RU2733897C2 - Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека - Google Patents

Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека Download PDF

Info

Publication number
RU2733897C2
RU2733897C2 RU2016111115A RU2016111115A RU2733897C2 RU 2733897 C2 RU2733897 C2 RU 2733897C2 RU 2016111115 A RU2016111115 A RU 2016111115A RU 2016111115 A RU2016111115 A RU 2016111115A RU 2733897 C2 RU2733897 C2 RU 2733897C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
leu
asp
glu
ala
ile
Prior art date
Application number
RU2016111115A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2016111115A3 (ru
RU2016111115A (ru
Inventor
Йоаким НИЛЬССОН
Эрик Нордлинг
Патрик СТРЕМБЕРГ
Original Assignee
Сведиш Орфан Биовитрум Аб (Пабл)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сведиш Орфан Биовитрум Аб (Пабл) filed Critical Сведиш Орфан Биовитрум Аб (Пабл)
Publication of RU2016111115A publication Critical patent/RU2016111115A/ru
Publication of RU2016111115A3 publication Critical patent/RU2016111115A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2733897C2 publication Critical patent/RU2733897C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к связывающим компонент 5 комплемента человека (C5) полипептидам, и может быть использовано в медицине для лечения или профилактики состояний, ассоциированных с С5. Полипептид имеет аминокислотную последовательность [BM]-[L2]-QSSELLSEAKKLX52X53SQ, где [BM] представляет собой С5-связывающий мотив, [L2] выбирают из DDPS и RQPE; X52 выбирают из E, N и S; X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N. Также получены варианты указанного полипептида и соединения с альбумин-связывающим доменом стрептококкового белка G. Изобретение обеспечивает улучшение стабильности C5-связывающих полипептидов без потери аффинности их связывания с С5. 8 н. и 19 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 табл., 9 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к полипептидам, которые связываются с компонентом 5 комплемента человека (C5) и к применению таких полипептидов в терапии.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Белок С5 комплемента является центральным компонентом системы комплемента; основной части врожденной иммунной системы. Система комплемента представляет собой сложную систему иммунного надзора с многочисленными задачами в жестко контролируемых, разнородных процессах. Она функционирует в качестве первой линии иммунной защиты организма против инфекции другими организмами, а также при различении здоровых тканей организма от продуктов клеточного распада и апоптотических и некротических клеток. Более того, она вовлечена в выведение иммунных комплексов, регуляцию адаптивного иммунного ответа, инициацию регенерации тканей, ангиогенез, мобилизацию стволовых клеток и развитие центральной нервной системы (Woodruff et al. Mol Immunol 2011, 48 (14):1631-1642); Ricklin et al. Nat Immunol 2010, 11(9):785-795). Любое запускающее событие, например, ошибочная или неограниченная активация или недостаточная регуляция, которое нарушает точное равновесие активации и регуляции комплемента, может приводить к патологическим состояниям, включающим атаку собственных иммунных клеток организма, приводящую к обширному повреждению тканей.
Система комплемента состоит из приблизительно 30 белков. Существуют три пути для инициации комплемента; классический путь, в котором используется C1q для распознавания иммунных комплексов на поверхности клеток; лектиновый путь, который инициируется, когда маннозосвязывающий лектин (MBL) распознает некоторые сахара; и альтернативный путь, который самопроизвольно инициируется посредством гидролиза фактора 3 комплемента (C3), процесса, подавляемого некоторыми молекулами поверхности клеток млекопитающих, не присутствующих на инвазивных патогенах. Альтернативный путь также действует в качестве амплификационного шунта для системы комплемента. Все три пути сходятся на уровне C3. Расщепление C3 на C3a и C3b приводит к образованию конвертазы, которая, в свою очередь, расщепляет фактор 5 комплемента (C5) на C5a и C5b. C5a представляет собой очень мощный аттрактант различных иммунных клеток, в то время как C5b олигомеризуется с C6-9 с образованием поры, известной как мембраноатакующий комплекс (MAC), или, иногда, терминальный каскад комплемента (TCC). Активация системы комплемента приводит к ряду механизмов с целью нейтрализации патогена; образование MAC на поверхности клеток, таких как инвазивные бактерии, приводит к лизису, осаждение продуктов расщепления C3 и C4, C3b и C4b, способствует опсонизации, приводящей к фагоцитозу патогена макрофагами, и анафилатоксины, такие как C3a и C5a привлекают моноциты и нейтрофилы к участку активации, повышающе регулируют поверхностные маркеры, приводя к увеличенной иммунологической восприимчивости и к высвобождению цитокинов.
C5 представляет собой 190-кДа гликопротеин, состоящий из 2 дисульфид-связанных полипептидных цепей, альфа и бета, с молекулярной массой, равной 115 и 75 кДа, соответственно (Tack et al. Biochem 1979, 18:1490-1497). Haviland et al. (J Immun 1991, 146: 362-368) построили полную последовательность кДНК про-С5 комплемента человека, которая предположительно кодирует 1676-аминокислотную про-молекулу, которая содержит 18-аминокислотный лидерный пептид и 4-аминокислотный линкер, разделяющий бета- и альфа- цепи (SEQ ID NO: 251). Поскольку C5 является общим для всех путей активации комплемента, блокирование C5 останавливает прогрессирование каскада независимо от стимулов и, таким образом, предотвращает повреждающие свойства терминальной активации комплемента, в то же время, оставляя иммунопротективные и иммунорегуляторные функции проксимального каскада комплемента незатронутыми.
Ключевое значение системы комплемента в защите против патогенов, в целом, делает ее интересной мишенью для фармацевтического вмешательства. Это усиливается тем фактом, что многие мутации или ухудшенная регуляция комплемента вовлечены в различные заболевания и состояния. Последние включают увеличенную подверженность аутоиммунным заболеваниям, таким как системная красная волчанка (СКВ), где отложение иммунных комплексов приводит в действие классический путь (Manderson et al. Annu Rev Immunol 2004, 22:431-456). Дополнительно, мутации белков C1-C5 комплемента часто приводят в результате к СКВ или СКВ-подобным симптомам. Другие аутоиммунные заболевания с сильным включением системы комплемента представляют собой ревматоидный артрит (РА), где иммунные комплексы могут активировать комплемент в пораженном РА суставе, синдром Сегрена, дерматомиозит и другие управляемые аутоиммунными антителами заболевания, такие как синдром Гийена-Барре (GBS), синдром Фишера (Kaida et al. J. Neuroimmun 2010, 223:5-12), различные типы васкулита, системный склероз, легочный гемосидероз с гломерулонефритом (анти-БМК-нефрит) и антифосфолипидный синдром (APS) (Chen et al. J Autoimmun 2010, 34:J276-J286). Кроме того, ингибирование комплемента оказалось эффективным на животных моделях таких различных состояний, как периодонтит (Abe et al. J Immunol 2012, 189:5442-5448), заживление ран (Cazender et al. Clin Dev Immunol 2012, публикация в Интернете), опухолевый рост (Markiewski et al. Nat Immunol 2008, 9:1225-1235) и глазные болезни, такие как увеит и возрастная дегенерация желтого пятна (AMD) (Copland et al. Clin Exp Immunol 2009, 159:303-314).
Антитела, нацеленные на С5 комплемента человека, известны из, например, WO 95/29697; WO 02/30985; и WO 2004/007553. Экулизумаб (Soliris™) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, направленное против белка C5, и предотвращает расщепление C5 на C5a и C5b. Было показано, что Экулизумаб является эффективным при лечении пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ), редкого и иногда опасного для жизни заболевания крови, характеризуемого внутрисосудистой гемолитической анемией, тромбофилией и недостаточностью костного мозга, и разрешенным для данного показания. Экулизумаб был также недавно разрешен FDA для лечения атипичного гемолитического синдрома (АГС), редкого, но опасного для жизни заболевания, вызываемого потерей управления альтернативным путем комплемента, приводящей к сверхактивации, проявляющейся как тромботическая микроангиопатия (TMA), приводящая к постоянному риску повреждения жизненно важных органов, таких как почка, сердце и мозг. При АГС, трансплантация поврежденного органа только временно помогает пациенту, так как печень продолжает вырабатывать мутировавшую форму управляющего белка (наиболее часто, фактора комплемента H или других белков альтернативного пути). Родственным заболеванием с преходящей острой патофизиологией является HUS, вызываемое инфекцией положительной по токсину Шига E. coli (STEC-HUS), и существуют обнадеживающие клинические данные, предполагающие эффективность действия также для этого состояния (Lapeyraque et al, N Engl J Med 2011, 364:2561-2563). Окончательно, C5-блокирующее антитело Экулизумаб оказалось эффективным при профилактике антитело-опосредованного отторжения (AMR) у реципиентов с почками, имеющими высокую степень несовпадения (Stegall, M. D. et al. Am J Transplant 2011, 11:2405-2413), и при лечении аутоиммунных нейропатий, таких как нейромиелит зрительного нерва и тяжелая миастения (Pittock et al. Lancet Neurol 2013, 12:554-562; Howard et al. Muscle Nerve 2013, 48:76-84).
Помимо непроцессированных антител, одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFV), миниантитела и аптамеры, нацеленные на C5, описаны в литературе. Эти ингибиторы С5 могут связываться с различными участками (эпитопами) на молекуле C5 и могут иметь различные механизмы действия. Например, в то время как Экулизумаб взаимодействует с C5 на некотором расстоянии от участка расщепления конвертазы, миниантитело Mubodina® взаимодействует с участком расщепления C5. Ингибирующий белок C5 Ингибитора Комплемента Ornithodoros moubata (OmCI, Nunn, M. A. et al. J Immunol 2005, 174:2084-2091) из мягкого клеща Ornithodoros moubata предположительно связывается с дистальным концом супердомена CUB-C5d-MG8, который находится близко от участка расщепления конвертазы (Fredslund et al. Nat Immunol 2008, 9 (7):753-760). В отличие от трех белков, указанных выше, ингибирующих расщепление C5, моноклональное антитело TNX-558 связывается с эпитопом C5a, присутствующим как на интактном C5, так и высвобождаемом C5a без ингибирования расщепления C5. (Fung et al. Clin Exp Immunol 2003, 133 (2):160-169).
C5-связывающие полипептиды, содержащие C5-связывающий мотив, раскрыты в Международной патентной заявке № PCT/SE2013/050139, опубликованной как WO 2013/126006. В частности, WO 2013/126006 раскрывает C5-связывающ мотив, BM, состоящий из аминокислотной последовательности
EX2X3X4A X6X7EID X11LPNL X16X17X18QW X21AFIX25 X26LX28D,
где, независимо друг от друга,
X2 выбирают из H, Q, S, T и V;
X3 выбирают из I, L, M и V;
X4 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X6 выбирают из N и W;
X7 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X11 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X16 выбирают из N и T;
X17 выбирают из I, L и V;
X18 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X21 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X26 выбирают из K и S; и
X28 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y.
Примеры конкретных C5-связывающих мотивов, как раскрыто ранее в WO 2013/126006, показаны как SEQ ID NO: 1-248 в настоящей патентной заявке.
Из WO 2013/126006 известно, что такие дополнительные пептиды или полипептиды могут улучшать стабилизацию C5-связывающих полипептидов. Одним примером такого полипептида является альбумин-связывающий домен (ABD), показанный как SEQ ID NO: 250 в настоящем описании. Другие примеры подходящих альбумин-связывающих доменов раскрыты в WO 2009/016043 и WO 2012/004384. ABD-расширенный полипептид связывается с альбумином сыворотки in vivo, и выигрывает от его более длительного периода полужизни, который увеличивает суммарный период полужизни самого полипептида (см. например, WO 91/01743).
Дальнейшее обеспечение средствами со сравнимой C5-блокирующей активностью остается предметом значительного интереса в данной области. В частности, существует продолжающаяся потребность в молекулах, которые предотвращают концевой каскад комплемента, а также образование провоспалительной молекулы C5a. Большой интерес также представляет обеспечение областей применения таких молекул при лечении заболеваний.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 иллюстрирует гель ДСН-ПААГ, где полосы представляют C5-связывающее соединение PSI0242 (SEQ ID NO: 249) (0) перед тестом на стабильность; и (2w) после 2-х недельного теста на стабильность.
Фиг. 2 представляет собой хроматограмму обращенно-фазовой ВЭЖХ PSI0242 (SEQ ID NO: 249) перед тестом на стабильность (сплошная линия) и после 2-х недельного теста на стабильность (пунктирная линия).
Фиг. 3 иллюстрирует гель ДСН-ПААГ, где первая дорожка содержит маркер размера SeeBlue 2P, и полосы представляют (0) первоначальные образцы; и (2w) образцы после 2-х недельного теста на стабильность. Фиг. 3A: SEQ ID NO: 249; Фиг. 3B: SEQ ID NO: 261; Фиг. 3C: SEQ ID NO: 262; Фиг. 3D: SEQ ID NO: 264.
Фиг. 4 представляет собой хроматограмму обращенно-фазовой ВЭЖХ C5-связывающего соединения (SEQ ID NO: 253) перед тестом на стабильность (сплошная линия) и после 2-х недельного теста на стабильность (пунктирная линия).
Фиг. 5 представляет собой хроматограмму обращенно-фазовой ВЭЖХ C5-связывающего соединения (SEQ ID NO: 264) перед тестом на стабильность (сплошная линия) и после 2-х недельного теста на стабильность (пунктирная линия).
Фиг. 6A-D показывает изображения гелей ДСН-ПААГ для сравнения исходных и модифицированных полипептидных вариантов (0) до и (2w) после 2-х недельного теста на стабильность. Маркер размера молекулы (Mw) представлял собой Novex® предварительно окрашенный Sharp стандартный белок (216, 160, 110, 80, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 3,5 кДа). Фиг. 6A показывает гель с HER2-связывающими полипептидами, где дорожки показывают дорожку 1: Mw, дорожку 2: (0) Z02891 (SEQ ID NO: 272), дорожку 3: (2w) Z02891 (SEQ ID NO: 272), дорожку 4: Mw, дорожку 5: (0) Z17341 (SEQ ID NO: 273), дорожку 6: (2w) Z17341 (SEQ ID NO: 273), дорожку 7: (0) Z17342 (SEQ ID NO: 274), дорожку 8: (2w) Z17342 (SEQ ID NO: 274). Фиг. 6B представляет собой гель с PDGF-Rβ-связывающими полипептидами, где дорожки показывают: дорожку 1: Mw, дорожку 2: (0) Z15805 (SEQ ID NO: 275), дорожку 3: (2w) Z15805 (SEQ ID NO: 275), дорожку 4: Mw, дорожку 5: (0) Z17343 (SEQ ID NO: 276), дорожку 6: (2w) Z17343 (SEQ ID NO: 276), дорожку 7: (0) Z17344 (SEQ ID NO: 277), дорожку 8: (2w) Z17344 (SEQ ID NO: 277). Фиг. 6C показывает гель с FcRn-связывающими полипептидами, где дорожки показывают: дорожку 1: (0) Z10103 (SEQ ID NO: 278), дорожку 2: (2w) Z10103 (SEQ ID NO: 278), дорожку 3: Mw, дорожку 4: (0) Z17347 (SEQ ID NO: 279), дорожку 5: (2w) Z17347 (SEQ ID NO: 279), дорожку 6: (0) Z17348 (SEQ ID NO: 280), дорожку 7: (2w) Z17348 (SEQ ID NO: 280). Диагональные полосы, видимые на Фиг. 6C, представляют собой артефакт, являющийся результатом отпечатка от второго геля, окрашенного в том же контейнере. Фиг. 6D представляет собой гель с CAIX-связывающими полипептидами, где дорожки показывают дорожку 1:Mw, дорожку 2: (0) Z09782 (SEQ ID NO: 281), дорожку 3: (2w) Z09782 (SEQ ID NO: 281), дорожку 4: Mw, дорожку 5: (0) Z17351 (SEQ ID NO: 282), дорожку 6: (2w) Z17351 (SEQ ID NO: 282), дорожку 7: (0) Z17352 (SEQ ID NO:283), дорожку 8: (2w) Z17352 (SEQ ID NO:283); дорожку 9: (0) Z17355 (SEQ ID NO: 284), дорожку 10: (2w) Z17355 (SEQ ID NO: 284), дорожку 11: (0) Z17357 (SEQ ID NO: 285), дорожку 12: (2w) Z17357 (SEQ ID NO: 285), дорожку 13: (0) Z17359 (SEQ ID NO: 286), дорожку 14: (2w) Z17359 (SEQ ID NO: 286), дорожку 15: (0) Z17360 (SEQ ID NO: 287), дорожку 16: (2w) Z17360 (SEQ ID NO: 287).
Фиг. 7 представляет собой таблицу, показывающую аминокислотные последовательности:
- примеров C5-связывающих мотивов (SEQ ID NO: 1-248);
- C5-связывающего соединения, обозначенного PSI0242 (SEQ NO: 249);
- альбумин-связывающего домена (SEQ ID NO: 250);
- входа Свисса-Прота P01031 человеческого С5 (SEQ ID NO:251), где α-цепь соответствует аминокислотным остаткам 678-1676, и α-цепь соответствует аминокислотным остаткам 19-673;
- примеров модифицированных C5-связывающих полипептидов (SEQ ID NO: 260, 265-267).
- примеров модифицированных C5-связывающих соединений (SEQ ID NO: 252-259, 261-264, 268-270).
- примеров полипептидных вариантов с аффинностью связывания для других целевых молекул (SEQ ID NO: 272, 275, 278, 281)
- примеров полипептидных вариантов с улучшенной стабильностью с аффинностью связывания для других мишеней с (SEQ ID NO: 273-274, 276-277, 279-280, 282-287).
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Неожиданно было обнаружено, что C5-связывающие полипептиды и соединения, в которых аминокислотные последовательности были модифицированы в конкретных положениях, имеет улучшенную стабильность по сравнению с ранее известными C5-связывающими полипептидами и соединениями.
Следовательно, данное изобретение предоставляет полипептид, способный к связыванию компонента 5 комплемента человека (C5), где указанный полипептид выбирают из:
(а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54Q
где, независимо друг от друга,
[BM] представляет собой С5-связывающий мотив;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 выбирают из A и S;
X43 выбирают из N и E;
X46 выбирают из A, S и C;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является
D, когда X52 представляет собой N; и
X54 выбирают из A и S; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 89% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (a), при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N.
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что модификация или замена аминокислотных остатка(остатков) в некоторых положении(положениях) аминокислотной последовательности C5-связывающих полипептидов, как описано в WO 2013/126006, улучшает стабильность C5-связывающих полипептидов, в то время, как биологическая активность, такая как аффинность связывания для компонента 5 комплемента человека (C5) и ингибирование функции пути комплемента, сохраняется по существу такой же. Таким образом, биологическая активность модифицированных C5-связывающих полипептидов является сравнимой с биологической активностью известных C5-связывающих полипептидов. Тестирование стабильности C5-связывающих полипептидов настоящего изобретения демонстрирует, что замена либо в X52, от N до E или S, или X53, от D до E, или S, улучшает стабильность. Кроме того, было обнаружено, что замена конкретной аминокислоты в [L2] независимо может стимулировать стабильность.
Термины “C5-связывание” и ”аффинность связывания для C5”, как используют в данном описании, относится к свойству полипептида, которое можно протестировать, например, посредством применения технологии поверхностного плазмонного резонанса, такой как в приборе Biacore (GE Healthcare). Аффинность С5-связывания, можно, например, тестировать в эксперименте, в котором C5 иммобилизуют на сенсорном чипе прибора Biacore, и образец, содержащий полипептид, подлежащий тестированию, пропускают над чипом. Альтернативно, полипептид, подлежащий тестированию, иммобилизуют на сенсорном чипе прибора, и образец, содержащий C5, или его фрагмент, пропускают над чипом. Квалифицированный специалист может затем интерпретировать результаты, полученные в таких экспериментах, чтобы установить по меньшей мере качественный показатель связывания полипептида с C5. Если желательным является количественный показатель, например, чтобы определить константу диссоциации кажущегося равновесия KD для взаимодействия, также могут применяться методы поверхностного плазмонного резонанса. Значения связывания могут, например, определяться на приборе Biacore 2000 (GE Healthcare). C5 иммобилизуют на сенсорном чипе для измерения, и образцы полипептида, аффинность которого подлежит определению, готовят посредством серийного разведения и инъекционно вводят над чипом. Значения KD могут затем быть рассчитаны на основании результатов с использованием, например, 1:1 модели связывания Лэнгмюра из программного обеспечения BIAevaluation, предоставляемого производителем прибора. C5 или его фрагмент, используемые при определении KD, могут, например, содержать аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 251. Примеры того, как можно тестировать аффинность С5-связывания, приведены в настоящем описании, см. Примеры 3 и 5.
В предпочтительной форме изобретения, указанный полипептид выбирают из
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
AEAKYAK-[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54QAP
где, независимо друг от друга,
[BM], [L2], X42, X43, X46, X52, X53 и X54 являются такими, как определено выше;
и (b) полипептида, который имеет по меньшей мере 90% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (a), при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N.
Как раскрыто ранее в WO 2013/126006, C5-связывающий полипептид согласно изобретению может образовывать часть трехспирального пучка белкового домена. Указанный C5-связывающий мотив [BM] по существу может образовывать часть двух альфа спиралей, с взаимосвязывающей петлей, внутри указанного трехспирального пучка. Вторая взаимосвязывающая петля, именуемая в данном описании [L2], соединяет C5-связывающий мотив с третьей альфа-спиралью, именуемой “Остов”.
В одном варианте осуществления, C5-связывающий мотив [BM] является по существу таким, как раскрыто в WO 2013/126006. Однако, согласно настоящему изобретению, C5-связывающий мотив предпочтительно состоит из 28, а не 29 аминокислот, и может дополнительно нести дополнительные замены аминокислот.
Таким образом, в одном варианте осуществления, указанный [BM] несет по меньшей мере одну дополнительную замену аминокислоты, например в положении 17, по сравнению с [BM], как раскрыто в WO 2013/126006. Таким образом, указанный [BM] представляет собой полипептид, выбранный из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
EX9X10X11A X13X14EIDX17X18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X17 выбирают из D и E;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из A, D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 85% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (a).
В предпочтительном варианте осуществления, C5-связывающий мотив [BM] является по существу таким, как раскрыто в WO 2013/126006. Указанный [BM] представляет собой, соответственно полипептид, выбранный из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
EX9X10X11A X13X14EIDX18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 85% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (а).
В дополнительном предпочтительном аспекте, [BM] состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из положений 1-28 в SEQ ID NOS: 1-248 или содержащей ее. Более предпочтительно, [BM] состоит из аминокислотной последовательности, показанной в виде положений 1-28 в SEQ ID NO: 1, или содержит ее.
В дополнительном аспекте, C5-связывающий полипептид согласно изобретению выбирают из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
AEAKYAKEX9X10X11AX13X14EIX17X18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32
X33LX35-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54QAP;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X17 выбирают из D и E;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из A, D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 выбирают из A и S;
X43 выбирают из N и E;
X46 выбирают из A, S и C;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является
D, когда X52 представляет собой N; и
X54 выбирают из A и S; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 90% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (а), при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N.
В предпочтительном варианте осуществления, C5-связывающий полипептид согласно изобретению выбирают из:
(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
AEAKYAKEX9X10X11AX13X14EIDX18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54QAP;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 выбирают из A и S;
X43 выбирают из N и E;
X46 выбирают из A, S и C;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является
D, когда X52 представляет собой N; и
X54 выбирают из A и S; и
(b) полипептида, который имеет по меньшей мере 90% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из (а), при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N.
В предпочтительных формах изобретения, выполняется по меньшей мере одно из следующих восемнадцати, необязательно девятнадцати условий:
X9 представляет собой V,
X10 представляет собой L,
X11 представляет собой E,
X13 представляет собой W,
X14 представляет собой D,
необязательно X17 представляет собой D,
X18 представляет собой R,
X23 представляет собой T,
X24 представляет собой I,
X25 представляет собой E,
X28 представляет собой L,
X32 представляет собой N,
X33 представляет собой K,
X35 представляет собой D,
[L2] представляет собой DDPS,
X42 представляет собой S,
X43 представляет собой E,
X46 представляет собой S,
X54 представляет собой S.
Более предпочтительно, выполняются по меньшей мере два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать или девятнадцать из приведенных выше условий.
В варианте осуществления, X52 и X53 независимо выбирают из E и S. Предпочтительно, (a) X52 представляет собой S, и X53 представляет собой E, или (b) X52 представляет собой E, и X53 представляет собой S.
В варианте осуществления, X52 представляет собой S, и X53 представляет собой D.
В еще одном варианте осуществления, X52 представляет собой N, и X53 представляет собой E.
В дополнительном аспекте, полипептид согласно изобретению содержит аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 265, SEQ ID NO: 266 или SEQ ID NO: 267.
В дополнительном аспекте, предоставлено соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
(a) по меньшей мере один C5-связывающий полипептид, как определено выше;
(b) по меньшей мере один альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, или его производного; и
(с) необязательно, по меньшей мере один связывающий фрагмент для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C или N концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида.
Предпочтительно, указанный альбумин-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 250.
Предпочтительно, указанный связывающий фрагмент представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность KVX60GS, где X60 выбирают из D, E и A. Когда X60 представляет собой D, предпочтительное соединение содержит аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 253 или состоит из нее. Когда X60 представляет собой E, предпочтительные соединения содержат аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 269 или SEQ ID NO: 270 или состоят из нее. Когда X60 представляет собой А, предпочтительное соединение содержит аминокислотную последовательность, показанную как SEQ ID NO: 262 или состоит из нее. В перечисленных выше аминокислотных последовательностях из C5-связывающих соединений, аминокислотные остатки 1-57 представляют аминокислотную последовательность C5-связывающего полипептида, остатки 58-62 представляют аминокислотную последовательность линкера, и остатки 63-108 представляют аминокислотную последовательность альбумин-связывающего домена.
В варианте осуществления, связывающий фрагмент отсутствует.
Как обсуждается выше, предпочтительные C5-связывающие полипептиды согласно изобретению включают такие полипептиды, где X52 и X53 независимо выбирают из E и S. Конкретно, соединения согласно изобретению могут являться производными PSI0242 (SEQ ID NO: 249), но имеют модификации по меньшей мере в одном из положений 52, 53 и 60. Например, как показано на Фиг. 7 и в списке последовательностей, предпочтительное соединение, обозначенное PSI0378 (SEQ ID NO: 261), несет замены аминокислот N52S, D53E и D60E; предпочтительное соединение, обозначенное PSI0379 (SEQ ID NO: 262), несет замены аминокислот N52S, D53E и D60A; предпочтительное соединение, обозначенное PSI0381 (SEQ ID NO: 263), несет замены аминокислот N52E, D53S и D60E; и предпочтительное соединение, обозначенное PSI0383 (SEQ ID NO: 264) несет замены аминокислот N52S, D53E и D60E. Дополнительно, SEQ ID NO: 264 также несет замены в петле [L2], а именно, D36R, D37Q и S39E. Кроме того, предпочтительное соединение, обозначенное PSI0403 (SEQ ID NO: 269), несет замены аминокислот D53E и D60E, и предпочтительное соединение, обозначенное PSI0404 (SEQ ID NO: 270), несет замены аминокислот N52S и D60E.
С учетом вышеуказанного, авторы изобретения неожиданно обнаружили, что замены аминокислот в некоторых положениях аминокислотной последовательности C5-связывающих полипептидов, как описано в WO 2013/126006, могут улучшать стабильность. Такие замены улучшают стабильность C5-связывающих соединений, в то время как биологическая активность, такая, как способность к связыванию С5 и ингибирование гемолиза in vitro, сохраняется. Тестирование стабильности C5-связывающих соединений настоящего изобретения демонстрирует, что, например каждая из N52S (X52) и D53E (X53) (SEQ ID NO: 253) индивидуально, а также удаление D60 (X60) (SEQ ID NO: 259 без связывающего фрагмента) улучшает стабильность. Комбинация замен N52S, D53E и D60E или D60A дополнительно улучшает стабильность (SEQ ID NO: 261 и SEQ ID NO: 262). Аналогично, было обнаружено, что каждая из комбинированных замен N52S и D60E (SEQ ID NO: 270) и D53E и D60E (SEQ ID NO: 269), улучшает стабильность. Это указывает на то, что каждая из перечисленных замен аминокислот включена в улучшение стабильности полипептида, и таким образом, что каждая из этих замен будет обеспечивать дополнительно стабилизированные C5-связывающие полипептиды и соединения в сравнении с ранее известными C5-связывающими полипептидами и соединениями.
Однако квалифицированный специалист сможет идентифицировать полипептиды и/или соединения, которые имеют модификации по меньшей мере в одном из положений 52, 53 и 60 и/или в петле [L2], но которые также несут дополнительные модификации, такие как замены, небольшие делеции, вставки или инверсии, и, тем не менее, имеют по существу раскрытые биологические активности и улучшенную стабильность. Дополнительно, C5-связывающий полипептид и/или соединение согласно изобретению могут содержать дополнительные C-концевые и/или N-концевые аминокислоты, которые улучшают получение, очистку, стабилизацию in vivo или in vitro, сочетание или обнаружение полипептида.
В дополнительном аспекте изобретения, предоставлено соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
a. по меньшей мере один C5-связывающий полипептид, где указанный полипептид выбирают из:
a-1. полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54Q
где, независимо друг от друга,
[BM] представляет собой С5-связывающий мотив;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 выбирают из A и S;
X43 выбирают из N и E;
X46 выбирают из A, S и C;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S;
X54 выбирают из A и S; и
a-2. полипептида, который имеет по меньшей мере 89% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из a-1.;
b. по меньшей мере один альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, или его производного; и
c. по меньшей мере один связывающий фрагмент для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C- или N-концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида; где связывающий фрагмент содержит KVEGS или KVAGS или состоит из них; или, где указанный связывающий фрагмент отсутствует.
Было обнаружено, что удаление D60 или замена аминокислоты в положении 60 SEQ ID NO: 249 по отдельности улучшает стабильность C5-связывающих соединений изобретения в сравнении с ранее известными C5-связывающими соединениями. Предпочтительно, связывающий фрагмент представляет собой KVEGS (X60=E), в то время как X52X53 может являться ND, и примером предпочтительного соединения, несущего такой связывающий фрагмент, является PSI0410 (SEQ ID NO: 268). В еще одном предпочтительном варианте осуществления, D60 и полный связывающий фрагмент отсутствуют, и примером такого соединения является предпочтительное соединение, обозначенное PSI0369 (SEQ ID NO: 259).
В вариантах осуществления вышеуказанного аспекта, [BM] и альбумин-связывающий домен являются такими, как определено выше в соответствующих аспектах. Предпочтительно, [L2] представляет собой DDPS.
В дополнительном аспекте, предоставлено соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
a. по меньшей мере один C5-связывающий полипептид, где указанный полипептид выбирают из:
a-1. полипептида, содержащего аминокислотную последовательность
[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54Q
где, независимо друг от друга,
[BM] представляет собой С5-связывающий мотив;
[L2] представляет собой RQPE;
X42 выбирают из A и S;
X43 выбирают из N и E;
X46 выбирают из A, S и C;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S;
X54 выбирают из A и S; и
a-2. полипептида, который имеет по меньшей мере 89% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом из a-1.;
b. по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена стрептококкового белка G или его производного; и
c. необязательно, по меньшей мере одного связывающего фрагмента для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C- или N- концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида.
Было обнаружено, что замена конкретных аминокислот в петле [L2] улучшает стабильность C5-связывающих соединений (например SEQ ID NO: 252) изобретения в сравнении с ранее известными C5-связывающими соединениями. В вариантах осуществления вышеуказанного аспекта, указанные [BM] и альбумин-связывающий домен представлены индивидуально, как определено выше в соответствующих аспектах. Предпочтительно, указанный связывающий фрагмент представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность KVX60GS, где X60 выбирают из D, E и A.
Изобретение включает полинуклеотиды, которые кодируют полипептиды согласно изобретению. Дополнительно включенными в изобретение являются векторы, такие как векторы экспрессии, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют полипептиды согласно изобретению. Включены также клетки-хозяева, которые содержат такие векторы.
Включенными в изобретение являются C5-связывающие полипептиды и соединения, описанные выше, для применения в терапии. В частности, C5-связывающие полипептиды и соединения согласно изобретению являются применимыми в способах лечения и/или профилактики состояний, ассоциированных с С-5, таких как воспалительные заболевания; аутоиммунные заболевания; инфекционные заболевания; сердечно-сосудистые заболевания; нейродегенеративные заболевания; повреждение трансплантата; болезни глаз; болезни почек; заболевания легких; гематологические заболевания, такие как пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ); аллергические заболевания и дерматологические заболевания.
В способах лечения и/или профилактики, указанные C5-связывающий полипептид или соединение предпочтительно могут вводиться внутривенно, подкожно, путем ингаляции, назально, перорально, интравитреально или местно.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1: Тест на стабильность известного ингибитора C5
C5-связывающее соединение, обозначенное PSI0242 (SEQ ID NO: 249) составляли в 25 мМ NaP/125 мМ NaCl pH 7,0 и подвергали ускоренному исследованию на стабильность в течение 2 недель при 37°C. Стабильность измеряли при появлении новых вариантов после тестирования стабильности посредством ДСН-ПААГ и обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ). При обоих анализах первоначальный образец и образец, подвергаемый исследованию на стабильность, анализировали параллельно. Для ДСН-ПААГ, 7,5 мкг белка загружали в каждую лунку. ОФХ проводили на ВЭЖХ Agilent 1100, используя подвижную фазу A, состоящую из 0,1% трифторуксусной кислоты (ТФУ) в воде, и используя подвижную фазу B, состоящую из 0,1% ТФУ/45% MeOH/45% изопропиламина (ИПА)/10% воды.
Результаты показывают, что новые формы белка образуются во время инкубации, причем эти новые формы визуализируются в виде полос на ДСН-ПААГ (Фиг. 1) и в виде новых пиков на хроматограммах обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ) (Фиг. 2). На Фиг. 2, основной пик после 2 недель инкубации соответствует 57% образца исходного белка.
Положения 1-60 в SEQ ID NO: 249 соответствуют полипептиду Z06175a, ранее раскрытому в WO 2013/126006 в виде SEQ ID NO: 753. PSI0242 (SEQ ID NO: 249) был получен по существу, как раскрыто в WO 2013/126006.
ПРИМЕР 2: Стабильность модифицированных C5-связывающих полипептидов и соединений
Модифицированные C5-связывающие полипептиды и соединения синтезировали и очищали по существу так, как описано в WO 2013/126006.
Вкратце, ДНК, кодирующая C5-связывающие Z варианты, представляла собой кодон E. coli, оптимизированный и синтезированный в GeneArt, GmbH. Синтетические гены, представляющие C5-связывающие Z варианты, субклонировали и экспрессировали в E. coli.
Экспрессированные внутриклеточно Z варианты очищали, используя общепринятые хроматографические методы. Гомогенизацию и осветление выполняли посредством обработки ультразвуком с последующими центрифугированием и фильтрацией. Анионо-обменную хроматографию применяли как стадию захвата. Дополнительную очистку проводили посредством хроматографии с гидрофобным взаимодействием. Очистку выполняли в кислой среде (pH 5,5). Обессоливание и буферный обмен выполняли посредством эксклюзионной хроматографии.
Очищенные белки составляли в 25 мМ NaP/125 мМ NaCl pH 7,0 и подвергали ускоренному исследованию на стабильность в течение 2 недель при 37°C. Стабильность измеряли по появлению новых вариантов после тестирования стабильности посредством ДСН-ПААГ и обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ). При обоих анализах первоначальный образец и образец, подвергаемый исследованию на стабильность, анализировали параллельно. Для ДСН-ПААГ, 7,5 мкг белка загружали в каждую лунку. Пример полученного в результате геля показан на Фиг. 3.
ОФХ проводили на ВЭЖХ Agilent 1100, используя подвижную фазу A, состоящую из 0,1% трифторуксусной кислоты (ТФУ) в воде, и подвижную фазу B, состоящую из 0,1% ТФУ/45% MeOH/45% изопропиламина (ИПА)/10% воды. Пример полученной в результате хроматограммы показан на Фиг. 4 для SEQ ID NO: 253.
Результаты тестирования стабильности обобщены в Таблице I, ниже.
Таблица I
SEQ ID NO: Название ДСН-ПААГ полосы ОФХ пред-пики Основной пик (% общего белка) ОФХ после-пики
249 PSI0242 2 2 57 1
252 PSI0332 2 1 57 1
253 PSI0334 1 1 73 0
254 PSI0335 2 2 57 1
255 PSI0336 2 2 57 1
256 PSI0337 2 2 57 1
257 PSI0339 2 2 57 1
258 PSI0340 2 2 67 1
259 PSI0369 2 1 90 1
260 PSI0377 1 0 77 0
261 PSI0378 1 0 89 0
262 PSI0379 1 0 88 0
263 PSI0381 1 0 87 0
264 PSI0383 1 0 91 0
267 PSI0400 1 0 91 0
268 PSI0410 1 1 72 1
269 PSI0403 1 1 77 1
270 PSI0404 1 1 88 0
На основании данных Таблицы I можно сделать вывод, что некоторые модифицированные C5-связывающие полипептиды или соединения имеют улучшенные свойства, такие как увеличенная стабильность, при сравнении с PSI0242. Такие улучшенные C5-связывающие полипептиды или соединения включают PSI0334 (SEQ ID NO: 253), PSI0340 (SEQ ID NO: 258), PSI0369 (SEQ ID NO: 259), PSI0377 (SEQ ID NO: 260), PSI0378 (SEQ ID NO: 261), PSI0379 (SEQ ID NO: 262), PSI0381 (SEQ ID NO: 263), PSI0383 (SEQ ID NO: 264), PSI0400 (SEQ ID NO: 267), PSI0410 (SEQ ID NO: 268), PSI0403 (SEQ ID NO: 269) и PSI0404 (SEQ ID NO: 270). В шести из указанных вариантов (SEQ ID NO: 253, 260, 261, 262, 264 и 267), аминокислотные остатки в положениях 52-53 были заменены с ND (см. PSI0242) на SE. В SEQ ID NO: 263, соответствующей заменой является с ND на ES. В SEQ ID NO: 269 только аминокислотный остаток в положении 53 был заменен с D на E, в то время как в SEQ ID NO: 270 аминокислотный остаток в положении 52 был заменен с N на S.
Дополнительно, PSI0378 (SEQ ID NO: 261), PSI0381 (SEQ ID NO: 263), PSI0383 (SEQ ID NO: 264), PSI0410 (SEQ ID NO: 268), PSI0403 (SEQ ID NO: 269) и PSI0404 (SEQ ID NO: 270), имеют, в общем, замену аминокислотного остатка D на E в положении 60.
Комбинированный благоприятный эффект от увеличивающих стабильность замен в положении 52 или 53 и положении 60 можно видеть на Фиг. 5, показыващей хроматограмму PSI0383 (SEQ ID NO: 264). В PSI0379 (SEQ ID NO: 262) заменой в положении 60 является замена D на A.
В PSI0369 (SEQ ID NO: 259) линкерный фрагмент (включающий D60) удаляют полностью, получая более стабильное C5-связывающее соединение, что указывает на влияние положения 60 на стабильность C5-связывающих соединений.
ПРИМЕР 3: Связывание модифицированных соединений с человеческим C5
Человеческий сывороточный альбумин иммобилизовали на аминореакционноспособных биосенсорах 2го поколения типа Dip и Read (AR2G) (Pall Life sciences (ForteBio) Кат # 18-5092) посредством сочетания амина. PSI0242 (SEQ ID NO: 249; 1 мкМ) и C5-связывающие соединения (1 мкМ) в буфере считывания (HBS-EP Буфер готовый к применению 200 мл, GE Healthcare #BR100188) загружали, каждый на поверхность отдельного сенсора, с использованием HSA, в течение 120 секунд с последующей регистрацией базовой линии в течение 60 секунд в буфере считывания перед подверганием воздействию человеческого C5 (Quidel Кат. # 403) в концентрациях в интервале от 0,79 нМ до 25 нМ в буфере считывания с циклом регенерации и регистрацией базовой линии между каждой концентрацией. Условия регенерации для сенсоров представляли собой 10 мМ Глицин, pH 2 (три импульса по 30 секунд и подвижный буфер в течение 60 секунд). Проводили вычитание эталонной спектрограммы, полученной для аналогичной конструкции, содержащей альбумин-связывающий домен (SEQ ID NO: 250), но не имеющей C5-связывающей способности. Данные анализировали в соответствии с моделью Лэнгмюра 1:1, используя ForteBio Analysis 7.1 (программное обеспечение для кинетики от Pall Life sciences (ForteBio)).
KD взаимодействия с C5 относительно PSI0242 (SEQ ID NO: 249) показана в Таблице II. KD PSI0242 варьировала от 1-3 нМ в различных сериях.
Результаты в Таблице II указывают на то, что C5-связывающие соединения согласно изобретению имеют способность к связыванию с человеческим С5, которая является аналогичной такой способности полипептида PSI0242 (SEQ ID NO: 249), раскрытого в WO 2013/126006.
Таблица II
SEQ ID NO: Название Отн. KD
249 PSI0242 1,0
253 PSI0334 1,1
261 PSI0378 1,3
263 PSI0381 23
264 PSI0383 2,1
ПРИМЕР 4: Стабильность химически синтезированного C5-связывающего полипептида
Химически синтезированный PSI0400 (SEQ ID NO: 267) был получен по заказу от BACHEM AG. Стабильность полипептида тестировали в соответствии с такой же методологией, как в Примере 2. Результаты тестирования стабильности показаны в Таблице III.
Таблица III
SEQ ID NO: Название ДСН-ПААГ полосы ОФХ пред-пики Основной пик
(% от общего белка)		 ОФХ после-пики
267 PSI0400 1 0 91 0
Стабильность PSI0400 была сравнимой со стабильностью полипептидов, которые продуцировались в E.coli в Примере 2.
Целостность складки PSI0400 (SEQ ID NO: 267) сравнивали с целостностью C5-связывающего полипептида (PSI0257, SEQ ID NO: 271), полученного в соответствии с методами Примера 2, используя спектры кругового дихроизма в дальней УФ-области (КД).
Спектры CD регистрировали на КД-спектрополяриметре J-720 (Jasco, Japan). Образцы разбавляли до концентрации белка 0,17 мг/мл, используя Pi буфер (5 мМ Na-K-PO4, pH 7.0). Сначала записывали спектр КД Pi-буфера, затем спектры записывали для каждого из образцов и окончательно снова для Pi-буфера. Так как два спектра буфера совпадали, первоначально записанный спектр применяли в качестве спектра буфера. Спектр буфера сглаживали, применяя методику Савицкого-Голэя с шириной свертки, равной 25. Другие спектры сглаживали в соответствии с такой же методикой с шириной свертки, равной 15. Сглаженный спектр буфера затем вычитали из каждого другого сглаженного спектра. Программу CDNN применяли для оценки вторичного содержимого белков, и полученные в результате оценки представлены в Таблице IV. Результаты показали, что ни две замены аминокислот в положении 52 и 53, ни получение полипептида посредством химического синтеза не влияют на содержимое вторичной структуры химически синтезированного полипептида. Целостность содержания вторичной структуры сравнивали с рекомбинантно полученным PSI0257 (SEQ ID NO: 271).
Таблица IV
SEQ ID NO: 271 SEQ ID NO: 267
Спираль 63% 69%
Антипараллельная 3% 2%
Параллельная 3% 3%
Бета-изгиб 13% 12%
Беспорядочная Спираль 13% 11%
ПРИМЕР 5: Связывание модифицированных соединений и полипептидов с человеческим C5
Аффинность связывания C5-связывающих соединений PSI0242 (SEQ ID NO: 249), PSI0340 (SEQ ID NO: 258), PSI0378 (SEQ ID NO: 261), и PSI0410 (SEQ ID NO: 268) и C5-связывающего полипептида PSI0400 (SEQ ID NO: 267) для человеческого C5 анализировали, используя прибор Biacore T200 (GE Healthcare). Человеческий C5 (A403, Quidel Corporation) сочетали с сенсорным чипом CM5 (900 RU), используя химическую реакцию сочетания с аминной группой, в соответствии с протоколом изготовителя. Сочетание выполняли посредством инъекционного ввода hC5 при концентрации, равной 7,5 мкг/мл в 10 мМ Na-ацетатного буфера с pH=5 (GE Healthcare). Элемент сравнения обрабатывали таким же реагентом, но без инъекции человеческого C5. Связывание связующих для C5 с иммобилизованным hC5 исследовали с помощью метода кинетики с одним циклом, в котором пять концентраций образца, обычно, 25, 12,5, 6,25, 3,12 и 1,56 нМ в HBS-EP буфере (10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% ПАВ P20, GE Healthcare) инъекционно вводили один за другим при скорости потока, равной 30 мкл/мин при 25°C в том же самом цикле без регенерации между инъекциями. Данные, полученные от элемента сравнения, вычитали, чтобы скомпенсировать объемные изменения показателя преломления. В большинстве случаев, инъекцию HBS-EP также включали в качестве контроля, таким образом, чтобы сенсограммы были скомпенсированы дважды. Поверхности регенерировали в HBS-EP буфере. Кинетические константы рассчитывали по сенсограммам, используя аналит-модель Лэнгмюра 1:1 из программного обеспечения оценки для Biacore T200, версия 1.0. Полученные в результате значения KD взаимодействий представлены в Таблице V.
Таблица V
SEQ ID NO: Название KD (нМ)
249 PSI0242 1,3
258 PSI0340 2,5
261 PSI0378 2,1
267 PSI0400 0,53
268 PSI0410 1,3
Увеличивающие стабильность замены аминокислот не являются неблагоприятными для способности молекул связываться с C5, и, таким образом, не влияют на их биологические активности.
ПРИМЕР 6: Ингибирование гемолиза
Для исследований функции классического пути комплемента и его ингибирования посредством C5-связывающих соединений PSI0378 (SEQ ID NO: 261) и PSI0410 (SEQ ID NO: 268), и C5-связывающего полипептида PSI0400 (SEQ ID NO: 267), бараньи эритроциты получали из свежей цельной крови баранов в растворе Олсвера (Национальный Ветеринарный Институт Швеции) и затем обрабатывали кроличьей антисывороткой против бараньих эритроцитов (Sigma), чтобы получить сенсибилизированные антителами бараньи эритроциты (EA). Весь процесс проводили в асептических условиях. Все другие реагенты получали из коммерческих источников.
Аналитический тест in vitro проводили в 96-луночном U-образном микротитрационном планшете посредством последовательных добавлений тестируемого белка, сыворотки комплемента и суспензии EA. Конечные концентрации всех реагентов, в полном реакционном объеме, равном 50 мкл на лунку и при pH 7,3-7,4, составляли: 0,15 мМ CaCl2; 0,5 мМ MgCl2; 3 мМ NaN3; 138 мМ NaCl; 0,1% желатина; 1,8 мМ натрия барбитала; 3,1 мМ барбитуровой кислоты; 5 миллионов EA; белок С5 сыворотки комплемента при подходящем разведении и C5-связывающее соединение или полипептид при желательных концентрациях.
C5-связывающие соединения и полипептид предварительно инкубировали с описанной выше сывороткой комплемента в течение 20 мин на льду перед началом реакции посредством добавления суспензии EA. Гемолитическую реакцию проводили при 37°C при встряхивании в течение 45 мин и затем необязательно заканчивали добавлением 100 мкл ледяного физраствора, содержащего 0,02% Твина 20. Клетки центрифугировали до полного осаждения, и верхнюю часть, соответствующую 100 мкл супернатанта, переносили в прозрачный микропланшет, имеющий плоскодонные лунки с половинным объемом. Результаты реакции анализировали по оптической плотности, используя считывающее устройство для микротитрационных планшетов при длине волны, равной 415 нм.
Во всех случаях тестирования, контрольный образец (PSI0242, SEQ ID NO: 249) и несущую среду включали в каждый планшет для определения значений для неингибированных и полностью ингибированных реакций, соответственно. Эти значения применяли для расчета% ингибирования гемолиза комплемента при любой данной концентрации образца. Ингибиторные активности (IC50-значения) тестируемых C5-связывающих соединений и полипептида определяли, применяя такой же аналитический тест в присутствии контролируемой концентрации человеческого С5, добавленного к сыворотке, лишенной C5. Для высокоактивных ингибиторов (от низких наномолярных до субнаномолярных), конечную концентрацию C5 в реакционной смеси контролировали при 0,1 нМ, которую необязательно устанавливали, используя сыворотку, лишенную C5, или с недостатком С5. Результаты представлены ниже в Таблице VI.
Таблица VI
SEQ ID NO: Название Активность (%) IC50 (нМ)
249 PSI0242 100 0,47
261 PSI0378 83 0,58
267 PSI0400 - 4
268 PSI0410 107 0,49
Результаты аналитического теста на гемолиз показывают, что улучшенные C5-связывающие соединения SEQ ID NO: 261 и 268 являются сравнимыми с эталонным соединением. C5-связывающий полипептид SEQ ID NO: 267 был функциональным в аналитическом тесте, но поскольку он не содержит альбумин-связывающий домен, результаты не могут напрямую сравниваться с эталонным соединением.
ПРИМЕР 7: Связывание с человеческим альбумином
Для оценки аффинности связывания C5-связывающих соединений для альбумина, применяли ELISA с человеческим альбумином с использованием рекомбинантного человеческого альбумина (покрытие) и доступных для приобретения антител (первичных и обнаруживающих), приобретенных от Novozymes, Affibody AB и DakoCytomation, соответственно. Стандарт для метода, полученный из PSI0242 (SEQ ID NO:249), содержащий C5-связывающий полипептид и альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, применяли для количественных измерений образцов. 96-луночный микропланшет покрывали рекомбинантным человеческим альбумином. Планшет затем промывали забуференным фосфатом физраствором, содержащим 0,05% Твин 20 (PBST) и блокировали в течение 1-2 часов 1% казеином в PBS. После промывки планшета, в него добавляли стандарт, контроли метода, контрольный образец и тестируемые образцы. После инкубации в течение 2 часов, несвязанное вещество удаляли промывкой. Козьи против-Affibody® IgG (Affibody AB, кат. №. 20.1000.01.0005) добавляли в лунки, и планшет инкубировали в течение 1,5 часов для обеспечения связывания со связанными C5-связывающими соединениями. После промывки, обеспечивали связывание кроличьих против-козьих IgG HRP с козьими антителами в течение 1 ч. После конечной промывки, количество связанной HRP обнаруживали посредством добавления TMB-субстрата, который превращался в синий продукт под действием фермента. Добавление 1 M хлористоводородной кислоты через 30 минут останавливало реакцию, и цвет содержимого лунки изменялся с синего на желтый. Поглощение при 450 нм измеряли фотометрически, используя поглощение при 650 нм в качестве эталонной длины волны. Интенсивность окраски была пропорциональной количеству PSI0242 (SEQ ID NO:249), и концентрации образцов определяли по стандартной кривой.
C5-связывающие соединения, содержащие альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, оказались способными к связыванию с человеческим альбумином, и данные представлены в Таблице VII ниже.
Таблица VII
SEQ ID NO: Название % от общего содержания белка
249 PSI0242 103
261 PSI0378 85
268 PSI0410 150
Результаты аналитического теста показали, что оба исследованных C5-связывающих соединения с улучшенной стабильностью поддерживают их способность связываться с человеческим альбумином.
ПРИМЕР 8: Тест C5-связывающих полипептидов/соединений на стабильность в течение 3 месяцев
C5-связывающие полипептиды/соединения, которые показали улучшенную стабильность в сравнении с PSI0242 в тесте на стабильность в течение 2 недель при 37°C (Пример 2), подвергали более длительному тесту на стабильность в течение 3 месяцев при 37°C. Набор установок теста на стабильность был таким же, как описано в Примере 2, и оценку стабильности проводили посредством измерения процентной доли основного пика хроматограммы от содержания общего белка посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФХ), причем метод ОФХ осуществляли, как описано в примере 2. Данные 2-х-недельного исследования из примера 2 включены в Таблицу VIII ниже, чтобы упростить интерпретацию.
Таблица VIII
SEQ ID NO: Название 2 недели, 37°C
Основной пик
(% от общего белка)		 3 месяца, 37°C
Основной пик
(% от общего белка)
253 PSI0334 73 16
261 PSI0378 89 59
262 PSI0379 88 58
263 PSI0381 87 46
264 PSI0383 91 59
268 PSI0410 72 16
269 PSI0403 77 35
270 PSI0404 88 46
C5-связывающие соединения с заменами аминокислот в положении 52, 53 с ND на SE и заменой в положении 60 с D на E или A (SEQ ID NO: 261, 264, и 262) в сравнении с PSI0242 имеют более высокую долю белка в исходной форме через 3 месяца при 37°C, чем PSI0242 (SEQ ID NO: 249) имеет через 2 недели при таких же условиях. Другие соединения также проявляли увеличенную стабильность.
ПРИМЕР 9: Стабильность аналогично модифицированных полипептидов
Ранее известные полипептидные варианты, являющиеся производными белка Z (Grönwall et al. J Biotechnol 2007, 128:162-183) с аффинностью связывания для целевых молекул, отличных от C5, были аналогичным образом модифицированы в конкретных положениях аминокислотной последовательности, чтобы улучшить стабильность. Отбор и получение исходных полипептидных вариантов с аффинностью связывания для человеческого рецептора 2 эпидермального фактора роста (HER2), рецептора бета фактора роста тромбоцитов (PDGF-Rβ), неонатального Fc рецептора (FcRn) и карбоангидразы IX (CAIX) раскрыты, например, в WO 2009/080810, WO 2009/077175, PCT/EP2014/055299 и WO 2014/096163. Полипептидные варианты с улучшенной стабильностью получали посредством сайт-направленного мутагенеза в выбранных положениях аминокислотной последовательности. Улучшающие стабильность замены аминокислот в полипептидных вариантах Z02891 (SEQ ID NO: 272), нацеленные на HER2; Z15805 (SEQ ID NO: 275), нацеленные на PDGF-Rβ; Z10103 (SEQ ID NO: 278), нацеленные на FcRn; и Z09782 (SEQ ID NO: 281), нацеленные на CAIX, приведены ниже в Таблице IX. Эти полипептидные варианты с улучшенной стабильностью отличаются от C5-связывающих полипептидов настоящего изобретения, например, в том, что они имеют связывающий мотив [BM] с аффинностью связывания для HER2, PDGF-Rβ, FcRn и CAIX.
Все варианты клонировали с N-концевой 6 × Гистидиновой-меткой (His6) и имели достигнутые конструкции кодируемых полипептидов в формате MGSSHHHHHHLQ-[Z#####]. Мутации вводили в плазмиды полипептидных вариантов, используя перекрывающиеся пары олигонуклеотидных праймеров, кодирующие желательные замены аминокислот, и применяя установленные технологии молекулярной биологии. Корректные плазмидные последовательности верифицировали посредством секвенирования ДНК.
Клетки E coli (штамма T7E2) (GeneBridge) трансформировали плазмидами, содержащими генные фрагменты, кодирующие исходные и модифицированные полипептиды. Клетки культивировали при 37°C в среде TSB-YE, дополненой 50 мкг/мл канамицина и экспрессию белка последовательно индуцировали добавлением IPTG. Осажденные центрифугированием клетки разрушали, используя гомогенизатор FastPrep®-24 (Nordic Biolabs), и клеточный дебрис удаляли центрифугированием. Каждый супернатант, содержащий полипептидный вариант в виде His6-меченого белка, очищали посредством аффинной хроматографии с иммобилизованными ионами металлов (IMAC), используя колонки His GraviTrapTM (GE Healthcare) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенные полипептидные варианты подвергали замене буфера на забуференный фосфатом физраствор (PBS; 1,47 мМ KH2PO4, 8,1 мМ Na2HPO4, 137 мМ NaCl, 2,68 мМ KCl, pH 7,4) используя колонки для обессоливания PD-10 (GE Healthcare). Корректную идентичность каждого полипептида верифицировали посредством ДСН-ПААГ и ВЭЖХ-МС.
Таблица IX
SEQ ID NO: Название Мишень Аминокислотные замены Исходные в сравнении с модифицированными
272 Z02891 HER2 - Исходный
273 Z17341 HER2 N52S, D53E Модифицированный
274 Z17342 HER2 D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E Модифицированный
275 Z15805 PDGF-Rβ - Исходный
276 Z17343 PDGF-Rβ N52S, D53E Модифицированный
277 Z17344 PDGF-Rβ D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E Модифицированный
278 Z10103 FcRn - Исходный
279 Z17347 FcRn N52S, D53E Модифицированный
280 Z17348 FcRn D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E Модифицированный
281 Z09782 CAIX - Исходный
282 Z17351 CAIX N52S, D53E Модифицированный
283 Z17352 CAIX D36R, D37Q, S39E, N52S, D53E Модифицированный
284 Z17355 CAIX D53E Модифицированный
285 Z17357 CAIX D36R, D37Q, S39E, D53E Модифицированный
286 Z17359 CAIX N52S Модифицированный
287 Z17360 CAIX D36R, D37Q, S39E, N52S Модифицированный
Помимо замен одной из (SEQ ID NO: 284-287) или обеих из (SEQ ID NO: 273-274, 276-277, 279-280, 282-283) N52 и D53, замены также проводили в положениях, соответствующих петле [L2]. Таким образом, в полипептидных вариантах SEQ ID NO: 274, 277, 280, 283, 285, и 287, [L2] представляет собой RQPE.
Для выполнения тестирования на стабильность, полипептидные варианты, составленные в PBS с pH 7,4, разбавляли до 1 мг/мл, и аликвоты по 200 мкл инкубировали при 37°C в течение 2 недель. Образцы, собранные до и после теста на стабильность, анализировали посредством ДСН-ПААГ, используя 10% гели Bis-Tris NuPAGE (Invitrogen) и загружая 5 мкг белка в каждую лунку. Полученные в результате окрашенные Кумасси голубым гели показаны на Фиг. 6. Стабильность оценивали по появлению новых вариантов после инкубации при повышенной температуре, и подвергшиеся мутации варианты сравнивали с соответствующим исходным полипептидом.
Все полипептидные варианты с модификациями, как выделено в Таблице IX, показали улучшенную стабильность в сравнении с соответствующим исходным полипептидом в том смысле, что вторая полоса непосредственно выше основной полосы, наблюдаемой для образцов исходного полипептида, не являлась видимой в образцах модифицированных полипептидов с заменой D53E и/или N52S, см. Фиг. 6. Полипептиды с заменами D53E и/или N52S в комбинации с заменами D36R, D37Q и S39E показали аналогичные профили на геле ДСН-ПААГ. Замена D53E по отдельности или в комбинации с заменами D36R, D37Q и S39E, по-видимому, снижает количество вида с альтернативной конформацией, наблюдаемого в виде второй полосы на геле ДСН-ПААГ, но не может полностью предотвратить образованием данного вида.
Дополнительно, тестировали способность к связыванию модифицированных полипептидных вариантов. Все полипептидные варианты сохраняли их аффинность связывания для их мишени после модификации (результаты не показаны).
Результаты, представленные выше для полипептидных вариантов, имеющих аффинность связывания для других целевых молекул, отличных от C5, хорошо соответствует результатам, представленным для C5-связывающих полипептидов и соединений настоящего изобретения (см., например, Примеры 2 и 4). Таким образом, конкретные аминокислотные модификации, как описано в данном документе, очевидно, обладают стабилизирующим эффектом независимо от аминокислотной последовательности [BM]. Аминокислотные модификации или замены, описанные в данном документе, таким образом, рассматривают, как улучшающие стабильность всех C5-связывающих полипептидов и соединений, описанных в данном документе, и в WO 2013/126006.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Swedish Orphan Biovitrum AB
<120> СТАБИЛЬНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С C5 КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА
<130> 21070713
<160> 287
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 1
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 2
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 2
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 3
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 3
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 4
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 4
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 5
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 5
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 6
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 6
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 7
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 7
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 8
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 8
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 9
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 9
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 10
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 10
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 11
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 11
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 12
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 12
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 13
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 13
Glu Thr Ile Thr Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Gly Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 14
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 14
Glu Ser Met Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Asn
1 5 10 15
Ile Asn Gln Trp Val Ala Phe Ile Asp Ser Leu Tyr Asp
20 25
<210> 15
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 15
Glu Ser Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Thr Asp
20 25
<210> 16
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 16
Glu Val Leu Asp Ala Trp His Glu Ile Asp Thr Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Val Arg Gln Trp Leu Ala Phe Ile Ser Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 17
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 17
Glu His Ile Gln Ala Asn Glu Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20 25
<210> 18
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 18
Glu Val Leu His Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 19
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 19
Glu Val Leu Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 20
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 20
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 21
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 21
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 22
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 22
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 23
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 23
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 24
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 24
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 25
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 25
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 26
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 26
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 27
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 27
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 28
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 28
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 29
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 29
Glu Thr Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 30
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 30
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 31
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 31
Glu Val Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 32
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 32
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 33
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 33
Glu Val Leu Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 34
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 34
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 35
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 35
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 36
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 36
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 37
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 37
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 38
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 38
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 39
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 39
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 40
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 40
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 41
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 41
Glu Thr Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 42
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 42
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 43
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 43
Glu Thr Leu His Ala Trp Ala Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 44
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 44
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 45
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 45
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 46
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 46
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 47
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 47
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 48
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 48
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 49
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 49
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 50
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 50
Glu Val Ile Ser Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 51
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 51
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 52
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 52
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 53
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 53
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 54
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 54
Glu Val Leu Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 55
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 55
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 56
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 56
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 57
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 57
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 58
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 58
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 59
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 59
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 60
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 60
Glu His Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Gln Asp
20 25
<210> 61
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 61
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 62
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 62
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 63
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 63
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 64
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 64
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 65
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 65
Glu Val Ile His Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 66
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 66
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 67
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 67
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 68
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 68
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 69
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 69
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 70
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 70
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 71
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 71
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 72
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 72
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 73
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 73
Glu Val Leu Asp Ala Trp His Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 74
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 74
Glu Gln Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 75
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 75
Glu Thr Leu Tyr Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Gln Asp
20 25
<210> 76
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 76
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 77
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 77
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 78
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 78
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 79
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 79
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 80
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 80
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 81
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 81
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Ala Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 82
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 82
Glu His Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 83
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 83
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 84
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 84
Glu Val Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Tyr Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 85
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 85
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 86
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 86
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 87
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 87
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 88
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 88
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 89
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 89
Glu His Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 90
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 90
Glu Val Val Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asn Asp
20 25
<210> 91
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 91
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 92
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 92
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 93
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 93
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 94
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 94
Glu Val Val Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 95
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 95
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 96
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 96
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 97
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 97
Glu Val Val Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 98
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 98
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 99
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 99
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 100
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 100
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 101
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 101
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 102
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 102
Glu His Ile His Ala Trp Asn Glu Ile Asp Glu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 103
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 103
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 104
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 104
Glu Val Ile Asp Ala Asn Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20 25
<210> 105
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 105
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 106
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 106
Glu Val Leu Leu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 107
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 107
Glu His Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 108
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 108
Glu Val Ile Glu Ala Trp Ser Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 109
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 109
Glu Gln Leu Asn Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 110
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 110
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 111
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 111
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 112
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 112
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 113
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 113
Glu Val Leu Tyr Ala Trp Ala Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 114
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 114
Glu Gln Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 115
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 115
Glu Val Leu Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 116
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 116
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 117
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 117
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 118
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 118
Glu Val Ile Asp Ala Asn Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20 25
<210> 119
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 119
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 120
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 120
Glu Val Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 121
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 121
Glu Val Ile Asn Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 122
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 122
Glu His Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 123
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 123
Glu His Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 124
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 124
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 125
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 125
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 126
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 126
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 127
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 127
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 128
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 128
Glu Gln Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 129
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 129
Glu Val Leu Asn Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 130
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 130
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 131
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 131
Glu Val Leu Leu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 132
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 132
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 133
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 133
Glu Thr Leu Leu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 134
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 134
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Thr Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 135
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 135
Glu Val Leu His Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Gln Asp
20 25
<210> 136
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 136
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 137
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 137
Glu Thr Val Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 138
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 138
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 139
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 139
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 140
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 140
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 141
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 141
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 142
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 142
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 143
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 143
Glu Val Ile Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 144
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 144
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 145
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 145
Glu Val Ile Gln Ala Asn Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20 25
<210> 146
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 146
Glu Val Leu His Ala Trp Ser Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 147
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 147
Glu Thr Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 148
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 148
Glu Thr Leu Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 149
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 149
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 150
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 150
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 151
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 151
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 152
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 152
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 153
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 153
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 154
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 154
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 155
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 155
Glu Thr Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 156
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 156
Glu Val Leu Thr Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 157
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 157
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Val Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 158
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 158
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 159
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 159
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 160
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 160
Glu Thr Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 161
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 161
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 162
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 162
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 163
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 163
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 164
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 164
Glu Thr Leu His Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 165
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 165
Glu Val Ile Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 166
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 166
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 167
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 167
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Thr Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 168
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 168
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 169
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 169
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 170
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 170
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 171
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 171
Glu Val Leu Glu Ala Trp Ala Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 172
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 172
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 173
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 173
Glu Thr Leu Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 174
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 174
Glu Thr Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 175
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 175
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 176
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 176
Glu Val Ile Glu Ala Trp Ser Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 177
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 177
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 178
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 178
Glu Val Ile His Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 179
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 179
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 180
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 180
Glu Gln Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 181
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 181
Glu Val Val Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 182
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 182
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 183
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 183
Glu Val Ile Glu Ala Asn Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu His Asp
20 25
<210> 184
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 184
Glu Thr Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 185
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 185
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 186
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 186
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 187
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 187
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 188
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 188
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 189
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 189
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 190
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 190
Glu Val Ile Ala Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gly Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 191
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 191
Glu Thr Leu Asn Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 192
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 192
Glu Val Leu Ser Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 193
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 193
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 194
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 194
Glu Gln Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 195
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 195
Glu Val Val Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 196
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 196
Glu Val Leu Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Glu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 197
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 197
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 198
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 198
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 199
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 199
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 200
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 200
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 201
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 201
Glu Val Leu Asp Ala Trp Ala Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 202
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 202
Glu His Ile Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 203
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 203
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 204
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 204
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 205
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 205
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 206
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 206
Glu Val Ile Thr Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ser Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 207
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 207
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile His Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 208
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 208
Glu Gln Leu Lys Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Gln Asp
20 25
<210> 209
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 209
Glu His Ile Asp Ala Trp Thr Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 210
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 210
Glu Gln Leu Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Gln Asp
20 25
<210> 211
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 211
Glu Val Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 212
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 212
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 213
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 213
Glu His Val Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 214
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 214
Glu Val Ile Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 215
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 215
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 216
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 216
Glu Val Leu Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 217
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 217
Glu Val Ile Lys Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 218
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 218
Glu Val Leu Glu Ala Trp His Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 219
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 219
Glu Val Leu Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 220
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 220
Glu Gln Leu Tyr Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Gln Asp
20 25
<210> 221
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 221
Glu Val Leu Asn Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Lys Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 222
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 222
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Val Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 223
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 223
Glu Val Val Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 224
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 224
Glu Val Ile Arg Ala Trp Asp Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 225
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 225
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 226
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 226
Glu Val Val Ala Ala Trp Thr Glu Ile Asp Leu Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 227
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 227
Glu Val Val Ala Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ser Asp
20 25
<210> 228
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 228
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Arg Glu Ile Asp Ser Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 229
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 229
Glu Val Ile Lys Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 230
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 230
Glu Val Leu Glu Ala Trp Thr Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 231
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 231
Glu Thr Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 232
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 232
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 233
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 233
Glu Thr Ile Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 234
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 234
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 235
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 235
Glu Val Leu Ser Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 236
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 236
Glu Val Ile Gln Ala Asn Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile His Lys Leu His Asp
20 25
<210> 237
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 237
Glu His Leu Asp Ala Trp Asp Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 238
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 238
Glu Val Ile Gln Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 239
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 239
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Tyr Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gln Trp Ile Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 240
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 240
Glu Thr Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Gln Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 241
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 241
Glu Thr Ile Gln Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 242
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 242
Glu Thr Leu Asp Ala Trp Ala Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 243
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 243
Glu Val Ile Glu Ala Trp Asp Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Leu Asn Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 244
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 244
Glu Val Leu Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 245
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 245
Glu Val Leu His Ala Trp Asn Glu Ile Asp His Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Glu Lys Leu Glu Asp
20 25
<210> 246
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 246
Glu Val Ile Glu Ala Trp Gln Glu Ile Asp Lys Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Asp Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 247
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 247
Glu Val Val Asp Ala Trp Asn Glu Ile Asp Gln Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Asp Asp
20 25
<210> 248
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 248
Glu Gln Ile Glu Ala Trp Asn Glu Ile Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn Lys Leu Ala Asp
20 25
<210> 249
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 249
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 250
<211> 46
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 250
Leu Ala Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly
1 5 10 15
Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu
20 25 30
Gly Val Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
35 40 45
<210> 251
<211> 1676
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 251
Met Gly Leu Leu Gly Ile Leu Cys Phe Leu Ile Phe Leu Gly Lys Thr
1 5 10 15
Trp Gly Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg
20 25 30
Val Gly Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu
35 40 45
Ala Phe Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe
50 55 60
Ser Tyr Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln
85 90 95
Asn Pro Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser
100 105 110
Lys Ser Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp Asn Gly Phe Leu Phe Ile
115 120 125
His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp Gln Ser Val Lys Val Arg
130 135 140
Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro Ala Lys Arg Glu Thr Val
145 150 155 160
Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu Val Asp Met Val Glu Glu
165 170 175
Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro Asp Phe Lys Ile Pro Ser
180 185 190
Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys Ala Lys Tyr Lys Glu Asp
195 200 205
Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu
210 215 220
Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly Tyr
225 230 235 240
Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe Tyr
245 250 255
Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile Arg
260 265 270
Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met Gln
275 280 285
Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser Glu
290 295 300
Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn Asn
305 310 315 320
Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly Phe
325 330 335
Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser Pro Tyr
340 345 350
Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly Ile Pro
355 360 365
Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu Val Gly
370 375 380
Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn Gln Glu
385 390 395 400
Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp Asp Gly
405 410 415
Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val Leu Glu
420 425 430
Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn Gln Ala
435 440 445
Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Gln Ser Tyr
450 455 460
Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys Ala Leu Leu Val Gly Glu
465 470 475 480
His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser Pro Tyr Ile Asp Lys Ile
485 490 495
Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys Gly Lys Ile Ile His Phe
500 505 510
Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser Tyr Gln Ser Ile Asn Ile
515 520 525
Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser Arg Leu Leu Val Tyr Tyr
530 535 540
Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu Val Ser Asp Ser Val Trp
545 550 555 560
Leu Asn Ile Glu Glu Lys Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser
565 570 575
Pro Asp Ala Asp Ala Tyr Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met
580 585 590
Ala Thr Gly Met Asp Ser Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala
595 600 605
Val Tyr Gly Val Gln Arg Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe
610 615 620
Gln Phe Leu Glu Lys Ser Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu
625 630 635 640
Asn Asn Ala Asn Val Phe His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn
645 650 655
Ala Asn Ala Asp Asp Ser Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile
660 665 670
Leu Arg Pro Arg Arg Thr Leu Gln Lys Lys Ile Glu Glu Ile Ala Ala
675 680 685
Lys Tyr Lys His Ser Val Val Lys Lys Cys Cys Tyr Asp Gly Ala Cys
690 695 700
Val Asn Asn Asp Glu Thr Cys Glu Gln Arg Ala Ala Arg Ile Ser Leu
705 710 715 720
Gly Pro Arg Cys Ile Lys Ala Phe Thr Glu Cys Cys Val Val Ala Ser
725 730 735
Gln Leu Arg Ala Asn Ile Ser His Lys Asp Met Gln Leu Gly Arg Leu
740 745 750
His Met Lys Thr Leu Leu Pro Val Ser Lys Pro Glu Ile Arg Ser Tyr
755 760 765
Phe Pro Glu Ser Trp Leu Trp Glu Val His Leu Val Pro Arg Arg Lys
770 775 780
Gln Leu Gln Phe Ala Leu Pro Asp Ser Leu Thr Thr Trp Glu Ile Gln
785 790 795 800
Gly Val Gly Ile Ser Asn Thr Gly Ile Cys Val Ala Asp Thr Val Lys
805 810 815
Ala Lys Val Phe Lys Asp Val Phe Leu Glu Met Asn Ile Pro Tyr Ser
820 825 830
Val Val Arg Gly Glu Gln Ile Gln Leu Lys Gly Thr Val Tyr Asn Tyr
835 840 845
Arg Thr Ser Gly Met Gln Phe Cys Val Lys Met Ser Ala Val Glu Gly
850 855 860
Ile Cys Thr Ser Glu Ser Pro Val Ile Asp His Gln Gly Thr Lys Ser
865 870 875 880
Ser Lys Cys Val Arg Gln Lys Val Glu Gly Ser Ser Ser His Leu Val
885 890 895
Thr Phe Thr Val Leu Pro Leu Glu Ile Gly Leu His Asn Ile Asn Phe
900 905 910
Ser Leu Glu Thr Trp Phe Gly Lys Glu Ile Leu Val Lys Thr Leu Arg
915 920 925
Val Val Pro Glu Gly Val Lys Arg Glu Ser Tyr Ser Gly Val Thr Leu
930 935 940
Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Gly Thr Ile Ser Arg Arg Lys Glu Phe Pro
945 950 955 960
Tyr Arg Ile Pro Leu Asp Leu Val Pro Lys Thr Glu Ile Lys Arg Ile
965 970 975
Leu Ser Val Lys Gly Leu Leu Val Gly Glu Ile Leu Ser Ala Val Leu
980 985 990
Ser Gln Glu Gly Ile Asn Ile Leu Thr His Leu Pro Lys Gly Ser Ala
995 1000 1005
Glu Ala Glu Leu Met Ser Val Val Pro Val Phe Tyr Val Phe His
1010 1015 1020
Tyr Leu Glu Thr Gly Asn His Trp Asn Ile Phe His Ser Asp Pro
1025 1030 1035
Leu Ile Glu Lys Gln Lys Leu Lys Lys Lys Leu Lys Glu Gly Met
1040 1045 1050
Leu Ser Ile Met Ser Tyr Arg Asn Ala Asp Tyr Ser Tyr Ser Val
1055 1060 1065
Trp Lys Gly Gly Ser Ala Ser Thr Trp Leu Thr Ala Phe Ala Leu
1070 1075 1080
Arg Val Leu Gly Gln Val Asn Lys Tyr Val Glu Gln Asn Gln Asn
1085 1090 1095
Ser Ile Cys Asn Ser Leu Leu Trp Leu Val Glu Asn Tyr Gln Leu
1100 1105 1110
Asp Asn Gly Ser Phe Lys Glu Asn Ser Gln Tyr Gln Pro Ile Lys
1115 1120 1125
Leu Gln Gly Thr Leu Pro Val Glu Ala Arg Glu Asn Ser Leu Tyr
1130 1135 1140
Leu Thr Ala Phe Thr Val Ile Gly Ile Arg Lys Ala Phe Asp Ile
1145 1150 1155
Cys Pro Leu Val Lys Ile Asp Thr Ala Leu Ile Lys Ala Asp Asn
1160 1165 1170
Phe Leu Leu Glu Asn Thr Leu Pro Ala Gln Ser Thr Phe Thr Leu
1175 1180 1185
Ala Ile Ser Ala Tyr Ala Leu Ser Leu Gly Asp Lys Thr His Pro
1190 1195 1200
Gln Phe Arg Ser Ile Val Ser Ala Leu Lys Arg Glu Ala Leu Val
1205 1210 1215
Lys Gly Asn Pro Pro Ile Tyr Arg Phe Trp Lys Asp Asn Leu Gln
1220 1225 1230
His Lys Asp Ser Ser Val Pro Asn Thr Gly Thr Ala Arg Met Val
1235 1240 1245
Glu Thr Thr Ala Tyr Ala Leu Leu Thr Ser Leu Asn Leu Lys Asp
1250 1255 1260
Ile Asn Tyr Val Asn Pro Val Ile Lys Trp Leu Ser Glu Glu Gln
1265 1270 1275
Arg Tyr Gly Gly Gly Phe Tyr Ser Thr Gln Asp Thr Ile Asn Ala
1280 1285 1290
Ile Glu Gly Leu Thr Glu Tyr Ser Leu Leu Val Lys Gln Leu Arg
1295 1300 1305
Leu Ser Met Asp Ile Asp Val Ser Tyr Lys His Lys Gly Ala Leu
1310 1315 1320
His Asn Tyr Lys Met Thr Asp Lys Asn Phe Leu Gly Arg Pro Val
1325 1330 1335
Glu Val Leu Leu Asn Asp Asp Leu Ile Val Ser Thr Gly Phe Gly
1340 1345 1350
Ser Gly Leu Ala Thr Val His Val Thr Thr Val Val His Lys Thr
1355 1360 1365
Ser Thr Ser Glu Glu Val Cys Ser Phe Tyr Leu Lys Ile Asp Thr
1370 1375 1380
Gln Asp Ile Glu Ala Ser His Tyr Arg Gly Tyr Gly Asn Ser Asp
1385 1390 1395
Tyr Lys Arg Ile Val Ala Cys Ala Ser Tyr Lys Pro Ser Arg Glu
1400 1405 1410
Glu Ser Ser Ser Gly Ser Ser His Ala Val Met Asp Ile Ser Leu
1415 1420 1425
Pro Thr Gly Ile Ser Ala Asn Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu Val
1430 1435 1440
Glu Gly Val Asp Gln Leu Phe Thr Asp Tyr Gln Ile Lys Asp Gly
1445 1450 1455
His Val Ile Leu Gln Leu Asn Ser Ile Pro Ser Ser Asp Phe Leu
1460 1465 1470
Cys Val Arg Phe Arg Ile Phe Glu Leu Phe Glu Val Gly Phe Leu
1475 1480 1485
Ser Pro Ala Thr Phe Thr Val Tyr Glu Tyr His Arg Pro Asp Lys
1490 1495 1500
Gln Cys Thr Met Phe Tyr Ser Thr Ser Asn Ile Lys Ile Gln Lys
1505 1510 1515
Val Cys Glu Gly Ala Ala Cys Lys Cys Val Glu Ala Asp Cys Gly
1520 1525 1530
Gln Met Gln Glu Glu Leu Asp Leu Thr Ile Ser Ala Glu Thr Arg
1535 1540 1545
Lys Gln Thr Ala Cys Lys Pro Glu Ile Ala Tyr Ala Tyr Lys Val
1550 1555 1560
Ser Ile Thr Ser Ile Thr Val Glu Asn Val Phe Val Lys Tyr Lys
1565 1570 1575
Ala Thr Leu Leu Asp Ile Tyr Lys Thr Gly Glu Ala Val Ala Glu
1580 1585 1590
Lys Asp Ser Glu Ile Thr Phe Ile Lys Lys Val Thr Cys Thr Asn
1595 1600 1605
Ala Glu Leu Val Lys Gly Arg Gln Tyr Leu Ile Met Gly Lys Glu
1610 1615 1620
Ala Leu Gln Ile Lys Tyr Asn Phe Ser Phe Arg Tyr Ile Tyr Pro
1625 1630 1635
Leu Asp Ser Leu Thr Trp Ile Glu Tyr Trp Pro Arg Asp Thr Thr
1640 1645 1650
Cys Ser Ser Cys Gln Ala Phe Leu Ala Asn Leu Asp Glu Phe Ala
1655 1660 1665
Glu Asp Ile Phe Leu Asn Gly Cys
1670 1675
<210> 252
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 252
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 253
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 253
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 254
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 254
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asn Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Leu His Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 255
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 255
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Ser Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 256
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 256
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Glu Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 257
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 257
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Ala
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 258
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 258
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Glu Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 259
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 259
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Leu Ala Glu Ala Lys Glu Ala
50 55 60
Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser Asp Phe Tyr Lys Arg
65 70 75 80
Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val Glu Ala Leu Lys Asp
85 90 95
Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100
<210> 260
<211> 57
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 260
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro
50 55
<210> 261
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 261
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 262
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 262
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 263
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 263
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Glu Ser Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 264
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 264
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 265
<211> 57
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 265
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Glu Ser Ser Gln Ala Pro
50 55
<210> 266
<211> 57
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 266
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro
50 55
<210> 267
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 267
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 268
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 268
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 269
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 269
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Glu Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 270
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 270
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Glu Gly Ser Leu Ala
50 55 60
Glu Ala Lys Glu Ala Ala Asn Ala Glu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Asp Phe Tyr Lys Arg Leu Ile Asp Lys Ala Lys Thr Val Glu Gly Val
85 90 95
Glu Ala Leu Lys Asp Ala Ile Leu Ala Ala Leu Pro
100 105
<210> 271
<211> 62
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 271
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Val Leu Glu Ala Trp Asp Glu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Leu Pro Asn Leu Thr Ile Glu Gln Trp Leu Ala Phe Ile Asn
20 25 30
Lys Leu Asp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys Val Asp Gly Ser
50 55 60
<210> 272
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 272
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Arg Asn Ala Tyr Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Arg Ala Phe Ile Arg
20 25 30
Lys Leu Tyr Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 273
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 273
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Arg Asn Ala Tyr Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Arg Ala Phe Ile Arg
20 25 30
Lys Leu Tyr Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 274
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 274
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Met Arg Asn Ala Tyr Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Asn Gln Gln Lys Arg Ala Phe Ile Arg
20 25 30
Lys Leu Tyr Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 275
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 275
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Leu Ile Glu Ala Ala Ala Glu Ile
1 5 10 15
Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Trp Asn Ala Phe Ile Lys
20 25 30
Lys Leu Val Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 276
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 276
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Leu Ile Glu Ala Ala Ala Glu Ile
1 5 10 15
Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Trp Asn Ala Phe Ile Lys
20 25 30
Lys Leu Val Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 277
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 277
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Leu Ile Glu Ala Ala Ala Glu Ile
1 5 10 15
Asp Ala Leu Pro Asn Leu Thr Arg Arg Gln Trp Asn Ala Phe Ile Lys
20 25 30
Lys Leu Val Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 278
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 278
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Gln Asp Ala Ala Ala His Glu Ile
1 5 10 15
Arg Trp Leu Pro Asn Leu Thr Phe Asp Gln Arg Val Ala Phe Ile His
20 25 30
Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 279
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 279
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Gln Asp Ala Ala Ala His Glu Ile
1 5 10 15
Arg Trp Leu Pro Asn Leu Thr Phe Asp Gln Arg Val Ala Phe Ile His
20 25 30
Lys Leu Ala Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 280
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 280
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Gln Asp Ala Ala Ala His Glu Ile
1 5 10 15
Arg Trp Leu Pro Asn Leu Thr Phe Asp Gln Arg Val Ala Phe Ile His
20 25 30
Lys Leu Ala Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 281
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 281
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 282
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 282
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 283
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 283
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 284
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 284
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 285
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 285
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Glu Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 286
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 286
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 287
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная бактериальная последовательность
<400> 287
Ala Glu Ala Lys Tyr Ala Lys Glu Asn Leu Phe Ala Gly Trp Glu Ile
1 5 10 15
Ser Asp Leu Pro Asn Leu Thr Asp Tyr Gln Arg Asn Ala Phe Ile Tyr
20 25 30
Lys Leu Trp Arg Gln Pro Glu Gln Ser Ser Glu Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Ser Asp Ser Gln Ala Pro Lys
50 55
<---

Claims (144)

1. Полипептид, способный к связыванию компонента 5 комплемента человека (C5), где указанный полипептид имеет аминокислотную последовательность
[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54Q,
где, независимо друг от друга,
[BM] представляет собой С5-связывающий мотив, имеющий аминокислотную последовательность
EX9X10X11A X13X14EIDX18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 представляет собой S;
X43 представляет собой E;
X46 представляет собой S;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N; и
X54 представляет собой S.
2. Полипептид, способный к связыванию компонента 5 комплемента человека (C5), где указанный полипептид имеет аминокислотную последовательность
AEAKYAK-[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54QAP,
где, независимо друг от друга,
[BM] представляет собой С5-связывающий мотив, имеющий аминокислотную последовательность
EX9X10X11A X13X14EIDX18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 представляет собой S;
X43 представляет собой E;
X46 представляет собой S;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N; и
X54 представляет собой S.
3. Полипептид по п. 1 или 2, где X52 и X53 независимо выбирают из E и S.
4. Полипептид по п. 3, где (a) X52 представляет собой S, и X53 представляет собой E, или (b) X52 представляет собой E, и X53 представляет собой S.
5. Полипептид по п. 1 или 2, где X52 представляет собой S, и X53 представляет собой D.
6. Полипептид по п. 1 или 2, где X52 представляет собой N, и X53 представляет собой E.
7. Полипептид, способный к связыванию компонента С5 комплемента человека, состоящий из аминокислотной последовательности
AEAKYAKEX9X10X11AX13X14EIDX18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54QAP;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 представляет собой S;
X43 представляет собой E;
X46 представляет собой S;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S, при условии, что X53 не является D, когда X52 представляет собой N; и
X54 представляет собой S.
8. Полипептид по п. 7, где выполняется по меньшей мере одно из следующих условий:
X9 представляет собой V,
X10 представляет собой L,
X11 представляет собой E,
X13 представляет собой W,
X14 представляет собой D,
X18 представляет собой R,
X23 представляет собой T,
X24 представляет собой I,
X25 представляет собой E,
X28 представляет собой L,
X32 представляет собой N,
X33 представляет собой K,
X35 представляет собой D,
[L2] представляет собой DDPS.
9. Полипептид по п. 1 или 2, где [BM] имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из положений 1-28 в SEQ ID NOS: 1-248.
10. Полипептид по п. 9, где [BM] имеет аминокислотную последовательность, показанную в виде положений 1-28 в SEQ ID NO: 1.
11. Полипептид, способный к связыванию компонента С5 комплемента человека, выбранный из полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 260, SEQ ID NO: 265, SEQ ID NO: 266, или SEQ ID NO: 267.
12. Применение C5-связывающего полипептида по п. 1 в способе лечения или профилактики состояния, ассоциированного с С5.
13. Применение по п. 12, где указанное состояние, ассоциированное с C5, представляет собой состояние, выбранное из воспалительных заболеваний; аутоиммунных заболеваний; инфекционных заболеваний; сердечно-сосудистых заболеваний; нейродегенеративных заболеваний; повреждений трансплантата; болезней глаз; болезней почек; заболеваний легких; гематологических заболеваний, таких как пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ); аллергических заболеваний и дерматологических заболеваний.
14. Применение по п. 12 или 13, где указанный C5-связывающий полипептид вводят внутривенно, подкожно, путем ингаляции, назально, перорально, интравитреально или местно.
15. Соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
(a) C5-связывающий полипептид по любому из пп. 1-11;
(b) альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G, и
(c) по меньшей мере один связывающий фрагмент для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C- или N-концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида.
16. Соединение по п. 15, где альбумин-связывающий домен имеет аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 250.
17. Соединение по п. 15, где связывающий фрагмент представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность KVX60GS, где X60 выбирают из D, E и A.
18. Соединение по п. 17, где X60 представляет собой D.
19. Соединение по п. 18, где соединение представляет собой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 253.
20. Соединение по п. 17, где X60 представляет собой E.
21. Соединение по п. 20, где соединение представляет собой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 269 или SEQ ID NO: 270.
22. Соединение по п. 17, где X60 представляет собой А.
23. Соединение по п. 22, где соединение представляет собой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в виде SEQ ID NO: 262.
24. Соединение, способное к связыванию C5, причем указанное соединение содержит:
a. C5-связывающий полипептид, имеющий аминокислотную последовательность
[BM]-[L2]-QSX42X43LLX46EAKKLX52X53X54Q,
где, независимо друг от друга,
[BM] представляет собой С5-связывающий мотив, имеющий аминокислотную последовательность
EX9X10X11A X13X14EIDX18LPNLX23X24X25QWX28AFIX32X33LX35;
где, независимо друг от друга,
X9 выбирают из H, Q, S, T и V;
X10 выбирают из I, L, M и V;
X11 выбирают из A, D, E, H, K, L, N, Q, R, S, T и Y;
X13 выбирают из N и W;
X14 выбирают из A, D, E, H, N, Q, R, S и T;
X18 выбирают из A, E, G, H, K, L, Q, R, S, T и Y;
X23 выбирают из N и T;
X24 выбирают из I, L и V;
X25 выбирают из A, D, E, H, K, N, Q, R, S и T;
X28 выбирают из I, L и V;
X32 выбирают из D, E, G, H, N, S и T;
X33 выбирают из K и S;
X35 выбирают из A, D, E, H, N, Q, S, T и Y;
[L2] выбирают из DDPS и RQPE;
X42 представляет собой S;
X43 представляет собой E;
X46 представляет собой S;
X52 выбирают из E, N и S;
X53 выбирают из D, E и S;
X54 представляет собой S;
b. альбумин-связывающий домен стрептококкового белка G; и
c. связывающий фрагмент для связывания указанного по меньшей мере одного альбумин-связывающего домена или его производного с C- или N-концом указанного по меньшей мере одного C5-связывающего полипептида; где связывающий фрагмент содержит KVEGS или KVAGS.
25. Применение C5-связывающего соединения по п. 15 или 24 в способе лечения или профилактики состояния, ассоциированного с С5.
26. Применение по п. 25, где указанное состояние, ассоциированное с C5, представляет собой состояние, выбранное из воспалительных заболеваний; аутоиммунных заболеваний; инфекционных заболеваний; сердечно-сосудистых заболеваний; нейродегенеративных заболеваний; повреждений трансплантата; болезней глаз; болезней почек; заболеваний легких; гематологических заболеваний, таких как пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ); аллергических заболеваний и дерматологических заболеваний.
27. Применение по п. 25 или 26, где указанное соединение вводят внутривенно, подкожно, путем ингаляции, назально, перорально, интравитреально или местно.
RU2016111115A 2013-08-28 2014-08-28 Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека RU2733897C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE1350986 2013-08-28
SE1350986-4 2013-08-28
PCT/EP2014/068282 WO2015028558A1 (en) 2013-08-28 2014-08-28 Stable polypeptides binding to human complement c5

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020128977A Division RU2020128977A (ru) 2013-08-28 2014-08-28 Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2016111115A RU2016111115A (ru) 2017-10-03
RU2016111115A3 RU2016111115A3 (ru) 2018-04-25
RU2733897C2 true RU2733897C2 (ru) 2020-10-09

Family

ID=51539238

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016111115A RU2733897C2 (ru) 2013-08-28 2014-08-28 Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека
RU2020128977A RU2020128977A (ru) 2013-08-28 2014-08-28 Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020128977A RU2020128977A (ru) 2013-08-28 2014-08-28 Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека

Country Status (29)

Country Link
US (1) US9994626B2 (ru)
EP (2) EP3811961A1 (ru)
JP (2) JP6767865B2 (ru)
KR (1) KR102446636B1 (ru)
CN (1) CN105658228B (ru)
AU (1) AU2014314222B2 (ru)
BR (2) BR112016003142A2 (ru)
CA (1) CA2926976C (ru)
CY (1) CY1123732T1 (ru)
DK (1) DK3038633T3 (ru)
ES (1) ES2842105T3 (ru)
HK (1) HK1225656A1 (ru)
HR (1) HRP20210013T1 (ru)
HU (1) HUE052613T2 (ru)
IL (1) IL244218A (ru)
LT (1) LT3038633T (ru)
MX (1) MX2016002397A (ru)
MY (1) MY173804A (ru)
NZ (1) NZ718153A (ru)
PH (1) PH12016500371B1 (ru)
PL (1) PL3038633T3 (ru)
PT (1) PT3038633T (ru)
RS (1) RS61347B1 (ru)
RU (2) RU2733897C2 (ru)
SA (1) SA516370622B1 (ru)
SG (1) SG11201602679VA (ru)
SI (1) SI3038633T1 (ru)
UA (1) UA117933C2 (ru)
WO (1) WO2015028558A1 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013126006A1 (en) * 2012-02-20 2013-08-29 Swedish Orphan Biovitrum Ab (Publ) Polypeptides binding to human complement c5
TR201911279T4 (tr) 2013-08-28 2019-08-21 Affibody Ab Mutasyona uğramış bir yapı iskelesine sahip polipeptidlerin bağlanması.
WO2015028558A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Swedish Orphan Biovitrum Ab (Publ) Stable polypeptides binding to human complement c5
UY37651A (es) * 2017-03-31 2018-10-31 Swedish Orphan Biovitrum Ab Publ Polipéptido de unión al il-1r-i
CN117327187A (zh) 2017-07-11 2024-01-02 亚力兄制药公司 结合补体成分c5或血清白蛋白的多肽及其融合蛋白
WO2023077139A1 (en) * 2021-11-01 2023-05-04 Ipc Research, Llc Administration of c5-binding proteins

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002059148A2 (en) * 2001-01-26 2002-08-01 Intercell Ag A method for identification, isolation and production of antigens to a specific pathogen
US20050090448A1 (en) * 2003-09-10 2005-04-28 Baxter International Inc. Peptides that inhibit complement activation
WO2012004384A2 (en) * 2010-07-09 2012-01-12 Affibody Ab Polypeptides
RU2477137C2 (ru) * 2006-03-08 2013-03-10 АРКЕМИКС Эл Эл Си Связывающие комплемент аптамеры и средства против с5, пригодные для лечения глазных нарушений

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE509359C2 (sv) 1989-08-01 1999-01-18 Cemu Bioteknik Ab Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
PT1325033E (pt) 2000-10-10 2010-04-15 Genentech Inc Inibição da activação do complemento c5 para o tratamento e a prevenção da rejeição diferida de um xenoenxertos ou de uma rejeição vascular aguda
JP4958387B2 (ja) 2001-08-17 2012-06-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃ５ｂの形成を妨害することなくｃ５及びｃ５ａに結合する補体経路阻害剤
ITMI20021527A1 (it) 2002-07-11 2004-01-12 Consiglio Nazionale Ricerche Anticorpi anti componente c5 del complemento e loro uso
SE0400274D0 (sv) * 2004-02-09 2004-02-09 Affibody Ab New polypeptide
GB0518443D0 (en) 2005-09-09 2005-10-19 Evolutec Ltd Method of treating myasthenia gravis
DK2359834T5 (en) 2006-03-15 2017-02-06 Alexion Pharma Inc Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria patients with a complement inhibitor
AU2008281913B2 (en) 2007-07-31 2013-11-07 Affibody Ab New albumin binding compositions, methods and uses
US9187535B2 (en) 2007-12-19 2015-11-17 Affibody Ab Polypeptide derived from protein A and able to bind PDGF
EP2231860B1 (en) 2007-12-19 2011-10-05 Affibody AB Polypeptide derived from protein a and able to bind pdgf
EP2072525A1 (en) 2007-12-21 2009-06-24 Affibody AB New polypeptides having affinity for HER2
PL2328616T3 (pl) 2008-08-05 2015-10-30 Novartis Ag Kompozycje i sposoby dla przeciwciał celujących białko dopełniacza C5
EP2327725A1 (en) 2009-11-26 2011-06-01 InflaRx GmbH Anti-C5a binding moieties with high blocking activity
WO2013126006A1 (en) 2012-02-20 2013-08-29 Swedish Orphan Biovitrum Ab (Publ) Polypeptides binding to human complement c5
JP5980104B2 (ja) 2012-11-22 2016-08-31 三菱電機株式会社 液晶表示装置の製造方法および液晶表示装置の製造システム
US9957330B2 (en) 2012-12-19 2018-05-01 Affibody Ab Polypeptides
WO2015028558A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Swedish Orphan Biovitrum Ab (Publ) Stable polypeptides binding to human complement c5
TR201911279T4 (tr) 2013-08-28 2019-08-21 Affibody Ab Mutasyona uğramış bir yapı iskelesine sahip polipeptidlerin bağlanması.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002059148A2 (en) * 2001-01-26 2002-08-01 Intercell Ag A method for identification, isolation and production of antigens to a specific pathogen
US20050090448A1 (en) * 2003-09-10 2005-04-28 Baxter International Inc. Peptides that inhibit complement activation
RU2477137C2 (ru) * 2006-03-08 2013-03-10 АРКЕМИКС Эл Эл Си Связывающие комплемент аптамеры и средства против с5, пригодные для лечения глазных нарушений
WO2012004384A2 (en) * 2010-07-09 2012-01-12 Affibody Ab Polypeptides

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TOKURIKI N. ET AL., Stability effects of mutations and protein evolvability, Curr. Opin. Struct. Biol., 2009, v.19, n.5, p.596-604. *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015028558A1 (en) 2015-03-05
US20160311870A1 (en) 2016-10-27
IL244218A (en) 2017-11-30
US9994626B2 (en) 2018-06-12
NZ718153A (en) 2022-05-27
CA2926976A1 (en) 2015-03-05
MY173804A (en) 2020-02-24
UA117933C2 (uk) 2018-10-25
CN105658228A (zh) 2016-06-08
SG11201602679VA (en) 2016-05-30
AU2014314222B2 (en) 2018-05-24
BR112016003142A2 (pt) 2017-10-17
EP3038633A1 (en) 2016-07-06
HK1225656A1 (zh) 2017-09-15
RU2016111115A3 (ru) 2018-04-25
PH12016500371A1 (en) 2016-05-02
PH12016500371B1 (en) 2016-05-02
JP2020172505A (ja) 2020-10-22
KR20160048121A (ko) 2016-05-03
IL244218A0 (en) 2016-04-21
CA2926976C (en) 2023-11-28
KR102446636B1 (ko) 2022-09-23
LT3038633T (lt) 2021-03-25
PL3038633T3 (pl) 2021-07-19
PT3038633T (pt) 2021-01-14
HUE052613T2 (hu) 2021-05-28
RS61347B1 (sr) 2021-02-26
EP3811961A1 (en) 2021-04-28
ES2842105T3 (es) 2021-07-12
JP2016529270A (ja) 2016-09-23
RU2016111115A (ru) 2017-10-03
SA516370622B1 (ar) 2018-12-23
EP3038633B1 (en) 2020-10-14
CY1123732T1 (el) 2021-10-29
DK3038633T3 (da) 2021-01-11
HRP20210013T1 (hr) 2021-04-02
CN105658228B (zh) 2020-02-07
RU2020128977A (ru) 2021-11-30
AU2014314222A1 (en) 2016-04-21
SI3038633T1 (sl) 2021-05-31
BR122023020080A2 (pt) 2023-12-26
MX2016002397A (es) 2016-09-08
JP6767865B2 (ja) 2020-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2733897C2 (ru) Стабильные полипептиды, связывающиеся с с5 комплемента человека
JP7076152B2 (ja) ＩｇＧ結合ペプチドによる抗体の特異的修飾
KR102365977B1 (ko) 단일 쇄 가변 단편 cd3 결합 단백질
Kipriyanov et al. Single-chain antibody streptavidin fusions: tetrameric bifunctional scFv-complexes with biotin binding activity and enhanced affinity to antigen
JP6486908B2 (ja) 肝細胞増殖因子に結合する設計アンキリン反復タンパク質
CN103459415B (zh) 设计的与血清白蛋白结合的重复蛋白
US20180194819A1 (en) Novel binding proteins based on di-ubiquitin muteins and methods for generation
KR20140129163A (ko) 인간 보체 c5에 결합하는 폴리펩티드
JP2023120208A (ja) 補体成分ｃ５または血清アルブミンと結合するポリペプチドおよびその融合タンパク質
CN109562167A (zh) 联合治疗
JP2019523016A (ja) 抗体の挿入可能な可変フラグメントおよびｎｋｇ２ｄリガンドの改変型ａ１−ａ２ドメイン
JP2023551481A (ja) 標的分子の選択的枯渇のための組成物及び方法
WO2016131987A1 (en) Alzheimer abeta peptide binding polypeptide
CN109180798B (zh) 一种增强型治疗性抗体及其应用
BR112020018563A2 (pt) Anticorpos de domínio único que se ligam à neurotoxina do tétano
WO2024074762A1 (en) Ultrastable antibody fragments with a novel disuldide bridge
EP3325515B1 (en) Novel binding proteins based on di-ubiquitin muteins and methods for generation
CA3212924A1 (en) Multivalent proteins and screening methods
CN116262784A (zh) 增强FcRn亲和力的Fc变体