SE445353B - Inneslutningskomplex baserat pa cyklodextrin och indometacin, sett att framstella komplexet samt farmaceutisk beredning derav - Google Patents

Description

20 25 30 35 40 -i ett molförhållande av 1,9-2,l:l ' vid 3s°c till 9,8 x 1o"4 7090047-9-2 2'_ genom omsättning av 1,9-2,1 mol d,- eller /2-cyklodextrin med 1 mol 1-(p-k1or-bensoyl)-S- metoxi-2-metyl-indol-3-yl-ättiksyra. ' Reaktionen mellan cyklodextriner och indometacin har under- sökts av Hamada, Nambu och Nagai (Chem. Pharm. Bull., 23, 1205 /1975/). De observerade, att löslïgheten för indometacin ökade vid stegring av cyklodextrinkoncentrationen i en vattenlösning, Den ursprungliga lösligheten kunde stiga från 3,5 X 10-4 mollliter mol/liter, dvs. lösligheten blev 2,8 gånger så stor. _ _ _ _ Det har visat sig, att indometacin i närvaro av glykos hyd- rolyserar snabbt i en vattenlösning, långsamt i närvaro av M- cyklodextrin och att ß-cyklodextrin inhiberar hydrolysen.

Kurozumi, Nambu och Nagai (Chem. Pharm. Bull., 23, 3062 /1975/) har försökt framställa cyklodextrin/indometacinkomplex.

Vid ett försök skakades 100 ml av en 10-3- molar cyklodextrinlös- ning vid rumstemperaturen med 20 ml av en 3 X 10-3 molar eterlös- ning av indometacín i 24 timmar och produkten kristalliserade vid kylning till ZQC. Den utfällda produkten innehöll emellertid inget indometacin utan endast ren ß-cyklodextrin. Detta förklaras i den nämnda artikeln med att diametern i ß-cyklodextrinhålígheter- na endast är 7-8 Å, då däremot indometacinmolekylens diameter är 8,5 Å, med andra ord är índometacinmolekylen för stor för att kun- na inbyggas i ß-cyklodextrinets hålighet. .

Man har också försökt framställa komplexet genom lyofílísa- tion. Indometacin omvandlades därvid till ett ammoniumsalt med 28% vattenlösníng av ammoniumhydroxid. Det löstes på detta sätt i vatten och en ekvimolar mängd av 'E-cyklodextrín tillsattes i form av en vattenlösning, varpå blandningen frystes och lyofili- serades. Den så erhållna produkten innehöll både det ursprungliga indometacinet och cyklodextrín i form av en blandning, dvs. i ett molförhållande av 1:1 (enligt artikeln var molförhållandet indo- 'metacin:CD = O,92:1). Författarna hänvisade till röntgendíffrak- itions-pulverdiagram för att bevisa att blandningen med molförhål- landet 1:1 i själva verket är ett komplex, men själva diagrammen har icke medtagits i artikeln. Däremot angives i artikeln röntgen- diffraktions-pulverdiagram av ett komplex erhållet av ibufenac genom kristallisation och lyofilisation och det framgår, att pul- verdiagrammet för det lyofiliserade Å -cyklodextrínet och pulver- diagrammet för det lyofiliserade ibufenac-ß-cyklodextrinkomplexet _.7.__ _ V1- ", ,_,_,._-_:>.,V , - -i .~,.,.. y» _ . pgon QUALITY , 10 15 20 25 30 55 40 3,1 7900479-2 är väsentligen identiska och svarar mot ett amorft tillstånd. Det är helt allmänt känt, att amorfa pulver erhålles genom lyofilíse- ring, vilka pulver icke uppvisar signifikanta karaktäristika i röntgendíffraktions-pulverdíagram. Takeo och Kuge (Agric. Biol.

Chem., 34, 1787 /1970/) anger, att Ä-cyklodextrin-inneslutnings- komplex i vattenfritt, torrt tillstànd ger identiska röntgendif- fraktions~pulverdiagram oberoende av typen hos den komplexbildande "värd"-molekylen. Komplexbildning när det gäller lyofiliserade material kan icke bestämmas med hjälp av röntgendiffraktionsdata.

Följaktligen har man í artikeln ifråga icke beskrivit fram- ställning av indometacin-cyklodextrinkomplex. Däremot har man som produkt erhållit en fysikalisk blandning av ammoniumsaltet av índometacin och cyklodextrin. Enligt de arbeten som ligger till grund för föreliggande ansökan kan indometacinsalter icke inne- slutas i ett cyklodextrininneslutningskomplex, ty salterna har visat sig vara alltför jonogena, dvs. hydrofila.

De ovannämnda japanska författarna har satt som mål att framställa ett komplex med molförhållandet 1:1, men de har icke lyckats.

Enligt förevarande uppfinning avses ett komplex bildat av ungefär tvâ cyklodextrinmolekyler och en indometacinmolekyl.

Indometacin kan, när det gäller bildning av cyklodextrin- inneslutningskomplex, betraktas som en bífunktíonell förening, enär en del av molekylen, nämligen p-klorfenylgruppen enbart kan ínbyggas i cyklodextrinets hålighet, samtidigt som en annan del av molekylen, nämligen den del som innehåller karboxylgruppen,_ inbygges i en annan cyklodextrinmolekyl. Komplexets sammansättning visas schematiskt i Fig. 1. De ihåliga skivorna symboliserar cyk- lodextrin, vars strukturformel angives nedtill i Fig. 1. 1 Molförhållandet cyklodextrin:indometaciJ1är wmfiüär 2:1.Ett kun- plex med molförhâllandet 1:1 kan också framställas, men ett sådant komplex kännetecknas av att det icke endast icke minskar indome- tacinets skadliga biverkningar utan t.o.m. ökar dem. Ett komplex men molförhållandet 2:1 minskar däremot väsentligt biverkningarna.

Fysikaliskt kemiska data understöder också skillnaden mellan de två komplexen. Sålunda ökas exempelvis syradissociationskonstan- tens (pK¿) värde väsentligt vid införlivning av de båda cyklo- dextrinringarna. g förfarandet enligt förevarande uppfinning genomföras på det sättet, att man omsätter_cyklodextrin i vattenlösning med indo- Poon Qvamrr ' J~Y . . V i , - I ¿~.~~, .g .,.--_ -.1,..,- 10 15 20 25 30 35 40 .7900479-2 f 4. metacin löst i ett inert lösningsmedel. Som inert, organiskt lös- ningsmedel användes sådana organiska lösningsmedel, som löser in- dometaçin och som icke bildar stabila komplex med cyk1odextrin., Man föredrar alkanoler med 1-3 kolatomer, såsom metanol eller etanol, ketoner, såsom aceton, och etrar, såsom tetrahydrofuran eller dietyleter. Reaktionen genomföres . vid en tempera- tur mellan 50 och 100°C, företrädesvis mellan 60 och 80°C. Reak- tionen kan åstadkommas genom att man enbart upphettar reaktions- blandningen. I cyklodextrinets inre hålighet är vattenmolekyler bundna medelst vätebryggor, vilka endast kan spjälkas genom att man höjer temperaturen. Reaktionen slutföres inom loppet av några få timmar. Komplexet isoleras, företrädesvis genom kylning, filtre- ring eller centrifugering av reaktionsblandningen.

Enligt en annan utföringsform av förevarande uppfinning bil- das cyklodextrinet ur en stärkelse, som förhydrolyseras i reak- tionsblandningen med hjälp av cyklodextrinasenzym. Enligt förfa- randet gelatineras stärkelsesuspensionen vid förhöjd temperatur (100-ZOOOC) och förhydrolyseras delvis med A-amylas. Hydrolysatet steriliseras och cyklodextrinasenzymet, exempelvis stärkelse- cyklodextrin-trans-glykolasenzym, tillsättes. Omvandlingen fort- sättes i 2-7 dagar vid en temperatur av 40-50°C. Den på detta sätt erhållna cyklodextrinhaltiga blandningen upphettas eventuellt efter utspädning med vatten i och för inaktivering av enzymet och alkhol tillsättes under upphettningen, den bildade uppslamningen kyles, filtreras och en lösning-av índometacin i ett organiskt lösningsmedel sättes till filtratet. Inslutningskomplexbildnings- reaktionen och produktisoleringen genomföres på ovan angivet sätt.

Det så framställda, nya cyklodextrin-indometacininneslut- ningskomplexet kan beredas genom tillsats av inerta, fasta eller vätskeformiga bärare och eventuellt farmaceutiska excipienter på i och för sig känt sätt för framställning av farmaceutiskt god- tagbara beredningar.

De farmaceutiska beredningarna kan företrädesvis framställas i för oral administration lämplig form, exempelvis i form av tab- ' letter eller kapslar. Man måste vid beredningen beakta, att indo- 'metacinhalten i inneslutningskomplexet är cirka'15-20%. En av kom- ponenterna_i inneslutningskomplexet, nämligen cyklodextrinet, är en gynnsam bärare. Enligt en föredragen utföringsform kan tablett- Poolia QUALITY i _._» 10 15 20 25 30 35 40 s. _ 7900479-2 massan kompletteras med en ytterligare mängd cyklodextrin, vari- genom komplexbildningens jämvikt i ett biologiskt medium (i mag- säcken) förskjutcs ännu mer i önskvärd riktning, varigenom den ulcerativa effektens möjlighet ytterligare minskas.

Om komplexföreningen administreras oralt, är den dagliga dosen 25-200 mg/kg kroppsvikt räknat på indometacinhalten i inne- fslutningskomplexet och administrationen kan ske i en enda dos el- ler i flera deldoser under dagens lopp.

De nya komplexen uppvisar många avsevärda fysikaliskt ke- miska och farmaceutiska fördelar. Komplexet uppvisar sålunda in- dometacínets antiinflammatoriska effekt men väsentligt mindre ul- cerativ biverkan och komplexet kan följaktligen med fördel an- vändas som antiinflammatoriskt medel med havandeskapsprotektiv effekt och väsentligt minskad skadlig biverkan. Komplexet är mycket mera lösligt än indometacin. Absorptionsprov visar, att indometa- cin administrerat i form av ett komplex tillförsäkrar högre kon- centration i blodet än fri indometacin och absorptionen av indo- metacin från komplexet är effektivare än vid administration av indometacinet i fri form.

Uppfinningen skall i närmare detalj belysas i följande exem- pal. 0 Exempel 1: 11,35 g (0,01 mol) ß-cyklodextrin löstes i 110 ml vat- ten och till denna mättade vattenlösning sattes en lösning av 1,78 g indometacin i 20 ml aceton (räknat som 2 mol-/ä-cyklodextrin per 1 mol indometacin) under omrörning vid 70°C. Lösningarna kom- binerades och reaktionsblandningen kyldes i 6 timmar och 12 tim- mar i kylskåp. Under kylningen utföll en vit, kristallin fällning, som avfíltrerades, tvättades med kall aceton eller eter och tor- kades över fosforpentoxid. Indometacinhalten i komplexet bestämdes genom upplösning av den kristallina substansen i vatten under mild upphettning och nedbrytning med alkohol. Substansen underkastades därefter fotometri vid 320 nm. lndometacinhalten i komplexet var 14%, molförhållandet ß-cyklodextrin:indometacin var 1:0,46.

UV-spektrum för indometacin frigjort ur komplexet visade sig vara identiskt med UV-spektrum för det ursprungliga indome- tacinet. s Komplexbildníngen har hevisats medelst följande prov: ëöslighetsprov: Både indometacin och dess cyklodextrinkomplex med molförhållandet 2:1 är väsentligen olösliga vid pH 2. Vid -w ^æ:~w..m,., Peer 10 15 20 25 30 35 40 7900479-2 É ¿ pH 4, 6, 7 och 8 var komplexets löslighet 33, 112, 223 respektive mer än 1.000% större än indometacinets. 7 ' Det pâvisades medelst tunnskiktskromatografering, att under sådana betingelser indometacin icke sönderdelas.

En väsentlig skillnad visar sig beträffande IR-spektra för índometacin, A-cyklodextrin och inneslutningskomplex av indometa- cin och cyklodextrin med molförhållandet 2:1, eftersom bandet 1618 cm_1, som är karaktäristiskt för p-klor-arylgruppen, försvin- ner i komplexet. _ En grafisk representation av röntgendiffraktions-pulverdíagrammet visar att den intensiva topp, som är karaktäristisk för cyklodex- trin och som normalt uppträder vid 2 ÉQ = 10,00 förskjutes till i2§§@ = 10,50 i komplexet. Enligt artikeln i Chem. Pharm. Bull., 23, 3062 (1975) visar röntgendiffraktionsdiagrammet för cyklo- dextrin-indometacinblandningen framställd genom lyofilisering icke några signifikanta karaktäristika. _ Diffusionsprov: För detta prov användes en diffusionscell med ett semipermeabelt membran mellan två cellhalvor. I den ena cellhal- van satsades indometacin i en buffert med pH 7 och i den andra halvan en ren buffert. p Efter 4 timmar vid rumstemperaturen hade indometacinet för- delats mellan de båda cellhalvorna i ett förhållande av 50:50% och jämvikten var fullständig. När indometacinbuffertlösningen satsades i den ena cellhalvan och samma buffrade lösning av ß - cyklodextrín i den andra förelåg en större mängd indometacin i ß -cyklodextrinhalvan efter 4 timmar än i indometacínhalvan.

Cyklodextrinet "pumpade" över en del av indometacinet på grund av komplexbildning. Om en lösning av komplexet av' ß-cyklodextrinz indometacin 2:1 satsades redan från början i den ena cellhalvan och en ren buffertlösning i den andra, återfanns mer än 70% av indometacinot i den första cellhalvan efter 4 timmar och jämvikt ”kunde uppnås först efter mer än ca 10 timmar.

Optisk vridningsförmåga-dispersionsprov: Cyklodextrin uppvisar ingen UV-absorption men optisk vridning, då däremot indometacin uppvisar UV-absorption men ingen optisk vridning, eftersom det icke innehåller någon asymmetrisk kolatom. Komplexet i molför- hållandet 2:1 har optisk vridning och UV~nbsorption och Följakt- ligen uppträder Uotton-effekter induccrude i området för du ursprungliga absorptionsbandenz-_ :HJ _' Cirkulära dikroismspektra visar att redan i en 10~4-molar 10 15 20 25 30 35 40 L 7900479-2 lösning uppträder 10~20% av komponenterna i associerat tillstånd, dvs. komplexet är ganska stabilt. I Tunnskiktskromatograferingsprov: Kromatograferingen genomfördes på ett skikt av s1LIcAGBL® blandning av kloroform, etanol och aceton 98:1,5:0,5 och kromato- grammet besprutades med 1 g p-dimetyl-amino-bensaldehyd + 50 ml 36% saltsyra + 50 ml etanol och efter upphettníng till SUOC var RF-värdet för indometacln 0,92 och RF-värdet för indometacin-cyk- lodextrinkomplexet med molförhållandet 2:1 endast 0,10.

Bestämning av pKn-värden: 0,1 mol/liter kaliumklorid och 10'3 mol/liter indometacin och ett komplex av cyklodextrin och indo- metacin med ett molförhållande av 1:1 och ett komplex av cyklo- dextrin och indomctacin med ett molförhållandc av 2:1 löstes i Lösningarna titre- G. Som framkallningssystem användes en en blandning av vatten och etanol 1:1 vid 25°C. rades med natriumhydroxid och användning av glaselektrod och pK- värdena bestämdes. Dessa var för indometacin 5,39, för komplexet med molförhallandet 1:1 5§43 (väsentligen samma som pK för indo- metacin), men för komplexet 2:1 var det 5,54.

Detta resultat bevisar indirekt, att i komplexet med mol- förhållandet 1:1 kan cyklodextrinringen befinna sig relativt längre bort från karboxylgruppen, dvs. på p-klor-fenylgruppen, under det att i komplexet 2:1 båda delarna av indometacínmolekylerna är in- förlivade i ett komplex, och detta är skälet till att pKa-värdet ökar, dvs. den sura karaktären minskas.

Aktiviteten hos cyklodextrin och indometacínkomplexet 2:1 och frånvaron av den ulcerinhiberande aktiviteten hos komplexet 1:1 påvisas genom följande biologiska prov.

På sätt som angives i Exempel 1 framställdes komplexet 1:1 men 1 mol cyklodextrin omsattes med 1 mol índometacin. Den erhåll- na produktens subkutana toxicitet'provades pâ samma sätt som 2:1- komplexets toxicitet. Provningsresultaten angives här nedan.

Resorptionsprov: 72 fastande råttor uppdelades i 3 grupper. 5 mg indometacin administrerades på den första gruppen och cyklodex- trínkomplex innehållande 5 mg indometacin på den andra gruppen.

Den tredje gruppen (kontrollgruppen) erhöll endast vatten. Efter en viss tid dekapiterades 3-3 försöksdjur och fick Eörblöda. Sc- rum avskildes från blodet och indometacinhalten bestämdes genom gaskromatografering på sätt som beskrives av W.G. Perry: J. Chro- matogr., 89, 110 (1974) och Helleberg E.:J. Chromatogr., 117, 167 (1976). 7 ' POÖR Öïiíšhiifï? _ 10 15 20 25 30 35 40 7900479-2 » L g Resuitaten askacuiggöfes grafiskt .i sig. z, där halten i försöksdjurets blod inducerad av índometacin eller cyklodextrín- índometacin med molförhâllandet 2:1 (mängden índometacin är i bå- da fallen 5 mg) angíves som funktion av tiden efter administratio- nen. Som framgår av diagrammet tillförsäkrade indometacín admini- strerat i form av ett komplex högre halt i blodet än det fria in- dometacinet under hela försökstiden. Förkortningarna CD + 1ND be- tyder komplexet framställt enligt Exempel 1 och IND betyder indo- metacín.

Prov beträffande índometacins och índometacin- fi~cyklodextrinkom- plexets havandeskapprotektiva aktivitet på ovariektomiserade råt- E9I_ .

Testförenipgz ß-cyklodextrln:índometacinkomplox 2:1.

Referenssubstans: índometacin.

Försöksdjur: honråttor med genomsnittlig kroppsvikt 308 g, här- stammande från 18 CFY-stam. ßehandlingt Ovaríet avlägsnades från försöksdjuren på havande- skapets 17de dag och djuren placerades vart för sig i burarr På 6 försöksdjur admínístrerades peroralt 1,25 mg/kg kroppsvikt in- dometacln suspenderat i vatten på havandeskapets 18de dag och pä 6 försöksdjur adminístrerades peroralt en komplexförening inne- hållande samma mängd índometacín, även den suspenderad i vatten. 6 försöksdjur användes som kontroll.

På morgonen den 19de och 20de dagen av havandeskapet upprepades behandlingen. Sålunda erhöll försöksdjuren totalt 6,25 mg/kg kroppsvikt índometacín och ett komplex innehållande en mot- svarande mängd indometacin. _ Resultat: Försöksdjuren dissekerades på morgonen av den Zlta da- gen av havandeskapet. Antalet abortioner bestämdes med hjälp av antalet ínplantatíoner av uterus och antalet i uterus kvarvarande foster. Hos i genomsnitt 16,1% av kontrolldjuren var fostren le- vande. 2 av 6 försöksdjur hade 100% abortíon. Hos försöksdjuren behandlade med indometacín var 58,8% av alla fostren och i för- söksdjuren behandlade med komplexföreningen var 66,7% av fostren levande. I jämförelse med kontrolldjuren ökade både behandlingen med índomctacín och med komplexföreningen väsentligt procentta- let fetusretention men vid en jämförelse mellan índometacin och komplexföreníngen kunde ingen väsentlig skillnad beträffande ak- tiviteten påvisas. _ " ' U Farmakologiska prov. 10 15 20 25 30 35 40 9. 7900479-2 Farmakologiska prov beträffande antiinflammatorisk aktivitet.

Provförening: jë-cyklodextrin-indometacinkomplex 2:1.

Referensförening: indometacin.

Försöksdjur: den antíinflammatoriska aktiviteten provades på hon- råttor härrörande från stammen CFY, 10-10 försöks- djur användes för varje substans och varje dos. 4-5 veckor gamla försöksdjur med en genomsnittlig kropps-c vikt av 90-110 g användes vid början av försöksserien. En grupp om 10 djur användes också i provserien.

Behandling: Den antiinflammatoriska aktiviteten undersöktes i ett akut prov. Försöksdjuren erhöll testföreningen och det som refe- rens använda indometacinet peroralt i form av en suspension fram- ställd med 1% metylcellulosa via en esofagussond.

En dos om 0,1 mg/försöksdjur av en 0,5% lösning av det in- flammationsinducerande karrageninet administrerades subplantart både på de behandlade och de obehandlade försöksdjuren.

Qoser: /9-cyklodextrin-indometacinkomplexet administrerades i doser om 8,06-16,12-24,18-32,24 och 40,3 mg/kg och indometacin i doser om 1-2-3-4- och 5-mg/kg. Å'-cyklodextrin-indometacinkom- plexet innehöll 12,4%. 1 mg indometacin är ekvívalent med 8,06 g komplex och de ovan angivna doserna administrerades för bättre jämförelse. På kontrollgruppen admínistrerades peroralt 1% metyl- cellulosa.

Undersökningen: Den antiinflammatoriska aktiviteten undersöktes på råttor, som fastat i 16 timmar. I 7 Dghandling: De antiinflammatoriska substanserna administrerades på försöksdjuren peroralt. Det inflammationsinducerande karra- geninet administrerades subplantart och 1 ml ljummet vattenled- ningsvatten adminístrerades peroralt på vart och ett av för- söksdjuren. 3 timmar efter behandlingen exterminerades försöks- djuren och de avskilda, obehandlade och med karragenin behandla- de tassarna vägdes. Avskiljningen genomfördes ovanför metakarpus.

Utvärdering: Viktskillnaden mellan de obehandlade och behandlade tassarna på ett och samma försöksdjur beräknades. Viktökníngen i kontrollgruppen räknades som 100% och resultaten i den behand- lade gruppen jämfördes med resultaten i kontrollgruppen.

Den antiinflammatoriska aktiviteten för försöksdjur behand- lade med olika doser av/@-cyklodextrín-indometacinkomplex och med indometacin beräknades i procent. De erhållna resultaten åter- gives grafiskt i Pig. 3. ! Pooa QUALITY 10 ßn 20 25 30 35 40 7900479-2 10_ Enligt testresultaten, som erhållits vid jämförelser mellan å ena sidan /--cyklodextrin-indometacin och ä den andra indometa- cin för behandling av akut inflammation, föreligger ingen väsent- lig skillnad mellan de båda molekylernas antiinflammatoriska ef- fekter. _ ' Den antiinflammatoriska aktiviteten stegrades i proportion till ökning av dosen och aktiviteten försköts mot komplexet. Så- lunda absorberas indometacin bättre ur komplexet än om föreningen icke administreras i form av ett komplex.

Undersökning av hur snabbt och hur länge föreningen verkar: Test- föreningen, referenssubstansen, försöksdjuren, behandlingen, do- serna och undersökningen, allt överensstämde med vad som ovan beskrivits. Skillnaderna framgår av nedanstående. , I denna försöksserie genomfördes följande undersökningar: 1. Samtidig administration av det antiinflammatoriska med- let och karragenín, utvärdering vid olika tidpunkter (3, 6, 24 och 28 timmar efter behandlingen). Z 2. Karragenin adminístrerades 1, 2 och 3 timmar efter ad- ministrationen av det antiinflammatoriska medlet och re- sultaten utvärderades efter 3 timmar. Försöksdjuren dö- dades med eter och de obehandlade och de med karragenin behandlade tassarna vägdes sedan de avskílts ovanför me- 'takarpus.

Utvärdering: Viktskíllnaden mellan obehandlade och behandlade tas- sar på ett och samma försöksdjur beräknades. Viktökningen i kon- trollgruppen betecknades som 100% inflammation och resultaten i de behandlade grupperna jämfördes med detta värde. Den antíin- flammatoriska aktiviteten beräknades i procent och resultaten âskådliggöres grafiskt i Fig. 4 och 5. i 0 1. När de antiinflammfltoriska medlen provades tillsammans med karragenín, visade resultateæ, att den_antiinflammatoriska aktiviteten fortfarande kan observeras och utvärderas 3, 6 tim- mar efter administrationen av karragenin men efter 24 och 48 tim- mar avtar karrageninaktíviteten i så hög grad, att resultaten icke kan utvärderas realistiskt. Enligt provningsresultaten minskar Åß -cyklodextrin-indometacinkomplexet inflammationen effektivare än indometacin och dess aktivitet minskade nästan icke 6 timmar efter behandlingen, då däremot vid administration av indometacin inflammationen ökar efter 6 timmar i stället för att minska (se Fig._S). ' 10 15 20 25 w s_s 40 H,, .i79øo479-2c 2. 1, 2 och 3 timmar efter administrationen av det anti» inflammatoriska medlet administrerades karragenin och 3 timmar därefter visade utvärderingen, att Å-cyklodextrin-indometacinkom~ plexets antiinflammatoriska aktivitet är högre än indometacinets' och kurvornas lutning (se Pig. 4) visar; att indometacin inneslu- tet i ett-komplek verkar snabbare som antiínflammatoriskt medel än indometacin. _ I _ Sammanfattningsvis kan sägas, att ¿å-cyklodextrin-indometa- cinkomplexet fungerar snabbare och under längre tid än indometa- cínet.

- Prov beträffande subakut toxicitet_hos ,fi-cyk1odextrin-indometa- cinkomplex på råttor (ulcerprov): Testföreningen är /ä-cyklodex-' trin-indometacinkomplex'framställt på sätt som angives i Exempel 1, och indometacin användes som referenssubstans.

Försöksdjur; Prov beträffande subakut toxicitet genomfördes på hannar och honor av stammen CFY och '10'-10 försöksdjur behandlades för varje substans och för vardera hannar och honor.

Vid undersökningens början var försöksdjuren 7 veckor gamla _ och vägde 1504170 g. De hölls vid konstant temperatur (22-24°Cï och under konstant relativ fuktighet (45-50%). Under behandlingen stod djuren pa en standarddiet och drack vatten ad libitum.

Behandling: Subakut toxicitet provades i 4 timmar. Djuren behand-I 1ades'daglígen vid samma tid på morgonen. Testföreningen och re- ferenssubstansen admínistrerades i form av en suspension fram- ställd med 1% metylcellulosa genom en esofagussond. Försöksdjureng i kontrollgruppen erhö1l'l%'metylce11ulosa per os. Försöksdjurensï viktökning och kliniska tillstånd registrerades under behandlingen varje vecka. I ' Eiåää - 1. Kontroll: 1% metylcellulosasuspension'0§2 ml/100 g per os; 2. 40,3 mg/kg få-cyk1odextrin-indometacin p.o. suspension. 3. 5,0 mg/kg indometacin p.o. suspension. _ Undersökning: Försöksdjuren behandlades i 28 dagar. 1. Erosion observerades hos 10% av hannarna i den grupp, som be- .handlats med 1% metylcellulosa. 2. 30% av hannarna behandlade med 40,3 mg/kg av komplexföreningen var döda på den sjunde dagen och 30%-av honorna var döda på iden tjugofemte dagen. 3. 80% av hannarna, som behandlats med 5 g/kg indometacin var dö- da på den fjortonde dagen och 60% av honorna var döda på den e 'POORFLQÜÄIÅTITY _' _10 15, 1 *zo 25 30 [ss 40' 79o0479é2.'._ ,,,6 tjugoförsta dagen. _ Antalet ulcera och erosioner, som fastställdes hos de behand- lade djuren i de enskilda grupperna; är sammanställda i följande itabell. 2 1 I C ulcus erosion hannar 'honor , 'hannar honor ,x6ntr611 g 0/10 0/10 1/10 0/101 40,3 mg/kg g ' CD-Ind 2/10 1/10 4/10 4/10 7/10 _6/10 9/10 1/10» 5,0 mg/kg Ind.

Bären var icke större än knappndlshuvuden.

Krogpsviktsökuingz De varje vecka.antecknadc-kroppsviktsökningarna är_sammanställda i nedanstående tabell. Resultaten visar, att' kroppsviktsökningen för bannar och honor behandlade med testföre- ningen och med referensföreningen icke väsentligt skiljer sig från kontrolldjurens. Kroppsviktsvärdena för honor och hannar behand- lade med 5 mg/kg índometacin gav en reell bild först under behand- elingens tredje vecka till följd av den stora andelen döda försöks- djur. l Genomsnittlig kroppsviktsökning, gu 0_ 1 ' 2 - 3 nu 4 (veckor) Hannar » _ _ _g .køntroii _ 152,5 196,5 240,5 276,5 300,5 ' 40,5 mg/kg ca-Ina 161,0 206,2 zss,s 303,6 339,3 5,0 mg/kg Ind. 164,5 210,7 ' 212,5 287,5. 320,0 Honor' _ 1 I _ Kqnuroii '1s4,s 183,0 .zo9,o 222,0 241,0 40,s,m¿/kg cd-Ina. 164,5 190,6 212,0 212,0 220,5 ”5,0 mg/kg Ind 182,0 177,5 206,5 221,2 161,5 ~Följande prov visar att ett komplex med molförhâllandet 1:1 icke minskar indometacinets skadliga biverkningar: 16 mg av komplexet 1:1 framställt på ovan angivet sätt överenstämmer med S mg indo- metacin. Som referenssubstans användes rent indometacín.

Försöksdjur: Prov beträffande subakut*toxicitet genomfördes på 1 shannar och honor (Long7Evans),10-10 djur behandlades för varje' provförening och både för honor och.hannar. Vid provets början .. r..- ....._.-,.-.._._.>..,...-..-._.....;., ..... ...a-_ ~»..,,,......_.........V..,_., ........... _. V 1 P§@@+,=,Qïn2,:.1frfirie 10 15 20 30 35 13k 7900479-2 var försöksdjuren 7 veckor gamla och hade en genomsnittlig kropps~ vikt av 140-160 g. Djuren hölls vid konstant temperatur (22-24°C) och under konstant relativ fuktighet (45-50%). Under behandlingen stod djuren på en standarddiet och drack vatten ad líbítum. ëehandlingz Provet beträffande subakut toxícitet motsvarade en 4 veckors behandlingsperíod. Djuren behandlades dagligen_samma tid på morgonen. Komplexet 1:1 och referenssubstansen administrerades i form av en suspension i'1% metylcellulosa via en esofagussond.

På djuren i kontrollgruppen admínistrerades 1% metylcellulosa per os; Kroppsvíktsökníng och.klíniskt tillstånd för försöksdjuren registrerades under behandlingen varje vecka.

Doser: 1. Kontroll: % metylcellulosa, 0,2 ml/100 g per os. 2. Komplex 1:1 16 mg/kg per os susp. I 3. Indometacin 5 mg/kg per os susp. 1 mg indometacin är ekvivalent med 3,2 mg komplex 1:1.

Undersökning: Försöksdjuren behandlades i 28 dagar. På den tjugo- nionde dagen dödades de överlevande djuren med eter och magsäcken och tolvfingertarmen preparerades. Även på de djur som dött under behandlingen preparerades magsäcken och tolvfingertarmen.

I vart fall undersöktes magsäckens slemhínna; gallan och ínälvorna makroskopiskt och antalet eventuella sår och erosioner fastställdes.

Provningsresultat: Antalet döda behandlade försöksdjur och antalet funna sår i varje grupp í förhållande till antalet behandlade djur i varje grupp angíves í nedanstående tabell.

Lgtalítet 7de dagen .14de dagen Zlsta dagen 28de dagen hannar honor hannar honor hannar honor hannar honor kontroll 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 komplex 1:1 ' 16 mg/kg S/10 1/10 7/10 2/10 7/10 3/10 9/10 9/10 lndometacin, 5 mg/kg 4/10 1/10 _ 4/10 2/10 5/10 3/10 6/10 6/10 POOR QUALITY 15 izo 25 50 35 40 e5 mg/kg índomctucin och 16 mg/kg av komplcxet 1:1. 79ÜÛ479“2 . 14 Ulcer och erosion ' Brosion Ulcer Grupp Hannar Honor _ Hannar Honor Kontroll 3/10 2/10 0/10 0/10 Komplex 1:1 - 1 16 mg/kg 10/10 10/10 9/10 9/10 Indometacin ' _ 5 mg/kg 10/10 10/10 8/10 .7/10 _Såren var icke större än knappnâlshuvuden.

Kroppsviktsökningen registrerades varje vecka, men till följd av den stora letaliteten hos hannarna och honorna som behandlats med 16 mg/kg av komplexföreníngen 1:1 och 5 mg/kg indometacin blev ut- värderingen icke realistisk. _ Kliniska.s1mpton: Med början på den tredje dagen av behandlingen observerades bradypnea och depression hos djuren behandlade med Dessa symptom observerades till dess att djuren dog respektive till den tjugo- åttonde behandlingsdagen.

Sammanfattning: Hos 90% av hannarna och honorna, som behandlats' med 16 mg/kg /S-CD-indometacinkomplex (komplex 1:1) hittades ulcer.

Hos 80% av hannarna behandlade med 5 mg/kg indometacin och hos 70% av honorna hittades ulcer.

Enligt testresultaten ökades indometacinets skadliga bi- verkan vid administration av komplexet 1:1. Endast komplexet 2:1 uppvisade den önskavärda ulcerinhiberandc effekten. fišempel 2: En 30%-ig stärkelsesuspension kyldes till 80°C efter gclhildning vid IZOGC och 0,2 viktproccnt ulfnumylns sattes íill blandningen, som underkastades partíell förhydrolys i 20 minuter.

Hydrolysatet sterliliserades och 5 enheter/g stärkelse-cyklodextrin. trans-glukosylas-enzymblandning tillsattes under kylning till 50°C, varpå 5 volymprocent toluen tillsattes efter 4 timmar. Omvandlingen fortsattes i 2=7 dagar och man fick på detta sätt-optimalt utbyte _av cyklodextrin; Omvandlingsprodukten utspäddes med vatten till dubbel volym, kokades i och för inaktivering av enzymet och 50_ volymprocent 96%-ig etanol tillsattes vid 70°C. Den så erhållna uppslamningen kyldes till 4006 och avfiltrerades. Acetonlösningen Pfooa QUALITY 1' o 15 20 30 35 1aA E E 79oo479-2 nav indometacin sattes till fi1tratet¿ varvid man beaktade, att ca. 70% av torrsubstansen bestod av på-cyklodextrin. ß1-cyk1odextrin/ indometacinkomplexet utkristalliserade under omrörning och lång- sam kylníng vid 6 timmar och efter förvaring i 24 timmar vid 0°C.

Komolexet visade sig vara väsentligen identisk med det i Exempel 1 beskrivna komplexet. Skillnaden var, att det, räknat på torrsubstan- ' sen, innehöll 5-10% av substanser, som skilde sig från ß=-cyklo- dextrín, nämligen dels (4-dextrin och dels linjära dextriner. Des- sa komponenter stör icke produktens användbarhet och följaktligen är det icke nödvändigt att genomföra ytterligare rening och endast det eventuellt i komplexet icke ínförlívade indometacinet måste av- lägsnas genom tvättning med ett organiskt lösningsmedel på sätt som angives i Exempel 1. Slutprodukten innehöll 14% indometacín också i detta fall.

Exempel 3: Kapslar med följande innehåll framställdes: Inneslutníngskomplex enligt Exempel 1 166 mg kolluidal kiselsyra ' g 9 mg talk 5 mg magnesiumstearat 15 mg potatisstärkelse 20 mg mjölksocker 20 mg kristallinísk cellulosa _ 40 mg total vikt 275 mg Kapslarna framställdes genom torrgranulerlngsteknik pä i och för sig känt sätt. §xemBel_í¿ Tabletter med följande sammansättning framställdes: inneslutníngskomplex enligt Exempel 1 330 mg amylopektin 10 mg » kristallinisk cellulosa É 60 mg stearinsyra 6 12 mg talk 13 mg total vikt 425 mg Tabletterna framställdes genom torrgranulcringsteknik på l och för sig känt sätt.

POOR QUALITY

Claims (7)

10 15 20 ' 25 30 iè. 79oo479+2' Patentkrav

1. Inneslutningskomplex, .k ä n n e t e c k n a t av cyklodeátrin och indometacin (1-(p-klorbensoy1)-5-me- toxi-2-metyl-indol-3-yl-ättiksyra) i ett molförhàllande av 1,9-2,1=-1. I _

2..Sätt att framställa ett inneslutningskomplex en- ligt krav 1 med ett molförhállande av 1,9-2,1:1 av 1-(p- klor-bensoyl)-5-metoxi-2-metyl-indol-3-yl-ättiksyra (in-I dometacin) och cyklodextrin, k ä n n e t e c k'n a t av att man omsätter 1,9-2,1 mol u- eller B-cyklodextrin med 1 mol 1-(p-klor-bensoyl)-5-metoxi-2-metyl-indol-3- Ädyl-ättiksyra vid en temperatur av 50-100°C i närvaro av ett inert organiskt lösningsmedel, som utgörs av en C1_3- alkanol, keton eller eter. '

3. '3. Sätt enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t av att reaktionen genomföres vid en temperatur mellan 50 och 80°C.

4. Sätt enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t av att man som inert, organiskt lösningsmedel använder metanol, etanol, aceton eller dietyleter. f

5. Sätt enligt något av krav 2-4, k ä n n e - t e c k n a t av att man omsätter cyklodextrin i vatten- lösning med indometacin löst i ett organiskt lösningsme- del.

6. Sätt enligt något av krav 2-5, k ä n n e - gt e c k n a t av att man avskiljer det bildade cyklo- dextrin/indometacinkomplexet med ett molförhâllande av 2:1 genom kylning av reaktionsblandningen.

7. Farmaceutisk beredning med antinflammatorisk aktivitet, -k ä n n e t e c k n a d av att den inne- håller ett inneslutningskomplex enligt krav 1 av cyklo- dextrin och indometacin i ett molföhållande av 1,9-2,1:1 och farmaceutiskt godtagbara, inerta, fasta eller vätske- formiga bärare. i Poon QUALITY __.-_-____.__........-.__,- _ ., , _........... _ _,