CN104672255A - 头霉素c制备方法 - Google Patents
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Abstract
头霉素Ｃ制备方法，包括对发酵液的预处理步骤Ａ，步骤Ａ具体包括如下步骤：步骤Ａ１：将发酵液经离心取得浑浊的清液；步骤Ａ２：浑浊的清液直接通过微滤、超滤、纳滤，得到澄清的浓缩滤液。本发明的有益效果是：膜处理液体澄清度得到明显提高，色谱纯度提高10%~20%。纳滤浓缩液上柱，消除上柱时堵柱现象，上柱时间短，载样量提高，层析效果得到大幅提升。膜系统便于再生，膜处理过程中不使用有机溶媒，利于工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及头霉素Ｃ制备方法，具体涉及头霉素Ｃ发酵液的预处理方法。
背景技术
头霉素（Cephamycin，又称甲氧头孢菌素）是继青霉素、头孢菌素后又一类新的β-内酰胺类抗生素。头霉素C是头霉素类的一种。头霉素以其对β-内酰胺酶（包括青霉素酶和头孢菌素酶）的优良抗性而引人注目。其原因在于7位上多一个甲氧基。
头霉素C的生产菌株按收集到的资料来看共有三个，分别由美国礼来公司和默克公司发现，即带棒链霉菌（S.clavuligerus）、S.lipmanii 和耐内酞胺链霉菌（S.lanctamdurans）。该药于78年12月经美国食品与药物管理局（FDA）批准在美国供应于市。英国是在78年10月上市。
头霉素类抗生素由于C7位甲氧基的存在，阻止内酰胺环与酶分子的接近，增强药物对β-内酰胺酶的稳定性，并提高对厌氧菌的活性，使本类抗生素具有较强的耐β-内酰胺酶性能，对一些产生β-内酰胺酶的细菌有较强的抗菌作用。
总之，头霉素C还是一个比较有前途的抗生素，它可作为半合成抗生素的理想原料。
头霉素C固体样品是一种白色粉末，无明确的熔点。易溶于水，可溶于甲醇、乙醇，微溶于二甲亚砜，不溶于丙酮和苯。头霉素C结构中有三个不对称碳原子，所以有旋光性，旋光度221°。紫外检测260nm有最大吸收峰值。
头霉素C分子结构中含有两个游离的氨基和两个羧基，因而它是一种两性化合物，等电点在pH3.5左右，pH1.5~9.0的范围内性质稳定。C7位氨基己二酰胺基侧链的存在，使头霉素C对茚三酮反应呈阳性。
近年来，关于头霉素C制备的文献报道较少，2000年前的文献报道相对多一些。现有头霉素C的制备方法主要是发酵液经离心、板框过滤等达到固液分离，滤液通过大孔树脂、离子交换树脂层析分离（IRA-411，IRA-35，XAD-1180，LH-20，HP-20SS等树脂），合并达到要求的层析分离液体，脱色浓缩后冻干得到需要的样品。
头霉素C发酵液处理的现有技术下，固液分离的液体浑浊、色素深、杂蛋白多，造成上柱时易堵柱子，上样载量低，分离效果有限，需要多步分离得到需要的样品。
发明内容
本发明克服了现有技术的不足，现有技术下，发酵液固液分离的液体浑浊、色素深、杂蛋白多，造成上柱时易堵柱子，上样载量低，分离效果有限，需要多步分离得到需要的样品。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：通过膜处理固液分离后的液体，微滤和超滤，分级去除色素、大分子杂蛋白等，纳滤去除小分子物质、无机盐等，解决了上柱时易堵柱子，上样载量低，分离效果有限等问题。具体来说采用以下技术方案：
头霉素C制备方法，包括对发酵液的预处理步骤A，上述的预处理步骤A具体包括如下步骤：
步骤A1：将发酵液经离心得到浑浊的清液；
步骤A2：浑浊的清液通过微滤、超滤、纳滤，得到澄清的浓缩液。
作为优选，上述的步骤A2包括以下具体步骤：
步骤A21：微滤，需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为1.5-6.5，然后通过微滤膜微滤，上述的微滤膜孔径为100nm、材质为氧化铝，1200mm膜管；
步骤A22：超滤，将步骤A21所得之微滤清液使用1mol/L醋酸钠/碳酸钠调pH值为6.0~6.5，再用超滤膜超滤，所属超滤膜的截留分子量为5×104道尔顿，材质为磺化聚醚砜。
作为优选，上述的步骤步骤A21中，需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为2.0－2.5或3.0－4.0。
作为优选，上述的步骤A2中，还包括如下步骤：
步骤A23：纳滤，将步骤A22所得之超滤清液，再采用的纳滤膜进行纳滤，超滤清液纳滤浓缩至1×104ug/mL以上，纳滤膜截留分子量为100道尔顿，材质为磺化聚醚砜。
作为优选，骤A2中，微滤、超滤、纳滤步骤采用恒压操作。
作为优选，上述的步骤A2中，微滤、超滤、纳滤步骤控制操作温度为18~20℃。
作为优选，上述的头霉素C制备方法还包括预处理步骤A之后的处理步骤，具体内容为：
步骤B：膜系统清冼；
步骤C：膜浓缩液上层析树脂；
步骤D1：层析合并液纳滤浓缩；
步骤D2：纳滤浓缩液旋蒸浓缩；
步骤E：旋蒸浓缩液使用水-丙酮体系沉淀结晶；
步骤F：沉淀结晶样真空干燥。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、膜处理液体澄清度得到明显提高，色谱纯度提高10%~20%。
2、纳滤浓缩液上柱，消除上柱时堵柱现象，上柱时间短，载样量提高，层析效果得到大幅提升。
3、膜系统便于再生，膜处理过程中不使用有机溶媒，利于工业生产。
除非另有说明，本说明书中所谓样品纯度，其HPLC检测方法为：C18色谱柱，以水（1000ml+0.2ml磷酸）/甲醇（980:20）为流动相，检测波长为260nm。
附图说明
图1为本发明制备方法的流程图。
具体实施方式
在具体叙述本发明的特点之前，申请人通过以下一个对比实验，演示一下现有技术下，需要多步分离得到需要的样品，样品收率低。
对比实验：发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），色谱纯度未见明显变化，收率96%。
将滤液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，易出现堵柱子现象，上柱载样量8g/L，5%乙醇洗脱，洗脱下样纯化后的头霉素C，分段收集。用HPLC方法检测，洗脱合并液中头霉素C纯度为71.05%（洗脱液最高纯度82.50%），合并液加盐进行二次以上柱层析，合并纯度大于95%的洗脱液，过柱富集， 30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率20.87%。
下面结合实施例对本发明更进一步详细说明，但不是对本发明的限定。
实例1
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；本文中使用硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调PH值，具体是指使用前述几种酸的一种先调，如果调过了，再使用其他一种或两种酸进行微调。
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量500mL/min，得到12L澄清滤液，收率88%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2.7L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.12×104ug/mL；
色谱纯度提高18.71%，收率75.43%。膜系统操作温度18℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L，5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率51.58%。
实例2
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量280mL/min，得到10L澄清滤液，收率97%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量500mL/min，得到12L澄清滤液，收率88%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2.8L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.08×104ug/mL；
色谱纯度提高15.67%，收率75.75%。膜系统操作温度18℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率51%。
实例3
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH3.0~4.0；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量120mL/min，得到10L澄清滤液，收率55%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量500mL/min，得到12L澄清滤液，收率87%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到1.5L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.12×104ug/mL；
色谱纯度提高19.91%，收率41.89%。膜系统操作温度18℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率30.33%。
实例4
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH1.5±0.2；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率91%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量500mL/min，得到12L澄清滤液，收率88%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2.5L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.13×104ug/mL；
色谱纯度提高17.92%，收率70.55%。膜系统操作温度18℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率16.53%。
实例5
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量510mL/min，得到12L澄清滤液，收率88%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2.5L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.18×104ug/mL；
色谱纯度提高16.22%，收率74.03%。膜系统操作温度18℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率48.12%。
实例6
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（10×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量700mL/min，得到12L澄清滤液，收率94%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2.5L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.28×104ug/mL；
色谱纯度提高10.47%，收率79.98%。膜系统操作温度20℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率41.59%。
实例7
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（2×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量350mL/min，得到12L澄清滤液，收率59%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1×104ug/mL；
色谱纯度提高20.31%，收率50.11%。膜系统操作温度19℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率37.77%。
实例8
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(200nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量400mL/min，得到10L澄清滤液（放置1小时后体系出现微浑浊现象），收率97%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量350mL/min，得到12L澄清滤液，收率80%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量150mL/min，得到2.5L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到1.17×104ug/mL；
色谱纯度提高13.68%，收率72.84%。膜系统操作温度19℃，发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量15g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率43.36%。
实例9
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
超滤膜（5×104Da）过滤，工作压力0.5MPa，平均膜通量500mL/min，得到12L澄清滤液，收率88%；
色谱纯度提高17.75%，收率81.10%。膜系统操作温度18℃，发酵液预处理操作流程如图1（不含纳滤部分）。
将超滤清液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量10g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率49.53%。
实例10
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%，滤液使用1mol/L硫酸调/（醋酸钠/碳酸钠）调pH6.0~6.5；
纳滤膜（100Da）浓缩，工作压力1.5MPa，平均膜通量80mL/min，得到5L澄清浓缩液，收率92%，浓度达到0.5×104ug/mL以上后浓缩困难；
色谱纯度提高10.15%，收率84.30%。膜系统操作温度20℃，发酵液预处理操作流程如图1（不含超滤部分）。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量10g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率41.15%。
实例11
发酵液：菌浓度50%，pH6.5±0.2，500ug/mL
将10L发酵液离心（3000r/min），使用预滤层过滤离心滤液，得到8L滤液（固含量2%~5%），收率96%，滤液使用1mol/L硫酸/（醋酸钠/碳酸钠）调pH2.0~2.5；
微滤膜(100nm)过滤，工作压力0.3MPa，平均膜通量300mL/min，得到10L澄清滤液，收率96%；
色谱纯度提高10.02%，收率92.21%。膜系统操作温度20℃，发酵液预处理操作流程如图1（不含超滤、纳滤部分）。
将超滤清液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱，载样量10g/L， 5%乙醇洗脱，分段收集。用HPLC方法检测，合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液，纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL，30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL，水-丙酮体系沉淀结晶，30℃，-0.095MPa真空干燥，总收率35.41%。
Claims (7)
1.头霉素C制备方法，其特征在于：制备方法包括对发酵液的预处理步骤A，所述的预处理步骤A具体包括如下步骤：
步骤A1：将发酵液经离心得到浑浊的清液；
步骤A2：浑浊的清液通过微滤、超滤、纳滤，得到澄清的浓缩液。
2.根据权利要求1所述的头霉素C制备方法，其特征在于：所述的步骤A2包括以下具体步骤：
步骤A21：微滤，需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为1.5-6.5，然后通过微滤膜微滤，所述的微滤膜孔径为100nm、材质为氧化铝，1200mm膜管；
步骤A22：超滤，将步骤A21所得之微滤清液使用1mol/L醋酸钠/碳酸钠调pH值为6.0~6.5，再用超滤膜超滤，所属超滤膜的截留分子量为5×104道尔顿，材质为磺化聚醚砜。
3.根据权利要求2所述的头霉素C制备方法，其特征在于：所述的步骤A21中，需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为2.0－2.5或3.0－4.0。
4.根据权利要求1或2或3所述的头霉素C制备方法，其特征在于：所述的步骤A2中，还包括如下步骤：
步骤A23：纳滤，将步骤A22所得之超滤清液，再采用的纳滤膜进行纳滤，超滤清液纳滤浓缩至1×104ug/mL以上，纳滤膜截留分子量为100道尔顿，材质为磺化聚醚砜。
5.根据权利要求1或2或3所述的头霉素C制备方法，其特征在于：所述的步骤A2中，微滤、超滤、纳滤步骤采用恒压操作。
6.根据权利要求1或2或3所述的头霉素C制备方法，其特征在于：所述的步骤A2中，微滤、超滤、纳滤步骤控制操作温度为18~20℃。
7.根据权利要求1所述的头霉素C制备方法，其特征在于：所述的头霉素C制备方法还包括预处理步骤A之后的处理步骤，具体内容为：
步骤B：膜系统清冼；
步骤C：膜浓缩液上层析树脂；
步骤D1：层析合并液纳滤浓缩；
步骤D2：纳滤浓缩液旋蒸浓缩；
步骤E：旋蒸浓缩液使用水-丙酮体系沉淀结晶；
步骤F：沉淀结晶样真空干燥。
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- 2015-02-06 CN CN201510062557.2A patent/CN104672255A/zh active Pending
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