RU2352638C2 - Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения - Google Patents
Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2352638C2 RU2352638C2 RU2005105322/13A RU2005105322A RU2352638C2 RU 2352638 C2 RU2352638 C2 RU 2352638C2 RU 2005105322/13 A RU2005105322/13 A RU 2005105322/13A RU 2005105322 A RU2005105322 A RU 2005105322A RU 2352638 C2 RU2352638 C2 RU 2352638C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- dna
- sequence
- mon863
- transformant
- Prior art date
Links
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 title claims abstract description 150
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 title claims abstract description 131
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 84
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 title claims abstract description 84
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 title claims description 99
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 76
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 claims abstract description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 151
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 80
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 80
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 75
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 74
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 52
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 52
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 52
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 48
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 claims description 47
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 46
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 46
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 34
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 34
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 30
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 30
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 claims description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 14
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 10
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 8
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims description 3
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 claims description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims description 3
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 claims description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 34
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 9
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 89
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 31
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 8
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 7
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 7
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 7
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 5
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 5
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000009401 outcrossing Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 3
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 3
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 3
- UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N Paromomycin II Natural products NC1C(O)C(O)C(CN)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(N)CC(N)C2O)OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)N)OC1CO UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 3
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 3
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 3
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 3
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 3
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 3
- 229960001914 paromomycin Drugs 0.000 description 3
- UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N paromomycin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 2
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 102000007347 Apyrase Human genes 0.000 description 1
- 108010007730 Apyrase Proteins 0.000 description 1
- 235000005340 Asparagus officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000003416 Asparagus officinalis Species 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 241001124134 Chrysomelidae Species 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000489975 Diabrotica Species 0.000 description 1
- 241000489973 Diabrotica undecimpunctata Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 244000148064 Enicostema verticillatum Species 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 1
- 102000004523 Sulfate Adenylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010022348 Sulfate adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000482268 Zea mays subsp. mays Species 0.000 description 1
- JUGOREOARAHOCO-UHFFFAOYSA-M acetylcholine chloride Chemical compound [Cl-].CC(=O)OCC[N+](C)(C)C JUGOREOARAHOCO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- IRLPACMLTUPBCL-FCIPNVEPSA-N adenosine-5'-phosphosulfate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@@H](CO[P@](O)(=O)OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O IRLPACMLTUPBCL-FCIPNVEPSA-N 0.000 description 1
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 235000012184 tortilla Nutrition 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Abstract
Для выявления трансформантов кукурузы MON863 трансформанты диагностируют на наличие ДНК-последовательности, встроенной в геном кукурузы посредством трансформации рекомбинантной конструкцией, содержащей ген Cry3Bb и геномные последовательности, фланкирующие сайт инсерции. Растения кукурузы, регенерированные из трансформантов MON863, обладают устойчивостью к поражению насекомыми отряда Жесткокрылых. 10 н. и 10 з.п. ф-лы, 2 ил.
Description
Область, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области молекулярной биологии растений. Более конкретно настоящее изобретение относится к растению кукурузы (Zea mays), резистентному к жесткокрылым, PV-ZMIR13 и обозначенному MON863; а также к семенам и к потомству указанного растения кукурузы MON863. Растение кукурузы MON863 и его потомство являются, в частности, резистентными к Diabrotica vergifera, Diabrotica undecimpunctata и Leptinotarsa decemlineata.
Более конкретно настоящее изобретение также относится к ДНК-конструкции, встроенной в геном растения-трансформанта (event) кукурузы MON863 для сообщения ему резистентности к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых (Coleopteran). Настоящее изобретение также относится к анализам на детекцию присутствия ДНК растения кукурузы MON863 в образце и ее композиций.
Предпосылки создания изобретения
Кукуруза является ценной сельскохозяйственной культурой и главным источником питания во многих регионах мира. Для улучшения агрономических показателей и качества продуктов, производимых из растений кукурузы, применяются методы биотехнологии. Известно, что экспрессия чужеродных генов в растениях зависит от их положения на хромосоме, определяемого структурами хроматина (например, гетерохроматина) или непосредственной близостью элементов регуляции транскрипции (например, энхансеров) к сайту интеграции (Weising et al., Ann. Rev. Genet. 22:421-477, 1988). По этой причине часто оказывается необходимым скринировать большое число трансформантов для идентификации трансформанта, характеризующегося оптимальной экспрессией нужного встроенного гена. Как известно, например, из наблюдений растений и других организмов, у различных трансформантов уровни экспрессии встроенного гена могут широко варьироваться. Могут также наблюдаться различия в типах пространственной или временной экспрессии, например различия в относительной экспрессии трансгена в различных тканях растений, которые могут не соответствовать ожидаемому характеру экспрессии, оцениваемому исходя из элементов регуляции транскрипции, присутствующих во встроенной генной конструкции. По этой причине обычно продуцируются сотни или тысячи различных трансформантов, и эти трансформанты скринируют в целях поиска одного трансформанта, который имеет желаемые уровни и типы экспрессии трансгена, необходимые для промышленного применения. Трансформант, который имеет нужные уровни или типы экспрессии трансгена, может быть использован для интрогрессии трансгена в другой генетический фон путем полового ауткроссинга с использованием стандартных методов селекции. Потомство таких кроссов сохраняет экспрессионные свойства трансгена, характерные для исходного трансформанта. Эта стратегия используется для гарантии надежной экспрессии гена у растений различных сортов, хорошо адаптированных к условиям роста в определенной местности.
Для того чтобы определить, содержит ли потомство кросса, полученного половым скрещиванием, нужный трансген, предпочтительно детектировать конкретный продукт трансформации. Кроме того, способ детекции конкретного трансформанта может оказаться полезным с точки зрения соблюдения правил, предписываемых регуляторными органами, дающими разрешение на поступление данного продукта на рынок и требующими, например, наличия на упаковке пищевого продукта информации о том, что он произведен из рекомбинантных сельскохозяйственных растений. Присутствие трансгена может быть установлено любым хорошо известным методом детекции нуклеиновых кислот, таким как полимеразная цепная реакция (ПЦР) или ДНК-гибридизация с использованием нуклеиновокислотных зондов. Эти методы детекции обычно направлены на часто используемые генетические элементы, такие как промоторы, терминаторы, маркерные гены и т.п. А поэтому такие методы не могут быть использованы для идентификации различных трансформантов, а в частности, тех трансформантов, которые продуцируются с использованием тех же самых ДНК-конструкций, за исключением тех случаев, когда последовательность хромосомной ДНК, смежная со встроенной ДНК (“фланкирующая ДНК”), является известной. Трансформант-специфический ПЦР-анализ обсуждается, например, в работе Windels et al. (Med. Fac. Landbouww, Univ. Gent. 64/5b:459-462, 1999), где был идентифицирован резистентный к глифосату трансформант сои 40-3-2 ПЦР-методом с использованием серии праймеров, охватывающих стык между вставкой и фланкирующей ДНК, а в частности, одного праймера, который включает последовательность, начинающуюся от вставки, и второго праймера, который включает последовательность, начинающуюся от фланкирующей ДНК.
Краткое описание изобретения
В предпочтительном варианте своего осуществления настоящее изобретение относится к композициям и к способам детекции присутствия области-вставки “трансген/геном” в новом растении кукурузы PV-ZMIR13, обозначенном MON863. Настоящее изобретение относится к ДНК-последовательностям, которые содержат, по меньшей мере, одну последовательность стыка в MON863, выбранную из группы, состоящей из последовательности SEQ ID NO:1 (стыка “произвольно установленная 5'-концевая вставка - геном”) и последовательности SEQ ID NO:2 (стыка “произвольно установленная 3'-концевая вставка - геном”) и их комплементов, где указанная последовательность стыка охватывает область стыка между гетерологичной ДНК, встроенной в геном кукурузы, и ДНК клетки кукурузы, фланкирующей сайт инсерции, и является диагностическим признаком для данного трансформанта.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения описаны, например, ДНК-последовательности, которые содержат новую область-вставку “трансген/геном”, SEQ ID NO:3 (последовательность, содержащая произвольно установленный 5'-конец встроенной ДНК) и SEQ ID NO:4 (последовательность, содержащая произвольно установленный 3'-конец встроенной ДНК).
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения также описаны ДНК-последовательности, которые содержат, по меньшей мере, примерно от 11 до 50 или более нуклеотидов 5'-трансгенной части ДНК-последовательности SEQ ID NO:7 и 5'-фланкирующую ДНК-последовательность кукурузы SEQ ID NO:5 аналогичной длины, или 3'-трансгенную часть ДНК-последовательности кукурузы SEQ ID NO:8 аналогичной длины и 3'-фланкирующую ДНК кукурузы SEQ ID NO:6 аналогичной длины, и которые используются в качестве ДНК-праймеров в методах амплификации ДНК. Ампликоны, продуцированные с использованием этих праймеров, являются диагностическими показателями присутствия трансформанта кукурузы MON863. В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к ампликону, продуцированному первым ДНК-праймером, гомологичным или комплементарным последовательности SEQ ID NO:7 и связанным со вторым ДНК-праймером, гомологичным или комплементарным последовательности SEQ ID NO:5, где оба этих праймера присутствуют в реакционной смеси вместе с ДНК трансформанта кукурузы MON863 в образце. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к ампликону, продуцированному третьим ДНК-праймером, гомологичным или комплементарным последовательности SEQ ID NO:8, и связанным с четвертым ДНК-праймером, гомологичным или комплементарным последовательности SEQ ID NO:6, где оба эти праймера присутствуют в реакционной смеси вместе с ДНК трансформанта кукурузы MON863 в образце. В других своих аспектах настоящее изобретение относится к растению кукурузы MON863 и к его потомству, происходящему от растений, которые содержат указанные ДНК-последовательности, используемые в реакции амплификации ДНК для получения одного или нескольких диагностических ампликонов.
В еще одном предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способам детекции присутствия ДНК, соответствующей ДНК трансформанта кукурузы MON863, в образце. Указанные способы включают стадии: (а) контактирования биологического образца, предположительно содержащего ДНК трансформанта MON863, с парой праймеров, которые, при использования в реакции амплификации нуклеиновой кислоты с указанной ДНК, продуцируют ампликон, который является диагностическим показателем присутствия трансформанта кукурузы MON863; (b) проведения реакции амплификации нуклеиновой кислоты с продуцированием ампликона; и (с) детекции указанного ампликона. Конкретно проиллюстрированные здесь ампликоны соответствуют первому ампликону, имеющему примерно 508 пар нуклеотидов и представленному в SEQ ID NO:3, и второму ампликону, имеющему примерно 584 пар нуклеотидов и представленному в SEQ ID NO:4, либо более длинным или более коротким ампликонам, где указанный первый ампликон содержит, по меньшей мере, нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:1 и простирающуюся примерно от нуклеотида 1 до нуклеотида 11, или примерно от нуклеотида 10 до нуклеотида 20, а указанный второй ампликон содержит, по меньшей мере, нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:2 и простирающуюся примерно от нуклеотида 1 до нуклеотида 11, или примерно от нуклеотида 10 до нуклеотида 20.
В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способам детекции присутствия ДНК, соответствующей трансформанту MON863, в образце. Указанные способы включают стадии: (а) контактирования биологического образца, предположительно содержащего ДНК трансформанта MON863, с зондом, который гибридизуется в жестких условиях гибридизации с указанной ДНК и не гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК контрольного растения кукурузы, не содержащего встроенную ДНК, происходящую от pMON25097; (b) создания жестких условий гибридизации для указанного образца и зонда; и (с) детекции гибридизации указанного зонда с геномной ДНК, где детекция связывания зонда с указанной ДНК является диагностическим показателем присутствия ДНК трансформанта MON863 в указанном образце.
В другом своем предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к новому растению кукурузы MON863, которое включает ДНК-последовательности, содержащие новые области вставки трансген/геном и представленные в SEQ ID NO:3 и SEQ ID NO:4. В других своих вариантах настоящее изобретение относится к семенам растений MON863, к потомству растений MON863 и к способам продуцирования растения кукурузы путем скрещивания растения кукурузы MON863 с этим же растением или с другим растением кукурузы.
Вышеуказанные и другие предпочтительные варианты настоящего изобретения будут более понятными из нижеследующего подробного описания.
Краткое описание чертежей и последовательностей
Описание чертежей
На фиг.1 проиллюстрирован экспрессирующий вектор PV-ZMIR13, также обозначенный pMON25097, с помощью которого был генерирован трансформант растения кукурузы MON863, резистентный к кукурузному листоеду, методом бомбардировки ускоренными частицами с использованием рестрикционного M1ul-фрагмента, расположенного примерно от положения нуклеотида 149 до положения нуклеотида 4840.
На фиг.2 представлена графическая схема, иллюстрирующая общую организацию элементов, содержащих гетерологичные последовательности нуклеиновой кислоты, встроенные в геном трансформанта кукурузы MON863, и указаны основные положения, в которых встроенные последовательности нуклеиновой кислоты присоединены к геномным ДНК-последовательностям кукурузы, именуемым здесь как геномные последовательности нуклеиновой кислоты кукурузы, фланкирующие концы встроенных гетерологичных ДНК-последовательностей; ниже охарактеризован трансформант кукурузы MON863, который содержит следующие последовательности: геномную ДНК кукурузы [1] (SEQ ID NO:5), фланкирующую произвольно установленный 5'-конец полноразмерной первичной функциональной встроенной ДНК-последовательности и являющуюся смежной с неприродной промоторной последовательностью CaMV35S AS4, [2], (P-CaMV.AS4 SEQ ID NO:17), функционально присоединенной к нетранслируемой лидерной последовательности связывающего белка А/В хлорофилла пшеницы, [3], (L-Ta.hcbl, SEQ ID NO:18), которая функционально присоединена к интронной последовательности актина риса, [4], (I-Os.Actl, SEQ ID NO:19), которая в свою очередь функционально присоединена к неприродной последовательности, кодирующей вариант белка Cry3Bb, [5], (SEQ ID NO:20) и функционально присоединенной к последовательности терминации транскрипции и последовательности полиаденилирования белка теплового шока Hspl7 пшеницы, [6], (Т-Ta.Hspl7, SEQ ID NO:21), и полноразмерную первичную функциональную встроенную ДНК-последовательность, фланкированную геномной ДНК кукурузы у произвольно установленного 3'-конца, [7] (SEQ ID NO:6), где стык между [1] и [2] ([8]) соответствует SEQ ID NO:1, а стык между [6] и [7] ([9]) соответствует SEQ ID NO:2.
Описание последовательностей
SEQ ID NO:1 соответствует последовательности стыка между геномной и встроенной ДНК кукурузы, которая является диагностическим признаком для произвольно установленного 5'-конца полноразмерной первичной функциональной встроенной ДНК-последовательности в трансформанте кукурузы MON863.
SEQ ID NO:2 соответствует последовательности стыка между геномной и встроенной ДНК кукурузы, которая является диагностическим признаком для произвольно установленного 3'-конца полноразмерной первичной функциональной встроенной ДНК-последовательности в трансформанте кукурузы MON863.
SEQ ID NO:3 соответствует последовательности, представленной, в основном, последовательностями [1] и [2] на фиг.2.
SEQ ID NO:4 соответствует последовательности, представленной, в основном, последовательностями [6] и [7] на фиг.2.
SEQ ID NO:5 соответствует неполной геномной ДНК-последовательности кукурузы, которая является смежной с произвольно установленным 5'-концом неполной Cry3Bb-кодирующей ДНК-последовательности, встроенной в трансформант кукурузы MON863, и фланкирует указанный 5'-конец.
SEQ ID NO:6 соответствует неполной геномной ДНК-последовательности кукурузы, которая является смежной с произвольно установленным 3'-концом неполной Cry3Bb-кодирующей ДНК-последовательности, встроенной в трансформант кукурузы MON863, и фланкирует указанный 3'-конец.
SEQ ID NO:7 соответствует последовательности произвольно установленного 5'-конца неполной Cry3Bb-кодирующей ДНК-последовательности, встроенной в трансформант кукурузы MON863.
SEQ ID NO:8 соответствует последовательности произвольно установленного 3'-конца неполной Cry3Bb-кодирующей ДНК-последовательности, встроенной в трансформант кукурузы MON863.
SEQ ID NO:9 соответствует 5'-праймерной последовательности (праймер А), комплементарной части геномной ДНК-последовательности кукурузы, идентифицированной как последовательность, фланкирующая произвольно установленный 5'-конец полноразмерной первичной функциональной ДНК-последовательности, встроенной в трансформант кукурузы MON863 и, при спаривании с праймером, соответствующим обратному комплементу последовательности, представленной в SEQ ID NO:10 и с матричной ДНК трансформанта кукурузы MON863, продуцирует ампликон, содержащий SEQ ID NO:3, который является диагностическим показателем присутствия ДНК трансформанта кукурузы MON863 в образце.
SEQ ID NO:10 соответствует обратному комплементу 3'-праймерной последовательности (праймер В), комплементарной части произвольно установленной 5'-концевой полноразмерной первичной функциональной ДНК, встроенной в геном кукурузы в трансформанте кукурузы MON863 и, при спаривании с праймером, соответствующим последовательности, представленной в SEQ ID NO:9 и матричной ДНК трансформанта кукурузы MON863, продуцирует ампликон, содержащий SEQ ID NO:3, который является диагностическим показателем присутствия ДНК трансформанта кукурузы MON863 в образце.
SEQ ID NO:11 соответствует 5'-праймерной последовательности (праймер С), комплементарной части произвольно установленной 3'-концевой последовательности полноразмерной первичной функциональной ДНК, встроенной в геном кукурузы в трансформанте MON863 и, при спаривании с праймером, соответствующим обратному комплементу последовательности, представленной в SEQ ID NO:12 и с матричной ДНК трансформанта кукурузы MON863, продуцирует ампликон, содержащий SEQ ID NO:4, который является диагностическим показателем присутствия ДНК трансформанта кукурузы MON863 в образце.
SEQ ID NO:12 соответствует обратному комплементу 3'-праймерной последовательности (праймер D), комплементарной части геномной ДНК-последовательности кукурузы, идентифицированной как последовательность, фланкирующая произвольно установленный 3'-конец полноразмерной первичной функциональной ДНК, встроенной в трансформант кукурузы MON863 и, при спаривании с праймером, соответствующим последовательности, представленной в SEQ ID NO:11, и с матричной ДНК трансформанта кукурузы MON863, продуцирует ампликон, содержащий SEQ ID NO:4, который является диагностическим показателем присутствия ДНК трансформанта кукурузы MON863 в образце.
SEQ ID NO:13 соответствует 5'-праймеру 1 для “прогулки по геному”.
SEQ ID NO:14 соответствует 5'-праймеру 2 для “прогулки по геному”.
SEQ ID NO:15 соответствует 3'-праймеру 1 для “прогулки по геному”.
SEQ ID NO:16 соответствует 3'-праймеру 2 для “прогулки по геному”.
SEQ ID NO:17 соответствует промоторной последовательности CaMV35S AS4.
SEQ ID NO:18 соответствует нетранслируемой лидерной последовательности связывающего белка А/В хлорофилла пшеницы (L-Ta.hcb1).
SEQ ID NO:19 соответствует интронной последовательности актина риса (I-Os.Act1).
SEQ ID NO:20 соответствует неприродной последовательности, кодирующей вариант белка Cry3Bb.
SEQ ID NO:21 соответствует последовательности терминации транскрипции и последовательности полиаденилирования белка теплового шока Hsp17 пшеницы (Т-Ta.Hsp17).
Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения
Ниже приводятся определения терминов и описание методов для лучшей характеризации настоящего изобретения и для облегчения его практического осуществления. Термины, которые не определены конкретно в нижеследующем описании, следует понимать в их обычно принятом значении. Определения общих терминов в молекулярной биологии можно также найти в работах Rieger et al., Glossary of Genetics: Classical and Molecular, 5th edition, Springer-Verlag: New York, 1991, и у Lewin, Genes V, Oxford University Press: New York, 1994. Номенклатура для оснований ДНК используется в соответствии со ст. 37 Свода федеральных правил (CFR) § 1.822.
При использовании в настоящем описании термина “биологический образец” или “образец” предусматривается, что он включает нуклеиновые кислоты, полинуклеотиды, ДНК, РНК, тРНК, кДНК и т.п. в композиции с субстратом или фиксированные на субстрате, который позволяет проводить анализ образца с использованием молекулярного зонда или термоамплификацию с использованием олигонуклеотидных зондов и/или праймеров.
Используемый здесь термин “кукуруза” означает Zea mays или маис и охватывает все сорта растений, которые могут быть скрещены с кукурузой, включая дикие виды маиса.
Используемый здесь термин “содержащий” означает “включающий, но не ограничивающийся”.
Используемый здесь термин “диагностический” относится к показателю, используемому в целях идентификации последовательностей нуклеиновой кислоты, содержащихся в трансформанте кукурузы MON863 или происходящих от этого трансформанта; причем любая одна или несколько новых описанных здесь ДНК-последовательностей должны содержать геномные фланкирующие последовательности кукурузы, смежные и связанные с произвольно установленными концами встроенных гетерологичных ДНК-последовательностей, что является необходимым и достаточным для описания отличительных признаков генома трансформанта кукурузы MON863 при условии, что данная последовательность содержит, по меньшей мере, часть одного из концов встроенной гетерологичной ДНК-последовательности или кукурузной геномной последовательности, фланкирующей один из этих концов или смежной с этим концом, и включает, по меньшей мере, два нуклеотида, то есть динуклеотид, содержащий сайт, в котором кукурузная геномная последовательность и встроенная гетерологичная ДНК-последовательность присоединены друг к другу фосфодиэфирной связью. Специалистам хорошо известно, что если последовательность, которая является диагностическим признаком для конкретного трансформанта, такого как описываемый здесь трансформант кукурузы MON863, не присутствует в конкретном образце, содержащем геномные нуклеиновые кислоты кукурузы, то это является показателем того, что данный образец не содержит диагностической последовательности, а значит в указанном образце данные нуклеиновые кислоты отсутствуют либо эти нуклеиновые кислоты не происходят от генома трансформанта кукурузы MON863 и не содержатся в геноме этого трансформанта. Кроме того, в трансформанте кукурузы MON863 присутствуют описанные здесь дополнительные новые и диагностические последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 и SEQ ID NO:4 и их комплементов.
Трансгенный “трансформант” (“event”) продуцируется путем трансформации клеток растения гетерологичной ДНК, то есть нуклеиновокислотной конструкцией, которая включает нужный трансген, с последующей регенерацией популяции растений в результате встраивания трансгена в геном растения и отбора конкретного растения, характеризующегося наличием вставки в конкретном положении генома. Термин “трансформант” (“event”) означает исходный трансформант и потомство этого трансформанта, которое включает гетерологичную ДНК. Термин “трансформант” (“event”) также означает потомство, продуцированное путем полового ауткроссинга между данным трансформантом и другим сортом, который включает гетерологичную ДНК. Даже после повторного возвратного скрещивания (беккроссинга) с рекуррентным родителем встроенная ДНК и фланкирующая ДНК от трансформированного родителя присутствует в потомстве этого кросса в том же самом положении хромосомы. Термин “трансформант” (“event”) также означает ДНК от исходного трансформанта, содержащего встроенную ДНК и фланкирующую геномную последовательность, непосредственно смежную со встроенной ДНК, которая, как ожидается, должна передаваться потомству, которое наследует встроенную ДНК, включающую нужный трансген, переданный в результате полового скрещивания родительской линии, содержащей встроенную ДНК (например, исходный трансформант и потомство, полученное в результате самоопыления), с родительской линией, которая не содержит встроенной ДНК.
Следует также отметить, что могут быть также скрещены два различных трансгенных растения с продуцированием потомства, которое содержит два или более независимо сегрегирующихся экзогенных гена (термин “экзогенные гены” означает нуклеотидные последовательности, которые не встречаются в природном геноме данного растения, то есть являются гетерогенными для данного растения кукурузы). В результате самоопыления соответствующего потомства могут продуцироваться растения, которые являются гомозиготными по любой комбинации этих экзогенных генов. В настоящем изобретении также рассматривается беккроссинг с родительским растением и ауткроссинг с нетрансгенным растением, а также вегетативное размножение. Описание других методов скрещивания, которые обычно используются для получения различных фенотипов и культур, можно найти в одной из нескольких работ, например, Fehr, Breeding Methods for Cultivar Development, Wilcox, J. ed. American Society of Agronomy, Madison WI (1987).
“Зонд” представляет собой выделенную нуклеиновую кислоту, к которой может быть присоединена или с которой может быть связана стандартная детектируемая метка или репортерная молекула, например радиоактивный изотоп, лиганд, хемилюминесцентный агент или фермент. Такой зонд является комплементарным последовательности, присутствующей в нуклеиновой кислоте-мишени, а в случае настоящего изобретения последовательности геномной ДНК, происходящей от трансформанта кукурузы MON863, либо от растения кукурузы, либо из образца, который включает ДНК данного трансформанта. Зонды настоящего изобретения включают не только дезоксирибонуклеиновые или рибонуклеиновые кислоты, но также и полиамиды и другие материалы-зонды, которые специфически связываются с ДНК-последовательностью-мишенью и могут быть использованы для детекции на присутствие такой ДНК-последовательности-мишени.
“Праймеры” представляют собой выделенные нуклеиновокислотные зонды, которые, в случае любого одного из данных праймеров, отжигаются с комплементарной ДНК-последовательностью-мишенью посредством гибридизации нуклеиновых кислот с образованием гибрида между праймером и ДНК-последовательностью-мишенью с последующим удлинением вдоль цепи ДНК-мишени под действием полимеразы, например ДНК-полимеразы. Термин “пары праймеров” настоящего изобретения означает две или более различных праймерных последовательности, используемых для амплификации последовательности нуклеиновой кислоты, которая присутствует между последовательностями-мишенями и связана с этими последовательностями-мишенями, называемыми обратным комплементом или, по существу, обратным комплементом праймеров, и где указанная амплификация осуществляется, например, с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) или другими стандартными методами амплификации нуклеиновых кислот.
Зонды и праймеры обычно имеют длину примерно от 11 нуклеотидов или более, предпочтительно, примерно от 18 нуклеотидов или более, более предпочтительно, примерно от 24 нуклеотидов или более, а наиболее предпочтительно, примерно от 30 нуклеотидов или более. Такие зонды и праймеры специфически гибридизуются с последовательностью-мишенью в условиях гибридизации высокой жесткости. Зонды и праймеры настоящего изобретения, предпочтительно, имеют полную последовательность, аналогичную последовательности-мишени, хотя в соответствии со стандартными методами могут быть сконструированы зонды, отличающиеся от последовательности-мишени и сохраняющие способность гибридизоваться с последовательностями-мишенями.
Методы получения и использования зондов и праймеров описаны, например, в руководстве Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., vol.1-3, ed. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (далее называемом “Sambrook et al., 1989”); Current Protocols in Molecular Biology ed. Ausubel et al., Greene Publisching Associates and Wiley Interscience, New York, 1992 (с периодическими исправлениями) (далее называемом “Ausubel et al., 1992”); и Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press: San Diego, 1990. Пары ПЦР-праймеров могут быть получены из известной последовательности, например, с использованием компьютерных программ, таких как программа “Primer”, предназначенная для этих целей (Version 0,5, © 1991, Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA).
Праймеры и зонды, сконструированные на основе фланкирующей ДНК, последовательностей-вставок и последовательностей стыков, описанных в настоящей заявке, могут быть использованы для подтверждения присутствия рассматриваемых последовательностей в образце стандартными методами, например путем повторного клонирования и секвенирования таких последовательностей.
Любой отдельно взятый нуклеиновокислотный зонд или праймер настоящего изобретения гибридизуется со специфической ДНК-последовательностью-мишенью в жестких условиях. Для идентификации присутствия ДНК, происходящей от трансгенсодержащего трансформанта в образце, могут быть использованы любые методы гибридизации или амплификации. Молекулы нуклеиновой кислоты или ее фрагменты специфически гибридизуются с другими молекулами нуклеиновой кислоты в определенных условиях. В соответствии с настоящим изобретением считается, что используемые здесь две различные молекулы нуклеиновой кислоты, каждая из которых содержит различные последовательности, специфически гибридизуются друг с другом, если указанные две молекулы образуют антипараллельную двухцепочечную структуру нуклеиновой кислоты. Молекула нуклеиновой кислоты считается “комплементарной” другой молекуле нуклеиновой кислоты, если эти молекулы имеют полную комплементарность. Считается, что используемые здесь молекулы имеют “полную комплементарность”, если каждый нуклеотид одной молекулы комплементарен нуклеотиду другой молекулы. В соответствии с настоящим изобретением считается, что две молекулы имеют “минимальную комплементарность”, если они могут гибридизоваться друг с другом со стабильностью, достаточной для их гибридизации друг с другом, по меньшей мере, в стандартных условиях “низкой жесткости”. Аналогичным образом считается, что данные молекулы являются комплементарными, если они могут гибридизоваться друг с другом со стабильностью, достаточной для их гибридизации друг с другом, по меньшей мере, в стандартных условиях “высокой жесткости”. Стандартные условия жесткости описаны у Sambrook et al., 1989, и у Haymes et al. (Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, IRL Press, Washington, DC, 1985). Поэтому отклонение от полной комплементарности допускается при условии, что такие отклонения абсолютно не препятствуют способности данных молекул образовывать двухцепочечные структуры. Для того чтобы молекула нуклеиновой кислоты служила в качестве праймера или зонда, необходимо лишь, чтобы она была достаточно комплементарной последовательности, способной образовывать стабильную двухцепочечную структуру в конкретном растворителе и в конкретных концентрациях соли.
Термин “специфический для (последовательности-мишени)” указывает на то, что зонд или праймер гибридизуется в жестких условиях гибридизации только с последовательностью-мишенью в образце, содержащем такую последовательность-мишень, и что такая гибридизация является детектируемой.
Используемый здесь термин “выделенная нуклеиновая кислота” означает нуклеиновую кислоту, которая является, в основном, отделенной или очищенной от других последовательностей нуклеиновой кислоты в клетке данного организма, в которой обычно присутствует данная нуклеиновая кислота, то есть от других хромосомных и внехромосомных ДНК и РНК, стандартными методами очистки нуклеиновых кислот. Этот термин также включает рекомбинантные нуклеиновые кислоты и химически синтезированные нуклеиновые кислоты.
Используемый здесь термин “по существу гомологичная последовательность” означает последовательность нуклеиновой кислоты, специфически гибридизующуюся с комплементом последовательности нуклеиновой кислоты, с которой она сравнивается, то есть с последовательностью-мишенью, в условиях высокой жесткости. Соответствующие условия жесткости, которые обеспечивают гибридизацию ДНК, такие как, например, использование 6,0 × хлорида натрия/цитрат натрия (SSC) примерно при 45°С, и промывки 2,0 × SSC при 50°С, являются известными либо их описание можно найти в руководстве Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y., 6.3.1-6.3.6., 1989. Так, например, концентрация соли в стадии промывки может быть выбрана из концентрации, используемой в условиях низкой жесткости и составляющей примерно 2,0 × SSC при 50°С, и концентрации, используемой в условиях высокой жесткости и составляющей примерно 0,2 × SSC при 50°С. Кроме того, температура в стадии промывки может быть увеличена от комнатной температуры, используемой в условиях низкой жесткости и составляющей примерно 22°С, до температуры, используемой в условиях высокой жесткости и составляющей примерно 65°С. Температура реакции и концентрация соли могут одновременно варьироваться, либо температура может оставаться постоянной, а концентрация соли варьироваться, или наоборот. В предпочтительном варианте нуклеиновая кислота настоящего изобретения может специфически гибридизоваться с одной или несколькими молекулами нуклеиновой кислоты, представленными либо в SEQ ID NO:1, либо в SEQ ID NO:2, или с их комплементами или фрагментами в условиях умеренной жесткости, например, примерно в присутствии 2,0 × SSC и при температуре примерно 65°С. В особенно предпочтительном варианте нуклеиновая кислота настоящего изобретения может специфически гибридизоваться с одной или несколькими молекулами нуклеиновой кислоты, представленными либо в SEQ ID NO:1, либо в SEQ ID NO:2, или с их комплементами или фрагментами в условиях высокой жесткости. Нуклеиновая кислота настоящего изобретения, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:1, или с последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:3, необязательно должна гибридизоваться с последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:2, или последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:4, и наоборот.
В одном из аспектов настоящего изобретения предпочтительная маркерная молекула нуклеиновой кислоты настоящего изобретения имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, или ее комплементы или фрагменты. В другом аспекте настоящего изобретения предпочтительная маркерная молекула нуклеиновой кислоты настоящего изобретения на 80 - 100% или на 90 - 100% идентична последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2, ее комплементу или фрагментам. В другом аспекте настоящего изобретения предпочтительная маркерная молекула нуклеиновой кислоты настоящего изобретения на 95 - 100% идентична последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2, ее комплементу или фрагментам. SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2 могут быть использованы в качестве маркеров для идентификации потомства генетических кроссов в методах скрещивания растений, аналогичных методам, описанным для простого анализа на наличие ДНК-маркеров повторяющихся последовательностей, как описано в “DNA markers: Protocols, Applications, and Overviews, 173-185, Cregan et al., eds., Wiley-Liss NY, 1997. Гибридизация зонда с молекулой ДНК-мишени может быть детектирована различными методами, известными специалистам, и такими методами являются, но не ограничиваются ими, методы с использованием флуоресцентных меток, радиоактивных меток, меток на основе антител и хемилюминесцентных меток.
Что касается амплификации последовательности нуклеиновой кислоты-мишени (например, с помощью ПЦР), проводимой с использованием конкретной пары праймеров для амплификации, то “жесткими условиями” являются такие условия, которые позволяют отдельным праймерам в данной паре праймеров гибридизоваться только с отдельной и уникальной последовательностью нуклеиновой кислоты-мишени, с которой должен связываться каждый праймер, содержащий соответствующую последовательность дикого типа (или ее комплемент), а предпочтительно продуцировать уникальный продукт амплификации, ампликон, в реакции термоамплификации ДНК.
Используемый здесь термин “трансформация” означает перенос фрагмента нуклеиновой кислоты в геном организма-хозяина, такого как растение-хозяин, в результате генетически стабильного наследования. Растения-хозяева, содержащие трансформированные фрагменты нуклеиновой кислоты, называются “трансгенными растениями”.
Используемый здесь термин “амплифицированная ДНК” или “ампликон” означает продукт амплификации последовательности нуклеиновой кислоты-мишени, которая является частью матричной нуклеиновой кислоты. Так, например, для того чтобы определить, содержит или не содержит данное растение кукурузы, полученное в результате полового скрещивания, геномную ДНК трансгенного растения, происходящую от растения кукурузы MON863 настоящего изобретения, ДНК, экстрагированная из образца ткани растения кукурузы, может быть подвергнута нуклеиновокислотной амплификации с использованием пары праймеров, которая включает один праймер, происходящий от фланкирующей последовательности в геноме растения, смежной с сайтом инсерции встроенной гетерологичной ДНК, и второй праймер, происходящий от встроенной гетерологичной ДНК, в результате чего будет продуцироваться ампликон, который является диагностическим признаком присутствия трансгенной ДНК. Ампликон имеет длину и последовательность, которые также являются диагностическими показателями присутствия трансгенной ДНК. Длина этого ампликона может составлять в пределах от общей длины пар праймеров плюс одна пара нуклеотидов, предпочтительно плюс примерно пятьдесят пар нуклеотидов, более предпочтительно плюс примерно двести пятьдесят пар нуклеотидов, и даже более предпочтительно плюс примерно четыреста пятьдесят пар нуклеотидов. Альтернативно пара праймеров может происходить от фланкирующей последовательности с обеих сторон от встроенной ДНК так, чтобы мог продуцироваться ампликон, который включает всю вставку нуклеотидной последовательности. Член пары праймеров, происходящий от геномной последовательности растения, может быть локализован на определенном расстоянии от встроенной ДНК-последовательности, причем это расстояние может варьироваться в пределах, примерно, от одной пары нуклеотидов до двадцати тысяч пар нуклеотидов. В частности, используемый здесь термин “ампликон” исключает димеры праймеров, которые могут образовываться в реакции термоамплификации ДНК.
Амплификация нуклеиновых кислот может быть осуществлена различными известными методами амплификации нуклеиновых кислот, включая полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Такие методы амплификации известны специалистам и описаны, inter alia, в патентах США №№ 4683195 и 4683202 и в руководстве PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al., Academic Press: San Diego, 1990. Методы ПЦР-амплификации были разработаны для амплификации до 22 т.п.н. геномной ДНК и до 42 т.п.н. ДНК бактериофага (Cheng et al., Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 91:5695-5699, 1994). Эти методы, а также другие методы, известные специалистам в области амплификации ДНК, могут быть использованы для осуществления настоящего изобретения. Последовательность гетерологичной ДНК-вставки или фланкирующей последовательности, происходящей от трансформанта кукурузы MON863, может быть подтверждена (и при необходимости скорректирована) путем амплификации таких последовательностей указанного трансформанта, с использованием праймеров, происходящих от описанных здесь последовательностей, и последующего проведения стандартного ДНК-секвенирования ПЦР-ампликона или клонированной ДНК.
Ампликон, продуцированный этими методами, может быть детектирован многими способами. Одним из таких способов является анализ генетического кода (Nikiforov et al., Nucleic Acid Res., 22:4167-4175, 1994), где конструируют ДНК-олигонуклеотид, перекрывающийся как со смежной фланкирующей геномной ДНК-последовательностью, так и со встроенной ДНК-последовательностью. Указанный олигонуклеотид иммобилизуют на лунках микролуночного планшета. После проведения ПЦР нужной области (с использованием одного праймера во встроенной последовательности и одного праймера в смежной фланкирующей геномной последовательности) одноцепочечный ПЦР-продукт может быть гибридизован с иммобилизованным олигонуклеотидом и может служить в качестве матрицы для реакции удлинения на одно основание с использованием ДНК-полимеразы и меченных ddNTP, специфических к следующему предполагаемому основанию. Считывание данных может быть осуществлено с помощью флуоресцентного анализа или ELISA-анализа. При успешной амплификации, гибридизации и удлинении на одно основание сигнал указывает на присутствие вставки/фланкирующей последовательности.
Другим методом является метод пиросеквенирования, описанный Winge (Innov. Pharma. Tech. 00:18-24, 2000). В этом методе конструируют олигонуклеотид, перекрывающийся со стыком смежной геномной ДНК и ДНК-вставки. Этот олигонуклеотид гибридизуют с одноцепочечным ПЦР-продуктом, происходящим от нужной области (с одним праймером во встроенной последовательности и одним праймером во фланкирующей геномной последовательности), и инкубируют в присутствии ДНК-полимеразы, АТФ, сульфурилазы, люциферазы, апиразы, аденозин-5'-фосфосульфата и люциферина. Затем отдельно добавляют DNTP, и его включение продуцирует световой сигнал, который измеряют. При успешной амплификации, гибридизации и удлинении на одно или множество оснований этот световой сигнал указывает на присутствие трансгенной вставки/фланкирующей последовательности.
Флуоресцентная поляризация, описанная Chen et al. (Genome Res. 9:492-498, 1999), представляет собой метод, который может быть использован для детекции ампликона настоящего изобретения. С использованием этого метода был сконструирован олигонуклеотид, который перекрывается со стыком геномной фланкирующей последовательности и встроенной ДНК. Этот олигонуклеотид гибридизуют с одноцепочечным ПЦР-продуктом, происходящим от нужной области (с одним праймером во встроенной ДНК и одним праймером во фланкирующей геномной ДНК-последовательности), и инкубируют в присутствии ДНК-полимеразы и флуоресцентно меченного ddNTP. Удлинение на одно основание приводит к включению ddNTP. Такое включение может быть измерено по изменению поляризации с использованием флуориметра. При успешной амплификации, гибридизации и удлинении на одно основание изменение поляризации указывает на присутствие трансгенной вставки/фланкирующей последовательности.
Метод Такмана (Taqman®) (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) описан как метод детекции и количественного определения присутствия ДНК-последовательности и его полное объяснение приводится в инструкциях производителя. Вкратце, был сконструирован олигонуклеотидный зонд FRET, который перекрывается со стыком геномной фланкирующей последовательности и ДНК-вставки. Зонд FRET и ПЦР-праймеры (один праймер во встроенной ДНК и один праймер во фланкирующей геномной ДНК-последовательности) подвергают циклам гибридизации в присутствии термостабильной полимеразы и dNTP. Гибридизация зонда FRET приводит к отщеплению и высвобождению флуоресцентной части от нефлуоресцирующей части на зонде FRET. При успешной амплификации, гибридизации и удлинении на одно основание флуоресцентный сигнал указывает на присутствие фланкирующей последовательности/трансгенной вставки.
Молекулярные сигнальные индикаторы, используемые для детекции последовательностей, описаны в работе Tyangi et al. (Nature Biotech. 14:303-308, 1996). Вкратце, был сконструирован олигонуклеотидный зонд FRET, который перекрывается со стыком геномной фланкирующей последовательности и ДНК-вставки. Зонд FRET и ПЦР-праймеры (один праймер во встроенной ДНК и один праймер во фланкирующей геномной ДНК-последовательности) подвергают циклам гибридизации в присутствии термостабильной полимеразы и dNTP. После успешной ПЦР-амплификации гибридизация зонда FRET с последовательностью-мишенью приводит к удалению вторичной структуры зонда и пространственному отделению флуоресцентной части от нефлуоресцирующей части. В результате этого продуцируется флуоресцентный сигнал. При успешной амплификации и гибридизации этот флуоресцентный сигнал указывает на наличие фланкирующей последовательности/трансгенной вставки.
Все вышеуказанные способы могут быть модифицированы в целях определения типа зиготности конкретного образца нуклеиновых кислот, происходящих от одного источника. Так, например, трансформант растения кукурузы MON863, который является гомозиготным по трансгенному аллелю 863, содержит в своем геноме две копии данного трансгенного аллеля 863, являющегося характерным и диагностическим признаком генома этого трансформанта кукурузы MON863, а поэтому при самоопылении должно продуцироваться чистосортное растение. Альтернативно гомозиготное растение трансгенной кукурузы MON863 может быть скрещено с другим сортом кукурузы, и в результате такого скрещивания должны продуцироваться растения, которые являются гетерозиготными по трансгенному аллелю MON863. Рассматриваются методы, с помощью которых каждый специалист может определить тип зиготности конкретного растения по трансгенному аллелю MON863.
Так, например, использование трех различных праймеров в реакции амплификации ДНК трансформанта кукурузы MON863 в качестве матрицы и в отдельной и параллельной реакции амплификации ДНК кукурузы негативного контроля, которая не является MON863, то есть не содержит встроенную ДНК, присутствующую в ДНК MON863, должно приводить к двум различным результатам в зависимости от типа зиготности ДНК кукурузы, содержащей ДНК трансгенной кукурузы. Подходящие праймеры могут быть выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 и SEQ ID NO:12. Амплификация ДНК не-MON863 с использованием этой группы праймеров будет, в случае пары праймеров SEQ ID NO:10 и SEQ ID NO:12, приводить к продуцированию первого ампликона, соответствующего непрерывной геномной последовательности кукурузы, в которую была встроена последовательность PV-ZMIR13, то есть амплифицированной последовательности, в основном, соответствующей комбинации связанных SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:6. При этом предполагается, что указанный первый ампликон должен находиться в растении, которое является гетерозиготным по трансгенному аллелю кукурузы MON863, однако гетерозигота также должна продуцировать второй ампликон, соответствующий последовательности SEQ ID NO:3 и образованный в результате удлинения пары праймеров, соответствующих SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10. Растение кукурузы, содержащее ДНК, которое является гомозиготным по аллелю MON863, должно продуцировать лишь второй ампликон.
Аналогичным образом третий ампликон должен продуцироваться в результате реакции термоамплификации, в которой используются праймеры SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 и SEQ ID NO:12 с матричной ДНК, происходящей от растения кукурузы MON863, где указанный третий ампликон соответствует SEQ ID NO:4. Этот третий ампликон должен представлять собой ампликон, продуцируемый лишь с использованием данной конкретной комбинации праймеров и матричной ДНК, если указанное растение является гомозиготным по аллелю MON863, однако использование гетерозиготной матричной ДНК должно приводить к амплификации первого и третьего ампликонов, а использование матричной ДНК не-MON863 должна приводить к амплификации только первого ампликона.
Посредством молекулярной характеризации авторами настоящего изобретения было определено, что трансформант кукурузы MON863 содержит первичную функциональную вставку, включающую значительную часть трансформирующей плазмиды, PV-ZMIR13. Этот сегмент является детектируемым и диагностическим показателем присутствия последовательностей нуклеиновой кислоты трансформанта MON863 в образце, а в частности, в растениях, которые были подвергнуты самоопылению после продуцирования трансформанта MON863.
Существует много методов трансформации молекул нуклеиновой кислоты Cry3Bb в клетки растения, такого как клетки растения кукурузы, для продуцирования нужного трансформанта, такого как MON863. Очевидно, что подходящими методами являются, фактически, любые методы, с помощью которых молекулы нуклеиновой кислоты могут быть введены в данные клетки, например посредством инфицирования Agrobacterium или посредством прямой доставки молекул нуклеиновой кислоты, которая может быть осуществлена путем ПЕГ-опосредованной трансформации, электропорации и бомбардировки ускоренными частицами, покрытыми ДНК, и т.п. (Pottykus, Ann. Rev. Plant. Physiol. Plant. Mol. Biol. 42:205-225, 1991; Vasil, Plant Mol. Biol. 25:925-937, 1994). Так, например, электропорация была использована для трансформации протопластов Zea mays (Fromm et al., Nature 312:791-793, 1986). В основном наиболее часто используемыми общими методами доставки гена в клетки являются следующие четыре типа методов: (1) химические методы (Graham and van der Eb, Virology, 54:536-539, 1973), (2) физические методы, такие как микроинжекция (Capecchi, Cell 22:479-488, 1980), электропорация (Wong and Neumann, Biochem. Biophys. Res. Commun. 107:584-587, 1982; Fromm et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82:5824-5828, 1985, патент США № 5384253) и “выстреливание” гена (Jonhston & Tang, Methods Cell Biol. 43:353-365, 1994); (3) метод с использованием вирусных векторов (Clapp, Clin. Perinatol. 20:155-168, 1993; Lu et al., J. Exp. Med. 178:2089-2096, 1993; Eglitis & Anderson, Biotechniques 6:608-614, 1988) и (4) метод на основе опосредуемых рецепторами механизмов (Curiel et al., Hum. Gen. Ther. 3:147-154, 1992; Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89:6099-6103, 1992).
Трансформация протопластов растения может быть достигнута методами на основе преципитации фосфатом кальция, обработки полиэтиленгликолем, электропорации и их комбинации. См., например, Potrykus et al., Mol. Gen. Genet., 205:193-200, 1986; Lorz et al., Mol. Gen. Genet., 199:178, 1985; Fromm et al., Nature, 319:791, 1986; Uchimiya et al., Mol. Gen. Genet. 204:204, 1986, Callis et al., Genes and Development, 1183, 1987; Marcotte et al., Nature, 335:454, 1988. Применение этих систем к различным видам растений зависит от способности растения данного вида регенерироваться из протопластов. Из этих методов подходящими методами для кукурузы являются методы, описанные в патенте США № 5569834 и в патенте США № 5416011; McCabe et al., Biotechnology 6:923, 1988; Christou et al., Plant Physiol., 87:671-674, 1988. Примерами методов регенерации зерновых культур из протопластов являются также методы, описанные Fujimura et al., Plant Tissue Culture Letters, 2:74, 1985; Toriyama et al., Theor. Appl. Genet. 205:34, 1986; Yamada et al., Plant Cell Rep.4:85, 1986; Abdullah et al., Biotechnology, 4:1087, 1986.
Трансгенное растение, такое как трансгенное растение кукурузы MON863, продуцированное методами трансформации, обычно содержит один добавочный ген Cry3Bb на одной хромосоме. Такое трансгенное растение может называться гетерозиготным по добавочному гену Cry3Bb. Более предпочтительным является трансгенное растение, гомозиготное по добавочному гену Cry3Bb, то есть трансгенное растение, содержащее два добавочных гена Cry3Bb, один ген в одном и том же локусе на каждой из пары хромосом. Гомозиготное трансгенное растение может быть получено путем полового скрещивания (самоопыления) независимо сегрегированного трансгенного растения, которое содержит один добавочный ген Cry3Bb, проращивания некоторых продуцированных семян и анализа полученных растений на присутствие гена Cry3Bb.
Следует отметить, что два различных трансгенных растения могут быть также скрещены с получением потомства, которое содержит два независимо сегрегирующихся добавочных гена Cry3Bb. Самоопыление соответствующего потомства может продуцировать растения, которые являются гомозиготными по обоим добавочным генам Cry3Bb, кодирующим полипептиды Cry3Bb. В настоящем изобретении также рассматривается возвратное скрещивание с родительским растением и ауткроссинг с нетрансгенным растением, а также вегетативное размножение.
В частности, способ продуцирования растения кукурузы, резистентного к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых, может быть осуществлен путем проведения следующих стадий: 1) полового скрещивания первого растения кукурузы, выращенного из семян трансгенной кукурузы MON863, содержащих молекулу ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 и SEQ ID NO:20, и сообщающую резистентность к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых, и второго растения кукурузы, не обладающего резистентностью к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых, и продуцирования в результате этого скрещивания множества растений первого потомства; 2) отбора растений первого потомства, которые являются резистентными к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых; 3) самоопыления растения указанного первого потомства с продуцированием множества растений второго потомства; и 4) отбора из указанных растений второго потомства растения, резистентного к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых. Растение первого потомства, которое является резистентным к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых, или растение второго потомства, которое является резистентным к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых, может быть подвергнуто возвратному скрещиванию со вторым растением кукурузы или с третьим растением кукурузы с получением растения кукурузы, резистентного к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых.
Методы регенерации, выведения и культивирования растений, таких как растения MON863, из трансформантов или различных трансформированных эксплантатов хорошо известны специалистам (Weissbach & Weissbach, Methods for Plant Molecular Biology, Eds., Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1988). Такой способ регенерации и культивирования обычно включает стадии отбора трансформированных клеток, содержащих экзогенные гены Cry3Bb, культивирования этих специализированных клеток путем проведения обычных стадий эмбрионального развития с последующим проведением стадии укоренения проростков. Трансгенные эмбрионы и семена регенерируются аналогичным образом. Полученные трансгенные корневые отпрыски затем высаживают в соответствующую среду для выращивания растений, такую как почва.
Методы регенерации растений, содержащих чужеродный экзогенный ген, кодирующий нужный белок, хорошо известны специалистам. Как описано в настоящем изобретении, регенерированные растения, такие как регенерированные растения MON863, содержащие нуклеиновые кислоты Cry3Bb, либо дикого типа, либо химически синтезированные, и кодирующие белки Cry3Bb, могут быть, предпочтительно, подвергнуты самоопылению с получением гомозиготных трансгенных растений кукурузы, обсуждаемых ниже. В другом случае пыльца, полученная от указанных регенерированных растений кукурузы, может быть подвергнута скрещиванию с пыльцой выращенных из семян растений агрономически ценных линий. И наоборот, пыльца от этих ценных линий может быть использована для опыления регенерированных растений. Трансгенное растение MON863 настоящего изобретения может быть культивировано методами, хорошо известными специалистам.
Существуют различные методы регенерации растений из растительных тканей. Выбор конкретного метода регенерации зависит от ткани исходного растения и от конкретного вида регенерируемого растения. Трансформация однодольных растений методами электропорации, бомбардировки частицами и инфицирования Agrobacterium также описана в литературе. Трансформация и регенерация растения может быть осуществлена для многих однодольных растений, включая кукурузу, спаржу, ячмень и пшеницу и т.п. (Bytebier et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84:5345, 1987; Wan & Lemaux, Plant Physiol 104:37, 1994; Rhodes et al., Science 240:204, 1988; Gordon-Kamm et al., Plant Cell, 2:603, 1990; Fromm et al., Bio/Technology 8:833, 1990; Armstrong et al., Crop Science 35:550-557, 1995; Vasil et al., Bio/Technology 10:667, 1992; патент США № 5631152).
Помимо процедур, обсуждаемых выше, специалисты-практики знакомы с известными источниками, в которых описаны конкретные условия, процедуры конструирования, модификации и выделения макромолекул (например, молекул ДНК, плазмид и т.п.), генерирование рекомбинантных организмов, а также скрининг и выделение клонов (см., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, 1989; Maliga et al., Methods in Pland Molecular Biology, Cold Spring Harbor Press, 1995; Birren et al., Genome Analysis: Analyzing DNA, 1, Cold Spring Harbor, New York, 1997).
Наборы для детекции ДНК могут быть разработаны с использованием описанных здесь композиций и методов, хорошо известных специалистам в области детекции ДНК. Такие наборы могут быть использованы для идентификации ДНК трансгенной кукурузы MON863 в образце и для выведения растений кукурузы, содержащих ДНК MON863. Эти наборы содержат одну или несколько ДНК-последовательностей, содержащих, по меньшей мере, 11 смежных нуклеотидов, гомологичных или комплементарных последовательностям, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21 и их комплементов. Эти ДНК-последовательности могут быть использованы в реакциях амплификации ДНК или в качестве зондов в методе гибридизации ДНК.
Нижеследующие примеры приводятся в целях иллюстрации некоторых предпочтительных вариантов осуществления изобретения. Для каждого специалиста очевидно, что в способах, описанных в этих примерах, в которых авторы подробно излагают принципы осуществления настоящего изобретения, заложены основные идеи, необходимые для осуществления настоящего изобретения, а поэтому эти способы могут рассматриваться как примеры осуществления предпочтительных вариантов настоящего изобретения. Однако для каждого специалиста очевидно, что, исходя из представленного описания изобретения, в конкретные варианты изобретения может быть внесено множество изменений, в результате которых могут быть получены такие же или аналогичные результаты, не выходящие за рамки существа и объема настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Выделение и характеристика ДНК-последовательностей, фланкирующих трансгенную вставку MON863
Трансформированную кукурузу MON863 генерировали методом бомбардировки ускоренными частицами с использованием выделенного из агарозного геля рестрикционного 4,7 т.п.н.-MluI-фрагмента, происходящего от плазмидного вектора PV-ZMIR13 (pMON25097, фиг.1). Экспрессирующий растительный вектор pMON25097 содержит первую экспрессионную кассету, включающую неприродную промоторную последовательность CaMV35S AS4 (Р-CaMV.AS4 SEQ ID NO:17), функционально присоединенную к нетранслируемой лидерной последовательности связывающего белка А/В хлорофилла пшеницы (L-Ta.hcb1, SEQ ID NO:18), которая функционально присоединена к интронной последовательности актина риса (I-Os.Act1, SEQ ID NO:19), функционально присоединенной к неприродной последовательности, кодирующей вариант белка Cry3Bb (SEQ ID NO:20) и функционально присоединенной к последовательности терминации транскрипции и последовательности полиаденилирования белка теплового шока Hsp17 пшеницы (Т-Ta.Hsp17, SEQ ID NO:21). Экспрессирующий растительный вектор pMON25097 содержит вторую экспрессионную кассету, присоединенную к Cry3Bb-экспрессионному кластеру, который сообщает трансформированной ткани растения резистентность к паромомицину (то есть 3'-конец Cry3Bb-экспрессионной кассеты присоединен к 5'-концу второй экспрессионной кассеты, сообщающей резистентность к паромомицину). Эта сообщающая резистентность кассета состоит из энхансерной промоторной последовательности CaMV35S (патент США № 5164316), которая функционально присоединена к последовательности, кодирующей неомицин-фосфотрансферазу (патент США № 5569834) и функционально присоединенной к последовательности терминации транскрипции и последовательности полиаденилирования нопалин-синтазы (Fraley et al., Proc.Natl. Acad. Sci., USA, 80:4803-4807, 1983). Трансгенные растения кукурузы, резистентные к паромомицину, получали, в основном, как описано в патенте США № 5424412.
Молекулярная характеризация вставки в трансгенную кукурузу MON863 продемонстрировала, что в указанной трансгенной кукурузе MON863 присутствует одна копия ДНК-фрагмента, используемого для трансформации. Для разработки трансформант-специфических методов ПЦР-идентификации последовательности ДНК кукурузы, фланкирующие 5'- и 3'-концы вставки в трансформанте кукурузы MON863, были определены с использованием технологии “прогулки по геному” (GenomeWalkerТМ, Clontech Laboratories, Inc.) в соответствии с инструкциями производителей. Указанный метод “прогулки по геному”, GenomeWalkerТМ, предусматривает сначала полный гидролиз очищенной ДНК кукурузы MON863 различными рестриктирующими и затупляющими концы ферментами, имеющимися в наборе GenomeWalkerТМ. Затем очищенные геномные ДНК-фрагменты с тупыми концами лигировали с адапторами GenomeWalkerТМ, содержащими известные фрагменты нуклеиновой кислоты. После этого каждый продукт лигирования амплифицировали в первой ПЦР-реакции с использованием внешнего праймера-адаптора, SEQ ID NO:22 (5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'), поставляемого GenomeWalkerТМ, и внешнего генспецифического праймера (SEQ ID NO:13, 5'-GAACGTCTTCTTTTTCCACGATGCTCC-3' и SEQ ID NO:15, 5'-GCGAGTCTGATGAGACATCTCTGTAT-3' для 5'- и 3'-концов трансгенной вставки соответственно). Затем первую смесь ПЦР-продукта разводили и использовали в качестве матрицы для второй или “гнездовой” ПЦР с “гнездовым” праймером-адаптором, SEQ ID NO:23 (5'-ACTATAGGGCACGCGTGGT-3'), поставляемым GenomeWalkerТМ, и с “гнездовым” генспецифическим праймером (SEQ ID NO:14, 5'-TCGGCAGAGGCATCTTGAATGATAGC-3' и SEQ ID NO:16, 5'-AATTTGGTTGATGTGTGTGCGAGTTCT-3' для 5'- и 3'-концов трансгенной вставки соответственно). Вторичный ПЦР-продукт, который начинается с известных генспецифических последовательностей и простирается до неизвестной смежной геномной ДНК, может быть затем секвенирован методами, хорошо известными специалистам. После определения фланкирующих геномных последовательностей кукурузы были разработаны ПЦР-анализы, с помощью которых может быть детектировано присутствие ДНК растения кукурузы PV-ZMIR13 (MON863) в образце.
После проведения этой процедуры нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID NO:5, была охарактеризована как геномная последовательность кукурузы, которая является непосредственно смежной с произвольно установленным 5'-концом ДНК-фрагмента pMON25097 и расположенной выше от этого фрагмента, который был встроен в геном кукурузы, в результате чего был сконструирован и выделен трансгенный трансформант кукурузы MON863. Специалисту в данной области или даже любому среднему специалисту должно быть известно, что дополнительная информация о нуклеотидной последовательности может быть легко получена даже в том случае, если эта последовательность расположена на более дальнем расстоянии от последовательности стыка, представленной в SEQ ID NO:1, но, при этом, находится в геноме кукурузы, чем последовательность длиной в 242 нуклеотида, представленная в SEQ ID NO:5, и последовательность, простирающаяся от нуклеотида в положении 267 до нуклеотида в положении 508 и представленная в SEQ ID NO:3. Аналогичным образом нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID NO:6, была охарактеризована как геномная последовательность кукурузы, которая является непосредственно смежной с произвольно установленным 3'-концом ДНК-фрагмента pMON25097 и расположенной ниже от этого фрагмента, который был встроен в геном кукурузы, в результате чего был сконструирован и выделен трансгенный трансформант кукурузы MON863. Специалисту в данной области также известно, что дополнительная информация о нуклеотидной последовательности может быть легко получена даже в том случае, если эта последовательность расположена на более дальнем расстоянии от последовательности стыка, представленной в SEQ ID NO:2, но, при этом, находится в геноме кукурузы, чем последовательность длиной в 224 нуклеотида, представленная в SEQ ID NO:6, и последовательность, простирающаяся от нуклеотида в положении 361 до нуклеотида в положении 584 и представленная в SEQ ID NO:4.
Пример 2. Детекция присутствия ДНК MON863 в образце
Ниже приводится неограничивающий пример ПЦР-анализов, разработанных для детекции наличия ДНК MON863 в образце.
ДНК экстрагировали приблизительно из 100 мг ткани дробленого зерна с использованием мини-набора (Qiagen Dneasy Plant Mini Kit (catalog # 68163, Valencia CA) в соответствии с протоколом, рекомендованным производителями, с одним лишь исключением. А именно перед экстракцией используемое зерно выдерживали в холодильнике при -80°С и не измельчали в присутствии жидкого азота с использованием ступки и пестика непосредственно перед экстракций. Количественную оценку ДНК проводили методами, хорошо известными специалистам, с использованием флуориметра Hoeffer DNA Quant 2000 Fluorometer и молекулярного маркера IX Boehringer Mannhiem (Indianapolis, IN) в качестве ДНК-стандарта для калибровки.
ПЦР-анализ геномных ДНК-последовательностей, фланкирующих 5'-конец вставки в MON863, осуществляли с использованием одного праймера (праймера А), происходящего от 5'-геномной фланкирующей последовательности (SEQ ID NO:9, 5'-GTCTTGCGAAGGATAGTGGGAT-3'), и спаренного со вторым праймером (праймером В), локализованным возле 5'-конца встроенной ДНК в промоторе 35S (SEQ ID NO:10, 5'-CATATGACATAAGCGCTCTTGG-3'), охватывая область в 508 п.н. ПЦР-анализ геномных ДНК-последовательностей, фланкирующих 3'-конец вставки в MON863, осуществляли с использованием одного праймера (праймера D), происходящего от 3'-геномной фланкирующей последовательности (SEQ ID NO:12, 5'-AGACTCTATGCTCTGCTCATAT-3'), и спаренного со вторым праймером (праймером C), локализованным в последовательности полиаденилирования tahsp17 возле 3'-конца вставки, охватывая область в 584 п.н. (SEQ ID NO:11, 5'-CTGATCATTGGTGCTGAGTCCTT-3') (фиг.2). ПЦР-анализы проводили с использованием 50 нг геномной ДНК трансгенной кукурузы MON863 или матрицы геномной ДНК нетрансгенной MON863 в реакционном объеме 50 мкл, содержащем Mg2+ в конечной концентрации 1,5 мМ, 0,4 мкМ каждого праймера, 200 мкМ каждого dNTP и 2,5 единиц ДНК-полимеразы Taq. Реакцию осуществляли при следующих условиях: 1 цикл при 94°С в течение 3 минут; 38 циклов при 94°С в течение 30 секунд, при 60°С в течение 30 секунд, и при 72°С в течение 1,5 минуты, и 1 цикл при 72°С в течение 10 минут.
ПЦР-продукты (20 мкл) ожидаемого размера, представляющие собой геномную последовательность, фланкирующую 5'- и 3'-концы вставки, выделяли с помощью гель-электрофореза в 2,0% агарозном геле при 60 В в течение ~ 1 часа и визуализировали путем окрашивания этидийбромидом. ПЦР-фрагменты, представляющие собой 5'- и 3'-фланкирующие последовательности, вырезали из геля и очищали с использованием набора для гель-фильтрации QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, catalog #28704) в соответствии с процедурой, рекомендованной производителем. Затем очищенные ПЦР-продукты секвенировали с использованием исходных ПЦР-праймеров химическим методом обрыва цепи красителем.
Как и ожидалось, контрольные реакции, не содержащие матрицу, а также реакции, содержащие нетрансгенную ДНК кукурузы, не генерировали ПЦР-продукт с любым набором праймеров. В ПЦР-анализах ДНК резистентного к листоеду трансформанта MON863, проводимых с использованием праймеров А и В, имеющих последовательности SEQ ID NO:9 и 10, генерировались продукты ожидаемого размера в 508 п.н., представляющие собой 5'-фланкирующую последовательность (SEQ ID NO:3), а в ПЦР-анализах, проводимых с использованием праймеров D и C, имеющих последовательности SEQ ID NO:11 и 12, генерировались продукты размером в 584 п.н., представляющие собой 3'-фланкирующую последовательность (SEQ ID NO:4).
Данные, полученные для этих последовательностей, показали, что 5'-ампликон, то есть SEQ ID NO:3, состоит из 266 п.н. 5'-конца промотора 35S у 5'-конца вставки, за которой следуют 242 п.н. геномной фланкирующей ДНК кукурузы. Данные для этих последовательностей показали, что 3'-ампликон, то есть SEQ ID NO:4, состоит из 360 п.н. 3'-последовательности полиаденилирования tahsp17, которая определяет 3'-конец вставки, за которой непосредственно следуют 224 п.н. геномной фланкирующей ДНК кукурузы.
Агрономически и экономически ценные продукты и/или их композиции, которыми являются, но не ограничиваются ими, корм для животных, основные продукты питания, а также продукты и субпродукты из кукурузы, и которые могут быть использованы в качестве пищевых продуктов или в качестве композиций, предназначенных для употребления в пищу, включая, но не ограничиваясь ими, кукурузная мука, кормовая кукурузная мука, кукурузная патока, кукурузное масло, кукурузный крахмал, попкорн, кукурузные лепешки, кукурузные хлопья и субпродукты из кукурузы и т.п., также входят в объем настоящего изобретения, если эти продукты и их композиции содержат детектируемые количества нуклеотидных последовательностей, описанных в настоящей заявке и являющихся диагностическими показателями для идентификации трансгенной кукурузы MON863.
Семена, содержащие трансген кукурузы MON863, были депонированы заявителем 17 октября 2000 г. в Американской коллекции типовых культур (АТСС), 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia, USA ZIP 20110-2209. Заявителю была выдана расписка АТСС о приеме депозита трансформанта кукурузы Zea mays MON863 PV-ZMIR13, которому был присвоен регистрационный номер АТСС № РТА-2605.
Однако для каждого специалиста очевидно, что, исходя из представленных примеров, в вышеуказанные анализы, используемые для детекции ДНК, происходящей от трансформанта кукурузы MON863, в образце, может быть внесено множество изменений. Так, например, может быть рассмотрена серия праймеров, содержащая один праймер, комплементарный геномной ДНК кукурузы, и другой праймер, комплементарный последовательностям, находящимся внутри вставки. Кроме того, могут быть также рассмотрены любые другие ранее описанные анализы гибридизации с использованием ДНК-зондов, комплементарных новым последовательностям нуклеиновой кислоты, локализованным в месте стыка “трансген/геном”.
При этом очевидно, что в соответствии с проиллюстрированными и описанными выше принципами настоящего изобретения, каждый специалист может внести изменения в общую структуру и конкретные детали описания изобретения, не выходящие за рамки указанных принципов. Авторами настоящего изобретения заявлены все изменения, не выходящие за рамки существа и объема изобретения, сформулированного в прилагаемой ниже формуле изобретения.
Все публикации и опубликованные патенты, цитированные в настоящей заявке, вводятся в настоящее изобретение посредством ссылки, так как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была конкретно и отдельно введена в настоящее изобретения посредством ссылки.
Claims (20)
1. Выделенная из клеток трансформанта кукурузы MON863 ДНК-молекула, связывающая встраиваемую и фланкирующую ДНК, где указанная выделенная молекула ДНК выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и комплементарных им последовательностей.
2. Выделенная нуклеиновая кислота, связывающая гетерологичную молекулу ДНК с геномом растения кукурузы в трансформанте кукурузы MON863 и содержащая последовательность длиной примерно от 11 до 20 последовательных нуклеотидов, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и комплементарных им последовательностей.
3. Растение кукурузы, регенерированное из трансформанта кукурузы MON863, где указанное растение кукурузы устойчиво к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых (Coleopteran) и содержит молекулу ДНК с последовательностью SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2 и комплементарными им последовательностями.
4. Растение кукурузы, устойчивое к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых (Coleopteran), содержащее по меньшей мере первую и вторую последовательности ДНК, которые присоединены друг к другу и образуют непрерывную нуклеотидную последовательность в геноме растения кукурузы, где указанная первая последовательность ДНК содержит по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов последовательности SEQ ID NO:2;
где указанная вторая последовательность ДНК содержит по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов любой последовательности из SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21; и где указанная первая и вторая последовательности ДНК могут использоваться в качестве нуклеотидных праймеров или зондов для детекции последовательностей нуклеиновой кислоты трансформанта кукурузы MON863 в биологическом образце.
где указанная вторая последовательность ДНК содержит по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов любой последовательности из SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21; и где указанная первая и вторая последовательности ДНК могут использоваться в качестве нуклеотидных праймеров или зондов для детекции последовательностей нуклеиновой кислоты трансформанта кукурузы MON863 в биологическом образце.
5. Набор для детекции нуклеиновой кислоты, используемый для идентификации нуклеиновых кислот трансформанта кукурузы MON863 в биологическом образце, содержащий:
a) зонд, который представляет собой часть последовательности трансгенной ДНК, присутствующей в геноме трансформанта кукурузы MON863, либо комплементарен ей, где указанный зонд содержит по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов, где указанные последовательные нуклеотиды выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и комплементарных им последовательностей;
b) реагенты, необходимые для детекции связывания указанного зонда с указанной последовательностью трансгенной ДНК; и
c) инструкции по применению, прилагаемые к указанному набору.
a) зонд, который представляет собой часть последовательности трансгенной ДНК, присутствующей в геноме трансформанта кукурузы MON863, либо комплементарен ей, где указанный зонд содержит по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов, где указанные последовательные нуклеотиды выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и комплементарных им последовательностей;
b) реагенты, необходимые для детекции связывания указанного зонда с указанной последовательностью трансгенной ДНК; и
c) инструкции по применению, прилагаемые к указанному набору.
6. Способ детекции трансформанта кукурузы MON863 в биологическом образце:
(I) предусматривающий следующие стадии:
(а) контактирование указанного образца с полинуклеотидной последовательностью первого праймера и полинуклеотидной последовательностью второго праймера, которые работают вместе в реакции амплификации нуклеиновой кислоты в присутствии матричной ДНК, происходящей от трансформанта кукурузы MON863, и дают ампликон, который является диагностическим показателем указанного трансформанта кукурузы,
(b) осуществление реакции амплификации нуклеиновой кислоты с получением указанного ампликона и
(c) детекцию указанного ампликона;
или
(II) предусматривающий следующие стадии:
a) контактирование образца, который предположительно содержит указанную ДНК, и полинуклеотидного зонда, который гибридизуется в жестких условиях гибридизации с указанной ДНК и который не гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК контрольного растения кукурузы, не являющегося трансформантом кукурузы MON863,
b) создание жестких условий гибридизации для указанного образца и указанного зонда и
c) детекцию гибридизации указанного зонда с ДНК трансформанта кукурузы MON863;
или
(III) предусматривающий следующие стадии:
(a) контактирование указанного образца с парой праймеров, которые при использовании в реакции амплификации нуклеиновой кислоты с ДНК трансформанта кукурузы MON863 дают ампликон, являющийся диагностическим показателем ДНК трансформанта кукурузы MON863,
(b) осуществление реакции амплификации нуклеиновой кислоты с получением указанного ампликона и
(c) детекцию указанного ампликона; или
(IV) предусматривающий следующие стадии:
(а) контактирование указанного образца с зондом, который
(i) гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК трансформанта кукурузы MON863 и
(ii) не гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК, не являющейся ДНК трансформанта кукурузы MON863, где указанный зонд содержит последовательность, комплементарную последовательности по меньшей мере из 11 нуклеотидов, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2;
(b) создание жестких условий гибридизации для указанного образца и зонда и
(c) детекцию гибридизации указанного зонда с указанной ДНК MON863.
(I) предусматривающий следующие стадии:
(а) контактирование указанного образца с полинуклеотидной последовательностью первого праймера и полинуклеотидной последовательностью второго праймера, которые работают вместе в реакции амплификации нуклеиновой кислоты в присутствии матричной ДНК, происходящей от трансформанта кукурузы MON863, и дают ампликон, который является диагностическим показателем указанного трансформанта кукурузы,
(b) осуществление реакции амплификации нуклеиновой кислоты с получением указанного ампликона и
(c) детекцию указанного ампликона;
или
(II) предусматривающий следующие стадии:
a) контактирование образца, который предположительно содержит указанную ДНК, и полинуклеотидного зонда, который гибридизуется в жестких условиях гибридизации с указанной ДНК и который не гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК контрольного растения кукурузы, не являющегося трансформантом кукурузы MON863,
b) создание жестких условий гибридизации для указанного образца и указанного зонда и
c) детекцию гибридизации указанного зонда с ДНК трансформанта кукурузы MON863;
или
(III) предусматривающий следующие стадии:
(a) контактирование указанного образца с парой праймеров, которые при использовании в реакции амплификации нуклеиновой кислоты с ДНК трансформанта кукурузы MON863 дают ампликон, являющийся диагностическим показателем ДНК трансформанта кукурузы MON863,
(b) осуществление реакции амплификации нуклеиновой кислоты с получением указанного ампликона и
(c) детекцию указанного ампликона; или
(IV) предусматривающий следующие стадии:
(а) контактирование указанного образца с зондом, который
(i) гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК трансформанта кукурузы MON863 и
(ii) не гибридизуется в жестких условиях гибридизации с ДНК, не являющейся ДНК трансформанта кукурузы MON863, где указанный зонд содержит последовательность, комплементарную последовательности по меньшей мере из 11 нуклеотидов, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2;
(b) создание жестких условий гибридизации для указанного образца и зонда и
(c) детекцию гибридизации указанного зонда с указанной ДНК MON863.
7. Способ по п.6, где в случае (I) указанный ампликон содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 и комплементарных им последовательностей.
8. Способ по п.7, где указанный ампликон содержит SEQ ID NO:1, и где указанная полинуклеотидная последовательность первого праймера выбрана из группы, состоящей из: SEQ ID NO:1 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 20; SEQ ID NO:3 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 267 и SEQ ID NO:9 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 22; а указанная полинуклеотидная последовательность второго праймера выбрана из группы, состоящей из последовательности, комплементарной SEQ ID NO:1 примерно от нуклеотидного положения 9 до нуклеотидного положения 20; последовательности, комплементарной SEQ ID NO:3 примерно от нуклеотидного положения 266 до нуклеотидного положения 508; и последовательности, комплементарной SEQ ID NO:10 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 22.
9. Способ по п.7, где указанный ампликон содержит SEQ ID NO:2, и где указанная полинуклеотидная последовательность первого праймера выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO:2 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 20; SEQ ID NO:4 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 361 и SEQ ID NO:11 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 23; а указанная полинуклеотидная последовательность второго праймера выбрана из группы, состоящей из последовательности, комплементарной SEQ ID NO:2 примерно от нуклеотидного положения 9 до нуклеотидного положения 20, последовательности, комплементарной SEQ ID NO:4 примерно от нуклеотидного положения 360 до нуклеотидного положения 584; и последовательности, комплементарной SEQ ID NO:12 примерно от нуклеотидного положения 1 до нуклеотидного положения 22.
10. Способ по п.8 или 9, где указанный ампликон содержит нуклеотидную последовательность, содержащую по меньшей мере 20 последовательных нуклеотидов, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2.
11. Биологический образец, полученный из растения-трансформанта кукурузы MON863, его ткани или семян, где указанный образец содержит полинуклеотидную последовательность, которая представляет собой последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2 или комплементарных им последовательностей, и где указанная полинуклеотидная последовательность может быть детектирована в указанном образце методом амплификации нуклеиновой кислоты или гибридизации нуклеиновой кислоты.
12. Биологический образец по п.11, содержащий растение, ткань или семена трансгенного трансформанта кукурузы MON863 с семенами, депонированными в Американской коллекции типовых культур (АТСС) под регистрационным номером №РТО-2506.
13. Биологический образец по п.12, где указанный образец выбран из группы, состоящей из экстракта, полученного из трансгенного растения-трансформанта кукурузы MON863, и где указанный экстракт содержит одну или несколько нуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов последовательностей SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и комплементарных им последовательностей.
14. Биологический образец по п.13, где указанный образец выбран из группы, состоящей из кукурузной муки, кормовой кукурузной муки, кукурузной патоки, кукурузного масла, кукурузного крахмала и кукурузных хлопьев, изготовленных так, что они полностью или частично содержат субпродукты из кукурузы.
15. Экстракт, полученный из растения-трансформанта кукурузы MON863, его ткани или семян, содержащих нуклеотидную последовательность из по меньшей мере 11 последовательных нуклеотидов в длину, которая представляет собой нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2 или комплементарных им последовательностей.
16. Экстракт по п.15, где указанная последовательность может быть детектирована в указанном экстракте методом амплификации нуклеиновой кислоты или гибридизации нуклеиновой кислоты.
17. Экстракт по п.16, содержащий образец, полученный из растения, ткани или семян трансгенного трансформанта кукурузы MON863.
18. Экстракт по п.17, где указанный образец выбран из группы, состоящей из кукурузной муки, кормовой кукурузной муки, кукурузной патоки, кукурузного масла, кукурузного крахмала и кукурузных хлопьев, изготовленных так, чтобы они полностью или частично содержали субпродукты из кукурузы.
19. Выделенная молекула ДНК, где указанная молекула ДНК является диагностическим показателем присутствия ДНК трансформанта кукурузы MON863, и где указанная ДНК выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и комплементарных им последовательностей.
20. Способ получения растения кукурузы, резистентного к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых, предусматривающий:
a) половое скрещивание первого родительского растения кукурузы, содержащего ДНК трансформанта кукурузы MON863, со вторым родительским растением кукурузы, не содержащим указанной ДНК, и получение в результате такого скрещивания множества растений первого потомства;
b) отбор растений первого потомства, которые являются резистентными к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых;
c) самоопыление указанного растения первого потомства с продуцированием множества растений второго потомства; и
d) отбор из указанных растений второго потомства, растения, резистентного к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых;
где указанные растения второго потомства содержат нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2.
a) половое скрещивание первого родительского растения кукурузы, содержащего ДНК трансформанта кукурузы MON863, со вторым родительским растением кукурузы, не содержащим указанной ДНК, и получение в результате такого скрещивания множества растений первого потомства;
b) отбор растений первого потомства, которые являются резистентными к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых;
c) самоопыление указанного растения первого потомства с продуцированием множества растений второго потомства; и
d) отбор из указанных растений второго потомства, растения, резистентного к заражению насекомыми отряда Жесткокрылых;
где указанные растения второго потомства содержат нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US39927902P | 2002-07-29 | 2002-07-29 | |
| US60/399,279 | 2002-07-29 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008150326/13A Division RU2008150326A (ru) | 2002-07-29 | 2008-12-18 | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005105322A RU2005105322A (ru) | 2005-09-10 |
| RU2352638C2 true RU2352638C2 (ru) | 2009-04-20 |
Family
ID=31188566
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005105322/13A RU2352638C2 (ru) | 2002-07-29 | 2003-07-23 | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения |
| RU2008150326/13A RU2008150326A (ru) | 2002-07-29 | 2008-12-18 | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008150326/13A RU2008150326A (ru) | 2002-07-29 | 2008-12-18 | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7705216B2 (ru) |
| EP (1) | EP1532247A4 (ru) |
| AR (1) | AR040710A1 (ru) |
| AU (1) | AU2003254099A1 (ru) |
| BG (1) | BG109051A (ru) |
| HR (1) | HRP20050134A2 (ru) |
| ME (1) | MEP35008A (ru) |
| PL (1) | PL374995A1 (ru) |
| RS (1) | RS20050183A (ru) |
| RU (2) | RU2352638C2 (ru) |
| UA (1) | UA87808C2 (ru) |
| WO (1) | WO2004011601A2 (ru) |
Families Citing this family (349)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6060594A (en) * | 1997-12-18 | 2000-05-09 | Ecogen, Inc. | Nucleic acid segments encoding modified bacillus thuringiensis coleopteran-toxic crystal proteins |
| US6501009B1 (en) | 1999-08-19 | 2002-12-31 | Monsanto Technology Llc | Expression of Cry3B insecticidal protein in plants |
| RU2352638C2 (ru) * | 2002-07-29 | 2009-04-20 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения |
| EP2942402A1 (en) | 2003-05-02 | 2015-11-11 | Dow AgroSciences LLC | Corn event tc1507 and methods for detection thereof |
| US8212113B2 (en) * | 2003-12-15 | 2012-07-03 | Monsanto Technology Llc | Corn plant Mon88017 and compositions and methods for detection thereof |
| EP2289311B1 (en) | 2004-03-25 | 2016-02-10 | Syngenta Participations AG. | Corn event MIR604 |
| HUE047016T2 (hu) | 2004-03-26 | 2020-04-28 | Dow Agrosciences Llc | CRY1F és CRY1AC transzgenikus gyapotvonalak és eseményspecifikus azonosításuk |
| CA2693280C (en) * | 2004-04-09 | 2017-09-12 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for control of insect infestations in plants |
| BRPI0515922B8 (pt) | 2004-09-29 | 2022-12-06 | Dow Agrosciences Llc | Molécula de dna, kit, constructo, método de identificação do evento, método de detecção, par de moléculas de dna, método de confirmação da pureza, método de varredura, par de sequências de dna |
| SG166097A1 (en) | 2005-09-16 | 2010-11-29 | Monsanto Technology Llc | Methods for genetic control of insect infestations in plants and compositions thereof |
| EP2059601A2 (en) * | 2006-10-03 | 2009-05-20 | Monsanto Technology, LLC | Methods for hybrid corn seed production and compositions produced therefrom |
| EP2113172A1 (de) * | 2008-04-28 | 2009-11-04 | Bayer CropScience AG | Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen |
| EP2525658B1 (de) | 2010-01-22 | 2017-03-01 | Bayer Intellectual Property GmbH | Akarizide und/oder insektizide wirkstoffkombinationen |
| EP2640706B1 (en) | 2010-11-15 | 2017-03-01 | Bayer Intellectual Property GmbH | N-aryl pyrazole(thio)carboxamides |
| EP2646413A1 (de) | 2010-11-29 | 2013-10-09 | Bayer Intellectual Property GmbH | Alpha-beta-ungesättigte imine |
| KR20180096815A (ko) | 2010-12-01 | 2018-08-29 | 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 | 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도 |
| EP2460407A1 (de) | 2010-12-01 | 2012-06-06 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe |
| JP6111200B2 (ja) | 2010-12-03 | 2017-04-05 | ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー | 除草剤耐性イベント８２６４．４４．０６．１のスタック、関連するトランスジェニックダイズ系統、およびその検出 |
| BR112013015745B1 (pt) | 2010-12-03 | 2021-01-19 | Ms Technologies, Llc | polinucleotídeos referente ao evento de tolerância a herbicida 8291.45.36.2, cassete de expressão, sonda, bem como processos para identificação do evento, determinação da zigosidade, produção de uma planta de soja transgênica e produção de uma proteína em uma célula de planta |
| US20130345058A1 (en) | 2011-03-10 | 2013-12-26 | Wolfram Andersch | Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds |
| US20140031204A1 (en) | 2011-03-23 | 2014-01-30 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations |
| CN103517900A (zh) | 2011-04-08 | 2014-01-15 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀真菌剂肟基-四唑衍生物 |
| ES2561296T3 (es) | 2011-04-22 | 2016-02-25 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Combinaciones de un compuesto activo que comprenden un derivado de carboximida y un compuesto fungicida |
| PL2720543T3 (pl) | 2011-06-14 | 2019-03-29 | Bayer Cropscience Ag | Zastosowanie związku enaminokarbonylowego w kombinacji ze środkiem kontroli biologicznej |
| TW201317353A (zh) | 2011-07-13 | 2013-05-01 | Dow Agrosciences Llc | 具疊加除草劑耐受性之品件８２６４．４２．３２．１，相關基因轉殖大豆品系以及測定該品件的方法 |
| US9265252B2 (en) | 2011-08-10 | 2016-02-23 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives |
| US10538774B2 (en) | 2011-08-22 | 2020-01-21 | Basf Agricultural Solutions Seed, Us Llc | Methods and means to modify a plant genome |
| EP2561759A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-02-27 | Bayer Cropscience AG | Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth |
| WO2013037717A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal 4-substituted-3-{phenyl[(heterocyclylmethoxy)imino]methyl}-1,2,4-oxadizol-5(4h)-one derivatives |
| CA2848620C (en) | 2011-09-16 | 2020-03-10 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of cyprosulfamide for inducing a growth regulating response in useful plants and increasing the yield of harvested plant organs therefrom |
| US20140378306A1 (en) | 2011-09-16 | 2014-12-25 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield |
| CN103781352A (zh) | 2011-09-16 | 2014-05-07 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 苯基吡唑啉-3-甲酸酯类用于提高植物产量的用途 |
| WO2013050410A1 (en) | 2011-10-04 | 2013-04-11 | Bayer Intellectual Property Gmbh | RNAi FOR THE CONTROL OF FUNGI AND OOMYCETES BY INHIBITING SACCHAROPINE DEHYDROGENASE GENE |
| EP2782920B1 (en) | 2011-11-21 | 2016-12-21 | Bayer Intellectual Property GmbH | Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives |
| RU2014126063A (ru) | 2011-11-30 | 2016-01-27 | Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх | ФУНГИЦИДНЫЕ N-БИЦИКЛОАЛКИЛ и N-ТРИЦИКЛОАЛКИЛ(ТИО)КАРБОКСАМИДНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ |
| IN2014CN04325A (ru) | 2011-12-19 | 2015-09-04 | Bayer Cropscience Ag | |
| WO2013098147A1 (en) | 2011-12-29 | 2013-07-04 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Fungicidal 3-[(pyridin-2-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-one derivatives |
| JP5976837B2 (ja) | 2011-12-29 | 2016-08-24 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 殺菌性３−［（１，３−チアゾール−４−イルメトキシイミノ）（フェニル）メチル］−２−置換−１，２，４−オキサジアゾール−５（２ｈ）−オン誘導体 |
| CN104507314B (zh) | 2012-01-25 | 2018-01-09 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 含有氟吡菌酰胺芽孢杆菌和生物防治剂的活性化合物结合物 |
| US20150011389A1 (en) | 2012-01-25 | 2015-01-08 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active Compound Combinations Containing Fluopyram and Biological Control Agent |
| BR122019010640B1 (pt) | 2012-02-27 | 2020-12-22 | Bayer Intellectual Property Gmbh | combinação, método para controle de fungos fitopatogênicos prejudiciais e uso da referida combinação |
| WO2013139949A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield |
| WO2013153143A1 (en) | 2012-04-12 | 2013-10-17 | Bayer Cropscience Ag | N-acyl- 2 - (cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides |
| EP2838363A1 (en) | 2012-04-20 | 2015-02-25 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| EP2838893B1 (en) | 2012-04-20 | 2019-03-13 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| UA126903C2 (uk) | 2012-05-08 | 2023-02-22 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Об'єкт кукурудзи mon 87411 |
| EP2662370A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides |
| CN104768934B (zh) | 2012-05-09 | 2017-11-28 | 拜耳农作物科学股份公司 | 吡唑茚满基甲酰胺 |
| EP2662364A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides |
| EP2662362A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole indanyl carboxamides |
| US9375005B2 (en) | 2012-05-09 | 2016-06-28 | Bayer Cropscience Ag | 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662363A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides |
| EP2662361A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazol indanyl carboxamides |
| EP2662360A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| AR091104A1 (es) | 2012-05-22 | 2015-01-14 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida |
| WO2013178656A1 (en) | 2012-05-30 | 2013-12-05 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| EP3292764A3 (en) | 2012-05-30 | 2018-04-25 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the respiratory chain at complex iii |
| PL2854549T3 (pl) | 2012-05-30 | 2019-02-28 | Bayer Cropscience Ag | Kompozycja zawierająca środek kontroli biologicznej i fluopikolid |
| MX362859B (es) | 2012-05-30 | 2019-02-20 | Bayer Cropscience Ag | Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un insecticida. |
| MX355327B (es) | 2012-05-30 | 2018-04-16 | Bayer Cropscience Ag | Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un fungicida seleccionado de inhibidores de la cadena respiratoria en el complejo i o ii. |
| CN104507317B (zh) | 2012-05-30 | 2019-11-15 | 拜尔农作物科学股份公司 | 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物、及其用途、试剂盒 |
| KR102095979B1 (ko) | 2012-05-30 | 2020-04-02 | 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 | 생물학적 방제제 및 살곤충제를 포함하는 조성물 |
| PT2854548T (pt) | 2012-05-30 | 2018-12-06 | Bayer Cropscience Ag | Composição compreendendo um agente de controlo biológico e um fungicida selecionado a partir de metalaxilo e metalaxil-m |
| CN104602520A (zh) | 2012-07-31 | 2015-05-06 | 拜尔农作物科学股份公司 | 包括杀虫萜烯混合物和杀虫剂的组合物 |
| CN104736699B (zh) | 2012-09-14 | 2020-04-14 | 拜尔作物科学有限合伙公司 | Hppd变体及使用方法 |
| EP2719280A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-16 | Bayer CropScience AG | Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi |
| PL2908640T3 (pl) | 2012-10-19 | 2020-06-29 | Bayer Cropscience Ag | Sposób stymulowania wzrostu roślin przy pomocy pochodnych karboksamidu |
| EA025862B1 (ru) | 2012-10-19 | 2017-02-28 | Байер Кропсайенс Аг | Способ повышения устойчивости к абиотическому стрессу в растениях с использованием производных карбоксамида или тиокарбоксамида |
| BR112015008798B1 (pt) | 2012-10-19 | 2020-03-17 | Bayer Cropscience Ag | Método para o tratamento de plantas contra fungos fitopatogênicos resistentes a um fungicida SDHI |
| WO2014060502A1 (en) | 2012-10-19 | 2014-04-24 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations comprising carboxamide derivatives |
| EP2735231A1 (en) | 2012-11-23 | 2014-05-28 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| CA2892702A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Bayer Cropscience Ag | Binary fungicidal or pesticidal mixture |
| BR112015012055B1 (pt) | 2012-11-30 | 2021-01-12 | Bayer Cropscience Ag | composição fungicida ternária, seu processo de preparação, método para controlar um ou mais microrganismos nocivos, semente resistente a microrganismos nocivos e seu método de tratamento |
| CN104994736B (zh) | 2012-11-30 | 2018-02-06 | 拜耳作物科学股份公司 | 二元农药和杀真菌混合物 |
| EA201890495A3 (ru) | 2012-11-30 | 2019-01-31 | Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт | Тройные фунгицидные и пестицидные смеси |
| CA2892693C (en) | 2012-11-30 | 2021-08-10 | Bayer Cropscience Ag | Binary fungicidal mixtures |
| MX2015006946A (es) | 2012-12-03 | 2015-09-08 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende agentes de control biologico. |
| JP2015535531A (ja) | 2012-12-03 | 2015-12-14 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | 生物農薬および殺菌剤を含む組成物 |
| MX2015006631A (es) | 2012-12-03 | 2015-08-05 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende un agente de control biologico y un insecticida. |
| WO2014086758A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| BR112015012785A2 (pt) | 2012-12-03 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | composição compreendendo um agente de controle biológico e um fungicida |
| EP2925142B1 (en) | 2012-12-03 | 2018-01-31 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| CA2893185A1 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| WO2014086753A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| WO2014090765A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Bayer Cropscience Ag | Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops |
| KR101594969B1 (ko) * | 2012-12-17 | 2016-02-18 | 대한민국 | 레스베라트롤 생합성 벼 및 이의 용도 |
| AR093996A1 (es) | 2012-12-18 | 2015-07-01 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias |
| IN2015DN04206A (ru) | 2012-12-19 | 2015-10-16 | Bayer Cropscience Ag | |
| AU2014214628A1 (en) | 2013-02-11 | 2015-08-13 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising gougerotin and an insecticide |
| EP2953469A1 (en) | 2013-02-11 | 2015-12-16 | Bayer Cropscience LP | Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and another biological control agent |
| MX2015010260A (es) | 2013-02-11 | 2016-04-04 | Bayer Cropscience Lp | Composicion que comprenden un agente de control biologico y un fungicida. |
| MX369500B (es) | 2013-03-07 | 2019-11-11 | Athenix Corp | Genes de toxinas y métodos para su uso. |
| CA2905743C (en) | 2013-03-13 | 2021-09-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate application for weed control in brassica |
| CN115960896A (zh) | 2013-03-14 | 2023-04-14 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫害虫的组合物和方法 |
| RU2015143825A (ru) | 2013-03-15 | 2017-04-26 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Полипептиды phi-4 и способы их применения |
| US9554573B2 (en) | 2013-04-19 | 2017-01-31 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Binary insecticidal or pesticidal mixture |
| CA2909725A1 (en) | 2013-04-19 | 2014-10-23 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| TW201507722A (zh) | 2013-04-30 | 2015-03-01 | Bayer Cropscience Ag | 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類 |
| WO2014177514A1 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Bayer Cropscience Ag | Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides |
| ES2893830T3 (es) * | 2013-06-06 | 2022-02-10 | Commw Scient Ind Res Org | Gen de resistencia a la roya del tallo del trigo |
| WO2014206953A1 (en) | 2013-06-26 | 2014-12-31 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| EA030896B1 (ru) | 2013-08-16 | 2018-10-31 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Инсектицидные белки и способы их применения |
| BR112016005543B1 (pt) | 2013-09-13 | 2022-03-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Polipeptídeo pip-72 recombinante, construto de dna, método de obtenção de planta transgênica, célula hospedeira, composição, proteína de fusão, método para controlar uma população de praga de inseto, método para inibir o crescimento ou matar uma praga de inseto, método para controlar uma infestação de insetos em uma planta transgênica, método para identificar em uma amostra biológica uma sequência de nucleotídeos, método para identificar em uma amostra um polipeptídeo pip-72 |
| AR097995A1 (es) | 2013-10-14 | 2016-04-27 | Syngenta Participations Ag | Método para sembrar filas de cultivos |
| TW201607929A (zh) | 2013-12-05 | 2016-03-01 | 拜耳作物科學公司 | Ｎ－環烷基－ｎ－｛［２－（１－經取代環烷基）苯基］亞甲基｝－（硫代）甲醯胺衍生物 |
| ES2705577T3 (es) | 2013-12-05 | 2019-03-26 | Bayer Cropscience Ag | Derivados de N-ciclopropil-N-{[2-(1-ciclopropil sustituido)fenil]metileno}-(tio)carboxamida |
| EP2885970A1 (en) | 2013-12-21 | 2015-06-24 | Bayer CropScience AG | Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide |
| BR112016018103B1 (pt) | 2014-02-07 | 2024-01-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Polipeptídeo e seu uso, polinucleotídeo, composição, proteína de fusão, método para controlar uma população, método para inibir o crescimento, método para controlar a infestação, método para obtenção de uma planta ou célula vegetal, construto |
| BR112016018287A2 (pt) | 2014-02-07 | 2017-10-10 | Du Pont | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
| EP3117003B1 (en) | 2014-03-11 | 2019-10-30 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Hppd variants and methods of use |
| WO2015160620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide |
| WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
| WO2015160619A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide |
| WO2016044092A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Pioneer Hi Bred International Inc | Compositions and methods to control insect pests |
| CA2963558C (en) | 2014-10-16 | 2023-04-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| WO2016099916A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability |
| BR112017022000A2 (pt) | 2015-04-13 | 2018-07-03 | Bayer Cropscience Ag | derivados de n-cicloalquil-n-(biheterocicliletileno)-(tio)carboxamida. |
| CN108064233B (zh) | 2015-05-19 | 2022-07-15 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| EP3097782A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-11-30 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents |
| BR112017027382A2 (pt) | 2015-06-16 | 2018-08-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | elemento de silenciamento, construto de dna, construto de expressão, cassete de expressão, célula hospedeira, composição, célula vegetal, planta ou parte de planta, semente transgênica, método para controlar um inseto-praga de planta, kit para controlar insetos-praga |
| EP3331352B1 (en) | 2015-08-06 | 2022-07-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| CA2992488A1 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ochrobactrum-mediated transformation of plants |
| ES2933673T3 (es) | 2015-09-11 | 2023-02-13 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Variantes de HPPD y métodos de uso |
| CA3206286A1 (en) | 2015-10-12 | 2017-04-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Fungal entomopathogen biocides and their use in plants |
| US11028407B2 (en) | 2016-04-19 | 2021-06-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal combinations of polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
| US11008585B2 (en) | 2016-05-04 | 2021-05-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| US20190185867A1 (en) | 2016-06-16 | 2019-06-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| EP3475430B1 (en) | 2016-06-24 | 2022-06-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| WO2018005411A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| WO2018013333A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| EP3490379A1 (en) | 2016-07-29 | 2019-06-05 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants |
| US11021716B2 (en) | 2016-11-01 | 2021-06-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| AU2017365169B2 (en) | 2016-11-23 | 2022-07-21 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Axmi669 and Axmi991 toxin genes and methods for their use |
| BR112019012339A2 (pt) | 2016-12-14 | 2019-11-26 | Pioneer Hi Bred Int | polipeptídeo inseticida recombinante, composição, construto de dna, célula hospedeira, planta transgênica, método para inibir o crescimento ou extermínio de uma praga de inseto ou população de praga, polipeptídeo ipd093 quimérico e proteína de fusão |
| BR112019011293A2 (pt) | 2016-12-19 | 2019-10-08 | Basf Se | compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| WO2018136611A1 (en) | 2017-01-18 | 2018-07-26 | Bayer Cropscience Lp | Use of bp005 for the control of plant pathogens |
| EP3571303A1 (en) | 2017-01-18 | 2019-11-27 | Basf Agricultural Solutions Seed Us Llc | Bp005 toxin gene and methods for its use |
| WO2018140214A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nematicidal protein from pseudomonas |
| CA3052794A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal combinations of plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| BR112019015338B1 (pt) | 2017-02-21 | 2023-03-14 | Basf Se | Compostos de fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso dos compostos e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| BR112019018056A2 (pt) | 2017-03-07 | 2020-08-11 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos |
| EP3606912A1 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-12 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018188962A1 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018195256A1 (en) | 2017-04-21 | 2018-10-25 | Bayer Cropscience Lp | Method of improving crop safety |
| CN110621669A (zh) | 2017-05-04 | 2019-12-27 | 巴斯夫欧洲公司 | 防除植物病原性真菌的取代5-卤代烷基-5-羟基异噁唑类 |
| WO2018202491A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CA3063200A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| WO2018219797A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018234139A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Basf Se | 2 - [[5- (TRIFLUOROMETHYL) -1,2,4-OXADIAZOL-3-YL] ARYLOXY] (THIO) ACETAMIDES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019025250A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019038042A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| US10897269B2 (en) | 2017-09-14 | 2021-01-19 | Apple Inc. | Hierarchical point cloud compression |
| US10861196B2 (en) | 2017-09-14 | 2020-12-08 | Apple Inc. | Point cloud compression |
| US11818401B2 (en) | 2017-09-14 | 2023-11-14 | Apple Inc. | Point cloud geometry compression using octrees and binary arithmetic encoding with adaptive look-up tables |
| US11113845B2 (en) | 2017-09-18 | 2021-09-07 | Apple Inc. | Point cloud compression using non-cubic projections and masks |
| US10909725B2 (en) | 2017-09-18 | 2021-02-02 | Apple Inc. | Point cloud compression |
| BR112020004441B1 (pt) | 2017-09-18 | 2024-01-16 | Basf Se | Compostos da fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso de compostos e método não-terapêutico de combate de fungos |
| WO2019068811A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Bayer Aktiengesellschaft | COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE |
| US20200165626A1 (en) | 2017-10-13 | 2020-05-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Virus-induced gene silencing technology for insect control in maize |
| BR112020008096A2 (pt) | 2017-10-24 | 2020-11-03 | Basf Se | método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica |
| US11279944B2 (en) | 2017-10-24 | 2022-03-22 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Of herbicide tolerance to 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors by down-regulation of HPPD expression in soybean |
| US10699444B2 (en) | 2017-11-22 | 2020-06-30 | Apple Inc | Point cloud occupancy map compression |
| US10607373B2 (en) | 2017-11-22 | 2020-03-31 | Apple Inc. | Point cloud compression with closed-loop color conversion |
| EP3713936B1 (en) | 2017-11-23 | 2021-10-20 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| BR112020010927A2 (pt) | 2017-11-30 | 2020-12-01 | Boragen, Inc. | compostos de benzoxaborol e formulações dos mesmos |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| EP3740070A1 (en) | 2018-01-18 | 2020-11-25 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Alginate encapsulation of fungal microsclerotia |
| BR112020013680A2 (pt) | 2018-01-29 | 2020-12-01 | BASF Agro B.V. | formulações agroquímicas, uso de formulações e método para controlar insetos |
| WO2019154665A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| BR112020014817A2 (pt) | 2018-02-07 | 2020-12-08 | Basf Se | Uso dos compostos de fórmula i, compostos de fórmula i, composição, uso de um composto de fórmula i, método para o combate de fungos fitopatogênicos e semente |
| BR112020016805A2 (pt) | 2018-03-01 | 2020-12-15 | BASF Agro B.V. | Composições fungicidas, métodos para controlar fungos nocivos fitopatogênicos, para melhorar a saúde de plantas e para a proteção de material de propagação vegetal, material de propagação vegetal e uso |
| CA3087861A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-09-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant health assay |
| US10939129B2 (en) | 2018-04-10 | 2021-03-02 | Apple Inc. | Point cloud compression |
| US10909726B2 (en) | 2018-04-10 | 2021-02-02 | Apple Inc. | Point cloud compression |
| US10909727B2 (en) | 2018-04-10 | 2021-02-02 | Apple Inc. | Hierarchical point cloud compression with smoothing |
| US11010928B2 (en) | 2018-04-10 | 2021-05-18 | Apple Inc. | Adaptive distance based point cloud compression |
| EP3784787A1 (en) | 2018-04-27 | 2021-03-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-023211-2 and methods for detection thereof |
| WO2019219464A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CA3096516A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| JP2021525774A (ja) | 2018-06-04 | 2021-09-27 | バイエル アクチェンゲゼルシャフトＢａｙｅｒ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 除草活性二環式ベンゾイルピラゾール |
| US11017566B1 (en) | 2018-07-02 | 2021-05-25 | Apple Inc. | Point cloud compression with adaptive filtering |
| US11202098B2 (en) | 2018-07-05 | 2021-12-14 | Apple Inc. | Point cloud compression with multi-resolution video encoding |
| US11012713B2 (en) | 2018-07-12 | 2021-05-18 | Apple Inc. | Bit stream structure for compressed point cloud data |
| EP3836938A4 (en) | 2018-08-18 | 2022-05-11 | Boragen, Inc. | SOLID FORMS OF SUBSTITUTED BENZOXAZOLE AND COMPOSITIONS THEREOF |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| MX2021002290A (es) | 2018-08-29 | 2021-04-28 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| US11386524B2 (en) | 2018-09-28 | 2022-07-12 | Apple Inc. | Point cloud compression image padding |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| US11367224B2 (en) | 2018-10-02 | 2022-06-21 | Apple Inc. | Occupancy map block-to-patch information compression |
| US11430155B2 (en) | 2018-10-05 | 2022-08-30 | Apple Inc. | Quantized depths for projection point cloud compression |
| US20210347777A1 (en) | 2018-10-23 | 2021-11-11 | Basf Se | Tricyclic pesticidal compounds |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| US20220015372A1 (en) | 2018-12-14 | 2022-01-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biologicals and their use in plants |
| EP3670501A1 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-24 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| US20220024898A1 (en) | 2019-01-11 | 2022-01-27 | Basf Se | Crystalline forms of 1-(1,2-dimethylpropyl)-n-ethyl-5-methyl-n-pyridazin-4-yl-pyrazole-4-carboxamide |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| US11057564B2 (en) | 2019-03-28 | 2021-07-06 | Apple Inc. | Multiple layer flexure for supporting a moving image sensor |
| WO2020231751A1 (en) | 2019-05-10 | 2020-11-19 | Bayer Cropscience Lp | Active compound combinations |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| CN113923987A (zh) | 2019-05-29 | 2022-01-11 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物 |
| WO2020244970A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | New carbocyclic pyridine carboxamides |
| WO2020244969A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | Pyridine derivatives and their use as fungicides |
| JP2022536081A (ja) | 2019-06-06 | 2022-08-12 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 殺菌ｎ－（ピリド－３－イル）カルボキサミド |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| MX2022000950A (es) | 2019-07-22 | 2022-02-14 | Bayer Ag | 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas. |
| WO2021013719A1 (en) | 2019-07-23 | 2021-01-28 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP4003974A1 (en) | 2019-07-23 | 2022-06-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| WO2021022069A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Bayer Cropscience Lp | Method of improving cold stress tolerance and crop safety |
| EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
| WO2021058659A1 (en) | 2019-09-26 | 2021-04-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Rnai-mediated pest control |
| US11562507B2 (en) | 2019-09-27 | 2023-01-24 | Apple Inc. | Point cloud compression using video encoding with time consistent patches |
| US11627314B2 (en) | 2019-09-27 | 2023-04-11 | Apple Inc. | Video-based point cloud compression with non-normative smoothing |
| WO2021063735A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | New bicyclic pyridine derivatives |
| US11538196B2 (en) | 2019-10-02 | 2022-12-27 | Apple Inc. | Predictive coding for point cloud compression |
| WO2021064075A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| WO2021063736A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | Bicyclic pyridine derivatives |
| US11895307B2 (en) | 2019-10-04 | 2024-02-06 | Apple Inc. | Block-based predictive coding for point cloud compression |
| EP4041721B1 (en) | 2019-10-09 | 2024-03-06 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| CN117567338A (zh) | 2019-10-09 | 2024-02-20 | 拜耳公司 | 作为农药的新的杂芳基三唑化合物 |
| WO2021076346A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-202216-6 and dp-023211-2 stack |
| EP4055010A1 (de) | 2019-11-07 | 2022-09-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge |
| WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
| US20220408727A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-12-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| TW202134226A (zh) | 2019-11-18 | 2021-09-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| TW202136248A (zh) | 2019-11-25 | 2021-10-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| US11798196B2 (en) | 2020-01-08 | 2023-10-24 | Apple Inc. | Video-based point cloud compression with predicted patches |
| US11625866B2 (en) | 2020-01-09 | 2023-04-11 | Apple Inc. | Geometry encoding using octrees and predictive trees |
| MX2022009333A (es) | 2020-01-31 | 2022-10-07 | Pairwise Plants Services Inc | Supresion de la respuesta de evasion de la sombra en las plantas. |
| TW202142114A (zh) | 2020-02-04 | 2021-11-16 | 美商陶氏農業科學公司 | 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關之方法 |
| CN115551839A (zh) | 2020-02-18 | 2022-12-30 | 拜耳公司 | 作为农药的杂芳基-三唑化合物 |
| EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
| EP4135512A1 (en) | 2020-04-16 | 2023-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
| US20230212163A1 (en) | 2020-04-21 | 2023-07-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents |
| EP3903584A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv |
| EP3903581A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i |
| WO2021219513A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-04 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3903583A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| TW202208347A (zh) | 2020-05-06 | 2022-03-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物 |
| EP4146628A1 (en) | 2020-05-06 | 2023-03-15 | Bayer Aktiengesellschaft | Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds |
| BR112022023012A2 (pt) | 2020-05-12 | 2022-12-20 | Bayer Ag | (tio)amidas de triazina e pirimidina como compostos fungicidas |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| US20230192617A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-06-22 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds |
| CN116096230A (zh) | 2020-06-02 | 2023-05-09 | 成对植物服务股份有限公司 | 控制分生组织大小以改良作物的方法 |
| EP4161906A1 (en) | 2020-06-04 | 2023-04-12 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides |
| WO2021249800A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| JP2023529475A (ja) | 2020-06-10 | 2023-07-10 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 新規殺菌剤としてのアザビシクリル置換複素環 |
| BR112022025598A2 (pt) | 2020-06-17 | 2023-01-03 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para controlar o tamanho do meristema para melhoria da safra |
| WO2021255118A1 (en) | 2020-06-18 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| CN116157017A (zh) | 2020-06-18 | 2023-05-23 | 拜耳公司 | 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物 |
| WO2021255091A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides |
| UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
| UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
| BR112022025710A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-03-07 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas |
| US11620768B2 (en) | 2020-06-24 | 2023-04-04 | Apple Inc. | Point cloud geometry compression using octrees with multiple scan orders |
| US11615557B2 (en) | 2020-06-24 | 2023-03-28 | Apple Inc. | Point cloud compression using octrees with slicing |
| EP3929189A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-29 | Bayer Animal Health GmbH | Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides |
| BR112022026904A2 (pt) | 2020-07-02 | 2023-01-24 | Bayer Ag | Derivados de heterocicleno como agentes de controle de pragas |
| BR112022027035A2 (pt) | 2020-07-14 | 2023-04-11 | Pioneer Hi Bred Int | Proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| CN116096903A (zh) | 2020-08-10 | 2023-05-09 | 先锋国际良种公司 | 植物调节元件及其使用方法 |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| WO2022033991A1 (de) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022053453A1 (de) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
| EP3974414A1 (de) | 2020-09-25 | 2022-03-30 | Bayer AG | 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022090071A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| CA3201212A1 (en) | 2020-12-14 | 2022-06-23 | Rizwan Shabbir SHAIKH | Sulfoximine pesticides |
| EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
| WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| CA3205419A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops |
| WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
| EP4036083A1 (de) | 2021-02-02 | 2022-08-03 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel |
| CN117441015A (zh) | 2021-02-11 | 2024-01-23 | 成对植物服务股份有限公司 | 用于修饰植物中细胞分裂素氧化酶水平的方法和组合物 |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| CN117203227A (zh) | 2021-02-25 | 2023-12-08 | 成对植物服务股份有限公司 | 用于修饰植物中根结构的方法和组合物 |
| US11948338B1 (en) | 2021-03-29 | 2024-04-02 | Apple Inc. | 3D volumetric content encoding using 2D videos and simplified 3D meshes |
| BR112023019788A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-11-07 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| WO2022207494A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2022233758A1 (en) | 2021-05-03 | 2022-11-10 | Basf Se | Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms |
| KR20240005019A (ko) | 2021-05-06 | 2024-01-11 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 알킬아미드 치환된, 환형 이미다졸 및 살충제로서의 이의 용도 |
| WO2022238391A1 (de) | 2021-05-12 | 2022-11-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4091451A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-23 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022243107A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicides |
| BR112023023989A2 (pt) | 2021-05-18 | 2024-01-30 | Basf Se | Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente |
| WO2022243111A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicides |
| CN117897050A (zh) | 2021-06-17 | 2024-04-16 | 成对植物服务股份有限公司 | 大豆中生长调节因子家族转录因子的修饰 |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| CA3224982A1 (en) | 2021-07-01 | 2023-01-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing root system development |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| CN117794907A (zh) | 2021-08-02 | 2024-03-29 | 巴斯夫欧洲公司 | (3-吡啶基)-喹唑啉 |
| AU2022323668A1 (en) | 2021-08-02 | 2024-02-15 | Basf Se | (3-quinolyl)-quinazoline |
| WO2023019188A1 (en) | 2021-08-12 | 2023-02-16 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| AU2022326207A1 (en) | 2021-08-13 | 2024-02-15 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
| US20230063927A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-03-02 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| AU2022335669A1 (en) | 2021-08-25 | 2024-02-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| US20230074699A1 (en) | 2021-08-30 | 2023-03-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement |
| EP4144739A1 (de) | 2021-09-02 | 2023-03-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| AR126938A1 (es) | 2021-09-02 | 2023-11-29 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023049720A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for reducing pod shatter in canola |
| WO2023060028A1 (en) | 2021-10-04 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| AR127300A1 (es) | 2021-10-07 | 2024-01-10 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| WO2023078915A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
| WO2023099445A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| AR127904A1 (es) | 2021-12-09 | 2024-03-06 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| WO2023147526A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Pairwise Plants Services, Inc. | Suppression of shade avoidance response in plants |
| WO2023148030A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in corn |
| WO2023148028A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests |
| WO2023156402A1 (en) | 2022-02-17 | 2023-08-24 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2023168217A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| WO2023192838A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Early flowering rosaceae plants with improved characteristics |
| WO2023196886A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight |
| US20230383305A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-11-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| WO2023215704A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| WO2023213626A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms |
| WO2023213670A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine |
| WO2023215809A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| TW202345696A (zh) | 2022-05-18 | 2023-12-01 | 美商科迪華農業科技有限責任公司 | 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關的方法 |
| US20230416771A1 (en) | 2022-06-27 | 2023-12-28 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| US20240000031A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| US20240002873A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024028243A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Basf Se | Pyrazolo pesticidal compounds |
| US20240043857A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20240060081A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024054880A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
| WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5380831A (en) * | 1986-04-04 | 1995-01-10 | Mycogen Plant Science, Inc. | Synthetic insecticidal crystal protein gene |
| GB8526774D0 (en) * | 1985-10-30 | 1985-12-04 | Sandoz Ltd | Bacillus thuringiensis hybrids |
| US5024837A (en) * | 1987-05-06 | 1991-06-18 | Donovan William P | Coleopteran active microorganisms, related insecticide compositions and methods for their production and use |
| US4910016A (en) * | 1987-08-03 | 1990-03-20 | Mycogen Corporation | Novel Bacillus thuringiensis isolate |
| US5071654A (en) * | 1988-09-01 | 1991-12-10 | Ecogen Inc. | Ion channel properties of delta endotoxins |
| US5683691A (en) * | 1989-02-15 | 1997-11-04 | Plant Genetic Systems, N.V. | Bacillus thuringiensis insecticidal toxins |
| CA2024811A1 (en) * | 1989-02-24 | 1990-08-25 | David A. Fischhoff | Synthetic plant genes and method for preparation |
| US5187091A (en) * | 1990-03-20 | 1993-02-16 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects |
| US5264364A (en) * | 1991-01-31 | 1993-11-23 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects |
| US5554534A (en) * | 1991-12-16 | 1996-09-10 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis toxins active against scarab pests |
| US5593874A (en) * | 1992-03-19 | 1997-01-14 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants |
| US5441884A (en) * | 1993-07-08 | 1995-08-15 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis transposon TN5401 |
| US5689052A (en) * | 1993-12-22 | 1997-11-18 | Monsanto Company | Synthetic DNA sequences having enhanced expression in monocotyledonous plants and method for preparation thereof |
| JP3052731B2 (ja) * | 1994-05-10 | 2000-06-19 | 三菱自動車工業株式会社 | 自動車のステアリング装置 |
| US5659123A (en) * | 1994-08-26 | 1997-08-19 | Plant Genetic Systems, N.V. | Diabrotica toxins |
| US6060594A (en) * | 1997-12-18 | 2000-05-09 | Ecogen, Inc. | Nucleic acid segments encoding modified bacillus thuringiensis coleopteran-toxic crystal proteins |
| US6023013A (en) * | 1997-12-18 | 2000-02-08 | Monsanto Company | Insect-resistant transgenic plants |
| US6077824A (en) * | 1997-12-18 | 2000-06-20 | Ecogen, Inc. | Methods for improving the activity of δ-endotoxins against insect pests |
| US6063597A (en) * | 1997-12-18 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Polypeptide compositions toxic to coleopteran insects |
| CN100340666C (zh) * | 1997-12-18 | 2007-10-03 | 孟山都技术有限公司 | 抗昆虫的转基因植物以及用于改善δ－内毒素抵抗目标昆虫活性的方法 |
| CZ301915B6 (cs) * | 1998-08-19 | 2010-07-28 | Monsanto Technology Llc | Rekombinantní molekula DNA, transformovaná bunka, rostlina a zpusob zlepšení genové exprese |
| US6137038A (en) * | 1999-05-13 | 2000-10-24 | Cargill Incorporated | Inbred corn line SM4603 |
| US6501009B1 (en) * | 1999-08-19 | 2002-12-31 | Monsanto Technology Llc | Expression of Cry3B insecticidal protein in plants |
| US6551962B1 (en) * | 2000-10-06 | 2003-04-22 | Monsanto Technology Llc | Method for deploying a transgenic refuge |
| AR035215A1 (es) * | 2000-11-20 | 2004-05-05 | Monsanto Technology Llc | Polinucleotido aislado, primer y segundo polinucleotido cebador, metodo para detectar el suceso vegetal de algodon 531, molecula de polinucleotido aislado obtenida por dicho metodo, equipo de deteccion de acido nucleico y metodo para determinar la cigosidad del genoma de una planta de algodon. |
| RU2352638C2 (ru) * | 2002-07-29 | 2009-04-20 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения |
-
2003
- 2003-07-23 RU RU2005105322/13A patent/RU2352638C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-07-23 RS YUP-2005/0183A patent/RS20050183A/sr unknown
- 2003-07-23 UA UAA200501759A patent/UA87808C2/ru unknown
- 2003-07-23 ME MEP-350/08A patent/MEP35008A/xx unknown
- 2003-07-23 AU AU2003254099A patent/AU2003254099A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-23 US US10/523,290 patent/US7705216B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-23 WO PCT/US2003/022860 patent/WO2004011601A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-07-23 PL PL03374995A patent/PL374995A1/xx unknown
- 2003-07-23 EP EP03771706A patent/EP1532247A4/en not_active Ceased
- 2003-07-28 AR AR20030102703A patent/AR040710A1/es not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-02-14 HR HR20050134A patent/HRP20050134A2/xx not_active Application Discontinuation
- 2005-02-16 BG BG109051A patent/BG109051A/bg unknown
-
2008
- 2008-12-18 RU RU2008150326/13A patent/RU2008150326A/ru not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-04-26 US US12/767,490 patent/US20100260729A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| WING ET AL. OSJNBb0064F10fCUGI Rice Library (EcoRI) Oryza Sativa (japonica cultivar group) genomic clone OSJNBb0064F10f. Genomic survey sequence. 2 June 2000. GenBank Accession No. AZ 128927. MARIENFELD ET AL. Zea mays NADF dehydrogenase subunit 4 (complex I) (nad4) gene, exon 4. 25 Juli 1995. GenBank Accession No. AR271021. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1532247A2 (en) | 2005-05-25 |
| US7705216B2 (en) | 2010-04-27 |
| PL374995A1 (en) | 2005-11-14 |
| AU2003254099A8 (en) | 2004-02-16 |
| US20100260729A1 (en) | 2010-10-14 |
| BG109051A (bg) | 2005-11-30 |
| RS20050183A (en) | 2007-06-04 |
| UA87808C2 (ru) | 2009-08-25 |
| RU2008150326A (ru) | 2010-06-27 |
| WO2004011601A2 (en) | 2004-02-05 |
| WO2004011601A8 (en) | 2004-03-18 |
| AU2003254099A1 (en) | 2004-02-16 |
| EP1532247A4 (en) | 2006-08-30 |
| WO2004011601A3 (en) | 2004-07-01 |
| US20060095986A1 (en) | 2006-05-04 |
| HRP20050134A2 (en) | 2005-06-30 |
| MEP35008A (en) | 2011-02-10 |
| RU2005105322A (ru) | 2005-09-10 |
| AR040710A1 (es) | 2005-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2352638C2 (ru) | Растения-трансформанты кукурузы pv-zmir13 (mon863) и композиции и способы их обнаружения | |
| US10851385B2 (en) | Corn plant event MON87460 and compositions and methods for detection thereof | |
| JP6315481B2 (ja) | トウモロコシイベントｍｏｎ８７４１１ | |
| JP4903051B2 (ja) | トウモロコシ植物ｍｏｎ８８０１７および組成物ならびにその検出方法 | |
| JP6393478B2 (ja) | トランスジェニック事象ｍｏｎ８７７１２に対応するダイズ植物および種子、ならびにそれを検出するための方法 | |
| US7964348B2 (en) | Cotton event PV-GHBK04 (531) and compositions and methods for detection thereof | |
| AU2019255192B2 (en) | Genes, constructs and maize event DP-202216-6 | |
| WO2021216571A1 (en) | Transgenic corn event mon95275 and methods for detection and uses thereof | |
| US20230279508A1 (en) | Transgenic corn event zm_bcs216090 and methods for detection and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150724 |