SK562990A3 - Mutant of bacillus thuringiensis deposited as subsp. tenebrionis dsm 5480, method for the preparation thereof and pesticide containing the same - Google Patents
Mutant of bacillus thuringiensis deposited as subsp. tenebrionis dsm 5480, method for the preparation thereof and pesticide containing the same Download PDFInfo
- Publication number
- SK562990A3 SK562990A3 SK5629-90A SK562990A SK562990A3 SK 562990 A3 SK562990 A3 SK 562990A3 SK 562990 A SK562990 A SK 562990A SK 562990 A3 SK562990 A3 SK 562990A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- mutant
- strains
- subsp
- dsm
- bacillus
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 title abstract description 36
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 title abstract description 19
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title description 7
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract description 49
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 15
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 12
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 7
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 claims abstract description 6
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract description 5
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 claims abstract description 3
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 28
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims description 27
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 13
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 claims description 13
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 12
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000007362 sporulation medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 abstract description 5
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 abstract description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 33
- 241000193369 Bacillus thuringiensis serovar tenebrionis Species 0.000 description 17
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 6
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 5
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 5
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 5
- 238000001350 scanning transmission electron microscopy Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000193367 Bacillus thuringiensis serovar san diego Species 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001124134 Chrysomelidae Species 0.000 description 2
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 2
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529716 Entomophaga Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000254109 Tenebrio molitor Species 0.000 description 1
- 241000254107 Tenebrionidae Species 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007798 antifreeze agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000012216 bentonite Nutrition 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000007653 larval development Effects 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000406 trisodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 238000010246 ultrastructural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
- A01N63/23—B. thuringiensis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/075—Bacillus thuringiensis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
MUTANT MIKROORGANIZMU BACILLUS THURÍNGIENSIS DEPONOVANÝ AKO SUBSP. TENEBRIONIS DSM 5480, SPÔSOB JEHO PRÍPRAVY A PESTICÍDNY PROSTRIEDOK, KTORÝ HO OBSAHUJE
Oblasť techniky
Vynález sa týka mutantu mikroorganizmu Bacillus thuríngiensis deponovaného ako subsp. tenebrionis DSM 5480, spôsobu jeho prípravy a pesticídneho prostriedku, ktorý ho obsahuje.
Doterajší stav techniky
Obchodný prípravok Bacillus thuríngiensis sú celosvetovo používané na biologický boj proti škodlivému hmyzu. Prednosťou týchto bakteriálnych insekticídov sú vysoká selektivita pre veľmi obmedzený odbor ničeného škodlivého hmyzu a biologická odbúrateľnosť.
Obchodné prípravky Bacillus thuríngiensis sa môžu aplikovať až do doby zberu bez akéhokoľvek vedľajšieho nepriaznivého pôsobenia.
Bacillus thuríngiensis je tyčinkovitá aeróbna, spórotvorná baktéria, jedinečne charakterizovaná produkciou jednej alebo niekoľkých inklúzií pri sporulačnom procese, označovaných ako parasporálne kryštály. Tieto kryštály sú tvorené vysokomolekulárnymi bielkovinami, označovanými ako endotoxíny delta. Endotoxíny delta sú účinnou látkou obchodne dostupných prípravkov Bacillus thuríngiensis.
Boli identifikované mnohé kmene Bacillus thuríngiensis s rôznym spektrom hostiteľského hmyzu. Klasifikujú sa na rôzne poddruhy na základe svojich antigénov. Zvláštny význam má poddruh kurstaki Bacillus thurigiensis a poddruh aizawai Bacillus thurigiensis na hubenie motýľov radu Lepidoptera, Bacillus thurigiensis poddruh israelensis na hubenie dvojkrídleho hmyzu a Bacillus thurigiensis poddruh tenebrionis používaný na hubenie chrobákov.
Prvá izolácia Bacillus thurigiensis toxického pre chrobáky bola popísaná v339/94H - 2.3.2000 v roku 1983 (A.Krieg a kol., Z.end.Ent. 96, str. 500 až 508, EP 0149162 A2). Izolát, označený ako Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis je uložený v nemeckej zbierke Germán Collection of Mocroorganisms pod číslom DSM 2803. Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis bol izolovaný v roku 1982 z usmrtených lariev múčiara Tenebrio molitor ( Tenebrionidae. Coleoptere ). Kmeň produkuje v každej bunke jednu spóru a jeden , alebo niekoľko insekticidnych peresporálnych kryštálov, ktoré majú plochú , doštičkovitú formu s dĺžkou hrany približne 0,8 pm až 1,5 pm . Patria k serotypu H8a, 8b a patotypu C Bacillus thurigiensis ( Krieg a kol. , System Appl. Microbiol. 9, str. 138-141, americký patentový spis číslo 4 766203,1988).
Je toxický len k určitým larvám chrobákov (Chrysomelidae) živiacim sa listami, je však neúčinný proti húseniciam ( Lepidoptera), proti komárom (Diptera) a proti ďalšiemu hmyzu.
Zistilo sa , že Bacillus thurigiensis subsp.tenebrionis je účinným prostriedkom proti larvám pásavky zemiakovej . Po požití kryštálov a spór mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis , alebo izolovaných kryštálov larvami a v určitej miere dospelými jedincami , prestane Pásavka zemiaková ( Leptinotarsa decemlineata ) prijímať potravu. Larválne štádium L1-L3 hynie v priebehu 1 až 3 dní ( Schnettar a kol. , „ Fundamental and applied aspects of invertebrate pathology “ - Základná a aplikovaná patológia bezstavovcov), R. A. Samson a kol., Proceedings of the 4th Int. Colloquium of Invertebrate Pathology, str. 555,1986).
Najnovšie sa zistilo, že Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis produkuje okrem aktívnych kryštálov proti chrobákom iný parasporálny- kryštál, ktorý má vretenový, guľovitý, alebo doštičkovitý tvar ( A.M.Huger a A.Krieg, J.appl.Ent.,108, str. 490-497, 1989 ). Účinnosť tohto druhého kryštálu doposiaľ nebola známa.
Boli vyvinuté štyri obchodné prípravky Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis na hubenie chrobákov ( NOVODOR ® spoločnosti NovoNordisk A/S, TRIDENT® spoločnosti Sandoz, DiTerra® spoločnosti Abbott Laboratories Inc. a FOIL ® spoločnosti Ecogen.
Izolácia ďalšieho kmeňa Bacillus thurigiensis, toxického pre chrobákov, bola
V339/94H - 2.3.2000 popísaná v roku 1986 (Hernstadt a kol., BioTechnology, ročník 4, str. 305-308, 1986, americký patentový spis číslo 4 764372, 1988 ). Tento kmeň označený ako „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego“, M7, je uložený vo výskumnom laboratóriu Northern Regional Research Laboratory, USA pod číslom NRRL B15939. Obchodný produkt na báze mikroorganizmu „Bacillusi thurigiensis subsp. San Diego, bol vyvinutý spoločnosťou Mycogen Corp.
Porovnávacie štúdie Bacillus thurigiensis subsp. tanebriosis, DSN 2803 a „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego, NRRL B 15939 vrátane fenotypovej charakteristijý vegetatívnych buniek , charakterizácie parasporálneho kryštálu a analýzy plazmidu DNA však ukázali, že Bacillus thurigiensis subsp. San Diego, je zrejme identický so skôr izolovaným kmeňom DSN 2803, Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis Krieg a kol., J.Appl. Ent. 104, str. 417 až 424,1987/Okrem toho nukleotidová sekvencie a odvodené aminokyselinové sekvencie proti chrobákom účinných génov endotoxínu delta mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis a Bacillus thurigiensis subsp. san diego , sú identické.
Pri rovnakých kultivačných podmienkach , vyššie uvedený typ kryštálov je tiež syntetizovaný mikroorganizmom Bacillus thurigiensis subsp. san diego ( A.M.Hunter a A.Krieg, J.Appl, Ent.,10B, str. 490 až 497, 1989 ).
Podľa autorov H. de Barjac a E.Frachon ( Entomophaga 35/2 , str. 233 až 240, 1990) izolát „San Diego, je podobný izolátu „tenebriosis“ a preto nieje možné ich považovať za rozdielne poddruhy.
Užitočnosť kmeňa Bacillus thurigiensis na hubenie chrobákov závisí na účinnosti a ekonomickej produkcii toxinov účinných proti chrobákom a na potencii vyrobeného produktu. To je naopak závislé na množstve endotoxinov delta, ktoré sa môžu produkovať fermentáciou kmeňov Bacillus thurigiensis účinných pri hubení chrobákov.
Mikroorganizmus Bacillus thurigiensis sa môže používať počas mnoho rokov na výrobu insekticídne účinnej látky , avšak akokoľvek by boli mutanty Bacillus thurigiensis so zvýšeným výťažkom endotoxinov delta výhodné , neboli doposiaľ takéto mutanty popísané. Mutanty produkujúce endotoxiny delta s vyššími výťažkami by umožňovali účinnejšiu a ekonomickejšiu v339/94H - 2.3.2000 produkciu toxínov Bacillus thurigiensis a možnosť výroby produktov Bacillus thurigiensis so zvýšenou potenciou za rovnakú cenu. To by naopak bolo výhodné pre užívateľa , pretože by sa skladovali znížené objemy pesticfdnych prostriedkov a bola by nutná manipulácia so sníženými objemami pre danú výmeru. Okrem toho by užívatelia mali menšie problémy s obalmi a znížilo by sa zaťažowanie životného prostredia týmito obalmi.
Zlepšenie produkcie endotoxinu delta mikroorganizmom Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis mutáciou nebolo doposiaľ popísané.
Jedným problémom, spojeným s použitím najmä mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis pri hubení lariev chrobákov, je pomerne nízka potencia, alebo agresívnosť prípravkov, vyžadujúca použitie pomerne veľkého množstva prípravku na ošetrovanú výmeru, napríklad 5 až 10 l/ha v porovnaní s 1 až 2 l/ha väčšiny iných produktov Bacillus thurigiensis a väčšiny iných insekticidov . Preto sa ukazuje potreba nových produktov so zvýšenou účinnosťou.
Jedným riešením tohoto problému je koncentrovanie prípravkov . To však, značne zvyšuje náklady v porovnaní s úsporami dosiahnutými pri skladovaní a pri manipulácii s prípravkami.
Elegantnejším riešením je vyvinutie mutantov existujúcich mikroorganizmov Bacillus thurigiensis schopných produkcie podstatne väčších množstiev endotoxinu delta na bunku.
Vynález sa teda týka mutantu kmeňov Bacillus thuringiensis, schopného produkcie podstatne väčšieho množstva toxínov než ich materský kmeň.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je mutant mikroorganizmu Bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticídnych delta-endotoxinov než materský kmeň.
Pesticídny prostriedok na boj so škodlivým hmyzom, zvlášť zo súboru zahrňujúceho motýle, dvojkrídle a chrobáky a predovšetkým na boj s pásavkou zemiakovou, spočíva podľa vynálezu vtom, že ako účinnú látku obsahuje
V339/94H- 2.3.2000 mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticfdnych delta-endotoxinov než materský kmeň. Tento pesticidny prostriedok môže prídavné obsahovať poľnohospodársky vhodnérozpúšťadlá a/alebo nosiče a povrchovo aktívnu látku.
Spôsob prípravy mutantu kmeňov mikroorganizmu Bacillus thurigiensis a jeho selekcia spočíva podľa vynálezu vtom, že sa materský kmeň
i) spracováva akýmkoľvek chemicky vhodným mutagénom, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidfnom alebo etylmetánsulfonátom, za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako sú papršleky gama, rôntgenové papršleky alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát a poprípade doplnky modifikovaného živného sporulačného prostredia, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nesteká pri zahrievaní a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát, doplnený chloridom horečnatým a doplnky modifikovaného živného sporulačného prostredia.
Takto oddelené kolónie sa nechávajú rásť na normálnom produkčnom prostredí a potom sa ďalej uskutočňuje konečné oddelenie kmeňov, schopných zvýšenia produkcie delta endotoxínov.
Resticídny prostriedok je vhodný na potieranie škodlivého hmyzu, pri ktorom sa na plochy, napadnuté škodlivým hmyzom, nanáša pesticidny prostriedok podľa vynálezu.
Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, ktorý produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta, bol deponovaný organizáciou Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroderweg 1b, D-3300 Braunschweig, Nemecko, na účely patentového postupu na základe ďalej uvedených hodnôt. DSM je medzinárodný depozitár podľa medzinárodnej Budapeštianskej dohody trvalého uloženia podľa odstavca 9 tejto
V339/94H - 2.3.2000 medzinárodnej dohody, deň uloženia referencia uloženia označenie DSM
10.
NB 176-1 DSM 5480 augusta
1989
Mutant DMS 5480 sa získa mutáciou mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis, kmeň DMS 5526, ktorý je tiež deponovaný podľa medzinárodnej Budapeštianskej dohody, ako je ďalej uvedené:
deň uloženia referencia uloženia označenie DSM
14. september 1989 NB 125 DSM 5526
Všeobecne sa vynález týka mutantov a variantov mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, produkujúcich vysoké množstvo endotoxlnu delta v porovnaní so svojím materským kmeňom.
V tejto súvislosti sa „vysokým množstvom mieni aspoň dvojnásobné množstvo avšak skôr ešte väčšie množstvo.
Všeobecne avšak zvlášť sa vynález týka endotoxínov delta, produkovaných mutantom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ktorý pôsobí na rovnaké druhy škodlivého hmyzu ako endotoxlny delta materského mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ako také proti motýľom (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. kurstaki a subsp. aizawai), dvojkrídlemu hmyzu (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. israelensis) alebo chrobákom (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. tenebrionis).
Zvlášť sa vynález týka mikroorganizmu Bacillus thuringiensis patriaceho do podtríedy tenebrionis a endotoxlnu delta, produkovaného týmto mikroorganizmom a účinného proti chrobákom.
Z tohto hľadiska sa vynález zvlášť týka mutantu alebo variantu mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis, schopného produkovať viac než trojnásobok endotoxlnu delta v porovnaní s kmeňom DSM 2803.
Vynález sa ďalej týka variantu alebo mutantov kmeňov mikroorganizmu
B. thuringiensis subsp. tenebrionis, ktoré sú schopné produkovať parasporálny kryštál majúci strednú dĺžku hrany aspoň 2 mikrometre.
V339/94H - 2.3.2000
Vynález sa tiež týka variantu alebo mutantu kmeňov B. thuringiensis subsp. tenebríonis, vykazujúcich frekvenciu sporulácie 10 až 100 krát alebo dokonca 106 krát nižšiu, než je frekvencia sporulácie materského kmeňa alebo kmeňa DSM 2803.
Podľa zvlášť výhodného uskutočnenia sa vynález týka deponovaného mutantu B. thuringiensis subsp. tenebríonis, DSM 5480.
Pri práci na tomto vynáleze bol izolovaný mutant mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebríonis /DSM 5480/ s viac než dvojnásobným množstvom produkovaného endotoxínu delta v porovnaní s materským kmeňom /DSM 5526/. Fázová kontrastná mikroskópia, riadkovacia elektrónová mikroskópia a transmisná elektrónová mikroskópia dokladajú, že vysoká produktivita tohto mutantu je podmienená zmenami riadenia produkcie endotoxínu delta vo vzťahu k sporulácii, vedúcimi k produkcii kryštálov bielkoviny, ktorá je až viac než päť krát vyššia než produkcia kryštálov kmeňa existujúceho mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ktorý je účinný proti chrobákom. Tento úzky vzťah medzi vytváraním kryštálu a sporuláciou sa zdá byť odstránený a mutant produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta pred sporuláciou.
Vynález sa týka použitia variantu alebo mutantu kmeňov podľa vynálezu pri produkcii insekticídnych produktov na báze mikroorganizmu B.thuringiensis, pričom sa variant alebo mutant kmeňa B. thuringiensis kultivuje vo vhodnom kultivačnom prostredí, obsahujúcom zdroje uhlfka, dusíka a ďalších zložiek, známych pracovníkom v odbore, počas vhodnej doby, načo sa endotoxíny delta izolujú.
Vynález sa tiež týka mikroorganizmom B.thuringiensis produkovaného endotoxínu delta, produkovaného zhora uvedeným spôsobom a používaného ako účinná látka v pesticidnych prostrediach.
V takýchto prostrediach sa endotoxíny delta môžu požívať buď samotné alebo v zmesi s inými biologicky účinnými látkami.
Vynález sa tiež týka takých pesticidnych zmesi alebo prostriedkov, ktoré obsahujú endotoxín delta, produkovaný mikroorganizmom B. thuringiensis podľa vynálezu v zmesi s poľnohospodársky vhodnými rozpúšťadlami alebo
V339/94H - 2.3.2000 nosičmi.
Vynález sa tiež týka takých pesticfdnych zmesí alebo prostriedkov obsahujúcich endotoxín delta, produkovaný mikroorganizmom B. thuringiensis, ktoré v kvapalnej forme majú účinnosť aspoň 15 000 BTTU/g, zodpovedajúcu aspoň hmotnostné 3 % bielkovinového kryštálu insekticldneho proti chrobákom alebo v suchej forme majú účinnosť aspoň 50 000 BTTU/g zodpovedajúcu aspoň hmotnostné 10 % bielkovinového kryštálu insekticidneho proti chrobákom.
Obzvlášť sa vynález týka pesticídnych prostriedkov produkovaných DSM 5480, majúcich aspoň dvojnásobnú účinnosť v porovnaní s pesticídnymi prostriedkami produkovanými DSM 2803, alebo inými kmeňmi Btt účinnými proti chrobákom.
Prostriedky podľa vynálezu môžu mať akúkoľvek známu formu z odboru agrochemikálif, napríklad to môžu byť suspenzie, disperzie, vodné emulzie, poprašky, dispergovateľné prášky, emulgovateľné koncentráty alebo granule. Okrem toho môžu byť vo vhodnej forme na priame použitie alebo vo forme koncentrátov alebo primárnych prostriedkov, ktoré vyžadujú neriedenie vhodným množstvom vody alebo iného rozpúšťadla pre použitím.
Koncentrácia insekticídnych endotoxínov delta B. thuringiensis v prostriedkoch podľa vynálezu, používaných ako také alebo v zmesi s inými pesticídmi, na nanášanie na rastliny, je s výhodou hmotnostné 0,5 až približne 25 %, zvlášť hmotnostné 1 až 15 %.
Vynález sa tiež týka spôsobu boja proti škodcom, pričom sa používajú hore popísané insekticídne prostriedky na miesta, napadnuté hmyzom.
Vynález sa zvlášť týka hubenia motýľov, dvojkrídleho hmyzu a chrobákov a predovšetkým sa týka potierania pásavky zemiakovej.
S výhodou sa podľa vynálezu používa 4,5 litrov na 0,4 ha kvapalného pesticídneho prostriedku alebo približne 226 g na 0,4 ha suchého pesticidneho prostriedku.
Aktívny prípravok B. thuringiensis alebo zmes podľa vynálezu sa môže nanášať priamo na rastlinu napríklad nastriekaním alebo poprášenim v dobe, keď sa nežiadúci hmyz začne na rastline vyskytovať. Výhodným spôsobom v339/94H - 2.3.2000 nanášania je postrek. Všeobecne je dôležité dosiahnuť dobrú kontrolu škodlivého hmyzu v ranných štádiách larválneho vývoja, pretože v takomto prípade dochádza k najmenšiemu poškodeniu rastliny.
Spôsob mutácie kmeňov Bacillus thuringiensis a selekcia takých mutantov, ktoré sú schopné produkcie podstatne väčšieho množstva endotoxínov delta než materské kmene, zahŕňa i/ spracovanie mutagénom, ii/ takto spracované mutanty sa nechávajú rásť na vhodnom prostredí pre selekciu asporogénnych alebo oligosporogénnych kmeňov, iii/ oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nestekucuje pri zahriati a iv/ oddelia sa skutočne asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií.
Pri takomto výhodnom spôsobe sa takto oddelené kolónie nechávajú rásť v normálnom produkčnom prostredí a potom sa uskutoční oddelenie kmeňov, ktoré sú schopné zvýšenej produkcie endotoxinu delta.
Pri stupni /i/ hore uvedeného postupu, môže byť mutagénom akýkoľvek vhodný chemický mutagén, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidín alebo etylmetánsulfonát alebo sa materský kmeň môže spracovať elektromagnetickým žiarením, ako sú γ-papršleky, rôntgenové papršleky alebo ako je ultrafialové žiarenie.
V stupni /ii/ môže byť vhodným prostredím modifikované živné sporulačné prostredie obsahujúce fosfát /prostredie NSMP/, ktoré popísal Johnson a kol. v publikácii „Spores Vľ, vy d. P. Gerhard a kol., str. 248 až 254, 1975. V stupni /iv/ hore popísaného spôsobu môže byť vhodným prostredím prostredie NSMP doplnené chloridom horečnatým a Gelritem, Kaico.
Iným spôsobom získania vysoko produktívnych variantov alebo mutantov podľa vynálezu môže byť rast materského kmeňa v kvapalnom prostredí a selekcia spontánnych mutantov alebo variantov po rozprestreti kultivačnej pôdy na agarovom prostredí, vhodné na selekciu asporogénnych a/alebo oligosporogénnych mutantov.
Môžu sa použiť tiež iné spôsoby oddelenia vysoko produktívnych
V339/94H- 2.3.2000 variantov alebo mutantov. podľa vynálezu, ako je použitie hmoty týchto mutantov priamo odstredením alebo inými spôsobmi oddeľovania hmoty.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Izoluje sa mutant mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebríonis s viac než dvojnásobnou produkciou endotoxínu delta. Fázovou kontrastnou mikroskopiou, ríadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskopiou tohto mutantu bolo zistené, že vysoká produktivita tohto mutantu je podmienená zmenami riadenia produkcie delta endotoxinu so zreteľom na sporuláciu, vedúcimi k produkcii kryštálov bielkoviny, ktorá je až päťkrát vyššia než v prípade kryštálov produkovaných súčasnými kmeňmi mikroorganizmu Bacillus thuringiensis aktívnymi proti chrobákom. Úzky vzťah medzi vytváraním kryštálu a sporuláciou sa zdá byť odstránený a mutant produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta pred sporuláciou.
Produkcia vysokovýťažkového mutantu
Spóry mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebríonis, kmeň DSM 5526 sa ožiari papršlekmi γ v dávke 7 kGy. Ožiarené spóry sa potom rozprestrú na NSMP agarové doštičky (modifikované živné prostredie sporulačné obsahujúce fosfát, popísané Johnsonom a kol, v publikácii „Spores Vľ, vyd. P. Gerhardt a kol., str. 248 až 254, 1975). Prostredie vhodné na selekciu asporogénnych a/alebo oligosporogénnych mutantov.
NSMP-agarové doštičky sa inkubujú pri teplote 30 °C počas dvoch až troch dní. Odoberú sa priesvitné kolónie a prenesú sa na NSMP gelrítové doštičky (NSMP prostredie, doplnené chloridom horečnatým - 0,57 g/l a Gelritom, Kelco - 20 g/l).
NSMP gelrítové doštičky sa inkubujú počas jednej hodiny pri teplote 90 °C a potom počas jedného až dvoch dní pri teplote 30 °C.
V339/94H - 2.3.2000
Mutanty, ktoré na NSMP gelritových doštičkách dobre narastú, sa oddelia. Týmto spôsobom sa oddelia všetky asporogénne mutanty, pretože po tepelnom spracovaní nerastú.
Oddelené mutanty sa nechajú rásť v trepačkách obsahujúcich obchodné prostredie. Množstvo produkovaného endotoxfnu delta sa stanoví imunologickými spôsobmi, ako bude ďalej popísané.
Selektujú sa iba mutanty produkujúce výrazne vyššie množstvo delta endotoxinu než materský kmeň.
Morfológia selektovaných mutantov na pevnom prostredí a v kvapalnom prostredí sa študuje fázovou kontrastnou mikroskópiou /zväčši 2 500/ a riadkovacou elektrónovou mikroskópiou a transmisnou elektrónovou mikroskópiou. Sčíta sa počet spór a kryštálov a stanoví sa veľkosť bielkovinových kryštálov.
Vedľa získaných mutantov sa selektuje mutant /DSM 5480/ pre vynikajúcu schopnosť produkovať endotoxín delta.
Množstvo endotoxinu delta, produkovaného mutantom DSM 5480, sa porovnáva s množstvom produkovaným DSM 2803, pôvodným izolátom z mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň DSM 5526, používaným na produkciu prostriedku NOVODOR, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň NB178, izolovaný zo Sandozovho Bacillus thuringiensis tenebrionis produktu TRIDENT z roku 1989, kmeň NN 198, izolovaný zo Sandozovho B.thuringiensis subs. tenebrionis produktu TRIDENT z 1990, „Bacillus thuringiensis subsp. san diego kmeň NRRL-B-15939 a kmeň NB 197, izolovaný zMycogénovho B. thuringiensis subs. san diego produktu M-ONE z 1990. Ako je uvedené v tabuľke I v príklade 2, zlepšený mutant podľa vynálezu produkuje 2 až 3,5 krát viac endotoxinu delta než súčasne dostupné kmene mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, účinné proti chrobákom.
Príklad 2
Porovnáva sa výťažok endotoxinu delta mikroorganizmu Bacillus v339/94H - 2.3.2000 thuringiensis subspecies tenebrionis, mutant DSM 5480 a výťažky endotoxlnu delta mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis kmeňmi DSM 2803 /pôvodný izolát z mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis/, DSM 5526 /produkčný kmeň spoločnosti Novo-Nordisk/ a NB 178 a N B 198 /produkčné kmene spoločnosti Sandoz/ a Bacillus thuringiensis subsp.san diego, kmeň NRRL-B 15939 a NB 197 /produkčné kmene spoločnosti Mycogen/ v obchodnom prostredí. Každý z kmeňov sa necháva rásť počas 17 hodín pri teplote 30 ’C na sklonených agaroch nasledujúceho zloženia, vyjadreného ako gramy na liter destilovanej vody:
Pepton, Difco 5 g
Hovädzí extrakt, Difco 3 g Agar, Difco 20 g
Hodnota pH 7,0
Potom sa prenesie 5 ml suspenzie buniek z každého kmeňa do 100 ml produkčného prostredia v erlenmayerovej banke sprepážkovým dnom s obsahom 500 ml. Produkčné prostredie pozostáva z nasledujúcich zložiek v uvedenom množstve, vyjadrenom ako počet gramov na liter vodovodnej vody:
sójová múčka 50 g hydrolyzovaný škrob 40 g dihydrogénfosforečnan draselný 1,77 g monohydrogénfosforečnan draselný 4,53 g hodnota pH 7,0
Naočkované banky sa inkubujú pri teplote 30 ’C za trepania (250/min). Po 96 hodinách inkubácie sa kultivačná pôda skúša na obsah endotoxlnu delta imunologickými spôsobmi.
Stanoví sa množstvo produkovaného endotoxínu delta jednotlivými kmeňmi stúpajúcou imunoelektroforézou (“rocket immuno electrophoresis“ RIE) a fotometrickou imunozložkou /PIA/ za použitia protilátok proti čisteným bielkovinovým kryštálom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Odváži sa 400 mg každej kultivačnej pôdy. Pridá sa 7 ml trojsodného fosforečnanového pufru /0,125 M, hodnota pH 12/ do každej vzorky. Suspenzia v339/94H - 2.3.2000 sa potom pretrepáva počas jednej hodiny na rozpustenie delta endotoxinových bielkovín.
Vzorky sa potom odstredia pri počte otáčok 3 500/min v priebehu 15 minút a skúša sa supernatant na obsah endotoxínu RIE elektroforézou proti antiséru stúpajúcemu proti čisteným bielkovinovým kryštálom mikroorganizmu B. thuríngiensis subsp. tenebrionis. Stanoví sa množstvo endotoxínu delta so zreteľom na štandard so známym obsahom kryštalickej bielkoviny.
Koncentrácia kryštalickej bielkoviny sa tiež stanoví fotometrickou imunoskúškou. Kryštalické bielkoviny sa rozpustia v alkalickom roztoku. Rozpúšťané bielkoviny sa vyzrážajú svojimi protilátkami. Miera tejto reakcie sa Stanovi turbidimetrícky. Množstvo endotoxínu delta sa stanoví so zreteľom na štandard so známym obsahom kryštalickej bielkoviny.
Kryštalické antigény na produkciu protilátok, používaných pri skúškach, sa získajú z kryštálov izolovaných z mikroorganizmu B. thuríngiensis subsp. tenebrionis.
Polyklonálne protilátky sa zvyšujú vstrekovaním králikom subkutánne každých 14 dni s 0,25 mg kryštalického antigénu.
Získané výsledky sú uvedené v nasledujúcich tabuľkách la a lb. Výťažky endotoxínu delta sú vyjadrené ako BTTU/g (jednotky na g kultivačnej pôdy, stanovené elektroforézou RIE alebo fotometrickou imonoskúškou PIA). Použitá hodnota na čistú kryštalickú bielkovinu mikroorganizmu B.thuringiensis subsp. tenebrionis je 500 000 BTTU/g. Táto hodnota znamená v tabuľke la strednú hodnotu šiestich až siedmich nezávislých fermentácií a v tabuľke lb strednú hod notu-troch nezávislých fermentácií.
V339/94H - 2.3.2000
Tabuľka la
Produkcia endotoxínu delta kmeňmi Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis v trepačke
Výťažok endotoxínu delta stanovený spôsobom | ||
RIE | PIA | |
Kmeň | BTTU/g | BTTU/g |
DSM 2803 | 676 | 1293 |
NRRL-B 15939 | 747 | 1126 |
NB 178 | 986 | 1728 |
DSM 5526 | 1097 | 1860 |
DSM 5480 | 2382 | 4169 |
Tabuľka Ib
Produkcia endotoxínu delta kmeňmi Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis v trepačke
Výťažok endotoxínu delta stanovený spôsobom | |
RIE | |
Kmeň | BTTU/g |
NB 197 | 1103 |
NB 198 | 1237 |
DSM 5480 | 2867 |
Z tabuľky la a Ib je zrejmé, že DSM 5480 produkuje viac než trojnásobok endotoxínu delta v porovnaní s pôvodným kmeňom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 2803 a „Bacillus thuringiensis subsp. san diego“, kmeň NRRL-B 15939 a viac než dvojnásobné množstvo endotoxínu delta v porovnaní s kmeňmi doteraz používanými na výrobu obchodných produktov Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Fázovou kontrastnou mikroskopiou, riadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskópiou organizmu Bacillus v339/94H - 2.3.2000
1S thuríngiensis subsp. tenebrionis, mutant DSM 5480 sa zistilo, že bielkovinové kryštály, produkované týmto mutantom, sú omnoho väčšie než zodpovedajúce bielkovinové kryštály, produkované mikroorganizmom Bacillus thuríngiensis subsp. tenebrionis, kmeňmi DSM 2803, DSM 5526, NB 178 a NB 198 a „Bacillus thuríngiensis subsp.san diego“, kmeňmi NRRL-B 15939 a NB 197.
Kultivačné prostredie mikroorganizmu Bacillus thuríngiensis subsp. tenebrionis, mutant DSM 5480 sa skúšalo na účinnosť proti larvám pásavky zemiakovej. Stanovilo sa zvýšené množstvo endotoxinu delta, produkovaného mutantom DSM 5480; stanovenie sa uskutočnilo imunologickými spôsobmi. Toto zvýšené produkované množstvo sa prejavuje v biologickej účinnosti proti larvám pásavky zemiakovej.
Príklad 3
Na pevnom a kvapalnom prostredí sa porovnáva sporulácia a parasporálne vytváranie kryštálu v mikroorganizmoch Bacillus thuríngiensis subsp. tenebrionis, kmeňmi DSM 2803, DSM 5526, NS 179, NB 198 a mutant DSM 5480 a „B. thuríngiensis subsp. san diego“, kmeňmi NRRL-B 15939 a NB 197.
Každý z týchto kmeňov sa necháva rásť počas dvoch dni pri teplote 30 °C na agarových doštičkách pri nasledujúcom zložení, vyjadrenom ako gramy na litre destilovanej vody:
Pepton, Difco 5 g
Hovädzí extrakt, Difco 3 g Agar, Difco 20 g
Hodnota pH 7,0
Každý kmeň sa necháva rásť v kvapalnom prostredí. Všetky kmene sa nechávajú rásť počas 17 hodín pri teplote 30 °C na agarových sklonených doštičkách. Potom sa prenesie 5 ml suspenzie buniek z každého kmeňa do erlenmayerovej banky s dnom s prepážkou s obsahom 500 ml, pričom každá banka obsahuje 100 ml prostredí.
Prostredie pozostáva z nasledujúcich zložiek v množstve uvádzanom v339/94H-2.3.2000 ako gramy na liter vodovodnej vody:
kvapalné prostredie: kvasnicový extrakt 5,0 g trypton 5,0 g glukóza 1,0 g dihydrogénfosforečnan draselný 0,8 g hodnota pH 7,0
Naočkované banky sa inkubujú pri teplote 30 °C za trepania /250/min/ počas 96 hodín.
Denne sa študuje morfológia kmeňov na pevnom prostredí a v kvapalnom prostredí fázovou kontrastnou mikroskópiou /pri zväčšení 2500 násobnom/. Počíta sa množstvo spór a kryštálov a stanovuje sa rozmer parasporálnych kryštálov. Študuje sa tiež niekoľko vybraných vzoriek riadkovacou elektrónovou mikroskópiou a transmisnou elektrónovou mikroskópiou.
Mikroorganizmy B. thuringiensis subsp. tenebrionis, kmene DSM 2803, DSM 5526, NB 178 a NB 198 a „B. thuringiensis subsp. san diego“, kmene NRRL-B 15939 a NB 197 veľmi sporulujú v oboch prostriedkoch. Pred lýzou bunky obsahuje každá bunka spóru a parasporálny kryštál. Veľkosť kryštálu je 0,4 až 0,9 až 1,1 mikrometra dĺžky vo chvíli lýzy bunky. Stredná dĺžka bielkovinových kryštálov je 0,6 až 0,7 mikrometrov.
Mutant DSM 5480 produkuje iba málo spór (menej než 106 spór/ml) na pevnom prostredí a v definovanom kvapalnom prostredí. Pred lýzou bunky obsahuje väčšina buniek veľký bielkovinový kryštál avšak žiadnu spóru. Dĺžkový-rozmer bielkovinových kryštálov je 0,4 až 0,7 pm až 5,0 pm pričom stredný dĺžkový rozmer bielkovinového kryštálu je 2,2 až 2,3 pm.
Ultraštrukturálna analýza buniek z tohto prostredia transmisnou elektrónovou mikroskópiou ukazuje, že sporulačný proces vmutante sa naštartuje, neukončí sa však v dobe bunkovej lýzy. Sporulačný proces dosahuje rôzne stupne v rôznych bunkách. V bunkách, v ktorých sporulácia dosiahla iba stupeň II (vytváranie predspórového septa) vypĺňajú bielkovinové kryštály celé bunky.
V produkčnom prostredí (príklad 2) mutant produkuje väčší počet spór
V339/94H-2.3.2000 (107 až 108 spór/ml). V tomto prostredí je sporulačná frekvencia mutantu 10 až 100 krát nižšia než v prípade materského kmeňa.
Tak si mutant ponecháva svoje schopnosti produkovať normálne spóry. Avšak sporulačné frekvencie mutantu sa zdajú byť silne závislé od prostredia. Dĺžkový rozmer bielkovinových kryštálov, produkovaných jednotlivými kmeňmi, i
je uvedený v tabuľke lla a llb.
Tabuľka lla
Rozmer bielkovinových kryštálov produkovaných súčasne dostupnými kmeňmi mikroorganizmom B. thuringiensis účinnými proti chrobákom
Dĺžka bielkovinových kryštálov v pm | |||
kmeň | minimálna hodnota | maximálna hodnota | stredná hodnota |
DSM 2803 | 0,4 | 0,9 | 0,7 |
NRRL-B 15939 | 0,4 | 0,9 | 0,7 |
NB 178 | 0,5 | 0,9 | 0,7 |
DSM 5526 | 0,4 | 0,9 | 0,7 |
DSM 5480 | 0,7 | 5,0 | 2,3 |
Tabuľka llb
Rozmer bielkovinových kryštálov produkovaných súčasne dostupnými kmeňmi mikroorganizmu B. thuringiensis účinnými proti chrobákom
Dĺžka bielkovinových kryštálov v mikrometroch | |||
kmeň | minimálna hodnota | maximálna hodnota | stredná hodnota |
NB 197 | 0,4 | 0,7 | 0,6 |
NB 198 | 0,4 | 1.1 | 0.7 |
DSM 5480 | 0,5 | 4,2 | 2.0 |
v339/94H- 2.3.2000
Z tabuľky Ha a llb je zrejmé, že mutant DSM 5480 produkuje omnoho väčšie bielkovinové kryštály než akýkoľvek dosiaľ známy kmeň B. thuríngiensis, účinný proti chrobákom.
Na základe získaných hodnôt sa zdá, že riadenie produkcie endotoxínu delta so zreteľom na sporuiáciu sa v mutante zmenilo.
Zdá sa, že mutant produkuje bielkovinové kryštály pred vývojom spór, čím poskytuje bunkám dlhšiu dobu na produkciu endotoxínu delta a to vedie k produkcii omnoho väčších bielkovinových kryštálov v čase lýzy buniek v porovnaní s materským kmeňom.
V závislosti na dostupných živinách a veľkosti bielkovinových kryštálov vo chvíli sporulácie sa vyvinie normálna spóra pred časom lýzy.
Príklad 4
Podľa tohto príkladu sa používa vysokovýťažkový Btt mutant DSM 5480 na produkciu vysoko účinných produktov na boj proti larvám pásavky zemiakovej.
Na produkčnom fermentačnom prostredí, popísanom v príklade 2, sa fermentuje DSM 5480 v prevzdušňovanej, miešanej, produkčnej, fermentačnej nádobe. Po 96 hodinách sa získa živné prostredie kontinuálnym odstreďovaním.
Koncentrovaný krém, ktorý obsahuje aktívne bielkovinové kryštály, sa stabilizuje pridaním mikrobiálnych konzervačných prostriedkov a nastavením hodnoty pH na 5,0.
Jeden diel koncentrovaného krému sa suší rozprašovaním a druhý sa používa na výrobu zmáčateľného prášku. Zvyšok koncentrovaného krému sa používa priamo na formuláciu vodných, rozplývavých koncentrátov /FC/.
Zmáčateľný prášok sa formuluje ako je charakterizované v tabuľke III. Formulácia vodných rozplývavých koncentrátov je popísaná v tabuľke IV.
v339/94H - 2.3.2000
Tabuľka III
Formulácia zmáčateľného prášku NOVODOR® (% hmotn.) | |
Zložka | percentá |
koncentrovaný krém Btt sušený rozprašovaním | 40 |
detergenty | 9 |
prostriedok proti vytváraniu koláča | 1 |
inertné plnidlo | 50 |
Tabuľka IV
Formulácia rozplývaného vodného koncentrátu NOVODOR® FC | ||
Zložka | NOVODOR® FC1 % hmotn. | NOVODOR®FC2 % hmotn. |
koncentrovaný krém Btt | 80,00 | 55,00 |
konzervačné prísady | 4,00 | 4,00 |
činidlo proti zamŕzaniu | 9,10 | 19,00 |
detergenty | 2,50 | 2,50 |
regulátory hodnoty pH | 2,85 | 2,85 |
voda | 1,55 | 16,65 |
100,00 | 100,00 |
Ak sa použije hodnota 500 000 BTTU/g čistej kryštalickej bielkoviny, je obsah aktívnej kryštalickej bielkoviny v prípravkoch nasledujúci:
% Btt kryštalickej bielkoviny | |
NOVODOR® WP 70,8 KBTTU/g | 14,16 |
NOVODOR1® FC1 24,7 KBTTU/g | 4,94 |
NOVODOR® FC2 14,2 KBTTU/g | 2,84 |
V339/94H- 2.3.2000
Detergenty sa volia zo širokého súboru pomocných prísad na suspendovanie a zmáčadiel normálne používaných v poľnohospodárskych pesticídnych prostriedkoch. Ako činidlo proti vytváraniu koláča sa požíva hydrofilný oxid kremičitý a ako inertné plnidlo sa používajú bežné inertné plnidlá, ako sú bentonity, anorganické soli alebo hlinky. Ako konzervačné prísady do rozplývaných vodných koncentrátov sa používajú konzervačné prísady pre potravinárske a kozmetické výrobky. Prostriedkom na úpravu hodnoty pH je anorganická kyselina.
Príklad 5
Uskutočňujú sa poľné skúšky na potvrdenie biologickej účinnosti vysokovýťažkového Btt mutantu DSM 5480 na samčích larvách pásavky zemiakovej. Porovnanie sa uskutočňuje s dvoma obchodnými produktami Trident® a M-one®; kultúrnou rastlinou sú zemiaky.
Kultúrna rastlina sa postrieka trikrát : 20. júna, 27. júla a 3. augusta (2.generačná larva). Používané produkty a ich dávkovanie je uvedené v nasledujúcej tabuľke:
Objem produktu na 0,4 ha pôdy | Účinnosť | Množstvo Btt bielkovinového kryštálu v prostriedku | |
líter/0,4 ha | KBTTU/g | % | |
Novodor® ru z | 1,134 | 14,2 | 2,84 |
1,701 | 14,2 | 2,84 | |
2,835 | 14,2 | 2,84 | |
3,402 | 14.2 | 2,84 | |
Trident® | 4,536 | 5,5 | 1,10 |
M-one® | 2,268 | 8,9 | 1,78 |
Stredná hodnota obmedzenia lariev pásavky zemiakovej v porovnaní s neošetrenými kontrolnými rastlinami je uvedená v tabuľke V. Napadnutie pásavkou zemiakovou bolo značne silné v prípade neošetrených rastlín : 370 lariev na 20 rastlín 1. augusta a 904 lariev na 20 rastlín 8. augusta.
V339/94H-2.3.2000
Tabuľka V
Ošetrenie | Objem produktu na akr pôdy | Percentuálne obmedzenie | |
NOVODOR0* FC 2 | liter/0,4 ha | 1. augusta | 8. augusta |
NOVODOR®FC 2 | 1,134 | 99 | 99 |
NOVODOR®FC 2 | 1,701 | 95 | 100 |
NOVODOR® FC 2 | 2,835 | 98 | 99 |
NOVODOR® FC 2 | 3,402 | 100 | 100 |
TRIDENT® | 4,536 | 94 | 98 |
M-one® | 2,268 | 98 | 98 |
Výsledky jasne dokazujú, že produkty s vysokovýťažkovým mutantom DSM 5480 sú účinné na ničenie lariev pásavky zemiakovej na poliach. Kryštalická bielkovina, produkovaná vysokovýťažkovým kmeňom je plne účinná, ako 1,701 litrov na 0,4 ha NOVODORU® FC poskytuje rovnako dobré výsledky ako 4,536 litrov na 0,4 ha Tridentu a rovnako dobré ako 2,268 litrov na 0,4 ha M-onu.
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticidnych deltaendotoxinov ako materský kmeň.
- 2. Pesticídny prostriedok na boj so škodlivým hmyzom, najmä zo súboru zahrňujúceho motýle, dvojkrídly hmyz a chrobáky a predovšetkým na boj s pásavkou zemiakovou, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, podľa nároku 1, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticidnych deltaendotoxinov ako materský kmeň.
- 3. Pesticídny prostriedok podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že obsahuje prídavné poľnohospodársky vhodné rozpúšťadlá a/alebo nosiče.
- 4. Pesticídny prostriedok, podľa nároku 2 a 3, vyznačujúci sa tým, že obsahuje prídavné povrchovo aktívnu látku.
- 5. Spôsob prípravy mutantov kmeňov mikroorganizmu Bacillus thurigiensis podľa nároku 1 a jeho selekcie, vyznačujúci sa tým, že sa materský kmeňi) spracováva akýmkoľvekxch^cky(<vlfodným mutagénom, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidínom, alebo etylmetánsulfonátom, za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako sú lúče γ, rôntgenové lúče, alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát a pripadne ako doplnky 0,57 g/l chloridu horečnatého a 20 g/l gelritu, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré v339/94H - 2.3.2000 nestekucuje pri zahrievaní a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónii v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát, doplnenom chloridom horečnatým a doplnkami modifikovaného živného sporulačného prostredia.
- 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že sa takto oddelené kolónie nechávajú rásť na normálnom produkčnom prostredí a potom sa ďalej vykonáva konečné oddelenie kmeňov, schopných zvýšente/produkcie delta endotoxínov.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK580589A DK580589D0 (da) | 1989-11-17 | 1989-11-17 | Mutant |
DK627489A DK627489D0 (da) | 1989-12-12 | 1989-12-12 | Mutant |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK562990A3 true SK562990A3 (en) | 2001-02-12 |
SK281286B6 SK281286B6 (sk) | 2001-02-12 |
Family
ID=26067985
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK5629-90A SK281286B6 (sk) | 1989-11-17 | 1990-11-14 | Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0585215B1 (sk) |
JP (1) | JP2950614B2 (sk) |
KR (1) | KR0157065B1 (sk) |
AT (1) | ATE184645T1 (sk) |
AU (1) | AU647056B2 (sk) |
BG (1) | BG61699B1 (sk) |
CA (1) | CA2068734C (sk) |
DE (2) | DE585215T1 (sk) |
DK (1) | DK0585215T3 (sk) |
ES (1) | ES2060568T3 (sk) |
FI (1) | FI103130B (sk) |
GR (2) | GR940300021T1 (sk) |
HU (1) | HU214685B (sk) |
NO (1) | NO305131B1 (sk) |
RO (1) | RO109862B1 (sk) |
RU (1) | RU2138950C1 (sk) |
SK (1) | SK281286B6 (sk) |
TR (1) | TR28902A (sk) |
WO (1) | WO1991007481A1 (sk) |
YU (1) | YU48440B (sk) |
Families Citing this family (139)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6270760B1 (en) * | 1989-12-18 | 2001-08-07 | Valent Biosciences, Inc. | Production of Bacillus thuringiensis integrants |
US5187091A (en) * | 1990-03-20 | 1993-02-16 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects |
IL99928A0 (en) * | 1990-11-08 | 1992-08-18 | Agricultural Genetics Co | Biological control of pests |
US5264364A (en) * | 1991-01-31 | 1993-11-23 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects |
ZA932792B (en) * | 1992-05-12 | 1993-11-16 | Aeci Ltd | Insecticide composition |
WO1994028724A1 (en) * | 1993-06-10 | 1994-12-22 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins |
IL110299A0 (en) * | 1993-07-15 | 1994-10-21 | Novo Nordisk Entotech Inc | Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity |
WO1997027305A1 (en) * | 1996-01-26 | 1997-07-31 | Abbott Laboratories | Production of bacillus thuringiensis integrants |
US5804180A (en) * | 1996-07-17 | 1998-09-08 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins |
US6063756A (en) | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
US5965428A (en) * | 1996-10-08 | 1999-10-12 | Ecogen, Inc. | Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins |
KR100458765B1 (ko) * | 2001-12-24 | 2004-12-03 | 학교법인 동아대학교 | 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법 |
WO2014056780A1 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Basf Se | A method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material |
WO2014082879A1 (en) | 2012-11-27 | 2014-06-05 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
WO2014082871A1 (en) | 2012-11-27 | 2014-06-05 | Basf Se | Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides |
US20150313229A1 (en) | 2012-11-27 | 2015-11-05 | Basf Se | Substituted [1,2,4] Triazole Compounds |
EP2928873A1 (en) | 2012-11-27 | 2015-10-14 | Basf Se | Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides |
WO2014086854A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator |
WO2014086850A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii |
WO2014086856A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide |
EP2746255A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
WO2014095555A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
EP2746279A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
EP2746278A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2746277A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
EP2935224A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
EP2935236B1 (en) | 2012-12-19 | 2017-11-29 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides |
WO2014095534A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
EP2746266A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
WO2014095381A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
EP2746256A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
EP2746262A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi |
EP2746263A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Alpha-substituted triazoles and imidazoles |
US20150329501A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-11-19 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides |
EP2746260A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2746258A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2746257A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2746259A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
WO2014124850A1 (en) | 2013-02-14 | 2014-08-21 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
BR112015018853B1 (pt) | 2013-03-20 | 2021-07-13 | Basf Corporation | Mistura, composição agroquímica, método para controlar fungos fitopatogênicos, método para proteção do material de propagação dos vegetais e semente revestida |
WO2015011615A1 (en) | 2013-07-22 | 2015-01-29 | Basf Corporation | Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide |
WO2015036059A1 (en) | 2013-09-16 | 2015-03-19 | Basf Se | Fungicidal pyrimidine compounds |
WO2015036058A1 (en) | 2013-09-16 | 2015-03-19 | Basf Se | Fungicidal pyrimidine compounds |
CN106061254B (zh) | 2013-10-18 | 2019-04-05 | 巴斯夫农业化学品有限公司 | 农药活性羧酰胺衍生物在土壤和种子施用和处理方法中的用途 |
US10053432B2 (en) | 2013-12-12 | 2018-08-21 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
US20160318897A1 (en) | 2013-12-18 | 2016-11-03 | Basf Se | Azole compounds carrying an imine-derived substituent |
WO2015104422A1 (en) | 2014-01-13 | 2015-07-16 | Basf Se | Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests |
EP2924027A1 (en) | 2014-03-28 | 2015-09-30 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds |
US9968092B2 (en) | 2014-04-17 | 2018-05-15 | Basf Se | Combination of novel nitrification inhibitors and biopesticides as well as combination of (thio)phosphoric acid triamides and biopesticides |
EP2962568A1 (en) | 2014-07-01 | 2016-01-06 | Basf Se | Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide |
EP2949649A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-02 | Basf Se | Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2949216A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-02 | Basf Se | Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2952512A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
EP2952506A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
EP2952507A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
CN107075712A (zh) | 2014-10-24 | 2017-08-18 | 巴斯夫欧洲公司 | 改变固体颗粒的表面电荷的非两性、可季化和水溶性聚合物 |
CN111742937A (zh) * | 2015-01-16 | 2020-10-09 | 瓦伦特生物科学有限责任公司 | 苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种组合制剂 |
WO2016128239A1 (en) | 2015-02-11 | 2016-08-18 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide |
AU2016231152A1 (en) | 2015-03-11 | 2017-09-28 | Basf Agrochemical Products B.V. | Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide |
CN107592790B (zh) | 2015-03-11 | 2022-03-25 | 巴斯夫农业化学品有限公司 | 包含羧酰胺化合物和生物农药的农药混合物 |
EP3111763A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-04 | BASF Agro B.V. | Pesticidal compositions comprising a triazole compound |
EP3383183B1 (en) | 2015-11-30 | 2020-05-27 | Basf Se | Compositions containing cis-jasmone and bacillus amyloliquefaciens |
EP3205209A1 (en) | 2016-02-09 | 2017-08-16 | Basf Se | Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides |
US20190200612A1 (en) | 2016-09-13 | 2019-07-04 | Basf Se | Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides |
WO2018149754A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Basf Se | Pyridine compounds |
JP7160486B2 (ja) | 2017-03-28 | 2022-10-25 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 殺生物剤化合物 |
WO2018184882A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Basf Se | Pyridine compounds |
US20210179620A1 (en) | 2017-06-16 | 2021-06-17 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
WO2018234202A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Basf Se | SUBSTITUTED PYRIMIDINIUM COMPOUNDS AND DERIVATIVES FOR CONTROLLING HARMFUL ANIMALS |
WO2018234488A1 (en) | 2017-06-23 | 2018-12-27 | Basf Se | SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES |
EP3453706A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-13 | Basf Se | Pesticidal imidazole compounds |
WO2019057660A1 (en) | 2017-09-25 | 2019-03-28 | Basf Se | INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES |
WO2019072906A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Basf Se | IMIDAZOLIDINE PYRIMIDINIUM COMPOUNDS FOR CONTROL OF HARMFUL ANIMALS |
WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
US11512054B2 (en) | 2017-12-21 | 2022-11-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
JP7479285B2 (ja) | 2018-01-09 | 2024-05-08 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 硝化阻害剤としてのシリルエチニルヘタリール化合物 |
WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
AU2019226360A1 (en) | 2018-02-28 | 2020-08-27 | Basf Se | Use of alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors |
CA3089381A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Basf Se | Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors |
WO2019166560A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Basf Se | Use of n-functionalized alkoxy pyrazole compounds as nitrification inhibitors |
WO2019175712A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Basf Corporation | New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways |
WO2019175713A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Basf Corporation | New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways |
WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
WO2020002472A1 (en) | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Basf Se | Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors |
EP3826983B1 (en) | 2018-07-23 | 2024-05-15 | Basf Se | Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors |
WO2020020765A1 (en) | 2018-07-23 | 2020-01-30 | Basf Se | Use of a substituted thiazolidine compound as nitrification inhibitor |
EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
EP3887357A1 (en) | 2018-11-28 | 2021-10-06 | Basf Se | Pesticidal compounds |
US20230031024A1 (en) | 2018-12-18 | 2023-02-02 | Basf Se | Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests |
EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
EP3730489A1 (en) | 2019-04-25 | 2020-10-28 | Basf Se | Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides |
EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
CN113923987B (zh) | 2019-05-29 | 2024-10-01 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物 |
EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
WO2021170463A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | BASF Agro B.V. | Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf |
CN115443267A (zh) | 2020-04-28 | 2022-12-06 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀害虫化合物 |
EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
EP3960727A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi |
EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
EP4011208A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-15 | BASF Corporation | Microparticle compositions comprising fluopyram |
CN116829521A (zh) | 2021-02-02 | 2023-09-29 | 巴斯夫欧洲公司 | Dcd和烷氧基吡唑作为硝化抑制剂的协同增效作用 |
EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
JP2024519813A (ja) | 2021-05-18 | 2024-05-21 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 殺菌剤としての新規な置換ピリジン |
US20240270727A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-08-15 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicide |
WO2022243109A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted quinolines as fungicides |
CN117355504A (zh) | 2021-05-21 | 2024-01-05 | 巴斯夫欧洲公司 | 乙炔基吡啶化合物作为硝化抑制剂的用途 |
CN117440946A (zh) | 2021-05-21 | 2024-01-23 | 巴斯夫欧洲公司 | N-官能化的烷氧基吡唑化合物作为硝化抑制剂的用途 |
WO2022268810A1 (en) | 2021-06-21 | 2022-12-29 | Basf Se | Metal-organic frameworks with pyrazole-based building blocks |
EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
KR20240042636A (ko) | 2021-08-02 | 2024-04-02 | 바스프 에스이 | (3-피리딜)-퀴나졸린 |
CA3227653A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Wassilios Grammenos | (3-quinolyl)-quinazoline |
EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
WO2023203066A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Basf Se | Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers |
EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
EP4361126A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-01 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv |
WO2024104823A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | New substituted tetrahydrobenzoxazepine |
WO2024104818A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
WO2024104822A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides |
WO2024104815A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
EP4389210A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Basf Se | Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests |
WO2024165343A1 (en) | 2023-02-08 | 2024-08-15 | Basf Se | New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi |
WO2024194038A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Basf Se | Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4277564A (en) * | 1980-01-09 | 1981-07-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis |
CA1193564A (en) * | 1982-07-09 | 1985-09-17 | University Of Western Ontario | Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control |
DE3346138A1 (de) * | 1983-12-21 | 1985-07-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera |
US4764372A (en) * | 1985-03-22 | 1988-08-16 | Mycogen Corporation | Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof |
DE3541893A1 (de) * | 1985-11-27 | 1987-06-11 | Basf Ag | Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus |
JPS62146593A (ja) * | 1985-12-16 | 1987-06-30 | マイコゲン コ−ポレ−シヨン | バシラス・スリンギエンシスの安定なspo−cry+変異株の製法 |
JP2775150B2 (ja) * | 1987-03-04 | 1998-07-16 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル.イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法 |
ES2063051T3 (es) * | 1987-12-24 | 1995-01-01 | Zeneca Ltd | Cepas bacterianas. |
US4999192A (en) * | 1988-02-12 | 1991-03-12 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate |
US4966765A (en) * | 1988-02-23 | 1990-10-30 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
US4996155A (en) * | 1988-03-04 | 1991-02-26 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin |
US4990332A (en) * | 1988-10-25 | 1991-02-05 | Mycogen Corporation | Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
-
1990
- 1990-11-14 SK SK5629-90A patent/SK281286B6/sk unknown
- 1990-11-16 RO RO92-200690A patent/RO109862B1/ro unknown
- 1990-11-16 WO PCT/DK1990/000294 patent/WO1991007481A1/en active IP Right Grant
- 1990-11-16 DE DE0585215T patent/DE585215T1/de active Pending
- 1990-11-16 JP JP2515745A patent/JP2950614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 HU HU9201628A patent/HU214685B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 YU YU218590A patent/YU48440B/sh unknown
- 1990-11-16 AU AU67364/90A patent/AU647056B2/en not_active Ceased
- 1990-11-16 KR KR1019920701171A patent/KR0157065B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 DK DK90917069T patent/DK0585215T3/da active
- 1990-11-16 AT AT90917069T patent/ATE184645T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 EP EP90917069A patent/EP0585215B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 DE DE69033291T patent/DE69033291T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 RU SU5052261A patent/RU2138950C1/ru active
- 1990-11-16 ES ES90917069T patent/ES2060568T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 CA CA002068734A patent/CA2068734C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 TR TR01097/90A patent/TR28902A/xx unknown
-
1992
- 1992-05-14 FI FI922205A patent/FI103130B/fi active
- 1992-05-15 NO NO921950A patent/NO305131B1/no unknown
- 1992-06-16 BG BG96488A patent/BG61699B1/bg unknown
-
1994
- 1994-04-29 GR GR940300021T patent/GR940300021T1/el unknown
-
1999
- 1999-11-10 GR GR990402908T patent/GR3031815T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SK562990A3 (en) | Mutant of bacillus thuringiensis deposited as subsp. tenebrionis dsm 5480, method for the preparation thereof and pesticide containing the same | |
US5006336A (en) | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate | |
EP0178151A2 (en) | Preparation of strains of bacillus thuringiensis having an improved activity against certain lepidopterous pests and novel strain produced thereby | |
US5080897A (en) | Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions | |
JP3798017B2 (ja) | 新規の双翅類活性化合物及びバチルス チューリングエンシス株 | |
EP0612217B1 (en) | Bacillus thuringiensis isolates active against cockroaches and genes encoding cockroach-active toxins | |
US5279962A (en) | Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin | |
EP0570089A1 (en) | Novel toxin producing fungal pathogen and uses | |
AU639896B2 (en) | Novel bacillus thuringiensis strains | |
EP0522836A2 (en) | Novel bacillus strain and insect pest controlling agent | |
EP0309145A1 (en) | Bacteriophage-resistant strain of Bacillus Thuringiensis Var. San Diego | |
CZ562990A3 (cs) | Mutant mikroorganismu Bacillus thuringiensis deponovaný jako subsp. tenebrionis DSM 5480, způsob jeho přípravy a pesticidní prostředek, který ho obsahuje | |
HRP920198A2 (en) | Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin | |
PL166433B1 (pl) | Sposób wytwarzania owadobójczego produktu wytwarzanego przez B. thuringlensis PL PL PL PL PL PL | |
EP0582541A2 (en) | Process for creating conjugation-proficient Bacillus thuringiensis strains | |
Jayaraman et al. | Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies | |
IL86242A (en) | Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use |