BG61699B1 - Мутанти или варианти на bacillus thuringiensis, произвеждащиголеми количества делта-ендотоксин - Google Patents
Мутанти или варианти на bacillus thuringiensis, произвеждащиголеми количества делта-ендотоксин Download PDFInfo
- Publication number
- BG61699B1 BG61699B1 BG96488A BG9648892A BG61699B1 BG 61699 B1 BG61699 B1 BG 61699B1 BG 96488 A BG96488 A BG 96488A BG 9648892 A BG9648892 A BG 9648892A BG 61699 B1 BG61699 B1 BG 61699B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- thuringiensis
- dsm
- strain
- medium
- bacillus thuringiensis
- Prior art date
Links
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 title claims description 97
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 title claims description 56
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 title claims description 18
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 38
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 16
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims abstract description 10
- 241000255925 Diptera Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 claims description 11
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 4
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 claims description 4
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 claims description 2
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 108050001192 Insecticidal delta endotoxin Proteins 0.000 claims 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 125000002467 phosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 36
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 8
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 6
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 5
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 238000001350 scanning transmission electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001124134 Chrysomelidae Species 0.000 description 1
- 241000252210 Cyprinidae Species 0.000 description 1
- 241001529716 Entomophaga Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000258915 Leptinotarsa Species 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000254109 Tenebrio molitor Species 0.000 description 1
- 241000254107 Tenebrionidae Species 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002528 anti-freeze Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000012216 bentonite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000007653 larval development Effects 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 235000014666 liquid concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000406 trisodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
- A01N63/23—B. thuringiensis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/075—Bacillus thuringiensis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Ниво на техниката
Търговски препарати на Bacillus thuringiensis се използват в света за биологичен контрол на вредни насекоми. Предимствата на тези бактериални инсектицидни вещества са, че те са високо избирателни за много ограничен брой насекоми и предизвикват биологичен разпад.
Търговски препарати на Bacillus thuringiensis могат да бъдат приложени непосредствено преди жътвата без неблагоприятни ефекти.
Bacillus thuringiensis е бактерия с формата на пръчица, аеробна, спорообразуваща, уникално характерна с продуциране по време на спорообразуващия процес на едно или две включения, които са наречени параспорални кристали. Тези кристали се състоят от протеини с високо молекулно тегло, които са означени катоб-ендотоксини. δ-ендотоксините са активната съставка в наличните търговски препарати на Bacillus thuringiensis.
Идентифицирани са много щамове на В. thuringiensis с различни спектри на носителя на паразита. Те са класифицирани в различни подвидове, основани на техните флагеларни антигени. Особен интерес представляват организмите от вида Bacillus thuringiensis, подвид kursfaki и подвид aizawai, които се използват за контрол на насекоми (по-специално ципокрили), Bacillus thuringiensis подвидове israelensis, които се използват за контрол на насекоми от род Diptera, и Bacillus thuringiensis подвидове tenebrionis - за контрол на насекоми от род Coleoptera (твърдокрили).
За първото изолиране на токсични Bacillus thuringiensis от твърдокрили насекоми е съобщено през 1983 г. (A. Krieg et al., Z. and Ent. 96, 500-508, ЕР 0149162 A2).
Културата, означена като Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, се съхранява в Немската колекция за микроорганизми под номер DSM 2803. Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis е изолирана през 1982 г. от Tenebrio molitor (Tenebrionidae, Coleoptera). Щамът образува във всяка клетка една спора и един или повече инсектицидни параспорални кристали, които са с плоска плочкоподобна форма с дължина на ръба около 0,8 gm до 1,5 μπι. Той принадлежи към серотип Н8а, 8в и патогенен тип С на Bacillus thuringiensis (Krieg et al., System. Appl. Microbiol. 9, 138-141, 1987, US 4 766 203, 1988).
Той е токсичен само срещу определени ларви на листоядни бръмбари (Chrysomelidae), но неефективен срещу гъсеници (Lepidoptera), комари (Diptera) или други насекоми.
Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis се оказва ефективно контролно вещество за ларвите на колорадския картофен бръмбар. След поглъщане на кристали и спори от Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis или изолирани кристали, ларвите, а до известна степен и възрастни, на колорадския картофен бръмбар (Leptinotarsa decemlineafa) престават да се хранят. Ларвите в стадий L1-L3 умират за 1-3 дни (Schnetter et al., in “Fundamental & applied aspects of invertebrate pathology” eds. R.A. Samson et al., Proceedings of the 4 th Int. collognium of Invertebrate Pathology, p. 555, 1986).
В последно време се установи, че Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis освен колеоптерни активни кристали произвежда и други параспорални кристали, такива като вретеновидни, сферични или плочковидни (А.М. Huger & A.Krieg, J. Appl. Ent. 108, 490-497, 1989). Активността на втория кристал е все още неизвестна.
Четири търговски продукта на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis са разработени за контрол на колеоптерни пестициди. NOVODORR от Novo Nordisk A/S, TRIDENT11 от Sandoz и Di Terra от Abbott Laboratories Inc. и Foil от Ecogen.
Изолирането на друг колеоптерен токсичен щам на Bacillus thuringiensis се съобщава през 1986 г. (Hemnstadt et al., Biol. Technology vol. 4, 305-308, 1986, US 4 764 372, 1988). Този щам, означен като “Bacillus thuringiensis подвид san diego”, M7, се съхранява в Northern Regional Research Laboratory, US под номер NRRL B-15939. Търговски продукт на основата на “Bacillus thuringiensis подвид san diego” е разработен от Mycogen Corp.
Сравнителни изследвания на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, DSM 2803 и Bacillus thuringiensis подвид san diego, NRRLB 15939, включващи фенотипно характеризиране на вегетативни клетки, характеризиране на токсичния параспорален кристал и анализ на плазмена ДНК, са показали, обаче, че Bacillus thuringiensis подвид san diego е несъмнено идентичен на преди изолирания щам DSM 2803, Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis (Krieg et al.: J. Appl. Ent. 104, 417-427, 1987). Освен това, нуклеотидната последователност и извлечената от нея последователност на аминокиселини на гените на колеоптерен активен δ-ендотоксин от Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis и Bacillus thuringiensis подвид san diego са идентични.
При същите културални условия посоченият втори тип кристали се синтезират също от Bacillus thuringiensis подвид san diego (A.M. Huger & A. Krieg, J. Appl. Ent. 108, 490497, 1989).
Според H. de Barjac & E. Frachon (Entomophaga 35/2/, 233-240, 1990) културата san diego е подобна на tenebrionis и не може да бъде оправдано разглеждането й като различен подвид.
Използването на щамове на Bacillus thuringiensis за контрол на колеоптерни пестициди зависи от работоспособността и икономичността на получаване на активни токсини и възможностите на получения продукт. Това, от своя страна, зависи от количеството δ-ендотоксини, което може да бъде получено чрез ферментацията на колеоптерно активни щамове на Bacillus thuringiensis.
В. thuringiensis се използва от много години за получаване на инсектициди, но въпреки че мутантите на тази култура с повишен добив на δ-ендотоксини са по-изгодни, те не са описани по-рано. Мутанти, даващи голям добив на δ-ендотоксини, осигуряват по-ефикасно и по-икономично получаване на В. thuringiensis токсини и продукти с повишена възможност при равна цена. Това от своя страна е предимство за този, който ги използва, поради намалените обеми на пестицидната технология на получаване, които трябва да бъдат съхранявани и използвани за определена площ. Съхранява се по-малко материал за получаването им и по този начин се намаляват пораженията върху околната среда.
Подобренията на получаването на δ-ендотоксин от Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis чрез мутация не са съобщавани преди.
Един проблем, свързан с използването особено на В. thuringiensis подвид tenebrionis при контролиране ларвите на бръмбари, е относително ниската възможност или сила на веществата, изискващи прилагането на относително големи количества от веществото на площта, която се обработва, като например от 5 до 10 Ι/ha, в сравнение с 1 до 2 Ι/ha за повечето от другите В. thuringiensis продукти и повечето от другите инсектициди.
Следователно, съществува определена необходимост от продукти с подобрена сила.
Един начин да се реши този проблем е концентрирането на веществата. Обаче, това ще увеличи значително цената на продукцията в сравнение с получените спестявания от съхранение и транспорт.
Много по-елегантно решение е създаването на мутанти на съществуващите щамове на В. thuringiensis, способни да продуцират съществено по-големи количества δ-ендотоксини на клетка.
Област на техниката
Изобретението се отнася, от една страна, до варианти или мутанти на щамове на Bacillus thuringiensis, способни да произвеждат съществено по-големи количества токсини, отколкото техния родоначален щам.
От друга страна, изобретението е свързано с такива високо продуциращи варианти или мутанти на щамове на В. thuringiensis, които принадлежат към подвид tenebrionis.
Други страни на изобретението са свързани с използването на такива варианти или мутанти на щамове на Bacillus thuringiensis за получаването на пестицидни продукти, а също така и с такива пестицидни състави, съдържащи като активни съставки δ-ендотоксини, получени от варианти или мутанти на щамове на Bacillus thuringiensis на изобретението.
Изобретението е свързано също с метод за контролиране на пестициди чрез прилагане на състав съгласно изобретението на повърхност, където пестициди, чувствителни към активността на δ-ендотоксините при съмнение трябва да се контролират.
Изобретението се отнася и до методи на селекциониране или мутиране и селекциониране на В. thuringiensis щамове с цел да се получат такива варианти или мутанти на щамове на В. thuringiensis, способни да продуцират значително по-големи количества δ-ендотокси ни, отколкото техния родоначален щам.
Депозиране на микроорганизми
С цел подробно описване на това изобретение, мутант на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, който продуцира големи количества δ-ендотоксини, е депозиран в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroderweg lb, D-ЗЗОО, Braunschweig, Federal Republic of Germany, за целите на патентоването на посочения по-долу ден. DSM, който е международен депозитар, съгласно Будапещенския договор, предлага постоянство на депозита в съответствие с правило 9 на спомена тия договор.
Дата на депозита
Депозитарен реф.
DSM обозначение август 1989
NB 176-1
DSM 5480
Мутантът DSM 5480 се получава чрез мутация на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, щам DSM 5526, който също е депо- 20 зиран съгласно Будапещенския договор, както е показано по-долу.
Дата на депозита Депозитарен реф. DSM обозначение септември 1989
NB 125
DSM 5526 25
Подробно описание на изобретението
Изобретението е свързано като цяло с варианти и мутанти на Bacillus thuringiensis, προ- 30 извеждаща големи количества активни δ-ендотоксини в сравнение с нейния родоначален щам.
В този смисъл изразът “големи количества” означава преди всичко поне двойно повече.
Както като цяло, така и в по-тесния сми- 35 съл на показаното по-долу изобретение, δ-ендотоксините, получени от мутант В. thuringiensis, имат активност, насочена срещу същите пестициди, както техните родоначални В. thuringiensis δ-ендотоксини, като например сре- 40 щу лепидоптери (мутанти от В. thuringiensis подвид kursfaki и подвид aizawai), диптери (мутанти от В. thuringiensis подвид israelensis) или колеоптери (мутанти от В. thuringiensis подвид tenebrionis). 45
При едно специфично проявление на този аспект В. thuringiensis принадлежи към подвид tenebrionis и полученият δ-ендотоксин е активен срещу колеоптери.
В този аспект предпочитано проявление 50 на изобретението вариралият или мутиралият В. thuringiensis подвид tenebrionis е способен да произвежда повече от три пъти δ-ендотоксин, отколкото щам DSM 2803.
Други проявления на изобретението включват варианти или мутанти на В. thuringiensis подвид tenebrionis щамове, които са способни да произвеждат параспорален кристал, имащ средна дължина на ръба 2 цт или повече.
Едно друго проявление на изобретението включва варианти или мутанти на В. thuringiensis подвид tenebrionis щамове, показващи честота на спорообразуване 10 до 100 или даже 106 пъти по-ниска от честотата на спорообразуване на щам DSM 2803.
Едно по-специфично проявление включва депозирания мутант В. thuringiensis подвид tenebrionis, DSM 5480.
Съгласно изобретението е изолиран мутант на В. thuringiensis подвид tenebrionis (DSM 5480) с повече от двойно повишено производство на δ-ендотоксин в сравнение с родоначалния му щам (DSM 5526). Фазово контрастна микроскопия, сканираща електронна микроскопия и трансмисионна електронна микроскопия на този мутант, показва, че високата му продуктивност се дължи на промени в регулацията на производството на δ-ендотоксини, което се отнася до спорообразуването, при което се произвеждат протеинни кристали, повече от 5 пъти по-големи от кристалите, продуцирани от съществуващите колеоптерно активни Bacillus thuringiensis щамове. Тясната корелация между образуването на кристал и спорообразуването изглежда отдалечена и мутантът произвежда големи количества δ-ендотоксин преди спорообразуването.
Един аспект на изобретението се отнася до използването на щамове на варианти или мутанти в метод за получаване на инсектицидни В. thuringiensis продукти, чрез който вариантен или мутантен В. thuringiensis щам се култивира в подходяща културална среда, състояща се от източници на въглерод, азот и други компоненти, известни на специалиста, за подходящ период време, след което δ-ендотоксините се възстановяват.
В друг аспект на изобретението В. thuringiensis δ-ендотоксинен продукт, получен както по-горе, се използва в пестицидни съединения като активен компонент.
В такива съединения δ-ендотоксините на изобретението могат да се използват или самостоятелно, или в съчетание с други биоло4 гично активни продукти.
Изобретението е свързано също с такива пестицидни съединения или препарати, състоящи се от получения продукт В. thuringiensis δ-ендотоксин в смес със селскостопанско приемливи разтворители или носители.
Изобретението се отнася също до такива пестицидни съединения или препарати, включващи продукта В. thuringiensis δ-ендотоксин, чието пестицидно съединение в течна форма има активност поне 15,000 BTTU/g, съответстваща на поне 3% W/W колеоптерен инсектициден кристален протеин, или чието пестицидно съединение в суха форма има ефективност поне 50,000 BTTU/g, съответстваща на поне 10% колеоптерен инсектициден кристален протеин.
При едно специфично проявление, изобретението се отнася до пестицидни съединения, произведени от DSM 5480, имащи поне двойно по-голяма активност от пестицидните съединения, произведени от DSM 2803 или други колеоптерно активни Btt щамове.
Съединенията на изобретението могат да заемат всички известни форми за образуване на агрохимикали, например, суспензия, дисперсия, водна емулсия, прах, диспергираща пудра, емулгиращ концентрат или гранули. Нещо повече, то може да бъде в подходяща форма за директно приложение или като концентрат или първоначално вещество, което изисква разреждане с подходящо количество вода или друг разредител преди приложение.
Концентрацията на инсектицидно активните В. thuringiensis δ-ендотоксини в съединенията по настоящото изобретение, когато се използват самостоятелно или в съчетание с други пестициди, е за предпочитане при прилагането върху растения да се осъществява в границите от около 0,5 до около 25% тегл., особено 1 до 15% тегл.
В още един аспект изобретението се отнася до метод за контролиране на насекоми, при което пестицидно съединение съгласно предшестващия аспект, се прилага на площ, инфектирана със споменатите насекоми.
При едно специфично проявление вредителят, който трябва да бъде контролиран, принадлежи към група, включваща насекоми от разред Lepidoptera, Diptera и Coleoptera, a от последния - колорадски картофен бръмбар.
При специфични проявления, насекомото може да бъде контролирано чрез прилагането на 1 /4 за acre от течното пестицидно съединение или чрез прилагане на 0,5 lb/асге от сухо пестицидно съединение.
Активният В. thuringiensis препарат или съединенията на изобретението могат да бъдат приложени директно към растението, например чрез разпръскване или опрашване по времето, когато насекомото започне да се появява върху растението. Предпочитаният начин на приложение е разпръскване. Като цяло е важно да се получи добър контрол на насекомите в ранните стадии на ларвено развитие, тъй като това е времето, когато растението страда от наймалко разрушаване.
При един метод на мутиране на Bacillus thuringiensis, щамове и подбиране на такива мутанти, които са в състояние да произвеждат съществено по-големи количества δ-ендотоксини, отколкото родоначалните щамове, родоначалният щам е:
I - третиран с мутаген;
II - така третираните мутанти се отглеждат върху среда, подходяща за селекция на аспорогенни и/или олигоспорогенни щамове;
III - прозрачни колонии се селекционират и отглеждат в среда, която не се стопява при затопляне, и
IV - истински аспорогенни щамове се отделят чрез подлагане на колониите на термична обработка.
Съгласно предпочитано проявление на този метод, така селекционираните колонии се култивират в нормална среда и се осъществява крайната селекция за щамове, способни да увеличат производството на δ-ендотоксин.
При етап I на горния метод мутагенът може да бъде подходящ условен химичен мутаген, като например Ν-Με·πυι-Ν’-ΗΗτρο-Νнитрозогуанидин, или етилов метансулфонат, или родоначалният щам може да бъде третиран с електромагнитна радиация, като γ-, рентгенови лъчи или ултравиолетово облъчване.
При етап И е подходяща среда, като модифицирана хранителна спорообразуваща среда, включваща фосфат (NSMP среда), като описаната от Johnson et al., в “Spores VI”: eds. P. Gerhardf et al., pp. 248-254, 1975.
При етап IV на метода на изобретението подходяща среда може да бъде NSMP среда, допълнена с MgCl2, и Gebriete, Kelco.
Друг метод за получаване на високо про5 дуциращи варианти или мутанти на изобретението може да бъде разгледан като отглеждане на родоначалния щам в течна среда и селекциониране на спонтанни мутанти или варианти след разпространяване на културалния бульон върху агарсреда, подходяща за селекция на аспорогенни и/или олигоспорогенни мутанти.
Могат да бъдат разгледани и други методи за скрининг на високо продуциращи варианти или мутанти на изобретението, например, използване на маса от тези мутанти директно чрез центрофугиране или други способи на сепарация на маса.
Пример 1. Изолира се мутант на В. thuringiensis подвид tenebrionis с повече от двойно повишена продукция на δ-ендотоксин. Методи като фазово контрастна микроскопия, сканираща електронна микроскопия и трансмисионна електронна микроскопия на този мутант показват, че високата производителност на този мутант се дължи на промени в регулацията на производството на δ-ендотоксин, което се отнася до спорообразуването, довеждайки до произвеждането на протеинови кристали, повече от 5 пъти по-големи от кристалите, продуцирани от съществуващите колеоптерно активни Bacillus thuringiensis щамове. Тясната корелация между образуването на кристали и спорообразуването изглежда отдалечена и мутантът произвежда големи количества -ендотоксин преди спорообразуването.
Производство на високо добивен мутант Спори на В. thuringiensis подвид tenebrionis, щам DSM 5526 се облъчват с γ-лъчи до получаване на доза от 7 kGy. Облъчените спори се разпределят върху NSMP агарова пластинка (модифицирана хранителна спорообразуваща среда, включваща фосфат, както е описано от Johnson et al., в “Spores VI”: eds. P. Gerhardt et al., pp. 248-254, 1975). Среда, подходяща за селекция на аспорогенни и/или олигоспорогенни мутанти.
NSMP-агаровите пластинки се инкубират при 30°С за 2-3 дни. Прозрачни колонии се изваждат и пренасят на NSMP пластинки (NSMP среда, допълнена с MgCl2 (0,57 g/1) и Gebriete, Kelco (20 g/1).
NSMP-агаровите пластинки се инкубират за 1 h при 90°С и след това допълнително се инкубират за 1-2 дни при 30°С.
Мутанти, които порастват добре върху NSMP агарови пластинки, се селекционират.
По този начин всички аспорогенни мутанти се отделят, тъй като престават да растат след термична обработка.
Отбраните мутанти се култивират в стъкленици, съдържащи търговска среда. Количеството на получения δ-ендотоксин се определя чрез имунологични методи, описани по-долу.
Отбират се само мутанти, произвеждащи по-големи количества δ-ендотоксин от родоначалния си щам.
Морфологията на селекционираните мутанти се изучава върху твърда среда или в течна среда чрез фазово контрастна микроскопия (х 2500) и чрез сканираща и трансмисионна електронна микроскопия. Броят на спорите и кристалите се изчислява и се определя размерът на белтъчните кристали.
Сред получените мутанти един е отбран (DSM 5480) заради изключителната му способност да продуцира δ-ендотоксин.
Количеството на произведения δ-ендотоксин от мутант DSM 5480 е сравнено с това на DSM 2803 оригинален изолат на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, щам DSM 5526, използван за производството на NOVODOR”, Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, щам NB 178 изолиран от Sandoz’ Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis продукт TRIDENT” от 1989, щам NB 198, изолиран от Sandoz’ В. thuringiensis подвид tenebrionis продукт TRIDENT” от 1990, Bacillus thuringiensis подвид san diego, щам NRRL-B-15939 и щам NB 197, изолиран от Mycoden В. thuringiensis подвид san diego продукт М-ONE” от 1990. Както се вижда от таблица 1, пример 2 мутантът на изобретението с подобрен добив произвежда 2-3,5 пъти повече δ-ендотоксин, отколкото колеоптерно активните щамове на Bacillus thuringiensis, известни днес.
Пример 2. В този пример добивът на δендотоксин на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, мутант DSM 5480 е сравнен с добивите на δ-ендотоксин на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis щамове DSM 2803 (оригиналния изолат на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis), DSM 5526 (производствен щам на Novo-Nordisk), и NB 178 и NB 198 (производствени щамове на Sandoz), и Bacillus thuringiensis подвид San diego, щам NRRL-B 15939 и NB 197 (производствени щамове на Mycoden) в търговска среда. Всеки от щамовете е култивиран за 17 h при 30°С на наклонена агарова среда със следния състав, изразен като g/Ι дестилирана вода: пептон 5, говежди екстракт 3, агар 20, при pH 7,0.
ml от суспензия на клетки от всеки щам се прехвърлят към 100 ml производствена среда в 500 ml колба на Erlenmeyer (с променящо се дъно). Производствената среда се състои от следните компоненти в показаните съотношения (изразени като g/Ι вода): брашно от соеви зърна 50, хидролизирано нишесте 40, КН2РО4 1,77, К2НРО4 4,53, при pH 7,00.
Инокулираните колби са инкубирани при 30°С с разбъркване (250 rpm). След 96 h на инкубация културалните бульони се оценяват за добиви на δ-ендотоксин чрез имунологични методи.
Количествата, произведен δ-ендотоксин от индивидуалните щамове се определят с “ракетна” имуноелектрофореза (RIE) и фотометричен имунотест (Р1А)р, като се използват антитела, произведени срещу пречистени белтъчни кристали от Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis.
400 mg от всеки културален бульон се отмерват. 7 ml тринатриев фосфатен буфер (0,125 М, pH 12) се добавя към всяка проба. Суспензиите се разбъркват в продължение на 1 h, за да се солюбилизират (разтворят) δендотоксинните протеини.
Пробите тогава се центрофугират при 3,500 ппр в продължение на 15 min и супернатантите (течностите над утайките) се проверяват за δ-ендотоксини чрез ракетни имуноелектрофореза срещу антисерум, образуван срещу пречистени белтъчни кристали от В. thuringiensis подвид tenebrionis. Количествата δ-ендотоксин се определят относно стандарт с известно съдържание на белтъчен кристал.
Концентрацията на белтъчен кристал също се определя чрез фотометричен имунотест. Кристалните белтъци се разтварят в основен разтвор. Разтворените белтъци се преципитират от техните антитела. Скоростта на тази реакция се определя нефелометрично. Количествата δ-ендотоксин се определят относно стандарт с известно съдържание на кристален белтък.
Кристални антигени за производство на антитела, използвани при тестове, се получават от кристали, изолирани от В. thuringiensis подвид tenebrionis.
Поликлоиални антитела се образуват чрез инжектиране на зайци подкожно, на всяка четвърта нощ, с 0,25 mg кристален антиген.
Получените резултати са показани в следващите таблици 1а и 1б. Добивите на δендотоксин са изразени като BTTU/g/единици за g културален бульон, определен чрез ракетна имуноелектрофореза (RIE) или чрез фотометричен имунотест (PIA)/. Еквивалентът, използван за чист В. thuringiensis подвид tenebrionis кристален белтък, е 500,000 BTTU/g. Еквивалентите, показани на таблица 1а подолу, са средните от 6-7 независими ферментации, а тези в таблица 1б са средните от 3 независими ферментации.
Таблица 1а
Производство на δ-ендотоксин от щамове на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis в шейкерни колби
| Щам | δ-ендотоксинов добив | |
| RIE BTTU/g | PIA BTTU/g | |
| DSM 2803 | 676 | 1293 |
| NRRL-B 15939 | 747 | 1126 |
| NB 178 | 986 | 1728 |
| DSM 5526 | 1097 | 1860 |
| DSM 5480 | 2382 | 4169 |
Таблица 1б
Производство на δ-ендотоксин от щамове на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis в шейкерни колби
| Щам | δ-ендотоксинов добив |
| RIE BTTU/g | |
| NB 197 | 1103 |
| NB 198 | 1237 |
| DSM 5480 | 2867 |
От таблици 1а и 1б става ясно, че DSM 5480 произвежда три пъти повече δ-ендотоксин от оригиналния щам на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, DSM 2803 и Bacillus thuringiensis подвид san diego, щам NRRL-B15939 и повече от два пъти количеството на δ-ендотоксин, отколкото щамовете използвани днес за производство на търговски продукти на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis.
Фазово контрастна микроскопия, сканираща електронна микроскопия и трансмисионна електронна микроскопия на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, мутант DSM 5480 са установили, че произведените белтъчни кристали от този мутант са много по-големи от съответните белтъчни кристали, произведени от Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, щам DSM 2803, DSM 5526, NB 178 и NB 198, и Bacillus thuringiensis подвид san diego, щамове NRRL-B 15939 и NB 197.
Културалният бульон на Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis, мутант DSM 5480 e проверен за активност срещу ларвите на колорадския картофен бръмбар. Увеличеното количество δ-ендотоксин, произведено от мутант DSM 5480, определено чрез имунологични методи повлиява рефлекторно биологичната активност срещу ларвите на колорадския картофен бръмбар.
Пример 3. В този пример спорообразуването и параспоралната кристална формация на В. thuringiensis подвид tenebrionis, щамове DSM 2803, DSM 5526, NB 178 и NB 198, и мутант DSM 5480, и В. thuringiensis подвид san diego, щамове NRRL-B 15939 и NB 197 са сравнени върху твърда среда и в течна среда.
Всеки от щамовете е култивиран в продължение на 2 дни при 30°С върху агарова пластинка със средния състав, изразен като g/Ι дестилирана вода: пептон 5, говежди екстракт 3, агар, 20, при pH 7,0.
Всеки от щамовете също е култивиран в течна среда. Всички щамове са култивирани в продължение на 17 h при 30°С на изкривени агарови среди. 5 ml от суспензията от клетки от всеки щам се прехвърлят към 500 ml колба на Erlenmeyer, всяка съдържаща 100 ml среда.
Средата се състои от следните съставки в посочените съотношения (изразени като g/1 чешмяна вода). Течната среда съдържа в g: мая екстракт 5, триптон 5, глюкоза 1, КН2РО4 0,8, при pH 7,0.
Инокулираните колби са инкубирани при 30°С с разбъркване (250 гтр) в продължение на 96 h.
Морфологията на щамовете върху твърда среда и в течна среда е изучена в подробности чрез фазово контрастна микроскопия (х 2500). Броят на спорите и кристалите е преброен и размерът на параспоралните кристали е определен. Нови отбрани проби също са изучени чрез сканираща и трансмисионна електронна микроскопия.
В. thuringiensis подвид tenebrionis, щамове DSM 2803, DSM 5526, NB 178 и NB 198, и В. thuringiensis подвид san diego, щамове NRRL-B 15939 и NB 197 образуват спори добре върху двете среди. Преди клетъчното лизиране всяка клетка съдържа спора и параспорален кристал. Размерът на кристалите е от 0,4 до 0,9-1,1 gm в дължина до момента на клетъчното лизиране. Средният размер на белтъчните кристали е 0,6-0,7 gm в дължина.
Мутант DSM 5480 произвежда само няколко спори /< 106 спори/ml върху твърда среда и в определена течна среда. Преди клетъчното лизиране повечето клетки съдържат огромен белтъчен кристал без спори. Размерът на белтъчните кристали е от 0,4-0,7 gm до 5,0 gm, средният размер на белтъчните кристали е 2,2-2,3 gm в дължина.
Ултразвуков анализ на клетките от тази среда чрез трансмисионна електронна микроскопия открива, че процесът на спорообразуване в мутанта започва, но не свършва до момента на клетъчното лизиране. В различните клетки процесът на спорообразуване достига различни етапи. В клетки, където спорообразуването е достигнало етап II (предспорова преградна формация), белтъчните кристали изпълват изцяло клетките.
В производствената среда (пример 2) мутантът произвежда по-голям брой спори (107-10* спори/ml). В тази среда честотата на спорообразуване на мутанта е 10-100 пъти пониска от тази на родоначалния щам.
Така мутантът е показал своите способности да произвежда нормални спори. Честотата на спорообразуването на мутанта, обаче изглежда строго зависима от средата.
Размерът на произведените белтъчни кристали от отделните щамове е показан в таблица Па и Пб.
Таблица Па.
Размер на белтъчните кристали, произведени от колеоптерно активни щамове на В. thuringiensis, с които разполагаме днес
| Щам | Дължина на белтъчните кристали в цш | ||
| Минимум стойност | Максимум стойност | Средна стойност | |
| DSM 2803 | 0,4 | 0,9 | 0,7 |
| NRRL-B-15939 | 0,4 | 0,9 | 0,7 |
| NB 178 | 0,5 | 0,9 | 0,7 |
| DSM 5526 | 0,4 | 0,9 | 0,7 |
| DSM 5480 | 0,7 | 5,0 | 2,3 |
Таблица Пб.
Размер на белтъчните кристали, произведени от колеоптерно активни щамове на В. thuringiensis, с които разполагаме днес
| Щам | Дължина на белтъчните кристали в m | ||
| Минимум стойност | Максимум стойност | Средна стойност | |
| NB 197 | 0,4 | 0,7 | 0,6 |
| NB 198 | 0,4 | 1,1 | 0,7 |
| DSM 5480 | 0,4 | 4,2 | 2,0 |
От таблици Па и Пб е ясно, че мутантът DSM 5480 произвежда много по-големи белтъчни кристали, отколкото който и да е колеоптерно активен щам на В. thuringiensis, с които разполагаме днес.
От получените данни е ясно, че регулацията на производството наб-ендотоксин относно спорообразуването е променено при мутанта.
Мутантът изглежда произвежда белтъчни кристали преди развиването на спори, следователно давайки на клетката по-дълъг период за производство на δ-ендотоксин, което довежда до производство на много по-големи белтъчни кристали до момента на клетъчното лизиране, отколкото при родоначалния щам.
В зависимост от известните хранителни вещества и размера на белтъчните кристали в клетките до момента на спорообразуването, преди момента на клетъчното лизиране, ще се образува нормална спора.
Пример 4. В този пример високото добиване на Btt мутант DSM 5480 е използвано за произвеждане на високоефективни продукти за контрол на ларви на колорадски картофен бръмбар.
DSM 5480 е ферментирал на производствената ферментационна среда, описана в пример 2, в аериран ферментационен резервоар с разбъркване при производството. След 96 h бульонът се възстановява чрез центрофугиране при непрекъснато действаща центрофуга.
Концентрираната пяна, която съдържа активните белтъчни кристали, е стабилизирана чрез добавяне на микробни предпазители и pH, нагласено на 5,0.
Една част от концентрираната пяна е изсушена и по-късно е използвана в технологията на приготвяне на овлажняваща пудра. Останалата концентрирана пяна е използвана пряко в технологията на приготвяне на два водни течни концентрата (FC).
Овлажняващата пудра се получава, както е описано в таблица III. Технологията на получаване на двата FC е описана в таблица IV.
Таблица III.
NOVODOR* овлажняваща пудра (WP) - технология на приготвяне
| Съставка | % от теглото |
| Спрей изсушена концентрирана пяна | |
| на Btt | 40 |
| Детергенти (миещи вещества) | 9 |
| Средство, предпазващо от слепване | 1 |
| Инертен пълнеж | 50 |
Таблица IV.
NOVODOR* FC-приготвяне
| Съставка | NOVODOR* FC1 % от теглото | NOVODOR* FC2 % от теглото |
| Btt концентрирана пяна | 80 | 55 |
| Консерванти | 4 | 4 |
| Антифризни вещества | 9,1 | 19 |
| Детергенти | 2,5 | 2,5 |
| pH регулатори | 2,85 | 2,85 |
| Вода | 1,55 | 16,65 |
| 100,0 | 100,0 |
При използване на 500,000 BTTU/g чист кристален белтък съдържанието на активния кристален белтък при получаването е:
| % Btt кристален белтък | ||
| NOVODOR* WP | 70,8 KBTTU/g | 14,16 |
| NOVODOR* FC1 | 24,7 KBTTU/g | 4,94 |
| NOVODOR* FC2 | 14,2 KBTTU/g | 2,84 |
Детергентите са избрани след широка селекция на помощни суспензии и овлажняващи агенти, използвани обикновено в селскостопанските пестицидни вещества.
Средството, което предпазва от слепване, е хидрофилен силициев двуокис и инертният пълнеж е избран от обикновено използваните инертни пълнежи, като бентонити, неорганични соли или лепила.
Консервантите, използвани при FC, са избрани от група хранителни и козметични консерванти. pH регулаторът е неорганична киселина.
Пример 5. Проведено е изследване в условията на практическата работа за доказване на биологичния ефект от високия добив на Btt мутант DSM 5480 върху главния пестициден обект, ларвите на колорадския картофен бръмбар. В сравнение с двата търговски продукта Trident* и М-one. Културата е картофи. Тя се пръска 3 пъти - на 20 юни, 27 юли и 3 август (2-ро поколение ларви).
Използваните продукти и дози са:
| Продукт об./acre | Активност KBTTU/g | % Btt кристален белтък в състава | |
| NOVODOR8 FC2 | 1 gt (капка)/acre | 14,2 | 2,84 |
| 1,5 gts/acre | 14,2 | 2,84 | |
| 2,5 gts/acre | 14,2 | 2,84 | |
| 3,0 gts/acre | 14,2 | 2,84 | |
| TRIDENT8 | 4 gts/acre | 5,5 | 1,10 |
| M-one8 | 2 gts/acre | 8,9 | 1,78 |
Средният процент контрола на ларви на колорадския картофен бръмбар, сравнен с необработваната контрола, е даден в таблица V.
Въздействието на колорадския картофен бръмбар е много силно в необработваната контрола: 370 ларви на 20 растения на 8 август.
Таблица V.
| Обработване | % контрола | ||
| 1 август | 8 август | ||
| NOVODOR8 FC2 | 1 gt | 99 | 99 |
| NOVODOR8 FC2 | 1,6 gts | 95 | 100 |
| NOVODOR8 FC2 | 2,5 gts | 98 | 99 |
| NOVODOR8 FC2 | 3 gts | 100 | 100 |
| TRIDENT8 | 4 gts | 94 | 98 |
| M-oneR | 2 gts | 98 | 98 |
Тези резултати ясно показват, че продуктите, направени с висок добив на мутант DSM 5480, са ефективни за контрол на ларвите на колорадския картофен бръмбар на полето. Кристалният белтък, произведен от високодобивен щам, е напълно активен, тъй като 1,5 капки NOVODOR8 FC дават такъв добър резултат, какъвто Trident при 4 капки и М-one при 2 капки.
Claims (14)
- Патентни претенции1. Щам Bacillus thuringiensis подвид tenebrionis за получаване на инсектициден δендотоксин, регистриран в DSM под № 5480.
- 2. Метод за селекциониране на щам Вас. thuringiensis DSM 5480 съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че изходен щам Вас. thuringiensis подвид tenebrionis, регистриран в DSM под № 5526, се подлага на насочена мутация с последващо култивиране върху подходяща хранителна среда и подбор на подходящите щамове продуценти.
- 3. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че изходният щам принадлежи към групата, включваща Вас. thuri- ngiensis подвид kurstaki, Вас. thuringiensis подвид aizawai, Вас. thuringiensis подвид israelensis и Вас. thuringiensis подвид tenebrionis.
- 4. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че в качеството на подходящ мутаген за обработка на изходния щам Вас. thuringiensis DSM 5526 се използва химически мутаген, по-специално N-Menui-N’-HHTpo-Nнитрозогуанидин или етилметансулфонат.
- 5. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че в качеството на мутаген се използва електромагнитно облъчване, по-специално γ-лъчи, Х-лъчи, UV-лъчи.
- 6. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че хранителната среда е модифицирана хранителна среда, съдържаща фосфат, по-специално среда NSMP.
- 7. Метод съгласно претенции 2 и 5, характеризиращ се с това, че хранителната среда е среда NSMP, допълнена с MgCl2 и Gebriete, Kelco.
- 8. Метод за селекциониране на варианти или естествени мутанти на щам Вас. thuringiensis, продуциращи δ-ендотоксин, характеризиращ се с това, че изходният щам Вас. thuringiensis DSM 5526 се култивира в течна среда, културалният бульон е разпръснат върху среда, подходяща за селекция на аспорогенни и/или олигоспорогенни щамове, прозрачните колонии се селекционират и отглеж- 5 дат в среда, която не се втечнява при затопляне, а истински аспорогенни щамове се селекционират чрез подлагане на колониите на термична обработка.
- 9. Метод за получаване на инсектици- 10 ден δ-ендотоксин, характеризиращ се с това, че щам Вас. thuringiensis подвид tenebrionis, депозиран в DSM под № 5480, се култивира в хранителна среда, съдържаща източници на въглерод, азот и микроелементи за подходящ 15 период от време, при което инсектицидният продукт, съдържащ δ-ендотоксините, се възстановява самостоятелно или в комбинация с клетки и/или спори от културалната среда.
- 10. Инсектициден състав, характеризи- 20 ращ се с това, че като активно вещество включва инсектициден δ-ендотоксин, получен съгласно претенция 9, евентуално смесен с подходя щи за селското стопанство пълнители, разредители или носители.
- 11. Инсектициден състав съгласно претенция 10, характеризиращ се с това, че разредителят или носителят в състава е твърдо или течно вещество, незадължително свързано с повърхностно активно вещество.
- 12. Метод за контролиране числения състав на вредители насекоми, характеризиращ се с това, че инсектицидният състав съгласно претенция 10 се прилага в количество 1 кварта (1,136 1) течен състав за acre или 0,8 lb от сухия инсектициден състав за acre.
- 13. Метод за контролиране числения състав на вредители съгласно претенция 12, характеризиращ се с това, че атакуваните насекоми принадлежат към разредите Lepidoptera, Diptera и Coleoptera.
- 14. Метод за контролиране числения състав на вредители съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че вредителят принадлежи към разред Coleoptera, по-специално колорадски бръмбар.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK580589A DK580589D0 (da) | 1989-11-17 | 1989-11-17 | Mutant |
| DK627489A DK627489D0 (da) | 1989-12-12 | 1989-12-12 | Mutant |
| PCT/DK1990/000294 WO1991007481A1 (en) | 1989-11-17 | 1990-11-16 | Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG61699B1 true BG61699B1 (bg) | 1998-03-31 |
Family
ID=26067985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG96488A BG61699B1 (bg) | 1989-11-17 | 1992-06-16 | Мутанти или варианти на bacillus thuringiensis, произвеждащиголеми количества делта-ендотоксин |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0585215B1 (bg) |
| JP (1) | JP2950614B2 (bg) |
| KR (1) | KR0157065B1 (bg) |
| AT (1) | ATE184645T1 (bg) |
| AU (1) | AU647056B2 (bg) |
| BG (1) | BG61699B1 (bg) |
| CA (1) | CA2068734C (bg) |
| DE (2) | DE585215T1 (bg) |
| DK (1) | DK0585215T3 (bg) |
| ES (1) | ES2060568T3 (bg) |
| FI (1) | FI103130B (bg) |
| GR (2) | GR940300021T1 (bg) |
| HU (1) | HU214685B (bg) |
| NO (1) | NO305131B1 (bg) |
| RO (1) | RO109862B1 (bg) |
| RU (1) | RU2138950C1 (bg) |
| SK (1) | SK562990A3 (bg) |
| TR (1) | TR28902A (bg) |
| WO (1) | WO1991007481A1 (bg) |
| YU (1) | YU48440B (bg) |
Families Citing this family (135)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6270760B1 (en) * | 1989-12-18 | 2001-08-07 | Valent Biosciences, Inc. | Production of Bacillus thuringiensis integrants |
| US5187091A (en) * | 1990-03-20 | 1993-02-16 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects |
| IL99928A0 (en) * | 1990-11-08 | 1992-08-18 | Agricultural Genetics Co | Biological control of pests |
| US5264364A (en) * | 1991-01-31 | 1993-11-23 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects |
| ZA932792B (en) * | 1992-05-12 | 1993-11-16 | Aeci Ltd | Insecticide composition |
| AU7102494A (en) * | 1993-06-10 | 1995-01-03 | Ecogen Inc. | (bacillus thuringiensis) strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins |
| IL110299A0 (en) * | 1993-07-15 | 1994-10-21 | Novo Nordisk Entotech Inc | Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity |
| EP0876493B1 (en) * | 1996-01-26 | 2004-04-14 | Valent Biosciences, Corp. | Production of bacillus thuringiensis integrants |
| US5804180A (en) * | 1996-07-17 | 1998-09-08 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins |
| US6063756A (en) | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
| US5965428A (en) * | 1996-10-08 | 1999-10-12 | Ecogen, Inc. | Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins |
| KR100458765B1 (ko) * | 2001-12-24 | 2004-12-03 | 학교법인 동아대학교 | 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법 |
| US20150257383A1 (en) | 2012-10-12 | 2015-09-17 | Basf Se | Method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material |
| CN104955813A (zh) | 2012-11-27 | 2015-09-30 | 巴斯夫欧洲公司 | 取代的[1,2,4]三唑化合物 |
| EP2925730A1 (en) | 2012-11-27 | 2015-10-07 | Basf Se | Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides |
| WO2014082879A1 (en) | 2012-11-27 | 2014-06-05 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
| EP2928873A1 (en) | 2012-11-27 | 2015-10-14 | Basf Se | Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides |
| WO2014086850A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii |
| WO2014086856A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide |
| WO2014086854A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator |
| EP2746266A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| WO2014095555A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| EP2935224A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| WO2014095672A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides |
| EP2746263A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Alpha-substituted triazoles and imidazoles |
| WO2014095381A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP3181558A1 (en) | 2012-12-19 | 2017-06-21 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides |
| EP2746277A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2746262A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi |
| EP2746279A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2746278A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| WO2014095534A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| EP2746255A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746256A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2746260A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746257A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746259A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746258A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| WO2014124850A1 (en) | 2013-02-14 | 2014-08-21 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| US20160278384A1 (en) | 2013-03-20 | 2016-09-29 | Basf Corporation | Synergistic compositions comprising a bacillus subtilis strain and a biopesticide |
| WO2015011615A1 (en) | 2013-07-22 | 2015-01-29 | Basf Corporation | Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide |
| CN105722833A (zh) | 2013-09-16 | 2016-06-29 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀真菌的嘧啶化合物 |
| WO2015036059A1 (en) | 2013-09-16 | 2015-03-19 | Basf Se | Fungicidal pyrimidine compounds |
| UA121106C2 (uk) | 2013-10-18 | 2020-04-10 | Басф Агрокемікал Продактс Б.В. | Застосування пестицидної активної похідної карбоксаміду у способах застосування і обробки насіння та ґрунту |
| WO2015086462A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| WO2015091645A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-25 | Basf Se | Azole compounds carrying an imine-derived substituent |
| WO2015104422A1 (en) | 2014-01-13 | 2015-07-16 | Basf Se | Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests |
| EP2924027A1 (en) | 2014-03-28 | 2015-09-30 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds |
| CN106470962A (zh) | 2014-04-17 | 2017-03-01 | 巴斯夫欧洲公司 | 新型硝化抑制剂和生物农药的组合以及(硫代)磷酸三酰胺和生物农药的组合 |
| EP2962568A1 (en) | 2014-07-01 | 2016-01-06 | Basf Se | Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide |
| EP2949216A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-02 | Basf Se | Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2949649A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-02 | Basf Se | Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2952512A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
| EP2952507A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
| EP2952506A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| JP2017538860A (ja) | 2014-10-24 | 2017-12-28 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ | 固体粒子の表面荷電を改変するための、非両性の四級化可能な水溶性ポリマー |
| CR20170327A (es) * | 2015-01-16 | 2017-11-02 | Valent Biosciences Llc | Formulaciones combinadas de bacillus thuringiensis subespecie kurstaki y bacillus thuringiensis subespecie aizawai |
| WO2016128239A1 (en) | 2015-02-11 | 2016-08-18 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide |
| WO2016142456A1 (en) | 2015-03-11 | 2016-09-15 | BASF Agro B.V. | Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide |
| CN107592790B (zh) | 2015-03-11 | 2022-03-25 | 巴斯夫农业化学品有限公司 | 包含羧酰胺化合物和生物农药的农药混合物 |
| EP3111763A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-04 | BASF Agro B.V. | Pesticidal compositions comprising a triazole compound |
| CN113303339A (zh) | 2015-11-30 | 2021-08-27 | 巴斯夫欧洲公司 | 顺式-茉莉酮和解淀粉芽孢杆菌的混合物 |
| EP3205209A1 (en) | 2016-02-09 | 2017-08-16 | Basf Se | Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides |
| WO2018050421A1 (en) | 2016-09-13 | 2018-03-22 | Basf Se | Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides |
| WO2018149754A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Basf Se | Pyridine compounds |
| AU2018241406B2 (en) | 2017-03-28 | 2021-11-11 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| CN110475772A (zh) | 2017-04-06 | 2019-11-19 | 巴斯夫欧洲公司 | 吡啶化合物 |
| CN110770235A (zh) | 2017-06-16 | 2020-02-07 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物 |
| CN110678469B (zh) | 2017-06-19 | 2023-03-03 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于防除动物害虫的取代嘧啶鎓化合物和衍生物 |
| WO2018234488A1 (en) | 2017-06-23 | 2018-12-27 | Basf Se | SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES |
| EP3453706A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-13 | Basf Se | Pesticidal imidazole compounds |
| WO2019057660A1 (en) | 2017-09-25 | 2019-03-28 | Basf Se | INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES |
| US11399543B2 (en) | 2017-10-13 | 2022-08-02 | Basf Se | Substituted 1,2,3,5-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyrimidiniumolates for combating animal pests |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| CN111491925B (zh) | 2017-12-21 | 2023-12-29 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀害虫化合物 |
| IL275726B1 (en) | 2018-01-09 | 2024-02-01 | Basf Se | Hetaryl silylethynyl compounds as nitrification inhibitors |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| WO2019166558A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Basf Se | Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors |
| PE20211753A1 (es) | 2018-02-28 | 2021-09-06 | Basf Se | Uso de alcoxipirazoles como inhibidores de la nitrificacion |
| KR20200128405A (ko) | 2018-02-28 | 2020-11-12 | 바스프 에스이 | 질화작용 저해제로서의 n-관능화 알콕시 피라졸 화합물의 용도 |
| WO2019175712A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Basf Corporation | New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways |
| WO2019175713A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Basf Corporation | New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| WO2020002472A1 (en) | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Basf Se | Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors |
| CN112424147B (zh) | 2018-07-23 | 2023-06-30 | 巴斯夫欧洲公司 | 取代噻唑烷化合物作为硝化抑制剂的用途 |
| WO2020020777A1 (en) | 2018-07-23 | 2020-01-30 | Basf Se | Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3887357A1 (en) | 2018-11-28 | 2021-10-06 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| WO2020126591A1 (en) | 2018-12-18 | 2020-06-25 | Basf Se | Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP3730489A1 (en) | 2019-04-25 | 2020-10-28 | Basf Se | Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides |
| BR112021019416A2 (pt) | 2019-05-29 | 2021-12-07 | Basf Se | Compostos, composição, métodos de proteção de safras e de combate, controle, prevenção ou proteção contra infestações, método não terapêutico de tratamento de animais infestados, semente e uso |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| WO2021170463A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | BASF Agro B.V. | Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| EP4143167B1 (en) | 2020-04-28 | 2024-05-15 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| CN116209355A (zh) | 2020-10-27 | 2023-06-02 | 巴斯夫农业公司 | 包含氯氟醚菌唑的组合物 |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| EP4011208A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-15 | BASF Corporation | Microparticle compositions comprising fluopyram |
| EP4288398A1 (en) | 2021-02-02 | 2023-12-13 | Basf Se | Synergistic action of dcd and alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| IL308529A (en) | 2021-05-18 | 2024-01-01 | Basf Se | New converted pyridines as fungicides |
| BR112023023989A2 (pt) | 2021-05-18 | 2024-01-30 | Basf Se | Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente |
| JP2024519813A (ja) | 2021-05-18 | 2024-05-21 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 殺菌剤としての新規な置換ピリジン |
| AR125955A1 (es) | 2021-05-21 | 2023-08-30 | Basf Se | Uso de un compuesto de alcoxi pirazol n-funcionalizado como inhibidor de nitrificación |
| CA3219022A1 (en) | 2021-05-21 | 2022-11-24 | Barbara Nave | Use of ethynylpyridine compounds as nitrification inhibitors |
| CN117500377A (zh) | 2021-06-21 | 2024-02-02 | 巴斯夫欧洲公司 | 具有基于吡唑的构建单元的金属有机框架 |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023011958A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Basf Se | (3-pirydyl)-quinazoline |
| CN117794908A (zh) | 2021-08-02 | 2024-03-29 | 巴斯夫欧洲公司 | (3-喹啉基)-喹唑啉 |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2023203066A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Basf Se | Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| EP4361126A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-01 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv |
| WO2024104818A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104815A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104823A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | New substituted tetrahydrobenzoxazepine |
| WO2024104822A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4277564A (en) * | 1980-01-09 | 1981-07-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis |
| CA1193564A (en) * | 1982-07-09 | 1985-09-17 | University Of Western Ontario | Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control |
| DE3346138A1 (de) * | 1983-12-21 | 1985-07-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera |
| US4764372A (en) * | 1985-03-22 | 1988-08-16 | Mycogen Corporation | Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof |
| DE3541893A1 (de) * | 1985-11-27 | 1987-06-11 | Basf Ag | Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus |
| JPS62146593A (ja) * | 1985-12-16 | 1987-06-30 | マイコゲン コ−ポレ−シヨン | バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法 |
| JP2775150B2 (ja) * | 1987-03-04 | 1998-07-16 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル．イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法 |
| EP0325037B1 (en) * | 1987-12-24 | 1994-04-06 | Zeneca Limited | Bacterial strains |
| US4999192A (en) * | 1988-02-12 | 1991-03-12 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate |
| US4966765A (en) * | 1988-02-23 | 1990-10-30 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
| US4996155A (en) * | 1988-03-04 | 1991-02-26 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin |
| US4990332A (en) * | 1988-10-25 | 1991-02-05 | Mycogen Corporation | Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
-
1990
- 1990-11-14 SK SK5629-90A patent/SK562990A3/sk unknown
- 1990-11-16 KR KR1019920701171A patent/KR0157065B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 AT AT90917069T patent/ATE184645T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 RO RO92-200690A patent/RO109862B1/ro unknown
- 1990-11-16 JP JP2515745A patent/JP2950614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 CA CA002068734A patent/CA2068734C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 AU AU67364/90A patent/AU647056B2/en not_active Ceased
- 1990-11-16 ES ES90917069T patent/ES2060568T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 HU HU9201628A patent/HU214685B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 DE DE0585215T patent/DE585215T1/de active Pending
- 1990-11-16 TR TR01097/90A patent/TR28902A/xx unknown
- 1990-11-16 EP EP90917069A patent/EP0585215B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 WO PCT/DK1990/000294 patent/WO1991007481A1/en active IP Right Grant
- 1990-11-16 DE DE69033291T patent/DE69033291T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 RU SU5052261A patent/RU2138950C1/ru active
- 1990-11-16 DK DK90917069T patent/DK0585215T3/da active
- 1990-11-16 YU YU218590A patent/YU48440B/sh unknown
-
1992
- 1992-05-14 FI FI922205A patent/FI103130B/fi active
- 1992-05-15 NO NO921950A patent/NO305131B1/no unknown
- 1992-06-16 BG BG96488A patent/BG61699B1/bg unknown
-
1994
- 1994-04-29 GR GR940300021T patent/GR940300021T1/el unknown
-
1999
- 1999-11-10 GR GR990402908T patent/GR3031815T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG61699B1 (bg) | Мутанти или варианти на bacillus thuringiensis, произвеждащиголеми количества делта-ендотоксин | |
| US5006336A (en) | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate | |
| US4849217A (en) | Novel isolates of bacilus thuringiensis having activity against the alfalfa weevil, hypera brunneipennis | |
| US4999192A (en) | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate | |
| CA1327176C (en) | Coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate | |
| EP0202739A1 (en) | Novel micro-organism and its use for controlling pests | |
| JP2571842B2 (ja) | 新規なバチルス・スリンギエンシス菌株、それらの分離方法および関連する組成物 | |
| JPH0829075B2 (ja) | 或る種の鱗翅類害虫に対して改良された活性を有するバチルス・スリンギエンシスの株の製法及びそれにより製造さた新規株 | |
| US5277906A (en) | Insecticidal composition of bacillus thuringiensis serovar israelensis, DSM 3435 and DSM 3440 | |
| US5279962A (en) | Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin | |
| US5516514A (en) | Insect controlling agent from strains of Bacillus thuringiensis var. Kurstaki | |
| JP3017799B2 (ja) | バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用 | |
| EP0409438A1 (en) | Novel Bacillus thuringiensis isolates | |
| US5202240A (en) | Preparation of spore free, concentrated protein preparations from Bacillus thuringiensis serovar,israelensis, which is toxic | |
| CZ562990A3 (cs) | Mutant mikroorganismu Bacillus thuringiensis deponovaný jako subsp. tenebrionis DSM 5480, způsob jeho přípravy a pesticidní prostředek, který ho obsahuje | |
| PL166433B1 (pl) | Sposób wytwarzania owadobójczego produktu wytwarzanego przez B. thuringlensis PL PL PL PL PL PL | |
| HRP920198A2 (en) | Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin | |
| Jayaraman et al. | Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies |