RO109862B1 - Mutanta sau varianta de bacillus thuringiensis, procedeu de obtinere, procedeu de obtinere a delta-endotoxinei cu ajutorul ei, produs insecticid pe baza de delta-endotoxina si metoda de combatere a daunatorilor cu acest produs - Google Patents

Mutanta sau varianta de bacillus thuringiensis, procedeu de obtinere, procedeu de obtinere a delta-endotoxinei cu ajutorul ei, produs insecticid pe baza de delta-endotoxina si metoda de combatere a daunatorilor cu acest produs Download PDF

Info

Publication number
RO109862B1
RO109862B1 RO92-200690A RO92200690A RO109862B1 RO 109862 B1 RO109862 B1 RO 109862B1 RO 92200690 A RO92200690 A RO 92200690A RO 109862 B1 RO109862 B1 RO 109862B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
delta
mutant
bacillus thuringiensis
endotoxin
product
Prior art date
Application number
RO92-200690A
Other languages
English (en)
Inventor
Hanne Gurtler
Anette Schousboe Petersen
Original Assignee
Novo Nordisk As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK580589A external-priority patent/DK580589D0/da
Priority claimed from DK627489A external-priority patent/DK627489D0/da
Application filed by Novo Nordisk As filed Critical Novo Nordisk As
Publication of RO109862B1 publication Critical patent/RO109862B1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Invenția se referă la o metodă sau variantă de Bacillus thuringiensis, procedeu de obținere a delta-endotoxinei cu ajutorul acesteia, produs insecticid pe bază de deltaendotoxină și metodă de combatere a dăună- 5 torilor cu acest produs.
Preparatele comerciale de Bacillus thuringiensis sunt utilizate în întreaga lume pentru combaterea biologică a insectelor dăunătoare. Avantajele acestor insecticide bac- 10 teriene constau în faptul că ele sunt foate selective pentru o gamă foarte limitată de insecte de combătut și sunt biodegradabile.
Preparatele comerciale de Bacillus thuringiensis pot fi aplicare corect până în 15 momentul recoltării fără a produce efecte negative.
Bacillus thuringiensis este o bacterie în formă de baghetă, aerobă, care formează spori caracterizată unic de producerea în timpul 20 procesului de sporulare a una sau mai multe incluziuni, denumite cristale parasporale. Aceste cristale sunt compuse din proteine cu greutate moleculară, care sunt denumite deltaendotoxime. Delta-endotoxinele sunt ingre- 25 dientul activ în preparatele existente în comerț de Bacillus thuringiensis.
Multe tulpini de B.thuringiensis cu diferite spectre de insecte gazdă au fost identificate până acum. Ele sunt clasificate în 30 diferite subspecii bazat pe antigenii lor flagelări. De un deosebit interes este Bacillus thuringiensis subspecies kurstaki și subspecies aizawai utilizate pentru combaterea insectelor dăunătoare lepidoptere, Bacillus thuringiensis 35 subspecies israeliensis utilizat pentru combaterea insectelor dăunătoare diptere și Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis utilizat pentru combaterea insectelor dăunătoare coleoptere. 40
Prima izolare a unui Bacillus thuringiensis toxic pentru coleoptere a fost realizată în 1983. (A. Krieg și alții, Z.and.Ent. 96, 500 508, publicația brevetului European EP 0149162 A2). 45
Izolatul, care a fost denumit Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, a ~ fost depozitat în Colecția Germană de
Microorganisme șut) numărul de acces DSM 2803. Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis a fost izolat în 1982 dintr-o pupă moartă de vierme de făină, Tenebrio molitor (Tenebrionidae, Coleoptera). Tulpina produce în interiorul fiecărei celule un spor și unul sau mai multe cristale parasporale insecticide care au o formă plată ca de farfurie cu o lungime a marginei de aproximativ 0,8 pm până la 1,5 pm. Aparține serotipului H8a, 8b și patotipului C al Bacillus thuringiensis (Krieg și alții, System. Appl. Microbiol. 9, 138-141, 1987, brevet SUA nr. 4766203, 1988).
El este toxic numai pentru anumite larve de insecte care mănâncă frunze (Chrysomelidae), fiind ineficient contra omizilor (Lepidoptera), țânțarilor (Diptera) sau altor insecte.
Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis s-a dovedit a fi un agent eficient de combatere a larvei gândacului de colorado al cartofului. După preluarea cristalelor și sporilor de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis sau a cristalelor izolate, larvele și în anumită măsură și adulții gândacului de colorado al cartofului (Leptinotarsa decemlineata) nu se mai hrănesc. Stadiile de larvă LI - L3 în 1 - 3 zile, în Fundamental & applied aspects of invertebrate pathology, editori R.A. Samson și alții, Proceedings of the 4-th Int.colloquium of Invertebrate Pathology p.555, 1986).
De curând s-a arătat, că Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis pe lângă cristalul activ contra coleopterelor mai produce și un alt cristal parasporal, care are formă de fus, sferică sau plată. (A.M. Huger & A.Krieg, J.Appl.Ent.108, 490-497, 1989). Activitatea celui de-al doilea cristal nu este încă cunoscută.
S-au elaborat pentru produse comerciale de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis pentru combaterea dăunătorilor coleopterici: NOVODOR® de la Novo Nordisk A/S; TRIDENT® de la Sandos; DiTerra® de la Abbott Laboratories Inc. și Foii® de la Ecogen.
Izolarea unei alte tulpini toxice pentru coleoptere de Bacillus thuringiensis a fost relatată în 1986 (Hemnstadt și alții, Bio/Technology vol.4, 305-308, 1986, brevet SUA nr. 4764372, 1988). Această tulpină, denumită Bacillus thuringiensis subsp. San Diego, M7, a fost depozitată la Laboratorul de Cercetări din Regiunea Nordică, SUA sub numărul de acces NRRL B-15939. Firma Mycogen Corp., a elaborat un produs comercial pe bază de Bacillus thuringiensis subsp. San Diego.
Studiile comparativ ale Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 2803 și Bacillus thuringiensis subsp. San Diego, NRRL B-15939, incluzând caracterizarea fenotipică a celulelor vegetative, caracterizarea cristalului toxic parasporal și analiza plasmidei ADN, au arătat însă că Bacillus thuringiensis subsp. San Diego este în mod clar identică cu tulpina izolată anterior DSM 2803, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, (Krieg și alții: J.Appl. Ent. 104, 417-424, 1987). Mai mult, consecvențele de nucleotidă și secvențele deduse de aminoacizi ale genelor deltaendotoxinei active contra coleopterelor din Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis și din Bacillus thuringiensis subsp. San Diego sunt identice.
în aceleași condiții de cultură cel de-al doilea tip de cristale menționat mai sus sunt sintetizate și de Bacillus thuringiensis subsp. San Diego. (A.M. Hulger & A.Krieg, J.Appl. Ent. 108, 490-497, 1989).
Conform cu H. de Barjac & E, Frachon (Entemophaga 35 (2) 233-240, 1990) izolatul San Diego, este similar cu tenebrionis și nu poate fi justificat să fie considerat o subspecie diferită.
Utilitatea tulpinilor de Bacillus thuringiensis pentru combaterea colepterelor dăunătoare este dependentă de producerea eficientă și economică a substanțelor toxice active contra coleopterelor și de potența produsului obținut. Aceasta la rândul său depinde de cantitatea de delta- endotoxină care se poate produce prin fermentarea tulpinilor de Bacillus thuringiensis active contra cqleopterelor.
Nu au fost relatate până în prezent îmbunătățiri în producerea de delta-endotoxină de către Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis prin mutație.
O problemă legată de utilizarea, în special, a B.thuringiensis subspecies tenebrionis în combaterea larvelor de insecte a fost potența sau tăria relativ mică a preparatelor, necesitând aplicarea unor cantități relativ mari de preparate pe suprafețele de tratat, cum ar fi 5 până la 10 1/Iia în comparație cu 1 până la 2 1/ha din majoritatea celorlalte produse ale B. thuringiensis și majoritatea celorlalte insecticide.
în consecință, există o cerință recunoscută de produse cu tărie îmbunătățită.
O cale de a rezolva această problemă, ar fi să se concentreze preparatele. însă, acest lucru ar adăuga mult la prețul de cost al producției, în comparație cu economiile obținute la depozitare și transport.
O soluție mult mai elegantă ar fi să se creeze mutante ale tulpinilor existente de B.thuringiensis capabile să producă cantități mult mai mari delta-endotoxine per celulă.
în consecință, prezenta invenție se referă la o mutantă sau variantă de Bacillus thuringiensis capabilă să producă deltaendotoxine insecticide, caracterizată prin aceea că a fost depusă la Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH sub numărul 5480, provine din tulpina DSM 5526, produce o cantitate de cel puțin două ori mai mare de delta-endotoxine decât tulpina din care provine, este capabilă să producă un cristal parasporal cu o lungime principală a marginii de cel puțin două ori mai mare decât lungimea principală a marginei cristalului parasporal al tulpinii din care provine și prezintă o frecvență a sporului de 10 până la 166 ori mai mică decât frecvența de sporulare a tulpinei din care provine. Mutanta se obține prin tratare cu un agent mutagen, apoi inocularea tulpinii inițiale pe un mediu de cultură adecvat pentru selectarea tulpinilor asporagene și/sau oligosporogene, după care coloniile transparente sunt selecționate și crescute pe un mediu care nu se fluidifică la încălzire, iar coloniile asporagene sunt deselectate prin supunerea lor la un tratament termic.
Produsul insecticid, sub formă lichidă, sau uscată pe bază de delta-endotoxină produsă de această mutantă, are o potență de cel puțin două ori mai mare decât cel obținut cu mutanta inițială. Produsul este folosit într-o metodă de combatere a dăunătorilor în care, se aplică 3,14 kg/ha de produs lichid sau 0,06 kg/ha de produs uscat.
B.thuringiensis a fost întrebuințat timp de mulți ani pentru producerea de insecticide, dar cu toate că mutanta de B.thuringiensis cu randament mărit în delta-endotoxine ar fi avantajoase, nu au fost descrise anterior astfel de mutante. Mutantele producătoare cu randamente mari de delta-endotoxine ar conduce la producerea mai eficientă și mai economică a toxinelor. B.thuringiensis și la o posibilitate de fabricare de produse ale B.thuringiensis cu potență mărită, la preț de cost egal. La rândul său, aceasta ar constitui un avantaj pentru utilizator pentru că ar trebui să fie depozitate și manipulate volume reduse de compoziții pesticide pentru suprafață dată. în plus, utilizatorii ar trebui să aibă de lichidat mai puține containere, astfel reducând efectul asupra mediului înconjurător.
O mutantă de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis care produce cantități mari de delta-endotoxină a fost depozitată la Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroderweg lb, D-33OO Braunschweig, Republica Federală Germania, în condițiile Tratatului de la Budapesta, conform cu regula 9 a acestui tratat. Data depozitului 10 august 1989
Indicativul depozitarului NB 176-1 Numărul dat de DSM DSM 5480
Mutanta DSM 5480, s-a obținut prin mutația Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, tulpina DSM 5526 care, de asemenea, a fost depozitată în condițiile Tratatului de la Budapesta, după cum se arată mai jos:
Data depozitului 14 septembrie 1989 Indicativul depozitarului NB 125
Numărul dat de DSM DSM 5526 t
Prezenta invenție, se referă, în general, la variante sau mutante de Bacillus thuringiensis, care produc cantități mari de delta-endotocine active, în comparație cu tulpina din care provin.
în acest context, expresia cantități mari înseamnă, de asemenea, de cel puțin două ori mai mult sau mai mult de atât.
Atât în ceea ce privește aspectele sale generale, cât și cele mai specifice, indicate mai jos pentru această invenție, delta-endotoxinele produse de către mutanta B.thuringiensis vor avea activitate contra acelorași insecte dăunătoare ca și delta-entdotoxinele B.thuringiensis ale tulpinei de bază, cum ar fi contra lepidopterelor (mutantele de la B.thuringiensis subsp. kurstaki, și subsp. aizawai), dipterelor (mutantele de la B.thuringiensis subsp. israelensis) sau coleopterelor (mutantele de la B.thuringiensis subsp. tenebrionis').
Una din realizările specifice, ale invenției de față, pentru B.thuringiensis aparține subspeciei tenebrionis, și delta-endotoxina produsă este activă împotriva coleopterelor.
în cadrul acestui aspect, o realizare preferată a invenției, B.thuringiensis subsp. tenebrionis, variantă sau mutantă, este capabilă să producă cu mai mult de trei ori cantitatea de delta-endozoxină față de tulpina DSM 2803.
Alte realizări, ale prezentei invenții, cuprind variante sau mutante de tulpini B.thuringiensis subsp. tenebrionis care sunt capabile să producă un cristal parasporal având o lungime medie a marginii de 2 um sau mai mult.
O altă realizare a invenției, cuprinde o variantă sau mutantă de B.thuringiensis subsp. tenebrionis care prezintă o frecvență a sporulației de 10 până la 100 de ori sau chiar IO6 ori mai mică decât frecvența de sporulație a tulpinii din care provine sau a tulpinii DSM 2803.
O realizare, chiar mai specifică, cuprinde mutanta depozitată B. thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 5480.
Lucrând, confonn prezentei invenții, sa izolat o mutantă de B-thuringiensis subsp.
tenebrionis (DSM 5480) cu o creștere mai mare de dublu a producției de deltaendotoxină, în comparație cu tulpina mamă (DSM 5526). Microscopia cu contrast de fază, microscopia electronică de explorare și microscopia electronică de transmisie a acestei mutante, au indicat că productivitatea mare a acestei mutante se datorează schimbărilor în regulamentul de producere a delta-endotoxinei față de sporularea rezultată în producția cristalelor de proteină, care este până la cinci ori mai mare, decât cristalele produse prin tulpinile de Bacillus thuringiensis existente, active contra coleopterelor. Corelația strânsă dintre formarea cristalelor și sporulare se pare că a fost înlăturată și mutanta produce cantități mari de delta-endotoxină înainte de sporulare.
într-unul din aspectele sale, invenția se referă la utilizarea tulpinilor variante sau mutante ale invenției, într-o metodă pentru fabricarea de produse insecticide B.thuringiensis, metodă prin care tulpina variantă sau mutantă a B.thuringiensis este cultivată într-un mediu de cultură corespunzătoare care conține surse de carbon, azot și alte componente cunoscute unei persoane de specialitate pe o perioadă adecvată de timp, după care se recuperează delta-endotoxinele.
într-un alt aspect al prezentei invenții, produsul delta-endotoxină B.thuringiensis obținut ca mai sus, este utilizat în compoziții pesticide în calitate de ingredient activ.
în asemenea compoziții, delta-endotoxinele, confonn invenției, pot fi utilizate, fie singure, fie în combinație cu alte produse active biocizi.
Invenția se mai referă la aceste compoziții pesticide sau preparate pesticide, care conțin produsul delta-endotoxină. B-thuringiensis, conform invenției, în amestec cu diluția sau suporturi acceptabile din punct de vedere agricol.
Invenția se mai referă, de asemenea, la acele compoziții sau preparate pesticide care conțin produsul delta-endotoxină B.thuringiensis, compoziții, care sunt în formă lichidă și au o potență de cel puțin 15000 BTTU/g, corespunzătoare la cel puțin 3% greutate/greutate proteină cristalină insecticidă contra coleopterelor, sau compoziții care în formă uscată au o potență de cel puțin 50000
BTTU/g, corespunzătoare la cel puțin 10% greutate/greutate proteină cristalină insecticidă contra coleopterelor. într-o realizare specifică, invenția se referă la compoziții pesticide produse din DSM 5480, care au cel puțin de două ori potența compozițiilor pesticide produse din DSM 2803, sau din alte tulpini de B.t active contra coleopterelor.
Compozițiile, conform invenției, pot lua orice formă cunoscută în specialitate pentru formularea produselor agrochimice, de exemplu, suspensie, dispersie, emulsie apoasă, pulbere de prăfuire, pulbere dispersabilă, concentrat emulsionabil sau granule. în plus, ele pot fi sub o formă adecvată pentru aplicarea directă sau sub formă de concentrat sau compoziție primară care necesită diluarea cu o cantitate corespunzătoare de apă sau alt diluant înainte de aplicare.
Concentrația delta-endotoxinelor B.thuringiensis active insecticide în compozițiile, conform prezentei invenții, când se utilizează singure sau în combinație cu un alt pesticid, așa cum se aplică pe plante, este de preferință în intervalul de la aproximativ 0,5 până la aproximativ 25% în greutate, în special 1 la 15% în greutate.
într-un alt aspect al său, invenția se referă la o metodă de combatere a dăunătorilor, în care o compoziție pesticidă, conform cu aspectul precedent, se aplică pe o arie infectată cu acest dăunător.
într-o realizare specifică, dăunătorul de combătut aparține grupului constituit din lepidoptere, diptere și coleoptere, în special, o coleopteră, cum este gândacul de colorado la cartofi.
în realizările specifice, dăunătorul poate fi combătut prin aplicarea a 3,14 kg/ha de compoziție pesticidă lichidă, sau prin aplicarea a 0,06 kg/ha de compoziție pesticidă uscată.
Preparatul activ B.thuringiensis sau compozițiile, confonn invenției, se pot aplica drept pe plantă, de exemplu, prin împrăștiere sau prăfuire în momentul în care dăunătorul a început să aparii pe plantă. Modul preferat de aplicare este împrăștierea (spray). în general, este important să se obțină o bună combatere a dăunătorilor în fazele timpurii de dezvoltare larvară pentru că acesta este momentul când planta a suferit cele mai puține vătămări.
într-una din metodele de mutație a tulpinilor Bacillus thuringiensis și de selectare a acelor mutante care sunt capabile să producă cantități cu mult mai mari de delta-endotoxine decât tulpinile din care provin, tulpina inițială este:
i) tratată cu un mutagen;
ii) mutantele astfel tratate sunt crescute pe un mediu corespunzător pentru selectarea tulpinilor asporogene și/sau oligosporogene;
iii) coloniile transparente sunt selectate și crescute într-un mediu care nu se fluidifică prin încălzire și;
iv) tulpinile adevărat asporogene sunt deselectate prin supunerea coloniilor la un tratament termic.
Conform cu o realizare preferată a acestei metode, coloniile astfel selectate sunt crescute într-un mediu normal de producție și se efectuează apoi selecția finală a tulpinilor capabile să mărească producția de deltaendotoxină. în etapa (i), a metodei de mai sus, mutagenul poate fi orice mutagen chimic cunoscut corespunzător, cum sunt N-metil-N'nitro-N-nitrozoguanidina sau metansulfonatul de etil, sau tulpina de plecare poate fi tratată în radiație electromagnetică, cum sunt radiația gama, razele X sau UV.
în etapa (ii), ca mediu corespunzător poate fi un mediu nutritiv de sporulare modificat, care conține fosfat (mediul NSMP descris de Johnson și alții în Spores VI, editori P.Gerhardt și alții pp. 248-254, 1975.
în etapa (iv), a metodei, conform invenției, un mediu corespunzător, poate fi un mediu NSMP suplimentat cu MgCl2 și Gelrite. Kelco.
O altă metodă de obținere a variantelor sau mutantelor de înaltă productivitate, conform invenției, poate fi considerată creșterea tulpinii de bază într-un mediu lichid și selectarea mutantelor sau variantelor spontane după împrăștierea bulionului de cultură ’pe un mediu de agar corespunzător, pentru selectarea mutantelor asporogene și/sau oligosporogene.
Alte metode de alegere a mutantelor sau variantelor cu productivitate înaltă, conform invenției, pot fi luate în considerație, cum ar fi, utilizarea masei acestor mutante direct prin centrifugare sau alte mijloace de separare a masei.
Se dau, în continuare, cinci exemple de realizare , a invenției:
Exemplul 1. S-a izolat o mutantă de B.thuringiensis subsp. tenebrionis cu o creștere mai mare de două ori a producției de deltaendotoxină. Microscopia cu contrast de fază, microscopia electronică de exploatare și microscopia electronică de transmisie a acestei mutante, arată că productivitatea ridicată a mutantei se datorește schimbărilor în modul de producție a delta-endotoxinei în raport cu sporularea obținută în producția cristalelor de proteină, care sunt de mai mult de cinci ori mai mari decât cristalele produse de către tulpinile de Bacillus thuringiensis existente, active contra coleopterelor. Se pare că corelația strânsă dintre formarea cristalului și sporulare a fost înlăturată și mutanta produce cantități mari de delta-endotoxină înainte de sporulare.
Producerea de mutantă de mare randament
Spori de B.thuringiensis subsp. tenebrionis, tulpina DSM 5526, au fost iradiați cu raze gamma pentru a da o doză de 7 kGy. Sporii iradiați au fost răspândiți pe plăci de agar NSMP (mediu de sporulare nutritiv modificat, care conține fosfat așa cum a descris Johnson și alții în Spores VI, editori
P.Gerhardt și alții pp. 248-154 (1975), un mediu corespunzător pentru selecția mutantelor asporogene și/sau oligosporogene.
Plăcile de agar NSMP au fost incubate la 30°C, timp de 2-3 zile. Coloniile transparente au fost scoase de pe ele și transferate pe plăci gelrite NSMP (mediu NSMP suplimentat cu MgCl2 (0,57 g/1) și Gelrite, Kelco (20 g/1).
Plăcile gelrite NSMP au fost incubate timp de o oră, la 90° C, și apoi în continuare incubate timp de 1-2 zile la 30°C.
Au fost selectate mutantele care au crescut bine pe plăcile de gelrite NSMP. în acest fel toate mutantele asporogene au fost deselectate pentru că ele nu au mai crescut după tratamentul termic.
Mutantele selectate au crescut în baloane, sub agitare, care conțin un mediu din comerț. Cantitățile de delta-endotoxină produsă au fost determinate prin metode imunologice descrise mai jos.
Numai mutantele care produc cantități cu mult mai mari de delta-endotoxină, decât tulpina din care provin au fost selectate.
S-a studiat morfologia mutantelor selecționate pe mediu solid și în medii lichide prin microscopia cu contrast de fază (x 2500) și prin microscopia electronică de explorare și de transmisie. S-a calculat numărul de spori și de cristale și s-a determinat mărimea cristalelor de proteină.
Printre mutantele obținute, una (DSM 5480), a fost selectată pentru remarcabila sa ușurință de a produce delta-endotoxină.
Cantitatea de delta-endotoxină produsă de mutanta 5480 DSM, s-a comparat cu aceea a DSM 2803 izolatul original al Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis tulpina DSM 5526 utilizată pentru producerea de NOVODOR®, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis tulpina NB178 izolată din produsul Sandoz de Bacillus thuringiensis tenebrionis TRIDENTR® din 1989, tulpina NB 198 izolată din produsul Sandoz B.thuringiensis subsp. tenebrionis TRIDENT® din 1990, Bacillus thuringiensis subsp. San Diego tulpina NRRLB-15939 și tulpina NB 197 izolată din produsul Mycogen, B.thuringiensis subsp. San Diego M-ONE® din 1990. Așa cum se arată în tabelul I, din exemplul 2, mutanta cu randament îmbunătățit, conform invenției, produce de 2 până la 3,5 ori mai multă deltaendotoxină decât tulpinile active contra coleopterelor ale Bacillus thuringiensis existente astăzi.
Exemplul 2. în acest exemplu, randamentul în delta-endotoxină al Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis, mutanta
DSM 5480, s-a comparat cu randamentele în delta-endotoxină ale Bacillus thuringiensis subspecies tenebrionis tulpinile DSM 2803 (izolatul original al Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis), DSM 5526 (tulpina produsă de Novo-Nordisk) și NB 178 și NB 198 (tulpinile produse de Sandoz) și Bacillus thuringiensis subsp. San Diego, tulpinile NRRL-B 14939 și NB 197 (tulpinile produse de Mycogen) într-un mediu existent în comerț. Fiecare tulpină a fost supusă creșterii timp de 17 h, la 30°C, pe plăci de agar cu unnătoarea compoziție (exprimată în grame Ia litru de apă distilată):
- peptonă, Difco 5 g
- extract de bou, Difco 3 g
- agar, Difco20 g
- pH 7,0 ml din suspensia de celule din fiecare tulpină au fost apoi transferate în 100 ml de producție în vase Erlenmeyer cu șicană pe fund. Mediul de producție a constat din următoarele elemente în cantitățile indicate (exprimate în grame la litru apă de robinet):
- făină de fasole soia50 g
- amidon hidrolizat40 g
-KH2PO4................................ 1,77g
-K2HPO4 ............................... 4,53g
- pH 7,0
Baloanele inoculate au fost incubate la 30°C, cu scuturare (250 rot/min). După 96 h de incubare, în bulioanele culturilor s-a analizat randamentul în delta-endotoxină prin metode imunologice.
Cantitățile de delta-endotoxină produse de tulpinile individuale au fost determinate prin imunoelectroforeză cu rachetă (RIE) și prin încercarea imunofotometrică (PIA), utilizând anticorpii crescuți împotriva cristalelor de proteină din Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
S-au cântărit câte 400 mg din fiecare bulion de cultură. La fiecare probă s-au adăugat câte 7 ml tampon de fosfat trisodic (0,125 M, pH=12). Suspensiile au fost agitate timp de o oră pentru a solubiliza proteinele delta-endotoxinei.
Probele au fost apoi centrifugate la 3500 rot/min, timp de 15 min și în supematante s-au testat delta-endotoxinele prin imunoelectroforeza cu rachetă în raport cu antiserul crescut împotriva cristalelor de proteină purificată din B.thuringiensis subsp. tenebrionis. Cantitățile de delta-endotoxină au 5 fost determinate în raport cu un etalon cu conținut cunoscut de proteină cristalină.
Concentrația de proteină cristalină a fost, de asemenea, determinată prin încercarea imunofotometrică. Proteinele cristaline s-au 10 dizolvat într-o soluție alcalină. Proteinele dizolvate au fost precipitate de anticorpii lor. Viteza acestei reacții a fost determinată turbidimetric. Cantitățile de delta endotoxină au fost determinate în raport cu etalon cu .15 conținut cunoscut de proteină cristalină.
Antigenii cristalini pentru producția de anticorpi utilizați în încercări s-au obținut din cristalele izolate din B.thuringiensis subsp. tenebrionis.
Anticorpii policlonali au fost crescuți prin injectarea iepurilor subcutanat la fiecare două săptămâni cu 0,25 mg, antigen cristalin.
Rezultatele obținute sunt arătate în tabelele Ia și lb care urmează. Randamentele în delta-endotoxină sunt exprimate ca BTTU/g (unități per gram bulion de cultură, determinate prin imunoelectroforeza cu rachetă, RIE, sau prin încercarea imunofotometrică, PIA). Valoarea utilizată pentru cristalul de proteină pură B.tghuringiensis subsp. tenebrionis este de 500000 BTTU/g. Valorile indicate în tabelul Ia, de mai jos sunt mediile a 6-7 fermentații independente, iar acelea ale tabelului lb, sunt mediile a 3 fermentații independent.
Producția de delta-endotoxină prin tulpinile de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, în baloane agitate
Tabelul Ia
Tulpina Randamentul delta-endotoxinei
RIE PIA
BTTU/g BTTU/g
DSM 2803 676 1293
NRRL-B 15939 747 1126
NB 178 986 1728
DSM 5526 1097 1860
DSM 5480 2382 4169
Producția de delta-endotoxină de către tulpinile de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, în baloane agitate Tabelul lb
Tulpina Randamentul de delta-endotoxină
RIE BTTU/g
1. 2.
NB 197 !. 1103
1. 2.
NB 198 1237
DSM 5480 2867
Din tabelele Ia și Ib, rezultă că DSM 5480 5 produce cu mai mult de trei ori mai multă delta-endotoxină decât tulpina originală de ' Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 2803 și Bacillus thuringiensis subsp. San Diego, tulpina NRRL-B 15939 și cu mai mult 10 de două ori cantitatea de delta-endotoxină produsă de tulpinile utilizate în prezent pentru fabricarea produselor industriale de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Prin microscopia cu contrast de fază, 15 microscopia electronică de explorare și microscopia electronică de transmisie a Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, mutanta DSM 5480 a reieșit că, cristalele de proteină produse de această mutantă sunt mult mai mari decât 20 cele de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, tulpina DSM 2803, tulpina DSM 5526, tulpinile NB 178 și NB 198 și Bacillus thuringiensis subsp. San Diego, tulpinile NRRL-B 15939 și NB 197. 25
Bulionul culturii de Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, mutanta DSM 5480, a fost testat pentru activitatea împotriva larvelor de gândac de coolorado al cartofului. Cantitatea mărită de delta-endotoxină produsă 30 de mutanta DSM 5480, așa cum s-a determinat prin metodele imunologice, s-a reflectat în activitatea biologică contra larvelor de gândac de colorado al cartofului.
Exemplul 3. în acest exemplu s-au 35 comparat: sporularea și formarea cristalului parasporal în B.thuringiensis subsp. tenebrionis, tulpinile DSM 2803, DSM 5526, NB · 178 și NB 198, și mutanta DSM 5480 și B.thurienginsis subsp. San Diego, tulpinile 40 NRRL-B 15939 și NB 197 pe un mediu solid și în mediu lichid.
Fiecare dintre tulpini a fost crescută timp de 2 zile la 30°C, pe plăci de agar cu următoarea compoziție (exprimată în grame la 45 litru de apă distilată):
- peptonă, Difco........................5 g
- extract de bovine, Difco3 g
- agar, Difco20 g
- pH 7,0
Fiecare dintre tulpini a fost, de asemenea, crescută în mediu lichid. Toate tulpinile au crescut timp de 17 h, la 30°C, pe plăci înclinate de agar. După aceea, s-au transferat 5 ml de suspensie de celule din fiecare tulpină în baloane Erlenmeyer cu șicană pe fund, cu capacitate de 500 ml, fiecare balon conținând 100 ml de mediu.
Mediul a constat din următoarele componente în cantitățile indicate (exprimate îm grame la litru apă de robinet):
- extract de drojdie5 g
- trptonă5 g
- glucoză 1 g
- KH2PO4.....................................0,8g
- pH7,0
Baloanele inoculate s-au incubat la 30°C, sub agitare (250 rot/min timp de 96 h).
S-a studiat morfologia tulpinilor pe mediul lichid și în mediul lichid, zilnic, prin microscopia cu contrast de fază (x 2500). S-a numărat numărul de spori și de cristale și sa determinat mărimea cristalelor parasporale. Câteva probe selectate au fost, de asemenea, studiate prin microscopia electronică de explorare și de transmisie.
B.thuringiensis subsp. tenebrionis, tulpinile DSM 2803, DSM 5526, NB 178 și NB 198 și B.thuringiensis subsp. San Diego, tulpinile NRRL-B 15939 și NB 197 au sporulat toate bine pe ambele medii. înaintea lizei celulare, fiecare celulă conținea un spor și un cristal parasporal. Mărimea cristalelor a fost între 0,4 și 0,9 - 1 : 1 pm ca lungime în momentul lizei celulei. Mărimea medie a cristalelor proteinei este ca lungime de 0,6-0,7 pm.
Mutanta DSM 5480 a produs numai puțini spori (<106 spori/ml) pe mediul solid și în mediul lichid definit. înainte lizei celulelor, majoritatea celulelor conțineau un cristal de proteină imens dar nu conțineau spori. Mărimea cristalelor de proteină a fost între 0,4 și 0,7 pm și 5,0 pm, mărimea medie a cristalelor de proteină fiind de 2,2 - 2,3 pm lungime. 5
Analiza ultrastructurală a celulelor din aceste medii prin microscopia electronică de transmisie a arătat că procesul de sporulare în ' mutantă începuse dar nu se terminase în momentul lizei. Procesul de sporulare a atins 10 diferite stadii în diferitele celule. în celulele unde sporularea a atins numai stadiul II (formarea membranei presporale) cristalele de proteină au umplut toate celulele.
în mediul de producție (exemplul 2) mutanta a produs un mare număr de spori (107108 spori/ml). în acest mediu frecvența sporulării mutantei a fost de 10-100 ori mai mică decât în tulpina din care provine.
Astfel, mutanta a reținut capacitatea sa de a produce spori normali. însă, se pare că frecvența sporulării mutantei depinde mult de medii.
Mărimea cristalelor proteinei produse de tulpinile individuale este arătată în tabelele Ila și Ilb.
Mărimea cristalelor proteinei produse de Bacillus thuringiensis, tulpini active contra coleopterelor existenze azi
Tebelul Ila
Tulpina Lungimea cristalelor proteinei în pm
Minimă valoare Maximă valoare Medie valoare
DSM 2803 0,4 0,9 0,7
NRRL-B 15939 0,4 0.9 0,7
NB 178 0,5 0,9 0,7
DSM 5526 0,4 0,9 0,7
DSM 5480 0,7 0,5 2,3
Mărimea cristalelor de proteină produse de tulpinile de Bacillus thuringiensis active contra coleopterelor existente în prezent
Tabelul Ilb
Tulpina Lungimea cristalelor de proteină în pm
Minimă valoare Maximă valoare Medie valoare
NB 197 0,4 0,7 0,6
NB 198 0,4 1,1 0,7
DSM 5480 0,4 4,2 2,0
Din tabelele Ila și Ilb, reiese clar că 50 mutanta DSM 5480 produce cristale de proteină mult mai mari decât oricare dintre tulpinile B.t., active contra colepterelor existente în prezent.
Din datele obținute rezultă că reglarea producției de delta-endotoxină, în funcție de sporulare s-a schimbat în mutantă.
Se pare, că mutanta produce cristalele de proteină înainte de dezvoltarea sporilor, astfel dând celulelor o perioadă mai lungă pentru producerea delta-endotoxinei care conduce la producerea unor cristale de proterină mult mai mari până în momentul lizei celulelor, decât la tulpina din care provine. 5 în funcție de materialele nutritive disponibile și de mărimea cristalelor de proteină din celule în momentul sporulării, se ‘ va dezvolta un spor normal înainte de timpul lizei celulelor. 10
Exemplul 4. în acest exemplu s-a utilizat mutanta DSM 5480 B.t. cu mare productivitate pentru a fabrica produse cu potență ridicată în combaterea larvelor gândacului de colorado al cartofilor. 15
DSM 5480 s-a fermentat pe mediul de fermentare de producție descris în exemplul 2, într-un vas de producție prin fermentare aerisit, sub agitare, După 96 h, bulionul s-a recuperat prin centrifugare pe o centrifugă continuă.
Spuma concentrată, care conține cristalele de proteină activă s-a stabilizat prin adăugare de conservanți microbieni și pH-ul sa modificat la 5,0.
O porție din spuma concentrată a fost uscată prin pulverizare și ulterior s-a folosit la formularea de pulbere umectabilă. Restul spumei concentrate s-a utilizat direct pentru formularea de două concentrate apoase fluide (FC).
Pulberea umectabilă s-a formualt așa cum se areată în tabelul III. Formularea celor două FC este descrisă în tabelul IV.
Formularea de pulbere umectabilă NOVODOR®
Tabelul III
Componenta % greutate
Spumă concentrată uscată prin pulverizare de B.t. 40
Detergenți 9
Agent contra lipirii 1
Formulări FC NOVODOR®
Tabelul IV
Componenta NOVODOR® 1 % în greutate NOVODOR® FC2 % în greutate
Spumă concentrată B.t. 80 55
Conservanți 4 4
Agenți contra înghețului : 9,1 19
Detergenți 2,5 2,5
Regulator de pH 2,85 2,85
Apă 1,55 16,65
100,0 100,0
22
Când se utilizează o valoare de 500000 proteină cristalină activă în formulări este de: KBTTU/g proteină cristalină pură,conținutul de
% B./.proteină cristalină
NOVODOR® WP 70,8 KBTTU/g 14,16
NOVODOR® FC1 24,7 KBTTU/g 4,94
NOVODOR® FC2 ' 14,2 KBTTU/g 2,84
Detergenții se aleg dintr-o mare grupă 10 de adjuvanți de suspensie și agenți de umectare utilizați în mod normal în produsele pesticide din agricultură.
Agentul contra lipirii este o silice hidrofilă și umplutura inertă se alege dintre 15 umpluturile inerte în general utilizate, cum sunt: bentonitele, sărurile anorganice sau argilele.
Conservanții utilizați în formulările FC se aleg din grupa conservanților alimentari și 20 cosmetici. Regulatorul de pH este un acid anorganic.
Exemplul 5. S-a efectuat o încercare pe câmp pentru a dovedi efectul biologic al mutantei B.t. DSM 5480 cu mare productivitate asupra principalului dăunător urmărit, larvele de gândac de colorado al cartofului, în comparație cu două produse din comerț Trident® și M-one®. Recolta au fost cartofii.
Recolta a fost stropită de trei ori: la 20 iulie, 27 iulie și 3 august (a doua generație de larve). Produsele și dozele utilizate au fost:
Volumul produsului/acru Potența KBTTU/g Proteină cristale în compoziție, %
1 qt/acru 14,2 2,84
1,5 qts/acru 14,2 2,84
NOVODOR® FC 2 2,5 qts/acru 14,2 2,84
3,0 qts/acru 14,2 2,84
TRIDENT® 4 qts/acru 5,5 1,10
M-one® 2 qts/acru 8,9 1,78
Procentul mediu de combatere a 5.0 larvelor gândacului de colorado în comparație cu martorul netratat este dat în tabelul V. Gândacul de colorado al cartofului a exercitat o presiune foarte puternică asupra motorului netestat: 370 larve per 20 plante la 1 august și 904 larve per 20 plante la 8 august
Tabelul V
Tratament % combatere
1 august 8 august
NOVODOR ® FC 1 1 qt 99 99
NOVODOR® Fc 2 1,5 qts 95 100
NOVODOR® FC 2 2,5 qts 98 99
NOVODOR® FC 2 3 qts 100 100
TRIDENT® 4 qts 94 98
M-one® 2 qts 98 98
Rezultatele au arătat clar, că produsele 10 făcute cu mutanta DSM 5480 de înaltă productivitate, sunt eficiente pentru combaterea larvei gândacului de colorado la cartofi pe câmp. Proteina cristalină produsă de către tulpina cu mare productivitate este în totalitate activă 15 pentru că 1,5 qts NOVODOR® FC dau rezultate tot atât de bune ca și 4 qts Trident® și 2 qts M-one®.

Claims (16)

  1. Revendicări 20
    1. Mutantă sau variantă de Bacillus thuringiensis capabilă să producă delta-endotoxinei insecticide, caracterizată prin aceea că, a fost depusă la Deutsche Sammlung von 25 Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, sub numărul 5480, provine din tulpina DSM 5526, produce o cantitate de cel puțin două ori mai mare de delta-endotoxine, decât tulpina din care provine, este capabilă să producă un 30 cristal parasporal cu o luingime principală a marginii, de cel puțin două ori mai mare decât lungimea principală a marginii cristalului parasporal de 10 până la IO6 ori mai mică decât frecvența de sporulare a tulpinei din care 35 provine.
  2. 2. Mutantă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, aparține prototipului C al Bacillus thuringiensis.
  3. 3. Mutantă, conform revendicării 1, 40 caracterizată prin aceea că, aparține'subspeciei tenebrionis.
  4. 4. Mutantă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, produce deltaendotoxine active contra coleopterelor, dipterelor sau lepidopterelor.
  5. 5. Mutantă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, este capabilă să producă o cantitate de delta-endotoxine de trei ori mai mare decât tulpina inițială.
  6. 6. Mutantă, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, este capabilă să producă un cristal parasporal cu o lungime a marginii de peste 2 pm.
  7. 7. Procedeu de obținere a mutantei, de le revendicarea 1, caracterizat prin aceea că, tulpina inițială DSM 5526 este tratată cu un agent mutagen, apoi este inoculată pe un mediu de cultură adecvat pentru selectarea tulpinilor asporogene și/sau oliosporogene, după care coloniile transparente sunt selecționate și crescute pe un mediu care nu se fluidifică la încălzire, iar coloniile asporogene sunt deselectate prin supunerea lor la un tratament termic.
  8. 8. Procedeu, confonn revendicării 7, caracterizat prin aceea că, agentul mutagen este de natură chimică cum ar fi N-metil-N’nitro-N-nitrozoguanidină sau metansulfonatul de etil.
  9. 9. Procedeu, conform revendicării 7, caracterizat prin aceea că, agentul mutagen este o radiație electromagnetică cum ar fi radiația gama, razele X sau UV.
  10. 10. Procedeu, conform revendicării 7, caracterizat prin aceea că, mediul pentru selectarea tulpinilor asporogene este un mediu de sporulare nutritiv modificat care conține fosfat (NSMP).
  11. 11. Procedeu, conform revendicării 7, 5 caracterizat prin aceea că, mediul care nu se fluidifică la încălzire este mediul NSMP suplimentat cu MgCl2 și Gerlite, Kelco.
  12. 12. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, etapa de tratare cu 10 un agent mutagen lipsește.
  13. 13. Procedeu de obținere a deltaendotoxinei pe cale microbiologică conținând etapa de cultivare a unei tulpini de Bacillus thuringiensis pe un mediu conținând surse de 15 carbon, azot și alte componente și etapa de recuperare a delta-endotoxinei pure sau în combinație cu celule și/sau spori, caractrerizat prin aceea că, în scopul obținerii unei cantități de cel puțin două ori mai mari decât folosind 20 tulpina inițială, se cultivă o mutantă sau variantă de Bacillus thuringiensis, descrisă la revendicarea 1.
  14. 14. Produs insecticid sub formă lichidă sau uscată pe bază de delta-endotoxină, caracterizat prin aceea că, conține delta-endotoxină produsă de mutanta descrisă la revendicarea 1, ceea ce îi conferă o potență de cel puțin două ori mai mare decât produsul obținut cu mutanta inițială.
  15. 15. Produs, conform revendicării 14, caracterizat prin aceea că, are o potență. în formă lichidă, de cel puțin 15000 NTTU/g corespunzătoare la cel puțin 3% greutate/ greutate proteină cristalină sau de 50000 BTTU/g în formă uscată, corespunzătoare la cel puțin 10% în greutate/greutate proteină cristalină.
  16. 16. Metodă de combatere a dăunătorilor, caracterizată prin aceea că, se aplică 3,14 kg/ha de produs lichid sau 0,06 kg/ha de produs uscat, produse descrise la revendicarea
RO92-200690A 1989-11-17 1990-11-16 Mutanta sau varianta de bacillus thuringiensis, procedeu de obtinere, procedeu de obtinere a delta-endotoxinei cu ajutorul ei, produs insecticid pe baza de delta-endotoxina si metoda de combatere a daunatorilor cu acest produs RO109862B1 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK580589A DK580589D0 (da) 1989-11-17 1989-11-17 Mutant
DK627489A DK627489D0 (da) 1989-12-12 1989-12-12 Mutant
PCT/DK1990/000294 WO1991007481A1 (en) 1989-11-17 1990-11-16 Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO109862B1 true RO109862B1 (ro) 1995-06-30

Family

ID=26067985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RO92-200690A RO109862B1 (ro) 1989-11-17 1990-11-16 Mutanta sau varianta de bacillus thuringiensis, procedeu de obtinere, procedeu de obtinere a delta-endotoxinei cu ajutorul ei, produs insecticid pe baza de delta-endotoxina si metoda de combatere a daunatorilor cu acest produs

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0585215B1 (ro)
JP (1) JP2950614B2 (ro)
KR (1) KR0157065B1 (ro)
AT (1) ATE184645T1 (ro)
AU (1) AU647056B2 (ro)
BG (1) BG61699B1 (ro)
CA (1) CA2068734C (ro)
DE (2) DE585215T1 (ro)
DK (1) DK0585215T3 (ro)
ES (1) ES2060568T3 (ro)
FI (1) FI103130B (ro)
GR (2) GR940300021T1 (ro)
HU (1) HU214685B (ro)
NO (1) NO305131B1 (ro)
RO (1) RO109862B1 (ro)
RU (1) RU2138950C1 (ro)
SK (1) SK281286B6 (ro)
TR (1) TR28902A (ro)
WO (1) WO1991007481A1 (ro)
YU (1) YU48440B (ro)

Families Citing this family (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6270760B1 (en) * 1989-12-18 2001-08-07 Valent Biosciences, Inc. Production of Bacillus thuringiensis integrants
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
IL99928A0 (en) * 1990-11-08 1992-08-18 Agricultural Genetics Co Biological control of pests
US5264364A (en) * 1991-01-31 1993-11-23 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects
ZA932792B (en) * 1992-05-12 1993-11-16 Aeci Ltd Insecticide composition
WO1994028724A1 (en) * 1993-06-10 1994-12-22 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins
IL110299A0 (en) * 1993-07-15 1994-10-21 Novo Nordisk Entotech Inc Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity
WO1997027305A1 (en) * 1996-01-26 1997-07-31 Abbott Laboratories Production of bacillus thuringiensis integrants
US5804180A (en) * 1996-07-17 1998-09-08 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US5965428A (en) * 1996-10-08 1999-10-12 Ecogen, Inc. Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins
KR100458765B1 (ko) * 2001-12-24 2004-12-03 학교법인 동아대학교 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법
WO2014056780A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Basf Se A method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material
WO2014082879A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
WO2014082871A1 (en) 2012-11-27 2014-06-05 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
US20150313229A1 (en) 2012-11-27 2015-11-05 Basf Se Substituted [1,2,4] Triazole Compounds
EP2928873A1 (en) 2012-11-27 2015-10-14 Basf Se Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides
WO2014086854A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator
WO2014086850A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii
WO2014086856A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide
EP2746255A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014095555A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746279A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746278A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746277A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2935224A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2935236B1 (en) 2012-12-19 2017-11-29 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
WO2014095534A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
EP2746266A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides
WO2014095381A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746256A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds
EP2746262A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi
EP2746263A1 (en) 2012-12-19 2014-06-25 Basf Se Alpha-substituted triazoles and imidazoles
US20150329501A1 (en) 2012-12-19 2015-11-19 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides
EP2746260A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746258A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746257A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2746259A1 (en) 2012-12-21 2014-06-25 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
WO2014124850A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
BR112015018853B1 (pt) 2013-03-20 2021-07-13 Basf Corporation Mistura, composição agroquímica, método para controlar fungos fitopatogênicos, método para proteção do material de propagação dos vegetais e semente revestida
WO2015011615A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 Basf Corporation Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide
WO2015036059A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
WO2015036058A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
CN106061254B (zh) 2013-10-18 2019-04-05 巴斯夫农业化学品有限公司 农药活性羧酰胺衍生物在土壤和种子施用和处理方法中的用途
US10053432B2 (en) 2013-12-12 2018-08-21 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
US20160318897A1 (en) 2013-12-18 2016-11-03 Basf Se Azole compounds carrying an imine-derived substituent
WO2015104422A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Basf Se Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests
EP2924027A1 (en) 2014-03-28 2015-09-30 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds
US9968092B2 (en) 2014-04-17 2018-05-15 Basf Se Combination of novel nitrification inhibitors and biopesticides as well as combination of (thio)phosphoric acid triamides and biopesticides
EP2962568A1 (en) 2014-07-01 2016-01-06 Basf Se Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide
EP2949649A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2949216A1 (en) 2014-05-30 2015-12-02 Basf Se Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952512A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
EP2952506A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds
EP2952507A1 (en) 2014-06-06 2015-12-09 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds
CN107075712A (zh) 2014-10-24 2017-08-18 巴斯夫欧洲公司 改变固体颗粒的表面电荷的非两性、可季化和水溶性聚合物
CN111742937A (zh) * 2015-01-16 2020-10-09 瓦伦特生物科学有限责任公司 苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种组合制剂
WO2016128239A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Basf Se Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide
AU2016231152A1 (en) 2015-03-11 2017-09-28 Basf Agrochemical Products B.V. Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide
CN107592790B (zh) 2015-03-11 2022-03-25 巴斯夫农业化学品有限公司 包含羧酰胺化合物和生物农药的农药混合物
EP3111763A1 (en) 2015-07-02 2017-01-04 BASF Agro B.V. Pesticidal compositions comprising a triazole compound
EP3383183B1 (en) 2015-11-30 2020-05-27 Basf Se Compositions containing cis-jasmone and bacillus amyloliquefaciens
EP3205209A1 (en) 2016-02-09 2017-08-16 Basf Se Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides
US20190200612A1 (en) 2016-09-13 2019-07-04 Basf Se Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides
WO2018149754A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Basf Se Pyridine compounds
JP7160486B2 (ja) 2017-03-28 2022-10-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺生物剤化合物
WO2018184882A1 (en) 2017-04-06 2018-10-11 Basf Se Pyridine compounds
US20210179620A1 (en) 2017-06-16 2021-06-17 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2018234202A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED PYRIMIDINIUM COMPOUNDS AND DERIVATIVES FOR CONTROLLING HARMFUL ANIMALS
WO2018234488A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Basf Se SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES
EP3453706A1 (en) 2017-09-08 2019-03-13 Basf Se Pesticidal imidazole compounds
WO2019057660A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Basf Se INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES
WO2019072906A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Basf Se IMIDAZOLIDINE PYRIMIDINIUM COMPOUNDS FOR CONTROL OF HARMFUL ANIMALS
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
US11512054B2 (en) 2017-12-21 2022-11-29 Basf Se Pesticidal compounds
JP7479285B2 (ja) 2018-01-09 2024-05-08 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 硝化阻害剤としてのシリルエチニルヘタリール化合物
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
AU2019226360A1 (en) 2018-02-28 2020-08-27 Basf Se Use of alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors
CA3089381A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Basf Se Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors
WO2019166560A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Basf Se Use of n-functionalized alkoxy pyrazole compounds as nitrification inhibitors
WO2019175712A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways
WO2019175713A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Basf Corporation New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
WO2020002472A1 (en) 2018-06-28 2020-01-02 Basf Se Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors
EP3826983B1 (en) 2018-07-23 2024-05-15 Basf Se Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors
WO2020020765A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Basf Se Use of a substituted thiazolidine compound as nitrification inhibitor
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3887357A1 (en) 2018-11-28 2021-10-06 Basf Se Pesticidal compounds
US20230031024A1 (en) 2018-12-18 2023-02-02 Basf Se Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3730489A1 (en) 2019-04-25 2020-10-28 Basf Se Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
CN113923987B (zh) 2019-05-29 2024-10-01 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
WO2021170463A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 BASF Agro B.V. Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf
CN115443267A (zh) 2020-04-28 2022-12-06 巴斯夫欧洲公司 杀害虫化合物
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
EP4236691A1 (en) 2020-10-27 2023-09-06 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
EP4011208A1 (en) 2020-12-08 2022-06-15 BASF Corporation Microparticle compositions comprising fluopyram
CN116829521A (zh) 2021-02-02 2023-09-29 巴斯夫欧洲公司 Dcd和烷氧基吡唑作为硝化抑制剂的协同增效作用
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
JP2024519813A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺菌剤としての新規な置換ピリジン
US20240270727A1 (en) 2021-05-18 2024-08-15 Basf Se New substituted pyridines as fungicide
WO2022243109A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Basf Se New substituted quinolines as fungicides
CN117355504A (zh) 2021-05-21 2024-01-05 巴斯夫欧洲公司 乙炔基吡啶化合物作为硝化抑制剂的用途
CN117440946A (zh) 2021-05-21 2024-01-23 巴斯夫欧洲公司 N-官能化的烷氧基吡唑化合物作为硝化抑制剂的用途
WO2022268810A1 (en) 2021-06-21 2022-12-29 Basf Se Metal-organic frameworks with pyrazole-based building blocks
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
KR20240042636A (ko) 2021-08-02 2024-04-02 바스프 에스이 (3-피리딜)-퀴나졸린
CA3227653A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Wassilios Grammenos (3-quinolyl)-quinazoline
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023203066A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Basf Se Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
WO2024104823A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
WO2024104818A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104822A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024194038A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4277564A (en) * 1980-01-09 1981-07-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis
CA1193564A (en) * 1982-07-09 1985-09-17 University Of Western Ontario Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control
DE3346138A1 (de) * 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
US4764372A (en) * 1985-03-22 1988-08-16 Mycogen Corporation Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof
DE3541893A1 (de) * 1985-11-27 1987-06-11 Basf Ag Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus
JPS62146593A (ja) * 1985-12-16 1987-06-30 マイコゲン　コ−ポレ−シヨン バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法
JP2775150B2 (ja) * 1987-03-04 1998-07-16 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル．イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法
ES2063051T3 (es) * 1987-12-24 1995-01-01 Zeneca Ltd Cepas bacterianas.
US4999192A (en) * 1988-02-12 1991-03-12 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
US4966765A (en) * 1988-02-23 1990-10-30 Mycogen Corporation Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate
US4996155A (en) * 1988-03-04 1991-02-26 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin
US4990332A (en) * 1988-10-25 1991-02-05 Mycogen Corporation Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate

Also Published As

Publication number Publication date
ES2060568T3 (es) 2000-01-01
BG96488A (bg) 1993-12-24
DE585215T1 (de) 1994-07-28
DE69033291D1 (de) 1999-10-21
ES2060568T1 (es) 1994-12-01
CA2068734C (en) 1999-12-28
AU647056B2 (en) 1994-03-17
TR28902A (tr) 1997-08-04
ATE184645T1 (de) 1999-10-15
HU214685B (hu) 1998-04-28
AU6736490A (en) 1991-06-13
EP0585215A1 (en) 1994-03-09
RU2138950C1 (ru) 1999-10-10
CA2068734A1 (en) 1991-05-18
WO1991007481A1 (en) 1991-05-30
JPH05501955A (ja) 1993-04-15
FI922205A (fi) 1992-05-14
HUT64581A (en) 1994-01-28
DE69033291T2 (de) 2000-05-11
EP0585215B1 (en) 1999-09-15
KR927003790A (ko) 1992-12-18
HU9201628D0 (en) 1992-08-28
FI922205A0 (fi) 1992-05-14
FI103130B1 (fi) 1999-04-30
FI103130B (fi) 1999-04-30
BG61699B1 (bg) 1998-03-31
SK562990A3 (en) 2001-02-12
GR3031815T3 (en) 2000-02-29
YU218590A (sh) 1993-05-28
YU48440B (sh) 1998-07-10
KR0157065B1 (ko) 1998-10-15
SK281286B6 (sk) 2001-02-12
NO305131B1 (no) 1999-04-06
DK0585215T3 (da) 2000-03-27
NO921950L (no) 1992-07-13
NO921950D0 (no) 1992-05-15
JP2950614B2 (ja) 1999-09-20
GR940300021T1 (en) 1994-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO109862B1 (ro) Mutanta sau varianta de bacillus thuringiensis, procedeu de obtinere, procedeu de obtinere a delta-endotoxinei cu ajutorul ei, produs insecticid pe baza de delta-endotoxina si metoda de combatere a daunatorilor cu acest produs
KR100241117B1 (ko) 신규한 미생물 및 살충제
US5208017A (en) Biologically active Bacillus thuringiensis isolates
EP0178151A2 (en) Preparation of strains of bacillus thuringiensis having an improved activity against certain lepidopterous pests and novel strain produced thereby
US5080897A (en) Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions
EP0202739A1 (en) Novel micro-organism and its use for controlling pests
US5185148A (en) Process for controlling scarab pests with Bacillus thuringiensis isolates
US5262324A (en) Coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolates and genes encoding coleopteran-active toxins
US5277906A (en) Insecticidal composition of bacillus thuringiensis serovar israelensis, DSM 3435 and DSM 3440
JPH10504451A (ja) 新規の双翅類活性化合物及びバチルス チューリングエンシス株
US5211946A (en) Bacillus thuringiensis isolates for controlling acarides
US5279962A (en) Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin
JP2002045186A (ja) 殺虫活性を有する蛋白質、その蛋白質をコードするｄｎａ、有害生物防除剤及び防除方法。
JP3017799B2 (ja) バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用
EP0522836A2 (en) Novel bacillus strain and insect pest controlling agent
EP0309145A1 (en) Bacteriophage-resistant strain of Bacillus Thuringiensis Var. San Diego
HRP920198A2 (en) Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin
PL166417B1 (pl) Sposób selekcji wariantów lub mutantów spon t a nicznych szczepy Baciiius thuringiensis PL PL PL PL PL PL
IL86242A (en) Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use
CZ286501B6 (en) Mutant of Bacillus thuringiensis micro-organism deposited as subsp. tenebrionis DSM 5480, process of its preparation and pesticidal agent containing thereof
Jayaraman et al. Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies