DK159115B

DK159115B - En logifremgangsmaade til fremstilling af et ketal- eller thioketalderivat af en mercaptoacylprolin

Info

Publication number: DK159115B
Application number: DK550079A
Authority: DK
Inventors: John Krapcho
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1978-12-22
Filing date: 1979-12-21
Publication date: 1990-09-03
Also published as: YU314879A; IL58930A; IT1126841B; ES488752A0; LU82023A1; BE880815A; DE2951200A1; FR2444669A1; AU5371479A; GB2039478A; ZA796720B; FI794027A7; AT374174B; SE451839B; HK15684A; DK550079A; FI70886B; IL58930A0; PH19213A; FR2444669B1

Description

DK 159115B

i

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et ketal- eller thioketalderi-vat af en mercaptoacylprolin med den almene formel I

5 R1 R2 X1 X2 R3 O f \ (I) * I II I *1

R1-S- (CH2) m-CH-C-N--C-COOR

10 H

hvori R betyder hydrogen eller C^-Cyalkyl, R3 betyder hydrogen, C^Cy-alkyl eller halogen-C1-C7-alkyl/ X1 og X2 betyder oxygen eller svovl, 15 R1 og R2 betyder C^Cy-alkyl, eller R1 og R2 betyder tilsammen en polymethylenkæde, således at der dannes en 5- eller 6-leddet ring, m betyder 0, 1 eller 2, og R1 betyder hydrogen, C2-C8-alkanoyl, benzoyl eller en gruppe 20 R1 R2 I, 15 X1 X2 R3 0 / \

I II I * I

-S- (CH2) m-CH-C-N-C-COOR

25 H

hvori R, R1, R2, R3, X1, X2 og m har de ovenfor angivne betydninger, således at der dannes en bis-symmetrisk disul-fidforbindelse.

Stjernen i ovenstående formel viser et asymmetricenter 30 i ringen. Dette center har L-konfiguration.

Asymmetriske centre kan også forekomme i mercaptoacyl-sidekæden afhængigt af definitionen af R3. Et andet asymmetricenter kan også forekomme i ringen, når X-'—R1 og X2-R2 er forskellige. Produkterne kan derfor forekomme i stereo-35 isomere former eller som racemiske blandinger heraf. Alle disse kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

DK 159115 B

2

Den nedenfor beskrevne syntese kan benytte sig af racematet eller en af de enantiomere som udgangsmaterialer. Når der •anvendes racemisk udgangsmateriale til syntesen, kan de stereoisomere, der fås i slutproduktet, adskilles ved gængse 5 chromatografiske metoder eller fraktioneret krystallisation. Dersom der findes et asymmetricenter i mercaptoacylsidekæden, er dette fortrinsvis i D-konfiguration.

De forbindelser, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er mercaptoacylderivaterne af prolin 10 med formlen I ovenfor, hvilke forbindelser er nyttige anti--hypertensive midler, idet de har en inhiberende virkning på angiotensin-omdannende enzym.

Fra dansk patentansøgning nr. 596/77 kendes nært beslægtede forbindelser med samme virkning, især forbindel-15 sen, som er i handelen under navnet Captopril. Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen udviser imidlertid en overraskende forøget virkning i forhold til de således kendte forbindelser.

Udtrykket alkyl, som det anvendes i definitionerne 20 af symbolerne R, R1, R2 og R3 er ligekædede eller forgrenede carbonhydridgrupper med op til 7 carbonatomer, f.eks. methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl og isopentyl. De foretrukne alkylgrupper har op til fire carbonatomer, idet methyl og ethyl er særlig foretrukket.

25 På lignende måde refererer udtrykkene alkoxy og alkylthio til sådanne alkylgrupper, der er knyttet til et oxygeneller svovlatom.

Udtrykket halogen-substitueret alkyl refererer til sådanne alkylgrupper, der er beskrevet ovenfor, hvor et 30 eller flere hydrogenatomer er erstattet af chlor-, brom eller fluoratomer såsom trifluormethyl, pentafluorethyl, 2,2,2-trichlorethyl, chlormethyl og brommethyl.

Som R5 foretrækkes alkanoylgrupper med op til fire carbonatomer, især acetyl, og benzoyl.

35 Foretrukne forbindelser med formlen I er det L-prolin- -holdige derivat, hvor R er hydrogen.

DK 159115B

3

Med hensyn til mercaptoacylsidekæden foretrækkes som slutprodukter sådanne forbindelser, hvor R5 er hydrogen, m er 0 eller 1, og R3 er hydrogen, alkyl med 1-4 carbonatomer, især methyl, eller trifluormethyl. Foretrukket er ligeledes 5 både som mellemprodukter og slutprodukter de ovennævnte sidekæder, hvor R5 er alkanoyl med 2-4 carbonatomer, især acetyl, eller benzoyl.

Særlig foretrukne som slutprodukter er forbindelser med formlen I med en mercaptoacylsidekæde, hvor R5 er hydro-10 gen, m er 1, R3 er methyl, og det asymmetriske carbonatom, hvortil R3 er knyttet, er i D-konfiguration.

Foretrukne med hensyn til substituenterne på prolin-ringen er sådanne forbindelser, hvor X1 og X2 er ens, især sådanne, hvor X^—R1 og X2-R2 begge er methoxy eller begge 15 ethoxy, eller X^R1 og X2-R2 tilsammen danner en gruppe H2c - ch2 / h2c - CH2 ,

0 0 SS

ν' ν' 20 CH2 CH2 ^^CH2 eller S^S 4 o 25 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling

af forbindelserne med formlen I er ejendommelig ved, at en substitueret prolin med formlen II

R1 R2 γΐ γ2

\ S

30 (II) h2cX ?h2 I λ *

HN-C-C00R

H

hvori R, R1, R2, X1 og X2 har de ovenfor angivne betydninger,

35 kobles med en syre med formlen III

DK 159115 B

4 R3 R,5-S-(CH2)m-CH-COOH (III) hvori R'5 betyder C2-C8-alkanoyl eller benzoyl,

5 eller et reaktivt derivat deraf, såsom et syrechlorid, til dannelse af en forbindelse med formlen IV

R1 R2 X1 X2 10 / f i? r J <IV>

R' 5-S- (CH2) m-CH-C-N-C-COOR

i hvorefter om ønsket gruppen R'5 fjernes til dannelse af en 15 forbindelse med formlen I, hvori R5 betyder hydrogen, og denne forbindelse om ønsket oxideres med iod til den bis--symmetriske disulfidforbindelse.

Denne reaktion kan udføres i nærværelse af et koblingsmiddel såsom dicyclohexylcarbodiimid eller lignende, 20 eller syren kan aktiveres ved dannelse af dens blandede anhydrid, symmetriske anhydrid, syrehalogenid, aktive ester eller ved anvendelse af Woodward-reagens K, N-ethoxycarbonyl--2-ethoxy-l,2-dihydroquinolin. eller lignende. Med hensyn til acyleringsmetoder henvises til Methoden der organischen 25 Chemie (Houben-Weyl), bd. XV, 2. del, side 1 ff. (1974). Fortrinsvis omsættes syrehalogenidet, især syrechloridet, med formlen III med en syre med formlen II.

Hvis prolinet med formlen II omsættes i esterformen, kan det fremkomne esterprodukt med formlen IV, dvs. R er 30 alkyl, omdannes til den frie syre, dvs. R er hydrogen, ved gængse metoder. Hvis R er éthyl,' kan således den esterbeskyttende gruppe fjernes ved hydrolyse.

Produktet med formlen IV isoleres og renses fortrinsvis ved krystallisation, f.eks. ved at danne dicyclohexyl-35 aminsaltet og derefter omdanne saltet til den frie syreform ved behandling med en vandig opløsning af en syre såsom 5

DK 159115 B

kaliumhydrogensulfat.

Forbindelsen med formlen IV kan omdannes til produkterne med formlen I, hvor R^ er hydrogen, ved gængs hydrolyse eller ammonolyse.

5 Forbindelserne med formlen I, hvor R5 er R1 R2 I, I, V*

R3 0 N

I II < * 1

10 -S-(CH2)m-CH-C-N-C-COOR

H

fås ved, at en forbindelse med formlen I, hvor R5 er hydrogen, oxideres direkte med iod.

Esterne med formlen I, hvor R er alkyl, kan opnås ud 15 fra carboxylsyreforbindelserne, dvs. hvor R er hydrogen, ved gængse esterificeringsmetoder, f.eks. ved esterificering med et diazoalkan såsom diazomethan, en l-alkyl-3-p-tolyl-triazen såsom l-n-butyl-3-p-tolyltriazen.

De disubstituerede proliner med formlen II, hvor χΐ-20 —r! og X2-R2 er ens, kan fås ved at omsætte en N-beskyttet ketoforbindelse med formlen Λ C CH0 25 I I 2

Cbz-N-C-COOR

hvor Cbz er carbobenzyloxy, med en alkohol eller thiol med formlen 30 R1-X1-H (VI) nærværelse af et orthoformiat eller thioformiat med form 2 len HC(X1-R1)3 og en syre såsom koncentreret svovlsyre eller 35 p-toluensulfonsyre. Denne reaktion kan foregå i et inaktivt 3 organisk opløsningsmiddel såsom benzen, eddikesyre, ether,

DK 159115 B

6 cyclohexan eller lignende, fortrinsvis under opvarmning, f. eks. til ca. tilbagesvalingstemperatur. Se Buehier m.fl.

Survey of Organic Syntheses (Wiley & Sons, 1977), bd. 1, side 516-519. Produktet af denne reaktion er det N-beskyttede 5 mellemprodukt med formlen R1 R1 f f X\ /χ1 10 h2c ^h2 (vii)

Cbz-N-xC-COOR

* i

H

Det N-beskyttede mellemprodukt med formlen VII kan 15 behandles med 1 molækvivalent af en alkohol eller thiol med formlen r2-x2-h (VIII) 20 ifølge de ovenfor beskrevne betingelser, hvilket giver mellemproduktet K1 R2 ? f '1 f 2

X\ ^X

25 /C\

Ii2<J (IX)

Cb z-N-jC-COOR

“l

H

30 Ved at anvende et moloverskud af alkoholen eller thiolen med formlen VIII fås mellemproduktet 2 2 f f k > C.

E0C^ C.EU (χ) 2| I 2

Cbz-N-xC-COOR

*1

H

DK 159115B

7

Den N-beskyttende gruppe kan derefter fjernes ved gængse metoder, f.eks. når X1 og X2 begge er oxygen, ved hydrogeno-lyse i nærværelse af palladium-carbon-katalysator, eller når det ene af eller begge symbolerne X1 og X2 er svovl, 5 ved behandling med HBr og eddikesyre, hvilket giver de di-substituerede forbindelser med formlen II.

På lignende måde kan spireforbindelserne med formlen II (dvs. R1 og R2 er forenet i en polymethylenkæde) fås ved at omsætte ketoforbindelsen med formlen V med en alkohol 10 eller thiol med formlen (ch2)t xlX Xx2 (XI)

I I

Η H

hvor t betyder 2 eller 3, i nærværelse af en syre såsom p-15 -toluensulfonsyre, hvilket giver mellemproduktet <%>t é x2 \ ^ (XII) (Η2?^ "Wg

20 I

• Cbz-N--C-C00R

H

Alternativt kan den disubstituerede forbindelse med formlen VII behandles direkte med et moloverskud af alkoholen 25 eller thiolen med formlen XI, hvilket giver mellemproduktet med formlen xii.

Som beskrevet ovenfor, kan den N-beskyttende gruppe derefter fjernes, hvilket giver spiroforbindelserne med formlen II.

30 Som en alternativ metode kan indførelsen af grup- 11 2 2 perne X -R og X -R ske senere i rækkefølgen. Ifølge denne ændring behandles den beskyttede ketoforbindelse med formlen 0

II

α 35 H,C CH, <XIII> 2| I 2

H-N-—C-COOH

H

DK 159115 B

8 som derefter acyleres med syren, fortrinsvis syrehalogenidet med formlen III, hvorved fås en forbindelse med formlen 5 £ R3 0 'Η2^Υ2)9 (XIV)

R' J-S- (CH2) -C-C-N-—C-COOH

H

10 112 2

Grupperne X -R og X -R eller spirogruppen (CH2>t x1 x2 X/ 15 kan derefter indføres på dette tidspunkt ved de ovenfor beskrevne- metoder; hvilket giver et produkt med formlen IV.

Der henvises til de følgende litteratursteder med hensyn til yderligere metoder til fremstilling af udgangsmaterialer og mellemprodukter: USA patentskrifterne nr.

20 4.046.889, 4.105.776, 4.154.935 og 4.116.962, Can.J.Biochem.

& Physiol. 37, 584 (1959), J.A.C.S. 79, 189 (1957), J.Med.

Chem. 21, 445 (1978), Aus. J. Chem. 20, 1493-1509 (1967),

Buehier m.fl., Survey of Organic Syntheses (Wiley & Sons, 1977), bd. 1, side 516-519, bd. 2, side 461-470, Chem.Pharm.

25 Bull., Tokyo 26, 2209 og 2217 (1978), Can.J.Chem. 47, 860, (1969), J.Amer.Chem.Soc., 80, 6350 (1958), Harrisonm.fi., Compendium or Organic Synthetic Methods (Wiley-lnterscience,

New York, 1971), side 449-456, J.Amer.Chem.Soc., 79, 192 (1956), Bull.Soc.Chem., 1965(8), side 2253-2259, J.Org.Chem.

30 25, side 521-530 (1960).

De deri beskrevne metoder kan anvendes som almene metoder ved syntesen af forbindelserne og adskillelsen af de isomere, der kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse. Yderligere detaljer findes i eksemp- 35 lerne, der tjener som model for fremstillingen af andre forbindelser i gruppen.

DK 159115B

9

Forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, danner basiske salte med en lang række uorganiske eller organiske baser. Det saltdannende ion, der stammer fra sådanne baser, kan være metalioner, f.eks. alu-5 minium, alkalimetalioner såsom natrium- eller kaliumjordalka-limetalioner såsom calcium eller magnesium eller et aminsalt-ion, hvoraf der kendes flere til dette formål f.eks. aralkyl-aminer såsom dibenzylamin, Ν,Ν-dibenzylethylendiamin, lavere alkylaminer såsom methylamin, t-butylamin, procain, lavere 10 alkylpiperidiner såsom N-ethylpiperidin, cycloalkylaminer såsom cyclohexylamin eller dicyclohexylamin, 1-adamantanamin, benzathin eller salte, der stammer fra aminosyrer såsom argi-nin, lysin eller lignende. De fysiologisk acceptable salte kan anvendes medicinsk som beskrevet nedenfor og foretrækkes.

15 Saltene fremstilles ved at omsætte syreformen af forbindelsen med 1 ækvivalent af den base, der giver den ønskede basiske ion i et medium, hvori saltet udfældes, eller i et vandigt medium med påfølgende lyophilisering. Den frie syreform kan fås ud fra saltet ved gængse neutralisationsmetoder, f.eks.

20 med kaliumbisulfat eller saltsyre.

Forbindelsen med formlen I er, især når R5 er hydrogen, anvendelige som hypotensive midler. De hæmmer omdannelsen af decapeptidet angiotensin I til angiotensin II og er derfor nyttige til lindring af angiotensin-fremkaldt hyper-25 tension. Virkningen af enzymet renin på angiotensinogen, et pseudoglobulin i blodplasma, producerer angiotensin I. Angiotensin I omdannes af det angiotensin-omdannende enzym (ACE) til angiotensin II. Dette er et aktivt pressorstof, der har været under mistanke for at være den fremkaldende årsag til 30 forskellige former for hypertension hos forskellige pattedyrarter, f.eks. rotter og hunde. Forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, griber ind i angiotensinogen---> (renin)---> angiotensin I---> (ACE)---> angiotensin Il-rækkefølgen ved at hæmme det an- 35 giotensin-omdannende enzym og nedsætte eller eliminere dan-

DK 159115 B

10 nelsen af pressorstoffet angiotensin II. Man kan således ved indgivelse af et middel indeholdende en eller en kombination af forbindelser med formlen I bedre angiotensin-frem-kaldt hypertension hos pattedyr, der lider heraf. En enkelt 5 dosis, eller fortrinsvis to til fire opdelte daglige doser beregnet ud fra ca. 0,1-100 mg/kg legemsvægt pr. dag, fortrinsvis 1-15 mg/kg/dag, er passende til nedsættelse af blodtryk. Stoffet indgives fortrinsvis oralt, men der kan anvendes parenterale indgivelsesveje såsom subcutant, intra-1° muskulært, intravenøst eller intraperitonealt.

Forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan kombineres med et diuretisk stof til behandling af hypertension. Et kombineret produkt, der omfatter en forbindelse fremstillet ved fremgangsmåden ifølge 15 opfindelsen og et diuretisk stof, kan indgives i effektiv mængde,hvilket for et pattedyr på 70 kg omfatter en samlet daglig dosis på ca. 30-600 mg, fortrinsvis ca. 30-300 mg, af en forbindelse fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen og ca. 15-300 mg, fortrinsvis 15-200 mg, af et diuretisk 20 stof til et pattedyr, der har behov herfor. Eksempler på di-uretika til anvendelse kombineret med en forbindelse fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er thiaziddiu-retika, f.eks. chlorthiazid, hydrcchlorthiazid, flumthiazid, hydroglumthiazid, benzdroflumthiazid, methchlothiazid, tri-25 chlorthiazid, polythiazid eller benzthiazid, samt ethacrynsy-re, ticrynafen, chlorthalidon, furosemid, musolimin, bumeta-nid, triamteren, emilorid og spironolacton samt salte af sådanne forbindelser.

Forbindelserne med formlen I kan fremstilles til 30 brug ved reduktion af blodtryk i præparater såsom tabletter, kapsler eller eliksirer til oral indgivelse eller i sterile opløsninger eller suspensioner til parenteral indgivelse.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses i det føl-35 gende nærmere ved hjælp af eksempler.

DK 159115 B

11 p

Eksempel 1 [7(S),8S]-7-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropylj-l,4-dioxa-7--azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre a) N-Carbobenzyloxy-4-hydroxy-L-prolin 26.5 g (0,20 mol) 4-hydroxy-L-prolin og 32,8 ml

O

(0,23 mol) benzylchlorformiat omsættes i 200 ml vand og 100 ml acetone i nærværelse af 20 g (0,02 mol) kaliumbicarbonat og 69,2 g (0,50 mol) kaliumcarbonat og oparbejdes med 90 ml koncentreret saltsyre som beskrevet i Can.J.Biochem. & Phy-10 siol. 37, 584 (1959), hvorved fås N-carbobenzyloxy-4-hydroxy--L-prolin. Dette produkt omsættes med cyclohexylamin til dannelse af cyclohexylaminsaltet i et udbytte på 69 g, smeltepunkt 193-195°C. Saltet (34 g) neutraliseres med N-saltsyre 2 6 til opnåelse af 27 g fri syre som et farveløst glas. [a] 15 -70°, (c, 1% i chloroform).

b) N-Carbobenzyloxy-4-keto-L-prolin 21.5 g (0,81 mol) N-carbobenzyloxy-4-hydroxy-L-pro-lin oxideres i 1,2 liter acetone med 83 ml 8N chromsyre i svovlsyre som beskrevet i J.A.C.S. 79, 189 (1957). For at 2Q lette den efterfølgende filtrering af chromsalte tilsættes 30 g "Celite" (diatoméjord) til acetoneopløsningen før indførelse af oxideringsmidlet. Der anvendes en luftomrører. Reaktiofxsblandingen filtreres, og acetonefiltratet inddampes til ca. 300 ml før fortynding med 1 liter chloroform. Op-25 løsningen vaskes med 300 ml mættet natriumchlorid (fire gange) , tørres (MgSO^), filtreres, og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 22,8 g N-carbobenzyloxy-4-keto-L-prolin, der krystalliseres ud fra 50 ml ether-150 ml hexan, hvorved fås 17,2 g produkt (81%), smeltepunkt 99-101°C, [a]^ +17° (c, 30 1% i chloroform).

c) N-Carbobenzyloxy-4,4-ethylendioxy-L-prolin

En omrørt blanding af 12,8 g (0,049 mol) N-carbo-benzyloxy-4-keto-L-prolin, 53 ml (0,095 mol) ethylenglycol og 0,35 g p-toluensulfonsyre.i^O i 1,31 liter benzen opvarmes, 35 og den fremkomne opløsning tilbagesvales i 7 timer (det dannede vand opsamles i et Dean-Stark-apparat). Efter henstand

O

DK 159115 B

12 natten over ved stuetemperatur skilles det nederste glycollag fra, og benzenopløsningen vaskes med 150 ml mættet natrium-chlorid, tørres (MgS04), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 14,6 g N-carbobenzyloxy-4,4-ethylendioxy-L-prolin 5 som en sirupsagtig remanens. Denne opløses i 60 ml ethanol, filtreres, behandles med 5 g cyclohexylamin og fortyndes med ether. Ved podning og gnidning skilles det krystallinske cyclohexylaminsalt fra; vægt efter afkøling natten over 9,0 g, smeltepunkt 179-180°C (begynder 173°C). Materialet om-10 krystalliseres ud fra acetonitril, smeltepunkt 182-184°C (begynder 179°C), [a]^* -21° (c, 1% i EtOH) .

8,4 g af cyclohexylaminsaltet suspenderes i 40 ml ethylacetat, omrøres, afkøles og behandles med IN saltsyre. Lagene adskilles, den vandige fase ekstraheres med med yder-15 ligere 3 x 40 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgS04), og opløsningsmidlet afdampes, til slut ved 0,2 mm. Den sirupsagtige remanens, der begynder at krystallisere, gnides under ether, og etheren afdampes, hvilket giver 6,4 g (42%) næsten farveløst N-carbobenzyloxy-4,4-ethylen-20 dioxy-L-prolin, smeltepunkt 101-103°C (begynder 98°C) , [a]^* -34° (c, 1% i CHC13).

d) 4,4-Ethylendioxy-L-prolin

En opløsning af 3,2 g (0,0104 mol) N-carbobenzyloxy-4 ,4-ethylendioxy-L-prolin i 100 ml methanol/vand (2:1) 25 behandles med 1 g 5% palladium-carbon og rystes på Parr-hydro-genator i 6 timer. Katalysatoren filtreres fra under nitrogen, vaskes med methanol, og de forenede filtrater inddampes, til sidst ved 0,1-0,2 mm, hvilket giver 1,7 g (94%) farveløst fast 4,4-ethylendioxy-L-prolin, smeltepunkt 245-247°C (søn-30 derdeliiig) , [a]^* -32° (c, 0,5% i 1:1 MeOH-^O) .

e) [7(S),8S]-7-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-1,4-di-oxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre

En omrørt opløsning af 3,2 g 4,4-ethylendioxy-L--prolin (0,0185 mol) i 50 ml vand afkøles til 5°C og behand-35 les portionsvis med fast natriumcarbonat til pH 8,5. Derefter tilsættes under fortsat omrøring og afkøling en opløs- 13

O

DK 159115 B

ning af 3,7 g (0,020 mol) D-3-acetylthio-2-methylpropanoyl-chlorid i 5 ml ether portionsvis, idet pH holdes på 8,5 med 25% natriumcarbonatopløsning (ca. 14 ml). Efter 1 1/4 times forløb behandles opløsningen med 50 ml ethylacetat, omrøres, 5 afkøles, gøres forsigtigt sur med saltsyre (1:1) til pH 2,0, mættes med natriumchlorid, og lagene adskilles. Den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 50 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes til sidst ved 0,2 mm. Den faste remanens gnides under 10 ether, og afdampningen gentages, hvorved der fås 5,9 g (100%) [7(S),8S]-7-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-l,4-dioxa--7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, smeltepunkt 108-111°C.

Produktet omdannes til dicyclohexylaminsaltet med 3,4 g dicyclohexylamin i 70 ml ethylacetat. Ved podning og 15 gnidning udfældes det krystallinske salt og omkrystalliseres ud fra 95 ml acetonitril, udbytte 6,7 g, smeltepunkt 187-189°C (begynder ved 184°C) , [ot]^ -59° (c, 1% i EtOH) .

Dicyclohexylaminsaltet omdannes til den frie syre ved at blive suspenderes i ethylacetat og behandles med 75 20 ml 10% kaliumbisulfat og omrøring, indtil der fås to lag.

Efter adskillelse' ekstraheres den vandige fase med 4 x 75 ml ethylacetat, de organiske lag forenes, tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 4,1 g farveløst [7(S),— 8S]-7-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-1,4-dioxa-7-aza-25 spiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, smeltepunkt 120-122°C, begynder ved 117°C, [<x]2d5 -118° (c, 1% i EtOH).

Eksempel 2 [7(S), 8S]-7-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxa-7-30 -azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre

Argon ledes gennem en kold opløsning af 8,5 ml koncentreret ammoniumhydroxid i 20 ml vand. 4,0 g (0,013 mol) [7(S),8S]— 7—(3—(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-1,4-dioxo- -7-azaspiro-[4,4]nonan-8-carboxylsyre fra eksempel 1 (e) til-35 sættes derefter, og blandingen omrøres i isbad i nogle få minutter og derefter ved stuetemperatur under argon i 2 timer.

O

DK 159115 B

14

Opløsningen behandles med 30 ml ethylacetat, afkøles, omrøres og gøres sur med 16 ml saltsyre (1:1). Lagene adskilles, den vandige fase ekstraheres med yderligere 30 ml ethylacetat (to gange), ethylacetatekstrakterne forenes, tørres 5 (MgS04), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver E7(S),— 8S]-7-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxa-7-azaspiro-[4,4]nonan-8-carboxylsyre som en fast remanens. Produktet gnides under ether, og afdampningen gentages. Derefter tri-tureres produktet med 30 ml hexan, afkøles 1 time, filtreres 10 un-er argon og tørres i vakuum, hvilket giver 2,7 g farveløs fast [7(S),8S]-7-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxa--7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, smeltepunkt 131-133°C (begynder 125°C) , [a]^ -66° (c, 1% i EtOH) .

15 Eksempel 3 (S)-1-[(3-Acetylthio)-2-methyl-l-oxoprbpyl]-4,4-dimethoxy-L- -prolin a) N-Carbobenzyloxy-4,4-dimethoxy -L-prolin-methylester

En omrørt opløsning af 7,8 q (0,03 mol) N-carbo-20 benzyloxy-4-keto-L-prolin fra eksempel 1 i 60 ml methanol behandles med 96 ml trimethylorthoformiat efterfulgt af 0,6 ml koncentreret svovlsyre og henstår natten over ved stuetemperatur .

Den bleggule opløsning omrøres, behandles med 1,5 g 25 kaliumcarbonat efterfulgt af 30 ml vand, og størstedelen af opløsningsmidlet fjernes på en roterende fordamper, hvilket giver en sirupsagtig remanens, der rystes med 30 ml vand og 30 ml chloroform. Efter at lagene er adskilt, ekstraheres den vandige fase med yderligere chloroform (3 x 30 ml), og de 30 forenede organiske lag vaskes med 45 ml mættet natriumchlo- ridopløsning og tørres (MgSO^). Afdampning af opløsningsmidlet giver 8,4 g (88%) N-carbobenzyloxy-4,4-dimethoxy-L-pro-lin-methylester.

b) N-Carbobenzyloxy-4,4-dimethoxy-L-prolin 35 8,4 g (0,026 mol) af esteren fra del (a) opløses i 80 ml methanol, behandles dråbevis ved -1°C til 4°C med 18 ml (0,036 mol) 2N natriumhydroxid, holdes på 0°C i en time og

DK 159115B

15

O

ved stuetemperatur natten over. Efter at ca. halvdelen af opløsningsmidlet er fjernes på en roterende fordamper, fortyndes opløsningen med 150 ml vand, vaskes med 100 ml ether (vaskevæsken kasseres), gøres sur under afkøling med 63 ml 5 1:1 saltsyre til pH 2 og ekstraheres med 4 x 750 ml ethyla- cetat. De forenede eks.trakter vaskes med 50 ml mættet na-triumchloridopløsning, tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 8,0 g af en bleggul viskos olie.

Olien opløses i 35 ml ethanol, behandles med 3,0 g cyclohexyl-10 amin i 10 ml ethanol og fortyndes til 500 ml med ether. Ved podning og gnidning udskilles det krystallinske N-carboben-zyloxy-4,4-dimethoxy-L-prolin-cyclohexylaminsalt, der efter afkøling natten over vejer 7,0 g, smeltepunkt 157-159°C (begynder 151°C) , [a]^6 -34° (c, 1% i EtOH) . Dette materiale 15 omkrystalliseres ud fra 100 ml acetonitril, hvilket giver saltet som et farveløst fast stof, smeltepunkt 158-160°C (s, 154°C) , [a]^6 -33° (c, 1% i EtOH).

N-Carbobenzyloxy-4,4-dimethoxy-L-prolin-cyclohexyl-aminsaltet suspenderes i 40 ml ethylacetat, omrøres og be-20 handles med 25 ml IN saltsyre. Når der er opnået to klare lag, adskilles de, den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 40 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, til sidst ved 0,2 mm og 40°C, hvilket giver 7,2 g (70%) N-carbobenzyloxy-4,4-di-25 methoxy-L-prolin som en bleggul viskos sirup.

c) 4,4-Dimethoxy-L-prolin

En opløsning af 72 g (0,022 mol) N-carbobenzyloxy--4,4-dimethoxy-L-prolin i 210 ml methanol/vand (2:'l) behandles med 2,3 g 5% palladium-carbon og rystes på en Parr-hydro-30 genator i 6 timer. Katalysatoren filtreres fra under· nitrogen, vaskes med methanol, og de forenede filtrater inddampes, til sidst ved 0,1-0,2 mm, hvilket giver en delvis krystallinsk remanens. Denne remanens tages op i 200 ml methanol, og ind-dampningen gentages. Når det faste stof er gnedet under ether 35 (inddampning gentages igen) fås der 3,6 g (95%) næsten farveløst 4,4-dimethoxy-L-prolin, smeltepunkt 192-194°C (sønderdeling), [cc]^6 -47° (c, 1% i MeOH) .

J

DK 159115 B

O

16

En prøve, der er krystalliseret ud fra methanol/e-ther, er farveløs og smelter ved 197-198°C (sønderdeling) [< -49°; (c, 1% i MeOH) .

d) (S) -1- [3- (Acetylthio) -2-methyl-l-oxopropylj -4,4-dimeth-5 oxy-L-prolin

En omrørt opløsning af 3,3 g (0,019 mol) 4,4-di-methoxy-L-prolin i 50 ml vand afkøles til 5°C og bringes på pH 8,5 ved tilsætning af 25% natriumcarbonatopløsning (vægt/ volumen). Derefter tilsættes portionsvis under fortsat om-10 røring og afkøling en opløsning af 3,8 g (0,021 mol) D-3--acetylthio-2-methylpropanoylchlorid i 5 ml ether, medens pH holdes på 7,5-8,5 ved dråbevis tilsætning af 25% natriumcarbonatopløsning. Når pH er stabiliseret ved 8,2-8,4 (efter ca. 15 minutter), fortsættes omrøring og afkøling i i alt 15 en time. Opløsningen vaskes derefter med 50 ml ethylacetat (vaskevæsken kasseres), dækkes med et lag af 50 ml ethylacetat, afkøles, omrøres, gøres forsigtigt sur med 1:1 saltsyre til pH 2,0, mættes med natriumchlorid, og lagene adskilles.

Den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 50 ml ethyl-20 acetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, til sidst ved 0,2 mm, hvilket giver 6,7 g sirupsagtigt produkt. Denne sirup behandles i 70 ml ethylacetat med 3,9 g dicyclohexylamin, hvilket giver 6,5 g farveløst (S)-1-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-4,4-dimeth-25 oxy-L-prolin-dicyclohexylaminsalt i udbytter på 3,1 g og 3,4 g, smeltepunkt 158-160°C (begynder ved 145°C), [a]^ -71° (c, 1% i EtOH).

Efter omkrystallisation ud fra 20 ml varm ethylacetat og 60 ml hexan vejer det farveløse faste salt 6,0 g, 30 smeltepunkt 158-166°C (begynder 155°C) , [a]^ -69° (c, 1% i EtOH) .

Dicyclohexylaminsaltet omdannes til den frie syre ved at suspendere 5,0 g i 50 ml ethylacetat, afkøle det og behandle med 60 ml 10% kaliumbisulfatopløsning, hvilket giver 35 2 klare lag. Efter adskillelse ekstraheres den vandige fase med 3 x 50 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, til sidst ved 0,1-0,2 17

O

DK 159115 B

mm og 45°C, hvilket giver 4,1 g (69%) (S)-l-[3-(acetylthio)- -2-methyl-l-oxopropyl]-4,4-dimethoxy-L-prolin som et viskost 25 o næsten glaslignende materiale, [a] -112 (c, 1% i EtOH).

5 Eksempel 4 (S)-1-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-4,4-dimethoxy-L-prolin Der ledes argon gennem en kold opløsning af 8,5 ml koncentreret ammoniumhydroxid i 20 ml vand i 0,25 time. Denne tilsættes under afkøling og argontæppe til 4,1 g (0,013 10 mol) (S)-1-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-4,4-dimethoxy-L-prolin, og blandingen hvirvles om i isbad, indtil der fås en svagt gul opløsning (ca. 15 minutter). Omrøringen under argon fortsættes ved stuetemperatur i yderligere 2 timer, derefter ekstraheres opløsningen med 30 ml ethylacetat (den-15 ne og følgende operationer udføres i så stor udstrækning som muligt under argonatmosfære). Det vandige lag afkøles, omrøres, overdækkes med et lag af 30 ml ethylacetat, gøres portionsvis surt med 16 ml 1:1 saltsyre. Lagene adskilles, den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 30 ml ethylacet-20 at, de forenede ethylacetatlag tørres (MgS04), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 3,5 g (100%) (S)-1-(3-mercap- to-2-methyl-l-oxopropyl)-4,4-dimethoxy-L-prolin som en far- 25 o veløs viskos sirup, [a] D -72 (c, 1% i EtOH).

Denne forbindelse (3,4 g) tritureres med 20 ml ethyl-25 acetat, gnides, fortyndes med 30 ml hexan og afkøles, hvorved fås et farveløst fast stof, der vejer 2,6 g, smeltepunkt 108-110°C, [a]2D5 -77° (c, 1% i EtOH).

Eksempel 5 30 (S)-1-[3-(Åcetylthio)-2-methyl-l-oxopropylj-4,4-diethoxy-L- -prolin a) N-Carbobenzyloxy-4,4-diethoxy-L-prolin-ethylester

Ved at følge fremgangsmåden i eksempel 3(a), men anvende triethylorthoformiat i stedet for trimethylorthofor-35 miat og ethanol i stedet for methanol fås 10,8 g N-carboben-zyloxy-4,4-diethoxy-L-prolin-ethylester som en gul olie.

O

DK 159115B

18 b) N-Carbobenzyloxy-4,4-diethoxy-L-prolin

Den rå ester fra del (a) (10,8 g, 0,03 mol) hydrolyseres med 70 ml IN natriumhydroxid som anført i eksempel 4(b), der tilsættes 30 ml ethanol i 10 ml portioner, hvorved 5 der fås en opløsning, som giver 10,5 g gul viskos olie. Denne olie opløses i 100 ml ether og behandles med 3,0 g cyclo-hexylamin. Ved podning og gnidning udskilles 8,3 g af det krystallinske N-carbobenzyloxy-4,4-diethoxy-L-prolin-cyclo-hexylaminsalt, smeltepunkt 123-126°C (begynder 114°C) , [a]^ 10 -32° (c, 1% i ethanol). Dette materiale omkrystalliseres ud fra 20 ml acetonitril, hvilket giver 7,0 g af saltet som et farveløst fast stof, smeltepunkt 125-128°C (begynder ved 115°C) , [ct]^6 -31° (c, 1% i ethanol).

N-Carbobenzyloxy-4,4-diethoxy -L-prolin-cyclohexyl-15 aminsaltet suspenderes i 40 ml ethylacetat, omrøres og behandles med 20 ml IN saltsyre. Lagene adskilles, og den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 40 ml ethylacetat, de organiske lag forenes, tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 5,6 g (56%) N-carbobenzyloxy-4,4-20 -diethoxy-L-prolin som en lysegul olie.

c) 4,4-Diethoxy-L-prolin

En opløsning af de 5,6 g N-carbobenzyloxy-4,4-di-ethoxy-L-prolin (0,017 mol) i 180 ml 2:1 ethanol/vand behandles med 2 g af en 5% palladium-carbon-katalysator og rystes 25 under 3 atm. hydrogen i 6 timer. Det rå delvis faste produkt gnides først under ethanol, derefter ether, og inddampningen gentages hver gang, hvilket giver 3 g (91%) næsten farveløst fast 4,4-diethoxy-L-prolin, smeltepunkt 172-174°C (sønderde- 2 6 ling) med forudgående gradvis mørkfarvning og sintring, [a] ^ 30 -40° (c, 1% i methanol).

Analyse, beregnet for CgH^NO^*0,25 E^O: C 52,03, H 8,49, N 6,74.

Fundet: C 52,22, H 8,59, N 6,69.

35 d) (S)-1-[3-(Acetylthio)-2-methyl-1-oxopropy1]-4,4-diethoxy--L-prolin 2,9 g 4,4-diethoxy-L-prolin (0,014 mol) fra del (c)

O

DK 159115B

19 og 3 g (0,017 mol) D-3-acetylthio-2-methylpropionylchlorid opløst i 3,5 ml ether omsættes i 35 ml vand i nærværelse af natriumcarbonat som anført i eksempel 3(d), hvilket giver 5,4 g svagt gul viskos olie. Dette olieagtige produkt behand-5 les i 40 ml ethylacetat med 2,6 g dicyclohexylamin og fortyndes med 60 ml hexan, hvilket i to udbytter giver 4,9 g (S)--1-[(3-acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-4,4-diethoxy-L-pro-lin-dicyclohexylaminsalt, smeltepunkt 135-138°C (begynder ved 132°C). Efter omkrystallisation ud fra 15 ml varm ethyl-10 acetat og 45 ml hexan vejer det farveløse faste salt 4,2 g, smeltepunkt 138-140°C (begynder ved 135°C) , [a]^ -63° (c, 1% i ethanol).

Analyse, beregnet for C^2H23^: C 61,33, H 9,15, N 5,30, S 6,06.

15 Fundet: C 61,48, H 9,55, N 5,25, S 5,91.

Dicyclohexylaminsaltet omdannes til den frie syre ved at suspendere 4,2 g i 40 ml ethylacetat, afkøle og behandle med 40 ml 10% kaliumbisulfatopløsning, hvorved der fås to lag. Efter adskillelse ekstraheres den vandige fase 20 med 3 x 50 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 3,0 g (61%) (S)-1-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-4,4-dieth-oxy-L-prolin som en bleggul viskos sirup.

25 Eksempel 6 (S)-4,4-Diethoxy-l-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolin Argon ledes gennem en kold opoøsning af 5,5 ml koncentreret ammoniumhydroxid i 13 ml vand i 0,25 time. Dette sættes derefter under afkøling under argontæppe til 3,0 g 30 (0,0086 mol) (S)-1-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-4,4- -diethoxy-L-prolin, og blandingen oparbejdes som beskrevet i eksempel 4, hvilket giver 2,4 g (92%) (S)-4,4-diethoxy-l-(3- -mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolin som en næsten farve-26 o løs sirup [a]^ -64 , (c, 1% i ethanol).

35 Analyse, beregnet for ci3H23N05 * 0/25 H20: C 50,38, H 7,64, N 4,52, S 10,35.

Fundet: C 50,68, H 7,96, N 4,78, S 10,07.

0

DK 159115 B

20

Eksempel 7 [2(S) ,3S] -2-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl3-6,10-dioxa--2-azaspiro[4,5]decan-3-carboxylsyre a) N-Carbobenzyloxy-4,4-trimethylendioxy-L-prolin 5 Omsætning af 8,2 g (0,031 mol) N-carbobenzyloxy- -4-keto-L-prolin og 45 ml (0,62 mol) 1,3-propandiol i 450 ml benzen i nærværelse af 500 mg p-toluensulfonsyre giver 12,3 g råt viskost esterprodukt. Dette produkt hydrolyseres med 70 ml IN natriumhydroxid, hvilket giver 10,6 g rå N-carbo-10 benzyloxy-4,4-trimethylendioxy-L-prolin som en gul olie.

Denne opløses i 40 ml ethanol/400 ml ether og behandles med 3,2 g cyclohexylamin, hvilket giver 10,1 g N-carbobenzyloxy--4,4-trimethylendioxy-L-prolin-cyclohexylaminsalt, smeltepunkt 163-165°C (begynder 160°C, [a]^* -27° (c, 1% i ethanol). 15 Krystallisation af 9,8 g af saltet ud fra 300 ml acetonitril giver 9,5 g farveløst fast cyclohexylaminsalt, smeltepunkt 165-167°C (begynder 162°C), [a]^5 -27° (c, 1% i ethanol).

Cyclohexylaminsaltet (9,0 g) suspenderes i 40 ml ethylacetat, omrøres, afkøles og behandles med 45 ml IN salt-20 syre. Lagene adskilles, den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 40 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 7,1 g (75%) glaslignende N-carbobenzyloxy-4,4-trimethylendi-oxy-L-prolin.

25 b) 4,4-Trimethylendioxy-L-prolin

En opløsning af 7,1 g (0,022 mol) N-carbobenzyl- oxy-4,4-trimethylendioxy-L-prolin i 200 ml 2:1 methanol/vand hydrogeneres i nærværelse af 2 g 5% palladium-carbon-kataly- sator, hvilket giver 3,8 g (93%) næsten farveløs 4,4-trimethyl- 30 endioxy-L-prolin, smeltepunkt 234-236°C (sønderdeling) med 25 o forudgående gradvis mørkfarvning of sintring, [α] β -36 (c, 1% i 1:1 methanol/vand).

Analyse, beregnet for C 51,33, H 7,00, N 7,48, 35 Fundet: C 51,42, H 7,11, N 7,40.

O

DK 159115B

21 c) [2(S),3S]-2-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-6,10-di-oxa-2-azaspiro[4,5]decan-3-carboxylsyre 3,7 g (0,02 mol) 4,4-trimethylendioxy-L-prolin acy-leres med 4,0 g (0,022 mol) D-3-acetylthio-2-methylpropionyl-5 chlorid i 50 ml vand i nærværelse af natriumcarbonat som anført i eksempel 1(e), hvilket giver 7,3 g glaslignende råprodukt.

Produktet omdannes til dicyclohexylaminsaltet med 3,6 g dicyclohexylamin i 70 ml ethylacetat. Efter podning 10 og gnidning udfældes det krystallinske salt, smeltepunkt 168-170°C (begynder 166°C) , [a]^* -59° (c,l% i ethanol). Omkrystallisation ud fra 30 ml acetonitril giver 6,5 g farveløst fast salt, smeltepunkt 169-171°, [a]^ -63°, (c, 1% i ethanol).

15 Dicyclohexylaminsaltet omdannes til den frie syre ved,at man suspenderer 6,4 g i 75 ml ethylacetat og behandler med 75 ml 10% kaliumbisulfat og omrører, indtil der fås to lag. Efter adskillelse ekstraheres den vandige fase med ethylacetat (4 x 75 ml), de organiske lag forenes, tørres (MgS04) 20 og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 4,3 g (67%) glaslignende [2(S),3S]-2-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]--6,10-dioxa-2-azaspiro[4,5]decan-3-carboxylsyre.

Eksempel 8 25 [2(S),3S]-2-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-6,lQ-dioxa-2- -azaspiro[4,5]decan-3-carboxylsyre [2(S),3S]-2-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]- -6,10-dioxo-2-azaspiro[4,5]dican-3-carboxylsyre (4,3 g, 0,013 mol) hydrolyseres med 8,5 ml koncentreret ammoniak i 20 ml 30 ifølge fremgangsmåden i eksempel 2, hvilket giver 0,9 g far- 25 o veløst fast produkt, [a] -64 (c, 0,5% i ethanol). Der fås yderligere 0,8 g produkt ved at ekstrahere den vandige 25 o fase med chloroform, [α] -66 . De to udbytter opløses i chloroform, inddampes, gnides under ether, og inddampningen 35 gentages, hvilket giver 1,7 g (46%) [2(S),3S]-2-(3-mercapto- -2-methyl-l-oxopropyl)-6,10-dioxo-2-azaspiro[4,5]decan-3--carboxylsyre, smeltepunkt 169-171° (begynder 167°), [a]^ 22

O

DK 159115 B

-71° (c, 1% i methanol).

Analyse, beregnet for C 49,81, H 6,62, N 4,84, S 11,08.

Fundet: C 49,67, H 6,67, N 4,93, S 11,10.

5

Eksempel 9 [7(S),8S]-7-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-7-aza-l,4--dithiaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre a) N-Carbobenzyloxy-4,4-ethylendithio-L-prolin-methylester 10 En omrørt opløsning af 3,9 g (0,014 mol) N-carbo- benzyloxy-4-keto-L-prolin-methylester i 60 ml methylenchlo-rid behandles med 3 ml (0,036 mol) ethandithiol, afkøles til 8°C og behandles under argontæppe med 3 ml (0,024 mol) bor-trifluoridetherat. Efter at kølebadet er fjernet, omrøres 15 den bleggule opløsning i yderligere en time og holdes natten over ved stuetemperatur. Opløsningen omrøres, behandles med flere stykker knust is, efterfulgt af 20 ml vand. Efter 30 minutters forløb skilles lagene, og den vandige fase (50 ml) ekstraheres med yderligere 3 x 30 ml methylenchlorid. De 20 forenede organiske lag vaskes med 50 ml mættet natriumchlorid-opløsning, tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet fjernes på en roterende fordamper, hvilket giver 6 g (100%) af en bleggul olie, N-carbobenzyloxy-4,4-ethylendithio-L-prolin-methylester.

b) N-Carbobenzyloxy-4,4-ethylendithio-L-prolin 25 Methylesterproduktet fra del (a) (7,4 g, ca. 0,018 mol) opløses i 65 ml methanol, behandles dråbevis ved -1 til 4°C med 14,5 ml (0,029 mol) 2N natriumhydroxid, holdes ved 0°C i en time og ved stuetemperatur natten over. Efter at ca. halvdelen af opløsningsmidlet er fjernet på en roterende 30 fordamper, fortyndes opløsningen med 125 ml vand, vaskes med ether (vaskevæsken kasseres), gøres sur under afkøling med 5 ml 1:1 saltsyre til pH 2 og ekstraheres med ethylacetat (4 x 50 ml). De forenede ekstrakter vaskes med 50 ml mættet na-triumchlorid, tørres (MgS04), og opløsningsmidlet afdampes, 35 hvilket giver 6 g af en bleggul viskos olie. Denne olie opløses i 25 ml ethanol, behandles med 1,8 g cyclohexylamin i 5 ml ethanol og fortyndes til 300 ml med ether. Ved podning

O

DK 159115B

23 og gnidning udskilles det krystallinske cyclohexylaminsalt, hvilket efter køling natten over giver 5,7 g N-carbobenzyloxy--4,4-ethylendithio-L-prolin-cyclohexylaminsalt, smeltepunkt 205-207°C (begynder 201°C). Omkrystallisation ud fra 50 ml 5 ethanol/400 ml ether giver 4,9 g farveløst fast salt, smeltepunkt 207-209°C (begynder 201°C) , [a]^ -15° (c, 1% i chloroform) .

Cyclohexylaminsaltet (4,8 g) suspenderes i 25 ml ethylacetat, omrøres og behandles med 25 ml IN saltsyre. Når 10 der fås to klare lag, skilles disse ad, den vandige fase eks-traheres med yderligere 3 x 25 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 3,8 g (62%) N-carbobenzyloxy-4,4-ethylendithio--L-prolin som en bleggul viskos sirup.

15 c) 4,4-Ethylendithio-L-prolin-hydrobromid 3,7 g N-carbobenzyloxy-4,4-ethylendithio-L-prolin (0,011 mol) behandles med 20 ml hydrogenbromid i eddikesyre (30-32%), tilproppes løst og omrøres magnetisk. Blanding er vanskelig på grund af udgangsmaterialets viskositet, og det-20 te opdeles så meget som muligt med en spatel. I mellemtiden begynder det krystallinske produkt at udskilles. Der tilsættes yderligere mængder hydrogenbromid i eddikesyre efter 15 minutter (10 ml) og efter 25 minutter (5 ml) og omrøringen fortsættes i ialt 35 minutter. Der tilsættes 250 ml ether 25 for at afslutte udfældningen af produktet, og efter afkøling i 15 minutter filtreres det cremefarvede materiale under nitrogen, vaskes med ether og tørres i vakuum, hvilket giver 2,7 g 4,4-ethylendithio-L-prolin-hydrobromid, smeltepunkt 240-242°C (sønderdeling), sintring og mørkfarvning fra ca.

30 200°C, [a]^ -40° (c, 0,5% i 1:1 chloroform/methanol) .

d) [7(S),8S]-7-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxoprQpyl]-7-aza--1,4-dithiaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre

En omrørt opløsning af 2,6 g (0,0091 mol) 4,4-e-thylendithio-L-prolin-hydrobromid i 25 ml vand afkøles til 35 5°C og bringes til pH 8,2 ved tilsætning af 25% natriumcarbo- nat (vægt/volumen). Under fortsat omrøring og afkøling tilsættes portionsvis en opløsning af 1,9 g (0,01 mol) D-3-ace-tylthio-2-methylpropionylchlorid i 2,5 ml ether, idet pH holdes på 7,5-8,2 ved dråbevis tilsætning af 25% natriumcarbo-

O

DK 159115 B

24 nat. Når pH er stabiliseret på 8,2-8,5 (efter ca. 15 minutter), fortsættes omrøring og afkøling i ialt en time. Opløsningen vaskes derefter med 25 ml ethylacetat (vaskevæsken kasseres, dækkes med et lag af 25 ml ethylacetat, afkøles, 5 omrøres, gøres forsigtigt sur med 1:1 saltsyre til pH 2,0, mættes med natriumchlorid, og lagene adskilles. Den vandige fase ekstraheres med yderligere ethylacetat (3 x 25 ml), de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, tilsidst ved 0,2 mm, hvilket giver 2,6 g sirups-10 agtigt produkt, der begynder at krystallisere. Dette behandles i 30 ml ethylacetat med 1,5 g dicyclohexylamin, hvilket giver 3,0 g farveløst dicyclohexylaminsalt, smeltepunkt 176-178° (s 170°C) , [a]^6 -55° (c, 1% i ethanol). Dette materiale formales i en morter under 15 ml acetonitril, afkø-15 les i en time, filtreres, vaskes med 5 ml kold acetonitril og med ether og tørres, hvilket giver 2,9 g dicyclohexylaminsalt, smeltepunkt 177-179°C (s 172°), [a]^ -56° (c, 1% i ethanol).

Analyse, beregnet for ci3HigN04S’c;L2H23N: 20 C 56,56, H 7,98, N 5,28, S 18,12.

Fundet: C 56,21, H 8,18, N 5,05, S 18,00.

Det ovennævnte dicyclohexylaminsalt omdannes til den frie syre ved at suspendere 2,8 g i 30 ml ethylacetat, afkøles og behandle med 30 ml 10% kaliumbisulfat, hvilket 25 giver to klare lag. Efter adskillelse ekstraheres den vandige fase med 3 x 50 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, til sidst ved 0,1-0,2 mm og 45°C, hvilket giver 2,0 g (63%) farveløs fast [7(S),8S]-7-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-7-30 -aza-l,4-dithiaspiro[4,4]-nonan-8-carboxylsyre, smeltepunkt 125-126°C (s, 122°C) , [a]^6 -101° (c, 1% i ethanol).

Eksempel 10 [7 (S) , 8S3-7-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-7-aza-l,4-di-35 thiaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre

Argon ledes gennem en kold opløsning af 3,5 ml koncentreret ammoniak i 8,5 ml vand i 15 minutter. Dette til-

O

DK 159115 B

25 sættes derefter under afkøling og argontæppe til 1,9 g (0,054 mol) [7(S),8S]-7-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl]-7-aza--l,4-dithiaspiro[4,4]nonån-8-carboxylsyre, og blandingen hvirvles rundt i isbad, indtil der fås en opløsning. Omrø-5 ring under argon fortsættes ved stuetemperatur i yderligere to timer, derefter ekstraheres opløsningen med 15 ml ethyl-acetat under argonatmosfære. Det vandige lag afkøles, omrøres, dækkes med et lag af 15 ml ethylacetat og gøres portionsvis sure med ca. 6,5 ml 1:1 saltsyre. Lagene adskilles, den 10 vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 15 ml ethylacetat, de forenede acetatlag tørres (I»lgS04), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver en glaslignende remanens, der størkner, når den gnides under ether. Afdampningen gentages, og det farveløse produkt suspenderes i 30 ml hexan, fil-15 treres og tørres i vakuum, hvilket giver 1,4 g (84%) [7(S), 8S]— 7—(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-7-aza-l,4-dithiaspi-ro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, smeltepunkt 116-118°C (s 105°C), [a]p® -44° (c, 1% i ethanol).

Analyse, beregnet for C^H^NO^S^: 20 C 42,97, H 5,57, N 4,56, S 31,29, SH 100%

Fundet: C 42,70, H 5,71, N 4,54, S 31,13, SH 100%.

Eksempel 11

(8S)-7-[3-(Acetylthio)-2-trifluormethyl-l-oxopropyl]-1,4-di-25 oxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, isomere A og B

a) D,L-3-(Acetylthio)-2-trifluormethylpropionsyre 10 g (0,071 mol) α-trifluormethylacrylsyre, fremstillet som anført i J.Chem.Soc., 1954, side 371, afkøles i et bad af is, vand og salt, omrøres og behandles portions-30 vis med 5,7 ml (0,075 mol) 97% thioleddikesyre. Efter tilsætningen omrøres en gule væske i kulden i en time, får lov at varme op til stuetemperatur og destilleres, hvilket giver 14 g (91%) D,L-3-(acetylthio)-2-trifluormethylpropionsyre som en lysegul olie, kogepunkt 149-153°C/13 mm. Materialet størk-35 ner ved opbevaring i kulden.

26

O

DK 159115 B

b) D,L-3~(Acetylthio)-2-trifluormethylpropionylchlorid 7 g (0,032 mol) D,L-3-(acetylthio)-2-trifluorme-thylpropionylsyre behandles med 18 ml (0,25) redestilleret thionylchlorid, og blandingen tilbagesvales i tre timer. Ef-5 ter at det overskydende thionylchlorid er fjernet på en roterende fordamper, destilleres remanensen, hvilket giver 6,8 g D,L-3-(acetylthio)-2-trifluormethylpropionylchlorid som en bleggul olie, kogepunkt 80-82°C/16 mm.

c) (8S)-7-[3-(Acetylthio)-2-trifluormethyl-l-oxopropyl]-1,4- 10 -dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre (isomere A og B) 2,4 g (0,014 mol) 4,4-ethylendioxy-L-prolin omsættes med 3,4 g (0,014 mol) D,L-3-(acetylthio)-2-trifluormethylpropionylchlorid i 40 ml vand i nærværelse af natriumcarbo-nat ifølge fremgangsmåden i eksempel 1(e), hvilket giver 4,5 15 g næsten farveløst fast produkt, smeltepunkt 126-145°C (s 115°C) , [cx]2d5 -34° (c, 1% i ethanol).

Blandingen af diastereoisomere (4,2 g) suspenderes i 45 ml ether, omrøres i to timer, afkøles i 20 minutter, og det uopløste faste stof filtreres, vaskes med kold ether og

20 lufttørres, hvilket giver 2,7 g produkt, smeltepunkt 166-172°C

(s 140°C), [a]^ -62° (c, 1% i ethanol). Materialet formales derefter i en morter under 25 ml ether, filtreres efter 15 minutter, vaskes med noget ether og lufttørres igen, hvilket giver 2,1 g produkt, (smeltepunkt 172-177°C (s 143°C). Efter 25 krystallisation ud fra 11 ml kogende isopropanol og afkøling natten over fås 1,55 g farveløs (8S)-7-[3-(acetylthio)-2-tri- fluormethyl-l-oxopropyl]-1,4-dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8- -carboxylsyre, isomer A, smeltepunkt 192-194°C, (s 183°C), 25 o [a] -32 (c, 1% i ethanol). En prøve omkrystalliseres U . o c 30 ud fra isopropanol, smeltepunkt 193-195°C (s 184°C) , [a]^ -134° (c, 1% i ethanol).

Isomer B fås ved at kombinere ovenstående ether-og isopropanolfiltrater og fjerne opløsningsmidlerne under formindsket tryk, hvilket giver 2,2 g af et svagt gult fast 35 stof, smeltepunkt 108-109°C (s 95°C) , [a]^ +30° (c, 1% i ethanol). Dette materiale renses ved krystallisation ud

O

DK 159115B

27 fra 6 ml isopropanol, hvilket giver 1,2 g næsten farveløst fast stof, smeltepunkt 153-155°C (s 130°C), [a]^ +40° (c, 1% i ethanol). Efter krystallisation ud fra 4 ml ethylace-tat/6 ml hexan fås 1,1 g (8S)-7-[3-(acetylthio)-2-trifluor-5 methyl-l-oxopropyl]-1,4-dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, isomer B, smeltepunkt 153-155°C (s 141°), [a]^ +41° (c, 1% i ethanol).

Eksempel 12 1 q (8S)-7-(3-Mercapto-2-trifluormethyl-l-oxopropyl)-1,4-dioxa-7-

-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre-isomer A

Isomer A-produktet fra eksempel 16 (1,45 g, 0,0039 mol) hydrolyseres med 2,5 ml koncentreret ammoniak i 6 ml vand i en time som beskrevet i eksempel 2, hvilket giver 15 1,25 g (97%) farveløs (8S)-7-(3-mercapto-2-trifluormethyl-1- -oxopropyl)-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, 25 o isomer A, som et glaslignende produkt, [a] -61 (c, 1% i ethanol). TLC: Rf 0,40 (95:5:5 methylenchlorid/methanol/ed-dikesyre, vis. SH-reagens, PMA og varme).

20 Analyse, beregnet for C11H14F3N05S: C 40,12, H 4,28, N 4,25, S 9,74, F 17,31. Fundet: C 40,10, H 4,43, N 4,51, S 9,63, F 17,10. Ovennævnte syre opløses i ethylacetat og behandles med 1-adamantanamin, hvilket giver 1-adamantanaminsaltet, smel-25 tepunkt 213-125° (sønderdeling, [a]^* -47° (c, 1% i methanol).

Eksempel 13 (8S)-7-(3-Mercapto-2-trifluormethyl-l-oxopropyl)-1,4-dioxa-

-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, isomer B

3Q Isomer B-produktet fra eksempel 16 (1,05 g, 0,028 mol) hydrolyseres med 2 ml koncentreret ammoniak i 5 ml vand ifølge fremgangsmåden i eksempel 2, hvilket giver 0,9 g (97%) (8S)-7-(3-mercapto-2-trifluormethyl-l-oxopropyl)-l,4- -dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre, isomer B som 2 5 35 en svagt gul viskos sirup, [a] -16° (c, 1% i ethanol). Ma-

DK 159115B

28

O

terialet størkner til et voksagtigt fast stof, smeltepunkt 61-64°C (s 55°).

Analyse, beregnet for C11H14F3NO5S.0,25 H20: C 39,58, H 4,38, N 4,20, S 9,61, F 17,01.

5 Fundet: C 39,60, H 4,28, N 4,26, S 9,62, F 16,89.

Eksempel 14 [8S]-7-(3-Mercapto-2-trifluormethyl-l-oxopropyl)-7-aza-l,4-dir thiaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre 10 a) 3-[[(4-Methoxy)phenylmethyl]thio]-2-trifluormethylpropionyl-chlorid

En omhyggelig blanding af 3,9 g 1-trifluormethyla-

crylsyre og 4,3 g 4-methoxybenzyltiiiol omrøres ved 100-110°C

i en time. Blandingen får lov at køle af til stuetemperatur, 15 og det faste stof omkrystalliseres ud fra cyclohexan, hvilket giver 3-[[(4-methoxy)phenylmethyl]thio]-2-trifluormethylpro-pionsyre, smeltepunkt 72-74°C.

Behandling af denne syre med thionylchlorid giver 3-[[(4-methoxy)phenylmethyl]thio]-2-trifluormethylpropionyl- 20 chlorid.

b) [8S] —7— [3— [ [ (4-Methoxy) phenylmethyl] thio] - 2-trif luorme thyl--1-oxopropyl]-7-aza-l,4-dithiaspiro[4,4]nonan-8-carboxyl-syre 3- [ [ (4-Methoxy)phenylmethyl] thio]-2-trifluormethyl- 25 propionylchloridet fra del (a) omsættes med 4,4-ethylendithio--L-prolin ifølge fremgangsmåden i eksempel 9(d), hvilket giver [8S]-7-[3-[[(4-methoxy)phenylmethyl]thio]-2-trifluorme-thyl-l-oxopropyl]-7-aza-l,4-dithiaspiro[4,4]nonan-8-carboxyl- syre.

30 c) [8S]-7-(3-Mercapto-2-trifluormethyl-l-oxopropyl)-7-aza--1,4-dithiaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsyre

Produktet fra del (b) blandes med trifluoreddike- syre og anisol under nitrogen. Opløsningsmidlerne fjernes under vakuum, hvilket som remanens giver [8S]-7-(3-mercap-35 * to-2-trifluormethyl-l-oxopropyl)-7-aza-l,4-dithiaspiro[4,4]-nonan-8-carboxylsyre.

O

DK 159115 B

29

Eksempel 15 1-(3-Mercapto-l-oxopropyl)-4,4-dimethylthio-L-prolin a) 4-Keto-L-prolin-hydrobromid

Til 4,0 g (0,015 mol) N-carbobenzyloxy-4-keto-L-5 -prolin sættes 20 ml hydrogenbromid i eddikesyre (30-32%). Blandingen hvivles hyppigt om i et tidsrum på 8 minutter.

Ved slutningen af dette tidsrum (brusningen er ophørt),dæk-kes den gulorange opløsning med et lag af ether på 25°C, og det gummiagtige produkt tritureres. Etheren kasseres, og 10 det fremkomne klæbrige faste stof tritureres med frisk ether og til sidst med 50 ml acetonitril, hvilket giver 4-keto-L--prolin-hydrobromid som et krystallinsk fast stof, der vejer 2,7 g (85%), smeltepunkt 153-155°C (sønderdeling), [a]^* -49° (c, 1% i vand).

15 b) 1-[3-(Aoetylthio-l-oxopropyl]-4-oxo-L-prolin

En omrørt opløsning af 4,1 g (0,0195 mol) 4-keto--L-prolin-hydrobromid i 50 ml vand afkøles til 5°C og behandles portionsvis med fast natriumcarbonat (skumning reguleres ved tilsætning af nogle dråber ether) til pH 8,0 (ca. 2 g er 20 nødvendigt). Derefter tilsættes portionsvis under fortsat omrøring og afkøling en opløsning af 3,5 g (0,012 mol) 3-acet-ylthiopropanoylchlorid i 5 ml ethylacetat ved hjælp af en pipette, idet pH holdes på 7,0-8,0 ved dråbevis tilsætning af 25% (vægt/volumen) natriumcarbonatopløsning (ca. 10 ml) .

25 Efter ca. 10 minutters·' forløb stabiliseres pH på 8,0-8,4.

Efter fortsat omrøring og afkøling i i alt en time vaskes opløsningen med 2 x 50 ml ethylacetat, dækkes med et lag af 50 ml ethylacetat, omrøres, afkøles, gøres forsigtigt sur med koncentreret saltsyre til pH 2,0, mættes med natrium-30 chlorid, og lagene adskilles. Den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 50 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, til sidst ved 0,2 mm, hvilket giver 4,8 g af en gulorange glaslignende remanens. Denne remanens opløses i 35 ml ethylacetat og be-35 handles med en opløsning af 3,5 g dicyclohexylamin i 5 ml ethylacetat. Ved podning og gnidning udskilles krystallinsk 0

DK159115B

30 1-[3-(acetylthio-1-oxopropyl)]-4-oxo-L-prolin-dicyclohexyl-aminsalt, vægt efter afkøling natten over 2,7 g (næsten farveløs), smeltepunkt 191-193°C (sønderdeling), [a]^ -24° (c, 1% i CHC13).

5 Dette dicyclohexylaminsalt omdannes til den frie syre ved anvendelse af kaliumbisulfat som beskrevet i eksempel 1(e), hvilket giver 3,7 g l-[3-(acetylthio)-1-oxopropyl]--4-oxo-L-prolin som et bleggult glaslignende fast stof.

c) 1-[3-(Acetylthio)-1-oxopropyl]-4,4-dimethylthio-L-prolin 10 1-[3-(Acetylthio)-1-oxopropyl]-4-oxo-L-?rolinet om sættes med methylthiol ifølge fremgangsmåden i eksempel 9(a), hvilket giver 1-[3-(acetylthio)-1-oxopropyl]-4,4-dimethylthio-L-prolin .

d) 1-(3-Mercapto-l-oxopropyl)-4,4-dimethylthio-L-prolin 15 Produktet fra del (a) hydrolyseres med koncentre ret ammoniak ifølge fremgangsmåden i eksempel 2, hvilket giver 1-(3-mercapto-1-oxopropyl)-4,4-dimethylthio-L-prolin.

Eksempel 16 20 [7(S),8Sj-7-(3-Mercapto-2-methyl-1-oxopropyl)-1,4-dioxo-7-aza- spiro[4,4]nonan-2-methyl-8-carboxylsyre a) N-Carbobenzyloxy-4,4-(1-methylethylendioxy)-L-prolin-methyl-ester

En omrørt blanding af 8 g (0,025 mol) N-carbobenz-25 yloxy-4,4-dimethoxy-L-prolin-methylester fra eksempel 3(a), 2,4 g (0,032 mol) 1,2-propandiol, 0,4 g p-toluensulfonsyre-mo-nohydroat og 400 ml toluen opvarmes til tilbagesvaling (110-112°C). Tilbagesvalingshastigheden reguleres således, at opløsningsmidlet langsomt destillerer ved hjælp af en Dean-30 Stark-ledning ind til en skalainddelt cylinder. Når der er opn samlet 80 ml opløsningsmiddel, sættes en tilsvarende volumen frisk opløsningsmiddel til reaktionskolben gennem en tilsætningstragt. Denne operation med at fjerne og erstatte 80 ml opløsningsmiddel gentages fire gange under en sam-35 let tilbagesvalingsperiode på 1,25 time.

O

DK 159115 B

31

Efter henstand natten over vaskes blandingen med 2 x 100 ml vand, de forenede vaskninger ekstraheres tilbage med 100 ml toluen, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet fjernes på en roterende fordamper, til 5 sidst ved 0,2 mm, hvilket giver 8,2 g (99%) N-carbobenzyl-oxy-4,4-(1-methylethylendioxy)-L-prolin-methylester som en gul viskos olie.

b) N-Carbobenzyloxy-4,4- (1-meth.ylethylendioxy) -L-prolin

Det rå methylesterprodukt fra del (a) (8,2 g, 10 0,025 mol) opløses i 80 ml methanol, behandles dråbevis ved -1 til +4°C med 18 ml (0,036 mol) 2N natriumhydroxid, holdes ved 0°C i en time og ved stuetemperatur natten over. Efter at ca. halvdelen af opløsningsmidlet er fjernet på en roterende fordamper, fortyndes opløsningen med 150 ml vand, va-15 skes med 100 ml ether (vaskevæsken kasseres), gøres sur under afkøling med 6,3 ml 1:1 saltsyre til pH 2 og ekstraheres med ethylacetat (4 x 75 ml). De forenede ekstrakter vaskes med 50 ml mættet natriumchlorid, tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 8 g rødorange viskos olie.

20 Denne olie opløses i 50 ml acetonitril, opvarmes, omrøres og behandles med 3,8 g 1-adamantanamin. Det faste salt udskilles hurtigt. Efter afkøling natten over filtreres materialet, vaskes med kold acetonitril og med ether og tørres i vakuum, hvilket giver 10,3 g råt adamantanaminsalt, smel-25 tepunkt 202-204°C (sønderdeling), [a]^ -13° (c, 1% i methanol) . Efter triturering med 50 ml kogende acetonitril og afkøling vejer det svagt lysebrune salt 9,4 g, smeltepunkt 202-204°C, sønderdeling, [a]^6 -13° (c, 1% i methanol).

Ovennævnte adamantanaminsalt suspenderes i 40 ml 30 ethylacetat, omrøres og behandles med IN saltsyre. Når der er opnået to klare lag, adskilles disse, den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x 40 ml ethylacetat, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet af-dampes, til sidst ved 0,2 mm og 40UC, hvilket giver 5,8 g 35 (72%) N-carbobenzyloxy-4,4-(1-methylethylendioxy)-L-prolin som en gulorange viskos sirup.

DK 159115 B

32

O

c) 4,4-(l-Methylethylendioxy)-L-prolin

En opløsning 5,6 g (0,017 mol) af ovennævnte N--carbobenzyloxy-4,4- (1-methylethylendioxo) -L-prolin i 150 ml 2:1 methanol/vand behandles med 1,6 g 5% palladium-carbon-5 -katalysator og rystes under 3 atm. hydrogen i 5 timer. Katalysatoren filtreres fra under nitrogen, vaskes med methanol og de forenede filtrater inddampes, til sidst ved 0,1-0,2 mm, hvilket giver en krystallinsk remanens. Denne suspenderes i 200 ml methanol, og inddampningen gentages. Den faste re-10 manens gnides under ether (inddampning gentages), hvilket giver 3,0 g (94%) bleg lysebrunt 4,4-(1-methylethylendioxy)- -L-prolin, smeltepunkt 219-221°C (sønderdeling) med forudgå- 25 o ende gradvis mørkfarvning og sintring, [a] Q -22 (c, 1% i 1:1 ethanol/vand).

15 d) [7(S),8S]-7-[3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl3-1,4-di-oxo-7-azaspiro[4,4]nonan-2-methyl-8-carboxylsyre 2,8 g (Q',015 mol) af 4,4-(1-methylethylendioxy)--L-prolinet omsættes med 3,0 g (0,017 mol) D-3-acetylthio-2--methylpropionylchlorid i 40 ml vand ifølge fremgangsmåden i 20 eksempel 1(e), hvilket giver 5,0 g viskost gult produkt. Dette behandles med 2,8 g dicyclohexylamin i 45 ml ethylacetat, hvilket giver 4,2 g næsten farveløst [7(S),8S]-7-[3-(acetylthio) -2-methyl-l-oxopropyl]-1,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan--2-methyl-8-carboxylsyre-dicyclohexylaminsalt, smeltepunkt 25 170-172°C (s, 168°C> [a]^5 -58°, (c, 1% i ethanol). Efter krystallisation ud fra 12 ml acetonitril vejer det farveløse faste salt 3,85 g (51%), smeltepunkt 170-172°C (s, 168°C), [a]^5 -57° (c, 1% i ethanol).

Analyse, beregnet for C-^H^-jNOgS.C^I^gN: 30 C 60,90, H 8,65, N 5,46, S 6,26.

Fundet: C 60,93,.H 8,72, N 5,43, S 6,35. Dicyclohexylaminsaltet omdannes til den frie syre ved at suspendere 3,8 gi ethylacetat og behandle med 45 ml 10% kaliumbisulfat og omrøre, indtil der fås to lag.

35 Efter adskillelse ekstraheres den vandige fase med ethylacetat (4 x 40 ml), de organiske lag forenes, tørres (MgS04),

O

DK 159115B

33 og opløsningsmidlet afdampes, hvilket giver 2,5 g (51%) farveløs fast [7(S),8S]-7-[3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopro-pyl]-l,4-dioxo-7-azaspiro[4,4]nonan-2-methyl-8-carboxylsyre, smeltepunkt 65-68°C (s, 48°C) , [a]^5 -100° (c, 1% i ethanol).

5 e) [7(S) ,8SJ-7-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-l,4-dioxo- -7-azaspiro[4,4]nonan-2-methyl-8-carboxylsyre

Produktet fra del (d) hydrolyseres med koncentreret ammoniak ifølge fremgangsmåden i eksempel 2, hvilket giver 2.05 g [7(S),8S]-7-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-1,4-di- 10 oxo-7-azaspiro[4,4]nonan-2-methyl-8-carboxylsvre som en vi- 25 o skos farveløs olie, [a] D -57 , (c, 1% i ethanol).

Eksempel 17 (S,S,S,S)-7,7'-[Dithiobis(2-methyl-l-oxo-3,l-propandiyl)]-15 bis [ 1,4-dioxa- 7-azaspiro [4,4] nonan-8--carboxvlsyre 3,0 g (0,0109 mol) [7(S),8S]-7-(3-Mercapto-2-meth-yl-l-oxopropyl)-1,4-dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carboxylsy-re fra eksempel 2 opløses i 80 ml vand, og pH indstilles til 6.5 med IN natriumhydroxid. Til denne omrørte opløsning sæt-20 tes dråbevis i alt 11 ml 0,5 molær iodopløsning i 95% ethanol (6,34 g iod/50 ml opløsning), idet pH holdes på 5,5-6,5 med IN natriumhydroxid. Efter 15 minutter fjernes spor af overskydende iod med fortyndet natriumthiosulfat, og opløsningen koncentreres til ca. 50 ml, afkøles og gøres sur med 25 1:1 saltsyre. 30 ml methylenchlorid tilsættes, og blandin gen mættes med natriumchlorid, omrøres, og lagene adskilles.

Den vandige fase ekstraheres med yderligere 3 x .20 ml methylenchlorid, de forenede organiske lag tørres (MgSO^), og opløsningsmidlet afdampes, til sidst ved 0,2 mm. Den sprøde re-30 manens gnides under ether og afdampningen gentages, hvilket giver 2,8 g bleggul fast remanens. Materialet genopløses i 50 ml methylenchlorid, vaskes med 3 x 10 ml vand, de forenede vandige lag tilbageekstraheres med 20 ml methylenchlorid, og de forenede lag tørres (MgSO^). Inddampning og triture-35 ring med ether som ovenfor giver 2,2 g (73%) flødefarvet 34

O

DK 159115 B

amorft fast stof (S,S,S,S)-7,7'-[dithiobis(2-methyl-l-oxo--3,1-propandiyl)]bis[1,4-dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-carbox-ylsyre], smeltepunkt 61-63°C (skumning), (s 50°C) , [a]^ -92°, (c, 1% i ethanol).

5 Analyse, beregnet for ^22^32^2^10^ *^2^: C 46,63, H 6,05, N 4,94, S 11,31.

Fundet: C 46,52, H 6,29, N 4,63, S 10,96.

Den biologiske virkning af forbindelserne fremstillet ίο ifølge opfindelsen i sammenligning med captopril, som er kendt fra dansk patentansøgning nr. 596/77, fremgår af den følgende tabel.

*50^ % Inhibering(k) ?H3 ΓΊ

15 HS-CH.-CH-CO-N L-COOH

2 0,005 3 (Captopril) c« 52 r,n | 3 0,0008 10

hs-ch2-ch-co-n-1—C00H

CH3"1 1 o^r6 CH3 0,002 16

25 HS-CH2~CH-C0-N '—CQOH

ΓΊ ?H3 0,002 52 HS-CH2-CH-C0-N—l-cooh 30 (3) 150 er den koncentration af den undersøgte forbindelse (/xg/ml), der giver 50% inhibering af angiotensin-omdan-nende enzym isoleret fra kaninlunge.

(b) Tilbageværende procentisk inhibering af angiotensin-om-dannende enzym efter 24 timer hos rotter, som målt ved 35 blodtrykket efter intravenøs infusion af angiotensin I.

DK 159115B

35

Dosering af forbindelse - 10 mg/kg ækvivalenter af cap-topril.

5

Som det fremgår af resultaterne, er de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser 3-5 gange så virksomme som captopril, og deres virkning har en betydelig længere varighed, idet der efter 24 timer resterer en 10 betydelig højere procentisk inhibering.

Claims

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af et ketal-eller thioketalderivat af en mercaptoacylprolin med den almene formel 1 5 R1 R2 X1 .X2 X R3 0 ( Λ (I) c i il i * i

10 R5-S- (CH2 ) m-CH-C-N-C-COOR H hvori R betyder hydrogen eller C^-Cy-alkyl, R3 betyder hydrogen, C1-C7-alkyl eller halogen-C-^-Cy-alkyl,

15 X1 og X2 betyder oxygen eller svovl, R1 og R2 betyder C1-C7-alkyl, eller R1 og R2 betyder tilsammen en polymethylenkæde, således at der dannes en 5- eller 6-leddet ring, m betyder 0, 1 eller 2, og

20 R5 betyder hydrogen, C2-C8-alkanoyl, benzoyl eller en gruppe R1 R2 yl v2 R3 O / f 11 f*l

25 -S- (CH2) m-CH-C-N-C-COOR H hvori R, R1, R2, R3, X1, X2 og m har de ovenfor angivne betydninger, således at der dannes en bis-symmetrisk disul-fidforbindelse, 30 kendetegnet ved, at en substitueret prolin med formlen II 35 DK 159115B R1 R2 X1 i2 X (II) h2c ce2

5 HN--C-COOR H hvori R, R1, R2, X1 og X2 har de ovenfor angivne betydninger, kobles med en syre med formlen III R3 c I

10 R,5-S-(CH2)m-CH-COOH (III) • 3 hvori R har den ovenfor angivne betydning, og R'5 betyder C2-C8~alkanoyl eller benzoyl, eller et reaktivt derivat deraf, såsom et syrechlorid, til dannelse af en forbindelse med formlen IV 15 R1 R2 li I, *vx2 „ f p / ^ (iv)

20 R,5-S-(CH2)m-CH-C-N-C-COOR H hvorefter om ønsket gruppen R'® fjernes til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R5 betyder hydrogen, og denne forbindelse om ønsket oxideres med iod til den bis-25 -symmetriske disulfidforbindelse.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R'5 betyder C2-C8-alkanoyl eller benzoyl, og at denne gruppe fjernes ved hydrolyse eller ammonolyse til dannelse af den forbindelse med formlen I, hvori R5 betyder 30 hydrogen.