SK281286B6 - Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje - Google Patents

Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje Download PDF

Info

Publication number
SK281286B6
SK281286B6 SK5629-90A SK562990A SK281286B6 SK 281286 B6 SK281286 B6 SK 281286B6 SK 562990 A SK562990 A SK 562990A SK 281286 B6 SK281286 B6 SK 281286B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
mutant
dsm
subsp
tenebrionis
bacillus
Prior art date
Application number
SK5629-90A
Other languages
English (en)
Other versions
SK562990A3 (en
Inventor
Hanne G�Rtler
Schousboe Anette Petersen
Original Assignee
Novo Nordisk A/S
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK580589A external-priority patent/DK580589D0/da
Priority claimed from DK627489A external-priority patent/DK627489D0/da
Application filed by Novo Nordisk A/S filed Critical Novo Nordisk A/S
Publication of SK562990A3 publication Critical patent/SK562990A3/sk
Publication of SK281286B6 publication Critical patent/SK281286B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticídnych endotoxínov delta než materský kmeň, je vhodný na výrobu pesticídnych prostriedkov na boj so škodlivým hmyzom, zvlášť na hubenie motýľov, dvojkrídlového hmyzu a predovšetkým pásavky zemiakovej. Pripravuje a selektuje sa tak, že sa materský kmeň i) spracováva akýmkoľvek vhodným chemickým mutagénom, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidínom alebo etylmetánsulfonátom, za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako je žiarenie gama, röntgenové žiarenie alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí obsahujúcom fosfát a prípadne ako doplnky 0,57 g/l chloridu horečnatého a 20 g/l gelritu, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré sa nestekucuje pri zahrievaní, a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí obsahujúcom fosfát doplnený chloridom horečnatým a doplnkami modifikovaného živného sporulačného prostredia.ŕ

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka mutantu mikroorganizmu Bacillus thuringiensis deponovaného ako subsp. tenebrionis DSM 5480, spôsobu jeho prípravy a pesticídneho prostriedku, ktorý ho obsahuje.
Doterajší stav techniky
Obchodný prípravok Bacillus thuringiensis je celosvetovo používaný na biologický boj proti škodlivému hmyzu. Prednosťou týchto bakteriálnych insekticídov je vysoká sclektivita pre veľmi obmedzený odbor ničeného škodlivého hmyzu a biologická odbúrateľnosť.
Obchodné prípravky Bacillus thuringiensis sa môžu aplikovať až do obdobia zberu bez akéhokoľvek vedľajšieho nepriaznivého pôsobenia.
Bacillus thuringiensis je tyčinkovitá aeróbna, spórotvomá baktéria, jedinečne charakterizovaná produkciou jednej alebo niekoľkých inklúzií pri sporulačnom procese, označovaných ako parasporálne kryštály. Tieto kryštály sú tvorené vysokomolekulárnymi bielkovinami označovanými ako endotoxíny delta. Endotoxíny delta sú účinnou látkou obchodne dostupných prípravkov Bacillus thuringiensis.
Boli identifikované mnohé kmene Bacillus thuringiensis s rôznym spektrom hostiteľského hmyzu. Klasifikujú sa na rôzne poddruhy na základe svojich antigénov. Zvláštny význam má poddruh kurstaki Bacillus thurigiensis a poddruh aizawai Bacillus thurigiensis na hubenie motýľov radu Lepidoptera, Bacillus thurigiensis poddruh israelensis na hubenie dvojkrídleho hmyzu a Bacillus thurigiensis poddruh tenebrionis používaný na hubenie chrobákov.
Prvá izolácia Bacillus thurigiensis toxického pre chrobáky bola opísaná v roku 1983 (A. Krieg a kol., Z. end. Ent. 96, str. 500 až 508, EP 0149162 A2).
Izolát označený ako Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis je uložený v nemeckej zbierke Germán Collection of Microorganisms pod číslom DSM 2803. Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis bol izolovaný v roku 1982 z usmrtených lariev múčiara Tenebrio molitor (Tenebrionidae. Coleoptere). Kmeň produkuje v každej bunke jednu spóru a jeden alebo niekoľko insekticídnych peresporálnych kryštálov, ktoré majú plochú, doštičkovitú formu s dĺžkou hrany približne 0,8 pm až 1,5 pm. Patria k serotypu H8a, 8b a patotypu C Bacillus thurigiensis (Krieg a kol., Systém Appl. Microbiol. 9, str. 138-141, americký patentový spis číslo 4 766203, 1988).
Je toxický len k určitým larvám chrobákov (Chrysomelidae) živiacim sa listami, je však neúčinný proti húseniciam (Lepidoptera), proti komárom (Diptera) a proti ďalšiemu hmyzu.
Zistilo sa, že Bacillus thurigiensis subsp.tenebrionis je účinným prostriedkom proti larvám pásavky zemiakovej. Po požití kryštálov a spór mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis, alebo izolovaných kryštálov larvami a v určitej miere dospelými jedincami, prestane pásavka zemiaková (Leptinotarsa decemlineata) prijímať potravu. Larválne štádium L1-L3 hynie v priebehu 1 až 3 dní (Schnettar a kol., „Fundamental and applied aspects of invertebrate pathology“ - Základná a aplikovaná patológia bezstavovcov), R. A. Samson a kol., Proceedings of the 4th Int. Colloquium of Invertebrate Pathology, str. 555,1986).
Najnovšie sa zistilo, že Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis produkuje okrem aktívnych kryštálov proti chrobákom iný parasporálny kryštál, ktorý má vretenový, guľovitý, alebo doštičkovitý tvar (A. M. Huger a A. Krieg, J.
appl. Ent.,108, str. 490-497, 1989). Účinnosť tohto druhého kryštálu dosiaľ nebola známa.
Boli vyvinuté štyri obchodné prípravky Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis na hubenie chrobákov (NOVODOR® spoločnosti NovoNordisk A/S, TRIDENT® spoločnosti Sandoz, DiTerra® spoločnosti Abbott Laboratories Inc. a FOIL® spoločnosti Ecogen.
Izolácia ďalšieho kmeňa Bacillus thurigiensis, toxického pre chrobákov, bola opísaná v roku 1986 (Hemstadt a kol., BioTechnology, ročník 4, str. 305-308, 1986, americký patentový spis číslo 4 764372, 1988). Tento kmeň označený ako „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego“, M7, je uložený vo výskumnom laboratóriu Northem Regional Research Laboratory, USA pod číslom NRRL B-15939. Obchodný produkt na báze mikroorganizmu „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego , bol vyvinutý spoločnosťou Mycogen Corp.
Porovnávacie štúdie Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis, DSN 2803 a „Bacillus thurigiensis subsp. San Diego, NRRL B 15939 vrátane fenotypovej charakteristiky vegetatívnych buniek, charakterizácie parasporálneho kryštálu a analýzy plazmidu DNA však ukázali, že Bacillus thurigiensis subsp. San Diego, je zrejme identický so skôr izolovaným kmeňom DSN 2803, Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis Krieg a kol., J. Appl. Ent. 104, str. 417 až 424,1987). Okrem toho nukleotidové sekvencie a odvodené aminokyselinové sekvencie proti chrobákom účinných génov endotoxínu delta mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis a Bacillus thurigiensis subsp. san diego, sú identické.
Pri rovnakých kultivačných podmienkach uvedený typ kryštálov je tiež syntetizovaný mikroorganizmom Bacillus thurigiensis subsp. San Diego (A. M. Hunter a A. Krieg, J. Appl, Ent.,10B, str. 490 až 497,1989).
Podľa autorov H. de Barjac a E. Frachon (Entomophaga 35/2, str. 233 až 240, 1990) izolát „San Diego“, je podobný izolátu „tenebriosis“, a preto nie je možné ich považovať za rozdielne poddruhy.
Užitočnosť kmeňa Bacillus thurigiensis na hubenie chrobákov závisí od účinnosti a ekonomickej produkcii toxínov účinných proti chrobákom a od potencie vyrobeného produktu. To je naopak závislé od množstva endotoxínov delta, ktoré sa môžu produkovať fermentáciou kmeňov Bacillus thurigiensis účinných pri hubení chrobákov.
Mikroorganizmus Bacillus thurigiensis sa môže používať počas mnoho rokov na výrobu insekticídne účinnej látky, ale akokoľvek by boli mutanty Bacillus thurigiensis so zvýšeným výťažkom endotoxínov delta výhodné, neboli dosiaľ takéto mutanty opísané. Mutanty produkujúce endotoxíny delta s vyššími výťažkami by umožňovali účinnejšiu a ekonomickejšiu produkciu toxínov Bacillus thurigiensis a možnosť výroby produktov Bacillus thurigiensis so zvýšenou potenciou za rovnakú cenu. To by naopak bolo výhodné pre používateľa, pretože by sa skladovali znížené objemy pesticídnych prostriedkov a bola by nutná manipulácia so zníženými objemami na danú výmeru. Okrem toho by používatelia mali menšie problémy s obalmi a znížilo by sa zaťažovanie životného prostredia týmito obalmi.
Zlepšenie produkcie endotoxínu delta mikroorganizmom Bacillus thurigiensis subsp. tenebriosis mutáciou nebolo dosial’ opísané.
Jedným problémom, spojeným s použitím najmä mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis pri hubení lariev chrobákov, je pomerne nízka potencia alebo agresívnosť prípravkov, vyžadujúca použitie pomerne veľkého množstva prípravku na ošetrovanú výmeru, napríklad až 10 1/ha v porovnaní s 1 až 2 1/ha väčšiny iných pro2
SK 281286 Β6 duktov Bacillus thurigiensis a väčšiny iných insekticídov. Preto sa ukazuje potreba nových produktov so zvýšenou účinnosťou.
Jedným riešením tohto problému je koncentrovanie prípravkov. To však značne zvyšuje náklady v porovnaní s úsporami dosiahnutými pri skladovaní a pri manipulácii s prípravkami.
Elegantnejším riešením je vyvinutie mutantov existujúcich mikroorganizmov Bacillus thurigiensis schopných produkcie podstatne väčších množstiev endotoxínu delta na bunku.
Vynález sa teda týka mutantu kmeňa Bacillus thuringiensis, schopného produkcie podstatne väčšieho množstva toxínov než ich materský kmeň.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je mutant mikroorganizmu Bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticídnych delta endotoxínov než materský kmeň.
Pesticídny prostriedok na boj so škodlivým hmyzom, zvlášť zo súboru zahrnujúceho motýle, dvojkrídle a chrobáky a predovšetkým na boj s pásavkou zemiakovou, spočíva podľa vynálezu v tom, že ako účinnú látku obsahuje mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticídnych delta endotoxínov než materský kmeň. Tento pesticídny prostriedok môže prídavné obsahovať poľnohospodársky vhodné rozpúšťadlá a/alebo nosiče a povrchovo aktívnu látku.
Spôsob prípravy mutantu kmeňov mikroorganizmu Bacillus thurigiensis a jeho selekcia spočíva podľa vynálezu v tom, že sa materský kmeň
i) spracováva akýmkoľvek chemicky vhodným mutagénom, ako napríklad
N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidínom alebo etylmetánsulfonátom za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako sú lúče gama, rôntgenové lúče alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí obsahujúcom fosfát a prípadne doplnky modifikovaného živného sporulačného prostredia, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nesteká pri zahrievaní a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí obsahujúcom fosfát doplnený chloridom horečnatým a doplnky modifikovaného živného sporulačného prostredia.
Takto oddelené kolónie sa nechávajú rásť na normálnom produkčnom prostredí a potom sa ďalej uskutočňuje konečné oddelenie kmeňov schopných zvýšenia produkcie delta endotoxínov.
Pesticídny prostriedok je vhodný na potieranie škodlivého hmyzu, pri ktorom sa na plochy napadnuté škodlivým hmyzom nanáša pesticídny prostriedok podľa vynálezu.
Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, ktorý produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta, bol deponovaný organizáciou Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroderweg lb, D-33OO Braunschweig, Nemecko, na účely patentového postupu na základe ďalej uvedených hodnôt. DSM je medzinárodný depozitár podľa medzinárodnej Budapeštianskej dohody trvalého uloženia podľa odseku 9 tejto medzinárodnej dohody.
deň uloženia 10. augusta 1989 referencia uloženia NB 176-1 označenie DSM DSM 5480
Mutant DMS 5480 sa získa mutáciou mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis, kmeň DMS 5526, ktorý je tiež deponovaný podľa medzinárodnej Budapeštianskej dohody, ako je ďalej uvedené : deň uloženia 14. september 1989 referencia uloženia NB 125 označenie DSM DSM 5526
Všeobecne sa vynález týka mutantov a variantov mikroorganizmu Bacillus thuringiensis produkujúcich vysoké množstvo endotoxínu delta v porovnaní so svojím materským kmeňom.
V tejto súvislosti sa „vysokým množstvom“ mieni aspoň dvojnásobné množstvo, ale skôr ešte väčšie množstvo.
Všeobecne ale zvlášť sa vynález týka endotoxínov delta produkovaných mutantom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ktorý pôsobí na rovnaké druhy škodlivého hmyzu ako endotoxíny delta materského mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, samotné proti motýľom (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. kurstaki a subsp. aizawai), dvojkrídlemu hmyzu (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. israelensis) alebo chrobákom (mutanty mikroorganizmu Bacillus thuringiensis susp. tenebrionis).
Zvlášť sa vynález týka mikroorganizmu Bacillus thuringiensis patriaceho do podtriedy tenebrionis a endotoxínu delta produkovaného týmto mikroorganizmom a účinného proti chrobákom.
Z tohto hľadiska sa vynález zvlášť týka mutantu alebo variantu mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrior nis schopného produkovať viac než trojnásobok endotoxínu delta v porovnaní s kmeňom DSM 2803.
Vynález sa ďalej týka variantu alebo mutantov kmeňov mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis, ktoré sú schopné produkovať parasporálny kryštál majúci strednú dĺžku hrany aspoň 2 mikrometre.
Vynález sa tiež týka variantu alebo mutantu kmeňov B. thuringiensis subsp. tenebrionis majúcich frekvenciu sporulácie 10- až 100-krát alebo dokonca 106-krát nižšiu, než je frekvencia sporulácie materského kmeňa alebo kmeňa DSM 2803.
Podľa zvlášť výhodného uskutočnenia sa vynález týka deponovaného mutantu B. thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 5480.
Pri práci na tomto vynáleze bol izolovaný mutant mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis /DSM 5480/ s viac než dvojnásobným množstvom produkovaného endotoxínu delta v porovnaní s materským kmeňom /DSM 5526/. Fázová kontrastná mikroskopia, riadkovacia elektrónová mikroskopia a transmisná elektrónová mikroskopia dokladajú, že vysoká produktivita tohto mutantu je podmienená zmenami riadenia produkcie endotoxínu delta vo vzťahu ksporulácii, vedúcimi k produkcii kryštálov bielkoviny, ktorá je až viac než päťkrát vyššia než produkcia kryštálov kmeňa existujúceho mikroorganizmu Bacillus thuringiensis, ktoiý je účinný proti chrobákom. Tento úzky vzťah medzi vytváraním kryštálu a sporuláciou sa zdá byť odstránený a mutant produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta pred sporuláciou.
Vynález sa týka použitia variantu alebo mutantu kmeňov podľa vynálezu pri produkcii insekticídnych produktov na báze mikroorganizmu B. thuringiensis, pričom sa variant alebo mutant kmeňa B. thuringiensis kultivuje vo vhodnom kultivačnom prostredí obsahujúcom zdroje uhlíka, dusíka a
SK 281286 Β6 ďalších zložiek známych pracovníkom v odbore, počas vhodného času, potom sa endotoxíny delta izolujú.
Vynález sa tiež týka mikroorganizmom B. thuringiensis produkovaného endotoxínu delta produkovaného uvedeným spôsobom a používaného ako účinná látka v pesticídnych prostrediach.
V takýchto prostrediach sa endotoxíny delta môžu požívať buď samotné alebo v zmesi s inými biologicky účinnými látkami.
Vynález sa tiež týka takých pesticídnych zmesí alebo prostriedkov, ktoré obsahujú endotoxín delta produkovaný mikroorganizmom B. thuringiensis podľa vynálezu v zmesi s poľnohospodársky vhodnými rozpúšťadlami alebo nosičmi.
Vynález sa tiež týka takých pesticídnych zmesí alebo prostriedkov obsahujúcich endotoxín delta produkovaný mikroorganizmom B. thuringiensis, ktoré v kvapalnej forme majú účinnosť aspoň 15 000 BTTU/g zodpovedajúcu aspoň hmotnostné 3 % bielkovinového kryštálu insekticídneho proti chrobákom alebo v suchej forme majú účinnosť aspoň 50 000 BTTU/g zodpovedajúcu aspoň hmotnostné 10 % bielkovinového kryštálu insekticídneho proti chrobákom.
Obzvlášť sa vynález týka pesticídnych prostriedkov produkovaných DSM 5480, majúcich aspoň dvojnásobnú účinnosť v porovnaní s pesticídnymi prostriedkami produkovanými DSM 2803 alebo inými kmeňmi Btt účinnými proti chrobákom.
Prostriedky podľa vynálezu môžu mať akúkoľvek známu formu z odboru agrochemikálií, napríklad to môžu byť suspenzie, disperzie, vodné emulzie, poprašky, dispergovateľné prášky, emulgovateľné koncentráty alebo granuly. Okrem toho môžu byť vo vhodnej forme na priame použitie alebo vo forme koncentrátov alebo primárnych prostriedkov, ktoré vyžadujú nariedenie vhodným množstvom vody alebo iného rozpúšťadla pred použitím.
Koncentrácia insekticídnych endotoxinov delta B. thuringiensis v prostriedkoch podľa vynálezu, používaných samostatne alebo v zmesi s inými pesticídmi, na nanášanie na rastliny, je výhodne hmotnostné 0,5 až približne 25 %, zvlášť hmotnostné 1 až 15 %.
Vynález sa tiež týka spôsobu boja proti škodcom, pričom sa používajú opísané insekticídne prostriedky na miesta napadnuté hmyzom.
Vynález sa zvlášť týka hubenia motýľov, dvojkrídleho hmyzu a chrobákov a predovšetkým sa týka potierania pása vky zemiakovej.
Výhodne sa podľa vynálezu používa 4,5 litrov na 0,4 ha kvapalného pesticídneho prostriedku alebo približne 226 g na 0,4 ha suchého pesticídneho prostriedku.
Aktívny prípravok B. thuringiensis alebo zmes podľa vynálezu sa môže nanášať priamo na rastlinu napríklad nastriekaním alebo poprášením v čase, keď sa nežiaduci hmyz začne na rastline vyskytovať. Výhodným spôsobom nanášania je postrek. Všeobecne je dôležité dosiahnuť dobrú kontrolu škodlivého hmyzu v ranných štádiách larválneho vývoja, pretože v takomto prípade dochádza k najmenšiemu poškodeniu rastliny.
Spôsob mutácie kmeňov Bacillus thuringiensis a selekcia takých mutantov, ktoré sú schopné produkcie podstatne väčšieho množstva endotoxinov delta než materské kmene, zahŕňa i/ spracovanie mutagénom, ii/ takto spracované mutanty sa nechávajú rásť na vhodnom prostredí na selekciu asporogénnych alebo oligosporogénnych kmeňov, iii/ oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nestekucuje pri zahriatí, a iv/ oddelia sa skutočne asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií.
Pri takomto výhodnom spôsobe sa takto oddelené kolónie nechávajú rásť v normálnom produkčnom prostredí a potom sa uskutoční oddelenie kmeňov, ktoré sú schopné zvýšenej produkcie endotoxínu delta.
Pri stupni /i/ uvedeného postupu, môže byť mutagénom akýkoľvek vhodný chemický mutagén, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidín alebo etylmetánsulfonát, alebo sa materský kmeň môže spracovať elektromagnetickým žiarením, ako sú γ-lúče, rôntgenové lúče alebo ako je ultrafialové žiarenie.
V stupni /ii/ môže byť vhodným prostredím modifikované živné sporulačné prostredie obsahujúce fosfát /prostredie NSMP/, ktoré opísal Johnson a kol. v publikácii „Spores VI“, vyd. P. Gerhard a kol., str. 248 až 254, 1975.
V stupni /iv/ opísaného spôsobu môže byť vhodným prostredím prostredie NSMP doplnené chloridom horečnatým a Gelritom, Kalco.
Iným spôsobom získania vysoko produktívnych variantov alebo mutantov podľa vynálezu môže byť rast materského kmeňa v kvapalnom prostredí a selekcia spontánnych mutantov alebo variantov po rozprestretí kultivačnej pôdy na agarovom prostredí, vhodné na selekciu asporogénnych a/alebo oligosporogénnych mutantov.
Môžu sa použiť tiež iné spôsoby oddelenia vysoko produktívnych variantov alebo mutantov podľa vynálezu, ako je použitie hmoty týchto mutantov priamo odstredením alebo inými spôsobmi oddeľovania hmoty.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Izoluje sa mutant mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis s viac než dvojnásobnou produkciou endotoxínu delta. Fázovou kontrastnou mikroskopiou, riadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskopiou tohto mutantu bolo zistené, že vysoká produktivita tohto mutantu je podmienená zmenami riadenia produkcie delta endotoxínu so zreteľom na sporuláciu, vedúcimi k produkcii kryštálov bielkoviny, ktorá je až päťkrát vyššia než v prípade kryštálov produkovaných súčasnými kmeňmi mikroorganizmu Bacillus thuringiensis aktívnymi proti chrobákom. Úzky vzťah medzi vytváraním kryštálu a sporuláciou sa zdá byť odstránený a mutant produkuje vysoké množstvo endotoxínu delta pred sporuláciou.
Produkcia vysokovýťažkového mutantu
Spóry mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň DSM 5526 sa ožiari lúčmi γ v dávke 7 kGy. Ožiarené spóry sa potom rozprestrú na NSMP agarové doštičky (modifikované živné prostredie sporulačné obsahujúce fosfát, opísané Johnsonom a kol, v publikácii „Spores VI“, vyd. P. Gerhardt a kol., str. 248 až 254, 1975). Prostredie vhodné na selekciu asporogénnych a/alebo oligosporogénnych mutantov.
NSMP-agarové doštičky sa inkubujú pri teplote 30 °C počas dvoch až troch dní. Odoberú sa priesvitné kolónie a prenesú sa na NSMP gelritové doštičky (NSMP prostredie, doplnené chloridom horečnatým - 0,57 g/1 a Gelritom, Kelco - 20 g/1).
NSMP gelritové doštičky sa inkubujú počas jednej hodiny pri teplote 90 °C a potom počas jedného až dvoch dni
SK 281286 Β6 pri teplote 30 °C.
Mutanty, ktoré na NSMP gelritových doštičkách dobre narastú, sa oddelia. Týmto spôsobom sa oddelia všetky asporogénne mutanty, pretože po tepelnom spracovaní nerastú.
Oddelené mutanty sa nechajú rásť v trepačkách obsahujúcich obchodné prostredie. Množstvo produkovaného endotoxínu delta sa stanoví imunologickými spôsobmi, ako bude ďalej opísané.
Selektujú sa iba mutanty produkujúce výrazne vyššie množstvo delta endotoxínu než materský kmeň.
Morfológia selektovaných mutantov na pevnom prostredí a v kvapalnom prostredí sa študuje fázovou kontrastnou mikroskopiou /zväčší 2 500/ a riadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskopiou. Sčíta sa počet spór a kryštálov a stanoví sa veľkosť bielkovinových kryštálov.
Vedľa získaných mutantov sa selektuje mutant /DSM 5480/ pre vynikajúcu schopnosť produkovať endotoxín delta.
Množstvo endotoxínu delta, produkovaného mutantom DSM 5480, sa porovnáva s množstvom produkovaným DSM 2803, pôvodným izolátom z mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň DSM 5526, používaným na produkciu prostriedku NOVODOR, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeň NB178, izolovaný zo Sandozovho Bacillus thuringiensis tenebrionis produktu TRIDENT z roku 1989, kmeň NN 198, izolovaný zo Sandozovho B.thuringiensis subs. tenebrionis produktu TRIDENT z 1990, „Bacillus thuringiensis subsp. san diego“ kmeň NRRL-B-15939 a kmeň NB 197, izolovaný zMycogénovho B. thuringiensis subs. san diego produktu M-ONE z 1990. Ako je uvedené v tabuľke I v príklade 2, zlepšený mutant podľa vynálezu produkuje 2 až 3,5-krát viac endotoxínu delta než súčasne dostupné kmene mikroorganizmu Bacillus thuringiensis účinné proti chrobákom.
Príklad 2
Porovnáva sa výťažok endotoxínu delta mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis, mutant DSM 5480 a výťažky endotoxínu delta mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis kmeňmi DSM 2803 /pôvodný izolát z mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis/', DSM 5526 /produkčný kmeň spoločnosti Novo-Nordisk/ a NB 178 a NB 198 /produkčné kmene spoločnosti Sandoz/ a Bacillus thuringiensis subsp. san diego, kmeň NRRL-B 15939 a NB 197 /produkčné kmene spoločnosti Mycogen/ v obchodnom prostredí. Každý z kmeňov sa necháva rásť počas 17 hodín pri teplote 30 °C na sklonených agaroch nasledujúceho zloženia vyjadreného ako gramy na liter destilovanej vody:
Pepton, Difco 5g
Hovädzí extrakt, Difco3 g
Agar, Difco 20g
Hodnota pH7,0
Potom sa prenesie 5 ml suspenzie buniek z každého kmeňa do 100 ml produkčného prostredia v Erlenmayerovej banke s priehradkovým dnom s obsahom 500 ml. Produkčné prostredie pozostáva z nasledujúcich zložiek v uvedenom množstve vyjadrenom ako počet gramov na liter vodovodnej vody:
sójová múčka50 g hydrolyzovaný škrob40 g dihydrogenfosforečnan draselný 1,77 g monohydrogenfosforečnan draselný 4,53 g hodnota pH7,0
Naočkované banky sa inkubujú pri teplote 30 °C za trepania (250/min.). Po 96 hodinách inkubácie sa kultivačná pôda skúša na obsah endotoxínu delta imunologickými spôsobmi.
Stanoví sa množstvo produkovaného endotoxínu delta jednotlivými kmeňmi stúpajúcou imunoelektroforézou („rocket immuno electrophoresis“ RIE) a fotometrickou imunozložkou /PIA/ s použitím protilátok proti čisteným bielkovinovým kryštálom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Odváži sa 400 mg každej kultivačnej pôdy. Pridá sa 7 ml trojsodného fosforečnanového pufra /0,125 M, hodnota pH 12/ do každej vzorky. Suspenzia sa potom pretrepáva počas jednej hodiny na rozpustenie delta endotoxínových bielkovín.
Vzorky sa potom odstredia pri počte otáčok 3 500/min v priebehu 15 minút a skúša sa supematant na obsah endotoxínu RIE elektroforézou proti antiséru stúpajúcemu proti čisteným bielkovinovým kryštálom mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis. Stanoví sa množstvo endotoxínu delta so zreteľom na štandard so známym obsahom kryštalickej bielkoviny.
Koncentrácia kryštalickej bielkoviny sa tiež stanoví fotometrickou imunoskúškou. Kryštalické bielkoviny sa rozpustia v alkalickom roztoku. Rozpúšťané bielkoviny sa vyzrážajú svojimi protilátkami. Miera tejto reakcie sa stanoví turbidimetricky. Množstvo endotoxínu delta sa stanoví so zreteľom na štandard so známym obsahom kryštalickej bielkoviny.
Kryštalické antigény na produkciu protilátok, používaných pri skúškach, sa získajú z kryštálov izolovaných z mikroorganizmu B. thuringiensis subsp. tenebrionis.
Polyklonálne protilátky sa zvyšujú vstrekovaním králikom subkutánne každých 14 dní s 0,25 mg kryštalického antigénu.
Získané výsledky sú uvedené v nasledujúcich tabuľkách la a lb. Výťažky endotoxínu delta sú vyjadrené ako BTTU/g (jednotky na g kultivačnej pôdy, stanovené elektroforézou RIE alebo fotometrickou imonoskúškou PIA). Použitá hodnota na čistú kryštalickú bielkovinu mikroorganizmu 5. thuringiensis subsp. tenebrionis je 500 000 BTTU/g. Táto hodnota znamená v tabuľke la strednú hodnotu šiestich až siedmich nezávislých fermentácii a v tabuľke lb strednú hodnotu troch nezávislých fermentácii.
Tabuľka la
Produkcia endotoxínu delta kmeňmi Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis v trepačke
Výťažok endotoxínu delta stanovený spôsobom
RIE PIA
Kmeň BTTU/g BTTU/g
DSM 2803 676 1293
NRRL-B 15939 747 1126
NB 178 986 1728
DSM 5526 1097 1860
DSM 5480 2382 4169
Tabuľka lb
Produkcia endotoxínu delta kmeňmi Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis v trepačke
Výťažok endotoxínu delta stanovený spôsobom
RIE
Kmeň BTTU/g
NB 197 1103
NB 198 1237
DSM 5480 2867
SK 281286 Β6
Z tabuľky la a lb je zrejmé, že DSM 5480 produkuje viac než trojnásobok endotoxínu delta v porovnaní s pôvodným kmeňom mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 2803 a „Bacillus thuringiensis subsp. san diego“, kmeň NRRL-B 15939 a viac než dvojnásobné množstvo endotoxínu delta v porovnaní s kmeňmi doteraz používanými na výrobu obchodných produktov Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Fázovou kontrastnou mikroskopiou, riadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskopiou organizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, mutant DSM 5480 sa zistilo, že bielkovinové kryštály, produkované týmto mutantom, sú omnoho väčšie než zodpovedajúce bielkovinové kryštály, produkované mikroorganizmom Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeňmi DSM 2803, DSM 5526, NB 178 a NB 198 a „Bacillus thuringiensis subsp. san diego“, kmeňmi NRRL-B 15939 a NB 197.
Kultivačné prostredie mikroorganizmu Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, mutant DSM 5480 sa skúšalo na účinnosť proti larvám pásavky zemiakovej. Stanovilo sa zvýšené množstvo endotoxínu delta produkovaného mutantom DSM 5480; stanovenie sa uskutočnilo imunologickými spôsobmi. Toto zvýšené produkované množstvo sa prejavuje v biologickej účinnosti proti larvám pásavky zemiakovej.
Príklad 3
Na pevnom a kvapalnom prostredí sa porovnáva sporulácia a parasporálne vytváranie kryštálu v mikroorganizmoch Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, kmeňmi DSM 2803, DSM 5526, NS 179, NB 198 a mutant DSM 5480 a „5. thuringiensis subsp. san diego“, kmeňmi NRRL-B 15939 a NB 197.
Každý z týchto kmeňov sa necháva rásť počas dvoch dní pri teplote 30 °C na agarových doštičkách pri nasledujúcom zložení vyjadrenom ako gramy na litre destilovanej vody:
Pepton, Difco 5g
Hovädzí extrakt, Difco3 g
Agar, Difco 20g
Hodnota pH7,0
Každý kmeň sa necháva rásť v kvapalnom prostredí. Všetky kmene sa nechávajú rásť počas 17 hodín pri teplote 30 °C na agarových sklonených doštičkách. Potom sa prenesie 5 ml suspenzie buniek z každého kmeňa do Erlenmayerovej banky s dnom s priehradkou s obsahom 500 ml, pričom každá banka obsahuje 100 ml prostredí.
Prostredie pozostáva z nasledujúcich zložiek v množstve uvádzanom ako gramy na liter vodovodnej vody: kvapalné prostredie:
kvasnicový extrakt 5,0 g
trypton 5,0 g
glukóza 1,0 g
dihydrogenfosforečnan draselný 0,8 g
hodnota pH 7,0
Naočkované banky sa inkubujú pri teplote 30 °C za tre-
pania /250/min./ počas 96 hodín.
Denne sa študuje morfológia kmeňov na pevnom prostredí a v kvapalnom prostredí fázovou kontrastnou mikroskopiou /pri zväčšení 2500-násobnom/. Počíta sa množstvo spór a kryštálov a stanovuje sa rozmer parasporálnych kryštálov. Študuje sa tiež niekoľko vybraných vzoriek riadkovacou elektrónovou mikroskopiou a transmisnou elektrónovou mikroskopiou.
Mikroorganizmy B. thuringiensis subsp. tenebrionis, kmene DSM 2803, DSM 5526, NB 178 a NB 198 a ,fl.
thuringiensis subsp. san diego“, kmene NRRL-B 15939 a NB 197 veľmi sporulujú v oboch prostriedkoch. Pred lýzou bunky obsahuje každá bunka spóru a parasporálny kryštál. Veľkosť kryštálu je 0,4 až 0,9 až 1,1 mikrometra dĺžky vo chvíli lýzy bunky. Stredná dĺžka bielkovinových kryštálov je 0,6 až 0,7 mikrometrov.
Mutant DSM 5480 produkuje iba málo spór (menej než 106 spór/ml) na pevnom prostredí a v definovanom kvapalnom prostredí. Pred lýzou bunky obsahuje väčšina buniek veľký bielkovinový kryštál, ale žiadnu spóru. Dĺžkový rozmer bielkovinových kryštálov je 0,4 až 0,7 pm až 5,0 pm pričom stredný dĺžkový rozmer bielkovinového kryštálu je 2,2 až 2.3 pm.
Ultraštrukturálna analýza buniek z tohto prostredia transmisnou elektrónovou mikroskopiou ukazuje, že sporulačný proces v mutante sa naštartuje, neukončí sa však v čase bunkovej lýzy. Sporulačný proces dosahuje rôzne stupne v rôznych bunkách. V bunkách, v ktorých sporulácia dosiahla iba stupeň II (vytváranie predspórového septa), vypĺňajú bielkovinové kryštály celé bunky.
V produkčnom prostredí (príklad 2) mutant produkuje väčší počet spór (107 až 108 spór/ml). V tomto prostredí je sporulačná frekvencia mutantu 10- až 100-krát nižšia než v prípade materského kmeňa.
Tak si mutant ponecháva svoje schopnosti produkovať normálne spóry. Ale sporulačné frekvencie mutantu sa zdajú byť silne závislé od prostredia. Dĺžkový rozmer bielkovinových kryštálov, produkovaných jednotlivými kmeňmi, je uvedený v tabuľke Ila a libTabuľka Ila
Rozmer bielkovinových kryštálov produkovaných súčasne dostupnými kmeňmi mikroorganizmom B. thuringiensis účinnými proti chrobákom
Dĺžka bielkovinových kryštálov v gm
kmeň minimálna hodnota maximálna hodnota stredná hodnota
DSM 2803 0,4 0,9 0,7
NRRL-B 15939 0,4 0,9 0,7
NB 178 0,5 0,9 0,7
DSM 5526 0,4 0,9 0,7
DSM 5480 0,7 5,0 2,3
Tabuľka lib
Rozmer bielkovinových kryštálov produkovaných súčasne dostupnými kmeňmi mikroorganizmu B. thuringiensis účinnými proti chrobákom
Dĺžka bielkovinových kryštálov v mikrometroch
kmeň minimálna hodnota maximálna hodnota stredná hodnota
NB 197 0,4 0,7 0,6
NB 198 0,4 1,1 0,7
DSM 5480 0,5 4,2 2,0
Z tabuľky Ila a lib je zrejmé, že mutant DSM 5480 produkuje omnoho väčšie bielkovinové kryštály než akýkoľvek dosiaľ známy kmeň B. thuringiensis účinný proti chrobákom.
Na základe získaných hodnôt sa zdá, že riadenie produkcie endotoxínu delta so zreteľom na sporuláciu sa v mutante zmenilo.
Zdá sa, že mutant produkuje bielkovinové kryštály pred vývojom spór, čim poskytuje bunkám dlhší čas na produkciu endotoxínu delta a to vedie k produkcii omnoho väčších bielkovinových kryštálov v čase lýzy buniek v porovnaní s materským kmeňom.
V závislosti od dostupných živín a veľkosti bielkovinových kryštálov vo chvíli sporulácie sa vyvinie normálna spóra pred časom lýzy.
Príklad 4
Podľa tohto príkladu sa používa vysokovýťažkový Btt mutant DSM 5480 na produkciu vysoko účinných produktov na boj proti larvám pásavky zemiakovej.
Na produkčnom fermentačnom prostredí, opísanom v príklade 2, sa fermentuje DSM 5480 v prevzdušňovanej, miešanej, produkčnej, fermentačnej nádobe. Po 96 hodinách sa získa živné prostredie kontinuálnym odstreďovaním.
Koncentrovaný krém, ktorý obsahuje aktívne bielkovinové kryštály, sa stabilizuje pridaním mikrobiálnych konzervačných prostriedkov a nastavením hodnoty pH na 5,0.
Jeden diel koncentrovaného krému sa suší rozprašovaním a druhý sa používa na výrobu zmáčateľného prášku. Zvyšok koncentrovaného krému sa používa priamo na formuláciu vodných, rozplývavých koncentrátov /FC/.
Zmáčateľný prášok sa formuluje ako je charakterizované v tabuľke III. Formulácia vodných rozplývavých koncentrátov je opísaná v tabuľke IV.
Tabuľka III
Formulácia zmáčateľného prášku NOVODOR® (% hmotn.)
Zložka percentá
koncentrovaný krém Btt sušený rozprašovaním 40
detergenty 9
prostriedok proti vytváraniu koláča 1
inertné plnidlo 50
Tabuľka IV
Formulácia rozplývaného vodného koncentrátu NOVODOR* FC
Zložka NOVODOR® FC 1 % hmotn. NOVODOR* FC 2 % hmotn.
koncentrovaný krém Btt 80,00 55,00
konzervačné prísady 4,00 4,00
činidlo proti zamŕzaniu 9,10 19,00
detergenty 2,50 2,50
regulátory hodnoty pH 2,85 2,85
voda 1,55 16,65
100,00 100,00
Ak sa použije hodnota 500 000 BTTU/g čistej kryštalickej bielkoviny, je obsah aktívnej kryštalickej bielkoviny v prípravkoch nasledujúci:
% Btt kryštalickej bielkoviny
NOVODOR® WP 70,8 KBTTU/g 14,16
NOVODOR® FC1 24,7 KBTTU/g 4,94
NOVODOR® FC2 14,2 KBTTU/g 2,84
Detergenty sa volia zo širokého súboru pomocných prísad na suspendovanie a zmáčadiel normálne používaných v poľnohospodárskych pesticidnych prostriedkoch. Ako činidlo proti vytváraniu koláča sa požíva hydrofilný oxid kremičitý a ako inertné plnidlo sa používajú bežné inertné plnidlá, ako sú bentonity, anorganické soli alebo hlinky. Ako konzervačné prísady do rozplývaných vodných koncentrátov sa používajú konzervačné prísady do potravinárskych a kozmetických výrobkov. Prostriedkom na úpravu hodnoty pH je anorganická kyselina.
Príklad 5
Uskutočňujú sa poľné skúšky na potvrdenie biologickej účinnosti vysokovýťažkového Btt mutantu DSM 5480 na samčích larvách pásavky zemiakovej. Porovnanie sa uskutočňuje s dvoma obchodnými produktmi Trident® a M-one®; kultúrnou rastlinou sú zemiaky.
Kultúrna rastlina sa postrieka trikrát: 20. júna, 27. júla a
3. augusta (2. generačná larva). Používané produkty a ich dávkovanie je uvedené v nasledujúcej tabuľke:
Objem produktu na 0,4 ha pôdy Účinnosť Množstvo Btt bielkovinového kryštálu v prostriedku
liter/0,4 ha KBTTU/g %
Novador*”*·'2 1,134 14,2 2,84
1,701 14,2 2,84
2,835 14,2 2,84
3,402 14,2 2,84
Trident* 4,536 5,5 1,10
M-one* 2,268 8,9 1,78
Stredná hodnota obmedzenia lariev pásavky zemiakovej v porovnaní s neošetrenými kontrolnými rastlinami je uvedená v tabuľke V. Napadnutie pásavkou zemiakovou bolo značne silné v prípade neošetrených rastlín: 370 lariev na 20 rastlín 1. augusta a 904 lariev na 20 rastlín 8. augusta.
Tabuľka V
Ošetrenie Objem produktu na aker pôdy Percentuálne obmedzenie
NOVODOR® FC 2 liter/0,4 ha 1. augusta 8. augusta
NOVODOR* FC 2 1,134 99 99
NOVODOR® FC 2 1,701 95 100
NOVODOR*FC2 2,835 98 99
NOVODOR* FC 2 3,402 100 100
TRIDENT® 4,536 94 98
M-one* 2,268 98 98
Výsledky jasne dokazujú, že produkty s vysokovýťažkovým mutantom DSM 5480 sú účinné na ničenie lariev pásavky zemiakovej na poliach. Kryštalická bielkovina produkovaná vysokovýťažkovým kmeňom je plne účinná, ako 1,701 litrov na 0,4 ha NOVODORU® FC poskytuje rovnako dobré výsledky ako 4,536 litrov na 0,4 ha Tridentu a rovnako dobré ako 2,268 litrov na 0,4 ha M-onu.

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis DSM 5480, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticidnych delta endotoxínov ako materský kmeň.
  2. 2. Pesticídny prostriedok na boj so škodlivým hmyzom, najmä zo súboru zahrnujúceho motýle, dvojkrídly hmyz a chrobáky a predovšetkým na boj s pásavkou zemiakovou, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje mutant mikroorganizmu Bacillus thurigiensis subsp. tenebrionis DSM 5480, podľa nároku 1, produkujúci aspoň dvakrát viac insekticidnych delta endotoxínov ako materský kmeň.
  3. 3. Pesticídny prostriedok podľa nároku 2, v y z ň a čujúci sa tým, že obsahuje prídavné poľnohospodársky vhodné rozpúšťadlá a/alebo nosiče.
  4. 4. Pesticídny prostriedok podľa nároku 2 a 3, vyznačujúci sa tým, že obsahuje prídavné povrchovo aktívnu látku.
  5. 5. Spôsob prípravy mutantov kmeňov mikroorganizmu Bacillus thurigiensis podľa nároku 1 a jeho selekcie, vyznačujúci sa tým, že sa materský kmeň
    i) spracováva akýmkoľvek vhodným chemickým mutagénom, ako napríklad N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidinom, alebo etylmetánsulfonátom, za pôsobenia elektromagnetického žiarenia, ako sú lúče γ, rôntgenové lúče alebo ultrafialové žiarenie, ii) takto spracované mutanty sa nechávajú rásť v živnom sporulačnom prostredí obsahujúcom fosfát a prípadne ako doplnky 0,57 g/1 chloridu horečnatého a 20 g/1 gelritu, iii) oddelia sa priesvitné kolónie a nechávajú sa rásť v prostredí, ktoré nestekucuje pri zahrievaní, a iv) vyselektujú sa pravé asporogénne kmene tepelným spracovaním kolónií v modifikovanom živnom sporulačnom prostredí obsahujúcom fosfát, doplnenom chloridom horečnatým a doplnkami modifikovaného živného sporulačného prostredia.
  6. 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že sa takto oddelené kolónie nechávajú rásť na normálnom produkčnom prostredí a potom sa ďalej vykonáva konečné oddelenie kmeňov schopných zvýšenej produkcie delta endotoxínov.
SK5629-90A 1989-11-17 1990-11-14 Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje SK281286B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK580589A DK580589D0 (da) 1989-11-17 1989-11-17 Mutant
DK627489A DK627489D0 (da) 1989-12-12 1989-12-12 Mutant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK562990A3 SK562990A3 (en) 2001-02-12
SK281286B6 true SK281286B6 (sk) 2001-02-12

Family

ID=26067985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK5629-90A SK281286B6 (sk) 1989-11-17 1990-11-14 Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0585215B1 (sk)
JP (1) JP2950614B2 (sk)
KR (1) KR0157065B1 (sk)
AT (1) ATE184645T1 (sk)
AU (1) AU647056B2 (sk)
BG (1) BG61699B1 (sk)
CA (1) CA2068734C (sk)
DE (2) DE585215T1 (sk)
DK (1) DK0585215T3 (sk)
ES (1) ES2060568T3 (sk)
FI (1) FI103130B1 (sk)
GR (2) GR940300021T1 (sk)
HU (1) HU214685B (sk)
NO (1) NO305131B1 (sk)
RO (1) RO109862B1 (sk)
RU (1) RU2138950C1 (sk)
SK (1) SK281286B6 (sk)
TR (1) TR28902A (sk)
WO (1) WO1991007481A1 (sk)
YU (1) YU48440B (sk)

Families Citing this family (137)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6270760B1 (en) * 1989-12-18 2001-08-07 Valent Biosciences, Inc. Production of Bacillus thuringiensis integrants
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
IL99928A0 (en) * 1990-11-08 1992-08-18 Agricultural Genetics Co Biological control of pests
US5264364A (en) * 1991-01-31 1993-11-23 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects
ZA932792B (en) * 1992-05-12 1993-11-16 Aeci Ltd Insecticide composition
WO1994028724A1 (en) * 1993-06-10 1994-12-22 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins
IL110299A0 (en) * 1993-07-15 1994-10-21 Novo Nordisk Entotech Inc Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity
KR19990082013A (ko) * 1996-01-26 1999-11-15 스티븐 에프. 웨인스톡 바실러스 투린지엔시스 인테그란트의 제조
US5804180A (en) * 1996-07-17 1998-09-08 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US5965428A (en) * 1996-10-08 1999-10-12 Ecogen, Inc. Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins
KR100458765B1 (ko) * 2001-12-24 2004-12-03 학교법인 동아대학교 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법
WO2014056780A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Basf Se A method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material
WO2014082881A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
US20150307459A1 (en) 2012-11-27 2015-10-29 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol Compounds and Their Use as Fungicides
EP2925732A1 (en) 2012-11-27 2015-10-07 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
WO2014082879A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
WO2014086856A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide
WO2014086850A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii
WO2014086854A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator
CN106632107A (zh) 2012-12-19 2017-05-10 巴斯夫欧洲公司 取代[1,2,4]三唑及其作为杀真菌剂的用途
EP2746263A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Alpha-substituted triazoles and imidazoles
EP2746278A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746256A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746277A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746266A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
WO2014095555A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746255A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746262A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi
US20150329501A1 (en) 2012-12-19 2015-11-19 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
EP2746279A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
WO2014095547A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
WO2014095534A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
WO2014095381A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746257A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746258A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746259A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746260A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014124850A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
BR112015018853B1 (pt) 2013-03-20 2021-07-13 Basf Corporation Mistura, composição agroquímica, método para controlar fungos fitopatogênicos, método para proteção do material de propagação dos vegetais e semente revestida
WO2015011615A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 Basf Corporation Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide
WO2015036059A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
WO2015036058A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
EP3456201B1 (en) 2013-10-18 2023-08-30 BASF Agrochemical Products B.V. Use of pesticidal active carboxamide derivative in soil and seed application and treatment methods
EP3080092B1 (en) 2013-12-12 2019-02-06 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2015091645A1 (en) 2013-12-18 2015-06-25 Basf Se Azole compounds carrying an imine-derived substituent
WO2015104422A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Basf Se Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests
EP2924027A1 (en) 2014-03-28 2015-09-30 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds
CN106470962A (zh) 2014-04-17 2017-03-01 巴斯夫欧洲公司 新型硝化抑制剂和生物农药的组合以及(硫代)磷酸三酰胺和生物农药的组合
EP2962568A1 (en) 2014-07-01 2016-01-06 Basf Se Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide
EP2949216A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2949649A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952506A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952512A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
EP2952507A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
RU2707051C2 (ru) 2014-10-24 2019-11-21 Басф Се Неамфолитные, кватернизируемые и водорастворимые полимеры для модифицирования поверхностного заряда твердых частиц
WO2016115476A1 (en) * 2015-01-16 2016-07-21 Valent Biosciences Corporation Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki and bacillus thuringiensis subsp. aizawai combination formulations
WO2016128239A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Basf Se Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide
US11219211B2 (en) 2015-03-11 2022-01-11 Basf Agrochemical Products B.V. Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide
MX2017011682A (es) 2015-03-11 2018-02-09 Basf Agrochemical Products Bv Mezcla plaguicida que comprende un compuesto de carboxamida y un bioplaguicida.
EP3111763A1 (en) 2015-07-02 2017-01-04 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions comprising a triazole compound
US11076600B2 (en) 2015-11-30 2021-08-03 Basf Se Mixtures of cis-jasmone and bacillus amyloliquefaciens
EP3205209A1 (en) 2016-02-09 2017-08-16 Basf Se Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides
EP3512337A1 (en) 2016-09-13 2019-07-24 Basf Se Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides
WO2018149754A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Basf Se Pyridine compounds
AU2018241406B2 (en) 2017-03-28 2021-11-11 Basf Se Pesticidal compounds
CN110475772A (zh) 2017-04-06 2019-11-19 巴斯夫欧洲公司 吡啶化合物
WO2018229202A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
BR112019025191B1 (pt) 2017-06-19 2023-11-28 Basf Se Compostos de pirimidínio substituídos, composição, método para proteger culturas, semente revestida, uso dos compostos e uso de um composto
WO2018234488A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES
EP3453706A1 (en) 2017-09-08 2019-03-13 Basf Se Pesticidal imidazole compounds
WO2019057660A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Basf Se INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES
CN111201227B (zh) 2017-10-13 2024-03-15 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的咪唑烷嘧啶鎓化合物
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
EP3728199A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Basf Se Pesticidal compounds
EP3737235A1 (en) 2018-01-09 2020-11-18 Basf Se Silylethynyl hetaryl compounds as nitrification inhibitors
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
EP3758492A1 (en) 2018-02-28 2021-01-06 Basf Se Use of alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors
EP3758491A1 (en) 2018-02-28 2021-01-06 Basf Se Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors
IL276745B2 (en) 2018-02-28 2023-10-01 Basf Se Use of N-functional alkoxy pyrazole compounds as nitrification inhibitors
WO2019175713A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways
WO2019175712A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
WO2020002472A1 (en) 2018-06-28 2020-01-02 Basf Se Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors
EP3826983B1 (en) 2018-07-23 2024-05-15 Basf Se Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors
PL3826982T3 (pl) 2018-07-23 2024-04-02 Basf Se Zastosowanie podstawionych związków tiazolidynowych jako inhibitora nitryfikacji
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
BR112021008491A2 (pt) 2018-11-28 2021-08-03 Basf Se composto da fórmula i, composição, método de combate ou controle de pragas invertebradas, método de proteção de plantas em crescimento, semente, uso de composto da fórmula i e método de tratamento ou proteção de animais
CN113195491A (zh) 2018-12-18 2021-07-30 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的取代嘧啶鎓化合物
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3730489A1 (en) 2019-04-25 2020-10-28 Basf Se Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides
CN113923987A (zh) 2019-05-29 2022-01-11 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
WO2021170463A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 BASF Agro B.V. Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf
BR112022021631A2 (pt) 2020-04-28 2022-12-06 Basf Se Compostos, composição, métodos para combater ou controlar pragas invertebradas, para proteger plantas em crescimento e para tratar ou proteger um animal, semente e uso de um composto
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
EP4236691A1 (en) 2020-10-27 2023-09-06 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
EP4011208A1 (en) 2020-12-08 2022-06-15 BASF Corporation Microparticle compositions comprising fluopyram
WO2022167488A1 (en) 2021-02-02 2022-08-11 Basf Se Synergistic action of dcd and alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
KR20240008856A (ko) 2021-05-18 2024-01-19 바스프 에스이 살진균제로서의 신규한 치환된 피리딘
BR112023023989A2 (pt) 2021-05-18 2024-01-30 Basf Se Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente
IL308534A (en) 2021-05-18 2024-01-01 Basf Se New converted pyridines as fungicides
WO2022243523A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Basf Se Use of an n-functionalized alkoxy pyrazole compound as nitrification inhibitor
CN117355504A (zh) 2021-05-21 2024-01-05 巴斯夫欧洲公司 乙炔基吡啶化合物作为硝化抑制剂的用途
CN117500377A (zh) 2021-06-21 2024-02-02 巴斯夫欧洲公司 具有基于吡唑的构建单元的金属有机框架
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
JP2024528144A (ja) 2021-08-02 2024-07-26 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア （３－ピリジル）－キナゾリン
WO2023011957A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Basf Se (3-quinolyl)-quinazoline
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023203066A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Basf Se Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
WO2024104818A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104822A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides
WO2024104823A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4277564A (en) * 1980-01-09 1981-07-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis
CA1193564A (en) * 1982-07-09 1985-09-17 University Of Western Ontario Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control
DE3346138A1 (de) 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
US4764372A (en) * 1985-03-22 1988-08-16 Mycogen Corporation Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof
DE3541893A1 (de) * 1985-11-27 1987-06-11 Basf Ag Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus
JPS62146593A (ja) * 1985-12-16 1987-06-30 マイコゲン　コ−ポレ−シヨン バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法
JP2775150B2 (ja) * 1987-03-04 1998-07-16 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル．イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法
ES2063051T3 (es) * 1987-12-24 1995-01-01 Zeneca Ltd Cepas bacterianas.
US4999192A (en) * 1988-02-12 1991-03-12 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
US4966765A (en) * 1988-02-23 1990-10-30 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate
US4996155A (en) * 1988-03-04 1991-02-26 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin
US4990332A (en) * 1988-10-25 1991-02-05 Mycogen Corporation Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate

Also Published As

Publication number Publication date
FI922205A (fi) 1992-05-14
TR28902A (tr) 1997-08-04
SK562990A3 (en) 2001-02-12
FI103130B (fi) 1999-04-30
FI103130B1 (fi) 1999-04-30
KR0157065B1 (ko) 1998-10-15
GR940300021T1 (en) 1994-04-29
DK0585215T3 (da) 2000-03-27
YU48440B (sh) 1998-07-10
CA2068734C (en) 1999-12-28
KR927003790A (ko) 1992-12-18
BG96488A (bg) 1993-12-24
DE585215T1 (de) 1994-07-28
RO109862B1 (ro) 1995-06-30
WO1991007481A1 (en) 1991-05-30
ATE184645T1 (de) 1999-10-15
NO305131B1 (no) 1999-04-06
BG61699B1 (bg) 1998-03-31
YU218590A (sh) 1993-05-28
GR3031815T3 (en) 2000-02-29
ES2060568T1 (es) 1994-12-01
AU6736490A (en) 1991-06-13
AU647056B2 (en) 1994-03-17
HU9201628D0 (en) 1992-08-28
DE69033291D1 (de) 1999-10-21
ES2060568T3 (es) 2000-01-01
FI922205A0 (fi) 1992-05-14
HUT64581A (en) 1994-01-28
HU214685B (hu) 1998-04-28
NO921950D0 (no) 1992-05-15
JP2950614B2 (ja) 1999-09-20
JPH05501955A (ja) 1993-04-15
DE69033291T2 (de) 2000-05-11
EP0585215B1 (en) 1999-09-15
CA2068734A1 (en) 1991-05-18
NO921950L (no) 1992-07-13
EP0585215A1 (en) 1994-03-09
RU2138950C1 (ru) 1999-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK281286B6 (sk) Mutant mikroorganizmu bacillus thuringiensis deponovaný ako subsp. tenebrionis dsm 5480, spôsob jeho prípravy a pesticídny prostriedok, ktorý ho obsahuje
US5006336A (en) Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
JP2571842B2 (ja) 新規なバチルス・スリンギエンシス菌株、それらの分離方法および関連する組成物
EP0178151A2 (en) Preparation of strains of bacillus thuringiensis having an improved activity against certain lepidopterous pests and novel strain produced thereby
EP0202739A1 (en) Novel micro-organism and its use for controlling pests
JPH10504451A (ja) 新規の双翅類活性化合物及びバチルス チューリングエンシス株
US5279962A (en) Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin
AU639896B2 (en) Novel bacillus thuringiensis strains
EP0570089A1 (en) Novel toxin producing fungal pathogen and uses
JPH0515364A (ja) 新規なバシラス菌株及び害虫防除剤
EP0409438A1 (en) Novel Bacillus thuringiensis isolates
EP0556238B1 (en) Biological control of pests
EP0309145A1 (en) Bacteriophage-resistant strain of Bacillus Thuringiensis Var. San Diego
CZ562990A3 (cs) Mutant mikroorganismu Bacillus thuringiensis deponovaný jako subsp. tenebrionis DSM 5480, způsob jeho přípravy a pesticidní prostředek, který ho obsahuje
PL166433B1 (pl) Sposób wytwarzania owadobójczego produktu wytwarzanego przez B. thuringlensis PL PL PL PL PL PL
HRP920198A2 (en) Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin
Jayaraman et al. Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies
IL86242A (en) Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use