JP6315481B2 - トウモロコシイベントmon87411 - Google Patents
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Description
本願は、2012年5月8日に出願された米国仮特許出願第61/644,368号の利益を主張し、当該仮特許出願は引用によりそのまま本明細書に組み込まれる。
230キロバイト(Microsoft Windows(登録商標)で測定したサイズ)であって2013年5月6日に作成された「MONS308WO_ST25.txt」という名称のファイルに含まれる配列表は、電子申請により本願に添付して提出され、引用により本明細書に組み込まれる。
本発明は、トランスジェニックZea maysイベント(event)MON87411に関する。本イベントは、コーンルートワーム寄生に対する抵抗性のための二重の作用機序と除草剤グリホサート耐性とを提供する。また本発明は、イベントMON87411に関係する植物、植物部分、植物種子、植物細胞、農産物、および方法にも関係し、本イベントにユニークなヌクレオチド分子であってZea mays植物のゲノムへのトランスジェニックDNAの挿入に関連して作出されたヌクレオチド分子を提供する。
トウモロコシ(Zea mays)は世界の多くの地域において重要な作物であり、望ましい形質を有するトウモロコシを作製するために、この作物には生物工学の方法が応用されてきた。植物における昆虫抵抗性または除草剤耐性トランスジーンの発現は、昆虫抵抗性および/または除草剤耐性という望ましい形質を植物に付与しうるが、そのようなトランスジーンの発現は、植物染色体に導入された個々の遺伝子の発現を駆動するカセットの配向および組成、ならびにトランスジーン挿入の染色体上の位置およびゲノム結果を含む、多くの異なる因子によって左右されうる。例えば、トランスジーンの染色体挿入部位の相違を除けば他の点では同一である個々のイベント間でも、トランスジーン発現のレベルおよびパターンにはばらつきが存在しうる。いくつかのイベントの間には、望ましくない表現型上または農学上の相違も存在しうる。したがって、そのイベントを商業的目的に適したものにするのに必要な望ましい形質ならびに最適な表現型上および農業上の特徴に関して優れた性質を有するイベントを選択するためには、多数の個別植物形質転換イベントを作製し、解析することが、しばしば必要になる。そのような選択は、多くの場合、相当量の農学的データ、表現型データ、および分子データを収集することができるように、大規模な分子キャラクタリゼーションと、複数年にわたって複数の立地においてさまざまな条件下で数多くのイベントを使って行われる温室試験および圃場試験とを必要とする。その結果得られたデータおよび観察記録は、次に、商業的に好適なイベントを選択することを目指して、科学者と農学者のチームによって解析されなければならない。そのようなイベントがひとたび選択されたら、次に、その望ましい形質を植物育種方法で他の遺伝的背景に遺伝子移入し、よって望ましい形質を持ちかつ具体的局所生長条件に適切に適応したいくつかの異なる作物品種を作製するために、そのイベントを使用することができる。
本発明者らは、既存のトランスジェニックトウモロコシ植物と比べて、そしてまた、並行して構築された新しいイベントと比べて、優れた性質および成績を呈するトランスジェニックトウモロコシイベントMON87411を同定した。トウモロコシイベントMON87411は、連結された3つの発現カセットを含有し、これらのカセットは全体として、トランスジェニックイベントMON87411を含有するトウモロコシ細胞、トウモロコシ組織、トウモロコシ種子およびトウモロコシ植物に、コーンルートワーム抵抗性およびグリホサート除草剤耐性の形質を付与する。トウモロコシイベントMON87411は、コーンルートワーム病害虫種(Diabrotica種を含む;とりわけ病害虫が、Diabrotica virgifera virgifera(ウエスタンコーンルートワーム、WCR)、Diabrotica barberi(ノーザンコーンルートワーム、NCR)、Diabrotica virgifera zeae(メキシカンコーンルートワーム、MCR)、Diabrotica balteata(ブラジリアンコーンルートワーム(BZR)もしくはDiabrotica viridulaとDiabrotica speciosaとからなるブラジリアンコーンルートワーム複合体(BCR))、またはDiabrotica undecimpunctata howardii(サザンコーンルートワーム、SCR)である場合)に対して、2つの作用機序を提供する。二重の作用機序は冗長性を与え、病害虫防除形質に対する抵抗性が発生する可能性を著しく低減する。
配列番号1は、イベントMON87411のヌクレオチド配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411中の、挿入トランスジェニックDNAに隣接(近接)する5’ゲノムDNAのセグメント(500ヌクレオチド)、挿入トランスジェニックDNA(11,248ヌクレオチド)、および挿入トランスジェニックDNAに隣接(近接)する3’ゲノムDNAのセグメント(500ヌクレオチド)を表す。
配列番号2は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAに近接する5’ゲノムDNAのセグメント(500ヌクレオチド)と挿入トランスジェニックDNAの境界残余部(263ヌクレオチド)とを表す。
配列番号3は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAの境界残余部(15ヌクレオチド)と挿入ゲノムDNAに近接する3’ゲノムDNAのセグメント(500ヌクレオチド)とを表す。
配列番号4は、イベントMON87411のヌクレオチド配列であり、イベントMON87411の挿入ゲノムDNA(11248ヌクレオチド)を表す。
配列番号5は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAに近接する5’ゲノムDNAのセグメント(50ヌクレオチド)と挿入トランスジェニックDNAの境界残余部(263ヌクレオチド)とを表す。
配列番号7は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAに近接する5’ゲノムDNAのセグメント(145ヌクレオチド)と挿入トランスジェニックDNAの境界残余部(263ヌクレオチド)とを表す。
配列番号8は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAのセグメント(83ヌクレオチド)と挿入トランスジェニックDNAに近接する3’ゲノムDNAのセグメント(34ヌクレオチド)とを表す。
配列番号9は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAのセグメント(83ヌクレオチド)と挿入トランスジェニックDNAに近接する3’ゲノムDNAのセグメント(90ヌクレオチド)とを表す。
配列番号10は、イベントMON87411のヌクレオチド接合部配列であり、5’から3’に向かって、イベントMON87411の挿入トランスジェニックDNAのセグメント(83ヌクレオチド)と挿入トランスジェニックDNAに近接する3’ゲノムDNAのセグメント(255ヌクレオチド)とを表す。
配列番号12は、逆方向反復RNA分子を発現するように工学的に操作された組換え遺伝子を含むDNA発現カセットのアンチセンス鎖を表すヌクレオチド配列である。逆方向反復DNAセグメントは位置663〜902と位置1292〜1053とに対応する。これらの逆方向反復DNA配列は配列番号11のヌクレオチド位置151〜390のヌクレオチド配列に対応する。
配列番号13は、配列番号12に示すDNAから転写されるリボヌクレオチド配列である。
配列番号14は、コーンルートワーム毒性Cry3Bbタンパク質をコードし発現するように工学的に操作された組換え遺伝子を含むDNA発現カセットのセンス鎖を表すヌクレオチド配列である。
配列番号15は、配列番号14の位置1522〜3480に対応するポリヌクレオチドのアミノ酸配列翻訳であって、コーンルートワーム毒性Cry3Bbタンパク質を表す。
配列番号17は、配列番号16の位置2186〜3781に対応するポリヌクレオチドのアミノ酸配列翻訳であって、除草剤グリホサートに対して非感受性を呈するEPSPSタンパク質を表す。
配列番号18は、SQ27011と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置462〜490に対応するヌクレオチド配列と同一である。
配列番号19は、PB3552と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置502〜515に対応するヌクレオチド配列の逆相補体と同一である。PB3552は、一対の熱増幅プライマー、例えばSQ27011およびSQ9085と組み合わせて使用するために、6−カルボキシフルオレセイン成分(6−FAM(商標))で5’標識し、クエンチャー成分で3’標識することができ、トウモロコシイベントMON87411 DNAを含有する生物学的試料中のイベントMON87411 DNAの存在を検出するために、TAQMAN(登録商標)DNA増幅方法で使用することができる。
配列番号20は、SQ9085と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置516〜541に対応するヌクレオチド配列の逆相補体と同一である。
配列番号22は、SQ27066と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置11710〜11728に対応するヌクレオチド配列と同一である。
配列番号23は、PB11300と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置11731〜11755に対応するヌクレオチド配列と同一である。PB11300は、6−カルボキシフルオレセイン成分(6−FAM(商標))で5’標識し、クエンチャー成分で3’標識することができる。こうして標識されたPB11300は、TAQMAN(登録商標)アッセイでイベントMON87411を検出するために、一対のPCRプライマー、例えばSQ27066およびSQ26977と組み合わせて使用することができる。
配列番号24は、SQ26977と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置11756〜11784に対応するヌクレオチド配列の逆相補体と同一である。
配列番号25は、イベントMON87411のヌクレオチド配列であり、配列番号1の位置11710〜11784に対応する。この配列を呈するアンプリコンは、一対のプライマー、例えばSQ27066およびSQ26977で増幅することができ、イベントMON87411に特徴的である。
配列番号27は、DNAコンストラクト#416を表すヌクレオチド配列である。
配列番号28は、DNAコンストラクト#418を表すヌクレオチド配列である。
配列番号29は、DNAコンストラクト#419を表すヌクレオチド配列である。
配列番号30は、DNAコンストラクト#402を表すヌクレオチド配列である。
配列番号31は、DNAコンストラクト#403を表すヌクレオチド配列である。
配列番号32は、DNAコンストラクト#404を表すヌクレオチド配列である。
配列番号33は、DNAコンストラクト#423を表すヌクレオチド配列である。
配列番号34は、DNAコンストラクト#405を表すヌクレオチド配列である。
配列番号35は、DNAコンストラクト#406を表すヌクレオチド配列である。
配列番号37は、イベントMON87411の野生型アレルを表すLH244トウモロコシ植物のヌクレオチド配列である。このヌクレオチド配列を呈するアンプリコンは一対のPCRプライマー、例えばSQ27011およびSQ26977で作製することができ、イベントMON87411の野生型アレルに特徴的である。
配列番号38は、SQ20221と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列である。
配列番号39は、PB10065と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列である。PB10065は、VIC(商標)で5’標識し、クエンチャー成分で3’標識することができる。こうして標識されたPB10065は、TAQMAN(登録商標)アッセイでトウモロコシの内在性遺伝子のセグメントの存在を検出するために、一対のPCRプライマー、例えばSQ10065およびSQ20222と組み合わせて使用することができる。
配列番号40は、SQ20222と呼ばれる合成オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列である。
配列番号41〜52は、配列番号1の領域のヌクレオチド配列であり、各配列番号は、図3に関する簡単な説明で詳述した介在配列と発現カセット要素とによって形成される接合部を包含する。
本発明者らは、既存のトランスジェニックトウモロコシ植物と比べて優れた性質および成績を呈するトランスジェニックトウモロコシイベントMON87411を同定した。トウモロコシイベントMON87411は、作動的に連結された3つの発現カセットを含有し、これらのカセットは全体として、トランスジェニックイベントMON87411を含有するトウモロコシ細胞、トウモロコシ組織、トウモロコシ種子およびトウモロコシ植物に、コーンルートワーム抵抗性およびグリホサート除草剤耐性の形質を付与する。トウモロコシイベントMON87411は、コーンルートワーム病害虫種(Diabrotica種を含む;とりわけ病害虫がDiabrotica virgifera virgifera(ウエスタンコーンルートワーム、WCR)、Diabrotica barberi(ノーザンコーンルートワーム、NCR)、Diabrotica virgifera zeae(メキシカンコーンルートワーム、MCR)、Diabrotica balteata(ブラジリアンコーンルートワーム(BZR)もしくはDiabrotica viridulaとDiabrotica speciosaとからなるブラジリアンコーンルートワーム複合体(BCR)、またはDiabrotica undecimpunctata howardii(サザンコーンルートワーム、SCR)である場合)に対して、2つの作用機序を提供する。当技術分野では、他に、一つずつ付与されるさまざまな実施形態を与えるトランスジェニックトウモロコシイベント、例えばMON863(Cry3Bb殺虫性毒素タンパク質の発現によってコーンルートワームに対する抵抗性の形質を付与するもの)、またはトウモロコシイベントMON88017(Cry3Bb殺虫性毒素タンパク質の発現によるコーンルートワームに対する抵抗性の形質とグリホサート非感受性EPSPSの発現によるグリホサート除草剤に対する抵抗性の形質とを付与するもの)やトウモロコシイベントDAS 59122−7(Cry34/Cry35とも呼ばれる二元Bacillus thuringiensis毒素PS149B1の発現によるコーンルートワームに対する抵抗性の形質と除草剤グルホシネートに対する耐性の形質とを付与するもの)の場合のように、2つ以上の形質を与えるトランスジェニックトウモロコシイベントも言及されている。他に、トウモロコシイベントMON88017またはDAS 59122−7によって付与される形質を、ルートワームの生存にとって不可欠なコーンルートワーム遺伝子を抑制のターゲットとするdsRNAの発現によってもたらされるコーンルートワーム抵抗性の形質を付与するトランスジェニックトウモロコシイベント(US7,943,819)と交配することによる組み合わせも開示されている。そのような組み合わせには、トウモロコシゲノム内の複数の異なる座位および複数の染色体上に位置するこれら複数の形質を、まとめて単一のトウモロコシ植物に導入し、これらの形質を、何百とはいわないまでも何十という異なるトウモロコシ生殖質品種に、雑種として維持することの必要に関連する課題がつきまとう。そのような課題の解決策は、これらの形質の組み合わせを、まとめて単一の座位に含めることであるだろう。本発明者らは、ここに、この課題に対するそのような解決策の一つを、共有結合で連結された3つの発現カセットをトウモロコシゲノム内の単一の座位に併せもつトウモロコシイベントMON87411の形態で提供するものであり、これらの発現カセットは、トランスジェニックイベントMON87411を含有するトウモロコシ細胞、トウモロコシ組織、トウモロコシ種子およびトウモロコシ植物に、コーンルートワーム抵抗性およびグリホサート除草剤耐性の形質を付与する。トウモロコシイベントMON87411の使用により、トウモロコシ栽培者は、a)2つの異なるコーンルートワーム抵抗性作用機序を用意することによる、コーンルートワーム幼虫に起因する経済的損失からの保護、およびb)広スペクトル雑草防除のためにトウモロコシ作物にグリホサート含有農業用除草剤を施用することができることという、大きな利益を得る。加えて、コーンルートワーム耐性形質とグリホサート耐性形質をコードするトランスジーンは同じDNAセグメント上で連結されており、MON87411のゲノム中の単一座位に見いだされるので、それが育種効率の強化をもたらし、また育種個体群およびその後代においてトランスジーンインサートを追跡するために分子マーカーを使用することを可能にする。
イベントMON87411を含むトウモロコシ種子の代表試料の寄託は、ブダペスト条約に従って、2012年3月14日に、郵便番号20110米国バージニア州マナッサス、ユニバーシティ・ブールバード10801に住所を有するAmerican Type Culture Collection(ATCC)になされ、ATCC受託番号PTA−12669が割り当てられている。本願の係属中、特許商標庁長官および長官が権限を有すると決定した者は、請求により、本寄託物を利用することが可能である。特許の発行後は直ちに、公衆に対する利用可能性に関する全ての制約が、取消不能に取り除かれるであろう。寄託物は、30年間、または最後の請求後5年間、または特許の有効期間中は、そのいずれが長くても、受託機関に維持され、その期間中は必要に応じて補充されるであろう。
[実施例]
[2]Ps.RbcS2−E9 3’UTR:配列番号26の位置486〜1118の逆相補体に対応する。Pisum sativum(エンドウ)のリブロース1,5−二リン酸カルボキシラーゼ小サブユニットE9(rbcS−E9)遺伝子転写産物からの3’非翻訳領域(UTR)に相当する。
[3]240マーDv_Snf7o逆方向反復遺伝子:配列番号26の位置1148〜1777の逆相補体に対応する。この遺伝子は、互いに全く同一に逆相補的に一致する2つの240マーリボヌクレオチドセグメントを、150リボヌクレオチドの中立的セグメントによって分離された状態で含有するRNAに転写されて、逆方向反復RNA(IR)を形成する。240bpセグメントの配列は酵母Snf7にオルソロガスなWCR遺伝子と一致する。
[4]トウモロコシDnaKイントロン:配列番号26の位置1814〜2617の逆相補体に対応する。この要素は、Zea mays(トウモロコシ)の熱ショックタンパク質70遺伝子からのエクソン1の10ヌクレオチド、イントロン1、およびエクソン2の11ヌクレオチドからなる。エクソン2の11ヌクレオチドには開始メチオニン残基を除去する修飾が加えられている。
[5]CaMV 35Sリーダー:配列番号26の位置2618〜2626の逆相補体に対応する。カリフラワーモザイクウイルス(CaMV)の35S RNA転写産物からの5’非翻訳領域(UTR)であって、その遺伝子のmRNA転写開始点の+1位置から始まるものに相当する。
[7]トウモロコシPIIGプロモーター:配列番号26の位置3265〜4213に対応する。この遺伝要素は、Zea maysの物理的障害誘導タンパク質(PIIG)遺伝子のプロモーターに相当する。
[8]コムギLhcb1リーダー:配列番号26の位置4220〜4280に対応する。この遺伝要素はTriticum aestivum(コムギ)の集光複合体b1(Lhcb1)遺伝子の5’非翻訳領域(UTR)に相当する。
[9]イネAct1イントロン:配列番号26の位置4297〜4776に対応する。Oryza sativa(イネ)のアクチン1(Act1)遺伝子からのエクソン1の12ヌクレオチド、イントロン1、およびエクソン2の7ヌクレオチドの連続配列からなる。
[10]Cry3Bb ORF:配列番号26の位置4786〜6747に対応する。ネイティブBt Cry3Bbタンパク質コード遺伝子と比べて修飾H231R、S311L、N313T、E317K、およびQ349Rを呈するように工学的に操作された非天然殺虫性Cry3Bタンパク質のコード領域に相当する。このヌクレオチド配列はイベントMON88017に含まれるcry3Bb遺伝子配列と一致する。
[12]イネTubA(プロモーター、リーダー、イントロン):配列番号26の位置7025〜9205に対応する。Oryza sativa(イネ)のαチューブリン遺伝子(TubA−3)からの連続するプロモーター、リーダー、イントロン、およびエクソン2の4ヌクレオチドに相当する。
[13]CTP:配列番号26の位置9210〜9437に対応する。A. thalianaの5−エノールピルビルシキミ酸−3−リン酸シンターゼ(EPSPS)からのN末端CTPをコードする工学的に操作されたコード領域に相当する。この要素は、最後のGAGコドン(グルタミン酸)がTGC(システイン)に修飾されている点で、ネイティブ遺伝子(GenBankアクセッション番号X06613)とは異なる。
[14]CP4 EPSPS:配列番号26の位置9438〜10805に対応する。Agrobacterium CP4からのEPSPSの工学的に操作されたコード領域に相当する。第2コドンがセリンをコードするものからCTT(ロイシン)へと修飾されている点と、4つのサイレント置換とが、ネイティブAgrobacterium遺伝子とは異なる。
[15]イネTubA 3’UTR:配列番号26の位置10813〜11394に対応する。Oryza sativa(イネ)からのαチューブリン遺伝子(TubA−3)の3’非翻訳領域(UTR)に相当する。
[16]RB:配列番号26の位置11413〜11743に対応する。A. tumefaciensからのノパリン右境界配列に相当する。
Claims (32)
- トウモロコシDNAを含有する試料中に検出することができる組換えDNA分子であって、該分子のヌクレオチド配列は、
(a)配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号21、および配列番号25からなる群より選択されるか、または
(b)(a)に完全に相補的なヌクレオチド配列であり、
当該DNA分子の存在が、該試料中のトウモロコシイベントMON87411 DNAに特徴的である、組換えDNA分子。 - トウモロコシDNAを含有する試料中に検出することができる組換えDNA分子であって、該分子のヌクレオチド配列は配列番号1またはその完全相補体に対して少なくとも99%の同一性を有するヌクレオチド配列であり、当該DNA分子の存在が、該試料中のトウモロコシイベントMON87411 DNAに特徴的である、組換えDNA分子。
- トウモロコシDNAを含有する試料中に検出することができる組換えDNA分子であって、該分子のヌクレオチド配列は、
(a)配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号49、配列番号50、配列番号51、および配列番号52からなる群より選択されるか、または
(b)(a)に完全に相補的なヌクレオチド配列であり、
当該DNA分子の存在が、該試料中のトウモロコシイベントMON87411 DNA内に含まれるコンストラクトに特徴的である、組換えDNA分子。 - 該DNA分子がトウモロコシイベントMON87411に由来し、トウモロコシイベントMON87411を含む種子の代表試料がATCC受託番号PTA−12669として寄託されている、請求項1、請求項2または請求項3に記載の組換えDNA分子。
- 該試料がトウモロコシ植物、トウモロコシ植物細胞、トウモロコシ種子、後代トウモロコシ植物、トウモロコシ植物部分、またはコモディティートウモロコシ製品を含む、請求項1、請求項2または請求項3に記載の組換えDNA分子。
- ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で試料中のトウモロコシイベントMON87411 DNAまたはそこに含まれるコンストラクトとハイブリダイズするDNAプローブとして機能するのに十分な長さのポリヌクレオチドセグメントを含むDNA分子であって、該プローブが、配列番号1に示すトウモロコシイベントMON87411またはそこに含まれるコンストラクトに特徴的である1つ以上の接合部セグメントに、該条件下で特異的にハイブリダイズし、該ハイブリダイゼーション条件下での該DNAプローブのハイブリダイゼーションの検出が、該試料中のトウモロコシイベントMON87411 DNAまたはそこに含まれるコンストラクトに特徴的であり、該DNAプローブが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号21、配列番号25、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号49、配列番号50、配列番号51、および配列番号52からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、DNA分子。
- 第1DNA分子と、第1DNA分子とは異なる第2DNA分子とを含む、一対のDNA分子であって、該第1および第2DNA分子は、それぞれ、DNAプライマーとして機能して、増幅反応においてトウモロコシイベントMON87411テンプレートDNAを含有する試料と共に、一緒に使用した場合に、該試料中の該トウモロコシイベントMON87411 DNAに特徴的であるアンプリコンが作製されるように、配列番号1または配列番号2または配列番号3または配列番号4の十分な長さの連続ヌクレオチドのポリヌクレオチドセグメントを含み、前記アンプリコンが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号21、および配列番号25からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、一対のDNA分子。
- 第1DNA分子と、第1DNA分子とは異なる第2DNA分子とを含む、一対のDNA分子であって、該第1および第2DNA分子は、それぞれ、DNAプライマーとして機能して、増幅反応においてトウモロコシイベントMON87411テンプレートDNAを含有する試料と共に、一緒に使用した場合に、該試料中の該コンストラクトを含むDNAに特徴的であるアンプリコンが作製されるように、配列番号1または配列番号2または配列番号3または配列番号4の十分な長さの連続ヌクレオチドのポリヌクレオチドセグメントを含み、該アンプリコンが、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号49、配列番号50、配列番号51、および配列番号52からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、一対のDNA分子。
- 試料中のトウモロコシイベントMON87411に特徴的であるDNAセグメントの存在を検出する方法であって、
(a)該試料を請求項6に記載のDNA分子と接触させること;
(b)該試料および該DNA分子をストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に付すこと;および
(c)トウモロコシイベントMON87411に特徴的である該DNAセグメントへの該DNA分子のハイブリダイゼーションを検出すること
を含み、該検出ステップが該試料中の該トウモロコシイベントMON87411分子の存在に特徴的である、方法。 - 試料中のトウモロコシイベントMON87411に特徴的であるDNAセグメントの存在を検出する方法であって、
(a)該試料を、請求項7に記載の一対のDNA分子と接触させること;
(b)DNAアンプリコンを作製するのに十分な増幅反応を行うこと;および
(c)該反応中の該DNAアンプリコンの存在を検出すること
を含み、該DNAアンプリコンは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号21および配列番号25からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含み、該アンプリコンの存在の該検出が、該試料におけるトウモロコシイベントMON87411 DNAの存在に特徴的である、方法。 - 試料中のトウモロコシイベントMON87411内に含まれるコンストラクトに特徴的であるDNAセグメントの存在を検出する方法であって、
(a)該試料を、請求項8に記載の一対のDNA分子と接触させること;
(b)DNAアンプリコンを作製するのに十分な増幅反応を行うこと;および
(c)該反応中の該DNAアンプリコンの存在を検出すること
を含み、該DNAアンプリコンは、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号49、配列番号50、配列番号51、および配列番号52からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含み、該アンプリコンの存在の該検出が、該試料におけるトウモロコシイベントMON87411 DNA内に含まれる該コンストラクトの存在に特徴的である、方法。 - 配列番号1のヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド分子を含む、トウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- グリホサート除草剤処置に対して耐性である、請求項12に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- Diabrotica種の食物に入れて提供された場合に殺虫性である、請求項12に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- 該Diabrotica種が、Diabrotica virgifera virgifera(ウエスタンコーンルートワーム、WCR)、Diabrotica barberi(ノーザンコーンルートワーム、NCR)、Diabrotica virgifera zeae(メキシカンコーンルートワーム、MCR)、Diabrotica balteata(ブラジリアンコーンルートワーム、BZR)、Diabrotica balteata(Diabrotica viridulaとDiabrotica speciosaとからなるブラジリアンコーンルートワーム複合体、BCR)、およびDiabrotica undecimpunctata howardii(サザンコーンルートワーム、SCR)からなる群より選択される、請求項14に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- 該トウモロコシ植物がさらに、該イベントMON87411を含むトウモロコシ植物の任意の世代の後代植物と規定される、請求項12に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- 該トウモロコシ植物が、少なくとも片方はイベントMON87411を含む親から育種された雑種である、請求項16に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- 該トウモロコシ植物が、DAS−59122−7;MON89034;MON88017;MIR604;MON87427;TC1507;5307;DAS−06275−8;BT176;BT11;およびMIR162からなる群より選択されるトランスジェニックイベントをさらに含む、請求項12に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- 配列番号1のヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド分子を含む、トウモロコシ種子。
- 検出可能な量の、イベントMON87411またはそこに含まれるコンストラクトにユニークなDNA分子を含むトウモロコシコモディティー製品であって、該分子が請求項1、請求項2または請求項3に記載の組換えDNA分子を含む、トウモロコシコモディティー製品。
- 全粒または加工トウモロコシ種子、トウモロコシを含む動物用飼料、トウモロコシ油、コーンミール、コーンフラワー、コーンフレーク、コーンブラン、トウモロコシバイオマス、ならびにトウモロコシおよびトウモロコシ部分を使って生産された燃料製品からなる群より選択されるコモディティー製品とさらに規定される、請求項20に記載のトウモロコシコモディティー製品。
- DNA増幅方法で試験した場合にテンプレートとして機能しうるDNAを含むトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分であって、該テンプレートを使った該DNA増幅方法を実行することで、イベントMON87411 DNAまたはそこに含まれるコンストラクトの存在に特徴的であるアンプリコンが作製され、トウモロコシイベントMON87411を含む種子の代表試料がATCC受託番号PTA−12669として寄託されており、該アンプリコンが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号21、配列番号25、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号49、配列番号50、配列番号51、および配列番号52からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、トウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分。
- グリホサート除草剤に対して耐性なトウモロコシ植物を作製する方法であって、該トウモロコシ植物のゲノムにトウモロコシイベントMON87411を提供することを含み、該トウモロコシ植物がイベントMON87411に関してホモ接合である近交系トウモロコシ植物であるか、または少なくとも片方はイベントMON87411を含む親トウモロコシ植物のF1雑種後代であり、トウモロコシイベントMON87411を含む種子の代表試料がATCC受託番号PTA−12669として寄託されている、方法。
- トウモロコシコモディティー製品を生産する方法であって、
(a)請求項12に記載のトウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分を取得すること;および
(b)前記トウモロコシ植物またはそのトウモロコシ植物部分からトウモロコシコモディティー製品を生産すること
を含む、方法。 - 圃場における雑草の生長を管理するための方法であって、圃場でイベントMON87411を含むトウモロコシ植物を生長させること、および雑草の生長を管理するために該圃場を有効量のグリホサートで処置することを含み、トウモロコシイベントMON87411を含む種子の代表試料がATCC受託番号PTA−12669として寄託されている、方法。
- 該有効量のグリホサートが1エーカーあたり0.125ポンド〜6.4ポンドである、請求項25に記載の方法。
- 検出可能な量の請求項1、請求項2または請求項3に記載の組換えDNA分子を含む、生きていない植物材料。
- 検出可能な量の請求項1、請求項2または請求項3に記載の組換えDNA分子を含む微生物。
- 細菌および植物細胞からなる群より選択される、請求項28に記載の微生物。
- (a)配列番号12に示す組換えポリヌクレオチドと
(b)配列番号14に示す組換えポリヌクレオチドと
(c)配列番号16に示す組換えポリヌクレオチドと
を含むDNA分子であって、
該組換えポリヌクレオチド配列がホスホジエステル結合によって一つに連結されている、DNA分子。 - 配列番号4を含むと規定される、請求項30に記載のDNA分子。
- トウモロコシイベントMON87411を含むトウモロコシ植物が50〜100パーセントを構成するトウモロコシ植物の圃場を耕作することを含む、トウモロコシ植物の圃場を保護する方法であって、トウモロコシイベントMON87411を含む種子の代表試料がATCC受託番号PTA−12669として寄託されている、方法。
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