DE69930947T2 - Piperazin-4-phenyl-derivate als inhibitoren der wechselwirkung zwischen mdm2 und mdm2 - Google Patents

Piperazin-4-phenyl-derivate als inhibitoren der wechselwirkung zwischen mdm2 und mdm2 Download PDF

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Description

  • Diese Erfindung betrifft Verbindungen, welche die Wechselwirkung zwischen MDM2 und dem Tumorsuppressorprotein p53 inhibieren. Diese Erfindung betrifft auch Verfahren zur Herstellung von Inhibitoren der MDM2/p53-Wechselwirkung und deren pharmazeutisch annehmbaren Salzen oder Solvaten, neuartige pharmazeutische Zusammensetzungen, welche diese enthalten, und die Verwendung der Verbindungen als Proben der MDM2- und p53-Funktion.
  • p53 ist ein Transkriptionsfaktor, der eine entscheidende Rolle bei der Regulierung der Balance zwischen Zellwachstum und dem Wachstumsstop/der Apoptose von Zellen. Unter normalen Bedingungen ist die Halbwertzeit von p53 sehr kurz und in der Folge ist der p53-Spiegel in den Zellen niedrig. Allerdings steigt der p53-Spiegel in Folge von zellulärer DNA-Schädigung oder zellulärem Stress an. Dieser Anstieg des p53-Spiegels führt zur Aktivierung der Transkription einer Reihe von Genen, was die Zelle dazu bringt, entweder das Wachstum zu stoppen oder die Prozesse der Apoptose zu durchlaufen. Daher ist die Funktion von p53, das Wachstum von transformierten Zellen zu verhindern und dadurch den Organismus vor der Entwicklung von Krebs zu schützen (als Übersicht siehe Levine 1997, Cell 88, 323-331).
  • MDM2 ist ein entscheidender Negativregulator der p53-Funktion, welcher sich an die aminoterminale Transaktivierungsdomäne von p53 bindet. MDM2 inhibiert einerseits die Fähigkeit von p53, die Transkription zu aktivieren, und zielt andererseits p53 für den proteolytischen Abbau, wodurch die niedrigen p53-Spiegel unter normalen Bedingungen aufrechterhalten werden. MDM2 kann auch andere Funktionen zusätzlich zu der Inhibierung von p53 aufweisen. Zum Beispiel bindet MDM2 auch ein anderes Tumorsuppressorprotein, das Retinoblastom-Genprodukt, und inhibiert die Fähigkeit, Transkription zu aktivieren. Übersichten der MDM2-Funktionen siehe: Piette et al. (1997) Oncogene 15, 1001-1010; Lane und Hall (1997) TIBS 22, 372-374; Lozano und de Oca Luna (1998) Biochim Biophys Acta 1377, M55-M59.
  • MDM2 ist ein zelluläres Proto-Onkogen. Überexpression von MDM2 wird bei verschiedenen Krebsarten beobachtet, siehe Momand und Zambetti (1997) J. Cell. Biochem 64, 343-352. Der Mechanismus, durch den MDM2-Verstärkung die Tumorbildung fördert, steht zumindest teilweise mit seiner Wechselwirkung mit p53 in Zusammenhang. In Zellen, welche MDM2 überexprimieren, wird die Schutzfunktion von p53 blockiert und daher sind die Zellen nicht fähig, auf die DNA-Schädigung oder den zellulären Stress durch Erhöhen der p53-Spiegel zu reagieren, was zum Stop von Zellwachstum und/oder Apoptose führt. Daher können nach einer DNA-Schädigung und/oder zellulärem Stress Zellen, welche MDM2 überexprimieren, frei fortfahren, zu wachsen und einen tumorähnlichen Phänotyp anzunehmen. Unter diesen Bedingungen würde eine Unterbrechung der Wechselwirkung von p53 und MDM2 das p53 freisetzen und dadurch erlauben, dass die normalen Signale von Wachstumsstop und/oder Apoptose funktionieren. Diese Unterbrechung der Wechselwirkung von MDM2 und p53 bietet einen Ansatz für einen therapeutischen Eingriff bei Krebs.
  • Einige Patentanmeldungen sind veröffentlicht worden, welche Peptidinhibitoren der Wechselwirkung von p53 und MDM2 beschreiben, siehe: International Patent Application WO9602642, University of Dundee; International Patent Application WO9801467, Novartis & Cancer Research Campaign Technology Ltd.; und International Patent Application WO 9709343.
  • Wir haben eine neue Klasse von Kleinmolekül- Verbindungen entdeckt, welche die Wechselwirkung von MDM2 und p53 inhibieren. Diese Verbindungen sind nützlich als Proben der MDM2- und p53-Funktion und können als Mittel für die Behandlung von Krebs nützlich sein.
  • Gemäß der Erfindung ist eine Verbindung der Formel (1) bereitgestellt:
    Figure 00030001
    Formel (1) wobei:
    L1 für Wasserstoff oder Methyl steht;
    R1 und R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Halogen, Nitro, Cyano, Carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl oder C1-4-Alcoxycarbonyl stehen;
    R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, einen C5-7-carbocyclischen Ring oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein können;
    R5 für Wasserstoff, C1-4-Alkyl, R6CH2- oder R6C(O) – steht;
    R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl oder R7 steht; wobei die Aryl-, Heteroaryl- bzw. Heterocyclylringe gegebenenfalls durch bis zu drei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Nitro, C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy, Halogen, (C1-4-Alkyl)sulfanyl, C1-4-Alcoxycarbonyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl, N-(C1-4-alkyl)amino oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino substituiert sein können;
    wobei R7 entweder für eine Gruppe der Formel (2) oder der Formel (3) steht:
    Figure 00040001
    wobei:
    L2, L3 und L4 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder Methyl stehen;
    R8 für Amino, Guanadino, Imidazolo steht, wobei diese Reste jeweils durch C1-4-Alkyl mono- oder di-N-substituiert sein können;
    A1 für Sauerstoff oder eine direkte Bindung steht;
    R9 für einen C5-8-gliedrigen monocarbocyclischen Ring, einen C6-10-gliedrigen bicarbocyclischen Ring, einen C8-12-gliedrigen tricarbocyclischen Ring, C5-7-Alkyl oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls durch C1-4-Alkyl mono-, di- oder trisubstituiert sein können;
    R10 für C1-6-Alkyl oder einen C3-8-mono-carbocyclischen Ring steht;
    R11 für Wasserstoff, Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy steht;
    R12 für Wasserstoff oder Methyl oder Ethyl steht oder R12 zusammen mit L2 einen stickstoffhaltigen C5-7- heterocyclischen Ring bildet;
    R13 für Wasserstoff, Methyl oder Ethyl steht oder R13 zusammen mit L4 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet;
    n für 0, 1 oder 2 steht;
    p für 0, 1 oder 2 steht;
    q für eine ganze Zahl von 1 bis 6 steht;
    r für 0, 1 oder 2 steht;
    s für 0, 1 oder 2 steht;
    mit der Maßgabe, dass, wenn R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl steht, R5 nicht für R6CH2- steht; und wenn R1 für Wasserstoff steht, R2 für Wasserstoff steht, R3 für Wasserstoff steht, L1 für Wasserstoff steht, n für 1 steht, R4 für Phenyl steht, R5 für R6C(O)- steht, R6 nicht für 2-Methyl-4-aminobutyl stehen kann,
    mit der Ausnahme von (S)-4-Chlor-N-[1-(1H-indol-3-ylmethyl)-2-oxo-2-(4-phenyl-1-piperazinyl)ethyl]-N-methylbenzamid;
    und deren pharmazeutisch annehmbare Salze und Solvate.
  • In dieser Beschreibung umfasst der Sammelbegriff "Alkyl" sowohl geradkettige als auch verzweigtkettige Alkylgruppen. Allerdings sind Bezugnahmen auf einzelne Alkylgruppen, wie z.B. "Propyl", nur für die geradkettige Version spezifisch und Bezugnahmen auf einzelne verzweigtkettige Alkylgruppen, wie z.B. "Isopropyl" sind nur für die verzweigtkettige Version spezifisch. Eine analoge Übereinkunft betrifft andere Sammelbegriffe.
  • Der Ausdruck "Aryl" betrifft Phenyl oder Naphthyl.
  • Der Ausdruck "Heteroaryl" betrifft einen 5-10-gliedrigen aromatischen mono- oder bicyclischen Ring, der bis zu 5 Heteroatome, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel, enthält. Beispiele für 5- oder 6-gliedrige Heteroarylringsysteme umfassen Imidazol, Triazol, Pyrazin, Pyrimidin, Pyridin, Isoxazol, Oxazol, Isothiazol, Thiazol, Furan, Pyrazol, 1,2,3-thiadiazol und Thiophen. Ein 9- oder 10-gliedriges bicyclisches Heteroarylringsystem ist ein aromatisches bicyclisches Ringsystem, umfassend einen 6-gliedrigen Ring, kondensiert an entweder an einen 5-gliedrigen Ring oder einen anderen 6-gliedrigen Ring. Beispiele für 5/6 oder 6/6 bicyclische Ringsysteme umfassen Benzofuran, Benzimidazol, Benzthiophen, Benzthiazol, Benzisothiazol, Benzoxazol, Benzisoxazol, Pyridoimidazol, Pyrimidoimidazol, Qinolin, Isoquinolin, Qinoxalin, Quinazolin, Phthalazin, Cinnolin, 4-oxo-4H-1-Benzopyran und Naphthyridin.
  • Der Ausdruck "Heterocyclyl" betrifft einen 5-10-gliedrigen nicht-aromatischen mono- oder bicyclischen Ring, der bis zu 5 Heteroatome, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel, enthält. Beispiele für "Heterocyclyl" umfassen Pyrrolinyl, Pyrrolidinyl, Morpholinyl, Piperidinyl, Piperazinyl, Dihydropyridinyl und Dihydropyrimidinyl.
  • Der Ausdruck "carbocyclischer Ring" betrifft einen vollständig gesättigen oder teilweise gesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Kohlenstoffring. Beispiele für carbocyclische Ringe sind Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cyclopentyl, Bicyclo-Octan oder Adamantyl.
  • Der Ausdruck "halo" betrifft Fluor, Chlor, Brom oder Jod.
  • Der Ausdruck Carbamoyl betrifft -C(O)NH2.
  • Der Ausdruck "Warmblüter" umfasst Menschen.
  • Beispiele für C1-4-Alkyl umfassen Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, sec-Butyl und tert-Butyl; Beispiele für C1-4-Alkoxy umfassen Methoxy, Ethoxy und Propoxy; Beispiele für C1-4-Alkanoyl umfassen Formyl, Acetyl und Propionyl; Beispiele für C1-4-Alkylamino umfassen Methylamino, Ethylamino, Propylamino, Isopropylamino, sec-Butylamino und tert-Butylamino; Beispiele für Di-(C1-4-Alkyl)amino umfassen Di-Methylamino, Di-Ethylamino und N-ethyl-N-methylamino; Beispiele für N-(C1-4-Alkyl)aminoC1-4-Alkyl umfassen N-methylaminomethyl und N-ethyl-aminoethyl und Beispiele für NN-di(C1-4-Aklyl)aminoC1-4-Alkyl umfassen: NN-dimethyl-aminomethyl und N-methyl-N-ethylaminomethyl.
  • Beispiele für geeignete Werte für R1, R2 oder R3 umfassen Wasserstoff, Halo, Nitro, Carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, NN-(Di-C1-4-Alkyl)carbamoyl oder C1-4-Alkoxycarbonyl. Vorzugsweise Wasserstoff, Halo, Nitro, Carbamoyl, N-ethylcarbamoyl, NN-dimethylcarbamoyl, N-methyl-N-ethylcarbamoyl, Methoxycarbonyl oder Ethoxycarbonyl. Mehr bevorzugt sind Wasserstoff, Halo oder Nitro. Mehr bevorzugt sind Wasserstoff, Chlor oder Nitro. Am meisten bevorzugt ist, dass entweder R1 Halo, vorzugsweise Chlor ist, R2 Halo, vorzugsweise Chlor ist und R3 Wasserstoff ist oder dass R1 Wasserstoff, R2 Nitro und R3 Wasserstoff ist.
  • Beispiele für geeignete Werte für R4 umfassen Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, einen C5-7-carbocyclischen Ring oder Aryl, von denen jedes gegebenenfalls durch Halo, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein kann. Vorzugsweise steht R4 für Indol, N-methylindol, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Phenyl oder Naphthyl, gegebenenfalls substituiert wie oben definiert. Mehr bevorzugt ist, das R4 für Indol, N-methylindol„ Cyclohexyl oder Phenyl steht, gegebenenfalls substituiert wie oben definiert. Mehr bevorzugt ist, dass R4 für Indol, N-methylindol, oder Phenyl steht, gegebenenfalls substituiert wie oben definiert. Mehr bevorzugt ist, dass R4 für Phenyl steht, gegebenenfalls substituiert wie oben definiert. Am meisten bevorzugt ist, dass R4 für Phenyl steht, substituiert mit Halo, vorzugsweise Chlor.
  • Beispiele für geeignete Werte für R5 umfassen Wasserstoff, C1-4-Alkyl, R6CH2- oder R6C(O)-. Vorzugsweise steht R5 für Wasserstoff, Methyl, R6CH2- oder R6C(O)-. Am meisten bevorzugt ist, dass R5 für R6C(O)- steht.
  • Beispiele für geeignete Werte für R6 umfassen Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-Alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-Alkyl, NN-(Di-C1-4-Alkyl)aminoC3-6-Alkyl oder R7. Vorzugsweise steht R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, NN-(Dimethyl)aminopropyl oder R7. Mehr bevorzugt ist, dass R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl oder R7 steht. Mehr bevorzugt ist, dass R6 für Aryl und Heteroaryl steht. Am meisten bevorzugt ist, dass R6 für Aryl, vorzugsweise Phenyl steht.
  • Beispiele für Substituenten auf den Arylringsystemen von R6 umfassen Nitro, C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy, Halo, (C1-4-Alkyl)sulfanyl. Vorzugsweise Nitro, C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy oder Methylsulfanyl. Mehr bevorzugt Nitro oder C1-4-Alkoxy. Am meisten bevorzugt Nitro oder Methoxy. Mehr bevorzugte Substitutionsmuster auf einer Phenylgruppe in R6 sind 2-nitro-4,5-dimethoxy, 2-methyl-3-nitro, 2-methoxy, 2,4-dimethyl, 4,5-dimethoxy-2-nitro oder 2-methylsulfanyl. Am meisten bevorzugt ist 2-nitro-4,5-dimethoxy.
  • Beispiele für geeignete Werte für Heteroarylringe bei R6 umfassen: Furan, Thiophen, Pyrrol, Pyrazol, Isoxazol, Thiazol, Thiadiazol, Pyridin, Pyridazin, Benzofuran, 4-oxo 4H-1-benzopyran. Heteroarylringsysteme mit einem oder zwei Heteroatomen sind bevorzugt. Heteroarylringsysteme mit einem Heteroatom sind am meisten bevorzugt.
  • Beispiele für geeignete Werte für Substituenten auf Ringkohlenstoffatomen in heterocyclischen Ringen von R6 umfassen C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy, Halo, Hydroxy, Oxo oder C1-4-Alkylcarbonyl.
  • Beispiele für geeignete Werte für R8 umfassen Amino, Guanadino und Imidazolo, von denen jedes mono oder di-N-substituiert mit C1-4-Alkyl sein kann. Mehr bevorzugt ist, dass R8 für Guanadino oder Amino steht, substituiert wie oben definiert. Vorzugsweise steht R8 für N-(C1-4-Alkyl)amino oder Amino. Am meisten bevorzugt steht R8 für Amino.
  • Beispiele für geeignete Werte für R9 umfassen C5-7-Alkyl, einen C5-10-gliedrigen carbocyclischen Ring und Aryl, von denen jedes gegebenenfalls mit C1-4-Alkyl substituiert sein kann. Vorzugsweise ist R9 3-propylbutyl, 2,2 dimethylpropyl, ein C5-10-gliedriger carbocyclischer Ring oder Aryl. Mehr bevorzugt ist, dass R9 für Cyclohexyl, Cycloheptyl, Adamantyl oder Aryl steht. Noch mehr vorzugsweise steht R9 für Cyclohexyl oder Aryl. Noch mehr vorzugsweise steht R9 für Aryl. Am meisten bevorzugt steht R9 für Phenyl.
  • Beispiele für geeignete Werte für R10 umfassen C1-4-Alkyl oder einen C3-7-carbocyclischen Ring. Mehr bevorzugt ist, dass R10 für einen C3-7-carbocyclischen Ring oder eine verzweigte C1-4-Alkylkette steht. Noch mehr bevorzugt ist, dass R10 für einen C3-7-carbocyclischen Ring steht. Am meisten bevorzugt steht R10 für Cyclohexyl.
  • Beispiele für geeignete Werte für R11 umfassen Wasserstoff, Halo, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy. Mehr bevorzugt ist, dass R11 für Wasserstoff oder C1-4-Alkyl steht. Am meisten bevorzugt steht R11 für Wasserstoff.
  • Beispiele für geeignete werte für R12 sind Wasserstoff oder Methyl oder wenn R12 für -CH2- steht, dann steht L2 für Wasserstoff und s steht für 1, R12 bildet zusammen mit L2 einen sechsgliedrigen, stickstoffhalti gen Ring. Vorzugsweise stehen sowohl R12 als auch L2 für Wasserstoff.
  • Beispiele für geeignete Werte für R13 sind Wasserstoff oder Methyl oder wenn R13 für -CH2- steht, dann steht L4 für Wasserstoff und s steht für 1, R13 bildet zusammen mit L4 einen sechsgliedrigen, stickstoffhaltigen Ring. Vorzugsweise stehen sowohl R13 als auch L4 für Wasserstoff.
  • Vorzugsweise steht n für 1.
  • Vorzugsweise steht p für 1.
  • Vorzugsweise steht q für 2-4. Am meisten bevorzugt steht q für 4.
  • Vorzugsweise steht r für 1.
  • Vorzugsweise steht s für 1.
  • Es versteht sich von selbst, dass, soweit bestimmte Verbindungen der Formel (1), wie oben definiert, in optisch aktiven oder racemischen Formen durch ein oder mehrere asymmetrische Kohlenstoffatome existieren können, die Erfindung in ihrer Definition jede derartige optisch aktive oder racemische Form umfasst, welche die Eigenschaft des Inhibierens der MDM2-Wechselwirkungen aufweist. Die Synthese von optisch aktiven Formen kann durch Standardtechniken der organischen Chemie durchgeführt werden, die auf dem Fachgebiet gut bekannt sind, zum Beispiel durch Synthese von optisch aktiven Startmaterialien oder durch Aufspaltung einer racemischen Form. Ähnlich dazu können inhibitorische Eigenschaften gegen MDM2-Wechselwirkungen unter Verwendung der Standard-Labortechniken ausgewertet werden, auf die nachfolgend Bezug genommen wird.
  • Wenn R6 anders ist als R7, dann ist die folgende Stereo-Chemie bevorzugt, in der Gruppe -N(L1)CH((CH2)nR4) CO-, in Formel (1):
    Figure 00110001
    Formel (X)
  • Eine bestimmte Gruppe von Verbindungen der Erfindung umfasst zum Beispiel eine Verbindung der Formel (1), wobei R5 für Wasserstoff oder C1-4-Alkyl oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon steht, wobei entweder:
    • (a) R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol oder Cyclohexyl steht; R5 für Wasserstoff oder Methyl steht; L1 für Wasserstoff steht und n für 1 oder 2 steht; und wobei das optische Zentrum, das in der Formel (X) dargestellt ist, in der S-Konfiguration ist; oder
    • (b) R1 für Halo steht; R2 für Halo steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol oder Cyclohexyl steht; R5 für Wasserstoff oder Methyl steht; L1 für Wasserstoff steht und n für 1 oder 2 steht; und wobei das optische Zentrum, das in der Formel (X) dargestellt ist, in der S-Konfiguration ist.
  • Eine weitere bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Erfindung umfasst zum Beispiel eine Verbindung der Formel (1), wobei R5 für R6C(O)- oder R6CH2- oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon steht, wobei entweder:
    • (a) R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, Halophenyl oder Cyclohexyl steht; R5 für R6C(O)- oder R6CH2- steht; R6 für substituiertes Phenyl steht; L1 für Wasserstoff oder Methyl steht und n für 1 oder 2 steht; und wobei das optische Zentrum, das in der Formel (X) dargestellt ist, in der S-Konfiguration ist; oder
    • (b) R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, Halophenyl oder Cyclohexyl steht; R5 für R6C(O)- oder R6CH2- steht; R6 für einen substituierten Heterocyclus steht; L1 für Wasserstoff oder Methyl steht und n für 1 oder 2 steht; und wobei das optische Zentrum, das in der Formel (X) dargestellt ist, in der S-Konfiguration ist.
  • Ein weitere bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Erfindung umfasst zum Beispiel eine Verbindung der Formel (1), wobei R5 für R6C(O)- steht und R6 für R7 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder solvat davon steht, wobei entweder:
    • (a) R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, Cyclohexyl oder Halophenyl steht; R5 für R6C(O)- steht; R6 für R7 steht; R7 von Formel (2) ist; R8 für Amino steht; R9 für eine gegebenenfalls substituierte Arylgruppe steht; R11 für Wasserstoff steht; A1 für Sauerstoff oder eine Bindung steht; n für 1 oder 2 steht; p für 1 steht; q für 2-4 steht und L1 und L2 und L3 unabhängig für Wasserstoff oder Methyl stehen; oder
    • (b) R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, Cyclohexyl oder Halophenyl steht; R5 für R6C(O)- steht; R6 für R7 steht; R von Formel (2) ist; R8 für Amino steht; R9 für eine gegebenenfalls substituierte heterocyclische Gruppe steht; R11 für Wasserstoff steht; A1 für Sauerstoff oder eine Bindung steht; n für 1 oder 2 steht; p für 1 steht; q für 2-4 steht und L1 und L2 und L3 unabhängig für Wasserstoff oder Methyl stehen.
  • Eine weitere bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Erfindung umfasst zum Beispiel eine Verbindung der Formel (1), wobei R5 für R6CH2- steht und R6 für R7 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon steht, wobei:
    • (a) R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, Cyclohexyl oder Halophenyl steht; R5 für R6CH2- steht; R6 für R7 steht; R7 von Formel (3) ist; R10 entweder für einen C3-7 carbocyclischen Ring oder eine C1-4-Alkylkette steht; R11 für Wasserstoff steht; L4 für Wasserstoff oder Methyl steht und r für 1 steht.
  • Eine mehr bevorzugte Verbindung der Erfindung ist eine Verbindung von Formel (1), wobei R5 für R6C(O)- steht und R6 für eine substituierte Phenylgruppe oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon steht, wobei:
    R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol; N-(C1-4-Alkyl)indol oder 4-Chlorophenyl steht; R5 für R6C(O)- steht; R6 für 4,5-dimethoxy-2-nitrophenyl steht; L1 für Wasserstoff oder Methyl steht; n für 1 steht und wobei das optische Zentrum, das in der Formel (X) dargestellt ist, in der S-Konfiguration ist.
  • Eine weitere mehr bevorzugte Verbindung der Erfindung ist eine Verbindung der Formel (1), wobei R5 für R6C(O)- steht und R6 für R7 steht und R7 von Formel (2) ist oder für pharmazeutisch annehmbare Salze oder Solvate davon steht, wobei:
    R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; R4 für Indol; N-(C1-4-Alkyl)indol; Phenyl; 4-Chlorophenyl oder Cyclohexyl steht; R5 für R6C(O)- steht; R6 für R7 steht; R7 von Formel (2) ist; R8 für Amino steht; A1 für Sauerstoff oder eine Bindung steht; R9 für Phenyl oder Cyclohexyl steht; R11 für Wasserstoff steht; L1, L2 und L3 unabhängig für Wasserstoff oder Methyl stehen; n für 1 steht; q für 2-4 steht und p für 0-1 steht.
  • Besondere Verbindungen der Erfindung sind:
    2-Methyl-3-nitrobenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2,4-Dimethyl-benzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    5-Brom-2-furoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-Methoxybenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Dimethoxynitrobenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-Methyl-3-furoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Thiophen-3-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-(Methylthio)-nicotinoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    3-Chlorothiophen-2-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2,5-Dimethoxybenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-Benzofuroyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    N-Methylpyrrol-2-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-Brom-5-methoxybenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Thiophen-2-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    5-Chlorothiophen-2-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-Methoxy-4-nitrobenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    2-Furylcarbonyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    6-Methylpicoliny-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    3-Methoxy-2-nitrobenzoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Dimethoxynitrobenzoyl-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    4-oxo-4H-1-benzopyran-2-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    5-Nitro-2-furoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    1,2,3-Thiadiazol-4-carboxyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Z-Lys-(NMe)Phe-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Cyclohexylacetyl-(D)Lys-(D)NMe-Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Adamantanacetyl-(D)Lys-(D)NMe-Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Cycloheptanoyl-(D)Lys-(D)NMe-Phe-(D)Trp-piperazin-4- nitrophenyl;
    2-Propylpentanoyl-(D)Lys-(D)NMe-Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Z-(D)NMe-Lys-(D)NMe-Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Me2CHCH2(D,L)NME-Phe{CH2NH}(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Z-LYS-(NMe)Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Cyclohexyl-(D)Lys-(D)(NMe)Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    T-Butylacetyl-(D)Lys-(D)NMePhe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Cyclohexyl-(D)Lys-(D)NMe-Phe-(D)Phe(4-Cl)-piperazindichlorophenyl; und
    Cyclohexyl-(D)Lys-(D)NMePhe-(D)Tyr(Et)-piperazin-4-nitrophenyl
    und deren pharmazeutisch annehmbare Salze oder Solvate.
  • Weitere besondere Verbindungen der Erfindung sind:
    4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-Phe(4-Cl)-piperazin-4-nitrophenyl;
    4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-NMe-Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-(D)(Nin-Me)Trp-piperazin-4-nitrophenyl;
    Z-(D)(NMe)Dab-(NMe)(D)Phe-(D)Trp-Piperazin-4-nitrophenyl;
    Z-NMe(D)Lys-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-Piperazin-4-nitrophenyl;
    Cyclohexyl-CO-(D)Lys(D)NMe-Phe-Cha-piperazin-4-nitrophenyl;
    Cyclohexyl-(D)Lys-(D)(NMe)Phe-(D)Phe(4Cl)-piperazin-4-nitrophenyl;
    Cyclohexyl-CH2-(D,L)NMe-Phe{CH2NH}(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl; und
    Cyclohexyl-(D)Lys-(D)(NMe)Phe-(D)hPhe-piperazin-4-nitrophenyl;
    und deren pharmazeutisch annehmbare Salze und Solvate.
  • Ein geeignetes pharmazeutisch annehmbares Salz einer Verbindung der Formel (1) ist zum Beispiel ein Salz mit Säurerest einer Verbindung der Formel (1), die ausreichend basisch ist, zum Beispiel ein Salz mit Säurerest mit einer anorganischen oder organischen Säure wie z.B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Trifluoressigsäure, Citronensäure oder Maleinsäure; oder zum Beispiel ein Salz einer Verbindung der Formel (1), die ausreichend sauer ist, zum Beispiel ein Alkali- oder ein Erdalkalimetallsalz, wie z.B. ein Calcium- oder Magnesiumsalz, oder ein Ammoniumsalz oder ein Salz mit einer organischen Base, wie z.B. Methylamin, Dimethylamin, Trimethylamin, Piperidin, Morpholin oder Tris-(2-hydroxyethyl)amin.
  • Verschiedene Formen von Medikamenten-Vorläufern sind auf dem Fachgebiet bekannt, zum Beispiel in-vivo hydrolysierbare Ester.
  • In vivo hydrolysierbare Derivate umfassen insbesondere pharmazeutisch annehmbare Derivate, die im menschlichen Körper oxidiert oder reduziert werden können, um die Stammverbindung herzustellen, oder Ester, die im menschlichen Körper hydrolysieren, um die Stammverbindung herzustellen. Solche Ester können identifiziert werden, indem zum Beispiel die Testverbindung intravenös dem Testtier verabreicht wird und nachfolgend die Körperflüssigkeiten des Testtieres untersucht werden. Geeignete in-vivo-hydrolysierbare Ester für Hydroxy umfassen Acetyl, und für Carboxyl umfassen sie zum Beispiel Alkylester, Dialkylaminoalkoxyester, Ester der Formel -C(O)-O-CH2C(O)NRa''Rb'', wobei Ra'' und Rb'' zum Beispiel ausgewählt sind aus Wasserstoff und Cl-4-Alkyl, und C1-6-Alkoxymethylester, zum Beispiel Methoxymethyl, C1-6-Alkanoyloxymethylester, zum Beispiel Pivaloyloxymethyl, Phthalidylester, C3-8-CycloalkoxycarbonyloxyC1-6-Alkylester, zum Beispiel 1-Cyclohexylcarbonyloxyethyl; 1,3-Dioxolan-2-ylmethylester, zum Beispiel 5-Methyl-1,3-dioxolan-2-ylmethyl; und Cl-6-Alkoxycarbonyloxyethylester, zum Beispiel 1-Methoxycarbonyloxyethyl.
  • Beispiele für Medikamenten-Vorläufer-Derivate, siehe:
    • a) Design of Prodrugs, herausgegeben von H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) und Methods in Enzymology, Vol. 42, S. 309-396, herausgegeben von K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);
    • b) A Textbook of Drug Design and Development, herausgegeben von Krogsgaard-Larsen und H. Bundgaard, Kapitel 5 "Design and Application of Prodrugs", von H. Bundgaard, S. 113-191 (1991);
    • c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);
    • d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988); und
    • e) N. Kakeya, et al., Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984).
  • Es versteht sich auch von selbst, dass bestimmte Verbindungen der vorliegenden Erfindung in gelöster, zum Beispiel hydrierter, sowie in ungelöster Form existieren können. Es versteht sich von selbst, dass die vorliegende Erfindung alle derartigen gelösten Formen einschließt, welche die Eigenschaft aufweisen, MDM2-Wechselwirkungen zu inhibieren.
  • In einem anderen Aspekt stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (1) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Esters davon bereit, wobei das Verfahren Entfernen der Schutzgruppen einer Verbindung der Formel (7) umfasst:
    Figure 00180001
    Formel (7) wobei n, L1 und R4 wie oben definiert sind und R1 für R1 oder geschütztes R1 steht, R2 für R2 oder geschütztes R2 steht, R3 für R3 oder geschütztes R3 steht und R5 für R5 oder geschütztes R5 steht; wobei mindestens eine Schutzgruppe vorliegt; und danach wenn nötig:
    • i) Bilden eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes und/oder
    • ii) Bilden eines Solvates.
  • Schutzgruppen können im Allgemeinen aus jeder der Gruppen, die in der Literatur beschrieben sind oder dem erfahrenen Chemiker als angemessen für den Schutz der betreffenden Gruppe bekannt sind, ausgewählt werden und können durch herkömmliche Verfahren angebracht werden.
  • Schutzgruppen können durch jedes passende Verfahren entfernt werden, wie in der Literatur beschrieben oder dem erfahrenen Chemiker als angemessen für das Entfernen der betreffenden Schutzgruppe bekannt, wobei derartige Verfahren so ausgewählt werden, dass sie die Entfernung der Schutzgruppe mit minimaler Störung von Gruppen anderswo im Molekül bewirken.
  • Spezielle Beispiele für Schutzgruppen sind nachfolgend aus praktischen Gründen angeführt, wobei "niedrig" andeutet, dass die Gruppe, an der sie angebracht wird, vorzugsweise 1-4 Kohlenstoffatome aufweist. Es versteht sich von selbst, dass diese Beispiele nicht erschöpfend sind. Die Verwendung von Schutzgruppen und Verfahren zur Entfernung derselben, welche nichtspeziell erwähnt werden, fallen selbstverständlich in den Umfang der Erfindung.
  • Eine Carboxy-Schutzgruppe kann der Rest eines Ester-bildenden aliphatischen oder araliphatischen Alkohols oder eines Ester-bildenden Silanols sein (wobei der Alkohol oder das Silanol vorzugsweise 1-20 Kohlenstoffatome enthalten).
  • Beispiele für Carboxy-Schutzgruppen umfassen geradkettige oder verzweigtkettige C1-12-Alkylgruppen (zum Beispiel Isopropyl, t-Butyl); niedrige Alkoxy-niedrige Alkyl-Gruppen (zum Beispiel Methoxymethyl, Ethoxymethyl, Isobutoxymethyl); niedrige aliphatische Acyloxyalkylgruppen (zum Beispiel Acetoxymethyl, Propionyloxymethyl, Butyryloxymethyl, Pivaloyloxymethyl); niedrige Alkoxycarbonyloxy-niedrige Alkyl-Gruppe (zum Beispiel 1-Methoxycarbonylethyl, 1-Ethoxycarbonylethyl); Phenyl niedrige Alkylgruppen (zum Beispiel Benzyl, p-Methoxybenzyl, o-Nitrobenzyl, p-Nitrobenzyl, Benzhydryl und Phthalidyl); Tri(niedrige Alkyl)silyl-Gruppen (zum Beispiel Trimethylsilyl und t-Butyldimethylsilyl); tri(niedrige Alkyl)silyl niedrige Alkyl-Gruppen (zum Beispiel Trimethylsilylethyl); und -C2-6-Alkenylgruppen (zum Beispiel Allyl und Vinylethyl).
  • Verfahren, die besonders geeignet sind für die Entfernung der Carboxy-Schutzgruppen, umfassen zum Beispiel Säure-, Basen-, Metall- oder enzymatisch katalysierte Hydrolyse.
  • Beispiele für Hydroxy-Schutzgruppen umfassen niedrige Gruppen (zum Beispiel t-Butyl), niedrige Alkenylgruppen (zum Beispiel Allyl); niedrige Alkanoylgruppen (zum Beispiel Acetyl); niedrige Alkoxycarbonylgruppen (zum Beispiel t-Butoxycarbonyl); niedrige Alkenyloxycarbonylgruppen (zum Beispiel Allyloxycarbonyl); Phenyl niedere Alkoxycarbonylgruppen (zum Beispiel Benzoyloxycarbonyl, p-Methoxybenzyloxycarbonyl, o-Nitrobenzyloxycarbonyl, p-Nitrobenzyloxycarbonyl); tri niedrige Alkylsilylgruppen (zum Beispiel Trimethylsilyl, t-Butyldimethylsilyl) und Phenyl niedrige Alkylgruppen (zum Beispiel Benzyl).
  • Beispiele für Amino-Schutzgruppen umfassen Formyl, Aralkylgruppen (zum Beispiel Benzyl und substituiertes Benzyl, p-Methoxybenzyl, Nitrobenzyl und 2,4-Dimethoxybenzyl und Triphenylmethyl); di-p-Anisylmethyl- und Furylmethylgruppen; niedrige Alkoxycarbonylgruppen (zum Beispiel t-Butoxycarbonyl); niedrige Alkenyloxycarbonylgruppen (zum Beispiel Allyloxycarbonyl); Phenyl niedrige Alkoxycarbonylgruppen (zum Beispiel Benzyloxycarbonyl, p-Methoxybenzyloxycarbanyl, o-Nitrobenzyloxycarbonyl, p-Nitrobenzyloxycarbonyl; Trialkylsilyl (zum Beispiel Trimethylsilyl und t-Butyldimethylsilyl); Alkyliden (zum Beispiel Methyliden); Benzyliden und substituierte Benzylidengruppen.
  • Verfahren, die für die Entfernung von Hydroxy- und Amino-Schutzgruppen geeignet sind, umfassen zum Beispiel Säure-, Basen-, Metall- oder enzymatisch katalysierte Hydrolyse, für Gruppen wie z.B. p-Nitrobenzyloxycarbonyl, Hydrierung und für Gruppen wie z.B. o-Nitrobenzyloxycarbonyl, photolytisch.
  • Der Leser wird hingewiesen auf Advanced Organic Chemistry, 4. Ausgabe, von Jerry March, veröffentlicht von John Wiley & Sons 1992, für eine allgemeine Anleitung zu Reaktionsbedingungen und Reagenzien. Der Leser wird hingewiesen auf Protective Groups in Organic Synthesis, 2. Ausgabe, von Green et al., veröffentlicht von John Wiley & Sons für eine allgemeine Anleitung über Schutzgruppen.
  • Verbindungen der Formel (1) und (7) können gebildet werden, indem:
    • i) eine Carbonsäure der Formel (8) oder ein reaktives Derivat davon mit einem Piperazin der Formel (9) umsetzt,
      Figure 00210001
      wobei L1, n, R4, R1'-R3' und R5' wie oben definiert sind.
  • Ein geeignetes Reaktionsderivat einer Säure der Formel III ist zum Beispiel ein Acylhalid, zum Beispiel ein Acylchlorid, das durch die Reaktion der Säure mit einem anorganischen Säurechlorid, zum Beispiel Thionylchlorid, gebildet wird; ein gemischtes Anhydrid, zum Beispiel ein Anhydrid, das durch die Reaktion der Säure mit einem Chlorkohlensäureester, wie z.B. Isobutyl-Chlorkohlensäureester, gebildet wird; ein Aktivester, zum Beispiel ein Ester, der durch die Reaktion der Säure mit einem Phenol, wie z.B. Pentafluorophenol, einem Ester, wie z.B. Pentafluorophenyl-Trifluoracetat, oder mit einem Alkohol, wie z.B. N-Hydroxybenzotriazol, gebildet wird; ein Acylazid, zum Beispiel ein Azid, das durch die Reaktion der Säure mit einem Azid, wie z.B. Diphenylphosphorylazid, gebildet wird; ein Acylcyanid, zum Beispiel ein Cyanid, das durch die Reaktion einer Säure mit einem Cyanid, wie z.B. Diethylphosphorylcyanid, gebildet wird; oder das Produkt der Reaktion der Säure mit einem Carbodiimid, wie z.B. Dicyclohexylcarbodiimid.
  • Die Reaktion zwischen Verbindungen der Formel (8) und (9) wird unter Bedingungen durchgeführt, die für Peptidbindungsbildung bekannt sind. Typischerweise wird die Reaktion in einem organischen Lösemittel, wie z.B. DMF oder DMA durchgeführt. Eine kleine Menge THF und DMSO kann ebenfalls hinzugefügt werden. Die Reaktion wird üblicherweise in Gegenwart eines Aktivierungsmittels, wie z.B. O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorphosphat (HATU), und einer Base, insbesondere einer Aminbase, zum Beispiel Diisopropylethylamin, durchgeführt. Außerdem kann 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol (HOAT) als Katalysator hinzugefügt werden. Die Reaktion wird normalerweise in einem Temperaturbereich von 0 bis 80 °C, vorzugsweise ungefähr bei Raumtemperatur durchgeführt. 2-(1H-Benzotriazol-lyl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphat (HBTU) kann an Stelle von HATU verwendet werden, wobei in diesem Fall 1-Hydroxy-benzotriazol (HOBt) allgemein als Katalysator verwendet wird.
  • Die Verbindung der Formel (8) wird bequem durch organische Festphasen-Synthese an einem Polymerharz hergestellt. Das Harz ist vorzugsweise eines, das mit milder Säure entfernt werden kann, wie z.B. Chlorotritylchloridharz. Beispiele für andere geeignete Polystyrolharze siehe Nova Biochem Combinatorial Chemistry Catalogue Februar 1997.
  • Die Synthese einer Verbindung der Formel (8) wird normalerweise mit einer Aminosäure gestartet, die eine -(CH2)nR4-Seitenkette aufweist. Die funktionalen Aminosäuregruppen, die nicht an der Reaktion teilnehmen, sind durch verschiedene funktionale Gruppen geschützt. Zum Beispiel können die N-terminalen und Seitenkettenaminogruppen geschützt werden durch Verwendung von 9-Fluoroenylmethoxycarbonyl (Fmoc), t-Butoxycarbonyl (Boc), Biphenylisopropoxycarbonyl (Bpoc), 2-[3,5-Dimethoxyphenyl]propyl-2-oxycarbonyl (Ddz), Adamantyloxycarbonyl (Adoc), Allyloxycarbonyl (Aloc), 2,2,2-Trichloroethoxycarbonyl (Troc), Benzyloxycarbonyl und verschiedene substituierte Benzyloxycarbonylgruppen. Diese geschützten Gruppen können wenn erforderlich durch die Standardtechniken gespalten werden (z.B. Säure- oder Basenbehandlung, katalytische Hydrogenolyse und Pd(0)-Behandlung oder Zink/Essigsäure-Behandlung). Die Wahl der Schutzgruppe hängt in großem Ausmaß von der Art des verwendeten Harzes ab. Wenn das Harz Chlortritylchlorid ist, ist die bevorzugte Aminoschutzgruppe Fmoc.
  • Die geschützte Aminosäure wird dann mit dem Harz derart gemischt, dass sie mit dem Harz durch seine Carboxygruppe reagiert. wenn das Harz Chlortritylharz ist, wird die Reaktion zwischen Aminosäure und Harz bequemerweise in einem organischen Lösemittel, wie z.B. DMF, in Gegenwart einer Base, wie z.B. DIPEA, durchgeführt. Die Aminoschutzgruppe wird dann entfernt, damit das R5' eingeführt werden kann, wenn es etwas anderes als Wasserstoff ist. Die Schutzgruppen-Spaltungsreaktionen können bei Temperaturen im Bereich von 4 °C bis 40 °C (vorzugsweise bei oder ungefähr bei Raumtemperatur) und über einen Zeitraum im Bereich von 10 Minuten bis 24 Stunden durchgeführt werden.
  • Die Einführung der R5'-Gruppe, wenn R5' die Formel R6C(O)- aufweist, wird unter Anwendung von Standardverfahren durchgeführt, die für die Bildung einer Amidbindung bekannt sind. Zum Beispiel in Gegenwart von HBTU, wie oben beschrieben.
  • Wenn R6 die Formel R7 aufweist, kann die Gruppe R6CO- allmählich aufgebaut werden mit anschließenden Amidbindungs-Bildungsreaktionen. Zum Beispiel kann die Gruppe NH(L2)-CH(CH2Ph)-CO- an der Aminosäure, die an dem Harz hängt, angebracht werden, indem eine Verbindung der Formel. PN(L2)-CH(CH2Ph)COOH (wobei P eine Aminoschutzgruppe ist) mit der letzteren Verbindung un ter Amidbindungs-Bildungsbedingungen umgesetzt wird. Die Aminoschutzgruppe kann entfernt werden und die entstehende Verbindung kann mit einer Verbindung der Formel PN(L3)CH((CH2)nR8)COOH unter ähnlichen Bedingungen umgesetzt werden. Wieder kann die Aminoschutzgruppe entfernt werden und die entstehende Verbindung kann mit einer Verbindung der Formel R9(CH2)PA1-COOH umgesetzt werden. Als Alternative könnte die Gruppe R7COOH selbst durch nachfolgende Amidbindungs-Bildungsreaktionen gebildet werden und dann in einem Schritt an der Aminosäure angebracht werden, die an dem Harz hängt.
  • Das Harz wird dann entfernt, was im Fall von Chlorotritylharz die Behandlung mit Essigsäure und Trifluoroethanol umfasst, um eine Verbindung der Formel (8) zu ergeben.
  • Für weitere Informationen über die Bildung von Amidbindungen siehe die Verfahren, die in "Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach" von Atherton und Sheppard (veröffentlicht von IRL Press at Oxford University Press, 1989) offenbart sind. "Solid Phase Peptide Synthesis" von Stewart und Young (veröffentlicht von Pierce Chemical Company, Illinois, 1984), "Principles of Peptide Synthesis" (veröffentlicht von Springer-Verlag, Berlin, 1984) und eine Reihe von Büchern "Amino Acids, Peptides and Proteins" (Volume 1-25; Volume 25 veröffentlicht 1994) (veröffentlicht von Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK).
  • Ähnliche Reaktionsbedingungen können verwendet werden, um eine Verbindung der Formel (8) ohne Verwendung einer Harzunterstützung zu synthetisieren.
  • Wenn R5' die Formel R6CH2- aufweist, kann eine Verbindung der Formel (8) hergestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel R6C(O)H und das passende Amin unter Bedingungen umsetzt, die für die Bildung einer Schiffschen Base bekannt sind, gefolgt von der Reduk tion der Schiffschen Base auf die Methylaminogruppe. Die Reaktion wird typischerweise in einem organischen Lösemittel, wie z.B. DMF, oder einem Alkohol, wie z.B. Methanol oder Ethanol, durchgeführt. Geeignete Reduktionsmittel umfassen Natriumtrisacetoxyborhydrid, Natriumcyanoborhydrid und Natriumborhydrid.
  • Eine Verbindung der Formel (9) wird praktisch hergestellt, indem Piperazin, bei dem ein Stickstoff geschützt ist, umgesetzt wird mit einer Gruppe der Formel:
    Figure 00250001
    wobei L4 eine Austrittsgruppe ist und R1'-R3' wie oben definiert sind. Vorzugsweise ist die Austrittsgruppe Chloro. Die Reaktion wird im Allgemeinen in einem inerten organischen Lösemittel, wie z.B. Toluen oder Methylformamid, in Gegenwart einer organischen Base, wie z.B. Triethylamin oder DBU, in einem Temperaturbereich von 80-200 °C, vorzugsweise beim Rückfluss durchgeführt.
  • Wahlweise Substituenten in einer Verbindung der Formel (1) oder (7) oder Zwischenverbindungen in ihrer Herstellung können in andere wahlweise Substituenten umgewandelt werden. Zum Beispiel könnte eine Hydroxygruppe zu einer Methoxygruppe alkyliert werden.
  • Verschiedene Substituenten können in Verbindungen der Formel (1) oder (7) und Zwischenverbindungen in dieser Herstellung eingeführt werden, wenn es angemessen ist, unter Verwendung von Standardverfahren, die auf dem Fachgebiet bekannt sind. Zum Beispiel kann eine Acylgruppe oder Alkylgruppe in einen aktivierten Ben zenring eingeführt werden unter Verwendung von Friedel-Crafts-Reaktionen, eine Nitrogruppe durch Nitration mit konzentrierter Salpetersäure und konzentrierter Schwefelsäure und Bromierung mit Brom oder Tetra(n-butyl)ammoniumtribromid.
  • Es versteht sich von selbst, dass es in bestimmten Schritten im Reaktionsablauf bei Verbindungen der Formel (1) nötig ist, bestimmte funktionelle Gruppen in Zwischenverbindungen zu schützen, um Seitenreaktionen zu verhindern. Die Entfernung der Schutzgruppe kann in einem passenden Stadium in der Reaktionsabfolge durchgeführt werden, wenn der Schutz nicht mehr erforderlich ist.
  • Um eine Verbindung der Formel (1) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder einen in vivo-spaltbaren Ester davon für die therapeutische Behandlung (einschließlich prophylaktische Behandlung) von Säugern, einschließlich Menschen, zu verwenden, wird sie normalerweise gemäß der pharmazeutischen Standardpraxis als pharmazeutische Zusammensetzung formuliert.
  • Gemäß diesem Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, welche ein Amidderivat der Formel (1) oder einen pharmazeutisch annehmbaren oder in vivo-spaltbaren Ester davon umfasst, wie hier zuvor in Zusammenhang mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger definiert.
  • Die Zusammensetzungen der Erfindung können in einer Form sein, die geeignet ist für orale Anwendung (zum Beispiel als Tabletten, Pastillen, harte oder weiche Kapseln, wässrige oder ölige Suspensionen, Emulsionen, dispergierbare Pulver oder Granulate, Sirupe oder Elixiere), für topische Anwendung (zum Beispiel als Cremen, Salben, Gels oder wässrige oder ölige Lösungen oder Suspensionen), für eine Verabrei chung durch Inhalation (zum Beispiel als fein verteiltes Pulver oder flüssiges Aerosol), für eine Verabreichung durch Insufflation (zum Beispiel als fein verteiltes Pulver) oder für parenterale Verabreichung (zum Beispiel als sterile wässrige oder ölige Lösung für intravenöse, subcutane, intramuskuläre oder intramuskuläre Dosierung oder als Zäpfchen für rektale Dosierung).
  • Die Zusammensetzungen der Erfindung können durch herkömmliche Verfahren erzielt werden unter Verwendung von herkömmlichen pharmazeutischen Bindemitteln, die auf dem Fachgebiet gut bekannt sind. Daher können Zusammensetzungen, die für orale Anwendung gedacht sind, zum Beispiel einen oder mehrere Farbstoffe, Süßstoffe, Geschmacksstoffe und/oder Konservierungsmittel enthalten.
  • Geeignete pharmazeutisch annehmbare Bindemittel für eine Tablettenformulierung umfassen zum Beispiel inerte Verdünnungsmittel, wie z.B. Laktose, Natriumcarbonat, Calciumphosphat oder Calciumcarbonat, Granulierungs- und Auflösungsmittel, wie z.B. Maisstärke oder Algensäure; Bindemittel, wie z.B. Stärke; Gleitmittel, wie z.B. Magnesiumstearat, Stearinsäure oder Talk; Konservierungsmittel, wie z.B. Ethyl oder Propyl p-Hydroxybenzoat und Antioxidanzien, wie z.B. Ascorbinsäure. Tablettenformulierungen können unbeschichtet oder beschichtet sein, entweder um ihre Auflösung und die anschließende Absorption des aktiven Inhaltsstoffes im Magen-Darm-Trakt zu modifizieren oder um ihre Stabilität und/oder Erscheinung zu verbessern, wobei in jedem Fall herkömmliche Beschichtungsmittel und Verfahren verwendet werden, die auf dem Fachgebiet gut bekannt sind.
  • Zusammensetzungen für orale Anwendung können in Form von harten Gelatinekapseln sein, in denen der aktive Inhaltsstoff mit einem inerten festen Verdün nungsmittel, zum Beispiel Calciumcarbonat, Calciumphosphat oder Kaolin, gemischt ist, oder als weiche Gelatinekapseln, in denen der aktive Inhaltsstoff mit Wasser oder einem Öl gemischt ist, wie z.B. Erdnussöl, flüssigem Paraffin oder Olivenöl.
  • Wässrige Suspensionen enthalten im Allgemeinen den aktiven Inhaltsstoff in fein gepulverter Form zusammen mit einem oder mehreren Suspensionsmitteln, wie z.B. Natriumcarboxymethylcellulose, Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Natriumalginat, Polyvinyl-Pyrrolidon, Tragantgummi, Akaziengummi; Dispersions- oder Benetzungsmitteln, wie z.B. Lecithin oder Kondensationsprodukte eines Alkylenoxids mit Fettsäuren (zum Beispiel Polyoxyethylenstearat) oder Kondensationsprodukte von Ethylenoxid mit langkettigen aliphatischen Alkoholen, zum Beispiel Heptadecaethylenoxycetanol, oder Kondensationsprodukte von Ethylenoxid mit partiellen Estern, abgeleitet von Fettsäuren und einem Hexitol, wie z.B. Polyoxyethylensorbitolmonooleat, oder Kondensationsprodukte von Ethylenoxid mit partiellen Estern, abgeleitet von Fettsäuren und Hexitolanhydriden, zum Beispiel Polyethylensorbitanmonooleat. Die wässrigen Suspensionen können auch einen oder mehrere Konservierungsstoffe (wie z.B. Ethyl- oder Propyl- p-Hydroxybenzoat), Antioxidanzien (wie z.B. Ascorbinsäure), Farbstoffe, Geschmacksstoffe und/oder Süßstoffe (wie z.B. Saccharose, Saccharin oder Aspartam) enthalten.
  • Ölige Suspensionen können durch Suspendieren des aktiven Inhaltsstoffes in einem Pflanzenöl (wie z.B. Arachisöl, Olivenöl, Sesamöl oder Kokosnussöl) oder in einem Mineralöl (wie z.B. flüssigem Paraffin) formuliert werden. Die öligen Suspensionen können auch ein Verdickungsmittel enthalten, wie z.B. Bienenwachs, Hartparaffin oder Cetylalkohol. Süßstoffe, wie jene, die oben erwähnt wurden, und Geschmacksstoffe können hinzugefügt werden, um ein angenehm einzunehmendes orales Präparat bereitzustellen. Diese Zusammensetzungen können durch die Zugabe eines Antioxidans, wie z.B. Ascorbinsäure, konserviert werden.
  • Dispergierbare Pulver und Granulate, die zur Herstellung einer wässrigen Suspension durch die Zugabe von Wasser geeignet sind, enthalten im Allgemeinen den aktiven Inhaltsstoff zusammen mit einem Dispersions- oder Benetzungsmittel, einem Suspensionsmittel und einem oder mehreren Konservierungsstoffen. Geeignete Dispersions- oder Benetzungsmittel und Suspensionsmittel sind durch die bereits oben erwähnten veranschaulicht. Zusätzliche Bindemittel, wie z.B. Süßstoffe, Geschmacksstoffe und Farbstoffe, können ebenfalls vorhanden sein.
  • Die pharmazeutischen Zusammensetzungen der Erfindung können auch in Form von Öl-in-Waser-Emulsionen vorliegen. Die ölige Phase kann ein Pflanzenöl, wie z.B. Olivenöl oder Arachisöl, oder ein Mineralöl, wie zum Beispiel flüssiges Paraffin, oder ein Gemisch aus jedem von diesen sein. Geeignete Emulgatoren können zum Beispiel natürlich vorkommende Gummi, wie z.B. Akaziengummi oder Tragantgummi, natürlich vorkommende Phosphatide, wie z.B. Sojabohne, Lecithin, und Ester oder partielle Ester, abgeleitet von Fettsäuren und Hexitolanhydriden (zum Beispiel Sorbitanmonooleat), und Kondensationsprodukte der partiellen Ester mit Ethylenoxid, wie z.B. Polyoxyethylensorbitanmonooleat sein. Die Emulsionen können auch Süßstoffe, Geschmacksstoffe und Konservierungsstoffe enthalten.
  • Sirupe und Elixiere können mit Süßstoffen, wie z.B. Glycerol, Propylenglycol, Sorbitol, Aspartam oder Saccharose formuliert sein und können auch einen Demulgator, ein Konservierungsmittel, einen Geschmacks- und/oder Farbstoff enthalten.
  • Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können auch in Form einer sterilen injizierbaren wässrigen oder öligen Suspension vorliegen, die gemäß bekannten Verfahren formuliert sein können unter Verwendung von einem oder mehreren der geeigneten Dispersions- oder Benetzungsmittel und Suspensionsmittel, die oben erwähnt worden sind. Ein steriles injizierbares Präparat kann auch eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nicht-toxischen, parenteral annehmbaren Verdünnungsmittel oder Lösungsmittel, zum Beispiel eine Lösung in 1,3-Butandiol, sein.
  • Zäpfchenformulierungen können hergestellt werden durch Mischen des aktiven Inhaltsstoffes mit einem geeigneten, nicht reizenden Bindemittel, das bei normalen Temperaturen fest ist, aber bei Rektaltemperatur flüssig ist und daher im Rektum schmilzt, um das Medikament freizugeben. Geeignete Bindemittel umfassen zum Beispiel Kakaobutter und Polyethylenglykole.
  • Topische Formulierungen, wie z.B. Cremen, Salben, Gels und wässrige oder ölige Lösungen oder Suspensionen können allgemein durch Formulieren eines aktiven Inhaltsstoffes mit einem herkömmlichen, oberflächlich annehmbaren Bindemittel oder Verdünnungsmittel erzielt werden unter Anwendung herkömmlicher Verfahren, die auf dem Fachgebiet gut bekannt sind.
  • Zusammensetzungen zur Verabreichung durch Insufflation können in Form eines fein zerteilten Pulvers vorliegen, das Partikel von durchschnittlichem Durchmesser von zum Beispiel 30 μm oder viel weniger enthält, wobei das Pulver selbst entweder den aktiven Inhaltsstoff alleine oder verdünnt mit einem oder mehreren physiologisch annehmbaren Trägern, wie z.B. Laktose, enthält. Das Pulver zur Insufflation wird dann bequemerweise in einer Kapsel aufbewahrt, die zum Beispiel 1 bis 50 mg des aktiven Inhaltsstoffes ent hält, zur Verwendung mit einem Turbo-Inhaliergerät, wie es für Insufflation des bekannten Mittels Natriumcromoglycat verwendet wird.
  • Zusammensetzungen zur Verabreichung durch Inhalation können in Form eines herkömmlichen Druckaerosols vorliegen, das so angeordnet ist, dass der aktive Inhaltsstoff als Aerosol, das entweder fein zerteilte Feststoffe oder flüssige Tröpfchen enthält, abgegeben wird. Herkömmliche Aerosoltreibmittel, wie z.B. flüchtige Fluorkohlenwasserstoffe oder Kohlenwasserstoffe können verwendet werden und das Aerosolgerät wird bequem angeordnet, um eine abgemessene Menge des aktiven Inhaltsstoffes abzugeben.
  • Für weitere Informationen über Formulierung wird der Leser hingewiesen auf Kapitel 25.2 in Volume 5 von Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
  • Die Menge des aktiven Inhaltsstoffes, die mit einem oder mehreren Bindemitteln kombiniert wird, um eine einzelne Dosierung herzustellen, variiert zwangsläufig in Abhängigkeit vom behandelten Wirtsorganismus und der jeweiligen Art der Verabreichung. Zum Beispiel enthält eine Formulierung, die für die orale Verabreichung an Menschen gedacht ist, im Allgemeinen zum Beispiel 0,5 mg bis 2 g des aktiven Mittels in Verbindung mit einer angemessenen und bequemen Menge an Bindemitteln, die von etwa 5 bis etwa 98 Gewichtsprozent der gesamten Zusammensetzung variieren kann. Dosierungen enthalten im Allgemeinen etwa 1 mg bis etwa 500 mg eines aktiven Inhaltsstoffes. Für weitere Informationen über Routes of Administration (Verabreichungsarten) und Dosage Regimes (Dosierungsschema) wird der Leser hingewiesen auf Kapitel 25.3 in Volume 5 von Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
  • Die Größe der Dosis für therapeutische oder prophylaktische Zwecke einer Verbindung der Formel (1) variiert natürlich entsprechend der Natur und Schwere des Zustandes, des Alters und Geschlechts des Tieres oder des Patienten und entsprechend der Verabreichungsart gemäß gut bekannten Grundsätzen der Medizin.
  • Wird eine Verbindung der Formel (1) für therapeutische oder prophylaktische Zwecke verwendet, wird sie im Allgemeinen derart verabreicht, dass eine tägliche Dosis im Bereich von zum Beispiel 0,5 mg bis 75 mg pro kg Körpergewicht erreicht wird, die falls erforderlich in geteilten Dosen gegeben wird. Im Allgemeinen werden niedrigere Dosierungen verabreicht, wenn eine parenterale Art angewendet wird. Daher wird zum Beispiel für intravenöse Verabreichung eine Dosis im Bereich von zum Beispiel 0,5 mg bis 30 mg pro kg Körpergewicht allgemein verwendet wird. Ähnlich dazu wird bei Verabreichung durch Inhalation eine Dosis im Bereich von zum Beispiel 0,5 mg bis 25 mg pro kg Körpergewicht verwendet. Orale Verabreichung ist allerdings bevorzugt, besonders in Tablettenform. Typischerweise enthalten Dosierungen etwa 1 mg bis 500 mg einer Verbindung dieser Erfindung.
  • Die Verbindungen dieser Erfindung können in Kombination mit anderen Medikamenten und Therapien verwendet werden, die bei der Behandlung bei Krankheitszuständen verwendet werden, welche von der Inhibierung der Wechselwirkung von p53 und MDM2 profitieren würden. Zum Beispiel könnten die Verbindungen der Formel (1) in Kombination mit Medikamenten und Therapien verwendet werden, die bei der Behandlung von Krebs, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Brustkrebs, Sarkome, Knochensarkom, Hodenkrebs oder Speiseröhrenkrebs, verwendet werden.
  • Wenn sie als fixe Dosis formuliert werden, werden bei solchen Kombinationsprodukten die Verbindun gen dieser Erfindung im hier beschriebenen Dosierungsbereich verwendet und das andere pharmazeutisch aktive Mittel in seinem bewährten Dosierungsbereich. Aufeinander folgende Verwendung wird erwogen, wenn eine Kombinationsformulierung unpassend ist.
  • Obwohl die Verbindungen der Formel (1) hauptsächlich als therapeutische Mittel zur Verwendung bei Warmblütern (einschließlich Mensch) wertvoll sind, sind sie auch nützlich, wenn immer es erforderlich ist, die Wechselwirkung von p53 und MDM2 zu inhibieren. Daher sind sie als pharmakologische Standards zur Verwendung bei der Entwicklung von neuen biologischen Tests und bei der Suche nach neuen pharmakologischen Mitteln nützlich.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist ein Verfahren zum Proben der Biochemie von MDM2-Wechselwirkungen unter Verwendung einer Verbindung der Formel (1) bereitgestellt.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (1) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvates davon als Medikament bereitgestellt.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (4) bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krebs in einem Warmblüter bereitgestellt.
    Figure 00330001
    Formel (4) wobei:
    L1 für Wasserstoff oder Methyl steht;
    R1 und R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Halogen, Nitro, Cyano, Carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl oder C1-4-Alcoxycarbonyl stehen;
    R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, einen C5-7-carbocyclischen Ring oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein können;
    R5 für Wasserstoff, C1-4-Alkyl, R6CH2- oder R6C(O)- steht; R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl oder R7 steht; wobei die Aryl-, Heteroaryl- bzw. Heterocyclylringe gegebenenfalls durch bis zu drei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Nitro, C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy, Halogen, (C1-4-Alkyl)sulfanyl, C1-4-Alkoxycarbonyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)amino oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino substituiert sein können;
    wobei R, entweder für eine Gruppe der Formel (5) oder der Formel (6) steht:
    Figure 00340001
    wobei
    L2, L3 und L4 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder Methyl stehen;
    R8 für Amino, Guanadino, Imidazolo steht, wobei diese Reste jeweils durch C1-4-Alkyl mono- oder di-N-substituiert sein können;
    A1 für Sauerstoff oder eine direkte Bindung steht;
    R9 für einen C5-8-gliedrigen monocarbocyclischen Ring, einen C6-10-gliedrigen bicarbocyclischen Ring, einen C8-12-gliedrigen tricarbocyclischen Ring, C5-7-Alkyl oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls durch C1-4-Alkyl mono-, di- oder trisubstituiert sein können;
    R10 für C1-6-Alkyl oder einen C3-8-mono-carbocyclischen Ring steht;
    R11 für Wasserstoff, Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy steht;
    R12 für Wasserstoff oder Methyl oder Ethyl steht oder R12 zusammen mit L2 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet;
    R13 für Wasserstoff, Methyl oder Ethyl steht oder R13 zusammen mit L4 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet;
    n für 0, 1 oder 2 steht;
    p für 0, 1 oder 2 steht;
    q für eine ganze Zahl von 1 bis 6 steht;
    r für 0, 1 oder 2 steht;
    s für 0, 1 oder 2 steht;
    mit der Maßgabe, dass, wenn R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl steht, R5 nicht für R6H2- steht; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz, eine Medikamenten-Vorstufe oder ein Solvat davon.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (4) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvates davon, wie hier definiert, bei der Herstellung eines Medika ments zur Verwendung bei der Behandlung von Krebs bereitgestellt.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (4) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvates davon, wie hier definiert, bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von Krebs bereitgestellt, der durch Wildtyp oder verändertes MDM2 hervorgerufen wird.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (4) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvates davon, wie hier definiert, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krebs, verursacht durch Wildtyp oder verändertes MDM2, in einem Warmblüter bereitgestellt.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, welche eine Verbindung der Formel (4) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon, wie hier definiert, in einer Mischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger umfasst, zur Behandlung von Krebs in einem Warmblüter mit der Maßgabe, dass die folgende Verbindung ausgenommen ist: (S)-4-Chloro-N-[1-(1H-indol-3-ylmethyl)-2-oxo-2-(4-phenyl-1-piperazinyl)ethyl]-N-methylbenzamid.
  • In einem weiteren Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, welche eine Verbindung der Formel (4) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon in einer Mischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger enthält, zur Behandlung von Krebs, welcher durch Wildtyp oder verändertes MDM2 verursacht wird, in einem Warmblüter, mit der Maßgabe, dass die folgende Verbindung ausgenommen ist: (S)-4-Chlor-N-[1-(1H-indol- 3-ylmethyl)-2-oxo-2-(4-phenyl-1-piperazinyl)ethyl]-N-methylbenzamid.
  • Der folgende biologische Test stellt ein Verfahren zur Messung der Inhibierung der Wechselwirkung von p53 mit MDM2 bereit.
  • Biologische Tests
  • Messung der Inhibierung der p53/MDM2-Wechselwirkung
  • Die Inhibierung der p53/MDM2-Wechselwirkung durch Verbindungen wurde gemessen unter Verwendung eines modifizierten ELISA-Tests unter Verwendung eines Histidin-markierten MDM2 [MDM2 (1-118)6 his], eines p53 GST Fusionsproteins (GST-p53) und einer Nickelchelat – Alkaliphosphatase (NTA-AP).
  • Das menschliche MDM2 N-terminale Fragment umfassend Aminosäuren 1-118 und unmittelbar gefolgt von einer C-terminalen 6-Histidin-Endsequenz und dann von einem Stopcodon wurde durch PCR aus einer menschlichen Plazenta-cDNA-Bibliothek erzeugt. Das PCR-Produkt wurde anfangs in einen pCR2.1 Vektor (Invitrogen) nach dem Herstellerprotokoll kloniert. DNA-Sequenzierung bestätigte eine MDM-Fragmentsequenz identisch zu jener des veröffentlichten MDM2 (EMBL-Zugang Nr. Z12020). Das MDM2-6His-Fragment wurde dann in den Expressionsvektor pTB375 E coli subkloniert, um den Expressionsvektor pTB375-MDM2-6His (1-118) Klon Nr. 11 herzustellen. Der pTB375-Vektor ist ein modifizierter T7 (Studier) Expressionsvektor. Expressionszuwächse wurden im E.coli-Stamm BL21/DE3 (von Novagen Inc.) durchgeführt und die Expression des recombinanten Proteins wurde durch Zugabe von IPTG (Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranosid) eingeleitet. MDM2 (1-118)6 wurde von E.coli-Lysaten unter Verwendung von Ni-NTA-Kügelchen (Qiagen) gereinigt.
  • Der Hintergrundvektor für die Erzeugung von pTB375 war pZEN0042 (pICI0042), wie vollständig in UK-Patentanmeldung GB 2253852 beschrieben. Kurz gesprochen enthält pZEN0042 die tetA/tetR induzierbare Tetracyclin-Resistenzsequenz von Plasmid RP4 und die Cer-Stabilitätssequenz von Plasmid pKS492 in einem pAT153-abgeleiteten Hintergrund. pTB375 wurde durch Zugabe einer Expressionskassette erzeugt, die aus dem T7-Gen-10-Promoter, einer multiplen Klonierungsstelle und T7-Gen-10 Terminationssequenz bestand. Außerdem war eine Terminationssequenz, die ausgeführt war, um das transkriptionelle Durchlesen des Hintergrundvektors zu reduzieren, aufwärts von der Expressionskassette enthalten.
  • Ein DNA-Fragment, das aa1-50 von p53 kodierte, gefolgt von einem Stopcodon, wurde durch PCR unter Verwendung des Vektors pHp53B (ATCC Klon Nr. 57255) als Vorlage erzeugt. Das PCR-Produkt wurde anfangs in den pCR2.1-Vektor (Invitrogen) nach dem Herstellerprotokoll kloniert. DNA-Sequenzierung bestätigte eine p53-Sequenz indentisch zu jener des veröffentlichten p53 (EMBL-Zugang Nr. X04269).
  • Das p53-Fragment wurde dann in den pGEX-4T1 E coli-Expressionsvektor (Pharmacia) subkloniert, um den Expressionsvektor pGEX-4T1-p53 (1-50), Klon Nr. 7 herzustellen.
  • Die Sequenz des Expressionsvektors an der Verbindung der GST- und p53-Sequenz war folgende:
    GST seq....CTG GTT CCG CGT GGA TCC ATG....
    (ATG ist aa1 von p53, GGA TCC ist die konservierte BamHI Klonierungsstelle)
  • Expressionszuwächse wurden im E.coli-Stamm DH5alpha durchgeführt und das recombinante Protein wurde durch Zugabe von IPTG induziert. GST-p53 (1-50) wurde gereinigt unter Verwendung von Glutathion-Sepharose-Kügelchen (Pharmacia). Die Verfahren, die zur Expression des GST-Fusionsproteins verwendet werden, sind daher analoge Verfahren zu jenen, die von J. Han et al., Journal of Biological Chemistry, 1996, 271, 2886-2891, offenbart sind.
  • Bei dem Test wurden die folgenden Lösungen verwendet:
    Stock GST-p53 (6,1 mg/ml/∼200 uM) 2706-fach verdünnt mit H2O;
    Stock MDM2-6His (1,1 mg/ml, ∼70 uM) 933-fach verdünnt mit H2O;
    Stock NTA-AP wurde hergestellt durch Rekonstituieren von lyophilisiertem Ni-NTA-AP (Qiagen 34510 – 200 μg) in 500 μl destilliertem Wasser und als gefrorene Proben gelagert. Es wurde frisch 1:1000 verdünnt unter Verwendung von Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) zur Verwendung bei dem Test;
    PNPP-Puffer – 100 mM Tris HCl, pH 9,5, 100 mM NaCl, 5 mM MgCl2;
    2,5 mM Phosphatasesubstrat (Sigma 104 Phosphatasesubstrat) wurde in PNPP-Puffer ungefähr 20 Minuten vor der Verwendung aufgelöst; es wurde im Dunklen aufbewahrt;
    Doppelt destilliertes Wasser wurde während des gesamten Tests verwendet.
  • 100 μl von 75 nM GST-p53 wurden pro Loch zu einer 96-Loch-Platte (Nunc Maxisorp) gegeben und die Platte wurde bei 4 °C über Nacht gelassen. Am nächsten Tag wurde die Flüssigkeit in den Löchern entfernt und weggeleert und 100 μl 0,2 %iges Rinderserumalbumin (BSR) in PBS wurde zu jedem Loch hinzugefügt und bei Raumtemperatur für 1 Stunde gelassen. Die Flüssigkeit wurde dann entfernt und weggeleert und jedes Loch wurde zweimal mit 0,1 % Tween in PBS gewaschen. Nach dem Entfernen und Wegleeren der zweiten Tween/PBS-Waschung, wurden 10 μl Verbindung zu jedem Loch hinzugefügt, gefolgt von 90 μl 75nM MDM2-6His. Die Platte wurde dann bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden inkubiert. Nach dieser Zeit wurde die Flüssigkeit von jedem Loch entfernt und weggeleert und jedes Loch wurde dreimal mit 280 μl Tween/PBS gewaschen. Nach dem Entfernen und Wegleeren der letzten Waschung wurden 100 μl NTA-AP zu jedem Loch hinzugefügt und die Platte wurde bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden inkubiert. Nach dieser Zeit wurde die Flüssigkeit von jedem Loch entfernt und weggeleert und jedes Loch wurde dreimal mit 280 μl Tween/PBS gewaschen. Als nächstes wurden 100 μl Phosphatasesubstrat in PNPP-Puffer hinzugefügt und die Platte wurde für 1-2 Stunden bei 30 °C gelassen. Die optische Dichte von jedem Loch wurde bei 405 nm gemessen.
  • Verbindungen wurden bei einer Endkonzentration zwischen 0 und 100 μM getestet. Stammlösungen der Verbindung wurden bei 30 μM in DMSO hergestellt, Verdünnungen wurden in H2O vorgenommen.
  • Obwohl die pharmakologischen Eigenschaften der Verbindungen der Formel (1) mit struktureller Veränderung wie erwartet variieren, weisen die Verbindungen der Formel (1) im Allgemeinen ein IC50 im obigen Test im Bereich von zum Beispiel 0,03 bis 200 μM auf. Somit weist zum Beispiel die Verbindung von Beispiel 9 hier ein IC50 von ungefähr 4 μM auf.
  • Die Erfindung wird nun durch die folgenden, nicht einschränkenden Beispiele veranschaulicht, in denen, wenn nicht anders angegeben:
    • (i) Konzentrationen und Verdampfungen durch Vakuum-Rotationsverdampfung durchgeführt wurden;
    • (ii) Operationen bei Raumtemperatur, das heißt im Bereich von 18-26 °C durchgeführt wurden;
    • (iii) Erträge, wenn angegeben, nur zur Unterstützung des Lesers gedacht sind und nicht unbedingt das Maximum darstellen, das durch sorgfältige Verfahrensentwicklung erreichbar ist;
    • (iv) die folgenden Abkürzungen verwendet werden: BOC = Tert-butoxycarbonyl; Cha = ein Aminosäurerest mit einer Cyclohexylmethylseitenkette; Dab = ein Aminosäurerest mit einer 2-Aminoethylseitenkette; DBU = 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en; DMF = N,N-Dimethylformamid; HOBt = 1-Hydroxybenzotriazol; Met = Methionin; Fmoc = 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl; THF = Tetrahydrofuran; DMSO = Dimethylsulfoxid; HATU = O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorphosphat; HBTU = 2-(1H-Benzotriazol-lyl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorphosphat; HOAT = 1-Hydroxy-7-azabenzotriazol; DIPEA = Diisopropylethylamin; TFA = Trifluoressigsäure; HPLC = Hochdruck-Flüssigkeitschromatografie; TCE = Trichloroethan; RP-HPLC = Hochdruck-Flüssigkeitschromatografie mit umgekehrten Phasen (welche wenn nicht anders angegeben auf einer Vydac C18 Säule 218TP54, 4,6 × 250 mm durchgeführt wurde); und Z = Benzyloxycarbonyl;
    • v) Flashchromatografie und Chromatografie auf Silica auf Merck Kieselgel 60 (Art.Nr. 9385), erhältlich von E Merck, Darmstadt, Deutschland, durchgeführt wurden; und
    • vi) 1H NMR Spektren bei 200 Mhz in CDCL3 oder d6-Dimethylsulphoxid (d6-DMSO) unter Verwendung von Tetramethylsilan (TMS) als innerer Standard bestimmt wurden und als chemische Shift-(Delta-) Werte in Millionstel (parts per million) hinsichtlich TMS ausgedrückt werden un ter Verwendung von herkömmlichen Abkürzungen zur Bezeichnung von größeren Peaks: s, Singulett; m, Multiplett; t, Triplett; br, breit; d, Dublett. Beispiel 1
      Figure 00420001
  • Z-NMe(D)Dab-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-piperazin-4-nitrophenyl
  • Z-NMe(D)Dab(BOC)-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-OH (das 0,25 mmol ausmachte) wurde in DMF (1 ml) aufgelöst. 4-Nitrophenyl-piperazin (1,2 eq, 15,5 mg), HATU (1 eq, 19 mg) und DIPEA (3,6 eq, 157 μl) wurden hinzugefügt und die Mischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. RP-HPLC zeigte an, dass die Reaktion zu 50 vollständig war. Es wurde verdampft bis zur Trockenheit und die BOC-Gruppe wurde durch Behandlung mit TFA/TIPS/Wasser 10:1:1 (6 ml, 5:0,5:0,5) entfernt.
  • Das entstehende Peptid wurde gereinigt durch präparative RP-HPLC (Vydac C18 218TP1022 Säule, eluierend mit einem Acetonitril-Wasser-System, das 0,1 % TFA enthielt (5 bis 60 % Acetonitril über 80 Minuten), Fließgeschwindigkeit 12 ml/min). Die Fraktionen, die das Produkt enthielten, wurden kombiniert und gefriergetrocknet, um Z-NMe(D)Dab-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-piperazin-4-nitrophenyl, 6,5 mg (3,25 % Ausbeute) zu ergeben.
  • Das Produkt wurde durch HPLC und Massenspektrometrie charakterisiert:
    RP-HPLC Vydac C18 218TP54 4,6 × 250 mm Säule, eluierend bei 1,2 ml/min in Wasser und Acetonitril, enthaltend 0,1 % TFA (30-70 % Acetonitril über 20 Minuten) Verzögerungszeit 15,27 Minuten, keine feststellbaren Verunreinigungen, Massenspektrometrie, m/e (positiver Elektrospray, (ES+)) 798,5, 799,1, 800,5 (MH+).
  • Das Startmaterial wurde durch Festphasensynthese hergestellt, beginnend mit Wang Resin in einem Bond Elut (Varian 25 ml, ausgestattet mit einem Filter im Boden):
    WangResin (Novabiochem, 1,28 g) wurde in Dichlormethan (15 ml) mit MSNT (s. Birgt Blankeymeyer-Menge, Tet Lett. 1990, 31, 1701) (2 mmol, 592 mg) und Fmoc-Phe(4-Cl)-OH (2 mmol, 845 mg) für 45 Minuten gerührt. Das Harz wurde mit Dichlormethan (3 × 10 ml) und dann Methanol (3 × 10 ml) gewaschen. Das Harz wurde in Vakuum bei 40 °C über Nacht getrocknet. Gewichtszunahme deutete auf eine Beladung von 0,59 mmol/g für Fmoc(D)Phe(4-Cl)-Wang Resin hin.
  • Die Fmoc-Gruppe wurde mit 20 % Piperidin in DMF (3 × 10 min, jedes Mal 10 ml) entfernt, um H-(D)Phe(4-Cl)-Wang Resin zu ergeben.
  • H-(D)Phe(4-Cl)-Wang Resin (423 mg – 0, 25 mmol) wurde in ein anderes Bond Elut (15 ml) gegeben. FmocNMe(D)Phe-OH (3 eq, 301 mg) wurde in DMF (1,5 ml) aufgelöst, HBTU (3 eq, 284 mg) und DIPEA (9 eq) wurden hinzugefügt. Nach 5 Minuten wurde diese Mischung zu dem Harz hinzugefügt und für 1-1,5 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Harz wurde dann mit DMF (3 × 10 ml) gewaschen.
  • Die Fmoc-Gruppe wurde mit 20 % Piperidin in DMF (3 × 10 min, jedes mal 10 ml) entfernt, um NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-Wang Resin zu ergeben.
  • Fmoc-Dab(BOC)-OH (3 eq, 340 mg) wurde an das N-Ende von NMe(D)Phe(D)-Phe(4-Cl)-Wang Resin gekoppelt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie beim Koppeln von Fmoc-Phe(4-Cl)-OH, mit der Ausnahme, dass HATU (3 eq, 285 mg) an Stelle von HBTU verwendet wurde, um Fmoc-Dab(BOC)NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-Wang Resin zu ergeben.
  • Die Fmoc-Gruppe wurde mit 20 % Piperidin in DMF (3 × 10 min, jedes Mal 10 ml) entfernt, um Dab(BOC)-NMe(D)Phe-(D)-Phe(4-Cl)-Wang Resin zu ergeben.
  • Das Harz wurde mit DMF (3 × 10 ml) gewaschen und in Dichlormethan (5 ml) suspendiert, zu dem 2-Nitrobenzensulfonylchlorid (3 eq, 166 mg) und 2,4,6-Collidin (5 eq, 165 μl) hinzugefügt wurden. Nach 2 Stunden wurde das Harz mit Dichlormethan (3 × 5 ml) gewaschen und in DMF (5 ml) suspendiert. Dazu wurde MTBD (s. Miller, J. Am. Chem. Soc., 1997, 119, 2301) (2-4 eq, 100 μl) und Methyl-4-nitrobenzensulfonat (3-5 eq, 200 mg) hinzugefügt. Nach 30 Minuten wurde das Harz mit DMF (3 × 5 ml) gewaschen und das Harz wurde in DMF (5 ml) suspendiert. DBU (5 eq, 187 μl) und Mercaptoethanol (10 eq, 175 μl) wurden hinzugefügt und nach 30 Minuten wurde das Harz mit DMF (5 × 10 ml) gewaschen.
  • Das Harz war nass mit DMF (1-2 ml) und Benzoylchloroformat (4 eq, 170 mg) und DIPEA (12 eq, 0,52 ml) wurden hinzugefügt. Nach 1,5 Stunden wurde das Harz mit DMF (3 × 10 ml) und dann mit Methanol (3 × 10 ml) gewaschen. Das Harz wurde noch einmal über Nacht in Vakuum getrocknet, um Z-NMe-(D)Dab-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-Wang Resin zu ergeben.
  • Z-NmeDab-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-OH wurde durch Zugabe von TFA:TIPS:Wasser (10:1:1, 12 ml) vom Harz gespalten. Das Harz wurde gefiltert und gründlich mit TFA (3 × 5 ml) gewaschen und die Lösung wurde bis zur Trockenheit verdampft und lyophilisiert von Wasser, um ein Öl zu ergeben.
  • Die BOC-Gruppe wurde erneut an dem Z-NmeDab-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-OH (ausgehend von 0,25 mmol) angebracht, indem es mit Di-t-butyl-dicarbonat (4 eq) in DMF (1-2 ml) und DIPEA (12 ml) behandelt wurde. RP-HPLC deutete darauf hin, dass die Reaktion nach 1 h abgeschlossen war (Vydac C18 218TP54 4,6 × 250 mm Acetonitril-Wasser-System, enthaltend 0,1 % TFA, 10-90 Acetonitril über 20 Minuten, Fluss 1,2 ml/min). Die Lösung wurde bis zur Trockenheit verdampft und mit 1M Zitronensäure (2 × 5 ml) und dann Hexan (2 × 5 ml) gewaschen. Es wurde in Vakuum über Nacht in Gegenwart von Phosphorpentoxid getrocknet, um Z-NMe(D)Dab(BOC)-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-OH als Öl zu ergeben. Beispiel 2
    Figure 00450001
  • Cyclohexylalanin-piperazin-4-nitrophenyl
  • Fmoc-Cyclohexylalanin (39 mg, 0,1 mmol) wurde in DMF (1 ml) aufgelöst und Piperazin-4-nitrobenzen (25 mg, 1,2 eq), HATU (1,2 eq, 47 mg) und DIPEA (3,6 eq, 63 μl) wurden hinzugefügt und die Mischung wurde bei Raumtemperatur gerührt.
  • Die Reaktion war durch RP-HPLC nach 2 Stunden abgeschlossen (Vydac C18 218TP54 4,6 × 250 mm Säule, Wasser-Acetonitril-System enthaltend 0,1 % TFA 10-90 Gradient über 20 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/min), und ergab Fmoc-Cyclohexylalanin-piperazin-4-nitrobenzen. Die Schutzgruppe wurde mit 20 % Piperidin in DMF (2 ml) für 20 Minuten entfernt. Es wurde dann mit Wasser (5 ml) verdünnt. Das Aminosäureamid wurde gereinigt durch präparative RP-HPLC Vydac 218TP1022-Säule, Fließgeschwindigkeit 12 ml/min in einem Wasser-Acetonitril-System, enthaltend 0,1 % TFA, unter Verwendung eines 10-50 % Acetonitrilgradienten über 1 Stunde.
  • Fraktionen, die das Produkt enthielten, wurden kombiniert und lyophilisiert, um Cyclohexylalaninpiperazin-4-nitrobenzen (36 mg, quantitative Ausbeute) zu ergeben.
  • Das Produkt wurde durch HPLC, Massenspektrometrie und 1H NMR charakterisiert:
    RP-HPLC Vydac C18 218TP54 Säule 4,6 × 250 mm eluierend mit Acetonitril und Wasser enthaltend 0,1 % TFA, unter Verwendung eines 10-50 % Acetonitrilgradienten über 20 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/min, Verzögerungszeit 17,61 Minuten mit keinen feststellbaren Verunreinigungen.
    Massenspektrometrie m/e (Electrospray (ES+)) 361,5 MH+ 1H-NMR (DMSO): 1,2 (m, 3H), 1,6 (m, 8H), 3,6 (m, 10H), 4,4 (m, 1H), 7,0 (d, 2H), 8,1 (m, 4H). Beispiel 3
    Figure 00470001
  • Cyclohexyl-CO-(D)Lys-NMe(D)Phe-Cha-piperazin-4-nitrophenyl
  • Cyclohexyl-CO-(D)Lys(BOC)-NMe(D)Phe-Cha-Harz (0,05 mmol) wurde in DMF (1 ml) aufgelöst und mit HATU (1 eq, 19 mg), DIPEA (3 eq, 26 μl) aktiviert und über Nacht an N-(4-nitrophenyl)piperazin (1,5 eq, 15,5 mg) gekoppelt. RP-HPLC zeigte an, dass die Reaktion vollständig war (VYDAC 201HS54 Säule, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/min Wasser-Acetonitril-Gradient enthaltend 0,1 % TFA unter Verwendung eines 10-90 % Acetonitrilgradienten über 20 Minuten).
  • Die Lösung wurde bis zur Trockenheit verdampft und mit einer Mischung aus TFA/TIPS/Wasser (12 ml, 10:1:1) für 30 Minuten behandelt. Nach einer weiteren Verdampfung bis zur Trockenheit wurde das Produkt in 50 Acetonitril/wasser aufgenommen und gereinigt durch präparative RP-HPLC (Dynamax 83-221 C 60Angstrom Säule 12 ml/min in einem Wasser-Acetonitril-System enthaltend 0,1 % TFA, unter Verwendung eines 30-70 Acetonitrilgradienten über 1 Stunde). Die Fraktionen, die das Produkt enthielten, wurden kombiniert und lyophilisiert, um Cyclohexyl-CO-(D)Lys-NMe(D)Phe-Cha-piperazin-4-nitrobenzen (30 mg, 79 % Ausbeute) zu ergeben.
  • Das Produkt wurde durch HPLC und Massenspektrometrie charakterisiert.
  • RP-HPLC Vydac C 18 Säule, 218TP54, 4,6 × 250 mm, eluierend mit Wasser-Acetonitril enthaltend 0,1 % TFA unter Verwendung eines 20-60 % Acetonitrilgradienten über 20 Minuten, Fluss 1,2 ml/min zeigt eine Reinheit von 99,3 %, Verzögerungszeit 15,11 Minuten. Massenspektrometrie m/e (Positiver Elektrospray (ES+)) 759,7, 761, 761,9 (MH+)
  • Das Startmaterial wurde auf einem ABI 430 Automated Peptide Synthesiser synthetisiert, ausgehend von 2-Chlorotritylchloridharz (Alexis, 188 mg, 0,25 mmol).
  • Fmoc Cha-OH (jedes Mal 1 mmol) wurde doppelt auf die Standardart an das Chlorotritylchloridharz gekoppelt unter Verwendung von Dichlormethan (jedes Mal 5 ml) mit Diisopropylamin (2 eq, jedes Mal 348 μl), um Fmoc-Cha-Harz zu ergeben.
  • Fmoc wurde entfernt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie jenes, das in Beispiel 1 verwendet wurde, aber unter Verwendung von jedes Mal 5 ml Piperidin in DMF.
  • Fmoc-NMe(D)Phe-OH (1 mmol, 401 mg) wurde an Cha-Harz gekoppelt unter Verwendung von HBTU (1 mmol, 379 mg) und HOBT (1 mmol, 135 mg) in DMF mit DIPEA (2 mmol, 378 μl) für 1 Stunde bei Raumtemperatur. Das Harz wurde gründlich mit Dichlormethan (5 × 5 ml) gewaschen, um Fmoc-(D)NMePh-Cha-Harz zu ergeben. Fmoc wurde entfernt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie jenes, das in Beispiel 1 beschrieben ist.
  • Fmoc-Lys(BOC)-OH (1 mmol, 468 mg) wurde an NMe(D)Ph-Cha-Harz gekoppelt unter Verwendung von HATU (1 mmol, 380 mg) in DMF mit DIPEA (2 mmol, 348 μl) bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Das Harz wurde gründlich mit DMF (5 × 5 ml) gewaschen. Fmoc wurde entfernt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie jenes, das in Beispiel 1 beschrieben ist.
  • Cyclohexancarbonsäure (1 mmol, 128 mg) wurde an das Peptidharz gekoppelt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie jenes, das für die Einbringung von Fmoc-NMe(D)Phe-OH verwendet wurde. Das Peptid wurde vom Harz gespalten unter Verwendung einer Mischung aus Essigsäure, Trichlorethan und Dichlormethan (14 ml 2:2:10) für 2 h. Das Harz wurde gefiltert und gründlich mit Essigsäure:Dichlormethan (1:4) gewaschen. Das Filtrat wurde bis zur Trockenheit verdampft und in Wasser aufgenommen und schließlich lyophilisiert, um Cyclohexyl-CO-(D)Lys-(BOC)NMe(D)Phe-Cha-Harz zu ergeben. Beispiel 4
    Figure 00490001
  • Cyclohexyl-(D)LysNMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-piperazin-3,4-dichlorphenyl
  • HATU (39 mg, 0,1 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung aus Cyclohexyl-(D)Lys(BOC)-NMe(D)Phe(4-Cl)-OH (70 mg, 0,1 mmol), Diisopropylethylamin (70 μl, 4 Äquivalente) und Dichlorphenylpiperazin (24 mg, 0,1 mmol) in DMF (4 ml) hinzugefügt. Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur zeigte RP-HPLC an, dass die meiste Säure aufgenommen worden war und ein neuer Peak, Verzögerungszeit 30,58 Minuten (Säule und Gradient wie am Ende dieses Beispiels beschrieben) gebildet worden war. Das Lösemittel wurde in Vakuum verdampft und der Rest wurde in einer Mischung aus TFA (9 ml), Wasser (1 ml) und Triethylsilan (0,3 ml) aufgelöst. Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur wurden überschüssige Reagenzien verdampft und das Rohprodukt wurde dann in Acetonitril (2 ml) und Wasser (2 ml) für analytische und präparative RP-HPLC aufgelöst. Das Rohprodukt wurde gereinigt unter Verwendung von präparativer RP-HPLC (Dynamax C18, 1 Inch innerer Durchmesser) unter Verwendung eines Gradienten von Acetonitril-Wasser enthaltend 0,1 % TFA (20-90 % Acetonitril) über 60 Minuten bei einer Fließgeschwindigkeit von 12 ml/Minute. Fraktionen, welche das Titelprodukt enthielten (eluierend bei 50 Minuten) wurden kombiniert und gefriergetrocknet. Ausbeute 69,6 mg.
  • Das Produkt wurde durch HPLC, Massenspektroskopie und Aminosäureanalyse charakterisiert.
  • RP-HPLC Vydac C18 Säule, 201HS54, 4,6 × 250 mm, eluierend mit Acetonitril und Wasser enthaltend 0,1 TFA unter Verwendung eines 20-60 % Acetonitrilgradienten über 30 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/Minute, Verzögerungszeit 22,15 Minuten, keine feststellbaren Verunreinigungen; Massenspektrometrie, m/e (positiver Elektrospray (ES+)) 811,4 (MH+); Aminosäureanalyse (Säurehydrolyse über 24 Stunden unter Verwendung einer Lösung aus 6N HCl enthaltend 1 % Phenol bei 130 °C) ergab Phe(4-Cl) 0,84, Lys 1,00.
  • Das Startmaterial wurde wie folgt hergestellt:
    Fmoc-(D)Phe(4-Cl)-OH (844 mg, 2 mmol) wurde an 2-Chlorotritylchoridharz (Alexis, 0,75 g, 1 mmol) gekoppelt in Gegenwart von Diisopropylethylamin (2 mmol, 0,35 ml) in DMF (8 ml) durch ein automatisches Verfahren auf einem Applied Biosystems 430A Peptidsynthesiser. Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur wurde das Harz gefiltert und mit DMF gewaschen. Nach Entfernen der Schutzgruppen mit 20 % Piperidin in DMF (zwei Behandlungen mit 15 ml), wurde das Harz gründlich mit DMF (5 × 10 ml) gewaschen. Fmoc-NMe(D)Phe-OH (803 mg, 2 mmol) wurde an die Harz-Bindung H-(D)Phe(4-Cl) gekoppelt durch die Standard-HBTU/HOBt-Chemie, ähnlich wie in Beispiel 3 verwendet. Nach ausgiebigem Waschen mit DMF wurde das oben beschriebene Verfahren zum Entfernen der Schutzgruppen wiederholt, um H-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-Harz zu ergeben. Fmoc-(D)Lys(BOC)-OH (983 mg, 2 mmol) wurde durch das HATU-Verfahren gekoppelt (siehe J Chem Soc. Chem Comm. 1994, 201). Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur wurde das Harz gefiltert und mit DMF gewaschen. Nach Entfernen der Schutzgruppen und ausgiebigem Waschen mit DMF wurde Cyclohexancarbonsäure (256 mg, 2 mmol) durch Standard-HBTU/HOBt-Chemie ähnlich wie oben beschrieben an das Harzbindungs-Tripeptid gekoppelt, um Cyclohexyl-(D)Lys(BOC)-NMe(D)Phe-(D)Phe(4-Cl) an dem Harz zu ergeben. Das Peptidharz wurde gesammelt und mit Methanol gewaschen und in Vakuum bei 50 °C getrocknet. Ausbeute 1,337 g (Zuwachs 587 mg).
  • Das Peptid wurde von dem Harz gespalten unter Verwendung einer Mischung aus Dichlormethan (20 ml), Trifluorethanol (4 ml) und Essigsäure (4 ml) bei Raumtemperatur. Nach 2 Stunden wurde die Mischung gefiltert und das Harz wurde mit einer Mischung aus Essigsäure in Dichlormethan (5 %) (5 × 20 ml) gewaschen. Das kombinierte Filtrat und die Waschungen wurden bis zur Trockenheit verdampft und der Rest wurde in einer Mischung aus Acetonitril (100 ml) und Wasser (50 ml) für analytische RP-HPLC und Lyophilisierung aufgelöst. Ausbeute 604 mg (86 %).
  • RP-HPLC Vydac C18 Säule, 201HS54, 4,6 × 250 mm, eluierend mit Acetonitril und Wasser enthaltend 0,1 % TFA, unter Verwendung eines 20-80 % Acetonitrilgradienten über 40 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/Minute, zeigte 100 % Reinheit, Verzögerungszeit 22,05 Minuten, keine feststellbaren Verunreinigungen. Beispiel 4
    Figure 00520001
  • Adamantylacetyl-(D)Lys-NMe(D)Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl
  • Adamantylacetyl-(D)Lys(BOC)-NMe(D)Phe-(D)Trp-OH (77 mg, 0,1 mmol) wurde an 4-(Nitrophenzyl)piperazin (21 mg, 0,1 mmol) gekoppelt durch ein ähnliches Verfahren, wie in Beispiel 4 beschrieben. Analytische RP-HPLC (Säule und Bedingungen wie für die geschützte Peptidsäure unten) deutete auf eine fast vollständige Umwandlung zu dem Amid hin, Verzögerungszeit 23,39 Minuten. Nach Entfernen der Schutzgruppen mit TFA und Reinigungsmitteln (Wasser und Triisopropylsilan) wurde das Rohprodukt gereinigt durch präparative RP-HPLC (Dynamax C18, 1 Inch innerer Durchmesser unter Verwendung eines Gradienten von Acetonitril-Wasser enthaltend 0,1 % TFA (20-70 % Acetonitril) über 60 Minuten bei einer Fließgeschwindigkeit von 12 ml/Minute. Fraktionen, welche das reine Titelprodukt (eluierend bei 55 Minuten) enthielten, wurden kombiniert und gefriergetrocknet. Ausbeute 43 mg.
  • Das Produkt wurde durch HPLC und Massenspektroskopie charakterisiert. RP-HPLC (Säule und Bedingungen genau wie beim vorhergehenden Beispiel) zeigte 100 Reinheit, Verzögerungszeit 19,66 Minuten; Massenspektrometrie m/e (positiver Elektrospray (ES+)) 859,6 (MH+).
  • Das Startmaterial wurde wie folgt hergestellt:
    Adamantylacetyl-(D)Lys(BOC)-NMe(D)Phe-(D)Trp-OH wurde durch ein ähnliches Verfahren hergestellt, wie in Beispiel 4 beschrieben, aber in kleinerem Ausmaß (0,4 mmol). Ausbeute 186 mg (60 %).
  • RP-HPLC Vydac C18 Säule, 201HS54, 4,6 × 250 mm, eluierend mit Acetonitril und Wasser enthaltend 0,1 % TFA, unter Verwendung eines 25-90 % Acetonitrilgradienten über 40 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/Minute, Verzögerungszeit 19,24 Minuten, keine feststellbaren Verunreinigungen. Beispiel 6
    Figure 00530001
  • 2-Propylpentanoyl-(D)Lys-NMe(D)Phe-(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl
  • Diese Titelverbindung wurde unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens hergestellt wie in Beispiel 4. Das geschützte Peptidamid wies eine Verzögerungszeit von 22 Minuten auf RP-HPLC (Säule und Bedingungen wie für die geschützte Peptidsäure unten) auf. Nach Entfernen der Schutzgruppen mit TFA und Reinigungsmitteln, wurde präparative RP-HPLC genau so durchgeführt, wie für das vorhergehende Beispiel beschrieben, und Fraktionen, welche das Produkt enthielten (eluierend bei 40 Minuten), wurden kombiniert und gefriergetrocknet. Ausbeute 93 mg.
  • RP-HPLC (Säule und Bedingungen wie beim vorhergehenden Beispiel), Verzögerungszeit 17,92 Minuten; Massenspektroskopie, m/e (positiver Elektrospray (ES+)), 809,6 (MH+).
  • Das Startmaterial wurde wie folgt hergestellt:
    2-Propylpentanoyl-(D)Lys(BOC)-NMe(D)Phe-DTrp-OH wurde durch das selbe Verfahren hergestellt, wie in Beispiel 4 beschrieben, aber in kleinerem Ausmaß (0,33 mmol). Ausbeute 248 mg (82 %). RP-HPLC Vydac C18 Säule, 201HS54, 4,6 × 250 mm, eluierend mit Acetonitril und Wasser enthaltend 0,1 % TFA, unter Verwendung eines 25-90 % Acetonitrilgradienten über 40 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/Minute, Verzögerungszeit 18 Minuten, keine feststellbaren Verunreinigungen. Beispiel 7
    Figure 00550001
  • 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-NmeTrp-piperazin-4-nitrophenyl
  • Ein Anteil 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-NmeTrp-OH (43 mg, 0,1 mmol) wurde an 4-(nitrophenyl)piperazin (21 mg, 0,1 mmol) in DMF (4 ml) gekoppelt unter Verwendung von Diisopropylethylamin (80 Mikroliter, 4 Äquivalente) und HATU (38 mg, 1 mmol). Die Reaktion war nach 1 Stunde vollständig, wie durch HPLC beurteilt. Die Lösung wurde mit Wasser (2 ml) verdünnt, gefiltert und direkt auf eine Dynamax C18 präparative Säule gegeben und mit einem Gradienten von Acetonitril-Wasser enthaltend 0,1 % TFA (20-70 % Acetonitril) über 70 Minuten bei einer Fließgeschwindigkeit von 12 ml/Minute eluiert. Fraktionen, welche das Produkt enthielten (eluierend bei 65 Minuten), wurden kombiniert und gefriergetrocknet. Ausbeute 32 mg.
  • RP-HPLC Verzögerungszeit 19,83 Minuten (Säule und Bedingungen wie beim vorhergehenden Beispiel); Massenspektroskopie, m/e (negativer Elektrospray (ES–)) 615,4 (MH–).
  • Das Startmaterial wurde wie folgt hergestellt:
    4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-NmeTrp-OH wurde aus 2-Chlortritylchloridharz (Alexis, 380 mg, 0,5 mmol) durch das automatische Verfahren hergestellt, das in Beispiel 4 beschrieben ist. Nach dem Koppeln von Fmoc-NmeTrp-OH an das Harz und nachfolgende Fmoc-Schutzgruppenentfernung, wurde 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzolsäure an die Harzbindung Nmethyl-Trp durch das HATU-Verfahren gekoppelt. Das fertige Harz wurde gesammelt und mit Methanol gewaschen und bei 50 ° getrocknet. Ausbeute 487 mg (Zuwachs 107 mg).
  • Das 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-NmeTrp-OH wurde mit Dichlormethan, Trifluorethanol und Essigsäure von dem Harz gespalten, wie zuvor beschrieben. Es wurde von Wasser und Acetonitril gefriergetrocknet. Ausbeute 173 mg (gelbes Pulver) (82 %) RP-HPLC bei 50 °C, Vydac C18, 201HS54 Säule, 4,6 × 250 mm, eluierend mit einem Gradienten von 5-50 % Acetonitril, 0,1 % TFA Acetonitril-Wasser über 40 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,3 ml/Minute, Verzögerungszeit 17,26 Minuten, Massenspektroskopie, m/e (negativer Elektrospray (ES–)) 425,6 (MH–). Beispiel 8
    Figure 00560001
  • 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-Phe(4-Cl)-piperazin-4-nitrophenyl
  • Das wurde hergestellt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie jenem von Beispiel 7. Präparative RP-HPLC wurde durchgeführt unter Verwendung eines Gradienten 20-80 % Acetonitril, 0,1 % TFA über 70 Minuten. Fraktionen, welche das Titelprodukt enthielten, (eluierend bei 59 Minuten) wurden zusammengefasst und gefriergetrocknet. Ausbeute 40 mg.
  • RP-HPLC Säule und Element wie bei dem vorhergehenden Beispiel, mit der Ausnahme Gradient 10-70 Acetonitril über 30 Minuten, Verzögerungszeit 20,81 Minuten; Massenspektroskopie, m/e (negativer Elektrospray (ES–)) 596,3 (MH–).
  • Das Startmaterial wurde wie folgt hergestellt:
    4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzol-Phe(4-Cl)-OH wurde hergestellt unter Verwendung eines ähnlichen Verfahrens wie in Beispiel 7. Ausbeute 203 mg (100 %).
  • RP-HPLC Vydac C18 Säule, 201HS54 4,6 × 250 mm, eluierend mit einem Gradienten 10-70 %, 0,1 % TFA Acetonitril-Wasser über 40 Minuten, Fließgeschwindigkeit 1,2 ml/Minute, Verzögerungszeit 178,5 Minuten. Beispiel 9
    Figure 00580001
  • 2-Methyl-3-furoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl
  • Die Amminolyse von 2-Methyl-3-furoyl-Trp-O-Kaiser-Oxim-Harz wurde bei 80 °C in Trichlorethan für 2 Stunden mit 1 Äquivalent 4-Nitrophenylpiperazin und Essigsäure (1-2 molar) durchgeführt. Die Mischung wurde gefiltert und das Harz wurde wiederholt mit Dichlormethan gewaschen. Das kombinierte Filtrat und die Waschungen wurden bis zur Trockenheit verdampft und der Rest wurde in Wasser (4 ml) und Acetonitril (4 ml) aufgelöst für HPLC und LC-MS und dann gefriergetrocknet. Ausbeute 29,8 mg.
  • RP-HPLC Säule und Elemente wie bei den vorhergehenden Beispielen, Gradient 5-70 %, 0,1 % TFA Acetonitril-Wasser über 40 Minuten, Fluss 1,2 ml/Minute, zeigte, dass der Hauptpeak (Verzögerungszeit 25,5 Minuten) das erwartete Produkt war, (65,7 % durch Peakintegration bei 230 nm). LC MS MH+ für Hauptpeak 502,3 (calc 501,55 mw).
  • Das Startmaterial wurde wie folgt hergestellt:
    BOC-Trp-OH (4,6 g, 15 mmol) wurde in Dichlormethan (30 ml) enthaltend DMF (3 ml) aufgelöst und Diisopropylcarbodiimid (0,95 g, 7,5 mmol) wurde hinzugefügt. Nach 20 Minuten bei Raumtemperatur wurde die Lösung von vorher gebildetem symmetrischem Anhydrid zu einem Bond-Elut-Röhrchen (80 ml) hinzugefügt, welches Kaiser-Oximharz (5 g, 1,21 mmol/g, 6 mmol) enthielt, das bereits in Dichlormethan gequollen war. Nach händischem Mischen für 5 Minuten wurde Dimethylaminopyridin (92 mg, 0,75 mmol) hinzugefügt und das Mischen wurde in Intervallen über 2 Stunden fortgesetzt. Das Harz wurde gefiltert und wiederholt mit Dichlormethan gewaschen. Stellen auf dem Harz, die nicht reagiert haben, wurden dann mit 2,6-Dichlorbenzoylchlorid (0,63 g, 3 mmol) in Dichlormethan (30 ml) "abgedeckt". Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur wurde das Harz gefiltert und mit Dichlormethan gewaschen.
  • Entfernung der Schutzgruppen wurde mit 25 % TFA in Dichlormethan enthaltend Triisopropylsilan (5 %) durchgeführt. Drei separate Behandlungen wurden für jeweils 10 Minuten durchgeführt, um eine vollständige Entfernung der BOC-Gruppe sicher zu stellen. Nach ausgiebigem Waschen mit Dichlormethan, um sicher zu stellen, dass der meiste Überstand an TFA entfernt worden ist, wurde das Harz in etwa gleiche Teile geteilt in 50 Bond-Elut-Röhrchen (3 ml), um 0,12 mmol TFA-Salz von Trp-O-Oximharz pro Röhrchen zu ergeben.
  • Zu einem dieser Anteile von beladenem Harz wurde 2-Methyl-3-furionsäure (64 mg, 0,5 mmol), aufgelöst in einer Lösung aus HBTU in DMF (0,33 M, 1,5 ml, 1 Äquivalent) hinzugefügt, nach kurzem Mischen gefolgt von Isopropylethylamin (263 Mikroliter, 1,5 mmol). Nach 5 Stunden bei Raumtemperatur wurde das Harz gefiltert und mit DMF gewaschen, um 2-Methyl-3-furoyl-Trp-O-Oximharz zu liefern. Beispiel 10
    Figure 00600001
  • Thien-3-ylcarbonyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl
  • Die Titelverbindung wurde hergestellt durch Ersetzen der Furoinsäure in Beispiel 9 durch Thiophen-3-carbonsäure und die Titelverbindung wurde durch Gefriertrocknen erzielt. Ausbeute 41 mg.
  • RP-HPLC Säule und Bedingungen waren wie im vorhergehenden Beispiel beschrieben. Verzögerungszeit 24,78 Minuten, 77 % durch Peakintegration bei 230 nm. LC MS M+H+ für Hauptpeak 504,2. Beispiel 11
    Figure 00610001
  • 2,6-Dimethoxynicotinoyl-Trp-piperazin-4-nitrophenyl
  • Die Titelverbindung wurde hergestellt durch Ersetzen der Furoinsäure in Beispiel 9 durch 2,6-Dimethoxynicotinsäure. Ausbeute 39,5 mg.
  • RP-HPLC Säule und Bedingungen wie in den Beispielen oben beschrieben.
  • Verzögerungszeit 27,9 Minuten, 78 % durch Peakintegration bei 230 nm. LC MS MH+ für Hauptpeak 559,6. Beispiel 12
    Figure 00620001
  • 2,4-Dimethylthiazol-5-ylcarbonyl-(L)-Trp-4-piperazin-4-nitrophenyl
  • Diese Herstellung wurde als Teil eines Durchgangs auf dem Abimed AMS432 multipel parallel Peptid-Synthesiser(MPPS)-Synthesiser durchgeführt:
    BOC-(L)-Trp-Oximharz (100 mg 110 μmol) (hergestellt wie in Beispiel 9) wurde in einen Reaktor (8 ml Bond-Elut) gegeben. Das Instrument war so programmiert, dass das Harz durch Spülen mit Dichlormethan gequollen wurde. Das Harz wurde als nächstes 4 × 10 Minuten mit 25 % TFA in Dichlormethan behandelt, wodurch die BOC-Gruppe entfernt wurde. Das Harz wurde 6 mal für 1 Minute mit Dichlormethan gespült, gefolgt von 6 Spülungen für 1 Minute mit DMF. 2,4-Dimethylthiazol-5-carbonsäure DIPEA (1000 μl von 0,5M) in NMP (1,0M) und HBTU in NMP (1100 μl 0,45M) wurden zu dem Harz hinzugefügt. Die Mischung wurde kurz händisch gerührt und dann für 1 Stunde verlaufen gelassen. Die Reaktionsmischung wurde abgelassen und das Harz wurde 6 mal mit DMF und 3 mal mit Dichlormethan gespült und Luft trocknen gelassen, um 2,4-Dimethylthiazol-5-carbon-yl-(L)-Trp-Oximharz zu ergeben.
  • Das Harz wurde in ein versiegeltes Reaktionsgefäß übertragen und in TCE (2 ml) suspendiert. Die Suspension wurde mit 1 ml einer Lösung behandelt, welche N-(4-nitrophenyl)-piperazin (100 μmol) und Eisessig (400 μmol) enthielt. Das Reaktionsgefäß wurde versiegelt und dann über Nacht in einem Ofen bei 75-80 °C gelassen. Nach der Reaktion über Nacht wurde die Reaktionsmischung gefiltert, das restliche Harz wurde 4 mal mit DMSO (0,5 ml) gespült. Die kombinierten Filtrate wurden auf einem Zentrifugalverdampfer bis zur Trockenheit verdampft und der Rest wurde erneut in DMSO (5 ml ca 20 mM Lösung) aufgelöst. Die Lösung wurde gefroren bei –20 °C gelagert.
  • Eine Probe der Lösung wurde 50 mal mit Wasser verdünnt, um eine Probe für LC-MS-Analyse bereitzustellen:
    Theorie mH+ = 533,6, Gefunden mH+ = 533,1

Claims (16)

  1. Verbindungen der Formel (I)
    Figure 00640001
    Formel (1) wobei: L1 für Wasserstoff oder Methyl steht; R1 und R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Halogen, Nitro, Cyano, Carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-Di-C1-4-alkyl)-carbamoyl oder C1-4-Alcoxycarbonyl stehen; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, einen C5-7-carbocyclischen Ring oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein können; R5 für Wasserstoff, C1-4-Alkyl, R6CH2- oder R6C(O)-steht; R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl oder R7 steht; wobei die Aryl-, Heteroaryl- bzw. Heterocyclylringe gegebenenfalls durch bis zu drei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Nitro, C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy, Halogen, (C1-4-Alkyl)sulfanyl, C1-4-Alcoxycarbonyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)amino oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino substituiert sein können; wobei R7 entweder für eine Gruppe der Formel (2) oder der Formel (3) steht:
    Figure 00650001
    wobei: L2, L3 und L4 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder Methyl stehen; R8 für Amino, Guanadino, Imidazolo steht, wobei diese Reste jeweils durch C1-4-Alkyl mono- oder di-N-substituiert sein können; A1 für Sauerstoff oder eine direkte Bindung steht; R9 für einen C5-8-gliedrigen monocarbocyclischen Ring, einen C6-10-gliedrigen bicarbocyclischen Ring, einen C8-12-gliedrigen tricarbocyclischen Ring, C5-7-Alkyl oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls durch C1-4-Alkyl mono-, di- oder trisubstituiert sein können; R10 für C1-6-Alkyl oder einen C3-8-monocarbocyclischen Ring steht; R11 für Wasserstoff, Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy steht; R12 für Wasserstoff oder Methyl oder Ethyl steht oder R12 zusammen mit L2 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet; R13 für Wasserstoff, Methyl oder Ethyl steht oder R13 zusammen mit L4 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet; n für 0, 1 oder 2 steht; p für 0, 1 oder 2 steht; q für eine ganze Zahl von 1 bis 6 steht; r für 0, 1 oder 2 steht; s für 0, 1 oder 2 steht; mit der Maßgabe, daß, wenn R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1- 4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl steht, R5 nicht für R6CH2- steht; und, wenn R1 bis R3 jeweils für Wasserstoff stehen, L1 für Wasserstoff steht, n für 1 steht, R4 für Phenyl steht, R5 für R6C(O)- steht, R6 nicht für 2-Methyl-4-aminobutyl stehen kann, mit der Ausnahme von (S)-4-Chlor-N-[1-(1H-indol-3-ylmethyl)-2-oxo-2-(4-phenyl-1-piperazinyl)ethyl]-N-methylbenzamid; und deren pharmazeutisch annehmbare Salze und Solvate.
  2. Verbindungen nach Anspruch 1, wobei R5 für Wasserstoff steht.
  3. Verbindungen nach Anspruch 2, wobei R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; n für 1 steht; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, Cyclohexyl oder Phenyl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein können, L1 für Wasserstoff steht und R5 für Wasserstoff steht.
  4. Verbindungen nach Anspruch 1, wobei R5 für R6(CO)- steht; R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl steht, wobei die Aryl-, Heteroaryl- bzw. Heterocyclylringe gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Nitro, Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein können.
  5. Verbindungen nach Anspruch 4, wobei R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; n für 1 steht; L1 für Wasserstoff steht; und R6 für Aryl oder Heteroaryl steht, wobei das Aryl bzw. Heteroaryl gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Nitro, Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein kann.
  6. Verbindungen nach Anspruch 1, wobei R6 für R7 steht.
  7. Verbindungen nach Anspruch 6, wobei R7 die Formel (2) aufweist.
  8. Verbindungen nach Anspruch 7, wobei R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; n für 1 steht; L1 für Wasserstoff steht; L2 für Wasserstoff oder Methyl steht; q für eine ganze Zahl zwischen 2 und 4 steht; R8 für Amino steht; s für 1 steht und L3 für Wasserstoff oder Methyl steht.
  9. Verbindungen nach Anspruch 6, wobei R7 die Formel (3) aufweist.
  10. Verbindungen nach Anspruch 9 wobei R1 für Wasserstoff steht; R2 für Nitro steht; R3 für Wasserstoff steht; n für 1 steht; s für 1 steht und L1 für Wasserstoff steht.
  11. Verbindungen, ausgewählt aus den folgenden: 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-Phe(4-Cl)-piperazin-4-nitrophenyl; 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-NMe-Trp-piperazin-4-nitrophenyl; 4,5-Dimethoxy-2-nitrobenzoyl-(D)(Nin-Me)Trp- piperazin-4-nitrophenyl; Z-(D)(NMe)Dab-(NMe)(D)Phe-(D)Trp-Piperazin-4-nitrophenyl; Z-(NMe)(D)Lys-(NMe)(D)Phe-(D)Phe(4-Cl)-Piperazin-4-nitrophenyl; Cyclohexyl-CO-(D)Lys(D)NMe-Phe-Cha-piperazin-4-nitrophenyl; Cyclohexyl-(D)Lys-(D)(NMe)Phe-(D)Phe(4Cl)-piperazin-4-nitrophenyl; Cyclohexyl-CH2-(D,L)NMe-Phe{CHzNH}(D)Trp-piperazin-4-nitrophenyl; und Cyclohexyl-(D)Lys-(D)(NMe)Phe-(D)hPhe-piperazin-4-nitrophenyl; und deren pharmazeutisch annehmbaren Salzen und Solvaten.
  12. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 11 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger.
  13. Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvates davon als Medikament.
  14. Verwendung einer Verbindung der Formel (4) bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krebs in einem Warmblüter
    Figure 00680001
    Formel (4) wobei: L1 für Wasserstoff oder Methyl steht; R1 und R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Halogen, Nitro, Cyano, Carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl oder C1-4-Alcoxycarbonyl stehen; R4 für Indol, N-(C1-4-Alkyl)indol, einen C5-7-carbocyclischen Ring oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls an Ringkohlenstoffatomen durch bis zu drei Substituenten jeweils unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy substituiert sein können; R5 für Wasserstoff, C1-4-Alkyl, R6CH2- oder R6C(O)- steht; R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl oder R7 steht; wobei die Aryl-, Heteroaryl- bzw. Heterocyclylringe gegebenenfalls durch bis zu drei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Nitro, C1-4-Alkyl, C1-4-Alkoxy, Halogen, (C1-4-Alkyl)sulfanyl, C1-4-Alkoxycarbonyl, N-(C1-4-Alkyl)carbamoyl, N,N-(Di-C1-4-alkyl)carbamoyl, N-(C1-4-Alkyl)amino oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino substituiert sein können; wobei R7 entweder für eine Gruppe der Formel (5) oder der Formel (6) steht:
    Figure 00690001
    wobei: L2, L3 und L4 jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff oder Methyl stehen; R8 für Amino, Guanadino, Imidazolo steht, wobei diese Reste jeweils durch C1-4-Alkyl mono- oder di-N-substituiert sein können; A1 für Sauerstoff oder eine direkte Bindung steht; R9 für einen C5-8-gliedrigen monocarbocyclischen Ring, einen C6-10-gliedrigen bicarbocyclischen Ring, einen C8-12-gliedrigen tricarbocyclischen Ring, C5-7-Alkyl oder Aryl steht, wobei diese Reste jeweils gegebenenfalls durch C1-4-Alkyl mono-, di- oder trisubstituiert sein können; R10 für C1-6-Alkyl oder einen C3-8-monocarbocyclischen Ring steht; R11 für Wasserstoff, Halogen, C1-4-Alkyl oder C1-4-Alkoxy steht; R12 für Wasserstoff oder Methyl oder Ethyl steht oder R12 zusammen mit L2 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet; R13 für Wasserstoff, Methyl oder Ethyl steht oder R13 zusammen mit L4 einen stickstoffhaltigen C5-7-heterocyclischen Ring bildet; n für 0, 1 oder 2 steht; p für 0, 1 oder 2 steht; q für eine ganze Zahl von 1 bis 6 steht; r für 0, 1 oder 2 steht; s für 0, 1 oder 2 steht; mit der Maßgabe, daß, wenn R6 für Aryl, Heteroaryl, Heterocyclyl, Amino-C3-6-alkyl, N-(C1-4-Alkyl)amino-C3-6-alkyl oder N,N-(Di-C1-4-alkyl)amino-C3-6-alkyl steht, R5 nicht für R6CH2- steht; oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvates davon.
  15. Pharmazeutische Zusammensetzung, einthaltend eine Verbindung der Formel (4), oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat davon in einer Mischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger zur Behandlung von Krebs in einem Warmblüter, mit der Maßgabe, daß die folgende Verbindung ausgenommen ist: (S)-4-Chlor-N-[1-(1H-indol-3-ylmethyl)-2-oxo-2-(4-phenyl-1-piperazinyl)ethyl]-N-methylbenzamid.
  16. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (1) und deren pharmazeutisch annehmbaren Salzen und Solvaten, bei dem man: a) eine Carbonsäure der Formel (8) oder ein reaktives Derivat davon mit einem Piperazin der Formel (9) umsetzt
    Figure 00710001
    wobei L1, n, R4, R1, -R3, und R5, wie oben definiert sind, wobei eine Verbindung der Formel (7)
    Figure 00710002
    Formel (7) gebildet wird, b) gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt, c) gegebenenfalls ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat bildet.
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