SE451839B - Forfarande for framstellning av ketal och tioketalderivat av merkaptoacylproliner - Google Patents

Description

\ 1 N pentyl, etc. De föredragna lägre alkylgrupperna har upp till 4 kolatomer och metyl och etyl föredrages helst.

Uttrycket "halogensubstituerad lägre alkyl“ avser de ovan be- skrivna lägre alkylgrupperna vari en eller flera väteatomer ersatts med klor, brom eller fluor, såsom trifluormetyl, pentafluoretyl, 2,2,2-trikloretyl, klormetyl, brommetyl, etc.

Med avseende på merkaptoacylsidokedjan föredrages som slut- produkter sådana föreningar vari R5 betecknar väte, m beteck- nar 0 eller l och R betecknar väte, lägre alkyl med 1-4 kol- 3 atomer, speciellt metyl eller trifluormetyl.

Speciellt föredragna som slutprodukter är sådana föreningar med formeln I med en merkaptoacylsidokedja vari Rs betecknar väte, m betecknar 1, R3 betecknar metyl och den asymmetriska kolatomen till vilken R3 är bunden är i D-konfiguration.

Föredragna föreningar med avseende på substituenterna på prolinringen är sådana vari Rl och R2 oberoende av varandra betecknar alkyl med l-4 kolatomer, speciellt metyl eller etyl.

De mest föredragna föreningarna med avseende på substituen- terna på prolinringen är de vari X1 och X2 är lika, speciellt de vari X1 - Rl och X2 - R2 båda betecknar metoxi eller etoxi eller vari X1 - Rl och X2 - R2 förenas till bildning av ca ./ “Ä /CIÄY aC-CHZ f Hc-cn , Hc ca , Hc' \cn 2 1 2 2 2 2 2 1 1 \ a | I a 0 0 S S s s o o \\// *\o/ *\\\/,/ '\\\/// .a W. 451 359 Föreningarna med formeln I kan erhållas genom koppling av den substituerade prolinen med formeln: HN CH-COOR med en syra eller dess kemiska ekvivalent såsom en syraklorid med formeln: fa RS .___ S :- (Cflzhní CH-- COOH vari R5' är lägre alkanoyl eller bensoyl, och avlägsnar nämnda grupp till bildning av en produkt vari R är väte och oxiderar nämnda produkt med jod till bildning av den bis-symmetriska disulfidprodukten.

Denna reaktion kan åstadkommas i närvaro av ett kopplings- medel såsom dicyklohexylkarbodiimid eller liknande eller syran kan aktiveras genom bildning av dess blandade anhydrid, symme- trisk anhydrid, syrahalogenid, aktiv ester eller genom använd- ning av Woodward reagens K, N-etoxikarbonyl-2-etoxi-1,2-di- hydrokinolin eller liknande. Beträffande acyleringsmetoderna, jämför metoden i Methoden der Organischen Chemie (Houben- Weyl), volym XV, del II, sidan l och följande (1974).

Företrädesvis får syrahalogeniden, speciellt syrakloriden med formeln III reagera med syran med formeln II.

Om prolinen med formeln II får reagera i esterformen kan den erhållna esterprodukten med formeln IV, dvs. R betecknar alkyl, överföras till den fria syran, dvs. R betecknar väte, på konventionellt sätt. Om exempelvis R är etyl kan denna esterskyddande grupp avlägsnas genom förtvålning. 451 859 Slutprodukten isoleras företrädesvis och renas genom kri- stallisation, t.ex. genom bildning av dicyklohexylaminsaltet, varefter salter överföres till den fria syraformen genom be- handling med en vattenlösning av en syra såsom kaliumväte- sulfat.

Estrarna vari R betecknar lägre alkyl kan erhållas från kar- boxylsyraföreningarna, dvs. vari R betecknar väte, enligt kon- ventionella förestringsförfaranden, t.ex. genom förestring med en diazoalkan såsom diazometan, en l~alkyl-3-p-tolyltriazen, såsom l-n-butyl-3-p-tolyltriazen eller liknande.

De disubstituerade utgångsprolinerna, vari X1 - R1 och X2 - R2 är lika kan erhållas genom reaktion mellan en N-skyddad keto- förening med formeln: (V) vari Cbz betecknar karbobensyloxi, med en alkohol eller tiol med formeln: (VI) R -X -H l l i närvaro av ett ortoformiat eller tioformiat med formeln HC(Xl-Rl)3 och en syra, såsom koncentrerad svavelsyra eller p- toluensulfonsyra. Denna reaktion kan åstadkommas i ett inert organiskt lösningsmedel, såsom bensen, ättiksyra, eter, cyklo- hexan eller liknande, företrädesvis under upphettning, t.ex. till ungefär återflödestemperatur. Jämför Buehler et al., Survey of Organic Syntheses (Wiley & Sons, 1977), volym l, sid. 516-519. Produkten från denna reaktion är den N-skydda- de mellanprodukten med formeln: 4-51 839 _- n 5 (VII) RI Rl I L X I fl C- ../ \ CH.

Hzí I ¿ C232 -- N gç-COOR Den N-skyddade mellanprodukten med formeln VII kan behandlas med en molekvivalent av en alkohol eller tiol med formeln (VIII) RZ-Xz-H enligt de ovan beskrivna betingelserna till framställning av mellanprodukten (IX) R R 1 2 l i X X 2 à C f ,/ \. uzc Cfïz | I Cbz -- N f- (lí-COOR H Genom att använda ett molärt överskott av alkoholen eller tiolen med formeln VIII erhålles mellanprodukten Ö -[I>.

G1 ...x C' CN \O _. _ 6 (X) lfz 1,92 x x \2C / 2 ,/ \\ cH aZCI: I 2 Cbz N ___... fïgïcoon H Den N~skyddande gruppen kan därefter avlägsnas på konven- tionellt sätt, exempelvis när bâde X1 och X2 betecknar syre genom hydrolys i närvaro av en palladium-kol-katalysator eller när en eller båda av grupperna X1 och X2 är svavel genom behandling med HBr och ättiksyra till de di-substituera- de föreningarna med formeln II.

Hänvisningar göres även till följande publikationer avseende ytterligare âskâdliggörande metoder för framställning av utgångsmaterial och mellanprodukter: U.S. Patenten 4,046,889, 4,lO5,776, 4,l54,935 och 4,1l6,962; Can. J. Biochem. & Physiol. volym 37 (1959) sid 584; J.A.C.S. Volym 79 (1957) sid 189; J. Med. Chem. volym Zl (1978) sid 445; Aus. J. Chem. volym 20 (1967) sid 1493 - 1509; Buehler et al., Survey of Organic Syntheses (Wiley & Sons, 1977), volym 1, sidorna 516 - 519, volym 2, sidorna 461 - 470; Chem. Pharm. Bull., Tokyo, volym 26 (1978) sid 2209 och 2217; Can. J. Chem. volym 47 (1969) sid 860; J. Amer. Chem. Soc., volym 80 (1958) sid 6350; Harrison et al., Compendium of Organic Synthetic Methods (Wiley-Interscience, New York, 1971), sidorna 449 - 456; J. Amer. Chem. Soc., volym 79 (1956) sid 192; Bull. Soc.

Chem., l965(8) sidorna 2253 - 2259; J. Org. Chem. volym 25 (1960) sidorna 521 - 530. kw 451 859 De däri åskådliggjorda förfarandena kan användas som allmänna metoder för syntes av föreningar och separation av isomerer vilka kan användas enligt uppfinningen som beskrivas i denna ansökan. Ytterligare åskådliggörande detaljer framgår av exemplen, vilka tjänar som modell för framställning av andra medlemmar av gruppen.

Föreningarna enligt föreliggande uppfinning bildar bassalter med en mångfald oorganiska eller organiska baser. De salt- bildande jonerna härledda från sådana baser kan vara metall- joner, t.ex. aluminium, alkalimetalljoner såsom natrium eller kalium, alkaliska jordartsmetalljoner såsom kalcium eller magnesium eller en aminsaltjon av vilka ett antal är kända för detta ändamål såsom exempelvis aralkylaminer såsom di- bensylamin, N,N-dibensyletylendiamin, lägre alkylaminer såsom metylamin, t-butylamin, prokain, lägre alkylpiperidin såsom N-etylpiperidin, cykloalkylaminer såsom cyklohexylamin eller dicyklohexylamin, l-adamantanamin, bensatin eller salter här- ledda från aminosyror såsom arginin, lysin eller liknande. HM De fysiologiskt acceptabla salterna såsom natrium- eller kaliumsalterna kan användas medicinskt såsom beskrives nedan och föredrages. Dessa och andra salter, som inte nödvändigtvis måste vara fysiologiskt acceptabla kan användas för isolering eller rening av en produkt acceptabel för de nedan beskrivna ändamålen vilket åskådliggöres av dicyklohexylaminsaltet i exemplen. Salterna framställes genom reaktion mellan syra- formen av föreningen och en ekvivalent av basen som tillför den önskade basjonen i ett medium vari saltet utfälles eller i vattenmedium och efterföljande lyofilisering. Den fria syra- formen kan erhållas från saltet enligt konventionell neutra- lisationsteknik, t.ex. med kaliumbisulfat, saltsyra etc.

Föreningen med formeln I vari R5 betecknar väte, lägre alkanoyl eller disulfidtypsubstituenten, speciellt vari RS betecknar väte kan användas som hypotensiva medel. De inhiberar överföringen av dekapeptidangiotensin I till angiotensin II och är därför användbara för att lindra angiotensinrelaterad hypertension. 451 859 8 _- p, Inverkan av enzymet renin på angiotensinogen, ett pseudoglobu- lin i blodplasma ger angiotensin I. Angiotensin I överföres genom angiotensinöverförande enzym (ACE) till angiotensin II.

Den senare är en aktiv pressorsubstans som angetts som orsa- kande medel i olika former av hypertension i olika däggdjurs- arter, t.ex. råttor och hundar. Föreningarna enligt före- liggande uppfinning ingriper i angiotensinogen->(renin)~o angiotensin I-9(ACE)-øangiotensin II-sekvensen genom inhibe- ring av angiotensinöverförande enzym och reducering eller eliminering av bildningen av pressorsubstansen angiotensin II.

Genom administration av en komposition innehållande en eller en kombination av föreningar med formeln I lindras angioten- sinberoende hypertension i däggdjursarter som lider därav. En enkel dos eller företrädesvis två eller fyra uppdelade dags- doser, tillhandahållna i en mängd av ungefär 0,1 till l00 mg per kg kroppsvikt per dag, företrädesvis ungefär l - 15 mg per kg kroppsvikt per dag är lämpligt för att reducera blod- trycket. Substansen administreras företrädesvis oralt men parenterala vägar såsom subkutant, intramuskulärt, intreve- .. . . .. .. :'55 nost eller intraperitonealt kan aven anvandas.

Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan även beredas i kombination med ett diuretikum för behandling av hyperten- sion. En kombinationsprodukt innefattande en förening enligt föreliggande uppfinning och ett diuretikum kan administreras i en effektiv mängd som innefattar (för ett 70 kg däggdjur) en total dagsdos av ungefär 30 till 600 mg, företrädesvis unge- fär 30 till 300 mg, av en förening enligt föreliggande upp- finning och ungefär 15 till 300 mg, företrädesvis ungefär till 200 mg av det diuretiska medlet till däggdjursarter i behov därav. Exempel på diuretikum som kan användas i kom- bination med en förening enligt föreliggande uppfinning är tiazid-diuretika, t.ex. klortiazid, hydroklortiazid, flume- tiazid, hydroglumetiazid, bensdroflumetiazid, metklotiazid, triklormetiazid, polytiazid eller benstiazid liksom etakryn- syra, tikrynafen, klortalidon, furosemid, musolimin, bume- tanid, triamteren, amilorid och spironolakton och salterna av dessa föreningar. 451 839 Föreningarna med formaln I kan beredas för användning för reduktion av blodtryck i kompositioner såsom tabletter, kaps- lar eller i elixir för oral administration eller i sterila lösningar eller suspensioner för parenteral adminstration.

Ungefär lO till 500 mg av en förening eller blandning av före- ningar med formeln I införlivas med en fysiologiskt accepta- bel vehikel, bärare, excipient, bindemedel, konserverings- medel, stabiliseringsmedel, aromämnen etc. i en enhetsdosform lämplig för accepterad farmaceutisk praxis. Mängden aktiv substans i dessa kompositioner eller preparat är sådan att en lämplig dos inom detangivna området erhålles.

Uppfinningen âskådliggöres närmare medelst följande exempel vari temperaturerna avser Celsius-grader.

Exemgel l [7(S)f35]'7'/3-(acetvltio)-2-metvl-l-oxooronvl/fl.4-dínxn-7 azasQiro[4,4]nonan~8-karboxylsyra a) N-karbobensyloxi-4~hydroxi-L-prolin 26,5 g (0,20 mol) 4-hydroxi-L-prolin och 32,8 ml (0,23 mol) bensylkloroformiat får reagera i 200 ml vatten och 100 ml aceton i närvaro av 20 g (0,02 mol) kaliumbikarbonat och 69,2 g (0,50 mol) kaliumkarbonat och upparbetas med 90 ml koncentrerad saltsyra såsom beskrives i Can. J. Biochem. & Physiol, volym 37 (1959) sid 584 och ger N-karbobensyloxi-4- hydroxi-L-prolin. Denna produkt får reagera med cyklohexyl- amin till bildning av cyklohexylaminsaltet i ett utbyte av 69 g, smältpunkt 193 - l95°. Saltet (34 g) nentraliseras med N-saltsyra och ger 27 g av den fria syran som färglöst glas [a]26 O D -70 , (c, 1% i kloroform). b) N-karbobensyloxi-4-keto-L-prolin 21,5 g (0,8l mol) N-karbobensyloxi~4-hydroxi-L-prolin oxide- ras i 1,2 liter aceton med 83 ml 8N kromsyra i svavelsyra så- som beskrivits i J.A.C.S. volym 79 (1957) sid 189. För att underlätta den efterföljande filtreringen av kromsalter sät- tes 30 g Celite (diatomacejord) till acetonlösningen innan införandet av oxideringsmedlet. En luftomrörare användes.

Reaktionsblandningen filtreras och acetonfiltratet koncentre- ras till ungefär 300 ml innan utspädning med l liter kloro- form. Lösningen tvättas med 300 ml mättad natriumklorid (fyra gånger), torkas (MgS04), filtreras och lösningsmedlet indunstas och ger N-karbobensyloxi-4-L-prolin (22,8 g) som kristalliseras ur eter (50 ml)-hexan (150 ml) och ger 17,2 g (81%) av produkten, smältpunkt 99 - 1010, [a]š6 +l7° (C, 1% i kloroform). ll c) N-karbobensyloxi-4,4-etylendioxi-L-prolin En omrörd blandning av 12,8 g (0,049 mol) N-karbobensyloxi- 4-keto-L-prolin, 53 ml (0,095 mol) etylenglykol och 0,35 g p-toluensulfonsyra - H20 i 1,31 liter bensen upphettas och den erhållna lösningen âterflödeskokas i 7 timmar (vatten som bildas samlas i en Dean-Stark-apparat). Efter att ha fått stå över natten vid rumstemperatur avskiljes det lägre glykol- skiktet och bensenlösningen tvättas med 150 ml mättad natrium- klorid, torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas och ger 14,6 g N-karbobensyloxi-4,4-etylendioxi-L-prolin som en siraps- liknande återstod. Den senare upplöses i 60 ml etanol, filtre- ras, behandlas med 5 g cyklohexylamin och spädes med eter. Vid ympning och rivning avskiljes det kristallina cyklohexylamin- saltet; vikt efter kylning över natten, 9,0 g, smältpunkt 179 - l80° (s. l73°). Materialet omkristalliseras ur aceto- nitril, smäitpunkt isz - 1840 (S. 179°), [a1š6 -21° (C, 1% 1 EtOH). 8,4 g av cyklohexylaminsaltet suspenderas i 40 ml etylacetat, omröres, kyles och behandlas med 40 ml lN saltsyra. Skikten separeras, vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 X 40 ml), de konbinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas, slutligen vid 0,2 mm. Den sirapsliknande återstoden, som börjar kristallisera rives under eter och etern indunstar och ger 6,4 g (42%) nästan färglös N-karbobensyloxi-4,4-etylendioxi-L-prolin, smältpunkt lol - 1o3° (S. 9s°), [a1š6 -34° (C, 1% 1 cac13>. d) 4,4-etylendioxi-L-prolin En lösning av 3,2 g (0,0lO4 mol) N-karbobensyloxi-4,4- etylendioxi-L-prolin i lOO ml metanol-vatten (2:l) behandlas med l g\5% palladium-kol och skakas på en Parr-hydrogenator i 6 timmar. Katalysatorn avfiltreras under kvävegas, tvättas med metanol och de kombinerade filtraten indunstas, slutli- gen vid 0,1 - 0,2 mm och ger 1,7 g (94%) färglös fast substans, 451 859 12 4,4-etylendioxi-L-prolín; smältpunkt 245 - 2470 (sönderdel- ning), [a]â6 -32° (C, o,s% 1 1=1 meon-H20). e) [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-l,4- dioxi-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra En omrörd lösning av 3,2 g 4,4-etylendioxi-L-prolin (0,0l85 mol) i 50 ml vatten kyles till 50 och behandlas portionsvis med fast natriumkarbonat till pH 8,5. Under fortsatt omrör- ning och kylning sättes portionsvis en lösning av 3,7 g (0,020 mol) D-3-acetyltio-2-metylpropanoylklorid i 5 ml eter under det att pH hålles vid 8,5 med 25%-ig natriumkarbonat- lösning (ungefär 14 ml). Efter l l/4 timme behandlas lösnin- gen med 50 ml etylacetat, omröres, kyles, surgöres noggrant med saltsyra (lzl) till pH 2,0, mättas med natriumklorid och skikten separeras. Vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 50 ml), de kombinerade organiska skikten tor- kas (MgS04) och lösningsmedlet indunstas slutligen vid 0,2 mm. N Den fasta återstoden rives under eter och indunstningen upp- repas och ger 5,9 g (l0O%) [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2- metyl-l-oxopropyl]-l,4~dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxyl- syra; smältpunkt 108 - lllo.

Produkten överföres till dicyklohexylaminsalter med 3,4 g dicyklohexylamin i 70 ml etylacetat. Vid ympning och rivning utfälles det kristallina saltet och omkristalliseras ur 95 ml acetonitrii; utbyte 6,7 g, smältpunkt 187 - 1s9° (S. 1a4°), [a1š5 -59° (C, 1% 1 Eton).

Dicyklohexylaminsaltet överföres till den fria syran genom suspendering i etylacetat och behandling med 75 ml 10%-ig kaliumbisulfat och omrörning tills tvâ skikt erhålles. Efter separation extraheras vattenfasen med etylacetat (4 x 75 ml), de organiska skikten kombineras, torkas (MgSO4) och lösnings- medlet indunstas och ger 4,1 g färglös [7(S),8S]-7¥[3-(acetyl- tio)-2-metyl-l-oxopropyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan- 8-karboxylsyra, smältpunkt 120 - 1220 (s. ll7o), [d]š5 -ll8O -h- G1 _A CO LN \O (C, 1% i EtOH).

Exempel 2 [7(S)-8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8~karboxylsyra Argon passeras genom en kall lösning av 8,5 ml koncentrerad ammoniumhydroxid i 20 ml vatten. 4,0 g (0,0l3 mol) [7(S),8S]- 7-[3-(acetyltio)-2~metyl-l-oxopropyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro- [4,4]nonan-8-karboxylsyra från exempel le tillsättes där- efter och blandningen omröres på isbad i några minuter och därefter vid rumstemperatur under argon i 2 timmar. Lösningen behandlas med 30 ml etylacetat, kyles, omröres och surgöres med 16 ml saltsyra (l:l). Skikten separeras, vattenfasen extraheras med ytterligare 30 ml etylacetat (tvâ gånger), etylacetatextrakten kombineras, torkas (MgSO4) och lösnings- medlet indunstas och ger [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2~metyl-l- oxopropyl)-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra som fast återstod. Produkten rives under eter och indunstningen upprepas. Produkten sönderdelas därefter med 30 ml hexan, kyles i l timme, filtreras under argon och torkas i vakuum och ger 2,7 g färglös fast substans [7(S),8S]-7-(3-merkapto- 2-metyl~l-oxopropyl)-1,4-dioxo-7-azaspiroI4,4]nonan-8-karbo- xyisyra, smältpunkt 131 - 133° (s. 125°), [oqšs -es° (c, 1% i EtOH).

Exempel 3 (S)-l-[(3-acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi-L- prolin a) N-karbobensyloxi-4,4-dimetoxi-L-prolin, metylester En omrörd lösning av 7,8 g (0,03 mol) N-karbobensyloxi-4- keto-L-prolin från exempel l i 60 ml metanol behandlas med 96 ml trimetylortoformiat, följt av 0,6 ml koncentrerad sva- " " 14 velsyra och får därefter stå över natten vid rumstemperatur.

Den blekt gula lösningen omröres, behandlas med l,S g kalium- karbonat, följt av 30 ml vatten och huvuddelen av lösnings- medlet avlägsnas på rotationsindunstare och ger en siraps- liknande återstod, som skakas med 30 ml vatten och 30 ml kloroform. Efter separation av skikten extraheras vattenfasen med ytterligare kloroform (3 x 30 ml) och de kombinerad orga- niska skikten tvättas med 45 ml mättad natriumkloridlösning och torkas (MgSO4). Indunstning av lösningsmedlet ger 8,4 g (88%) N-karbobensyloxi-4,4-dimetoxi-L-prolin, metyl-ester. b) N-karbobensyloxi-4,4-dimetoxi-L-prolin Estern (8,4 g, 0,026 mol) från del a upplöses i 80 ml metanol, behandlas droppvis vid -l till 40 med 18 ml (0,036 mol) 2N natriumhydroxid vid Oo i l timme och vid rumstemperatur över natten. Efter att ha avlägsnat ungefär hälften av lösnings- medlet på rotationsindunstare spädes lösningen med 150 ml vat- ten, tvättas med 100 ml eter (tvättvätskan kastas), surgöres under kylning med 63 ml 1:1 saltsyra till pH 2 och extraheras med etylacetat (4 x 750 ml). De kombinerad extrakten tvättas med 50 ml mättad natriumkloridlösning, torkas (MgS04) och lös- ningsmedlet indunstas och ger 8,0 g ljust gul viskös olja.

Oljan upplöses i 35 ml etanol, behandlas med 3,0 g cyklo- hexylamin i lO ml etanol och spädes till 500 ml med eter. Vid ympning och gnidning avskiljes det kristallina N-karbobensyl- oxi-4,4-dimetoxi-L-prolincyklohexylaminsaltet; vikt efter kyl- ning över natten 7,0 g, smältpunkt l57 - 1590 (s, l5l) [d]š6 -340 (c, 1% i Et0H). Detta material omkristalliseras ur 100 ml acetonitril och ger saltet som färglös fast substans, smäitpunkt 158 - 1eo° (s, 1s4°),' mås -33° (c, 1% i ston) .

N-karbobensyloxi-4,4-dimetoxi-L-prolincyklohexylaminsaltet suspenderas i 40 ml etylacetat, omröres och behandlas med ml lN saltsyra. När tvâ klara skikt erhålles avskiljes de, vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 40 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgS04) och lösnings- medlet indunstas, slutligen vid 0,2 mm och 400 och ger 7,2 g (70%) N-karbobensyloxi-4,4-dimetoxi-L-prolin som ljust gul viskös sirap. c) 4,4-dimetoxi-L-prolin En lösning av N-karbobensyloxi-4,4-dimetoxi-L-prolin (72 g, 0,022 mol) i 2lO ml metanol-vatten (2:l) behandlas med 2,3 g % palladium-kol och skakas på en Parr-hydrogenator i 6 tim- mar. Katalysatorn avfiltreras under kvävgas, tvättas med meta- nol och de kombinerade filtraten indunstas, slutligen vid 0,1 - 0,2 mm och ger en delvis kristallin återstod. Denna återstod upptas i ZOO ml metanol och indunstningen upprepas.

När den fasta substansen rives under eter (indunstningen upp- repas åter) erhålles 3,6 g (95%) nästan färglös 4,4-dimetoxi- L-proiin, smälrpunkt 192 - 194° (sönaerde1nin§); [u1š6 -47° (C, 1% i MGOH).

Ett prov kristalliserat ur metanol-eter är färglöst och smälter via 197 - 19a° (sönaerae1n1ng); {a]š6 -49° <0, 1% 1 MeOH). d) (S)-1-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi-L- prolin En omrörd lösning av 3,3 g (0,0l9 mol) 4,4-dimetoxi-L-prolin i 50 ml vatten kyles till 50 och överföres till pH 8,5 genom tillsats av 25%-ig natriumkarbonatlösning (vikt/volym). Där- efter tillsättes under fortsatt omrörning och kylning en lös- ning av 3,8 g (0,02l mol) D-3-acetyltio-2-metylpropanoyl- klørid i 5 ml eter portionsvis under det att pH hålles vid 7,5 - 8,5 genom droppvis tillsats av 25%-ig natriumkarbonat- lösning. När pH stabiliserats vid 8,2 - 8,4 (efter ungefär minuter) fortsätter omrörningen och kylningen i total l timme. Lösningen tvättas därefter med 50 ml etylacetat (tvätt- vätskan kastas, skiktas över med 50 ml etylacetat, kyles, om- 16 röres, surgöres noggrant med l:l saltsyra till pH 2,0, mättas med natriumklorid och skikten separeras. Vattenfasen extrahe- ras med ytterligare etylacetat (3 x 50 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas slutligen vid 0,2 mm och ger 6,7 g sirupös produkt. Denna sirap behandlas i 70 ml etylacetat med 3,9 g dicyklohexylamin och ger 6,5 g färglös (S)-l-[3-(acetyltio)~2-metyl-l-oxo- propyl]-4,4-dimetoxi-L-prolindicyklohexylaminsalt i skördar (3,1 g och 3,4 g), smä1tpunkt 158 - 1eo° (s, 14s°), [a]š6 -71° (C, 1% i EtOH).

Efter omkristallisation ur 20 ml het etylacetat - 60 ml hexan väger det färglösa festa saltet 6,0 g, smältpunkt 158 - 1es° (s, 15s°), [a1š5 -e9° (C, 1% 1 ston).

Dicyklohexylaminsaltet överföres till den fria syran genom att ,0 g suspenderas i 50 ml etylacetat, kyles och behandlas med 60 ml 10%-ig kaliumbisulfatlösning och ger två klara skikt.

Efter separation extraheras vattenfasen med etylacetat (3 x 50 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgS04) och lösningsmedlet indunstas, slutligen vid O,l - 0,2 mm och 450 och ger 4,1 g (69%) (S)-l-[3-(acetyltio)-2-metyl~l-oxopropyl]- 4,4-dimetoxi-L-prolin som viskös, nästan glasliknande material [a1š5 -112° (C, 1% 1 ston).

Exemgel 4 (S)-l-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin Argon får passera genom en kall lösning av 8,5 ml koncentrerad ammoniumhydroxid i 20 ml vatten i 0,25 timmar. Den senare tillsättes därefter under kylning och under argonatmosfär till 4,1 g (0,0l3 mol) (S)-1-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]- 4,4-dimetoxi-L-prolin och blandningen omröres i ett isbad tills en ljust gul lösning erhålles (ungefär 15 minuter). Om- rörning under argon fortsätter vid rumstemperatur i ytterli- gare 2 timmar, därefter extraheras lösningen med 30 ml etyl- Jß Cm ._$ OO CJ vO acetat (detta och efterföljande förfaranden genomföres så mycket som möjligt under argonatmosfär). Vattenskiktet kyles, omröres, skiktas med 30 ml etylacetat och surgöres portionsvis med ungefär 16 ml 1:1 saltsyra. Skikten separeras, vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 30 ml), de kombine- rade etylacetatskikten torkas (MgS04) och lösningsmedlet in- dunstas och ger 3,5 g (lOO%) (S)-1-(3-merkapto-2-mety1-l-oxo- propyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin som färglös viskös sirap, [a1š5 -72° (C, 1% 1 ston).

Den senare (3,4 g) sönderdelas med 20 ml etylacetat, rives, spädes med 30 ml hexan och kyles och ger en färglös fast substans, som väger 2,6 g, smältpunkt 108 - l10°, [a]š5 -770 (c, 1% i Et0H).

Exempel 5 (S)-1-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyll-4,4-dietoxi-L-prolin a) N-karbobensyloxi-4,4-dietoxi-L-prolin, etylester Enligt förfarandet i exempel 3 (a) men genom att använda tri- etylortoformiat i stället för trimetylortoformiatet och eta- nol i stället för metanol erhâlles 10,8 g N-karbobensyloxi- 4,4-dietoxi-L-prolin etylester som gul olja. b) N-karbobensyloxi-4,4-dietoxi-L-prolin Den orena estern från del (a) (10,8 g, 0,03 mol) förtvålas med 70 ml 1N natriumhydroxid enligt förfarandet i exempel 4 (b), 30 ml etanol tillsättes i 10 ml portioner till en lös- ning och ger 10,5 g av en gul viskös olja. Denna olja upplöses i 100 ml eter och behandlas med 3,0 g cyklohexylamin. Vid ympning och rivning avskiljes 8,3 g av det kristallina N- karbobensyloxi-4,4-dietoxi-L-prolincyklohexylaminsaltet; smäitpunkt 123 - 12e° (S. 114°) [a126 -32° (C, 1% i etanol).

D Detta material omkristalliseras ur 20 ml acetonitril och ger - ~ 18 7,0 g av saltet som färglös fast substans; smältpunkt 125-1280 (S. 11s°> [alšö -31° (C, 1% 1 etanol).

N-karbobensyloxi-4,4~dietoxi-L-prolincyklohexylaminsaltet suspenderas i 40 ml etylacetat, omröres och behandlas med 20 ml lN saltsyra. Skikten avskiljes och vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 40 ml), de organiska skikten kombineras, torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas och ger 5,6 g (56%) N-karbobensyloxi-4,4-dietoxi-L-prolin som ljust gul olja. c) 4,4-dietoxi-L-prolin En lösning av N-karbobensyloxi-4,4-dietoxi-L~prolin (5,6 g, 0,017 mol) i l8O ml 2:1 etanol-vatten behandlas med 2 g 5%-ig palladium-kol-katalysator och skakas under 3 atmosfärer väte i 6 timmar. Den orena delvis fasta produkten rives först under etanol, därefter eter och indunstningen upprepas varje gång och ger 3 g (91%) nästan färglös fast 4,4-dietoxi-L-prolin; smöltpunkt 172 - 1740 (sönderdelnin9); föregângen av gradvis märkning och sintring [a]š6 -4o° (C, 1% 1 metanol). (m6 Analys Beräknat för C9Hl7NO4 : 0,25 H20: C, 52,03; H, 8,49; N, 6,74 Funnet: C, 52,22; H, 8,59; N, 6,69 d) (S)-l-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4-dietoxi~L- Brolin 2,9 g (0,0l4 mol) 4,4-dietoxi-L-prolin från del (c) och 3 g (0,0l7 mol) D-3-acetyltio-2-metylpropionylklorid upplöst i 3,5 ml eter får reagera med 35 ml vatten i närvaro av natrium- karbonat enligt förfarandet i exempel 3 (d) och ger 5,4 g ljust gul viskös olja. Denna oljiga produkt behandlas i 40 ml etylacetat med 2,6 g dicyklohexylamin och spädes med 60 ml hexan och ger tvâ skördar om 4,9 g (S)-l~[(3-acetyltio)-2- metyl-l-oxipropyl]-4,4-dietoxi-L-prolindicyklohexylaminsalt, [:> LH _J- CO LN \O smältpunkt l35 - 1380 (s. 1320). Efter omkristallisation ur l5 ml het etylacetat-45 ml hexan väger det färglösa fasta sal- tet 4,2 g; smäitpunkt 138 - 14° (S. 135°), [u1š6 -63° (c, 1% 1 etanol).

Analys Beräknat för Cl5H25NO6S . Cl2H23N: C, 61,33; H, 9,15; N, 5,30; S, 6,06 Funnet: C, 61,48; H, 9,55; N, 5,25; S, 5,9l Dicyklohexylaminsaltet överföres till den fria syran genom att 4,2 g suspenderas i 40 ml etylacetat, kyles och behandlas med 40 ml 10%-ig kaliumbisulfatlösning och ger två skikt. Efter separation extraheras vattenfasen med etylacetat (3 x 50 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösnings- medlet indunstas och ger 3,0 g (61%) (S)-l-I3-(acetyltio)-2- metyl-l-oxopropyl]-4,4-dietoxi-L-prolin som ljust gul viskös sirap. _ Exempel 6 (S)-4,4-dietoxi-l-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-L-prolin Argon får passera genom en kall lösning av 5,5 ml koncentre- rad ammoniumhydroxid i 13 ml vatten i 0,25 timmar. Den senare sättes därefter under kylning under argonatmosfär till 3,0 g (0,0086 mol) (S)-l-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4- dietoxi-L-prolin och blandningen upparbetas såsom beskrivits i exempel 4 och ger 2,4 g (92%) (S)-4,4-dietoxi-l-(3-merkapto- 2-metyl-l-oxopropyl)-L-prolin som nästan färglös viskös sirap [a1š6 -64° (C, 1% 1 etanol).

Analys Beräknat för Cl3H23N05 . 0,25 H20: 'C, 50,38; H, 7,64; N, 4,52; S, 10,35 Funnet: C, 50,68; H, 7,96; N, 4,78; S, 10,07 45? 839 Exempel 7 [2(S),3S]-2~[3-(acetyltio)-2-metyl-1-oxopropyl]~6,l0-dioxo-2- azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra a) N-karbobensyloxi-4,4-trimetylendioxi-L-prolin Samverkan av 8,2 g (0,03l mol) N-karbobensy1oxi~4-keto-L- prolin och 45 ml (0,62 mol) 1,3-propandiol i 450 ml bensen i närvaro av 500 mg p-toluensulfonsyra ger 12,3 g oren viskös esterprodukt. Denna produkt förtvålas med 70 ml lN natrium- hydroxid och ger 10,6 g oren N-karbobensyloxi-4,4-trimetylen- dioxi-L-prolin som gul olja. Den senare upplöses i 40 ml etanol - 400 ml eter och behandlas med 3,2 g cyklohexylamin och ger 10,1 g N-karbobensyloxi-4,4-trimetylendioxi-L-prolin, cyklonexylaminsalt; smältpunkt 163 - 1es° (S. 16o°), [a]š6 -270 (c, 1% i etanol). Kristallisation av 9,8 g av sal- tet ur 300 ml acetonitril ger 9,5 g färglöst fast cyklohexyl- aminsalt; smältpunkt 165 - 1s7° (s. 1sz°> [oqå-r” -27° (c, 1% i etanol).

Cyklohexylaminsaltet (9,0 g) suspenderas i 40 ml etylacetat, omröres och kyles och behandlas med 45 ml lN saltsyra. Skik~ ten avskiljes, vattenfasen extraheras med ytterligare etyl- acetat (3 x 40 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas och ger 7,1 g (75%) glas- liknande N-karbobensyloxi-4,4-trimetylendioxi-L-prolin. b) 4,4-trimetylendioxi-L-prolin En lösning av 7,1 g (0,022 mol) N-karbobensyloxi-4,4-tri- metylendioxi-L-prolin i 200 ml 2:1 metanol-vatten hydreras i närvaro av 2 g 5% palladium-kol-katalysator och ger 3,8 g (93%) nästan färglös 4,4-trimetylendioxi-L-prolin; smältpunkt 234 - 2360 (sönderdelning); föregången av gradvis mörkning och sintring; [alšs -360 (c, 0,5% i 1:1 metanol-vatten). 4> LH .A CD CN \D 21 Analys Beräknat för C8Hl3N04: C, 51,33; H, 7,00; N, 7,48 Funnet: C, 51,42; H, 7,11; N, 7,40 c) [2(S),3S]-2-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-6,lO- dioxo-2-azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra 4,4-trimetylendioxi-L-prolin (3,7 g, 0,02 mol) acyleras med 4,0 g (0,022 mol) D-3-acetyltio-2-metylpropionyl i 50 ml vat- ten i närvaro av natriumkarbonat enligt förfarandet i exempel l (e) och ger 7,3 g glasliknande oren produkt.

Produkten överföres till dess cyklohexylaminsalt med 3,6 g dicyklohexylamin i 70 ml etylacetat. Vid ympning och rivning utfälles det kristallina saltet och ger 7,5 g dicyklohexyl- sminsslt; smäupunkt 168 - 11ø° (s. 166%, mšö -59° (s, 1% i etanol). Omkristallisation ur 30 ml acetonitril ger 6,5 g färgusst fast says; smärspunkt 169 - 171°, [sqšs -63°, (s, 1% i etanol).

I W Dicyklohexylaminsaltet överföras till den fria syran genom suspendering av 6,4 g i 75 ml etylacetat och behandling med 75 ml 10%-ig kaliumbisulfat och omrörning tills två skikt erhållits. Efter separation extraheras vattenfasen med etyl- acetat (4 x 75 ml), de organiska skikten kombineras, torkas (MgS04) och lösningsmedlet indunstas och ger 4,3 g (67%) glasliknande [2(S),3S]-2-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]- 6,10-dioxo-2-azaspiro[4,5]dekan-3~karboxylsyra.

Exemgel 8 [2(S),3S]-2-(Bmerkapto-2-metylel-oxopropyl)-6,l0-dioxo-2- azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra [2(S),3S]-2-[3-(acetyltio)-2-metyl~l-oxopropyl]-6,l0-dioxo- 2-azaspiro[4,Sldekan-3-karboxylsyra (4,3 g, 0,013 mol) hydro- lyseras med 8,5 ml koncentrerad ammoniak i 20 ml enligt för- 4> LU ...à CO xD 22 farandet i exempel 2 och ger 0,9 g färglös fast produkt; Ialâs -640 (c, 0,5% i etanol). Ytterligare 0,8 g av produkten erhålles genom extraktion av vattenfasen med kloroform; lalšs rives under eter och indunstningen upprepas och ger 1,7 g -660. De två skördarna upplöses i kloroform, indunstas, (46%) [2(S),3S]-2-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-6,lO-dioxo- 2-azaspiro[4,Sldekan-3-karboxylsyra; smältpunkt 169 - l7l° (S. 1s7°), [a1š6 -71° (C, 1% 1 metanol).

Analys Beräknat för Cl2Hl9N05S: C, 49,81; H, 6,62; N, 4,84; S, 11,08 Funnet: C, 49,67; H, 6,67; N, 4,93; S, ll,lO Exempel 9 [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-7-aza-l,4- ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra a) N-karbobensyloxi-4,4-etylenditio-L-prolin, metylester En omrörd lösning av 3,9 g (0,0l4 mol) N-karbobensyloxi-4- keto-L~prolin, metylester i 60 ml metylenklorid behandlas med 3 ml (0,036 mol) etanditiol, kyles till 80 och behandlas under argon med 3 ml (0,024 mol) bortrifluorideterat. Efter att ha avlägsnat kylbadet omröres den blekt gula lösningen ytterliga- re l timme och hålles över natten vid rumstemperatur. Lösnin- gen omröres, behandlas med flera bitar krossad is, följt av ml vatten. Efter 30 minuter avskiljes skikten och vatten- fasen (50 ml) extraheras med ytterligare metylenklorid (3 x ml). De kombinerad organiska skikten tvättas med 50 ml mättad natriumkloridlösning, torkas (MgS04) och lösningsmed- let avlägsnas på rotationsindunstare och ger 6 g (lO0%) av en ljust gul olja N-karbobensyloxi-4,4-etylenditio-L-prolin metylester. b) N-karbobensyloxi-4,4~etylenditio-L-prolin Metylesterprodukten från del (a) (7,4 g, ungefär 0,018 mol) .['> CH _; CO CN \O 23 upplöses i 65 ml metanol, behandlas droppvis vid -lo till 40 med 14,5 ml (0,029 mol) 2N natriumhydroxid, hålles vid Oo i l timme och vid rumstemperatur över natten. Efter att ha avlägs- nat ungefär hälften av lösningsmedlet på rotationsindunstare spädes lösningen med 125 ml vatten, tvättas med eter (tvätt- vätskan kastas), surgöres under kylning med 5 ml l:l saltsyra till pH 2 och extraheras med etylacetat (4 x 50 ml). De kombi- nerade extrakten tvättas med 50 ml mättad natriumklorid, torkas (MgS04) och lösningsmedlet indunstas och ger 6 g ljust gul viskös olja. Denna olja upplöses i 25 ml etanol, behand- las med 1,8 g cyklohexylamin i 5 ml etanol och spädes till 300 ml med eter. Vid ympning och rivning avskiljes det kris- tallina cyklohexylaminsaltet och ger efter kylning över natten ,7 g N-karbobensyloxi-4,4-etylenditio-L-prolincyklohexyl- aminsalt; smältpunkt 205 - 2070 (s. 2010). Omkristallisation ur 50 ml etanol - 400 ml eter ger 4,9 g färglöst fast salt; smältpunkt 207 - 2o9° (s. 2o1°), [cqšs -1s° (c, 1% i klore- form). .M Cyklohexylaminsaltet (4,8 g) suspenderas i 25 ml etylacetat, omröres och behandlas med 25 ml lN saltsyra. När två klara skikt erhållits avskiljes dessa, vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 25 ml), de kombinerad skikten torkas (MgS04) och lösningsmedlet indunstas och ger 3,8 g (62%) N-karbobensyloxi-4,4-etylenditio~L-prolin som ljust gul viskös sirap. c) 4,4-etylenditio-L-prolin, hydrobromid N-karbobensyloxi-4,4-etylenditio-L-prolin (3,7 g, 0,011 mol) behandlas med 20 ml bromväte i ättiksyra (30 - 32%), packas löst och omröres magnetiskt. Blandningen är svår beroende på viskositeten hos utgångsmaterialet och det senare uppbrytes så mycket som möjligt med en spatel. Under mellantiden börjar den kristallina produkten avskiljas. Ytterligare mängder brom- väte i ättiksyra tillsättes efter l5 minuter (10 ml) och efter 25 minuter (5 ml) och omrörningen fortsätter i totalt 24 minuter. Eter (250 ml) tillsättes för att göra utfällnin- gen av produkten fullständig och efter kylning i 15 minuter filtreras det krämfärgade materialet under kvävgas, tvättas med eter och torkas i vakuum och ger 2,7 g 4,4-etylenditio-L- prolin, hydrobromid; smältpunkt 240 - 2420 (sönderdelning); sintring och mörkning från ungefär 2000; [a]š6 -400 (c, 0,5% i lzl kloroform-metanol). d) [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl}-7-aza-l,4- ditiasQiro[4,4]nonan-8~karboxylsyra En omrörd lösning av 2,6 g (0,009l mol) 4,4-etylenditio-L- prolin, hydrobromid i 25 ml vatten kyles till 50 och överföres till pH 8,2 genom tillsats av 25%-ig natriumkarbonat (vikt/ volym). Under fortsatt omrörning och kylning tillsättes por- tionsvis en lösning av 1,9 g (0,0l mol) D-3-acetyltio-2-metyl- propionylklorid i 2,5 ml eter under det att pä hâlles vid 7,5 - 8,2 genom droppvis tillsats av 25%-ig natriumkarbonat.

När pH stabiliserats vid 8,2 - 8,5 (efter ungefär 15 minuter) fortsätter omrörning och kylning i totaltl timme. Lösningen tvättas därefter med 25 ml etylacetat (tvättvätskan kastas), skiktas med 25 ml etylacetat, kyles, omröres, surgöres nog- grant med lzl saltsyra till pH 2,0, mättas med natriumklorid och skikten separeras. Vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 25 ml), de kombinerad organiska skikten tor- kas (MgS04) och lösningsmedlet indunstas slutligen vid 0,2 mm och ger 2,6 g sirupös produkt som börjar kristallisera. Den senare behandlas i 30 ml etylacetat med 1,5 g dicyklohexyl- amin och ger 3,0 g färglöst dicyklohexylaminsalt; smältpunkt 176 - 17ß° (s. 17o°); mås -5s° (c, 1% i etanol). Detta material males i en mortel under 15 ml acetonitril, kyles i l timme, filtreras, tvättas med 5 ml kall acetonitril och eter och torkas och ger 2,9 g dicyklohexylaminsalt; smält- punkt 177 - 179° (s. 172%; [oqåö -se° (e, 1% i etanol) . 4>~ (II _..å Ci) C vd \O Analys Beräknat för Cl3Hl9N04S _ Cl2H23N: C, 56,56; H, 7,98; N, 5,28; S, l8,l2 Funnet: C, 56,21; H, 8,18; N, 5,05; S, 18,00 Det ovannämnda dicyklohexylaminsaltet överföres till den fria syran genom suspendering av 2,8 g i 30 ml etylacetat, kylning och behandling med 30 ml 10%-ig kaliumbisulfat och ger tvâ klara skikt. Efter separation extraheras vattanfasen med etyl- acetat (3 x 30 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas, slutligen vid 0,1 - 0,2 mm och 450 och ger 2,0 g (63%) färgiöst fast [7(s),ss1-7-[3- (acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-7-aza-1,4-ditiaspiro[4,41- nonâg-8-karboxylsyra, smältpunkt 125 - 1260 (s. 1220); [a]D -l0l (c, 1% i etanol).

Exemgel lO [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-7-aza-l,4- s ditiaspiro[4,4]nonan-8-karbogylsyra Argon får passera genom en kall lösning av 3,5 ml koncentre- rad ammoniak i 8,5 ml vatten i l5 minuter. Den senare till- sättes därefter under kylning och under argonatmosfär till 1,9 9 (0,0054 mol) [7(S),8S]-7-[3-(acetytio)-2-metyl-l-oxo- propyl]-7-aza-l,4-ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra och blandningen omröres i isbad tills en lösning erhållits. Om- rörning under argon fortsätter vid rumstemperatur i ytterli- gare 2 timmar, därefter extraheras lösningen med 15 ml etyl- acetat under argonatmosfär. Vattenskiktet kyles, omröres, skiktas med 15 ml etylacetat och surgöres portionsvis med ungefär 6,5 ml 1:1 saltsyra. Skikten separeras, vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x lS ml), de kombi- nerade acetatskikten torkas (MQSO4) och lösningsmedlet in- dunstas och ger en glasliknande återstod som stelnar när den rives under eter. Indunstningen upprepas och den färglösa produkten suspenderas i 30 ml hexan, filtreras och torkas i vakuum och ger 1,4 g (84%) [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l- 451 859 ..- n 26 oxopropyl)-7-aza-1,4-ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra; smältpunkt 116 - 11s° (s. 1os°); [oqšö -44° (c, 1% i etanol).

Analys Beräknat för CllHl7NO3S3: C, 42,97; H, 5,57; N, 4,56; S, 31,29; SH,MI% Rnmætz C, 42,70; H, 5,71; N, 4,54; S, 31,16; SH,MI% Exemgel ll [2(S),3S]-2-(3-merkapto-2-metyl-1-oxopropyl)-6,lO-ditia-2- azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra a) [2(S),3S]-2~{3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-6,lO-ditia- 2-azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra Enligt förfarandet i exempel 9 men genom att använda 1,3- propanditiol i stället för etanditiolen i del (a) erhålles [2(S),3S]-2-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-6,lO-ditio-2- azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra. b) [2-(S),3S]-2-(3-merkapto-2-metyl-1-oxopropyl)-6,l0-ditía- 2-azaspiro[4,5]dekan-3-karboxylsyra Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 10 och ger [2(S),3S]-2-(3-mer- kapto-2-metyl-l-oxopropyl)-6,lO-ditia-2-azaspiro[4,5]dekan~ 3-karboxylsyra. n: 451 839 27 Éxemgel 12 [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-mety1-1-oxopropyl)-l~oxo~4-tia-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra a) [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-l-oxo-4- tia-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra Enligt förfarandet i exempel l men genom att använda 2-mer- kaptoetanol i stället för etylenglykolen i del (c) erhålles [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-l-oxo-4- tia-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra. b) [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl~l-oxopropyl)-l-oxo-4-tia- 7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger [7(S),8S]-7-(3-merkapto- -metyl-l-oxopropyl)-l-oxo-4-tia-7-azaspiro[4,4]nonan-8-kar- boxylsyra.

Exemgel 13 (85)-7-[3-(acetyltio)-2-trifluormetyl-l-oxipropyl]-l,4-dioxo- 7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra (Isomerer A och B) a) D,L-3-(acetyltio)-2-trifluormetylpropionsyra Q-trifluormetylakrylsyra (lO g, 0,071 mol) (framställd enligt förfarandet i J. Chem. Soc., 1954, sid 371) kyles i ett salt- is-vattenbad, omröres och behandlas portionsvis med 5,7 ml (0,075 mol) 97%-ig tiolättiksyra- Efter tillsatsen omröres den gula vätskan i kyla i l timme, får uppvärmas till rums- temperatur och destilleras och ger 14 g (91%) D,L-3~(acetyl- tio)-2-trifluormetylpropionsyra som ljust gul olja, kokpunkt 149 - 1530/13 mm. Materialet stelnar när det lagras under kyla. b) D,L-3-(acetyltio)-2-trifluormetylpropionylklorid D,L-3-(acetyltio)-2-trifluormetylpropionylsyra (7 g, 0,032 mol) behandlas med 18 ml (O,25 mol) omdestillerad tionylklo- rid och blandningen återflödeskokas i 3 timmar. Efter att ha avlägsnat överskottet tionylklorid på en rotationsindunstare destilleras återstoden och ger 6,8 g D,L-3-(acetyltio)-2- trifluormetylpropionylklorid som blekt gul olja; kokpunkt ao - 82°/16 m. c) (SS)-7-[3-(acetyltio)-2-trifluormetyl-l-oxopropyl]-l,4- dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8~karboxylsyra (Isomerer A och B) 4,4-etylendioxi-L-prolin (2,4 g, 0,014 mol) får reagera med 3,4 g (0,0l4 mol) D,L-3-(acetyltio)-2-trifluormetylpropionyl~ klorid i 40 ml vatten i närvaro av natriumkarbonat enligt för- farandet i exemçel l (e) och ger 4,5 g nästan färglös fast produkt; smäitpunkt 126 - 14s° (S. 11s°), [a1š5 -34° (C, 1% i etanol).

Blandningen av diastereoisomerer (4,2 g) suspenderas i 45 ml eter, omröres i 2 timmar, kyles i 20 minuter och den olösta fasta substansen filtreras, tvättas med kall eter och luft- torkas och ger 2,7 g produkt; smältpunkt 166 - 1720 (s. 1400), [a1š5 -62° tel under 25 ml eter, filtreras efter 15 minuter, tvättas med en liten mängd eter och lufttorkas åter och ger 2,1 g produkt, smältpunkt l72 - l77° (s. 1430). Efter kristallisation ur ll ml kokande isopropanol och kylning över natten erhålles 1,55 g färglös (85)-7-[3-(acetyltio)-2-trifluormetyl-l-oxo- propyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8~karboxylsyra, isomer A; smältpunkt 192 - 194° (S. 1s3°), [a1š5 -3z° (C, 1% 1 etanol). Ett prov omkristalliseras ur isopropanol; smältpunkt 193 - 195° (s. 184°), [a]â5 -134° (C, 1% 1 etanol). (c, 1% i etanol). Materialet males därefter i mor- 451 839 29 Isomer B erhålles genom att den ovan angivna etern och iso- propanolfiltraten kombineras och att lösningsmedlen avlägsnas under reducerat tryck och ger 2,2 g av en blek gul fast substans; smältpunkt 108 - 1o9° (5. 9s°>; [a1š5 +3o° (C, 1% 1 etanol). Detta material renas genom kristallisation ur 6 ml isopropanol och ger 1,2 g nästan färglös fast substans; smä1tpunkt 153 - 1s5° (S. 13o°), (@1š5 +4o° (C, 1% 1 etanol).

Efter kristallisation ur 4 ml etylacetat - 6 ml hexan erhålles l,l g (8S)-7-[3-(acetyltio)-2-trifluormetyl-l-oxopropyl]-l,4- dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, isomer B; smält- punkt 153 - 15s° (S. 141°), [e1š5 +41° (C, 1% 1 etanoi).

Exemgel 14 (8S)-7-(3-merkapto-2~trifluormetyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, Isomer A Isomer A-produkt från exempel 13 (l,45 g, 0,0039 mol) hydroly- vw seras i 2,5 ml koncentrerad ammoniak i 6 ml vatten under l timme såsom beskrivits i exempel 2 och ger 1,25 g (97%) färg- lös (8S)-7-(3-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-l,4- dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, isomer A, som en glasliknande produkt, [o]š5 -610 (c, 1% i etanol). TLC:Rf 0,40 (95:5:5 metylenklorid-metanol-ättiksyra; vis. SH reagens, PMA och värme).

Analys Beräknat för CllHl4F3N05S: C, 40,12; H, 4,28; N, 4,25; S, 9,74; F, 17,31 Funnet: C, 40,10; H, 4,43; N, 4,51; S, 9,63; F, l7,l0 Den ovan angivna syran upplöstes i etylacetat och behandlas med l-adamantanamin till framställning av l-adamantanamin- sa1tet; smältpunkt 213 - 21s° (sönaerae1n1ng), [a1å5 -47° (C, 1% i metanol).

Exempel 15 (8S)-7-(2-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-l,4~dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, Isomer B Isomer B-produkt från exempel 13 (l,O5 g, 0,0028 mol) hydro- lyseras med 2 ml koncentrerad ammoniak i 5 ml vatten enligt förfarandet i exempel 2 och ger 0,9 g (97%) (8S)-7-(3-merkapto- 2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan- 8-karboxylsyra, isomer B som blekt gul viskös sirap; [u]š5 -160 (c, 1% i etanol). Detta material stelnar till en vaxliknande fast substans; smältpunkt 61 - 640 (s. 550).

Analys Beräknat för CllHl4F3NO5S . 0,25 H20: CI 39:58; H: 4:38; Nr4r2O; S: 9:61; F: 17:01 Funnet: C, 39,60; H, 4,28; N, 4,26; S, 9,62; F, 16,89 Exemmpel 16 M' l~[3~(acetyltio)-2-trifluormetyl-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi~L- prolin, isomer A och B Enligt förfarandet i exempel 13 men genom att använda 4,4- dimetoxi-L-prolin i stället för 4,4-etylendioxi-L-prolin i del (c) erhålles l-[3-(acetyktio)-2-trifluormetyl-l-oxo- propyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin som racemisk blandning. De indi- viduella isomererna kan separeras på det sätt som anges i exempel 13- Exempel 17 l-(3-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L- pgplin, isomer A och isomer B Varje individuell isomer-produkt från exempel 16 hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 4 och ger 1-(3-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi- L-prolin, isomer A och l-(3-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxo- propyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin, isomer B.

Exemgel 18 (85)-7-(3-merkapto-l-oxopropyl)~l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxxlsyra a) ((s)-7-[3-(acetyltio)~l-oxopropyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro- [4,4]nonan-8-karboxylsyra 4,4-etylendioxi-L-prolin får reagera med 3-acetyltiopropionyl- klorid enligt förfarandet i exempel 1 (e) och ger (8S)-7-[3- (acetyltio)-l-oxopropyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8- karboxylsyra. b) (85)-7-(3-merkapto-l-oxopropyl)-1,4-dioxo-7~azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxzlsxra Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger (8S)-7-(3-merkapto-l- oxopropyl)-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra.

Exemgel 19 l-(3-merkapto-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin a) l-[3-(acetyltio)-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin 4,4-dimetoxi-L-prolin får reagera med 3-acetyltiopropionyl- klorid enligt förfarandet i exempel 3 (d) och ger l-[3-(ace~ tyltio)-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin. b) 1-(3-merkapto~l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 4 och ger l-(3-merkapto-l-oxo- propyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin. 451 839 32 Exempel 20 (85)-7-(4-merkapto-l-oxobutyl)-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxylsyra a) (85)-7-[4-(acetyltio)-l-oxobutyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro- [4,4]nonan-8-karboxylsyra 4,4-etylendioxi-L-prolin får reagera med 4-acetyltiobutyroyl- klorid enligt förfarandet i exempel l (e) och ger 8(S)-7-[4- (acetyltio)-l-oxobutyl]-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8- karboxylsyra. b) (85)-7-(4-merkapto-l-oxobutyl)-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxylsyra Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger (8S)-7-(4~merkapto-l- oxobutyl)-l,4-dioxo-7-azaspir0[4,4]nonan-8-karboxylsyra.

Exempel 21 l-(4-merkapto-l-oxobutyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin a) l-[4-(acetyltio)-l-oxobutyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin 4,4-dimetoxi-L-prolin får reagera med 4-acetyltiobutyroyl- klorid enligt förfarandet i exempel 3 (d) och ger l-[4-(ace- tyltio)-l-oxobutyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin. b) l-(4-merkapto-l-oxobutyl)>4;4-dimetoxi-L-prolin Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 4 och ger l-(4-merkapto-l-oxo- butyl)-4,4-dímetoxi-L-prolin. $> CH __; OÛ LN \Û 33 Exemgel 22 (8S)-7-(2-merkapto-l-oxoetyl)-1,4-dioxo-7-azaspiroI4,4]nonan~ 8~karboxylsyra a) (8S)~7- [2-(acetyltio)-l-oxoetyl]-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]~ nonan-8-karboxylsyra 4,4-etylendioxi-L-prolin får reagera med acetyltioacetylklo- rid enligt förfarandet i exempel l (e) och ger (8S)-7-[2- (acetyltio)-l-oxoetyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan~8- karboxylsyra. b) (8S)-7-(2-merkapto-l-oxoetyl)-1,4~dioxo-7-azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxylsyra Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger (85)-7-(2-merkapto-l~ QW oxoetyl)-l,4-dioxo-7-aza5piro[4,4]nonan-8-karboxylsyra.

Exemgel 23 l-(2-merkapto-l-oxoetyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin a) 1-[2-(acetyltio)-l-oxoetyl]-4,4-dimetoxi-L~prolin 4,4dimetoxi-L-prolin får reagera med acetyltioacetylklorid enligt förfarandet i exempel 3 (d) och ger lF[2-(acetyltio)-l- oxoetyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin. b) l-(2-merkapto-l-oxoetyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 4 och ger l-(2-merkapto-l-oxo- etyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin. 451 859 34 Exemgel 24 [7(S),8S)-7-(3-merkapto-2-etyl~l-oxopropyl]-4,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karbq§Xl§yra a) [7(S),8S)-7-[3-(acetyltio)-2-etyl-l-oxopropyl]-l,4-dioxo- 7-azaspirol4,4]nonan-8-karboxylsyra 4,4-etylendioxi-L-prolin får reagera med D-3-acetyltio-2- etylpropionylklorid enligt förfarandet i exempel l (e) och ger [7(S),8S]-7-[3-(acetyltio)-2-etyl-l-oxopropyl]~l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra. b) [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-etyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra ' Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger [7(S),8S]-7-(3-merkapto- 2-etyl-l-oxopropyl)-l,4~dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxyl- syra.

Exemgel 25 (S)-l-(3-merkapto-2-etyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin a) (S)-l~[3-(acetyltio)-2~etyl-l-oxopropyl]~4,4-dimetoxi-L- Brolin 4,4-dímetoxi-L-prolin får reagera med D-3-acetyltio-2-etyl- propionylklorid enligt förfarandet i exempel 3 (d) och ger (S)-l-[3-(acetyltio)-2-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi-L-prolin. u 451 839 b) (S)-l-(3-merkapto*2-etyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet förfarandet i exempel 4 och ger (S)-l-(3- merkapto-2-etyl-1-oxopropyl)~4,4-dimetoxi-L-prolin.

Exemgel 26 [8S]-7-(3-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-7-aza-l,4- ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra a) 3~[[(4-metoxi)fenylmetyl]tio]-2-trifluormetylpropionyl- klorid En ren blandning av l-trifluormetylakrylsyra (3,9 g) och 4- metoxibensyltiol (4,3 g) omröres vid 1oo - 11o° 1 1 timme.

Blandningen får kallna till rumstemperatur och den fasta substansen omkristalliseras ur cyklohexan och ger 3-[[(4- metoxi)fenylmetyl]tio]-2-trifluormetylpropionsyra; smält- punkt 72 - 74°.

Behandling av denna syra med tionylklorid ger 3-[[(4-metoxi)- fenylmetyl]tio]-2-trifluormetylpropionylklorid. b) [8S1-7-[3-[[(4-metoxi)fenylmetyl]tio]-2-trifluormetyl~l- oxopropyl]-7-aza-l,4-ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra 3-[[(4-metoxi)fenylmetyl]tio]-2-trifluormetylpropionylklori- den från del (a) får reagera med 4,4-etylenditio-L-prolin en- ligt förfarandet i exempel 9 (d) och ger [8S]-7-[3F[[(4- metoxi)fenylmetyl]tio]-2-trifluormetyl-l-oxopropyl]-7-aza- l,4-ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra. 451 859 c) [8S]-7-(-merkapto-2-trifluormetyl-l-oxopropyl)-7~aza-l,4- ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra Produkten från del (b) blandas med trifluorättiksyra och anisol under kvävgas. Lösningsmedlen avlägsnas under vakuum och ger som återstod [8S]-7-(3-merkapto-2-trifluormetyl-l- oxopropyl)-7-aza-l,4-ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra.

Exempel 27 l-(3-merkapto-l-oxopropyl)~4,4-dimetyltio-L-prolin a) 4-keto-L-prolin, hydrobromid Till 4,0 g (0,0l5 mol) N-karbobensyloxi-4-keto-L-prolin sät- tes 20 ml bromväte i ättiksyra (30 - 32%). Blandningen omröres då och då under en period av 8 minuter. I slutet av denna period (skumningen upphör) skiktas den gul-oranga lösningen med 250 med eter som söndelar den gummiliknande produkten.

Etern kastas och den erhållna klibbiga fasta substansen sönder- delas med ny eter och slutligen med 50 ml acetonitril och ger 4-keto-L~prolin, hydrobromid som en kristallin fast substans som väger 2,7 g (85%), (sönderdeining), mås -49° (c, 1% i vatten). b) l-[3-(acetyltio)-l-oxopropyl]-4-oxo-L-prolin En omrörd lösning av 4,1 g (0,0l95 mol) 4-keto-L-prolin, hydrobromid i 50 ml vatten kyles till 50 och behandlas por- tionsvis med fast natriumkarbonat (skumningen kontrolleras genom tillsats av några droppar eter) till pH 8,0 (ungefär 2 g erfordras). Under fortsatt omrörning och kylning till- sättes portionsvis en lösning av 3,5 g (0,0l2 mol) 3-acetyl- tiopropanoylklorid i 5 ml etylacetat med hjälp av en pipett under det att pH hâlles vid 7,0 - 8,0 genom droppvis tillsats av 25% (vikt/volym) natriumkarbonatlösning (ungefär 10 ml).

Efter ungefär 10 minuter stabiliseras pH vid 8,0 - 8,4. Efter u 451 839 - ~- 37 fortsatt omrörning och kylning i totalt l timme tvättas lös- ningen med etylacetat (2 x 50 ml), skiktas med 50 ml etyl- acetat, omröres, kyles, surgöres noggrant med koncentrerad saltsyra till pH 2,0, mättas med natriumklorid och skikten separeras. Vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 50 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösningsmedlet indunstas, slutligen vid 0,2 mm och ger 4,8 g av en gul-orange glasliknande återstod. Denna återstod upplöses i 35 ml etylacetat och behandlas med en lösning av 3,5 g dicyklohexylamin i 5 ml etylacetat. Vid ympning och rivning avskiljes kristallin l-[3-(acetyltio-1-oxopropyl)]f4- oxo-L-prolindicyklohexylaminsalt som efter kylning över natten vägen 2,7 g (nästan färglös), smältpunkt 191 ~ 1930 (sönder- aeining), [a1ê6 -z4° (c, 1% i cHc1¿).

Detta dicyklohexylaminsalt överföres till den fria syran med användning av kaliumbisulfat såsom beskrivits i exempel l (e) och ger 3,7 g l-[3-(acetyltio)-l-oxopropyl]-4-oxo-L-prolin som ljust gul glasliknande fast substans. (N c) l-[3-(acetyltio)-l-oxopropyl]-4,4-dimetyltio-L-prolin l-[3-(acetyltio)-l-oxopropyl]-4-oxo-L-prolin får reagera med metyltiol enligt förfarandet i exempel 9 (a) och ger l-[3- (acetyltio)-l-oxopropyl]-4,4-dimetyltio-L-prolin. d) 1-(3-merkapto-l-oxopropyl)-4,4-dimetyltio-L-prolin Produkten från del (a) hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger l-(3-merkapto-l-oxo- propyl)-4,4-dimetyltio-L-prolin. 451 839 38 Exempel 28 (S,S,S,S)-7,7'-[ditiobis(2-metyl-l-oxo-3,l-propandiyl)]bis- [l,4-dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra] [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7-aza- spiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra (3,0 g, 0,0lO9 mol) från exem- pel 2 upplöses i 80 ml vatten och pH justeras till 6,5 med lN natriumhydroxid. Till denna omrörda lösning sättes droppvis totalt ll ml 0,5 M jodlösning i 95%-ig etanol (6,34 g jod/50 ml lösning) under det att blandningens pH hålles vid 5,5 - 6,5 med lN natriumhydroxid. Efter 15 minuter avlägsnas spår av överskott jod med utspädd natriumtiosulfat och lösningen koncentreras till ungefär 50 ml, kyles och surgöres med 1:1 saltsyra. 30 ml metylenklorid tillsättes och blandningen mät- tas med natriumklorid, omröres och skikten separeras. Vatten- fasen extraheras med ytterligare metylenklorid (3 x 20 ml), de kombinerade organiska skikten torkas (MgSO4) och lösnings- medlet indunstas, slutligen vid 0,2 mm. Den spröda återstoden rives under eter och indunstningen upprepas och ger 8,2 g blekt gul fast återstod. Detta material återlöses i 50 ml metylenklorid, tvättas med vatten (3 x lO ml), de kombinerade vattenskikten âterextraheras med 20 ml metylenklorid och de kombinerade skikten torkas (MgSO4). Indunstning och sönderdel- ning med eter på ovan angivet sätt ger 2,2 g (73%) krämfärgad amorf fast substans (S,S,S,S)-7,7'-[ditiobis(2-metyl-l-oxo- 3,1-propandiyl)]bis[l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxyl- syra]; smältpunkt 61 - 630 (skumning). S. 500), [u]š6 ~92°, (c, 1% i etanol).

Analys Beräknat för C22H32N2OloS . H20: C, 46,63; H, 6,05; N, 4,94; S, ll,3l Funnet: C, 46,52; H, 6,29; N, 4,63; S, 10,96 451 839 Exemgel 29 (S,S,S,S)-7,7'-[ditiobis(2~metyl-oxo-3,l-propandiyl)]bis- [7-aza-1,4-ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra] [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl~l-oxopropyl)-7-aza-l,4-di- tiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra från exempel 10 får reagera med jod enligt förfarandet i exempel 125 och ger (S,S,S,S)- 7,7'-[ditiobis(2-metyl-1-oxo-3,l~propandiyl)]bis-[7-aza-l,4- ditiaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra].

Exemgel 30 (S,S,S,S)-l,l'-[ditiobis(2-metyl-l-oxo-3,l-propandiyl)]bis- [4,4-dimetoxi-L-prolin] (S)-l-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin från exempel 4 får reagera med jod enligt förfarandet i exem- pel l25 och ger (S,S,S,S)-l,l'-[ditiobis(2-metyl-l-oxo-3,l- propandiyl)]bis[4,4]-dimetoxi-L-prolin].

Exemgel 31 [7(S),8(S)1-7-[3-(acetyltio)-2-metyl-1-oxopropyl]-l,4-dioxo- 7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra En lösning av produkten i exempel l i eter behandlas med ett lätt överskott diazometan. Efter att ha fått stå vid rums- temperatur i 2 timmar indunstas lösningsmedlet och ger [7(S),8S]-7-[3-acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-l,4-dioxo- 7-azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, metylester. 451 839 40 Exempel 32 f [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, metylester Produkten från exempel 31 hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 2 och ger [7(S),8S]-7- (3~merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4~dioxo-7-azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxylsyra, metylester.

Exempel 33 (S)-l-[3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi-L- Brolin, metylester En lösning av produkten från exempel 3 i eter behandlas med ett lätt överskott diazometan. Efter att ha fått stå vid rumstemperatur indunstas lösningsmedlet och ger (S)-l-[3- (acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4-dimetoxi~L-prolin, metylester.

Exempel 34 (S)-l-(3-merkapto-2-metyl-1-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin, metylester Produkten från exempel 33 hydrolyseras med koncentrerad ammoniak enligt förfarandet i exempel 4 och ger (S)~l-(3- merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin, metyl- ester. 451 839 41 Exempel 35 [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-1,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, natriumsalt En lösning av 1,0 g av produkten i exempel 2 upplöses i ml vatten och behandlas med en ekvivalent natriumbikar- bonat. Lösningen frystorkas och ger [7(S),8S]-7-(3-merkapto- 2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-kar- boxylsyra, natriumsalt På samma sätt erhålles med användning av kaliumbikarbonat motsvarande kaliumsalt.

Exempel 36 (S)-l-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin, natriumsalt pa En lösning av 1,0 g av produkten i exempel 4 upplöses i ml vatten och behandlas med en ekvivalent natriumbikarbo- nat. Lösningen frystorkas och ger (S)-l-(3-merkapto-2-metyl- l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin, natriumsalt.

På samma sätt men genom att använda kaliumbikarbonat erhålles motsvarande kaliumsalt.

Exempel 37 1000 tabletter vardera innehållande följande beståndsdelar: [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2- metyl-l-oxopropyl)-l,4~dioxo~ 7-azaspiro[4,4]nonan-8-kar- boxylsyra 100 mg majststärkelse 50 mg gelatin 7,5 mg 451 859 .J- 5, 42 Avicel (mikrokristallin cellulosa) 25 mg magnesiumstearat 2,5 mg 185 mg framställes (av tillräckliga bulkmängder) genom blandning av [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra och majsstärkelse med en vattenlösning av gelatinet. Blandningen torkas och males till ett fint pulver. Avicel och därefter magnesiumstearat blandas under granulering. Denna blandning pressas därefter i en tablettpress till lOOO tabletter vardera innehållande 100 mg av den aktiva beståndsdelen.

Exemgel 38 Tabletter vardera innehållande 100 mg (S)-l-(É-merkapto-2- metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin framställes såsom beskrivits i exempel 134.

Exemgel 39 1000 tabletter vardera innehållande 50 mg [7(S),8S]-7-(3- merkapto-2-metyl-l-oxopropy)-1,4-dioxo-7-azaspiroI4,4]-nonan- 8-karboxylsyra framställes av följande beståndsdelar: [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl- l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7-aza- spiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra 50 g laktos 100 g Avicel 150 g majsstärkelse 50 g magnesiumstearat 5 g [7(S),BS1-7-[3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, laktos och Avicel blandas och blandas därefter med majsstärkelsen. Magnesiumstearat 451 839 tillsättes. Den torra blandningen pressas i en tablettpress till 1000 tabletter om 355 mg vardera innehållande 50 mg aktiv beståndsdel. Tabletterna belägges med en lösning av Methocel E 15 (metylcellulosa) innefattande som färg ett pigment inne- hållande gul nr 6.

Exemgel 40 Tabletter vardera innehållande 50 mg (S)-l-(3-merkapto-2- metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin framställes såsom be- skrivits i exempel 136.

Exemgel 41 Två bitar nr l gelatinkapslar vardera innehållande 100 mg [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- azaspiro[4,4]nonan-8~karboxylsyra, natriumsalt fylles med en blandning av följande beståndsdelar: [7(S),BS]-7-(3-merkapto-2-metyl- l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7-aza- spiro[4,41nonan~8-karboxylsyra, natriumsalt 100 mg magnesiumstearat 7 mg laktos 193 mg Exemgel 42 Gelatinkapslar innehållande lOO mg (S)-l-(3-merkapto-2-metyl- l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin, natriumsalt framställes såsom beskrivits i exempel 138.

Exemgel 43 En injicerbar lösning framställes på följande sätt: " ”i 44 [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl- å l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7-aza- spiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra 500 g Ä metylparaben 5 g Q propylparaben l g natriumklorid 25 g vatten för injektion qs. 5 l Den aktiva substansen, konserveringsmedel och natriumklorid upplöses i 3 liter vatten och därefter överföres volymen till liter. Lösningen filtreras genom ett sterilt filter och fylles aseptiskt i försteriliserade flaskor vilka därefter stänges med försteriliserade gummiförslutningar. Varje flaska innehåller 5 ml lösning i en koncentration av 100 mg aktiv beståndsdel per ml lösning för injektion.

Exemgel 44_ En injicerbar lösning innehållande (S)-l-(3-merkapto-2- metyl-l-oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin framställes såsom beskrivits i exempel 43.

Exemgel 4§¿ 6000 tabletter vardera innehållande följande beståndsdelar: [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l- oxopropyl)-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]- nonan-8-karboxylsyra lOO mg Avicel (mikrokristallin cellulosa) lOO mg hydroklortiazid 12,5 mg laktos U.S.P. 113 mg majsstärkelse 17,5 mg stearinsyra U.S.P 7 'mg 350 mg framställes av tillräckliga bulkmängder genom att bearbeta [7(S),8S]-7-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo-7- 451 839 azaspiro[4,4]nonan-8-karboxylsyra, Avicel och en andel av stearinsyran. Den bearbetade produkten males och passeras genom en nr 2 sikt, blandas därefter med hydroklortiazid, lak- tos, majsstärkelse och resten av stearinsyran. Blandningen pressas till 350 mg kapselformade tabletter i en tablett- press. Tabletterna skäras för delning i halvor.

Exempel 46 Tabletter vardera innehållande (S)-l-(3-merkapto-2-metyl-l- oxopropyl)-4,4-dimetoxi-L-prolin och hydroklortiazid kan framställas såsom beskrivits i exempel 45.

Produkten från exemplen l, 3 och 6 till 36 kan även beredas enligt förfarandena i exemplen 37-46. i!!!

Claims (2)

451 839 1 1% PATENTKRAV

1. Förfarande för framställning av en förening med formeln: Rixi xzRz ïß 73 R _s-(cs2)f cH-cod-N cøoR 5 vari R betecknar väte eller lägre alkyl; R3 betecknar väte, lägre alkyl eller halogensubstituerad lägre alkyl; X och X l 2 betecknar syre eller svavel; Rl och R2 betecknar lägre alkyl eller Rl och R2 förenas i en polymetylenkedja till en 5- eller 6-ledad ring; m är 0, 1 eller 2; och RS är väte, lägre alka- noyl, bensoyl eller en sulfid med formeln: 'gift -S--(CH2)E-“CH-CO-~N OOR och bildar därigenom en bis-symmetrisk disulfidprodukt som k ä n n e t e c k n a s av att man kopplar en substituerad prolin med formeln: HN CH--COOR med en syra eller dess kemiska ekvivalent såsom en syraklorid med formeln: n R5'-- S -- (CH2)m-- CH-- COOH vari Rs' är lägre alkanoyl-eller bensoyl, 451 839 471 och avlägsnar nämnda grupp till bildning av en produkt vari R är väte och oxiderar nämnda produkt med jod till bildning av 5 den bis-symmetriska disulfidprodukten.

2. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att R5' är lägre alkanoyl eller bensoyl och att nämnda grupp avlägsnas genom hydrolys eller ammonolys till bildning av produkten, vari R5 är väte.