HU214685B - Eljárás delta-endotoxint fokozott mennyiségben termelő Bacillus thuringiensis mutánsok és variánsok előállítására és szelektálására, és az általuk termelt delta-endotoxint tartalmazó inszekticid készítmények - Google Patents

Eljárás delta-endotoxint fokozott mennyiségben termelő Bacillus thuringiensis mutánsok és variánsok előállítására és szelektálására, és az általuk termelt delta-endotoxint tartalmazó inszekticid készítmények Download PDF

Info

Publication number
HU214685B
HU214685B HU9201628A HU162892A HU214685B HU 214685 B HU214685 B HU 214685B HU 9201628 A HU9201628 A HU 9201628A HU 162892 A HU162892 A HU 162892A HU 214685 B HU214685 B HU 214685B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
delta
endotoxin
strains
bacillus thuringiensis
strain
Prior art date
Application number
HU9201628A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT64581A (en
HU9201628D0 (en
Inventor
Hanne Gurtler
Anette Schousbo Petersen
Original Assignee
Abbott Laboratories
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK580589A external-priority patent/DK580589D0/da
Priority claimed from DK627489A external-priority patent/DK627489D0/da
Application filed by Abbott Laboratories filed Critical Abbott Laboratories
Publication of HU9201628D0 publication Critical patent/HU9201628D0/hu
Publication of HUT64581A publication Critical patent/HUT64581A/hu
Publication of HU214685B publication Critical patent/HU214685B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

A találmány tárgya eljárás Bacillűs thűringiensis műtáns törzsekelőállítására és szelektálására, mely műtánsők őligőspőrőgének,legalább kétszeres mennyiségű delta-endőtőxint termelnek és ű yanazőnkártevők ellen hatásősak, mint szülőtörzseik. Az eljárás abban áll,hőgy i) a szülőtörzset műtagén kezelésnek vetik alá; ii) a műtánsőkat őlyan táptalajőn tenyésztik, mely alkalmas az aspőrőgénés/vagy őligőspőrőgén törzsek szelektálására; iii) az áttetsző telepeket szelektálják és őlyan táptalajőn tenyésztik,amely melegítésre nem főlyósődik el; és iv) a ténylegesen aspőrőgén törzseket eltávőlítják a telepekhőkezelésével, és kívánt esetben az így szelektált telepeket nőrmáltermelő táptalajőn növesztik, és egy tővábbi szelektálást végezne afőkőzőtt mennyiségű delta-endőtőxin-termelőképesség alapján. Atalálmány tővábbá a fenti Bacillűs thűringiensis műtánsőktenyésztésével a delta-endőtőxin termék előállítására és ezttartalmazó inszekticid készítményekre is vőnatkőzik. ŕ

Description

A Bacillus thuringiensis kereskedelmi forgalomban lévő készítményeit világszerte használják rovarkártevők irtására. A bakteriális eredetű inszekticidek előnye, hogy a rovarok nagyon szűk körére szelektívek és biológiailag lebomlanak.
A Bacillus thuringiensis kereskedelmi forgalomban lévő készítményei közvetlenül a betakarítás idejéig használhatók kedvezőtlen hatások nélkül.
A Bacillus thuringiensis pálcikaalakú, aerob, spóraképző baktérium, melyre egyedülállóan jellemző, hogy a spóraképzés alatt egy vagy több zárványt, úgynevezett parasporális kristályt képez. Ezek a kristályok nagy molekulasúlyú fehéijékből, úgynevezett delta-endotoxinokból állnak. A Bacillus thuringiensis kereskedelmi készítményeinek hatóanyagai ezek a delta-endotoxinok.
Több B. thuringiensis törzset határoztak meg, melyek abban különböznek egymástól, hogy a gazdarovarspektrumuk eltér. Különféle alfajokra osztjuk őket az ostoruk antingénjei alapján. Különösen fontos alfajok a Bacillus thuringiensis subspecies kurstaki és subspecies aizawai, melyeket a pikkelyes szárnyú lepkék, a Bacillus thuringiensis subspecies israelensis, melyet a kétszámyú rovarkártevők és a Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis, melyet a fedelesszámyú kártevők irtására használnak.
A fedelesszámyú rovarokra toxikus Bacillus thuringiensis első izolálását 1983-ban írták le A. Krieg és munkatársai [Z. and Ént., 96: 500-508] az EP 0149162 A2 számú európai szabadalmi közrebocsátási iratban.
Az izolált mikroorganizmust, amit Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionisnak határoztak meg, DSM 2803 katalógusszámon helyezték el a német törzsgyűjteményben. A Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionist 1982-ben izolálták a Tenebrio molitor (Tenebrionidae, Coleoptera) lisztkukac elhalt bábjából. A törzs sejtenként egy spórát és egy vagy több inszekticid parasporális kristályt hoz létre, amely lapos lemezalakú, élei 0,8-1,5 pm hosszúak. A Bacillus thuringiensis H8a, 8b szerotípusba tartozik [Krieg és munkatársai, System. Appl. Microbiol., 9: 138-141 (1987); 4766203 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom (1988)].
Csak bizonyos levélevő bogárlárvákkal (Chrysomelidae) szemben toxikus és hatástalan a lepkékre (Lepidoptera), szúnyogokra (Diptera) vagy más rovarokra.
Kimutatták, hogy a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis hatásosan irtja a kolorádóbogarak lárváit. Ha a kolorádóbogár (Leptinoptera decemlineata) lárvája és - bizonyos mértékig a kifejlett bogár is - felveszi a Bacillus thuringiensis subs. tenebrionis kristályait és spóráit vagy az izolált kristályokat, leáll a táplálkozásuk. Az L1-L3 állapotban lévő lárvák 1-3 nap alatt elpusztulnak [Schnetter és munkatársai, „Fundamental and applied aspects of invertebrate pathology”, szerk.: R. A. Sámson és munkatársai, Proceeding of the 4th Intemat. colloquium of Invertebrate Pathology, p. 555. (1986)].
Újabban kimutatták, hogy a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis a fedelesszámyúakra hatékony kristály mellett más parasporális kristályt is létrehoz, ami orsóalakú, gömbszerű vagy lemezalakú [A. M. Huger és A. Krieg, J. Appl. Ént., 108:490-497 (1989)]. A második kristály aktivitása még nem ismert.
A fedelesszámyú kártevők irtására négy kereskedelmi készítmény került kidolgozásra: NOVODORR a Novo Nordisk A/S-től, a TRIDENTR a Sandoztól, a DiTerraR az Abbot Laboratories Inc.-tői és a FoilR az Ecogentől.
A fedelesszámyúakra toxikus másik Bacillus thuringiensis törzset 1986-ban írták le [Hemnstadt és munkatársai, Bio/Technology 4. köt., 305-308 (1986); 4764372 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom (1988)]. Ezt a törzset Bacillus thuringiensis subsp. san diego M7-nek nevezték el és NRRL B-15939 katalógusszámon helyezték el a Northern Régiónál Research Laboratoryban (USA). A Bacillus thuringiensis subsp. san diego kereskedelmi készítményét a Mycogen Corp. fejlesztette ki. A vegetatív sejtek fenotípusos jellemzői, a toxikus parasporális kristály tulajdonságai és a plazmid DNS-analízise alapján azonban feltételezhető, hogy a Bacillus thuringiensis subsp. san diego azonos a korábban izolált DSM 2803 törzzsel, a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionisszal [Krieg és munkatársai, J. Appl. Ént., 104: 417-424 (1987)]. Ezen túlmenően a fedelesszámyúakra toxikus delta-endotoxin génjeinek nukleotid szekvenciája és a levezetett aminosav-szekvencia a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis és a Bacillus thuringiensis subsp. san diego esetében azonos.
Azonos tenyésztési körülmények mellett a Bacillus thuringiensis subsp. san diego is szintetizálja a fent említett második típusú kristályt [A. M. Huger és A. Krieg, J. Appl. Ént., 108: 490-497 (1989)].
H. de Baijac és E. Frachon szerint [Entomophaga, 35 (2): 233-240 (1990)] a „san diego” izolátum hasonló a „tenebrionis”-hoz, és nem lehet jogosan kijelenteni, hogy a két különböző alfajról van szó.
A Bacillus thuringiensis fedeles számyúakkal szembeni alkalmazhatósága a toxinok hatékonysági jellemzőin és gazdaságos előállításukon, valamint az előállított termék hatásosságán alapszik. Ez viszont attól függ, hogy az aktív Bacillus thuringiensis törzsek fermentálásakor milyen mennyiségű delta-endotoxin termelődik.
A B. thuringiensist már évek óta használják inszekticidek előállítására, és noha előnyösek lettek volna a megnövekedett delta-endotoxin mennyiséget termelő Bacillus thuringiensis mutánsok, ilyen mutánsokat korábban nem írtak le.
A delta-endotoxint fokozottabban termelő mutánsok a B. thuringiensis toxinok hatékonyabb és gazdaságosabb termelését tenné lehetővé, és ugyanazon a költségen megnövekedett hatású Bacillus thuringiensis készítmények ipari előállítására volna lehetőség. A felhasználó számára pedig előnyt jelentene egy adott területre szükséges kisebb térfogatú peszticid készítmény tárolása és kezelése, továbbá a kisebb térfogatú készítmény csomagolásához szükséges kevesebb anyag kisebb mértékben terhelné meg a környezetet.
Mindeddig nem írtak le olyan eljárást, mely során a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis mutációjával
HU 214 685 Β fokozták volna a delta-endotoxin termelését. Különösen a B. thuringiensis subspecies tenebrionis rovarlárva irtására szolgáló készítményeinél jelentett problémát, hogy viszonylag alacsony hatásfokúak, és ezért viszonylag nagy mennyiséget kell egy adott terület kezelésére felhasználni. Ez a mennyiség 5-10 liter hektáronként, szemben más B. thuringiensis készítményekkel vagy a legtöbb más rovarirtó szerrel, ahol ez a mennyiség 1-2 liter. Ebből következően igény van hatásosabb készítményekre. A kérdés egyik megoldása lehetne a koncentráltabb készítmény előállítása. Ez azonban lényegesen megdrágítaná a készítményt még ahhoz képest is, amennyit a raktározásnál és a szállításnál nyernénk.
Jobb megoldást jelentene a meglevő B. thuringiensis törzsek olyan mutánsait elkészíteni, melyek sejtenként lényegesen nagyobb mennyiségű deltaendotoxint termelnek.
A J. Invertebr. Pathol, 22 (2): 273-7 (1973) cikke B. t. kurstaki természetes izolátumot ismertet, mely nem a HD-1 mutánsa. Ezen törzs magasabb aktivitása abból származik, hogy önmagában hatékonyabb, mint a HD-1 törzs. A cikk nem ismerteti magasabb protein-kifejezés jelenlétét. Ezenkívül a cikkben nem szerepel kitanítás arról, hogy a szülőtörzs a HD-1 lenne.
Az EP 228 228 számú nyilvánosságrahozatali irat spo-cr/ B. thuringiensis mutáns előállítását ismerteti. Az irat nem tesz azonban említést lényegesen nagyobb termelőképességű mutánsokról, csupán „hatékonyabb” termelésről. Az Applied and Environmental Microbiology, 43 (6): 1498-1500 (1982) cikkben a B. thuringiensis subsp. kurstaki IK törzs asporogén mutánsát ismertetik, amely azonban nem termel nagyobb mennyiségű toxint.
A találmány egyik tárgya eljárás a Bacillus thuringiensis törzsek olyan variánsai vagy mutánsai előállítására, amelyek a szülőtörzsüknél lényegesen több toxint termelnek.
A találmány második tárgya a B. thuringiensis tenebrionis alfajához tartozó törzsek magasabb termelőképességű variánsai vagy mutánsai előállítása.
A találmány további tárgya eljárás az említett B. thuringiensis variánsokból, illetve mutánsokból származó peszticid (inszekticid) anyagok előállítására, illetve olyan peszticid (inszekticid) készítmények, melyek hatóanyagként a találmány szerinti B. thuringiensis variánsok vagy mutánsok által termelt delta-endotoxinokat tartalmazzák.
A találmány további tárgya eljárás rovarkártevők irtására, amely abból áll, hogy a területet olyan - a találmány szerinti - készítménnyel kezeljük, amely a kérdéses kártevőre hatásos delta-endotoxinokat tartalmaz.
A találmány további tárgya eljárás Bacillus thuringiensis törzsek szelektálására vagy mutációjára és szelektálására azzal a céllal, hogy olyan variánsokat vagy mutánsokat kapjunk, melyek a szülőtörzseknél lényegesen nagyobb mennyiségű delta-endotoxint termelnek.
A nagy mennyiségű delta-endotoxint termelő Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis törzset a német törzsgyűjteményben (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroderweg lb, D-3300 Bharaunschweig, Német Szövetségi Köztársaság) helyeztük el. A német törzsgyűjtemény (DSM) olyan nemzetközi lerakat, mely a Budapesti Egyezménynek (annak 9. rendszabálya szerint) megfelelően folyamatos letétet biztosít.
Letétbe helyezés: 1989. augusztus 10.
Letétbe helyező ref. NB 1761.
DSM katalógusszám DSM 5480.
A DSM 5480 mutánst a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5526 törzs mutációjával nyertük, mely törzset a fent említett Budapesti Egyezmény előírásai szerint helyeztünk ugyancsak letétbe.
Letétbe helyezés: 1989. szeptember 14.
Letétbe helyező ref. NB 125.
DSM katalógusszám DSM 5526.
A találmány általános tárgya olyan Bacillus thuringiensis variánsok vagy mutánsok előállítása, melyek a szülőtörzsükhöz viszonyítva nagy mennyiségű aktív delta-endotoxint termelnek.
A „nagy mennyiség” kifejezésén azt értjük, hogy a delta-endotoxinok mennyisége legalább kétszerese vagy még ennél is több a szülőtörzs által termelt mennyiségnek.
A találmánynak úgy általánosan, mint - az alábbiakban ismertetésre kerülő - specifikusan meghatározott tárgyában a B. thuringiensis mutáns által termelt deltaendotoxinok ugyanazokra a rovarkártevőkre hatásosak, mint a szülőtörzs delta-endotoxinjai, így például pikkelyes szárnyú lepkékkel szemben (B. thuringiensis subsp. kurstaki és subsp. aizawai törzsek mutánsai), kétszámyúakkal szemben (B. thuringiensis subsp. israelensis mutánsai) vagy fedelesszámyú rovarokkal szemben (B. thuringiensis subsp. tenebrionis mutánsai).
A találmány tárgyának egyik speciális megvalósítási módjánál a B. thuringiensis a tenebrionis alfajhoz tartozik, és a termelt delta-endotoxin a fedelesszámyú rovarokkal szemben hatásos. Ennek egyik előnyös megvalósítási módjánál a B. thuringiensis subsp. tenebrionis variáns vagy mutáns háromszor annyi deltaendotoxint képes termelni, mint a DSM 2803 törzs.
A találmány további megvalósításai olyan B. thuringiensis subsp. tenebrionis variánsokkal vagy mutánsokkal foglalkoznak, melyek 2 pm vagy még nagyobb élhosszúságú parasporális kristályokat termelnek.
A találmány egy további megvalósítási formája olyan B. thuringiensis subsp. tenebrionis variánsokkal vagy mutánsokkal foglalkozik, melyek spóraképződési gyakorisága 10-100-szor vagy akár 106-szor alacsonyabb, mint a szülőtörzs vagy a DSM 2803 törzs spóraképződési gyakorisága.
A találmány még szűkebben meghatározott megvalósítási formája a letétbe helyezett B. thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5480 letétbe helyezett mutánssal foglalkozik.
Miközben ezen a találmányon dolgoztunk a B. thuringiensis subsp. tenebrionis (DSM 5480) egy olyan mutánsát izoláltuk, mely több mint kétszerannyi deltaendotoxint termel, mint a szülőtörzs (DSM 5526). A fáziskontraszt mikroszkóppal, a letapogató (scanning) elektronmikroszkóppal és a transzmissziós elektronmikroszkóppal végzett vizsgálatok szerint a mutáns magas
HU 214 685 Β termelőképessége annak köszönhető, hogy megváltozott a delta-endotoxin-termelés és a spóraképzés közötti kapcsolat szabályozása, miáltal több mint ötször akkora proteinkristályok termelődnek, mint a fedeles szárnyú rovarokkal szemben aktív, meglévő Bacillus thuringiensis törzsek sejtjeiben. A kristályképződés és a spóraképzés közötti kapcsolat, úgy látszik, megszűnt, és a mutáns nagy mennyiségű delta-endotoxint termel a sporuláció előtt.
A találmány egyik tárgya olyan eljárás, mely során a találmány szerinti megváltoztatott vagy mutált törzset használjuk fel az inszekticid B. thuringiensis termékek előállítására. Az eljárásban a B. thuringiensis variánst vagy mutánst szén- és nitrogénforrást, valamint a szakemberek előtt ismert egyéb komponenseket tartalmazó alkalmas tápközegben tenyésztjük megfelelő ideig, majd a delta-endotoxinokat kinyerjük.
A találmány egy további megvalósítási formája a B. thuringiensis fentebb leírtak szerint előállított deltaendotoxinját használja fel mint hatóanyagot peszticid készítmények előállításához.
Ezekben a készítményekben a találmány szerinti delta-endotoxinokat használhatjuk önmagukban vagy biocid anyagok kíséretében.
Foglalkozik a találmány azokkal a peszticid készítményekkel is, melyek a B. thuringiensis delta-endotoxin termék mellett mezőgazdasági szempontból alkalmazható hígító- vagy hordozóanyagokat is tartalmaznak.
Foglalkozik továbbá a találmány azokkal a B. thuringiensis delta-endotoxin terméket tartalmazó peszticid készítményekkel, melyeknek folyékony alakban a hatékonysága legalább 15 000 BTTU/g, ami megfelel legalább 3 tömegszázaléknyi inszekticid (fedelesszárnyú rovarok elleni) kristályos proteinnek; vagy száraz alakban a hatékonysága legalább 50000 BTTU/g, ami megfelel legalább 10 tömegszázaléknyi inszekticid (fedelesszámyú rovarok elleni) kristályos proteinnek.
A találmány egyik speciális megjelenési formája azokkal a DSM 5480 törzstől származó peszticid készítményekkel foglalkozik, melyek legalább kétszer olyan hatékonyak, mint a DSM 2803 törzzsel vagy más fedelesszámyú rovar ellen hatásos Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis törzzsel készített peszticid készítmény.
A találmány szerinti készítmények bármely, a mezőgazdasági alkalmazásban ismert formáját választhatjuk, így például lehet szuszpenzió, diszperzió, vizes emulzió, hintőpor, diszpergálható por, emulgeálható koncentrátum vagy granulátum. Lehet közvetlenül felhasználható állapotban és olyan koncentrátumban vagy előkészítményként, amit kellő mennyiségű vízzel vagy más hígítóközeggel hígítani kell.
A készítményekben, amelyekben a delta-endotoxinokat önmagukban vagy más peszticidek kíséretében alkalmazzuk, a B. thuringiensis delta-endotoxinoknak a növényeknél alkalmazott koncentrációja előnyösen 0,5-25 tömegszázalék, főként 1-15 tömegszázalék.
Foglalkozik a találmány azzal a rovarirtó eljárással, ahol a fentiekben tárgyalt peszticid készítményekkel kezeljük az említett rovarkártevőkkel fertőzött területet.
A találmány közelebbről meghatározott megvalósítási formájában az irtandó kártevők a pikkelyesszámyú lepkék, a kétszárnyúak és a fedelesszámyú rovarok rendszertani csoportjába tartoznak; főként a fedelesszámyúakhoz tartozók, mint amilyen a kolorádóbogár is.
Egyik megjelenítési módnál a rovarkártevő irtásához hektáronként 2,8 liter folyékony peszticid készítményt vagy 1,1 kg szilárd peszticid készítményt alkalmazunk.
Az aktív B. thuringiensis készítményt a növény közvetlen bepermetezésével vagy porozásával használjuk, amint a kártevő kezd megjelenni rajta. Előnyös eljárás a permetezés. Általában fontos, hogy a hatásos védekezést a lárvaállapot korai állapotában végezzük, mert ekkor még kevés károsodás éri a növényt.
A Bacillus thuringiensis mutációjához, majd a szülőtörzsnél nagyobb mennyiségű delta-endotoxint termelő mutánsok szelektálásához:
i) a szülőtörzset mutagén kezelésnek vetjük alá;
ii) a mutánsokat olyan táptalajon tenyésztjük, mely alkalmas az asporogén és/vagy oligosporogén törzsek szelektálására;
iii) az áttetsző telepeket szelektáljuk, és olyan táptalajon tenyésztjük, ami melegítésre nem folyósodik el;
iv) a ténylegesen asporogén törzseket - mint alkalmatlanokat - kiszelektáljuk a telepeket hőkezelésnek kitéve.
A módszer előnyös megjelenítési módjánál a fentiek szerint kiválasztott telepeket normál táptalajon tenyésztjük, és elvégezzük a végső szelekciót a deltaendotoxint fokozott mértékben termelő törzsekre.
A fenti módszer i) lépésénél a szokásos kémiai mutagéneket használjuk, például N-metil-N’-nitro-Nnitrozo-guanidint, etil-metánszulfonátot; vagy a szülőtörzset elektromágneses besugárzással - például gammasugárzással, röntgensugárzással vagy ultraibolya sugárzással kezeljük.
Az ii) lépésnél foszfátot tartalmazó sporulációs táptalajt (NSMP táptalaj) használunk, melyet Johnson és munkatársai írtak le a P. Gerhardt és munkatársai által szerkesztett „Spores VI” című munkában (248-254. old. 1975).
Az iv) lépés alkalmas tápközege a magnézium-kloriddal és Gelrite-tel (Kelco) kiegészített NSMP táptalaj.
A találmány szerinti nagy termelőképességű variánsok és mutánsok nyerésének egy másik módszerével a szülőtörzset folyékony táptalajon tenyésztjük, és miután a tenyészetet olyan agaros táptalajon szerkesztettük, mely alkalmas az asporogén és/vagy oligosporogén mutánsok szelektálására, a spontán mutánsokat és variánsokat kiválasztjuk.
A nagy termelőképességű variánsokat és mutánsokat a tömegük alapján is szelektálhatjuk centrifugálással vagy más, a tömegkülönbségen alapuló módon.
Az elmondottak szemléltetésére az alábbiakban példákat adunk meg. A példák kizárólag szemléltető célúak, a találmány oltalmi körét nem korlátozzák.
1. példa
Több, mint kétszeres mennyiségű delta-endotoxint termelő B. thuringiensis subsp. tenebrionis mutánst izoláltunk az alábbiakban ismertetett módon. A fázis kontraszt mikroszkóppal, tapogató elektronmikroszkóppal
HU 214 685 Β és transzmissziós elektronmikroszkóppal végzett vizsgálatok szerint a mutáns nagy termelőképessége azzal függ össze, hogy a delta-endotoxin és a spóraképzés közötti reguláció megváltozik, a képződő fehérjekristály több mint ötször akkora, mint a fedelesszámyú rovarokkal szemben aktív, meglévő Bacillus thuringiensis törzseknél. Úgy tűnik, megszűnt a szoros összefüggés a kristályképzés és a spóraképzés között, és a mutáns a sporuláció előtt nagy mennyiségű delta-endotoxint termel.
A B. thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5526 jelű törzs spóráit 7 kGy dózisnyi gamma-sugárzással kezeljük. A besugárzott spórákat NSMP agarra (lásd fent) szélesztjük. A táptalaj alkalmas asporogén és/vagy oligosporogén mutánsok szelektálására.
Az NSMP-agar lemezeket 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk 2-3 napon át. Az átlátszó telepeket kiszűrjük, és NSMP-gelrite lemezekre visszük át [NSMP tápközeg literenként 0,57 g magnézium-kloriddal és 20 g Gelrite-tel (Kelco) kiegészítve].
Az NSMP-gelrite lemezt 90 °C hőmérsékleten tartjuk egy órán át, majd 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk 1-2 napon át.
Az NSMP-gelrite lemezen jól növő mutánsokat szelektáljuk. Ezzel a módszerrel valamennyi asporogén mutáns kiszelektálódik, minthogy azok a hőkezelés után nem nőnek.
A szelektált mutánsokat rázott lombikban növesztjük szokásos tápközegben. A termelődött deltaendotoxin mennyiségét az alábbiakban ismertetésre kerülő immunológiai eljárásokkal határozzuk meg.
Csak azokat a mutánsokat szelektáljuk, melyek a szülőtörzsnél jelentősen több delta-endotoxint termelnek.
A szilárd táptalajon és a folyékony közegben tenyésztett szelektált mutánsok morfológiáját fáziskontraszt-mikroszkóppal (2500x) és tapogató, illetve transzmissziós elektronmikroszkóppal vizsgáljuk. Meghatározzuk a kristályok és spórák számát, a proteinkristályok méretét.
A kapott mutánsok között az egyik (DSM 5480) egyedülállóan kitűnt delta-endotoxint termelő képességével.
A DSM 5480 mutáns által termelt delta-endotoxin mennyiségét összehasonlítottuk az eredetileg izolált Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 2803, a NOVODORR termelésére használt Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5526 törzs, az 1989-től a TRIDENTR előállítására használt Bacillus thuringiensis tenebrionis Sandoz törzsből izolált Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis NB 178 törzs, az 1990-től a TRIDENTR előállítására használt B. thuringiensis subsp. tenebrionis Sandoz törzsből izolált NB 198 törzs, a „Bacillus thuringiensis subsp. san diego” NRRL-B-15939 törzs és az 1990-től az ΜΟΝΕ11 előállítására használt „B. thuringiensis subsp. san diego” Mycogen törzsből izolált NB 197 törzs által termelt mennyiséggel. Amint azt a 2. példa I. táblázata mutatja, a találmány szerinti javított mutáns 2-3,5-szer több delta-endotoxint termel, mint azok az eddig rendelkezésünkre álló Bacillus thuringiensis törzsek, amelyek fedelesszámyú rovarokkal szemben aktívak.
2. példa
A példában a Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis DSM 5480 jelű delta-endotoxint termelő törzset összehasonlítjuk a Bacillus thuringiensis species tenebrionis DSM 2803 törzs (a Bacillus thuringiensis susp. tenebrionis eredeti izolátum), a DSM 5526 törzs a (Novo Nordisk termelő törzse), az NB 178, NB 198 törzsek (a Sandoz termelő törzsei), a Bacillus thuringiensis subsp. san diego NRRL-B 15939 törzs és az NB 197 törzs (a Mycogen termelő törzse) delta-endotoxin termelésével szokásos táptalajon. Valamennyi törzset 30 °C hőmérsékleten növesztjük ferdeagaron 17 órán át. A ferdeagar összetétele:
g/liter desztillált víz pepton, Difco 5 marhahúskivonat, Difco 3 agar, Difco 20 kémhatás pH = 7,0
Mindegyik törzsből 5 ml sejtszuszpenziót ezután átviszünk 500 ml-es horpasztott fenekű Erlenmeyer-lombikban lévő 100 ml termelő tápközegbe. A termelő táptalaj összetétele:
g/liter csapvíz szójaliszt 50 hidrolizált keményítő 40 kálium-dihidrogén-foszfát 1,77 dikálium-hidrogén-foszfát 4,53 kémhatás pH = 7,0
A beoldott edényeket 30 °C hőmérsékleten rázatjuk percenként 250 fordulatszámmal. 96 órás rázatás után a fermentlé delta-endotoxin-termelését immunológiai módszerrel meghatározzuk.
A termelt delta-endotoxin mennyiségét immunelektroforézissel (RIE) és fotometriás immunvizsgálattal (PIA) határozzuk meg, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionisből származó tisztított proteinkristályokkal szembeni antitesteket használva.
400 mg tenyészlevet kimérünk mindegyik tenyészetből, és hozzáadunk 7 ml trinátrium-foszfát puffért (0,125 M, pH = 12). A szuszpenziót 1 órán át rázatjuk, hogy a delta-endotoxin protein feloldódjon.
A mintákat percenként 3500 fordulatszámon centrifugáljuk 15 percen át és a felülúszó delta-endotoxin mennyiségét immunelektroforézissel (RIE) határozzuk meg B. thuringiensis subsp. tenebrionsiból származó tisztított proteinkristályokkal szemben termelődött antiszérum felhasználásával. A delta-endotoxin mennyiségi meghatározásánál ismert mennyiségű kristályproteint tartalmazó standardhoz viszonyítjuk.
A kristályprotein koncentrációját fotometriás immunvizsgálattal is meghatározzuk. A kristályproteint alkalikus oldatban oldjuk. A beoldódott fehérjét antitestjével lecsapjuk. A reakció mennyiségi kiértékeléséhez turbidimetriás módszert alkalmazunk. A deltaendotoxin mennyiségének meghatározásánál ismert mennyiségű kristályproteint tartalmazó standardhoz viszonyítjuk.
HU 214 685 Β
A vizsgálatokhoz alkalmazott antitestek előállításához antigénként a B. thuringiensis subsp. tenebrionisból származó kristályokat használjuk.
Poliklonális antitesteket képzünk oly módon, hogy nyulakba kéthetenként szubkután 0,25 mg antigénkristályt fecskendezünk be.
A kapott eredményeket az la és lb táblázaton mutatjuk be. A delta-endotoxin-termelést BTTU/g értékben fejezzük ki (egység/g tenyészlé, RIE-vel vagy PIA-val meghatározva). A tiszta B. thuringiensis subsp. tenebrionis kristályprotein értéke 500000 BTTU/g. Az la táblázat értékei 6-7, az lb táblázat értékei 3 egymástól független fermentációból kapott átlagértékek.
la táblázat
Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis törzsek rázottlombikos tenyészetével kapott delta-endotoxin-termelés
törzs delta-endotoxin-termelés
RIE BTTU/g PIA BTTU/g
DSM 2803 676 1293
NRRL-B 15939 747 1126
NB 178 986 1728
DSM 5526 1096 1860
DSM 5480 (találmány szerinti) 2382 4169
lb táblázat
Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis törzsek rázottlombikos tenyészetével kapott delta-endotoxin-termelés
törzs delta-endotoxin- termelés RIE BTTU/g
NB 197 1103
NB 198 1237
DSM 5480 (találmány szerinti) 2867
Amint az la és lb táblázat adataiból látszik, a DSM 5480 törzs több mint háromszor annyi delta-endotoxint termel, mint az eredeti Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 2803 törzs és a „Bacillus thuringiensis subsp. san diego” NRRL-B 15939 törzs, és több mint kétszer annyi delta-endotoxint termel, mint a kereskedelmi forgalomban lévő Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis termékek előállításához ma használt törzsek.
A Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5480 mutáns fáziskontraszt mikroszkópos, tapogató és transzmissziós elektronmikroszkópos vizsgálatai szerint a mutáns által termelt proteinkristályok sokkal nagyobbak, mint a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 2803, DSM 5526, NB 178 és NB 198 törzsek, valamint a „Bacillus thuringiensis subs.
san diego” NRRL-B 15939 és NB 197 törzsek által termelt kristályok.
A Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5480 mutáns tenyészlevét megvizsgáltuk abból a szempontból, hogy milyen hatással van a kolorádó burgonyabogár lárváira. A DSM 5480 mutáns megnövekedett delta-endotoxin-termelése megnyilvánul a kolorádó burgonyabogár-lárvákkal szembeni hatásában.
3. példa
Szilárd és folyékony táptalajon tenyésztett B. thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 2803, DSM 5526, NB 178, NB 198 törzsek, a DSM 5480 mutáns és a „B. thuringiensis subsp. san diego” NRRL-B 15939 és NB 197 törzsek spóraképzését és parasporális kristályképzését hasonlítjuk össze.
Valamennyi törzset 30 °C hőmérsékleten növesztjük az alábbi összetételű agartáptalajon 2 napon keresztül.
g/liter desztillált víz pepton, Difco 5 marhahúskivonat 3 agar, Difco 20 kémhatás pH = 7,0
Valamennyi törzset folyékony táptalajon is vizsgáljuk. A törzseket 30 °C hőmérsékleten 17 órán át növesztjük ferdeagaron. 5 ml sejtszuszpenzióval beoltunk 500 ml-es horpasztott fenekű Erlenmeyer-lombikban lévő 100 ml tápközeget, melynek összetétele:
g/liter csapvíz élesztőkivonat 5 tripton 5 glükóz 1 kalcium-hidrogén-foszfát 0,8 kémhatás pH = 7,0
A beoltott lombikokat 30 °C hőmérsékleten rázatjuk (percenként 250 fordulatszámmal) 96 órán át.
A szilárd és folyékony táptalajon növesztett tenyészetek morfológiáját naponként megvizsgáljuk fáziskontrasztmikroszkóppal (2500x). Megszámláljuk a spórákat és a kristályokat, megmérjük a parasporális kristályok méretét. Néhány kiválasztott mintát tapogató és transzmissziós elektronmikroszkóppal is megvizsgálunk.
A B. thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 2803, DSM 5526, NB 178, NB 198, a „B. thuringiensis subsp. san diego” NRRL-B 15939 és NB 197 törzsek valamennyien jól képeznek spórát mindkét táptalajon. A sejt lizálása előtt mindegyik sejt egy spórát és egy parasporális kristályt tartalmaz. A kristályok mérete a sejtlízis idején: 0,4 és 0,9-1,1 pm közötti. Átlaghossz: 0,6-0,7 pm.
A DSM 5480 mutáns a szilárd táptalajon és a meghatározott folyékony tápközegben csak kevés spórát képez (milliliterenként 106 spóránál kevesebbet). Sejtlízis előtt mindegyik sejt egy hatalmas proteinkristályt tartalmaz, melynek mérete: 0,4-0,7 és 5,0 pm közötti; a kristályok átlagosan 2,2-2,3 pm hosszúak.
A sejtek transzmissziós elektronmikroszkóppal végzett ultrastrukturális analízise szerint a sejtlízis idején a mutáns sporulációs folyamata már megindult, de nem
HU 214 685 Β fejeződött be. Az egyes sejteknél a spóraképzés folyamatában elért állapot különböző. Azoknál a sejteknél, ahol a spóraképzés csak a II állapotig jutott el (előspóraszeptum kialakulása), a proteinkristály kitölti a sejt belsejét.
Termelő táptalajon (2. példa) a mutáns nagyobb számú spórát (milliliterenként ΙΟ7—108 spóra) hoz létre. Ebben a tápközegben a mutáns sporulációs gyakorisága 10-100-szor kisebb, mint a szülőtörzsé.
A mutáns tehát megőrzi a képességét, hogy normál spórákat hozzon létre, ugyanakkor a spóraképzés gyakorisága, úgy látszik erősen függ a közegtől, amiben tenyésztjük.
Az egyes törzsek által termelt proteinkristályok méreteit a Ila és Ilb táblázatban foglaljuk össze.
Ila táblázat
A jelenleg rendelkezésre álló, a fedelesszámyú rovarokkal szemben hatásos B. thuringiensis törzsek proteinkristályának mérete
Kristályhossz, gm
Törzs minimum maximum átlag
DSM 2803 0,4 0,9 0,7
NRRL-B 15939 0,4 0,9 0,7
NB 178 0,5 0,9 0,7
DSM 5526 0,4 0,9 0,7
DSM 5480 (találmány szerinti) 0,7 5,0 2,3
Ilb táblázat
A jelenleg rendelkezésre álló, a fedelesszámyú rovarokkal szemben hatásos B. thuringiensis törzsek proteinkristályának mérete
Kristályhossz, gm
Törzs minimum maximum átlag
NB 197 0,4 0,7 0,6
NB 198 0,4 1,1 0,7
DSM 5480 (találmány szerinti) 0,4 4,2 2,0
A Ila és Ilb táblázatokból világosan kitűnik, hogy a DSM 5480 mutáns sokkal nagyobb kristályt hoz létre, mint bármelyik ma ismert olyan B. thuringiensis törzs, ami a fedelesszámyú rovarokkal szemben hatásos.
Az adatokból arra következtetünk, hogy a mutánsnál megváltozik a delta-endotoxin-képzés és a sporuláció közötti összefüggés. A mutáns, úgy tűnik, a proteinkristályt a spóraképzés előtt hozza létre, ezáltal a sejt számára hosszabb idő áll rendelkezésre a delta-endoxin termeléséhez, és a sejtlízis idejére már egy sokkal nagyobb kristály keletkezhet, mint a szülőtörzs esetében.
A rendelkezésre álló tápanyagoktól és a sejtben lévő proteinkristály méretétől függően a spóraképzés idejére kifejlődik egy normál spóra, még mielőtt a sejt szétesne.
4. példa
A példában a magas termelőképességű Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5480 mutánst használjuk a kolorádóbogár-lárvák irtására szolgáló nagy hatékonyságú termék előállítására.
A DSM 5480 törzset a 2. példában leírt termelő tápközegben fermentáljuk levegőztetett, kevert fermentációs tankban. 96 óra elmúltával folyamatos centrifugában eltávolítjuk a sejttömeget.
Ezt a kenőcsös anyagot, mely az aktív proteinkristályokat tartalmazza, mikroorganizmusoktól védő konzerválóanyag hozzáadásával tartósítjuk, és a kémhatását pH = 5,0 értékre állítjuk be.
Az anyag egy részét permetezve szárítjuk, és a későbbiekben mint nedvesíthető por használjuk fel. Az anyag további részét közvetlenül felhasználjuk egy vizes, folyékony koncentrátum elkészítéséhez.
A nedvesíthető port a III. táblázat szerinti összetételű készítménnyé dolgozzuk fel. A IV. táblázatban ismertetjük két folyékony koncentrátum összetételét.
III. táblázat
NOVODORR nedvesíthető porkészítmény (WP)
tömeg%
B. thuringiensis sp. tenebrionis sejttömeg permetezéssel szárított pora 40
detergensek 9
tömörödést akadályozó anyag 1
közömbös töltelékanyag 50
IV. táblázat
NOVODORR FC1 tömeg% NOVODORR FC2 tömeg%
B. thuringiensis sp. tenebrionis nedves sejttömeg 80 55
tartósítóanyagok 4 4
fagyásálló anyag 9,1 19
detergensek 2,5 2,5
pH szabályozó 2,85 2,85
VÍZ 1,55 16,65
100,0 100,0
50000 BTTU/g tiszta krisztályra vonatkoztatva a készítmények aktív kristálytartalma:
NOVODORR WP 70,8 KBTTU/g 14,16% kristályprotein,
NOVODORR FC1 24,7 KBTTU/g 4,94% kristályprotein,
NOVODORR FC2 14,2 KBTTU/g 2,84% kristályprotein.
A detergensek kiválasztására peszticid készítményekhez használt nagy számú olyan detergens áll rendelkezésre, melyeket szuszpendáló- és nedvesítőszerként alkalmaznak.
HU 214 685 Β
A tömörödés megakadályozására hidrofil szilíciumdioxidot használunk, a közömbös töltelékanyag pedig az erre a célra általánosan használt anyagok egyike lehet, például bentonitok, szervetlen sók vagy agyagok.
Az FC készítményekhez az élelmiszer- és kozmetikai iparban használt tartósítóanyagokat alkalmazzuk. A kémhatás beállítására szervetlen savakat használunk.
5. példa
A nagy termelőképességű Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5480 mutáns biológiai aktivitásának bizonyítása szabadföldi kísérleten kolorádó burgonyabogár lárvájával, mint a fő célrovarral szemben. Két kereskedelmi forgalomban lévő termékkel, a TridentR és az M-oneR készítményekkel hasonlítjuk össze. A növényi kultúra: burgonya.
A burgonya növényeket háromszor - július 20., július 27. és augusztus 3. (második lárvageneráció) - permeteztük le. Az alkalmazott készítmények és dózisok:
liter/hektár (quart/acre) hatékonyság, KBTTU/g készítmény kristályprotein tartalma %
NOVODORrFC2 (ta lálmány szerinti) 2,8 (1) 14,2 2,84
4,2 (1,5) 14,2 2,84
7,0 (2,5) 14,2 2,84
8,4 (3,0) 14,2 2,84
TRIDENTR (kontroll) 11,2 (4) 5,5 1,10
M-oneR (kontroll) 5,6 (2) 8,9 1,78
Az V. táblázatban a burgonyabogár-lárvák pusztulását adjuk meg a kezeletlen kontrolihoz viszonyított átlagos százalékos értékben kifejezve. A kezeletlen kontrolion a fertőzés nagyon erős volt, augusztus 1jén 370, aguszutus 8-án 904 lárva volt található 20 növényen.
V. táblázat
kezelés pusztulás mértéke,%
augusztus 1. augusztus 8.
NOVODORRFC2* 99 99
NOVODORR FC2* 95 100
NOVODORrFC2* 98 99
NOVODORrFC2* 100 100
TRIDENTr 94 98
M-oneR S98 98
* = találmány szerinti ** = kontroll
Az eredmények világosan mutatják, hogy a nagy termelőképességű DSM 5480 mutánsból készült terméket szabadföldön alkalmazva, hatásos a burgonyabogárlárvák ellen. A nagy termelőképességű törzs által termelt kristályprotein tökéletesen aktív, hiszen a 2,8 liter/hektár NOVODORRFC kezelés ugyanolyan jó eredményt adott, mint a 11,2 liter/hektár TRIDENTR vagy az 5,6 liter/hektár M-oneR kezelés.

Claims (21)

1. Eljárás Bacillus thuringiensis mutáns törzsek előállítására és szelektálására, mely mutánsok oligosporogének, legalább kétszeres mennyiségű delta35 endotoxint termelnek és ugyanazon kártevők ellen hatásosak, mint szülőtörzseik, azzal jellemezve, hogy
i) a szülőtörzset mutagén kezelésnek vetjük alá;
ii) a mutánsokat olyan táptalajon tenyésztjük, mely alkalmas az asporogén és/vagy oligosporogén törzsek
40 szelektálására;
iii) az áttetsző telepeket szelektáljuk, és olyan táptalajon tenyésztjük, mely melegítésre nem folyósodik el; és iv) a ténylegesen asporogén törzseket eltávolítjuk a te45 lepek hőkezelésével, és kívánt esetben az így szelektált telepeket normál termelő táptalajon növesztjük, és egy további szelektálást végzünk a fokozott mennyiségű delta-endotoxin-teimelőképesség alapján.
50
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az i) lépésnél a mutagén kezeléshez mutagén kémiai anyagot, előnyösen N-metil-N’-nitro-N-nitrozoguanidint vagy etil-metán-szulfonátot használunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve,
55 hogy az i) lépésnél alkalmazott mutagén kezelésként elektromágneses - előnyösen gamma-sugaras, röntgensugaras vagy ultraibolya-sugaras - besugárzást alkalmazunk.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás,
60 azzal jellemezve, hogy az i) lépésnél táptalajként fosz8
HU 214 685 Β fátot tartalmazó módosított sporulációs táptalajt használunk.
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az iv) lépésnél tápközegként magnézium-kloriddal és gellán géllel kiegészített, módosított sporulációs táptalajt használunk.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szülőtörzsként a B. thuringiensis subsp. kurstaki, B. thuringiensis subsp. aizawai, B. thuringiensis subsp. israelensis vagy B. thuringiensis subsp. tenebrionis alfajba tartozó törzset alkalmazunk.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szülőtörzsként egy Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis törzset alkalmazunk.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szülőtörzsként a B. thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5526 törzset alkalmazzuk.
9. Eljárás Bacillus thuringiensis delta-endotoxin termék előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-8. igénypontok bármelyike szerint előállított B. thuringiensis mutánst vagy variánst szénforrást, nitrogénforrást és más alkotórészeket tartalmazó, alkalmas tápközegben kellő ideig tenyésztjük, majd a delta-endotoxin kristályos terméket önmagában vagy a sejtekkel és/vagy spórákkal együtt a tenyészléből kinyeijük.
10. Inszekticid készítmény, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként legfeljebb 95 t%-ban 9. igénypont szerint előállított B. thuringiensis delta-endotoxin terméket tartalmaz legalább egy, mezőgazdaságban alkalmazható adalékanyaggal együtt.
11. A 10. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a delta-endotoxin terméket önmagában vagy más, biológiailag aktív termékkel együtt tartalmazza.
12. A 10. vagy 11. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a B. thuringiensis deltaendotoxin terméket a mezőgazdaságban alkalmazható hígító- vagy hordozóanyaggal együtt tartalmazza.
13. A 10. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy folyékony és hatékonysága legalább 15000 BTTU/g.
14. A 10. igénypont szerinti készítmény azzal jellemezve, hogy száraz kiszerelésű, és hatékonysága legalább 50 000 BTTU/g.
15. A 10-14. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy DSM 5480 törzsből származó hatóanyagot tartalmaz, és hatékonysága legalább kétszerese a DSM 5526 törzsből vagy más, a fedelesszámyú rovarokkal szemben hatásos törzsből készített inszekticid készítmények hatékonyságának.
16. A 10-15. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy szilárd vagy folyékony hígító- vagy vivőanyagot és adott esetben felületaktív anyagot tartalmaz.
17. Eljárás rovarkártevő irtására, azzal jellemezve, hogy a kártevőkkel fertőzött területre legalább 5 g/ha hatóanyagnak megfelelő mennyiségű, 10. igénypont szerinti készítményt viszünk fel.
18. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inszekticid készítménnyel rovarkártevőként pikkelyesszámyú lepkék, kétszárnyúak és fedelesszámyú rovarok rendszertani csoportjába tartozó kártevőket irtunk.
19. A 18. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inszekticid készítménnyel fedelesszámyú rovarokat, különösen kolorádó burgonyabogarat irtunk.
20. A 18. vagy 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a rovarirtáshoz hektáronként 2,8 liter, 0,5-25 t% koncentrációjú, folyékony készítményt használunk.
21. A 18. vagy 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a rovarkártevő irtásához hektáronként 1,1 kg száraz készítményt használunk.
HU9201628A 1989-11-17 1990-11-16 Eljárás delta-endotoxint fokozott mennyiségben termelő Bacillus thuringiensis mutánsok és variánsok előállítására és szelektálására, és az általuk termelt delta-endotoxint tartalmazó inszekticid készítmények HU214685B (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK580589A DK580589D0 (da) 1989-11-17 1989-11-17 Mutant
DK627489A DK627489D0 (da) 1989-12-12 1989-12-12 Mutant

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9201628D0 HU9201628D0 (en) 1992-08-28
HUT64581A HUT64581A (en) 1994-01-28
HU214685B true HU214685B (hu) 1998-04-28

Family

ID=26067985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9201628A HU214685B (hu) 1989-11-17 1990-11-16 Eljárás delta-endotoxint fokozott mennyiségben termelő Bacillus thuringiensis mutánsok és variánsok előállítására és szelektálására, és az általuk termelt delta-endotoxint tartalmazó inszekticid készítmények

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0585215B1 (hu)
JP (1) JP2950614B2 (hu)
KR (1) KR0157065B1 (hu)
AT (1) ATE184645T1 (hu)
AU (1) AU647056B2 (hu)
BG (1) BG61699B1 (hu)
CA (1) CA2068734C (hu)
DE (2) DE585215T1 (hu)
DK (1) DK0585215T3 (hu)
ES (1) ES2060568T3 (hu)
FI (1) FI103130B (hu)
GR (2) GR940300021T1 (hu)
HU (1) HU214685B (hu)
NO (1) NO305131B1 (hu)
RO (1) RO109862B1 (hu)
RU (1) RU2138950C1 (hu)
SK (1) SK281286B6 (hu)
TR (1) TR28902A (hu)
WO (1) WO1991007481A1 (hu)
YU (1) YU48440B (hu)

Families Citing this family (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6270760B1 (en) * 1989-12-18 2001-08-07 Valent Biosciences, Inc. Production of Bacillus thuringiensis integrants
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
IL99928A0 (en) * 1990-11-08 1992-08-18 Agricultural Genetics Co Biological control of pests
US5264364A (en) * 1991-01-31 1993-11-23 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects
ZA932792B (en) * 1992-05-12 1993-11-16 Aeci Ltd Insecticide composition
WO1994028724A1 (en) * 1993-06-10 1994-12-22 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins
IL110299A0 (en) * 1993-07-15 1994-10-21 Novo Nordisk Entotech Inc Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity
WO1997027305A1 (en) * 1996-01-26 1997-07-31 Abbott Laboratories Production of bacillus thuringiensis integrants
US5804180A (en) * 1996-07-17 1998-09-08 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US5965428A (en) * 1996-10-08 1999-10-12 Ecogen, Inc. Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins
KR100458765B1 (ko) * 2001-12-24 2004-12-03 학교법인 동아대학교 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법
WO2014056780A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Basf Se A method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material
WO2014082879A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
WO2014082871A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
US20150313229A1 (en) 2012-11-27 2015-11-05 Basf Se Substituted [1,2,4] Triazole Compounds
EP2928873A1 (en) 2012-11-27 2015-10-14 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
WO2014086854A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator
WO2014086850A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii
WO2014086856A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide
EP2746255A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014095555A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746279A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746278A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746277A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2935224A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2935236B1 (en) 2012-12-19 2017-11-29 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
WO2014095534A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746266A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
WO2014095381A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746256A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746262A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi
EP2746263A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Alpha-substituted triazoles and imidazoles
US20150329501A1 (en) 2012-12-19 2015-11-19 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
EP2746260A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746258A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746257A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746259A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014124850A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
BR112015018853B1 (pt) 2013-03-20 2021-07-13 Basf Corporation Mistura, composição agroquímica, método para controlar fungos fitopatogênicos, método para proteção do material de propagação dos vegetais e semente revestida
WO2015011615A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 Basf Corporation Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide
WO2015036059A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
WO2015036058A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
CN106061254B (zh) 2013-10-18 2019-04-05 巴斯夫农业化学品有限公司 农药活性羧酰胺衍生物在土壤和种子施用和处理方法中的用途
US10053432B2 (en) 2013-12-12 2018-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
US20160318897A1 (en) 2013-12-18 2016-11-03 Basf Se Azole compounds carrying an imine-derived substituent
WO2015104422A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Basf Se Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests
EP2924027A1 (en) 2014-03-28 2015-09-30 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds
US9968092B2 (en) 2014-04-17 2018-05-15 Basf Se Combination of novel nitrification inhibitors and biopesticides as well as combination of (thio)phosphoric acid triamides and biopesticides
EP2962568A1 (en) 2014-07-01 2016-01-06 Basf Se Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide
EP2949649A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2949216A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952512A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
EP2952506A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952507A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
CN107075712A (zh) 2014-10-24 2017-08-18 巴斯夫欧洲公司 改变固体颗粒的表面电荷的非两性、可季化和水溶性聚合物
CN111742937A (zh) * 2015-01-16 2020-10-09 瓦伦特生物科学有限责任公司 苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种组合制剂
WO2016128239A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Basf Se Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide
AU2016231152A1 (en) 2015-03-11 2017-09-28 Basf Agrochemical Products B.V. Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide
CN107592790B (zh) 2015-03-11 2022-03-25 巴斯夫农业化学品有限公司 包含羧酰胺化合物和生物农药的农药混合物
EP3111763A1 (en) 2015-07-02 2017-01-04 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions comprising a triazole compound
EP3383183B1 (en) 2015-11-30 2020-05-27 Basf Se Compositions containing cis-jasmone and bacillus amyloliquefaciens
EP3205209A1 (en) 2016-02-09 2017-08-16 Basf Se Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides
US20190200612A1 (en) 2016-09-13 2019-07-04 Basf Se Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides
WO2018149754A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Basf Se Pyridine compounds
JP7160486B2 (ja) 2017-03-28 2022-10-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺生物剤化合物
WO2018184882A1 (en) 2017-04-06 2018-10-11 Basf Se Pyridine compounds
US20210179620A1 (en) 2017-06-16 2021-06-17 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2018234202A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED PYRIMIDINIUM COMPOUNDS AND DERIVATIVES FOR CONTROLLING HARMFUL ANIMALS
WO2018234488A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES
EP3453706A1 (en) 2017-09-08 2019-03-13 Basf Se Pesticidal imidazole compounds
WO2019057660A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Basf Se INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES
WO2019072906A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Basf Se IMIDAZOLIDINE PYRIMIDINIUM COMPOUNDS FOR CONTROL OF HARMFUL ANIMALS
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
US11512054B2 (en) 2017-12-21 2022-11-29 Basf Se Pesticidal compounds
JP7479285B2 (ja) 2018-01-09 2024-05-08 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 硝化阻害剤としてのシリルエチニルヘタリール化合物
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
AU2019226360A1 (en) 2018-02-28 2020-08-27 Basf Se Use of alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors
CA3089381A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Basf Se Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors
WO2019166560A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Basf Se Use of n-functionalized alkoxy pyrazole compounds as nitrification inhibitors
WO2019175712A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways
WO2019175713A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
WO2020002472A1 (en) 2018-06-28 2020-01-02 Basf Se Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors
EP3826983B1 (en) 2018-07-23 2024-05-15 Basf Se Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors
WO2020020765A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Basf Se Use of a substituted thiazolidine compound as nitrification inhibitor
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3887357A1 (en) 2018-11-28 2021-10-06 Basf Se Pesticidal compounds
US20230031024A1 (en) 2018-12-18 2023-02-02 Basf Se Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3730489A1 (en) 2019-04-25 2020-10-28 Basf Se Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
CN113923987B (zh) 2019-05-29 2024-10-01 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
WO2021170463A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 BASF Agro B.V. Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf
CN115443267A (zh) 2020-04-28 2022-12-06 巴斯夫欧洲公司 杀害虫化合物
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
EP4236691A1 (en) 2020-10-27 2023-09-06 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
EP4011208A1 (en) 2020-12-08 2022-06-15 BASF Corporation Microparticle compositions comprising fluopyram
CN116829521A (zh) 2021-02-02 2023-09-29 巴斯夫欧洲公司 Dcd和烷氧基吡唑作为硝化抑制剂的协同增效作用
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
JP2024519813A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺菌剤としての新規な置換ピリジン
US20240270727A1 (en) 2021-05-18 2024-08-15 Basf Se New substituted pyridines as fungicide
WO2022243109A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Basf Se New substituted quinolines as fungicides
CN117355504A (zh) 2021-05-21 2024-01-05 巴斯夫欧洲公司 乙炔基吡啶化合物作为硝化抑制剂的用途
CN117440946A (zh) 2021-05-21 2024-01-23 巴斯夫欧洲公司 N-官能化的烷氧基吡唑化合物作为硝化抑制剂的用途
WO2022268810A1 (en) 2021-06-21 2022-12-29 Basf Se Metal-organic frameworks with pyrazole-based building blocks
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
KR20240042636A (ko) 2021-08-02 2024-04-02 바스프 에스이 (3-피리딜)-퀴나졸린
CA3227653A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Wassilios Grammenos (3-quinolyl)-quinazoline
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023203066A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Basf Se Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
WO2024104823A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
WO2024104818A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104822A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024194038A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4277564A (en) * 1980-01-09 1981-07-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis
CA1193564A (en) * 1982-07-09 1985-09-17 University Of Western Ontario Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control
DE3346138A1 (de) * 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
US4764372A (en) * 1985-03-22 1988-08-16 Mycogen Corporation Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof
DE3541893A1 (de) * 1985-11-27 1987-06-11 Basf Ag Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus
JPS62146593A (ja) * 1985-12-16 1987-06-30 マイコゲン　コ−ポレ−シヨン バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法
JP2775150B2 (ja) * 1987-03-04 1998-07-16 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル．イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法
ES2063051T3 (es) * 1987-12-24 1995-01-01 Zeneca Ltd Cepas bacterianas.
US4999192A (en) * 1988-02-12 1991-03-12 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
US4966765A (en) * 1988-02-23 1990-10-30 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate
US4996155A (en) * 1988-03-04 1991-02-26 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin
US4990332A (en) * 1988-10-25 1991-02-05 Mycogen Corporation Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate

Also Published As

Publication number Publication date
ES2060568T3 (es) 2000-01-01
BG96488A (bg) 1993-12-24
DE585215T1 (de) 1994-07-28
DE69033291D1 (de) 1999-10-21
ES2060568T1 (es) 1994-12-01
CA2068734C (en) 1999-12-28
AU647056B2 (en) 1994-03-17
TR28902A (tr) 1997-08-04
ATE184645T1 (de) 1999-10-15
AU6736490A (en) 1991-06-13
EP0585215A1 (en) 1994-03-09
RU2138950C1 (ru) 1999-10-10
CA2068734A1 (en) 1991-05-18
WO1991007481A1 (en) 1991-05-30
JPH05501955A (ja) 1993-04-15
FI922205A (fi) 1992-05-14
HUT64581A (en) 1994-01-28
DE69033291T2 (de) 2000-05-11
EP0585215B1 (en) 1999-09-15
KR927003790A (ko) 1992-12-18
HU9201628D0 (en) 1992-08-28
FI922205A0 (fi) 1992-05-14
FI103130B1 (fi) 1999-04-30
FI103130B (fi) 1999-04-30
BG61699B1 (bg) 1998-03-31
SK562990A3 (en) 2001-02-12
GR3031815T3 (en) 2000-02-29
RO109862B1 (ro) 1995-06-30
YU218590A (sh) 1993-05-28
YU48440B (sh) 1998-07-10
KR0157065B1 (ko) 1998-10-15
SK281286B6 (sk) 2001-02-12
NO305131B1 (no) 1999-04-06
DK0585215T3 (da) 2000-03-27
NO921950L (no) 1992-07-13
NO921950D0 (no) 1992-05-15
JP2950614B2 (ja) 1999-09-20
GR940300021T1 (en) 1994-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU214685B (hu) Eljárás delta-endotoxint fokozott mennyiségben termelő Bacillus thuringiensis mutánsok és variánsok előállítására és szelektálására, és az általuk termelt delta-endotoxint tartalmazó inszekticid készítmények
CA1328239C (en) Bacillus thuringiensis strain, method for their isolation and related insecticidal compositions
JPH10504451A (ja) 新規の双翅類活性化合物及びバチルス チューリングエンシス株
JP4608059B2 (ja) 殺虫活性を有する蛋白質、その蛋白質をコードするｄｎａ、有害生物防除剤及び防除方法。
US5279962A (en) Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin
JP3017799B2 (ja) バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用
US5516514A (en) Insect controlling agent from strains of Bacillus thuringiensis var. Kurstaki
US5422106A (en) Method of controlling coleotera using Bacillus thuringiensis strains MG P-14025 and LMG P-14026
EP0309145A1 (en) Bacteriophage-resistant strain of Bacillus Thuringiensis Var. San Diego
PL166433B1 (pl) Sposób wytwarzania owadobójczego produktu wytwarzanego przez B. thuringlensis PL PL PL PL PL PL
HRP920198A2 (en) Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin
CZ562990A3 (cs) Mutant mikroorganismu Bacillus thuringiensis deponovaný jako subsp. tenebrionis DSM 5480, způsob jeho přípravy a pesticidní prostředek, který ho obsahuje
Jayaraman et al. Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies
IL86242A (en) Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: ABBOTT LABORATORIES, US

DNF4 Restoration of lapsed final protection
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee