UA124487C2 - Рекомбінантна молекула днк, яка надає рослині кукурудзи стійкості до глюфосинату і дикамба, та спосіб її використання - Google Patents
Рекомбінантна молекула днк, яка надає рослині кукурудзи стійкості до глюфосинату і дикамба, та спосіб її використання Download PDFInfo
- Publication number
- UA124487C2 UA124487C2 UAA201610556A UAA201610556A UA124487C2 UA 124487 C2 UA124487 C2 UA 124487C2 UA A201610556 A UAA201610556 A UA A201610556A UA A201610556 A UAA201610556 A UA A201610556A UA 124487 C2 UA124487 C2 UA 124487C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- dna
- transformant
- maize
- plant
- corn
- Prior art date
Links
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 title claims abstract description 316
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 title claims abstract description 276
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 205
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 title claims abstract description 205
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 156
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 167
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims abstract description 92
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 85
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 claims abstract description 84
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 79
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 claims abstract description 77
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 190
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 182
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 71
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 71
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 71
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 60
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 45
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 42
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 41
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 claims description 36
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 claims description 33
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 32
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 24
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 22
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 22
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims description 10
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 claims description 6
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 claims description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 101000951943 Stenotrophomonas maltophilia Dicamba O-demethylase, oxygenase component Proteins 0.000 claims description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 claims 67
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 claims 67
- 108010082527 phosphinothricin N-acetyltransferase Proteins 0.000 claims 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 41
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 35
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 25
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 15
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 13
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 13
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 13
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 13
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 11
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 11
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- HIGSLXSBYYMVKI-UHFFFAOYSA-N pralidoxime chloride Chemical compound [Cl-].C[N+]1=CC=CC=C1\C=N\O HIGSLXSBYYMVKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000014107 chromosome localization Effects 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000024346 drought recovery Effects 0.000 description 2
- 238000003366 endpoint assay Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 238000009401 outcrossing Methods 0.000 description 2
- 230000008654 plant damage Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000734 protein sequencing Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 108010020183 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710197633 Actin-1 Proteins 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 101100184147 Caenorhabditis elegans mix-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000380130 Ehrharta erecta Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- FNJQGUKETYGBGL-UHFFFAOYSA-N OC(=O)C(N)CCP(=O)CO Chemical compound OC(=O)C(N)CCP(=O)CO FNJQGUKETYGBGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494165 Peanut chlorotic streak virus Species 0.000 description 1
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 1
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N bilanafos Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCP(C)(O)=O GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 238000007622 bioinformatic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 1
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000010154 cross-pollination Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-M glufosinate-P zwitterion(1-) Chemical compound CP([O-])(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-M 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006278 hypochromic anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000009399 inbreeding Methods 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 208000033937 musculocontractural type Ehlers-Danlos syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 description 1
- 210000000745 plant chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/02—Methods or apparatus for hybridisation; Artificial pollination ; Fertility
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids
- A01N37/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system
- A01N37/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system having at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and one oxygen or sulfur atom attached to the same aromatic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
- A01N57/18—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-carbon bonds
- A01N57/20—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-carbon bonds containing acyclic or cycloaliphatic radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Abstract
Винахід стосується рекомбінантної молекули ДНК, яка надає рослині кукурудзи стійкість до глюфосинату та дикамба; способу детекції наявності такої молекули; трансгенної рослини, одержаної з використанням такої молекули; та способу вирощування такої рослини.
Description
ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
ІОО1| Дана заявка заявляє пріоритет за попередньою заявкою на патент США Мо 61/968342, поданою 20 березня 2014 року.
ВКЛЮЧЕННЯ ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
І002| Перелік послідовностей міститься у файлі під назвою "МОМ5З362УМО. ХГ, розміром 29,4 кб (виміряно у М5-Міпаом/5) та створеному 9 березня 2015 року, подається у цьому документі в електронній формі та включений у цей документ за допомогою посилання.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
ІООЗ| Цей винахід відноситься до рекомбінантних молекул ДНК, унікальних для трансгенного трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Цей винахід також відноситься до трансгенних рослин, частин, насіння, клітин кукурудзи та сільськогосподарських продуктів, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, а також до способів їх застосування. Трансгенні рослини кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, проявляють стійкість до гербіцидів дікамба та глюфосинату.
РІВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ї004| Кукурудза (Леа тауз) є важливою сільськогосподарською культурою у багатьох регіонах світу. Для цієї культури застосовувались способи біотехнології з метою отримання кукурудзи з бажаними ознаками. Одною з таких бажаних ознак є стійкість до гербіцидів.
Експресія гетерологічного гену, також відомого як трансген, для стійкості до гербіциду у рослині може надати стійкості до гербіцидів всій рослині. Однак, на експресію трансгену, а отже на його ефективність можуть впливати багато різних факторів, включаючи орієнтацію та композицію касети, яка відповідає за експресію окремого трансгену, переміщеного в хромосому рослини, та хромосомну локалізацію, та геномний результат трансгенної інсерції. Це додатково ускладнюється в трансгенних рослинах з безліччю молекулярно-зв'язаних трансгенів, які визначають окремі ознаки. У такому випадку, коректна експресія кожного з молекулярно- зв'язаних трансгенів у рослині повинна бути результатом такої ж трансгенної інсерції (що також називається мультигенним трансформантом). У таких випадках, необхідно розробити та протестувати багато касет експресії кожна з яких має іншу конфігурацію трансгенів та елементів експресії, а потім отримати та проаналізувати велику кількість окремих об'єктів трансформації рослин за допомогою багатьох поколінь рослин для того, щоб відібрати трансгенний трансформант з переважними властивостями по відношенню до кожної з бажаних ознак та оптимальними фенотипічними та сільськогосподарськими характеристиками, необхідними для того, щоб зробити його придатним для комерційних цілей. Такий відбір потребує обширних молекулярних досліджень, а також багаторічних тепличних та польових випробувань в різних місцях та при різних умовах, щоб таким чином можна було зібрати значну кількість агрономічних, фенотипічних та молекулярних даних. Отримані в результаті дані та спостереження мають бути потім проаналізовані групами вчених та агрономів з метою відбору трансформанту, придатного для комерційного використання у сільському господарстві в широкому діапазоні генетичних ознак та в різних польових умовах. Будучи відібраним, комерційний трансформант, що визначає бажані ознаки, може бути інтрогресованим в інші фонові генотипи з використанням методів розведення рослин, тим самим отримуючи ряд різних сортів сільськогосподарських культур, які містять бажану ознаку та, відповідним чином, адаптовані до конкретних місцевих умов зростання.
ЇОО5І| Для того, щоб створити трансгенну рослину, що містить один об'єкт трансформації, частину конструкції рекомбінантної ДНК переносять у геном клітини кукурудзи з використанням методів трансформації рослин. Ця клітина кукурудзи згодом використовується для отримання унікальної рослини Ко, яку потім можна буде використати для отримання трансгенних рослин- потомків. Геном рослин-потомків містить унікальний трансформант, ці рослини можуть бути протестовані на бажану ознаку (ознаки), а також на агрономічну продуктивність. На ефективність трансформанту можуть впливати сі5 та/або ігап5 фактори відносно сайту інтеграції в об'єкті трансформації. На фенотип, що визначається трансформантом, також може впливати розмір та структура ДНК-конструкції, яка може варіювати в залежності від комбінації генетичних елементів у касеті експресії, кількості трансгенів, кількості касет експресії, а також конфігурації таких елементів та таких касет. Продуктивність цього трансформанту може додатково ускладнюватись такими факторами, які пов'язані з розвитком рослини, добовими, сезонними та просторовими патернами експресії трансгенів; або зовнішніми факторами, наприклад, умовами оточуючого середовища для росту рослин, наявністю води, наявністю азоту, теплом або стресом. Таким чином, можливість створити трансформант, що визначає бажаний набір фенотипічних ознак, не є легко передбачуваною. 60 КОРОТКИЙ ОПИС СУТНОСТІ ВИНАХОДУ
І0О6| Цей винахід відноситься до рекомбінантної молекули ДНК, що містить послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:1-10. Цей винахід також відноситься до рекомбінантної ДНК, отриманої із трансгенної рослини кукурудзи або насінини, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, характерний зразок насінини, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, був депонований у АТСС під номером доступу РТА-120860. Цей винахід також відноситься до рекомбінантної молекули ДНК, яка є ампліконом для діагностики наявності
ДНК, отриманої із трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Цей винахід також відноситься до молекули ДНК, яка знаходиться у рослині кукурудзи, клітині, насінині, рослині-потомку або частині рослини, отриманих із трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Ї0О0О7| Цей винахід відноситься до молекули ДНК з достатньою довжиною безперервної послідовності ДНК 5ЕО ІЮ МО:10, щоб функціонувати у якості зонду ДНК, який гібридизується при жорстких умовах гібридизації з молекулою ДНК, що містить ДНК-послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5БЕО ІЮ МО:1 -10, та не гібридизується в жорстких умовах гібридизації з молекулою ДНК, що не містить ДНК-послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ
МО:1-10. Винахід також відноситься до пари молекул ДНК, що містить першу молекулу ДНК та другу молекулу ДНК, при чому перша молекула ДНК являє собою фрагмент послідовності ЗЕО
ІО МО:9, а друга молекула ДНК являє собою фрагмент геномної ДНК кукурудзи трансформанту кукурудзи МОМ 87419, та при цьому і перша, і друга молекули ДНК містять послідовність ДНК із суміжних нуклеотидів достатньої довжини, щоб функціонувати у якості праймерів ДНК при їх спільному використанні у реакції ампліфікації з ДНК, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, для отримання амплікону для діагностики трансформанта кукурудзи МОМ 87419 у зразку.
І0О8І Винахід відноситься до способу детекції наявності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК шляхом приведення в контакт зразка з ДНК-зондом, піддаючи зразок та зонд ДНК жорстким умовам гібридизації, та детекції гібридизації ДНК зонда до молекули ДНК у зразку, де гібридизація ДНК зонду з молекулою ДНК вказує на наявність трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК.
ІО0О9| Винахід відноситься до способу детекції наявності трансформанту кукурудзи МОМ
Зо 87419 у зразку ДНК шляхом приведення в контакт зразка з парою ДНК праймерів, виконуючи реакцію ампліфікації, достатню для отримання ДНК амплікону, що містить послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО:1-8 та 5ЕО ІЮО МО:10, та детекції наявності амплікону ДНК в реакції, при чому наявність амплікону ДНК в реакції вказує на наявність трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК. 0010 Винахід також відноситься до набору для детекції ДНК, що містить щонайменше одну молекулу ДНК, що містить послідовність ДНК із суміжних нуклеотидів 5ЕО ІЮ МО:10 довжиною, достатньою для того, щоб функціонувати у якості специфічного праймера або зонду для детекції наявності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК.
Ї0011| Цей винахід відноситься до рекомбінантної рослини кукурудзи, насінини, клітини, частини рослини або товарного продукту, що містить молекулу ДНК з послідовністю ДНК, вибраної з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:1-10. Цей винахід також відноситься до трансгенної рослини кукурудзи, насінини або клітини, стійким до гербіцидів глюфосинату, або дікамба, або глюфосинату та дікамба. Цей винахід також відноситься до трансгенної рослини кукурудзи, насінини, клітини, частини рослини або товарного продукту, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419. Цей винахід також відноситься до рослини кукурудзи або насінини, що являють собою гібрид, який має щонайменше одну батьківську рослину, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. 00121 Цей винахід відноситься до способу боротьби із бур'янами на ділянці, що включає посадку трансгенної кукурудзи, яка містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, на ділянці та застосування ефективної дози гербіцидів дікамба або глюфосинату, або дікамба та глюфосинату для боротьби із бур'янами на ділянці, не ушкоджуючи трансгенної кукурудзи.
Винахід також відноситься до способу боротьби із бур'янами шляхом застосування ефективної дози гербіциду глюфосинату від близько 0,1 фунта (0,045 кг) кислотного еквіваленту на акр (0,405 га) до близько 16 фунтів (7,257 кг) кислотного еквіваленту на акр гербіциду глюфосинату впродовж періоду вегетації. Винахід також відноситься до способу боротьби із бур'янами шляхом застосування ефективної дози гербіциду глюфосинату від близько 0,4 фунта (0,181 кг) кислотного еквіваленту на акр (0,405 га) до близько 1,59 фунтів (0,721 кг) кислотного еквіваленту на акр гербіциду глюфосинату впродовж періоду вегетації. Винахід також відноситься до способу боротьби із бур'янами шляхом застосування ефективної дози гербіциду 60 дікамба від близько 0,1 фунта (0,045 кг) кислотного еквіваленту на акр (0,405 га) до близько 16 фунтів (7,257 кг) кислотного еквіваленту на акр гербіциду дікамба впродовж періоду вегетації.
Винахід також відноситься до способу боротьби із бур'янами шляхом застосування ефективної дози гербіциду дікамба від близько 0,5 фунтів (0,227 кг) кислотного еквіваленту на акр (0,405 га) до близько 2 фунтів (0,906 кг) кислотного еквіваленту на акр гербіциду дікамба впродовж періоду вегетації. 0013) Цей винахід також відноситься до способу отримання трансгенної рослини кукурудзи, стійкої до гербіцидів глюфосинату та дікамба, шляхом статевого схрещування трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, з іншою рослиною кукурудзи, збору отриманого насіння, вирощування насіння для отримання рослин-потомків, обробки рослин-потомків гербіцидами глюфосинатом або дікамба, або глюфосинатом та дікамба, а також відбору рослини-нащадка, стійкої до гербіцидів глюфосинату та дікамба. Цей винахід також відноситься до способу отримання трансгенної рослини кукурудзи, стійкої до гербіцидів глюфосинату та дікамба, шляхом самозапилення трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, збору отриманого насіння, вирощування насіння для отримання рослин-потомків, обробки рослин-потомків гербіцидами глюфосинатом або дікамба, або дікамба та глюфосинатом, а також відбору рослини-нащадка, стійкої до гербіцидів глюфосинату та дікамба.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
00141 Фігура 1: ілюструє організацію трансгенної вставки у геном рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Горизонтальні лінії відповідають відносним положенням 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5БЕО ІО МО:3, ЗЕО ІЮ МО:4, ЗЕО 10 МО:5, 5ЕО І МО:6,
ЗЕО ІЮО МО:7, 5ЕО ІЮО МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10; товсті стрілки, помічені 5026644 та 5026645, означають приблизне положення пари праймерів, що використовуються для ідентифікації трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419; товсті короткі лінії під номером від 14 до 22 являють собою відносне положення унікальних послідовностей рекомбінантних конструктів всередині вставки ДНК (ЗЕО ІЮ МО:9) та число відноситься до відповідного ЗЕ ІО МО кожної, відповідно; тонкі горизонтальні стрілки представляють відносну організацію двох окремих касет експресії вбудованої ДНК гетерологічного трансгена, трансформанту кукурудзи МОМ 87419, та блоки вказують на окремі
Зо елементи двох касет експресії; велика літера Р' означає промоторний елемент, велика літера "7 означає лідерний елемент, велика літера "І" означає інтрон, великі літери "Т5' позначають транзитний пептид хлоропласту, велика літера "ГГ означає 3'-елемент термінації транскрипції та поліаденілювання (3 ТЕ), раї означає кодуючу ділянку білку фосфінотрицинацетилтрансферази (РАТ) та йто означає кодуючу ділянку білку дікамба монооксигенази (ОМО).
КОРОТКИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
Ї0015| БЕО ІЮ МО:1 являє собою послідовність ДНК довжиною у тридцять нуклеотидів, що відображає 5'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи та трансгенної вставки. 5ЕО ІЮ МО 1 відповідає позиціям нуклеотидів від 1232 до 1261 з БЕО ІЮ МО:10.
Ї0016|Ї БЕО ІЮ МО:2 являє собою послідовність ДНК довжиною у тридцять нуклеотидів, що відображає 3'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи та трансгенної вставки. 5ЕО ІЮ МО:2 відповідає позиціям нуклеотидів від 7994 до 8023 з БЕО ІЮ МО:10.
Ї0017| БЕО ІЮО МО:З являє собою послідовність ДНК довжиною у шістдесят нуклеотидів, що відображає 5'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи та трансгенної вставки. ЗЕО ІЮ МО:З відповідає позиціям нуклеотидів від 1217 до 1276 з БЕО ІЮ МО:10. 0018) БЕО ІЮО МО:4 являє собою послідовність ДНК довжиною у шістдесят нуклеотидів, що відображає 3'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи та трансгенної вставки. 5ЕО ІЮ МО:4 відповідає позиціям нуклеотидів від 7979 до 8038 з БЕО ІЮ МО:10.
Ї001915БО І МО:5 являє собою послідовність ДНК довжиною у сто нуклеотидів, що відображає 5'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи та трансгенної вставки. 5ЕО ІЮ МО:5 відповідає позиціям нуклеотидів від 1197 до 1296 з БЕО ІЮ МО:10.
І002015ЕО І МО:б являє собою послідовність ДНК довжиною у сто нуклеотидів, що відображає 3'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи та трансгенної вставки. 5ЕО ІЮ МО:6 відповідає позиціям нуклеотидів від 7959 до 8058 з БЕО ІЮ МО:10.
І0021|5ЕО І МО:7 являє собою послідовність ДНК довжиною у 1771 нуклеотидів, що відображає 1246 нуклеотидів 5'-фланкуючої геномної ДНК кукурудзи та 525 нуклеотидів 5'-кінця трансгенної вставки. (0022 5ЕО ІЮО МО:8 являє собою послідовність ДНК довжиною у 1767 нуклеотидів, що відображає 516 нуклеотидів 3-кінця трансгенної вставки та 1251 нуклеотидів 3'-фланкуючої бо геномної ДНК кукурудзи.
0023 5ЕО ІЮ МО:9 являє собою послідовність ДНК довжиною у 6762 нуклеотиди, що відповідає трансгенній вставці трансформанта кукурудзи МОМ 87419. 00241 5ЕО ІЮ МО:10 являє собою послідовність ДНК довжиною у 9259 нуклеотидів, що відображає трансформант кукурудзи МОМ 87419; послідовність містить 5'-фланкуючу послідовність геномної ДНК від 1 до 1246 позицій, ДНК трансгенної вставки від 1247 до 8008 позицій та 3--фланкуючу послідовність геномної ДНК від 8009 до 9259 позицій. 0025 5ЕО І МО:11 являє собою послідовність ДНК довжиною у 33 нуклеотиди, що відповідає праймеру, позначеному як 5026644, та який використовується для ідентифікації трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку; вона відповідає позиціям від 7966 до 7998 з
ЗЕО ІЮ МО:10. 0026 5ЕО І МО:12 являє собою послідовність ДНК довжиною у 24 нуклеотиди, що відповідає праймеру, позначеному як 5026645, та який використовується для ідентифікації трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку; вона відповідає позиціям від 8022 до 8045 з
ЗЕО ІЮ МО:10.
І002715ЕБО ІО МО:13 являє собою послідовність ДНК довжиною у 19 нуклеотидів, що відповідає зонду, позначеному як РВІ11207, та який використовується для ідентифікації трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку; вона відповідає позиціям від 8002 до 8020 з
ЗЕО ІЮ МО:10.
І0028| 5ЕО 10 МО:14-22 являють собою послідовності ДНК, що відповідають унікальним послідовностям у межах трансгенної вставки трансформанта кукурудзи МОМ 87419.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
І0О029| Наступні визначення та способи запропоновані для того, щоб краще визначити цей винахід та направити середнього спеціаліста у цій галузі техніки в практичному підході за цим винаходом. Якщо не вказано інше, терміни слід розуміти у відповідності зі звичайним використанням середніми спеціалістами у цій галузі техніки.
І00ОЗ0О| Сучасні методи трансформації рослин використовуються для створення генетично модифікованих рослин. Термін "трансгенний" також може бути використаний для позначення генетично сконструйованих рослин. У процесі створення трансгенної рослини, чужорідну ДНК випадковим чином овбудовують у геном рослинної клітини. Під час трансформації,
Зо трансформується багато окремих клітин. Внаслідок випадкової інтеграції буде відбуватись окрема та унікальна подія рекомбінації ДНК у межах геному кожної окремої трансформованої клітини рослини. Потім вирощують цілу трансгенну рослину із однієї окремої трансгенної клітини, що обов'язково приводить в результаті до того, що у кожній клітині трансгенної рослини міститься унікально вбудована ДНК у якості стабільної частини її геному. Стійка до гербіцидів трансгенна кукурудза, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, містить одну вставку трансгенної ДНК у хромосомі/геномі зародкової плазми кукурудзи. Трансформант кукурудзи
МОМ 87419 був отриманий шляхом: (І) трансформації тисяч клітин рослини кукурудзи конструкцією нуклеїнової кислоти, яка включає трансгени інтересу, (Ії) регенерації популяції рослин кукурудзи, кажна з яких містить унікальний трансгенний трансформант та (ПІ) багаторічного тестування, скринінгу та відбору, щоб відібрати трансформант з необхідними агротехнічними властивостями, трансформант кукурудзи МОМ 87419. Трансформант кукурудзи
МОМ 87419 характеризується унікальною послідовністю ДНК вставки трансгену у певному місці геному рослини кукурудзи.
ІЇ00ОЗ1| Акт вставки трансгенної ДНК у геном рослини кукурудзи здійснюється шляхом акту трансформації рослин та в результаті приводить до створення нової трансгенної геномної молекулярної послідовності, відомої як ""рансформант". Ця послідовність є унікальною та специфічною для трансформанту та може бути легко ідентифікована при порівнянні з оригінальною геномною послідовністю кукурудзи або іншими трансгенними трансформантами кукурудзи. Молекулярний аналіз трансформанта кукурудзи МОМ 87419 визначив геномний сайт вставки вбудованої ДНК (ЗЕО І МО:9) та фланкуючу геномну послідовність ДНК кукурудзи, безпосередньо суміжної до обох сторін від вбудованої ДНК (5ЕО ІЮ МО:7 та ЗЕО ІЮ МО:8). Таке положення вбудованої ДНК по відношенню до оточуючої ДНК геному рослини кукурудзи є, таким чином, специфічним та унікальним для стійкої до гербіцидів трансгенної кукурудзи, що включає трансформант кукурудзи МОМ 87419. Ця нова геномна молекулярна послідовність (ЗЕО ІО МО':10) також є невід'ємною частиною хромосоми трансгенних стійких до гербіцидів рослин кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, і, таким чином, є статичною у рослині та може передаватись потомству рослини. (0032) Цей винахід також відноситься до потомства вихідного трансформанта, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Таке потомство може бути отримано шляхом бо самозапилення рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, або статевого схрещування між рослиною кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, та ще однією рослиною, яка містить або не містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Така інша рослина може бути трансгенною рослиною, що містить той самий або інший трансформант(трансформанти), або нетрансгенною рослиною, такою як рослина іншого сорту.
Навіть після багаторазового оберненого схрещування з рекурентною батьківською рослиною, трансформант кукурудзи МОМ 87419 з трансформованої батьківської рослини присутній у потомстві, отриманому від схрещування, у тому ж місці геному. 0033) Як використовується у цьому документі термін "кукурудза" означає 2еа тауз (також відомий як кукурудза) та включає всі види рослин, які можна схрещувати з кукурудзою. 00341 Цей винахід відноситься до стійкої до гербіциду трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, який є стійким до гербіцидів дікамба (3,6-дихлор- 2-метоксибензойної кислоти) та глюфосинату (2-аміно-4--гидроксиметилфосфинил)-бутанової кислоти). Дікамба являє собою синтетичний ауксиновий гербіцид, який застосовується для боротьби з широким спектром широколистяних бур'янів. Глюфосинат являє собою органофосфорний гербіцид, який застосовується для боротьби з широким спектром однолітніх та багатолітніх трав та широколистяних бур'янів. Трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ген деметилази (йто) із Зіепоїгорпотопах тайкКорпййа, який експресує білок дікамба моно- оксигенази (ОМО) для надання стійкості до гербіциду дікамба, та ген стійкості до біалафосу (ра) із зігеріотусев мігідоспготодепев5, який експресує білок фосфінотрицин М-ацетилтрансферази (РАТ) для надання стійкості до гербіциду глюфосинату.
Ї0ОЗ5| Як використовується у цьому документі термін "рекомбінантний" відноситься до ненатуральних ДНК, білку або організму, які зазвичай не зустрічаються у природі та були створені шляхом людського втручання. Як використовується у цьому документі "молекула рекомбінантної ДНК" являє собою молекулу ДНК, що містить комбінацію молекул ДНК, які не зустрічаються разом у природніх умовах, та є результатом людського втручання, наприклад,
ДНК-молекулу, яка містить комбінацію щонайменше двох молекул ДНК, гетерологічних по відношенню один до одного, наприклад, молекулу ДНК, яка містить трансген та геномну ДНК рослини, суміжну з трансгеном. Приклад молекули рекомбінантної ДНК являє собою молекулу
ДНК, що містить щонайменше одну послідовність, вибрану з 5ЕБО І МО:1-10. Як
Зо використовується у цьому документі "рекомбінантна рослина" являє собою рослину, яка зазвичай не існує у природі, є результатом людського втручання та містить трансгенну молекулу ДНК. У результаті такої зміни геному, рекомбінантна рослина являє собою щось нове та помітно відрізняється від відповідної рослини дикого типу. Прикладом рекомбінантні рослини є рослина кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. 0036) Як використовується у цьому документі термін "трансген" відноситься до молекули
ДНК, штучно вбудованої у геном організму в результаті людського втручання, наприклад, за допомогою методів трансформації рослин. Трансген може бути гетерологічним по відношенню до організму. Термін "трансгенна вставка", як використовується у цьому документі, відноситься до трансгену, вбудованого за допомогою методів трансформації рослин у геном кукурудзи для отримання трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Послідовність для цієї трансгенної вставки запропонована як послідовність БЕО ІЮ МО:9. Термін "трансгенний" відноситься до чогось, що містить трансген, наприклад, "трансгенна рослина" відноситься до рослини, що містить трансген.
ІЇ0037| Як використовується у цьому документі термін "гетерологічний" відноситься до першої молекули, яка у природі, як правило, не пов'язана з другою молекулою або організмом.
Наприклад, молекула ДНК може бути отримана з перших видів та вбудована у геном других видів. Молекула ДНК, таким чином, буде гетерологічною по відношенню до геному та організму.
І00З8| Як використовується у цьому документі термін "химерний" відноситься до однієї молекули ДНК, отриманої шляхом злиття першої молекули ДНК з другою молекулою ДНК, при цьому ні перша, ні друга молекули ДНК, як правило, не були б у нормі знайдені у такій злитій конфігурації по відношенню до іншої. Молекула химерної ДНК, таким чином, являє собою нову молекулу ДНК, яка, як правило, не зустрічається у природі. Приклад молекули химерної ДНК являє собою молекулу ДНК, що містить щонайменше одну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮ
МО:1-10. 0039) Цей винахід відноситься до молекул ДНК та відповідним ДНК послідовностям. Як використовується у цьому документі терміни "ДНК" та "молекула ДНК" відносяться до молекули дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК) . Молекула ДНК може бути геномного або синтетичного походження, та, як прийнято, представляється від 5' (лівого) кінця до 3' (правого) кінця. Як використовується у цьому документі термін "послідовність ДНК" відноситься до нуклеотидної бо послідовності молекули ДНК. Використана номенклатура є такою, як вимагається у Розділі 37
Кодексу федеральних нормативних актів Сполучених Штатів 5 1.822, та приведена у Таблицях в стандарті ВОІВ 517.25 (1998), Додаток 2, Таблиці 1 та 3. Як прийнято, послідовності ДНК за даним винаходом та їх фрагменти описані з посиланням тільки по одному ланцюгу з двох комплементарних ланцюгів ДНК послідовності. Опосередковано та навмисно, комплементарні послідовності запропонованих у цьому документі послідовностей (послідовності комплементарного ланцюга), що також називаються у даній галузі техніки зворотніми комплементарними послідовностями, знаходяться у межах об'єму даного винаходу та явно маються на увазі у межах заявленого предмету. Таким чином, як використовується у цьому документі посилання на 5ЕО ІЮ МО:1-10 ї 5ЕО ІЮ МО:14-22 та їх фрагменти включають та відносяться до послідовності комплементарного ланцюга та її фрагментам. 0040) Як використовується у цьому документі термін "фрагмент" відноситься до невеликої частини цілого. Наприклад, фрагменти ЗЕО ІЮ МО:10 будуть включати послідовності, які складають щонайменше близько 20 послідовних нуклеотидів, щонайменше, близько 25 послідовних нуклеотидів, щонайменше, близько 30 послідовних нуклеотидів, щонайменше, близько 35 послідовних нуклеотидів, щонайменше, близько 40 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 45 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 50 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 60 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 70 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 80 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 90 послідовних нуклеотидів або щонайменше близько 100 послідовних нуклеотидів повної послідовності 52ЕО ІЮ МО:10. 0041) Послідовність ДНК, що відповідає повній послідовності ДНК вставки трансгену та істотних сегментів ДНК геному кукурудзи, що фланкують будь-який кінець трансгенної вставки, представлена як 5ЕО ІЮ МО:10. ДНК-послідовності геномної ДНК кукурудзи фізично зв'язані фосфодіефірним зв'язком і, таким чином, фланкуючий 5-кінець трансгенної вставки представлений як 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮО МО:З3, 5БЕО ІЮ МО:5 та 5ЕО ІО МО:7. Послідовність ДНК геномної ДНК кукурудзи фізично зв'язана фосфодіефірним зв'язком і, таким чином, рланкуючий 3-кінець трансгенної вставки представлений як ЗЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МО:4, 5ЕО ІО МО:6 та
ЗЕО І МО:8. 0042) Трансгенна кукурудза, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить дві ділянки, що називаються з'єднаннями. "З'єднання" являє собою місце, в якому один кінець трансгенної вставки поєднаний з геномною ДНК. З'єднання охоплює або тягнеться через частину трансгенної вставки та прилеглої до неї фланкуючої геномної ДНК і, як таке, є точкою з'єднання цих двох молекул у якості однієї суміжної молекули. Одне з'єднання на 5'-кінці трансгенної вставки та одне на 3'-кінці трансгенної вставки, згадується у цьому документі як 5'- та 3-з'єднання, відповідно. «Послідовність з'єднання» відноситься до послідовності ДНК будь- якої довжини, яка охоплює 5'- або 3-з'єднання трансформанту. Послідовності з'єднання трансформанту кукурудзи МОМ 87419 є очевидними для спеціаліста у даній галузі техніки, який використовує 5ЕО ІЮ МО:10. Приклади послідовностей з'єднань трансформанту кукурудзи МОМ 87419 представлені як 5ЕО ІЮО МО:1-8. Фігура 1 ілюструє фізичне положення 5ЕО ІЮ МО:1-10, розташованих від 5' до 3". Таким чином, цей винахід відноситься до молекули ДНК, яка містить щонайменше одну з послідовностей ДНК, приведених у ЗЕО ІЮ МО:1-8. 0043) Послідовності з'єднання трансформанту кукурудзи МОМ 87419 можуть бути присутніми як частина геному трансгенної рослини кукурудзи, насінини або клітини, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419. Ідентифікація будь-якої однієї або декількох з ЗЕО ІЮ
МО:1-8 у зразку, взятому з рослини трансгенної кукурудзи, частини рослини, насінини або клітини, вказує на те, що ДНК була отримана з трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, та є діагностичним параметром наявності трансформанту кукурудзи
МОМ 87419. 0044) Трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить послідовності, які є унікальними для трансгенної вставки, зокрема, ЗЕО ІЮ МО:14-22. Ці послідовності є унікальними для конкретної химерної конфігурації різних промоторів, інтронів, хлоропласт-направлених пептидів (СТР), 3- сигналу термінації, генів раї та дто у межах трансгенної вставки трансформанту. Фігура 1 ілюструє відносне положення кожної з цих унікальних послідовностей вставки трансгену по відношенню до послідовності 5ЕО ІЮ МО:9. 0045) Запропонованими є приклади молекул ДНК, які можуть бути використані або у якості праймерів, або зондів з метою діагностики наявності у зразку ДНК, отриманої із трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Такі праймери або зонди є специфічними для послідовності-мішені нуклеїнової кислоти та у якості таких можуть бути використані для ідентифікації трансформанту кукурудзи МОМ 87419 за допомогою методів, описаних у цьому документі. бо І0046| "Праймер" являє собою молекулу ДНК, яка призначена для використання при відпалі або гібридизаційних методах, які включають реакцію ампліфікації. Реакція ампліфікації являє собою реакцію іп омйго, яка ампліфікує матричну ДНК для отримання амплікону. Як використовується у цьому документі "амплікон' являє собою молекулу ДНК, яка була синтезована з використанням методів ампліфікації. Амплікони, згідно з даним винаходом, мають послідовність ДНК, що містить одну або декілька з БЕО ІЮ МО:1-10, або їх фрагменти.
Пара праймерів може бути використана з матричною ДНК, такою як зразок геномної ДНК кукурудзи, в реакції ампліфікації, такій як полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), щоб отримати амплікон, при цьому отриманий амплікон буде мати послідовність ДНК, що відповідає послідовності матричної ДНК, розташованої між двома ділянками, де праймери гібридизуються з матрицею. Праймер, як правило, призначений для гібридизації з комплементарним цільовим ланцюгом ДНК з утворенням гібриду між праймером та цільовим ланцюгом ДНК. Наявність праймера є точкою розпізнавання для полімерази, щоб почати подовження праймера з використанням у якості матриці ланцюг ДНК-мішені. Пари праймерів відносяться до використання двох праймерів, зв'язуючих протилежні ланцюги двохланцюгового нуклеотидного сегменту з метою ампліфікації нуклеотидного сегменту між ними. Приклади послідовностей праймерів представлені як БЕО ІЮ МО:11 та 5ЕО ІО МО:12. Пара праймерів, представлена як
ЗЕО ІЮО МО:11 та ЗЕО ІЮ МО:12, може бути використана у якості першої молекули ДНК та другої молекули ДНК, при тому, що перша молекула ДНК являє собою фрагмент 5ЕО ІЮ МО:9, а друга молекула ДНК являє собою фрагмент послідовності геномної ДНК кукурудзи ЗЕО ІЮ МО:10, та кожна має достатню довжину, щоб функціонувати у якості праймерів ДНК при їх спільному використанні у реакції ампліфікації з ДНК, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, для отримання амплікону з метою діагностики трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку.
Послідовність геномної ДНК кукурудзи з трансформанту кукурудзи МОМ 87419 представлена у якості позицій 1-1246 та 8009-9259 з ЗЕО ІЮ МО:10.
Ї0047| "Зонд" являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка є комплементарною к цільового ланцюга нуклеїнової кислоти та використовується в гібридизаційних методах детекції.
Зонди за даним винаходом включають не тільки дезоксирибонуклеїнові або рибонуклеїнові кислоти, але також та поліаміди та інші матеріали зонду, які специфічно зв'язуються з послідовністю ДНК мішені та детекція такого зв'язування може бути використана при детекції наявності або відсутності ДНК послідовності мішені. Зонд може бути приєднаний до звичайної мітки, що детектується, або репортеру, такої як радіоактивний ізотоп, ліганд, хемілюмінісцентний агент або фермент. Приклад послідовності ДНК, що використовується у якості зонду для детекції трансформанту кукурудзи МОМ 87419, представлений як 5ЕО ІЮ
МО:13. 0048) Способи конструювання та використання праймерів і зондів добре відомі у даній галузі техніки, а ДНК-молекули, що містять фрагменти 5ЕО ІЮ МО:1-10 та використовуються у якості праймерів та зондів для детекції трансформанту кукурудзи МОМ 87419, можуть бути легко разроблені спеціалістом у даній галузі техніки.
Ї0049| Молекули ДНК та ДНК послідовності, що їм відповідають, представлені у цьому документі, таким чином, використовуються для ідентифікації трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у трансгенних рослинах кукурудзи, клітинах, насінні або частинах рослини; відбору сортів кукурудзи або гібридів, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419; та детекції наявності або відсутності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку.
ЇОО5О| Як використовується у цьому документі термін "ізольований" відноситься до відокремлення молекули від інших молекул, зазвичай зв'язаних з нею у своєму природньому або натуральному стані. Термін "ізольований", таким чином, може відноситись до молекули
ДНК, яка була відокремлена від іншої молекули(молекул) ДНК, які зазвичай зв'язані з нею у своєму природньому або натуральному стані. Така молекула ДНК може бути присутньою у рекомбінантному стані, такому як рекомбінантна молекула ДНК. Таким чином, молекули ДНК, злиті з регуляторними або кодуючими послідовностями, 3 якими вони зазвичай не зв'язані, наприклад, як результат рекомбінантних технологій, вважаються ізольованими, навіть при вбудовуванні у якості трансгену у хромосому клітини або присутності з іншими молекулами ДНК. 0051) Цей винахід відноситься до рослин кукурудзи, потомства, насіння, клітин рослини та частин рослини, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, та товарним продуктум, отриманим з їх використанням. Характерний зразок трансгенної насінини кукурудзи, стійкої до гербіцидів, що містить трансформант МОМ 87419, депонований у відповідності з
Будапештським договором у Американській колекції типових культур (АТССФ). Для насінини трансгенної стійкої до гербіцидів рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, репозитарій АТСС привласнив позначення патентного депозиту РТА-120860. Рослини, 60 потомство, насіння, клітини рослини, частини рослини та товарні продукти за даним винаходом містять кількість ДНК, що детектується, з, щонайменше, однією з послідовностей, приведених як
ЗЕО ІЮ МО 1-10 та 5ЕО ІЮО МО:14-22. Рослини, потомство, насіння, клітини рослини та частини рослин за даним винаходом можуть також містити одну або декілька додаткових трансгенних ознак, зокрема, тих, які вносяться шляхом схрещування рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, з іншою рослиною, що містить додаткову трансгенну ознаку (ознаки). Такі ознаки включають, але без обмежень, підвищену стійкість до комах, підвищену ефективність використання води, підвищену продуктивність врожаю, підвищену стійкість до засухи, підвищену якість насіння, покращення поживної якості, продукцію гібридного насіння та/або підвищену стійкість до гербіцидів, при цьому ознака оцінюється по відношенню до рослини кукурудзи, яка не має такої трансгенної ознаки. 0052 Рослини за даним винаходом можуть бути використані для отримання потомства, яке містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Як використовується у цьому документі термін "потомство" включає будь-яку рослину, насінину та клітину рослини, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, успадкований від рослини-предка, вказаної рослиною, що містить молекулу ДНК, з, щонайменше, однією послідовністю, вибраною з 5ЗЕО ІЮ МО:1-10. Рослини, потомство та насіння можуть бути гомозиготними або гетерозиготними за трансформантом кукурудзи МОМ 87419. Рослини-потомки можна вирощувати з насіння, що продукується рослиною кукурудзи, яка містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, або з насіння, отриманого за допомогою рослини кукурудзи, заплідненої пилком, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. 0053) Як використовується у цьому документі термін "частина рослини" за даним винаходом являє собою будь-яку частину, отриману з трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Частини рослин включають, але без обмежень, пилок, бруньку, стручок, квітку, коріння, стебла, волокна та листя. Частини рослини можуть бути життєздатними або нежиттєздатними. 0054) Винахід відноситься до товарного продукту, який отриманий з трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Товарні продукти за даним винаходом містять кількість ДНК, яка детектується, що містить послідовність ДНК, вибрану з групи, яка складається з ЗБО ІЮ МО:1-10. Як використовується у цьому документі термін "товарний продукт" відноситься до будь-якої композиції, або продукту, який складається з матеріалу, отриманого з трансгенної рослини кукурудзи, насінини кукурудзи, клітини рослини кукурудзи або частини рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Товарні продукти включають, але без обмежень, оброблене насіння, зерна, частини рослини та їжу. Трансгенна кукурудза, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, може бути використана для виробництва будь-якого товарного продукту, як правило, отриманого з кукурудзи. Товарний продукт за даним винаходом буде містити кількість ДНК, що детектується, відповідно до трансформанта кукурудзи МОМ 87419. Детекція однієї або декількох з таких ДНК у зразку може бути використана для визначення вмісту або джерела товарного продукту. Можна використати будь-який стандартний спосіб детекції молекул ДНК, у тому числі способи детекції, описані у цьому документі.
Ї0055| Цей винахід відноситься до способів боротьби із бурянами з використанням гербіцидів глюфосинату або дікамба, або глюфосинату та дікамба з трансгенною кукурудзою, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Передбачено, що спосіб боротьби із бур'янами на ділянці, такій як поле, включає посадку трансгенних рослин кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, на ділянці, та застосування гербіцидно ефективної дози гербіцидів глюфосинату або дікамба, або глюфосинату та дікамба на ділянці з метою боротьби із бур'янами на ділянці, не пошкоджуючи трансгенних рослин кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419. Таке застосування гербіцидів глюфосинату або дікамба, або глюфосинату та дікамба може бути до проростання (у будь-який час після посадки насінини трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, та проростанням трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419) або після проростання (у будь-який час після проростання трансгенних рослин кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419). Гербіцидно ефективна доза глюфосинату для використання на ділянці для боротьби із бур'янами повинна складати у межах діапазону від близько 0,1 фунта (0,045 кг) кислотного еквіваленту на акр (0,405 га) (к.е./акр) аж до близько 16 фунтів (7,257 кг) к.е./"акр глюфосинату впродовж періоду вегетації. Гербіцидно ефективна доза дікамба для використання на ділянці для боротьби із бур'янами повинна складати у межах діапазону від близько 0,1 фунта (0,045 кг) к.е./"акр аж до близько 16 фунтів (7,257 кг) к.е./акр дікамба впродовж періоду вегетації. Багато застосувань гербіцидів глюфосинату або дікамба, бо або глюфосинату та дікамба можуть бути використані впродовж періоду вегетації, наприклад,
два застосування (такі, як застосування до посадки та застосування після проростання або застосування перед проростанням та застосування після проростання) або три застосування (такі, як застосування до посадки, застосування перед проростанням та застосування після проростання).
Ї0056| Як використовується у цьому документі термін "активний інгредієнт" або "а." є компонентом гербіцидного складу, що відповідає за гербіцидну активність, часто вимірюється у фунтах на галон або застосовується у фунтах на акр. Для гербіцидів, які є кислотами (наприклад, молекулами, які мають карбоксильну групу, як частину їх структури), в яких кислотну групу часто перетворюють (може бути замінено бажаними іонами, щоб сформувати) на сіль або (піддають взаємодії зі спиртом, щоб сформувати) складний ефір у процесі формулювання. Це може змінити не тільки хімічні характеристики конкретної молекули гербіциду, але й масу. Тим не менш, відповідна кислота є гербіцидно активною частиною складу, а еквівалентність гербіцидної активності між різними активними інгредієнтами можна розрахувати з використанням кислотного еквіваленту у якості стандартної одиниці вимірювання.
Термін "кислотний еквівалент" або "к.е." означає ту частину активного інгредієнта у складі, яка теоретично може бути перетворена назад у відповідну кислоту. Норми витрат гербіциду можуть бути виражені у вигляді "кислотного еквіваленту на акр" (скорочено "к.е./акр") або у вигляді "активного інгредієнта на акр" (скорочено "а.і./акр»).
Ї0057| Запропоновані способи отримання трансгенної рослини кукурудзи, стійкої до гербіцидів, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Потомство, отримане цими способами може бути сортовими або гібридними рослиними; може бути вирощено з насіння, отриманого з трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, або з насіння, отриманих з рослини кукурудзи, заплідненої пилком з трансгенної рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419; та може бути гомозиготним або гетерозиготним за трансформантом кукурудзи МОМ 87419. Рослини можуть самозапилюватися (також відомо як "самозапилювання") або перехресно запилюватися (також відомо як "перехресне запилювання"). Трансгенні рослини кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи
МОМ 87419 можуть самозапилюватися для створення істинної лінії для розведення рослин, які є гомозиготними за трансформантом кукурудзи МОМ 87419. Самозапилювання в результаті приводить до отримання потомства, відомого як "інбредне", та використовується для виробництва інбредних ліній, які є генетично однорідними. У якості альтернативи, трансгенні рослини кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419, можуть бути ауткросними (схрещені з іншою рослиною, яка є трансгенною або нетрансгенною) для отримання сортової або гібридної насінини. Насіння та рослини-потомки, отримані способами за даним винаходом, будуть містити трансформант кукурудзи МОМ 87419, а потім можуть бути відібрані гербіцидами глюфосинатом або дікамба, або глюфосинатом та дікамба. Обробку гербіцидами глюфосинатом або дікамба, або глюфосинатом та дікамба можна використати для відбору стійкого потомства. У якості альтернативи, ці рослини-потомки можуть бути проаналізовані за допомогою діагностичних методів, щоб відібрати рослини або насіння, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419.
ЇО0О58)| Рослини, потомство, насіння, клітини рослини та частини рослин за даним винаходом можуть також містити одну або декілька додаткових трансгенних ознак кукурудзи, зокрема, ті, які вносяться шляхом схрещування рослини кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи
МОМ 87419 з іншою рослиною кукурудзи, що містить додаткову трансгенну ознаку(ознаки). Такі трансгенні ознаки кукурудзи включають, але без обмежень, підвищену стійкість до комах, підвищену ефективність використання води, підвищену продуктивність врожаю, підвищену стійкість до засухи, підвищену якість насіння, покращення поживних характеристик, продукцію гібридного насіння та стійкість до гербіцидів, при цьому ознака вимірюється по відношенню до рослини кукурудзи, яка не має такої трансгенної ознаки. Такі трансгенні ознаки кукурудзи відомі спеціалісту у даній галузі техніки; наприклад, перелік таких ознак надається у Державному департаменті сільського господарства Сполучених Штатів (ШВА) Служби контролю здоров'я тварин та рослин (АРНІ5) та можуть бути знайдені на їх сайті пер:/Лимлу.арпіз.изаа.дом. Дві трансгенні рослини, таким чином, можуть бути схрещені для отримання потомства, яке містить дві або декілька незалежні одна від одної окремі трансгенні ознаки. Також розглядаються зворотнє скрещування з батьківською рослиною та ауткросинг із нетрансгенною рослиною, як і вегетативне размноження. Опис способів розведення, які зазвичай використовуються для різних ознак та культур, можна знайти в одному з декількох посилань, наприклад, Еепйг, у
Вгеєдіпуд Меїнодз Тог Сийімаг Оемеіортепі, УМїсох «). ед.,
Ї0О059)| Рослини, насіння, клітини, частини рослин та товарні продукти за даним винаходом бо можуть бути використані для детекції ДНК та білкових молекул, що свідчать про наявність трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Таку детекцію можна здійснювати з використанням ДНК послідовності, запропонованої у цьому документі, та відповідних послідовностей білків ОМО та
РАТ, що кодуються трансгенною вставкою, що приведена як 5ЕО ІО МО:9. Детекцію наявності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 можна здійснити за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки, таких як теплова ампліфікація нуклеїнової кислоти, методи гібридизації нуклеїнових кислот (такі як, нозерн-блотинг та саузерн-аналіз), методи детекції білку (такі як, вестерн блотинг, іммунопреципітація та твердофазний іммуносорбентний аналіз (ЕГІ5А)) або за допомогою методів детекції та/або наборів для детекції, запропонованих у цьому документі.
Один зі способів відноситься до контактування зразка ДНК з парою праймерів, яка здатна продукувати амплікон з ДНК трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, виконуючи реакцію ампліфікації та, таким чином, продуцикуючи амплікон ДНК, що містить щонайменше одну з послідовностей ДНК, представленних як 5ЕО ІЮ МО:1-10 та ЗЕО ІЮ
МО:14-22, а потім детекції наявності або відсутності молекули амплікону та можливого підтвердження у межах послідовності амплікон, що містить, щонайменше одну з послідовностей, представленних як 5ЕО ІЮ МО:1-10 та 5БЕО ІО МО:14-22. Наявність такого амплікону є діагностичною ознакою наявності специфічної ДНК для трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, і, таким чином, біологічного матеріалу у зразку, який отриманий з трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Інший спосіб відноситься до контактування зразка ДНК з ДНК зондом, піддаючи зонд та зразок
ДНК жорстким умовам гібридизації, а потім детекції гібридизації між зондом та зразком ДНК мішені. Детекція гібридизації є діагностичною ознакою наявності специфічної ДНК для трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК.
Ї0О6О| Пропонуються набори для детекції ДНК трансформанту кукурудзи МОМ 87419.
Варіації таких наборів також можуть бути розроблені з використанням композицій та способів, описаних у цьому документі, та способів детекції ДНК, добре відомих у даній галузі техніки.
Набори для детекції ДНК можна застосовувати до способів розведення трансгенних рослин кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419. Такі набори містять ДНК праймери або зонди, що містять фрагменти ЗЕО ІЮ МО:1-10. Один з прикладів такого набору містить щонайменше одну молекулу ДНК із суміжних нуклеотидів «ЕО ІЮ МО:10 достатньої довжини,
Зо щоб функціонувати у якості зонду ДНК, що використовується для детекції наявності та/або відсутності у зразку ДНК, отриманої із трансгенних стійких до гербіцидів рослин кукурудзи, що містять трансформант кукурудзи МОМ 87419. Пропонується молекула ДНК, достатня для використання у якості зонду ДНК, що використовується для визначення, детекції або діагностики наявності та/або відсутності у зразку трансгенної стійкої до гербіцидів кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, ДНК, приведеної як 5ЕО ІЮО МО:13. Інші зонди можуть бути легко розроблені спеціалістом у даній галузі техніки та повинні містити, щонайменше, близько п'ятнадцяти нуклеотидів 5ЕО ІЮ МО:10 та бути достатньо унікальними для стійкої до гербіцидів трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, з метою виявлення ДНК, отриманої від трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Інший тип набору містить пару праймерів, що використовуються для отримання амплікону, який використовується для детекції наявності або відсутності у зразку трансформанту кукурудзи
МОМ 87419. Такий набір повинен застосовувати спосіб, що включає приведення у контакт зразка ДНК-мішені з парою праймерів, а потім проведення реакції ампліфікації нуклеїнової кислоти, достатньої для отримання амплікону, що містить молекулу ДНК з щонайменше однією послідовністю, вибраною з 5ЕО ІЮО МО:1-10, а потім детекцію наявності або відсутності амплікону. Такий спосіб може також включати секвенування амплікону або його фрагменту. Інші пари праймерів можуть бути легко розроблені спеціалістом у даній галузі техніки та повинні містити щонайменше двадцять нуклеотидів 56 ІЮ МО:10 та бути достатньо унікальними для стійкої до гербіцидів трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, з метою детекції трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Набори за даним винаходом також можуть необов'язково включати реагенти для виконання детекції або діагностичних реакцій, описаних у цьому документі або інструкціях по застосуванню набору та його вмісту. 0061) Як використовується у цьому документі термін "що містить" означає "що включає, але не обмежується".
Інформація про депозит
І0062| Депозит характерного зразка насінини трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, був проведений у відповідності з Будапештським договором в Американській колекції типових культур (АТСС), за адресою10801 Опімегейу
Вошемага, Мапаззаз, Вірджинія, США, поштовий індекс 20110. АТСС позначенням патентного бо депозиту (номер доступу) для насіння, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, є РТА-
120860 та датою депозиту було 17 січня 2014. Депозит буде зберігатись у депозитарії впродовж
ЗО років або 5 років після останнього запиту, або впродовж терміну дії патенту, в залежності від того, який період довше.
ПРИКЛАДИ
0063) Наступні приклади включені для більш повного опису даного винаходу. Спеціалістам у даній галузі техніки повинно бути зрозуміло, що різні модифікації можуть бути створені у конкретних прикладах, які описані, але все ще з отриманням аналогічного результату. Деякі засоби, які схожі і хімічно, і фізіологічно, можуть бути використані замість засобів, описаних у цьому документі, досягаючи тих самих або подібних результатів. Всі такі заміни та модифікації, очевидні для спеціалістів у даній галузі техніки, вважаються у межах об'єму даного винаходу.
Приклад 1: Отримання та відбір трансформанту МОМ 87419 0064) Цей приклад описує отримання, аналіз та відбір трансгенної кукурудзи, що містить трансформант МОМ 87419, трансформант, який може забезпечити стійкість до обох гербіцидів, дікамба та глюфосинату. Узагальнено кажучи, для остаточного відбору трансформанту кукурудзи МОМ 87419 необхідні отримання та аналіз десятків тисяч окремих рослин впродовж багатьох років за допомогою строгих молекулярних, фенотипічних та польових випробувань.
Ї0065| Вектори трансформації, що містять різні касети експресії були розроблені та протестовані для підтвердження їх користі для експресії генів то та раї. Використовуючи ці дані, були відібрані комбінації елементів експресії та вісім різних векторів трансформації були сконструйовані та трансформовані у кукурудзу. За допомогою цих векторів були протестовані промотори та термінатори у різних комбінаціях з двома кодуючими ділянками гену раї та дто (Таблиця 1). Отримані в результаті рослини аналізували на експресію білку та два вектори (позначені як А та В в Таблиці 1) були відібрані для комерційної трансформації кукурудзи.
Таблиця 1
Конфігурація касети векторів трансформації
В ОЇРЯ 7777 0РАТ /ЇТ-ї ////// |РСОБУМ/ААСИ ІСТРА/ЮМО |Нері75 0 |РЯ 77777 0РАТ /ЇТ-ї ///// ФАМОоейраї О(СТРАЮМО |Нері75
Ї0О66| Більше тринадцяти тисяч унікальних трансформованих рослин кукурудзи були отримані з використанням двох векторів (А та В), які були відібрані. У рослинах часто спостерігаються значні відмінності у рівнях експресії вбудованого гену серед окремих трансформантів та експресія генів може безпосередньо позитивно або негативно корелювати з
Зо фенотипом рослини, що містить трансформант. Експресія чужорідних генів у рослинах, як відомо, знаходиться, між іншим, під впливом їх положення у хромосомі. По цій причині необхідно було провести відбір великої кількості окремих рослин, що містять випадкові вставки трансформантів, впродовж багатьох років та локалізацій для того, щоб визначити оптимальний трансформант. Трансгенний трансформант кукурудзи МОМ 87419 був створений за допомогою
Адгорасієгійт-опосредованної трансформації І Н244 незрілих зародків кукурудзи. Способи трансформації кукурудзи відомі у даній галузі техніки. Клітини кукурудзи були трансформовані та регенерували у цілі рослини кукурудзи. Були відібрані укорінені рослини з нормальними фенотипічними характеристиками. Тисячі окремих незалежних трансформантів потім переносили у грунт для росту та додаткової оцінки.
Таблиця 2
Процес відбору трансформанту
Всього
ВекторА Вектор В Унікальні
Етап Просунуті транс- ІППросунуті транс- просунуті форманти форманти трансфор- манти
Отримані трансгенні
Проходження першого ше
Нет чВ НИНІ НН НІ НЕ Я молекулярний аналіз :
Ранні відбори молекулярний аналіз молекулярний аналіз
Просунутіпольові |РКЕТСША (17777175 Ї711171611117111111т1 випробування та молекулярний Детальнаоцнкаї//-: | 2 | 0 | 2 трансформанту
Ї0067| Протягом всього процесу відбору трансформантів були проведені, часто одночасно, молекулярний аналіз, а також польові випробування для оцінки фенотипу, агрономії та ефективності трансформантів (Таблиця 2). На початку були проаналізовані 13 000 унікальних трансформованих КО рослин кукурудзи за допомогою ПЛР, щоб відібрати трансформанти з однією копією трансгенної вставки (Проходження першого аналізу з однією копією). Це привело у результаті до просування 2998 трансформантів. Наступний відбір на стійкість КО до обприскування гербіцидами проводився у теплиці. Рослини тестувались одночасно на стійкість до глюфосинату (гербіцид Ідпіет 280) та дікамба (гербіцид СіапуФф) з використанням бакової суміші глюфосинату (0,9 фунтів а.і./акр) та дікамба (2,0 фунти (0,907 кг) к.е./акр), розпиленої на стадії росту М1//2. Рослини, які продемонстрували »15 95 пошкодження, були відкинуті, а 1440 трансформантів були відібрані для додаткового аналізу. Був проведений первинний детальний молекулярний аналіз, який включав ідентифікацію та підтвердження послідовності і другу перевірку кількості копій та відсутності основи. В результаті цього аналізу було отримано 184 трансформанти, що містять тільки одну копію трансгенної вставки, відібраної для просування.
Саузерн аналіз на ДНК, виділеної із трансформантів КО, був проведений для додаткового підтвердження числа копій трансгенної вставки та підтвердження відсутності трансформації основи. Виходячи з цього, 112 трансформанти були відібрані для просування до Кі! для додаткового аналізу. Рослини КО самозапилювались та насіння збирали для випробувань з К1. 0068) Одночасно з усіма польовими випробуваннями додатковий молекулярний аналіз був на стадії розробки. Нозерн аналіз був проведений для детекції та вимірювання транскриптів
МРНК раї та ато генів. М-кінцеве білкове секвенування білків РАТ та ОМО, очищенних із трансгенних рослин, що містять відібрані трансформанти, проводили для того, щоб підтвердити рекомбінантну послідовність білку. Вестерн аналіз для детекції РАТ та ОМО білків проводили з трансгенними зразками рослин. Було проведено секвенування всього трансгену та обох 5'- і 3- кінців вставки, та згодом використано для розробки способів детекції окремих трансформантів.
Детальний аналіз за Саузерном проводили на КІ рослинах для того, щоб підтвердити число копій та відсутності основи.
Зо ЇОО69| Для польового випробування К1! ранніх відборів, серед 112 трансформантів, відібраних з КО скринінгу, були відібрані 82 трансформанти, враховуючи проростання насіння та розмір розсадника. Рослини КІ були розділені і, таким чином, були нульовими, гемізиготними або гомозиготними за трансформантом. Оцінювали 82 трансформанта у К1 рослинах при відборі по ефективності на полі з високими нормами витрат гербіцидів. Пошкодження рослин оцінювали після обробки різними комбінаціями глюфосинату (пе 280) та дікамба (Сіагйу) (до 20-кратного глюфосинату та до 16-кратного дікамба вказаних норм витрат) та з урахуванням часу застосування на різних стадіях росту від М1/Л/2 до М8//10. Ступінь пошкодження оцінювали через 10-14 днів після застосування гербіцидів. Стандарти ступеня пошкодження включають оцінку хлорозу у балах, мальформацій та схрещуваності. Загальні середні значення для багатьох рослин, що містять той самий трансформант, були використані для відбору трансформантів для просування. При застосуваннях гербіцидів при 2-кратних значеннях зазвичай отримують менш 10 95 пошкоджень, а при застосуванні гербіцидів при 16-кратних та 20-кратних значеннях отримують більш ніж ступінь пошкодження у 10 95. Окрім тестування ефективності проводили агрономічне оцінювання у балах для кожної рослини та корелювали із трансформантом, який у ній міститься. Критерії агрономічного оцінювання у балах, які були оцінені, включали висоту рослини, висоту колосу, процент вологості, тест ваги, дні до 50 905 запилення та дні до 50 95 появи ниток початків. На основі аналізу даних, зібраних в ході польових випробувань КІ та молекулярного аналізу, були відібрані 44 трансформанта для просування до К2 для додаткового аналізу. Рослини К1 самозапилювались та насіння збирали для випробувань з К2.
ЇО070|У польовому випробуванні К2 ранніх відборів, К2 та Е1 трансформанти (з К1 ауткросів) оцінювались у відборах польової ефективності у трьох місцях (двох штатах та
Пуерто-Ріко). Пошкодження рослин оцінювали після обробки різними комбінаціями норм витрат глюфосинату та дікамба та з урахуванням часу застосування. Рослини К2 є гомозиготними за трансформантом та рівень невдалої стійкості до гербіцидів після обробки гербіцидами був низьким, що підтверджує результати К1. Агрономічні дані були зібрані та оцінені у балах як у польових випробуваннях К!1. Додатковий молекулярний аналіз, включаючи аналіз експресії генів, також був використаний для відбору рослин, що містять найкращі трансформанти. На основі аналізу даних, зібраних в ході польових випробувань К2 та Е1 молекулярного аналізу, були відібрані 42 трансформанти для просування до КЗ для додаткового аналізу. Рослини К2 самозапилювались та насіння збирали для випробувань з КЗ.
Ї0071| Для просунутих польових випробувань були проведені польові випробування як
Ко) гібридної, так і інбредної ефективності, а також гібридні та інбредні агрономічні польові випробування. Агрономічні польові випробування проводились впродовж того ж сезону, що й польові випробування ефективності. Всі польові випробування використовували рандомізацію повними групами та були проведені в декількох місцях. Для польових випробувань ефективності та агрономічних польових випробувань, впродовж всього сезону випробувань було проведено агрономічне оцінювання у балах, а в кінці сезону визначали врожайність (ефективність врожаю або агрономічну врожайність). Польові випробування ефективності були проведені для оцінки пошкодження сільськогосподарських культур від 10 до 14 днів після застосування гербіциду, оцінки пошкодження сільськогосподарських культур та врожаю. Оцінка пошкодження цільового врожаю у балах була менше 10 95 для просування трансформанту. Для агрономічних польових випробувань, на ділянках підтримувалась відсутність бур'янів та у період вегетації не використовувались гербіциди глюфосинат або дікамба. Гібридні агрономічні польові випробування включали контролі гібриду, якого порівнювали (гібридного контролю), отриманого з використанням тих самих батьківських ліній кукурудзи, які використовувались для того, щоб провести трансгенне гібридне схрещування, але такого що не містить трансгенний трансформант. Інбредні контролі були співставні по інбредності з трансгенними інбредними лініями.
І0072| Мета-аналіз проводили З використанням сукупності мульти-сезонних багатолокаційних даних польових випробувань. У Таблиці З представлена кількість повторів, для яких повторювали спостереження для конкретного типу польового випробування для рослин, що містять один з трансформантів. Для кожного з цих двох трансформантів нараховували 135 значень, зареєстрованих для агрономічних реалізацій гібриду, 933 значення для ефективності гібриду, 179 значень для інбредної агрономії, 30 значень для інбредної ефективності та 16 значень для тестування трансформанта випробуванням навантаженням нормами витрат гербіциду для кукурудзи, що містить трансформант.
Таблиця З
Повтори польових випробувань для двох остаточних трансформантів. трансформанту
Ї00О7ЗІ| Гібридні рослини, кожна з яких містить один з 23 відібраних трансформантів (підмножина 42 трансформантів із польового випробування К2), були оцінені у Південній
Америці (ПАм) в рік 1 контра-сезону польових випробувань ефективності та агрономічних польових випробувань. Випробування проводились у шести місцях при рандомізації повними групами з 4-ма обробками та 2-ма повторами кожної обробки. У польових випробуваннях ефективності препаратом дікамба був гербіцид Вапмекшф 45Ї, а складом глюфосинату був
ІібепуФ 1.6751. Обробки гербіцидами включали наступне: (1) необроблений контроль; (2) дікамба у 2 фунти (0,907 кг) к.е./акр (акр) РЕЕ (при тому, що РКЕ визначається при посадці або до появи врожаю) з наступним дікамба в 1 фунт (0,454 кг) к.е./акр, що застосовувався до кожного з МЕ-М2, з наступним М4 з наступним М8; (3) глюфосинат, що застосовувався у 0,8 фунтів (0,363 кг) аї/акр до МЕ-М2, з наступним М4 з наступним М8; та (4) глюфосинат, що застосовувався у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.і./акр, плюс дікамба, що застосовувався в 1 фунт (0,454 кг) к.е./акр до МЕ-М2, з наступним МА з наступним У8. Ступінь пошкодження оцінювали через 10- 14 днів після застосування гербіцидів. Загальні середні значення для багатьох рослин, що містять той самий трансформант, були використані для відбору трансформантів для просування. Оцінка пошкодження цільового врожаю у балах склала менше 10 95 та оцінка спостереженого пошкодження була менше 1 95. На основі оцінювання пошкодження гібриду у балах, агрономічного оцінювання у балах, ефективності врожаю, агрономічної врожайності та додаткового молекулярного аналізу, були відібрані 17 трансформантів для просування.
І0074| Інбредні та гібридні рослини з 17 трансформантів, просунутих від року 1 ПАм польових випробувань контра-сезону, були потім додатково оцінені у польових випробуваннях ефективності року 1 та агрономічних польових випробуваннях у Сполучених Штатах (США). Ці випробування були проведені в 2012 році, який був сезоном сильної засухи у Сполучених
Штатах. Польові випробування ефективності гібриду проводились у 12 місцях, 2 штатах при рандомізації повними групами з б-тьма обробками та 3-ма повторами кожної обробки. Гібридні рослини, що містять трансгенний трансформант стійкості до гліфосату, мали походження від чоловічої батьківської рослини при схрещуванні. У польових випробуваннях ефективності
Зо складом гліфосату був Коппдир РожегмМАХФ 4.551, складом дікамба був Сіапу 451 та складом глюфосинату був Ідпіе 280 2.3451І. Обробки гербіцидами включали наступне: (1) необроблений контроль; (2) гліфосат у З фунти (1,361 кг) к.е./акр, що застосовувався до М4, з наступним М8; (3) глюфосинату у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.ї/акр, що застосовувався до М2, з наступним МА4 з наступним МУ8; (4) дікамба у 2 фунти (0,907 кг) а.і./акр, що застосовувався РЕЕ, та потім знову застосовувався до М4, з наступним М8; (5) гліфосат у З фунти (1,361 кг) к.е./акр плюс дікамба у 1,5 фунти (0,68 кг) к.е./акр, що застосовувався до М2, з наступним М4 з наступним М8; (6) дікамба у 2 фунти (0,907 кг) к.е./акр, що застосовувався до М2, з наступним глюфосинатом у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.і/акр плюс дікамба в 1 фунт (0,454 кг) к.е./акр, що застосовувався на стадії росту М4, з наступним гліфосатом у З фунти (1,361 кг) к.е./акр плюс дікамба у 1,5 фунти (0,68 кг) к.е./"акр, що застосовувався на стадії росту М8. Ступінь пошкодження оцінювали через 10-14 днів після застосування гербіцидів. Загальні середні значення для багатьох рослин, що містять той самий трансформант, були використані для відбору трансформантів для просування.
Оцінка пошкодження цільового врожаю у балах склала менше 10 95 та оцінка спостереженого пошкодження була менше 1 95. На основі оцінювання пошкодження гібриду у балах, агрономічного оцінювання у балах, ефективності врожаю, агрономічної врожайності та додаткового молекулярного аналізу, були відібрані 11 трансформантів для просування.
Ї0075| Польові випробування року 2 контра-сезону у Південній Америці (ПАм) для оцінки ефективності гібриду та інбредної агрономічної врожайності були потім проведені з рослиними,
що містять ці 11 трансформантів. Гібридні рослини, що містять трансгенний трансформант стійкості до гліфосату, мали походження від чоловічої батьківської рослини при схрещуванні.
Польові випробування ефективності гібриду були проведені, в основному, як описано для контра-сезону року 1 польових випробувань у Південній Америці (ПАм), але з наступними гербіцидними обробками: (1) необробленим контролем; (2) гліфосатом у З фунти (1,361 кг) к.е./акр, що застосовувався до М4, з наступним М8; (3) глюфосинатом у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.і/акр, що застосовувався до М4, з наступним М8; (4) дікамба у 2 фунти (0,907 кг) к.е./акр, що застосовувався РЕЕ, та потім знову застосовувався до М4 з наступним М8; (5) гліфосатом у З фунти (1,361 кг) к.е./"акр плюс дікамба у 1,5 фунти (0,68 кг) к.е./акр, що застосовувався до МА, з наступним М8; (6) глюфосинатом у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.і/акр плюс дікамба в 1 фунт (0,454 кг) к.е./акр, що застосовувався до М4, з наступним гліфосатом у З фунти (1,361 кг) к.е./акр плюс дікамба у 1,5 фунти (0,68 кг) к.е./акр, що застосовувався до У8. Ступінь пошкодження оцінювали через 10-14 днів після застосування гербіцидів. Загальні середні значення для багатьох рослин, що містять той самий трансформант, були використані для відбору трансформантів для просування. На основі оцінювання пошкодження гібриду у балах, агрономічного оцінювання у балах, ефективності врожаю гібриду, інбредної агрономічної врожайності та додаткового молекулярного аналізу, були відібрані 5 трансформантів для просування. 0076) Потім був здійснений додатковий молекулярний аналіз для цих 5 трансформантів.
Багаторічні польові та молекулярні дані для кожного з 5 трансформантів, включаючи польові випробування ознаки ефективності гібриду, гібридні та інбредні вимірювання врожайності, агрономічне оцінювання у балах та молекулярну інформацію, були згодом розглянуті, та були відібрані два трансформанти для додаткового аналізу. Ці обидва трансформанти були отримані з використанням того ж самого вектору трансформації і, таким чином, мали ту ж саму вставку трансгену, але не іншу локалізацію у геномі або фланкуючу послідовність.
Ї0077| Польові випробування року 2 у Сполучених Штатах (США) інбредної ефективності, а також гібридні та інбредні агрономічні польові випробування були проведені для оцінки цих двох трансформантів. Польові випробування ефективності гібриду були проведені аналогічним чином, як в рік 17 польових випробувань у США, але включаючи різні режими розпилення.
Ефективність була виміряна по ступеню пошкодження та ефективності врожаю гібриду. Потім
Зо був здійснений додатковий молекулярний аналіз для цих трансформантів. Гібридні рослини, що містять трансгенний трансформант стійкості до гліфосату, мали походження від чоловічої батьківської рослини при схрещуванні. Польові випробування 1 та 2 ефективності гібриду проводились в 12 місцях серед двох штатів та польові випробування З ефективності гібриду проводились в тридцяти трьох місцях серед чотирьох штатів У цих польових випробуваннях ефективності складом гліфосату був Кошпдир РожмегмАХ 4.551Ї, складом дікамба був Сіагіу 451. та складом глюфосинату був Ідпіне 280 2.3451. Гербіцидами для випробувань ефективності 1 та ефективності 2 (зі схрещуванням двох окремих інбредних ліній) були: (1) необроблений контроль; (2) глюфосинат у 0,4 фунти (0,181 кг) а.і/акр, що застосовувався до МЕ-М2, з наступним Мб; (3) глюфосинат у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.і/акр, що застосовувався до МЕ-М2, з наступним Мб; (4) дікамба у 0,5 фунтів (0,227 кг) к.е./акр, що застосовувався до М4, з наступним
М8; (5) дікамба в 1,0 фунт (0,454 кг) к.е./акр, що застосовувався до М4, з наступним М8; та (6) гліфосат у 2,25 фунтів к.е./акр плюс дікамба в 1,0 фунт (0,454 кг) к.е./акр, що застосовувався до
М4, з наступним М8. Гербіцидами для випробувань ефективності З (що представляють гібрид, отриманий від схрещування з третьою інбредною лінією) були: (1) необроблений контроль; (2) дікамба у 0,5 фунтів (0,227 кг) к.е./акр, що застосовувався до МЕ-М2, з наступним глюфосинатом у 0,4 фунта (0,181 кг) а.і/акр, що застосовувався до Мб; та (3) дікамба в 1,0 фунт (0,454 кг) к.е./акр, що застосовувався до МЕ-М2, з наступним глюфосинатом у 0,8 фунтів (0,363 кг) а.і./акр, що застосовувався до Мб. Ступінь пошкодження оцінювали через 10-14 днів після застосування гербіцидів та для багато рослин, що містять такий же трансформант, використовували для відбору трансформантів для просувань. Збирали дані врожайності та агрономічні дані.
Ї0078| Для порівняння ступеня пошкодження гібриду для двох трансформантів, був проведений мета-аналіз багатьох польових випробувань ефективності гібриду. (Таблиця 4)
Ступінь пошкодження оцінювали на М8 (при тому, що аналіз М8 охоплює кумулятивне пошкодження від М2, М4, Мб та М8 застосувань гербіцидів) зі статистичною найменшою достовірною різницею (150 при р «0,05). Тестер 1, тестер 2 та тестер 3 являють собою схрещування з 3-ма незалежними інбредними батьківськими лініями кукурудзи, які були використані для створення гібриду для вказаного польового випробування. Для кожного з випробувань не було знайдено статистичної різниці у ступені пошкодження між гібридами, отриманими з використанням батьківської трансгенної кукурудзи, що містить один з двох бо трансформантів.
Таблиця 4
Мета-аналіз ступеня пошкодження з польових випробувань ефективності гібриду. (Тестер'гібридуроку2ПАм 0 МОМ87419..ЙЩДЙ-: | 0 | 0 (Тестер'гібридуроку2ПАм (ТРАНСФОРМАНТ2| /-:/ 0 | 0 |/ (Тестерогібридуроку2ПАм 0 МОМ87419..ДЙ.-: | 0 г юЮ | 0 (Тестерогібридурогу2ПАм ТРАНСФОРМАНТ2| /-:/ 0 | 0
Ї0079| Був проведений мета-аналіз ефективності врожаю гібриду (бушелів/акр) з багатьох польових випробувань ефективності порівняно з врожаєм гібридів, що містять кожний з двох трансформантів. (Таблиця 5) Для кожного з випробувань не було знайдено статистичної різниці в ефективності врожаю гібридів між гібридами, отриманими з використанням батьківської трансгенної кукурудзи, що містить один з двох трансформантів.
Таблиця 5
Мета-аналіз врожайності польових випробувань ефективності гібриду.
ІЇ0080| Польові випробування тестування випробовування навантаженням були проведені також з гібридною трансгенною кукурудзою, що містить один з двох трансформантів. В тестах випробовування навантаженням або гербіцид глюфосинат (Ідпійе 280, 2.3451), або дікамба (Сіашу 451) застосовувались при некомерційно високих величинах. Для типічних польових випробувань 1-кратна величина глюфосинату складала 0,4 фунта (0,181 кг) а.і./акр та 1-кратна величина для дікамба складала 0,5 фунта (0,227 кг) ке/акр. Для польових випробувань тестування випробовування навантаженням глюфосинату, застосовували глюфосинат на МЕ-М2 з наступним М4 з наступним М8 з наступними величинами: (1) 1 фунт (0,454 кг) а.і./акр (2,5- кратний); (2) 2 фунти (0,907 кг) а.і./акр (5-кратний); (3) 4 фунти (1,814 кг) а.і./акр (10-кратний); та (4) 8 фунтів (3,629 кг) а.і/акр (20-кратний). Для польових випробувань тестування випробовування навантаженням дікамба, застосовували дікамба на МЕ-М2 з наступним МА з наступним МУ8 з наступними величинами: (1) 2 фунти (0,907 кг) к.е./акр (4-кратний); (2) 4 фунта (1,814 кг) к.е./акр (8-кратний); (3) 8 фунтів (3,629 кг) к.е./акр (16-кратний); та (4) 16 фунтів (7,257 кг) к.е/акр (32-кратний). В кінці сезону польові випробування тестування випробовування навантаженням гібриду збирали та визначали врожайність (бушелів/(акр або буш/акр). Аналіз даних по врожайності порівнювали з гібридами, що містили будь-який 3 цих двох трансформантів. Для кожного з випробувань не було знайдено статистичної різниці у врожайності по будь-якій з величин застосування гербіцидів між гібридами, отриманими з використанням батьківської трансгенної кукурудзи, що містить один з двох трансформантів.
Таблиця 6
Врожайність з польових випробувань ефективності тестування випробовування гібриду навантаженням.
Польове випробування кукурудзи бушелів/акр Р«0,05
Тест випробовування навантаженням 2,5- 20-кратного глюфосинату МОМ 87419 207,31
Тест випробовування навантаженням 2,5- ТРАНСФОРМАНТ 2 201,65 40 20-кратного глюфосинату
Тест випробовування навантаженням 4-
З2-кратного дікамба МОМ 87419 239,93
Тест випробовування навантаженням 4- ТРАНСФОРМАНТ 2 234,60 40
З2-кратного дікамба
І0081| Агрономічні польові випробування гібридів проводились у 3-х комплексах по 15 місць у кожному комплексі у 21 місці серед З штатів та були проведені впродовж того ж самого сезону з польовими випробуваннями ефективності гібриду. Агрономічні вимірювання були зібрані впродовж польового сезону випробувань, а в кінці сезону була визначена агрономічна врожайність. Мета-аналіз мульти-сезону багатолокаційних агрономічних польових випробувань гібриду використовували для порівняння з врожайністю гібридного контролю та гібридів, що містять один з двох трансформантів. Жодної статистичної різниці для агрономічної врожайності гібриду не було знайдено ні між трансгенними гібридами, ні порівняно з контрольними гібридами (Таблиця 7).
Таблиця 7
Мета-аналіз врожайності агрономічних польових випробувань гібриду. : Врожайність І 50
Польове випробування Гібрид кукурудзи (бушелів/акр) (Р«0,05)
Рік 1 комбіновано ПАм та США 180,28 6
Рік 1 комбіновано ПАм та США МОМ 87419 179,01 6
Рік 1 комбіновано ПАм та США ТРАНСФОРМАНТ 2 184,88 6
Рік2 ПАм 231,70
Рік 2 ПАм МОМ 87419 232,47
Рік 2 ПАМ ТРАНСФОРМАНТ 2 225,07
Тестер 2 року 1 США 185,80 17,40
Тестер 2 року 1 США МОМ 87419 187,09 17,40
Тестер 1 року 2 США ТРАНСФОРМАНТ 2 192,28 17,40
Тестер 2 року 2 США 21912 12,83
Тестер 2 року 2 США МОМ 87419 219,56 12,83
Тестер 2 року 2 США ТРАНСФОРМАНТ 2 221,22 12,83
Тестер З року 2 США 197,62
Тестер З року 2 США МОМ 87419 191,49
Тестер З року 2 США ТРАНСФОРМАНТ 2 195,48
І0082| Польові випробування інбредної ефективності були проведені з використанням рандомізації повними групами в б місцях, 1 штаті. У цих польових випробуваннях складом дікамба був Сіагіу 451. та складом глюфосинату був Ідпіе 280 2.3451. Застосування гербіциду для інбредних польових випробувань ефективності представляли собою глюфосинат у 0,8 фунта (0,363 кг) а.і./акр та дікамба у 2,0 фунта (0,907 кг) к.е./акр, що застосовувались при МЕ-М2 з наступним глюфосинатом у 0,8 фунта (0,363 кг) а.і/акр та дікамба у 2,0 фунти (0,907 кг) к.е./акр, що застосовувався на М8. У кінці сезону вимірювали врожайність. Для кожного з випробувань була знайдена статистична різниця інбредної ефективності врожайності порівняно з інбредною врожайністю, отриманою в цих випробуваннях від трансгенної кукурудзи, що містить один з двох трансформантів (Таблиця 8). Ці дані вказують на більш високу продуктивність трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Таблиця 8
Мета-аналіз врожайності польових випробувань інбредної ефективності. бушелів/акр Р«0,05
І0О831| Інбредні агрономічні польові випробування проводились впродовж того же сезону, що й польові випробування ефективності року 1 США, польові випробування ефективності року 1
ПАм та польові випробування ефективності року 2 США (11 місць, 1 штат). Ділянки були налаштовані при рандомізації повними групами, проведеної у багатьох місцях, а також випробування включали контролі інбредної лінії, що порівнювали з трансгенними інбредними лініями. Мета-аналіз мульти-сезону багатолокаційних інбредних агрономічних польових випробувань проводили порівняно з врожайністю парного контролю та трансгенними інбредними рослиними з використанням одного з двох трансформантів. Для інбредної агрономічної врожайності не було знайдено жодної статистичної різниці між контрольною та трансгенною кукурудзою, що містить трансформант МОМ 87419 (Таблиця 9). На відміну від цього, спостерігалось статистично значуще зниження врожайності трансгенної кукурудзи, що містить трансформант 2, порівняно або з контролем, або трансгенною кукурудзою, що містить трансформант МОМ 87419. Ці дані додатково вказують на більш високу продуктивність трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Таблиця 9
Мета-аналіз врожайності інбредних агрономічних польових випробувань. (бушелів/акр) (Р«0,05)
ОІнбреднероку2 США (Контроль | 7 108,90.7..ЙЙ.|7.7ЄЄЄЗ 6 Г/Г(К(Ж:
Інбреднероку2 США |МОМ87419 2 (( | 109922 | 6
Пнбреднероку2 США |ТРАНСФОРМАНТ2 | 9688..ШЩ.-: | 6
Приклад 2: Характеристика послідовності ДНК трансформанту кукурудзи МОМ 87419 00841) Цей приклад описує широку молекулярну характеристику, яка була проведена для трансформанта кукурудзи МОМ 87419. Трансгенна вставка трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у напрямку від 5' до 3' містить: () промотор (Р-АМОде.Ора1), лідер та інтрон (І1-1-
АМОде.Ова!1) гену убіквітину (Ба) з Апагородоп дегагайїї; функціонально зв'язаний з раї геном з зЗіеріотусев міпдосптотодепе5 (СВ-ЗТЕмі ра), який кодує фосфінотрицин /-М- ацетилтрансферазу (РАТ), що надає стійкість до гербіциду глюфосинату; функціонально зв'язаний із сигналом поліаденілювання (також відомий як термінатор, який направляє поліаденілювання мРНК) з КА5ЗВ попередника гену з Огула 5аїйїма (Т-О5.Ага5) та (ії) промотор
Зо повної довжини транскрипту віруса хлоротичної смугастості арахісу з подвоєною енхансерною ділянкою (РСІЗМ); ген з Тийісцит аевзіїмит (І-Та.ЇпсБ1), функціонально зв'язаний з лідером світлозбираючого комплексу 01; функціонально зв'язаний з першим інтроном гену актину 1 з
Огула займа (І-О5.АсИ); функціонально зв'язаний з М-кінцевим транзитним пептидом хпоропласту із гібриду гену 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази петунії (Т5-РИ.ЗИКа-СТ РА); функціонально зв'язаний з (то геном Біепоїгорпотопаз тайкорпййа, оптимізованим для експресії в однодольних (СК-ЗТЕта.ОМО), який кодує монооксигеназу дікамба (ОМО), що надає стійкість до гербіциду дікамба; функціонально зв'язаний з сигналом поліаденілювання білку теплового шоку 17 з Тгйісит аебвіїмит (Т-Та.Нер17). 5-кінець трансгенної вставки фланкований правою межею Аадгобасіегішт їшптіасіеп5 та 3'-кінець трансгенної вставки фланкований лівою межею Адгобасіегчт шптігасіепв. 0085) Саузерн-блот-аналіз був проведений, щоб підтвердити, що трансгенна кукурудза, яка містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, містить єдину, непошкоджену копію всієї трансгенної вставки без жодної основи вектора. Фланкуючі послідовності були відокремлені від обох 5'- та 3-кінців вставки, а відповідні з'єднання були визначені за допомогою зворотної ПЛР та/або методів "прогулянки по геному" Хромосомне положення вставки трансформанту кукурудзи МОМ 87419 визначали за допомогою зворотньої ПЛР для ампліфікації геномної ДНК за межами сайту інтересу. Фланкуючі послідовності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 були картовані за відомою фізичною сукупністю геному кукурудзи та було підтверджено, що у межах будь-якого з відомих генів не було трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Ця інформація про послідовність була використана для розробки ТАОМАМФЕ аналізів за кінцевою точкою, специфічних по відношенню до трансформанту, для виявлення присутності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку. Інформація про послідовність сайту вставки була також використана для біоїінформатичного аналізу хромосомної локалізації трансформанту. Цілісність сайту вставки визначалась за допомогою ПЛР через алель дикого типу з використанням праймерів, специфічних до фланкуючих ділянок трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Дикий тип вставки сайту був використаний для картування по еталонному геному кукурудзи унікального сайту вставки трансгену для трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Для того, щоб гарантувати, що жодні зміни або мутації не були введені у будь-яку ділянку трансгену у процесі трансформації, вся трансгенна вставка трансформанту кукурудзи МОМ 87419 була виділена з рослини та секвенована. 0086) М-кінцеве білкове секвенування експресованих білків РАТ та ЮОМО проводили з використанням імуноочищених білкових екстрактів, отриманих із зерна трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Цю послідовність потім використовували для підтвердження достовірності М-кінцевої амінокислотної послідовності. Вестерн-аналіз проводили на білкових екстрактах отриманих із зерна трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Це підтверджувало, що продукувався один білок очікуваного розміру для РАТ та ОМО, відповідно. Були проведені аналізи ЕГІ5ЗА для визначення рівнів білку в різних типах тканин трансгенної кукурудзи (листя, насіння, коріння та пилку) для білку РАТ або ОМО, експресованого з трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Нозерн-аналіз був проведений на поліаденільованій РНК, виділеній із зерна трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419. Це підтверджувало розмір транскрипту та кількість продуктів МРНК раї та ато. Рівні експресії РНК також були виміряні за допомогою ПЛР у реальному часі з використанням зразків, отриманих з трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Приклад 3: Специфічні по відношенню до трансформанту ТАОМАМОФ аналізи за кінцевою точкою
Ї0087| У цьому прикладі описаний специфічний по відношенню до трансформанту спосіб термічної ампліфікації ТАОМАМФОЕ за кінцевою точкою, розроблений для ідентифікації трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419 у зразку. ДНК- праймери, які використовуються в аналізі за кінцевою точкою являють собою праймери 5О26644 (5ЕО ІЮ МО:11), 5026645 (5ЕО ІЮ МО:12) та 6-БГАМ "М мічений зонд РВ11207 (5ЕО ІЮ
МО:13). 6-РАМ "М являє собою флуоресцентний барвник, продукт із Арріїеа Віозузіет5 (Фостер
Сіті, Каліфорнія), приєднаний до ДНК-зонду. Для зондів ТАОМАМЕ МОВ м 5' екзонуклеазна активність Тад ДНК-полімерази розщеплює зонд з 5'-кінця між флуорофором та гасником. При гібридизації з ланцюгом ДНК-мішені, гасник та флуорофор розділені достатньо, щоб отримати флуоресцентний сигнал, тим самим вивільнюючи флуоресценцію. 50026644 та 5026645 при використанні з цими методами реакції та РВ11207 дозволяють отримати ДНК амплікон, який є діагностичним для трансформанту кукурудзи МОМ 87419. Контролі для цього аналізу повинні включати позитивний контроль, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, негативний контроль з нетрансгенною кукурудзою, а також негативний контроль, який не містить матричної
ДНК. Крім того, контроль ПЛР-реакції повинен оптимально включати праймери внутрішнього контролю та зонд внутрішнього контролю, специфічні до однієї копій гена у геномі кукурудзи. Ці аналізи оптимізовані для використання або з Арріїей Віозуєїтет5 СепеАтреФ РСК бузієет 9700 (пробіг на максимальній швидкості) або на М.) Кезеагсп ОМА Епдіпе РТО-225 термоциклері, але можна використати й інше обладнання. 0088) Прикладом умов, які використовуються зі способом аналізу ТАЛОМАМФО за кінцевою бо точкою, який використовується для детекції трансформанту кукурудзи МОМ 87419, є наступне.
Стадія 1: 18 мегаомну воду доводили до кінцевого об'єму 10 мкл. Стадія 2: 5,0 мкл 2-кратної суміші ОпімегзанІ Мабхіег Міх (аМТР, фермент, буфер) доводили до 1-кратної кінцевої концентрації. Стадія 3: 0,5 мкл праймер-ї для трансформанту (5026644) та праймер-2 для трансформанту (5026645). Суміш (ресуспендували у 18 мегаомній воді до концентрації 20 мкМ кожного праймера) доводили до 1,0 мкМ кінцевої концентрації (наприклад, у пробірці для мікроцентрифуги, щоб досягти 500 мкл кінцевої концентрації 20 мкМ необхідно додати наступне: 100 мкл праймера 5026644 у концентрації 100 мкМ; 100 мкл праймера 5026645 у концентрації 100 мкМ; 300 мкл 18 мегаомної води). Стадія 4: 0,2 мкл зонду для трансформанту 6-РАМ 7 МОВ РВІ11207 (10мкМ) (ресуспендували у 18 мегаомній воді до концентрації 10 мкМ до 0,2 мкМ кінцевої концентрації. Стадія 5: 0,5 мкл суміші праймера-1 внутрішнього контролю та праймера-2 внутрішнього контролю (ресуспендували у 18 мегаомній воді до концентрації 20
МКМ для кожного праймера) доводили до 1,0 мкМ кінцевої концентрації. Стадія 6: 0,2 мкл зонду внутрішнього контролю МІСтм (1О0мкМ) доводили до 0,2 МКМ кінцевої концентрації (ресуспендували у 18 мегаомній воді до концентрації 10 КМ). Стадія 7: 3,0 мкл виділеної ДНК (матричної) для кожного зразка з одним з наступного, що містить 1. Зразки листків для аналізу; 2. Негативний контроль (не трансгенна ДНК); 3. Негативний контроль води (без матриці); 4.
Позитивний контроль трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419.
Стадія 8: Умови термоциклера наступні: Один цикл при 50 "С впродовж 2 хвилин; один цикл при 95 "С впродовж 10 хвилин; десять циклів при 95 " впродовж 15 секунд, потім 64 "С впродовж 1 хвилини при (-1"С/цикл); тридцять циклів при 95 "С впродовж 15 секунд, потім 54 "С 1 хвилину, необов'язкові додаткові від 10 до 20 циклів (95 "С впродовж 15 секунд, потім 64 "С впродовж 1 хвилини (-1"С/цикл) можуть забезпечити більш чітке розділення популяції при аналізі ЕпаРоіїіпі
Тадмапе)); кінцевий цикл при 10 "С.
Приклад 4: Аналіз зиготності
І0089| Аналіз зиготності може бути використаний для визначення того, чи є рослина, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, гетерозиготною або гомозиготною за трансформантом або алелем дикого типу. Аналіз реакції ампліфікації може бути розроблений з використанням інформації про послідовність, вказаній у цьому документі. Праймер-1, праймер-2 та праймер-3, при тому, що праймер-ї є специфічним для геномної ДНК кукурудзи на 3'-
Зо фланкуючому кінці трансформанту кукурудзи МОМ 87419; праймер-2 є специфічним для трансгенної вставки трансформанту кукурудзи МОМ 87419; та праймер-3 є специфічним для алелю дикого типу. При використанні у якості пари праймерів в реакції ампліфікації праймера-1 з праймером-2 буде отриманий ПЛР амплікон, специфічний для трансформанту кукурудзи МОМ 87419. При використанні у якості пари праймерів в реакції ампліфікації праймера-1 з праймером-3 буде отриманий ПЛР амплікон, специфічний для алелю дикого типу. При ПЛР- реакції, виконаній на геномній ДНК кукурудзи, відповідні ПЛР амплікони, отримані за допомогою (праймера-1 «т праймер-2) та (праймера-1 ж праймер-3), будуть відрізнятись за послідовністю та розміром амплікону. Коли три праймери включені у реакцію ПЛР з ДНК, виділеною з рослини, гомозиготної за трансформантом кукурудзи МОМ 87419, буде синтезуватися тільки амплікон праймер-ї ї- праймер-2. Коли три праймери включені у реакцію ПЛР з ДНК, виділеною з рослини, гетерозиготної за трансформантом кукурудзи МОМ 87419, будуть синтезуватися амплікон праймер-ї ї- праймер-2 та амплікон праймер-ї1 ї- праймер-3. Коли три праймери змішуються разом у реакції ПЛР з ДНК, виділеною з рослини, нульової за трансформантом кукурудзи МОМ 87419 (такої, яка є диким типом), буде синтезуватися тільки амплікон праймер- 1 т праймер-3.
ЇО0О90О| Іншим способом визначення зиготності рослини кукурудзи для трансформанту кукурудзи МОМ 87419 є ТадМапф реакція термічної ампліфікації за кінцевою точкою. Для даного типу аналізу, на додаток до праймерів, як описано вище, аналіз буде включати два флуоресцентно мічених зонди. Зонд-ї буде специфічним для трансформанту кукурудзи МОМ 87419 та зонд-2 буде специфічним для рослини кукурудзи, яка є нульовим за трансформантом кукурудзи МОМ 87419 (диким типом), та при тому, що два зонди містять різні флуоресцентні мітки, наприклад 6-ЕАМ "М--мітку або МІС м--мітку. При використанні ТЛОМАМФ реакції термічної ампліфікації за кінцевою точкою, праймер-ї ї- праймер-2 жї- зонд-1 буде виробляти перший флуоресцентний сигнал, специфічний для трансформанту кукурудзи МОМ 87419. При використанні ТАОМАМФО реакції термічної ампліфікації за кінцевою точкою, праймер-і1 - праймер-3 ж зонд-2 буде виробляти другий флуоресцентний сигнал, специфічний для кукурудзи дикого типу. Коли три праймери та два зонди включені в ТАОМАМФ реакцію термічної ампліфікації за кінцевою точкою з ДНК, виділеної з рослини, гомозиготної за трансформантом кукурудзи МОМ 87419, буде генеруватись тільки перший флуоресцентний сигнал (специфічний 60 праймеру-1 ї- праймеру-2 ж- зонду-1). Коли три праймери включені в ТАОМАМФ реакцію термічної ампліфікації за кінцевою точкою з ДНК, виділеної з рослини, гетерозиготної за трансформантом кукурудзи МОМ 87419, буде генеруватись перший флуоресцентний сигнал (специфічний праймеру-1 ж праймеру-2 ж- зонду-ї1) та другий флуоресцентний сигнал (специфічний праймеру-1 ї- праймеру-3 я зонду-2). Коли три праймери змішуються разом при
ТАОМАМ реакції термічної ампліфікації за кінцевою точкою з ДНК, виділеною з рослини, яка є нульовим за трансформантом кукурудзи МОМ 87419 (диким типом), буде генеруватись тільки другий флуоресцентний сигнал (специфічний праймеру-1 - праймеру-3 т зонду-2).
І0091| Іншим способом визначення зиготності рослини кукурудзи для трансформанту МОМ 87419 буде аналіз за Саузерном. Спеціалісту у даній галузі техніки має бути зрозуміло як розробити гібридизаційний(гібридизаційні) зонд(зонди) для аналізу за Саузерном, специфічні для трансформанту кукурудзи МОМ 87419, та інший гібридизаційний зонд для аналізу за
Саузерном, специфічний для рослини кукурудзи, яка є нульовою за трансформантом кукурудзи
МОМ 87419 (диким типом). За допомогою аналізу за Саузерном сигнал, що детектується тільки від першого гібридизаційного зонду для аналізу за Саузерном, буде свідчити про те, що рослина є гомозиготною за трансформантом кукурудзи МОМ 87419; сигнал, що детектується як від першого гібридизаційного зонду для аналізу за Саузерном, так і від другого гібридизаційного зонду для аналізу за Саузерном, буде свідчити про те, що рослина є гетерозиготною за трансформантом кукурудзи МОМ 87419; та сигнал, що детектується тільки від другого гібридизаційного зонду для аналізу за Саузерном, буде свідчити про те, що ДНК виділили з рослини, яка є нульовою за трансформантом кукурудзи МОМ 87419 (диким типом).
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» Мопзапіо Тесппоіоду І І С «1205 ТРАНСГЕННИЙ ТРАНСФОРМАНТ КУКУРУДЗИ МОМ 87419 ТА СПОСОБИ ЙОГО
ЗАСТОСУВАННЯ
-1305 МОМ5:362М0 «-140» Невідомо
Зо -1415 2015-03-10 -1505 61/968342 -1515 2014-03-20 -1605» 22 170» РаїепіНп версії 3.5 -2105 1 «2115 З30 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 1 саддіайда щіодсоссад ісадсаїсаї 30 -2105 2 «2115 З30 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 2 псНШшсі ссаїадсай сдсааіасад 30 -2105» З «2115» 60 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 З дсаддсодіс дсідссадді андаюдютдс дссадісадс аїсаїсасас сааааднад бо «-210» 4 60 «2115» 60
«2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «400» 4 андаїааїй асісшсії Шсіссаїа дсансосаа їасадунада дсдадоаа (610) -2105 5 «-2115 100 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «-4005 5 аддадддоаої додсддадчю дсадасудіс дсідссадаї айдащшідс дссадісадс (610) аїсаїсасас сааааднаяд дсссдааіад Шдааана 100 -2105» 6 «-2115 100 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 6 санндаа Кдааааааа апддіаан асісшсй Шсіссаїа дсансодсаа (610) тТасаонада юдсдадідаа дсасодаїаад іІсасаассаї 100 -2105 7 «2115 1771 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Рекомбінантна «4005 7 дідаїайці ЮДасссааад асаїдссаїй сісацо їІсадішаї ссіассааю (610) іїадіаассса аасадшаа Насаадіда аїсаасюдда аасаадаїсі асадасдса 120 сасадсасаї Іаасаансі дсдссаааїд ааїдасадад щдашагад дсасіаадсі 180
З5 дуашісаїс адаанно аїсададсаї ааассіщії дасаасадаа адааїйсааа /-240 саадсідсіс адсісадаїд дассааааїйа адаасосос дсасадіаїа Ндаассааа 300 азаддаася сасадіадаа аасадасдда даадсіадід сасасіаааа аїадаасіса 360 сідаюдсаїї Шаассдаа іІсайааааа асадассаас аданадас садсіаїсаа /-420 аадасасасі дсюдадааїс аасаасідсі азашіоіда ісіассідаа аїааасадаї 480 дсадннці дісссіасад ассаасайі Шааїсада аїдссааїдасаааїсснца 540 дадаїсідда дадсааасіа айаассасі дадааїсаас аасідсіаїа аїсснадад (610)0) аіїсіддадад сасасіааї!ї аассасідад ссісшодаї садсаїдсад аааіїссссаа 660 аасіаїасід іаайсдааа сссаїаадсяо сасаїсааад саасіссан дайдадн 720 ддааашцна аааагадаї дддасасс аайдссдіа аасааасссасадддадаас 780 ададіащюа асааїсаааа сіаасаддаа іаадідда Нсадайаа діааддаааа /- 840 даїсасад апаадааса дадсаащіа іадсасааді ддааацаса аассіннці 900 сасааааца сааїсісіад асадсасаса дсаадаїсії ддааюдаю аддаюацда 960 аїсдддааа ааадасадса сасадсаада ісістадаас адаасаїдаа аїшподача 1020 аюдадаща аіщіадасс іаассісщі ссаїісснії ааїадссдіс дсідссаддаі 1080 аддаагада дсдссдщдад юссадісдад ддасодсодсоса вдаасасоді пдаї999 1140 сдадаїассс дасдсдвдісу ддааасссса сддсоудісаї сасддсдадс сддаддачод 1200 ддчааванодс ддадідосад дсодаїсосід ссаддаїано аїдідсодсса дісадсаїса 1260
Ісасассааа аднаддссс дааїаацо ааанадааа дсісосаайн дададісідіє 1320 дадаадона ассіаддіас Ідаанассс шюйаїсссі аасіадаїтаії сдаанцсіаа 1380 сіаїаасдаї ссіааддіад сдааїсоне Ненподсодс дссаадасос ааасісддас 1440 сдднсаадс сдісааддса сисіаюдса ассасадіса асіїдаадс сосндадід 1500 ссісісаад ШШШе подсаааааї сашсні Шаааааа адіаїааш 1560 ддаїсдідса аашсісіс тадаїіоо шідасідід дадіаасаа Шсістаді 1620 дідсосдас їдсідснас Шддадаїй асааїаїсії Ісідааааївс Нсдайасі 1680 60 ташаїааа ссдісісіаа доассаайос ісаадайса саасаай дааасдісіс 1740 асаюдайаа аїсаїаіааа днсіааді с 1771 -2105» 8 «2115 1767 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 8 дсдадісєда ідадасаїсі сідтацою шсщшесс садіаіне ютасноїд (610)
Тааїсдосіа аїсдссааса дайсдосда дааїааа адаааіааайіднсюдан о 120
Пдадосаа ааааааадда ападаїсія юн Кодаїсссс ддадсодсса 180 сасаасааас дааїасдісс Ідснудссі асіаддссаа сдсаддсосі дассдуїдасяа 240 дссасдадсо аасідаїаїс даайнсіадд даїаасадод їааіссасаї діадсіааас 300 дсодсссісаї сіаадссссс ашодасої даадіадас асдісдааайааадашсс 360 даанадаа!ї аашощша посщшсос сіаїааатас дасоддаїсодїаашаісді 420
Шаїсаааа щіасшса Шаїааїа асосідсдда саїсіасан Шддаайда 480 ааааааацо діаанасіс Шсініс Іссагадсаї ісдсааїаса дНадаїдсад 540 аддаасдсас даїаадісас аассаїааїйа саїасіаца дааіссддсі сшдссдад 600 їде ддрдсасісдд сааадасинс Шассддса аадіссіасі сісддіаасу 6бо ассасдша ссдададсад дасодсісдді асадададас асісддсааа дассісщЯ 720
Ісдадіосса аасдсісддс ааадоддссої садсадссоді стаїадсадатдшанаї 780 сшодссдад сдссаадсої ддсасісду саааасааді опоссдадіоснааацу 840 дасасісдас аааагатай Шешш сишщосаа ссааасшс зюошаї 900
Іссіасасіа ідіадасаїа сайссаї Шододсасаа Наіааааді дшосіаїа 960 ааїанадаї Шонсой їаайдаай Неісддаїа айсадацш даасіасаад 1020
Ісасісаааа ааіддаааас садааюса ааааюдагаї ссайнайадсасааді 1080 тасдассдаї йсаддадіа дасссдаай шдадсасс адсісасда аасаїдасід 1140 щдаасцщціс аїссаднодї Шаааацо іаїаааасас ааасааааїс ааааааїсаї 1200 дааасіщіс сасащісаї даїаїсаїса їаїдіададу Наїдаїааа ааднйдаааа 1260
Зо ташсоща ааднцоісса їаднсасід адссісща ісдадідіса сасісддсаа 1320 адссшоіс дадіосіїса дасасісодс аааіаадно Шссадіад Шасацааї 1380 адааааадад ідсаїаднс діісасаїад сіаасіаай дднсанас ааадааасаї 1440 тТадаасаадс агааїдаїда спддасаїа адаааааа аїасазадді їдадддаасс 1500 ааасаїаа!д даасасадаа саааіададоу асаасаїсаї адаааасдас аїаасисас 1560 аддадаіша содссаайцос іссасоссаа діссаїаадії осісдащцад аїсайнда 1620 ашйододної аїсашодад асіадіда нощадащаЯд адсаїаодсса сісідіасда 1680 аснсаддда Ндащдаїдад адаїссасої дсасіссааї дсдосааасісаасацас 1740 посасдаща дассіїдісс Ісдасаа 1767 -210» 9 «2115 6762 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 9 дссадісадс аїсаїсасас сааааднад дсссдааїад Шодааацна дааадсісдс (610) аайдаддіс щісдаддад днНаассіад аіасюдааїй асссіднаї сссіаасіад 120 азагсдааїй сіаасіаїіаа содіссіаад діадсдааїс дісісно9 дсдсдссаад 180 асдсааасіс ддассддіс аадссдісаа ддсасинсіа їдсаассаса дісааснда 240 адссдсно адідсснсї сааднції шсносаа аааїсашіс ШИШаа 300 ааааацдіаїа ашоддаїсд дсааашс ісістада дідідідас дідідадчіа 360 асаашсіс їадноїоса сдасідсідс Пасшода дацйасаааісцшсіааа 420 аюдсісдаї їаснащша їааассдісі стааддссаа Посісаада йПсайсаас 480 аайдааася ісісасаюда Наааїсаїа їааадшсі аадіснунідасаадан 540 пшШадаїй нсаїсіааа Подаюдааа сіаїсаааса сіаайнаа ааааіайаад 600 адаадсіссд дадаїаааад дісдісіаїд Нанагаад адіааацісод ісіайсісї 660 ісдісссаас аїадагаайї сіаадсаюда апдсцсї нддасаа ааддадсаїд 720 ссасаасаса адаашдащці сассдісаю сіддаїссі Шаїдіааадснсассі 780
Істаїгааїсі аасааіадад аааісаддда аааагсаці Шоонон Шаціста 840 60 ассіссасаа іаасшоді Массації пуоашоай Чпадішададаадсаш 900 аїаасаддас сіааааїсії Нисадіас асадіасаас дсадасосісаїасасдсас 960 дсасасісас сісіаїдаас асасдіаада ааасссіаса ссіїдадсас сісдаадда 1020 сідадссодаї ааазагадад айсісдааяд іІсасіайад соссісднНо їсаасдддаа 1080
ІдісдсНас саснааадс аїаасоссда даааїсссді ааіааасса діааааасд 1140 адсасссдід ссаадндаа їашдаасс сдадіддаїа дзайссассо саааддассі 1200 аассадаїса Шсдсааас аддаасіааа аїсддіадад адсссадасаааадссшс 1260 сіаададсса сіссадідда адссссіасі Наддіаїаа аагдсааїасіадідадосі 1320 ссіаааіааа снетаці ісаїддссії сідаааанса сісссааасс ссіадсіаїа 1380 даадісісії агїссаїссіс іаааіааааа щдадацісіа шШашса ссададіда 1440
Ісдіаааїйй адісісісаа ашагїаазд йПоадоддіаяд аддаюдасід дзадносісї 1500 ааасддассі аїснсааді дассісадід адсссудшШа асддсдісда саадшааї 1560 сіаасддаса ссаассадад аададаасса ссдссадсдс сдадссаадс дасдійдаса 1620 їсндасоса осасдодсаїс ісссіддсоді сіддссссосі сісдадаси ссдсіссасс 1680 їсссассдді ддасдащшес аадіссонс сдссіссісї сасасддсас дааассдіюда 1740 сдддсассд9у садсасддаду даайссй сссассосіс сцсссщшс ссНосісіс 1800 ссдссдсіаї адаїадссад ссссаїсссс адсісцшс сссаассіса ісйсісісд 1860 тднойсодо сасаасссда Ісдаїсссса асісссісоді сдісісіссі сдсдадссіс 1920 дісдаїсссс сдсісаадяо їасддсодаїс дайнаїсне ссісісісіа ссісісісї 1980 снагаддос сідстадсіс Носії Шшссагддс дсдадаоіас ааїадаїсдуд 2040 сдаїссаща НМадддсею стадноіцді іссідіні ссаїддосідс дадасасааїї 2100 адаїсідаю асоНаїдаї доанаасцо ісаїасісії дсодаїсіа дісссшад 2160 дадшадода саїсїіаша ашсддаїа дісдадаїс дідаїссаї доНадіасс 2220 сіадасадід ддонНадаїс соїдсіона щайсодіад адайсід анйдсісаді 2280 аасюдддааї сстоддаїда неїадсіда Псодсадата адаїсдац сатюайацдс 2340 таїаїстді Пдонасса донНссодйї аааїсідісї днадаїсіїадісєніда 2400 таадайсо9о Ісоюсіадс їасдіссідї дсадсасна андісадої саїаайй 2460 адсаїдссії ШШацноу адашоадни дісдасідо дсідіадата дшсааюсі 2520 пдісіасі дддсіада їадшсааї сіассідісд дашанна йпааашод 2580 асідїаці дідісаїага існсаїсії Надаїата! сдаїадацш агайносі 2640
Зо дісдаїші їасіднссі Наїдадаїа їайсаїдсі їадаїтасаю ааасаасуд 2700 сіднасаді Наатаднс Пудщшаїсі ааіааасааа іааодаїтадо їазіаїдсідс 2760 ашадні асюдіасії ШИдасаї даассіасду снаайаац адісНнсаїс 2820 аааїааааад саїаннії аабацісо агагтаснода аїдаїціса аїдсадсаїс 2880 тдїдаай Шодсссід ісісаїа сідшай ошодоадасі ошешо9д 2940 пдаїаасіс аїссіднаї Нодідаїсс ппдсадої дсаассаїдісіссддадад 3000 дадассадії дзаданйаддс садсіасадс аодсідаїа дссодсдаш аїдагаїсді 3060
ТІаассанас айдадасої сіасадщдаа сшаддаса дадссасааа сассасаада 3120 аюдайодаї даїсіадада дданосаада їадаїасссі шаноона сюадонда 3180 адашнод дсщдаїано снасдсща асссіддаад дсіаддаасо спасданоя 3240 дасадідазд адіасіційї асдідісаса іадосаїсаа адайдддссіаддаїссас 3300 ацйдіасаса сашосна адістаюда досодсаадді Шаавдісід їдойосіЯі 3360 таїаддссії ссааасдаїс саїсювнад дносаюдад дсшодддаасасадссся 3420 дддіасайц9 сдсдсадсід даїасаадса щдаддаюао саїдацйно дншодса 3480 аадддацшії дадндссад сіссіссаад дссаднадоу ссаднассс адаїсідан 3540 аацаасіад асіасщіад сіадсідщс ашіащшіда дідонНасіаааайааца 3600 ашїшесії Шошода адсаїгаюю дащдааїаа аідадаасі ссдаїднсс 3660
Ісісіагааа іспдащаї ісосіадсіа іссоїасцдіс ойпойсш дашодаюда 3720 щадайодаа ааадодаа! ісаїсіаад даддаїдсса сддсссддсс дідасддсса 3780 сдадсодаасі ссідсаддас аасддадсад ссіссісадс аааїссіассассісаша 3840 ааїададаюа дондащшо сідаддіадс ддссдсона асаадснсі дсадаайсд 3900
Іїсаасдадаї сндадссаа іІсааададда додаїдіада ссіааадсаааададсс 3960 ащдасодіаад додсцасодсс саїасдаааї аайаааддс ідаїдідасс ідісдаїсіс 4020 їсадаассії їіасішаї ашододсог їайШааа Шссасддс ааїдасдаю 4080
Засссаасд адаїсндад ссааісааад аддадща!о їадассіааа дсааіаад 4140 адссаюдасо іаадддсца сдсссаїасд аааїіаанаа адодсідаїді дассідісдя 4200
Ісісїсадаа ссШасійї Наїашод соіаці їааашсса сддсааїдас 4260 чаюдідассі дідсаїссдс Шоссіаїа ааїаадій адшоан даїсдасасд 4320 дісдадаада сасдодссаїй! сіадаассаї снссасаса сісаадссас асіайддад 4380 аасасасаду дасаасасас саїаадаїсс аадддаддсс іссдссодссу ссддіаасса 4440 бо ссссдуссссі сіссісшс Шсіссон НШеса ісісодісіс дайсшодс 4500 спадіачії дашюадсо ададдсодасі ісдідсдсдс ссадаїсоді дясдасдодада 4560 додсддааїсі сдасддсдда асісісдссо дсоїддаїсс дасссддаїсісдсддоддаа 4620 адасісіс ддашюіадаї сідсдаїссд ссананода додадаїдаї ддддадша 4680 ааащшссдс сдідсіааас аадаїсадда ададдддааа аддодсасіа дудшатан 4740 Шаїаїай ісідсідсії сдісаддсії адайіосіа даїсшсніснснн 4800 дюдаїадаа Шоааїссс Ісадсацоі ісаїсодіад ШИСНИ саїдашаї 4860 дасааадса дссісдідсу дадснці діадаїадаа дідаїсаасс аїддсссада 4920
Ісаасаасаї ддсссадддс аїссадассс Юаасссіаа сісіааснс сасаадссдс 4980 аадідсссаа дісіадсісс Неосісдіці Ісддсіссаа дааодсісаад ааїадсдсса 5040 айссаїдсі ддіссідаад ааадасісда ісйсаїдса дааднсідсіссшсдса 5100 їсадідсійс даносдасі дссідсаїдс іІсасснсадї їаддаасосс ідаїасдісд 5160 ссдсісіссс дфаддадсід адсдадаадс сспддадісу сассаїссіа дасасіссді 5220 їІадсссщша ссдссадссі дасддсодіад Іасоддсссі дсідасаїсідсссдсаїа 5280 доУнсосісс дсісадсдас досаїссісд ісаасддаса ісйсадідс ссдіассасд 5340 додсюдаай дасдасаоді дддсадіцдіюд іссасаассс дсасддсаас дасасасддс 5400 садснсоссії саасонадад ісонсссід ндісдадсо сдасосасід аїісіддаїсї 5460 ддссідасда сссадсісід дссдаїссад дадссайсс сдаснсдді дссодсдда 5520 асссадссіа ісадасддіс дасаднасо додсасдісда Нодіаасіа аадсіссну 5580 ддасаассі іїіадддашо ддссасосіс адіасудюдса ссодосіаас дсісадасід 5640 асдссшоа ссдісісдаа аддодаддіса Ісдісддсда сддададай ссаддсдсіда 5700 аадаїссс їддаддсаса сссісідідс іІсаїддсдаа оШісісада ддсдсдааса 5760 сдсссоідда сдссіддаас дасаїссдсі ддааїаадоії сіссодсдаїд сідаасиса 5820
ІсдссонНос дсссдадддс асасссааад адсадісааї ссасадсада дадасссаїа 5880 пснасасс ддааассдад дсіадідсс асіасісії сддсісдіса сддаашсд 5940 ддагадасда Іссддадаїд дасоддідіїс йсдаїсно дсааодсосаа дсісісдіса 6000 аддаадаїаа дадіса дадосіаїсо адсдіадодсод соссіасуй даддсдаасо 6060 дФайаддсс сдсдагсе! іссідсдаса аддссдсаді їададідісд сдсдадайад 6120 аааадсюда дсадсіадад дссдссюдаяд аїассдадсі сдісааїсасіадідаайс 6180 тюдвсаїдсоії юддасдіац сісайсадд нддадссаа Шодноаї дічідюсда 6240
Зо ансносда дісюаюад асаїсісіді анйаідшс Шссссадіоннсідїа 6300 спущшіааї сддсіааісо ссаасадай сддсдаюаа іааададаа агаааноай 6360 сідашіда дідсаааааа аааддаайна даїсідюіо шо аїссссядод 6420 сддсосдсаса асааасдааї асдіссідсі (ддссіасіа ддссаасддса ддсосіддсс 6480 дюасддсса сдадсдаасі даїаїсдааї Істадддайа асадддіаа! ссасдідіад 6540 сіааасосос ссісаїсіаа дсссссаїйї ддасдїідааї діадасасді сдаааїааад 6600 ашссдааї їадааїіаай ющшайодс Шсодссіаї аааїйасдасо даїсдуіаай 6660 дісдіща ісаааайціа сішсації аїааїаасдс дсоддасаїсіасацшаЯ 6720 аайдааааа ааанддіаа Пасісшс ШНсіссаїа 6762 «2105 10 «211» 9259 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 10 дідаїайі ЮДасссааад асаїдссаїй сісацо їІсадінаї ссіассааїд (610) їіадіаассса аасадшаа Насаадіда аїсаасідда аасаадаїйсі асадасідса 120 сасадсасаї Іаасаансі дсдссаааїд ааїдасадад щдашагад дсасіаадсі 180 дуашісаїс адаанно аїсададсаї ааассіщії дасаасадаа адааїйсааа /-240 саадсідсіс адсісадаїд дассаааайа адаасосос дсасадіаїа Ндаассааа 300 азаддаася сасадіадаа аасадасдда даадсіадід сасасіаааа аїадаасіса 360 сідаюдсаїї Шаассдаа іІсайааааа асадассаас аданадас садсіаїсаа /-420 аадасасасі дсюадааїс аасаасідсі азашіоіда ісіассюдаааааасадаї 480 дсадннцй дісссіасад ассаасаші Шааїсада аїдссааїдааааїссца 540 дадаїсідда дадсааасіа айаассасі дадааїсаас аасідсіаїа аїсснадад (610)0) аіїсіддадад сасасіааї!ї аассасідад ссісшодаї садсаїдсад аааійссссаа 660 аасіаїасід іаайсодааа сссаїаадсяо сасаїсааад саасіссай дидадн 720 ддааашцна аааагадаї дддасасс аайдссдіа аасааасссасадддадаас 780 ададіащюа асааїсаааа сіаасаддаа іаадідда Нсадайаа діааддаааа /- 840 бо даїсасад апаадааса дадсаащіа іадсасааді ддааацаса аассій 900 сасааааца сааїсісіад асадсасаса дсаадаїсії ддааюдаю аддаюацда 960 аїсдддааа ааадасадса сасадсаада ісістадаас адаасаїдаа аїшподача 1020 аюдадаща аіщіадасс іаассісщі ссаїісснії ааїадссдіс дсідссаддї 1080 аддаагада дсдссдщдад юссдісдад дасасоасоса дддасосдаї ПодіЧчаЯ 1140 сдоадаїассс дасдсддісу ддааасссса сддсоудісаї сасддсдадс сддаддачод 1200 ддчааванодс ддадідосад дсодаїсосід ссаддаїано аїдідсодсса дісадсаїса 1260
Ісасассааа аднаддссс дааїааца ааапйадааа дсісосаайн даддісідіє 1320 дадаадона ассіаддіас Ідаанассс шюйаїсссі аасіадаїтаії сдаанцсіаа 1380 сіаїаасдаї ссіааддіад сдааїсоне Ненподсодс дссаадасос ааасісддас 1440 сдднсаадс сдісааддса сисіаюдса ассасадіса аспдааїдс сдсійдадід 1500 ссісісаад ШШНІс Посаааааї сашсни ІШаааааа адіаїааш 1560 ддаїсдідса аашсісіс тадаїіоо шідасідід дадіаасаа Шсістаді 1620 дідсосдас їдсідснас Шддадаїй асааїаїсії Ісідааааївс Нсдайасі 1680 ташаїааа ссдісісіаа доассаайос ісаадайса саасааїй дааасцісіс 1740 асаюдацаа аїсаїаіааа д«Шсіааді спуашдас ааданнші іаданцнса 1800
Істааай9до адааасіаї сааасасіаа Шаааааа іаїаададаа дсіссддада 1860
Тааааддісд стаюцйаї їіаїаададіа аацдісдісіа Псісісоді сссаасатаї 1920 аїаайнсіаа дсаюдаацо сшсешй ддасаааадо адсаїдссас аасасаадаа 1980 щаїдісасс дісаїдсно даїссіщШа іддіааадсі ісассісіа іааїстааса 2040 агададаааї садддааааа ісаїнно опойша Шсіаассі ссасааїаас 2100 шаодшШас сашнтшоі пдаїшад ІшШададаа дсоШаїаа саддассітаа 2160 ааїсцці садіасасад іасаасдсад асодсісаїас асдсасдсас асісассісї 2220 адаасасас діаадаааас ссіасассії дадсасснс дааддасіда дссодіаааї 2280 агададанс іІсдаадісас їапйадсосс ісойдісаа сдддааїдіс дсЦассасі 2340
Іааадсаїаа сдссдадааа ісссдіааїа ааїссадіаа ааіасдадса сссдїдссаа 2400 дндааїай даасссдад ддоіадаїйї ссассдсааа ддассіаасс адаїсашс 2460 дсааасадда асіааааїсд діадададсс садасаааад ссШссіаа дадссасісс 2520 адддаадсс ссіїасшад діаїаааац саагасіаді дадосіссіа ааїааасцс 2580 тайшсаї ддссисіаа аайсасісс сааассссіа дсіаїадаад ісісЦаїсс 2640
Зо аїссісіааа іааааадювдао адістації ашсассад адіїдаїсдіааашадіє 2700
Ісісааай їІагаадйда ддоїададда щюдасіддавді дсісіааас ддассіаїсї 2760 їсаадідасс іІсадідадсс суошаасодо сдісдасаад Шааїсіаа сддасассаа 2820 ссададаада даассассдс садсдссдад ссаадсдасу Ндасаїсі ддсдсддсас 2880 досаїсіссс юдсдісіда сссссісісоа адаснссдс Іссассіссс ассодіддсу 2940 дшссааді ссуйссодсс іссісісаса сддсасдааа ссддас9д9до сассддсадс 3000 асдаддаддаї Іїссшссса ссосіссно ссшесссії ссісісссодс сосіаїаааїй 3060 адссадсссс аїссссадсі Ісшсссса ассісаїсиї сісісодідй днсоддсаса 3120 асссдаїсда Іссссаасіс ссісдісдіс ісіссісдса адссісдісуд аїсссссудсі 3180 їсааодіасд дсдаїсодаї! аїсісссіс ісістассії сісісісца адоадссідс 3240 таосісщії ссідіше садасідсо аддіасаайа даїсддсдаї ссадоднад 3300 доссідсіад Поїднеосії данщшссаї ддсідсдадо сасааіадаї сідаїддсдї 3360 тащдаїдодйїї аасцнцдісаї асісйдсда ісіадаісс сшаддаді Наддасаїс 3420 ташаай сддаїаднс дадаїсідію аїссагдії адіасссіад дсадіддаді 3480
Тадаїссою сіднаюді ісдїадаюа айсідано сісадіаасі дддааїссід 3540 ддашансі адсюдіса садаїаадаї сдацісаїд аїгагсіайаісношоад 3600 подссащаї Іссопаааї сідісіона даїснаді сшдагаад дісодісді 3660 дсіадсіасод іссідідсад саснааця іІсаддісата айшШадса сс 3720 нпанодій даїшаїсі дасідддсід їадагадій сааісшоі сідасідддс 3780 щадаїасді нНсааїсіас сідісодій аїшанаа ашоддаїсі діа 3840 саїаїаїсії саїсішая аїагасодаї адащшагїа! дносідісд дшшасі 3900 дниссщшаї дадаїааїй са(дснада їасаїдааас аасдідсідіїасадшаа 3960 таопсцді Паїсіааіа аасаааїтаад даїаддіаа (дсідсадн адїшасід 4020 діасішії (дасаюаас сіасоадсена аїаацадіс псаїсаааі ааааадсаїа 4080 шШшШааї ашсодаїйаї асндаащта щісаїташс адсаїсідід дааншя 4140 дсссідісії саїадсіої пашційї дддасідн сшодойноа їаасісаїюс 4200 тношод даїсснії дсаддаідсаа ссащісісс ддададдада ссадідада 4260
Нпадассадс іасадсадсі дагаддссд сддашаїда їіаїсонаас сацасайо 4320 адасдісіас адідаасіїї аддасададс сасааасасс асаададчідд анпдаїдаїс 4380 тадададой адсаадаїада їассспдаї Фдоносіда дойдаддаг онодосід 4440 60 Файцоснца сдсідддссс ддаадасіа ддаасосна сдаподаса сйдададіа 4500 сідшасої дісасагада саїсааадді ддодссіаду аїссасано їасасасай 4560 тдснаацдіс їаїддаддсо сааддіша адісідідді юсіднНайадоссйссаа 4620 асдаїссаїс (дНнадано сададосії щоддаїасас адсссодддаїасайдсдсу 4680 садсіддаїа саадсащаї ддаїдосаю андаш НКдодсааадоу чашідаді 4740
Юссадсісс Іссааддсса днаддссад Пасссадаї сіданаай аасіаддсіа 4800 сідадсіад сідрсаююі адідашю ойасіаааа іаайадіуі шШссннЯ 4860 шоадаадса їающідої дааіааащда юдаасіссда ідносісіс їаїаааіїсй 4920 даюдаїйсос їадсіаїссо їасаісоно нешодаї! щдащдаїдад айдаааааї 4980 ддаащдісаї дсіааддадао дідссдсддс ссддссдіда сддссасдад сдаасіссід 5040 саддасаасд дадсадссіс сісадсаааї ссіассассії сашаааа дадідадай 5100 чашосіда ддіадсодсс дсонНаасаа дсисідсад аансдісаа сдадаїсну 5160 адссааїсаа ададдадіда шіадассіа аадсааїааї ддадссаїда саїааддодсі 5220 їасдсссаїа сдаааїаайн аааддсідаї ащдассідіс доїсісісадаассшасі 5280
Ішающіїї ддсущіай Шааашсе сасдоасаад асдаїдідас ссаасдадаї 5340 спдадссаа ісазададда дідащіада ссіааадсаа іІааїддадсс адасаїаад 5400 доуснНасосс саїасдааа! аайаааддс юдаїдщдасс ідісддісісісадаассії 5460 тасишаї ашддсаі їайшааа Шссасддс аадасодаїйд їдассідідс 5520 аїссЯсща ссіаїаааїа адішади айдаїс дасасодісд адаадасасд 5580 дссайсіад аассаїсіїс сасасасіса адссасасіа пПддадааса сасадддаса 5640 асасассаїа адаїссаада даддссіссуд ссдссоссоа іаассасссос дссссісісс 5700
ІсСШещше їссуннй Шесадісіс ддісісдаїс Шодссіо діадшода 5760 дадсдадад дсоадсисої дсдсдсссад агсддідсос дддадоддаса одаїсісдсд 5820 осідадасіс ісдссодсої ддаїссддсс соддаїсісдс ддддааоо дсісісддаї 5880 діадаїсідс даїссдссої идадаода дададодаоа доШаааа! йссдссоад 5940 сіааасаада Іісаддаадад дддаааадда сасіащдаїй їатанша їаїашсід 6000 сідснедіс аддсцназдаї дідсіадаїс Шешей сищшаї9 діадаашо 6060 ааїсссісад сапдунсаї садіадіш ісітсаю ашодідаса аадсадссі 6120 соадсддадс ШНОІаяд діадаадіда Ісаассаїдд сссадаїсаа саасаддсс 6180 саддоасаїсс адасссюдаа сссіаасісі аасіссаса адссдсааді дсссаадісєї 6240
Зо аадсіссісс Ісаіднеоду сіссаадаад сісаадааїа дсдссаанс саїдсідаїсє 6300 сідаадааад асісдаїсії саїдсадаад Нсідсіссі Нсосаїсаддснсдан 6360 дсдасідссі дсаїдсісас сісонадд аасодссідді асдісдссдс ісісссідад 6420 дадсщадсо адаадсссії дддісдсасс аїссіадаса сіссуонПадс ссШассудс 6480 садссюаса асдіадіддс дасссідсії дасаїсідсс сдсаїіаддИ сдсіссдсіс 6540 адсдасдодса Іссісдісаа соддодсаїсії садідсссді ассасдадсі ддаашдас 6600 ддсдащодс адіціцісса саасссодсас ддсаасддсу сасддссадс НПсоссісаас 6660 анаадісді Ісссіднаї сдадсдсдас дсасідаїсі ддаїсіддссіддсдассоса 6720 одсісіддссЯ аіссаддадс сансссдас НПсддідсс дсоїддассс адссіаїсду 6780 асдаісддсд днасодоса сдісдацої аасіагаадс іссноїдда саасснаюю 6840 дашоддсс асдсісадіа сддсассод дсіаасодсіс адасідасдс сішідассої 6900 сісдаааддао адаїсаїсодї сддсдасодда дадайсадао сосідаюаа даїсссідда 6960 ддсасосссі сідідсісаї ддсдаадій сісададдсу сдаасасосс суіддасдсс 7020 ддаасдаса іссдсіддаа їааддісісс дсдагсіда асіїсаїсос сдйдсодссс 7080 дададсасас ссааададса дісааїссас адсададода сссаїайсіїасассддаа 7140 ассдаддсіа днодссасіа сісійсодс ісдісасдда ашсдоддаї адасдаїсся 7200 дададаса діонсйсо аїспйддсаа дсосаадсіс Ісдісаадда адаіаадаатю 7260 дісдюдаада сіаїсдадсяа їіаддсдсодсс їасондадо сдаасодіайаддсссодсЯ 7320 ашдсідіссії дсдасдадас сасаднада аідісдсдсо адаїадаааа дсіддадсад 7380 сіададдссуд ссдаддіас сдадсісадїс ааїсасіаді даайсідсаїдсошода 7440 сдіадсіса йсадонод адссааша днаащіої дідсдадіїс Ппосдадісї 7500 дададасаї сісідтаца (дшеше сссадіцш ісщіасно іааіїсддс 7560
Іааїсдссаа садансддс даїдаагааа Ідадаааїаа айднсіда Шідадідс 7620 ааааааааад даанадаїс діоди шодаїсс ссдддодсоддс сдсасаасаа 7680 асдааїасді ссідсндас сіасіаддсс аасдсадаса сіддссдіда сддссасдад 7740 сдаасідаїа ісдаансіа дддаїаасад одіааїссас діїадсіааасдсдсссіс 7800 аїсіаадссс ссашддас дідаашіад асасдісдаа аїааадайш ссдаацада 7860 агзаашон зайдсщше дссіаїааа!ї асдасдда!с діааціодіс динаїсаа 7920 аашютасц саїшаїаа іаасдсідса дасаїсітаса НИОааїй дааааааааї 7980 даїаайцас ІсСшеНи ісіссаїадс айсдсаана саоцнада сддадідаадс 8040 бо асдаїаацдіс асаассаїаа іасаїасіа! їіддааїссдд сісшоссо адіосішії 8100 пддасасіс ддсааадасі Ісшассодо сааацдіссіа сісісддіаа сдассасуй 8160 їТассдададс аддасодсісд діасадддад асасісдоса аадассісц Ідісдадідс 8220 сааасаосісду дсааадддсс дісадсадсс дісіаїадса дзаюшайнаюсшоссу 8280 адсоассаадс дноадсасіс дасаааасаа діоноссда дідснНаааі ддасасісд 8340 дсаааатата НШеНШІ НСНШшОсС аассааасії істотні діссіасас 8400 ташіадаса їасашісс ашіддсас аацаіаааа діощшосіаааайайцад 8460 ашонсд Шаайодаа Шсісода іаансадаї! йдаасіаса адісасісаа 8520 ааааддааа ассадааю сааааащаї аїссаїдна Шадсасаа днасддсосу 8580 ашсаддаяд їадасссдаа НИдадса ссаїдсісас дааасаюас ідідаасно 8640
Ісаїссадії діШааааї іагаааас асааасаааа ісааааааїсаїдааасня 8700 іссасаїщіс аюдагагсаї саїаідіада деанащюаїа аааадіїдаа ааїацісді 8760 дааадйнцоіс сагаднсас дадссісії (дісдадідї сасасісддс ааадссшщаЯ 8820 ісдадіасії садасасісд дсаааїааді тшиссадії адідасаца аїадааааад 8880 адюдсаїаді ІсднНсасаї адсіаасіаа Подисай асааадааас ападаасаа 8940 дсаїааїдаї даснддаса іаашдаааїа ааагасаїад дндадодаа ссааасаїаа 9000 ддаасасад аасаааіада ддасаасаїс аїадаааасяд асаїаасійс асаддайі 9060
Тасдссааї! дсіссасдсс аадіссаїаа дідсісчаю адаїсації даааноай 9120 діаїсашо адасіадіда юнадаю ддадсаїадс сасісідіас дааснсаду 9180 дчанаїдаїд ададаїссас дідсасісса апдсоддсаа асісаасай аспдсасояаї 9240 дддассцої ссісдасаа 9259 «2105 11 «2115 ЗЗ3 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 11 даайндаааа аааацйодіа ацйасісці сії З3 «2105» 12
Зо «211» 24 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 12 аїсдідснс асісдсаїсі аасі 24 «2105 13 «211» 19 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005 13 сіссаїадса йсодсааїа 19 «210» 14 «211» 81 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 14 анадааадс ісасаайда ддісщісда ддадонаас сіадаїасід аапйасссід (610)
Наїсссіаа сіадаїасд а 81 «-2105 15 «2115 61 «2125 ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна 60 «4005» 15 їддсдсодсса адасдсааас ісддассдді ісаадссдіє ааддсаснсе іаїдсаасса (610) с 61 «2105 16 «2115 59 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005 16 ассідноаї пддаідаїсс шШіосадаої дсаассаці сіссддадад дадассавді 59 «2105» 17 «2115 56 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «400» 17 ссадінаддс саднассса даїсдана анаасіадао сіасюдіадс їадсід 56 «2105» 18 «2115» 99 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна -4005» 18 аааааюддаа щісаїдсіа аддададос сдсддссс99 ссудщдасддс сасдадсдаа (10) сіссідсадд асаасддадс адссіссіса дсаааїссі 99 «2105» 19 «2115 56
Зо «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 19 шщаддноааї нпдасдадої адсддссосо НМаасаадсі іІсідсадааї ісдіса 56 «2105» 20 «2115 55 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 20 аддіадаавді даїсаассаї ддсссадаїс аасаасаїдд сссадддсаї ссада 55 «2105» 21 «2115» 91 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «4005» 21 сдсдадаїад аааадсідда дсадсіадад дссдссдад діассдадсі сдісааїсас (610) тадідаанс юсаїдсай ддасоатю с 91 «2105» 22 «211» 67 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Рекомбінантна «400» 22 бо сіадддаїаа саддаїааїс сасдюіадс їааасдсосс сісаїсіаад сссссашд (610)
дасудоюда 67
Claims (23)
1. Рекомбінантна молекула ДНК, яка містить послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2, 5ЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4, 5ЕО 10 МО: 5, 5ЕО 0 МО: 6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕБЕО ІЮ МО:8 ї 5БО ІЮО МО:10, або її комплементи, що вказує на наявність трансформанту кукурудзи МОМ 87419, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить БЕО ІЮ МО: 10.
2. Рекомбінантна молекула ДНК за п. 1, де молекула ДНК отримана від трансгенної рослини кукурудзи або насінини, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮ МО: 10.
3. Рекомбінантна молекула ДНК за п. 1, де молекула ДНК являє собою амплікон для діагностики наявності ДНК, отриманої із трансформанту кукурудзи МОМ 87419, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
4. Рекомбінантна молекула ДНК за п. 1, де молекула ДНК отримана з рослини кукурудзи, клітини, насінини, рослини-нащадка або частини рослини з трансгенної кукурудзи, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
5. Молекула ДНК, яка містить суміжну послідовність ДНК 5ЕО ІЮО МО: 10 достатньої довжини, щоб функціонувати як зонд ДНК, який гібридизується у жорстких умовах гібридизації з послідовністю ДНК, вибраною з групи, яка складається із ЗЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО І МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО ІЮО МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО І МО: 9 і ЗЕБЕО І МО:10, де молекула ДНК не гібридизується у жорстких умовах гібридизації з послідовністю ДНК, яка не містить послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 5, 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7, ЗЕОІО МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9 ї БЕО ІЮ МО: 10, і де вказана молекула ДНК містить 5ЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2.
6. Пара молекул ДНК, яка містить першу молекулу ДНК і другу молекулу ДНК, де перша Зо молекула ДНК є фрагментом послідовності ЗЕО ІО МО: 9, а друга молекула ДНК є фрагментом геномної ДНК кукурудзи трансформанту кукурудзи МОМ 87419, ії де і перша, і друга молекули ДНК містять послідовність ДНК із суміжних нуклеотидів достатньої довжини, щоб функціонувати як праймери ДНК при їхньому спільному використанні у реакції ампліфікації з ДНК, що містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, для отримання амплікону для діагностики трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку, де вказаний амплікон містить 5ЕО ІО МО: 1 або ЗЕО ІО МО:2, і де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
7. Спосіб детекції наявності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК, де спосіб включає: а) контактування зразка з молекулою ДНК за п. 5; р) застосування до зразка і молекули ДНК жорстких умов гібридизації; і с) детекцію гібридизації молекули ДНК з молекулою ДНК-мішені у зразку, де гібридизація молекули ДНК з молекулою ДНК-мішені свідчить про наявність трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК, і де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
8. Спосіб детекції наявності трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК, де спосіб включає: а) контактування зразка з парою молекул ДНК за п. 6; Б) здійснення реакції ампліфікації, достатньої для отримання ДНК амплікону, що містить послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 3, ЗЕО ІО МО: 4, 5ЕО І МО: 5, 5ЕО І МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 7 і ЗЕОІЮ МО: 8; і с) детекцію наявності ДНК амплікону в реакції, де наявність ДНК амплікону в реакції свідчить про наявність трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку ДНК, і де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
9. Набір для детекції ДНК, який містить: а) молекулу ДНК, яка містить ЗЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2; або Б) пару молекул ДНК, яка містить першу молекулу ДНК і другу молекулу ДНК, де перша молекула ДНК є фрагментом послідовності ЗЕО ІО МО: 9, а друга молекула ДНК є фрагментом геномної ДНК кукурудзи трансформанту кукурудзи МОМ 87419, і де і перша, і друга молекули ДНК містять послідовність ДНК із суміжних нуклеотидів достатньої довжини, щоб функціонувати бо як праймери ДНК при їхньому спільному використанні у реакції ампліфікації з ДНК, що містить Зо трансформант кукурудзи МОМ 87419 для отримання амплікону для діагностики трансформанту кукурудзи МОМ 87419 у зразку, де вказаний амплікон містить 5ЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІО МО:2, і де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
10. Трансгенна рослина кукурудзи, насінина, клітина або частина рослини, яка містить нуклеотидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 1 і 5ЗЕО ІЮО МО: 2, а також молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує білок дикамба монооксигенази (МО) і білок фосфінотрицинацетилтрансферази (РАТ).
11. Трансгенна рослина кукурудзи, насінина або клітина за п. 10, де рослина, насінина або клітина стійка до глюфосинату або дикамба, або гербіцидів глюфосинату і дикамба, і де рослина, насінина або клітина містить 5ЕО ІЮ МО: 10.
12. Трансгенна рослина кукурудзи, насінина, клітина або частина рослини, яка містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
13. Трансгенна рослина кукурудзи або насінина за п. 12, де рослина кукурудзи або насінина є гібридом, який має щонайменше одну батьківську рослину, яка містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮ МО: 10.
14. Спосіб вирощування трансгенної кукурудзи, який включає висівання трансгенної кукурудзи, яка містить трансформант кукурудзи МОМ 87419, на ділянці і застосування ефективної дози дикамба або глюфосинату, або гербіцидів дикамба і глюфосинату для контролювання росту бур'янів на ділянці, не ушкоджуючи трансгенну кукурудзу, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить 5ЕО І МО: 10.
15. Спосіб за п. 14, де ефективна доза гербіциду глюфосинату в цілому складає від 0,1 фунта (0,045 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) до 16 фунтів (7,257 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) гербіциду глюфосинату впродовж періоду вегетації.
16. Спосіб за п. 14, де ефективна доза гербіциду глюфосинату в цілому складає від 0,4 фунта (0,181 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) до 1,59 фунта (0,721 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) гербіциду глюфосинату впродовж періоду вегетації.
17. Спосіб за п. 14, де ефективна доза гербіциду дикамба в цілому складає від 0,1 фунта (0,045 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) до 16 фунтів (7,257 кг) кислотного еквівалента на Зо акр (0,405 га) гербіциду дикамба впродовж періоду вегетації.
18. Спосіб за п. 14, де ефективна доза гербіциду дикамба в цілому складає від 0,5 фунта (0,227 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) до 2 фунтів (0,907 кг) кислотного еквівалента на акр (0,405 га) гербіциду дикамба впродовж періоду вегетації.
19. Спосіб вирощування трансгенної рослини кукурудзи, стійкої до гербіцидів глюфосинату і дикамба, де спосіб включає: а) посадку насінини кукурудзи, що містить трансформант МОМ 87419; р) забезпечення росту рослини із вказаної насінини; і с) обробку рослини глюфосинатом або дикамба, або гербіцидами глюфосинату і дикамба, де вказаний трансформант кукурудзи МОМ 87419 містить ЗЕО ІЮО МО: 10.
20. Спосіб отримання рослини, стійкої до застосування гербіцидів глюфосинату і дикамба, де спосіб включає: а) забезпечення ДНК-конструкта, який містить вставку трансгена, що включає 5ЕО ІЮО МО: 9; р) введення ДНК-конструкта у клітину рослини кукурудзи; і с) регенерацію клітини рослини кукурудзи для отримання рослини кукурудзи, такої як рослина, стійка до застосування гербіцидів глюфосинату і дикамба.
21. Спосіб за п. 20, де введення ДНК-конструкта у клітину рослини кукурудзи приводить у результаті до отримання 5ЕО ІЮ МО: 10 як частини геному клітини кукурудзи.
22. Рослина кукурудзи, отримана способом за п. 20.
23. Рослина-нащадок, насінина або частина рослини кукурудзи за п. 22, яка містить ЗЕО ІЮ МО: 10.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201461968342P | 2014-03-20 | 2014-03-20 | |
| PCT/US2015/019663 WO2015142571A1 (en) | 2014-03-20 | 2015-03-10 | Transgenic maize event mon 87419 and methods of use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA124487C2 true UA124487C2 (uk) | 2021-09-29 |
Family
ID=54141517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201610556A UA124487C2 (uk) | 2014-03-20 | 2015-03-10 | Рекомбінантна молекула днк, яка надає рослині кукурудзи стійкості до глюфосинату і дикамба, та спосіб її використання |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10113178B2 (uk) |
| EP (1) | EP3119186B1 (uk) |
| JP (1) | JP6606164B2 (uk) |
| KR (1) | KR102308359B1 (uk) |
| CN (1) | CN107072163A (uk) |
| AP (1) | AP2016009479A0 (uk) |
| AR (2) | AR099816A1 (uk) |
| AU (1) | AU2015231804B2 (uk) |
| BR (1) | BR112016021520A2 (uk) |
| CA (1) | CA2942316A1 (uk) |
| CL (1) | CL2016002357A1 (uk) |
| EA (1) | EA201691886A1 (uk) |
| EC (1) | ECSP16075632A (uk) |
| ES (1) | ES2965721T3 (uk) |
| MA (1) | MA39747A (uk) |
| MX (1) | MX365442B (uk) |
| PE (2) | PE20211797A1 (uk) |
| PH (1) | PH12016501831A1 (uk) |
| UA (1) | UA124487C2 (uk) |
| UY (1) | UY36039A (uk) |
| WO (1) | WO2015142571A1 (uk) |
Families Citing this family (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2743728T3 (es) | 2011-03-30 | 2020-02-20 | Monsanto Technology Llc | Evento transgénico MON 88701 del algodón y procedimientos de uso del mismo |
| BR112019011293A2 (pt) | 2016-12-19 | 2019-10-08 | Basf Se | compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| US11425910B2 (en) | 2017-02-21 | 2022-08-30 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3606912A1 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-12 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018188962A1 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018202487A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted 5-(haloalkyl)-5-hydroxy-isoxazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018202491A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018219797A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3642187A1 (en) | 2017-06-19 | 2020-04-29 | Basf Se | 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019020283A1 (en) | 2017-07-27 | 2019-01-31 | Basf Se | USE OF HERBICIDE COMPOSITIONS BASED ON L-GLUFOSINATE IN TOLERANT FIELD CROPS |
| WO2019025250A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019038042A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| BR112020004441B1 (pt) | 2017-09-18 | 2024-01-16 | Basf Se | Compostos da fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso de compostos e método não-terapêutico de combate de fungos |
| US11147275B2 (en) | 2017-11-23 | 2021-10-19 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| WO2019145221A1 (en) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | BASF Agro B.V. | New agrochemical formulations |
| EP3717650A4 (en) * | 2018-02-02 | 2021-09-01 | Monsanto Technology LLC | CORN VARIANT MON87429 AND METHOD OF USE THEREOF |
| WO2019154665A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| WO2019154663A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| UA126830C2 (uk) | 2018-03-01 | 2023-02-08 | Басф Агро Б.В. | Фунгіцидні композиції мефентрифлуконазолу |
| WO2019219464A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| CA3057917A1 (en) * | 2018-10-16 | 2020-04-16 | Monsanto Technology Llc | Brassica event mon94100 and methods of use thereof |
| ES2955718T3 (es) | 2018-10-23 | 2023-12-05 | Basf Se | Compuestos pesticidas tricíclicos |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3670501A1 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-24 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| MA54689B1 (fr) | 2019-01-11 | 2023-07-31 | Basf Se | Formes cristallines de 1-(1,2-diméthylpropyl)-n-éthyl-5-méthyl-n-pyridazine-4-yl-pyrazole-4-carboxamide |
| CN109628632A (zh) * | 2019-02-11 | 2019-04-16 | 黄埔出入境检验检疫局综合技术服务中心 | 一种用于转基因玉米mon87419品系特异性检测的引物组合、探针、试剂盒及方法 |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2020239517A1 (en) | 2019-05-29 | 2020-12-03 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| MX2021014864A (es) | 2019-06-06 | 2022-01-18 | Basf Se | N-(pirid-3-il)carboxamidas fungicidas. |
| WO2020244970A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | New carbocyclic pyridine carboxamides |
| WO2020244969A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | Pyridine derivatives and their use as fungicides |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| WO2021063735A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | New bicyclic pyridine derivatives |
| WO2021063736A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | Bicyclic pyridine derivatives |
| EP3903584A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| EP3903581A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i |
| EP3903583A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii |
| CN115443267A (zh) | 2020-04-28 | 2022-12-06 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀害虫化合物 |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2021249800A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022090071A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| KR20230121790A (ko) | 2020-12-14 | 2023-08-21 | 바스프 에스이 | 술폭시민 살충제 |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| CN113201531B (zh) * | 2021-04-27 | 2023-06-27 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 转基因玉米事件lw2-1及其检测方法 |
| EP4333616A1 (en) | 2021-05-03 | 2024-03-13 | Basf Se | Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms |
| EP4091451A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-23 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022243111A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicides |
| WO2022243109A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Basf Se | New substituted quinolines as fungicides |
| KR20240008857A (ko) | 2021-05-18 | 2024-01-19 | 바스프 에스이 | 살진균제로서의 신규한 치환된 피리딘 |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023011957A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Basf Se | (3-quinolyl)-quinazoline |
| WO2023011958A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Basf Se | (3-pirydyl)-quinazoline |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| WO2023156402A1 (en) | 2022-02-17 | 2023-08-24 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2024028243A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Basf Se | Pyrazolo pesticidal compounds |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
Family Cites Families (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6069298A (en) | 1993-02-05 | 2000-05-30 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods and an acetyl CoA carboxylase gene for conferring herbicide tolerance and an alteration in oil content of plants |
| US5850019A (en) | 1996-08-06 | 1998-12-15 | University Of Kentucky Research Foundation | Promoter (FLt) for the full-length transcript of peanut chlorotic streak caulimovirus (PCLSV) and expression of chimeric genes in plants |
| US7105724B2 (en) | 1997-04-04 | 2006-09-12 | Board Of Regents Of University Of Nebraska | Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms |
| US7022896B1 (en) | 1997-04-04 | 2006-04-04 | Board Of Regents Of University Of Nebraska | Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms |
| JP2001519663A (ja) | 1997-04-04 | 2001-10-23 | ピー． ウィークス、ドナルド | 遺伝子導入ジカンバ−分解生物体を製造及び使用するための方法及び材料 |
| US5914451A (en) | 1998-04-06 | 1999-06-22 | Monsanto Company | Efficiency soybean transformation protocol |
| US20090087878A9 (en) * | 1999-05-06 | 2009-04-02 | La Rosa Thomas J | Nucleic acid molecules associated with plants |
| AU2002218413A1 (en) | 2000-11-30 | 2002-06-11 | Ses Europe N.V. | Glyphosate resistant transgenic sugar beet characterised by a specific transgene insertion (t227-1), methods and primers for the detection of said insertion |
| US6818807B2 (en) | 2001-08-06 | 2004-11-16 | Bayer Bioscience N.V. | Herbicide tolerant cotton plants having event EE-GH1 |
| US7166771B2 (en) | 2002-06-21 | 2007-01-23 | Monsanto Technology Llc | Coordinated decrease and increase of gene expression of more than one gene using transgenic constructs |
| DK2267136T3 (da) | 2003-01-31 | 2013-11-04 | Monsanto Technology Llc | Glyphosattolerante lucerne-begivenheder og fremgangsmåder til detektering deraf |
| US7381861B2 (en) | 2003-02-12 | 2008-06-03 | Monsanto Technology Llc | Cotton event MON 88913 and compositions and methods for detection thereof |
| CA2524493C (en) | 2003-05-02 | 2013-06-25 | Dow Agrosciences Llc | Corn event tc1507 and methods for detection thereof |
| US7157281B2 (en) | 2003-12-11 | 2007-01-02 | Monsanto Technology Llc | High lysine maize compositions and event LY038 maize plants |
| JP2007530036A (ja) | 2004-03-25 | 2007-11-01 | シンジェンタ パーティシペーションズ アクチェンゲゼルシャフト | Ｍｉｒ６０４系統トウモロコシ |
| US7323556B2 (en) * | 2004-09-29 | 2008-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Corn event DAS-59122-7 and methods for detection thereof |
| US20090199308A1 (en) | 2005-08-30 | 2009-08-06 | Kimberly Zobrist Duff | Transgenic plants with enhanced agronomic traits |
| US8993846B2 (en) * | 2005-09-06 | 2015-03-31 | Monsanto Technology Llc | Vectors and methods for improved plant transformation efficiency |
| EP1934354B1 (en) | 2005-10-13 | 2017-11-08 | Monsanto Technology, LLC | Methods for producing hybrid seed |
| CA2909340C (en) | 2006-05-25 | 2019-07-02 | Monsanto Technology Llc | A method to identify disease resistant quantitative trait loci in soybean and compositions thereof |
| US7884262B2 (en) | 2006-06-06 | 2011-02-08 | Monsanto Technology Llc | Modified DMO enzyme and methods of its use |
| US7855326B2 (en) | 2006-06-06 | 2010-12-21 | Monsanto Technology Llc | Methods for weed control using plants having dicamba-degrading enzymatic activity |
| CA2653742C (en) | 2006-06-06 | 2016-01-05 | Monsanto Technology Llc | Method for selection of plant cells transformed with a polynucleotide encoding dicamba monooxygenase using auxin-like herbicides |
| US8207092B2 (en) | 2006-10-16 | 2012-06-26 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for improving plant health |
| AP2885A (en) | 2006-10-16 | 2014-05-31 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for improving plant health |
| US7939721B2 (en) | 2006-10-25 | 2011-05-10 | Monsanto Technology Llc | Cropping systems for managing weeds |
| CN101528033A (zh) * | 2006-10-25 | 2009-09-09 | 孟山都技术公司 | 控制杂草的种植系统 |
| CL2008000083A1 (es) | 2007-01-12 | 2008-07-18 | Monsanto Technology Llc Soc Or | Polipeptido cristalizado de dicamba monooxigenasa (dmo); molecula que comprende una superficie de union para dicamba; celula vegetal que comprende dmo. |
| US7838729B2 (en) | 2007-02-26 | 2010-11-23 | Monsanto Technology Llc | Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof |
| WO2008112633A2 (en) | 2007-03-09 | 2008-09-18 | Monsanto Technology Llc | Method of meristem excision and transformation |
| WO2008130985A2 (en) * | 2007-04-16 | 2008-10-30 | Monsanto Technology, Llc | Plants with multiple transgenes on a chromosome |
| WO2009085982A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-07-09 | Monsanto Technology Llc | Method to enhance yield and purity of hybrid crops |
| WO2009091518A2 (en) * | 2008-01-15 | 2009-07-23 | Monsanto Technology, Llc | Isolated novel nucleic acid and protein molecules from corn and methods of using those molecules to generate transgenic plant with enhanced agronomic traits |
| KR101597376B1 (ko) | 2008-02-15 | 2016-02-26 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 트랜스제닉 계통 ｍｏｎ８７７６９에 상응하는 대두 식물 및 종자, 및 그의 검출 방법 |
| BRPI1007175A2 (pt) | 2009-01-22 | 2015-08-18 | Syngenta Participations Ag | Polipeptídeos hidroxifenilpriruvato dioxigenase mutantes e métodos de uso |
| JP2011001290A (ja) | 2009-06-18 | 2011-01-06 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 雑草の防除方法 |
| NZ598598A (en) * | 2009-08-19 | 2014-05-30 | Dow Agrosciences Llc | Detection of aad-1 event das-40278-9 |
| CN102575263B (zh) * | 2009-08-19 | 2014-12-24 | 陶氏益农公司 | 在双子叶植物作物的田间对aad-1单子叶自生植物的控制 |
| CA2771538C (en) * | 2009-08-19 | 2019-06-04 | Dow Agrosciences Llc | Aad-1 event das-40278-9, related transgenic corn lines, and event-specific identification thereof |
| CN102596984A (zh) * | 2009-09-17 | 2012-07-18 | 孟山都技术公司 | 大豆转基因事件mon 87708及其使用方法 |
| UA115762C2 (uk) * | 2009-11-23 | 2017-12-26 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Рекомбінантна молекула днк, яка вказує на присутність трансгенної події mon 87427 маїсу |
| RU2583658C2 (ru) | 2009-11-24 | 2016-05-10 | ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи | Борьба с двудольными самосевными aad растениями в однодольных сельскохозяйственных культурах |
| MX2012006936A (es) * | 2009-12-17 | 2012-07-17 | Pioneer Hi Bred Int | Evento de maiz dp-004114-3 y metodos para su deteccion. |
| AU2011261580B2 (en) | 2010-06-04 | 2013-12-19 | Monsanto Technology Llc | Transgenic brassica event MON 88302 and methods of use thereof |
| JP2014509866A (ja) | 2011-03-25 | 2014-04-24 | モンサント テクノロジー エルエルシー | 植物調節要素およびその使用 |
| ES2743728T3 (es) | 2011-03-30 | 2020-02-20 | Monsanto Technology Llc | Evento transgénico MON 88701 del algodón y procedimientos de uso del mismo |
| UA126903C2 (uk) * | 2012-05-08 | 2023-02-22 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Об'єкт кукурудзи mon 87411 |
-
2015
- 2015-03-10 UA UAA201610556A patent/UA124487C2/uk unknown
- 2015-03-10 KR KR1020167027435A patent/KR102308359B1/ko active IP Right Grant
- 2015-03-10 CN CN201580025678.8A patent/CN107072163A/zh active Pending
- 2015-03-10 MA MA039747A patent/MA39747A/fr unknown
- 2015-03-10 US US14/643,650 patent/US10113178B2/en active Active
- 2015-03-10 AU AU2015231804A patent/AU2015231804B2/en active Active
- 2015-03-10 WO PCT/US2015/019663 patent/WO2015142571A1/en active Application Filing
- 2015-03-10 JP JP2017501065A patent/JP6606164B2/ja active Active
- 2015-03-10 CA CA2942316A patent/CA2942316A1/en active Pending
- 2015-03-10 AP AP2016009479A patent/AP2016009479A0/en unknown
- 2015-03-10 MX MX2016012147A patent/MX365442B/es active IP Right Grant
- 2015-03-10 EA EA201691886A patent/EA201691886A1/ru unknown
- 2015-03-10 ES ES15764078T patent/ES2965721T3/es active Active
- 2015-03-10 EP EP15764078.0A patent/EP3119186B1/en active Active
- 2015-03-10 BR BR112016021520A patent/BR112016021520A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-03-10 PE PE2021000618A patent/PE20211797A1/es unknown
- 2015-03-10 PE PE2016001659A patent/PE20161403A1/es unknown
- 2015-03-20 UY UY0001036039A patent/UY36039A/es active IP Right Grant
- 2015-03-20 AR ARP150100853A patent/AR099816A1/es unknown
-
2016
- 2016-09-19 PH PH12016501831A patent/PH12016501831A1/en unknown
- 2016-09-20 CL CL2016002357A patent/CL2016002357A1/es unknown
- 2016-09-20 EC ECIEPI201675632A patent/ECSP16075632A/es unknown
-
2018
- 2018-08-23 US US16/110,991 patent/US11098321B2/en active Active
-
2020
- 2020-05-08 AR ARP200101329A patent/AR118897A2/es unknown
-
2021
- 2021-07-26 US US17/385,779 patent/US20220010326A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220010326A1 (en) | Transgenic Maize Event MON 87419 and Methods of Use Thereof | |
| US20210054398A1 (en) | Cotton transgenic event mon 88701 and methods of use thereof | |
| JP5957447B2 (ja) | 遺伝子組換えアブラナ事象ｍｏｎ８８３０２および同使用方法 | |
| RU2624025C2 (ru) | Трансгенный объект сои mon 87708 и способы его применения | |
| UA116975C2 (uk) | Спосіб боротьби із комахами-шкідниками та стійка до комах-шкідників рослина сої | |
| US11198887B2 (en) | Corn transgenic event MON 95379 and methods for detection and uses thereof | |
| KR102258496B1 (ko) | 옥수수 이벤트 mon87429 및 이의 사용 방법 | |
| US20220033838A1 (en) | Brassica event mon94100 and methods of use thereof | |
| EA040754B1 (ru) | Трансгенное событие кукурузы mon 87419 и способы его применения | |
| EA044838B1 (ru) | Трансформант кукурузы mon87429 и способы его использования | |
| TW202409284A (zh) | 轉殖基因甜菜事件ｂｖ＿ｃｓｍ６３７１３及其偵測及使用方法 | |
| EA044068B1 (ru) | Объект brassica mon94100 и способы его применения |