JPH04505998A - バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用 - Google Patents

バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用

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JPH04505998A JP2500368A JP50036889A JPH04505998A JP H04505998 A JPH04505998 A JP H04505998A JP 2500368 A JP2500368 A JP 2500368A JP 50036889 A JP50036889 A JP 50036889A JP H04505998 A JPH04505998 A JP H04505998A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２、−１２０、−１．１０“、７８．５０．４６３．４３．３３．３１．６．０ 　（ｏ、ｃ、　）　、８．０．７，９．５．４．４．７及び３，５メガダルトン のプラスミド及びり、　Ｄ、Ｅを含むプラスミド配列を有する、請求項１に記載 のバチルス・スリンギエンシス変種アイザワイ細菌ＨＤ−１２Ａ０ ３．１１０１メガダルトンのプラスミド及び６５°メガダルトンのプラスミドを 含むプラスミド配列を有する、上記ｌに記載のバチルス・スリンギエンシス変種 アイザワイ細菌。
４、−１２０、−１１０”、７８．６５ゝ、５０．４３．３３．３０．８．０． ７．９．６．０　（ｏ、ｃ、　）　、５．４．４．７及び３．５メガダルトンの プラスミド及びり、　Ｄ、　Ｅを含むプラスミド配列を有する、請求項３に記載 のバチルス・スリンギエンシス変種アイザワイ細菌。
５．１１０＋メガダルトンのプラスミド及び４６１メガダルトンのプラスミドを 含むプラスミド配列を有する、請求項１に記載のバチルス・スリンギエンシス変 種アイザワイ細菌。
６、〜１２０、〜１１０＋、７８．５０．４６′、４３．３３．３１．６．０　 （ｏ、ｃ、　Ｌ　８．０．５．４．４．７．３，５メガダルトンのプラスミド及 びり、　Ｄ、Ｅを含むプラスミド配列を有する、請求項５に記載のバチルス・ス リンギエンシス変種アイザワイ細菌。
７、請求項１ないし６のいずれかに記載のバチルス・スリンギエンシス細菌によ り産生されたトキシン蛋白質。
８、昆虫の食餌供給物又は素餌場に殺虫的に有効な量の、ＮＲＲＬに寄託され受 託番号Ｂ−１８０４６を割当てられたＨＤ−１２２Ａ、、ＮＲＲＬに寄託され受 託番号１８４０７を割当てられたＨＤ−１２２Ｂ及びＮＲＲＬに寄託され受託番 号１８４０８を割当てられたＨＤ−１２２Ｃ；又はそれらの突然偏異体、組換え 体又は遺伝工学的な誘導体から選択されたバチルス・スリンギエンシス変種アイ ザワイ細菌株を施用することを特徴とする昆虫を防除する方法。
９、該昆虫が鱗翅目昆虫である、請求項８に記載の方法。
１０、請求項１ないし６のいずれかに記載されたバチルス・スリンギエンシス細 菌、又はそれらのトキシン蛋白質、及び適当なキャリヤーを特徴とする殺虫剤組 成物。
明細書 バシラス　スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護に おけるその利用 その利用に関しては十分言及がなされているが、それにもかかわらずプルテラ　 キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）のようなある種の昆 虫は商業的に入手できる株のバシラス　スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　 Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）あるいは多（の従来の殺昆虫剤、例えばカルバメ ート、ホスフェート、及びピレスロイドなどにより有効な制御を行うことができ ない。
従って本発明の目的は、従来の殺虫剤に対して抵抗性を持ち、商業的の集団を強 力に制御することができ、殺有害生物剤としての所望の属性有効な新規固体及び 液体Ｂ、ｔ、配合物において、該配合物が殺虫剤とｈｕｒ　ｉｎｇｉｅｎｓ　ｉ ｓ）株を含むことを特徴とする配合物の提供も本発明の目的である。
本発明は、Ｐ１エンドトキシンタンパク質をコードする１１０メガダルトンのプ ラスミド、及びＰ１エンドトキシンタンパク質をコードする４６又は６５メガク ルトンのプラスミドを含む新規バシラス　スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ 　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）株に関する。本発明はさらに昆虫、特に鱗翅目 の昆虫及び特にプルテラ　キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌ ｌａ）を、Ｂｔ１株が１１０メガダルトンのプラスミド及び４６又は６５メガダ ルトンのプラスミドを含むＢ、ｔ、配合物を殺虫剤として有効量用いて制御する 方法に関する。本発明はまた、１１０メガダルトンのプラスミド及び４６あるい は６５メガダルトンのプラスミドを含むバシラス　スリンギエンシス（Ｂａｃｉ ｌｌｕｓ　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の株を植物の葉に、殺虫剤として有効 量適用することにより該植物を昆虫の食糧となる損害から保護する方法に関する 。
その胞子形成サイクルの間にエンドトキシンを製造する。エンドトキシンは一般 にバラスポア結晶として堆積し、特定のＢ、ｔ、株の殺虫剤としての有効性を決 定する第１因子である。多くの場合、胞子形成の間に異なる株のＢ、ｔ、は異な るエンドトキシンを異なる量製造することが見いだされた。例えばある株のＢ、 ｔ、は非常に限られた量のエンドトキシン及びバラスポア結晶を製造するが、他 のＢ、ｔ、株はＢ、ｔ、細胞の乾燥重量の約１５−４０％に相当する結晶を製造 することができる。
従って、Ｂ、ｔ、の新現株の殺虫活性は正しい評価によってのみ確立することが できるということは明らかである。
ここで驚くべきことに、プルテラ　キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａｘｙｌｏｓ ｔｅｌｌａ）などのある種の昆虫の、Ｂ、ｔ、を用いた有効な制御は、Ｂ、ｔ、 配合物中にＰ１エンドトキシンタンパク質をコードする遺伝情報（遺伝子）を有 する１１０メガダルトンのプラスミド、及びＰ１エンドトキシンタンパク質をコ ードする遺伝情報（遺伝子）を有する４６又は６５メガダルトンのプラスミドが 共存することに大きく起因することが見いだされた。
さらに以下のプラスミド　プロファイルをメガダルトン（Ｍｄ）中に含むＢ、ｔ 、株、特にｖａｒ、ａｉｚａｗａｉ　（Ｓｅｒｏｖａｒ　Ｈ７）が、該Ｂ、ｔ、 株のひとつを含む液体配合物を植物に噴霧すると、プルテラ　キシロステラ（Ｐ ｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）の制御、及び／又は該有害生物が植物 の葉を食糧とするのを妨げるのに特に有効であることを見いだした。
本発明において、昆虫制御剤又は植物保護剤として使用するのが好ましいＢ、ｔ 、株ＨＤ１２２−１　ｖａｒ、ａｉｚａｗａｉ及び変種ノメガダルトン中のプラ スミドプロファイルは以下である：ＨＤ１２２−１　−　“野生型”−１２０、 −１１０”、７８，５０゜４６”、４３．　３３．　３１．　３０．　６．　Ｏ 開環（ｏ、ｃ、　）、８．　０．　７．　９．　５．　４．　４．　７゜３．５ ．直鎖り、　Ｎ、　Ａ、要素（Ｌ、Ｄ、Ｅ、　）；ここで＋は殺有害生物性毒素 タンパク質をコードするプラスミドを示す； ＨＤ−１２２Ａ　−−１２０，−１１０”、７８，５０．４６″″、４３゜３３ 、　３１．　８．　０．　７．　９．　６．　０　（ｏ、ｃ、　）、５．　４． 　４．　７．　３．　５．　Ｌ、Ｄ、Ｅ、。
ＨＤ−１２２Ｂ　−−１２０，−１１０”、７８．６５’、５０．４３゜３３、 　３０．　６．　０　（ｏ、ｃ、　）　、８．　０．　７゜９、５．４．４．７ ．３．５．　Ｌ、　Ｄ、　Ｅ、　、及び ＨＤ−１２２Ｃ’−−１２０，−１１０”、７８，５０．４６”、４３゜３３． ３１．３０，６．０　（ｏ、ｃ、）、８．０゜５．４，４．７．３．５．Ｌ、Ｄ 、Ｅ。
Ｂｔ株ＨＤ１２２−１　ｖａｒ、ａｉｚａｗａｉ及びその変種（ＨＤ−１２２Ａ 、ＨＤ−１２２８，ＨＤ−１２２０）のｌ１０Ｍｄプラスミドは約１３０−１４ ５キロダルトン（ｋＤ）の大きさの、１種類かそれ以上のエンドトキシンタンパ ク質をコードする遺伝情報を運ぶ。同様に４６及び６５Ｍｄプラスミドは約１３ ０−１４０の大きさのエンドトキシンタンパク質をコードする遺伝情報を運ぶ。
これらのエンドトキシンタンパク質は胞子形成の時に製造され、二重ピラミッド 型結晶内包物をさらに、上記配合物のいずれかから４６“又は６５１プラスミド が失われると、プラスミド列が減少したＢ、ｔ、配合物の殺虫活性及び植物保護 活性の大きな損失を生ずる。
上記の通り、本発明のＢ、ｔ、株はプルテラ　キシロステラ（旦工旦ｔｅｌｌａ 　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）の制御に非常に有効であり、その制御に特別有用であ る。しかし、本発明のＢ、ｔ、株は種々の池の昆虫、例えば５ｐＯｄＯｐｔｅｒ ａ　ｅｘｉｑｕａ、シロイチモンジョトウ（７）幼虫；Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉ ａ　ｎｉ、キャベツ　シャクトリムシ：Ｈｅ１ｉｏｔｈｉｓ　ｓｅａ、ポールワ ーム、コーン　イヤワーム又はトマトフルーツワーム；Ｈｅ１ｉｏｔｈｉｓ　ｖ ｉｒｅｓｃｅｎｓ、　タバコバヅワーム：アワヨトウ　５ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　 Ｌｉｔｔｏｒａ↓ｉｓ、多ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、及び５ ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｅｒｉｄａｎｉａならびに輸入キャベツワーム、旦工ユニ 工互　１”　ａ　ｐ　ａ　ｅの制御にも同様に有効である。
該昆虫の制御及び／又は昆虫が食糧とする植物の保護は一般に、１１０１メガダ ルトンプラスミド及び４６″′あるいは６５４メガダルトンプラスミドを持つＢ 、ｔ、株により製造されたエンドトキシン　タンパク質を殺虫剤として有効量含 む液体スプレーを植物の葉に適用することにより行う。昆虫に与えることにより 処理した植物を摂取するとＢ、ｔ、エンドトキシンが昆虫の中腸に入り、そこで 昆虫の腸のアルカリ性ｐＨ及びタンパク質分解酵素がＢ、ｔ、エンドトキシン配 合物のバラスポア結晶を溶解し、適用したスプレー配合物の１１０＋及び４６′ ″又は６５４メガダルトンプラスミドにより製造させた毒素を活性化する。
このようにして活性化された毒素は中腸の細胞を崩壊させ、昆虫が食糧を摂取し な（なり死ぬ原因となる。
１１０′″メガダルトンプラスミド、及び４６＋又は６５′″メガダルトンプラ スミドを含むＢ、ｔ、株により製造されたエンドトキシンタンパク質を約１１０ −１Ｏ００ｐｐ、好ましくは約２２０−５００ｐｐ含む液体配合物が昆虫の制御 及び所望の植物の保護の達成に有効である。
本発明のＢ、ｔ、株はプルテラ　キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａｘｙｌｏｓ　 ｔｅ　Ｉ　Ｉａ）ならびに他の鱗翅目の有害生物の制御に非常に有効であり、又 該昆虫の飼料に適用すると、あるいは１ヘクタール当たり約１０グラム−１０， ０００グラムの毒素タンパク質、好ましくは１ヘクタール当たり約２０グラム− ５００グラムの毒素タンパク質という適用比で土壌に供給すると該昆虫有害生物 による攻撃からの植物の保護に有用であることを我々は見いだした。
本発明のＢ、ｔ、株は、約１５％−４０％　ｗ／ｖの発酵不溶物を含み、発酵培 地に含まれるもの以外化学物質又は添加剤を含まない脱水発酵ブロスから成る発 酵ブロス濃厚液として調製するのが有利である。濃厚液は一般に、約１％−２０ ％　Ｗ／ＶのＢ、ｔ、タンパク質を含むがそれに限られるわけではない。発酵ブ ロス濃厚液は直接殺虫剤スプレーに調製することもでき、あるいはそれをスプレ ー乾燥し、スプレー乾燥材料を水和剤、油流動性濃厚液、水流動性調製液、水分 散性顆粒、微カプセル調剤、及び／又は他の配合物に調製することもできる。こ れらの配合物はスプレー乾燥Ｂ、ｔ、粉末を、界面活性剤、増粘剤、不活性固体 又は液体希釈剤などの配合物成分と混合することにより調製する。
スプレー乾燥Ｂ、ｔ、を用いて調製することができろ水和剤配合物は１％−２０ 重量％のＢ、ｔ、結晶：１４％−２０重量％の発酵不溶物；４０％−６０重量％ の希釈剤、例えばアタパルジャイト、カオリナイト、モントモリロナイト、ケイ ソウ土、タルクなど：５％−１０重量％の湿潤剤及び１％−３重量％の調整剤を 含むことができる。
典型的な水和剤配合物は約１５％−２０％のＢ、ｔ、結晶：約１４％−２０％の 発酵不溶物：４５％−５５％のアタパルジャイト又はカオリン：２％の合成ケイ 酸塩調整剤；２．５％−５％のソルビタンモノオレートなどの乳化剤：０％−２ ，５％のオクチルフェノキシポリエトキシエタノールなどの湿潤剤、及び０％− 約０．　５％のポリビニルピロリドンを含むことが多い。
本発明の方法で用いられるＢ、ｔ、種の油流動可能な調剤は、一般に、１１０１ メガダルトン（ｍｅｇａｄａｌｔｏｎ）プラスミドおよび４６″″または６５４ メガダルトンプラスミドのどちらかを有するＢ、ｔ、細胞から生産されるＢ、ｔ 、結晶を約１０〜１５重量％：発酵不溶物を約１０〜１５％；水添ひまし油を約 ２〜３％：ラクトーゼをＯ〜１．０％；乳化剤を５〜１０％：としてパラフィン 系もしくは鉱物系オイルの如き油を約５０〜６０重量％含有している。
多くの高活性殺虫剤的Ｂ、ｔ、種がトランスコンジュゲーション（ｔｒｎｓｃｏ ｎ　ｊｕｇａｔｉｏｎ）によって生産されるが、他の高活性Ｂ、ｔ、種は、選択 されたプラスミドをそこに移す前に、複合トキシンプラスミドから最初に１個以 上のプラスミドを除去する必要があり得る。プラスミドの損失はキユアリング（ ｃｕｒｉｎｇ）と呼ばれ、モしてキユアリングがある種のトキシン蛋白質の優位 をもたらすことができることを見い出した。従って、Ｂ、ｔ、種のキユアリング は、Ｂ、ｔ、種の毒性を増大させるばかりでなく、与えられたこん虫、即ちこん 虫種またはこん虫目に対する該Ｂ９ｔ０種の選択性または特性を増大させる手段 として用いられ得る。
本発明を更に以下に示す実施例を用いて説明する。
実施例１ 培地Ｃ−２Ｍ上でのバチルスツリンギイエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒ ｉｎｇｉｅｎｓｉｓＸＢ、　ｔ、　）種ＨＤ−１２２Ａ変種アイザワイ（ＥＧ２ １７５）製造のための発酵方法 発酵用の接種材料は、ＥＧ２１７５としても知られている種ＨＤ−１２２Ａ変種 アイザワイ（ａｉｚａｗａｉ）の無菌胞子懸濁液からなっている。これは、栄養 塩類かんでん（ＮＳＡ）（表Ｉ）上のこの種の単一単離コロニーからの白金耳を 、遮断した２リツトルの三角フラスコ中の５００＋ａｌのＣ−２培地中に無菌的 に接種することによって調製する。このフラスコを３０℃で４８時間振とうしく ３００ＲＰＭ）、それによって、充分に胞子を生じさせた培地を生じさせる。こ れは数週間安定であり、そして好適的な冷蔵庫で保存される。次に、使用に先立 って、一定分量の種菌を無菌的に取り出し、そして１００マイクロリツトルをＮ ＳＡ　（表■）上に融合性表面ローンとして置き、純度を確認する（３０℃で培 養）。
融合性領域と単離されたコロニーを含有している二番目の画線プレートは、ＮＳ Ａかんてん上に生じさせ、ＤＮＡを両方のコロニーから抽出し、そしてＧｏｎｚ ａｌｅｚの方法（出典１）に従って、該融合性領域を公知の種ＥＧ２１７５の標 準に対してＥｃｋｈａｒｄｔアガロースゲル上を流す。グラスを、位相差顕微鏡 、油浸漬、１００ＯＸで検査し、そして（ｂ）グルコース濃度をＹＳＩまたは同 様の装置を用いて測定する。発泡は重要ではないが、必要ならば、ＭａｚｕＤＦ ２０４消泡剤（Ｍａｚｅｒ　Ｃｈｅｍｉｃａｉ、　Ｇｕｒｎｅｅ　ＩＬ）を無菌 的に添加してもよい。
この発酵器中の細胞は１２〜１６時間で胞子を生じ始め、そして一般に、充分に 胞子を生じさせた後、２４−３６時間で細胞溶解させる。胞子の生成は、相の輝 き、卵形の中心を有する胞子、およびまた細胞の境または胞子のう内の若干相の 輝きがある蛋白質の結晶によって示される。
細胞溶解は、遊離胞子、および胞子のうからの結晶の放出によって示される。
この培養物を、中空繊維、即ちクロス・フロー膜システム、例えばＢ。
■１ｃｏｎ　ＰｉｌｏｔＰｅｏｌ　Ｏを用いるか、或いはディスク・スタック遠 心分離機、例えばＡｌｆａ−Ｌａｖｅｌ　Ａ　Ｘ　２１３を用いて収穫する。１ ０６ミルのＰＭ５００繊維を用いたＲｏｍｉｃｏｎにおいては、再循環速度を、 入口と出口の圧力を各々１０および４０ＰＳＩに保持する値に保つ。濃縮容積が 元の薄い容積の５〜１５％に減少するまで、収穫を継続する。好適には、その後 、等容積の水道水を用いて再びパルプ状しそして再び濃縮することによって、２ 回濃縮物を洗浄する。遠心分離を用いる場合、位相差顕微鏡で上澄液中に蛋白質 の結晶がいくつか見られるように、流速および排出頻度を調整する。
表■ 普通塩類寒天 （ＮＳＡ） 普通ブイヨン（ディフコ）　８ 寒天　１５ ＭｇＣ１□・６８２０　０．２ ＣａＣ１２・２■、０　０．１０３ ＭｎＣ１２・４１ＬｚＯｏ、　ｏｔ 記：塩類は単純な普通寒天（ＮＡ）では生じないところをＢ、ｔ。
の良い胞子形成を得るのに必要とされる。
表ｌＩ Ｃ−２０媒体　Ｃ−２媒体 ｇＩＩＩ／１ｇｌ１／ｌ グルコース　ＩＯ中　グルコース　ＩＱ＋１１マルコールカゼインＢ　バクトペ プトン（Ｍａｒｃｏｒ　Ｃａ５ｅｆｎ　Ｂ）　２　（Ｂａｃｔｏ　Ｐｅｐｔｏｎ ｅ）　２アンバーレツクス１００３酵母Ｅｓｔ、　ディフコ酵母抽出物（Ａａ＋ ｂｅｒｅｘ　１００３　Ｙｅａｓｔ　Ｅｓｔ、　）　２　（Ｄｉｆｃｏ　Ｙｅａ ｓｔ　Ｅｘｔｒａｃｔ）　２Ｋ１２ＰＯ４０，３１１３，１１ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈｚ０　０．３　ｍｇｓｏ４・７１２０　０．３ＣａＣ１４・２ ［１ｔＯｏ、　Ｉ　ＣａＣ１ｚ・２■２０　０．　ｌＭｎＣ１ｚ”４Ｈ２００， ０５８ＭｎＣ１ｚ”４ＨｚＯＯ，０５８（ＮＨ４）ｔＳＯ４２，０（ＮＨ４）２ ＳＯ４２，０ＺｎＳＯ４−７Ｈ，ｏ　ｏ、００５　Ｚｎ５０４−７ｎ２ｏ　ｏ、 ００５ＣＩＩＳＯ４・５Ｈｚ０　０．００５　ＣｕＳＯ４・５ｔｌｔ０　０．０ ０５（殺菌前に添加） ｐＨ７，２；５Ｎ　Ｎａ０ＦｌまたはＨ２ＳＯ４で要求されるようにして調製ｆ ｌ＋無水物として、１水和物［例えばセレローズ（ｃｅｒｅｌｏｓｅ）］を使用 した場合、この１００％を使用。別途５０−７０％溶液として殺菌し、そして殺 菌した冷却媒体に平衡して殺菌的に添加。
（２）濃縮溶液として調製し、別途殺菌し、そして培養器中に殺菌した冷却媒体 に平衡して殺菌的に添加。
参考文献１ニジエイ・エム・ゴンザレス、エイチ・チー・ダルメイジ、ビー・シ ー・カールトン（Ｇｏｎｚａｌｅｚ、　Ｊ、　Ｍ、　Ｄｕｌｍａｇｅ、　Ｈ，Ｔ 、　Ｃａｒｌｔｏｎ、　Ｂ、　Ｃ，）プラスミド　第５巻、３５１−３６５頁（ １９８１）前に示したように、ＨＤ１２２−１　（ＥＧ２１７９）は、プラスミ ドを通じて他の変種（ＨＤ−１２２Ａ、Ｈ３−１２２８，ＨＤ−１２２Ｃ）の元 となっている野生種または親株のＢ、ｔ、であると考えられる。四つの程合ては 、栄養塩類かんでん上に、生物学的に純粋な培養物として単離され、そしてプラ スミド配列に関して特徴づけられる。
ＨＤ１２２−１　（ＥＧ２１７９）は下記のプラスミド配列を有する＝３．５． ４．７．５．４．７．９．８．０、−６．０（開いた円）　Ｌ、　Ｄ、Ｅ。
３０．３１．３３．４３．４６′″、５０．７８．１１０４、−１２０（メガド ルトンで表したプラスミドの大きさ）下記のように、単離された三種の変種はＨ Ｄ１２２−１とは異なる。
ＨＤ−１２２Ａ　（ＥＧ２１７５）には３０Ｍｄプラスミドが欠乏している。
ＨＤ−１２２８（ＥＧ２１７６）には３１Ｍｄプラスミドが欠乏しており； ４６”Ｍｄが６５１Ｍｄｌ−キシンプラスミドに置き換えられている。
ＨＤ−１２２０（ＥＧ２１７７）には７．９Ｍｄプラスミドが欠乏している。
メガドルトン（Ｍｄ）で表したこれらのＨＤ１２２変種のプラスミドの形は、こ ん虫押制剤または植物保護剤としての本発明における使用のために好適であり、 そして以下のように示すことができる。
ＨＤ−１２２Ａ−−１２０、−１１０”、７８．５０．４６′″、４３．３３． ３１．８．０．７．９．６．０　（ｏ、ｃ、）　、５．４．４．７．３．５、Ｌ 、　Ｄ、　Ｅ、　。
ＨＤ−１２２Ｂ−−１２０、−１１０’、７８．６５゛、５０．４３．３３．３ ０．６．０　（ｏ、ｃ、）　、８．０．７．９．５．４．４．７．３．５、Ｌ、 　Ｄ、　Ｅ、　、およびＨＤ−１２２Ｃ−−１２０、−１１０″″、７８．５０ ．４６＋、４３．３３．３１．３０．６．０　（ｏ、ｃ、）　、８．　Ｃ１５， ４、バシラス・チュリンジエンシス変異りルスタキ株ＨＤ−２６３はＵ。
Ｓ、　Ｄ、　Ａ、カルチャー・コレクション（Ｕ、Ｓ、Ｄ、　Ａ、ｃｕｌｔｕｒ ｅｃ。
１１ｅｃｔｉｏｎ）から得られる。
このカルチャーの代表的な単一コロニーを単離しそして野生型又は親株として選 ぶ。このコロニー、ＨＤ−２６３−１（ＥＧ２０３５）は下記のプラスミドアレ イ：１．４．４．９．５．０．５．２．５．４．７゜５．４３．４４＋、６０＋ 、１１０＋及び１３０（メガダルトン、Ｍｄ、で表したサイズ）を有する。
ＨＤ−２６３は、イリノイ州、ペオリアのＮＲＲＬカルチャ・コレクション、Ｕ 、Ｓ、Ｄ、　Ａ、からＮＲＲＬ−ＨＤ−２６３として入手可能ＨＤ２６３親株、 ＨＤ−２６３−１（ＥＧ２０３５）は、サイズｌ１０Ｍｄ、６０Ｍｄ及び４４Ｍ ｄの３種の毒素プラスミドを含有している。
ＨＤ−２６３−１をディフコ普通ブイヨン中で高められた温度（４２°Ｃ）で− 夜振とうさせながら増殖させ、次いで単一コロニーをこの一夜培養物から単離す る。４４Ｍｄ毒素プラスミドを失ったコロニーを、４４Ｍｄプラスミドの不存在 を検出するためのアガロースゲル上の単一コロニーのランダムスクリーニングに より発見しそしてＨＤ２６３−４と名付ける。
バシラス・チュリンジエンシス菌株ＨＤ−１２２Ａ　（ＥＧ２１７５）と受容株 ＨＤ７３−２６の両者の胞子をＭ２７グロス（下記６．１節に記載の組成）に接 種しそしてこれらの株を穏やかに振とうさせながら３０℃で８時間−緒に増殖さ せることによって、バシラス・チュリンジェンシス菌株ＨＤ−１２２Ａを受容株 ＨＤ７３−２６と一緒に増殖させることにより、バシラス・チュリンジエンシス 菌株ＨＤ−１２２Ａ　（ＥＧ２１７５）を供与菌として使用した。その後、受容 株のコロニーをストレプトマイシン含有プレートを使用することにより選び出し くＨＤ７３−２６はストレプトマイシンに対して耐性である）、次いでＣｒｙ” （結晶生産性）コロニーを位相差顕微鏡により同定する。このようにして、接合 体（ｔｒａｎｓｃｏｎｊｕｇａｎｔ）ＨＤ７３−２６−２３　（ＥＧ２２５５） を造り出し、この接合体ＨＤ７３−２６−２３は、ＨＤ−１２２Ａから４６＋及 び５．４Ｍｄプラスミドを取得した。次いで、ＨＤ７３−２６−２３の胞子と受 容株ＨＤ２６３−４　（ＥＧ２０３８．）の胞子をＭ２７グロスに一緒に接種し そして穏やかに振とうさせながら３０℃で８時間それらを一緒に増殖させること により、ＨＤ７３−２６〜２３を供与菌として使用する。ＨＤ７３−２６−２３ から４６＋及びＰ１毒素プラスミドを取得した接合体ＨＤ２６３−４−５Ａ　（ ＥＧ２１０１）が、アガロースゲル上の受容菌型（ＰＩＰ２＋）コロニーのラン ダムスクリーニングにより選び出された。
バシラス・チュリンジエンシス変異りルスタキ株ＨＤ２７９　（ＥＧ２１５４） は、Ｕ、Ｓ、　Ｄ、　Ａ、カルチャー・コレクションから得られる。
このカルチャーの代表的な単一コロニーを単離しそして野生型又は親株として選 ぶ。このコロニー、ＨＤ２７９−１　（ＥＧ２１５４）は、下記のプラスミドア レイ、１．４．４．９．５，０．５．２．５．４．７゜２．７６５、Ｌ、　Ｄ、 　Ｅ、　、４３．４４＋、４８．６０＋、１１０＋及び１３０（メガダルトン、 Ｍｄで表したサイズ）を有する。
ＨＤ２７９は、イリノイ州、ベオリアのＮＲＲＬカルチャー・コレクション、Ｕ 、Ｓ、Ｄ、Ａ、　からＮＲＲＬ−ＨＤ−２７９として入手可能ＨＤ−２７９の親 種、ＨＤ２７９−１　（ＥＧ２１５４）はｌ１０Ｍｄ、６０Ｍｄ及び４４Ｍｄの 大きさの三種のトキシンプラスミドを含んでいる。ＨＤ２７９−１は高温（４３ ℃）で数日間ルリア寒天（１１％ペプトン、０．５％酵母抽出物、０．５％Ｎａ Ｃｌ、１．２％寒天）　上テ増殖し、次いで単一細胞から由来するコロニーを成 長過度（ｏｖｅｒ−ｇｒｏｗｎ）のコロニーから単離する。アガロースゲル上で ランダムにスクリーニングすることにより６０Ｍｄｌ−キシンプラスミドを失っ たコロニーが見出され、ＨＤ２７９−７２　（ＥＧ２１５７）と命名される。
実施例７ プルテラ・キロステラに対する昆虫防除剤としての試験バチルス・ツリンギエン シスの評価 次ぎの評価では、乾燥したＢ、ｔ、粉末を充分な量の５０１５０の水／アセトン 混合物中に分散して、評価されるＢ、ｔ、株を３０ないし１１０００ｐｐとする 。使用物質が完全に懸濁することを確実にするために、次いで混合物を約５分間 超音波装置中に入れる。
次いでヘッド・キャベツ（ｈｅａｄ　ｃａｂｂａｇｅ）又はチャイニーズ・キャ ベツ（ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ）の葉を試験溶液に浸漬するか又は溶液 を噴霧し、そして湿潤した葉を乾燥させる。処理された葉を湿潤した濾紙で内張 すしたベトリ皿（１５０Ｘ２０ｍｍ）中に入れ、１０匹の第三主船ダイヤモンド バック・モス（ＤｉａＩＩｌｏｎｄｂａｃｋ　Ｍｏｔｈ）−プルテラ・キロステ ラ幼虫を接種する。試験が開始されてから２４．７２及び１２０時間後の死亡率 を記録し、そして結果を記録する。試験開始後７２時間において昆虫の索餌率を も測定する。
この評価で使用されたＢ、ｔ、株はメガダルトンで報告されたプラスミドの配列 により下記のように特定される。
ＨＤ２６３−１　（ＥＧ２０３５）：英国からの原型株、クルスタキ変種。
プラスミド、１３０．１１０．６０、アミン−末端基、４３．７゜５．５．４． ５．２．５．０．４．９．１．４Ｍｄ０トキシンプラスミド：１１０（ＰＬ、Ｐ ２）　、６０　（ＰＬ）　、４４（Ｐｌ）。
ＨＤ２６３−４　（ＥＧ２０３８）：４４−Ｍｄ）キシンプラスミドで養生（ｃ ｕｒｅ）されたＨＤ２６３−１株。
トキシンプラスミド：１１０（ＰＩ、Ｐ２）、６０　（ＰＬ）。
ＨＤ２６３−４−５Ａ　（ＥＧ２１０１）：ＨＤ−１２２Ａの４６Ｍｄ（Ｐｉ） ）キシンプラスミドを獲得した受容体としてＨＤ２６３−４を用いるトランス接 合体。
トキシンプラスミド：１１０（ＰＬ、Ｐ２）　、６０　（Ｐｌ）及び４６（ＰＬ ）。
ディベル（Ｄｉｐｅｌ）は比較として使用されたアボット（ＡｂｂＯｔｔ）研究 所の製品である、バチルス・スリンギエンシスである。
これらの評価においては未処理の対照も使用される。
下記の表３に報告された農場噴霧試験において得られたデータによれば、ＨＤ− １２２Ａからの４６ＭｄプラスミドはＨＤ２３６−４株の活性を増大することが 示されている。ＨＤ２３６−１、ＨＤ２３６−４及びＨＤ２３６ＨＤ１２２−４ −５Ａのｌ１０ＭｄプラスミドはＨＤ１２２−１、ＨＤ１２２Ａ、ＨＤ１２２Ｂ 及びＨＤ１２２Ｃのｌ１０Ｍｄプラスミドと異なる殺虫性蛋白質をコード化する ことに留意しなければならない。
表ＩＩＩ 抗プルテラキロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌ、ａ）に対する 植物スブレンに適用したＢ、　ｔ、化合物の効果 （ｐｐｍ）　（７２時間） ＦＩＤ２６３−１　５０　１３．０　１００．０　１００．０　普通１００　５ ０．０　１００．０　１００．０　普通２００　８ｇ、０　１００．０　１００ ．０　ゆるやか４００　７５．０　１００．０　１００．０　よりゆるやが■Ｄ ２６３−４　１００　０．０　６３．０　６３．０　速い２００　１３．０　４ ３．０　４３．０　速い４００　２２．０　１００．０　１００．０　ゆるやか ６００　６０．０　１００．０　１００．０　ゆるやかＨＤ２６３−４−５Ａ　 ５０　２５．０　１００．０　１００．０　普通１００　２５．０　１００．０ 　１００．０　普通２００　５０．０　１００．０　１００．０　ゆるやか４０ ０　７５．０　１００．０　１００．０　よりゆるやかディペル（Ｄｉｐｅｌ） 　３００　４０．０　１００．０　１００．０　ゆるやか比較　０．０　０．０ 　１０．０　速い０−損害なし １＝僅かに又は葉の約１ないし５％の区域が消耗される。
３＝軽く又は葉の約１０ないし２０％の区域が消耗される。
５＝中程度又は葉の約３０ないし４０％の区域が消耗される。
７＝著しく又は葉の約５０ないし６０％の区域が消耗される。
９＝激しく又は葉の約７０以上の区域が消耗される。
等級２．４．６、又は８は単に観察された損害が上記に指示された等級の間に入 ることを意味し、そして少数点を付けて示された等級は６個の植物からの平均等 級である。
この試験において噴霧乾燥されたＢ、ｔ、試料は約１０重量％のＢ。
ｔ、結晶：２２．５％のＢ、ｔ、発酵固形物：５２．７５％のカオリナイト（ク レー）希釈剤；８％の湿潤剤５％の非イオン性乳化剤及び２％の合成コンディシ ョニング剤から成る湿潤性粉末として製造される。
キャベツ植物は農場の条件を模倣するが、スクリーン室中に導入される昆虫に対 して侵入を制限するスクリーン（ｓｃｒｅｅｎ）室内で成長させる。
この試験において、ダイヤモンド・モス幼虫（プルテラ・キロステラ）を導入し 、幼虫をキャベツ植物に侵入させる。植物体に試験組成物を４日間隔で噴霧し、 そして植物体当たりの１−２虫齢及び３−４虫齢の幼虫の数を計測し、処理が開 始した後、１日目及び４日目及び７日目に索餌による損害を評価する。
本試験で用いられる損害率体系（ｄａｍａｇｅ　ｒａｔｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ） は、以下の通りである。　損害率体系 ０＝損害なし １＝わずか又は、葉の面積の約１から５％が損害を受けた（ｃｏｎｓｕａ＋ｅｄ ）。
３＝軽い又は、葉の面積の約ＩＱから２０％が損害を受けた。
５＝中程度又は、葉の面積の約３０から４０％が損害を受けた。
７＝かなり又は、葉の面積の約５０から６０％が損害を受けた。
９＝ひどく又は、葉の面積の約７０％以上が損害を受けた。
２．４．６又は８の評価は、単に、上記に示した評価はの間の損害が観察された ことを示し、小数で示された評価は、６株の植物の評価の平均値である。
得られたデータを下記の表４に報告する。
表ＩＶ プルテラキロステラ（ＰＬｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）を制御するＢ 、　ｔ、試験組成物の評価及びその組成物を適用することによるキャベツの損害 の制御の評価（ｖｔ／ｗｔ）　ｈａ　１−２　３−４　１−２　３−４　１−２ 　３−４　（７日）ＨＤ２７９　６．８％　３０　８．８　０．９　６．６　０ ．９　６．４　２．３　３．９６０　５．５　０．５　３．２　０．５　３．３ 　１．０　３．６１’１Ｄ２７９−７２　６．１５％　３０　ｇ、５　１．３　 ４．９　０．８　４．０　１．４　２．８６０　８．９　１．９　４．８　１． ８　４．３　１．６　３．７ＨＤ１２２＾　１２％　１５　．７．７　０．２　 ４．０　０．３　４．２　０．８　２．３３０　８．１　０．４　５．３　０． ２　４．５　０．５　２．６６０　２．０　０．２　０．５　０．０　０．５　 ０．６　１．０デイベル　１２％　６０　１１．８．２．３　５．７　１．４　 ４．６　１．９　４．９（Ｄｉｐｅｌ、）　１２０　１１．６　２．８　７．７ 　１．１　６．６　１．８　４．９２４０　１０．６　１．１　７．８　１．１ 　７．５　１．８　４．３未処理　９．８　５．８　９．７　４．４　６．３　 ３．８　７．４ｆｌｌ　ａｔは活性成分またはトキシンプロティンを示す。
上記のデータから、１ヘクタール当たり１５グラムのｌ１０Ｍｄプラスミドおよ び４６Ｍｄプラスミドを有するＨＤ−１２２Ａのトキシン蛋白質は１ヘクタール 当たり６０グラムのｌ１０Ｍｄプラスミドおよび４６もしくは６５Ｍｄプラスミ ドを含有していないＨＤ−１２２ＡのＢ。
ｔ、菌株と比較してプルテラ・キロステラ（Ｐ　１ｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔ ｅｌｌａ）の攻撃に対して良好な昆虫抑制および良好な植物保護を与えることが わかる。
この評価では、下記のプラスミド配列ニブラスミド類：１２０．１１０．７８． ５０．４６．４３．３３．３１．６．０　（０，Ｃ，）　、８．　Ｏ１５，４， ４，７，３，５Ｍｄ並びにり、Ｄ、Ｅ、トキシンプラスミド類：１１０　（ＰＬ ）　、４６　（Ｐｉ）を有するＢ、　ｔ、菌株ＨＤ−１２２Ａ　（ＥＧ２１７５ ）、変種アイザワイ（ａｉｚａｗａｉ）を噴霧乾燥したＢ、ｔ、粉末状で製造し 、そして液体噴霧液の形状で適用するための水和剤に調合した。調合された組成 物は、１０重量％のＢ、ｔ、結晶、２２．２５％のＢ、ｔ、発酵固体分、５２． ７５％のカオリナイト（クレー）希釈剤、８％の湿潤剤、５％の非イオン性乳化 剤および２％の合成シリケート調整剤からなっていた。
Ｂ、　ｔ、水和剤の製造において使用できる他の希釈剤、湿潤剤および分散剤に は、アタパルガイドおよびベントナイト希釈剤、テトラメチルジシネジオール、 ナトリウムアルキルスルホネートおよびノニルフェノールエトキシレート湿潤剤 並びにナトリウムナフタレンスルホン酸分散剤が包含される。
これらの評価で使用されている損害評価システムは下記の如くである：損害評価 システム ０＝損害なし １＝僅か、すなわち葉の面積の約１−５％が消費された３＝軽い、すなわち葉の 面積の約１０−２０％が消費された５＝中程度、すなわち葉の面積の約３０−４ ０％が消費された７＝重い、すなわち葉の面積の約５０−６０％が消費された９ ＝ひどい、すなわち葉の面積の約７０％以上が消費された２、４．６または８の 評価は単に観察された損害が上記の評価間にあることを意味しており、そして小 数付きで示されている評価は６つの植物の平均的評価である。　これらの試験で は、抗プルテラ・キロステラ（Ｐ　１ｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）が ひどく感染していることが既知の畑区域で成長しているキャベツ植物に試験化合 物の水性分散液をスプレーした。
キャベツ植物へのスプレー適用は、１ヘクタール当たり約１５−４９０グラムの 活性化合物を供給するのに充分な量で行われた。第４回スプレー適用後３日およ び６日に、１区域当たり６つの植物を幼虫数および植物損害に関して試験した。
これらの評価を下表Ｖに報告する。
表■ 抗プルテラ　キＯステラ（ＰｌｕｔｅＬｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）に対する ４日間隔でＮＤ−１１２Ａ及びディペル（ＤｉｐｅＬ）を適用した場合の効果の 比較処理物　ｇｍ　ａｉ／　幼虫／植物１　損害率２ｔｌＤ−１２２Ａ　１５　 ６．７　３．７　９．３　３．０　３．８　４．９１２％　３０　５．６　０． ７　７．４　１．１　２．９　３．８６０　３．４　０．３　４．４　０．８　 ２．４　２．４１２０　５．７　０．０　６．６　１３　２．４　２．０２４０ 　２．７　０．０　５．６　０．３　１．８０．９デイベル　３０　８．８　１ ．２　１０．２　２．９　３．８　５．０（Ｄｉｐｅｌ）ＷＰ　６０　８．３　 １．５１２．６　２．８　３．８　５．２１２％　１２０　９．３　２．１　１ １．２　４．７　４．５　４．４２４０　４．４　０．８　１３．９　２．６　 ３．２　４．０４９０　５．６　０．３　１０．２　１．９　２．８　２．７未 処理　５．８　３．８　９．１　３．８　５．７　６．４２３回及び４回スプレ ー後の６日に得られたそれぞれのロー９段階評価：率は６つの個々の植物での平 均値を示す。
上記ノデータから、プルテラ・キロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅ ｌｌａ）の抑制に関しては５９ｇｍ／ｈａで適用されたＨＤ−１２２Ａの方が有 効であることがわかる。
実施例１０ 抗プルテラ・キロステラ（Ｐ　１ｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）の抑制 に関するＢ。
ｔ、菌株ＨＤ−１２２Ａ　（ＥＧ２１７５）の評価この試験は透明なプラスチッ ク屋根を有するスクリーンで覆われたビルディング中で実施された。それぞれ９ つのキャベツ植物（変種、ヴイキマ）を含有している１平方メートルの区域を適 用前にそれの周囲に配置されている１平方メートルの箱で保護して、隣接区域か らの汚染可能性を除いた。
第１回処理の前に成虫の蛾をビルディング中に放して植物上に産卵させた。幼虫 を数え、そして１−２幼虫齢および３−４幼虫齢の２つの区分で記録した。計数 は１日目の予備処理時とその後の各適用の１日前に行われた。植物損害評価は、 処理後３日および６日に行われた。
キャベツ植物へのスプレー適用は、１ヘクタール当たり約１７−２４０グラムの 活性化合物を供給するのに充分な量で行われた。４日間隔で４回適用し、そして １区域当たり６つの植物を幼虫数および植物損害に関して試験した。
これらのデータを下表ｖ■に報告する。損害評価は０−９の目盛りで測定されて おり、そして報告されている評価は６つの個々に評価された植物の平均である。
この評価では比較用にディペルが使用された。これはノくシルス・スリンジエン シス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）変種クルスタキ（ｋｕ ｒｓｔａｋｉ）である。デルタメスリンは（５）−ａ−シアノ−３−フェノキシ ベンジル（ＩＲ，３Ｒ）−３−（２，２−ジブロモビニル）−２，２−ジメチル シクロプロパンカルボキシレートであり、そしてこれも同様に比較用に使用され た。テフルベンズロンは１−（３，５−ジクロロ−２，４−ジフルオロフェニル ）−３−（２，６−ジフルオロベンゾイル）尿素であり、そしてこれもこの試験 で比較用に使用された。
損害評価システム ０＝損傷なし １＝僅か、すなわち葉の面積の約１−５％が消費された３＝軽い、すなわち葉の 面積の約１０−２０％が消費された５＝中程度、すなわち葉の面積の約３０−４ ０％が消費された７＝重い、すなわち葉の面積の約５０−６０％が消費された９ ＝ひどい、すなわち葉の面積の約７０％以上が消費された２、４．６または８の 評価は単に観察された損害が上記の評価間にあることを意味しており、そして小 数付きで示されている評価は６つの植物の平均的評価である。
下表ＶＩ中に報告されている損害評価データは、同じ割合での商業的なり、ｔ、 処理と比べてＨＤ−１２２Ａ処理の優秀性を明白に示している。
実際に、はとんどの場合、低割合のＨＤ−１２２Ａの方がそれより高割合のディ ペルの大部分より優れていた。１２０グラムのａ　ｉ　／　ｈ　ａにおけるＨＤ −１２２Ａも３日および６日の読み取り値の両者で化学的標準より明らかに優れ ていた。
表ＶＩ 抗プルテラ　キロステラ（ＰＬｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）の制御の ＨＤ−１２２＾の評価及び鱗翅目昆虫の比較のための市販の殺虫剤との比較処理 物　ｇｌｍ　幼虫／植物ｌ／　損害率２／ＨＤ−１２２Ａ　１２％　３０　ｇ、 １　１．９１５．１　３．７　３．５　４．７１ｏｔＡ　６０　５．９　１．２ 　９．２　１．９　２．９　３．６１２０　４．４　０．２　４．６　ｔｏ　１ ．８　２．４ＨＤ−１２２Ａ　１１．８％　３０　９．１　１．９１５．７　４ ．５　４．１　５．４１ｏｔＢ　６０　７．７　１．８１１．７　２．４　３． ５　４．７１２０　５．２　０．９　７．５　０．７　２．３　３．３デイベル 　１２％　６０　８．７　３．０１８．９　４．２　４．３　４．８（Ｄｉｐｅ ｌ）ＷＰ　１２０　１６．９　３．４１７．３　６．０　４．０　５．２２４０ 　８．３　１，０１７．２　２．７　３．６　４．２デイベル　２０％　６０　 Ｌ２．６　４．７　１６．７　６゜８　４．３　６．１（Ｄｉｐｅｌ）２Ｘ　１ ２０　１０．２　１．９　１６．６　５．０　３．７　５．３２４０　１７．５ 　３．６２２．０　８．０　３．７　５．４Ｄｅｌ　ｔａｍｅｔｈｒｉｎ　２． ５％　１７　２．１　２，２１０．８　５．３　４．８　５．９２５　７．６　 ３．８　６．８　３．５　４．７　６．５Ｔｅｆｌｕｂｅｎｚｕｒｏｎ　５％　 ３０　５．３　２．４１０．２　３．８　４．９　５．４４５　３．２　１．７ 　２．７　２．１　３．１　４．３未処理　−１０，６３，６１６，５５，４５ ，７６，９Ｉ／第４回スプレー後の３日及び６日目の結果：１−２幼虫齢、３− ４幼主船２７３回及び４回スプレー後の６日に得られたそれぞれのロー９段階評 価：率は６つの個々の植物での平均値を示す。
実施例１１ 本試験は、透明なプラスチックの屋根を持つスクリーンでおおわれた建物の中で 行う。それぞれ９株のキャベツ（変種、ヴイキマ（Ｖｉｋｉｍａ））を含む１平 方メートルの区画を、施用（ａｐｐｌｉｃａｔｆｏｎ）前にそのまわりを１平方 メートルの箱を置いて保護し、隣りの区画からの汚染を除く。
蛾の成虫を建物の中に放し、最初の施用前に、植物上に産卵させる。
幼虫を２つのカテゴリー、即ち１−２齢及び３−４齢でかぞえ、記録する。計数 は、前処理の日及びそれぞれの連続する施用の１日前に行う。
植物の損害（ｄａｍａｇｅ）の評価は、処理の３日後及び６日後に行う。
噴霧による施用は、ヘクタール当り約１７から２４０グラムの活性化合物を与え るのに十分な量でキャベツに対して行う。４日間の間隔で４回の施用を行い、１ 区画につき６株の植物で幼虫の数及び植物の損害を調査した。
これらのデータは、下記の表７に報告する。被害の評価は、０から９の段階で決 定し、報告された評価は、６株の個々の評価された植物の平均値である。
一５Ａは、以下のプラスミド配列（ｐｌａｓｍｉｄ　ａｒｒａｙ）を持ち、プラ スミド、１３０．１１０“、６０＋、４６″″、４３．７．５．５，４．５．２ ．５．０．４，９及び１．４ＭＤ０を持つ。
プラスミド＝１２０．１１０“、７８．５０．４６＋、４３．３３．３１．６． ０　（ｏ、ｃ、）　、８．０．５．４．４．７．３．５Ｍｄ及びＬＥＤ。
下記の表７に報告された、本実験のデータは、ＨＤ２６３−４−５Ａ種クルスタ キ株の上に（ｏｖｅｒ）、ＨＤ１２２Ａ種アイザワイ株を用いる葉の被害の防止 に著しい改善を示す。ＨＤ−１２２Ａ及びＨＤ２６３−４−５Ａの両方が、同じ ４５”Ｍｄの毒素プラスミド（ｔｏｘｉｎ　ｐｌａｓｍｉｄ）を含むが、明らか にＨＤ−１２２Ａの１１０”Ｍｄ毒素プラスミド及び／又は、他のＨＤ−１２２ ＾株のバックグラウンドの性質は、ＨＤ−１２２Ａで得られる優れたプルテラ・ キロステラ制御において、重要な部分をなす。
これらの試験で用いられる損害率体系（ｄａｍａｇｅ　ｒａｔｉｎｇ　ｓｙｓｔ ｅｍ）は、以下の通りである。
損害率体系 ０＝損害なし １＝わずか又は、葉の面積の約１から５％が損害を受けた（ｃｏｎｓｕｍｅｄ　 ）。
３＝軽い又は、葉の面積の約１０から２０％が損害を受けた。
５＝中程度又は、葉の面積の約３０から４０％が損害を受けた。
７＝かなり又は、葉の面積の約５０から６０％が損害を受けた。
９＝ひどく又は、葉の面積の約７０％以上が損害を受けた。
２．４．６又は８の評価は、単に、上記に示した評価はの間の損害が観察された ことを示し、小数で示された評価は、６株の植物の評価の平均値である。
表ＶＩＩ プルテラ・キロステラに対するＢ、　ｔ、株＋１Ｄ−１２２Ａ種Ｂ、ｔ、組成物 　ａｉ／ｈａ　退頁率 ＨＤ−１２２＾　３０　２．６ ６０　１、０ ＨＤ２６３−４−５＾　３０　３．５ ６０　３、５ 微生物の寄託 Ｂ、ｔ、微生物の単離された株の胞子形成性体及び非胞子形成体の両方がこれに 包含されることは、本発明の範囲に含まれる。ここで開示された組成物及び方法 において有用な微生物の模範例（ｅｘｅｍｐｌａｒｙ）は、下記のバチルス（Ｂ ａｃｉｌｌｕｓ）であり、それはアグリカルチュラル・リサーチ・カルチャー・ コレクション（ＮＲＲＬ）　、イリノイ州ペオリア所在に寄託され、受は入れら れており（ａｓｓｉｇｎｅｄ）、寄託番号を下記にリストにした。
Ｂ、スリンギエンシス（ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）株　受託番号ＨＤ−１２ ２Ａ　ＮＲＲＬ−Ｂ−１８４０６ＨＤ−１２２Ｂ　ＮＲＲＬ−８−１８４０７Ｈ Ｄ−１２２ＣＮＲＲＬ−Ｂ−１８４０８ＨＤ−１２２−Ｉ　ＮＲＲＬ−Ｂ−１８ ４０９ＨＤ−２６３ＮＲＲＬ−ＴＩＤ−２６３ＨＤ２６３−４−５Ａ　ＮＲＲＬ −８−１８２０６１’１Ｄ２７９　ＮＲＲＬ−ＨＤ−２７９ＨＤ２７９−７２　 ＮＲＲＬ−８−１８３４５本発明の側面（ａｓｐｅｃｔｓ）は、寄託された微生 物による範囲に限定されず、寄託された態様は、単なる具体例として意図したも のである。確かに、この中に示されそして記載されたそれらに追加する発明の様 々な修飾は、前記記載から当業者にとって明らかであろう。
国際調査報告 １ｍｓ＋＊ａｌｌ＊−＾−ｅｕＣ−１１−ＩＩ−ＰＣＴ／ＵＳ　８９１０４９７ Ｂ国際調査報告 ＵＳ　８９０４９７８ Ｓ＾　３２５８８

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．ＮＲＲＬに寄託され、受託番号Ｂ−１８０４６を割当てられたＨＤ−１２２ Ａ株；ＮＲＲＬに寄託され受託番号Ｂ−１８４０７を割当てられたＨＤ−１２２ Ｂ株及びＮＲＲＬに寄託され受託番号１８４０８を割当てられたＨＤ−１２２Ｃ 株；又はそれらの突然偏異体、組換え体又は遺伝工学的な誘導体から選択された バチルス・スリンギエンシス変種アイザワイ細菌。 ２．−１２０、−１１０＋、７８、５０、４６＋、４３、３３、３１、６．０（ ｏ．ｃ．）、８．０、７．９、５．４、４．７及び３．５メガダルトンのプラス ミド及びＬ．Ｄ．Ｅを含むプラスミド配列を有する、請求項１に記載のバチルス ・スリンギエンシス変種アイザワイ細菌ＨＤ−１２２Ａ。 ３．１１０＋メガダルトンのプラスミド及び６５＋メガダルトンのプラスミドを 含むプラスミド配列を有する、上記１に記載のバチルス・スリンギエンシス変種 アイザワイ細菌。 ４．−１２０、−１１０＋、７８、６５＋、５０、４３、３３、３０、８．０、 ７．９、６．０（ｏ．ｃ．）、５．４、４．７及び３．５メガダルトンのプラス ミド及びＬ．Ｄ．Ｅを含むプラスミド配列を有する、請求項３に記載のバチルス ・スリンギエンシス変種アイザワイ細菌。 ５．１１０＋メガダルトンのプラスミド及び４６＋メガダルトンのプラスミドを 含むプラスミド配列を有する、請求項１に記載のバチルス・スリンギエンシス変 種アイザワイ細菌。 ６．〜１２０、〜１１０＋、７８、５０、４６＋、４３、３３、３１、６．０（ ｏ．ｃ．）、８．０、５．４、４．７、３．５メガダルトンのプラスミド及びＬ ．Ｄ．Ｅを含むプラスミド配列を有する、請求項５に記載のバチルス・スリンギ エンシス変種アイザワイ細菌。 ７．請求項１ないし６のいずれかに記載のバチルス・スリンギエンシス細菌によ り産生されたトキシン蛋白質。 ８．昆虫の食餌供給物又は索餌場に殺虫的に有効な量の、ＮＲＲＬに寄託され受 託番号Ｂ−１８０４６を割当てられたＨＤ−１２２Ａ、ＮＲＲＬに寄託され受託 番号１８４０７を割当てられたＨＤ−１２２Ｂ及びＮＲＲＬに寄託され受託番号 １８４０８を割当てられたＨＤ−１２２Ｃ；又はそれらの突然偏異体、組換え体 又は遺伝工学的な誘導体から選択されたバチルス・スリンギエンシス変種アイザ ワイ細菌株を施用することを特徴とする昆虫を防除する方法。 ９．該昆虫が鱗翅目昆虫である、請求項８に記載の方法。 １０．請求項１ないし６のいずれかに記載されたバチルス・スリンギエンシス細 菌、又はそれらのトキシン蛋白質、及び適当なキャリヤーを特徴とする殺虫剤組 成物。
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