SK145792A3

SK145792A3 - Rapamycin derivatives and pharmaceutical agents containing them

Info

Publication number: SK145792A3
Application number: SK1457-92A
Authority: SK
Inventors: Craig E Caufield
Original assignee: American Home Prod
Priority date: 1991-05-20
Filing date: 1992-05-14
Publication date: 1995-04-12
Also published as: CZ145792A3; HU9201622D0; MX9202285A; CA2068567A1; NO921976D0; ZA923601B; US5118677A; FI922201A0; FI922201A; AU641319B2; KR920021554A; EP0515140A1; HUT62590A; NZ242778A; NO921976L; JPH05148271A; AU1637892A

Description

Oblast vynálezu

Vynález se týká derivátu rapamycinu a farmaceutických prostŕedkú s imunosupresivním, protizánetlivým, antifungálním a protinádorovým účinkem s obsahem tšchto látek.

Dosavadní stav techni k y

Rapamycin je makrocykli.cké. trienové antibiotikum produkované Streptortiyces' hygroscopicus, které má antifungální účinnost, zejména proti Candida albicans, a to jak in vitro, tak in vivo, jak bylo uvedeno v publikacích C. Vezina a další, J. Antibiot. 20, 721, 1975, S.N. Sehgal a další, 3. Antibiot. 20, 727, 1975, H.A.Baker a další, J. Antibiot. 31, 539, 1970 a US patentové spisy é. 3 929992 a 3 993749.

Samotný rapamycin (US patentový spis č. 4 005 171) nebo v kombinaci s picibanilem (US patentový spis č. 4 4DL 653) má protinádorový účinek.Martel a další, Can. 3. Physiol. Pharmacol. 55, 48,1977 popisují, že rapamycin je účinný na modelu experi-r·:· menbtální alergické encefalomyelitidy, modelu pro roztroušenou sklerózu, na modelu athritidy, vyvolané pri použití pomocného prostŕedkú, rheumatoidní athritidy a účinné inhibuje tvorbu protilátek typu IgE.

Imunosupresivní účinek rapamycinu byl popsán ve FASEB 3, 3411, 1989. Bylo prokázáno, že také cyklosporin A a FK-506, další makrocyklické molkuly, jsou účinné jako imunosupresivní látky a je proto možno je použít jako látky pro prevenci odmítnutí transplantátu (FASEB 3, 3411, 1989, FASEB 3, 5256, 1909 a R.Y. Calne a další, Lancet 1103, 1978.

Mono- a diacylované deriváty rapamycinu (esterifikované v polohách 20 a 43) jsou účinnými antifungálními látkami, jak bylo popsáno v US patentovom spisu č. 4 316 805 a tyto deriváty byly také použitý k výrobe ve vode rozpustných prekursorú rapmycinu podel US patentového spisu č. 4 650 803. V poslední dobé bylo číslování atomú v molekule rapamycinu pozmänéno, takže podie názvosloví Chemical Abstracts by svrchu uvedené esterové skupiny byly uložený v polohách 31 a 42.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvorí nové deriváty rapamycinu, které je možno vyjádrit obecným vzorcem I

kde

znamenaj! nezávisle na sobé atóm vodíku nebo skupinu

0

4

-C-X-C-NR n kde

X znamená skupinu nebo -Ar-,

R⁵ a R^ znamenaj! nezávisle na sobé atóm vodíku, alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku nebo nékterou ze .skupín -(CH_?) -Ar, -(Cll_?) -NR^R^ nebo

-(CH₂) -n rYr'y , ~ P

R^ a R^ znamenají nezávisle atóm vodíku, alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku nebo skupinu -(CH₂)_n“Ar,

Ar je prípadné mono- nebo di-substituovaná skupina, která se volí ze skupín a až g

nebo (g) kde prípadným substituentem je alkyl □ 1 až 6 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 10 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlíku, kyanoskupina, atóm halogénu, nitroskupina, karbalkoxyskupina o 2 až 7 atomech uhlíku nebo perfluoralky1 o 1 až 6 atomech uhlíku,

R⁷ znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku,

Y znamená atóm halogénu, zbytek sulfátu, fosfátu nebo p-toluensulfonátu, m znamená číslo 1 až 6, n znamená 1 až 6 a p znamená 1 až 6,

2 za predpokladu, že R a R nejsou současne atómy vodíku, jakož i soli tšchto sloučenin, pŕijatelné z farmaceutického hlediska.

Soli, pŕijatelné z farmaceutického hlediska je možno tvoŕit v pŕípadč, že R^ nebo R^ znamenají skupinu -(CH„) -NR^R^ 4 P nebo v prípade, že Ar znamená pyridiyl nebo chinolyl, popŕípadé mono- nebo di-substituovaný. Soli, pŕijatelné z farmaceutického hlediska jsou odvozený od organických nebo anorganických kyselín, napríklad od kyseliny octové, mléčné, citrónové, vinné, jantárové, maleinové, malonové, glukonové, chlorovodíkové, bromovodíkové, fosforečné, dusičné, sírové, methansulfonové a podobné.

Z uvedených látek jsou výhodné ty sloučeniny, v nichž X znamená skupinu -(CH₇) -, dále ty látky, v nichž X znamená skupinu ^a A a R⁴ znamenají alkylové zbytky o 1 až 6 atomech uhlíku a ty látky, v nichž X znamená skupinu -(CH„) -,

4 ^{Ĺ m}

R znamená atóm vodíku a R a Ar znamenají skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-Ar.

Sloučeniny obecného vzorce I, acylované v poloze 42 je možno pripraviť tak, že se acyluje raparnycin acylačním činidlem typu amidokyseliny obecného vzorce

HO

kde jednotlivé symboly mají svrchu uvedený význam, za prítomnosti vhodného väzného činidla, napríklad príslušne substituovaného karbodiimidu.

Sloučeniny podie vynálezu, acylované v polohách 31 a 42 je možno pripraviť svrchu uvedeným zpôsobem pri zvýšení hodnôt reakčních parametrú, jako jsou čas, teplota a množství acylačního činidla.

Sloučeniny podie vynálezu, acylované v poloze 31 je možno pripraviť tak, že se raparnycin chráni na alkoholové skupine v poloze 42, napríklad pči použití terc.butyldimethylsilylové skupiny za prítomnosti baze, napríklad imidazolu, s následnou acylací v poloze 31 pôsobením acylačního činidla svrchu uvedeného obecného vzorce. Odstrančním ochranné skupiny se získají sloučeniny, acylované v poloze 31. V pŕípadé terc.butyldimethyl silylové ochranné skupiny je možno odstranäní provést za mírnš kyselých podmínek, napríklad pôsobením smési vodného roztoku kyseliny octové a tetrahydrofuránu.

Jakmile je uskutečnéna acylace v poloze 31 a je odstránená ochranná skupina v poloze 42, je možno provést acylaci v poloze 42 reakcí s odlišnou amidokyselinou svrchu uvedeného obecného vzorce, takže se získají sloučeniny s odlišnými acylovými skupinami v polohách 31 a 42. Je také možno postupovať tak, že se sloučeniny, acylované v poloze 42, pripravené svrchu uvedeným zpôsobem u vedou do reakce s acylačním činidlem odlišné štruktúry, pŕičemž se opét získají sloučeniny s odlišnými acylovými skupinami v polohách 31 a 42.

Acylační činidlo, užité k výrobe sloučenin podie vynálezu je možno pripravit z anhydridú, které jsou béžné dostupné postupy, které jsou známe z literatúry podie následujícího schematu

Imunosupresivní účinek byl vyhodnocen pomoci štandardní zkoušky in vitro, pri níž se méŕí proliferace lymfocytú (LAF) a dvéma standardními farmakologickými testy in vivo. Prvním testem in vivo je test na lymfatickou popliteální uzlinu (PLN), na níž se méŕí účinek sloučenin podie vynálezu na smíšené lymfocyty, druhou zkouškou in vivo je vyhodnocení doby prežití kožního štépu.

Metoda LAF na thymocytech pri použití komitogenu byla užitá in vitro k vyhodnocení imunosupresivního účinku sloučenin podie vynálezu. Postupuje se tak, že se buňky brzlíku normálních myší kmene BALB/c péstují 72 hodin za prítomnosti PHA a IL-1 a v prubéhu posledních 6 hodin se uvedou do styku s thymidinem, značeným triciem. Buňky se péstují bez prítomnosti a za prítomnosti rúzných koncentrací rapamycinu, cyklosporin A nebo zkoumané látky podie vynálezu. Pak se buňky oddelí a stanoví se jejich rádioaktivita. Inhibice proliferace lymfocytú se uvádí v procentech impulsú za minutu ve srovnání s kontrolami bez zkoumané látky. Výsledky jsou vyjádreny následujícím pomérem:

^H-kontrolních bunék brzlíku - ^H-buňky brzlíku po pôsobení rapamycinu ^H-kontrolní buňky brzlíku - ^H-buňky brzlíku po pôsobení zkoumané látky

Reakce se vznikem smíšených lymfocytú (MĽR) vzniká v pŕípadé, že se ve tkáňové kultuŕe kombinují lymŕoidní buňky geneticky odlišných, živočichú. Každé z téchto bunék stimulují odlišné buňky k transformaci na blasty, což má za následek zvýšenou syntézu DNA, kterou je možno stanovit kvantitatívne včlenäním thymidinu, značeného triciem. Vzhledem k tomu, že MLR je funkce poruchy hlavního antigénu histologické kompatibility, je pokus PLN in vivo pri použití popliteální lymfatické uzliny blízce príbuzný stavu , pri némž hostitel odmítá nebo pŕijímá cizorodý štép. Postupuje se tak, že se ozáŕené slezinné buňky myší BALB/c vstŕiknou do pravé zadní tlapky myší C3H. Zkoumaná látka se podává denne perorálné ode dne 0 do dne 4. Ve dnech 3 a 4 se podá thymidin, značený triciem intraperitoneálné. Ve dni 5 se odstráni zadní popliteální lymfatické uzliny, homogenizují se a stanoví se rádioaktivita. Odpovídající uzliny z levé dolní končetiny jsou použitý jako uzliny kontrolní. Vypočítá se potlačení odpovédi, jako kontrolní zvíŕata se užijí zvíŕata, jimž není podávána zkoumaná látka. Tato zvíŕata jsou považována za allogenní kontrolu. Rapamycin v dávce 6 mg/kg perorálné zpúsobí potlačení na 86 %, cyklosporin A v téže dávce má 43 %. Výsledky se vyjadŕují následujícím pomérem:

^H-PLN buňky kontrolních - ^H-PLN-buňky myší C3H po pôsobení myší C3K rapamycinu ^H-LPN-buňky kontrolních - ^H-PLN-buňky myší C3H po pôsobení myší C3K zkoumané látky

Pri druhé zkoušce in vivo se stanoví doba prežití kožního štépu z myších samcú kmene DBA/2, které byly transplantov-ány myším samcúm kmene BALB/c. Bylo užito upravené metódy podie publikace R. E.Billingham a P. 8. Medawar, J. Exp. Biol. 28:385-402, 1951. Postupuje se tak, že se kožní štép dárce uloží do kúže zad pŕíjemce a současné se jako kontrola do téže oblasti uloží kožní Štép pŕíjemce. Pak se pŕíjemcúm podávají rúzné koncentrace cyklosporinu A jako kontrolní látky nebo rúzné koncentrace zkoumané látky intraperitoneálné. Jako .kontrola se užijí zvíŕata bez ošetrení. Štép se denné sleduje a pozoruje se tak dlouho, dokud není vysušen a nevytvorí černavý strup. Tento den se považuje za den odmítnutí štépu. Doba prežití jako počet dnu + štandardní odchýlka se srovnává pro kontrolní skupinu a pro skupinu, jíž byla podávána zkoumaná látka.

Výsledky pro nékteré sloučeniny podie vynálezu jsou pro svrchu uvedené zkoušky shrnuty v následující tabulce 1:

sloučenina	LAF	PLN	kožní štép
z príkladu	pomer	pomér	dny + SO
1	1,94	0,62	nehodnoceno
2	0,14	nehodnoceno nehodnoceno
3	0,19	0,76	7,5+1,6
4	0,91	0,59	9,5+0,8
rapamycin	1,00	1,00	12,0+1,7

Výsledky téchto standardních farmakologických zkoušek prokazují imunosupresivní účinnost in vitro i in vivo pro sloučeniny podie vynálezu. Pozitívni pomér pro testy LAF a PLN prokazuje potlačení proliferace T-bunék. Vzhledem k tomu, že kožní štépy jsou po transplantaci bez použití imuno9 supresivních látek obvykle odmítnuty v prúbéhu 6 až 7 dnú, prokazuje prodloužení doby prežití kožních štépú po podání sloučeniny podie vynálezu jejich použitelnost, jako imunosupresivních látek.

Vzhledem k tomu,že sloučeniny podie vynálezu jsou velmi podobné rapamycinu a mají také podobnou účinnost jako rapamycin, je možno pŕedpokládat, že inají také antifungální a protinádorové vlastnosti.

Vzhledem k výsledkúm standardních farmakologických zkoušek je možno tyto látky použít k léčbé odmítnutí transplantátu, napríklad srdce, ledviny, jater, kostní dfené a kožních transplantátú, v pŕípadé autoimunologických onemocnéní jako jsou lupus, rheumatoidní arthritida, cukrovka, myasthenia gravis, a roztroušená sklerosa a také v pŕípadé zánôtlivých onemocnení,, jako jsou lupenka, kožní zánéty, exémy, seborrhea, zánétlivá onemocnôní močového môchýŕe a tlustého streva a uveitis, dále v prípade pevných nádorú a houbových infekcí.

Sloučeniny podie vynálezu je možno podávat jako takové nebo spolu s nosičem, pŕijatelný z farmaceutického hlediska, látky jsou určený pro podávání savcúm, je možno užít pevný nebo kapalný nosič.

Pevný nosič muže zahrnovat jednu nebo vétší počet látek a môže obsahovať také chulové látky, kluzné látky, pomocná rozpouštédla, látky, napomáhající vzniku suspenze, plniva, látky, napomáhající slisování nebo také rozpadu tablet, múže také jít o materiál, určený k opouzdŕení účinné látky.

V prípade prášku je nosičem jemné prášková pevná látka, která se mísí s jemné práškovou účinnou složkou. V pŕípadé tablet se účinná složka mísí s nosičem, který má žádoucí vlastnosti pri lisování, ve vhodném poméru, načež se tableta zpracovává na požadovaný rozmer a tvar. Prášky a tablety s výhodou obsahují až 99 % účinné složky. Vhodným pevným nosičem je napríklad fosforečnan vápenatý, stearan horečnatý, mastek, cukry, laktosa, dextrin, škrob, želatína, celulosa, methylcelulosa, sodná súl karboxymethylcelulosy, polyvinylpyrrolidon, vosky s nízkou teplotou tání a iontoméničové pryskyŕice.

Kapalné nosiče se užívají pri pŕipravč suspenzí, roztoku, emulzí, sirupu, elixírú a prostŕedkú pod tlakem.

Účinnou složku je možno rozpustiť nebo uvést do suspenze v kapalném nosiči, který je pŕijatelný z farmaceutického hlediska, jako je voda, organické rozpouštôdlo, smés vody a organického rozpouštšdla nebo z farmaceutického hlediska pŕijatelný olej nebo tuk. Kapalný nosič muže obsahovať další vhodné farmaceutické prísady, jako jsou pomocná rozpouštédla, emulgátory, pufry, konzervační prostŕedky, sladidla, chuíové látky, látky, napomáhající vzniku suspenze, zahušíovadla, barviva, regulátory viskozity, stabilizátory nebo regulátory osmotického tlaku. Vhodným kapalným nosičem pro t

perorální a parenterální podání je voda, která muže obsahovať další prísady, napríklad deriváty celulosy, s výhodou jde o roztok sodné soli karboxymethylcelulosy, dalším vhodným nosičem je alkohol, a to jednosytný alkohol i vícesytné alkoholy, jako glykoly a deriváty téchto alkoholu a také oleje, napríklad frakcionovaný kokosový nebo arašídový olej. Pro parenterální podání múže být nosičem také ester, napríklad ethyloleát a isopropylmyristát. Sterilní kapalné nosiče je možno užít pro parenterální podání ve sterilních farmaceutických prostŕedcích. Kapalným nosičem pro prostŕedky pod tlakem múže být halogenovaný uhlovodík nebo jiný hnací prostŕedek, pŕijatelný z farmaceutického hlediska.

Kapalné farmaceutické prostŕedky ve forme sterilních roztoku nebo suspenzí je možno užít napríklad pro nitrosvalové, intraperitoneální nebo podkožní injekci. Sterilní

I roztoky je možno podávať také nitrožilné. Sloučeniny je možno podávať zejména perorálné ve forme pevného nebo kapalného farmaceutického prostŕedku.

Farmaceutický prostŕedek podie vynálezu má s výhodou tvar lékové formy, napríklad tablety nebo kapsle. V této lékové forme obsahuje jednotlivá dávka príslušné množství účinné složky. Múže jít také o balené prášky, lékovky, ampule, pŕedem naplnené injekční stŕíkačky nebo polštáŕky s obsahem kapaliny. Jednotlivou dávku múže obsahovať jedna kapsle nebo tableta nebo príslušné množství kapslí nebo tablet. Použitou dávku vždy stanoví ošetŕující lékaŕ.

Mimoto je možno sloučeniny podie vynálezu použít ve forme roztoku, krému nebo mazání spolu s nosným prostredím, pŕijatelným z farmaceutického hlediska v koncentraci 0,1 až 5, s výhodou 2 % hmotnostní účinné látky. Tyto prostŕedky jsou určený pro ošetrení částí téla k dosažení antifungálního účinku.

Praktické provedení vynálezu bude osvétleno následujícími príklady.

Príklady provedení vynálezu

Príklad 1

Rapamycin 42-ester kyseliny 4-(dimethylamino)-4-oxobutanové

K roztoku 1,00 g, 1,09 mmol rapamycinu ve 20 ml bezvodého dichlormethanu se pridá 316 mg, 2,18 mmol kyseliny N,N-dimethylsukcinamové, 15 mg 4-N,N-dimethylaminopyridínu a pak 476 mg l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu. Roztok se míchá pŕes noc, pak se vlije do IN roztoku kyseliny chlorovodíkové a trikrát se extrahuje ethylacetátem. Organické vrstvy se spojí, promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným, zfiltrují a odparí ve vákuu, čímž se získá biede žlutá pénovitá pevná látka. Odparek se podrobí rychlé chromatografii na sloupci oxidu kremičitého s rozmérem 40 x 150 mm, sloupec se vyrnývá pri použití gradientu 40 až 60 % ethylacetátu vhexanu, čímž se ve výtéžku 10 % získá 105 mg čistého rapamycin-42-esteru kyseliny 4-(dimethylamino)-4-oxobutanové, který se izoluje ve formé monohydrátu.

¹H NMR (CDClj 400 MHz): S 4,81 (s, III, anomerní OH), 4,66 (m, 1H, -CH0₂CCH₂), 4,19 (m, 1H, 31-CHOH), 3,39 (s, 3H, -OCH-j), 3,33 (s, 3H, -OCH^, 3,14 (s, 3H, -00Η_?), 3,03 (s, 3H, -CONCHj), 2,95 (s, 3H, -CONCH^), 2,67 (m, 4H, -0₂CCH₂CH₂C0NMe₂), 1,75 (s, 3H, CH₃C=C-), 1,65 (s, 3H,

CH-jC = C-),

IR (KBr) 3450 (OH), 2940, 2090, 1735 (0=0),1650 (C=0), 1455, 1380, 1295, 1105, 995 cm¹,

MS (negatívni ion FAB) 1040 (M^-),

MS (negatívni ion FAB) vypočteno 1040,61842, nalezeno 1040,6196.

Analýza pro ^C57^H8B^N2°15 vypočteno C 65,74, H 8,52, N 2,69 h nalezeno C 65,81, H 8,73, N 2,42 ^?s.

Z rapamycinu a odpovídajícího amidoesteru je možno pri použití zpúsobu, popsaného v príkladu 1 získat ješté následující sloučeniny podie vynálezu:

rapamycin 42-ester kyseliny 4-//l-(4-chlorfenyl)~methyl/amino/-4-oxobutanové, rapamycin 42-ester kyseliny 5-//3-(2-naftyl)propyl/amino/-5-oxopentanové, rapamycin 42-ester kyseliny 6-(N-methyl-N-hexylamino)-6-oxohexanové, rapamycin 42-ester kyseliny amino/-4-oxobutanové, rapamycin 42-ester kyseliny -5-oxopentanové, rapamycin 42-ester kyseliny ethyl/amino/-4-oxobutanové, rapamycin 42-ester kyseliny amino/-4-oxobutanové, rapamycin 42-ester kyseliny

-oxopentanové, rapamycin 42-ester kyseliny rapamycin 42-ester kyseliny karbamyl/benzoové, rapamycin 42-ester kyseliny tinové, rapamycin 42-ester kyseliny pikolinové.

4- //3-(dimethylamino)propyl/5- //4-(oktylamino)butyl/amino/4-//2-(3-(-6-hydroxychinolyl))4- //2-(fenylmethylamino)ethyl/5- (N-hexyl-N-decylamino)-52-(dimethylkarbamyl)benzoové, 2-//3-(diethylamino)propyl/2- /(fenyImethy1)karbamy1/niko3- /(fenyImethyl)karbamyl/Pŕíklad 2

Rapamycin-31,42-diester kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové

K roztoku 5,0 g, 50 mmol anhydridu kyseliny jantárové v 50 ml dichlormethanu se pridá 550 mg DMAP a 6,1 g, 50 mmol 2-(2 -aminoethyDpyridinu. Dôjde k exothermní reakci, reakční srnés se varí 1 hodinu pod zpétným chladičem a pak se zchladí na teplotu místnosti, pri níž se míchá 40 hodin. Pak se reakční smšs odparí ve vákuu, výsledný pevný podíl se rozpustí v pufru o pH 4 a roztok se trikrát extrahuje srnésí ethylacetátu a tetrahydrofuránu v pomeru 4 : 1 po nasycení vodného roztoku síranem amonným. Organická vrstva se vysuší síranem sodným a odparí ve vákuu. Odparek se nechá pŕekrystalovat ze smesi ethylacetátu a rnethanolu, čímž se ve výtéžku 50 % získá 5,5 g kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové.

K roztoku 5,8 g, 4,19 mmol rapamycinu ve 125 ml dichlormethanu se pri teplote místnosti pridá 200 mg DMAP, 4,5 g,

20,9 mmol dicyklohexylkarbodiirnidu a 4,6 g, 20,7 mmol kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové'. Reakční smés se míchá pŕes noc pri teploté místnosti. Pak se reakční smés vlije do vody ,a dvakrát se extrahuje ethylacetátem. Organické extrakty se spojí, vysuší se síranem sodným a odparí ve vákuu na pevný odparek. Tento odparek se čistí preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií pri použití sloupce Waters Prep. 500 a 5¾ rnethanolu v ethylacetátu, čímž se ve výtéžku 79 % získá 4,50 g čistého rapamycin-51,42-diesteru kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové.

¹H NMR (COC1₃, 400 MHz): S 8,55 (s, 1H, aróm.), 7,67 (m, 1H, aróm.), 7,22 (m, 2H, aróm.), 6,74 (m, 1H, aróm.), 4,65 (m,

1H, CH0₂CCH₂), 4,10 (m, 1H, 51-CHOH), 5,68 (m, 211, -CONHCH ), 5,56 (s, 5H, -OCH-j), 5,55 (s, 5H, -OCH-j), 5,14 (s, 5H, -OCH-j), 5,02 (m, 2H, CH₂Pyr), 2,67 (s, 5H, -0₂CCH₂CH₂C0NHR), 1,75 (s, 511, CH₃C=C), 1,66 (s, 5H, CH₃C=C),

IR (KBr): 5590 (OH), 2950, 2850, 1755 (C=0), 1640 (C=0),

1555, 1455, 1500, 1295, 1100, 995 cm¹,

MS (neg. FAB) 1521 (M).

Z rapamycinu a príslušného amidoesteru je možno zpúsobem podie príkladu 2 pŕipravit také následující látky:

rapainycin-51,42-diester kyseliny 4-//1-(4-chlorfenyl)methyl/amino/-4-oxobutanové, rapamycin-51,42-diester kyseliny 6-(N-methyl-N-hexylamino)-6-oxohexanové, rapamycin-51,42-diester kyseliny 4-//5-(dimethylamino)propyl/amino/-4-oxobutanové, rapamycin-31,42-diester kyseliny amino/-5-oxopentanové, rapamycin-31,42-diester kyseliny ethyl/amino/-4-oxobutanové, rapamycin-31,42-diester kyseliny ethyl/amino/-4-oxobutanové,

5-//4-(oktylamino)butyl/4-//2-(3-(6-hydroxychinolyl))

4-//2-(fénylmethylamino)rapamycin-31,42-diester kyseliny 4-//-2-(2-indolyl)ethyl/amino/-4-oxobutanové, rapamycin-31,42-diester kyseliny 5-(N-hexy1-N-decy1amino)-5-oxopentanové, rapamycin-31,42-diester kyseliny benzoové a rapamycin-31,42-diester kyseliny propyl/karbamyl/benzoové.

2-(dimethylkarbamyl)2-//3-(diethylamino)Pfíklad 3

Dihydrochlorid rapamycin-31,42-diesteru kyseliny 4-oxo-4//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové

K roztoku 500 mg, 378 mikromolu rapamycin-31,42-esteru kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové ve 2 ml methanolu se pridá 56 mikrolitrú acetylchloridu. Reakční smés se odparí ve vákuu, čímž se ve výtéžku 100 % získá 530 mg čistého dihydrochloridu rapamycin-31,42-diesteru kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové.

¹H NMR (d₆-DMS0, 400 MHz): š 0,53 (s, 1H, aróm.), 8,32 (m, 1H, aróm.), 7,76 (m, 2H, aróm.), 8,06 (m, 1H, aróm.), 3,45 (m, 5H,-0CH₃ a -CONHCHp, 3,44 (s, 3H, -OCH-j), 3,23 (s, 3H, -OCH-j), 3,07 (m, 2H, Cl^Pyr), 2,49 (s, 3H, -0₂CCH₂CH₂C0NHR), 1,79 (s, 3H, CK₃C=C), 1,66 (s, 3H, 00^0 = 0,

IR (KBr) 3400 (OH), 2920, 2850, 1730 (C=0), 1635 (C=0),

1545, 1440, 1370, 1150, 985 cm'¹.

MS (neg. FAB) pro vypočteno 1321,0950, nalezeno 1321,7350.

MS (neg. FAB): 1321 (volná baze, M^-), 590, 446 (100), a 297. Analýza pro C7-jH^..Ν^-Ο^7CI₂.5 H₂0 vypočteno C 56,04, H 6,71, N 4,47 ¾ nalezeno C 55,66, H 6,36, N 4,29.

Príklad 4

Rapamycin-31,42-diester 2-/2-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/ethyl/-l-methylpyridiniumjodidu

K roztoku 500 mg, 370 mikromolu rapamycin-31,42-diesteru kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové ve 2 ml acetónu se pridá 50 mikrolitrú methyljodidu a reakční smés se míchá pfes noc pri teploté místnosti. Bylo prokázáno, že reakce není dovŕšená, bylo pfidáno 25 mikrolitrú methyljodidu a smés byla vaŕena pod zpétným chladičem. Pak byla reakční smés zchlazena na teplotu místnosti a odparená ve vákuu, čímž bylo ve výtôžku 9B h získáno 580 mg rapamycin-31,42-diesteru 2-/2-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/ethyl/-l-methylpyridiniumjodidu, který byl izolován jako tetrahydrát.

¹H NMR (CDCl-j, 400 MHz): ^9,05 (m, 1H, aróm.), 0,40 (m, 1H, aróm.), B,04 (m, 1H, aróm.), 7,89 (m, 2H), aróm.), 4,53 (s,

3H, NCH₃ ⁺), 3,64 (m, 2H, -CONHCHp, 3,38 (s, 311, -OCH-j),

3,33 (s, 3H, -0CH₅), 3,12 (s, 3H, -OCH-j), 3,09 (m, 2H, Cl^Pyr) 2,56 (s, 3H, -0₂CCH₂CH₂C0NHR), 1,82 (s, 3H, CH-jOC-), 1,64 (s, 3H, CH₃C=C).

IR (KBr): 3410 (OH), 2920, 2840, 1720 (C = 0), 1625 (C = 0)',

1535, 1430, 1360, 1225, 1100, 985 cm'¹.

MS (neg. FAB): 1605 (M^-).

Analýza pro ^c75^Hχog^N5⁰χ7¹2’^{4 H}2° vypočteno C 53,67, H 6,97, N 4,17 % nalezeno C 53,96, H 6,03, N 3,72 %.

Z príslušne substituovaného esteru rapamycinu a príslušné substituovaného alkylačního činidla je možno zpúsobem podie príkladu 4 získat také následující látky:

rapamycin-31,42-diester 3-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/propyltrimethylamoniumjodidu, í

rapamycin_31,42-diester 3-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/propyltrimethylamoniumsulfátu, rapamycin-31,42-diester 3-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/propy1trimethýlamoniumf osfátu, rapamycin-31,42-diester 3-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/propyltrimethylamonium-p-toluensulfoná tu, rapamycin-31,42-diester 3-/2-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/ethy1/-1-methyIchinoliniumjodidu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Deriváty rapamycinu obecného vzorce I kde

12'

R a R znamenají nezávisle na sobé atóm vodíku nebo skupinu í I o o

3-4

-c-x-c-NirR* kde

X znamená skupinu nebo -Ar-,

3 4

R a R znamenaj! nezávisle na sobé atóm vodíku, alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku nebo nekterou ze skupín -(CH₂)_n-Ar, -(CH₂)_p-NR⁵R⁶ nebo

-(CH₂)_p-N⁺R⁵R⁶R⁷Y“ ,

R^ a R^ znamenají nezávisle atóm vodíku, alfyl o 1 až 12 atomech uhlíku nebo skupinu -(CH₂)_n~Ar,

Ar je prípadné mono- nebo di-substituovaná skupina, která se volí ze skupin a až g nebo

Y kde prípadným substituentem je alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 10 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlíku, kyanoskupina, atóm halogénu, nitroskupina, karbalkoxyskupina o 2 až 7 atomech uhlíku nebo perfluoralky1 o 1 až 6 atomech uhlíku,

R⁷ znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku,

Y znamená atóm halogénu, zbytek sulfátu, fosfátu nebo p-toluensulfonátu, m znamená číslo 1 až 6, n znamená 1 až 6 a p znamená 1 až 6,

1 2 za predpokladu, že R a R nejsou současné atómy vodíku, jakož i soli téchto sloučenin, prijatelné z farmaceutického hlediska.
2. Deriváty rapamycinu podie nároku 1, skupinu v nichž X znamená
3. Deriváty rapamycinu podie nároku 1, v nichž X znamená , x 3 4 skupinu ^-(CH₂)_m- a R a R znamenají alkylové zbytky o 1 až 6 atomech uhlíku.
4. Deriváty rapamycinu podie nároku 1, v nichž X znamená skupinu R^ znamená atóm vodíku a R^ tvorí společné s Ar skupinu -(CH₂)_n-Ar.
5. Derivát rapamycinu podie nároku 1, rapamycin-42-ester kyseliny 4-(dimethylamino)-4-oxobutanové.
6. Sloučenina podie nároku 1, rapamycin-31,42-diester kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)ethyl/amino/butanové nebo sul této látky, pŕijatelná s farmaceutického hlediska.
7. Derivát rapamycinu podie nároku 6, rapamycin-31,42diester kyseliny 4-oxo-4-//2-(2-pyridinyl)-ethyl/amino/~ butanové ve formš dihydrochloridu.
8. Oerivát rapamycinu podie nároku 1, rapamycin-31,42-diester 2-/2-/(3-karboxy-l-oxopropyl)amino/ethyl/~l-methylpyridíniumjodidu.
9. Farmaceutický prostfedek pro potlačení imunologické „ odpovôdi, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje derivát rapamycinu obecného vzorce I • podie nároku 1 nebo jeho súl, prijatelnou z farmaceutického hlediska spolu s farmaceutickým nosičem.
10. Zpúsob Ť^qení odmítnutí trapKjílantátu, autoimunologických onemocnéní a^zánétlivyjdi onemocnéní u savcú, vyznačující s\zťi m, že se temto savcúm podá účinné množství dej>ŤvátiK^apamycinu obecného vzorce I podie nároku 1 neboxjfeho soli, priJatelné z farmaceutického hlediska. .s