SK562990A3 - Mutant of bacillus thuringiensis deposited as subsp. tenebrionis dsm 5480, method for the preparation thereof and pesticide containing the same - Google Patents

Mutant of bacillus thuringiensis deposited as subsp. tenebrionis dsm 5480, method for the preparation thereof and pesticide containing the same Download PDF

Info

Publication number
SK562990A3
SK562990A3 SK5629-90A SK562990A SK562990A3 SK 562990 A3 SK562990 A3 SK 562990A3 SK 562990 A SK562990 A SK 562990A SK 562990 A3 SK562990 A3 SK 562990A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
mutant
strains
subsp
dsm
bacillus
Prior art date
Application number
SK5629-90A
Other languages
English (en)
Other versions
SK281286B6 (sk
Inventor
Hanne Gurtler
Schousboe Anette Petersen
Original Assignee
Novo Nordisk As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK580589A external-priority patent/DK580589D0/da
Priority claimed from DK627489A external-priority patent/DK627489D0/da
Application filed by Novo Nordisk As filed Critical Novo Nordisk As
Publication of SK562990A3 publication Critical patent/SK562990A3/sk
Publication of SK281286B6 publication Critical patent/SK281286B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

MUTANT MIKROORGANIZMU BACILLUS THURÍNGIENSIS DEPONOVANÝ AKO SUBSP. TENEBRIONIS DSM 5480, SPÔSOB JEHO PRÍPRAVY A PESTICÍDNY PROSTRIEDOK, KTORÝ HO OBSAHUJE
Oblasť techniky
Vynález sa týka mutantu mikroorganizmu Bacillus thuríngiensis deponovaného ako subsp. tenebrionis DSM 5480, spôsobu jeho prípravy a pesticídneho prostriedku, ktorý ho obsahuje.
Doterajší stav techniky
Obchodný prípravok Bacillus thuríngiensis sú celosvetovo používané na biologický boj proti škodlivému hmyzu. Prednosťou týchto bakteriálnych insekticídov sú vysoká selektivita pre veľmi obmedzený odbor ničeného škodlivého hmyzu a biologická odbúrateľnosť.
Obchodné prípravky Bacillus thuríngiensis sa môžu aplikovať až do doby zberu bez akéhokoľvek vedľajšieho nepriaznivého pôsobenia.
Bacillus thuríngiensis je tyčinkovitá aeróbna, spórotvorná baktéria, jedinečne charakterizovaná produkciou jednej alebo niekoľkých inklúzií pri sporulačnom procese, označovaných ako parasporálne kryštály. Tieto kryštály sú tvorené vysokomolekulárnymi bielkovinami, označovanými ako endotoxíny delta. Endotoxíny delta sú účinnou látkou obchodne dostupných prípravkov Bacillus thuríngiensis.
Boli identifikované mnohé kmene Bacillus thuríngiensis s rôznym spektrom hostiteľského hmyzu. Klasifikujú sa na rôzne poddruhy na základe svojich antigénov. Zvláštny význam má poddruh kurstaki Bacillus thurigiensis a poddruh aizawai Bacillus thurigiensis na hubenie motýľov radu Lepidoptera, Bacillus thurigiensis poddruh israelensis na hubenie dvojkrídleho hmyzu a Bacillus thurigiensis poddruh tenebrionis používaný na hubenie chrobákov.
Prvá izolácia Bacillus thurigiensis toxického pre chrobáky bola popísaná v339/94H - 2.3.2000 v roku 1983 (A.Krieg a kol., Z.end.Ent. 96, str. 500 až 508, EP 0149162 A2). Izolát, označený ako Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis je uložený v nemeckej zbierke Germán Collection of Mocroorganisms pod číslom DSM 2803. Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis bol izolovaný v roku 1982 z usmrtených lariev múčiara Tenebrio molitor ( Tenebrionidae. Coleoptere ). Kmeň produkuje v každej bunke jednu spóru a jeden , alebo niekoľko insekticidnych peresporálnych kryštálov, ktoré majú plochú , doštičkovitú formu s dĺžkou hrany približne 0,8 pm až 1,5 pm . Patria k serotypu H8a, 8b a patotypu C Bacillus thurigiensis ( Krieg a kol. , System Appl. Microbiol. 9, str. 138-141, americký patentový spis číslo 4 766203,1988).
Je toxický len k určitým larvám chrobákov (Chrysomelidae) živiacim sa listami, je však neúčinný proti húseniciam ( Lepidoptera), proti komárom (Diptera) a proti ďalšiemu hmyzu.
Zistilo sa , že Bacillus thurigiensis subsp.tenebrionis je účinným prostriedkom proti larvám pásavky zemiakovej . Po požití kryštálov a spór mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis , alebo izolovaných kryštálov larvami a v určitej miere dospelými jedincami , prestane Pásavka zemiaková ( Leptinotarsa decemlineata ) prijímať potravu. Larválne štádium L1-L3 hynie v priebehu 1 až 3 dní ( Schnettar a kol. , „ Fundamental and applied aspects of invertebrate pathology “ - Základná a aplikovaná patológia bezstavovcov), R. A. Samson a kol., Proceedings of the 4th Int. Colloquium of Invertebrate Pathology, str. 555,1986).
Najnovšie sa zistilo, že Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis produkuje okrem aktívnych kryštálov proti chrobákom iný parasporálny- kryštál, ktorý má vretenový, guľovitý, alebo doštičkovitý tvar ( A.M.Huger a A.Krieg, J.appl.Ent.,108, str. 490-497, 1989 ). Účinnosť tohto druhého kryštálu doposiaľ nebola známa.
Boli vyvinuté štyri obchodné prípravky Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis na hubenie chrobákov ( NOVODOR ® spoločnosti NovoNordisk A/S, TRIDENT® spoločnosti Sandoz, DiTerra® spoločnosti Abbott Laboratories Inc. a FOIL ® spoločnosti Ecogen.
Izolácia ďalšieho kmeňa Bacillus thurigiensis, toxického pre chrobákov, bola
V339/94H - 2.3.2000 popísaná v roku 1986 (Hernstadt a kol., BioTechnology, ročník 4, str. 305-308, 1986, americký patentový spis číslo 4 764372, 1988 ). Tento kmeň označený ako „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego“, M7, je uložený vo výskumnom laboratóriu Northern Regional Research Laboratory, USA pod číslom NRRL B15939. Obchodný produkt na báze mikroorganizmu „Bacillusi thurigiensis subsp. San Diego, bol vyvinutý spoločnosťou Mycogen Corp.
Porovnávacie štúdie Bacillus thurigiensis subsp. tanebriosis, DSN 2803 a „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego, NRRL B 15939 vrátane fenotypovej charakteristijý vegetatívnych buniek , charakterizácie parasporálneho kryštálu a analýzy plazmidu DNA však ukázali, že Bacillus thurigiensis subsp. San Diego, je zrejme identický so skôr izolovaným kmeňom DSN 2803, Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis Krieg a kol., J.Appl. Ent. 104, str. 417 až 424,1987/Okrem toho nukleotidová sekvencie a odvodené aminokyselinové sekvencie proti chrobákom účinných génov endotoxínu delta mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis a Bacillus thurigiensis subsp. san diego , sú identické.
Pri rovnakých kultivačných podmienkach , vyššie uvedený typ kryštálov je tiež syntetizovaný mikroorganizmom Bacillus thurigiensis subsp. san diego ( A.M.Hunter a A.Krieg, J.Appl, Ent.,10B, str. 490 až 497, 1989 ).
Podľa autorov H. de Barjac a E.Frachon ( Entomophaga 35/2 , str. 233 až 240, 1990) izolát „San Diego, je podobný izolátu „tenebriosis“ a preto nieje možné ich považovať za rozdielne poddruhy.
Užitočnosť kmeňa Bacillus thurigiensis na hubenie chrobákov závisí na účinnosti a ekonomickej produkcii toxinov účinných proti chrobákom a na potencii vyrobeného produktu. To je naopak závislé na množstve endotoxinov delta, ktoré sa môžu produkovať fermentáciou kmeňov Bacillus thurigiensis účinných pri hubení chrobákov.
Mikroorganizmus Bacillus thurigiensis sa môže používať počas mnoho rokov na výrobu insekticídne účinnej látky , avšak akokoľvek by boli mutanty Bacillus thurigiensis so zvýšeným výťažkom endotoxinov delta výhodné , neboli doposiaľ takéto mutanty popísané. Mutanty produkujúce endotoxiny delta s vyššími výťažkami by umožňovali účinnejšiu a ekonomickejšiu v339/94H - 2.3.2000 produkciu toxínov Bacillus thurigiensis a možnosť výroby produktov Bacillus thurigiensis so zvýšenou potenciou za rovnakú cenu. To by naopak bolo výhodné pre užívateľa , pretože by sa skladovali znížené objemy pesticfdnych prostriedkov a bola by nutná manipulácia so sníženými objemami pre danú výmeru. Okrem toho by užívatelia mali menšie problémy s obalmi a znížilo by sa zaťažowanie životného prostredia týmito obalmi.
Zlepšenie produkcie endotoxinu delta mikroorganizmom Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis mutáciou nebolo doposiaľ popísané.
Jedným problémom, spojeným s použitím najmä mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis pri hubení lariev chrobákov, je pomerne nízka potencia, alebo agresívnosť prípravkov, vyžadujúca použitie pomerne veľkého množstva prípravku na ošetrovanú výmeru, napríklad 5 až 10 l/ha v porovnaní s 1 až 2 l/ha väčšiny iných produktov Bacillus thurigiensis a väčšiny iných insekticidov . Preto sa ukazuje potreba nových produktov so zvýšenou účinnosťou.
Jedným riešením tohoto problému je koncentrovanie prípravkov . To však, značne zvyšuje náklady v porovnaní s úsporami dosiahnutými pri skladovaní a pri manipulácii s prípravkami.
Elegantnejším riešením je vyvinutie mutantov existujúcich mikroorganizmov Bacillus thurigiensis schopných produkcie podstatne väčších množstiev endotoxinu delta na bunku.
Vynález sa teda týka mutantu kmeňov Bacillus thuringiensis, schopného produkcie podstatne väčšieho množstva toxínov než ich materský kmeň.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je mutant mikroorganizmu Bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticídnych delta-endotoxinov než materský kmeň.
Pesticídny prostriedok na boj so škodlivým hmyzom, zvlášť zo súboru zahrňujúceho motýle, dvojkrídle a chrobáky a predovšetkým na boj s pásavkou zemiakovou, spočíva podľa vynálezu vtom, že ako účinnú látku obsahuje
V339/94H- 2.3.2000 mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticfdnych delta-endotoxinov než materský kmeň. Tento pesticidny prostriedok môže prídavné obsahovať poľnohospodársky vhodnérozpúšťadlá a/alebo nosiče a povrchovo aktívnu látku.
Spôsob prípravy mutantu kmeňov mikroorganizmu Bacillus thurigiensis a jeho selekcia spočíva podľa vynálezu vtom, že sa materský kmeň
i) spracováva akýmkoľvek chemicky vhodným mutagénom, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidfnom alebo etylmetánsulfonátom, za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako sú papršleky gama, rôntgenové papršleky alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát a poprípade doplnky modifikovaného živného sporulačného prostredia, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nesteká pri zahrievaní a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát, doplnený chloridom horečnatým a doplnky modifikovaného živného sporulačného prostredia.
Takto oddelené kolónie sa nechávajú rásť na normálnom produkčnom prostredí a potom sa ďalej uskutočňuje konečné oddelenie kmeňov, schopných zvýšenia produkcie delta endotoxínov.
Resticídny prostriedok je vhodný na potieranie škodlivého hmyzu, pri ktorom sa na plochy, napadnuté škodlivým hmyzom, nanáša pesticidny prostriedok podľa vynálezu.
Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, ktorý produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta, bol deponovaný organizáciou Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroderweg 1b, D-3300 Braunschweig, Nemecko, na účely patentového postupu na základe ďalej uvedených hodnôt. DSM je medzinárodný depozitár podľa medzinárodnej Budapeštianskej dohody trvalého uloženia podľa odstavca 9 tejto
V339/94H - 2.3.2000 medzinárodnej dohody, deň uloženia referencia uloženia označenie DSM
10.
NB 176-1 DSM 5480 augusta
1989
Mutant DMS 5480 sa získa mutáciou mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis, kmeň DMS 5526, ktorý je tiež deponovaný podľa medzinárodnej Budapeštianskej dohody, ako je ďalej uvedené:
deň uloženia referencia uloženia označenie DSM
14. september 1989 NB 125 DSM 5526
Všeobecne sa vynález týka mutantov a variantov mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, produkujúcich vysoké množstvo endotoxlnu delta v porovnaní so svojím materským kmeňom.
V tejto súvislosti sa „vysokým množstvom mieni aspoň dvojnásobné množstvo avšak skôr ešte väčšie množstvo.
Všeobecne avšak zvlášť sa vynález týka endotoxínov delta, produkovaných mutantom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ktorý pôsobí na rovnaké druhy škodlivého hmyzu ako endotoxlny delta materského mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ako také proti motýľom (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. kurstaki a subsp. aizawai), dvojkrídlemu hmyzu (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. israelensis) alebo chrobákom (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. tenebrionis).
Zvlášť sa vynález týka mikroorganizmu Bacillus thuringiensis patriaceho do podtríedy tenebrionis a endotoxlnu delta, produkovaného týmto mikroorganizmom a účinného proti chrobákom.
Z tohto hľadiska sa vynález zvlášť týka mutantu alebo variantu mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis, schopného produkovať viac než trojnásobok endotoxlnu delta v porovnaní s kmeňom DSM 2803.
Vynález sa ďalej týka variantu alebo mutantov kmeňov mikroorganizmu
B. thuringiensis subsp. tenebrionis, ktoré sú schopné produkovať parasporálny kryštál majúci strednú dĺžku hrany aspoň 2 mikrometre.
V339/94H - 2.3.2000
Vynález sa tiež týka variantu alebo mutantu kmeňov B. thuringiensis subsp. tenebríonis, vykazujúcich frekvenciu sporulácie 10 až 100 krát alebo dokonca 106 krát nižšiu, než je frekvencia sporulácie materského kmeňa alebo kmeňa DSM 2803.
Podľa zvlášť výhodného uskutočnenia sa vynález týka deponovaného mutantu B. thuringiensis subsp. tenebríonis, DSM 5480.
Pri práci na tomto vynáleze bol izolovaný mutant mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebríonis /DSM 5480/ s viac než dvojnásobným množstvom produkovaného endotoxínu delta v porovnaní s materským kmeňom /DSM 5526/. Fázová kontrastná mikroskópia, riadkovacia elektrónová mikroskópia a transmisná elektrónová mikroskópia dokladajú, že vysoká produktivita tohto mutantu je podmienená zmenami riadenia produkcie endotoxínu delta vo vzťahu k sporulácii, vedúcimi k produkcii kryštálov bielkoviny, ktorá je až viac než päť krát vyššia než produkcia kryštálov kmeňa existujúceho mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ktorý je účinný proti chrobákom. Tento úzky vzťah medzi vytváraním kryštálu a sporuláciou sa zdá byť odstránený a mutant produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta pred sporuláciou.
Vynález sa týka použitia variantu alebo mutantu kmeňov podľa vynálezu pri produkcii insekticídnych produktov na báze mikroorganizmu B.thuringiensis, pričom sa variant alebo mutant kmeňa B. thuringiensis kultivuje vo vhodnom kultivačnom prostredí, obsahujúcom zdroje uhlfka, dusíka a ďalších zložiek, známych pracovníkom v odbore, počas vhodnej doby, načo sa endotoxíny delta izolujú.
Vynález sa tiež týka mikroorganizmom B.thuringiensis produkovaného endotoxínu delta, produkovaného zhora uvedeným spôsobom a používaného ako účinná látka v pesticidnych prostrediach.
V takýchto prostrediach sa endotoxíny delta môžu požívať buď samotné alebo v zmesi s inými biologicky účinnými látkami.
Vynález sa tiež týka takých pesticidnych zmesi alebo prostriedkov, ktoré obsahujú endotoxín delta, produkovaný mikroorganizmom B. thuringiensis podľa vynálezu v zmesi s poľnohospodársky vhodnými rozpúšťadlami alebo
V339/94H - 2.3.2000 nosičmi.
Vynález sa tiež týka takých pesticfdnych zmesí alebo prostriedkov obsahujúcich endotoxín delta, produkovaný mikroorganizmom B. thuringiensis, ktoré v kvapalnej forme majú účinnosť aspoň 15 000 BTTU/g, zodpovedajúcu aspoň hmotnostné 3 % bielkovinového kryštálu insekticldneho proti chrobákom alebo v suchej forme majú účinnosť aspoň 50 000 BTTU/g zodpovedajúcu aspoň hmotnostné 10 % bielkovinového kryštálu insekticidneho proti chrobákom.
Obzvlášť sa vynález týka pesticídnych prostriedkov produkovaných DSM 5480, majúcich aspoň dvojnásobnú účinnosť v porovnaní s pesticídnymi prostriedkami produkovanými DSM 2803, alebo inými kmeňmi Btt účinnými proti chrobákom.
Prostriedky podľa vynálezu môžu mať akúkoľvek známu formu z odboru agrochemikálif, napríklad to môžu byť suspenzie, disperzie, vodné emulzie, poprašky, dispergovateľné prášky, emulgovateľné koncentráty alebo granule. Okrem toho môžu byť vo vhodnej forme na priame použitie alebo vo forme koncentrátov alebo primárnych prostriedkov, ktoré vyžadujú neriedenie vhodným množstvom vody alebo iného rozpúšťadla pre použitím.
Koncentrácia insekticídnych endotoxínov delta B. thuringiensis v prostriedkoch podľa vynálezu, používaných ako také alebo v zmesi s inými pesticídmi, na nanášanie na rastliny, je s výhodou hmotnostné 0,5 až približne 25 %, zvlášť hmotnostné 1 až 15 %.
Vynález sa tiež týka spôsobu boja proti škodcom, pričom sa používajú hore popísané insekticídne prostriedky na miesta, napadnuté hmyzom.
Vynález sa zvlášť týka hubenia motýľov, dvojkrídleho hmyzu a chrobákov a predovšetkým sa týka potierania pásavky zemiakovej.
S výhodou sa podľa vynálezu používa 4,5 litrov na 0,4 ha kvapalného pesticídneho prostriedku alebo približne 226 g na 0,4 ha suchého pesticidneho prostriedku.
Aktívny prípravok B. thuringiensis alebo zmes podľa vynálezu sa môže nanášať priamo na rastlinu napríklad nastriekaním alebo poprášenim v dobe, keď sa nežiadúci hmyz začne na rastline vyskytovať. Výhodným spôsobom v339/94H - 2.3.2000 nanášania je postrek. Všeobecne je dôležité dosiahnuť dobrú kontrolu škodlivého hmyzu v ranných štádiách larválneho vývoja, pretože v takomto prípade dochádza k najmenšiemu poškodeniu rastliny.
Spôsob mutácie kmeňov Bacillus thuringiensis a selekcia takých mutantov, ktoré sú schopné produkcie podstatne väčšieho množstva endotoxínov delta než materské kmene, zahŕňa i/ spracovanie mutagénom, ii/ takto spracované mutanty sa nechávajú rásť na vhodnom prostredí pre selekciu asporogénnych alebo oligosporogénnych kmeňov, iii/ oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nestekucuje pri zahriati a iv/ oddelia sa skutočne asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií.
Pri takomto výhodnom spôsobe sa takto oddelené kolónie nechávajú rásť v normálnom produkčnom prostredí a potom sa uskutoční oddelenie kmeňov, ktoré sú schopné zvýšenej produkcie endotoxinu delta.
Pri stupni /i/ hore uvedeného postupu, môže byť mutagénom akýkoľvek vhodný chemický mutagén, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidín alebo etylmetánsulfonát alebo sa materský kmeň môže spracovať elektromagnetickým žiarením, ako sú γ-papršleky, rôntgenové papršleky alebo ako je ultrafialové žiarenie.
V stupni /ii/ môže byť vhodným prostredím modifikované živné sporulačné prostredie obsahujúce fosfát /prostredie NSMP/, ktoré popísal Johnson a kol. v publikácii „Spores Vľ, vy d. P. Gerhard a kol., str. 248 až 254, 1975. V stupni /iv/ hore popísaného spôsobu môže byť vhodným prostredím prostredie NSMP doplnené chloridom horečnatým a Gelritem, Kaico.
Iným spôsobom získania vysoko produktívnych variantov alebo mutantov podľa vynálezu môže byť rast materského kmeňa v kvapalnom prostredí a selekcia spontánnych mutantov alebo variantov po rozprestreti kultivačnej pôdy na agarovom prostredí, vhodné na selekciu asporogénnych a/alebo oligosporogénnych mutantov.
Môžu sa použiť tiež iné spôsoby oddelenia vysoko produktívnych
V339/94H- 2.3.2000 variantov alebo mutantov. podľa vynálezu, ako je použitie hmoty týchto mutantov priamo odstredením alebo inými spôsobmi oddeľovania hmoty.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Izoluje sa mutant mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebríonis s viac než dvojnásobnou produkciou endotoxínu delta. Fázovou kontrastnou mikroskopiou, ríadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskopiou tohto mutantu bolo zistené, že vysoká produktivita tohto mutantu je podmienená zmenami riadenia produkcie delta endotoxinu so zreteľom na sporuláciu, vedúcimi k produkcii kryštálov bielkoviny, ktorá je až päťkrát vyššia než v prípade kryštálov produkovaných súčasnými kmeňmi mikroorganizmu Bacillus thuringiensis aktívnymi proti chrobákom. Úzky vzťah medzi vytváraním kryštálu a sporuláciou sa zdá byť odstránený a mutant produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta pred sporuláciou.
Produkcia vysokovýťažkového mutantu
Spóry mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebríonis, kmeň DSM 5526 sa ožiari papršlekmi γ v dávke 7 kGy. Ožiarené spóry sa potom rozprestrú na NSMP agarové doštičky (modifikované živné prostredie sporulačné obsahujúce fosfát, popísané Johnsonom a kol, v publikácii „Spores Vľ, vyd. P. Gerhardt a kol., str. 248 až 254, 1975). Prostredie vhodné na selekciu asporogénnych a/alebo oligosporogénnych mutantov.
NSMP-agarové doštičky sa inkubujú pri teplote 30 °C počas dvoch až troch dní. Odoberú sa priesvitné kolónie a prenesú sa na NSMP gelrítové doštičky (NSMP prostredie, doplnené chloridom horečnatým - 0,57 g/l a Gelritom, Kelco - 20 g/l).
NSMP gelrítové doštičky sa inkubujú počas jednej hodiny pri teplote 90 °C a potom počas jedného až dvoch dní pri teplote 30 °C.
V339/94H - 2.3.2000
Mutanty, ktoré na NSMP gelritových doštičkách dobre narastú, sa oddelia. Týmto spôsobom sa oddelia všetky asporogénne mutanty, pretože po tepelnom spracovaní nerastú.
Oddelené mutanty sa nechajú rásť v trepačkách obsahujúcich obchodné prostredie. Množstvo produkovaného endotoxfnu delta sa stanoví imunologickými spôsobmi, ako bude ďalej popísané.
Selektujú sa iba mutanty produkujúce výrazne vyššie množstvo delta endotoxinu než materský kmeň.
Morfológia selektovaných mutantov na pevnom prostredí a v kvapalnom prostredí sa študuje fázovou kontrastnou mikroskópiou /zväčši 2 500/ a riadkovacou elektrónovou mikroskópiou a transmisnou elektrónovou mikroskópiou. Sčíta sa počet spór a kryštálov a stanoví sa veľkosť bielkovinových kryštálov.
Vedľa získaných mutantov sa selektuje mutant /DSM 5480/ pre vynikajúcu schopnosť produkovať endotoxín delta.
Množstvo endotoxinu delta, produkovaného mutantom DSM 5480, sa porovnáva s množstvom produkovaným DSM 2803, pôvodným izolátom z mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň DSM 5526, používaným na produkciu prostriedku NOVODOR, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň NB178, izolovaný zo Sandozovho Bacillus thuringiensis tenebrionis produktu TRIDENT z roku 1989, kmeň NN 198, izolovaný zo Sandozovho B.thuringiensis subs. tenebrionis produktu TRIDENT z 1990, „Bacillus thuringiensis subsp. san diego kmeň NRRL-B-15939 a kmeň NB 197, izolovaný zMycogénovho B. thuringiensis subs. san diego produktu M-ONE z 1990. Ako je uvedené v tabuľke I v príklade 2, zlepšený mutant podľa vynálezu produkuje 2 až 3,5 krát viac endotoxinu delta než súčasne dostupné kmene mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, účinné proti chrobákom.
Príklad 2
Porovnáva sa výťažok endotoxinu delta mikroorganizmu Bacillus v339/94H - 2.3.2000 thuringiensis subspecies tenebrionis, mutant DSM 5480 a výťažky endotoxlnu delta mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis kmeňmi DSM 2803 /pôvodný izolát z mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis/, DSM 5526 /produkčný kmeň spoločnosti Novo-Nordisk/ a NB 178 a N B 198 /produkčné kmene spoločnosti Sandoz/ a Bacillus thuringiensis subsp.san diego, kmeň NRRL-B 15939 a NB 197 /produkčné kmene spoločnosti Mycogen/ v obchodnom prostredí. Každý z kmeňov sa necháva rásť počas 17 hodín pri teplote 30 ’C na sklonených agaroch nasledujúceho zloženia, vyjadreného ako gramy na liter destilovanej vody:
Pepton, Difco 5 g
Hovädzí extrakt, Difco 3 g Agar, Difco 20 g
Hodnota pH 7,0
Potom sa prenesie 5 ml suspenzie buniek z každého kmeňa do 100 ml produkčného prostredia v erlenmayerovej banke sprepážkovým dnom s obsahom 500 ml. Produkčné prostredie pozostáva z nasledujúcich zložiek v uvedenom množstve, vyjadrenom ako počet gramov na liter vodovodnej vody:
sójová múčka 50 g hydrolyzovaný škrob 40 g dihydrogénfosforečnan draselný 1,77 g monohydrogénfosforečnan draselný 4,53 g hodnota pH 7,0
Naočkované banky sa inkubujú pri teplote 30 ’C za trepania (250/min). Po 96 hodinách inkubácie sa kultivačná pôda skúša na obsah endotoxlnu delta imunologickými spôsobmi.
Stanoví sa množstvo produkovaného endotoxínu delta jednotlivými kmeňmi stúpajúcou imunoelektroforézou (“rocket immuno electrophoresis“ RIE) a fotometrickou imunozložkou /PIA/ za použitia protilátok proti čisteným bielkovinovým kryštálom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Odváži sa 400 mg každej kultivačnej pôdy. Pridá sa 7 ml trojsodného fosforečnanového pufru /0,125 M, hodnota pH 12/ do každej vzorky. Suspenzia v339/94H - 2.3.2000 sa potom pretrepáva počas jednej hodiny na rozpustenie delta endotoxinových bielkovín.
Vzorky sa potom odstredia pri počte otáčok 3 500/min v priebehu 15 minút a skúša sa supernatant na obsah endotoxínu RIE elektroforézou proti antiséru stúpajúcemu proti čisteným bielkovinovým kryštálom mikroorganizmu B. thuríngiensis subsp. tenebrionis. Stanoví sa množstvo endotoxínu delta so zreteľom na štandard so známym obsahom kryštalickej bielkoviny.
Koncentrácia kryštalickej bielkoviny sa tiež stanoví fotometrickou imunoskúškou. Kryštalické bielkoviny sa rozpustia v alkalickom roztoku. Rozpúšťané bielkoviny sa vyzrážajú svojimi protilátkami. Miera tejto reakcie sa Stanovi turbidimetrícky. Množstvo endotoxínu delta sa stanoví so zreteľom na štandard so známym obsahom kryštalickej bielkoviny.
Kryštalické antigény na produkciu protilátok, používaných pri skúškach, sa získajú z kryštálov izolovaných z mikroorganizmu B. thuríngiensis subsp. tenebrionis.
Polyklonálne protilátky sa zvyšujú vstrekovaním králikom subkutánne každých 14 dni s 0,25 mg kryštalického antigénu.
Získané výsledky sú uvedené v nasledujúcich tabuľkách la a lb. Výťažky endotoxínu delta sú vyjadrené ako BTTU/g (jednotky na g kultivačnej pôdy, stanovené elektroforézou RIE alebo fotometrickou imonoskúškou PIA). Použitá hodnota na čistú kryštalickú bielkovinu mikroorganizmu B.thuringiensis subsp. tenebrionis je 500 000 BTTU/g. Táto hodnota znamená v tabuľke la strednú hodnotu šiestich až siedmich nezávislých fermentácií a v tabuľke lb strednú hod notu-troch nezávislých fermentácií.
V339/94H - 2.3.2000
Tabuľka la
Produkcia endotoxínu delta kmeňmi Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis v trepačke
Výťažok endotoxínu delta stanovený spôsobom
RIE PIA
Kmeň BTTU/g BTTU/g
DSM 2803 676 1293
NRRL-B 15939 747 1126
NB 178 986 1728
DSM 5526 1097 1860
DSM 5480 2382 4169
Tabuľka Ib
Produkcia endotoxínu delta kmeňmi Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis v trepačke
Výťažok endotoxínu delta stanovený spôsobom
RIE
Kmeň BTTU/g
NB 197 1103
NB 198 1237
DSM 5480 2867
Z tabuľky la a Ib je zrejmé, že DSM 5480 produkuje viac než trojnásobok endotoxínu delta v porovnaní s pôvodným kmeňom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 2803 a „Bacillus thuringiensis subsp. san diego“, kmeň NRRL-B 15939 a viac než dvojnásobné množstvo endotoxínu delta v porovnaní s kmeňmi doteraz používanými na výrobu obchodných produktov Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Fázovou kontrastnou mikroskopiou, riadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskópiou organizmu Bacillus v339/94H - 2.3.2000
1S thuríngiensis subsp. tenebrionis, mutant DSM 5480 sa zistilo, že bielkovinové kryštály, produkované týmto mutantom, sú omnoho väčšie než zodpovedajúce bielkovinové kryštály, produkované mikroorganizmom Bacillus thuríngiensis subsp. tenebrionis, kmeňmi DSM 2803, DSM 5526, NB 178 a NB 198 a „Bacillus thuríngiensis subsp.san diego“, kmeňmi NRRL-B 15939 a NB 197.
Kultivačné prostredie mikroorganizmu Bacillus thuríngiensis subsp. tenebrionis, mutant DSM 5480 sa skúšalo na účinnosť proti larvám pásavky zemiakovej. Stanovilo sa zvýšené množstvo endotoxinu delta, produkovaného mutantom DSM 5480; stanovenie sa uskutočnilo imunologickými spôsobmi. Toto zvýšené produkované množstvo sa prejavuje v biologickej účinnosti proti larvám pásavky zemiakovej.
Príklad 3
Na pevnom a kvapalnom prostredí sa porovnáva sporulácia a parasporálne vytváranie kryštálu v mikroorganizmoch Bacillus thuríngiensis subsp. tenebrionis, kmeňmi DSM 2803, DSM 5526, NS 179, NB 198 a mutant DSM 5480 a „B. thuríngiensis subsp. san diego“, kmeňmi NRRL-B 15939 a NB 197.
Každý z týchto kmeňov sa necháva rásť počas dvoch dni pri teplote 30 °C na agarových doštičkách pri nasledujúcom zložení, vyjadrenom ako gramy na litre destilovanej vody:
Pepton, Difco 5 g
Hovädzí extrakt, Difco 3 g Agar, Difco 20 g
Hodnota pH 7,0
Každý kmeň sa necháva rásť v kvapalnom prostredí. Všetky kmene sa nechávajú rásť počas 17 hodín pri teplote 30 °C na agarových sklonených doštičkách. Potom sa prenesie 5 ml suspenzie buniek z každého kmeňa do erlenmayerovej banky s dnom s prepážkou s obsahom 500 ml, pričom každá banka obsahuje 100 ml prostredí.
Prostredie pozostáva z nasledujúcich zložiek v množstve uvádzanom v339/94H-2.3.2000 ako gramy na liter vodovodnej vody:
kvapalné prostredie: kvasnicový extrakt 5,0 g trypton 5,0 g glukóza 1,0 g dihydrogénfosforečnan draselný 0,8 g hodnota pH 7,0
Naočkované banky sa inkubujú pri teplote 30 °C za trepania /250/min/ počas 96 hodín.
Denne sa študuje morfológia kmeňov na pevnom prostredí a v kvapalnom prostredí fázovou kontrastnou mikroskópiou /pri zväčšení 2500 násobnom/. Počíta sa množstvo spór a kryštálov a stanovuje sa rozmer parasporálnych kryštálov. Študuje sa tiež niekoľko vybraných vzoriek riadkovacou elektrónovou mikroskópiou a transmisnou elektrónovou mikroskópiou.
Mikroorganizmy B. thuringiensis subsp. tenebrionis, kmene DSM 2803, DSM 5526, NB 178 a NB 198 a „B. thuringiensis subsp. san diego“, kmene NRRL-B 15939 a NB 197 veľmi sporulujú v oboch prostriedkoch. Pred lýzou bunky obsahuje každá bunka spóru a parasporálny kryštál. Veľkosť kryštálu je 0,4 až 0,9 až 1,1 mikrometra dĺžky vo chvíli lýzy bunky. Stredná dĺžka bielkovinových kryštálov je 0,6 až 0,7 mikrometrov.
Mutant DSM 5480 produkuje iba málo spór (menej než 106 spór/ml) na pevnom prostredí a v definovanom kvapalnom prostredí. Pred lýzou bunky obsahuje väčšina buniek veľký bielkovinový kryštál avšak žiadnu spóru. Dĺžkový-rozmer bielkovinových kryštálov je 0,4 až 0,7 pm až 5,0 pm pričom stredný dĺžkový rozmer bielkovinového kryštálu je 2,2 až 2,3 pm.
Ultraštrukturálna analýza buniek z tohto prostredia transmisnou elektrónovou mikroskópiou ukazuje, že sporulačný proces vmutante sa naštartuje, neukončí sa však v dobe bunkovej lýzy. Sporulačný proces dosahuje rôzne stupne v rôznych bunkách. V bunkách, v ktorých sporulácia dosiahla iba stupeň II (vytváranie predspórového septa) vypĺňajú bielkovinové kryštály celé bunky.
V produkčnom prostredí (príklad 2) mutant produkuje väčší počet spór
V339/94H-2.3.2000 (107 až 108 spór/ml). V tomto prostredí je sporulačná frekvencia mutantu 10 až 100 krát nižšia než v prípade materského kmeňa.
Tak si mutant ponecháva svoje schopnosti produkovať normálne spóry. Avšak sporulačné frekvencie mutantu sa zdajú byť silne závislé od prostredia. Dĺžkový rozmer bielkovinových kryštálov, produkovaných jednotlivými kmeňmi, i
je uvedený v tabuľke lla a llb.
Tabuľka lla
Rozmer bielkovinových kryštálov produkovaných súčasne dostupnými kmeňmi mikroorganizmom B. thuringiensis účinnými proti chrobákom
Dĺžka bielkovinových kryštálov v pm
kmeň minimálna hodnota maximálna hodnota stredná hodnota
DSM 2803 0,4 0,9 0,7
NRRL-B 15939 0,4 0,9 0,7
NB 178 0,5 0,9 0,7
DSM 5526 0,4 0,9 0,7
DSM 5480 0,7 5,0 2,3
Tabuľka llb
Rozmer bielkovinových kryštálov produkovaných súčasne dostupnými kmeňmi mikroorganizmu B. thuringiensis účinnými proti chrobákom
Dĺžka bielkovinových kryštálov v mikrometroch
kmeň minimálna hodnota maximálna hodnota stredná hodnota
NB 197 0,4 0,7 0,6
NB 198 0,4 1.1 0.7
DSM 5480 0,5 4,2 2.0
v339/94H- 2.3.2000
Z tabuľky Ha a llb je zrejmé, že mutant DSM 5480 produkuje omnoho väčšie bielkovinové kryštály než akýkoľvek dosiaľ známy kmeň B. thuríngiensis, účinný proti chrobákom.
Na základe získaných hodnôt sa zdá, že riadenie produkcie endotoxínu delta so zreteľom na sporuiáciu sa v mutante zmenilo.
Zdá sa, že mutant produkuje bielkovinové kryštály pred vývojom spór, čím poskytuje bunkám dlhšiu dobu na produkciu endotoxínu delta a to vedie k produkcii omnoho väčších bielkovinových kryštálov v čase lýzy buniek v porovnaní s materským kmeňom.
V závislosti na dostupných živinách a veľkosti bielkovinových kryštálov vo chvíli sporulácie sa vyvinie normálna spóra pred časom lýzy.
Príklad 4
Podľa tohto príkladu sa používa vysokovýťažkový Btt mutant DSM 5480 na produkciu vysoko účinných produktov na boj proti larvám pásavky zemiakovej.
Na produkčnom fermentačnom prostredí, popísanom v príklade 2, sa fermentuje DSM 5480 v prevzdušňovanej, miešanej, produkčnej, fermentačnej nádobe. Po 96 hodinách sa získa živné prostredie kontinuálnym odstreďovaním.
Koncentrovaný krém, ktorý obsahuje aktívne bielkovinové kryštály, sa stabilizuje pridaním mikrobiálnych konzervačných prostriedkov a nastavením hodnoty pH na 5,0.
Jeden diel koncentrovaného krému sa suší rozprašovaním a druhý sa používa na výrobu zmáčateľného prášku. Zvyšok koncentrovaného krému sa používa priamo na formuláciu vodných, rozplývavých koncentrátov /FC/.
Zmáčateľný prášok sa formuluje ako je charakterizované v tabuľke III. Formulácia vodných rozplývavých koncentrátov je popísaná v tabuľke IV.
v339/94H - 2.3.2000
Tabuľka III
Formulácia zmáčateľného prášku NOVODOR® (% hmotn.)
Zložka percentá
koncentrovaný krém Btt sušený rozprašovaním 40
detergenty 9
prostriedok proti vytváraniu koláča 1
inertné plnidlo 50
Tabuľka IV
Formulácia rozplývaného vodného koncentrátu NOVODOR® FC
Zložka NOVODOR® FC1 % hmotn. NOVODOR®FC2 % hmotn.
koncentrovaný krém Btt 80,00 55,00
konzervačné prísady 4,00 4,00
činidlo proti zamŕzaniu 9,10 19,00
detergenty 2,50 2,50
regulátory hodnoty pH 2,85 2,85
voda 1,55 16,65
100,00 100,00
Ak sa použije hodnota 500 000 BTTU/g čistej kryštalickej bielkoviny, je obsah aktívnej kryštalickej bielkoviny v prípravkoch nasledujúci:
% Btt kryštalickej bielkoviny
NOVODOR® WP 70,8 KBTTU/g 14,16
NOVODOR1® FC1 24,7 KBTTU/g 4,94
NOVODOR® FC2 14,2 KBTTU/g 2,84
V339/94H- 2.3.2000
Detergenty sa volia zo širokého súboru pomocných prísad na suspendovanie a zmáčadiel normálne používaných v poľnohospodárskych pesticídnych prostriedkoch. Ako činidlo proti vytváraniu koláča sa požíva hydrofilný oxid kremičitý a ako inertné plnidlo sa používajú bežné inertné plnidlá, ako sú bentonity, anorganické soli alebo hlinky. Ako konzervačné prísady do rozplývaných vodných koncentrátov sa používajú konzervačné prísady pre potravinárske a kozmetické výrobky. Prostriedkom na úpravu hodnoty pH je anorganická kyselina.
Príklad 5
Uskutočňujú sa poľné skúšky na potvrdenie biologickej účinnosti vysokovýťažkového Btt mutantu DSM 5480 na samčích larvách pásavky zemiakovej. Porovnanie sa uskutočňuje s dvoma obchodnými produktami Trident® a M-one®; kultúrnou rastlinou sú zemiaky.
Kultúrna rastlina sa postrieka trikrát : 20. júna, 27. júla a 3. augusta (2.generačná larva). Používané produkty a ich dávkovanie je uvedené v nasledujúcej tabuľke:
Objem produktu na 0,4 ha pôdy Účinnosť Množstvo Btt bielkovinového kryštálu v prostriedku
líter/0,4 ha KBTTU/g %
Novodor® ru z 1,134 14,2 2,84
1,701 14,2 2,84
2,835 14,2 2,84
3,402 14.2 2,84
Trident® 4,536 5,5 1,10
M-one® 2,268 8,9 1,78
Stredná hodnota obmedzenia lariev pásavky zemiakovej v porovnaní s neošetrenými kontrolnými rastlinami je uvedená v tabuľke V. Napadnutie pásavkou zemiakovou bolo značne silné v prípade neošetrených rastlín : 370 lariev na 20 rastlín 1. augusta a 904 lariev na 20 rastlín 8. augusta.
V339/94H-2.3.2000
Tabuľka V
Ošetrenie Objem produktu na akr pôdy Percentuálne obmedzenie
NOVODOR0* FC 2 liter/0,4 ha 1. augusta 8. augusta
NOVODOR®FC 2 1,134 99 99
NOVODOR®FC 2 1,701 95 100
NOVODOR® FC 2 2,835 98 99
NOVODOR® FC 2 3,402 100 100
TRIDENT® 4,536 94 98
M-one® 2,268 98 98
Výsledky jasne dokazujú, že produkty s vysokovýťažkovým mutantom DSM 5480 sú účinné na ničenie lariev pásavky zemiakovej na poliach. Kryštalická bielkovina, produkovaná vysokovýťažkovým kmeňom je plne účinná, ako 1,701 litrov na 0,4 ha NOVODORU® FC poskytuje rovnako dobré výsledky ako 4,536 litrov na 0,4 ha Tridentu a rovnako dobré ako 2,268 litrov na 0,4 ha M-onu.

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticidnych deltaendotoxinov ako materský kmeň.
  2. 2. Pesticídny prostriedok na boj so škodlivým hmyzom, najmä zo súboru zahrňujúceho motýle, dvojkrídly hmyz a chrobáky a predovšetkým na boj s pásavkou zemiakovou, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, podľa nároku 1, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticidnych deltaendotoxinov ako materský kmeň.
  3. 3. Pesticídny prostriedok podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že obsahuje prídavné poľnohospodársky vhodné rozpúšťadlá a/alebo nosiče.
  4. 4. Pesticídny prostriedok, podľa nároku 2 a 3, vyznačujúci sa tým, že obsahuje prídavné povrchovo aktívnu látku.
  5. 5. Spôsob prípravy mutantov kmeňov mikroorganizmu Bacillus thurigiensis podľa nároku 1 a jeho selekcie, vyznačujúci sa tým, že sa materský kmeň
    i) spracováva akýmkoľvekxch^cky(<vlfodným mutagénom, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidínom, alebo etylmetánsulfonátom, za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako sú lúče γ, rôntgenové lúče, alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát a pripadne ako doplnky 0,57 g/l chloridu horečnatého a 20 g/l gelritu, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré v339/94H - 2.3.2000 nestekucuje pri zahrievaní a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónii v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí, obsahujúcom fosfát, doplnenom chloridom horečnatým a doplnkami modifikovaného živného sporulačného prostredia.
  6. 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že sa takto oddelené kolónie nechávajú rásť na normálnom produkčnom prostredí a potom sa ďalej vykonáva konečné oddelenie kmeňov, schopných zvýšente/produkcie delta endotoxínov.
SK5629-90A 1989-11-17 1990-11-14 Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje SK281286B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK580589A DK580589D0 (da) 1989-11-17 1989-11-17 Mutant
DK627489A DK627489D0 (da) 1989-12-12 1989-12-12 Mutant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK562990A3 true SK562990A3 (en) 2001-02-12
SK281286B6 SK281286B6 (sk) 2001-02-12

Family

ID=26067985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK5629-90A SK281286B6 (sk) 1989-11-17 1990-11-14 Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0585215B1 (sk)
JP (1) JP2950614B2 (sk)
KR (1) KR0157065B1 (sk)
AT (1) ATE184645T1 (sk)
AU (1) AU647056B2 (sk)
BG (1) BG61699B1 (sk)
CA (1) CA2068734C (sk)
DE (2) DE585215T1 (sk)
DK (1) DK0585215T3 (sk)
ES (1) ES2060568T3 (sk)
FI (1) FI103130B (sk)
GR (2) GR940300021T1 (sk)
HU (1) HU214685B (sk)
NO (1) NO305131B1 (sk)
RO (1) RO109862B1 (sk)
RU (1) RU2138950C1 (sk)
SK (1) SK281286B6 (sk)
TR (1) TR28902A (sk)
WO (1) WO1991007481A1 (sk)
YU (1) YU48440B (sk)

Families Citing this family (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6270760B1 (en) * 1989-12-18 2001-08-07 Valent Biosciences, Inc. Production of Bacillus thuringiensis integrants
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
IL99928A0 (en) * 1990-11-08 1992-08-18 Agricultural Genetics Co Biological control of pests
US5264364A (en) * 1991-01-31 1993-11-23 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects
ZA932792B (en) * 1992-05-12 1993-11-16 Aeci Ltd Insecticide composition
WO1994028724A1 (en) * 1993-06-10 1994-12-22 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins
IL110299A0 (en) * 1993-07-15 1994-10-21 Novo Nordisk Entotech Inc Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity
WO1997027305A1 (en) * 1996-01-26 1997-07-31 Abbott Laboratories Production of bacillus thuringiensis integrants
US5804180A (en) * 1996-07-17 1998-09-08 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US5965428A (en) * 1996-10-08 1999-10-12 Ecogen, Inc. Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins
KR100458765B1 (ko) * 2001-12-24 2004-12-03 학교법인 동아대학교 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법
WO2014056780A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Basf Se A method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material
WO2014082879A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
WO2014082871A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
US20150313229A1 (en) 2012-11-27 2015-11-05 Basf Se Substituted [1,2,4] Triazole Compounds
EP2928873A1 (en) 2012-11-27 2015-10-14 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
WO2014086854A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator
WO2014086850A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii
WO2014086856A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide
EP2746255A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014095555A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746279A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746278A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746277A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2935224A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2935236B1 (en) 2012-12-19 2017-11-29 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
WO2014095534A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746266A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
WO2014095381A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746256A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746262A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi
EP2746263A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Alpha-substituted triazoles and imidazoles
US20150329501A1 (en) 2012-12-19 2015-11-19 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
EP2746260A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746258A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746257A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746259A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014124850A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
BR112015018853B1 (pt) 2013-03-20 2021-07-13 Basf Corporation Mistura, composição agroquímica, método para controlar fungos fitopatogênicos, método para proteção do material de propagação dos vegetais e semente revestida
WO2015011615A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 Basf Corporation Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide
WO2015036059A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
WO2015036058A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
CN106061254B (zh) 2013-10-18 2019-04-05 巴斯夫农业化学品有限公司 农药活性羧酰胺衍生物在土壤和种子施用和处理方法中的用途
US10053432B2 (en) 2013-12-12 2018-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
US20160318897A1 (en) 2013-12-18 2016-11-03 Basf Se Azole compounds carrying an imine-derived substituent
WO2015104422A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Basf Se Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests
EP2924027A1 (en) 2014-03-28 2015-09-30 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds
US9968092B2 (en) 2014-04-17 2018-05-15 Basf Se Combination of novel nitrification inhibitors and biopesticides as well as combination of (thio)phosphoric acid triamides and biopesticides
EP2962568A1 (en) 2014-07-01 2016-01-06 Basf Se Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide
EP2949649A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2949216A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952512A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
EP2952506A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952507A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
CN107075712A (zh) 2014-10-24 2017-08-18 巴斯夫欧洲公司 改变固体颗粒的表面电荷的非两性、可季化和水溶性聚合物
CN111742937A (zh) * 2015-01-16 2020-10-09 瓦伦特生物科学有限责任公司 苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种组合制剂
WO2016128239A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Basf Se Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide
AU2016231152A1 (en) 2015-03-11 2017-09-28 Basf Agrochemical Products B.V. Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide
CN107592790B (zh) 2015-03-11 2022-03-25 巴斯夫农业化学品有限公司 包含羧酰胺化合物和生物农药的农药混合物
EP3111763A1 (en) 2015-07-02 2017-01-04 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions comprising a triazole compound
EP3383183B1 (en) 2015-11-30 2020-05-27 Basf Se Compositions containing cis-jasmone and bacillus amyloliquefaciens
EP3205209A1 (en) 2016-02-09 2017-08-16 Basf Se Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides
US20190200612A1 (en) 2016-09-13 2019-07-04 Basf Se Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides
WO2018149754A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Basf Se Pyridine compounds
JP7160486B2 (ja) 2017-03-28 2022-10-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺生物剤化合物
WO2018184882A1 (en) 2017-04-06 2018-10-11 Basf Se Pyridine compounds
US20210179620A1 (en) 2017-06-16 2021-06-17 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2018234202A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED PYRIMIDINIUM COMPOUNDS AND DERIVATIVES FOR CONTROLLING HARMFUL ANIMALS
WO2018234488A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES
EP3453706A1 (en) 2017-09-08 2019-03-13 Basf Se Pesticidal imidazole compounds
WO2019057660A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Basf Se INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES
WO2019072906A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Basf Se IMIDAZOLIDINE PYRIMIDINIUM COMPOUNDS FOR CONTROL OF HARMFUL ANIMALS
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
US11512054B2 (en) 2017-12-21 2022-11-29 Basf Se Pesticidal compounds
JP7479285B2 (ja) 2018-01-09 2024-05-08 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 硝化阻害剤としてのシリルエチニルヘタリール化合物
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
AU2019226360A1 (en) 2018-02-28 2020-08-27 Basf Se Use of alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors
CA3089381A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Basf Se Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors
WO2019166560A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Basf Se Use of n-functionalized alkoxy pyrazole compounds as nitrification inhibitors
WO2019175712A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways
WO2019175713A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
WO2020002472A1 (en) 2018-06-28 2020-01-02 Basf Se Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors
EP3826983B1 (en) 2018-07-23 2024-05-15 Basf Se Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors
WO2020020765A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Basf Se Use of a substituted thiazolidine compound as nitrification inhibitor
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3887357A1 (en) 2018-11-28 2021-10-06 Basf Se Pesticidal compounds
US20230031024A1 (en) 2018-12-18 2023-02-02 Basf Se Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3730489A1 (en) 2019-04-25 2020-10-28 Basf Se Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
CN113923987B (zh) 2019-05-29 2024-10-01 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
WO2021170463A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 BASF Agro B.V. Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf
CN115443267A (zh) 2020-04-28 2022-12-06 巴斯夫欧洲公司 杀害虫化合物
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
EP4236691A1 (en) 2020-10-27 2023-09-06 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
EP4011208A1 (en) 2020-12-08 2022-06-15 BASF Corporation Microparticle compositions comprising fluopyram
CN116829521A (zh) 2021-02-02 2023-09-29 巴斯夫欧洲公司 Dcd和烷氧基吡唑作为硝化抑制剂的协同增效作用
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
JP2024519813A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺菌剤としての新規な置換ピリジン
US20240270727A1 (en) 2021-05-18 2024-08-15 Basf Se New substituted pyridines as fungicide
WO2022243109A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Basf Se New substituted quinolines as fungicides
CN117355504A (zh) 2021-05-21 2024-01-05 巴斯夫欧洲公司 乙炔基吡啶化合物作为硝化抑制剂的用途
CN117440946A (zh) 2021-05-21 2024-01-23 巴斯夫欧洲公司 N-官能化的烷氧基吡唑化合物作为硝化抑制剂的用途
WO2022268810A1 (en) 2021-06-21 2022-12-29 Basf Se Metal-organic frameworks with pyrazole-based building blocks
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
KR20240042636A (ko) 2021-08-02 2024-04-02 바스프 에스이 (3-피리딜)-퀴나졸린
CA3227653A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Wassilios Grammenos (3-quinolyl)-quinazoline
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023203066A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Basf Se Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
WO2024104823A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
WO2024104818A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104822A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024194038A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4277564A (en) * 1980-01-09 1981-07-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis
CA1193564A (en) * 1982-07-09 1985-09-17 University Of Western Ontario Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control
DE3346138A1 (de) * 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
US4764372A (en) * 1985-03-22 1988-08-16 Mycogen Corporation Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof
DE3541893A1 (de) * 1985-11-27 1987-06-11 Basf Ag Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus
JPS62146593A (ja) * 1985-12-16 1987-06-30 マイコゲン　コ−ポレ−シヨン バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法
JP2775150B2 (ja) * 1987-03-04 1998-07-16 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル．イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法
ES2063051T3 (es) * 1987-12-24 1995-01-01 Zeneca Ltd Cepas bacterianas.
US4999192A (en) * 1988-02-12 1991-03-12 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
US4966765A (en) * 1988-02-23 1990-10-30 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate
US4996155A (en) * 1988-03-04 1991-02-26 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin
US4990332A (en) * 1988-10-25 1991-02-05 Mycogen Corporation Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate

Also Published As

Publication number Publication date
ES2060568T3 (es) 2000-01-01
BG96488A (bg) 1993-12-24
DE585215T1 (de) 1994-07-28
DE69033291D1 (de) 1999-10-21
ES2060568T1 (es) 1994-12-01
CA2068734C (en) 1999-12-28
AU647056B2 (en) 1994-03-17
TR28902A (tr) 1997-08-04
ATE184645T1 (de) 1999-10-15
HU214685B (hu) 1998-04-28
AU6736490A (en) 1991-06-13
EP0585215A1 (en) 1994-03-09
RU2138950C1 (ru) 1999-10-10
CA2068734A1 (en) 1991-05-18
WO1991007481A1 (en) 1991-05-30
JPH05501955A (ja) 1993-04-15
FI922205A (fi) 1992-05-14
HUT64581A (en) 1994-01-28
DE69033291T2 (de) 2000-05-11
EP0585215B1 (en) 1999-09-15
KR927003790A (ko) 1992-12-18
HU9201628D0 (en) 1992-08-28
FI922205A0 (fi) 1992-05-14
FI103130B1 (fi) 1999-04-30
FI103130B (fi) 1999-04-30
BG61699B1 (bg) 1998-03-31
GR3031815T3 (en) 2000-02-29
RO109862B1 (ro) 1995-06-30
YU218590A (sh) 1993-05-28
YU48440B (sh) 1998-07-10
KR0157065B1 (ko) 1998-10-15
SK281286B6 (sk) 2001-02-12
NO305131B1 (no) 1999-04-06
DK0585215T3 (da) 2000-03-27
NO921950L (no) 1992-07-13
NO921950D0 (no) 1992-05-15
JP2950614B2 (ja) 1999-09-20
GR940300021T1 (en) 1994-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK562990A3 (en) Mutant of bacillus thuringiensis deposited as subsp. tenebrionis dsm 5480, method for the preparation thereof and pesticide containing the same
US5006336A (en) Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
EP0178151A2 (en) Preparation of strains of bacillus thuringiensis having an improved activity against certain lepidopterous pests and novel strain produced thereby
US5080897A (en) Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions
JP3798017B2 (ja) 新規の双翅類活性化合物及びバチルス チューリングエンシス株
EP0612217B1 (en) Bacillus thuringiensis isolates active against cockroaches and genes encoding cockroach-active toxins
US5279962A (en) Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin
EP0570089A1 (en) Novel toxin producing fungal pathogen and uses
AU639896B2 (en) Novel bacillus thuringiensis strains
EP0522836A2 (en) Novel bacillus strain and insect pest controlling agent
EP0309145A1 (en) Bacteriophage-resistant strain of Bacillus Thuringiensis Var. San Diego
CZ562990A3 (cs) Mutant mikroorganismu Bacillus thuringiensis deponovaný jako subsp. tenebrionis DSM 5480, způsob jeho přípravy a pesticidní prostředek, který ho obsahuje
HRP920198A2 (en) Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin
PL166433B1 (pl) Sposób wytwarzania owadobójczego produktu wytwarzanego przez B. thuringlensis PL PL PL PL PL PL
EP0582541A2 (en) Process for creating conjugation-proficient Bacillus thuringiensis strains
Jayaraman et al. Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies
IL86242A (en) Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use