CN104672255A - 头霉素c制备方法 - Google Patents

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CN104672255A CN201510062557.2A CN201510062557A CN104672255A CN 104672255 A CN104672255 A CN 104672255A CN 201510062557 A CN201510062557 A CN 201510062557A CN 104672255 A CN104672255 A CN 104672255A
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朱辉
张鹏
范雪涛
张翠英
曹艳茹
赵磊
黄运昌
刘丹
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Abstract

头霉素C制备方法,包括对发酵液的预处理步骤A,步骤A具体包括如下步骤:步骤A1:将发酵液经离心取得浑浊的清液;步骤A2:浑浊的清液直接通过微滤、超滤、纳滤,得到澄清的浓缩滤液。本发明的有益效果是:膜处理液体澄清度得到明显提高,色谱纯度提高10%~20%。纳滤浓缩液上柱,消除上柱时堵柱现象,上柱时间短,载样量提高,层析效果得到大幅提升。膜系统便于再生,膜处理过程中不使用有机溶媒,利于工业生产。

Description

头霉素C制备方法
技术领域
本发明涉及头霉素C制备方法,具体涉及头霉素C发酵液的预处理方法。
背景技术
头霉素(Cephamycin,又称甲氧头孢菌素)是继青霉素、头孢菌素后又一类新的β-内酰胺类抗生素。头霉素C是头霉素类的一种。头霉素以其对β-内酰胺酶(包括青霉素酶和头孢菌素酶)的优良抗性而引人注目。其原因在于7位上多一个甲氧基。
头霉素C的生产菌株按收集到的资料来看共有三个,分别由美国礼来公司和默克公司发现,即带棒链霉菌(S.clavuligerus)、S.lipmanii 和耐内酞胺链霉菌(S.lanctamdurans)。该药于78年12月经美国食品与药物管理局(FDA)批准在美国供应于市。英国是在78年10月上市。
头霉素类抗生素由于C7位甲氧基的存在,阻止内酰胺环与酶分子的接近,增强药物对β-内酰胺酶的稳定性,并提高对厌氧菌的活性,使本类抗生素具有较强的耐β-内酰胺酶性能,对一些产生β-内酰胺酶的细菌有较强的抗菌作用。
总之,头霉素C还是一个比较有前途的抗生素,它可作为半合成抗生素的理想原料。
头霉素C固体样品是一种白色粉末,无明确的熔点。易溶于水,可溶于甲醇、乙醇,微溶于二甲亚砜,不溶于丙酮和苯。头霉素C结构中有三个不对称碳原子,所以有旋光性,旋光度221°。紫外检测260nm有最大吸收峰值。
头霉素C分子结构中含有两个游离的氨基和两个羧基,因而它是一种两性化合物,等电点在pH3.5左右,pH1.5~9.0的范围内性质稳定。C7位氨基己二酰胺基侧链的存在,使头霉素C对茚三酮反应呈阳性。
近年来,关于头霉素C制备的文献报道较少,2000年前的文献报道相对多一些。现有头霉素C的制备方法主要是发酵液经离心、板框过滤等达到固液分离,滤液通过大孔树脂、离子交换树脂层析分离(IRA-411,IRA-35,XAD-1180,LH-20,HP-20SS等树脂),合并达到要求的层析分离液体,脱色浓缩后冻干得到需要的样品。
头霉素C发酵液处理的现有技术下,固液分离的液体浑浊、色素深、杂蛋白多,造成上柱时易堵柱子,上样载量低,分离效果有限,需要多步分离得到需要的样品。
发明内容
本发明克服了现有技术的不足,现有技术下,发酵液固液分离的液体浑浊、色素深、杂蛋白多,造成上柱时易堵柱子,上样载量低,分离效果有限,需要多步分离得到需要的样品。
为解决上述的技术问题,本发明采用以下技术方案:通过膜处理固液分离后的液体,微滤和超滤,分级去除色素、大分子杂蛋白等,纳滤去除小分子物质、无机盐等,解决了上柱时易堵柱子,上样载量低,分离效果有限等问题。具体来说采用以下技术方案:
头霉素C制备方法,包括对发酵液的预处理步骤A,上述的预处理步骤A具体包括如下步骤:
步骤A1:将发酵液经离心得到浑浊的清液;
步骤A2:浑浊的清液通过微滤、超滤、纳滤,得到澄清的浓缩液。
作为优选,上述的步骤A2包括以下具体步骤:
步骤A21:微滤,需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为1.5-6.5,然后通过微滤膜微滤,上述的微滤膜孔径为100nm、材质为氧化铝,1200mm膜管;
步骤A22:超滤,将步骤A21所得之微滤清液使用1mol/L醋酸钠/碳酸钠调pH值为6.0~6.5,再用超滤膜超滤,所属超滤膜的截留分子量为5×104道尔顿,材质为磺化聚醚砜。
作为优选,上述的步骤步骤A21中,需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为2.0-2.5或3.0-4.0。
作为优选,上述的步骤A2中,还包括如下步骤:
步骤A23:纳滤,将步骤A22所得之超滤清液,再采用的纳滤膜进行纳滤,超滤清液纳滤浓缩至1×104ug/mL以上,纳滤膜截留分子量为100道尔顿,材质为磺化聚醚砜。
作为优选,骤A2中,微滤、超滤、纳滤步骤采用恒压操作。
作为优选,上述的步骤A2中,微滤、超滤、纳滤步骤控制操作温度为18~20℃。
作为优选,上述的头霉素C制备方法还包括预处理步骤A之后的处理步骤,具体内容为:
步骤B:膜系统清冼;
步骤C:膜浓缩液上层析树脂;
步骤D1:层析合并液纳滤浓缩;
步骤D2:纳滤浓缩液旋蒸浓缩;
步骤E:旋蒸浓缩液使用水-丙酮体系沉淀结晶;
步骤F:沉淀结晶样真空干燥。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
1、膜处理液体澄清度得到明显提高,色谱纯度提高10%~20%。
2、纳滤浓缩液上柱,消除上柱时堵柱现象,上柱时间短,载样量提高,层析效果得到大幅提升。
3、膜系统便于再生,膜处理过程中不使用有机溶媒,利于工业生产。
    除非另有说明,本说明书中所谓样品纯度,其HPLC检测方法为:C18色谱柱,以水(1000ml+0.2ml磷酸)/甲醇(980:20)为流动相,检测波长为260nm。
附图说明
图1为本发明制备方法的流程图。
具体实施方式
在具体叙述本发明的特点之前,申请人通过以下一个对比实验,演示一下现有技术下,需要多步分离得到需要的样品,样品收率低。
对比实验:发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),色谱纯度未见明显变化,收率96%。
将滤液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,易出现堵柱子现象,上柱载样量8g/L,5%乙醇洗脱,洗脱下样纯化后的头霉素C,分段收集。用HPLC方法检测,洗脱合并液中头霉素C纯度为71.05%(洗脱液最高纯度82.50%),合并液加盐进行二次以上柱层析,合并纯度大于95%的洗脱液,过柱富集, 30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率20.87%。
下面结合实施例对本发明更进一步详细说明,但不是对本发明的限定。
实例1
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;本文中使用硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调PH值,具体是指使用前述几种酸的一种先调,如果调过了,再使用其他一种或两种酸进行微调。
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量500mL/min,得到12L澄清滤液,收率88%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2.7L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.12×104ug/mL;
色谱纯度提高18.71%,收率75.43%。膜系统操作温度18℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L,5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率51.58%。
实例2
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量280mL/min,得到10L澄清滤液,收率97%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量500mL/min,得到12L澄清滤液,收率88%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2.8L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.08×104ug/mL;
色谱纯度提高15.67%,收率75.75%。膜系统操作温度18℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率51%。
实例3
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH3.0~4.0;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量120mL/min,得到10L澄清滤液,收率55%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量500mL/min,得到12L澄清滤液,收率87%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到1.5L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.12×104ug/mL;
色谱纯度提高19.91%,收率41.89%。膜系统操作温度18℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率30.33%。
实例4
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH1.5±0.2;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率91%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量500mL/min,得到12L澄清滤液,收率88%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2.5L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.13×104ug/mL;
色谱纯度提高17.92%,收率70.55%。膜系统操作温度18℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率16.53%。
实例5
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量510mL/min,得到12L澄清滤液,收率88%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2.5L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.18×104ug/mL;
色谱纯度提高16.22%,收率74.03%。膜系统操作温度18℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率48.12%。
实例6
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(10×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量700mL/min,得到12L澄清滤液,收率94%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2.5L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.28×104ug/mL;
色谱纯度提高10.47%,收率79.98%。膜系统操作温度20℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率41.59%。
实例7
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(2×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量350mL/min,得到12L澄清滤液,收率59%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1×104ug/mL;
色谱纯度提高20.31%,收率50.11%。膜系统操作温度19℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率37.77%。
实例8
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(200nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量400mL/min,得到10L澄清滤液(放置1小时后体系出现微浑浊现象),收率97%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量350mL/min,得到12L澄清滤液,收率80%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量150mL/min,得到2.5L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到1.17×104ug/mL;
色谱纯度提高13.68%,收率72.84%。膜系统操作温度19℃,发酵液预处理操作流程如图1。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量15g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率43.36%。
实例9
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
超滤膜(5×104Da)过滤,工作压力0.5MPa,平均膜通量500mL/min,得到12L澄清滤液,收率88%;
色谱纯度提高17.75%,收率81.10%。膜系统操作温度18℃,发酵液预处理操作流程如图1(不含纳滤部分)。
将超滤清液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量10g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率49.53%。
实例10
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%,滤液使用1mol/L硫酸调/(醋酸钠/碳酸钠)调pH6.0~6.5;
纳滤膜(100Da)浓缩,工作压力1.5MPa,平均膜通量80mL/min,得到5L澄清浓缩液,收率92%,浓度达到0.5×104ug/mL以上后浓缩困难;
色谱纯度提高10.15%,收率84.30%。膜系统操作温度20℃,发酵液预处理操作流程如图1(不含超滤部分)。
将纳滤浓缩液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量10g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率41.15%。
实例11
发酵液:菌浓度50%,pH6.5±0.2,500ug/mL
将10L发酵液离心(3000r/min),使用预滤层过滤离心滤液,得到8L滤液(固含量2%~5%),收率96%,滤液使用1mol/L硫酸/(醋酸钠/碳酸钠)调pH2.0~2.5;
微滤膜(100nm)过滤,工作压力0.3MPa,平均膜通量300mL/min,得到10L澄清滤液,收率96%;
色谱纯度提高10.02%,收率92.21%。膜系统操作温度20℃,发酵液预处理操作流程如图1(不含超滤、纳滤部分)。
将超滤清液调pH6.8±0.1上XAD-1180树脂柱,载样量10g/L, 5%乙醇洗脱,分段收集。用HPLC方法检测,合并头霉素C纯度大于95%的洗脱液,纳滤浓缩至4×104~5×104ug/mL,30℃旋蒸浓缩至8×104~10×104ug/mL,水-丙酮体系沉淀结晶,30℃,-0.095MPa真空干燥,总收率35.41%。

Claims (7)

1.头霉素C制备方法,其特征在于:制备方法包括对发酵液的预处理步骤A,所述的预处理步骤A具体包括如下步骤:
步骤A1:将发酵液经离心得到浑浊的清液;
步骤A2:浑浊的清液通过微滤、超滤、纳滤,得到澄清的浓缩液。
2.根据权利要求1所述的头霉素C制备方法,其特征在于:所述的步骤A2包括以下具体步骤:
步骤A21:微滤,需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为1.5-6.5,然后通过微滤膜微滤,所述的微滤膜孔径为100nm、材质为氧化铝,1200mm膜管;
步骤A22:超滤,将步骤A21所得之微滤清液使用1mol/L醋酸钠/碳酸钠调pH值为6.0~6.5,再用超滤膜超滤,所属超滤膜的截留分子量为5×104道尔顿,材质为磺化聚醚砜。
3.根据权利要求2所述的头霉素C制备方法,其特征在于:所述的步骤A21中,需要先将浑浊的清液使用1mol/L硫酸/醋酸钠/碳酸钠调pH值为2.0-2.5或3.0-4.0。
4.根据权利要求1或2或3所述的头霉素C制备方法,其特征在于:所述的步骤A2中,还包括如下步骤:
步骤A23:纳滤,将步骤A22所得之超滤清液,再采用的纳滤膜进行纳滤,超滤清液纳滤浓缩至1×104ug/mL以上,纳滤膜截留分子量为100道尔顿,材质为磺化聚醚砜。
5.根据权利要求1或2或3所述的头霉素C制备方法,其特征在于:所述的步骤A2中,微滤、超滤、纳滤步骤采用恒压操作。
6.根据权利要求1或2或3所述的头霉素C制备方法,其特征在于:所述的步骤A2中,微滤、超滤、纳滤步骤控制操作温度为18~20℃。
7.根据权利要求1所述的头霉素C制备方法,其特征在于:所述的头霉素C制备方法还包括预处理步骤A之后的处理步骤,具体内容为:
步骤B:膜系统清冼;
步骤C:膜浓缩液上层析树脂;
步骤D1:层析合并液纳滤浓缩;
步骤D2:纳滤浓缩液旋蒸浓缩;
步骤E:旋蒸浓缩液使用水-丙酮体系沉淀结晶;
步骤F:沉淀结晶样真空干燥。
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