NO305131B1 - Mutant eller variant av Bacillus thuringiensis som produserer h°ye utbytter av delta-endotoksin, anvendelse av en mutant av B. thuringiensis, pesticid blanding eller preparat omfattende delta-endotoksinet samt anvendelse derav - Google Patents
Mutant eller variant av Bacillus thuringiensis som produserer h°ye utbytter av delta-endotoksin, anvendelse av en mutant av B. thuringiensis, pesticid blanding eller preparat omfattende delta-endotoksinet samt anvendelse derav Download PDFInfo
- Publication number
- NO305131B1 NO305131B1 NO921950A NO921950A NO305131B1 NO 305131 B1 NO305131 B1 NO 305131B1 NO 921950 A NO921950 A NO 921950A NO 921950 A NO921950 A NO 921950A NO 305131 B1 NO305131 B1 NO 305131B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- delta
- mutant
- thuringiensis
- endotoxin
- dsm
- Prior art date
Links
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 title claims abstract description 58
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 title claims description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 24
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title claims description 16
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 title abstract description 32
- 241000193369 Bacillus thuringiensis serovar tenebrionis Species 0.000 claims abstract description 29
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 42
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 101710151559 Crystal protein Proteins 0.000 claims description 11
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 claims description 11
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 241000193363 Bacillus thuringiensis serovar aizawai Species 0.000 abstract description 2
- 241000193365 Bacillus thuringiensis serovar israelensis Species 0.000 abstract description 2
- 241001147758 Bacillus thuringiensis serovar kurstaki Species 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 26
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 15
- 241000193367 Bacillus thuringiensis serovar san diego Species 0.000 description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 5
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 4
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 238000001350 scanning transmission electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000007362 sporulation medium Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001124134 Chrysomelidae Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001529716 Entomophaga Species 0.000 description 1
- 241000471162 Erysipelothrix larvae Species 0.000 description 1
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000254109 Tenebrio molitor Species 0.000 description 1
- 241000254107 Tenebrionidae Species 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000012216 bentonite Nutrition 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000007653 larval development Effects 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000406 trisodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010246 ultrastructural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
- A01N63/23—B. thuringiensis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/075—Bacillus thuringiensis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Handelspreparater av Bacillus thuringiensis brukes over hele verden for biologisk kontroll av skadeinsekter. Fordelene ved disse bakterielle insekticider er at de er meget selektive for et meget begrenset antall av målinsekter og at de er bionedbrytbare.
Handelspreparater av Bacillus thuringiensis kan brukes helt opp til innhøstningstiden uten skadelige effekter.
Bacillus thuringiensis er en stavformet, aerob sporedannende bakterie som er eneståendekarakterisert vedat den under sporuleringsprosessen utvikler eller produserer én eller flere inneslutninger, ofte betegnet som paraspore krystaller. Disse krystaller er sammensatt av høymolekylære proteiner, ofte betegnet som delta-endotoksiner. Disse delta-endotoksinene er den aktive ingrediensen i de tilgjengelige kommersielle preparater av Bacillus thuringiensis.
Det er blitt identifisert mange stammer av B. thuringiensis med forskjellige insektsvertsspektra. De klassifiseres i forskjellige underarter basert på sine flagellære antigener. Av spesiell interesse er Bacillus thuringiensis underart kurstaki og underart aizawai som brukes for kontroll av forskjellige skadelige sommer-fugler, Bacillus thuringiensis underart israelensis som brukes for kontroll av tovingete skadeinsekter og Bacillus thuringiensis underart tenebrionis som bruks for kontroll av skadelige biller.
En første isolering av en billegiftig Bacillus thuringiensis ble rapportert i 1983 (A. Krieg et al., Z.and.Ent. 96, 500-508, europeisk patentpublikasjon EP 0149162 A2).
Isolatet som ble betegnet Bacillus thuringiensis underart tenebrionis er innlevert i den tyske samling av mikroorganismer under deponeringsnummer DSM 2803. Bacillus thuringiensis underart tenebrionis ble isolert i 1982 fra en død puppe av melorm, Tenebrio molitor ( Tenebrionidae, Coleoptera). Denne stammen produserer innenfor hver celle én spore og én eller flere insekticide paraspore krystaller som har en flat plateliknende form med en kantlengde på ca. 0,8 til 1,5fim. Den tilhører serotypen H8a,8b og patotype C av Bacillus thuringiensis (Krieg et al., System.Appl.Microbiol. 9, 138-141, 1987, US-patent 4 766 203,
Dette giftstoffet er bare virksomt mot visse bladspisende billelarver ( Chrysomelidae), men er ineffektive mot larver ( Lepidoptera), mygg { Diptera) eller andre insekter.
Bacillus thuringiensis underart tenebrionis har vist seg å være meget effektiv for bekjempelse av colorado potetbillelarvene. Etter opptak av krystaller og sporer fra Bacillus thuringiensis underart tenebrionis eller isolerte krystaller, så vil larvene og også til en viss grad de voksne insektene av colorado potetbillen ( Leptinotarsa decemlineata) stoppe å spise. Larvestadiene L1-L3 dør i løpet av 1-3 døgn (Schnetter et al. i "Fundamental&applied aspects of invertebrate pathology", red. R.A. Samson et al., Proceedings of the 4th Int. colloquium of Invertebrate Pathology, s. 555, 1986).
Det er nylig blitt påvist at Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis i tillegg til de billeaktige krystaller også fremstiller en annen type parasporale krystaller som er spindel-, speroidal- eller plateformete (A.M. Huger & A. Krieg, J.Appl.Ent. 108, 490-497, 1989). Aktiviteten av denne andre typen krystaller er ikke kjent for tiden.
Fire kommersielle produkter av Bacillus thuringiensis underart tenebrionis er utviklet for kontroll av skadebiller. N0V0D0R<®>fra Novo Nordisk A/S, TRIDENT<®>fra Sandoz og DiTerra<®>fra Abbott Laboratories Inc., og Foil<®>fra Ecogen.
Isolasjon av en annen billegiftig Bacillus thuringiensis-stamme er angitt i 1986 (Hernnstadt et al., Bio/Technology vol. 4, 305-308, 1986, US-patent 4 764 372, 1988) . Denne stammen som er betegnet " Bacillus thuringiensis underart san di ego", M7, er innlevert ved det Northern Regional Research Laboratory, USA, under deponeringsnummer NRRL B-15939. Et kommersielt produkt basert på Bacillus thuringiensis subsp. san diego er blitt utviklet av Mycogen Corp.
Sammenliknende studier over Bacillus thuringiensis subsp. teneJbriozzis, DSM 2803 og Bacillus thuringiensis subsp. san diego, NRRL-B 15939 innbefatter fenotypisk karakterisering av de vegeta-tive celler, karakterisering av de toksiske parasporale krystaller og analyser av plasmid DNA, har imidlertid vist at Bacillus thuringiensis subsp. san diego tilsynelatende er identisk med den tidligere isolerte stammen DSM 2803, Bacillus thuringiensis subsp. tidligere isolerte stammen DSM 2803, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis (Krieg et al., J.Appl.Ent. 104, 417-424, 1987). Videre har det vist seg at nukleotidsekvensene og avledete aminosyre-sekvenser hos de billeaktive delta-endotoksingenene fra Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis og Bacillus thuringiensis subsp. san diego er identiske.
Under de samme kulturbetingelser vil også de ovennevnte andre typer av krystaller bli syntetisert av Bacillus thuringiensis subsp. san diego (A.M. Huber & A. Krieg, J.Appl.Ent. 108, 490-497, 1989) .
Ifølge H. de Barjac & E. Frachon (Entomophaga 35(2), 233-240, 1990) så er "san diego"-isolatet lik " tenebrionis" og det er derfor ikke mulig å opprettholde " san diego"-isolatet som en annen underart.
Evnen for Bacillus thuringiensis-stammer for kontroll eller bekjempelse av skadelige biller er avhengig av en effektiv og økonomisk produksjon av de billeaktive toksiner og på styrken på det fremstilte produktet. Dette er igjen avhengig av den mengde delta-endotoksiner som kan fremstilles ved fermentering eller dyrking av de billeaktive Bacillus thuringiensis-stammer.
B. thuringiensis har i mange år vært brukt for fremstilling av insekticider, og skjønt det ville være meget fordelaktig med mutanter av B. thuringiensis med et øket utbytte av delta-endotoksiner, så er hittil ingen slike mutanter blitt beskrevet. Mutanter som gir høyere utbytter av delta-endotoksiner vil gi en langt mer effektiv og økonomisk produksjon av Bacillus thuringiensis-toksiner og gi en mulighet for fremstilling av
B. thuringiensis-produkter med økende styrke uten økende omkostninger. Dette vil igjen være fordelaktig for brukeren ved at man kan bruke reduserte volumer av pesticidene som eventuelt skal lagres og brukes over et gitt areal. I tillegg vil brukerne ha mindre tomgods som skal kastes, hvorved man reduserer miljø-problemer generelt.
Forbedringer med hensyn til fremstilling av delta-endotoksiner ved hjelp av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis ved hjelp av mutasjoner er tidligere ikke blitt rapportert.
Ett problem forbundet med bruken av spesielt B. thuringiensis underart tenebrionis for kontroll av billelarver har vært den nødvendig å anvende relativt store mengder av preparatet på de områder som skal behandles, såsom fra 5 til 10 liter/ha sammenliknet med 1-2 liter/ha av de fleste andre B. thuringiensis-produkter og de fleste andre insekticider.
Det har derfor vært et sterkt behov for produkter med forbedret styrke.
Én måte for å unngå dette problemet ville være å konsentrere preparatene. Dette vil imidlertid øke produksjonsomkostningene betydelig i forhold til de besparelser man vil oppnå med hensyn til lagring og transport. En langt mer elegant løsning vil være å kunne skape mutanter av eksisterende B. thuringiensis-stammer som vil være istand til å produsere vesentlig større mengder av delta-endotoksiner pr. celle.
SAMMENDRAG AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse angår følgelig i ett aspekt en mutant Bacillus thuringiensis-stamme som er istand til å produsere vesentlig større mengder av delta-endotoksinene enn de opprinnelige stammer og hvor mutanten av B. thuringiensis-stammen hører til underarten tenebrionis, og er deponert i DSM under deponeringsnummer 5480.
Videre angår oppfinnelsen bruken av slike mutant Bacillus thuringiensis-stammer for produksjon av pesticidale produkter, foruten slike produkter som sådan som inneholder som den aktive ingrediens de delta-endotoksiner som fremstilles av de mutanteBacillus thuringiensis-stammer ifølge foreliggende oppfinnelse.
Oppfinnelsen omhandler også en pesticid blanding eller preparat som omfatter delta-endotoksinet fremstilt fra B. thuringiensis-mutanter ifølge krav 1.
Videre angår oppfinnelsen en anvendelse av pesticid preparat eller blanding for å bekjempe skadeinsekter ved at man anvender en sammensetning ifølge foreliggende oppfinnelse på et område hvor det er ønskelig å bekjempe skadeinsekter som er påvirkbare av aktiviteten fra nevnte delta-endotoksiner.
INNLEVERING AV MIKROORGANISMER
For det formål å beskrive foreliggende oppfinnelse i detalj er en mutant av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis som produserer høye mengder av delta-endotoksin, produsert i den tyske samling av mikroorganismer og cellekulturer GmbH, Mascheroderweg lb, D-33 00 Braunschweig, Tyskland, med det formål å søke patent,
på den dato som er angitt nedenfor. DSM er et internasjonalt institutt under Budapest-konvensjonen som sikrer varig dokumen-tasjon ifølge regel 9 i nevnte konvensjon.
Innleveringsdato: 10. august 1989
Innleverers ref.: NB 176-1
DSM-betegnelse: DSM 5480
Mutanten DSM 5480 ble oppnådd ved mutering av Bacillus thuringiensis substp. tenebrionis stamme DSM 5526, som også er blitt deponert under Budapest-konvensjonen som angitt nedenfor.
Innleveringsdato: 14. september 1989
Innleverers ref.: NB 125
DSM-betegnelse: DSM 5526
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Oppfinnelsen angår generelt varianter eller mutanter av Bacillus thuringiensis som produserer høye mengder av aktive delta-endotoksiner sammenliknet med de opprinnelige stammer.
I denne sammenheng vil uttrykket "høye mengder" fortrinnsvis bety minst dobbelt så store mengder eller mer.
Både i sitt generelle aspekt og mer spesifikt slikt dette er beskrevet nedenfor, så vil delta-endotoksiner som fremstilles av en mutant av B. thuringiensis ha en aktivitet som retter seg mot de samme skadeinsekter som de opprinnelige B. thuringiensis delta-endotoksiner, f.eks. mot sommerfugler (mutanter av B. thuringiensis subsp. kurstaki og subsp. aizawai) , tovinger (mutanter fra B. thuringiensis subsp. israelensis) eller biller (mutanter fra B. thuringiensis subsp. tenebrionis).
Ifølge oppfinnelsen hører nevnte B. thuringiensis-stammen til underarten tenebrionis og de delta-endotoksiner som fremstilles, er aktive mot biller.
Andre utførelser av oppfinnelsen angår varianter eller mutanter av B. thuringiensis subsp. tenebrionis-stammer som er istand til å produsere en parasporal krystall som har en midlere kantlengde på 2/xm eller mer.
En mer spesifikk utførelse innbefatter bruken av den inn-leverte mutanten B. thuringiensis subsp. tenebrionis DSM 5480.
Under arbeid med denne oppfinnelsen ble det isolert en mutant av B. thuringiensis subsp. tenebrionis (DSM 5480) som hadde en mer enn dobbelt økning av delta-endotoksinproduksjonen sammenliknet med foreldrestammen (DSM 5526). Fasekontrastmikroskopi, scanning-elektronmikroskopi og transmisjonselektronmikroskopi av denne mutanten indikerer at den høye produktiviteten fra denne mutanten skyldes forandringer i reguleringen av delta-endotoksin-produks jonen i forhold til sporuleringen, noe som resulterer i produksjon av proteinkrystaller som er opptil 5 ganger større enn de krystaller som fremstilles av de foreliggende billeaktive Bacillus thuringiensis-stammer. Den nære korrelerasjonen mellom krystalldannelsen og sporuleringen synes å ha blitt fjernet, hvorved mutanter fremstiller større mengder av delta-endotoksin før sporulering.
Ett aspekt av oppfinnelsen angår bruken av en variant eller en mutert stamme av oppfinnelsen i en metode for fremstilling av insekticidale B. thuringiensis-produkter, og i nevnte metode vil varianten eller mutanten av B. thuringiensis-stammen bli kultivert eller dyrket i et egnet kulturmedium som inneholder kilder for karbon, nitrogen og andre komponenter som er velkjente for fagfolk, i et egnet tidsrom, hvoretter man utvinner delta-endotoksinene alene eller i kombinasjon med celler og/eller andre sporer fra kulturmediet.
Videre angår oppfinnelsen de delta-endotoksinprodukter som oppnås fra nevnte B. thuringiensis-stammer for bruk i pesticidale sammensetninger hvor de anvendes som en aktiv komponent.
I slike sammensetninger vil delta-endotoksiner ifølge foreliggende oppfinnelse enten brukes alene eller i kombinasjon med andre biocidalaktive produkter.
Oppfinnelsen angår også slike pesticidale sammensetninger eller preparater som inneholder B. thuringiensis delta-endotoksinprodukter ifølge foreliggende oppfinnelse i blanding med landbruksmessig akseptable fortynningsmidler eller bærestoffer.
Oppfinnelsen angår også slike pesticidale sammensetninger eller preparater som inneholder et B. thuringiensis delta-endotoksinprodukt, og hvor preparatet i flytende form har en styrke på minst 15000 BTTU/g, noe som tilsvarer minst 3% vekt/vekt bille-insekticidalt krystallprotein, eller hvor det pesticidale preparatet i tørr form har en styrke på minst 50 000 BTTU/g, noe som tilsvrer minst 10% vekt/vekt av det billeinsekticidale krystallprotein.
En spesifikk utførelse av oppfinnelsen angår pesticidale sammensetninger eller produkter fremstilt fra DSM 5480 som har minst dobbelt styrke i forhold til pesticidale preparater eller sammensetninger fremstilt fra DSM 2803 eller andre billeaktive Btt-stammer.
Preparater eller sammensetninger ifølge foreliggende oppfinnelse kan være i velkjente former av den type som brukes i landbruket, f.eks. som en suspensjon, en dispersjon, en vandig emulsjon, et støvpulver, et dispergerbart pulver, et emulgerbart konsentrat eller i form av granulater. Det kan også opparbeides i en egnet form for direkte påføring eller som et konsentrat eller som et primært preparat som krever fortynning med en egnet mengde vann eller et annet fortynningsmiddel før anvendelse.
Konsentrasjonen av de insekticidalt aktive B. thuringiensis delta-endotoksiner i preparater ifølge foreliggende oppfinnelse, når disse brukes alene eller i kombinasjon med andre pesticider, vil ved påføring på planter vanligvis ligge i konsentrasjonsområde fra 0,5 til ca. 25 vektprosent, mer spesielt fra 1-15 vektprosent.
Et annet aspekt av oppfinnelsen angår en anvendelse av et preparat eller blanding ifølge oppfinnelsen for bekjempelse av skadeinsekter hvor en pesticidal sammensetning eller preparat påføres et område som er infisert med nevnte skadeinsekt.
I en spesifikk utførelse vil det skadeinsekt som skal bekjempes høre til gruppen som innbefatter biller, tovinger eller sommerfugler, da spesielt en bille, f.eks. colorado potetbillen.
I spesifikke utførelser kan skadeinsektet kontrolleres eller bekjempes ved at man anvender ca. 23 0 ml/mål av et flytende preparat, eller ved å anvende ca. 112 g/mål av et tørt pesticidalt preparat eller sammensetning.
Det aktive B. thuringiensis-preparatet eller sammensetning ifølge foreliggende oppfinnelse kan påføres direkte på planten, f.eks. ved sprøyting eller vanlig spredning i tørr tilstand på det tidspunkt da insektet er begynt å opptre på planten. Den fore-trukne påføringsmetoden er sprøyting. Det er vanligvis viktig å oppnå god kontroll av skadeinsektene under tidlige trinn av larveutviklingen, fordi plantene på dette tidspunkt har lidd minst skade.
I én metode for å mutere Bacillus thuringiensis-stammer og utvelge slike mutanter som er istand til å produsere vesentlig større mengder av delta-endotoksiner enn de opprinnelige stammer, så vil foreldrestammen først:
i) behandles med et mutagen,
ii) hvoretter de således behandlete mutanter dyrkes på et medium som er egnet for seleksjon av asporogene og/eller
oligosporogene stammer,
(iii) utvelge gjennomskinnelige kolonier som deretter dyrkes i et medium som ikke blir flytende ved oppvarming, og (iv) hvoretter man utvelger de virkelige asporogene stammer ved at koloniene utsettes for en varmebehandling.
Ifølge en utførelse av denne fremgangsmåten blir de således utvalgte kolonier dyrket i et normalt produksjonsmedium, hvoretter man foretar et endelig utvalg av stammer som er istand til å produsere økende mengder av delta-endotoksin.
I trinn (i) i ovennevnte fremgangsmåte kan mutagenet være ethvert egnet vanlig kjent kjemisk mutagen, såsom N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin, eller etylmetansulfonat, eller foreldrestammen kan behandles med elektromagnetisk bestråling, f.eks. gamma-, røntgen- eller UV-stråling.
I trinn (ii) kan et egnet medium være et modifisert nærings-sporuleringsmedium som innbefatter fosfat (NSMP-medium) slik det er beskrevet av Johnson et al., i "Spores VI": red. P. Gerhardt et al., p. 248-254, 1975.
I trinn (iv) ifølge fremgangsmåten kan et egnet medium være et NSMP-medium tilsatt MgCl2og Gelrite, Kelco.
En annen fremgangsmåte for å oppnå en høytproduserende variant eller mutant kan være at man dyrker foreldrestammen i et væskemedium og velger ut spontane mutanter eller varianter etter å ha spredd kulturmediet på et agarmedium som er egnet for seleksjon av asporogene og/eller oligosporogene mutanter.
Andre fremgangsmåter for å undersøke og utvelge høytprodu-serende varianter eller mutanter kan være å bruke massen av disse mutanter direkte gjennom sentrifugering eller andre anordninger for å separere massen.
Eksempel 1
En mutant av B. thuringiensis subsp. tenebrionis med en mer enn to gangers økning i delta-endotoksinproduksjonen er blitt isolert. Fasekontrastmikroskopi, scanning elektronmikroskopi og transmisjonelektronmikroskopi av denne mutanten indikerer at dens høye produktivitet skyldes forandringer med hensyn til reguleringen av delta-endotoksinproduksjonen i forhold til sporulering, noe som resulterer i en produksjon av proteinkrystaller som er opptil 5 ganger større enn de krystaller som fremstilles av eksisterende billeaktive Bacillus thuringiensis-stammer. Den nære korrelasjonen mellom krystall-dannelse og sporulering synes å være fjernet, og mutanten produserer høyere mengder av delta-endotoksin før sporulering.
Fremstilling av høyutbyttemutant
Sporer av B. thuringiensis subsp. tenebrionis-stamme DSM5526 ble Y-bestrålet til en dose på 7 kGy. De bestrålte sporene ble så spredd utover NSMP agarplater (modifiserte næringssporulerings-medium som innbefattet fosfat, som beskrevet av Johnson et al., i "Spores VI": red. P. Gerhardt et al., s. 248-254, 1975). Dette medium er egnet for seleksjon av asporogene og/eller oligosporogene mutanter.
NSMP-agarplatene ble inkubert ved 30°C i 2-3 døgn. Gjennomskinnelige kolonier ble tatt ut og overført til NSMP gelrittplater (NSMP-medium supplementert med MgCl2(0,57 g/l) og Gelrite, Kelco (20 g/l)).
NSMP-gelrittplatene ble inkubert i 1 time ved 90°C og ytterligere inkubert i fra 1 til 2 døgn ved 30°C.
Mutanter som vokste bra på nevnte NSMP-gelrittplater ble så valgt ut. På denne måten fikk man fjernet alle asporogene mutanter ettersom de ikke vokser etter varmebehandlingen.
De utvalgte mutanter ble dyrket i risteflasker som inneholdt et kommersielt medium. De mengder delta-endotoksin som ble fremstilt ble bestemt ved immunologiske metoder beskrevet nedenfor.
Bare mutanter som ga betydelig høyere mengder delta-endotoksin enn foreldrestammen ble valgt ut.
Morfologien på de utvalgte mutanter på fast medium og i flytende media ble undersøkt ved fasekontrastmikroskopi (x 2500) og ved scanning og transmisjonselektroskopi. Antallet sporer og krystaller ble tellet, og man bestemte størrelsen på proteinkrystallene.
Blant de fremstilte mutanter valgte man én (DSM 5480) for sin enestående evne til å produsere delta-endotoksin.
Den mengde delta-endotoksin som ble fremstilt av mutanten DSM 5480 ble sammenliknet med tilsvarende produksjon for DSM 2803 som er det opprinnelige isolatet av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, og Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis stamme DSM 5526 som brukes for fremstilling av NOVODOR<®>, Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis stamme NB178, isolert fra Sandoz Bacillus thuringiensis tenebrionis produkt TRIDENT<®>fra 1989, stamme NB 198, isolert fra Sandoz B. thuringiensis subsp. tenebrionis produkt TRIDENT<®>fra 1990, " Bacillus thuringiensis subsp. san diego" stamme NRRL-B-15939, og stamme NB 197 isolert fra Mycogens "B. thuringiensis subsp. san diego"-produkt M-ONE<®>fra 1990. Som vist i tabell I i eksempel 2 var utbyttet hos den forbedrete mutanten ifølge foreliggende oppfinnelse 2-3 ganger høyere enn det man tilsvarende fant hos de billeaktige stammer av B. thuringiensis som er tilgjengelig idag.
Eksempel 2
I dette eksempel ble delta-endotoksinutbyttet av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis mutant DSM 5480 sammenliknet med tilsvarende utbytter for Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis stamme DSM 2803 (det opprinnelige isolatet av subsp. tenebrionis), DSM 5526 (produksjonsstamme hos Novo-Nordisk), og NB 178 og NB 198 (produksjonsstamme hos Sandoz) og Bacillus thuringiensis subsp.
san diego, stamme NRRL-B 15939 og NB 197 (produksjonsstamme fra Mycogen) i et kommersielt medium. Hver av stammene ble dyrket i
17 timer ved 30°C på skråagar med den følgende sammensetning uttrykt som g/l destillert vann. 5 ml av en suspensjon av celler fra hver stamme ble så overført til 100 ml produksjonsmedium i 500 ml Erlenmeyer-kolber. Produksjonsmediet besto av de følgende komponenter i de angitte mengder (uttrykt som gram pr. liter vann fra springen).
De inokulerte kolbene ble inkubert ved 30°C ved visping (250 omdreininger/min.). Etter 96 timers inkubering ble kulturmediet analysert for utbytte av delta-endotoksin ved immunologiske metoder.
Mengdene av det fremstilte delta-endotoksin fra de individuelle stammer ble bestemt ved en immunoelektroforesemetode (RIE) og en fotometrisk immunoprøve (PIA) ved å bruke antistoffer som var utviklet mot rensete proteinkrystaller fra Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
400 mg av hvert kulturmedium ble veiet. 7 ml trinatrium-fosfatbuffer (0,125 M, pH 12) ble tilsatt hver prøve. Suspensjonene ble ristet i 1 time for å oppløseliggjøre delta-endotoksinproteinene.
Prøvene ble så sentrifugert ved 3500 rpm i et kvarter, og supernatantene ble undersøkt for delta-endotoksin ved nevnte immunoelektroforesemetode mot antiserum som var utviklet mot rensete proteinkrystaller fra B. thuringiensis subsp. tenebrionis. Mengden av delta-endotoksin ble bestemt relativt til en standard med kjent innhold av krystallprotein.
Konsentrasjonen av krystallprotein ble også bestemt ved en fotometrisk immunoprøve. Krystallproteinene ble oppløst i en alkalisk oppløsning. De oppløste proteiner ble så utfelt ved hjelp av sine antistoffer. Hastigheten på denne reaksjonen ble bestemt turbidimetrisk. Mengdene av delta-endotoksin ble bestemt relativt til en standard med kjent innhold av krystallprotein.
Krystallantigener for produksjon av antistoffer som ble brukt i prøvene ble oppnådd fra krystaller isolert fra B. thuringiensis subsp. tenebrionis.
Polyklonale antistoffer ble så utviklet ved å injisere kaniner subkutant hver 14. dag med 0,25 mg krystallantigen.
De oppnådde resultater er vist i de følgende tabeller Ia og Ib. Utbyttet av delta-endotoksin er uttrykt som BTTU/g (enheter pr. g kulturmedium bestemt ved immunoelektroforese, RIE, eller ved en fotometrisk immunoprøve, PIA). Verdien som ble brukt for ren subsp. tenebrionis-krystallprotein er 500 000 BTTU/g. De verdier som er angitt i tabell Ia nedenfor er et middel av 6-7 uavhengige fermenteringer, mens de som er angitt i tabell Ib er middel av 3 uavhengige fermenteringer.
Det fremgår av tabellene Ia og Ib at DSM 5480 produserer mer enn tre ganger mer delta-endotoksin enn den opprinnelige stammen av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 2803 og " Bacillus thuringiensis subsp. san diego", stamme NRRL-B 15939 og mer enn to ganger mengden av det som fremstilles av de stammer som brukes idag for fremstilling av kommersielle produkter av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis.
Fasekontrastmikroskopi, scanning elektronmikroskopi og transmisjonselektronmikroskopi av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis mutant DSM 5480 har vist at de proteinkrystaller som fremstilles av denne mutanten er langt større enn de tilsvarende proteinkrystaller som fremstilles av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis stamme DSM 2803, DSM 5526, NB 178 og NB 198, og " Bacillus thuringiensis subsp. san diego", stammene NRRL-B 15939 og NB 197.
Kulturmedium av Bacillus thuringiensis subsp. tenebrionis mutant DSM 5480 ble undersøkt for aktivitet mot larver av colorado potetbille. De økende mengder av delta-endotoksin som fremstilles av mutant DSM 5480 som var bestemt ved hjelp av immunologiske metoder ble klart også reflektert i den biologiske aktiviteten mot larver av colorado potetbillen.
Eksempel 3
I dette eksempelet sammenliknet man sporulerings- og para-sporalkrystalldannelsen hos B. thuringiensis subsp. tenebrionis stammene DSM 2803, DSM 5526, NB 178 og NB 198, samt mutanten DSM5480 og " B. thuringiensis subsp. san diego" stammene NRRL-B 15939 og NB 197 både på fast og flytende medium.
Hver av stammene ble dyrket i 2 døgn ved 30°C på agarplater av den følgende sammensetning uttrykt som g/l destillert vann.
Hver av stammene ble også dyrket i et flytende medium. Alle stammer ble dyrket i 17 timer ved 30°C på skråagar. 5 ml av en cellesuspensjon fra hver rase ble så overført til 500 ml'sErlenmeyerkolber med riflet bunn og hvor hver kolbe inneholdt 100 ml medium.
Mediet inneholdt de følgende komponenter i de angitte mengder (uttrykt som g/l vann fra springen).
Flytende medium:
De inokulerte kolbene ble inkubert ved 3 0°C med risting (250 omdreininger pr. minutt) i 96 timer.
Morfologien av stammene på det faste medium og i det flytende medium ble undersøkt daglig ved hjelp av fasekontrastmikroskopi (x 2500). Antall sporer og krystaller ble tellet, og man bestemte størrelsen på de parasporale krystaller. Et par utvalgte prøver ble også undersøkt ved scanning og transmisjonselektronmikroskopi.
B. thuringiensis subsp. tenebrionis stamme DSM 2803, DSM 5526, NB 178 og NB 198 og "B. thuringiensis subsp. san diego" stamme NRRL-B 1593 9 og NB 197 sporulerte alle sammen bra på alle media. Før celleoppløsning inneholdt hver celle en spore og en parasporal krystall. Størrelsen på krystallene varierte fra 0,4 til 0,9-1,1/xm i lengde på det tidspunkt da cellene ble oppløst. Den midlere størrelsen på proteinkrystallene var 0,6-0,7/xm i lengde.
Mutant DSM 5480 produserte bare få sporer (<10 sporer/ml) på det faste mediet og i det definerte flytende mediet. Før celle-oppløsning inneholdt de fleste cellene en stor proteinkrystall, men ingen sporer. Størrelsen på proteinkrystallene var fra 0,4-0,7/xm til 5,0/im, og den midlere størrelse på proteinkrystallene var 2,2-2,3/xm i lengde.
Ultrastrukturen analyse av celler fra disse media ved hjelp av transmisjonselektronmikroskopi viste at sporuleringsprosessen i mutanten hadde startet, men var ikke ferdig på det tidspunkt da cellene ble oppløst. Sporuleringsprosessen hadde nådd forskjellige trinn i forskjellige celler. I de celler hvor sporoleringen bare hadde nådd trinn 2 (forsporeseptumdannelse), fylte proteinkrystallene hele cellene.
I produksjonsmediet (eksempel 2) produserte mutanten et høyere antall sporer (10 7 -10 8sporer/ml). I dette medium var sporuleringsfrekvensen hos mutanten fra 10-100 ganger lavere enn hos foreldrestammen.
Mutanten har således beholdt sin evne til å produsere normale sporer. Sporuleringsfrekvensen hos mutanten synes på den annen side å være strengt avhengig av mediet.
Størrelse på proteinkrystallene fremstilt ved hjelp av de individuelle stammene er vist i tabellene Ila og Ilb.
Det fremgår fra tabellene Ila og IIb at mutant DSM 5480 produserer langt større proteinkrystaller enn noen annen av de billeaktive B. t.-stammer som er tilgjengelige idag.
Det fremgår av de oppnådde data at reguleringen av delta-endotoksinproduks jonen i forhold til sporuleringen er blitt forandret hos mutanten.
Det synes som om mutanten produserer proteinkrystallene før utviklingen av sporene, hvorved man gir cellene en lengre periode for produksjon av delta-endotoksin, noe som resulterer i produksjon av langt større proteinkrystaller på det tidspunkt når cellene oppløses, enn hos foreldrestammen.
Avhengig av tilgjengelige næringsstoffer og størrelsen på proteinkrystallene i cellene på det tidspunkt når sporuleringen finner sted, så vil en normal spore bli utviklet før celle-oppløsningen.
Eksempel 4
I dette eksempel ble den høyproduktive Btt-mutanten DSM 5480 brukt for å fremstille produkter med sterk virkning for bekjempelse av larver av colorado potetbillen.
DSM 5480 ble fermentert på det produksjonsfermenteringsmedium som er beskrevet i eksempel 2, i en gjennomluftet rørt produksjons-fermenteringstank. Etter 96 timer ble mediet innvunnet ved hjelp av sentrifugering i en kontinuerlig sentrifuge.
Det konsentrerte produktet som inneholdt de aktive proteinkrystallene ble stabilisert ved tilsetning av mikrobielle konserveringsmiddel, hvoretter pH ble justert til 5,0.
En del av det konsentrerte produktet ble forstøvningstørket og senere brukt for fremstilling av et fuktbart pulver. Resten av det konsentrerte produktet ble direkte brukt for fremstilling av to vandige flytbare konsentrater (FC).
Det fuktbare pulveret ble fremstilt som beskrevet i tabell III, mens de to flytbare konsentrasjonene har en sammensetning som angitt i tabell IV.
Ved å bruke en verdi på 500 000 BTTU/g for rent krystallprotein, så vil innholdet av aktivt krystallprodukt i preparatene være som følger:
Emulgeringsmidlene ble valgt blant en rekke forskjellige suspenderingsmidler og fuktemidler av den type som normalt brukes for opparbeiding av pesticidprodukter i landbruket.
Anti-sammenklistringsmiddelet er et hydrofilt silisium-dioksyd, mens det inerte fyllstoffet ble valgt fra de typer inerte fyllstoffer som vanligvis brukes, dvs. bentonitter, uorganiske salter eller forskjellige typer leire.
De konserveringsmidler som ble brukt i nevnte flytbare konsentrater ble valgt fra forskjellige matvare- og kosmetiske konserveringsmidler. pH-regulatoren var en uorganisk syre.
Eksempel 5
Det ble utført et feltforsøkt for å prøve den biologiske effekten av den høyproduktive Btt-mutanten DSM 5480 på hovedmålet, dvs. larver av colorado potetbillen. Det ble samtidig utført en sammenlikning med to kommersielle produkter, dvs. Trident<®>og M-one<®>. Nytteplanten var poteter.
Potetplantene ble sprøytet tre ganger, dvs. 20. juli,
27. juli og 3. august (annen generasjons larver).
Produktene og de anvendte doser er som følger:
Den midlere prosent kontroll av CPB-larver sammenliknet med den ubehandlete kontroll er gitt i tabell V. Colorado potetbille-trykket var meget sterkt i den ubehandlete kontrollen: 370 larver pr. 20 planter 1. august og 904 larver pr. 20 planter den 8. august.
Disse resultater viser klart at produkter fremstilt ved hjelp av den høyproduktive mutanten DSM 5480 er meget effektiv for bekjempelse av colorado potetbillelarver i felten. Krystallprotein fremstilt ved hjelp av denne høyproduktive stammen er helaktive i form av 350 ml/mål av NOVODOR<®>FC, dvs. gir de samme resultater som Trident brukt i en mengde på 935 ml/mål og som M-one<®>i en mengde på 468 ml/mål.
Claims (9)
1. Mutant av Bacillus thurigiensis,
karakterisert vedat mutanten er den deponerte mutant B. thuringiensis subsp. tenebrionis, DSM 5480, som er istand til å produsere to eller flere ganger mer av de insekticide delta-endotoksiner i forhold til sin opphavstamme.
2. Anvendelse av en mutant av B. thuringiensis ifølge krav 1, for å fremstille et B. thuringiensis delta-endotoksinprodukt,karakterisert vedat mutanten eller varianten av B. thuringiensis-stammen blir dyrket i et egnet kulturmedium inneholdende kilder for karbon, nitrogen og andre komponenter, i et egnet, tidsrom hvoretter et insekticid produkt inneholdende delta-endotoksiner utvinnes alene eller i kombinasjon med celler og/eller sporer fra kulturmediet, og hvoretter dette produkt eventuelt blandes med landbruksmessig akseptable fortynningsmidler.
3. Pesticid blanding,karakterisert vedat den omfatter delta-endotoksinet fremstilt som en aktiv komponent; fra Bacillus fchuringiensis-mutanter ifølge krav 1, istand til å produsere en parasporal krystall som har en midlere kantlengde som er minst to ganger lengre enn den midlere kantlengden på parasporalkrystallene hos opphavstammen, f.eks. en parasporal-krystall som har en midlere kantlengde på 2/xm eller mer og at det har minst to ganger større styrke enn pesticide preparater fremstilt fra DSM 2803 eller andre billeaktive Btt-stammer.
4. Blanding ifølge krav 3,karakterisert vedat delta-endotoksinproduktet brukes enten alene eller i kombinasjon med andre biocide aktive produkter, fortrinnsvis i blanding med et landbruksmessig akseptabelt fortynningsmiddel eller bærestoff, såsom et faststoff eller en væske eventuelt i forbindelse med et overflateaktivt middel.
5. Pesticid preparat eller blanding ifølge krav 3 eller 4,karakterisert vedå ha en styrke som er mer enn to ganger større enn for pesticide blandinger fremstilt med opphavstammen, f.eks. i tilfelle av et flytende pesticid preparat, å ha en styrke på minst 15 000 BTTU/g, noe som tilsvarer minst 3% v/v av et bille-insekticid krystallprotein, og/eller, i tilfelle av et tørt pesticid preparat,å ha en styrke på minst 50 000 BTTU/g, noe som tilsvarer minst 10% v/v av bille-insekticid krystallprotein.
6. Pesticid preparat ifølge krav 3,
karakterisert vedå være fremstilt fra DSM 5480, ved å ha minst to ganger større styrke enn pesticide preparater fremstilt fra DSM 2803 eller andre billeaktive Btt-stammer.
7. Anvendelse av pesticid preparat eller blanding for å bekjempe skadeinsekter,karakterisert vedat et pesticid preparat ifølge hvert av kravene 3-6 påføres et område som er infisert med nevnte skadeinsekt.
8. Anvendelse ifølge krav 7,karakterisert vedat skadeinsektet hører til gruppen bestående av biller, tovinger eller sommerfugler, idet skadeinsektet f.eks. er en bille, spesielt coloradopotetbillen.
9. Anvendelse ifølge krav 7 eller 8,
karakterisert vedat skadeinsektet kan bekjempes ved å påføre ca. 34 ml/mål av et flytende pesticid preparat, eller ved å anvende ca. 112 g/mål av et tørt pesticid preparat.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK580589A DK580589D0 (da) | 1989-11-17 | 1989-11-17 | Mutant |
| DK627489A DK627489D0 (da) | 1989-12-12 | 1989-12-12 | Mutant |
| PCT/DK1990/000294 WO1991007481A1 (en) | 1989-11-17 | 1990-11-16 | Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO921950D0 NO921950D0 (no) | 1992-05-15 |
| NO921950L NO921950L (no) | 1992-07-13 |
| NO305131B1 true NO305131B1 (no) | 1999-04-06 |
Family
ID=26067985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO921950A NO305131B1 (no) | 1989-11-17 | 1992-05-15 | Mutant eller variant av Bacillus thuringiensis som produserer h°ye utbytter av delta-endotoksin, anvendelse av en mutant av B. thuringiensis, pesticid blanding eller preparat omfattende delta-endotoksinet samt anvendelse derav |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0585215B1 (no) |
| JP (1) | JP2950614B2 (no) |
| KR (1) | KR0157065B1 (no) |
| AT (1) | ATE184645T1 (no) |
| AU (1) | AU647056B2 (no) |
| BG (1) | BG61699B1 (no) |
| CA (1) | CA2068734C (no) |
| DE (2) | DE585215T1 (no) |
| DK (1) | DK0585215T3 (no) |
| ES (1) | ES2060568T3 (no) |
| FI (1) | FI103130B (no) |
| GR (2) | GR940300021T1 (no) |
| HU (1) | HU214685B (no) |
| NO (1) | NO305131B1 (no) |
| RO (1) | RO109862B1 (no) |
| RU (1) | RU2138950C1 (no) |
| SK (1) | SK281286B6 (no) |
| TR (1) | TR28902A (no) |
| WO (1) | WO1991007481A1 (no) |
| YU (1) | YU48440B (no) |
Families Citing this family (139)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6270760B1 (en) * | 1989-12-18 | 2001-08-07 | Valent Biosciences, Inc. | Production of Bacillus thuringiensis integrants |
| US5187091A (en) * | 1990-03-20 | 1993-02-16 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects |
| IL99928A0 (en) * | 1990-11-08 | 1992-08-18 | Agricultural Genetics Co | Biological control of pests |
| US5264364A (en) * | 1991-01-31 | 1993-11-23 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects |
| ZA932792B (en) * | 1992-05-12 | 1993-11-16 | Aeci Ltd | Insecticide composition |
| WO1994028724A1 (en) * | 1993-06-10 | 1994-12-22 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis strains capable of producing large amonts of insecticidal crystal proteins |
| IL110299A0 (en) * | 1993-07-15 | 1994-10-21 | Novo Nordisk Entotech Inc | Formation of and methods for the production of large bacillus thuringiensis crystals with increased pesticidal activity |
| WO1997027305A1 (en) * | 1996-01-26 | 1997-07-31 | Abbott Laboratories | Production of bacillus thuringiensis integrants |
| US5804180A (en) * | 1996-07-17 | 1998-09-08 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis strains showing improved production of certain lepidopteran-toxic crystal proteins |
| US6063756A (en) | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
| US5965428A (en) * | 1996-10-08 | 1999-10-12 | Ecogen, Inc. | Chimeric lepidopteran-toxic crystal proteins |
| KR100458765B1 (ko) * | 2001-12-24 | 2004-12-03 | 학교법인 동아대학교 | 파리목 해충에 대해 방제효과를 가지는 바실러스슈린지에스 균주 및 이를 이용한 미생물 살충제의 제조방법 |
| WO2014056780A1 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Basf Se | A method for combating phytopathogenic harmful microbes on cultivated plants or plant propagation material |
| WO2014082879A1 (en) | 2012-11-27 | 2014-06-05 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
| WO2014082871A1 (en) | 2012-11-27 | 2014-06-05 | Basf Se | Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides |
| US20150313229A1 (en) | 2012-11-27 | 2015-11-05 | Basf Se | Substituted [1,2,4] Triazole Compounds |
| EP2928873A1 (en) | 2012-11-27 | 2015-10-14 | Basf Se | Substituted 2-[phenoxy-phenyl]-1-[1,2,4]triazol-1-yl-ethanol compounds and their use as fungicides |
| WO2014086854A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a plant growth regulator |
| WO2014086850A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal inhibitor of respiratory complex ii |
| WO2014086856A1 (en) | 2012-12-04 | 2014-06-12 | Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) | Compositions comprising a quillay extract and a biopesticide |
| EP2746255A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| WO2014095555A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| EP2746279A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2746278A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746277A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2935224A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| EP2935236B1 (en) | 2012-12-19 | 2017-11-29 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides |
| WO2014095534A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| EP2746266A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | New substituted triazoles and imidazoles and their use as fungicides |
| WO2014095381A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2746256A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Fungicidal imidazolyl and triazolyl compounds |
| EP2746262A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds for combating phytopathogenic fungi |
| EP2746263A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-25 | Basf Se | Alpha-substituted triazoles and imidazoles |
| US20150329501A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-11-19 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds and their use as fungicides |
| EP2746260A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746258A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746257A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2746259A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-25 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| WO2014124850A1 (en) | 2013-02-14 | 2014-08-21 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| BR112015018853B1 (pt) | 2013-03-20 | 2021-07-13 | Basf Corporation | Mistura, composição agroquímica, método para controlar fungos fitopatogênicos, método para proteção do material de propagação dos vegetais e semente revestida |
| WO2015011615A1 (en) | 2013-07-22 | 2015-01-29 | Basf Corporation | Mixtures comprising a trichoderma strain and a pesticide |
| WO2015036059A1 (en) | 2013-09-16 | 2015-03-19 | Basf Se | Fungicidal pyrimidine compounds |
| WO2015036058A1 (en) | 2013-09-16 | 2015-03-19 | Basf Se | Fungicidal pyrimidine compounds |
| CN106061254B (zh) | 2013-10-18 | 2019-04-05 | 巴斯夫农业化学品有限公司 | 农药活性羧酰胺衍生物在土壤和种子施用和处理方法中的用途 |
| US10053432B2 (en) | 2013-12-12 | 2018-08-21 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| US20160318897A1 (en) | 2013-12-18 | 2016-11-03 | Basf Se | Azole compounds carrying an imine-derived substituent |
| WO2015104422A1 (en) | 2014-01-13 | 2015-07-16 | Basf Se | Dihydrothiophene compounds for controlling invertebrate pests |
| EP2924027A1 (en) | 2014-03-28 | 2015-09-30 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole fungicidal compounds |
| US9968092B2 (en) | 2014-04-17 | 2018-05-15 | Basf Se | Combination of novel nitrification inhibitors and biopesticides as well as combination of (thio)phosphoric acid triamides and biopesticides |
| EP2962568A1 (en) | 2014-07-01 | 2016-01-06 | Basf Se | Mixtures comprising a bacillus amyliquefaciens ssp. plantarum strain and a pesticide |
| EP2949649A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-02 | Basf Se | Fungicide substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2949216A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-02 | Basf Se | Fungicidal substituted alkynyl [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2952512A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
| EP2952506A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole and imidazole compounds |
| EP2952507A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-09 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds |
| CN107075712A (zh) | 2014-10-24 | 2017-08-18 | 巴斯夫欧洲公司 | 改变固体颗粒的表面电荷的非两性、可季化和水溶性聚合物 |
| CN111742937A (zh) * | 2015-01-16 | 2020-10-09 | 瓦伦特生物科学有限责任公司 | 苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种组合制剂 |
| WO2016128239A1 (en) | 2015-02-11 | 2016-08-18 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a pyrazole compound and a biopesticide |
| AU2016231152A1 (en) | 2015-03-11 | 2017-09-28 | Basf Agrochemical Products B.V. | Pesticidal mixture comprising a carboxamide compound and a biopesticide |
| CN107592790B (zh) | 2015-03-11 | 2022-03-25 | 巴斯夫农业化学品有限公司 | 包含羧酰胺化合物和生物农药的农药混合物 |
| EP3111763A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-04 | BASF Agro B.V. | Pesticidal compositions comprising a triazole compound |
| EP3383183B1 (en) | 2015-11-30 | 2020-05-27 | Basf Se | Compositions containing cis-jasmone and bacillus amyloliquefaciens |
| EP3205209A1 (en) | 2016-02-09 | 2017-08-16 | Basf Se | Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides |
| US20190200612A1 (en) | 2016-09-13 | 2019-07-04 | Basf Se | Fungicidal mixtures i comprising quinoline fungicides |
| WO2018149754A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Basf Se | Pyridine compounds |
| JP7160486B2 (ja) | 2017-03-28 | 2022-10-25 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 殺生物剤化合物 |
| WO2018184882A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Basf Se | Pyridine compounds |
| US20210179620A1 (en) | 2017-06-16 | 2021-06-17 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2018234202A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Basf Se | SUBSTITUTED PYRIMIDINIUM COMPOUNDS AND DERIVATIVES FOR CONTROLLING HARMFUL ANIMALS |
| WO2018234488A1 (en) | 2017-06-23 | 2018-12-27 | Basf Se | SUBSTITUTED CYCLOPROPYL DERIVATIVES |
| EP3453706A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-13 | Basf Se | Pesticidal imidazole compounds |
| WO2019057660A1 (en) | 2017-09-25 | 2019-03-28 | Basf Se | INDOLE AND AZAINDOLE COMPOUNDS HAVING 6-CHANNEL SUBSTITUTED ARYL AND HETEROARYL CYCLES AS AGROCHEMICAL FUNGICIDES |
| WO2019072906A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Basf Se | IMIDAZOLIDINE PYRIMIDINIUM COMPOUNDS FOR CONTROL OF HARMFUL ANIMALS |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| US11512054B2 (en) | 2017-12-21 | 2022-11-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| JP7479285B2 (ja) | 2018-01-09 | 2024-05-08 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 硝化阻害剤としてのシリルエチニルヘタリール化合物 |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| AU2019226360A1 (en) | 2018-02-28 | 2020-08-27 | Basf Se | Use of alkoxypyrazoles as nitrification inhibitors |
| CA3089381A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Basf Se | Use of pyrazole propargyl ethers as nitrification inhibitors |
| WO2019166560A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Basf Se | Use of n-functionalized alkoxy pyrazole compounds as nitrification inhibitors |
| WO2019175712A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Basf Corporation | New uses for catechol molecules as inhibitors to glutathione s-transferase metabolic pathways |
| WO2019175713A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Basf Corporation | New catechol molecules and their use as inhibitors to p450 related metabolic pathways |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| WO2020002472A1 (en) | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Basf Se | Use of alkynylthiophenes as nitrification inhibitors |
| EP3826983B1 (en) | 2018-07-23 | 2024-05-15 | Basf Se | Use of substituted 2-thiazolines as nitrification inhibitors |
| WO2020020765A1 (en) | 2018-07-23 | 2020-01-30 | Basf Se | Use of a substituted thiazolidine compound as nitrification inhibitor |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3887357A1 (en) | 2018-11-28 | 2021-10-06 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| US20230031024A1 (en) | 2018-12-18 | 2023-02-02 | Basf Se | Substituted pyrimidinium compounds for combating animal pests |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP3730489A1 (en) | 2019-04-25 | 2020-10-28 | Basf Se | Heteroaryl compounds as agrochemical fungicides |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| CN113923987B (zh) | 2019-05-29 | 2024-10-01 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物 |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| WO2021170463A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | BASF Agro B.V. | Methods and uses of a mixture comprising alpha-cypermethrin and dinotefuran for controlling invertebrate pests in turf |
| CN115443267A (zh) | 2020-04-28 | 2022-12-06 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀害虫化合物 |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| EP3960727A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| EP4011208A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-15 | BASF Corporation | Microparticle compositions comprising fluopyram |
| CN116829521A (zh) | 2021-02-02 | 2023-09-29 | 巴斯夫欧洲公司 | Dcd和烷氧基吡唑作为硝化抑制剂的协同增效作用 |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| JP2024519813A (ja) | 2021-05-18 | 2024-05-21 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 殺菌剤としての新規な置換ピリジン |
| US20240270727A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-08-15 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicide |
| WO2022243109A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted quinolines as fungicides |
| CN117355504A (zh) | 2021-05-21 | 2024-01-05 | 巴斯夫欧洲公司 | 乙炔基吡啶化合物作为硝化抑制剂的用途 |
| CN117440946A (zh) | 2021-05-21 | 2024-01-23 | 巴斯夫欧洲公司 | N-官能化的烷氧基吡唑化合物作为硝化抑制剂的用途 |
| WO2022268810A1 (en) | 2021-06-21 | 2022-12-29 | Basf Se | Metal-organic frameworks with pyrazole-based building blocks |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| KR20240042636A (ko) | 2021-08-02 | 2024-04-02 | 바스프 에스이 | (3-피리딜)-퀴나졸린 |
| CA3227653A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Wassilios Grammenos | (3-quinolyl)-quinazoline |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2023203066A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Basf Se | Synergistic action as nitrification inhibitors of dcd oligomers with alkoxypyrazole and its oligomers |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| EP4361126A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-01 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv |
| WO2024104823A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | New substituted tetrahydrobenzoxazepine |
| WO2024104818A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104822A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides |
| WO2024104815A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| EP4389210A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Basf Se | Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2024165343A1 (en) | 2023-02-08 | 2024-08-15 | Basf Se | New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi |
| WO2024194038A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Basf Se | Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4277564A (en) * | 1980-01-09 | 1981-07-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis |
| CA1193564A (en) * | 1982-07-09 | 1985-09-17 | University Of Western Ontario | Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control |
| DE3346138A1 (de) * | 1983-12-21 | 1985-07-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera |
| US4764372A (en) * | 1985-03-22 | 1988-08-16 | Mycogen Corporation | Compositions containing bacillus thuringiensis toxin toxic to beetles of the order coleoptera, and uses thereof |
| DE3541893A1 (de) * | 1985-11-27 | 1987-06-11 | Basf Ag | Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus |
| JPS62146593A (ja) * | 1985-12-16 | 1987-06-30 | マイコゲン コ−ポレ−シヨン | バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法 |
| JP2775150B2 (ja) * | 1987-03-04 | 1998-07-16 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | 蚊類毒性のバシラス・ツリンギーンシス・セロバル．イスラエレンシスの、胞子不含の、濃縮した蛋白質製剤の製法並びに該方法を実施するための微生物及び該微生物を収得する方法 |
| ES2063051T3 (es) * | 1987-12-24 | 1995-01-01 | Zeneca Ltd | Cepas bacterianas. |
| US4999192A (en) * | 1988-02-12 | 1991-03-12 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate |
| US4966765A (en) * | 1988-02-23 | 1990-10-30 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
| US4996155A (en) * | 1988-03-04 | 1991-02-26 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis gene encoding a coleopteran-active toxin |
| US4990332A (en) * | 1988-10-25 | 1991-02-05 | Mycogen Corporation | Novel lepidopteran-active Bacillus thuringiensis isolate |
-
1990
- 1990-11-14 SK SK5629-90A patent/SK281286B6/sk unknown
- 1990-11-16 RO RO92-200690A patent/RO109862B1/ro unknown
- 1990-11-16 WO PCT/DK1990/000294 patent/WO1991007481A1/en active IP Right Grant
- 1990-11-16 DE DE0585215T patent/DE585215T1/de active Pending
- 1990-11-16 JP JP2515745A patent/JP2950614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 HU HU9201628A patent/HU214685B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 YU YU218590A patent/YU48440B/sh unknown
- 1990-11-16 AU AU67364/90A patent/AU647056B2/en not_active Ceased
- 1990-11-16 KR KR1019920701171A patent/KR0157065B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 DK DK90917069T patent/DK0585215T3/da active
- 1990-11-16 AT AT90917069T patent/ATE184645T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-11-16 EP EP90917069A patent/EP0585215B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 DE DE69033291T patent/DE69033291T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 RU SU5052261A patent/RU2138950C1/ru active
- 1990-11-16 ES ES90917069T patent/ES2060568T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 CA CA002068734A patent/CA2068734C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 TR TR01097/90A patent/TR28902A/xx unknown
-
1992
- 1992-05-14 FI FI922205A patent/FI103130B/fi active
- 1992-05-15 NO NO921950A patent/NO305131B1/no unknown
- 1992-06-16 BG BG96488A patent/BG61699B1/bg unknown
-
1994
- 1994-04-29 GR GR940300021T patent/GR940300021T1/el unknown
-
1999
- 1999-11-10 GR GR990402908T patent/GR3031815T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO305131B1 (no) | Mutant eller variant av Bacillus thuringiensis som produserer h°ye utbytter av delta-endotoksin, anvendelse av en mutant av B. thuringiensis, pesticid blanding eller preparat omfattende delta-endotoksinet samt anvendelse derav | |
| US5006336A (en) | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate | |
| US5208017A (en) | Biologically active Bacillus thuringiensis isolates | |
| US5080897A (en) | Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions | |
| EP0202739A1 (en) | Novel micro-organism and its use for controlling pests | |
| CZ20013239A3 (cs) | Biologicky čistá kultura, prostředek, izolovaný metabolit, supernatant, částečně přečiątěná frakce, ve vodě rozpustná látka, způsob produkce fungicidního supernatantu, způsob částečného přečiątění supernatantu, způsob zvýąení insekticidní aktivity | |
| US5302387A (en) | Bacillus thuringiensis isolates active against cockroaches and genes encoding cockroach-active toxins | |
| JPH10504451A (ja) | 新規の双翅類活性化合物及びバチルス チューリングエンシス株 | |
| US5279962A (en) | Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin | |
| US5516514A (en) | Insect controlling agent from strains of Bacillus thuringiensis var. Kurstaki | |
| JPH04505998A (ja) | バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用 | |
| CZ286501B6 (en) | Mutant of Bacillus thuringiensis micro-organism deposited as subsp. tenebrionis DSM 5480, process of its preparation and pesticidal agent containing thereof | |
| PL166479B1 (pl) | Srodek owadobójczy PL PL PL PL PL PL | |
| HRP920198A2 (en) | Mutants or variants of bacillus thuringiensis producing high yields of delta toxin | |
| Jayaraman et al. | Active against Lepidopteran Agricultural Pests, by the Use of Continuous Culture Studies | |
| IL86242A (en) | Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use |