SE438164B - Forfarande for framstellning av cefamycin c genom odling av streptomyces sp. ofr 1022(atcc nr 31666) - Google Patents

Description

800l§ly+3lv0 2 Efter omfattande forskning har det visat sig att en ny stam Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666), som isolerats ur jord från Kenya, producerar en stor mängd cefamycin C i ett odlingsmedium och möjliggör fördelaktig framställning av cefamycin C i kommersiell skala. På basis av det ovan an- givna har föreliggande uppfinning fullbordats.

Enligt uppfinningen åstadkommas ett förfarande för framställ- ning av cefamycin C, som innefattar odling av stammen Streptomyces sp. OFR lO22 (ATCC nr 31666) i ett odlingsmedium till bildning av cefamycin C däri och utvinning av detta cefamycin C.

I figur l visas ett UV-absorptionsspektrum för cefamycin C, som erhållits vid förfarandet enligt uppfinningen; 'figur 2 utgör ett IR-absorptionsspektrum av detta cefa- mycin C; och figur 3 utgör ett protonkärnmagnetiskt resonansspektrum (NMR) för detta cefamycin C.

Den nya stammen Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666), som användes enligt uppfinningen, har en utomordentligt hög produktivitet med avseende på cefamycin C i jämförelse med kända cefamycin C-producerande stammar och vidare är den optimala odlingstemperaturen därför hög i jämförelse med temperaturen för de kända stammarna. Enligt uppfinningen kan man sålunda framställa cefamycin C utan att använda någon kylning och genom användning av förenklat arbetssätt och förenklad apparatur, varvid man med lätthet erhåller en markant större mängd till låg kostnad och med gott utbyte.

Uppfinningen avser sålunda ett markant effektivt förfarande för framställning av cefamycin C.

De mikrobiologiska egenskaperna för stammen Streptomyces sp.

OFR 1022 (ATCC 31666), som användes enligt uppfinningen, är 80014-43le-0 såsom följer: (I) Morfologiska kännetecken.

Observationsresultaten för stammen efter odling därav vid 28°C i 3 veckor är såsom följer: Luftmyceliet består av en huvudaxel och enkla grenar längs huvudaxeln. Dessa grenar bildar ofta klungor. Pâ kultur- mediet, som medger sporbildning, är grenen sällan i slingform och vanligen i en fullständig spiralform, varvid ett flertal varv förekommer. Sporen har en taggig yta och den är sfärisk eller elliptisk till formen och har storleken 0,7-l,0;4 x l,l-l,3;x. Tio eller flera sporer bildas i kedjeform.

(II) Odlingsegenskaper på olika agarmedia.

Observationsresultat för stammen efter odling därav vid 28°C i 3 veckor anges i tabell I. Färgtonen bestämmes med hän- visning till Color Harmony Manual, Container Corporation of America, Chicago, USA.

~PQ0R Quzxïifri* 8Û0lr43l+~0 uwmcH vfiøm >m Hmmm wmmflfi vwmam ßammwfim uwflfimßq mfim ~:5HQmn0U< mflm .øßnnwnoflm mom .mmonflnmm omm .ønšmm mmm .mnmHm>fiHm mfim mwcmcxflfimßwšëmw mwflmmnw>mm \c5nnmmmcmw mflflxflm wow mflm .øøunmmflwmr Anwmfiuwmv www .wHmum>flflm Emmummm mflw wwnmcxflflmumšâmm uommz _c5HQwmm:wm mfifixflm wow mmm .ßuflmm :mmm ~søunmflfifl mom wwcmcxflflmumšëmm .wmonfluwm mflfixfim pmuwøoz møw uwm _mflHH=»«z ~GmQnmmHw mflEuomuw>H5m møfifl umuwøoz umumwoä Eøflflwoæë Edfiflmoæâuwøfl uxw>HHHa lumnßmnsm .H fiflwnmü, Mmmm Hmßfimm mxwflnmmnoo mmfiwxhmww Hmmm øfimmummmm fionmoæflw Hmmá Qflmmummmm WOvÉUHÜ .

Hmmm umnvflz monmxumm 1 Eøfiwmë |wmGfiHUO 800443443 Hmm .ucøunmøfin vmmcH uwmcH uomdH mflm .»a=unmnow< UCGEWAN umflfimwq mmm mflm _mfluxmG5Hm .fiflunmmfiwm www now _wmvnm ~wumHw>HHm Imdwßcmmflm man .mxflfifimz mflm .flwšmm now .wanna lmcmnammam owm .flnfimm Ham mfim .asnnxfifiwwz .cflnnwnowm møfimmHw>mm_ Eflfifiwuwä |umuumn5m cmmnH mflm .uøunmmflmm mfiEu0muw>Hsm mflfixflm #H> mønmcxflamumiëmm wflfixfim uvmnm uøw .mflfluøumz wøflmcxflflmumäšmw mflflxflm ÉÜHHÜUNEMWÉÅ ..muuowv H Hflwnma mflflwn IPMHWUOÉ Anmufluwmv Emmummm wow UOU mflfimfl HMHUUOZ #Nm>HHflB Hmmm namn vmmh Goummm Hmmm HßwEwu>mm Hmwë uamä ummh Hmmm flwflmñ lwmcflumz Hmmá cfimonæfi Eßfiflwå ammafifiuo ...v -~v-.-.-_..*»-- 8004434-0 6 (III) Fysiologiska egenskaper. (l) Temperaturintervall för tillväxt (2) pH-intervall för tillväxt (3) Likvifaktion för gelatin (i ett glukos/pepton/- gelatin-medium, 2o°c) (4) Stärkelsehydrolys (i ett agarmedium innehållande stärkelse och oorganiska salter) (5) Koagulering och peptonisering av skummjölk (6) Bildning av melanoid- pigment (7) Reduktion av nitrat (8) Cellulosasönderdelning (9) NaCl-tolerans 15-4e°c (optimal tillväxt- temperatur ungefär 37°C) pH 4,5-8,5 (optimal tillväxt vid pH ungefär 6,5) Negativ Positiv Peptonisering Positiv (i tyrosin- agar, pepton/jäst/- järn-agar och en tryptonjästextrakt~ buljong) Negativ Negativ Tillväxt vid 3 % och ingen tillväxt vid 5 %.

(IV) Utnyttjande av kolkällor (på ett agarmedium enligt Pridham-Gottlieb).

L-arabinos D-xylos D-glukos D-fruktos Sackaros Inositol L-ramnos Raffinos -D-mannitol ++ + ++ ++ I ++ (I tabellen ovan betecknar ++ väl utnyttjad; + utnyttjad; 1 något utnyttjad; - icke utnyttjad). 800h43lr-0 7 (V) Diaminopimelinsyra i cellvägg.

LL-diaminopimelinsyra.

Föreliggande stam OFR 1022 (ATCC nr 31666) hör till släktet Streptomyces; enligt den internationella Streptomyces-projekt- metoden (ISP) tillhör det sporbildande myceliets morfologi sektionen Spirales, sporens yta är taggig, färgen för det mognade luftmyceliet tillhör Gray-färgserien och bildar ett melanoidpigment men nästan inga andra pigment. När man vidare beaktar det faktum att substratmyceliet och revers- sidan är blekgula - gulbruna eller ljusbruna till färgen och de olika data som beskrives ovan såsom de fysiologiska egenskaperna och utnyttjandet av kolkällor, har stammen enligt uppfinningen ansetts vara mest lika stammarna Streptomyces filipinensis och Streptomyces gannmycicus enligt ,Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 8:e upplagan (1974), S.A. Waksman, The Actinomycetes, volym 2 (1961) och E.B. Shirling och D. Gottlieb, International Journal of Systematic Bacteriology, volym 18, sid. 69-189 (1968), volym 18, sid. 279-392 (1968), volym 19, sid. 391-512 (1969) och volym 22, sid. 265-394 (1972).

Av denna anledning odlades stammen enligt uppfinningen och de typstammar som liknade den enligt uppfinningen under samma betingelser och jämfördes. Resultaten anges i tabell II.

POOR QÜÄLETY 3004434-oí umm:H wwflmuwm uwmGH mmflmuwm .mflfima Hmnflmm umu Hwaflm Hmnflmm :mama fl nmflflwm .mm cwmflfixmm lfløbøs Hm :wwcm |mm0B .cwnm flmxcm Nßmm mmH møofloæñøflmm mwoæšowmwnum ummflH omm .ßnñmm uuH> ~»mflsnow |Hw>Høm _wmHww02 Qflfi .flømfiflmummm .wøw Gw©nmmm0ß Ufl> wflcmcxflflxonx umflflm mumënow lmnfiflw .mømënom |flmHflmm uvmu .ummmflm Nfiflm mmw wflwcmnflmflfiflm mwoæäoummnuw uwm:H omm .flnšmm OUN .umfifluflumc .umfifinom |uw>Høm ~umHmUoE mom ~¶mmHmmmcmAcwmHm uumfi .umuwøoz Enommcflflm cmflfimm mms :oo >mHww cmflcmmmou fi >Hm> mnwfiw wwš mmfiënøwfimnflmm uwwflflm Hm _nomcSHx mumo umwfiflß .ëøflflmoæñ luuøfl ~:Hmxmu5>5n mmcwfi wmwflfin Hmflwuw mfixcm Åwwwflm nu uuamv NNOH MMO .mm mwoæëoummuum .HH fiflwnmü pamamflm umfifimwq mwflmmnmbwm Esflflmoæñvmøq nmmm|pmnuHG\m0Hmxumm a uxw>HHflB Euom muwflawuæëuwøq 800ls434~0 undan >m Hwmw mmm .wmmumuwoxflumm mønfl uafl> .umflfiwo omm .flnämn .v00 fiwmGH m.H .mad ~nmmHwwEmHM »»fi> .umfiflmo omm ~5nEmn .umumwoä nanm >m Hmmm mmm .fidmflcmfl www .mfluxmwnm ~®mvHm |Hw>Hflm ~flmnwflO2 man .flmwumummmnmw .wow man ~flømflcmA mmm .mfluxmcnum wflw uwmcH ~:ßHQmmmflmw wmsfifi .wwuwuoz »wmcH QUN .nwnfiwmflw ANN ummnH .ummuwmaflmn vmm>m _ßmHw©02 ß wflm LW Anm bm Hmmm .cdunmmflmm ww~ .umfivxm uw Hfiflu uu~ .ßmfiauflumc .umunm |Hm>Høm .ßwfiflxflm Hmw .cøunwmmcwm ~ ÜÜÜ Hmm .vfløunmdwn mmm _mwuxm:øHm flwmGH mfim _G5Hnwmfl0Q ßmmbm Hfifia umumwoä uwmflH now .wmmummwnmncmuflm uwmGH omm .SQEMA .mflflmn u0mcH mom ~mmouHHmm mmm .mmwwn Hfiflu www .pmflpxm Innan .wvfimcxflfi |m»mEEmm .umflaxflm mom .mwouanmm .umnwøoz unwamflm umfifimmq møflmwHm>wm Edfifiwoæšumflfl Hmmm|:Hwfi\ßmmw\z0»mmm w uxm>HafiH ßcwëmflm umflflmmn ßU«mmum>wm Eflfifiwoæšvuøfl ußmmmflwwmšmmnfiumc fl vNm>HHfiB unwämflm umflflmnfl mwHmwuø>mm Edflflwuæšuwfln Hmmm|cflwmnmmmm\m0xflfim w uxm>flHflB POOR QUALITY 800lr43l+~0 10 ^mm>mv >flufim0m + + Amfipwmflx. >«pflwom Amfipwmnxv >H»fiwom >fi»Hmom O.HH|m_w uomw wH> flxm>HHfi» wxofl noe uomw @«> pxm>HH«a >HuHwOm + >fl#flmOm >Huflm0m >flvmmoZ m.Oa|m~v uoow w«> »xm>HHH» wxufl :oo uo@« wfl>.»xw>HHfia >HummmZ ++ +++ >fl¥fim0m >fi#flmOm >flummwZ m.w1m.« o%wwÉ ßxm>HHfl» wgofl :oo _UOmw Ufi> uNm>HHfiB Fflflflflfi >M COHPMÖUNM nmmmcfiwøuæß Hmmm Inummumwficoummm mcofiadnuxmnukw |pmwfi:0um>HB ucwëmflmflflocmfimñ bm mcflnwfifln Hflflu mmmñumm mflfluwmflcoummm lwxflwfisasxw mmflonøæswwflwxnwfim cfiumflwm >ø =oflpxm«fl>xfiq _ uNm>Haflu Hmm HHm>Hwucfl|mm #Nw>HfiflQ ußu mcmumunumnwmëmu mH>n Hwmmxwcwmw mxmfimoflofimæm 8004143 læ-O ll kflmfiuvæøufl uommc umøxowuwn | nmmfivuæcuß ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ Hmnxowumß + flßnuuæauø wxofl nmcxømumn | Mwmfiauæcuø Hm> Hmcxowuwn ++ «.n.c ++ +| ++ +11 ++ -H H0u«ccmE|Q moøflummm wocšmunfl a0ufiw0cH woumxumm mouxøumun moxflfimxn moaæxio mocfinmnmufl uofiflmxfiox >m wwcmfi»ß>c»s >~._.__,_. _, POOR QUJf-.LITE 8004434-0 12 Tabell II anger: (1) Stammen enligt uppfinningen OFR 1022 (ATCC nr 31666) skiljer sig från Streptomyces filipinensis ISP 5112 på så sätt att Streptomyces filipinensis ISP 5112 har ett luft- mycelium i kvastform och toppänden därav är en tät spiral och i en slingform eller krokliknande form, substratfärgen för myceliet på glukos/asparagin~agarmedium är senapsbrun 2pl, reverssidan är beigebrun 3ig och uppvisar nitratredu- cerande förmåga och utnyttjar väl L-arabinos och raffinos; och (2) stammen enligt uppfinningen OFR 1022 (ATCC nr 31666) skiljer sig från Streptomyces gannmycicus ISP 5572 på så sätt att den övervägande andelen av luftmyceliet på Streptomyces gannmycicus ISP 5572 har formen av sektion RF (Rectiflexibiles) och är sällan i den något öppna spiralformen eller täta spi- ralformen, tillväxten på sackaros/nitrat-agarmedium är dålig och ingen utveckling av luftmycelium iakttages, å andra sidan förekommer utveckling av luftmycelium på näringsmedelsagar- medium och pepton/jäst/järn-agarmedium och vidare kan den inte växa vid 46°C, den kan förvätska gelatin och har för- måga att utnyttja kolkällor och särskilt väl utnyttjas L-arabinos, L-ramnos och raffinos, men sackaros utnyttjas inte.

Det framgår sålunda att stammen enligt uppfinningen OFR 1022 (ATCC nr 31666) är en ny stam som skiljer sig från Strepto- myces filipinensis och Streptomyces gannmycicus, vilka mest liknar stammen enligt uppfinningen.

Stammen enligt uppfinningen OFR 1022 (ATCC nr 31666) har betecknats Streptomyces sp. OFR 1022 och är deponerad vid Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ibaragi, Japan, under mikroorganismdeposi- tionsnumret FERM-P nr 4985 och vid American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 2Q852, USA, under depositionsnumret ATCC 31666. 80044344) 13 Det är väsentligt för föreliggande uppfinning att använda Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666) eller de naturliga eller artificiella mutanterna därav. Odlingen av stammen enligt uppfinningen eller mutanterna därav kan utföras på varje konventionellt odlingssätt, företrädesvis i ett vätskeformigt kulturmedium genom omskakning av odlingsvätskan eller under odling med luftning och omrörning.

Olika kända_näringsmedel för actinomycetes kan användas för odling av stammen enligt uppfinningen. Näringsmedel som kan användas såsom kolkällor innefattar glukos, sackaros, glyce- rol, maltos, dextrin, stärkelse, sojabönolja, bomullsfröolja och liknande. Näringsmedel som kan användas såsom kväve- källor innefattar sojabönmjöl, jordnötsmjöl, bomullsfrömjöl, jäst, fiskmjöl, majsstöpsvätska, pepton, jästextrakt, kött- extrakt, havremjöl, kaseinhydrolysat, natriumnitrat, ammo- niumnitrat, ammoniumsulfat och liknande. Oorganiska salter innefattar magnesiumsulfat, salt, fosforsyrasalter, kalcium- karbonat och liknande.

Om så erfordras kan till kulturmediet sättas en ringa mängd av ett metallsalt och lämpliga mängder av aminosyror såsom a-aminoadipinsyra, natriumtiosulfat, natriumditionit, glycin, L-fenylalanin, arginin och ornitin och diaminer såsom 1,3- -diaminopropan, l,3-diamino-2-hydroxipropan, polyaminer såsom spermidin och liknande. När det gäller odling i vätskeform kan silikon, vegetabilisk olja, ytaktiva medel och liknande tillsättas såsom skumningsförhindrande medel.

Odlingsmediets pH är från ungefär 4,0 till ungefär 8,0, före- trädesvis ungefär 6,0, och odlingstemperaturen är från unge- fär 1s°c till ungefär 46°c, företrädesvis ungefär 37°c. Den maximala producerade mängden av den önskade produkten cefamycin C kan vanligen erhållas inom en tidsperiod från 72 timmar till 96 timmar. vid odling i en 5-liters fermentor av typ "minijar“ är exempelvis den ansamlade mängden cefamycin C upp till ungefär 2 mg/ml. Cefamycin C är huvud- sakligen närvarande i odlingsvätskans vätskefas, emedan Poor QUALITY 8Û0le43lf~0 14 substansen är väl löslig i vatten.

När odlingen är avslutad avlägsnas mycelierna och andra fasta substanser genom centrífugering eller filtrering och den cefamycin C som är närvarande i filtratet isoleras och renas lätt på konventionellt sätt med användning av fysikaliska och kemiska egenskaper hos substansen. För sådan rening kan man effektivt använda en metod, varvid olika adsorbenter såsom ett jonbytarharts, kiselgel och aktivt kol användas. Exempel på sådana jonbytarhartser är sura katjonbytarhartser och basiska anjonbytarhartser. Starkt basiska anjonbytarhartser användes företrädesvis. Representativa exempel därpå är "Diaion PA 406" (framställd av Mitsubishi Chemical Co., Ltd.), "Dowex 5OWx4" (framställd av Dow Chemical Corp.), "Dowex lx2" (framställd av Dow Chemical Corp.), etc.

Den cefamycin C som är adsorberad på adsorbenten elueras med användning av vatten, saltlösning, metanol/vatten, n-butanol/- vatten, aceton/vatten eller liknande.

För rening av cefamycin C kan man använda en kromatografisk metod med användning av kiselgel eller "Avicel" (framställd av Asahi Kasei Kogyo, K.K.).

Genom lämplig kombination av de ovan beskrivna reningsmeto- derna och upprepning därav kan man erhålla rent cefamycin C.

De fysikaliska och kemiska egenskaperna för den cefamycin C som erhålles enligt uppfinningen anges nedan: (l) Utseende: Vitt pulver. (2) Specifik rotation: [zjšo = 221° (c=o,4, H20). (3) Löslighet: _ Löslig i vatten, något löslig i etanol och lätt löslig i dimetylsulfoxid. (4) (5) (6) (7) (8) (9) 800lr43lr~0 15 Färgreaktion: Positiv för ninhydrinreaktionen och jodoreaktionen, negativ för ferrikloridreaktionen.

Tunnskiktskromatografi (TLC): Framkallning utfördes med användning av en lösning av n-butanol/ättiksyra/vatten (2:l:l, volym/volym) på en tunnskiktskromatografisk platta, "Silica Gel GF 254" (framställd av Merk and Co.). Rf = 0,2.

Ultraviolettabsorptionsspektrum (UV): Såsom belyses av kurva (a) (lösningsmedel H20) och kurva (b) (lösningsmedel 0,1 N HCl) i figur l.

Maximal absorption och Eâ%cm-värdet för varje lösningsmedel anges i tabell III.

Tabell III.

Maximum- 1% Lösnings- _ N medel absorption (mn) Elcm Värde H20 240 - 265 127 0,1 N Hcl 245 -I 266 105 Infrarödabsorptionsspektrum (IR): IR-spektrum (KBr-tablett) visas i figur 2.

Protonkärnmagnetiskt resonansspektrum (NMR): NMR-spektrum visas i figur 3, varvid D20 användes såsom lösningsmedel och DSS användes såsom ett inre standardreagens och frekvensen var 60 MHz.

Aminosyraanalys: Analys efter hyarolys med 4 N Hcl vid 11o°c 1 4 timmar bekräftade att Q-aminoadipinsyra och glycin bildades.

De antimikrobiella spektra för olika mikroorganis- mer med avseende på cefamycin C framställd enligt uppfinningen visas såsom minsta inhiberande kon- centrationer (MlC) i tabell IV. wu-Jaim- vf~f~'^i°^1ïA1.1fsY 80Üløh3l+~0 16 Tabell IV.

Test nr Testorganism _ MIC (gg/ml) 1 Bacillus subtilis PCI 219 15,6 2 Staphylococcus aureus 250 FDA 209P 3 Staphylococcus aureus 250 Newman Sarcina lutea PCI 1001 15,6 Salmonella typhi O-901 3,9 NCTC 8393 Proteus vulgaris IID OX-19 - 7,8 Proteus mirabilis 1287 7,8 Esherichia coli NIHJ 15,6 De ovannämnda fysikaliska och kemiska egenskaperna och de antimikrobiella spektra överensstämmer väl med de för känt cefamycin C, exempelvis såsom anges i den japanska patent- ansökan (OPI) nr 3286/1971.

Följande exempel belyser uppfinningen närmare men uppfinning- en är icke begränsad därtill. Alla procenttal hänför sig till vikten.

Exempel l.

Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666), som inkuberats i ett havremjölsagarmedium, inokulerades i ett flytande kultur- medium innehållande 3 % stärkelse, 0,5 % sackaros, l % soja- bönmjöl och 0,3 % torrjäst och hade ett pH av 7 och inkube- rades under omskakning vid 37oC i 48 timmar för erhållning av en frökulturlösning.

I en fermentor med 30-liters volym infördes 20 liter kultur- medium innehållande 3 % stärkelse, 1 % sackaros, 2 % bomulls- frömjöl, l % torrjäst, 0,05 % magnesiumsulfat, 0,02 % kalium- divätefosfat, 0,05 % dinatriummonovätefosfat och 0,5 % silikon (framställd av Shinetsu Chemical Co,, Ltd.) såsom skumningsförhindrande medel (efter sterilisation var pH = 6,0), varpå den ovannämnda frökulturlösningen därefter inokulerades vid en mängd av l % och inkuberades under luftning vid 37°C. 8G04lr34~0 17 Luftningsvolymen var 20 liter/minut och propellerns rota- tionshastighet var 300 varv/minut.

Efter odling i 90 timmar nådde den bildade mängden cefamycin C 2 mg/ml. Detta bestämdes med användning av höghastighets- vätskekromatografi under följande mätningsbetingelser: Pump: Typ "6000 A" från Japan Waters Co., Ltd.

Injektor: Typ “U6K" från Japan Waters Co., Ltd.

Detektor: Typ "SPD l" från Shimazu Seisakusho Ltd.

Kolonn: Typ "Micro-Bandapack C-18", 4 mmidx30 cm, från Japan Waters Co., Ltd.

Mobil fas: 0,01 M - ättiksyra Flödeshastighet: 2 ml/minut Detektion: UV 254 nm, 0,16 AUFS Karthastighet: 0,5 cm/minut.

Efter avslutad odling underkastades kulturlösningen centri- fugeringsseparation för avlägsnande av mycelier och filtratet som hade en volym av 18 liter inställdes på pH 7-8 och adsor- berades på 3 liter "Diaion PA 406". Därefter eluerades med en 0,5 M vattenlösning av natriumklorid för erhållning av 2 liter av en antimikrobiellt aktiv fraktion. Denna fraktion koncentrerades under förminskat tryck vid ungefär 30°C. Den koncentrerade lösningen hade en volym av 200 ml och fördes genom 400 ml “Silica Gel ODS" (framställd av Waters Co.) och koncentrerades åter. Den så koncentrerade lösningen under- kastades reversfaskromatografi med 0,01 M ättiksyra på en kolonn av "Silica Gel ODS" med måtten 5,35 cm diameter och 120 cm längd.

Aktiva fraktioner tillvaratogs och frystorkades för erhâllning av 18 g vit pulverformig cefamycin C. De fysikaliska och kemiska egenskaperna för den erhållna föreningen undersöktes och visade sig vara desamma som ovan beskrivits.

Exempel 2.

Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666) odlades på samma Éöon 8004434-0 18 sätt som beskrivits i exempel 1 och odlingsvätskan filtrerades för erhållning av 20 liter filtrat. Filtratet adsorberades på 1,5 liter "Diaion PA 406" av typ Cl (framställd av Mitsubishi Chemical Co., Ltd.). Därefter tvättades kolonnen med avjoniserat vatten i en mängd som var 4 gånger större än kolonnens volym och därefter eluerades med l M vattenlösning av NaCl för erhållning av 2,5 liter av en antimikrobiellt aktiv fraktion. Denna fraktion inställdes på pH l med 4 N klorvätesyra och NaCl sattes därtill, så att den slutliga koncentrationen blev 4 M (mol/liter). Den erhållna lösningen adsorberades på en kolonn (2 liter) av "Diaion HP 20" (fram- ställd av Mitsubishi Chemical Co., Ltd.) och eluerades med vatten. Den avsedda föreningen cefamycin C eluerades när eluatets pH blev ungefär 4. Därefter tillvaratogs eluatet tills mängden uppgick till 1,5 liter och detta frystorkades för erhållning av 24 g qitt pulver av cefamycin C.

De fysikaliska och kemiska egenskaperna för den erhållna produkten undersöktes och visade sig väl motsvara de som beskrivits i exempel 1.

Produktiviteten för cefamycin C med stammen OFR 1022 (ATCC nr 31666) jämfördes med produktiviteten för de kända stam- marna som anges i de olika hänvisningarna och resultaten anges i tabell V nedan. 80011434-0 19 Gwmfiwüflfimmmfl umflfiflm >>\H>Omw ^HmO. nmxwmcmvcmumm mxmnmmmh omm.o>».m uwunwpmm mxwqmxfiuwam ~«@.»~m.m pwpnwpmm mxmcmgflumeæ w>\ßmooHH AHmov ømxßmflmvcwumm mxmnmmmh m>\«m~m@ ^Hmov cmxmmcmucmvmm mxmcmmmh mmm.mmæ.m Mwnüwumß mxmfimxflhwšá WCUHÜM.. Nm ~w»fiH\us ooow nw»«H\ms omm uwpflH\ma Hmflfi Hw»HH\ms www um»flH\wa omm uwu«H\wa oo~ HwßflH\ms ow mxmum>mmcfiH©o w 0 Cwumfimuwo wuwnvn .> aawflmü Awwwfim HC UUB -oH mmo .mm mmdwmšmvomfl møHmmfiHd>mHu H~wwm .mm ïmmcwmämvomfl mHm:wfiw:0EDfi mwuæëovmwuum Oßflfl OUMU mmohšoummuum mmuæñoummuum mwomšoßmwuuw mmomëoummuum mmuæñoumwuum ENMW BÛÛIIABLx-Û 20 Av tabell V framgår att Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666), som användes enligt uppfinningen, ger utmärkt utbyte av cefamycin C i jämförelse med tidigare kända stammar av Streptomyces.

Uppfinningen har beskrivits i detalj och med hänvisning till specifika utföringsformer därav, men det är uppenbart för en fackman att olika förändringar och modifikationer kan göras utan att uppfinningstanken frângås. fÅJ- ' ' “' -ál-:flimm- -du-n' «-- n' » - ~ --~ - wí -~ *P ~ ^- -1- *e -Mfl n main-LM. _...._._,_.__.-.....,-.n-A.;4,._,_...., ...__ u.. ..n~*'^^

Claims (3)

ål PATENTKRAV

1. Förfarande för framställning av cefamycin C, k ä n - n e t e c k n a t därav, att man odlar Streptomyces sp. OFR 1022 (ATCC nr 31666) i ett odlingsmedium för bildning av cefamycin C däri och utvinning av denna substans.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k - n a t därav, att mikroorganismen odlas vid en temperatur av 15-46°c.

3. Förfarande enligt patentkravet 2, k ä n n e t e c k - n a t därav, att mikroorganismen odlas vid en temperatur av 37°c. 800h434~0 New-___... w» 'n fM jfi' f! UF! rw-rw w- , f... V "v" 1.» 'Ü \': .¿'|