JPH0661262B2 - 細胞増殖の刺激方法 - Google Patents

細胞増殖の刺激方法

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JPH0661262B2
JPH0661262B2 JP59021506A JP2150684A JPH0661262B2 JP H0661262 B2 JPH0661262 B2 JP H0661262B2 JP 59021506 A JP59021506 A JP 59021506A JP 2150684 A JP2150684 A JP 2150684A JP H0661262 B2 JPH0661262 B2 JP H0661262B2
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polypeptide
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パルフューム・クリスチャン・ディオール
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は細胞（例えば線維芽細胞）の増殖を刺激する方
法に関する。
本発明はまた化粧品組成物、医薬組成物あるいは上記方
法を使用する細胞培養培地のための補足組成物に関す
る。
細胞、特に細胞培養（例えばワクチン製造のための細胞
培養）における細胞、の増殖を刺激するために、胎盤抽
出物、蛋白質（例えば動物の皮膚や腱から得られたも
の）、母乳にら含まれるペプチド（”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．”，米国、７５巻１０号、５０
５７〜５０６１ページ、１９７８年１０月に発表された
“母乳は培養線維芽細胞のＤＮＡ合成と細胞増殖を刺激
する”と題するMichael Klagsbrun)の論文に説明され
る）、および子牛の血清のごとき血清や血清抽出物
（“Experimental Cell.Research”、４３、９８〜１０
６ページ、１９６６年に発表された“血清の酵素消化物
からのペプチド分画によるインビトロでの哺乳動物細胞
の生育刺激”と題するＣ．ＤＥ ＬＵＣＡ等の論文なら
びに“Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．”、７９、３１
９〜３３０ページに発表された“細胞培養での鶏の線維
芽細胞に対する増殖刺激活性および非抑圧的インシュリ
ン様活性を有する分画の子牛の血清からの部分精製”と
題するRobert W.Pierson,Jr.およびHoward M.Teminの論
文に説明される）がよく利用されている。
また、化粧品組成物に例えば皮膚の若返りのためにコラ
ーゲンやエラスチンのようなペプチド成分を使用するこ
とが可能であることも、例えば仏国特許第２３５３２８
２号、同第２４７２３８５号および同第２３８０２９４
号の各明細書から知られている。
しかしながら、血清、胎盤抽出物および組織の冷浸によ
り生じた抽出物のごとき生物学的物質の使用は、応々に
して皮膚に施用した場合に稀釈状態においてさえも不耐
現象をもたらす。さらに、これらの生物学的物質やペプ
チド成分を細胞に対する前記物質の活性を低下させるこ
となしに化粧品、医薬品またはその他の組成物に混入す
ることは応々にして困難である。
本発明は詳細にはペプチド物質を皮膚に施用し、薬剤の
形で投与し、また細胞の増殖を刺激するべく細胞培養培
地中に加えることを可能にする方法を提供し、こうして
実質的にまたは完全に皮膚や細胞培養培地もしくは人体
についての不耐性の危険を除き、そして細胞、特に線維
芽細胞に対する前記ペプチド物質の活性を実質的に高め
ることにより先に述べた弊害を除くことを一つの目的と
している。それ故に、本発明方法は血清、胎盤抽出物ま
たは類似物質を部分的にもしくは全部、特に細胞培養培
地において、交換することを可能にするものである。
この目的のために、本発明はペプチドまたはポリペプチ
ドを細胞に作用させて細胞、特に線維芽細胞、の増殖を
刺激する方法を提供し、その方法は前記ペプチドまたは
ポリペプチドもしくはそれらの混合物を水和した層状脂
質相（例えばリポソーム）中にカプセル封入するかある
いは組み入れて、その相を処理すべき細胞と接触させる
ことから成っている。
前記のペプチドまたはポリペプチドは蛋白質もしくは組
織構造の巨大分子、特にエラスチン、フィブロイン、ケ
ラチン、コラーゲン、ミオシン、アクチン、チューブリ
ン、フィブリンまたは類似物を加水分解することにより
有利に得られる。
本発明の他の特徴によれば、そのペプチドまたはポリペ
プチドは分子量が約１０００〜７５０００のエラスチン
加水分解物もしくはコラーゲン加水分解物である。
前記の水和した層状脂質相の脂質成分は糖脂質、リン脂
質またはホスホアミノ脂質から成る群から選択され、有
利には大豆レシチンまたは卵レシチンから成っている。
本発明の新規な特徴によれば、前記の水和した層状脂質
相の層中にユビキノンやステロール（例えばコレステロ
ール、ラノステロール、スチグマステロール、シトステ
ロール）のような疎水性の物質が組み入れられる。
本発明はさらに１種またはそれ以上のペプチドもしくは
ポリペプチドを中にカプセル封入したかあるいは組み入
れた前記の水和した層状脂質相からなる皮膚若返り用の
化粧品組成物を一つの主題として有している。その化粧
品組成物は１種またはそれ以上のペプチドもしくはポリ
ペプチドを中にカプセル封入したかあるいは組み入れた
前記の層状脂質相と、外用組成物の形体（特にローショ
ン剤、クリーム剤、バルム剤、バルサム剤、軟膏剤およ
びゲル剤から成る群から選択される）を得るのに適した
少なくとも１種の基剤との混合物からなり、前記組成物
中の層状脂質相を構成する脂質の濃度は約０．０１〜８
０重量％である。前記の水和した層状脂質相の層中にカ
プセル封入されるかあるいは組み入れられるペプチドま
たはポリペプチドは有利にはエラスチン加水分解物もし
くはコラーゲン加水分解物である。
また、本発明は先に述べた方法を使用して傷、やけどま
たは類似のものの治癒を助けるための医薬組成物を一つ
の主題として有しており、その医薬組成物は治癒有効量
の１種またはそれ以上のペプチドもしくはポリペプチド
を中にカプセル封入したかあるいは組み入れた前記の水
和した層状脂質相を、生理学的に適合性の基剤と組み合
わせて成るものである。
本発明はまた例えば微生物の活動下にワクチンや化学製
品を製造するのに使用されるか、あるいは毒性試験を行
うのに使用される細胞培養培地のための補足組成物を一
つの主題として有している。この補足組成物は有効量の
１種またはそれ以上のペプチドもしくはポリペプチドを
中にカプセル封入したかあるいは組み入れた水和した層
状脂質相を、細胞培養に適した賦形剤（例えばイーグル
の最少培地、Eagle′s minimun medium、ＭＥＭ）と適
宜に組み合わせて成るものである。
前記補足組成物中の水和した層状脂質相を構成する脂質
の濃度は約０．０１〜８０重量％であるのが好ましい。
有利には、この濃度は約0.01〜２０重量％である。
こうして、本発明によると、例えば蛋白質の加水分解に
より得られたペプチドまたはポリペプチドは、これらの
物質の細胞に対する適用を促進させまた特に皮膚へのこ
れらの物質の浸透を促進させるために、水和した層状脂
質相（特にリポリームを形成するもの）の中にカプセル
封入させるかあるいは組み入れられる。それ故、本発明
方法は線維芽細胞に対するペプチドまたはポリペプチド
の効率を実質的に改善して、リポソーム含有化粧品組成
物の皮膚若返り効果を増大させる。さらに、本発明によ
るリポソームを構成する脂質成分はヒトの皮膚に容易に
許容されるので不耐性の危険が減少するかあるいは除か
れさえする。
さらにまた、本発明方法は値段が比較的高くその上細胞
増殖を刺激しない多くの物質を含んでいる例えば血清、
胎盤抽出物、胚抽出物または類似物のような、化粧品組
成物、医薬組成物または細胞培養培地用の補足組成物に
使用される生物学的物質を部分的にあるいは全部交換す
ることを可能にする。
本発明はその実施態様についての非限定的な実施例の次
の記述が進むにつれてさらによく理解されるだろうし、
また本発明の他の特徴、細部および利点もより明瞭なも
のになるだろう。
次の実施例で示す濃度は重量濃度であり、リン脂質相の
濃度は組成物中のリン脂質相を構成する脂質の重量濃度
を表わす。
実施例１ 顔の皮膚に対して軟化作用を有する化粧用ローション剤
の製造 この化粧用ローション剤の組成は次の通りである。
−１０％のコレステロールを含むリン 脂質相 １％ −エラスチンポリペプチド（加水分解物） １％ −防腐剤で安定化した水性賦形剤 全量１００ コレステロール含有リン脂質相は例えば仏国特許出願第
８２０２６２０号明細書（１９８２年２月１７日付）に
記載された噴霧法により製造した。こうして得られた粉
末２０ｇはエラスチンポリペプチド２０ｇを含む“安定
化した水”１００ｇ中に分散した。その後この分散液を
例えば仏国特許出願第８２１７３１１号明細書（１９８
２年１０月１５日付）に記載された均質化法により均質
化して、所定の大きさの粒子の懸濁液を得た。この懸濁
液に安定化した水性基剤を先に明記した濃度を得るのに
必要な量だけ加えた。
このようにして得られたローション剤は例えば朝の洗顔
後に毎日施用した。非常にすべすべした皮膚が得られて
メーキャップがしやすくなつた。
実施例２ 顔の皮膚の美容処置用化粧品組成物の製造組成： −１０％シトステロールを含む リン脂質相 ５％ −コラーゲンポリペプチド （加水分解物） １％ −エラスチンポリペプチド （加水分解物） １％ −防腐剤で安定化した水性賦形剤 全量１００ リン脂質相の製造、そのリン脂質相へのコラーゲンポリ
ペプチドとエラスチンポリペプチドのカプセル封入、お
よびこうして得られた分散液の均質化は実施例１と同じ
方法で行った。
この製品を顔の皮膚に８日間繰り返し施用してより美し
く、なめらかな、張りのある皮膚を得た。
実施例３ 顔の皮膚のための化粧用ゲル剤の製造組成： −１０％ラノステロールを含む リン脂質相 ２％ −コラーゲン加水分解物 −防腐剤で“安定化した”水およ びゲル剤製造用の賦形剤 全量１００ ラノステロール含有リン脂質相の製造およびコラーゲン
加水分解物のカプセル封入は実施例１に記載した方法に
より行った。
こうして得られた水和した層状脂質相を“安定化した”
水に分散して実施例１に記載した方法に従って均質化し
た後、ゲル剤を製造するための賦形剤すなわちカルボキ
シビニルポリマーとトリエタノールアミンを加えた。
このゲル剤を皮膚に毎日施用すると皮膚が水和されてす
べすべした柔らかな皮膚になった。
実施例４ 顔の皮膚のための美容処置用パック剤の製造組成： −１０％シトステロールを含むリン 脂質相 ２０％ −エラスチン加水分解物 ２％ −防腐剤で安定加した水性賦形剤 全量１００ リン脂質相の製造、エラスチン加水分解物のカプセル封
入および水和した層状脂質相の分散液の均質化は実施例
１の方法に従って行った。
こうして得られた製品を顔の皮膚に施用して、少なくと
も１時間、有利には一晩そのままにしておいた。
その後その皮膚を真水またはローション剤で洗浄し、タ
オルで軽くたたくようにして乾燥させた。この処置は皮
膚を引き締まって張りのあるものにした。
実施例５ 体の皮膚のための美容ローション剤の製造組成： −５％シトステロールを含む リン脂質相 ２％ −シルクフィブロインポリペプチド １％ −防腐剤で“安定化した”水 性賦形剤 全量１００ リン脂質相の製造、シルクフィブロインポリペプチドの
カプセル封入および得られた分散液の均質化は実施例１
の方法に従って行った。
こうして得られたローション剤を入浴後またはシャワー
後に体の皮膚に施用した。この処置は皮膚を柔らかです
べすべしたものにした。
実施例６ つめの美容処置用化粧品組成物の製造 組成： −７％ラノステロールを含む リン脂質相 ８０％ −ケラチン加水分解物 （ポリペプチド） １％ −賦形剤 全量１００ 脂質成分の混合物は実施例１の噴霧法により製造した。
ケラチン加水分解物を溶解した状態で含む必要量の賦形
剤を調製し、次いで噴霧加した脂質粉末混合物を添加混
合した。この混合物は圧潰ロール手段で均質化した。こ
うして低水和性の層状脂質相を得た。
この組成物をつめに施用するとつめが裂けにくくなっ
た。
実施例７ 傷の治癒を活性化する医薬組成物の製造 組成： −リン脂質 ２％ −エラスチン加水分解物 ３％ −カラジーナン 0.8％ −グリセロール ５％ −賦形剤 全量１００ リン脂質相は仏国特許出願第８２０２６２０号明細書
（１９８２年２月１７日付）に記載された方法により製
造した。得られた粉末をエラスチン加水分解物溶液に分
散して水和した層状脂質相を得た。
このようにして得た分散液は例えば仏国特許出願第８２
１７３１１号明細書（１９８２年１０月１５日付）に記
載された方法により均質化した。
これらの水和した層状脂質相はカラジ−ナンとグリセロ
ールを含む“安定化した”水の中に懸濁させた。
得られた懸濁液を生理学的に適合性の賦形剤と混合して
バルム剤を製造し、これは傷を閉じた後８日間施用し
た。この製品は傷の治癒を促進させた。
実施例８ 傷の治癒を活性化するための医薬組成物の製造 組成： −５％ラノステロールを含む リン脂質相 ２０％ −エラスチン加水分解物 ２％ −防腐剤で“安定化した” 水性賦形剤 全量１００ ラノステロール含有リン脂質相の製造、エラスチン加水
分解物のカプセル封入およびこうして得られた水和した
層状脂質相の懸濁液の均質化は実施例１の方法に従って
行った。
この懸濁液は傷を閉じた後毎日施用することにより傷の
治癒を促進させた。
実施例９ ひび割れした皮膚のための軟膏剤の製造 組成： −５％ラノステロールを含む リン脂質相 ６０％ −コラーゲン加水分解物 １％ −脂肪質賦形剤 全量１００ 低水和性リン脂質相の製造は実施例６に記載た方法に従
って行い、コラーゲン加水分解物は脂肪質賦形剤に添加
した。
得られた軟膏剤は皮膚を低温をさらす前後に毎日施用し
た。
実施例１０ この実施例は細胞培養培地のための補足組成物に関する
ものであり、既知の細胞培養用補足組成物に比較した細
胞増殖速度についての本発明方法により得られた結果を
例示する。
この目的のために、水和した層状脂質相にカプセル封入
されていないエラスチン加水分解物またはコラーゲン加
水分解物を含む組成物ＡおよびＢ、ならびに実施例１に
記載した方法により得られる補足組成物ＣおよびＤを製
造した。
組成物Ａ −エラスチン加水分解物（分子量4000）１％ −生理学的な溶質 全量100 組成物Ｂ −コラーゲン加水分解物（分子量4000）１％ −生理学的な溶質 全量100 組成物Ｃ −リン脂質相 １％ −エラスチン加水分解物（分子量4000）１％ −生理学的な溶質 全量100 組成物Ｄ −リン脂質相 １％ −コラーゲン加水分解物（分子量4000）１％ −生理学的な溶質 全量100 組成物ＣおよびＤは実施例１に記載した方法により製造
した。これらは、組成物ＡおよびＢもまたそうであるよ
うに、０．２２ナノメートルの細孔を有するフィルター
を通して過した。
比較試験はマウスの線維芽細胞培養について行った。こ
の培養は１００μｇ／mのストレプトマイシンおよび
１００ＩＵ／mのペニシリンを含むＭＥＭ培地のペト
リ皿で実施した。
補足組成物Ａ，Ｂ，ＣおよびＤの活性を測定するため
に、第一のペトリ皿に５％の子牛血清を、そして第二の
ペトリ皿に１０％の子牛血清を加えた。これらの二つの
対照皿でそれぞれ産生された細胞の数を一定時間後に測
定した。
▲Ｎ10 t▼は１０％の子牛血清を含む対照ペトリ皿で産
生された細胞数を表わす。
▲Ｎ5 t▼は５％の子牛血清を含む対照ペトリ皿で生産さ
れた細胞数を表わす。
補足組成物Ａ，Ｂ，ＣおよびＤの活性を測定するため
に、一方のペトリ皿に含まれる１０％子牛血清含有培養
培地の一定量をこれと等量の５％子牛血清含有の新しい
培養培地および５％血清培養培地１mあたり１００μ
ｇに等しい組成物濃度の補足組成物Ａ，Ｂ，ＣまたはＤ
と交換した。また、対照ペトリ皿において同じ量の培養
培地を５％対照ペトリ皿では５％子牛血清を含む新しい
培地で、そして１０％対照ペトリ皿では１０％子牛血清
を含む新しい培地でそれぞれ交換したが、この新しい培
地は補足組成物Ａ．Ｂ．ＣまたはＤを含有しないもので
あった。
本実施例において、５％子牛血清または１０％子牛血清
のいずれかを含むＭＥＭ培地２mは２×１０５個の細
胞を用いて培養した。１日経過後、各ペトリ皿に含まれ
る培養培地２mを５％または１０％の子牛血清を含み
かつ補足組成物Ａ，Ｂ，ＣまたはＤを含有もしくは含有
しない新しい培地２mで交換した。
３日間培養した後細胞を引き離すためにトリプシンで処
理して、生じた細胞を計数した。補足組成物Ａ，Ｂ，Ｃ
またはＤを含むペトリ皿で産生された細胞数は▲ＮCo e
▼で表わされる。
補足組成物Ａ，Ｂ，ＣおよびＤの活性は次の式により示
される。
得られた結果を下の第１表に示す。
培養培地にペプチドまたはポリペプチドを添加する前
に、これらの物質を水和した層状脂質相にカプセル封入
することからなる特徴は細胞増殖に対するこれらの物質
の作用をかなり増大させることが上記の結果から明らか
である。２種のペプチドについて言えば、この活性はお
およそ２倍になった。
それ故に、本発明方法は細胞増殖を刺激するために現在
使用されている生物学的抽出物を部分的にまたは全部、
既知濃度の既知成分をこのような培養に組み入れさせる
比較的安価で純粋な製品を用いて交換することを可能に
するものである。実際に、生物学的抽出物の添加の際に
はもともとかなり数多くの物質が高濃度もしくは低濃度
で添加され、これらの物質は細胞増殖に何ら影響を与え
ないどころか、その生物学的抽出物に含まれる有効物質
の作用を応々にして低下させさえするものである。

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】１種またはそれ以上のペプチドまたはポリ
    ペプチドもしくはこれらの混合物を水和した層状脂質
    相、例えばリポソームにカプセル封入するかあるいは組
    み入れて、処理すべき細胞に上記層状脂質相を接触させ
    るが、その際、上記ペプチドまたはポリペプチドは、蛋
    白質もしくは組織構造の巨大分子、例えばエラスチン、
    フィブロイン、ケラチン、コラーゲン、ミオシン、アク
    チン、チューブリンまたはフィブリンを加水分解するこ
    とにより得られるものである、ペプチドまたはポリペプ
    チドの作用により細胞、特に線維芽細胞の増殖を刺激す
    る方法。
  2. 【請求項２】ペプチドまたはポリペプチドが約1,000な
    いし約75,000の範囲内の分子量をもつエラスチン加水分
    解物もしくはコラーゲン加水分解物である請求項１記載
    の方法。
  3. 【請求項３】水和した層状脂質相が糖脂質、リン脂質お
    よびホスホアミノ脂質よりなる群から選択される脂質成
    分から製造される請求項１記載の方法。
  4. 【請求項４】水和した層状脂質相が大豆レシチンおよび
    卵レシチンよりなる群から選択される脂質成分から製造
    される請求項１記載の方法。
  5. 【請求項５】水和した層状脂質相の層中にカプセル封入
    したかあるいは組み入れた疎水性の物質をさらに含む請
    求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】疎水性の物質がコレステロール、ラノステ
    ロール、スチグマステロールおよびシトステロールより
    なる群から選択される請求項５記載の方法。
  7. 【請求項７】上記水和した層状脂質相の層中に封入した
    かあるいは組み入れた上記１種またはそれ以上のペプチ
    ドまたはポリペプチドもしくはこれらの混合物を、適当
    な外用組成物、特にローション剤、クリーム剤、バルム
    剤およびゲル剤より選択されるものを得るのに適した少
    なくとも１種の賦形剤と混合するが、その際、上記組成
    物中の上記層状脂質相を構成する脂質の濃度が約0.01〜
    約80重量％の範囲である請求項１記載の方法。
  8. 【請求項８】上記組成物が傷またはやけどの治癒を助け
    るためのものである請求項７記載の方法。
  9. 【請求項９】１種またはそれ以上のペプチドまたはポリ
    ペプチドを中にカプセル封入したかあるいは組み入れ
    た、有効量の水和された層状脂質相を細胞培養物に導入
    し、適宜に細胞培養に適した賦形剤を混合することより
    なる、細胞培養物中で細胞増殖を刺激する請求項１記載
    の方法。
  10. 【請求項１０】補足組成物中の層状脂質相を構成する脂
    質の濃度が約0.01〜約80重量％の範囲である請求項９記
    載の方法。
  11. 【請求項１１】脂質の濃度が約0.01〜約20重量％の範囲
    である請求項10記載の方法。
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