FR2459289A1

FR2459289A1 - Procede de preparation de l'antibiotique cephamycine c

Info

Publication number: FR2459289A1
Application number: FR8013330A
Authority: FR
Inventors: Takashi Kamogashira; Tsutomu Nishida; Michiharu Sugawara; Tomiyo Nihno; Setsuko Takegata
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1979-06-15
Filing date: 1980-06-16
Publication date: 1981-01-09
Also published as: AU5929380A; GB2052502A; US4332891A; ES8104414A1; GB2052502B; SE438164B; IT1146229B; ES492443A0; NL8003449A; CH646996A5; JPS594120B2; JPS561894A; CA1150167A; DE3022250A1; AU527100B2; SE8004434L; NL183898B; IT8048978A0; FR2459289B1; NL183898C

Abstract

PROCEDE DE PREPARATION DE L'ANTIBIOTIQUE CONNU CEPHAMYCINE C. ON CULTIVE UNE NOUVELLE SOUCHE DE STREPTOMYCES, STREPTOMYCES SP. OFR 1022 DANS UN MILIEU DANS LEQUEL L'ANTIBIOTIQUE S'ACCUMULE ET D'OU ON LE RECUEILLE.

Description

La présente invention se rapporte à un procédé pour la préparation de

l'antibiotique céphamycine C. La céphamycine C est un antibiotique connu,

l'acide 7 - (5-amino-5-carboxyvalérylamino)-3-carbamoyloxyméthyl-7-

méthoxy-3-céphème-4-carboxylique répondant à la formule plane ci- après:

OCH3 S

H2N-CH(CH2)3 -CHN

2, 2 3, i

COOH O 2CH 2CNH

iH0,CN2

COOH

On a déjà proposé des procédés variés de prépara-

tion de la céphamycine C faisant appel a des souches de Streptomyces.

Ainsi, par exemple, on a utilisé S. jumonjiensis, S. lactamgenes, S. sp. P6621, S. clavuligerus, S. lactamdulans (cf. brevets des Etats-Unis d'Amérique n 3 770 590, 3 865 693 et 3 977 942, brevet britannique n 1 425 081, brevets japonais n 69 294/75 et 110 097/76

et demande de brevet japonais publiée sous n 49 071/77).

On souhaiterait vivement préparer, à l'aide de micro-organismes, la céphamycine C avec des rendements très supérieurs

et de manière plus simple.

Après des recherches approfondies, la demanderesse a trouvé qu'une nouvelle souche, Streptomyces sp. OFR 1022, isolée du sol au Kenya, donnait dans un milieu de culture de grandes quantités

de céphamycine C et permettait de préparer avantageusement cet anti-

biotique à l'échelle industrielle. Ce sont ces découvertes qui sont

& la base de la présente invention.

L'invention concerne donc un procédé de préparation de la céphamycine C, procédé caractérisé en ce que l'on cultive la souche Streptomyces Sp. OFR 1022 dans un milieu de culture dans lequel

la céphamycine C s'accumule et on la recueille.

D'autres caractéristiques et avantages de l'inven-

tion ressortiront plus particulièrement de la description détaillée

donnée ci-après en référence aux figures des dessins annexes, dans lesquels: - la figure 1 représente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet de la céphamycine C obtenue conformément à l'invention; - la figure 2 représente le spectre d'absorption dans l'infrarouge de la même céphamycine C; et - -J afigure 3 représente le spectre de résonance magnétique nucléaire protonique (RMN) de la même céphamycine C. La nouvelle souche Streptomyces sp. OFR 1022

utilisée dans l'invention, comparativement aux souches connues pro-

ductrices de c9phamycine C, possède à l'égardde cet antibiotique une productivité remarquable; d'autre part, la température de culture optimale pour la souche selon l'invention est plus élevée que la température de culture optimale pour les souches connues. Par suite, et conformément à l'invention, on peut préparer la céphamycine C

sans procéder à un quelconque refroidissement, avec un mode opéra-

toire et des appareillages simplifiés, avec une grande aisance, un

bas prix de revient et de bons rendements.

Le procédé selon l'invention constitue donc un

procédé remarquablement efficace pour la préparation de la cépha-

mycine C. Les propriétés microbiologiques de la souche Streptomyces sp. OFR 1022 qu'on utilise dans l'invention sont les suivantes. (1) Caractéristiques morphologiques On donne ci-après les résultats d'observation

effectués sur la souche après culture de trois semaines à 280C.

Le mycélium aérien consiste en l'axe principal et des ramifications simples de cet axe. Ces ramifications forment

fréquemment des grappes. Sur un milieu de culture permettant la for-

nation de spores, la ramification présente rarement la forme de

boucle et; habituellement, elle est sous une forme entièrement héli-

coldale refermée sur plusieurs spires. La spore a une surface épi-

neuse, elle est de forme sphérique ou elliptique avec une dimension de 0, 7 à 1,0,p x 1,1 à 1,3 la. Il y a formation de dix ou plusieurs

spores en chalne.

(2) Caractéristiques des cultures sur divers milieux gélosés

On trouvera dans le tableau I ci-après les résul-

tats d'observation effectués bur la souche après culture de trois semaines à 28C. La coloration est déterminée par référence à l'ouvrage Color Harmony Manual, Container Corporation of America,

Chicago, Etats-Unis d'Amérique.

(3) Propriétés physiologiques (I) intervalle de température de croissance (II) intervalle des pH de croissance: (III) liquéfaction de la gélatine (dans un milieu glucose-peptone-gélatine, 20 C (IV) hydrolyse de l'amidon (dans un milieu gélosé amidon-sels minéraux) (V) coagulation et peptonisation du lait écrémé (VI) production de pigment mélanolde (VII) réduction des nitrates (VIII) décomposition des celluloses (IX) tolérance à NaCl

à 46 C (tempéra-

ture de croissance optimale environ 37 C)

4,5 à 8,5 (crois-

sance optimale à pH 6,5 environ) négative positive positive positive (dans une gélose à la tyrosine, dans une gélose à la peptone, levure, fer et dans un bouillon à la tryptone et à l'extrait de levure) négative négative croissance à 3 %; absence de croissance à 5% (4) Utilisation des sources de carbone (sur un milieu gélosé Pridham-Gottlieb) L-arabinose + D-xylose + D-glucose ++ D-fructose + saccharose ++ inositol ++ L-rhamnose raffinose + D-mannitol ++ (Nota: -++: bonne utilisation; +: utilisation;

+: légère utilisation; -: non utilisé.

(5) Acide diaminopimélique dans la paroi cellulaire Acide LLdiaminopiméligue La souche en question OFR 1022-appartient au genre Streptomyces; selon la méthode de l'International Streptomyces

"/> 5 Project (ISP), la morphologie du mycélium formant les spores appar-

tient à celle de la section Spirales, la surface de la spore est épineuse, la couleur du mycélium aérien à maturation se situe dans la série des colorations grises, et la souche produite a un pigment mélanoTde, mais presque pas d'autres pigments. En outre, tenu compte

du fait que le mycélium sur substrat et la face inverse sont de colo-

ration jaune pâle-brun-jaune ou brun clair, et tenu compte des diverses

caractéristiques décrites ci-dessus, telles que les propriétés physio-

logiques et l'utilisation des sources de carbone, la souche selon l'invention a été considérée comme une souche des plus semblables & Streptomyces filipinensis et Streptomyces gannmycicus selon le Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8e édition (1974), . S.A. Waksman, The Actinomycetes, volume 2. (1961) et E.B. Shirling et D. Gottlieb, International Journal of Systematic Bacteriology, -,': volume 18, pages 69 à 189 (1968), volume 18, pages 279 à 392 (1968),

-'" 20 volume 19, pages 391 à 512 (1969) et volume 22, pages 265 à 395 (1972).

:.,- -On a donc cultivé la souche selon l'invention et les souches semblables dans les mêmes conditions et on a comparé les

résultats obtenus qui sont rapportés dans le tableau II ci-après.

:?' Les résultats rapportésdans le tableau II ci-après montrent que: "S (1) la souche selon l'invention OFR 1022 diffère de la

souche Streptomyces filipinensis ISP 5112 en ce que, avec cette der-

< nière, le mycélium aérien est sous forme touffue avec son extrémité

supérieure en forme d'hélice serrée et en forme de boucle ou de cro-

chet, la coloration du mycélium sur substrat, sur milieu de gélose-

glucose-asparagine, est brun-moutarde 2pl, la face inverse est brun-

beige 3ig, la souche est capable de réduire les nitrates et elle uti-

4' lise bien le L-arabinose et le raffinose; et (2) la souche selon l'invention OFR 1022 diffère de la i," 35 souche Streptomyces gannmycicus ISP 5572 en ce que la plus grande partie du mycélium aérien de cette dernière est sous la forme de la section RF (Rectiflexibiles) et rarement en forme d'hélice légèrement

ouverte ou d'hélice serrée, la croissance sur milieu de gélose-saccha-

rose-nitrate est faible et il n'y a pas de développement du mycélium aérien; par contre, on observe le développement du mycélium aérien sur milieu de gélose nutritive et milieu de gélose à la peptone-levure- fer, et la souche ne peut pas croître à 46WC; elle peut liquéfier la gélatine et est capable d'utiliser les sources de carbone; en particulier, elle utilise bien le L-arabinose, le L-rhamnose et le

raffinose, mais elle n'utilise pas le saccharose.

On peut donc constater que la souche selon l'invention OFR 1022 est une souche nouvelle qui diffère de Streptomyces

filipinensis et Streptomyces gannmycicus, les souches les plus sem-

blables. La souche selon l'invention a donc été appelée Streptomyces sp. OFR 1022 et déposée le 18 mai 1979 au Fermentation Institute, the Agency of Industrial Science and Technology, Ibaragi, Japon, sous le nnuméro de dépôt de micro-organisme FERM-P n0 4985 et à l'American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland

20852, Etats-Unis d'Amérique, sous le numéro de dépôt 31666 ATCC.

Il est essentiel, conformément à l'invention, d'utiliser

la souche Streptomyces sp. OFR 1022 ou les mutants naturels ou artifi-

ciels de cette souche. La souche selon l'invention et ses mutants peuvent être cultivée par des techniques de culture classiques, de préférence dans un milieu de culture liquide, sous secousses ou en

culture aérée sous agitation.

Pour la culture de la souche selon l'invention, on peut faire appel à des substances nutritives variées et connues pour les actinomycètes. On peut ainsi utiliser des sources de carbone, telles que le glucose, le saccharose, le glycérol, le maltose, la dextrine,

l'amidon> l'huile & soja, l'huile de coton et des substances analogues.

Comme sources d'azote, on citera la farine de soja, la farine d'ara-

chide, la farine de coton, la levure, la farine de poisson, la liqueur de macération de mals, la peptone, l'extrait de levure, l'extrait de viande, la farine d'avoine, l'hydrolysat de caséine, le nitrate de sodium, le nitrate d'ammonium, le sulfate d'ammonium et les substances analogues. Parmi les sels minéraux, on peut utiliser le sulfate de magnésium, le chlorure de sodium, des phosphates, le carbonate de

calcium et les sels minéraux analogues.

Lorsqu'on le désire ou lorsque c'est nécessaire, on peut ajouter au milieu de culture une petite quantité d'un sel métallique et des proportions appropriées d'aminoacides, tels que l'acide a- aminoadipique, ou encore du thiosulfate de sodium, de l'hydrosulfite de sodium, de la glycine, de la L-phénylalanine, de l'arginine, de l'ornithine ou des diamines, telles que le 1,3-diaminopropane, le 1,3-diamino-2- hydroxypropane, des polyamines telles que la spermidine et des substances analogues. Dans le cas de cultures en milieu liquide, on peut ajouter comme agents antimousses des silicones, des huiles

végétales, des agents tensioactifs et des substances analogues.

Le pH du milieu de culture va d'environ 4,0 à 8,0; il est de préférence d'environ 6,0 et la température de culture se situe

entre 15 et 46 C environ et, de préférence, aux environs de 37 C.

Habituellement, on parvient à la production maximale de la cépha-

mycine C recherchée en une durée de 72 à 96 h. Ainsi, par exemple, lorsqu'on cultive dans un appareil

de fermentation du type petit flacon de 5 1 de capacité, on peut accu-

muler jusqu'à 2 mg environ/ml de céphamycine C. Celle-ci est présente principalement dans la partie liquide du milieu de culture parce qu'elle

est bien soluble dans l'eau.

Lorsque la culture est terminée, on élimine le mycélium et les autres matières solides par centrifugation ou par filtration et on isole facilement la céphamycine C présente dans le filtrat; on la purifie par des techniques classiques exploitant ses propriétés

physiques et chimiques. Ainsi, on peut utiliser efficacement un pro-

cédé faisant appel à des adsorbants variés tels qu'une résine échan-

geuse d'ions, du gel de silice, du charbon actif. Parmi les résines échangeuses d'ions qui conviennent, on citera des résines échangeuses de cations acides et des résines échangeuses d'anions basiques. On utilise de préférence des résines échangeuses d'anions fortement basiques et, par exemple, des résines du commerce Diaion PA 406 de la Firme Mitsubishi Chemical Co., Ltd., Japon, Dowex 5OWx4 de la Firme Dow Chemical Corp., Etats-Unis d'Amérique, ou Dowex lx2 de la même

Firme, et des résines analogues.

La céphamycine C retenue sur l'adsorbant est éluée à l'aide d'eau, de saumure, d'un mélange méthanol-eau, d'un mélange

n-butanol/eau, d'un mélange acétone/eau ou d'un liquide analogue.

Pour purifier la céphamycine C, on peut exploiter une technique chramatographique utilisant du gel de silice ou le produit

du commerce Avicel de la Firme Asahi Kasei Kogyo, K.K., Japon.

En combinant de manière appropriée les techniques de pu-

rification mentionnées ci-dessus et en répétant ces opérations combi-

nées, on peut parvenir a la céphamycine C pure.

On donne ci-après les propriétés physiques et chimiques de la céphamycine C obtenue conformément à l'invention: (1) Aspect: poudre blanche (2) Rotation spécifique: [a]D = 2210 (C=O,4, H20) (3) Solubilité: soluble dans l'eau, peu soluble dans

l'éthanol et légèrement soluble dans le diméthyl-

sulfoxyde (4) Réactions colorées:réaction à la ninhydrine positive; réaction à l'iode positive; réaction au chlorure ferrique négative (5) 'hromatographie sur couche mince (TLC): On a développé & l'aide d'une solution n-butanol/acide acétique/eau, 2:1:1 en volume, sur une plaque pour chromatographie sur couche mince, la plaque Silica Gel GF 254 de la Firme Merck and Co.

On trouve Rf = 0,2.

(6) Spectre d'absorption dans l'ultraviolet (UV): Ce spectre est représenté dans la figure 1 des dessins annexés par la courbe (a) (solvant: 20) et la courbe (b) (solvant:

HC1l OalN). On trouvera dans le tableau III ci-après les maximas d'ab-

sorption et la valeur E1%cm pour chacun des solvants.

sorpion t l valur 1 cm (7) Spectre d'absorption dans l'infrarouge (IR): Ce spectre (comprimé de KBr) est représenté dans la

figure 2 des dessins annexés.

(8) Spectre de résonance magnétique nucléaire protonique (RmN) Ce spectre est représenté dans la figure 3 des dessins annexés; le solvant est D20 et l'étalon interne le DSS; fréquence: MHz.

? Z459289

(9) Analyse des aminoacides L'analyse après hydrolyse par HCl 4N à 110 C pendant

4 h confirme la formation de i'acide a-aminoadipique et de la glycine.

Le spectre antimicrobien de la céphamycine C obtenue t 5.conformément à l'invention à l'égard de micro-organismes variés est - i illustré dans le tableau IV ci-après par les concentrations minimales

inhibitrices (CMI) a l'égard de chacun de ces micro-organismes.

Les propriétés physiques et chimiques ainsi que le spectre antimicrobien rapportés ci-dessus concordent bien avec ceux de la céphamycine C connue, tels que décrits par exemple dans la demande

de brevet japonais publiée n 3286/1971.

I"':: Les exemples suivants illustrent l'invention sans toute-

fois en limiter la portée; dans ces exemples, les indications de

:; parties et de % s'entendent en poids sauf mention contraire.

EXEMPLE 1

'U - - On part de Streptomyces sp. OFR 1022 qui a été soumis a .. incubation sur un milieu de gélose à la farine d'avoine; à l'aide

. de ce micro-organisme, on inocule un milieu de culture liquide conte-

nant 3 % d'amidon, 0,5 % de saccharose, 1 % de farine de soja et 0,3 % de levure sèche, pH 7, et on soumet à incubation de 48 h sous

secousses à 37 C en vue de former une solution de culture d'ensemen-

:; cement.

Dans un fermenteur de 30 1 de volume, on place 20 1 de -; - milieu de culture contenant 3 % d'amidon, 1 % de saccharose, 2 % de farine de coton, 1 % de levure sèche, 0,05 % de sulfate de magnésium,

0,02 % d'orthophosphate monopotassique, 0,05 % d'orthophosphate diso-

dique et 0,5 % de silicone (de la firme Shinetsu Chemical Co., Ltd., :' Japon)' qui sert d'agent antimousse (après stérilisation, pH 6,0); on inocule ce milieu par la solution de culture préparée ci-dessus, - 30 à raison de 1 % et on soumet à incubation sous aération à 37 C. Le débit d'air d'aération est de 20 1/min et l'agitateur tourne à

300 tr/min.

Après 90 h de culture, la quantité de céphamycine C pro-

rq duite atteint 2 mg/ml. Cette concentration est déterminée par chroma-

tographie de liquide à haute vitesse dans les conditions de mesure , - ciaprès: zi, t pompe: type 6000 A dela Firme Japan Waters Co., Ltd. injecteur: type U6K de la Firme Japan Waters Co., Ltd. détecteur: SPD 1 de la firme Shimazu Seisakusho Ltd.

colonne: Micro-Bandapack C-18, 4 mm de diamètre inté-

rieur x 30 cm, de la Firme Japan Waters phase mobile: acide acétique 0,01 M débit: 2 ml/min détection: UV 254 nm 0,16 AUFS vitesse du graphique: 0, 5 cm/min Après culture, la solution est traitée par centrifugation pour élimination du mycélium; le filtrat en quantité de 18 1 est réglé & pH 78 et adsorbé sur 3 1 de résine Diaion PA 406. On élue ensuite (A l'aide d'une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,5M); on obtient 2 1 d'une fraction antimicrobienne active. On concentre cette fraction sous vide à 30 C environ. Le concentré de 200 ml est passé sur 400 ml de gel de silice (Silica Gel ODS de la Firme Waters Co.) puis & nouveau concentré. La solution concentrée est soumise & chromatographie en phase inversée avec de l'acide acétique,01M sur une colonne de Silica Gel ODS de 5,35 cm de diamètre x 120 cm

de longueur.

On recueille les fractions actives et on les lyophilise; on obtient 10 mg de déphamycine C pulvérulente blanche. Les propriétés physiques et chimiques de cette substance sont les mêmes que celles

décrites ci-dessus.

EXEMPLE 2

On cultive Streptomyces sp 0FR 1022 comme décrit dans l'exemple 1 et on filtre le bouillon de culture; on obtient 20 1 de filtrat qu'on adsorbe sur 1,5 1 de résine Diaion PA 406 type C1 de la firme Mitsubishi Chemical Co., Ltd.). On lave ensuite la colonne à l'eau déminéralisée en quantité de 4 volumes de colonne et on élue par une solution aqueuse M de NaCl; on obtient 2,5 1 de fraction antimicrobienne active. On règle cette fraction à pH 1 par HC1 4N et on ajoute NaCl jusqu'à concentration finale 4M. On adsorbe la solution sur une colonne de 2 1 de rdsine Diaion HP 20 de la firme Mitaubishi Chemical Co., Ltd. et on élue a l'eau. Le composé recherché, la céphamycine C, est élué au moment o le pH de l'éluat atteint 4 environ. On recueille ensuite l'éluat jusqu'b volume total de 1, 5 1 et on lyophilise; on obtient 24 g de céphamycine C à l'état de

poudre blanche.

L'examen des propriétés physiques et chimiques de cette substance montre que ce sont les mêmes que celles décrites dans

l'exemple 1.

On a comparé la productivité en céphamycine C de la souche OFR 1022 selon l'invention à celle de souches connues, telle >; que rapportée dans les publications antérieures citées dans le

tableau V ci-après.

Les résultats rapportés dans le tableau V ci-après montrent que la souche Streptomyces sp. 0FR 1022 utilisée conformément à l'invention donne, comparativement aux souches de Streptomyces utilisées antérieurement, un meilleur rendement en céphamycine C. Il est clair que l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation préférés décrits ci-dessus à titre d'exemples et que l'hompe de l'art peut y apporter des modifications variées sans

pour autant sortir de son cadre.

ISM

TABLEAU I

Milieu de culture I Croissance Mycélium aérien Mycélium sur substrat Face inverse Pigment soluble 1 i su susrt aeivrs imn oul Gélose, saccharose, nitrate Gélose, glucose, asparagine Gélose, glycérine, asparagine Gélose, amidon, sels minéraux Gélose, tyrosine Gélose nutritive Gélose, levure, malt Gélose, farine d'avoine Gélose, peptone, levure, fer modérée modérée bonne, quelque peu éparse (périphérique) bonne modérée mauaise bonne bonne, éparse (périphérique) modérée-faibl modéré, poudreux, naturel, 2dc abondant, beige voilé velouté, beige 2ge,.3ge abondant, gris argent velouté, 3fe, brun-beige, 3ig gris argent velouté, abondant, 3fe abondant, naturel velouté, 2dc néant abondant, blanc velouté

abondant, brun-

beige poudreux, 3ig néant ivoire pale, 2ca rose perle, 3ca moutarde, 21g moutarde, 21g brun brique, 31g bambou, 2gc chameau, 3iu nuance ivoire, 2cb brun-beige, 3ig bambou, 2gc rose perle, 3ca brun brique, 31g brun brique, 31g brun girofle, 3ni nuance ivoire, 2cb cannelle, 31e gris argent, 3fe beige voilé, 2ge néant néant trace de jaune néant brun brique, 31g néant néant néant brun sombre, 3pl D-. 1-. N oe o i j 4,

TABLEAU II

Streptomyces sp. OFR 1022 StreDtomvces filipinensis Streptomyces gannmycicus

ISP 5112 ISP 5572

Forme de mycélium aérien il y a formation de ramifi- hélice, touffu, serré, ramification simple, cations simples le long de boucle ou crochet à l'extrémité supérieure l'axe principal, mycélium l'extrémité supérieure est principalement RF, aérien formant souvent des rarement en hélice grappes, formant des hélices ouverte ou hélice serrée fermées enroulées plusieurs

fois à l'extrémité supé-

rieure, rarement en forme de boucle Croissance sur gélose modérée, ivoire clair, 2ca bonne, jaune pastel, faible, incolore au saccharose et au ldb nitrate Mycélium aérien modéré, poudreux, naturel, modéré, poudreux blanc néant 2dc Face inverse bambou, 2gc bambou, 2gc incolore Pigment soluble néant néant néant Croissance sur gélose rose perle, modérée, 3ca bonne, brun-moutarde, bonne, moutarde, 21e au glucose et à l'aspa- 2pl ragine Mycélium aérien abondant, beige voilé abondant, poudreux, na- modéré, poudreux, gris velouté, 2ge à beige, 3ge turel, 2dc à gris voilé, voilé, 2fe 2fe Face inverse rose perle, 3ca brun-beige, 3ig bois d'érable jaune, 3ng Pigment soluble | néant trace de jaune trace de jaune [Pgmn soul, _n tr, N %0 Co ; - ic TABLEAU II (suite 1) !Streptomyces sp. OFR 1022 Streptomyces filipinensis Streptomyces gannmycicus

|I ISP 5112 ISP 5572

i Croissance sur gélose faible, bambou, 2gc modérée, faible, paille, modérée, bambou, 2gc nutritive 2fb Mycélium aérien néant néant faible, blanc Face inverse nuance ivoire, 2cb ivoire, 2db crème, 1 1/2 ca Pigment soluble néant néant néant Croissance sur gélose modérée à faible, brunmodérée, beige moutarde bonne, bambou, 2gc à la peptone, à la beige, 3ig p8le, 2ie levure et au fer Mycélium aérien néant néant faible,bblanc Face inverse beige voilé, 2ge beige voilé, abricot clair, 2ea jPigment soluble brun sombre, 3pl bois d'érable jaune, 3ng trace de brun Propriétés physiologiques Limite supérieure des croissance à 46 C; pas croissance à 46 C; pas croissance à 42 C; pas températures de crois- de croissance a 600C de croissance à 60 C de croissance à 46 C sance Intervalle des pHli de 4,5 à 8,5 4,5 a 10,5 4,5 à 11,0 croissance Liquéfaction de la négative négative positive gélatine Hydrolyse de l'amidon positive positive positive (forte) Peptonisation du lait positive positive I positive (forte) écrémé] I -.O Do N ro Co %0 :'':'-'=.i1..

* - *x. - -

TABIZAU II (suite 2) Nota: ++ - bonne utilisation; +: utilisation; +: faible utilisation; -: non-utilisation Streptomyces sp. OFR 1022 Streptomyces filipinensis Streptomyces gannmycicus

ISP 5112 ISP 5572

Capacité de production de pigment mélanoide bouillon de tryptone- + + extrait de levure gélose à la peptone- |H: + + levure-fer gélose à la tyrosine ++ + + Réduction des nitrates négative positive positive (faible) Utilisation des sources d de carbone L-arabinose + ++. ++ D-xylose + + + D-glucose ++ ++ 4+ D-fructose + 4+ ++

saccharose 4+ + -

Inositol ++ ++ 4+ L-rhamnose ++ Raffinose + ++ ++ D-mannitol +H 4+ 4+ I-a 1" ri vo

TABLEAU III

Solvant |Maximas d'absorption (m) 1 E1 cm

H20 240

265 127

lCi 0,1 N 245

266 105

TABLEAU IV

Essai Micro-organisme CI (U/ml 1 Bacillus subtilis PCI 219 15,6 2 Staphylococcus aureus FDAI 209P 250 3 Staphylococcus aureus Newman 250 4 Sarcina lutea PCI 1001 15,6 Salmonella typhi 0-901 NCTC 8393 3,9 6 Proteus vulgaris IID OX-19 7,8 7 Proteus mirabilis 1287 7,8 8 Escherichia coli NIHJ 15,6

TABLEAU V

Souche Rendement du bouillon Référence Sonohe Référence en céphamycine C Streptomyces jumonjiensis 40 mg/l brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 865 693 Streptomyces lactamgenes 200 mg/1 demande de brevet japonais publiée n 69 294/75 Streptomyces sp. P6621 350 mg/l demande de brevet japonais publiée n 110 097/76 Streptomyces clavuligerus 494 mg/1 brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 977 942 Streptomyces lactamgenes ditto 1291 mg/1 brevet des Etats-Unis d'amérique n 3 770 590 ditto 530 mg/l demande de brevet japonais publiée n 49 071/77 Streptomyces sp. OFR 1022 200 mg/1 selon l'invention N N t. Co %O is 0%

Claims

R E V E N D I C A T I ONS

1. Procédé de préparation de l'antibiotique céphamycine C, ce procédé se caractérisant en ce que l'on cultive le micro-organisme Streptomyces sp. OFR 1022 dans un milieu de culture dans lequel la céphamycine C s'accumule et d'o on la recueille.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le

micro-organisme est cultivé à une température de 15 à 46 C.

3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le microorganisme est cultivé à une température de 37 C>