SE465222B - Ett rekombinant, humant faktor viii-derivat och foerfarande foer dess framstaellning - Google Patents

Ett rekombinant, humant faktor viii-derivat och foerfarande foer dess framstaellning

Info

Publication number
SE465222B
SE465222B SE8904239A SE8904239A SE465222B SE 465222 B SE465222 B SE 465222B SE 8904239 A SE8904239 A SE 8904239A SE 8904239 A SE8904239 A SE 8904239A SE 465222 B SE465222 B SE 465222B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
factor viii
human factor
kda
domain
amino acid
Prior art date
Application number
SE8904239A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8904239D0 (sv
SE465222C5 (sv
SE8904239L (sv
Inventor
A B Almstedt
Original Assignee
Kabivitrum Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=20377785&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SE465222(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Kabivitrum Ab filed Critical Kabivitrum Ab
Priority to SE8904239A priority Critical patent/SE465222C5/sv
Publication of SE8904239D0 publication Critical patent/SE8904239D0/sv
Priority to NZ236276A priority patent/NZ236276A/xx
Priority to DE1999175066 priority patent/DE19975066I2/de
Priority to DE69032600T priority patent/DE69032600T3/de
Priority to PCT/SE1990/000809 priority patent/WO1991009122A1/en
Priority to BR909007921A priority patent/BR9007921A/pt
Priority to DE69034040T priority patent/DE69034040T2/de
Priority to ES97103685T priority patent/ES2189897T3/es
Priority to JP3501715A priority patent/JP2644084B2/ja
Priority to AT97103685T priority patent/ATE232213T1/de
Priority to EP97103685A priority patent/EP0786474B1/en
Priority to ES91901327T priority patent/ES2119769T5/es
Priority to EP02009162A priority patent/EP1293513A3/en
Priority to AU70393/91A priority patent/AU645539B2/en
Priority to AT91901327T priority patent/ATE170219T1/de
Priority to SG9603152A priority patent/SG66753A1/en
Priority to DK97103685T priority patent/DK0786474T3/da
Priority to DK91901327T priority patent/DK0506757T4/da
Priority to CA002071875A priority patent/CA2071875C/en
Priority to EP91901327A priority patent/EP0506757B2/en
Priority to PT96208A priority patent/PT96208B/pt
Priority to IE451090A priority patent/IE904510A1/en
Publication of SE8904239L publication Critical patent/SE8904239L/sv
Publication of SE465222B publication Critical patent/SE465222B/sv
Priority to NO922325A priority patent/NO309041B1/no
Priority to FI922745A priority patent/FI104260B1/sv
Priority to HU95P/P00489P priority patent/HU211504A9/hu
Publication of SE465222C5 publication Critical patent/SE465222C5/sv
Priority to HK99104067A priority patent/HK1019449A1/xx
Priority to HK98109933A priority patent/HK1009290A1/xx
Priority to NL990035C priority patent/NL990035I2/nl
Priority to LU90457C priority patent/LU90457I2/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Compositions Of Oxide Ceramics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Confectionery (AREA)

Description

465 222 2 10 15 20 25 30 35 för virusöverföring. Ingen garanti beträffande frånvaro av virus kan emellertid utfärdas. Vidare är koncentraten tämligen dyra pä grund av att plasman som råmaterial är dyr pà grund av begränsad tillgång.
En rekombinant faktor VIII kan sannolikt i stor utsträck- ning lösa de problem som är förenade med användningen av koncen- trat av faktor VIII härledda från plasma. Pà grund av behovet av en rekombinant faktor VIII för att behandla hemofili A arbetar för närvarande ett antal grupper pà utvecklingen av en sådan produkt. Utvecklingen av en rekombinant faktor VIII har emeller- tid stött pä svårigheter. Ett av huvudproblemen är att framstäl- la rekombinant faktor VIII i tillräckligt höga utbyten. Det mes- ta av det utförda utvecklingsarbetet har gjorts under användning av den cDNA-gen som kodar för fullängdsmolekylen av faktor VIII.
Föreliggande uppfinning beskriver en deleterad faktor- -VIII-cDNA som kodar för ett rekombinant faktor-VIII-derivat ' motsvarande beträffande molekylvikt och andra biokemiska karak- teristika tidigare beskriven en plasmafaktor-VIII-form som är närvarande i väsentliga mängder i kommersiella koncentrat (An- derson, L-0. et al (1986), Proc.Natl.Acad.Sci. USA 83, 2979- -2983). Den expressionsnivà som erhålles vid uttryck av denna molekyl i en kultur av djurceller har befunnits vara väsentligt högre jämfört med när fullängdsfaktor-VIII-cDNA användes för att uttrycka faktor VIII. Den nya deleterade faktor-VIII-cDNA kan antas ge tillräckligt höga utbyten av rekombinant faktor VIII för att användas i ett industriellt förfarande för en farmaceu- tisk framställning av rekombinant faktor VIII.
ALLMÄNNA DEFINITIONER I följande avsnitt är nomenklaturen för de olika struktu- rella domänerna i den 2332 aminosyror langa enkelsträngade full- -längdsfaktorn VIII likadan som den som definieras av Vehar, GA. et al (1984), Nature 312, 337-342. A1- och A2-domänerna innehal- les följaktligen inom den tunga kedjan av faktor VIII om ca 200 kDa (aminosyrorna 1 till och med 1548) till ca 90 kDa (aminosy- rorna 1 till och med 740). A3-, C1- och C2-domänerna innehàlles inom den lätta kedjan av faktor VIII om ca 80 kDa (aminosyrorna 1649 till och med 2332). B-domänen utgör den tunga glykosylerade mellanregionen av den enkelkedjiga fullängdsfaktor VIII eller 10 15 20 25 30 35 'B 465 222 C-terminaldelen av 200 kDa-formen av den tunga kedjan av faktor VIII (aminosyrorna 741 till och med 1648). Uttrycket “faktor- -VIII-deletionsderivat“ definieras som en eller flera polypep- tidkedjor med faktor VIII:C-aktivitet härledd från fullängdsfak- tor VIII-polypeptiden genom deletering av en eller flera amino- syror. Uttrycket "faktor-VIII:QD“ definieras som en polypeptid- kedja härledd från fullängdsfaktor VIII utan aminosyrorna 745 till och med 1562. Uttrycket "faktor-VIII:RE" definieras som en polypeptidkedja härledd från fullängdsfaktor VIII utan aminosy- rorna 741 till och med 1648. Uttrycket faktor-VIII:SQ definieras som en polypeptidkedja härledd från fullängdsfaktor VIII utan aminosyrorna 743 till och med 1636.
KÄND TEKNIK I färsk plasma beredd i närvaro av proteasinhibitorer har faktor VIII visat sig ha en molekylvikt av 280 kDa och vara sam- mansatt av två peptidkedjor med molekylvikter om 200 kDa respek- tive 80 kDa (Andersson, L-O et al. (1986) Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 83, 2979-2983). Dessa kedjor sammanhàlles genom metalljon- bryggor. Mer eller mindre proteolytiskt nedbrutna former av fak- tor-VIII-molekylen återfanns som aktiva fragment i faktor-VIII- -material renat från kommersiella koncentrat (Andersson, L-O et al. 1986; Andersson, et al. (1985) EP 0197901). De fragmenterade formerna av faktor VIII med molekylvikter av från 260 kDa ned till 170 kDa bestod av en tung kedja med en molekylvikt varier- ande från 180 kDa ned till 90 kDA (alla varianter med identiska N-termini) i kombination med den lätta kedjan om 80 kDa. De tunga kedjornas N-terminalregion är identisk för den för den enkelkedjiga faktorn VIII erhållen från nukleotidsekvensdata av faktor-VIII-cDNA (Wood, W.I., et al. (1984) Nature 312, 330336, Vehar, G.A., et al., (1984) Nature 312, 337-342).
Den minsta aktiva formen med en molekylvikt av 170 kDa innehållande en 90 kDa och en 80 kDa kedja kunde aktiveras med trombin i samma utsträckning som de högmolekylära formerna. Den representerar sålunda en oaktiverad form. Den har även visats ha full biologisk aktivitet in gigg enligt tester i hemofilihundar (Brinkhous, K.M. et al. (1985) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 82, 8752- -8756). Den hemgstatiska effektiviteten var sålunda densamma som för de högmolekylära formerna av faktor VIII. Vidare förelåg en 465 222 4 10 15 20 25 30 35 40 indikation att 170 kDa-formen hade en överlevnadetid in gigg som var 50% längre än jämfört med de högmolekylära formerna.
Det faktum att den mellanliggande, i stor utsträckning glykosylerade delen av polypeptidkedjan av faktor VIII liggande mellan aminosyrorna Arg-739 och Glu-1649 ej synes vara nödvändig för full biologisk aktivitet har lett manga forskare till att försöka framställa derivat av rekombinant faktor VIII utan denna region. Detta har uppnåtts genom uteslutning av en del av den cDNA som kodar för den mellanliggande i stor utsträckning glyko- sylerade delen av faktor VIII, endera helt eller partiellt.
Exempelvis J.J. Toole, et al. har angett konstruktion och expression av faktor VIII saknande aminosyrorna 982 till och med 1562 respektive 760 till och med 1639, (Proc.Natl.Acad.Sci. USA (1986) 83, 5939-5942). D.L. Eaton et al. rapporterar konstruk- tionen och expressionen av faktor VIII saknande aminosyrorna 79? till och med 1562 (Biochemistry (1986) 25, 8343-8347). R.J.
Kaufman beskriver expression av faktor VIII saknande aminosy- rorna 741 till och med 1646 (PCT-ansökan nr WO 87/04187). N.
Sarver et al. rapporterar konstruktion och expression av faktor VIII med avsaknad av aminosyrorna 747_till och med 1560 (DNA (1987) 6, 553-564). M. Pasek rapporterar konstruktion och ex- pression av faktor VIII saknande aminosyrorna 745 till och med 1562 respektive aminosyrorna 741 till och med 1648 (PCT-ansökan nr 88/00831). K-D Langner rapporterar konstruktion och expres- sion av faktor VIII saknande aminosyrorna 816 till och med 1598 respektive aminosyrorna 741 till och med 1689 (Behring Inst.
Mitt., (1988) nr 82, 16-25, EP 295 597). P. Meulien, et al. rap- porterar konstruktion och expression av faktor VIII saknande aminosyrorna 868 till och med 1562, respektive aminosyrorna 771 till och med 1666 (Protein Engineering (1988) 2(4>, 301-306, EP O 303 540 A1). Vid expression av dessa deleterade former av fak- tor-VIII-cDNA i mammalieceller är produktionsnivan typiskt 10 gånger högre jämfört med fullängdsfaktor VIII.
Vidare har försök gjorts att uttrycka 90 kDa- respektive 80 kDa-kedjorna separat från tva olika cDNA-derivat i samma cell (Burke, R.L. et al. (1986), J.Biol.Chem. 261, 12574-12578, Pavi- rani, A. et al. (1987) Biochem. Biophys. Res. Ccmm., 145, 234- -240). I detta system synes emellertid rekonstitution in gigg vara av begränsad effektivitet med avseende pà utvunnen faktor- -VIII-aktivitet. 10 15 20 25 30 35 s 465 222 ~ BESKRIVNING AV UPPFINNINGEN Föreliggande uppfinning avser förfaranden för framställ- ning av proteiner bestående av en eller flera polypeptidkedjor med faktor-VIII:C-aktivitet. Föreliggande uppfinning avser när- mare bestämt en modifierad cDNA-sekvens härledd från fullängds- faktor-VIII-cDNA, vilken vid uttryck i animalceller ger upphov till produktion på hög nivå av ett protein med faktor-VIII-C- -aktivitet bestående i huvudsak av två polypeptidkedjor med en molekylvikt av 90 kDa respektive 80 kDa.
Genom föreliggande uppfinning åstadkommas sålunda en DNA- -sekvens kodande för ett biologiskt aktivt, rekombinant, humant faktor-VIII-derivat innefattande ett första DNA-segment kodande för 90 kDa-kedjan av human faktor VIII och ett andra DNA-segment kodande för 80 kDa-kedjan av human faktor VIII, vilka segment är inbördes anslutna med ett linker-DNA-segment kodande för en lin- kerpeptid om 4 till ca 100 aminosyrarester av B-domänen av human faktor VIII, varvid minst 4 av nämnda aminosyrarester härrör från C-terminalen av nämnda domän.
Det är föredraget att nämnda linker kodar för minst 4 ami- nosyrarester härrörande från C-terminalen av B-domänen av human faktor VIII. Vid en föredragen utföringsform av uppfinningen kodar nämnda linkergen för upp till ca 20 aminosyrarester av B-domänen av human faktor VIII.
Vid en speciellt föredragen utföringsform av uppfinningen innehåller nämnda DNA-sekvens en linker kodande för en amino- syrasekvens innefattande 12 aminosyror härrörande från B-domänen av human faktor VIII.
Som ett föredraget exempel kan nämnda linker koda för minst 7 aminosyrarester av B-domänen av human faktor VIII, var- vid minst 7 aminosyrarester härrör från C-terminalen och minst 2 aminosyrarester härrör från N-terminalen av nämnda domän.
Vid en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning innehåller DNA-sekvensen en linker kodande för 12 aminosyra- rester härrörande från C-terminalen och 2 aminosyrarester här- rörande från N-terminalen av B-domänen av human faktor VIII.
Uppfinningen avser även en rekombinant expressionsvektor innehållande en transkriptionsenhet innefattande den ovan skis- serade DNA-sekvensen och dessutom en promoter och en polyadeny- leringssignalsekvens. 465 222 10 15 20 25 30 35 Uppfinningen innefattar även värdceller av animaliskt ur- sprung transformerade med den rekombinanta expressionsvektorn som definieras ovan.
Genom uppfinningen åstadkommas dessutom ett förfarande för framställning av ett biologiskt aktivt rekombinant, humant fak- tor-VIII-derivat såsom beskrivits ovan, vilket förfarande inne- fattar odling av en animal cellinje transformerad med den rekom- binanta expressionsvektor såsom definierats ovan i ett närings- medium som tillhör expression och sekretion av human faktor- -VIII-derivat sammansatt av 90 kDa-domänen och bunden därtill medelst metalljonbindning 80 kDa-domänen, varvid det uttryckta derivatet sedan tillvaratas från odlingsmediet.
Slutligen åstadkommas genom uppfinningen ett humant fak- tor-VIII-derivat innefattande 90 kDa-domänen och bunden därtill, eventuellt via linkerpeptiden eller del därav, genom metalljon- bindning 80 kDa-domänen av humanfaktor VIII.
För att erhålla ett protein med faktor-VIII:C-aktivitet bestående av ovanstående två polypeptidkedjor måste den enkla polypeptidkedja som skapas under translation in gigg spjälkas endera genom post-translationell processning i den producerande cellen eller genom proteolytisk processning in vitro, eller bå- dadera. Eftersom protein med faktor-VIII-aktivitet bestående av de två polypeptidkedjorna med 200 kDa och 80 kDa av molekylvikt kan isoleras från human plasma antas det att där finns en lämp- lig spjälkningssite för processningsenzymer enligt ovanstående på den primära enkelkedjiga fullängdsfaktor-VIII-translations- produkten. Förmodligen är en betydelsefull in gigg processnings- site belägen vid karboxiterminalsidan av Arg-1684. Under mognad ger spjälkning vid Arg-1648 upphov till ett faktor-VIII-protein bestående av två kedjor med molekylvikter om 200 kDa och 80 kDa.
Eftersom Arg-1648 synes vara belägen vid en övergång mellan strukturella domäner i faktor-VIII-molekylen utgör den ett ste- riskt tillgängligt mål för processningsenzvmet eller -enzymerna.
Troligen föreligger en annan processningssite vid Arg-740, vil- ken ger upphov till omvandling av 200 kDa-kedjan till en 90 kDa- -kedja ig gitgg, sålunda alstrande den 90 kDa- och 80 kDa-form av faktor VIII som är närvarande i kommersiella, från human plasma härledda,faktor-VIII-koncentrat. I enlighet med förelig- gande uppfinning har det befunnits, att för att producera ett v! 10 15 20 25 30 35 465 222 _ deletionsderivat av faktor VIII som kan processes endera in vivo eller in vitro eller bådadera till ett tvåkedjigt protein bestående av polypeptidkedjor om 90 kDa och 80 kDa ami- nosyrasekvenserna omgivande Arg-740 och Arg-1648 måste vara kon- serverade för att bibehålla de strukturella kraven på korrekt spjälkning. Om närmare bestämt exempelvis aminosyrorna 743 till och med 1636 i fullängdsfaktor-VIII-polypeptiden deleteras er- hålles en ny polypeptidkedja, där 14 aminosyror sammanbinder Arg-740 och Arg-1648. Av dessa 14 aminosyror är sekvensen med de terminala fem aminosyrorna direkt motsvarande de fem aminosyror som följer efter Arg-740 i fullängdsfaktor VIII. Även sekvensen av de 12 karboxiterminala aminosyrorna av ovanstående 14 amino- syrafragment motsvarar direkt de 12 aminosyror som föregår Glu- -1649 i-fullängdsfaktor VIII, så att sålunda bildas en 3 amino- syrors överlappning mellan N- och C-terminalregionerna av B-do- mänen.
För att producera ett faktor-VIII:SQ-protein med hög nivå bestående av de två polypeptidkedjorna enligt det ovanstående sammanfogas cDNA kodande för detta faktor-VIII-deleteringsderi- vatfltill en effektiv transkriptionell enhet tillsammans med de lämpliga regulatoriska elementen i en kloningsvektor som kan propageras i E,coli enligt förfaranden som är kända för fackmän- nen på området. Effektiva transkriptionella regulatoriska ele- ment kan härledas från kromosomal DNA av eukaryota celler. Exem- pelvis promoter-enhancerkombinationer från starkt konstitutivt transkriberade gener kan användas, företrädesvis metallotionein, beta-aktin eller GRP78. Effektiva transkriptionella regulatoris- ka element kan även härledas från virus med eukaryota celler som naturliga värdar. Sålunda kan exempelvis promoter-enhancerkombi- nationer härledda från virus närvarande på djurvärdar användas, företrädesvis den enhancer och promoter som uppträder i lång terminal repeat av Rous sarkomavirus, simian- virus 40, adenovi- rus major late promoter och den humana immediate early promoter av cytomgalovirus. För att erhålla stabila höga nivåmängder av mRNA transkriberad från faktor-VIII-:SQ-CDNA bör den transkrip- tionella enheten innehålla i dess 3'-proximaldel en DNA-region kodande för en transkriptionell termination-polyadenylationssek- vens. Denna sekvens är företrädesvis härledd från tidig 4e5 222 ° 10 15 20 25 30 35 transkriptionell region av simianvirus 40 eller beta-globingenen av kanin.
Denna faktor VIII:SQ-cDNA sammanfogad till en effektiv transkriptionsenhet introduceras sedan i en lämplig värdorganism för expression av faktor-VIII:SQ-proteinet. Denna organism bör företrädesvis vara en animal cellinje av vertebratursprung för att åstadkomma korrekt veckning, bildning av disulfidbindningar och sekretion samt andra post-translationella modifikationer.
Exempel pa de senare är asparaginknuten glykosylering, tyrosin- -0-sulfatering och proteolytisk processning av den nascenta enk- la polypeptidkedjan som är väsentlig för bildningen av det två- kedjiga faktor-VIII-proteinet om 90 kDa och 80 kDa. Exempel pa cellinjer som kan användas är ap-COS-celler, mus-L-celler, mus- -C127-celler, hamster-BHK-21-celler och företrädesvis CHO-cel- ler.
Den transkriptionsenhet som kodar för faktor-VIII:SQ-cDNA kan introduceras i en animal cellinje pà flera olika sätt. Ett exempel pà det är att skapa rekombinanter mellan ovanstående transkriptionsenhet och vektorer baserade pà olika djurvirus.
Exempel pà dessa är vektorer baserade på vacciniavirus, SV40- -virus och företrädesvis bovint papillomavirus.
Transkriptionsenheten kodande för faktor-VIII:SQ-cDNA kan även introduceras i en djurcellinje tillsammans med en annan rekombinant gen, som kan fungera som en dominant selekterbar markör i dessa celler för att underlätta isoleringen av de spe- cifika cellkloner i vilka rekombinant DNA integrerats. Exempel på denna typ av dominanta selekterbara markörgener är Tn5 amino- glykosidfosfotransferas (resistent mot Geneticin, G418) och pu- romycinacetyltransferas (resistent mot puromycin). Transkrip- tionsenheten kodande för en sådan selekterbar markörgen kan àterfinnas antingen pà samma vektor som den som kodar för fak- tor-VIII:SQ-enheten men kan även vara kodad pà en separat vek- tor, som samtidigt introduceras och integreras i värdcellens genom, vilket ofta resulterar i tät fysikalisk bindning mellan de olika transkriptionsenheterna.
Andra typer av dominanta selekterbara markörgener, som kan användas tillsammans med faktor-VIII:SQ-CDNA, är baserade pà olika transkriptionsenheter kodande för dihydrofolatreduktas (dhfr>. Efter introduktion av denna typ av gen i celler som sak- 10 15 20 25 30 35 465 222, företrädesvis CHO-celler (DUKX-B11, DG-44) kan dessa tillväxa i medium ej innehållande nukleosider. nar endogen dhfr-aktivitet, Ett exempel på ett sådant medium är Ham's F12 utan hypoxantin, tymidin och glycin. Dessa dhfr-gener kan användas i förening med den transkriptionella faktor-VIII:SQ-enheten i CHO-celler av ovanstående typ, endera bundna på samma vektor eller i två olika vektorer, sålunda alstrande dhfr-positiva cellinjer producerande rekombinant faktor-VIII:SQ-protein.
Om ovanstående cellinjer odlas i närvaro av den cytotoxis- ka dhfr-inhibitorn methotrexate uppträder nya cellinjer resis- tenta mot methotrexate. Dessa cellinjer kan producera rekombi- nant faktor-VIII:SQ-protein i förhöjd grad genom det förstärkta antalet transkriptionella länkade dhfr- och faktor-VIII:SQ-enhe- ter. Vid förökning av dessa cellinjer i stigande koncentrationer av methotrexate (1-10000 nM) kan nya cellinjer erhållas, vilka producerar faktor-VIII:SQ-proteinet vid mycket hög nivå.
Ovanstående cellinjer producerande faktor-VIII-SQ-protein kan odlas i stor skala, endera i suspensionskultur eller på oli- ka fasta underlag. Exempel på sådana underlag är mikrobärare baserade på dextran- eller kollagenmatrix eller fasta bärare i form av ihåliga fibrer eller olika keramiska material. Vid od- ling i suspensionskultur eller på mikrobärare kan kulturen av ovanstående cellinjer utföras endera som en satskultur eller en perfusionskultur med kontinuerlig produktion av konditionerat medium över utsträckta tidsperioder. Enligt föreliggande uppfin- ning är sålunda ovanstående cellinjer väl lämpade för utveck- lingen av en industriell process för framställning av rekombi- nant faktor-VIII:SQ vilken motsvarar den autentiska faktor VIII med två polypeptidkedjor (90 kDa och 80 kDa) som kan isoleras från humant plasma.
Det rekombinanta faktor-VIII:SQ-proteinet som ackumuleras i mediet av CHO-celler av ovanstående typ kan koncentreras och renas genom ett flertal biokemiska förfaranden, innefattande me- toder utnyttjande skillnader i storlek, laddning, solubilitet, hydrofobicitet, specifik affinitet, etc. mellan rekombinant fak- tor-VIII:SQ och andra substanser i det konditionerade mediet.
Ett exempel på en sådan rening är adsorptionen av det re- kombinanta faktqr-VIII:SQ-proteinet till en monoklonal antikropp som är immobiliserad på en fast bärare. Efter desorptionen kan 10 465 222 10 15 20 25 30 35 faktor-VIII:SQ-proteinet ytterligare renas genom en mångfald typer av kromatografisk teknik baserat på ovanstående egenska- per.
Det protein med faktor-VIII-aktivitet som beskrives i fö- religgande uppfinning kan formuleras till farmaceutiska bered- ningar för terapeutisk användning. Det producerade rekombinanta faktor-VIII:SQ-proteinet kan vara upplöst i konventionella fysi- ologiskt kompatibla vattenbuffertlösningar till vilka eventuellt kan ha tillsatta farmaceutiska adjuvantia för att åstadkomma farmaceutiska beredningar.
Föreliggande uppfinning kommer att beskrivas vidare mera i detalj i följande icke inskränkande exempel. Denna beskrivning av konkreta utföringsformer av uppfinningen göres i anslutning till bilagda ritningar, där: Fig. 1 är en schematisk återgivning av förhållandet mellan fullängdsfaktor VIII och faktor-VIII:SQ. Den primära strukturen av regionen mellan C-terminalen av 90 kDa-kedjan och N-termina- len av 80 kDa-kedjan visas. Den vertikala pilen anger den pep- tidbindning som spjälkas till bildning av den tvàkedjiga pro- dukten; Fig. 2 är en illustration av plasmid pKGE436 innehållande faktor-VIII:SQ-cDNA under transkriptionell kontroll av den hu- i mana cytomegaloviruspromotern; Fig. 3 är en illustration av plasmid pxesszv innehållande dihydrofolatreduktas cDNA av mus under transkriptionell kontroll av musens långa terminala repeat av mammartumörvirus; Fig. 4 är en illustration av immunoblotting av rekombinant faktor-VIII:SQ efter polyakrylamidgelelektrofores i närvaro av - natriumdodecylsulfat; Fig. 5 visar ett diagram över ändringar i faktor-VIII- -aktivitet av rekombinant faktor-VIII:SQ efter inkubation med trombin; och Fig. 6 illustrerar ändringar i mönstret av SDS-PAGE och immunoblotting av rekombinant faktor-VIII:SQ efter inkubering ß med humant Q-trombin.
EXEMPEL 1 Ett deleteringsderivat av faktor-VIII-oDNA har konstrue- rats som kodar för en polypeptidkedja som saknar det mesta av H 10 15 20 25 30 35 M 465 2220 B-domänen men innehållande delar av amino-terminal- och karboxi- -terminalsekvensen av B-domänen som är väsentliga för proteoly- tisk processning in vivo av den primära translationsprodukten i tva polypeptidkedjor.
Mutagenes av faktor-VIII-cDNA Ett 894 baspar Kpnl-PstI-restriktionsfragment erhållet fràn cDNA av faktor-VIII:QD-deleteringsderivatet (M. Pasek, PCT- ansökning nr WO88/00831) kodande för aminosyrorna Leu 587 till och med Ala 1702 introduceras i bakteriofagvektorn M13mp19 et al. (1985) Gene 33, 103-119) enligt stan- dardmetoder inom tekniken. Den erhållna rekombinanta fagklonen (Yanisch-Perron, C. användes som källa för framställning av enkelsträngad DNA använd som templat för oligonukleotidriktad mutagenes Eckstein, F. (1986) Nucleic Acids Res. 14, 9679-9698). 10 gg renad cirkulär enkelsträngad vektor-DNA sammansmälts med 8 pmo- ler av en 5'-fosforylerad oligonukleotid med följande sekvens: 5'-GCCATTGAACCAAGAAGCTTCTCTCAGAATCCACCAGTCTTGAAACGC-3' Den andra strängen av cirkulär DNA syntetiserades pà re- sulterande templat genom tillsats av alla fyra deoxinukleoti- derna dCTPGS, 12 enheter av Klenow-fragmentet av DNA-polymeras I och 12 enheter av T4 DNA-ligas. Efter inkubering över natten vid 16°C anrikades reaktionsblandningen med avseende på dubbel- strängad DNA genom filtrering genom nitrocellulosa i närvaro av 500 mM NaCl. En femtedel av den renade dubbelsträngade DNA un- derkastades nickning genom inkubation med 5 enheter av restrik- tionsenzymet Ncil, behandlades med 50 enheter Exonuclease III i en sådan utsträckning att templatsträngen av fag-DNA avlägsnades partiellt. Resulterande partialduplex omvandlades åter till dub- belsträngad DNA genom behandling med 3 enheter DNA-polymeras I och 2 enheter T4 DNA-ligas i närvaro av alla fyra deoxinukleo- tidtrifosfaterna vid 16°C i 3 timmar. En fjärdedel av den resul- terande blandningen användes för transformering av 300 ul E.coli TG1. Av de erhållna mutageniserade fagklonerna underkastades tio et al. 1977, Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 74, 5463-54§7). En av de resulterande fagklonerna uppvisade vilket anger att ett 228 bas- dideoxisekvensering (Sanger, F. den förväntade nukleotidsekvensen, 465 222 10 15 20 25 30 35 12 par segment avlägsnats vilket motsvarar aminosyrorna Asp 1563 till och med Ser 1637 av faktor-VIII:QD. Detta skapar ett nytt 666 baspar Kpnl-PstI-fragment av faktor-VIII-cDNA inom M13mp19- -vektorn kodande för en fusion mellan Phe 742 och Ser 1637 av faktor-VIII-proteinet (faktor VIII:SQ).
Konstruktion av en mammalieexgressiogsvektor kodande för faktor VIII:SQ 666 baspar KpnI-Pstl-fragmentet kodande för faktor VIII:SQ-fusionen enligt ovanstående isolerades fran den dubbel- strängade replikativa formen av M13mp19-fag-DNA och introducera- des i vektorn pKGE431. Denna vektor består av ett 2046 baspar Kpnl-SphI-fragment fràn faktor VIII-RE-cDNA (M. Pasek, PCT an- sökning nr W088/00831, ATCC accession nr 53517) kodande för ami- nosyrorna Leu 587 till och med Met 2176 i faktor-VIII:RE-pro- teinet i pUC19. För att inrymma faktor VIII:SQ 666 baspar Kpnl- -PstI-fragmentet på önskat sätt maste pKGE431-DNA öppnas genom fullständig Kpnl-uppslutning och partiell PstI-uppslutning.
Fragmentet av pKGE431 i vilket PstI spjälkad i en position mot- svarande Ala 1702 i faktor VIII:RE-proteinet isolerades och le- gerades till ovanstående Kpnï-Pstl-fragment av faktor-VIII:SQ- -cDNA skapande vektorn pKGE432. Den senare vektorn uppslöts med KpnI och Apal och motsvarande 1700 baspar Kpnl-Apal-fragmentet kodande för Leu 587 till och med Ala 2047 av faktor-VIII:SQ-pro- teinet legerades till det stora fragmentet av vektorn pKGE347 som uppslutits med Kpnl och Apal. Vektorn pKGE347, som är base- rad pa E,coli-kloningvektorn pBR327, består av den humana cyto- megalovirusenhancer/promotsrn som kodas pà ett 741 baspars DNA- -segment (nukleotidpositionerna - 671 till +71, Boshart, M. et al (1985) Cell 41, 521-530) uppströms om faktor-VIII:QD-CDNA med SV40-t-antigenintron och polyadenylationssekvens vid den proxi- mala 3'-delen. Den resulterande vektorn Pig. 2 innehåller komplett faktor VIII:SQ-cDNA och är identisk med pKGE347 bortsett ifran det annorlunda deleteringsderivat av faktor VIII som kodas för. 10 15 20 25 30 12 465 222 ~ EXEMPEL 2 Transfektion av ovarieceller hos Chinese Hamster I en cellodlingsskål med 10 centimeters diameter inympades 0,5 millioner dihydrofolatreduktas saknande Chinese Hamster Ova- rieceller (CHO-DG44, erhållna från Dr. L.A. Chasin, Columbia University, New York) i Dulbecco's Modified Eagles Medium/Ham's F12 (1:1) supplementerat med 10% fetalt kalvserum och inkubera- des över natten vid 3?°C i en 5% koldioxidinkubator. Nästa dag tvättades cellerna med nytt medium och transfekterades sedan enligt kalciumfosfatmetoden med 10 ug av en 1:1-blandning av faktor-VIII:SQ-expressionsvektor pKGE436 och dihydrofolatreduk- tasvektorn pKGE327 enligt kända metoder. Vektorn pKGE327 inne- håller en transkriptionsenhet bestående av musens långa termina- la repeat av mammartumörvirus uppströms om musdihydrofolatreduk- tas-cDNA med SV40-t-antigenet och polyadenylationssekvensen vid den proximala 3'-delen inklonad i vektorn pML2 på medursvis (Fig. 3). Dag tre avlâgsnades mediet, cellerna tvättades och fördelades på nya cellodlingsskålar. På den fjärde dagen initie- rades selektionen med avseende på dihydrofolatreduktas-positiva celler genom ersättning av medierna med ovanstående cellodlings- medium utan hypoxantin, glycin och tymidin och supplementerades med 10% noggrant dialyserat fetalt kalvserum. Mediet utböts två gånger i veckan och efter ca två veckor kunde kolonier av di- hydrofolatreduktas-positiva celler skördas. Dessa kolonier odla- des ytterligare i 25 cmz cellodlingsflaskor, och efter att ha uppnått subkonfluens ersattes mediet med färskt medium innehål- lande 3% fetalt kalvserum. Efter en tidsperiod av 24 timmar tes- tades aktiviteten av faktor-VIII:C i odlingsmediet under an- vändning av metoden med syntetiskt substrat (Coatest faktor VIII:C, KABI). Resultaten visas nedan i Tabell 1. 14 465 222 TA E L 1 CHO-DG44-cellinjer groducerande FVIII SQ 5 Cell- Coatest assay Cell- Coatest essay linje nr (mU/ml) linje nr (mU/ml) 208:1 10 208:13 107 2 73 14 167 3 147 15 253 10 4 27 16 253 5 107 17 313 6 80 18 307 7 73 19 27 8 87 20 287 15 9 93 21 393 10 33 22 46? 11 47 23 107 12 147 24 180 20 25 30 Genamglifiering av CHO-DG44-cellinjer groducerande faktor- -VIII:SQ CHO-DG44-cellinjen 208:22 i Tabell 1 producerande 467 mU/ml/dag av faktor VIII:SQ utvaldes för ytterligare genamplifi- ering genom selektion och tillväxt i methotrexate. Efter flera veckor av odling i 20 nM methotrexate gav cellinjen 208:22 upp- hov till flera nya resistenta cellkloner. Dessa kloner ekördades individuellt och expanderades ytterligare som separata kulturer såsom beskrivits ovan. Produktiviteten av faktor-VIII:C i mediet av dessa kloner undersöktes såsom i Exempel 1. Resultaten visas i Tabell 2.
(D 10 15 20 25 30 35 465 222 15 TAB L 2 Amplifierade celligjer Qrogucerandg faktor-VIII:SQ härledd från C30-DG44-cellinjen 208:22 Coatest assay Coatest assay Cellinje nr (mU/ml) Cellinje nr (mU/gl) 208:22:1 1040 208:22:13 1070 2 690 14 860 3 660 15 930 4 720 16 680 5 800 17 790 6 940 18 750 7 1100 19 960 8 260 20 80 9 900 21 1130 10 660 22 920 11 720 23 950 12 870 24 1010 EXEMPEL 3 Rening och biokemisk karakterisering av faktor-VIII:SQ Faktor-VIII:SQ producerad medelst den amplifierade CHO- -DG44-cellinjen 208:22 undersöktes med avseende på biokemiska egenskaper. Partiell rening av faktor-VIII-materialet fran od- lingsmediet utfördes före studien. Detta inkluderade en immuno- affinitetskromatografi under användning av en matrix innehållan- de monoklonala antikroppar riktade mot faktor VIII àtföljt av ett kromatografiskt jonbytarsteg. Den specifika aktiviteten av det erhållna renade faktor-VIII-materialet lag inom intervallet 3000-4000 IU/A230 och förhållandet faktor-VIII-aktivitet/faktor- -VIII-antigen var nära 1 (aktiviteten uppmättes med Coateet (KABI) och antigenet bestämdes genom en Elisa-assay under an- vändning av monoklonala antikroppar riktade mot 80 kDa-kedjan).
Det renade faktor-VIII:SQ-materialet underkastades SDS-poly- akrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE) och Western blot analys. 15 465 222 10 15 20 25 30 35 SDS-PAGE utfördes enligt Laemmli (1970) Nature 227, 680-685.
Polyklonala anti-humana faktor-VIII-antikroppar av kanin använ- des för Western blot analysen och analysen utfördes i huvudsak såsom beskrivits av Towbin, H. et al. (1979) Prcc. Natl.Acad.
Sci. USA, 76, 4350-4354. De erhållna resultaten visas i Fig. 4, Lane 1: plasmafaktor VIII innehållande en 80kDa lätt kedja och tunga kedjor varierande från 200 kDa till 90 kDa. Lanes 2 och 3: rekombinant faktor-VIII:SQ innehållande en 80 kDa kedja och 90 kDa kedja. Materialen härrörde från faktor-VIII:SQ renad från två olika satser såsom beskrivits ovan. Analysen visade sålunda närvaron av två huvudband i faktor-VIII-SQ-materialet; ett vid 90 kDa och ett dubblettband vid 80 kDa. Dessa två band återfanns i samma position på gelen som de 90 kDa och 80 kDa peptider som representerar det minsta biologiskt aktiva komplexet av plasma- faktor VIII. En mindre mängd av 170 kDa band (< 5% av totalt material) återfanns även i faktor-VIII:SQ-materialet, förmodli- gen representerande icke spjälkad primär translationsprodukt.
Vidare angav N-terminal sekvensbestämning med automatiserad Ed- man-degradation av faktor-VIII:SQ-proteinet att N-termini av 90 kDa och 80 kDa kedjorna är identiska för dem av plasma härledd 90 kDa plus 80 kDa faktor VIII. Detta resultat visade sålunda, att proteolytisk processning in vivo av den primära transla- tionsprcdukten i två polypeptidkedjor varit effektiv.
Faktor-VIII:SQ kunde aktiveras med humant trombin på ett dosberoende sätt. Inaktivering följdes sedan. I Fig. 5 visas kurvan för erhållna aktivitetsförändringar när 0,1 U trombin per 1 IU renad faktor-VIII:SQ tillsattes. En enstegs klottingmetod (Mikaelsson, M. et al. (1983) Blood 62, 1006-1015) användes för omedelbar analys av prover från reaktionsblandningen. En femton- faldig aktivering erhölls inom en minut, vilken sedan följdes av inaktivering. Natriumdodecylsulfat vid 0,02 g/ml tillsattes för att avbryta reaktionen i proven för analys. SDS-polyakrylamid- gelelektrofores och Western blot analys med polyklonala kanin- antikroppar mot human faktor VIII utfördes på prover uttagna med tidsintervaller under reaktionen (Fig. 6). Elektrofores och im- munoblotting utfördes såsom beskrivits i anslutning till Fig. 4.
De erhållna resultaten visade en molekylär ändring av fak- tor-VIII-peptidsr identisk för den för plasma faktor VIII under PA Û 10 15 20 25 17 465 222 inkubering med trombin. 90 kDa-peptiden spjälkades således med trombin och en 50 kDa plus en 40 kDa-peptid bildades. 80 kDa- -peptiden spjälkades och en 70 kDa-peptid bildades. Det svaga band som återfinnas vid 170 kDa i faktor-VIII:SQ-provet försvann under den första minuten av inkubationen med trombin, och pepti- derna som uppenbarligen bildades var identiska med dem som bil- dades från 90 kDa-80 kDa-komplexet. Studierna med trombin visade att faktor-VIII:SQ uppför sig på samma sätt som plasmafaktor VIII vid interaktioner med detta enzym. Detta särdrag betecknas som väsentligt för biologisk aktivitet in gigg.
Interaktionen av faktor VIII:SQ med human von Willebrand- -faktor studerades under användning av storleksexklusionskroma- tografi på Sepharose CL-6B. Tio (10) IU faktor VIII:SQ inkubera~ des med 30 U renad human von Willebrand-faktor vid 37°C i 20 minuter. Inkubationsblandningen överfördes sedan på en kolonn packad med Sepharose CL-6B. Allt material med faktor-VIII-akti- vitet eluerades i voidvolymen med von Willebrand-faktor. När faktor-VIII:SQ utan tillsatt von Willebrand-faktor applicerades på kolonnen eluerades material med faktor-VIII-aktivitet endast vid de inre fraktionerna vid en position, där även 90 kDa-80 kDa-formen av plasmafaktor VIII eluerades. Detta resultat visar, att faktor-VIII:SQ har kapaciteten att binda von Willebrand-fak- tor, vilket är en egenskap som är nödvändig för god överlevnad in gigg (Brinkhous, K.M. et al. (1985) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 82, 8752-8756).
Faktor-VIII:SQ-DNA enligt föreliggande uppfinning har de- ponerats hos Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkul- turen den 13 december 1989 och har erhållit depositionsnummer DSM 5693.

Claims (11)

181 465 222 10 15 20 25 30 35 PATENTKRAV
1. DNA-sekvens kodande för ett biologiskt aktivt, rekom- binant, humant faktor-VIII-derivat med förmåga att genom in vivo-processning i en därmed transformerad animal värdcell ut- trycka och sekretera ett tvàkedjigt faktor-VIII-derivat samman- satt av tva polypeptider med molekylvikter om 90 kDa respektive 80 kDa, kännetecknad av ett första DNA-segment kodande för 90 kDa-kedjan av human faktor VIII och ett andra DNA-segment kodan- de för 80 kDa-kedjan av human faktor VIII, vilka segment är in- bördes anslutna med ett linker-DNA-segment kodande för en link- erpeptid om 4 till ca 100 aminosyrarester av B-domänen av human faktor VIII, varvid minst 4 av nämnda aminosyrarester härrör fràn C-terminalen av nämnda domän.
2. DNA-sekvens enligt patentkravet 1, vari nämnda linker kodar för minst 4 aminosyrarester härrörande fran C-terminalen av B-domänen i human faktor VIII.
3. DNA-sekvens enligt patentkravet 1 eller 2, vari nämn- da linkergen kodar för upp till ca 20 aminosyrarester av B-domä- nen i human faktor VIII.
4. DNA-sekvens enligt patentkravet 1, 2 eller 3, vari nämnda linker kodar för en aminosyrasekvens innefattande 12 ami- nosyror härrörande frán B-domänen i human faktor VIII.
5. DNA-sekvens enligt nagot av de föregående patentkra- ven, vari nämnda linker kodar för minst 7 aminosyrarester av B-domänen i human faktor VIII, varvid minst 4 aminosyrarester härrör fràn C-terminalen och_minst 2 aminosyrarester från N-ter- minalen i nämnda domän.
6. DNA-sekvens enligt något av de föregående patentkra- ven, vari nämnda linker kodar för 12 aminosyrarester hârrörande från C-terminalen och 2 aminosyrarester härrörande från N-termi- nalen av B-domänen i human faktor VIII.
7. Rekombinant expressionsvektor innehållande en tran- skriptionsenhet innefattande DNA-sekvensen enligt nagot av pa- tentkraven 1 till 6, en promoter och en polyadenylationssignal- sekvens.
8. Värdcell av animalt ursprung transformerad med den rekombinanta expressionsvektorn enligt patentkravet 7. (W 10 15 --sekvens enligt något av patentkraven 1 till 6, n” 465 222
9. Förfarande för framställning av ett biologiskt aktivt rekombinant humant faktor-VIII-derivat uttryckt medelst en DNA- kännetecknat därav, att man odlar en animal cellinje transformerad med en rekombinant expressionsvektor enligt patentkravet 7 i ett nä- ringsmedium som tillåter expression och sekretion av humant fak- tor-VIII-derivat sammansatt av två polypeptider med molekylvik- ter om 90 kDa respektive 80 kDa sammanlänkade medelst en metall- jonbrygga, och tillvaratar nämnda derivat fràn odlingsmediet.
10. Humant faktor-VIII-derivat framställt genom förfaran- det enligt patentkravet 9.
11. Humant faktor-VIII-derivat enligt patentkravet 10 innefattande 90 kDa-domänen och länkad därtill, eventuellt via linkerpeptiden eller del därav, genom metalljonbindning 80 kDa- domänen av human faktor VIII.
SE8904239A 1989-12-15 1989-12-15 Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning SE465222C5 (sv)

Priority Applications (29)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8904239A SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1989-12-15 Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
NZ236276A NZ236276A (en) 1989-12-15 1990-11-29 Dna encoding factor viii: comprising two polypeptide chains, a 90 kda a chain polypeptide and an 80 kda c chain polypeptide
CA002071875A CA2071875C (en) 1989-12-15 1990-12-06 Recombinant human factor viii derivative
EP91901327A EP0506757B2 (en) 1989-12-15 1990-12-06 A recombinant human factor viii derivative
AU70393/91A AU645539B2 (en) 1989-12-15 1990-12-06 A recombinant human factor VIII derivative
DK91901327T DK0506757T4 (da) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinant human faktor VIII derivat
PCT/SE1990/000809 WO1991009122A1 (en) 1989-12-15 1990-12-06 A recombinant human factor viii derivative
BR909007921A BR9007921A (pt) 1989-12-15 1990-12-06 Sequencia de dna codificando para um derivado de fator viii humano,recombinante biologicamente ativo,vetor de expressao recombinante,cellula haspedeira de origem animal,processo para a fabricacao de um derivado e derivado de fator viii humano
DE69034040T DE69034040T2 (de) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinanter Abkömmling des menschlichen Faktors VIII
ES97103685T ES2189897T3 (es) 1989-12-15 1990-12-06 Un derivado del factor viii recombinante humano.
JP3501715A JP2644084B2 (ja) 1989-12-15 1990-12-06 組換えヒト▲ｖｉｉｉ▼因子誘導体
AT97103685T ATE232213T1 (de) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinanter abkömmling des menschlichen faktors viii
EP97103685A EP0786474B1 (en) 1989-12-15 1990-12-06 A recombinant human factor VIII derivative
ES91901327T ES2119769T5 (es) 1989-12-15 1990-12-06 Derivado del factor viii humano recombinante.
EP02009162A EP1293513A3 (en) 1989-12-15 1990-12-06 A recombinant human factor VIII derivative
DE1999175066 DE19975066I2 (de) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinanter Abk¦mmling des menschlichen Faktors III.
AT91901327T ATE170219T1 (de) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinanter abkömmling des menschlichen faktors iii
SG9603152A SG66753A1 (en) 1989-12-15 1990-12-06 A recombinant human factor viii derivative
DK97103685T DK0786474T3 (da) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinant human faktor VIII derivat
DE69032600T DE69032600T3 (de) 1989-12-15 1990-12-06 Rekombinanter abkömmling des menschlichen faktors iii
IE451090A IE904510A1 (en) 1989-12-15 1990-12-14 A recombinant human factor viii derivative
PT96208A PT96208B (pt) 1989-12-15 1990-12-14 Processo de obtencao de uma sequencia de adn codificando um derivado recombinante do factor viii humano, de um vector e de celula recombinante e de preparacao do referido derivado.
NO922325A NO309041B1 (no) 1989-12-15 1992-06-12 DNA-sekvens, rekombinant ekspresjonsvektor og vertscelle omfattende DNA-sekvensen, samt fremgangsmÕte for fremstilling av human faktor VIII-derivat
FI922745A FI104260B1 (sv) 1989-12-15 1992-06-12 DNA som kodar för ett biologiskt aktivt rekombinanthumanfaktor VIII-derivat, rekombinant expressionsvektor och värdcell innehållande denna DNA, samt ett förfarande för framställning av ett biologisktaktivt rekombinant humanfaktor VIII-derivat
HU95P/P00489P HU211504A9 (en) 1989-12-15 1995-06-28 Recombinant human factor viii derivatives
HK99104067A HK1019449A1 (en) 1989-12-15 1998-08-14 A recombinant human factor viii derivative
HK98109933A HK1009290A1 (en) 1989-12-15 1998-08-14 A recombinant human factor viii derivative
NL990035C NL990035I2 (nl) 1989-12-15 1999-10-12 Een recombinante afgeleide van humane factor VIII.
LU90457C LU90457I2 (fr) 1989-12-15 1999-10-12 Refacto

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8904239A SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1989-12-15 Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning

Publications (4)

Publication Number Publication Date
SE8904239D0 SE8904239D0 (sv) 1989-12-15
SE8904239L SE8904239L (sv) 1991-06-16
SE465222B true SE465222B (sv) 1991-08-12
SE465222C5 SE465222C5 (sv) 1998-02-10

Family

ID=20377785

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8904239A SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1989-12-15 Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning

Country Status (21)

Country Link
EP (3) EP1293513A3 (sv)
JP (1) JP2644084B2 (sv)
AT (2) ATE232213T1 (sv)
AU (1) AU645539B2 (sv)
BR (1) BR9007921A (sv)
CA (1) CA2071875C (sv)
DE (3) DE19975066I2 (sv)
DK (2) DK0786474T3 (sv)
ES (2) ES2189897T3 (sv)
FI (1) FI104260B1 (sv)
HK (2) HK1009290A1 (sv)
HU (1) HU211504A9 (sv)
IE (1) IE904510A1 (sv)
LU (1) LU90457I2 (sv)
NL (1) NL990035I2 (sv)
NO (1) NO309041B1 (sv)
NZ (1) NZ236276A (sv)
PT (1) PT96208B (sv)
SE (1) SE465222C5 (sv)
SG (1) SG66753A1 (sv)
WO (1) WO1991009122A1 (sv)

Families Citing this family (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US6060447A (en) * 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
IL86693A (en) 1987-06-12 1994-06-24 Stichting Centraal Lab Proteins that have the activity IIIV of the blood, a process for their preparation that uses cells are produced through genetic engineering and pharmaceutical preparations that contain them
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
US5629287A (en) * 1991-01-18 1997-05-13 University College London Depot formulations
US5610148A (en) * 1991-01-18 1997-03-11 University College London Macroscopically oriented cell adhesion protein for wound treatment
SE468050C (sv) * 1991-03-15 1998-04-27 Pharmacia & Upjohn Ab Rekombinant derivat av human faktor VIII
US5663060A (en) * 1992-04-07 1997-09-02 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5744446A (en) * 1992-04-07 1998-04-28 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5364771A (en) * 1992-04-07 1994-11-15 Emory University Hybrid human/porcine factor VIII
US5888974A (en) * 1992-04-07 1999-03-30 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
DK53792D0 (da) * 1992-04-24 1992-04-24 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til fremstilling af proteiner
WO1994007510A1 (en) * 1992-10-02 1994-04-14 Kabi Pharmacia Ab Composition comprising coagulation factor viii formulation, process for its preparation and use of a surfactant as stabilizer
SE9300509D0 (sv) * 1993-02-16 1993-02-16 Kabi Pharmacia Ab Peg treatment
SE9301581D0 (sv) * 1993-05-07 1993-05-07 Kabi Pharmacia Ab Protein formulation
SE504074C2 (sv) * 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
SE9303601D0 (sv) * 1993-11-01 1993-11-01 Kabi Pharmacia Ab Improved cell cultivation method and medium
US6288030B1 (en) 1993-12-22 2001-09-11 Amgen Inc. Stem cell factor formulations and methods
IL113010A0 (en) * 1994-03-31 1995-10-31 Pharmacia Ab Pharmaceutical formulation comprising factor VIII or factor ix with an activity of at least 200 IU/ml and an enhancer for improved subcutaneous intramuscular or intradermal administration
SE9403915D0 (sv) * 1994-11-14 1994-11-14 Annelie Almstedt Process A
SE503424C2 (sv) * 1994-11-14 1996-06-10 Pharmacia Ab Process för rening av rekombinant koagulationsfaktor VIII
US6818439B1 (en) 1994-12-30 2004-11-16 Chiron Corporation Methods for administration of recombinant gene delivery vehicles for treatment of hemophilia and other disorders
SE9501189D0 (sv) * 1995-03-31 1995-03-31 Pharmacia Ab Protein formulation
AU6455896A (en) * 1995-07-11 1997-02-10 Chiron Corporation Novel factor viii:c polypeptide analogs with altered metal-binding properties
SE9503380D0 (sv) * 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
US5851800A (en) * 1996-05-14 1998-12-22 Pharmacia & Upjohn Ab Process for producing a protein
EP1318198B1 (en) * 1996-05-14 2006-03-22 Biovitrum Ab Process for producing a recombinant polypeptide involving the addition of an inhibitor of chymotrypsins to the cell culture medium
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
JP2002517180A (ja) * 1997-12-05 2002-06-18 ジ・イミユーン・リスポンス・コーポレーシヨン 増大された発現を示す新規ベクターおよび遺伝子
US7820796B2 (en) 1998-03-12 2010-10-26 Genetics Institute, Llc. Methods for producing Factor VIII proteins
US6797505B2 (en) * 1998-05-27 2004-09-28 Cell Genesys, Inc. Recombinant AAV vectors for gene therapy of hemophilia A
US6200560B1 (en) * 1998-10-20 2001-03-13 Avigen, Inc. Adeno-associated virus vectors for expression of factor VIII by target cells
US6221349B1 (en) 1998-10-20 2001-04-24 Avigen, Inc. Adeno-associated vectors for expression of factor VIII by target cells
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
JP5149470B2 (ja) 1999-02-22 2013-02-20 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 新規のアルブミンを含有していない第ｖｉｉｉ因子処方物
SE9901379D0 (sv) 1999-04-19 1999-04-19 Pharmacia & Upjohn Ab Receptor structures
AT409379B (de) 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
MXPA02009221A (es) * 2000-03-22 2005-07-25 Octagene Gmbh Produccion de factores de coagulacion sanguineo recombinantes en lineas celular humanas.
AU2004236174B2 (en) 2001-10-10 2011-06-02 Novo Nordisk A/S Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
GB0207092D0 (en) 2002-03-26 2002-05-08 Sod Conseils Rech Applic Stable pharmaceutical composition containing factor VIII
EP1520008B1 (en) 2002-07-09 2012-09-05 Baxter International Inc. Animal protein free media for cultivation of cells
LT1596887T (lt) 2003-02-26 2022-04-25 Nektar Therapeutics Polimero-faktoriaus viii fragmento konjugatai
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US9005625B2 (en) 2003-07-25 2015-04-14 Novo Nordisk A/S Antibody toxin conjugates
ES2648241T3 (es) 2003-09-30 2017-12-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Clados de virus adenoasociados (AAV), secuencias, vectores que contienen el mismo, y usos de los mismos
US20080305992A1 (en) 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
DK2586456T3 (en) 2004-10-29 2016-03-21 Ratiopharm Gmbh Conversion and glycopegylation of fibroblast growth factor (FGF)
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
MX350293B (es) 2004-11-12 2017-09-04 Bayer Healthcare Llc Modificacion dirigida al sitio del factor viii.
EP1858543B1 (en) 2005-01-10 2013-11-27 BioGeneriX AG Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
EP1707634A1 (en) 2005-03-29 2006-10-04 Octapharma AG Method for isolation of recombinantly produced proteins
US8999678B2 (en) 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
EP2386571B1 (en) 2005-04-08 2016-06-01 ratiopharm GmbH Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants
EP1739179A1 (en) 2005-06-30 2007-01-03 Octapharma AG Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines
US20070105755A1 (en) 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
US20090048440A1 (en) 2005-11-03 2009-02-19 Neose Technologies, Inc. Nucleotide Sugar Purification Using Membranes
PL3121266T3 (pl) 2006-01-04 2020-07-13 Baxalta Incorporated Wolne od oligopeptydów pożywki do hodowli komórkowej
US7982010B2 (en) 2006-03-31 2011-07-19 Baxter International Inc. Factor VIII polymer conjugates
US7645860B2 (en) 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
US7985839B2 (en) 2006-03-31 2011-07-26 Baxter International Inc. Factor VIII polymer conjugates
KR20080108147A (ko) 2006-03-31 2008-12-11 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 페질화된 인자 ｖｉｉｉ
EP2049144B8 (en) 2006-07-21 2015-02-18 ratiopharm GmbH Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
US20100075375A1 (en) 2006-10-03 2010-03-25 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates
ES2521490T3 (es) 2006-12-15 2014-11-12 Baxter International Inc. Conjugado de factor VIIa - ácido (poli)siálico con una vida media in vivo prolongada.
CN101646779B (zh) 2007-02-23 2014-12-03 Sk化学株式会社 制备和纯化因子viii及其衍生物的方法
CN101796063B (zh) 2007-04-03 2017-03-22 拉蒂奥法姆有限责任公司 使用糖聚乙二醇化g‑csf的治疗方法
ES2551123T3 (es) 2007-06-12 2015-11-16 Ratiopharm Gmbh Proceso mejorado para la producción de azúcares de nucleótido
US9359629B2 (en) 2007-12-27 2016-06-07 Baxalta Incorporated Cell culture processes
MX2010009154A (es) 2008-02-27 2010-09-09 Novo Nordisk As Moleculas conjugadas del factor viii.
LT2393828T (lt) 2009-02-03 2017-01-25 Amunix Operating Inc. Prailginti rekombinantiniai polipeptidai ir juos apimančios kompozicijos
ES2966234T3 (es) 2009-06-09 2024-04-18 Prolong Pharmaceuticals Llc Composiciones de hemoglobina
US8809501B2 (en) 2009-07-27 2014-08-19 Baxter International Inc. Nucleophilic catalysts for oxime linkage
US8642737B2 (en) 2010-07-26 2014-02-04 Baxter International Inc. Nucleophilic catalysts for oxime linkage
KR101832937B1 (ko) 2009-07-27 2018-02-28 박스알타 인코퍼레이티드 혈액 응고 단백질 복합체
SG10201401194VA (en) 2009-07-27 2014-07-30 Lipoxen Technologies Ltd Glycopolysialylation of non-blood coagulation proteins
ES2590679T3 (es) 2009-07-27 2016-11-23 Lipoxen Technologies Limited Glicopolisialilación de proteínas diferentes a proteínas de coagulación de la sangre
EP2470559B1 (en) 2009-08-24 2017-03-22 Amunix Operating Inc. Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same
GB0915481D0 (en) 2009-09-04 2009-10-07 Arecor Ltd Stable manufacture of factor V111
MX336830B (es) 2009-12-06 2016-02-03 Biogen Hemophilia Inc Polipeptidos hibridos y quimericos del factor viii-fc, y metodos de uso de los mismos.
WO2011095604A1 (en) 2010-02-04 2011-08-11 Octapharma Biopharmaceuticals Gmbh Half-life prolongation of proteins
US9315825B2 (en) 2010-03-29 2016-04-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
CA2793633A1 (en) 2010-03-29 2011-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
WO2012006635A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Processable single chain molecules and polypeptides made using same
WO2012006623A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
EP2616486B1 (en) 2010-09-15 2019-01-02 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Factor viii variants having a decreased cellular uptake
EA032056B1 (ru) 2010-12-22 2019-04-30 Баксалта Инкорпорейтид Конъюгат терапевтического белка и производного жирной кислоты, способы получения конъюгата терапевтического белка и производного жирной кислоты (варианты)
HUE043921T2 (hu) 2011-02-17 2019-09-30 Univ Pennsylvania Készítmények és módszerek szövetspecifitás módosítására és AAV9-mediált géntranszfer javítására
WO2012170969A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Biogen Idec Ma Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
EA029045B1 (ru) 2011-07-08 2018-02-28 Байоджен Хемофилия Инк. Химерные и гибридные полипептиды фактора viii и способы их применения
WO2013016454A1 (en) 2011-07-25 2013-01-31 Biogen Idec Hemophilia Inc. Assays to monitor bleeding disorders
AU2012324020A1 (en) 2011-12-30 2013-07-18 Grifols, S.A. Method for purifying Factor VIII
LT2802668T (lt) 2012-01-12 2018-11-26 Bioverativ Therapeutics Inc. Imunogeninio atsako prieš faktorių viii individuose, kuriems skiriama faktoriaus viii terapija, sumažinimas
LT2804623T (lt) 2012-01-12 2019-12-10 Bioverativ Therapeutics Inc Chimeriniai viii faktoriaus polipeptidai ir jų panaudojimas
RS63870B1 (sr) 2012-02-15 2023-01-31 Bioverativ Therapeutics Inc Sastavi faktora viii i postupci za pravljenje i upotrebu istih
WO2013123457A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
CN104519897A (zh) 2012-06-08 2015-04-15 比奥根艾迪克Ma公司 促凝血化合物
US10202595B2 (en) 2012-06-08 2019-02-12 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeric clotting factors
EP3404105A1 (en) 2012-07-06 2018-11-21 Bioverativ Therapeutics Inc. Cell line expressing single chain factor viii polypeptides and uses thereof
ES2770501T3 (es) 2012-07-11 2020-07-01 Bioverativ Therapeutics Inc Complejo del factor VIII con XTEN y proteína del factor de Von Willebrand y sus usos
RU2500818C1 (ru) * 2012-07-19 2013-12-10 Общество с ограниченной ответственностью "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК рАР227, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА VIII СВЕРТЫВАЕМОСТИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, ЛИНИЯ КЛЕТОК Cricetulus griseus CHO 2H5 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА VIII СВЕРТЫВАЕМОСТИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДА, ОБЛАДАЮЩЕГО АКТИВНОСТЬЮ ФАКТОРА VIII
US10001495B2 (en) 2012-07-25 2018-06-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Blood factor monitoring assay and uses thereof
US10391152B2 (en) 2012-10-18 2019-08-27 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
US20150266944A1 (en) 2012-10-30 2015-09-24 Biogen Idec Ma Inc. Methods of Using FVIII Polypeptide
HRP20231183T1 (hr) 2013-02-15 2024-01-05 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimizirani gen faktora viii
TWI683666B (zh) 2013-03-15 2020-02-01 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｉｘ多肽調配物
JP6330026B2 (ja) 2013-03-15 2018-05-23 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子ポリペプチド製剤
WO2015012924A2 (en) 2013-04-29 2015-01-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and use thereof
EP4368194A3 (en) 2013-06-28 2024-07-31 Bioverativ Therapeutics Inc. Thrombin cleavable linker with xten and its uses thereof
EP3875106A1 (en) 2013-08-08 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. Purification of chimeric fviii molecules
US20160311885A1 (en) 2013-08-14 2016-10-27 Biogen Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
TWI667255B (zh) 2013-08-14 2019-08-01 美商生物化學醫療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
WO2015048330A2 (en) 2013-09-25 2015-04-02 Biogen Idec Ma Inc. On-column viral inactivation methods
EP3060242A1 (en) 2013-10-22 2016-08-31 DBV Technologies Method of treating haemophilia by inducing tolerance to blood factors
EP3065769A4 (en) 2013-11-08 2017-05-31 Biogen MA Inc. Procoagulant fusion compound
WO2015085276A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Biogen Idec Ma Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
EP3757116A1 (en) 2013-12-09 2020-12-30 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for genome engineering
SG11201605242YA (en) 2014-01-10 2016-07-28 Biogen Ma Inc Factor viii chimeric proteins and uses thereof
AU2015214245B2 (en) 2014-02-04 2020-09-10 Biogen Ma Inc. Use of cation-exchange chromatography in the flow-through mode to enrich post-translational modifications
WO2016012595A1 (en) * 2014-07-25 2016-01-28 Csl Behring Gmbh Improved factor viii preparations suitable for therapeutic use and processes to obtain these
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
WO2016168728A2 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Emory University Recombinant promoters and vectors for protein expression in liver and use thereof
UA126016C2 (uk) 2015-08-03 2022-08-03 Біовератів Терапеутікс Інк. Злитий білок фактора іх
EP3411478B1 (en) 2016-02-01 2022-06-08 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor viii genes
US20200085915A1 (en) 2016-12-02 2020-03-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of inducing immune tolerance to clotting factors
EP3548066A1 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
KR20200035130A (ko) 2017-08-09 2020-04-01 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 핵산 분자 및 이의 용도
WO2019067766A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Sigilon Therapeutics, Inc. METHODS, COMPOSITIONS AND IMPLANTABLE ELEMENTS COMPRISING ACTIVE CELLS
CA3090136A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Bioverativ Therapeutics, Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor viii
WO2019195056A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
TW202014181A (zh) 2018-04-04 2020-04-16 美商希吉隆醫療公司 可植入顆粒及相關方法
TW202015723A (zh) 2018-05-18 2020-05-01 美商百歐維拉提夫治療公司 治療ａ型血友病的方法
MX2021001599A (es) 2018-08-09 2021-07-02 Bioverativ Therapeutics Inc Moleculas de acido nucleico y sus usos para la terapia genica no viral.
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
TW202115127A (zh) 2019-06-19 2021-04-16 美商百歐維拉提夫治療公司 治療血友病及低骨質密度之方法及組成物
JP2023537070A (ja) 2020-08-07 2023-08-30 アミカス セラピューティックス インコーポレイテッド 小胞を標的とするタンパク質及びその使用
JP2024532262A (ja) 2021-08-23 2024-09-05 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 最適化第ｖｉｉｉ因子遺伝子
WO2023056331A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acids encoding factor viii polypeptides with reduced immunogenicity
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR910006424B1 (ko) * 1985-08-21 1991-08-24 인코텍스 비.브이 편성브리프(brief) 제조방법
JP2525022B2 (ja) * 1986-01-03 1996-08-14 ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド ▲ＶＩＩＩ▼：ｃ因子型タンパク質の改良生産方法
EP0251843A1 (fr) * 1986-06-06 1988-01-07 Transgene S.A. Procédé de préparation de facteur VIII à partir de cellules de mammifères
JPH0637425B2 (ja) * 1986-11-11 1994-05-18 株式会社クラレ 高沸点（メタ）アクリル酸エステルの製造方法
FR2619314B1 (fr) * 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
JP2586092B2 (ja) * 1988-04-06 1997-02-26 三菱瓦斯化学株式会社 多官能（メタ）アクリル酸エステルの製造法
ES2112255T3 (es) * 1989-11-17 1998-04-01 Novo Nordisk As Complejos proteicos que tienen actividad del factor viii:c y su produccion.

Also Published As

Publication number Publication date
ES2119769T5 (es) 2006-04-16
EP1293513A3 (en) 2003-04-02
DK0506757T3 (da) 1999-05-25
AU7039391A (en) 1991-07-18
WO1991009122A1 (en) 1991-06-27
FI104260B (sv) 1999-12-15
CA2071875C (en) 2006-08-08
NZ236276A (en) 1993-03-26
FI922745A0 (fi) 1992-06-12
JP2644084B2 (ja) 1997-08-25
NO922325D0 (no) 1992-06-12
HU211504A9 (en) 1995-11-28
EP0506757A1 (en) 1992-10-07
DE69032600T3 (de) 2006-07-20
NO309041B1 (no) 2000-12-04
AU645539B2 (en) 1994-01-20
DE19975066I2 (de) 2005-07-07
LU90457I2 (fr) 2001-04-13
ES2189897T3 (es) 2003-07-16
DE69032600D1 (de) 1998-10-01
EP0506757B2 (en) 2005-10-26
NL990035I1 (nl) 1999-12-01
CA2071875A1 (en) 1991-06-16
DK0506757T4 (da) 2006-02-20
NL990035I2 (nl) 2000-01-03
EP0506757B1 (en) 1998-08-26
NO922325L (no) 1992-08-11
EP0786474A1 (en) 1997-07-30
PT96208A (pt) 1991-09-30
SE8904239D0 (sv) 1989-12-15
HK1019449A1 (en) 2000-02-11
IE904510A1 (en) 1991-07-17
ES2119769T3 (es) 1998-10-16
JPH05502161A (ja) 1993-04-22
DK0786474T3 (da) 2003-03-03
ATE232213T1 (de) 2003-02-15
DE69034040D1 (de) 2003-03-13
FI104260B1 (sv) 1999-12-15
ATE170219T1 (de) 1998-09-15
SE465222C5 (sv) 1998-02-10
EP0786474B1 (en) 2003-02-05
HK1009290A1 (en) 1999-05-28
SG66753A1 (en) 2001-12-19
SE8904239L (sv) 1991-06-16
BR9007921A (pt) 1992-11-10
EP1293513A2 (en) 2003-03-19
DE69034040T2 (de) 2003-11-20
PT96208B (pt) 1998-05-29
DE69032600T2 (de) 1999-01-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE465222B (sv) Ett rekombinant, humant faktor viii-derivat och foerfarande foer dess framstaellning
US5661008A (en) Recombinant human factor VIII derivatives
EP0533862B1 (en) Recombinant human factor viii derivatives
US5451521A (en) Procoagulant proteins
US5422260A (en) Human factor VIII:c muteins
US6228620B1 (en) Protein complexes having factor VIII:C activity and production thereof
US6060447A (en) Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US20060122376A1 (en) Protein complexes having factor VIII:C activity and production thereof
CA2068728A1 (en) Protein complexes having factor viii:c activity and production thereof
Sottile et al. Assembly of fibronectin molecules with mutations or deletions of the carboxyl-terminal type I modules
EP1673391B1 (en) MODIFIED cDNA FOR HIGH EXPRESSION LEVELS OF FACTOR VIII AND ITS DERIVATIVES

Legal Events

Date Code Title Description
NAV Patent application has lapsed

Ref document number: 8904239-4