UA120246C2 - Молекула рекомбінантної днк, яка вказує на присутність об'єкта кукурудзи mon 87411 та спосіб її виявлення - Google Patents
Молекула рекомбінантної днк, яка вказує на присутність об'єкта кукурудзи mon 87411 та спосіб її виявлення Download PDFInfo
- Publication number
- UA120246C2 UA120246C2 UAA201413078A UAA201413078A UA120246C2 UA 120246 C2 UA120246 C2 UA 120246C2 UA A201413078 A UAA201413078 A UA A201413078A UA A201413078 A UAA201413078 A UA A201413078A UA 120246 C2 UA120246 C2 UA 120246C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- dna
- transgenic
- iom
- zeo
- corn
- Prior art date
Links
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 title claims abstract description 269
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 title claims abstract description 228
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 title claims abstract description 95
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 title claims abstract description 95
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 266
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 80
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 432
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 181
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 166
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 160
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 159
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 claims description 75
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 claims description 56
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 claims description 56
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 claims description 54
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 42
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 41
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 39
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 36
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 33
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 31
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 21
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 17
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 15
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 claims description 13
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 claims description 12
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims description 11
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 11
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 11
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims description 10
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 claims description 10
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 4
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 claims 1
- OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N Bromadiolone Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC(Br)=CC=2)C=CC=1C(O)CC(C=1C(OC2=CC=CC=C2C=1O)=O)C1=CC=CC=C1 OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100310222 Caenorhabditis briggsae she-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 240000006055 Dacrydium cupressinum Species 0.000 claims 1
- 235000018782 Dacrydium cupressinum Nutrition 0.000 claims 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 claims 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 claims 1
- 241000697033 Ostracion meleagris Species 0.000 claims 1
- 241001311547 Patina Species 0.000 claims 1
- 241000159610 Roya <green alga> Species 0.000 claims 1
- 241001441723 Takifugu Species 0.000 claims 1
- 241000482268 Zea mays subsp. mays Species 0.000 claims 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 claims 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 133
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 133
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 113
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 96
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 93
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 86
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 66
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 40
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 38
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 35
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 35
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 33
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 31
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 29
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 29
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 27
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 27
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 26
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 25
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 24
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 23
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 23
- 238000003070 Statistical process control Methods 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 21
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 19
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 230000008653 root damage Effects 0.000 description 13
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 11
- 238000013461 design Methods 0.000 description 11
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 11
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 10
- 101100498160 Mus musculus Dach1 gene Proteins 0.000 description 9
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 9
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 9
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 8
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 8
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 5
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 5
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 4
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 4
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 4
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 4
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 4
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 3
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 description 3
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 108010020183 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 101710197633 Actin-1 Proteins 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 102100030621 Carboxypeptidase A4 Human genes 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N D-nopaline Chemical group NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 2
- IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N D-octopine Chemical group [O-]C(=O)[C@@H](C)[NH2+][C@H](C([O-])=O)CCCNC(N)=[NH2+] IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N 0.000 description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 2
- 101000772572 Homo sapiens Carboxypeptidase A4 Proteins 0.000 description 2
- 240000007218 Ipomoea hederacea Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101000987816 Triticum aestivum 16.9 kDa class I heat shock protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 2
- 102100028968 Tubulin alpha-1A chain Human genes 0.000 description 2
- 101710108834 Tubulin alpha-1A chain Proteins 0.000 description 2
- 101710193110 Tubulin alpha-3 chain Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 2
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000009193 crawling Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 208000033065 inborn errors of immunity Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 208000033937 musculocontractural type Ehlers-Danlos syndrome Diseases 0.000 description 2
- 229940028444 muse Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 238000009401 outcrossing Methods 0.000 description 2
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 2
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 101150101112 7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241001182632 Akko Species 0.000 description 1
- 102000007347 Apyrase Human genes 0.000 description 1
- 108010007730 Apyrase Proteins 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 101100478187 Arabidopsis thaliana MOS4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241001522729 Bassia <hydrozoan> Species 0.000 description 1
- 101100167365 Caenorhabditis elegans cha-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100022533 Calcium-binding protein 39 Human genes 0.000 description 1
- 235000008536 Capsicum baccatum var pendulum Nutrition 0.000 description 1
- 244000003211 Capsicum baccatum var. pendulum Species 0.000 description 1
- 241000131329 Carabidae Species 0.000 description 1
- 101000746263 Conus leopardus Conotoxin Lp5.1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N D-Octopin Natural products OC(=O)C(C)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N D-ribulose 1,5-bisphosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 description 1
- 235000002756 Erythrina berteroana Nutrition 0.000 description 1
- 244000088811 Erythrina rubrinervia Species 0.000 description 1
- 235000002753 Erythrina rubrinervia Nutrition 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000899411 Homo sapiens Calcium-binding protein 39 Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 240000002329 Inga feuillei Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150049547 Lyar gene Proteins 0.000 description 1
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 1
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 241001466030 Psylloidea Species 0.000 description 1
- 240000005499 Sasa Species 0.000 description 1
- 206010040007 Sense of oppression Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000592344 Spermatophyta Species 0.000 description 1
- 102000004523 Sulfate Adenylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010022348 Sulfate adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000383558 Thalia <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 241000838698 Togo Species 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- BQVYVGJIUMNETO-HVIRUEHBSA-N [(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(4-carbamoyl-1,3-selenazol-2-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]methyl]phosphinic acid Chemical compound NC(=O)C1=C[se]C([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)CP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=N1 BQVYVGJIUMNETO-HVIRUEHBSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- IRLPACMLTUPBCL-FCIPNVEPSA-N adenosine-5'-phosphosulfate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@@H](CO[P@](O)(=O)OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O IRLPACMLTUPBCL-FCIPNVEPSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229940117702 breo Drugs 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000014107 chromosome localization Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000010154 cross-pollination Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000024346 drought recovery Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- YYJNOYZRYGDPNH-MFKUBSTISA-N fenpyroximate Chemical compound C=1C=C(C(=O)OC(C)(C)C)C=CC=1CO/N=C/C=1C(C)=NN(C)C=1OC1=CC=CC=C1 YYJNOYZRYGDPNH-MFKUBSTISA-N 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003760 hair shine Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006278 hypochromic anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009399 inbreeding Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 description 1
- 210000000745 plant chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- MXRGZXBFSKSZPH-UHFFFAOYSA-N protheobromine Chemical compound O=C1N(CC(O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 MXRGZXBFSKSZPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
- C12N15/8275—Glyphosate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Physiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Management, Administration, Business Operations System, And Electronic Commerce (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Винахід стосується молекули рекомбінантної ДНК, яка вказує на присутність трансгенного об'єкта MON 87411. Винахід також стосується праймерів, зондів та способів виявлення вищезазначеної молекули. Крім того винахід стосується рослини кукурудзи, яка містить вищезазначену молекулу і є стійкою до гліфосату та інсектицидною проти комах роду Diabrotica, її насіння, неживого рослинного матеріалу, способу одержання та вирощування.
Description
ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
Дана заявка претендує на пріоритет попередньої заявки Сполучених Штатів Америки Мо 61/644368, поданої 8 травня 2012 року, яка включена в даний винахід шляхом посилання у всій повноті.
ВКЛЮЧЕННЯ ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
Перелік послідовностей, що знаходиться в файлі під найменуванням "мОоМ5ЗОвВУМО 5Т25.х, створеному 6 травня 2013 року, розмір якого становить 230 кілобайт (розмір виміряний згідно з Місго5ой УМміпдом5Ф), в даному винаході представлений в електронному вигляді і включений в нього шляхом посилання.
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Винахід стосується трансгенного об'єкта 7єа таух МОМ 87411. Об'єкт має два механізми дії, що являють собою стійкість до ураження злаковими кореневими черв'яками і толерантність до гербіциду гліфосату. Даний винахід також стосується рослин, частин рослин, насіння рослин, клітин рослин, сільськогосподарських продуктів і способів, пов'язаних з об'єктом МОМ 87411, і розглядає одержання нуклеотидних молекул, які є унікальними для згаданого об'єкта і були створені шляхом вставки трансгенної ДНК в геном рослини 2еа таубх.
РІВЕНЬ ВИНАХОДУ
У багатьох регіонах світу кукурудза (7еа тау5) є важливою культурою, яку піддають біотехнологічним розробкам з метою одержання зерна з бажаними ознаками. Експресія в рослині трансгена стійкості до комах або толерантності до гербіцидів може надавати рослині бажані ознаки стійкості до комах і/або толерантності до гербіцидів, але на експресію таких трансгенів може впливати множина різних факторів, які включають в себе орієнтацію і композицію касет, що запускають експресію окремих генів, які переносяться в хромосому рослини, і хромосомну локалізацію і геномний результат вставки трансгена. Наприклад, окремі об'єкти можуть мати варіанти по рівню і характеру експресії трансгена, які в інших відношеннях ідентичні, за винятком сайта хромосомної вставки трансгена. Деякі об'єкти також можуть мати небажані фенотипічні або агрономічні відмінності. Тому часто доводиться одержувати і аналізувати велику кількість окремих трансформаційних об'єктів рослин з метою вибору об'єкта, що має поліпшені властивості відносно бажаної ознаки і оптимальні фенотипічні і
Зо сільськогосподарські характеристики, необхідні для придатності об'єкта для комерційних цілей.
Для такої селекції часто потрібне всебічне визначення молекулярних характеристик, а також дослідження численних об'єктів в тепличних і польових умовах протягом ряду років, в декількох місцеположеннях і при різних умовах, щоб одержати можливість зібрати значну кількість агрономічних, фенотипічних і молекулярних даних. Одержані дані і спостереження повинні бути проаналізовані колективом вчених і агрономів з метою селекції придатного в комерційному відношенні об'єкта. Після селекції такий об'єкт можна використовувати для інтрогресії бажаної ознаки в інші генетичні середовища за допомогою способів селекції рослин, і, таким чином, одержувати ряд різних сортів рослин, які містять бажану ознаку і відповідним чином адаптовані до конкретних місцевих умов росту.
Для створення трансгенної рослини, що містить один об'єкт трансформації, частину конструкції рекомбінантної ДНК переносять в геном клітини кукурудзи, і потім вирощують цю клітину кукурудзи до рослини. Клітину кукурудзи, в яку спочатку переноситься об'єкт, піддають регенерації для одержання покоління Ко. Рослини Ко і потомство рослин від рослини Ко можна тестувати відносно будь-якої бажаної ознаки (ознак), але на ефективність об'єкта можуть впливати фактори цис- і/або транс-орієнтації що стосуються сайта інтеграції у випадку трансформації. На фенотип, що надається об'єктом, також може впливати розмір і дизайн ДНК- конструкції, які можна варіювати шляхом комбінації генетичних елементів в експресійній касеті, кількості трансгенів, кількості касет експресії і конфігурації таких елементів і таких касет.
Ідентифікація об'єкта з бажаними ознаками може додатково ускладнюватися такими факторами, як параметри трансгенної експресії в ході розвитку рослини, залежно від часу доби, тривалості або місцеположення; або зовнішніми факторами, такими як умови навколишнього середовища для росту рослин, забезпеченість водою, наявність азоту, тепла або стресу. Таким чином, неможливо легко прогнозувати одержання об'єкта що надає бажаний набір фенотипічних ознак.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Автори винаходу ідентифікували трансгенний об'єкт кукурудзи МОМ 87411, що виявляє чудові властивості і продуктивність, в порівнянні з наявними на даний час трансгенними рослинами кукурудзи і зі створеними паралельно новими об'єктами. об'єкт кукурудзи МОМ 87411 містить три зв'язаних касети експресії, які в сукупності надають ознаки стійкості до бо злакових кореневих черв'яків і толерантність до гербіциду гліфосату в клітинах кукурудзи,
тканинах кукурудзи, насінні кукурудзи і рослинах кукурудзи, що містять трансгенний об'єкт МОМ 87411. Об'єкт кукурудзи МОМ 87411 має два механізми дії проти видів шкідників кукурудзи - злакових кореневих черв'яків (що включають в себе види Оіаргоїїса, зокрема шкідників, які являють собою Оіарбгоїїса мігдітега мігдітега (блішка довговуса західна, М/СЕК), Оіаргоїїса рагрегу (блішка довговуса північна, МСЕК), Оіабгоїїса мігаїега 7леає (блішка довговуса мексиканська,
МСЕ), Ріабгоїйса банеага (блішка довговуса бразильська (В2Е) або комплекс блішок довговусих бразильських (ВСК), що складається з Оіаргоїїса мігідшіа і Оіаргоїїса 5ресіоза) і Ріабгоїїса ипаесітрипсіага поучагаїї (бСлішка довговуса південна, ЗСК)). Подвійний механізм дії забезпечує надмірність і значно знижує імовірність розвитку резистентності до ознак боротьби зі шкідниками.
Об'єкт МОМ 87411 характеризується специфічними унікальними сегментами ДНК, які є корисними для виявлення присутності об'єкта в зразку. Вважається, що зразок належить або до композиції, яка по суті не містить ДНК кукурудзи, або до композиції, яка містить ДНК кукурудзи.
У будь-якому випадку, зразок являє собою біологічний зразок, тобто цей зразок містить біологічні матеріали, що включають в себе, без обмеження, ДНК, яка одержана або походить, прямим або опосередкованим способом, з геному об'єкта кукурудзи МОМ 87411. "Прямий спосіб" стосується того, що фахівець в даній галузі може одержувати ДНК безпосередньо з геному кукурудзи шляхом руйнування клітин кукурудзи (або шляхом одержання зразків кукурудзи, які містять зруйновані клітини кукурудзи) і проводити детекцію геномної ДНК. "Опосередкований спосіб" стосується того, що фахівець в даній галузі може одержувати в конкретному зразку цільову ДНК або специфічну референо-ДНК, тобто новий і унікальний з'єднувальний сегмент, призначений, згідно з винаходом, для діагностики наявності об'єкта
МОМ 87411, способами, відмінними від прямого способу, шляхом руйнування клітин кукурудзи або одержання зразка кукурудзи, що містить зруйновані клітини кукурудзи. Такі опосередковані способи включають в себе, без обмеження, ампліфікацію сегмента ДНК, що містить послідовність ДНК-мішені для конкретного зонда, призначеного для специфічного зв'язування з послідовністю-мішенню, або ампліфікацію сегмента ДНК, який можна виміряти і описати його характеристики, тобто виміряти шляхом відділення від інших сегментів ДНК за допомогою якої- небудь ефективної матриці, наприклад агарозного або акриламідного гелю або подібної
Зо матриці, або описати його характеристики шляхом аналізу прямого секвенування амплікону або клонування амплікону у вектор і прямого секвенування вставленого амплікону, розташованого в межах такого вектора. Альтернативно, можна клонувати різними способами сегмент ДНК, відповідний положенню всередині хромосоми кукурудзи, в який була вбудована трансгенна
ДНК в хромосому кукурудзи і який можна використовувати для визначення об'єкта МОМ 87411, а також ідентифікувати і описувати його присутність в конкретному зразку або в конкретному геномі кукурудзи. Такі сегменти ДНК називають з'єднувальними сегментами або послідовностями, і вони можуть мати будь-яку довжину вставленої ДНК і прилеглої (фланкуючої) хромосомної ДНК кукурудзи, за умови, що точка з'єднання між вставленою ДНК і геномом кукурудзи входить в цей сегмент. Прикладами таких сегментів є 5БЕО ІО МО:12 і ЗЕО
ІО МО:21 і їх зворотно комплементарні послідовності.
Конкретні послідовності, ідентифіковані у винаході, можуть однозначно бути присутніми в об'єкті МОМ 87411, або в конструкції, що містить цей об'єкт, і визначення цих послідовностей, як за допомогою прямого аналізу послідовностей, шляхом виявлення зондів, зв'язаних з цими послідовностями, так і шляхом встановлення розміру і, можливо, композиції конкретних ампліконів, описаних у винаході, якщо вони присутні в конкретній зародковій плазмі кукурудзи або в геномі і/або присутні в конкретному біологічному зразку, що містить ДНК кукурудзи, є діагностичним на наявність в такому зразку об'єкта МОМ 87411 або конструкції, що містить цей об'єкт. Відомо, що фланкуючі геномні сегменти (тобто геномні сегменти послідовності ДНК кукурудзи, суміжні відносно вставленої трансгенної ДНК) піддаються невеликій мінливості, і, таким чином, існує обмеження ідентичності щонайменше 9995 або більше відносно таких аномалій або поліморфізму від одного геному кукурудзи до іншого геному кукурудзи. У обсяг даного винаходу входять нуклеотидні сегменти, які Є повністю комплементарними по всій їх довжині, при порівнянні з конкретними діагностичними послідовностями, згаданими в даному винаході.
Положення нуклеотидних сегментів за даним винаходом одного відносно одного і в геномі кукурудзи представлені на фіг. 3, і нуклеотидна послідовність кожного з них показана в 5ЕО ІЮ
МО:1. Нуклеотидні сегменти, які характеризують об'єкт МОМ 87411 і які є діагностичними на присутність в зразку об'єкта МОМ 87411 або конструкції, що містить цей об'єкт, включають в себе 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МО:3, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІЮ (510) МО:7, БЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮО МО:С9, 5ЕО І МО:10, 5ЕО І МО:12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО І МО:16,
ЗЕО ІЮ МО:18, БЕО ІО МО:19, 5ЕО ІЮ МО:20, 5ЕО 10 МО:21, 5ЕО ІЮ МО:22, 5ЕО ІЮ МО:23, 5ЕО
ІО МО:24, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО І МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО ІЮ МО 44, 5ЕО Ір
МО:45, ЗЕО ІЮ МО:49, ЗЕО ІЮ МО:50, ЗЕО ІЮ МО:51 або 5ЕО ІО МО:52. Якщо згаданий зразок містить тканини кукурудзи і, отже, ДНК кукурудзи, то наявність однієї або двох, або декількох з цих нуклеотидних послідовностей в зразку є діагностичною на присутність об'єкта МОМ 87411 або конструкції, що містить цей об'єкт.
Використання поняття "який походить від' передбачає, що конкретна молекула ДНК знаходиться в геномі рослини кукурудзи або може бути виявлена в ДНК рослини кукурудзи. "Можливий для виявлення" стосується можливості ампліфікації конкретного сегмента ДНК і визначення або з'ясування характеристик його розміру і послідовності шляхом аналізу послідовності ДНК, і може також стосуватися здатності зонда до специфічного зв'язування з конкретним сегментом ДНК, тобто з цільовим сегментом ДНК, і подальшої здатності виявляти зв'язування зонда з цією мішенню. Конкретний сегмент ДНК або цільовий сегмент ДНК за даним винаходом присутній в кукурудзі, яка містить вставку - об'єкт МОМ 87411.
Відносно кукурудзи передбачається, що клітини кукурудзи, насіння кукурудзи, частини рослин кукурудзи і рослини кукурудзи входять в обсяг даного винаходу, за умови, що кожний їх варіант здійснення містить визначувану кількість ДНК, відповідну якому-небудь з одного, двох або декількох сегментів, які описані в даному винаході як діагностичні на присутність ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Частини рослин кукурудзи включають в себе клітини, пилок, насінний зачаток, квітки і частини квіток, такі як качани, нитки і волоті, тканину кореня, тканину стебла і тканину листа. У обсяг даного винаходу входять товарні продукти, вироблені з кукурудзи, яка має кількість сегментів ДНК, що піддається виявленню, описаних у винаході як діагностичні на присутність об'єкта МОМ 87411. Такі товарні продукти можуть включати в себе цільне або оброблене насіння кукурудзи, корми для тварин, що містять зерно кукурудзи або побічні кукурудзяні продукти, кукурудзяну олію, розмолоту кукурудзу, кукурудзяне борошно, кукурудзяний крохмаль, кукурудзяні пластівці, кукурудзяні висівки, кукурудзяну біомасу і солому, і паливні продукти і вторинні паливні продукти, вироблені з кукурудзяного зерна або рослин і частин рослин кукурудзи.
Звичайно ДНК з об'єкта кукурудзи МОМ 87411 присутня в кожній клітині і в кожній хромосомі
Зо рослини кукурудзи, насіння кукурудзи і тканин кукурудзи, що містять згаданий об'єкт. Геном кукурудзи передається потомству згідно з менделевськими принципами, тому, якщо рослини кукурудзи були гомозиготними, в потомстві кожна рослина і клітина кукурудзи буде містити цей об'єкт ДНК в кожній з батьківських хромосом, успадкованих від батька (батьків). При цьому, якщо геном кукурудзи, що містить ДНК об'єкта МОМ 87411, належить гетерозиготним або гіоридним батькам, то тільки п'ятдесят процентів пилка і п'ятдесят процентів яйцеклітин, що беруть участь в спаровуванні від гібридних батьків, будуть нести ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411, внаслідок чого буде одержана змішана популяція потомства, що несе ДНК об'єкта МОМ 87411, і процент цього потомства, виникаючого в результаті таких схрещувань з гібридами, може варіюватися від п'ятдесяти до сімдесяти п'яти процентів, що несуть ДНК об'єкта МОМ 87411, яка було передана такому потомству.
Молекули ДНК згідно з даним винаходом можуть бути унікальними для вставленої ДНК в об'єкті кукурудзи МОМ 87411 або для двох з'єднань між трансгенною вставкою ДНК і геномною
ДНК кукурудзи, яка прилягає до якого-небудь з кінців вставленої ДНК. Якщо такі молекули присутні в конкретному зразку, який аналізують за допомогою описаних у винаході способів з використанням зондів, праймерів і, в деяких випадках, за допомогою аналізу послідовності ДНК, то вони можуть бути діагностичними на присутність в цьому зразку деякої кількості об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Такі молекули ДНК, унікальні для ДНК об'єкта кукурудза МОМ 87411, можуть бути ідентифіковані і охарактеризовані декількома способами, в тому числі з використанням молекул нуклеїнових кислот, сконструйованих для специфічного зв'язування з молекулами унікальних ДНК, з подальшим виявленням зв'язування таких зондів з унікальною
ДНК, ї за допомогою способів термічної ампліфікації, в яких використовують щонайменше дві різні молекули ДНК, що діють як зонди, при цьому послідовність таких молекул може бути трохи менше, ніж описані вище зонди. Фахівцю в даній галузі техніки буде очевидно, що контактування специфічної цільової ДНК з зондом або праймером при придатних умовах гібридизації приведе до зв'язування цього зонда або праймера з цільовим сегментом ДНК.
Молекули ДНК за даним винаходом, які являють собою цільові сегменти ДНК, здатні до ампліфікації і, якщо вони визначені як один або декілька ампліконів представленої довжини, одержаних шляхом ампліфікації конкретного зразка, ці молекули можуть бути діагностичними на присутність в такому зразку об'єкта МОМ 87411 або конструкції, що його містить. Такі 60 молекули ДНК або полінуклеотидні сегменти мають нуклеотидні послідовності, вказані в кожній з послідовностей 5ЕО ІЮО МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮ МО:З3, 5ЕО ІЮО МО 4, 5ЕО ІО МО:5, 5ЕО ІЮ
МО:6, 5ЕО ІО МО:7, 5ЕО ІО МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО:14,
ЗЕО ІЮ МО:16, БЕО ІЮ МО:21, БЕО 10 МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО І МО:42, 5ЕО ІО МО:43, 5ЕО
ІЮО МО:44, 5ЕО І МО:45, 5ЕО ІЮ МО:49, 56 ОО МО:50, БО ІО МО:51 ії 5ЕО ІЮ МО:52, і додатково описані в даному розділі і в прикладах нижче. Праймерні молекули і/або зонди можуть бути представлені у вигляді комплекту разом з необхідними реагентами, що включають в себе контрольні реагенти, і упаковані разом з інструкцією по застосуванню.
Молекули рекомбінантних ДНК за даним винаходом вважаються такими, що входять в обсяг даного винаходу, якщо вони знаходяться в мікроорганізмі або одержані з мікроорганізму.
Мікроорганізм повинен включати в себе будь-яку мікроскопічну клітину, прокаріотичну або еукаріотичну, або клітину іншого типу, яка містить ДНК в геномі або хромосомі, або в екстрахромосомній структурі ДНК, частіше називаній плазмідою або вектором. Мікроскопічні організми включають в себе бактерії (прокаріоти) і клітини, що належать до вищих форм життя (еукаріоти), розмір яких нижче візуального рівня середньої людини, звичайно менше п'ятдесяти кубічних мікрон і частіше менше десяти кубічних мікрон. Бактерії є поширеними мікроскопічними мікроорганізмами, які, ймовірно, не можуть містити вектор або плазміду, що несе один або декілька, або всі з нових сегментів ДНК за даним винаходом, в тому числі кожну з відповідних касет експресії, присутніх, як указано в 5ЕО ІЮ МО:1. Рослинні клітини і, зокрема, клітини рослин кукурудзи входять в обсяг даного винаходу, якщо вони містять який-небудь з одного, двох або декількох нових сегментів ДНК або всі з нових сегментів ДНК за даним винаходом.
Зонди, використовувані в даному винаході, звичайно являють собою молекули ДНК або полінуклеотидні сегменти достатньої довжини для функціонування в жорстких умовах гібридизації, згідно з винаходом, щоб зв'язуватися з конкретним цільовим сегментом ДНК, тобто з унікальним сегментом ДНК, присутнім в ДНК об'єкта МОМ 87741, і служити для діагностики присутності ДНК об'єкта МОМ 87741 в зразку. Такий зонд може бути призначений для зв'язування тільки з єдиним з'єднанням або з іншою новою послідовністю, присутньою тільки в
ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411, або з двома або декількома такими одиничними з'єднувальними сегментами. Виявлення в якому-небудь об'єкті зв'язування такого зонда з молекулою ДНК в конкретному зразку, що передбачувано містить ДНК кукурудзи, є
Зо діагностичним на присутність в цьому зразку об'єкта кукурудзи МОМ 87411.
Праймери звичайно представлені у вигляді пар різних олігонуклеотидів або полінуклеотидних сегментів для використання в реакції термічної ампліфікації, за допомогою якої ампліфікується конкретний цільовий сегмент ДНК. Кожний праймер в парі призначений для зв'язування з досить специфічним сегментом ДНК в межах або поблизу сегмента ДНК, що представляє інтерес для ампліфікації. Праймери зв'язуються таким чином, що потім вони діють як локалізовані області полімеризації послідовностей нуклеїнових кислот, внаслідок чого одержують один або декілька ампліконів (ампліфіковані цільові сегменти ДНК). У даному винаході застосування праймерів, сконструйованих для зв'язування з унікальними сегментами
ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 в конкретному біологічному зразку, і згадана ампліфікація конкретних ампліконів, що несуть один або декілька з'єднувальних сегментів, описаних у винаході, і детекція і визначення характеристик цих ампліконів після завершення або припинення полімеразної реакції, є діагностичною ознакою наявності об'єкта кукурудзи МОМ 87411 в конкретному зразку. Фахівцю в даній галузі добре відомий цей спосіб ампліфікації, і немає необхідності наводити посилання про подробиці ампліфікації в даному винаході.
Рослини кукурудзи, клітини рослин кукурудзи, тканини рослин кукурудзи і насіння кукурудзи є нечутливими до обробок гербіцидом гліфосатом завдяки експресії СРА4 ЕРБРБЗ - ферменту нечутливості до гліфосату з промотору Ксс3З рису в експресійній касеті на дистальному 3'-кінці, як показано в 5ЕО ІЮО МО:1. Таке насіння можна висівати в полі. Через декілька днів після проростання і появи сходів можна застосовувати ефективну для контролю бур'янів кількість гербіциду гліфосату, що знищить по суті всі бур'яни в полі, але дозволить продовжити ріст і розвиток рослин кукурудзи, які містять ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Рослини також стійкі до ураження злаковими кореневими черв'яками всіх відомих видів кореневих черв'яків ріабгоїїса, що включають в себе, без обмеження, Оіабгоїїса мігдітега мігдітега (блішка довговуса західна, М/СЕК), Ріабгоїїса рагрегу (блішка довговуса північна, МСЕ), Оіабгоїїса мігудїега 7еае (блішка довговуса мексиканська, МОСК), Оіабгоїїса ракеаїйа (блішка довговуса бразильська (ВВ) або комплекс блішок довговусих бразильських (ВСК), що складається з Оіабгоїйса мігіаціа і
Ріабгоїїса 5ресіоза) і Оіаргоїїса ипдесітрипсіаїа ПпПоу/агаїї (блішка довговуса південна, ЗСК).
Стійкість до видів Юіаргоїїса виникає в зв'язку з експресією двох різних сегментів ДНК, які функціонально і ковалентно зв'язані в межах вставленої трансгенної ДНК: дволанцюжкова РНК бо (длЛРНК) транскрибується з касети експресії на проксимальному 5'-кінці вставленої трансгенної
ДНК, як показано в 5ЕО ІЮО МО:1 і проілюстровано на фіг. 1 в позиції (5) в 5ЕО ІЮ МО:12, і націлює супресію життєво важливого гена у злакових кореневих черв'яків; і білок СтгузВр, токсичний для твердокрилих комах, експресується з касети експресії (приблизно в центрі в ХЕО
ІЮ МО:1, як показано на фіг. 1 в позиції (НІ в 5ЕБЕО ІЮ МО:14) по центру між касетою, експресуючою длРНК (|С), і касетою на дистальному 3'-кінці вставленої трансгенної ДНК, показаної в 5ЕО ІЮ МО:1 (касета експресії толерантності до гліфосату, показана на фіг. 1, позиція (ШІ в 5ЕО ІО МО:16). длРНК націлює супресію ортологічного гена дріжджів під найменуванням 5пі7 і експресується з промотору САММ ез355, а білок СтузВЬ експресується з промотору РІС 7еа тау5х. Згадані длРНК і білок СтузВор є токсичними агентами для видів злакових кореневих черв'яків.
Промотори, що запускають експресію токсичних агентів длРНК і СтуЗВр, розташовані дивергентно, таким чином, що експресія кожного з промоторів відповідного токсичного агента відбувається далеко від точки, що знаходиться в центрі між двома промоторами, тобто транскрипція кожної касети експресії протікає в протилежних напрямах, без конвергенції.
Касета експресії СР4 ЕРБР5 толерантності до гліфосату розташована нижче по ходу транскрипції, тобто проксимальніше 3'-кінця, як показано в ЗЕО ІЮ МО-:1, і дистальніше 3'-кінця відносно касети, що запускає експресію білка СтуЗВЬ. Касети, що запускають експресію СтузВЬ і
ЕРБР5, продукують відповідні білюи за допомогою тандемної орієнтації транскрипції, Сгузвь розташований вище по ходу транскрипції від ЕР5Р5 і транскрибується в тій же орієнтації, але кожний зі своїх окремих відповідних промоторів. Залишаючи інтактними касету експресії длРНК і касету стійкості до гліфосату і поміщаючи на дистальних кінцях ДНК сегмент, призначений для вставки в геном кукурудзи, одержували інші варіанти конструкції, в яких орієнтація касети
СтузвВьЬ була інвертованою або зворотною відносно конструкції, присутньої в ДНК об'єкта МОМ 87411. У цих варіантах конструкцій для запуску експресії СтузВвоЬ використовували промотор
РІС 7еа тауз або промотор Ксс3 рису.
Трансгенні об'єкти, що містять тільки згадані варіанти конструкцій/орієнтації касети експресії
СтузвЬр, порівнювали з об'єктом МОМ 87411 і з доступними на даний час комерційними об'єктами: МОМ 863 (що містить тільки касету експресії СтузвВр), МОМ 88017 (що містить касету експресії СтузВЬ, яка функціонально зв'язана з касетою експресії СР4 ЕРБРБ) і ОА5-59122-7
Зо (що містить три функціонально зв'язаних касети експресії, дві з яких тандемно експресують подвійні компоненти токсину Ві Сту34 і Сту3з5 разом з геном, що надає толерантність до глюфозинату). Результати, показані нижче в розділі прикладів, свідчать, що об'єкт МОМ 87411 демонструє чудові властивості відносно направленої в коріння експресії білка СгузВБ, і множина трансгенних об'єктів, одержаних за допомогою конструкції, яку використовували для створення об'єктів МОМ 87411, частіше виявляла ефективний контроль злакових кореневих черв'яків, ніж інших об'єкти, одержані з іншими конструкціями.
У обсяг даного винаходу входять рослини кукурудзи за даним винаходом і їх частини, в тому числі насіння, і кожна з частин рослини містить ДНК, відповідну об'єкту МОМ 87411. Такі рослини стійкі до ураження злаковими кореневими черв'яками і нечутливі до застосування гербіциду гліфосату. Ці рослини включають в себе гібриди, що містять тільки один алель МОМ 87411, тобто геном, відмінний гетерозиготністю відносно локусу, відповідного об'єкту МОМ 87411 ДНК. Такі гібриди одержують шляхом селекції з бажаною зародковою плазмою для гарантії гібридної сили і інших бажаних в сільськогосподарському плані властивостей кукурудзи.
Гібриди можна одержувати будь-яким з множини способів, але в переважному способі використовують переваги першого інбредного (гомозиготного) батька, який несе специфічний алель об'єкта МОМ 87411 в обох хромосомах в локусі, в який вставлена ДНК об'єкта МОМ 87411, і виводять першу інбредну рослину разом з другою інбредною рослиною, яка не несе
ДНК МОМ 87411. Обидва варіанти батьківських інбредних рослин будуть мати одну або декілька вигідних властивостей, бажаних для насіння потомства, тобто для гібридного насіння.
БО Особливо бажаною є трансгенна властивість або алель, що надає деяку додаткову ознаку рослині, що містить ДНК об'єкта МОМ 87411. Такі трансгенні алелі включають в себе інші трансгенні об'єкти, що надають стійкість до злакових кореневих черв'яків, і включають в себе, без обмеження, такі об'єкти як ЮАБ5-59122-7, МІКбО4 і 5307. Кожний з цих об'єктів дає додатковий агент, токсичний для злакових кореневих черв'яків (0А5-59122-7 забезпечує
РБ14981 (СтуЗза/Стгуз35), що має властивості токсичності для кореневих черв'яків і толерантності до гербіциду глюфозинату; МІК604 забезпечує модифікований СтузАа, що виявляє властивості токсичності для кореневих черв'яків; об'єкт 5307 забезпечує ген ЕК8а, що виявляє властивості токсичності для кореневих черв'яків). Наявність додаткових ознак стійкості до злакових кореневих черв'яків, наприклад наявність вищеперелічених ознак, може знижувати імовірність 60 розвитку стійкості до якого-небудь представленого агента, токсичного для злакових кореневих черв'яків. Інші бажані ознаки включають в себе ознаки врожайності і стійкості до стресу або переносимості стресу, ознаки фіксації азоту, ознаки, що модулюють використання води, стійкості до грибкового ураження, стійкості до гербіцидів, таких як дикамба (МОМ 87427), глюфозинат і т. п., а також ознаки стійкості до лускокрилих шкідників. Ознаки стійкості до лускокрилих шкідників були розглянуті в даній галузі техніки і включають в себе об'єкти трансгенної кукурудзи (і відповідні активні білюи лускокрилих) МОМ810 (СтутАБ), МОМ 89034 (СтулА.105 і Сту2АБ); ТС1507 (Стут Ас і СтуїРа); ОАЗ-06275-8, також відомий як ТО-6275 (Сту1їЕРа і Баг (що надає стійкість до глюфозинату)); МІК162 (МірзАа), ВИ 76 (СтутАБ) і ВТ11 (СтутАБ).
Альтернативою наявності в одній рослині якої-небудь комбінації або всіх з перерахованих ознак, зокрема ознак стійкості до комах, інших перерахованих ознак стійкості, що належать до об'єкта МОМ 87411, до злакових кореневих черв'яків або ознак стійкості до лускокрилих, буде наявність згаданих ознак в різні комбінаціях сумішей насіння, в яких певне насіння в суміші містить ознаки МОМ 87411 і деяку комбінацію виключно з перерахованих ознак стійкості до твердокрилих і спільно діють під землею для запобігання ураженню злаковими кореневими черв'яками, в той час як інше насіння в суміші містить тільки ознаки стійкості до лускокрилих і надають стійкість до ураження кукурудзи лускокрилими шкідниками над землею. Таким чином, насінини в суміші забезпечують захист одне для одного, тобто насіння і рослини із захистом від твердокрилих діють як захист для рослин, що надають стійкість до лускокрилих, і навпаки.
Разом з тим, звичайно ці ознаки будуть представлені в якій-небудь комбінації або в пакеті ознак, де ознаки МОМ 87411 будуть представлені спільно в одній рослині за допомогою виведення з однією або декількома ознаками стійкості до лускокрилих, для забезпечення повного пакета стійкості до шкідників урожаю в полі, і невеликий процент насіння (можливо від 1 до 20 процентів або будь-яка кількість, що включає в себе 2, 3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 або 19 процентів) буде мати тільки ознаки толерантності до гербіциду і не буде мати яких-небудь ознак захисту від шкідників, і будуть висаджені в полі в рандомізованій суміші з насінням з ознаками стійкості до шкідників або у вигляді структурованого (окремого) насадження культур, і будуть діяти як захист як від шкідників, які вражають рослини кукурудзи над землею, так і від шкідників, які уражують рослини кукурудзи під землею.
Конструкція, вставлена в об'єкт МОМ 87411, дає особливі переваги в порівнянні з касетою
Зо експресії ЕР5Р5. По-перше, присутність цієї касети полегшує виведення трансгенних об'єктів, в які була вбудована ця конструкція. По-друге, касета забезпечує контроль бур'янів в полі, на якому було посаджене насіння, відповідне об'єкту МОМ 87411. Поле, що містить ці рослини
МОМ 87411, можна обробляти шляхом розпилення ефективної кількості гліфосату для контролю росту на цьому полі бур'янів, які є чутливими до гліфосату. Для бур'янів, які не чутливі до гліфосату, як відмічено вище, можна виводити інші трансгенні об'єкти, які забезпечують толерантність до інших гербіцидів, таких як дикамба або глюфозинат, створюючи єдиний гібрид разом з об'єктом МОМ 87411, і таким чином одержувати ефективний засіб для боротьби з бурянами в полі шляхом застосування двох або декількох гербіцидів, таких як гліфосат, дикамба або глюфозинат, оскільки малоймовірна присутність бур'янів, що мають стійкість до двох або декількох із згаданих гербіцидів, і в цьому випадку урожай кукурудзи буде складатися з гіоридів, які виявляють стійкість до такого застосування комбінацій гербіцидів.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Фіг. 1 схематично зображує трансгенну вставку в геном об'єкта кукурудзи МОМ 87411: ГАЇ являє собою 5ЕО ІЮ МО:1, яка є безперервною послідовністю трансгенної ДНК-вставки, інтегрованої в геном кукурудзи І Н244, і 5'- і 3і--геномні ДНК, фланкуючі вставлену ДНК; |ВІ і ІСІ відповідають відносним положенням 5ЕО ІО МО:2 ії З, які утворюють 5- і 3-з'єднувальні послідовності трансгенної/геномної ДНК об'єкта МОМ 87411, відповідно; (СОЇ показує 5ЕО ІЮ
МО:4, яка являє собою послідовність трансгенної ДНК-вставки, інтегрованої в геном, і в результаті одержують об'єкт МОМ 87411; (Е) відповідає відносним положенням 5ЕО 10 МО5,
БО ЗБЕО ІЮ МО:б і 5ЕО ІЮО МО:7, кожна з яких охоплює 5'-з'єднання між термінальними кінцями трансгенної ДНК-вставки і фланкуючої геномної ДНК; ГІГЇ| відповідає відносним положенням
ЗБЕО Ір МО:8, 5ЕБЕО І МО:9 ії 5ЕБЕО 10 МО:10, кожна з яких охоплює 3'-з'єднання між термінальними кінцями трансгенної ДНК-вставки і фланкуючої геномної ДНК; ІСІ, ІНІ ії (І, відповідно, являють собою три різні експресійні касети, відповідні трансгенній ДНК-конструкції, вставленій в геном рослини кукурудзи, результатом чого є об'єкт МОМ 87411; || і ІК) являють собою олігонуклеотидні праймери, олігонуклеотидні зонди і амплікони ДНК, відповідні з'єднанням в об'єкті МОМ 87411.
Фіг. 2 показує одинадцять різних конструкцій ДНК (417, 416, 418, 419, 402, 403, 404, 423, 405, 406 і 890), сконструйованих для експресії до трьох різних касет, що включають в себе дві касети бо з інкорпорованими протектантами рослин (РІР), націленими на блішок довговусих західних
(МУСК), і одну касету стійкості до гербіцидів. Дві РІР-касети включають в себе (а) касету експресії для 240-мерного інвертованого повтору Юм бпі7о, і (5) касету експресії для білка
СтузвьЬ. Кожна з показаних конструкцій містить ці касети експресії у варіабельному порядку і орієнтації. Конструкції 405 і 406 не містять касету стійкості до гербіцидів, і конструкція 890 містить тільки одну касету експресії для 240-мерного інвертованого повтору Юм зЗпі7о. Ці три конструкції містять в загальній складності шістнадцять генетичних елементів від лівої границі (І.В) до правої границі (АВ): ГП) І В; (2) 3'-нетрансльована область (ТЕ) Р5.КБсо52-Е9; |ІЗІ 240- мерний Ом 5пі7о інвертований повторюваний ген; |4| кукурудзяний інтрон ОпакК; (5) лідер Самм 355; І6Ї промотор еСамм 355; І7| промотор кукурудзи РІС; |8) лідер пшениці І псб1; (9) інтрон рису Асі; (10) відкрита рамка зчитування (ОКЕ) СтузВБ; П11| З'ЮТК пшениці Нзр17; (12| ТиБА рису (промотор, лідер, інтрон); (13| цитоплазматичний пептид СТР; (14) СРА ЕРБРБ; (15) З'ЮТА
ТибБА рису; і (16) КВ.
Фіг. 3. На схемах ЦА1-ІМІ і ІааІ-(тт)| показані функціонально зв'язані елементи і фланкуючий кукурудзяний геном і їх положення один відносно одного, згідно з їх розташуванням в позиції трансгенної вставки ДНК в геном об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Представлені нижче описи визначають композицію, функції і положення для кожного з елементів, показаних в 5ЕО ІЮ
МО-1.
ІАЇ Положення нуклеотидів 1-500, показані в 5ЕО ІЮО МО:1, відповідають геномній ДНК кукурудзи, суміжній з трансгенною вставленою ДНК в об'єкті кукурудзи МОМ 87411, яка в цьому випадку довільно позначена на 5'-кінці від трансгенної вставленої ДНК.
ІВІ Положення нуклеотидів 8007-1439, показані в ЗЕО ІЮ МО:1, відповідають зворотно комплементарній послідовності термінації транскрипції і сигналу поліаденілювання малої субодиниці Е9 3'-рибулозобісфосфаткарбоксилази від Різит заїїмит.
ЇС| Положення нуклеотидів 1469-2098, показані в 5ЕО ІЮО МО:1, відповідають зворотно комплементарній послідовності, сконструйованій для експресії у вигляді молекули РНК, укладеної в 240-нуклеотидну длРНК і 150-нуклеотидну шпилькову структуру, яка створена для націлювання на супресію ортолога гена дріжджів у видів Оіабгоїїса, що кодує білок Зпі7, при його наявності в раціоні видів Оіабгоїїса. Перший 240-нуклеотидний сегмент, відповідний частині ортологічного гена зп від Оіабгоїїса, присутній в положеннях нуклеотидів 1469-1708, як показано в 5ЕО ІЮ МО:1, другий 240-нуклеотидний сегмент, відповідний в зворотній комплементарності першому сегменту, розташований в позиціях нуклеотидів 1850-2098, як указано в ЗЕО ІЮ МО/:1, і перший і другий сегменти функціонально зв'язані за допомогою 150- нуклеотидного спейсера в положеннях нуклеотидів 1709-1858, як указано в 5ЕО ІЮ МО:1.
ІОЇ Положення нуклеотидів 2135-2938, показані в 5ЕО ІЮО МО:1, відповідають зворотно комплементарній послідовності інтрона, що походить з гена ЮОпак 7ва таух».
ІЕЇ Положення нуклеотидів 2839-3298, показані в 5ЕО ІЮ МО:1, відповідають зворотній комплементарній розширеній послідовності 355 промотору вірусу мозаїки цвітної капусти і нетрансльованій 5'-лідерній послідовності. Вказаний промотор, асоційований нетрансльований лідер, елемент ІдДІ| інтрона і елемент |В) термінації транскрипції і поліааденілювання регулюють експресію елемента |С| в клітинах рослин кукурудзи.
ІНЇ Положення нуклеотидів 3586-4534, показані в 5ЕО ІЮ МО:1, відповідають промоторній послідовності, одержаній з індукованого фізичним імпедансом гена білка 7еа таув (2т.РІЇІВ).
Вказаний промотор, асоційований нетрансльований лідер ||, елемент ІНІ інтрона і елемент ІЛ термінації транскрипції і поліаденілювання регулюють експресію елемента ||. Цей промотор орієнтований відносно промотору (Е| таким чином, що кожний з промоторів (ГЕЇ і ГЕ) буде запускати дивергентну експресію своїх елементів (ІСІ і (ЇЇ) (дивіться стрілки на фіг. 2, де ці стрілки позначають відповідні промотори (ЦЕ) і ГРІ) у вказаному напрямі експресії з відповідного промотору).
ЇЯ| Положення нуклеотидів 4541-4601, показані в ЗЕО ІЮ МО, відповідають нетрансльованій 5'-лідерній послідовності, одержаній з гена 01 світлоуловлюючого комплексу (Та. пер) від Тгійсит аезімит.
ІНІ Положення нуклеотидів 4618-5097, показані в БЕО ІЮ МО:1, відповідають послідовності інтрона, одержаного з гена Асііп-1 від Огу7а Заїйїма (О5.АсСИ). (І Положення нуклеотидів 5107-7068, показані в БЕО ІЮ МО:1, відповідають нуклеотидній послідовності, що кодує білок СтуЗзВЬ, токсичний для злакових кореневих черв'яків (СгузВБ).
Кодований білок СгтузВр є пестицидним у випадку його наявності в раціоні видів Оіабгоїїса (злакових кореневих черв'яків).
ІМ Положення нуклеотидів 7088-7297, показані в 5ЕО ІО МО:1, відповідають послідовності термінації транскрипції і сигналу поліаденілювання в білку теплового шоку 17 (НЗР17) від 60 Тийсит аевіїмит.
ЇК) Положення нуклеотидів 7346-9526, показані в ЗЕО ІЮО МО:1, відповідають безперервній послідовності промотор-лідер-інтрон, одержаній з гена альфа-тубулін-3 (ТиБА-3) від Огуа 5айма. Вказаний промотор з асоційованим лідером і інтроном і елемент |МІ) термінації транскрипції і поліаденілювання регулюють експресію елемента (||.
ІЇЦЇ Положення нуклеотидів 9531-11126, показані в 5ЕО ІЮ МО:1, відповідають послідовності цитоплазматичного націлюючого пептиду від Агарідор5зі5 Ійпайапа (СТР; з нуклеотидних положень 9531-9758) і послідовності ЕРБР5, одержаної з СРА Адгобрасієегіит (з нуклеотидних положень 9759-11126). Коли ця послідовність транскрибується і транслюється в білок в клітині рослини кукурудзи, СТР функціонально зв'язується з ЕРБР5. При експресії в клітинах рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411, згаданий СТР-ЕРБЗРОЗ забезпечує стійкість до гербіциду гліфосату.
ІЇМІ Положення нуклеотидів 11134-11715, показані в 5ЕБО ІЮО МО, відповідають послідовності гена альфа-тубулін-3 (ТиИБА-3) термінації транскрипції і сигналу поліаденілювання від Огула заїїма.
ЇМ| Положення нуклеотидів 11749-12248, показані в БЕО ІО МО:1, відповідають геномній
ДНК кукурудзи, суміжній з трансгенною вставленою ДНК в об'єкті кукурудзи МОМ 87411, які в цьому випадку довільно позначені як 3'-кінець трансгенної вставки ДНК.
Іаа Положення нуклеотидів 501-806, показані в ЗЕО ІЮ МО:1, відповідають частині октопінової послідовності лівої границі від Адгобрасіегцт Іштеїасіеп5 з 417 конструкцій, суміжних з геномом, довільно позначеним як 5'-кінець трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411. 5'-кінець (аа), показаний в 5ЕО ІЮ МО:1, приєднаний до 3-кінця елемента |(А| для утворення унікального з'єднання - 5'-трансгенна вставка ДНК/геном кукурудзи, що охоплюється послідовностями ЗЕО ІЮО МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6,
ЗЕО ІЮО МО:7 і БЕО ІЮ МО:21. 3"-кінець елемента (аа| приєднаний до 5'-кінця елемента |В) для утворення унікального з'єднання в трансгенній вставці ДНК, яка входить в ЗЕО ІО МО:41.
ІББЇ Положення нуклеотидів 1440-1468, показані в ЗЕО ІЮ МО:1, відповідають вставній послідовності між елементами |ВІ і ІС). 5'-кінець |ББІ, показаний в 5ЕО ІЮ МО:1, приєднаний до 3'-кінця елемента |ВІ, і 3'-кінець елемента |ББ| приєднаний до 5'-кінця елемента |С| з утворенням унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:42, в межах трансгенної ДНК, вставленої в
Зо геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411.
Ісс| Положення нуклеотидів 2099-2134, показані в 5ЕО ІЮ МО: 1, відповідають вставній послідовності між елементами |СІ і (0). 5'-кінець (сс), як показано в ЗЕО ІЮ МО, приєднаний до
З-кінця елемента |С|, Її 3З'і-кінець елемента |сс| приєднаний до 5'-кінця елемента |С)| для утворення унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:43, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411.
Іее|) Положення нуклеотидів 3299-3585, показані в 5ЕО ІЮ МО:1, відповідають вставній послідовності між елементами (БЕ) і (Р). 5'-кінець ГеєЇ, як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, приєднаний до
З'-кінця елемента (|Е), ії 3'-кінець елемента (ее| приєднаний до 5'-кінця елемента |Г)| для утворення унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮО МО:44, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411.
ЇЙ Положення нуклеотидів 4535-4540, показані в 5ЕО ІО МО:1, відповідають вставній послідовності між елементами |Р) і (С). 5'-кінець |), як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, приєднаний до 3'-кінця елемента (Р), і 3'-кінець елемента || приєднаний до 5'-кінця елемента |С| для утворення унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:45, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411. (да| Положення нуклеотидів 4602-4617, показані в ЗЕО ІЮ МО, відповідають вставній послідовності між елементами |) і (НІ. 5'-кінець |до, як показано в ЗЕО ІЮО МО/1, приєднаний до
З'-кінця елемента |С|, і 3і-кінець елемента |99| приєднаний до 5-кінця елемента |НІ, для утворення з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:46, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411, але це з'єднання не є унікальним для об'єкта МОМ 87411.
ІНИЇ Положення нуклеотидів 5098-5106, показані в ЗЕО ІЮ МО:1, відповідають вставній послідовності між елементами (НІ і (Ц. 5'-кінець (ПІ, як показано в ЗЕО ІЮО МО1, приєднаний до
З'-кінця елемента |НІ, і 3і-кінець елемента |пп| приєднаний до 5'-кінця елемента ||| для утворення з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:47, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411, але це з'єднання не є унікальним для об'єкта МОМ 87411.
ІЙ Положення нуклеотидів 7069-7087, як показано в ЗЕО ІЮ МО, відповідають вставній послідовності між елементами ЦІ) і І). 5'-кінець ЦіїЇ, як показано в ЗЕО ІЮО МО:1, приєднаний до 3'- бо кінця елемента |||, і 3'-кінець елемента Ції| приєднаний до 5'-кінця елемента М для утворення з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮО МО:48, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи, для утворення об'єкта МОМ 87411, але це з'єднання не є унікальним для об'єкта МОМ 87411.
ЇЙ Положення нуклеотидів 7298-7345, як показано в ЗЕО ІЮ МО, відповідають вставній послідовності між елементами | і ІК). 5'-кінець (|), як показано в ЗЕО ІЮО МО:1, приєднаний до 3'-кінця елемента |У, ії 3'-кінець елемента ||| приєднаний до 5'-кінця елемента |К) для утворення унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:49, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411.
ЇКК| Положення нуклеотидів 9527-9530, як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, відповідають вставній послідовності між елементами ІК) і І). 5'-кінець ЇКК), як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, приєднаний до
З'-кінця елемента ІК), ії 3'і-кінець елемента ІКК| приєднаний до 5'-кінця елемента |-| для утворення унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:50, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411. (ЇЇ Положення нуклеотидів 11127-11133, як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, відповідають вставній послідовності між елементами (Чі і (МІ. 5'-кінець (І, як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, приєднаний до 3'-кінця елемента ||, і 3'-кінець елемента || приєднаний до 5'-кінця елемента |М| для утворення унікального з'єднання, що входить в ЗЕО ІЮ МО:51, в межах трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411.
Ітт| Положення нуклеотидів 11716-11748, як показано в ЗЕО ІО МО:1, відповідає частині правої границі послідовності нопаліну від Адгобасіегіит шптегасіеп5 з конструкції 417, суміжної з геномом на довільно позначеному 3'-кінці трансгенної ДНК, вставленої в геном кукурудзи для утворення об'єкта МОМ 87411. 5-кінець (тті, як показано в ЗЕО ІЮ МО:1, приєднаний до 3'- кінця елемента |ІМІ, ії 3'-кнець елемента (тт| приєднаний до 5'-кінця елемента |МІ|, для утворення унікального з'єднання - трансгенна вставка ДНК/геном кукурудзи, що входить в ЗХЕО
ІО МО:52.
Фіг. 4 показує орієнтацію касети для векторів, що виявили в дослідженні більш високу ефективність дивергентних промоторів, які запускають експресію агентів, токсичних для злакових кореневих черв'яків, в порівнянні з векторами з тандемною орієнтацією промоторів, що запускають експресію агентів, токсичних для злакових кореневих черв'яків.
КОРОТКИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
Зо ЗЕО ІЮО МО:1 являє собою нуклеотидну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5'- до 3-кінця сегмент 5--геномної ДНК, фланкуючий (суміжний з) вставлену трансгенну ДНК (500 нуклеотидів), вставлену трансгенну ДНК (11248 нуклеотидів) і сегмент 3'-геномної ДНК, фланкуючий (суміжний з) вставлену трансгенну ДНК (500 нуклеотидів) в об'єкті МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:2 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент 5-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (500 нуклеотидів), і пограничний залишок вставленої трансгенної ДНК (263 нуклеотиди) з об'єкта МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:3 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5'- до 3-кінця пограничний залишок вставленої трансгенної ДНК (15 нуклеотидів) і сегмент 3-геномної ДНК, суміжний з вставленою геномною ДНК (500 нуклеотидів) з об'єкта МОМ 87411.
Послідовність 5ЕО ІЮ МО:4 являє собою нуклеотидну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує вставлену геномну ДНК (11248 нуклеотидів) з об'єкта МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:5 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент 5-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (50 нуклеотидів), і пограничний залишок вставленої трансгенної ДНК (263 нуклеотиди) з об'єкта МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:6б являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент 5-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (110 нуклеотидів), і пограничний залишок вставленої трансгенної ДНК (263 нуклеотиди) з об'єкта МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:7 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент 5-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (145 нуклеотидів), і пограничний залишок вставленої трансгенної ДНК (263 нуклеотиди) з об'єкта МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:8 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент вставленої трансгенної ДНК (83 нуклеотиди) і сегмент 3-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (34 нуклеотиди) з об'єкта
МОМ 87411.
ЗЕО ІЮО МО:9 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент вставленої трансгенної ДНК (83 нуклеотиди) і сегмент 3'-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (90 нуклеотидів) з об'єкта
МОМ 87411.
ЗЕО ІЮ МО:10 являє собою нуклеотидну з'єднувальну послідовність об'єкта МОМ 87411 і показує в напрямі від 5- до 3-кінця сегмент вставленої трансгенної ДНК (83 нуклеотиди) і сегмент 3-геномної ДНК, суміжний з вставленою трансгенною ДНК (255 нуклеотидів) з об'єкта
МОМ 87411.
ЗЕО ІЮ МО:11 являє собою нуклеотидну послідовність з послідовності КДНК від Оіабгоїїса мікдітега мігдігега (блішки довговусої західної), що кодує комплексну субодиницю Е5СРЕВТ-1ІЇ, яка ортологічна відносно 5пі7 дріжджів.
ЗБЕО ІЮ МО:12 являє собою нуклеотидну послідовність, яка відображає антисмисловий ланцюг касети експресії ДНК, що включає в себе рекомбінантний ген, сконструйований для експресії інвертованих повторів молекули РНК. Сегменти інвертованих повторів ДНК відповідають позиціям від 663 до 902 і позиціям від 1292 до 1053. Послідовності інвертованих повторів ДНК відповідають нуклеотидній послідовності БЕО ІЮ МО:11 в позиції нуклеотидів 151- 390.
Послідовність ЗЕО ІЮ МО:13 являє собою рибонуклеотидну послідовність, транскрибовану від ДНК, як указано в ЗЕО ІО МО:12.
Послідовність 5ЕО ІЮ МО:14 являє собою нуклеотидну послідовність, яка відображає смисловий ланцюг касети експресії ДНК, що включає в себе рекомбінантний ген, сконструйований для кодування і експресії білка СгуЗзВЬ, токсичного для злакових кореневих черв'яків.
Послідовність ЗЕО ІЮ МО:15 являє собою трансляцію полінуклеотиду в амінокислотну послідовність, що відповідає позиціям 1522-3480 5ЕО ІЮ МО:14, і являє собою білок СтузВр, токсичний для злакових кореневих черв'яків.
ЗЕО ІЮО МО:16 являє собою нуклеотидну послідовність, яка показує смисловий ланцюг касети експресії ДНК, що включає в себе рекомбінантний ген, сконструйований для кодування і експресії білка 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕРЗР5Б).
Зо Послідовність ЗЕО ІЮ МО:17 являє собою трансляцію полінуклеотиду в амінокислотну послідовність, відповідну позиціям від 2186 до 3781 5ЕО ІО МО:16, і являє собою білок ЕРБР5, який виявляє нечутливість до гербіциду гліфосату.
Послідовність 5ЕО ОО МО:18 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується 5027011, і ідентична нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям 462-490 5ЕО 10 МО-1.
ЗЕО ІЮ МО:19 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується РВЗ552, і ідентична зворотно комплементарній нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям 502-515 5ЕБЕО ОО МОЛ. РВЗ552 може нести 5-мітку 6- карбоксифлуоресцеїнової групи (6-ЕАМ'М) і 3'-мітку гасильної групи для застосування в комбінації з парою праймерів термічної ампліфікації, наприклад 5027011 і 509085, які можна використовувати для ампліфікації ДНК способом ТадМапФ для виявлення присутності ДНК з об'єкта МОМ 87411 в біологічному зразку, який містить ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411.
Послідовність 5ЕО ОО МО:20 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується 509085, і є ідентичною зворотно комплементарній нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям 516-541 5ЕО ІЮ МО:1.
Послідовність БЕО ІЮ МО:21 являє собою нуклеотидну послідовність об'єкта МОМ 87411 і відповідає позиціям 462-541 5ЕО ІЮО МО:1. Амплікон, що експонує цю послідовність, можна одержувати за допомогою пари праймерів термічної ампліфікації, наприклад 5027011 і
ОЗ9О85.
БО Послідовність 5ЕБО ОО МО:22 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується 5027066, і ідентична нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям 11710-11728 5ЕО 10 МО.
Послідовність 5ЕО ІО МО:23 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується РВ11300, і ідентична нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям 11731-11755 5ЕО ІЮ МО-1. РВ11300 може нести 5'-мітку б6-карбоксифлуоресцеїнової групи (6-ЕАМ"У) і 3'-мітку гасильної групи. З такими мітками РВ11300 може бути використаний в комбінації з парою ПЛР-праймерів, наприклад 5027066 і 5026977, для виявлення об'єкта МОМ 87411 в аналізі ТадМапоФф.
Послідовність 5ЕО ІЮО МО:24 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується 5026977, і є ідентичною зворотно комплементарній нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям 11756-11784 5ЕО 10 МО 1.
ЗЕО ІЮ МО:25 являє собою нуклеотидну послідовність об'єкта МОМ 87411 ії відповідає позиціям 11710-11784 5ЕО ІО МО: 1. Амплікон, що експонує цю послідовність, можна ампліфікувати за допомогою пари праймерів, наприклад 5027066 і 5026977, і цей амплікон є діагностичною ознакою для об'єкта МОМ 87411.
ЗЕО ІЮ МО:26 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 417.
ЗЕО ІЮ МО:27 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 416.
ЗЕО ІЮ МО:28 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 418.
ЗЕО ІЮ МО:29 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 419.
ЗЕО ІЮ МО:30 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 402.
ЗЕО ІЮ МО:31 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 403.
ЗЕО ІЮ МО:32 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 404.
ЗЕО ІЮ МО:33 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 423.
ЗЕО ІЮ МО:34 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж ЖА4О5.
ЗЕО ІЮ МО:35 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 406.
ЗЕО ІЮ МО:36 являє собою нуклеотидну послідовність, що представляє конструкцію ДНК Ж 890.
Зо ЗБО ІЮО МО:37 являє собою нуклеотидну послідовність рослини кукурудзи І Н244, що представляє алель дикого типу з об'єкта МОМ 87411. Амплікон, що експонує цю нуклеотидну послідовність, може бути одержаний за допомогою пари праймерів ПЛР, наприклад 5027011 і 5026977, і цей амплікон є діагностичною ознакою для алеля дикого типу з об'єкта МОМ 87411.
Послідовність 5ЕО ОО МО:38 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується 5020221.
Послідовність 5ЕО ІО МО:39 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується РВ10065. РВ10065 може нести 5'-мітку МІСтм і 3'-мітку гасильної групи. З такими мітками РВ10065 можна використовувати в аналізі ТадМапФ в комбінації з парою ПЛР-праймерів, наприклад 5010065 і 5020222, для виявлення присутності сегмента ендогенного гена кукурудзи.
Послідовність 5ЕО ОО МО:40 являє собою нуклеотидну послідовність синтетичного олігонуклеотиду, що іменується 5020222.
ЗЕО ІЮ МОС41-52 являють собою нуклеотидні послідовності областей з 5ЕО ІЮО МО:1, де в кожну з БЕО ІЮО МО: входить з'єднання, утворене послідовністю і елементами касети експресії, як указано в короткому описі фіг. З.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС
Автори винаходу ідентифікували об'єкт МОМ 87411 трансгенної кукурудзи, що виявляє чудові властивості і врожайність в порівнянні з існуючими трансгенними рослинами кукурудзи.
Об'єкт кукурудзи МОМ 87411 містить три функціонально зв'язані касети експресії, які в сукупності надають ознаки стійкості до злакових кореневих черв'яків і толерантність до гербіциду гліфосату клітинам кукурудзи, тканинам кукурудзи, насінню кукурудзи і рослинам кукурудзи, що містять трансгенний об'єкт МОМ 87411. Об'єкт кукурудзи МОМ 87411 має два механізми дії проти видів шкідників кукурудзи - злакових кореневих черв'яків (що включають в себе види Оіабгоїїса, зокрема шкідників, що являють собою Оіабгоїїса мігдітега мігдітега (блішка довговуса західна, МУСК), Оіабгоїїса Багрегу (блішка довговуса північна, МОСК), Оіабгоїйса мігуітега 7еае (блішка довговуса мексиканська, МСЕК), Оіабгоїїса банеага (блішка довговуса бразильська (В2К) або комплекс блішок довговусих бразильських (ВСК), що складається з Оіабгоїїса мігідиїа і Оіабгоїїса 5ресіоза) або Оіабгоїїса ипаесітрипсіайа поулагаїї (блішка довговуса південна, З5СК)).
В даній галузі техніки відомі інші об'єкти трансгенної кукурудзи, які мають різні варіанти 60 передачі ознак, наприклад єдиної ознаки, наприклад об'єкт МОМ 863 (надає ознаку стійкості до злакових кореневих черв'яків шляхом експресії інсектицидного токсичного білка СтуЗВБЬ), або об'єкти трансгенної кукурудзи, що надають дві або декілька ознак, такі як об'єкт кукурудзи МОМ 88017 (надає ознаку стійкості до злакових кореневих черв'яків шляхом експресії інсектицидного токсичного білка СтуЗВЬ і ознаку стійкості до гербіциду гліфосату шляхом експресії ЕРЗР5, нечутливого до гліфосату) і об'єкт кукурудзи ОАЗ 59122-7 (надає ознаку стійкості до злакових кореневих черв'яків шляхом експресії бінарного токсину Р514981 ВасШив Тпигіпдіепвіб5, також званого Сту34/Сту35, і ознаку толерантності до гербіциду глюфозинату). В інших джерелах розкрита комбінація, що передбачає виведення ознак, які надаються об'єктами кукурудзи МОМ 88017 або ЮБА5Б 59122-7, з трансгенним об'єктом кукурудзи, що надає ознаку стійкості до злакових кореневих черв'яків, і ця ознака є результатом експресії длРНК, націленої на супресію гена злакових кореневих черв'яків, життєво важливого для кореневих черв'яків (патент США 7943819). В основі таких комбінацій лежать проблеми, пов'язані з необхідністю спільного виведення згаданих множинних ознак, розташованих в декількох різних локусах і в декількох хромосомах в геномі кукурудзи в одній рослині кукурудзи, і збереження цих ознак як гібридів у десятків, якщо не сотень, різних варіантів зародкової плазми кукурудзи. Ці проблеми можна вирішити шляхом спільного включення в один локус комбінації з цих ознак. Автори даного винаходу представляють одне таке вирішення цієї проблеми у вигляді об'єкта кукурудзи МОМ 87411, в якому спільно комбінують три ковалентно зв'язані касети експресії в одному локусі в геномі кукурудзи, і ці касети експресії надають ознаки стійкості до злакових кореневих черв'яків і ознаки толерантності до гербіциду гліфосату в клітинах кукурудзи, тканинах кукурудзи, насінні кукурудзи і рослинах кукурудзи, що містять трансгенний об'єкт МОМ 87411. Використання об'єкта кукурудзи МОМ 87411 дає виробникам кукурудзи великі переваги: а) захист від економічних втрат, що виникають через личинок злакових кореневих черв'яків, за допомогою двох різних механізмів дії відносно стійкості до злакових кореневих черв'яків, і Б) можливість в широкому масштабі застосовувати на зернових культурах сільськогосподарські гербіциди, що містять гліфосат, для боротьби з бур'янами. Додатково, трансгени, що кодують ознаки стійкості до злакових кореневих черв'яків і ознаки толерантності до гліфосату, з'єднані в одному і тому ж сегменті ДНК і розташовані в одному локусі в геномі МОМ 87411, що забезпечує підвищену ефективність селекції і дозволяє використовувати молекулярні маркери для відстеження
Зо трансгенної вставки в популяції, призначеній для розведення, і в її потомстві.
Об'єкт кукурудзи МОМ 87411 одержували способом трансформації за допомогою
Адгобрасієгійт інбредної лінії кукурудзи за допомогою плазмідної конструкції РМОМ120417. Ця плазмідна конструкція містить зв'язані касети експресії рослин з регуляторними генетичними елементами, які необхідні для експресії в рослинних клітинах кукурудзи білка СРА4 ЕРБР5, а також білка СтузЗВЬ і длРНК, націленої на супресію життєво важливого гена в клітинах злакових кореневих черв'яків, при цьому в раціон цих злакових кореневих черв'яків вводять клітини кукурудзи, що містять об'єкт кукурудзи МОМ 87411. Клітини кукурудзи регенерували в інтактні рослини кукурудзи і проводили селекцію окремих рослин з популяції рослин, в яких виявлена цілісність касет експресії, стійкість до гліфосату і порушення живлення личинки злакових кореневих черв'яків. Рослина кукурудзи, яка містить в своєму геномі зв'язані рослинні касети експресії, представлені в об'єкті кукурудзи МОМ 87411, є одним з аспектів даного винаходу.
Плазмідну ДНК, вставлену в геном об'єкта кукурудзи МОМ 87411, піддавали детальним молекулярним аналізам. Ці аналізи включали в себе визначення: кількості вставок (кількості інсерційних сайтів в геномі кукурудзи), кількості копій (кількості копій Т-ДНК в межах одного локусу) і цілісності трансгенних вставлених ДНК. Плазмідна конструкція, що містить вставлені в геном кукурудзи три зв'язані касети експресії, внаслідок чого був створений об'єкт МОМ 87411, містить декілька сегментів (з'єднувальних послідовностей між елементами, які використовують для створення або конструювання декількох касет експресії), відносно яких не відома можливість їх природної появи в геномі кукурудзи, або в інших векторах, або в трансгенних
БО об'єктах кукурудзи, або іншим чином (наприклад, послідовності, вказані в ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЗЕО І
МО:2, БЕО ІЮ МО:3, 5ЕО І МО 4, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІО МО:8, 5ЕО
ІО МО:9, 5ЕО І МО:10; 5ЕО ІЮ МО-12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО І
МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО 10 МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО 10 МО: 44, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО Ір
МО:49, ЗЕО ІЮ МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 і 5ЕО ІЮ МО:52). Додатково, об'єкт трансформації, що викликає появу вставленої трансгенної ДНК в об'єкті МОМ 87411, являє собою в даному винаході вставку в єдиний локус в геномі кукурудзи, внаслідок чого виникають два нових локуси або з'єднувальні послідовності між вставленою ДНК і ДНК геному кукурудзи (додаткові з'єднувальні послідовності), які мають достатню довжину, щоб бути унікальними тільки відносно геному кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411. Ці з'єднувальні послідовності є корисними для бо виявлення присутності ДНК об'єкта МОМ 87411 в клітинах кукурудзи, тканинах, насінні і рослинах кукурудзи або в рослинних продуктах (товарній продукції). У винаході описані молекулярні зонди і пари праймерів ДНК, які були розроблені для використання з метою ідентифікації присутності цих різних з'єднувальних сегментів в біологічних зразках, які містять або передбачувано містять клітини кукурудзи, насіння, частини рослин або тканини рослин, що містять ДНК об'єкта МОМ 87411. Дані показують, що об'єкт МОМ 87411 містить єдину вставку Т-
ДНК з однією копією вставленої трансгенної ДНК. У об'єкті МОМ 87411 не були виявлені які- небудь додаткові елементи з вектора трансформації рмоОмМ120714, крім лівої і правої приграничних ділянок Адгобасієгішт Їштеїасіеп5, які використовують для перенесення трансгенної ДНК від трансформаційної плазміди рослин в геном кукурудзи. Нарешті, проводили термічну ампліфікацію з одержанням специфічних ампліконів, які являють собою діагностичну ознаку на присутність згаданої ДНК об'єкта МОМ 87411 в зразку, і аналізи послідовностей ДНК, для визначення довільно позначених 5- і 3З-вставлених в геном рослин з'єднань, для підтвердження організації елементів всередині вставки, і для визначення повної послідовності
ДНК у вставленої трансгенної ДНК в об'єкті рослини кукурудзи МОМ 87411 (5ЕО ІЮО МО: 1).
Була одержана множина трансгенних об'єктів з використанням конструкції, застосовуваної для одержання трансгенного об'єкта МОМ 87411, ї різні конструкції були створені і використані для одержання багатьох десятків інших об'єктів трансгенної кукурудзи, які потім порівнювали з об'єктом МОМ 87411 і подібними об'єктами. Всі ці об'єкти були тестовані в біопробах з раціоном злакових кореневих черв'яків на ефективність їх контролю, і в цих тестах в раціоні личинок злакових кореневих черв'яків були присутніми тканини трансгенних об'єктів рослин кукурудзи.
Було встановлено, що орієнтація експресії двох різних касет експресії, які відповідають за передачу різним об'єктам ознак стійкості до злакових кореневих черв'яків, мала вирішальне значення для ефективності об'єктів відносно контролю злакових кореневих черв'яків, якщо в раціоні личинок злакових кореневих черв'яків були присутніми клітини об'єкта кукурудзи, експресуючі ці ознаки стійкості. Було виявлено, що два різних промотори, САММ е355 і 2т.РІС, надають несподівану і високу ефективність кукурудзяним об'єктам, що містять касети експресії, експресуючі протектант від длРНК злакових кореневих черв'яків з промотору е355 і токсичний для злакових кореневих черв'яків білок СгузВоЬ з промотору 2т.РІЇС, який розташований суміжно і в дивергентному напрямі від промотору е355. Якщо згадані промотори знаходилися
Зо в цій конкретній орієнтації, були одержані значно поліпшені показники трансгенних об'єктів, що виявляють ефективність.
Якщо не вказане інше, терміни потрібно розуміти відповідно до їх звичайного застосування рядовими фахівцями в даній галузі техніки. Визначення загальноприйнятих термінів в галузі молекулярної біології також можна знайти у виданнях: Кіедег еї аї., сіІо5загу ої Сепеїіс5:
СіІаззіса! апа Моїесціаг, 5-е видання, Зргіпдег-Мепад: Мем/ Могк, 1991; і І ем/п, Сепе5 М, Охіога
Опімегейу Рге55: Мем/ ХогКк, 1994. Використовуваний у винаході термін "кукурудза" означає 2еа тау;х і включає в себе всі варіанти рослин, які можна піддавати селекції з рослинами кукурудзи, що містять МОМ 87411. Використовуваний у винаході термін "який містить" означає "який включає в себе, без обмеження".
Даний винахід стосується трансгенних рослин, які були трансформовані ДНК-конструкцією, що містить щонайменше три касети експресії: перша касета експресії експресує длРНК в кількості, токсичній для злакових кореневих черв'яків, сконструйовану для супресії життєво важливого для злакових кореневих черв'яків гена, ортологічного гену 5п!7 дріжджів, друга касета експресії експресує дельта-ендотоксин СтуЗзВр в кількості, токсичній для злакових кореневих черв'яків, і третя касета експресії експресує фермент СР4 ЕРБРБ5 стійкості до гліфосату, який є нечутливим до гліфосатного інгібування. Рослини кукурудзи, трансформовані
ДНК-конструкціями за винаходом і згідно зі способами, розкритими у винаході, є стійкими до
СЕМУ і толерантними до обробок гербіцидом гліфосатом. Зчепленість агрономічних ознак легко забезпечує спільне збереження цих ознак в популяції, що виводиться, і демонструє більш високу ефективність проти злакових кореневих черв'яків, в порівнянні з цими показниками у рослин, що несуть тільки єдиний інгібуючий ген злакових кореневих черв'яків, або у рослин, які несуть ці ж самі інгібуючі гени для злакових кореневих черв'яків (СтуЗзВЬ і длРНК), об'єднані в селекційний пакет.
Трансгенну "рослину" одержують наступними способами: шляхом трансформації рослинної клітини з гетерологічною ДНК, тобто з конструкцією полінуклеїнової кислоти, яка включає в себе трансген, що розглядається; шляхом регенерації популяції рослин, одержаної після вставки трансгена в геном рослинної клітини; і шляхом селекції конкретної рослини, що характеризується наявністю вставки в геном в конкретній локалізації. Термін "об'єкт" стосується вихідної трансформованої рослини і потомства трансформанта, яке включає в себе бо гетерологічну ДНК. Термін "об'єкт" також включає в себе потомство, одержане статевим ауткросингом між об'єктом і іншою рослиною, при цьому потомство включає в себе гетерологічну ДНК. Вставлена ДНК і фланкуюча геномна ДНК з трансформованого батьківського об'єкта присутні в потомстві від цього схрещування в тій же хромосомній локалізації навіть після повторного зворотного схрещування з рекурентним батьком. Термін "об'єкт" також стосується ДНК з вихідного трансформанта, яка містить вставлену ДНК і фланкуючу геномну послідовність, що безпосередньо прилягає до вставленої ДНК, відносно яких можна передбачати, що вони передаються потомству, яке одержує вставлену ДНК, що включає в себе трансген, що розглядається, внаслідок статевого схрещування однієї батьківської лінії, яка несе вставлену ДНК (наприклад, вихідний трансформант і потомство, одержане самозапиленням), і батьківської лінії, яка не містить вставленої ДНК. Даний винахід стосується трансгенних об'єктів рослин кукурудзи, що містять МОМ 87411, їх потомства і композицій ДНК, що містяться в цих об'єктах. "Зонд" являє собою виділену нуклеїнову кислоту, до якої прикріплена звичайна виявлювана мітка або репортерна молекула, наприклад радіоактивний ізотоп, ліганд, хемілюмінесцентний агент або фермент. Такий зонд є комплементарним відносно ланцюга нуклеїнової кислоти- мішені, а саме, згідно з даним винаходом, ланцюга геномної ДНК з МОМ 87411, що походить або з рослини МОМ 87411, або із зразка, який включає в себе ДНК МОМ 87411. Зонди згідно з даним винаходом включають в себе не тільки дезоксирибонуклеїнові або рибонуклеїнові кислоти, але також поліаміди і інші матеріали для зондів, які специфічно зв'язуються з цільовою послідовністю ДНК і можуть бути використані для виявлення присутності цієї цільової послідовності ДНК.
ДНК-праймери являють собою виділені полінуклеїнові кислоти, які відпалюють з комплементарним ланцюгом цільової ДНК за допомогою гібридизації нуклеїнових кислот, з утворенням гібриду між праймером і ланцюгом ДНК-мішені, і потім нарощують по довжині ланцюга ДНК-мішені за допомогою полімерази, наприклад ДНК-полімерази. Пара ДНК- праймерів або набір ДНК-праймерів згідно з даним винаходом належить до двох ДНК- праймерів, які використовують для ампліфікації цільової послідовності нуклеїнової кислоти, наприклад, шляхом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) або іншими загальноприйнятими способами ампліфікації полінуклеїнових кислот.
ДНК-зонди і ДНК-праймери звичайно мають довжину в 11 полінуклеотидів або більше, часто 18 полінуклеотидів або більше, 24 полінуклеотиди або більше або 30 полінуклеотидів або більше. Ці зонди і праймери вибирають таким чином, щоб вони мали достатню довжину для специфічної гібридизації з послідовністю-мішенню при гібридизації в умовах високої жорсткості.
Переважно, зонди і праймери згідно з даним винаходом мають повну подібність послідовностей з послідовністю-мішенню, разом з тим, по звичайних методиках можна конструювати зонди, відмінні від послідовності-мішені, які зберігають здатність до гібридизації з послідовностями-мішенями.
Праймери і зонди на основі фланкуючої геномної ДНК і вставлених послідовностей, описаних у винаході, можна використовувати для верифікації (і, за необхідності, для корекції) розкритих послідовностей ДНК за допомогою загальноприйнятих способів, наприклад шляхом повторного клонування і секвенування таких молекул ДНК.
Нуклеїновокислотні зонди і праймери за даним винаходом гібридизуються з молекулою цільової ДНК при жорстких умовах. Можна використовувати будь-який загальноприйнятий спосіб гібридизації або ампліфікації нуклеїнових кислот для визначення присутності в зразку
ДНК з трансгенної рослини. Молекули полінуклеїнової кислоти, також звані сегментами нуклеїнової кислоти або її фрагментами, при певних обставинах здатні до специфічної гібридизації з іншими молекулами нуклеїнової кислоти. Вважається, що використовувані у винаході дві молекули полінуклеїнової кислоти здатні до специфічної гібридизації одна з одною, якщо ці дві молекули можуть утворювати антипаралельну дволанцюжкову структуру нуклеїнової кислоти. Вважається, що молекула нуклеїнової кислоти є "комплементом" іншої молекули нуклеїнової кислоти, якщо ці молекули демонструють повну комплементарність.
Вважається, що використовувані у винаході молекули демонструють повну "комплементарність", якщо кожний нуклеотид однієї з молекул є комплементарним нуклеотиду іншої молекули. Дві молекули вважаються "мінімально комплементарними", якщо вони можуть гібридизуватися одна з одною з достатньою стабільністю, що дозволяє їм залишатися ренатурованими одна відносно одної щонайменше при звичайних умовах "низької жорсткості".
Аналогічно, молекули вважаються "комплементарними", якщо вони можуть гібридизуватися одна з одною з достатньою стабільністю, що дозволяє їм залишатися ренатурованими одна відносно одної щонайменше при звичайних умовах "низької жорсткості". Загальноприйняті бо умови жорсткості описані в керівництві затьгоок еї аї., 1989, і авторами Наутез еї аї.: Мисівєїс
Асій НубБбгіаігайцйоп, А Ргасіїсаї Арргоасі, ІК Ргеб55, УММазпіпдаїоп, ОС (1985). Таким чином, допустимо відхилятися від повної комплементарності, якщо такі відхилення повністю не виключають можливість утворення дволанцюжкової структури цими молекулами. Щоб молекула нуклеїнової кислоти служила як праймер або зонд, вона тільки повинна мати достатню міру комплементарності в послідовності, щоб мати можливість утворити стійку дволанцюжкову структуру при конкретних використовуваних значеннях концентрації розчинників і солей.
Згідно з винаходом, використовувана по суті гомологічна послідовність являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, яка специфічно гібридизується 3 комплементом послідовності нуклеїнової кислоти, з якою порівнюють цю послідовність в умовах високої жорсткості. Придатні умови жорсткості, які сприяють гібридизації ДНК, являють собою, наприклад, б,Оххлорид натрію/цитрат натрію (550) при температурі приблизний 45"С, з подальшим промиванням 2,0х55С при 50"С, і ці умови відомі фахівцям в даній галузі або наведені в керівництві Сиггепі РгоїосоЇ5 іп МоїІесшіаг Віоіоду, Чойп Умієу 5 Боп5, М.М. (1989), 6.3.1-6.3.6. Наприклад, можна вибирати концентрацію солі на етапі промивання при умовах низької жорсткості приблизно 2,0х550 при 50"С, і при умовах високої жорсткості приблизно бех55ОС при 50"С. Додатково, температуру на етапі промивання можна підвищувати до кімнатної температури приблизно 22"С при умовах низької жорсткості і приблизно до температури 65"С при умовах високої жорсткості. Значення температури і концентрації солі можна варіювати або можна підтримувати постійні значення як температури, так і концентрації солі, і при цьому варіювати інші змінні показники. У переважному варіанті здійснення полінуклеїнова кислота за даним винаходом буде специфічно гібридизуватися з однією або декількома молекулами нуклеїнових кислот, що являють собою 5ЕО ІЮ МО:1,2,3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 21, 25, 41, 42, 43, 44, 45, 49, 50, 51 або 52, або з їх комплементами, або з їх фрагментами, при помірно жорстких умовах, наприклад приблизно в 2,0х5552 і приблизно при 65"С. У особливо переважному варіанті здійснення нуклеїнова кислота за даним винаходом буде специфічно гібридизуватися з однією або декількома молекулами нуклеїнових кислот, вказаними в ЗЕО ІЮ МО:1,2, 3,4,5,6, 7, 8,9, 10, 12, 14, 16, 21, 25, АТ, 42, 43, 44, 45, 49, 50, 51 або 52, або з їх комплементами, або з їх фрагментами, в умовах високої жорсткості. У одному з
Зо аспектів даного винаходу переважна маркерна молекула нуклеїнової кислоти за даним винаходом має послідовність нуклеїнової кислоти, представлену в ЗЕО ІЮ МО:1 або 5ЕО ІЮ
МО:2, або 5ЕО ІО МО:3, або 5ЗЕО ІЮ МО:4, або 5ЕО ІЮ МО:5, або 5ЕО ІЮО МО:6, або ЗЕО ІО
МО:7, або ЗЕО ІЮ МО:8, або 5ЕО ІО МО:9, або ЗЕО ІЮ МО:10, або 5ЕО ІЮ МО:12, або 5ЕО ІЮ
МО:14 або 5ЕО ІЮО МО:16, або 5ЕО ІЮ МО:21, або ЗЕО ІЮ МО:25, або 5ЕО ІЮ МО:41, або ЗЕО ІЮ
МО:42, або ЗЕО ІЮ МО:43, або 5ЕО ІО МО:44, або 5ЕО ІОЮО МО:45, або ЗЕО ІЮ МО:49, або ЗЕО ІЮ
МО:50, або 5ЕО ІО МО:51, або 5ЕБЕО ІЮО МО:52, або являє собою їх комплементи або їх фрагменти. Гібридизацію зонда з цільовою молекулою ДНК можна виявити будь-якою кількістю способів, відомих фахівцям в даній галузі, і ці способи можуть включати в себе, без обмеження, флуоресцентні мітки, радіоактивні мітки, мітки на основі антитіл і хемілюмінесцентні мітки.
Відносно ампліфікації цільової послідовності нуклеїнової кислоти (наприклад, за допомогою
ПЛР) з використанням конкретної пари ампліфікаційних праймерів, "жорсткі умови" являють собою умови, які дозволяють проводити гібридизацію пари праймерів тільки з цільовою послідовністю нуклеїнової кислоти, з якою буде зв'язуватися праймер, що має відповідну послідовність дикого типу (або комплементарну їй послідовність), і переважно шляхом реакції термічної ампліфікації ДНК виробляти унікальний продукт ампліфікації - амплікон.
Термін "специфічний для (цільової послідовності)" вказує, що зонд або праймер гібридизується в жорстких умовах гібридизації тільки з цільовою послідовністю в зразку, який містить цю цільову послідовність.
Використовувані у винаході терміни "ампліфікована ДНК" або "амплікон" стосуються продукту, одержаного способом ампліфікації полінуклеїнових кислот, націленого на молекулу- мішень полінуклеїнової кислоти, яка є частиною полінуклеїновокислотної матриці. Наприклад, щоб визначити, чи містить рослина кукурудзи, одержана статевим схрещуванням, геномну ДНК трансгенної рослини з рослини кукурудзи, що містить МОМ 87411 згідно з даним винаходом,
ДНК, яку виділяють із зразка тканини рослини кукурудзи, можна піддавати способу ампліфікації полінуклеїнових кислот з використанням пари праймерів, яка включає в себе праймер, одержаний з послідовності ДНК в геномі МОМ 87411, що містить рослинну ДНК, суміжну з сайтом інсерції вставленої гетерологічної ДНК (трансгенної ДНК), і другий праймер, одержаний з вставленої гетерологічної ДНК, з метою одержання амплікону, який є діагностичною ознакою наявності ДНК рослин МОМ 87411. Довжина і послідовність ДНК діагностичного амплікону також бо є діагностичними ознаками геномної ДНК рослин. Довжина амплікону може варіюватися від сумарної довжини пари праймерів плюс одна пара нуклеотидних основ, переважно плюс близько п'ятдесяти пар нуклеотидних основ, більш переважно плюс приблизно двісті п'ятдесят пар нуклеотидних основ і найбільш переважно плюс приблизно чотириста п'ятдесят пар нуклеотидних основ або більше. Альтернативно, пара праймерів може бути одержана з геномної послідовності на обох сторонах вставленої гетерологічної ДНК таким чином, щоб одержати амплікон, який повністю включає в себе всю вставлену полінуклеотидну послідовність (наприклад, прямий праймер, виділений з геномної частини 5ЕО ІЮ МО-1, і зворотний праймер, виділений з геномної частини 5ЕО ІЮ МО:1, який ампліфікує молекулу
ДНК, що містить з'єднувальну послідовність згідно з винаходом в геномі об'єкта МОМ 87411).
Елемент пари праймерів, одержаних з геномної послідовності рослини, суміжної з вставленою трансгенною ДНК, розташований на відстані від вставленої послідовності ДНК, їі ця відстань може складати від однієї пари нуклеотидних основ до приблизно двадцяти тисяч нуклеотидних пар основ. Використання терміна "амплікон" конкретно виключає праймерні димери, які можуть утворитися в реакції термічної ампліфікації ДНК.
Ампліфікацію полінуклеїнових кислот можна здійснювати за допомогою будь-якого з різних способів ампліфікації полінуклеїнових кислот, відомих в даній галузі техніки, які включають в себе полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР). Способи ампліфікації добре відомі в даній галузі техніки і описані, зокрема, в патентах США МоМо 4683195 і 4683202, і в керівництві РОК
Ргоїосої!5: А Сціде о Меїпоаз апа Арріїсайопв»5, ей. Іппі5 еї аї., Асадетіс Рге55, зап Оіедо, 1990.
Способи ПЛР-ампліфікації були розроблені для ампліфікації геномної ДНК до 22 кб (кілобаз) і
ДНК бактеріофага до 42 кб (Снепа єї аї., Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА 91:5695-5699, 1994). Ці способи ампліфікації ДНК, а також інші способи, відомі в даній галузі, можна використовувати для здійснення даного винаходу. Послідовність вставленої гетерологічної ДНК або послідовність фланкуючої геномної ДНК з об'єкта МОМ 87411 можна верифікувати (їі, за необхідності, коректувати) шляхом ампліфікації таких молекул ДНК з об'єкта МОМ 87411, що містить насіння або рослини, вирощені з насіння, яке депоноване в Американській колекції типових культур АТСС під номером доступу РОТА-12669, з використанням праймерів, одержаних з послідовностей згідно з винаходом, з подальшим стандартним ДНК- секвенуванням амплікону з ПЛР, або клонованих фрагментів його ДНК.
Зо Набори для виявлення ДНК, основані на способах ампліфікації ДНК, містять праймерні молекули ДНК, які специфічно гібридизуються з цільовою ДНК і ампліфікують діагностичний амплікон при придатних умовах реакції. Цей набір можна застосовувати в способі виявлення на основі агарозного гелю або в будь-яких інших способах виявлення діагностичного амплікону, які відомі в даній галузі техніки. Метою даного винаходу є набір, що містить ДНК-праймери, які гомологічні або комплементарні якій-небудь ділянці геномної області кукурудзи, як указано в
ЗЕО ІЮ МО/:1, і якій-небудь ділянці вставленої трансгенної ДНК, як указано в 5ЕО ІЮ МО:1.
Фахівці в галузі ампліфікації ДНК можуть вибирати молекули ДНК, використовувані як ДНК- праймери, з розкритої у винаході послідовності трансгенної/геномної ДНК з МОМ 87411 (5ЕО ІЮ
МО:1).
Діагностичний амплікон, одержаний згаданими способами, може бути виявлений за допомогою множини методик. Одним з таких способів є генетичний біт-аналіз (Мікігогом еї аї.,
Мисівїс Асіа Нев. 22:4167-4175, 1994), в якому створюється олігонуклеотид ДНК, що перекриває і суміжну фланкуючу сгеномну ДНК і вставлену послідовність ДНК. Олігонуклеотид іммобілізують в ямках мікротитрувального планшета. Після ПЛР області, що представляє інтерес (з використанням одного праймера у вставленій послідовності і одного праймера в суміжній фланкуючій геномній послідовності), одноланцюжковий ПЛР-продукт може піддаватися гібридизації з іммобілізованим олігонуклеотидом і служити як матриця для реакції подовження на одну основу за допомогою ДНК-полімерази і мічених дидезоксинуклеотидтрифосфатів (ддНТФ), специфічних для передбачуваної наступної основи.
Показання можна одержувати на основі люмінесцентного аналізу або імуноферментного аналізу ЕГІЗБА. Сигнал вказує на присутність трансгенної/геномної послідовності, зумовлену успішною ампліфікацією, гібридизацією і подовженням на одну основу.
Іншим способом є технологія піросеквенування, описана М/пде (Іппоу. Рпапта. Тесп. 00:18- 24, 2000). У цьому способі конструюють олігонуклеотид, який перекриває з'єднання суміжної геномної ДНК і вставленої ДНК. Олігонуклеотид гібридизують з одноланцюжковим ПЛР- продуктом з області, що представляє інтерес (один праймер у вставленій послідовності і один праймер у фланкуючій геномній послідовності), і інкубують в присутності ДНК-полімерази, АТФ, сульфурилази, люциферази, апірази, аденозин-5'і-фосфосульфату і люциферину. ДНТФ додають окремо і вимірюють результати включення по світловому сигналу. Світловий сигнал вказує на присутність трансгенної/геномної послідовності, зумовлену успішною ампліфікацією, гібридизацією і подовженням на одну основу.
Поляризація флуоресценції, описана авторами Спеп еї аї. (зепоте Кевз. 9:492-498, 1999), являє собою спосіб, який можна використовувати для виявлення амплікону за даним винаходом. За допомогою цього способу конструюють олігонуклеотид, що перекриває з'єднання геномної фланкуючої ДНК і вставленої ДНК. Олігонуклеотид гібридизують з одноланцюжковим ПЛР-продуктом з області, що представляє інтерес (один праймер у вставленій ДНК і один праймер у фланкуючій геномній послідовності ДНК), і інкубують в присутності ДНК-полімерази і флуоресцентно міченого ддНТФ. Подовження на одну основу приводить до включення ддНТФ. Включення можна вимірювати по зміні поляризації за допомогою флуорометра. Зміна поляризації вказує на присутність трансгенної/геномної послідовності, зумовлену успішною ампліфікацією, гібридизацією і подовженням на одну основу.
Аналіз ТадМапФ (РЕ Арріїєй Віозузіетв5, Ровіег Спу, СА) розглядається як спосіб виявлення і кількісного визначення присутності послідовності ДНК і повністю викладений в інструкціях, представлених виробником. Коротко, олігонуклеотидний зонд на основі перенесення енергії за допомогою флуоресцентного резонансу (ЕКЕТ) конструюють таким чином, що він перекриває з'єднання геномної фланкуючої ДНК і вставленої ДНК. Зонд ЕКЕТ і ПЛР-праймери (один праймер у вставленій послідовності ДНК і один праймер у фланкуючій геномній послідовності) піддають циклізації в присутності термостабільної полімерази і дНТФ. Гібридизація ЕКЕТ- зондів приводить до розщеплення і вивільнення флуоресцентної групи з гасильної групи на зонді ЕКЕТ. Флуоресцентний сигнал вказує на присутність трансгенної/геномної послідовності, зумовлену успішною ампліфікацією і гібридизацією.
Були описані молекулярні маяки для застосування з метою виявлення послідовностей, як описано авторами Туапді еї аї. (Маїшге Віоїесп. 14:303-308, 1996). Коротко, конструювали олігонуклеотидний зонд ЕКЕТ, що перекриває з'єднання фланкуючої геномної ДНК і вставленої
ДНК. Унікальна структура зонда ЕКЕТ приводить до утворення вторинної структури, що його містить, в якій флуоресцентна і гасильна групи розташовані в безпосередній близькості. Зонд
ЕКЕТ і ПЛР-праймери (один праймер у вставленій послідовності ДНК і один праймер у
Зо фланкуючій геномній послідовності) піддають циклізації в присутності термостабільної полімерази і дНТФ. Після успішної ПЛР-ампліфікації, гібридизація зонда ЕКЕТ з послідовністю- мішенню приводить до видалення вторинної структури зонда і до просторового розділення флуоресцентної і гасильної груп. Одержують флуоресцентний сигнал. Флуоресцентний сигнал вказує на присутність фланкуючої/трансгенної вставленої послідовності, зумовлену успішною ампліфікацією і гібридизацією.
Набори для виявлення ДНК можуть бути розроблені з використанням композицій, описаних у винаході, і способів, добре відомих в галузі виявлення ДНК. Набори можна використовувати для ідентифікації ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 в зразку і можна застосовувати в способах виведення рослин кукурудзи, що містять ДНК МОМ 87411. Набір містить молекули ДНК, які корисні як праймери або зонди і які гомологічні або комплементарні щонайменше можливим для застосування ділянкам 5БО ІЮО МО:1, згідно з винаходом. Молекули ДНК можна використовувати в способах ампліфікації ДНК (ПЛР) або як зонди в способі гібридизації полінуклеїнових кислот, тобто для саузерн-аналізу і нозерн-аналізу.
З'єднувальні послідовності можуть являти собою послідовність з групи, що складається з
ЗЕО ІО МО:2, 5ЕО ІЮ МО:3, ЗЕО 10 МО:5, 5ЕО 10 МО:6, 5ЕО І МО:7, 5ЕО 10 МО:8, 5ЕО ІЮ
МО:9, 5ЕО І МО:10; 5ЕО І МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО І МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І
МО:43, 5ЕО ІЮО МО:44, 5ЕО ІО МО:45, 5ЕО ІО МО:49, 5ЕО ІО МО:50, 5ЕО ІЮО МО:51 ії 5ЕО ІО
МО:52. Наприклад, з'єднувальні послідовності можуть бути довільно представлені нуклеотидними послідовностями, що являють собою 5БО І МО:5 і 5ЕО І МО:8.
Альтернативно, з'єднувальні послідовності можуть бути довільно представлені нуклеотидними послідовностями, що являють собою 5ЕО ІЮ МО:6 і 5ЗЕО ІЮ МО:9. Альтернативно, з'єднувальні послідовності можуть бути довільно представлені нуклеотидними послідовностями, що являють собою 5ЕО ІЮ МО:7 і 5ЕО ІЮ МО:10. Ці нуклеотиди сполучені фосфодіефірним зв'язком і в об'єкті кукурудзи МОМ 87411 присутні як частина геному рекомбінантної рослинної клітини. Ідентифікація однієї або декількох послідовностей з БЕО ІЮ МО:1, 5ЕО І МО:2, 5ЕО ІЮ
МО:З, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО І МО:5, 5ЕО ІЮ МО:б6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІО МО:9, 5ЕО
ІО МО:10, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО І МО:С41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО І
МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО ІЮ МО:50, ЗЕО ІЮО МО:51 або 5ЕО ІО МО:52 в зразку, одержаному з рослини кукурудзи, насіння або з частини рослини кукурудзи, є визначальною, бо що ДНК походить від об'єкта кукурудзи МОМ 87411, і діагностичною ознакою на присутність в зразку ДНК, що міститься в об'єкті кукурудзи МОМ 87411. Таким чином, даний винахід стосується молекули ДНК, що містить щонайменше одну з нуклеотидних послідовностей, які являють собою 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЗЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮ МО:3, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО ІО МО:5, 5ЕО ІЮ
МО:6, 5ЕО ІО МО:7, 5ЕО І МО:8, 5ЕО І МО:9, 5ЕО І МО 10, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25,
ЗЕО ІЮ МО:41, БЕО ІО МО:42, 5ЕБЕО ІЮ МО:43, 5ЕО 10 МО:44, 5ЕО ІО МО:45, 5ЕО 10 МО:49, 5ЕО
ІО МО:50, 5ЕО ІЮО МО:51 або 5ЕО ІО МО:52. У обсяг даного винаходу входить будь-який сегмент
ДНК, одержаний з трансгенного об'єкта кукурудзи МОМ 87411, і є достатнім, щоб такий сегмент включав в себе щонайменше одну з послідовностей, показаних в ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2,
ЗЕО І МО:З3, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО 10 МО:5, 5ЕО 10 МО:6, 5ЕО І МО:7, 5ЕО 10 МО:8, 5ЕО ІЮ
МО:9, 5ЕО І МО:10, 5ЕО І МО:21, 5ЕО І МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МОс:42, 5ЕО І
МО:43, ЗЕО ІЮО МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО ІЮО МО:50, ЗЕО ІЮО МО:51 або 5ЕО ІЮ
МО:52. Додатково, будь-який полінуклеотид, що містить послідовність, комплементарну будь- якій з описаних в цьому параграфі послідовностей, входить в обсяг даного винаходу.
Винахід розглядає ілюстративні молекули ДНК, які можна використовувати або як праймери, або як зонди для виявлення присутності ДНК, яка походить з рослини кукурудзи, що містить в зразку ДНК об'єкта МОМ 87411. Такі праймери або зонди є специфічними для цільової послідовності нуклеїнової кислоти і як такі є корисними для ідентифікації послідовності нуклеїнової кислоти об'єкта кукурудзи МОМ 87411 за допомогою способів за винаходом, описаних в цьому документі. "Праймер" звичайно являє собою виділений полінуклеотид високої міри очищення, який сконструйований для використання в специфічних способах відпалу або гібридизації, до яких належить термічна ампліфікація. Пара праймерів може бути використана з матричною ДНК, наприклад із зразком геномної ДНК кукурудзи, для термічної ампліфікації, такої як полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), для одержання амплікону, при цьому амплікон, одержаний за допомогою такої реакції, буде мати послідовність ДНК, відповідну послідовності матричної ДНК, розташованої між двома сайтами, де праймери гібридизуються з матрицею. Використовуваний у винаході "амплікон" являє собою частину або фрагмент ДНК, яка була синтезована за допомогою способів ампліфікації. Амплікон згідно з винаходом містить щонайменше одну з послідовностей, що являють собою ЗЕО ІЮ МО:21 або 5ЕО ІО МО:25. Праймер звичайно
Зо призначений для гібридизації з комплементарним ланцюгом ДНК-мішені для створення гібриду між праймером і ланцюгом ДНК-мішені, і присутність праймера є точкою розпізнавання полімерази для старту подовження праймера (тобто для полімеризації додаткових нуклеотидів в подовжувальну нуклеотидну молекулу), де як матриця використовується ланцюг ДНК-мішені.
Пара праймерів, використовувана у винаході, призначена для позначення використання двох праймерів, що зв'язують протилежні ланцюги з дволанцюжкового нуклеотидного сегмента з метою лінійної ампліфікації полінуклеотидного сегмента між позиціями, які являють собою мішень для зв'язування окремих елементів праймерної пари, звичайно в реакції термічної ампліфікації або в інших загальноприйнятих способах ампліфікації нуклеїнових кислот. Корисна для даного застосування пара праймерів повинна містити першу молекулу ДНК і другу молекулу ДНК, яка відрізняється від першої молекули ДНК, і при цьому обидві молекули мають достатню довжину суміжних нуклеотидів в послідовності ДНК, щоб діяти як праймери ДНК, при їх спільному використанні в реакції термічної ампліфікації з матричною ДНК, що походить з об'єкта кукурудзи МОМ 87411, для одержання амплікону, який є діагностичною ознакою для
ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 в зразку. Зразкові молекули ДНК, використовувані як праймери, являють собою ЗЕО ІЮ МО:18, 5ЕО ІЮ МО:20, 5ЕО ІЮ МО:22 або 5ЕО ІЮ МО:24. "Зонд" являє собою виділену нуклеїнову кислоту, яка є комплементарною відносно ланцюга нуклеїнової кислоти-мішені. Зонди включають в себе не тільки дезоксирибонуклеїнові або рибонуклеїнові кислоти, але також і поліаміди і інші матеріали зондів, які специфічно зв'язуються з цільовою послідовністю ДНК, і виявлення такого зв'язування може бути корисне з метою діагностики, розрізнення, визначення, детекції або підтвердження присутності цієї цільової послідовності ДНК в конкретному зразку. Зонд може бути приєднаний до звичайної виявлюваної мітки або репортерної молекули, наприклад до радіоактивного ізотопу, ліганду, хемілюмінесцентного агента або ферменту. Зразкові молекули ДНК, використовувані як зонди, являють собою 5ЕО ІЮ МО:19 і БЕО ІО МО:23.
Зонди і праймери можуть мати послідовності, повністю ідентичні цільовій послідовності, разом з тим, за допомогою загальноприйнятих способів можна створювати праймери і зонди, які відмінні від цільової послідовності, але зберігають здатність до гібридизації переважно з цільовою послідовністю. Для того, щоб молекула нуклеїнової кислоти служила як праймер або зонд, вона повинна мати достатню міру комплементарності послідовності, щоб могла 60 утворитися стійка дволанцюжкова структура при конкретних концентраціях використовуваних розчинників і солей. Можна застосовувати будь-який загальноприйнятий спосіб гібридизації або ампліфікації нуклеїнових кислот для ідентифікації присутності в зразку трансгенної ДНК з об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Зонди і праймери звичайно мають довжину щонайменше приблизно 11 нуклеотидів, щонайменше приблизно 18 нуклеотидів, щонайменше приблизно 24 нуклеотиди або щонайменше приблизно 30 нуклеотидів або більше. Такі зонди і праймери специфічно гібридизуються з цільовою послідовністю ДНК при жорстких умовах гібридизації.
Звичайні жорсткі умови описані авторами затьгоок еї аї., 1989, і в керівництві Наутез еї аї.:
Мисієїс Асіа Нубгідігайноп, А Ргасіїса! Арргоасі, ІКГ. Ргез55, Умазпіпоаїоп, ОС (1985).
Будь-яку кількість способів, добре відомих фахівцям в даній галузі, можна використовувати для виділення і маніпуляцій з молекулою ДНК або з її фрагментом, згідно з винаходом, в тому числі способи термічної ампліфікації. Молекули ДНК або їх фрагменти можна також одержувати іншими способами, наприклад шляхом прямого синтезу фрагмента в хімічних реакціях, як це звичайно практикується за допомогою автоматизованого синтезатора олігонуклеотидів.
Таким чином, молекули ДНК і відповідні нуклеотидні послідовності, представлені у винаході, корисні, серед іншого, для ідентифікації об'єкта кукурудзи МОМ 87411, селекції сортів або гібридів рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ 87411, для виявлення присутності в зразку
ДНК, що походить з трансгенного об'єкта кукурудзи МОМ 87411, і для відстеження зразків на присутність і/або відсутність об'єкта кукурудзи МОМ 87411 або частин рослин, одержаних з рослин кукурудзи, які містять об'єкт МОМ 87411.
Винахід стосується рослин кукурудзи, їх потомства, насіння, рослинних клітин, частин рослин (таких як пилок, яйцеклітина, тканини качана або ниток, тканини волоті, тканини коріння, тканини стебла і тканини листя) і товарних продуктів. Ці рослини, потомство, насіння, клітини рослин, частини рослин і товарні продукти містять визначувану кількість полінуклеотиду за винаходом, тобто полінуклеотиду, який має щонайменше одну з послідовностей, показаних в
ЗЕО І МО:1, 5ЕО 10 МО:2, ЗЕО 10 МО:З3, 5ЕО 10 МО:4, 5ЕО І МО:5, 5ЕО 10 МО:6, 5ЕО ІЮ
МО:7, БЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮО МО:С9, 5ЕО І МО:10, 5ЕО І МО:12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО І МО:16,
ЗЕО І МО:21, 5ЕО ІЮ МОС25, 5ЕО ІО МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО ІЮ МО:44, 5ЕО
ІО МО:45, 5ЕО ІЮО МО:49, 5ЕО ІЮО МО:50, 5ЕО ІО МО:51 або 5ЕО ІО МО:52. Рослини, потомство, насіння, клітини рослин і частини рослин за винаходом також можуть містити один або декілька додаткових трансгенів. Такий додатковий трансген може являти собою будь-яку нуклеотидну послідовність, що кодує білок або молекулу РНК, що надає бажану ознаку, яка включає в себе, без обмеження, підвищену стійкість до комах, підвищену ефективність використання води, підвищену врожайність, підвищену стійкість до засухи, поліпшену якість насіння, поліпшені поживні властивості і/або підвищену толерантність до гербіцидів, при цьому бажану ознаку вимірюють відносно рослин кукурудзи, що не містять згаданий додатковий трансген.
Даний винахід стосується рослин кукурудзи, їх потомства, насіння, клітин рослин і частин рослин, таких як пилок, яйцеклітини, тканини качана або ниток, тканини волоті, кореня або тканини стебла і листя, одержаних з трансгенних рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411. Репрезентативний зразок насіння кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411, був депонований відповідно до Будапештського договору в Американській колекції типових культур (АТСС). Депозитарій АТСС надав насінню, що містить об'єкт МОМ 87411, індекс Раїепі Рерозії
ОРезідпайоп РТА-12669.
Винахід стосується мікроорганізмів, що містять молекулу ДНК, які в своєму геномі мають щонайменше одну послідовність, вибирану з групи, що складається з 5БЕО ІЮ МО, 5ЕО І
МО:2, БЕО ІЮ МО:3, 5ЕО І МО 4, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:б6, 5ЕО 10 МО7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО
ІО МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО ІЮ МО-12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО І
МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО 10 МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО 10 МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО І
МО:49, 5ЕО ІЮ МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 ії 5ЕО ІЮ МО:52. Прикладом такого мікроорганізму є трансгенна рослинна клітина. Мікроорганізми, такі як рослинна клітина за винаходом, є корисними в багатьох промислових застосуваннях, що включають в себе, без обмеження: (Її) використання як дослідницького інструменту для наукового пошуку або промислових досліджень; (ії) використання в культурі для одержання ендогенних або рекомбінантних вуглеводів, ліпідів, нуклеїнових кислот або білкових продуктів, або малих молекул, які можна використовувати для подальших наукових досліджень або як промислові продукти; і (ії) використання в сучасних технологіях культивування рослинних тканин для одержання трансгенних рослин або культур рослинних тканин, які потім можна використовувати для сільськогосподарських досліджень або виробництва. У виробництві і застосуванні мікроорганізмів, таких як клітини трансгенних рослин, використовуються сучасні мікробіологічні бо технології і втручання людини для одержання рукотворних унікальних мікроорганізмів. При такому способі в геном рослинної клітини вводять рекомбінантну ДНК для створення з природних рослинних клітин трансгенної рослинної клітини, яка є окремою і унікальною клітиною. Такі трансгенні рослинні клітини можна потім культивувати подібно бактеріальним і дріжджовим клітинам, з використанням сучасних мікробіологічних технологій, і вони можуть існувати в недиференційованому, одноклітинному стані. Нова або змінена генетична композиція і фенотип трансгенної рослинної клітини являє собою технічний ефект, створений шляхом інтеграції гетерологічної ДНК в геном клітини. Мікроорганізми за винаходом, такі як трансгенні рослинні клітини, включають в себе: () способи одержання трансгенних клітин шляхом інтеграції рекомбінантної ДНК в геном клітини і подальше використання цієї клітини для одержання додаткових клітин, що мають цю ж гетерологічну ДНК; (її) способи культивування клітин, які містять рекомбінантну ДНК, з використанням сучасних мікробіологічних технологій; (її) способи одержання і очищення ендогенних або рекомбінантних вуглеводів, ліпідів, нуклеїнових кислот або білка, продуктів з культивованих клітин; і (ім) способи з використанням сучасних технологій культивування рослинних тканин з трансгенними клітками рослин для одержання трансгенних рослин або тканинних культур трансгенних рослин.
Рослини за винаходом можуть передавати потомству об'єкт ДНК, що включає в себе трансген. Використовуване у винаході "потомство" включає в себе будь-яку рослину, насіння, рослинну клітину і/або регенеровану частину рослини, що містить ДНК об'єкта, одержану від предка рослин, і/або містить молекулу ДНК, яка має щонайменше одну послідовність, вибирану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО І МО:3, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО І МО:5,
ЗЕО ІО МО:6, ЗЕО ІЮ МО:7, ЗЕО 10 МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО І МО:12, 5ЕО ІЮ
МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО 10 МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І
МО:43, 5ЕО ІЮО МО:44, 5ЕО ІО МО:45, 5ЕО ІО МО:49, 5ЕО ІО МО:50, 5ЕО ІЮО МО:51 ії 5ЕО ІО
МО:52. Рослини, потомство і насіння можуть бути гомозиготними або гетерозиготними по траносгену.
Потомство можна вирощувати з насіння, одержаного від рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ 87411, і/або з насіння, одержаного від рослин, запліднених пилком від рослини, що містить об'єкт кукурудзи МОМ 87411.
Потомство рослин може бути самозапилюваним (також зване "самозапліднюваним") для
Зо створення чистих гомозиготних ліній рослин, тобто рослин, гомозиготних по трансгену.
Самозапиленням відповідного потомства можна одержувати рослини, які будуть гомозиготними по обох доданих екзогенних генах.
Як альтернатива, можна проводити ауткросинг потомства рослин, наприклад, схрещуванням з іншою неспорідненою рослиною для одержання сортового або гібридного насіння або рослин. Інша неспоріднена рослина може бути трансгенною або нетрансгенною.
Таким чином, сортове або гібридне насіння або рослини за винаходом можна одержувати шляхом схрещування першого батька, у якого відсутня специфічна і унікальна ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411, з другим батьком, що містить об'єкт кукурудзи МОМ 87411, внаслідок чого одержують гібрид, який містить специфічну і унікальну ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411.
Кожний батько може являти собою гібридну або інбредну/сортову рослину, за умови, що схрещування або селекція дає в результаті рослини або насіння за винаходом, тобто насіння, яке має щонайменше один алель, що несе ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 і/або молекулу
ДНК, що має щонайменше одну послідовність, вибирану з групи, що складається з 5ЕО І
МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МОЗ, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО
ІО МО:8, 5ЕО ІО МО:9, 5ЕО Ір МОл0, 5ЕО І МО 72, 5ЕО 10 МО:14, 5ЕО І МО:16, 5ЕО ІЮ
МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО ІЮ МО:44, 5ЕО І
МО:45, 5ЕО І МО:49, 5ЕО ІЮ МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 і 5ЕО ІЮО МО:52. Таким чином, можна схрещувати дві різних трансгенних рослини для одержання гібридного потомства, яке несе два незалежно розщеплюваних доданих екзогенних гени. Наприклад, об'єкт кукурудзи МОМ 87411, що несе ознаку стійкості до ураження злаковими кореневими черв'яками і ознаку толерантності до гліфосату, можна схрещувати з різними трансгенними рослинами кукурудзи, щоб одержати гібридну або інбредну рослину, яка має властивості обох трансгенних батьків. Одним з таких прикладів може бути схрещування об'єкта МОМ 87411, що несе ознаку стійкості до ураження злаковими кореневими черв'яками і ознаку толерантності до гліфосату, з рослиною кукурудзи, що має одну або декілька додаткових ознак, таких як толерантність до гербіцидів і/або контроль комах, внаслідок чого одержують потомство рослин або насіння, яке стійке до ураження злаковими кореневими черв'яками і толерантне до гліфосату і має щонайменше одну або декілька додаткових ознак. У даному винаході також розглядається зворотне схрещування з батьківською рослиною і ауткросинг з нетрансгенною рослиною, а також вегетативне бо розмноження. Опис інших способів схрещування, які звичайно використовуються для одержання різних ознак і культур, можна знайти в одній з декількох робіт, наприклад, Еепйг,
Вгеєдіпуд Меїнодз Тог Сийімаг ОемеІортепі, УМіїсох, у. ед. Атегісап 5осієїу ої Адгопоту, Мадізоп
М/І (1987).
Винахід стосується частини рослини, яку одержують з рослини кукурудзи, що містить об'єкт
МОМ 87411. Використовувана у винаході "частина рослини" стосується будь-якої частини рослини, яка складається з матеріалу, одержаного з рослини кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411. Частини рослини включають в себе, без обмеження, пилок, яйцеклітину, качан або нитки, волоті, тканину кореня або стебла, волокна і листя. Частини рослин, можуть бути життєздатними, нежиттєздатними, регенерованими і/або нерегенерованими.
Винахід стосується товарного продукту, який одержують з рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411, і який містить визначувану кількість нуклеїнової кислоти, специфічної для об'єкта МОМ 87411. Використовуваний у винаході "товарний продукт" стосується будь-якої композиції або продукту, що містить матеріал, одержаний з рослини кукурудзи, цільного або обробленого кукурудзяного насіння, однієї або декількох рослинних клітин і/або частин рослин, що містять ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Товарні продукти можуть продаватися споживачам і можуть бути життєздатними або нежиттєздатними. Нежиттєздатні товарні продукти включають в себе, без обмеження, нежиттєздатне кукурудзяне насіння; оброблене насіння кукурудзи, частини кукурудзяного насіння і частини рослин кукурудзи, кукурудзяне насіння і частини рослин кукурудзи, оброблені для кормів або харчових продуктів, олію, подрібнене насіння, борошно, пластівці, висівки, біомасу і паливні продукти. Життєздатні товарні продукти включають в себе, без обмеження, насіння кукурудзи, рослини кукурудзи і клітини рослин кукурудзи. Таким чином, рослини кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411, можна використовувати для виробництва якої-небудь товарної продукції, звичайно одержуваної з кукурудзи. Винахід розглядає будь-який такий товарний продукт, який одержаний з рослин кукурудзи, що містить ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411, що має щонайменше визначувану кількість однієї або декількох специфічних і унікальних молекул ДНК, присутність яких є визначальною для об'єкта кукурудзи МОМ 87411, і, зокрема, може містити виявлювану кількість полінуклеотиду, що несе молекулу ДНК, яка має щонайменше одну послідовність, вибирану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮ МО:З3, 5ЕО І МОС4, 5ЕО 10 МО:5,
Коо) ЗЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІО МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО 10 МО:10, 5ЕО ІЮ МО 12, 5ЕО ІЮ
МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО 10 МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І
МО:43, 5ЕО ІЮ МО 44, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО 10 МО:49, 5ЕО ІЮ МО:50, ЗЕО ІЮ МО:51 їі ЗЕО ІО
МО:52. Можна застосовувати будь-який стандартний спосіб виявлення нуклеотидних молекул, в тому числі способи виявлення, розкриті в даному винаході. Товарний продукт входить в обсяг
З5 даного винаходу, якщо в цьому товарному продукті є яка-небудь виявлювана кількість молекули ДНК, що має щонайменше одну діагностичну послідовність, вибирану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮ МО:3, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО ІО МО:5, ЗЕО ІЮ
МО:6, ЗЕО ІО МО:7, ЗЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО 10 МО-12, 5ЕО І МО 14,
ЗЕО ІЮ МО:16, БЕО ІО МО:21, 5ЕО ІО МО:25, 5ЕО 10 МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІО МО:43, 5ЕО
ІО МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО ІЮО МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 і ЗЕО ІЮ МО:52.
Таким чином, рослини, потомство, насіння, рослинні клітини, частини рослин (наприклад, пилок, яйцеклітини, качан або нитки, волоті, тканини кореня або стебла і листя) і товарні продукти за винаходом, є корисними, серед іншого, для вирощування рослин з метою одержання насіння і/або частин рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ 87411, для сільськогосподарських цілей, для одержання потомства, що містить об'єкт кукурудзи МОМ 87411, для селекції рослин і наукових цілей, для використання в мікробіологічних технологіях для промислових і науково-дослідних застосувань і для продажу споживачам.
Винахід стосується способів боротьби з бур'янами і способів виробництва рослин за допомогою гербіциду гліфосату і об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Розглянутий спосіб контролю бур'янів в полі, який складається з саджання в полі об'єкта кукурудзи МОМ 87411, що містить сортові або гібридні рослини, і застосування на цьому полі гербіцидно ефективної дози гліфосату з метою боротьби з бур'янами в полі без пошкодження рослин, що містять МОМ 87411. Таке застосування гербіциду гліфосату можна проводити до появи сходів, тобто в будь- який час після саджання насіння, що містить МОМ 87411, і до появи рослин, що містять МОМ 87411, або після появи сходів, тобто в будь-який час після появи рослин, що містять МОМ 87411. Також розглянутий інший спосіб контролю бур'янів в полі, який полягає в обробці поля ефективною дозою гербіциду гліфосату для боротьби з бур'янами і подальшому саджанні на цьому полі рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411. Таке застосування гербіциду гліфосату є передпосадковою обробкою, тобто до висадження насіння, що містить МОМ 87411, 60 і цю обробку можна проводити в будь-який час перед саджанням, в тому числі, і без обмеження,
в термін приблизно від 14 днів перед саджанням до 1 дня перед саджанням. Даний винахід також стосується способу одержання насіння кукурудзи, яке по суті не містить насіння бур'янів, і цей спосіб полягає в саджанні в полі насіння толерантних до гліфосату рослин кукурудзи, що містять МОМ 87411, обробці цього поля після появи сходів ефективною дозою гербіциду гліфосату, достатньою для знищення бур'янів, і збиранні насіння з цього поля. Гербіцидно ефективна доза гліфосату для обробки поля повинна знаходитися в діапазоні від приблизно 0,125 фунта на акр до приблизно 6,4 фунта гліфосату на акр протягом періоду вегетації. У одному варіанті здійснення протягом усього вегетаційного періоду загальна кількість застосовуваного гліфосату становить приблизно 1,5 фунта на акр. Протягом вегетаційного періоду можна використовувати декілька обробок гліфосатом, наприклад застосовувати гліфосат два рази (наприклад, застосування перед саджанням і застосування після появи сходів, або застосування до появи сходів і застосування після появи сходів) або застосовувати гліфосат три рази (наприклад, застосування перед саджанням, застосування перед появою сходів і застосування після появи сходів).
У винаході описані способи одержання рослини кукурудзи, толерантної до комах і гербіцидів, що містить послідовності ДНК, специфічні і унікальні для об'єкта МОМ 87411.
Використовувані в цих способах трансгенні рослини можуть бути гомозиготними або гетерозиготними по трансгену. Потомство рослин, одержане за допомогою цих способів, може являти собою сортові або гібридні рослини, може бути вирощене з насіння, одержаного від рослини, що містить об'єкт кукурудзи МОМ 87411, і/або з насіння, одержаного від рослини, заплідненої пилком від рослини, що містить об'єкт кукурудзи МОМ 87411, і може бути гомозиготним або гетерозиготним по трансгену. Потомство рослин надалі може бути самозапилюваним для створення чистих гомозиготних ліній рослин, тобто рослин, гомозиготних по трансгену, або, альтернативно, може бути ауткросним, наприклад схрещеним з іншою неспорідненою рослиною для одержання сортового або гібридного насіння або рослин.
Винахід стосується способів виявлення присутності в зразку ДНК, одержаної з клітин кукурудзи, тканин, насіння або рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411. Один зі способів являє собою (і) витягання зразка ДНК щонайменше з однієї клітини, тканини, насінини або рослини кукурудзи, (ії) контактування зразка ДНК щонайменше з одним праймером, який здатний продукувати послідовність ДНК, специфічну для ДНК об'єкта МОМ 87411, в умовах, придатних для секвенування ДНК, (іїї) здійснення реакції секвенування ДНК, і потім (ім) підтвердження того, що нуклеотидна послідовність містить нуклеотидну послідовність, специфічну для об'єкта МОМ 87411 або для конструкції, що його містить, наприклад послідовність, вибирану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МОЗ,
ЗЕО ІО МО:4, 5ЕО ІЮ МО:5, ЗЕО 10 МО:6, 5ЕО 10 МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО 10 МО:9, 5ЕО ІЮ
МО:10, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО 10 МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО ІЮ МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО І
МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО І МО:44, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО І
МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 і 5ЕО ІЮ МО:52. Інший спосіб являє собою (ї) витягання зразка ДНК щонайменше з однієї клітини, тканини, насінини або рослини кукурудзи, (її) контактування зразка ДНК з праймером, який здатний продукувати амплікон з ДНК об'єкта МОМ 87411, в умовах, придатних для ампліфікації ДНК, (іїї) здійснення реакції ампліфікації ДНК, ії потім (ім) детекцію молекули амплікону і/або підтвердження того, що нуклеотидна послідовність амплікону містить нуклеотидну послідовність, специфічну для об'єкта МОМ 87411, наприклад послідовність, вибирану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО:21 і 5ЕО ІЮ МО:25. Амплікон повинен бути специфічним для об'єкта МОМ 87411, наприклад являти собою амплікон, який містить ЗЕО І МО:21 або 5ЕО ІЮО МО:25. Виявлення в ампліконі нуклеотидної послідовності, специфічної для об'єкта МОМ 87411, є визначальним і/або діагностичним на присутність в зразку специфічної ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Представлений приклад пари праймерів, які можуть виробляти амплікон з ДНК об'єкта МОМ 87411 при умовах, придатних
БО для ампліфікації ДНК, а саме 5ЕО ІО МО:18, 5ЕО ІЮО МО:24, 5ЕБЕО ІО МО:20 і 5ЕО ІЮО МО:22.
Фахівець в даній галузі техніки може легко створювати інші пари праймерів, які будуть виробляти амплікон, що містить ЗЕО ІЮ МО:21 або 5ЕО ІЮ МО:25, при цьому така пара праймерів містить щонайменше один праймер в межах геномної області, рланкуючої вставку, і другий праймер в межах вставки. Інший спосіб виявлення в зразку присутності ДНК, одержаної з клітин кукурудзи, тканин, насіння або рослини кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411, являє собою (ї) витягання зразка ДНК щонайменше з однієї клітини, тканини, насінини або рослини кукурудзи, (її) контактування зразка ДНК з ДНК-зондом, специфічним для ДНК об'єкта МОМ 87411, (ії) створення можливостей для гібридизації зонда і зразка ДНК при жорстких умовах гібридизації, і після цього (ім) детектування гібридизації між зондом і зразком ДНК-мішені. 60 Приклади послідовностей ДНК-зонда, який є специфічним для ДНК об'єкта МОМ 87411,
являють собою ЗЕО ІЮ МО:19 або 5ЕО ІО МО:23. Фахівець в даній галузі техніки може легко створювати інші зонди, які будуть містити щонайменше один фрагмент геномної ДНК, фланкуючий вставку, і щонайменше один фрагмент ДНК-вставки, наприклад послідовності, представлені нижче, і без обмеження: 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО І МО:З3, 5ЕО І МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6,
ЗБОЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО І МО:9, 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО ІЮ МО:21 і 5ЕО ІЮ МО25.
Виявлення гібридизації зонда із зразком ДНК є діагностичною ознакою присутності в зразку специфічної ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411. З іншого боку, відсутність гібридизації є діагностичною ознакою відсутності в зразку специфічної ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411.
У винаході розглянуті набори для виявлення ДНК, які можна використовувати для ідентифікації ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 в зразку і також можна застосовувати в способах виведення рослин кукурудзи, що містять придатний об'єкт ДНК. Такі набори містять
ДНК-праймери і/або зонди, що містять фрагменти послідовностей 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2,
ЗЕО ІО МО:3, 5ЕО 10 МО:4, 5ЕО ІО МО:5, 5ЕО 10 МО:6, 5ЕО І МО:7, 5ЕО 10 МО:8, ЗЕО І
МО:9, 5ЕО І МО:10, 5ЕО ІО МО:12, 5ЕО ІЮО МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО ІЮ МОС21, 5ЕО І
МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО 10 МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО 10 МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО І
МО:49, 5ЕО ІО МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 і 5ЕО ІЮО МО:52. У одному з прикладів такий комплект містить щонайменше одну молекулу ДНК достатньої довжини з суміжних нуклеотидів 5ЕО І
МО-1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МОЗ, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІО МО:7, 5ЕО
ІО МО:8, 5ЕО ІО МО:9, 5ЕО Ір МОл0, 5ЕО ІЮ МО 12, 5ЕО І МО 14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО І
МО:21, 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО ІЮ МО:44, 5ЕО І
МО:45, 5ЕБЕО І МО:49, 5БО І МО:50, 5БО ІО МО:51 і 5ЕБЕО ІЮ МО:52, яка діє як ДНК-зонд, корисний для виявлення в зразку присутності і/або відсутності ДНК, одержаної з трансгенних рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411. ДНК, одержана з трансгенних рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411, буде містити молекулу ДНК, яка має щонайменше одну послідовність, вибирану з групи, що складається з 5ЕБО ІЮ МО:1, 5ЕО І МО:2, 5ЕО І
МО:З, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО І МО:5, 5ЕО ІЮ МО:б6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІО МО:9, 5ЕО
ІО МО:10, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО І МО:16, 5ЕО І МО:21, 5ЕО ІЮ МО 25, 5ЕО Ір
МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО І МО:44, 5ЕО І МО 45, 5ЕО 10 МО:49, 5ЕО І
МО:50, 5ЕО ІО МО:51 і 5ЕО ІЮ МО:52. У винаході розглянута молекула ДНК, придатна для використання як ДНК-зонда, яка є корисною для визначення, виявлення або діагностики наявності і/або відсутності в зразку ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411, що являє собою 5ЕО ІЮ
МО:19 ї БЕО ІО МО:23. Фахівець в даній галузі техніки може легко створювати інші зонди, які повинні містити достатню кількість суміжних нуклеїнових кислот, що включають в себе щонайменше 15 суміжних нуклеотидів, щонайменше 16, щонайменше 17, щонайменше 18, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21, щонайменше 22, щонайменше 23, щонайменше 24, щонайменше 25, щонайменше 26, щонайменше 27, щонайменше 28, щонайменше 29, щонайменше 30, щонайменше 31, щонайменше 32, щонайменше 33, щонайменше 34, щонайменше 35, щонайменше 36, щонайменше 37, щонайменше 38, щонайменше 39 або щонайменше 40 суміжних нуклеотидів 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО І МО 2, 5ЕО І
МО:З, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО І МО:5, 5ЕО ІЮ МО:б6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮО МОС9, 5ЕО
ІО МО:10, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО І МО:16, 5ЕО І МО:21, 5ЕО ІЮ МО 25, 5ЕО Ір
МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО І МО:44, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО І
МО:50, ЗЕО ІО МО:51 і БЕО ІО МО:52, і бути досить унікальними для ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 з метою виявлення ДНК, що походить з цього об'єкта. Набір іншого типу містить пару праймерів, яку використовують для одержання амплікону, корисного для визначення присутності і/або відсутності в зразку ДНК, що походить з трансгенного об'єкта кукурудзи МОМ 87411. Такий набір необхідно використовувати для способу, який включає контактування зразка
ДНК-мішені з парою праймерів, згідно з винаходом, і після цього проводять реакцію ампліфікації нуклеїнової кислоти, достатню для одержання амплікону, що містить молекулу
ДНК, яка має щонайменше одну послідовність, вибирану з групи, що складається з 5ЕО І
МО:21 і БЕО ІЮ МО:25, і потім визначають присутність і/або відсутність амплікону. Такий спосіб може також включати в себе секвенування амплікону або його фрагмента, що буде визначальною, тобто діагностичною ознакою присутності специфічної ДНК об'єкта кукурудзи
МОМ 87411 в зразку ДНК-мішені. Фахівець в даній галузі техніки може легко створити інші пари праймерів, які повинні містити достатню кількість суміжних нуклеїнових кислот, що включають в себе щонайменше 15 суміжних нуклеотидів, щонайменше 16, щонайменше 17, щонайменше 18, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21, щонайменше 22, щонайменше 23, щонайменше 24, щонайменше 25, щонайменше 26, щонайменше 27, щонайменше 28, щонайменше 29 або щонайменше 30 суміжних нуклеотидів з послідовностей, що являють 60 собою, без обмеження: ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МО:3, ЗЕО ІЮО МО:5, ЗЕО ІЮ МО:6,
ЗЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, ЗЕО ІО МО:9, або 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО
ІО МО:16, 5ЕО ІЮ МО:41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО ІЮ МО:44, 5ЕО ІЮ МО 45, 5ЕО Ір
МО:49, 5ЕО ІЮ МО:50, 5ЕО ІЮ МО:51 і 5ЕО ІЮО МО:52, і бути досить унікальними для ДНК об'єкта кукурудзи МОМ 87411 з метою виявлення ДНК, що походить з цього об'єкта.
Набори і способи виявлення згідно з винаходом корисні, серед іншого, для виявлення об'єкта кукурудзи МОМ 87411, селекції сортів або гібридів рослин, що містять об'єкт кукурудзи
МОМ 87411, виявлення присутності в зразку ДНК, яка походить з трансгенних рослин кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411, і відстеження зразків на присутність і/або відсутність рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411, або частин рослин, одержаних з рослин кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411.
Послідовність гетерологічної ДНК-вставки, з'єднувальні послідовності, фланкуючі послідовності з об'єкта кукурудзи МОМ 87411 можна верифікувати (і, за необхідності, коректувати) шляхом ампліфікації згаданих послідовностей з об'єкта за допомогою праймерів, одержаних з послідовностей згідно з винаходом, з подальшим стандартним ДНК- секвенуванням амплікону або клонованої ДНК.
Наступні приклади включені у винахід для демонстрації прикладів деяких переважних варіантів здійснення даного винаходу. Фахівцям в даній галузі техніки потрібно розуміти, що описані в прикладах технології, в яких застосовуються розроблені авторами винаходу представлені підходи, добре працюють при здійсненні даного винаходу і, таким чином, можуть вважатися прикладами переважних способів для його здійснення. Разом з тим, фахівцям в даній галузі техніки, в світлі даного опису, потрібно розуміти, що можна робити множину змін в конкретних розкритих варіантах здійснення, і одержати проте схожий або аналогічний результат без відхилення від суті і обсягу даного винаходу.
ІНФОРМАЦІЯ ПРО ДЕПОНУВАННЯ
Депонування репрезентативної вибірки насіння кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411, було проведене 14 березня 2012 року відповідно до Будапештського договору з Американською колекцією типових культур (АТСС), розташованою за адресою: 10801 Опімегейу Вошемага,
Мапаззавз, Мігдіпіа ОБА, поштовий індекс 20110, з наданням номера доступу АТСС: РОТА- 12669. Доступ до депозитів на час розгляду заявки буде відкритий для Комісара по патентах і
Зо товарних знаках і для осіб, визначених комісаром як такі, що мають право такого доступу по запиту. При видачі патенту будуть остаточно зняті всі обмеження на доступ до нього громадськості. Депозит буде зберігатися в депозитарії протягом 30 років або протягом 5 років після останнього запиту, або протягом ефективного терміну дії патенту, залежно від того, що довше, і буде замінюватися у міру необхідності протягом цього періоду.
ПРИКЛАДИ
Приклад 1
Цей приклад описує створення і селекцію конструкції, позначеної під номером 417, і конструювання і оцінку різних конструкцій ДНК. Таблиця 1 класифікує ці конструкції ДНК по тестових критеріях і результатах.
Були сконструйовані ДНК-конструкції для експресії в кукурудзі інкорпорованого протектанта рослин (РІР) на основі РНК, націленого на блішку довговусу західну (М/СК). Були протестовані варіанти РНК-транскрипту на різних генах-мішенях від М/СЕК (група 1), з різною довжиною РНК (група 2), з нейтральним носієм РНК або без цього носія (група 2), з різними вторинними структурами (група 4) і з різними цільовими сегментами з Юм 5піто (групи 2 ії 3). Також були протестовані варіанти ряду трансгенів, наприклад РНК-транскрипт ї- М/СВА-активний білок (групи З ї 5) і два РНК-транскрипти, націлені на дві М/СК-мішені (групи 1 і 4). Також протестували варіанти по кількості ії конфігурації використовуваних касет і елементів експресії (всі групи).
Таблиця 1
Сорок п'ять конструкцій ДНК були стабільно трансформовані в рослини кукурудзи. Оцінювали потомство рослин від декількох об'єктів трансформації відносно конструкції ДНК - Досліджували інгібування активності М/СВ. на рослинах, експресуючих укладені у вектори комбінації сегментів РНК, націлені 1 на транскрипти 4 різних ендогенних генів М/СЕК. - Досліджували інгібування активності М/СЕ. на рослинах, експресуючих сегмент РНК, націлений на транскрипт гена Ом 5піто
- Досліджували інгібування активності М/УСВ. на рослинах, експресуючих РНК-сегмент різних розмірів, націлених на транскрипт гена Ом зпі?о (від 27-мерного до 429-мерного), сконструйованих для експресії у вигляді інвертованої-повторюваної РНК (ІК). Також 2 тестували 150-мерний нейтральний носій ІК, в який був вставлений 27-мерний, націлений на Юм Зпіто, або така вставка була відсутня. - Оптимальна активність М/СЕК спостерігалася на рослинах, експресуючих цільові сегменти Юм Зп/7о, що мають довжину, яка дорівнює або більше, ніж 100 пар основ - Досліджували інгібування активності МУСЕ. на рослинах, експресуючих: (а) 240-мерний ІВ Ом 5піто, і (5) пару білків ТІС809 і
ТІС810, що мають М/СЕ-інгібуючу активність; обидва під однією касетою експресії в одній конструкції ДНК. - Досліджували інгібування активності М/СЕК на рослинах, експресуючих: (а) 240-мерний Юм 5піто ІК, і (Б) пару білків ТІС809 і
ТІС810, що мають М/СК-інгібуючу активність; кожний з який незалежно і функціонально зв'язаний з окремою касетою експресії в
З одній конструкції ДНК. - Досліджували згадані комбінації ІК ж білок, використовуючи різні комбінації різних промоторів і конфігурації касет експресії. - Експресія 240-мерного Ом Зпіто ІК іп ріапіа інгібує активність М/С на таких рослинах, з експресією пари білків ТІС809 і ТІС810 або без - Досліджували потомство рослин від гібридного схрещування рослин, які містять об'єкти, що несуть конструкцію ДНК 2 503 (429- мерний Ом зпі?7о ІК), і рослин, що містять об'єкт МОМ 88017 (СтузВ). - Досліджували інгібування активності М/СЕК на рослинах, експресуючих 150-мерний або 240-мерний Юм 5піто ІВ. - Досліджували інгібування активності М/СЕК на рослинах, 4 експресуючих: (а) Ом Зпіто ІК, і (б) мАТФазу А ІВ. - Досліджували ІК у порівнянні з не-ІК вторинними структурами РНК для супресії Ом Зпіто, мАТФази А і комбінації. 365 - Експресія 240-мерного Ом Зпіто ІК іп ріапіа інгібує активність МУСЕ, з експресією сегмента мАТфФази А РНК або без експресії. - Інгібування М/СЕК було більш сильним іп ріапіа, коли Юм 5піто ІВ експресувався разом з СтузЗВБ, при порівнянні з експресією Юм Зпіто
ІК єдиного або СтуЗзВр єдиного - Досліджували інгібування активності М/УСВ. на рослинах, експресуючих і (а) 240-мерний Ом 5піто ІВ, і (5) білок СгуЗзВЬ, що має пестицидну активність проти Оіабгоїіса мігдітега; кожний трансген розташований в окремих касетах експресії в конструкції ДНК. - Тестували десять конструкцій ДНК, що мають комбінації різних промоторів і комбінації різних конфігурацій касет експресії. - Була вибрана конструкція ДНК 2 417
Використовуючи як приклад ДНК-конструкції групи 2, було створено 7 ДНК-конструкцій з різною довжиною (від 27 до 429 нуклеотидів в довжину) для тестування націлювання на 5 Ом зпіто. Була одержана кожна з ДНК-конструкцій, виконана трансформація рослинних клітин, одержані рослини, і інбредні рослини тестували в біопробах на ефективність у вегетаційній камері. Результати показали кореляцію між довжиною інвертованого повтору РНК (ІК) і УУСЕК- активністю (таблиця 2, стовпці (В) і (Н)).
Таблиця 2
Співвідношення довжини ІЕ і ММС -активності (Р)
Кількість |(0) Кількість (С) Во-рослин, об'єктів- (А) (В) Довжина Кідькість |. (0) (9 що попередни- (Н) МСВ-
Конструкція сегмента РНК трансфор- Кількість Кількість передба- ків для активність
Ом піто паростків У! Ко рослин на днк мованих й - | чувано мульти- (нуклеотиди) : зародків | в грунті рослинах? зародків несуть | рослинного єдиний | біоаналізу об'єкт 474 1771127. 1711230 | 81 | 51 | 49 | 23 | -
У стовпці (В) показані варіабельні значення довжини цільової РНК Ом 5пі?7о, сконструйованої для експресії вторинної структури інвертованого повтору РНК (ІК) в рослинах кукурудзи. У стовпці (С) показана кількість зародків кукурудзи, які були трансформовані. У стовпці (0) відображена кількість зародків кукурудзи, у яких розвивалися паростки. У стовпці (Е) показана кількість регенерованих рослин кукурудзи (позначених як покоління Ко), життєздатних на грунті. У стовпці (Р) показана кількість Ко-рослин, що передбачувано несуть єдину копію
ДНК-вставки в об'єкті трансформації. У стовпці (б) показана кількість Ко-рослин, які передбачувано несуть єдиний об'єкт трансформації і які виробляють достатню кількість насіння для біоаналізу в мультирослинній вегетаційній камері. У стовпці (Н) показані результати досліджень росту рослин у вегетаційній камері, проведених для оцінки активності М/СЕК.
Позначення "н----" вказує на середній ступінь пошкодження коріння (СПК) менше ніж 0,5 СПК.
Позначення "ї- вказує на середнє значення СПК від 0,5 СПК до 2,0 СПК. Позначення "-" вказує на середнє значення СПК приблизно 2,0 СПК, що порівнянно з показниками негативного контролю в дослідженнях на ефективність у вегетаційній камері.
Її означає той же 27-мерний сегмент, як в конструкції ДНК Ж 474, але вставлений в нейтральний 150-мерний ІК. Для оцінки М/УСК-активності у рослин, вирощених у вегетаційних камерах, в торфових горщиках вирощували від б до 8 рослин для кожного з 10-20 об'єктів на конструкцію. Рослини досліджували на присутність вставки ДНК і експресії трансгена (трансгенів) в обох тканинах - і в листі, і в корінні. Потім рослини з підтвердженою експресією трансгена пересаджували в горщики більшого розміру, заражені яйцями УУСК. Лінії І Н5БО і
І Н244 нетрансгенної кукурудзи були включені в дослідження як негативний контроль. Рослини, що містять об'єкт МОМ 88017 (експресуючі СтуЗВБО) були включені в дослідження як позитивний контроль. Пошкодження коріння зростаючих рослин кукурудзи оцінювали через 4 тижні. Ступінь пошкодження коріння (СПК) оцінювали по трибальній шкалі, де СПК - 0 означає відсутність пошкодження коріння і СПК - З означає максимальне пошкодження коріння.
Зо Результати дослідження визначали розробку конструкцій ДНК з групи 5, які містили (а) касету експресії для 240-мерного Юм 5піто ІК, і (Б) касету експресії для білка СтуЗВЬ (фіг. 2).
Вибір 240-мерного Юм 5піто ІК був зумовлений тим, що (а) рослини, експресуючі ідентичні 240- мерні Ом 5піто ІБ, показували повторюване успішне інгібування активності СЕМУ (групи 2-4), (Б) сегменти, розмір яких перевищує 100 нт в довжину, зменшують імовірність розвитку стійкості до
МСЕ, і (с) буде більш важко здійснювати перенесення в геном кукурудзи сегментів розміром більше 240 нт, щоб вони залишалися інтактними. Конструкції ДНК були створені для тестування різних регуляторних генетичних елементів в кожній касеті експресії і різних конфігурацій кожної касети експресії в конструкції ДНК. Конструкції ДНК з групи 5 також включали в себе конструкції з касетами експресії толерантності до гліфосату і конструкції без цієї касети, і контрольні конструкції з групи 3, які експресували тільки 240-мерний Юм 5пі7о ІК. Створювали кожну конструкцію ДНК, здійснювали трансформацію рослинних клітин, одержували рослини, і інбредні рослини оцінювали на ефективність в біоаналізах у вегетаційній камері (таблиця З від (С) до (Н)).
Таблиця З
Показники одержаних рослин з трансформацією конструкцій ДНК з групи 5 (С) Кількість (Р) Кількість | Ко об'єктів- (С) (0) () Во-рослин, | попередни- (Н) Продук- (В) тя ні Кіль- й тивність (А) Мо К - | Кількість |Кількість| . що ківдля | бредного і конструкції ОМПОЗИЦІЯ трансфор- | парост- кість передбачу-| мульти- іноред конструкції ; Во- гібридного днк мованих ків у вано несуть | рослинного днк : - рослин їй й потомства зародків | зародків | єдиний аналізу в в грунті , ни рослин об'єкт вегетацій- ній камері ру пі? ів сгзвь 651 | 106 | 95 | 68 | 43 / ях бЕРеРе 724 10.93 | 84 1. 86 | 4 | нн (6) | 402 (8) | 404 не лов Ед, кс тт НН Я В: ВЕ РР
ІВ « Стузвь
В стовпці (А) перераховані конструкції ДНК, досліджені на етапі 5 (також дивіться фіг. 2 відносно руйнування генетичних елементів). В стовпці (В) показана композиція трансгена. В стовпці (С) показана кількість зародків кукурудзи, які були трансформовані. В стовпці (0) показана кількість зародків кукурудзи, у яких розвивалися паростки. В стовпці (Е) показана кількість регенерованих рослин кукурудзи (позначених як покоління Ко), життєздатних на грунті. В стовпці (Р) показана кількість Ко-рослин, що передбачувано несуть єдиний об'єкт трансформації. В стовпці (С) показана кількість рослин Ко, що передбачувано несуть єдиний об'єкт трансформації, які виробляли достатню кількість насіння для подальшого мультирослинного тестування. В стовпці (Н) показана продуктивність рослин, уражених УСЕ (дивіться детальний опис в наступному параграфі).
Як показано в таблиці З, стовпець (Н), позначення "------" описує ДНК-конструкції, які в середньому дають найбільш високу постійну експресію гена у трансгенних рослин протягом всього їх розвитку, максимальне пригнічення УУСК в період розвитку і максимальне пригнічення
МСА у самозапилюваних і перехресно схрещених поколінь. Позначення "ж" описує конструкції ДНК, які в середньому показують пригнічення МУСК у трансгенних рослин, але виявляють більш низьку експресію генів в порівнянні з рослинами "-----". Позначення "ж" описує ДНК-конструкції, які в середньому меншою мірою пригнічують М/СА у трансгенних рослин, в порівнянні з рослинами "жа" і "---". Таким чином, для подальшого аналізу була висунена конструкція ДНК Ж 417. Ця конструкція має шістнадцять генетичних елементів, розташованих в трьох касетах експресії від лівої границі (8) до правої границі (КВ).
Конструкція показана на фіг. 2, і послідовність представлена в 5ЕО ІЮ МО:26. Елементи вектора представлені наступним чином:
ПІ ЇВ: відповідає зворотно комплементарній послідовності відносно позицій з 1 по 442 5ЕО
ІЮ МО:26. Цей елемент являє собою послідовність лівої границі октопіну з Аагобрасієтійт
Іштегасіепв5. (2! З'ЮТА Р5.Арсе52-Е9У: відповідає зворотно комплементарній послідовності відносно позицій від 486 до 1118 5ЕО ІЮ МО:26. Являє собою нетрансльовану область З'ЮТВ) транскрипту гена від малої субодиниці ЕЗ (Вбе52-Е9) рибулозо-1,5-бісфосфаткарбоксилази від
Різит заїмит (горох).
ІЗІ 240-мерний Ом зпі7о інвертований генний повтор: відповідає зворотно комплементарній послідовності відносно позицій від 1148 до 1777 ЗЕО ІЮО МО:26. Цей ген транскрибує РНК, що містить два 240-мерних рибонуклеотидних сегменти з ідентичним вирівнюванням один до одного за принципом зворотної комплементарності, які розділені нейтральним сегментом довжиною 150 рибонуклеотидів і утворюють інвертований повтор РНК (ІК). Послідовність сегмента з 240 п.о. вирівняна відносно гена М/СЕК, ортологічного гену дріжджів зп. (ЇЇ Інтрон ЮОпак кукурудзи: відповідає зворотно комплементарній послідовності відносно позицій від 1814 до 2617 5ЕО ІО МО:26. Цей елемент складається з 10 нуклеотидів екзона 1, інтрона 1 і 11 нуклеотидів з екзона 2, що належать гену 70 білка теплового шоку з 7еа тауз (кукурудза). 11 нуклеотидів з екзона 2 були модифіковані для видалення ініціюючого залишку метіоніну.
ІЇ Лідер Самм 355: відповідає зворотно комплементарній послідовності відносно позицій 2618-2626 5БЕО ІО МО:26. Являє собою 5'-нетрансльовану область (ТК) від 355 РНК- транскрипту вірусу мозаїки цвітної капусти (Самум), що починається в позиції 41 від початку транскрипції гена мРНК.
ІЄЇ Промотор еСамм 355: відповідає зворотно комплементарній послідовності відносно позицій 2627-3238 5ЕО ІЮ МО:26. Являє собою промотор 355 РНК з вірусу мозаїки цвітної капусти (Саму), що містить дуплікацію ділянки від -90 до -350.
Ї/Ї Промотор кукурудзи РІС: відповідає позиціям 3265-4213 5БЕО ІЮ МО:26. Цей генетичний елемент являє собою промотор індукованого фізичним імпедансом гена білка (РІІС) від 7еа таув.
ІВЇ Лідер пшениці І йсб1: відповідає позиціям 4220-4280 5ЕО ІЮ МО:26. Цей генетичний елемент являє собою нетрансльовану область 5'ЄШТК) гена світлоуловлюючого комплексу Б1 (пер) від Тгйсит аевіїмит (пшениця).
ІО|Ї Інтрон Ас рису: відповідає позиціям 4297-4776 ЗЕО ІЮ МО:26. Складається з безперервної послідовності в 12 нуклеотидів з екзона 1, інтрона 1 і з 7 нуклеотидів екзона 2 з гена актину 1 (АсИ) Огула 5аїма (рис).
МО) ОКЕ СтгузвВр: відповідає позиціям 4786-6747 5ЕО ІЮО МО:26. Являє собою кодуючу область пестицидного білка СтуЗВ, що не зустрічається в природі, сконструйованого для вияву
Ко) модифікації Н2З1Е, 53111, М313Т, ЕЗ17К ії О349К в порівнянні з геном, що кодує нативний білок
ВІ СгуЗзвЬр. Послідовність нуклеотидів вирівнюється до генної послідовності СтуЗзВЬ, що міститься в об'єкті МОМ 88017. 1) З'ЮТЕ Неьр17 пшениці: відповідає позиціям 6767-6976 5ЗЕО ІЮ МО:26. Цей генетичний елемент являє собою 3-ШТА з гена білка 17 теплового шоку (НЗРІ17) від Тгйісит аевімит (пшениця). 121 ТибБА рису (промотор, лідер, інтрон): відповідає позиціям 7025-9205 5ЕО ІЮ МО:26.
Являє собою безперервний промотор, лідер, інтрон і 4 нуклеотиди з екзона 2 з гена альфа- тубуліну (ТИБА-3) з Огула заїїма (рис). 13) СТР: відповідає позиціям 9210-9437 5ЕО ІЮО МО: 26. Представляє сконструйовану кодуючу область, яка кодує М-кінцевий СТР з 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕРЗР5Б) з
А. Іпаійапа. Цей елемент відрізняється від нативного гена (зепВапкК, Мо доступу ХОб6б613) в останньому САС-кодоні (глутамінова кислота) по модифікації ТОС (цистеїн).
М4| СРА ЕРБЗРБ: відповідає позиціям 9438-10805 5БЕО ІО МО:26. Являє собою сконструйовану кодуючу область ЕРОР5 з СРА Адгобрасієегічт. Відрізняється від нативного гена
Адгорасієтгішт у другому кодоні по модифікації кодуючого серину на СТТ (лейцин) і по чотирьох мовчазних замінах. 15) З'ЮТК ТибБА рису: відповідає позиціям 10813-11394 5ЕО ІЮ МО:26. Являє собою 3- нетрансльовану область (СТЕ) гена, що кодує альфа-тубулін (ТирА-3) з Огула заїїма (рис). 16) КВ: відповідає позиціям 11413-11743 5ЕО ІЮ МО:26. Являє собою послідовність правої границі нопаліну з А. (шптегасіепв.
Приклад 2
Цей приклад описує трансформацію і вибір об'єктів МОМ 87411 з множини трансгенних об'єктів.
З ядер кукурудзи лінії ІН244 вирізали зародки і інокулювали їх рекомбінантною
Адгобрасіегішт, що несе конструкцію ДНК 2 417. Спільно культивовані зародки переносили на селекційні і ростові середовища для утворення трансгенної калюсної тканини з паростками, що розвиваються. Паростки, що розвиваються, переносили в середовище для укорінення для розвитку паростків. Паростки регенерували в грунті в повноцінні Ко-рослини. Регенеровані таким чином Ко-рослини піддавали скринінгу на одиничну копію вставленої ДНК-конструкції. Як 60 показано в таблиці 3, передбачувані однокопійні об'єкти були представлені в 71 унікальному трансформанті Но. Кожний Ко-трансформант переносили на дорощування в шкілку для одержання насіння потомства Кі. Були відмічені сорок чотири об'єкти. Щонайменше 8 В.- насінин, одержаних від кожної з 44 Ро-рослин, були висаджені в грунт, потім вирощували К.- рослини для одержання Ко-насіння. Для продовження кожної лінії вибирали єдину рослину Кі на об'єкт, кожна з яких містила кожний окремий об'єкт, і насіння від однієї рослини К. відкладали для подальшого тестування шляхом (а) самозапліднення (Нза,..м), Її шляхом (Б) перехресного запилення з іншою лінією кукурудзи, наприклад з лінією кукурудзи 93З1ІОІЗ.
Рослини, що представляють об'єкти з трансформації ДНК-конструкції Ж 890 (рядок 11 таблиці 3), також були регенеровані як порівняльний контроль для подальших польових випробувань, описаних нижче в цьому прикладі.
З 44 об'єктів були вибрані 25 об'єктів для подальшої роботи, виходячи з фенотипу, що включає в себе експресію СтгуЗзВЬ. Рослини Кі, що представляють ці 25 об'єктів, додатково оцінювали на інгібування М/СЕК у вегетаційній камері в тестах на ефективність, описаних в прикладі 1, ії на кількість копій множинних генетичних елементів ДНК-вставки. Для подальшої роботи були взяті сімнадцять об'єктів з цих 25 об'єктів, оскільки чотири об'єкти представляли більше однієї копії генетичного елемента З'ЮТА з Р5.Арсе52-Е9, і у В:-рослин, що представляють 4 інших об'єкти, виявлений ступінь пошкодження коріння вище 0,8 СПК.
Потомство рослин, що містить 17 об'єктів, що залишилися, а саме "А", МОМ 87411 і від "С" до "0", було додатково паралельно проаналізоване відносно молекулярних властивостей і продуктивності в полі (дивіться таблиці 4 і 5).
Таблиця 4
Молекулярний аналіз 17 трансгенних об'єктів кукурудзи, що несуть ДНК-вставки з вектора трансформації 417 ДНК (0) (Е) (В) Число (Р) (А) одиничних (С) Перевище: ) Перевище- Нейтраль- (9)
Об'єкт | Відсутність | вставокі | Інтактна ння порога ) ння порога ний Перед ачу- каркаса | одиничних | вставка а експресії ІВ інсерційний ваний розмір копій ілка ДЛРНК сайт транскрип-ту
Стузвь Ом Зпіто и ПЕ ЗИ ПО Я ПОН ПОН ПО ОН КО ОН НО о
Е ЇЇ ях ЇЇ я | я | 5 | 56 | - | мА пи ПО ЗИ ПО Я ПОЛОН ПО КО ОН КО КОН ТУ УНН а Її я Її я | я | я | я | - | мА 1 ж, МА | МА | МА | МА | МА кю 117117 - 1171 МА | мА | МА | МА | МА 7777-7177 А МА | МА | МА | МА | МА / м 77-71 ж | МА | МА | МА | МА | МА / м 777-071 - | МА | мА | МА | МА | МА / о 7777-1717, | МА | мА | МА | МА | МА /
Р ЇЇ 7-1 - | МА | мА | МА | МА | МА / 6 777-71-17 МА | мА | МА | мА | МА /
Позначення "-" вказує на те, що об'єкт не відповідає молекулярним критеріям відповідного молекулярного аналізу. Позначення "-" вказує на те, що об'єкт відповідає молекулярним критеріям відповідного молекулярного аналізу. "МА" позначає, що дані не були доступні.
Об'єкти піддавали скринінгу на сегменти каркасної ДНК з вектора трансформації
Адгобасіегішт і на кількість одиничних копій всіх ділянок ДНК, призначеної для вставки (таблиця 4, стовпці (А) і (В)). Сім об'єктів (МОМ 87411, А, С, 0, Е, Е ї С) аналізували на послідовність вставленої ДНК, яка була ідентична вектору трансформації Ж 417, за винятком варіацій нік- сайта на лівій і правій границях Адгобасіегішт, що відбувається під час опосередкованої
Адгобрасієгійт вставки, об'єкт ОЮ не пройшов цей аналіз послідовності (таблиця 4, стовпець (С)).
Ці 7 об'єктів також аналізували на стійку експресію в рослинах білка СгтгузЗВЬ і Ом Зпіто ІК РНК протягом всього періоду розвитку рослин і в декількох поколіннях, і всі 7 об'єктів відповідали критеріям стійкої експресії в рослинах (таблиця 4, стовпець (0)). Кожний з 7 об'єктів був проаналізований відносно геномних характеристик інсерційного сайта (тобто нейтрального інсерційного сайта), таких як перестановки ДНК, дуплікації і повторюваність, близькість до ендогенного гена, розриви в ендогенному гені і близькість до локусу кількісних ознак (ОТ), і відносно біотехнологічних ознак, при цьому об'єкти Е, Е і б не пройшли цей аналіз (таблиця 4, стовпець (Р)). Нозерн-блотинг проводили на тканині рослин, що містять об'єкти МОМ 87411, А,
С ої О, з метою визначення наявності в РНК з цих об'єктів двох РНК-транскриптів передбачуваних розмірів, які кодують СтуЗзВр або продукують Ом бпі/о ІВ РНК, їі всі проаналізовані об'єкти відповідали цьому критерію (таблиця 4, стовпець (0)).
Проводили оцінку цих 17 об'єктів в польових випробуваннях на агрономічну ефективність, ефективність відносно комах і ефективність толерантності до гліфосату, і результати цих випробувань наведені в таблиці 5. Заголовки стовпців в таблиці 5 описують тип польових випробувань ("агрономічне", "комахи" або "гліфосат"), перераховані контрольні об'єкти, з якими проводили порівняння/контрастування об'єктів, і також вказані генетично інбредні елементи, використовувані для генерації гібридних об'єктів. Результати польових випробувань, наведених в стовпцях від (А) до (С), стосуються саджань за один календарний рік до польових випробувань, результати яких наведені в стовпцях (0) до (Н), і за два роки до польових випробувань, результати яких наведені в стовпці (1).
Таблиця 5
Результати польових випробувань об'єктів, створених з вектором трансформації 417: агрономічних, тестів на ефективність відносно комах і ефективність відносно гліфосату
Вид (с) (в) (в) ГТ (н польового! у (А) (В) Агроно- Ефектив- (0) Ефектив- Ефектив- Ефектив- (І) випробу- гроно- мічне ність Агроно- ність "ність "ність Агроно- вання мічне відносно| мічне | відносно | відносно | відносно | мічне комах гліфосату|гліфосату| комах
Контроль, викорис- І Н2г44, товува- 1Н244, | Нг44х93І0ІЗ) МОМ Ге мом | мом вот Інга, ний для 890 х890 88017, 88017 88017 88017 яво0 т890 порівнян- 890 ня
Інбред- бридний Вз Інбредний В5 В5 ІнбреднийІнбредний В5 -у інбредний Аз інбредний Вгх93ІПІЗІінбреднийінбредний вахМОМ | НехМОМ інбредний - 89034 89034
Тестовий ки 5 11 11
СПК СПК
МОМ -010 ви | | 5 ||| ж -010 с | |сак/| |: || мм -010 -0,20 б 1-15 ск | | ск м -0,15 є 1-1 ж 1-1
ЕЕ 0171-15 | МА | 7 | - | МА | МА | МА -0,15 8 ,|-1- |ж/1 1-1 я | |сж| м | м | м | м | м
СПК
ПЕ ОЇ 7-71 - | МА | мА | МА | МА | МА | МА
Зо
Вид (с) (в) (в) ГТ (н польового (А) (В) Агроно- Ефектив- (0) Ефектив- Ефектив- Ефектив- (І) випробу- Агроно- мічне ність Агроно- ність "ність "ність Агроно- вання мічне відносно| мічне | відносно | відносно | відносно | мічне комах гліфосату|гліфосату| комах
ЕЕ 171 -Ї1 .- БЮ | МА | мА | МА / МА | МА | МА -0,15
ГНН НОРИ НООЕНННЯ Нз НЕН НОСІ НОСА НОСУУНИ НОСИ - 70171 Ї - | МА | - | МА | МА | МА | МА "1-17: ро рмурмжрмю мМ 7-1 - БЖ Ющ| МА | - | МА | МА | МА | МА о 7711 - Ї Ю ю- БЮжю РюІ| МА | МА | МА / МА | МА | МА
Р ЇЇ - Ї - 5Бжю| МА | МА | МА / МА | МА | МА о 71 1-1 БЮющю- Бжк/| мА | мА | МА | МА | МА | МА
СПК - ступінь пошкодження коріння.
МА - дані не були доступні.
Об'єкти порівнювали з контролем (контролями) в кожному польовому випробуванні. Дані для кожного польового випробування усереднювали за допомогою дублюючих ділянок, розташованих в декількох місцях. І! Н244 являв собою контроль трансформаційної лінії. ДНК- вектор "Ж 890" використовували для одержання об'єктів, експресуючих тільки 240-мерний
Ом бпіто ІК. Як контроль використовували комерційний об'єкт МОМ 88017, який надавав рослинам кукурудзи стійкість до твердокрилих і толерантність до гліфосату. "Вм інбредний" означає М-не покоління потомства. Гібридні об'єкти, оцінювані в польових випробуваннях, були вирощені з насіння, зібраного від схрещування з одним з батьків з оцінюваним об'єктом (МОМ 87411 або від А до ОС) і з одним з батьків, вказаних в таблиці 5 (стовпець С, б або Н). Зокрема, в таблиці 5, в стовпці, що описує інбредний об'єкт В2х93І0ІЗ, указано, що Е2г інбредний елемент з об'єкта в ході дослідження схрещували з лінією 93І0ІЗ інбредної кукурудзи для одержання гібридного насіння. Аналогічним чином, в таблиці 5, стовпцях С і Н, що описують інбредний об'єкт ВаихМОМ 89034, указано, що К. інбредне потомство з об'єкта в ході дослідження схрещували з рослиною, що містить об'єкт МОМ 89034, для одержання гібридного насіння. "МА" означає, що дані для цього тестового об'єкта були недоступні. Позначення "-" вказує на еквівалентність ознаки в порівнянні з контрольною групою. Позначення "-" вказує на наявність ознаки в порівнянні з контрольною групою. Позначення "--" вказує на підвищення продуктивності в порівнянні з контрольною групою. "СПК" означає ступінь пошкодження коріння. Знак "ф" означає, що в одночасних дослідженнях в теплиці було показано, що застосовний об'єкт виявляється в фенотипічно нетипових рослинах, вирощених в шкілці. Знак "Її" означає, що в одночасних дослідженнях в теплиці було показано, що застосовний об'єкт не забезпечує ефективність проти М/СЕК.
Агрономічні польові випробування були проведені в декількох районах Північної Америки і
Південної Америки, одержані результати представлені як середні дані по всіх ділянках, що показано в таблиці 5, стовпці А, В, О ї І. В цих агрономічних польових випробуваннях кукурудзяні зерна були посаджені по схемі рандомізованого повного блока (КСВ) в три ряди ділянок на об'єкт на ділянку. На кожний ряд ділянки висаджували 100 зерен. Методика
Зо досліджень була розроблена для оптимізації виробництва зерна і усунення природного навантаження УУСК. Були зібрані один або декілька з наступних показників стандартних агрономічних польових випробувань: одиниці міри скидання пилка до 5095 (50), селекційна оцінка (ВК), потужність паростків (5ОМ), вилягання стебел (5ТІ С), ламкість коріння (КТС), висота качана зрілих рослин (ЕНТ), висота рослини дорослих рослин (РНТ), вологість зерна (М5Т) і вага зерна при випробуваннях (ТУМТ), фенотипічно нетипові рослини і врожайність зерна. Проводили оцінку і інбредних, і гібридних об'єктів, результати наведені в таблиці 5, стовпці А, В, О і І. Придатні контролі були включені в три ряди ділянок, на контроль на ділянку.
Виводили середні результати на ділянку на всіх ділянках. Дані проводили через аналіз дисперсії, і середні значення розділяли по найменшій суттєвій різниці при 595 рівні імовірності (50 (0,05)).
Результати польових випробувань на ефективність проти комах, які включали в себе аналіз пошкодження УУСК, усереднений по декількох північноамериканських ділянках, наведені в таблиці 5, стовпці С і Н. Для цих польових випробувань на ефективність кукурудзяні зерна були посаджені по схемі КСВ в три ряди ділянок на об'єкт на ділянку; на кожний ряд ділянки висаджували 25 зерен. Тестові об'єкти були представлені в гібридних рослинах. Придатні контролі були включені в три ряди ділянок, на контроль на ділянку. Коли кукурудза на ділянках досягала стадії росту М2, 5 рослин на кожній ділянці заражали яйцями УУСК в кількості 3330 яєць на рослину. Під час стадії росту М1О0 коріння 5 заражених рослин на кожній ділянці викопували, промивали і оцінювали на наявність пошкоджень - об'їдань по ступеню пошкодження коріння (СПК) від 0 до 3, де СПК - 0 означає відсутність пошкодження коріння, і
СПК - З означає наявність максимального пошкодження коріння. Показники СПК для тестових об'єктів і контрольних рослин були усереднені по показниках від рослин зі всіх ділянок на всіх ділянках. Рослини негативного контролю в кожному польовому випробуванні на ефективність проти комах показували відповідні середні СПК, що становлять 1,7 і 1,5 СПК. Комерційні перевірочні зразки в кожному польовому випробуванні на ефективність проти комах показували відповідні середні СПК 0,25 і СПК 0,20. Рослини, що містять об'єкти з конструкції ДНК 2 890, показували СПК в діапазоні від 0,35 до 0,50 СПК. Об'єкти з конструкції ДНК 2 417 стійко давали рослини з середнім показником СПК, який був нижче порога економічного збитку 0,25 СПК.
Результати польових випробувань на ефективність, що оцінюють толерантність рослин до обробки гербіцидом гліфосатом, проведених на декількох ділянках в Північній Америці, наведені в таблиці 5, стовпці Б і б. Схеми застосування гліфосату, використовувані для конкретного випробування в рамках цих польових випробувань на ефективність, представлені в таблиці 6 (відповідно до таблиці 5, стовпець ЕК) і в таблиці 7 (відповідно до таблиці 5, стовпець
С).
Таблиця 6
Польові випробування обробки гербіцидами "фунт к.е." означає фунт кислотного еквівалента. "А" означає акр.
Таблиця 7
Польові випробування обробки гербіцидами
Безобробки. //////////////СС|Ї7771717171717171717171л030111171717171111111 1711111 Неоцінювалася//З: "фунт к.е." означає фунт кислотного еквівалента. "А" означає акр.
Кожна ділянка зі 100 рослин оцінювалася по нанесеному збитку для урожаю на 7-10 день після останнього обприскування кожного лікування. Показники пошкодження урожаю включали в себе хлороз, вади розвитку і середнє зниження висоти рослин, всі з яких вказують на більш низьку толерантність до гербіциду гліфосату. Кожну ділянку також оцінювали на РНТ, ЕНТ, кількість днів до 5095 скидання пилка (О50Р), кількість днів до 5095 появи ниток (0505), ТУМТ,
Зо М5Т їі врожайність. Представленими об'єктами були інбредні рослини і гібридні рослини, які порівнювали з об'єктом МОМ 88017. Об'єкти "А", МОМ 87411, "0", "Е" ї "с" були еквівалентні об'єккту МОМ 88017 відносно пошкодження урожаю, показників РНТ, ЕНТ, ОБОР, 0505, ТУТ,
М5Т ії рівня врожайності. На основі цих результатів в поєднанні зі значною перевагою по показнику СПК у об'єкта МОМ 87411 в порівнянні з іншими об'єктами і комерційним об'єктом
МОМ 88017 був вибраний об'єкт МОМ 87411.
Приклад З
Цей приклад описує молекулярну характеристику об'єкта МОМ 87411. Зразок тканини листя відбирали з рослин (Ко) МОМ 87411. Проводили секвенування геномної ДНК, відповідної трансгенному інсерційному сайту в об'єкті МОМ 87411, і не спостерігалося яких-небудь відмінностей в порівнянні з послідовністю у векторі трансформації, відповідному вектору 2 417.
Фланкуючі послідовності були картовані на референс-послідовності геному кукурудзи, що включають в себе референс-геному В7З кукурудзи (Кеї В73). Було встановлено, що об'єкт МОМ 87411 фізично розташований на хромосомі 9. Фланкуюча послідовність, яка закінчується на з'єднанні лівий кінець/ДНК-вставка, відповідає положенню 2М В73 СВО9: 39261797.
Фланкуюча послідовність, яка закінчується на з'єднанні правий кінець/ДНК-вставка, відповідає положенню 2М 873 СВОЗ: 39261915. Фланкуючі послідовності для об'єктів МОМ 87411 були проаналізовані на наявність геномних дуплікацій, повторів і ендогенних генів. Не було виявлено нічого з вищепереліченого.
Аналіз послідовності ДНК, вставленої в об'єкт МОМ 87411, свідчить, що тільки 263 нуклеотидів на лівій границі Адгобасіегічт (довільно позначеній як 5'-кінець вставки) і тільки 15 нуклеотидів на правій границі Адгобасіегішт (довільно позначеній як 3'-кінець вставки) були збережені у вставленій ДНК в геномному інсерційному сайті об'єкта МОМ 87411.
Був проведений порівняльний аналіз геномної послідовності, що фланкує ДНК-вставку в об'єкті МОМ 87411 і відповідає геномній області інсерційного сайта в алелі дикого типу з І Н2г44.
У цьому аналізі було встановлено, що в ході конструювання об'єкта МОМ 87411 сегмент з 118 пар основ з геномної ДНК І Н244 був заміщений вставленою ДНК з вектора трансформації 34 417.
Приклад 4
У цьому прикладі описані способи, які корисні при ідентифікації присутності ДНК, що походить з об'єкта МОМ 87411 в зразку кукурудзи. Були створені пара праймерів і зонд з метою ідентифікації унікального з'єднання, яке утворене між геномною ДНК і довільно призначеним 5'- кінцем вставленої ДНК з об'єкта МОМ 87411 (тобто ліве з'єднання) і входить в ЗЕО ІЮ МО:1,
ЗЕО ІЮ МО:2, 5ЕО І МО:4, 5ЕО ІЮО МО:5, 5ЕО ІЮ МО:б, 5ЕО ІЮ МО:7 або 5ЕО ІЮ МО:21.
Послідовність олігонуклеотидного прямого праймера 5027011 (5БО ІО МО:18) ідентична нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям від 462 до 490 5ЕО ІЮ МО: їі 5ЕО ІЮ МО2, позиціям від 107 до 135 5ЕО ІЮ МО:7, позиціям від 72 до 100 ЗЕО ІО МО:6, позиціям від 12 до 40
ЗЕО ІЮ МО:5 і позиціям від 1 до 29 5ЕО ІОЮО МО:21. Послідовність олігонуклеотидного зворотного
Зо праймера 509085 (5БО ІЮ МО:20) ідентична зворотному комплементу нуклеотидної послідовності, відповідної позиціям від 516 до 541 5ЕО ІЮ МО і БЕО ІЮ МО:2, позиціям від 161 до 186 БЕО ІО МО:7, позиціям від 126 до 151 5ЕО ІЮО МО:6, позиціям від 66 до 91 5ЕО ІО МО:5, позиціям від 16 до 41 5ЕО ІЮ МО:С4 і позиціям від 55 до 80 5ЕБО ІЮ МО:21. Послідовність олігонуклеотидного зонда РВЗ3552 (5БО І МО:19) ідентична зворотному комплементу нуклеотидної послідовності, відповідної позиціям від 502 до 515 5ЕО ІЮ МО:1 і 5ЕО ІЮ МО2, позиціям від 147 до 160 5ЕО ІЮ МО:7, позиціям від 112 до 125 5ЕО ІЮ МО:6, позиціям від 52 до 65 5ЕО ІЮ МО:5, позиціям від 2 до 15 5ЕО ІЮО МО:4 і позиціям від 41 до 54 БЕО ІО МО:21. ПЛР- праймери 5027011 (ЗЕО ІЮ МО:18) і 509085 (5ЕО ІЮО МО:20) ампліфікують 79-нуклеотидний амплікон з унікальної геномної/вставленої ДНК на лівому з'єднанні об'єкта МОМ 87411. Ця ж пара праймерів із зондом РВЗ3552 (5ЗЕО ІЮ МО:19), який несе флуоресцентну мітку (а саме флуоресцентну мітку бБЕАМ"М), можна використовувати в ПЛР-аналізі кінцевих точок ТадМапФ для ідентифікації присутності в зразку ДНК, що походить з об'єкта МОМ 87411.
Були сконструйовані пара праймерів і зонд з метою виявлення унікального з'єднання, утвореного між геномною ДНК і довільно призначеним 3'-кінцем вставленої ДНК з об'єкта МОМ 87411 (тобто правого з'єднання), що входить в ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:3, 5ЕО 10 МО:С4, 5ЕО І
МО:8, 5Е6ЕО ІО МО:9, 5ЕБЕО І МО:10 або 5ЕО ІЮ МО:25. Послідовність олігонуклеотидного прямого праймера 5027066 (5ЕО ІЮО МО:22) ідентична нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям від 11710 до 11728 5ЕО ІО МО:1, позиціям від 11210 до 11228 5БЕО ІО МО:4, позиціям від 45 до 63 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮО МО:9 і БЕО ІЮО МО:10 ї позиціям від 1 до 19 5ЕО ІЮО МО:25.
Послідовність олігонуклеотидного зворотного праймера 5026977 (5БО ІЮ МО:24) ідентична зворотному комплементу нуклеотидної послідовності, відповідної позиціям від 11756 до 11784
ЗЕО ІЮ МО/:1, позиціям від 91 до 117 5ЕО ІЮ МО:8, позиціям від 91 до 119 5ЕО ІЮ МО:9 ії БЕО ІЮ
МО:10, позиціям від 23 до 51 5ЕО ІО МО:3З і позиціям від 47 до 75 5ЕО ІО МО:25. Послідовність олігонуклеотидного зонда РВІ1І1300 (5ЕО ІЮ МО:23) ідентична нуклеотидній послідовності, відповідній позиціям від 11731 до 11755 5ЕО ІЮО МО:1, позиціям від 11231 до 11248 5ЕО ІЮ
МО:4, позиціям від 66 до 90 5ЕО ІЮО МО:8, 5ЕО ІО МО:9 ї БЕО ІЮО МО:10, позиціям від 1 до 22
ЗЕО ІЮ МОЗ і позиціям від 22 до 46 ЗЕО ІЮ МО:25. ПЛР-праймери 5027066 (ЗЕО ІЮ МО:22) і
З026977 (5БО 10 МОс24) ампліфікують 75-нуклеотидний амплікон з унікальної геномної/вставленої ДНК на правому з'єднанні об'єкта МОМ 87411. Цю ж пару праймерів із бо зондом РВ11300 (5ЕО ІЮ МО:23), який несе флуоресцентну мітку (а саме флуоресцентну мітку бЕАМ'М), можна використовувати в ПЛР-аналізі кінцевих точок ТадМапФ для ідентифікації присутності в зразку ДНК, що походить з об'єкта МОМ 87411.
Фахівцям в даній галузі потрібно розуміти, що на доповнення до 5027011, 509085, РВ3552, 5027066, 5026977 і РВ11300 можна створювати інші праймери і/або зонди і для ампліфікації, і/або для гібридизації з послідовностями в межах 5ЕО ІЮ МО:1, які є унікальними і корисними для виявлення присутності в зразку ДНК, що походить з об'єкта МОМ 87411.
Для об'єктів МОМ 87411 на основі молекулярного аналізу і аналізу послідовності були розроблені тести ПЛР для ідентифікаційних досліджень об'єктів. Згідно зі стандартною лабораторною молекулярно-біологічною практикою були оптимізовані параметри або стандартного аналізу ПЛР, або аналізу ТадМапб ПЛР з кожною парою праймерів і зондів (а саме зондів, мічених флуоресцентною міткою, наприклад бЕАМ'М), використовуваних для виявлення присутності в зразку ДНК, що походить від об'єкта МОМ 87411 (5027011, 509085 ймабо РВЗ3552 або 5027066, 5026977 і/або РВ11300). Звичайно параметри, які були оптимізовані, включали в себе концентрацію праймера і зонда, кількість матричної ДНК і параметри циклів ПЛР-ампліфікації. Контроль для реакції ПЛР включав в себе праймери (5020221 (5ЕО ІО МО:38) ії 5020222 (5ЕО ІО МО:40)) або зонди (РВ10065 (ЗЕО ІЮ МО:39)) (зонд, мічений флуоресцентною міткою, наприклад МІСтМм), які є специфічними для внутрішнього контролю, однокопійного гена в геномі кукурудзи. Фахівцю в даній галузі відомо, як конструювати інші специфічні ПЛР-праймери для однокопійного гена в геномі кукурудзи, які можна використовувати для ампліфікації амплікону, призначеного для використання як внутрішнього контрольного зонда або як внутрішнього контролю в аналізі ПЛР (наприклад,
ТадмапФ). ДНК екстрагували з тканини листа для кожної з наступних задач: | 1| зразок листа для аналізу; І2| негативний контроль (ДНК нетрансгенної кукурудзи); ІЗ| негативний водний контроль (без матриці); і (4 позитивний контроль ДНК МОМ 87411. Виявлення ампліконів в стандартному ПЛР-аналізі можна було візуалізувати за допомогою гель-електрофорезу ДНК і в
ПЛР-аналізі ТадмМмапФ шляхом реєстрації флуоресценції.
Аналіз зиготності корисний для визначення, чи є рослина, що містить об'єкт, гомозиготною по цьому об'єкту ДНК, тобто містить екзогенну ДНК в тій же локалізації на кожній хромосомі з пари хромосом; або є гетерозиготною по цьому об'єкту ДНК, тобто містить екзогенну ДНК тільки на одній хромосомі з пари хромосом; або є нульовою по об'єкту ДНК, тобто являє собою дикий тип. Зиготність рослини кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411, можна визначити шляхом термічної ампліфікації (ПЛР) або способами ТадМапФ з кінцевими точками. Наприклад, при ПЛР-ампліфікації пари праймерів 5027011 (5ЕО ІЮО МО:18) ії 5026977 (5ЕО ІЮ МО:22) гібридизуються в геномній ДНК, фланкуючій вставний об'єкт МОМ 87411. Ця пара праймерів буде створювати амплікон, який має довжину в 11323 нуклеотидів, якщо в зразку присутня ДНК, що походить з об'єкта МОМ 87411. Ця ж пара праймерів буде створювати амплікон, який має довжину приблизно тільки в 150 нуклеотидів, якщо ДНК кукурудзи в зразку не походить від об'єкта МОМ 87411. На гель-електрофорезі ДНК одна смуга з 11323 пар основ свідчить про те, що ДНК в цьому зразку походить від гомозиготного об'єкта МОМ 87411, одна смуга приблизно з 150 п.о. свідчить про те, що ДНК в зразку не належить до об'єкта МОМ 87411, і присутність і смуги в 11323 п.о., і смуги приблизно в 150 пар основ вказує на те, що ДНК в зразку походить з рослини кукурудзи, що є гетерозиготною по об'єкту МОМ 87411.
Аналіз ТадМапФ може бути розроблений для визначення зиготності рослини кукурудзи, що містить об'єкт МОМ 87411. Для цього аналізу створюються три або чотири праймери і два зонди, при цьому 1| перша пара праймерів і перший зонд є специфічними для виявлення присутності в зразку ДНК об'єкта МОМ 87411, і (21 друга пара праймерів, відмінна від першої пари праймерів, і другий зонд, відмінний від першого зонда, є специфічними для виявлення присутності ДНК кукурудзи дикого типу (тобто зразка, що не містить об'єкт МОМ 87411). У аналізі ТадМапФ або в подібному аналізі наявність флуоресцентного сигналу тільки від першого зонда свідчить про те, що рослина гомозиготна по об'єкту МОМ 87411 їі є діагностичною на гомозиготність; флуоресцентний сигнал і від першого зонда, і від другого зонда свідчить про те, що рослина гетерозиготна по об'єкту МОМ 87411 ї є діагностичною на гетерозиготність; і флуоресцентний сигнал тільки від другого зонда свідчить про те, що рослина гомозиготна по алелю дикого типу (тобто є нульовою для об'єкта МОМ 87411) і є діагностичною для цієї ознаки.
Приклад 5
Цей приклад описує чудовий захист рослини, що містить об'єкт МОМ 87411, від пошкодження злаковими кореневими черв'яками, в порівнянні з існуючими комерційними продуктами (МОМ 88017 і ОА5-59122-7) і рослинами негативного контролю. Були проведені бо польові випробування на ефективність, в яких порівнювали по 135 рослин кожного з об'єктів
МОМ 87411, МОМ 88017, ВОБА5-59122-7 і негативних контрольних об'єктів. Були зібрані показники ступеня пошкодження коріння (СПК), і в таблиці 8 показаний процент рослин з СПК нижче рівня економічного збитку (СПК-О,25).
У таблиці 8 показано, що приблизно тільки у 495 рослин, що містять об'єкт МОМ 87411, виявлений СПК, що перевищує економічний поріг 0,ю25 СПК. На відміну від цього, 22905 з комерційних рослин, що містять МОМ 88017, показують СПК, що перевищує економічний поріг 0,25 СПК. І 2095 з комерційних рослин, що містять ОА5-59122-7, показують СПК, що перевищує економічний поріг 0,25 СПК. І 9695 рослин негативного контролю показують СПК, що перевищує економічний поріг 0,25 СПК. З одержаних даних зроблений висновок, що об'єкт МОМ 87411 явно показує чудові властивості по забезпеченню захисту від пошкоджень злаковими кореневими черв'яками, в порівнянні з комерційними продуктами МОМ 88071 і ОА5-59122-7 і негативним контролем.
Таблиця 8
Результати польових випробувань на ефективність з приблизним процентом рослин, що показали СПКО,25
ОбєктмМОМ87411..../.Й7//ССС7111171111111111111111111111111861111111111С1 рАБ-5Я122-7..7777111111111111111111111111111111111111111111801111
В дослідження включені 135 рослин для кожного тестованого об'єкта.
Випробування на ефективність в теплиці були проведені для тестування продуктивності об'єктів МОМ 87411 з екстремальним навантаженням пошкодженням злаковими кореневими черв'яками. У цьому випробуванні були протестовані наступні об'єкти: об'єкт МОМ 87411, об'єкт, одержаний шляхом трансформації з ДНК вектором 2 890, експресуючим тільки длРНК; МОМ 88017, ВА5-59122-7 і негативний контроль. Для цих випробувань на ефективність при високому навантаженні тестові рослини кукурудзи вирощували в горщиках в теплиці. Екстремальне навантаження пошкодженням досягалося шляхом послідовного зараження кожної горщикової рослини яйцями М/СЕК в кількості приблизно 2000 яєць на один горщик в стадії росту М2 і додаткового 4-кратного зараження, яке здійснювали з інтервалами від 1 до 1-1/2 тижня в кількості приблизно 1000 яєць М/СК на один горщик на одне зараження, при цьому в загальній складності в кожний горщик було додано близько 6000 яєць М/СЕК. Коріння рослин витягували, промивали і підраховували показник СПК на стадії росту МТ. Коріння від всіх тринадцяти (М - 13) рослин негативного контролю показало максимальне пошкодження, або абсолютне значення СПК - 3. Ці результати показують, що об'єкт МОМ 87411 значно перевершує інші об'єкти кукурудзи, доступні для контролю злакових кореневих черв'яків (таблиця 9).
Коо)
Таблиця 9
Ступінь пошкодження коріння (СПК) під високим навантаженням пошкодженням злаковими кореневими черв'яками (М - кількість тестових рослин) мом87411(М-153) 77777771 Ї717171717171000677777 | ...юрюрюрюрюрюИиИио0ов/бов1
Одним з показників ефективності трансгенних об'єктів проти злакових кореневих черв'яків є виявлення виповзання дорослих жуків з грунту в горщиках з рослинами, які вирощуються в теплиці. Щоб визначити появу дорослих жуків злакових кореневих черв'яків з грунту в горщиках, де вирощували рослини об'єкта МОМ 87411, пророщували від 10 до 15 рослин в горщиках, що містять грунт, заражений яйцями М/СЕК, подібно прикладу, описаному вище. Протягом всього періоду росту кожна рослина кукурудзи була накрита сітчастим мішком для уловлювання всіх виповзаючих дорослих жуків.
Підрахунок наземних дорослих жуків проводили на 6, 12 і 18 тижні після появи сходів рослин, і в кінці дослідження коріння оцінювали на СПК. Рослини, що містять об'єкт МОМ 87411, порівнювали з рослинами негативного контролю і іншими протективними трансгенними об'єктами проти злакових кореневих черв'яків. Результати показали, що спостерігалася значно менша кількість виповзаючих з грунту жуків в тих горщиках, в яких знаходилися рослини з об'єктом МОМ 87411, в порівнянні з іншими протективними трансгенними об'єктами проти злакових кореневих черв'яків, що свідчить про чудові властивості об'єкта МОМ 87411 для захисту від пошкоджень злаковими кореневими черв'яками.
Приклад 6
Цей приклад показує, що орієнтація експресії двох різних промоторів в клітині кукурудзи, кожний з яких запускає експресію окремого агента, токсичного для злакових кореневих черв'яків, може в результаті давати значно поліпшені співвідношення трансгенних об'єктів, що виявляють ефективність при введенні їх в раціон личинок злакових кореневих черв'яків.
Клітини кукурудзи були трансформовані одним з чотирьох різних векторів трансформації рослин: рМОМ120417, рмомМ120434, рмоОоМ120416 або рмоМ120419, і були одержані трансгенні об'єкти, які регенерували в трансгенні рослини кукурудзи.
Згідно з фіг. 4, всі вектори трансформації рослин містять три касети експресії - 1,2 їі 3, обмежені з одного кінця за допомогою лівої границі (І.В) Адгобасієгіит і з протилежного кінця за допомогою правої границі (КВ) Адгобасіегішт. Токсична для злакових кореневих черв'яків
ДЛРНК експресується з касети 1 у всіх чотирьох векторах з посиленого промотору вірусу мозаїки цвітної капусти 355 (е355). Білок СтуЗзВЬ, токсичний для злакових кореневих черв'яків, експресується у вектори рМОМ120417, рМОМ120434 з касети 2 з промотору 2т.РІИО. Білок
СтузВвЬ, токсичний для злакових кореневих черв'яків, експресується у вектори РМОМ120416, рМОМ120419 з касети 2 з промотору О5.Всс3. У всіх чотирьох векторах касета 1 і касета З знаходяться в одній і тій же відносній орієнтації. Згідно з фіг. 4, блок стрілок вказує напрямок експресії з промотору в кожній з відповідних касет.
Зо Відносна орієнтація касети 2 у векторах РМОМ120417 і рМОМ120434 є зворотною, про що свідчить блок стрілок (фіг. 4), що вказують напрямок експресії від промотору. Експресія білка
СтузвЬ, токсичного для злакових кореневих черв'яків, в РМОМ120417 з касети 2, відбувається дивергентно відносно напрямку експресії длРНК, токсичної для злакових кореневих черв'яків, яка експресується з касети 1. Експресія білка СтуЗзВор, токсичного для злакових кореневих черв'яків, в РМОМ 120434 з касети 2, відбувається з тією ж орієнтацією, що і експресія токсичної для злакових кореневих черв'яків длРНК з касети 1.
Відносна орієнтація касети 2 у векторах РМОМ120416 і рМОМ120419 є зворотною, про що свідчить блок стрілок (фіг. 4), що вказують напрямок експресії від промотору. Експресія білка
СтузвЬ, токсичного для злакових кореневих черв'яків, в РМОМ120416 з касети 2, відбувається дивергентно відносно напрямку експресії длРНК, токсичної для злакових кореневих черв'яків, яка експресується з касети 1. Експресія білка СтуЗзВор, токсичного для злакових кореневих черв'яків, в РМОМ120419 з касети 2, відбувається в тій же орієнтації, що і експресія токсичної для злакових кореневих черв'яків длРНК з касети 1.
Як показано в таблиці 10, якщо в раціоні злакових кореневих черв'яків видів Оіабгоїйса присутня тканина з трансгенних рослин кукурудзи, то рослини, одержані трансформацією за допомогою конструкції або РМОМ120417, або рРМОМ120416 (дивергентна експресія компонентів, токсичних для злакових кореневих черв'яків), були більш ефективні відносно пестицидної активності, в порівнянні з рослинами, одержаними шляхом трансформації за допомогою конструкції або рРМОМ120434, або рМОМ120419 (з тандемною або однаковою орієнтацією експресії) (таблиця 10). Співвідношення ефективних об'єктів, створених шляхом трансформації з використанням векторів РМОМ120417 ії рМОМ120416, в порівнянні зі співвідношенням ефективних об'єктів з векторів РМОМ120416 і рМОМ120419, було значно більшим, про що свідчать дані з таблиці 10. Наприклад, для об'єктів, створених з вектора рРМОМ120417 з дивергентною експресією компонентів, що запускається промотором, токсичних для злакових кореневих черв'яків, 11 з 43 об'єктів, або майже 2595 об'єктів, виявляли ефективний контроль злакових кореневих черв'яків. Навпаки, не було одержано яких-небудь ефективних об'єктів серед об'єктів, створених з вектора РМОМ 120434 з експресією з тандемною орієнтацією компонентів, що запускається промотором, токсичних для злакових кореневих черв'яків. Для об'єктів, створених з вектора рМОМ120416 з дивергентною експресією компонентів, що бо запускається промотором, токсичних для злакових кореневих черв'яків, 17 з 27 об'єктів, або близько 6395 об'єктів, виявляли ефективний контроль злакових кореневих черв'яків. Навпаки, було одержано тільки близько 18,595 ефективних об'єктів серед об'єктів, створених з вектора рмМоОМ120419 з експресією з тандемною орієнтацією компонентів, що запускається промотором, токсичних для злакових кореневих черв'яків. Ці дані демонструють значно підвищену кількість ефективних об'єктів і поліпшення співвідношення трансгенних об'єктів, що виявляють ефективність, якщо трансгенні рослини кукурудзи створюються з вектора трансформації рослин з двома різними промоторами, кожний з яких запускає дивергентну експресію (в напрямах, що розходяться) двох різних агентів, токсичних для злакових кореневих черв'яків, і трансгенні рослини кукурудзи присутні в раціоні личинок злакових кореневих черв'яків.
Таблиця 10
Результати, що показують кількість Ко-об'єктів і кількість ефективних об'єктів, одержаних з чотирьох векторів трансформації рослин рМОМІ204347771777111111111181111111111111111111101 рмомі20419....Й7777777717777111714311 11111118
Приклад 7
Для виробництва рослин кукурудзи або частин рослин, які містять поліпшені агрономічні, інсектицидні або гербіцидні властивості, можна схрещувати рослини кукурудзи, що містять об'єкт МОМ 87411, з рослинами кукурудзи, що містять потенційно будь-який інший об'єкт кукурудзи або їх комбінації і фенотипи, досліджені для визначення одержуваних властивостей у потомства цих рослин. Як необмежувальний приклад, МОМ 87411 можна схрещувати з рослинами кукурудзи, в тому числі з однією або декількома комбінаціями, вибираними з наступного: ОА5Б-59122-7, МІНбЄО4, МОМ 89034, МОМ 87411, МОМ 87427, ТС1507, 5307, СА5Б- 06275-8, ВИ 76, ВТ11 і МІК162.
СлИСОК, пОоОолЛІДОВНОСТЕЙ «1105 Мопзайсо Тесппс1оду ІС
Біжпа, Меп о спау, Сбаспегіпе А
Сбіопіцуєк, Спекуі.
Оепд, Міпуді
Еіазіпаекі, Збапівіах хо, Еспаивбпевд «120» ОБ'ЄКТ КУКУРУДЗИ МОМ 87411. «1303 МОМ; ЗОВ «140» Невідомо «14ї» 2013-05-08 «1505 б17544368 «-151з 2018-05-08 «1605 Би «170» РасепбсТтв усеклісов 3.5 «ЕїО0з 1 «Т1» т1РЕВ «ріг» ДНК «віз» Штучна послідовність «РРО» к«вгоЗ» є нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 87411 «Ох ч«р2ї» півс беасигре каге» (1)..4300) «ра» показана геномна ДНК, фланкуюча ліву рранишю Т-ДНК «вх типі» щтівс Теабцтге «ги» (501)..(11 740) «газ показана Т-ДНК «пров «грі» преометор «гро» га9А4В).. (35593 «235 показана зворотно комплементарна послідовність побийленого промотору Саму 355 «шо «21» промотор «гор» (2948)... (4534) «Рез» показана область дивергентного промотору, яка запускає двонаправлену транскрипцію «аО» «2219 промеотор хрор» (35863... (18534) «ваз показаний промотор Согп РІІС «вро х «21» шШшівс Тевасикге «рр» (11749)..(122483
«РиЗ» показана геномна ДИК, фланкуюча праву границю ТЛ-ДИЕ «005 1 ссствоасУєе чдадсссваст адтсачЧкесад сеттсоссотес саазсчстча сстестсдае бо сеастроарса аск стедедо сСсадасстаа сссавссав сзаєсстасча ссадавчсе 120 чачаєссяаєсо датадсссусЕ суєстосваа ачсЕуєсава адзсескесЯа ЕсСесЕгадаа 180 авсзасстас асррозс ас стсасааєта дуссессвдЧе Есєсосбавда саяацдессееее р чстекатеЕс аатсасавала зпааатствава Есбачеуєет судвзасества васстудедав зо
ЕсЕсаваєсь севдсаваєт вассобааає бдодкодене ваахстдсава відабсатая збо
Таєєтаєтсьс сассгусЕкса загсасвавта вЕсСсастетс бБасаєчтаєа застава: 420 стадасаата чзЧаЕЕсаєтса аачсдаєадча сбасєбасса азчасдчававі зазавзчасаа МУеВ) засастааєУ засадевнау суаосесаву сессдуссваво стасасочає саусаавчад чо тагзасдасс авагасузадча зазачачача сЧсваскасса айссостєсссе авасссааная вад гаБадаєсуєс содсадсаєва бсасзазаєу аазорасаєс ЕСЯсСававе часаватраєс во чаєссаядводе аттасадас дазачсввка авасававтсає сскваєсксуя вааееосвЕває тео гЕсчасЧчвує стасаєесає чіссазасуд 'сааситачаєс сасаавесксс асчаєсчаєсу тва спдссассаєс бсдадуссча чдудбаседева їсваєссваєс сдосаазссає вавасчсакь вій вававасасу кЕсагастіса встдсававс саєдазьаса всовсаасса базачсаясу Зоо аккачачссо дасвавучась стчавазваєт асасавачса агосссаєава «счссєвача. зво саєсєзачадча сагассгтоса ЕкЕсаяупавса БЕКООСсасесь вБЕстазУєеє дававтарає тео гсесвудеста чЧедвасавуас агрзаєцасаєсє вастасваує ЧЕ саессос ронеЕвссаво оо сЕсоОдЕсаєс ададаоассаса асссудасаса єсЕсСсСассса вавасававто сб дсатаєс 1170
Естбасааюс бссазасссава сасасазева абавзцадаза васаасаватсаа сасеЕвавева їмо ачаасдваса авачдассає аксаєтсаве авастоювото сакосаєтвс саєеЕссасвсад їхбБа
ГссдаввнодсЯа аваассдвакє аазавнасаса чсазаєтаса ачдсасавсва асчоабасаад 1320 йзазасачьс стессазічс сасаабаєстс вавстсвуса удаскстозє вдсакасоасав 1380 їчавассдає чдсаслтуванст Сдасувнасат суссдавасс часчасасса авсчавачева ї840 чассісацдоч адЕасецева дсзаксьває севасчатгаєс убазвасаєса бевасаєсса 15580 завєествавоа адовусстта ауддудсавсту садсаєтесвтє сатачааєс авгбасадсадє 1560
Багрседвасов адерсосвтсУ ачадчавсст бесвБдсаєссс аасвауссвура ачадебесає 1620 ставстотає гручавсюсЕ босваюсеєє сСсесеессь дасчосюєча вубусаассо тево
ЕЕсвавєввво соасдсасвв стрес ссосос кессстасачує ддосозочкоя асуадаасте 17495 вахсЗзавоЧЕ чдідазачьтад Едаєссачья сдавЗеЕссосся вуавчсваєуа чувак 1800 гЯдссадодасє абсусудусада адасассусч асазасозст аастсчаєся сачсасссас 1860 ааадааазає чдодЕсдавав агазазцаст бдевсьссаа десоссрсаава задавчаваєу 195820 астоадазаза асссвастає аазасачасочч васссєтаса асктастдчаза сосачачуцча 19880 адссстсдва чавассвуса саваасСвстос касі вча ссівсдадава арчзстосада 2040 бадасоссказа азадстсаса адваксгцдвна есСадчведас дсєсасавнса всасаЧавоо 215а тассасасад сачастчдссча чадавсассцча доссссачесю, чаБасстаса Єсасавнсдаа 2150 атуачсзавуа астасусуач саасастуде савсвастацчу дезчаачдсає сдяадсавуає гг асдбаєЧчіава аздачавасаа БагадЕоєсса дб уабауас ассадаєсасс вксадчауче 2280 задачададса асазазачдча вастісстає вЕсСтаваєіє буєсасаася аасавдсадча 224 їсаачдсатс аадасасіяїЕ сачбрасттрає сеЕстЕСсСадао адсвавБассс аазасавена ло савессдасст паастравдо Ссасавзсава учадчоачача бавзасаєтсва завсссдеса гав
Естасаттса сЕсстссвадУ сЧЕсСвасває сСгвасСсацеве асавасавав асачвавадча ай засассотаає єБЕдодсазає дасазуєтеоє чдосзоаасчазсе вавсосаєссає ацеассуссет 2авО асзаратчаа Сбсосстасаст абгдасссас дтедтаєува десбоєудссоє азаєтаасає ой саваствсву аакссаваауєч ссостаєсаавса сосвасасясяа ссевавсава сассаставу 2той сассазаєта сасасевство дчрассуєсоє дсвгодесвета собесЯвесс драсрассяе ал доссстатає сітчасті оста сазачсаєссу савосавасса всасяисчсад васасчаес 2520 садачсчєвда сЕСтТаЧчаєсс адставаєса спстсвчусва Єсассасаса впвадновсатє 28 садздавнасо єддсводагазо авадусацад дчсудачсва чедсчкасся зачасудчьке 254 зчеЧеЕЧкЕссс ссссазасудза засчваасссо стсасбавсача давача сев адесакачаає зво ачссачдачассд содсассаитсо сЕсвосьсеу Едоваакаєс асабсваєсс асебассса збо зацасувБодчв Бддаасдьесє соссЕєсосса одаєуєсссю субаочсоава давссавсве зі2О
БЕдаддассаєї дісдодсадач деаєовксва соадсудестьс вес каєся сааєсдавєуФе зіво аєвсЯбаодда чдссассввсс ЕжЕссссаєсва Бсосссовсває авадбуасво авадссчдаеє 3-24 засадаассс задчЧадасьь ссазсдабаєса сосстєбеєса пазацістса ассудассає 300 сасабсвасс састлеасівв дававсубач ссадавсяєюс вве сксс асчасасосе засо тедсочЧаєчЧоа чдадессарек сєвдадассає ЄдЕсцусацча чдасасссса всечагбадесе заго
ЕСессеЕрсБасс дсаанчавау савесвубавдо ацосасссьс ср єЕсссась австєсасаг зЗа80 гаазасчаса чавдасвуча сваєсочаакс совоудадчесь сссаддаєаєт асоссббаеаь зва цазнацеьсюс аагсозассї дсадссбуса сустадочос дсосовсява бсоасацаєса зеро гдаасостає ссасадевссЯд асббдсссва сасвовоста ссанавссса вассабассо зв гЕдасаціса сісчочазьс вгаасаєбоцчУ Сасобаєсста сбавдєсває сабабоесевеь зго стсаєсавдаєт сасачЧчассод сстачтасує адсдасатоє ссассвоадасає сасозЕкаєд ато чогдсассота агачсчатає сацдсаєссоавсч ссатадесссс астассачдаує взчЧчедачачсс зла асстсасас соссаасєссо сбваставнада бссссваєса стає ссоччає остачассвта 3590 чаассавзча азаастствио астасбвудеь сдсвосасась саовсаясабає сЗасадчвеса забиИ зсадавзаєса басудєастає ссодсудеавоба ваасудасвс зазсестасс саграгасаа 4020 девасвасссє граЯасСсооауєа бдадесаєсся обсацчсвдач чбсебовЕвс саддедуєаде 4080 ччЕачдстрчда єстоацеЕсусс дцтассугаа чЧдасетатата азвзатсвсояєе астеєвкдава 4150 чдчадсусьса садаваєває воддтасссЯс ддоводссудсс сесцсауває васавааваєваєч 4590 ччсчдачесасдс асаєдсатєса чсЕссдЗаєсва вагваєваса дсоссвасса аєсядаасаа ах ей тЕссадсрад састаає ура сСеЕсстосаєс саєсьудсста тасвасасасо басстсдаеєта 1350 засчассск асасчаєтка Ссаасксдст сеуалсовас асбесстчаєсу абетосасає 1380 часзаєсцчасс дЕроассстас асесстві зас вассауссева сустсвавуєс асасарасоує 44 гассчзаєктає ссдедсаєсде суссвадевс дачацдсасою сссетсбасвне сукссавсає 4500 ссасзааваас сабоссваде ассосієвБчцва вацесосучууа аассаєсвтсо сасасасьса 4569 вдссасаста гтрдчачааса сасачодаса асасассаса вЧассесвача чдадуєссесу 4вгИ ссадссаесуя баассасссс дшсссостсс Бебсосвстєс сбессувесЕсЕ соросовеке 4590 чЧаєсседчасс сісадддєсста акассссосо додсдачач дседосьссоу дсудсосссад ТА вЕсчачсЧчсує чададуадесд яддавкЕсісчся оссбвддочесс ЄсоссЧаєЗе чдавесседуєє. 4890 сддасстсус чадазасуяєч Ядстсссадав дєвовьссос чарседссяє сус очавва 4860 часчасчача чЧавссвнаває сресуосуєу стазасвауа созоудвачач чечазачнучу 4520 састатудеє сабгассєтта басассбсто стадасттсаєс едастврадає додссадасс дво
ЕЕєвовЕБСВЕ стро БуЯ дсачвнасстд вабсеостсвоа саєтеєссяо сдуєвавєье пай
ЕстЕстсаєад аквсасдвса аагрдсвусстя счуєдсадаче БЕК ЕУСає вдсрацазогоаа зо тсвнассяБуд ссаассссав сааєсЯстсс дЧачсасчаса счавсавачс сасссосаає ій тссзачевсс авдассазоса сазссаубас соустаасся всавассоста стосассоко ой чавчачсіча астасвавчча чеьЕсстдевс асСовссуачч встосстссвс Уудачасссву зав часвзаєтсоса ссцдггавуча счесосодуд ассудеаєсть ссецесаьгда дсадавсеося вдо часчЕесцева дсдгсвасьв сусаяцУбасв сотовсостсве ссогасрацьо сессесЕЧаає 5АОО ассасстаддс сстосдасас стчасосеосуч вадуссотоса соддсосавав счвадчбесесв або аксодсавуа адаєссувуча чсасчуссвад сссаачуєсс годассвдачех дсвачоассту 5520 савзасзасе ссдаучаєта сяссвасася соуднаєсєтссс яддавовачас досЕСстаЯавес зо стдсасвсса ацечсссоса чддасоссасс стсдчачесов срссевчуєс счадссссас 5680
Есссусоваст ссасуєсубсес согсчдссусо бесвасткво адасеосась сстадсссасс 5ТОоВ
А набадсссада сідссвасає ссоассоростд єсЯасеЕдвадя асаессадаь ссбсодедвач 5760 чавзсодаЗзесс астсстсЗда ччвасчссяЯсо чачевстасєс досуссачеє чавзчдссудвсос 5в2О саасадіасєсв содассвеву счсвастод сасвасеассе шсссчвасачв сстуаччає ЗВО босасєстаєч ассасудуЕ саадессяво состсссдса дасовчаєЄдас сстдласояве Зза4а стдчасєсьча Есдссеруюь сессссограє дасарссдсс саБвссосна чадечЕсвад во зссзадсрча соесчстуасає секесасудчає сесетствос сдстсвсчцаєс сстесадава вОовО тасаддіссса соссссвуєс сацедаднаєс Гссабсососа вдсоссосасої ЧдеЕЕсаастас в120 стссачодса єсдадібсса сасосусєсста ачассвучов асессооадсава здаастосЕсе 189 застастудо ссдчсавсста суєдачасоє аддсессстоса ссуадсссстс чЧазчаєсчатсс Ге) асотесоеств пстасчасча сзаудсосасо дазсоесчсос ачаачестасе сссостчасаче лоб сацвазчсст ассосдсассв: суссвасаєсс сасЯссозосда ссбеачдссува сзасвадчеаєе взБО
Еавссоддова Есасдаачав суассвсссоє саовасєчаєсч ассваааєна сдадастрес саго асссатчасев астуассссаа ддсдсавсває ддсвасдюес седссосадуа всбесасодає ба садсьрдсоус сідадассає бБЧасчадссо обучадаачча ссіастсесса ссадседаас вало тасадстоавус дстлоссвуає дсвадассоє аддсодсасса бссесЕсесе сасстоадасе вод сассастсва бсдасосевЕ свпасассасо дасоссоаоа возовесаєсса дсгдсссоьо веб
ЧдЕсавадчЧчессї асудоссбусс стчсазчаєудсс їссяаксаєрся адацссосаяа сестсаседає тей часзасстус єдЕссстуаа сдчадссстоо вастсовіся обавчєссва дуссассста вто застосдста сесстуєсдса асодстассос чдсседсаєсс десасусевс сассасване вій стасаЯассесЯЄ ссуссснава стссавсовабє сасстссрач Осабогасає саасавоавсс 5ЗОВ аєгдаасзадч асуавдассь дасстассву ассосєсуасс Есадссасовас авсьссааво ве ардадеЕсстї сдддодасаа дааєдвнастЯа ассаєтцаса ссувуєосте сдбсбоссаває 7о5О чачазчаєст асаєстасава чзассочацевс абссоссусос ачсвасчасеа пеавастстеа таво тевдаасссва сабусоєсво дасапасуєє саєтесвоачесе удадсесхаєє са счасо 71420
ЧевсссвчачЕ сстдсовнаЄ стчасчачає абстсгурає сосеассьесо тесссвусо задо вессгдраєсє вобасавасєд дсеваєсдос васацатєьсу усоаассваана васдачаває трЕй заведе дата цсаваааайна аучавнеЕсача собачу а єеЕсЕЄЕОдає тзвга сесастюЕвст асадоасскас стецачаєсдва саасовечесь стсассаава соадчаччдазе 7380 взчавочдчова азачсуєсас ссадесасстяї ссавітчюсас вассвуссасі пдуєсадетею 7440 сесасаєваєс сзагчдесача чздсвацчсЕвЕ авадсвовуєсєса ссассбсасс посассясся 7500 застассста чостксадсоса асачдссаєсоя Гсаваєсєдессосе сЕссссаїса всатавачазча 7 чацачачазаоа апчачачсад ссастсоЧеач вадчаддсоваса чоасатчдачча сстаєссУєте 75520 чесавасває кІтчУучЧстас свадс гадав саазгсавочод ачаваєсьда ссатосЯядее 76850 чаавазндочєта сЕдчаусацк аксекссас гачзваєсаєсєс заазаавазає васстовува 7740 сесассгодаєч вадасассас скуссвувод саесстегссада асаєсвваєс ссагаванає т8о0 аєсацдазаза сСЕсЕстецчає свзачасекас вассвссава зстдессьса астедавуца 786 аГвчсЕсСсанавс аатгсваваєо асавссадває ЄувУусссова сЕвсастсва асеоссвЕєтав тво закстсвзаєу чЧкаяаясасс засесувсву ставав чЕ ЄсЕЄЕЕсаєт зстєжесваза 7980 азвоставаєс асавгасачав Бсаавгаєссав садесадуєсе сваччусесяа ссуадчсваас оо забацаєсає чдодссадасс садссвасосаєст сбесоєссобос бцаососсяс воепЕЧавксЕ 5100 сааваєссавава азатассудао асчдасєсочос дсосддасочву содоасочЧача асуасадаає 87150 засосстода астсотасссс аайскасдесе ассвасосас асуссаєссоча сваасосчаве 220 стасссссасЄ уаддессассх асявчсдача сессачеоує ссоасацеваєс сачсуцдцссяе пад асстсссаді чдадесддечач бадасоєада ссессвесова ссесцасвсосвна асававасддс 8340 асдазсаєьо бодсаставаа сссссачавна авассосоцата сбосавассв чсасачессо Во
БдассдвЕЧа аддачесааа чеіддассяда ссогааваєсс судсаавесква аксосавучдоадУ ваівО
Гсазасодсаа азасуссуад додссссосу ссстабваува зоудовадва саччачевау цого ававссствос асассадсача Чавачосоасо сСсесогбасєсся ссоесбессоссаЯа саоссосбоесто 885950 сдосцосасї сасосусеуєЕ суксеосусо осевосучеє едссаєссосву дсваачасава 8640 саазаавасдча ЄстЯасадсть ссассусестос дЕЕЕсгсяса чсадеусчве єсцдчаєссуса вто ччгачаксса чавчасссту заадсУсочЕс суссевуєть даєздасеса рочагацаве вто тчасстсста содсбдЕсда бассосцаєс Бусассєрса бсаусдаєвя Єссебудчасс 9820 тддсдазава БЕЄЕуддуаєсь сасадесдаца одекаацаає суддававва. сдсачкаєта ввво чіадаЧвЕсс дчдасауадав ссаєтвааве ауєовувосо сесбосєчаєса вкесгосбеєссє 890
ГсЕсЗЧдтача стае садЕ ятасявекає БЕсоодатсадча їссдЧассває сопе зоабо ес сссаваас сксестаєста дУуссубаєау давсадсаса сеадасесвоЗє садаєсоссесв збо часссчгоас соваасосес секс ачессва бачасстрда васбсєсасья са ссасеє 120 адаєсссадває єесецісрає астсаарсва єсесеваеєка сдаавсваасс сЯаєааствад 9188 чЧоасасавбає дчзасочадьа ЕЧЕЧЧассто бачравусає асвадстасаа чдосавоваєх ВЕ авгрссачадс падсвсадає азававраске авдасвосвесУу доадасаасваєв суавдчвеь ЗО бададсаксаво стр соасауєя сседекссто сегадсваєс ср двосса вЕсровадчає зво заавчставс агассссєаа азчдабсаєсвнЯа васдеобаАссос даавучеває аАсваєтасоеда. зало сЕдасссвос Бусуаєсвосс БдтІксеоюсьє ссстєдаєаа вссссвбдає зазававасєи заво сстзаздаЧчеує аасттдсвда вассставсс Бассогатоє ачссстуаєссо асчудсусава з54о тРадсачаву стдсзаєячаЯв ЧЕдсСаздааос саєсьістьвав стосваєсьс бсцавасеса зво чЧчесавнсосваа абстосства сечу сскесо гдаадасчса зсацсассса счвастсаєс Зебо сзасстсднс ассусачачча сСтадвачавнсца зБаччасвдас чусьвасьадо сєстчачсьсе зтгиа
ЧдЕССЕСсСтТІза чдохсасавеЕ сстукстсса соцедЕЧеас чсЕрсвеЧає усвадсадес зтвО адессдсавс счсосусаза бсесбосаддсє ЕСсссучавс сзБесузваєс ссеуасавеа зво адтЕсчатстес ссасоуутст Єтсатувсся чЧдесодтстсадс дачедасадав всчсасасеа з890 сесдоадсслтісь додвадусчач дасобсаєсса асасодудсесва дассаявусад дсдатбадуєу збо сссасатосЯя гагдодаачус часасокодса Бсабовсаєуд суєсодсаво дасадодосьсс 10029 гадсассрда чоасчссясто чат тсодчса агассуссас доадссассяс ссчасчаєє 19080 чессседесода ччастаозчає срсуавоваса соссосвісуч счасочсокеу сгсасазауе 19150 чессдагодча ссоасусасЯа авассеостос дедававсчча саосасвадоа вався 10200 асудсдасся єсСтЕсссуюе асссточсцоу дассдаацчає цесчасдесяЯ ассасствєсе 162760
ЧечдЕдссвчав чдадсстсодса свузі чав ссесдесувуєсе дскедсосдуос сосавсводо 19320 сочдасавсас часчдесаєс чадсссасса сдасцсостча гсасасчдаа аачасоссас 10380 задасствач соассдасстс ассусодача судабводсуцча содсобасос ассатросасс ТО44о бїачавоадссосоа счасавзоассс ассоаочесаву ссассзасої сдссочасчає ссубссусза 19500 счадссссосс четаУЕсдсо доссегассвЯа Есссусчєсс суасчєсаєс абестсвасо їе55а
БдсрЯачсбОдваа сеєсассодо ассдусества гостдаєдсе чсадувнаса часдеседасая, їчего тедаздаєсає сзасєссусуєс стсадссдусу ссузадаєуес дасодасска садсавседеє 106580 сесгссасус давдодсясс асацсоссву вадассочосс чссскедаво ассчасоває 10740 аєгсодавьсв соустуссдес десасеовссу одовавчоавдас дасосдедаєа васЯачеессад 10800 вадзасєтсву сЯдбовадува адсуассдес ЄсесдуссяЯт одосваєдає сесаваєтса 10860 аєдасчбсадча сбБодсчаєсчає ччсчадчассою содсьсчесаЕ дсовуадссус сстчасадса 10520 адачастсота сазедесітсо дусассоссу бедссаєссса ссбодаєсвсо сасабсуссесв Т9980 чадссссск сотсасодас сьсягоаресу ваавссссує сасадсочеєс Чарудссастча 11050 гадасечдобає чдадстісосдоа чазрксаєза асстчатаде соедссЕдоус сеуаачаєса тт10о засєстооуа сасзавудесв цсесбчасувоа обосасучьє ссебасосуце досєвєудсав ї1Т16О гЧдессечЧавта сьдсбБдставї сетасчасов стсодечьсу дсссссабев ассадесває 11220 чедвстоаче годававаса Стас сте чатрасосава чсабсрасьва бадсексяс 11280
БаєвБчЧЕЧасс пасе свасЕв атабдаасст Бесссабдос асосєвбаваса бссавясеся 11340 част ЧцЕсЯ Баааасозадч сессгабсье ссвавачісев осстатадса сбедаваєсоде 11400 вЕсссвосто дадаатаавс дедасовоса дссоуєсчеба адстадекке сдахсаєссвча 1460 гЕссестадЕ сдсаанство адаєсокссо сдстгвоцдсЯч адстаачєча саЯсссствад 1ї5аО тавасадстсс ссассвоавакт асчсачссУє ссузавачадч засососува бСасзтачека 11580 гадбавазаєх асудссссвад Савзасосссво сват се ссовасістсс адросадаава 11650 сагєсувева доласодста чадссасвос савоатксста зстасчабав веасЕдесета 11700
Інасадавяа сасозвіссва вчсодсодся ЕЄсазаєває, сячеУЧвБЕсва аднаєссасаїв 1Ттео зессстадає чдкатсваасст ассстадаває бацсесаєстт собака сає вссеєжветає 11820 бдваскоува сісассвсдь Єдсабаваєє Єбабасаєса овес сасс авбдсосалза 11550
ТаБасктаає чдадеЕдаєтадє стЕссорачча савсоавоусач бссвачзессс сечачеоває 11940 гадсававачас сіссстчаче адсаасстоя сСчдаавчусава содбесЕсіда сссаєтаєує 127000 сабсастсаст спраеасазаєсвас арсессваса асасчассва ауассвасве саваасварає 127060 асабасаевас чкразвзавес садаєсссвяа асвасєсача суососвуває чдсавоссстяд 125120 чЧасоддссаче дсачодстсав асдасосатва суанааеста ссесавуєде ссдсесведав 17180
Есзардосда сауєссаває Гассудсаєсс дсвзасобата дадасвавзаа састасодааа 15824 агачсаза 12248 «1005 о «2115 763 «2125 ДНК «Різ» Штучна послідоввість «ОО «кра» ее нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ ВІ тег «вні» Шшіво твасуте свя» (13)5..1500) «баз» показана геномна ДНК, фланкуюча ліву гранипю Т-ДНЕ сао чаї» тівс. тгеаїцтге «роР» (З013.. (763) «23» залишок лівої гранимні «005 г ссегачочсє чдадесесзасеь адссачсьста сесрессссс сгоседесЧча сосесссуде бо ссасетаєса дсскрсадсус босаавсссва ксссавовес счасстасуа ссудаводео 120 чадассасес чагоасосЯясЕ суєбсосага ауєсдссава аеадасесюєто ЄсСЕСсСЕвадав 1805 авдгаасстає аЕжсатаувЕ струєдаєса бдссостудє єсессауєЄава авасосове ДА чЧчегЕравЕкє аассвасаавна абаааєстав ЕСЕазіщесв одавсЕсваа васокеасуаа ЗО
ТЕрсасавсс секдсасаво зассссааав водо саЯви азароусава аставсаєагв зво бастаєсстс сабстосста васбасавіа БЕссастаєс сасавобасоа бавестасда 20 ссадчасвааєа здат Есаєсєра вад чабадча вБкЕакстаєта ванаудааавсо ввавасисав аАВОо аасастаата аасадсєавадч счддстсваво сссуддааає сгасаєудає садсваєдчат БІО гавєдчасодЕс азрагсчдача азаасазаза «вав касва СЕсСстЕсре ачрссававах во табасатдсс сдсадесаста стасазавту аавотасаєь ссдасазвас часававнсяє бо часєссуссЯь абсгтасачас чвназзсвнатса ваасазаєває себсаасссся аваресветат тео
Ессдасовдв стасаєссас осссаваєсодд одддессевчдаєс дад тв каз З «її» 515 «рірз» ДНЕ «1» Штучна послідовність «ех «газ» є нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 87411 «ех «ре2їх щшівс тгеатшке «ваше (1)..(15) «роз» залишок правої правиці чех чері» щівс Теаєшкеє «рас» (160)..(515) чи?» показана генсомна ДНК, фланкуюча праву траницю 7-ДНЕ «ОО В завасктаєсач сх тявдада ассасаваєс сствздаєата єсзасосаєс ссавдвнассьна ба
ЕЕсастсрса садарасабаст єЕкЕсСтассчЧа асгодсеасесес астсрассяс взіарсетта 129 тасастУсес ажсосдссасо сссоваасос сбсссазедаво соувссусссе доЧчезувсва 189 счачсвчссс вадасссося ачдсасовсес вавадасьсс сосьдваосавус аасстзаеьда АЙ здукваацеЯав сстстдассс асвакдвсао аЕсБаськга єваттасаєєс осссаасвава зо кдаєсалада Стаасасовза акратараса гасаваєдесс взазасЕссва ведссазата зба аєсвсадавЧє гЕадаасаса гссставсівс ддссассаса десьсаваєс аєксаєасеа 420 азасеставсс стачтдсісо стлсуваєка всчссоасва Зсбазастас сасабосдеа «80 асствіаздач асадавваасаєс бакоававава. баса; 515 «210 4 «ії» 11958 «2155 ДНЕ «1» Штучна послідовність єв «Ра» є нуклестидною послідовністю об'єкта МОМ вл показує Т-ДНК об'єкта МОМ 87А11. «вах «па1» співс тезі йге
«рив» (1)..(263) «Рез» залишок лівої гравиці «Во» «і? промсатор «ге (2083), (0) «кра» промотор Соки сРІТО «280 «рів промотор «ий» (8гйАВ).. (30593 «23» показаня зворотно комплементарна послідовність посиленото промотори Саму з585 «и «21» промотор «дог (2а48),. (4034) «ва» показана область дивергентисто промотору, яка запускає цвонаправлену транекОипнцію. «КО 21» щівс геасите «при (11233). .(11248) «теЗ» Залишок правої границі «00» А тддстссара бссодуваає стасаєсодас овосваєсову таєвасчзєе вабасудадча ей взавадазада діаавсасса айсЕвЕвесс ваєссаваава сотадаєдес сдсадсааєвта 150 гсаєавааард авачтасаєї сгчаказавс дасвавсбає дасссуєсяє аєссасадую 180 чазадсвзата засаваєстак сстаасксзд ваасссстас свсуасуєає стасаевссає р) чЧчЕссвааі ча чадстсачає чсадавастсс весзаксзасоя седссассво ссчачасоеда 300 чавасечсЯа єсаассватк дусвасієаї вавасудсатєє адаваакаєсе сссавассса збБо астасазаєс сатзачсаса астатбааєста базвадсавьраЯа всгадваєст дасавудае 320 сроддааваєс асасвазоуа ааздчсссаєссва асовБстаава Сасеасавча сабасссока 480 їжсадсваса сСсодсауосЕ Єпесрадуєст даваасбаєає Єб5асбосста ядвдаакаачое ЗЛО аєвакдоасає аассасааче орсссастісс сасаєссаас стсовзесаєь адачдадєсася 50 асктаасава СЕ Етастісаа авасававьу БСЕдЧсатаєс ресєатааьс созаасссаяа, бо сасасєзвзасаа агавцяадааа аазасвавясвна БаєсавЕсса ачавсдався вазачассве тео агезсссаєє вассстосво сабссвесссо састксовзову бсссдасадод звааассчнатє тво вававнасаса діавасСасв адсасвасав ягродсасава аававсваєє соссосаяєче Бай сатаарасєтс завоєсадса Зддассстоаь ссавдсдова бдаваєссвчає дсаєвеуаваст зо тдасдаасЯяб Боссдаваєс чаєчуагасда асаваадчста дасекоадчся вубасосусва Зо чедассваві ссабсдатаєс чЧедайсаєся Бебасавєсоса. заєжесетаєа вастЕтлстева 1550 вачдччсассьо садсаєесевЕ сатачааест вакасачсач тасесурочсе адсвссьосу їо50 ацдачесіссс собусаєсьс васвасстра вучассссвь стаєекаєає Єсаваавеює 1150
Бссааєсуве вБесЕассьсЕ дадоачесссд адсбдовасьс СЕСтассссс сдасаварєьи 12590 гЕссссрасоас гостадсауадо дчуссасЯавоаЯ ассаечудачоє аагсаоднояє чедачачсад 1250 гачассазоєаЯ чаБессЯаесЯа ачачецчаєса «ож цавас саєЄсачідає асечсодчвача 15320 ааддсатсосу аказавусувс заєсчецатед сачтасотвоєс вазстававає чдоуссувана Іза всваплачачо босассасава чссстовава ачавнчавнасоа вссодчавана ассессвастас 1440 азасачаєду авсестсаса аскатбуава БдсаеачачучЧа чадоссстечаа сдадвачссадса 150 сазвзасастчс счтаєтечає бстаєозавга абуссссача гдсесгсбава авадстсаєта їз6а задваєттчдаа сутацаєуає двсасава Єсавбддасдя бацеусасаєт счаєсуасьда 1і5Б2О чечасуєссув чдсксссоскЕ часасссоаса ссовзсаасуза асдаЧсаваач встасчсдчаєч їево їаасассоус саасассаздоу чадавосдесво сЯвосвачає асзсатасаа воаовадчева. 1749 таЕзаБаєса ЯдЕБоадсадає аствзувсасс звЕсвауваче аабдадачеа авсаавзачча оо застісссСав сЕСтаватст буєсаєвнаса васвачесача ссавасусасс вааваграсєцє 860 садсасстсас срссссядас васяасастє вавасаадсд сабствакоє счЧассваєча 1920 тсасвасалава чдадсачача Сазасавсва васоссовса еєсбБатаєстьа сбсстрсаЧче 1880 «ас вдасаає Сбаасадсас асавасазавз асадавсача вабаєстаае Есбддеаває 2040 заБазусьсяї дсадчасодває вазі бастсас вугассіфсов абавтсасачвч вБоєсстасасє 2100 астдасессає чтіазчсасуза достусоасос азастзасауч сазаєсьста васссавеа 25150 сестасвнаса ссавовіоса сткааасава сбассчуставо сассаваєсв свое ри чсаседевУє чвачдЕссва ссвсбсоцрЕвс дебваствносяе дсссстатає єстдсрьцдета гай саваццасуд саваєнаакса цсасадуєву аасаєтаєьє сачачсаєав сестадчасее ЗА задсбааасса сісгсадсаа бсассовсаса вчазадсаєс Сададваасч садосачбааю 7400 азаддсадаа чусчдадсов едсусассо вадасууєсс еудсубоссс сЕссааатда бо засчаасесс стіасасача счаваччоєся Бассавцучаєс вчсчачассо сосавсавсс Вшю зЕтасцрсач Бодазчакаєс дсаєсванос асЕвБасІссд вадвовьчує буддаасоссю 2580 гсБСсЕссоса суаєаєсссосю сеагачаБаяЧ ча всосвЕєсе єЧдоЧассаєє чдссчасауна БО чеасессссаа сзчзасудсове бсессссагтод савтдасчдос асесуєзача дссаєсстьсо 2790 вЕсЄссяста сссесвсваї вааусдвову асадсводує вабоднаєбес чачвавєсє 2760 ссчаваєса сосеврасса авануєстсвя ассудасови Сасассавкс сасебаєсвсе 285890 чаачасубач сЕЧчазедеЕс ЄВС ЕсЕсСсо асачасдовос оцдвоачасва уд єссаюеє 2880
Есададвассвс бадбодусада Ззасаєсессссоа асдвбудесе вЕССТтвраєс дсаабаатад 2ЗАй савсрутача адссассюєвс стевєсосась абссобсасаа савачсодаса чабачскочУ з090 свагдччаасс сзачдацчавь сссачуасась ассстстаст деававобсосс авахссаоцасеь забо чсадсстдса достадсудс дсдоссасава цеасаєусова савасостає сСсатадевкед з12а асєсбдасссза сасасаєтра ссааааєтся ааєсасовос тедасваїса сссчудчасте зЗіво аєаасабоача гасясаєсзяа стассісаває гасагосуєс стсассацчає сирадаєрд за сстадтасує адтчататеє ссастачсас сУусучдеЕтасч усєчсвссву асадечвнає зво садсассозда бсатодевев ассассваде адсазавуєу асесссасве сСуссадчассо завио
Еаазсгаасда ЄЕсссвактса стувтсодає сстаеачеаскста давассвачва вавастставо зай астасацосе дсачсасасє суубасасахє Едатодсдосва всадазаєсяа бдсабастає ЗАВО чсасчасчьа азасдчасає заассстасс сабатрасаасє дсавсвасов содЕссЯдЕ с з5ао кчдЧддссасоЯ чЕсадсадау скЕсстсавьвє сучка доєвадовода сегбадеЕсдво БІВ) стасс3сача чдодаснсаса авассагаєс астсеєтЕчЧава сувосостса Ссачавасаве об вччвсбасгсус адодадессусо ссесдсвавас зсвавасавзуч чедвасасчс всасаясавеса зга чеЕссдяаєсЄвза засаасавса чсодссацдесву ассудааєва ссссачссбач сасєвасеата з'Во
Ес ссосаєт чакєссдетса бСасяасаєує БвасосодувсЯ ваза асасоааека 3840 тсвассвуєє осуабсестає абсссдассу абстосасає дасдасааєв уссасостаеє 3800 абсссабдає аассададсаа сустсаазус асасаєседє ассяаєвтає седеЕдсавтасє зве спдесвзадсас чааачеассть сссгерасво соудсосвссво статавазас сагсдссоваче 4020 зсссіоцтдав аадосасуду аассаростє сасаєсєзстсоа адссасаста сродчачеааса щово сасачоцчаса асасассвса ачассовасу уададссхссоч ссессзссяу свдастасесое 1150 чдесестекБсес берксссвсс соєве сссосудєоюе уцеессадасо сєстадесьва д2го0 чЧЕЗЯєЕБОдЧЯа соддасаацау дсодчесБсув деадсососява ассеачсасае дачачачаєд 4-ва чзчасстсдся чсбочдеучово ссадсосуєдЕ дчавесодасс содасстодо дчачаасеюда 4350 чЧчеєстсчдає чсадавссдс часссоссує басвододоа чаєдасчуая чядссваваає 4380 тсссдссуся сіазасаача бсадозачао саддааавадоа састаєоаоев агар са дао тахгастсрста студе ссяєс вдодсЕсадає сбсоєсєсадаєе вЕсевсосвЕ свссЕвоасоо дО чусазваїтьса авссосссад саєсЯвЕває сячевсвкеє бсттегсава ассгууєдаєв, 1560 закдсадсст сЯасасодаче Ес ссугтад отадавоасоа бесзассасчуа ссавасессстаа 4620 савссусєссс увадсасадяса суассвадає сасссосесаве сосуадссесс адассавоса 4550 савссадтає соусвддоосЯя васанососага сеісовсособЯ двадассєда астасавауда 4749 чЕкОоссЧече акуасосядачда абсесссває бдасавостя щдасавоєоса ссуєсавадуа 4890 аадссассоуФгу асеасаєсь ссачвсеоссод осеауатсосЯ дасаюсУєсо дсдесесеве 14860 счсацубаєсв сьсасскссЕ бстаєсвааєс сскоссчаас ассаєоточе сотесдасуєс 4550 счдассссраа авдусессіса сдадсесавос счавоассстя ахссаасаача асассчачеа. А ЗВО чоасадссава бесавдадссс будссоавасі дсавадчостад сявазаєсаасо сечаччаста во срЕсаасоова спгдзаєсосї удаадзвачає чдесссгпоБос осБосастоса зЧсдсососа здо ччассцдсаєєс сяасзчачеваЯЄ Сесбасоадає счадтсосас ссссдваась ссаєдесаве 516О среЕсаседес сесСсавуєтсу ачбестае сосусосаєс бастсссвуд ссуссавсяо зага сптсасстсстоа ссдссдавзаз асчдссоваци ссосацедач чавсчочеасе астсевредца З280 чдаасовсадсс дауєсесасс огодессацес дагуссдаєс савсавсаса ссуассаєсва зай счЧЕсСзаєтчч басавсяісу досєзузасуд остосачодас госасосСасуа всосавадає заО00 саачЕсвсазе сусссссуса чодачаєдає себоасесчес сгподасстда ссабесеаЕе ЗзАбО ссосстстас чдасалосасс сабсассосаа ущчссчсавач ассоачстча сессасдасає 5а2О сЕрсвдсоадас сссвісссс Судсісасаас ссоссвчава басдассесса ссвсетоєе во сагсдазаас бссатссуса адссоссасеб дсЕсдассас сссосвадаса ссддадсесеєса ЗедОо сасусдеста адчесваусЕ астресудсва девогеестою звастассцев сочадсавясета вва ечЕсцдадасс воаЧессроса ссаебсосто савоасчасс ассссесосво ссбасудедча Зт5о сазадасссасс дадсосуєбсе здаазобуєс ог ссувасоодс сяедавачаєсь ассадсаєсає 5820 зассаасасс чдасдєсосоу сЕрадссдав сссаводєс басстададео Есасодааде ЗВО счассеЕстсс садеасчаєЄєту ассачазува сочачасобос асозачассє асчастосаай 54 чЧчедсаасаас зчоссаесятест ссачсссадууа стссаєсчавс садесдссяс спсачассвє впоо гаасавдодссєе студадавЯо сствстссса ссвоасіЗаве гасусодазо устресесеа воби чдсазчдассус адчеадсасса боєссосгешкЕ сСсасетсуцаєсс сасечессеу сседастсеве віла савзсасєсавс дасоаоссуача ачассассса дссгоссодра досвадчдаєсое асусесвдєе 5180 срсддасадос Босаєсатсу ададеЕссаду ссбовосудє досвасстус са ессгдаа бЕло чЧчасдсосствоу ааскссабсу ссазуєссва ддссасосса вастссусся ссбвуєссеса 6300 асцсктассує зсссдсаєсс пспасуссвс сассасчавс ссоаосусскає псавссатна збо згссазсває часті остаоу ссаєогасає савсаазаєсєс асбдаасавацчч воЗаєдаєсе 52 часстассач ассттєдаєсєс Гоздссассво чдаастссавсо абБочаосстес сяЯадасчасна ско чаасчдзнассо ассатсдусч стувусесс севососзає чЧачаазчаєоє зсассдасаїв 5 чассуачсьс акссосауатсс вастуєсава одаевевесча єсоваєсева сабосуєєтву ебОО часдбаєсдєтє саєссасдеє ддадоосавсе Едеєраавкає дБаБдесдаде єсЕсасоавЯю БЕБО стчаєчадчає атскогаграж босу еєє бессовауває ЕсСЕсватбасо сдсасааєсо 6т20 чегавссосс васачаєссУ чесчасовзава аваєдадваве еааєкусьсє даєреЕсуавоє 6578 стазаваза адчваєссадча: сстоагасаса екв соачас сстсовевтвся асвадестщо сво стсзадчасав саасавідест сссабсазсв Гудеачовавч аододдвасчЧвач аавчсаседе з сєсдЯарсасст ссагтдссас астадчеосаст удосачевеє сссасассво сваєсаесадд евао часачдачевтс адсасачоса ссдстссаос сссассвосуа бастасоста чеовЕссасоса 7ахо асачссассУ Есвасчосто сссрсоасса асаєбаазача дЧачачачаач аоаочачавзсад 79во ссасочЕчЧача адаачуавава чЧчсасасузчуд сесасоувеє удоватстає сстадаєсор 7140 савастачаус сватсазочеау ачддасессоад ссевессдуєє ддазачаєта суда ває ТЕО ассєтсевЕвбас бадуаанссоєсс авазазаваєс аудЕстовува ссаєстоядач водасуєсоє те сЕдбрадача сасеЕст ваду всассзавсї осатавазазвсо вбсадаеаава ЗЕсвстедаає т732а чаачаєтвас азссастваа астассстса асесдавоаодя ачсссвавас вагссаааавс 71в98о акакрсдчаваут газ сссвава бЕссассвва всосоїсвоа вассссваба дуєзазвасато таідо васосуссва чЕачсисаа секс сСтаєь сссусеЕсваава азааассавоо асанаасадаа 7590 тсазаязства садсстадуєсо свадусссаь сесводсваас авівадвісає дудссачуєе 7»з60 бадсозосасо стоссссьсс буадокссовоєс гсссудаврсс савзваєссвае авагбассдде т620 асузстоадес досчувсосіаза судчсоачава весаасоачавс аассоссеча аєбстасссе тево авастасоссс ассвасосає авсассасстда свахсосоасс ссассостоє чдоддсссасев тт асавдасдача сассавсос Есчдсадсяає савогдуассо ассєсссаче дадсозс9УаУ 70
Тачасєстода сьеєктассоса сссасаєтва асававочдаєс апоавасассє вБадсаставаг твей сессбсадаава аастссдлара сСсссавасовя дФрасачсксос суассустчса ачоачесава 7520 чЧчЕчаадвсача часазавиьс сачавастса ассовосзаує гсавасчсвав ааасассова 78вО чедесьессЯ стокарачан ачддачадчач сЧдоудачасцуд аачссстаєсс асассусада водо чазацуєдес гЕСсСЯатастсу сежевєсбесу сассстссте сасодссуве сдссассуєє 1650 сгагсєссдос досассяуєі адосаєосау стаааасава Садааасуча согчавдеве вібо ссавссстос дЕсЕсвсуба тадсосаст седаєсетуєу одообаддаостяа ядуєсаєсста вага чаасавоачив сотсстаєвЕ чдасадактсса Єсоасотаочаєс содвдесьсева садове да 528 счЕсСсЯдцавс БЧдечссЕгда сад са Сссдсоасаєс бдцечаааєя сеЕсточасс во часачеЕдЧчача саставадзає сазцачаєча гдсваєатса чадчадсвЕс чдаансЧчачаве ОО ссассдваєє адсетуєЄєсть сстаседара асстуссост все удсача сстудскаде вабо чеасчеесує стсаочасСада сбставссває чес свас єсЕтссаває ЕсСтставога 5 чЧаЕварасад дчдавсодсаєа содясстоЯе ЄЗвдаєтооса бдавседєдс Ецавнавовсюо ЗВО сЕгкодесЧа беадаєссссда сакьсвсаосу обоєсєсасеє вдасєтаврає соссаєвкає во асєттаавька стдсотсасста Гдаатачаєс СусЄваєсєсва дсасавубає с«дасадачва ато
Басочаєссьо сгадсаєсасас азекадссуєсча дствачавеє ассьсачаус зачсасадагв ве ваазасасс адасадаєо дусваставсо гдасааее севстаксаве сстгарачс 85820 сєссЯдвЕсста сатадсваєс Є ЕЕЧаєстоа асстадвадчає вадсодебаєє аеабасесегав В'яВО ааідЕсатрад аасеястатст давачоастає асбаєуєача едасксаєсс сутдаєсося ло гавссЯассвЕ ЧЕсСеЕтЧаєаа авсасабдає азааваанаєо ссЕаваздасзе авесєцчьсча ОО зассжЕвЧвес сакестатає ачестцатос асчусусаву ссадсвауває ссуусааеУе забо чЧЕдсадавсс сатстстбав стссавасоссс бсоваавосса уссаасчєсва авевссевва 120
ЕсЯЯБЕЕСтС Єдазудасуса дсацдсансса сдвоуссвавс сдаєстсЧес ч«ссесдБЧадаа зІ180 гЕдазддвача чдЕдадаєцає укваасваде ЕСЕЧачевкс Убссросєва чдудбєсаварею ЗрАй гсгдЕввсса соодесдеасає дстосасдоє дсвадсачдос дадоссдєсвас садсссусаца Зз00 сстетеадас сітссаддаає саасесосарть ссоочдезчаєса ачбсочассос сезвзосадеос зУєо тссакуссся дедассссуас даасочтава асосусатса ссудссстсс давачасуво заго часассанса абасучусава сддссасадсад дссвгуузаса ссодевіссяа баваддзваУде зава чдасасєстодуа всатсзвЕдч сгсдааєсває чЧесудеесес сдосусстава чудсассасве зВАЙ чаєсессодса адесуссас чдадчесасецче стсчасоаабоч чессособесда сУбстсасчат. зе0о
Ессдасвудса ссековссуд счасодссссу осссововавнус пссосддасоза ссусабуєсо звБей васссчстдЧс чдодававчодУ сардсачаса аавосудава есудсадасося Єстрсссуе 9720 асструєдсоЯа дчссчаачає часчавоуесу ассаєстаєсс десодвассчає дассвосаса зтва сачЧчсдаачс ссдссусуєк дсостечесаудс стсовасаєсо ссудсассовао чЧчастуассате зво чачесчвасса гадасоасасаа ссагасодав вачакзосуєс ачсоозссеста сассовасев зво ассцсодача сдчасусудаеа сдасувдедс восасосусе гдовачесоеу судсааччеве заво зосудсосачу гсагбсчасав уссччдедве осукестсдча садастссоо ЯдобочЕБдеу 10020 чеосеЕцевьЯ ЕБСоспцучЧово сдасуєсаєс весосоОвася содосаводаа сбСосасссдо тоб8О авссочсстса бестцасусе дсадчаааво сусоуссдаса бодавадсосвсат снласссуєчо 10150 сЕсоссодся дедавачасує ддсадчасева сдсобсседос собосаєдев чазадасуко ТО2Ою асадсассча аадасосчсас ческтсовабу вссдасовав яабсечаєсос сао Ядссасо 10760 чссавогсо содавзудааде дасеядедаєу вастчсЕекуя зачаассеося суссаачува 19390 зазедасодас версдусоде сдссавзсдде сссавуєсса абсодечсоча гсасдаєдавд 10380
ЧасоавучоУсЄ саствосСсув сеудгдцдсеве сегуасудев ааоддссеуц саведессеу 10440 чЧасдссусао боуосасоса бсесувісає сусаєсодоса бдадевюсоє сабсавоадае то500 сЕсчзсдЕсЯч азааососдЕ сасудсудає Забоосаєуа ассуссяс уадеввссса 10560 чадессаєчу асекдаєудо сучдоасеучас дсоовачаєсЯ вастстосча Еасдвадуєе 10650 сосдасдад сбссаудаєЕ стедессдає десвводсва сдевбдаєся седесаєтає 19650 сстасчавссес акссусціча дессесанеє аксачствоє ЧкасевЯЯае ссдаававса 19740
ЕсСсоасЄвЕре даєвтаєоєач дБ сбаству садесЕссає сеаслуєвдасе сетер 10800 асдсдаасаеє гсстовоаєодо аєсттсавна сссвадісся сода саааасдаава т19850 севобравекс чгааачеваЄ ЧдсеЕстагвнаса сЕвавссує сЕсСсСтосго Чадчавесааве 198820 чЧчЕдасстеса чЕгоаддесатда зассачьсте чЧувсаксвса ссстстудеЕсо сусавеесеЯ тТазво зчассобвсде Бдсттадосу адссаааноз саосесстава бавасбестос ссассвоває 11040 асчсачевае дгдавазсад авоезсці ува Басутачево еЧквавчаве чдечесссаво 11100 тазвасєстсву Єчаєсевтає ЄродаєсвсЕх вастгасдаза сабЕссасья ддадсадева 11160 чадссасасс саачеьєсста асьтасчаєва вд адсьстя Саасадаввна сассаєстад 1128О засадссаса тт азастає сачкчкє 112758 «А 5 «115 313 «125 ДНК «піз» Штучна посліцовність «Ох «ра» є нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 87417. «ваг» «21» щшівс Евасчте «ше» (1)..150) «рез» показана геномна ДНК, фланкуюча ліву границю Т-ДНЕ кре» «2» шівс Гевтциеє «ЕР (513.31) «ра» залишок лівої границі «ад 5 стаєсратса ваводанаає аванасуєсав авсаєствасч веасауєсаво єчустесаву бо тссдаддааав стасаєсддає сачезаєчау бассакєоіасс вавасудава ваазачаваєва 120 чраастаєся акеЕЕтеЕсЕс аагрксовазаа Басвачасуєс сдовчсуєса сбагбааавсо 180 занчбасавї єбБдасааває чдасаваєтає чЧассосоатсяе асєвасачес тавацчсватах ай засаварває соваассечу авазсоебссає ссеуасаєою стасасссас дросазасду зО0 чачсесстадчає чад зі «2100 в «вів З тЗ «2155 ДНЕ «1» Штучна послідовність єв «Ра» є нуклестидною послідовністю об'єкта МОМ вла. «г» сг212 щіво тедїцке «гей» С(1)..1110)
«раз» показана ргечномна ДНК, фланкуюча ліву гранище Т-ДИК «жов «221» шівс геасихе «ви» (111). (33) «Рез залишок лівої границі «Об»
ЕЕсастоаєс басатадатаєоа басссстасса ссводасваса часссаьсва авуєавесоаа бо
Есассраєвта авачуавває авазацуєва авасаеастватоа вакавчєсаву воадекесажва 170 тссодздаває стасаєочає саусазбдеу ассасодес вабсасодача аазачаваєча 180 чсваєтасса асо с засссаяваава Бобадаваес ссдсачсчєса сравсааваєа шо зазадсасаст гідасавзає пасязаєсає чЧчаєссуєесос абссєасадас чдазачеваса Зо нкасаваєсас ссетвагссзд аваєсссгсас СпедасугеєЄ ставасаєссвс дсссавасач зб чадсстадає чад. за «ря 7 «2115 йо «2155 ДНК «-213з Штучна послідовність «ваг» «бай» є нуклесотидною послідовністю об'єкта МОМ 87411 «Ой «Е21» шюівс Геабїйре «ваше (1)..(145) «геЗг показана Геномна ДНК, флювкуюна ліву траницю Т-ДНЕ «Ох «рРн1» тівс театуте ага» (1453... (408) «ви» валишок лівої гранині «Ох 7 сатаатавса Стексобассть чЧЕБЕаваєста бСавратесса ссаєстасає ч«вагоабаєвь ба таєдаєтада сваєадЯяаєсс асссавадчЕЯ аєаядаєратє Баєсавзазуд завагаавяча 12а
Чдасаавасаєс сазідазтадЗ ссааубодеє бесасабссодя Зазасстаса садЧассадеа 180 асчачдіанса соадЕсвасавє доавоаваавяч аваачасьває сассвасьеє свЕсСсваєос щїАй азазаєдЧЕад абдєседеад счксаєвага вавнсчавачеь азсаєссєсдає ваеавасцчасята зо асЕасчаєсс ЧдЕСЯтаєтса гадасозвзаяо совасааасаа всгастотава гесданавьос зво
ЕЕгаєтьсчча субсоаєоссаса ктовосісся васоудачусь Седаєдає 498 «вщОоз В «211» 117 «212» днк -2135 Штучна послідовність «ех
«рРиЗ» є нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 8411. «Во» «реї» шівє хгеатцке «ее (68)... (83) «ра» звалишок правої траниці «г2ох «йй15 щіяш гевтпге «ги» (843. (117) «2283» показваня теномна ДНК, фланкуюча праву границю Т-ДНКЕ «а0дОз В зсасєссвачь бсесзасєтає дасааачсва стьстдсзаса давзасасса сстачачедчу во сецдсатства астатсвоту сЕсядацаве сасвавсссо Бачасубавс васстас 117 «АД» З «115 173 «125 ДНК «піз» Штучна посліцовність «Ох «ра» є нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 87417. «ваг» «21» щшівс Евасчте «ве? (6835. ,83) «рез» задишож правої границі кре» «2» шівс Гевтциеє «те» (84)... 18) «раї» показана тпеномна ДНК, фланкуюча праву границю Т-ДНЕ «або» 8 асасссваче соссвастає чЗагрнавуєо состдуваса даввасясса Єстадачода бо седосдієсза астаєсаедсЯа севадацаає сасавасстс ЄаедаєЄчбаєє аабстаєсеє 120 адазсотвадЕє сасвтсвуєбЯ Єдсаєтаєтьк бсБактдавс вдацсаЕвсас БЕ 173 -2105 То «2115» 338 «г1у» ДНЕ 213» Штучна послідовність ве» «ве» є нуклесотидною послідовністю об'єкта МОМ 57411 «Его» «15 пмпівс Хвасите «гай г69)..ї83) «ваз залишок правої границі «ой» «иг1» півс Гваїтике «вай (Ва)... (338) «223» показана теномна ДНК, фланкуюча праву границю Т-ДНЕ
-4005 10 асасссаачс гсостаастаї дасавадея стстудгаваса чазаасаєса согадачсча ба ссядсяссраа астаєтсачюУ сСЕначадчаві сасаавессс тачасзаве ачбесасосе 120 адаастаеадес састоксову бусатастеє бобасесавс сбудеувосяс сетер сає 180 асесстжосоа гастоаєттав ссоассастос ссавасувоє гбазозувася аббусьсвдс пло чЧчеаЧасвнасуц адсачьссваа дукесссудад БдБокгдсва задвастсссосо гадвадсваєва зоо сссочЕдЧазу деаауєоаєся бсвдаєсссакє Еаспреає ззВ «105 11 «2115 ББЗ3 «12» ДНК «213» ріаргобіса уїкуітвра чзігчітгетса «во «реї» щівс беассцке кит (1)..560) «ййЗ» БЕ ру шпїтТо, ОВЕ ру 5пІТО, кодуючого путитативну комплексну субодиницю ЕБОСВЕТ-ІІЇЇ від ріавБгобісв тієцЧітека «ПО» 11 агдадевЕКЕ гГрддаанаєс сЕтсдодада вававосава едасадсссе ЕадкесстдаУ во чаччасєтаєтьс авазасссає ачачаскава дЧаварассва гаавававсв задав ра ї2го чаавазаача баддавуваєт бассасодчкра дсавачаава асдедесова заасазаацча 180 чЕБвасастсс авауссстсав айзочвацчава счаскадазва асбасссовась асвавевав Аа чааассетта саастаєстаеа аагчесвадачу цеавуєсостсяа аадчачестацд сасаватваєє вопо чЧчевдвавьзха актстаєдаз азасассуса даєссссста вазавуєтьса саадавчесву зво загадабачаєцч агдсЕсасча гагсасоачає сасатачося адсвасаєча сатадссааю 420 чЧазассасаз асустаєсад сааєсстубс одабсосасосу асдасссода буасдаєааа 480
Гсадаавначу азссачавча сспесдавсяа чаводавсода васвачассв дсоссаватка зай ссачасссва сусваєктаєс чадсЕдсасеє деЕцдаєосац всасстаєсаа зссааввсяава ой ссадсачсса азадачесаа ачасчаєуас чабатсаазва вассоудавос ссочачессс9 ве тай б «РО» чи «115 2758 «1» днк «йк13з Штучна послідовність «ио» «кра» є нуклеотидною послідовністю, що явпяє пробою антисмисловий ланцюг касети експресії інвертовансого повтору РНЕ «ех
«ри вВ'СТВ. «дже? (1)... (633) «ра» З' СІВ аптисмислового ланцюга Ре.БровБ2-Ка «вед? «2215 щівс тевцте «р» (6683), . 905) «лоз» плече інвертованогро повтору Ом БІ ТО «ДООх «и2г1» шівс тевсиге «где» (9803)..і1052) «ра83» петля інвертованогто повтору «и «221?» тівс беаїиге «рег» (10533),..11292) «пра» плече інвертованого повтору Оу 5пЕто «годе ч«Ктів ТІнтрок я» СІ1528)..2155) «прах їднтрон азнтисмислового ланцюга Со Бпак «Ох чий1» шпівс Гевсите «228» (21383)..(2141) «раз» лідер антисмислового ланцюга бами з58 «ев чі» промотор «рез (21423,.12753) «аа» покавана зворотно комплементарна послідовність посиленого промотору Саму з585 «Що» 19 чЧеЕЕдсЕсваєс застдуєвад ссабсаанаву саєсавнавна баєсстсаса стсавестсася БО заєссардднуч сагааєтаєа арабазавче аавозЕсада вістдасава дасестаддав 120 загбасаваа адчавачево абавасуєоє вазвзасасава асдасасаєє сатавссадь 180 васаєтвоєса дексЕЕста чисттвават асвастсьосса сстіачсчвдає аассакаячсу гла чЧчеЕасааєтає азс всва стьссссасає бавссссуус састасадчоус сасчаєесда зо сасасссЕба сісававаєсєвна вабассраза їаЕскоїрав васесадає Ссзасасаєса зе асазаєзача чдвавзазнасаа абаасаксва СсссСасвасуа аасаавачча ссабаєсаюс 20 сассразесст сепесассоса сЕБссасттс асачсосчЧає здсччазвасс дзаасазачаа 480 сасачснавс басваусаса возвзавсоддва савовававнс ачессссссв асусєсавави За асісвавстс адеводасес бадедвувас дсавзвоваво сдаєвуєвеко васеєуаєда ОО зсукрдрсча азссяасддає зоудаводава десвудосто воусчачсасо усвдбсуаво во таакссаєча бассясцавнс аксаєссаса ЕсСсаваєссотї БасодадевсЕ севБавчодаса Та
Есрасадсає сЕжЕрсагада ажвствасаса чсадтавстя содстачессос сесадчадесх тво їесстстаса ссрсвабаче сгЧусаадовс ссеавасстаєєт усачесвадУє соте сссавь вай едФЕЄрсвксСв ЕСЕ дЧаоуде Єтодвдадсдса еслесесває сеЕсСссудаєсде асвєюрєсеюьь зда чедегсстрас аддсдоассяс чдбаддасчазчя адетаасосса ссосаєдача чсазеЕчаєсст з60 зч«Баласосєс чЕсзчачачно асдасеяєва аєзчсксотеза счасатуцєоч сачававрає 1020 сабаасяааач сдєкзасусу агечеваутас спосавачвна вазвчсуєоу азазасаана 1080 чависосаєє ссвадеосссс аяазачаазаа аасодаєссоача вайдасссва ссасазарає 1140 асддаассосе басааєсаєс даазаєцеада ддсвадсссс сузаачадев вадсасвавва ї2950 стдсбуєаєт адаєссваєуа взаааасєдсву саувассоссяос бавдазадчес сабвадааєь ї26а тїазаєсчсача бдасцессас чдабассаєод асчовравєсує асачесасо сочачеачаса ізо сцачдсссас чдсткочсакс сасатсаєва сСчдаваєзчасо азваазаєсаба суаусаавсас 1380
Гачссаяасас сСадацадазо чсассоачса вачвасвсагає дсваатачава чевагсасач 1470 чсесевзасгодчї ачаєзстада баєсассвод васівазодвч адсвасавав взудавасьес 15 рраєетссза агссгасрас яасаваснау саваєсваєа саєбсаванса сочцеЕсаФчсає 15560 сабсвовсс адасвасаас ассбававаса авуБосвсосЯа асссосдасво авучесасаїв 1620 тазачувзоса дадчасаваса ссоаавасстс деЕсасжсаста сБасєосеєв саудсуєсав 1е80 саавєстваса дсасасасаєс аааваасачав Єасдавсаєсо аг Егоде апасааєсвад п74о сістдсадас чаасазаєта стасачкаєс дестаєааса гцавасоссса Бастаєсєдас 18090 ссасасаутв бодвацестеат доставаєста вовосазааоє сесазассса ачсчдесеває 1850 заСассваса каса сьваава сСавасасссс таадчевссава вссасасаєс секс сарьа 15820 срасадтадяє єстаєсстод сттовдваєта севнеаєсост асасстсуєє дстасаазоау 1589 зододсазудбра агсадеасау цсадчаасасу асеєтсвувнчє дсваєсьстач абесадчетаг грай зссастрстса човаєсаоса озовачачеу сасвЕсазчазса аасчсовдсад Євасавадає 21950 ачадудсача чсузусосЯє ассуаачасо дсссадодсу бессстесаа акдазасова 2160 сЕсСсстраса бСачадавача оссессусува сачвасастудча аксдубвоєсЯвс ассесвбася й гсазсдачача Бассасаєса акосассвще сЕцЧавоаєву БодЕсодавас дев 2980
Ессавцаєас сестоеудбада бодзадокеоса БевЕссоцЧчає састуєсЗос адаосаеє зла тсазсдасча сстстествв агсдсваєова суссасссоє задчедесаєс сеесЕскреє гадо астасстоса свасаваусо асадасвусс дбодссавсядчЧа асссовучвя чУсесссудає 2450 аєсассеєеЕє дЕєЄднанацчі стовассяцча сеассасаєс вабссвоєста ссєЕсазадає 252 чЕчЧЯавсЧудаа сус есєе євссасдаєд'отостовуєая чдсочаЗавес абєсерсоддца г58О ссасбуєсяч сададдсаєс Бкосваєчаєа ассвексоте Баксоусвнато агччсансева -БО тачзчадссає стлестевес сассасвсокс асаасвавує сасачатачо вачдасаавца 2700 вагссувадча заБстссоча басбасесо гдассдававу сстсваєссод асе їв
«г10з 13 «115 о «щі» РАК «13» Штучна послідовність «ВО» «га» показана рибонуклесотилна послідовністр, що являє собою
ЕНЕ рх по «ОО» 13 чезавзузава азусупсдаа ааацавзадца сипооасмос аадесовсяа заздзацчана бо зздазпчудава адасссвасо асавацадчац) дчдавассосяцча савсцайича авидсададчу 120 чаавадсссисо ааддадспас сасавечаси дсидивипад виспомпаччаа аазилодсиеса 180 чЧацасесоца адаавдсиса чаачааваччсч вашоцадацч апоочпосаєча пацеваивдеви р) «105 14 «115 3719 «рі ЦК «піз» Штучна послідовність «де «223» показана нуклеотидна послідовність, що являє смисловий ланцюг касети екопресії ДНК, яка включає в себе рекомбінантний тен, сконструйований для кодування і експресії білка стувнво кре «шві» промотер кре» (1)..(359) «гг» промсотор Соїтп РІТЄ «ЕрОх «221» мівс Бевсите «вн2в (955), .( 1016) кг2Зо лідер смислового лаинцюта 1певі пшениці свя» «йеїх ТІТнтрон «ати (МОЗ 3)..(1515) «шва» Щднтрон смислового ланцюга Асі рису «вт «її» сор «вогр» (1592). (3483) с2а8» ОВБЕ смислового ланцюта стузв» ер» «гаїв» в'сте «рр» (З5О0З3)1.. (37123 «рез» З'СТЕ смислового ланцюта Нері7 пшениці «00» 14 асаватсаса чдуссасдавсе сстаєтсаво ссподаєссоа бссовасасає встгассяада бо астсзаязЕса сотостсуає ачссасссосу дасссвдбяаєс асчадебасує ассчаєсаса ї2го гсавастакратє час Естьсакє сачає тане асЕЗасссау басоогачеда сасвЕсевасе 180 задсассоєовд стасуусєтяає асссчакачсо дЧабассвуса ссачеаєсатя дсвебассас 24 сачдабачецча чачсуаєсьї бабСассасса дастаєвзаєс аадчаєсьсс вабєсастаєь З00 сзчЧассстач чдесстадааєк аадЕаазаст стаєевстає азчадссусачс асассесдуєса збо тарассзаєчя аддссвасадча аваскегасаг вссагосуса асосавааєеу дасаєдавное га стасесабає асавтусває даєсєстсгассес саоЗЕсЕЧаде сассядеєсбад сачадоасосяь 4во чзасЕссуосЯа чівасчдавсву стсвасорца ЄсаксасаєЄс чсЕадауавас абаванзваєс 40 акудссастсє єчазауЧчаде дессасадчав атавтауота ссосчсчачдач ссуєсссояе 560 адаасасваа абавадусуау сасосасасу саєсачессс дасаввавва Свабадсуєсс бо здстчатсодда аасваєссса чставдсасва абадатавєссоє дсаєсдаєсє чЕсСсасасаа т2га саєадстасесс сдЕгдачеда СЕЕЕЧдасаня вес єсаас геЕдстссЯве ссватаєстс 580 чавочасстс слсаєдасча саЧеЕеоског серотатсвс васоасавсса удсаавсоеве о завдсасаса сдсчссзсесУ асрасссаву сасусоцчсеса ваддсасуавадч сасстьосссте за савасоцксс аксаустава ававесвіодє сяавосвесоє ЧЕдчазачос ссудааасса зво
ЕСЕсссасас асссвадцеса сассасьода давзоасасву дддасавасасв ссабаачаво 1578 сааччдадчс стосодссуєсс чдесучдсваасе асоссщесос вевсстсЕво сЕсЕсЕссЯє 1ово тс вЕсСВЕсСЄ дссссуЯдвоВ сдассоквод себтадеваус сводчасчдус чадачесее 11455 їссасосава сосадчаєсзод гасоаосодово очесеадзасс ссосчаствда счдессссоасс 1500 часаБзчаєсо содоссадчає стсцсачада асвечаенсе счасусача сстаясчасосс 1260 чеєчссеассоа чЧадавазгча єдудчаа зававсссссЯя ососчуссавза сваачаєссяда 1320 зачачЧудаза авуадддсаєса гадсерасас ссссаєвсаєс состсоастуєє бБочесачаєє ІзВОо тадасасоаст адашсеьєтеє сЕссссьттє єуєодосаса абссваєсс сссадсаєса ТА
ЕЕсассодудра дчЕєЕвсетвє ссосардасстд Єдасааавас восекодсає ададосеье 150 тасадачбачяа адбдаєсяас с ау дос вас зо аво вас сдо бос дач саб 1551
Месб АТа Авп о Рго Азп Ав Ага бек біц Нів 1 З 19 час ас абсо азу дес асс ссс авао бес Чад ссс пад'асо вас сао вас 1555
Авр тп тів Був Уаії Тк Рко Ап Бек сій Гезч сіп Ле Двап о Нібв дай сачЧ гдо сс ба се дає азс ссо авває се асс ска даз ад ста вас 1547 сіп тТук Бо Гц А1їа Авро Ап о Бсо АЗпоЗеї ТЕ Пе б1м сій Те Ав зо З що
Бас вдач чад во сбу сяє або асс чву ас ос тоо асая да ЯЕс осте 16895
ТтТук Був сіш Ре пев Асу Ме Тр сі о Аво бек бет Тйж січ Уаії Бей їз БО 55 чає вас бесо асо бе вач час дос дес ода авос ядо абс бос ассе яв 1743 дар о Авп бек тп Маї Ггпув АвроАїа Чаї зіу Так су діє Бек Чаї Уаї 5О 65 79 ччч сач асс са дадс дос сс ос де сос тос дса ЯЯо зсо сте асс 1781 сіу стп Тіе пе біу Уаї МХаі біу уУаї Рко Рне Аїа біуУу Аїа Гемш Тр 75 во 55 90 с КБЕС ас сад ес кс сту вас асс або год осо оо зас дес пас 1839
Зекс Ре Ту сіп беїг Рпе о Гец йо ТК о чІ1е Трр о Рго вег Авр о Ата Авр 100 ї05 бос Буд зад дос сс аг дос сва діс дав дос соя всс дасовад вад ї1887
Бко Тр Був Аїа Ре Меб Аїа бів Маї бій Маї пей Ті Авр Ппув Гуд 110 115 1259 атс дач чад тас дусс вад все аву дос стя дес дау стя сва час ста 1335
Ііе сіц стш Тухк Аза Був дек Був АтТа лем АТа сі) пемзм Сіп Сіу Гей 125 1230 135 сав аас вас Ес дач дас тає дос авасодсса стя вас бос Сад ана ану 19583 ій АбвпоАвп Бе зі) Авр Тут Ууаї Ав Аза Пец Аза бек Трр опув ГТ ув 1459 145 ІЗО зася соб сад бе су сує себ заз бос сес сад аб сус все сує чад 2п31
ТпІ Рго теп овехк рей лкЕд бес Був Ах бегс обій Ав о Ату Те дк сти 155 160 155 179 су бе сссо сад дес дач бос сас со садс аас ес ас сед ес Бе 2079 тем Рпе дет б1п АТа 51 Бек нів о РОПе Аго дяп обег Меб Рго Бек рРНЦе 175 180 185 чЧес Ес сс вад вс дач дос сту вс сеЕФ сос всос бає дос сад дес ій
Аіа Уаї вет ГПує Рпе сіш Уаї рей Ріе Пейп Ро Тс Тук АТїа сів» Аа ї130 195 20 сс вас асо сво сс са СЯ обо аву сас дес сає сс бос Чос чад 2175.
А1а деп Тахо Нія ем Гец те) ге був Ар АтТа іп о Маї Ре сбіУу 1 205 21о 2-15 чаа сСчч час бас Ссс ге дну дав дес со чдач ЕС гас св сс сад ше сеї Тер озіУу Тук бек Бек Бій дер о Уаї А1іа січ Рбе Тук Аж АкЯ сій
РО 225 Зо ста ва сту асо сна сач сво асо дає сво бос дос авс бод бас вас вех
Івч пу Пец Тк бій Сіп Тук ТЕХ Ар о Нів Сув Уаї Авп о Тгр о тую Ав 2385 2ЩО 2АБ 25 чес зас сту вас ус: ста вчу дає бос асо бас Час са бо ЯдЕс аву -315
Уаї бІу Печ Авп обіу Гей Ару біу Бест Тк ТтТук Авр о Аза Тгр Уві Гуд 255 259 Бо ее аає сас Ес сус ад чазч абз асс о зоє усе оку Час око ажо Зб7
Епе Азп Аке Ебе Ак Ак бій Меб тВс о Т-шй Жвж Маї Гей Авр Тем Тіє 270 У ВО
ЧеЕс са сс сс Се рас дає абс сує ско Бас се авЯ дае вес вад 215 уаії пез Рпе ЕРго ЕнНе Тук Ар 115 Аг пе Тук бБет Був с1у Ууах гпуя 285 2 ВО 295 асс дач сбя асо счо дає ага сс ас ас бсс ав со сеБЯ ст асх 463
Тахо біл о Тецй тах Агбуд АЗО» Т1іе Рбе ТЕ АвВо Рго тІле РНе їецчц тей Тех кед) з05 Зо асє стє савучу зач бас даб ссс асо сс ста бос абс дач вас сс асе -ВА1
Так без бій Гув Тух 01у Рго ТБх Ре о пей бек ї1еє б5Ім йвл Беж Ще 18 зва Зо зо счє вач ссос саєс сб сс дас Бас сс сао здс абс дач сс сас ас 2588
Аква був Ро нів Пен Ріє Авр Тут пец Бі сГу ІТе біз Ре Нія Тіт зало З45 сс ста вач сса уає бас сс Час авзд Час пес соб авбо бас бузч бос БО
Ага Ппез оАгЯ РО 1у Ту Епе СТУ МБув АБО бек Ре Ап Тук тТгр век 350 зо збо час вас гас діє чЧау асс оаду ссс бос абс дос Сбсо сбсдЯд вед савеФг або 2555 сіУ Авп оту Маї Зі Тпе оАку ро бех її біу беж осЕ Пув ТПЕ Щ1Єє 865 зо зт вес бес сов Ес бас дас дас аву ос вос двеЯ ссс ядеє сау аа ста гтаз
Тис обех Рто Ре Туг біу Авр Був бек ТБ бі Рго Уві біп Пувє Гец
ІЗ) 385 Зо їсс бе час ддо сад вас дію бас сс асс ас дес вас асо дає че гивІ1
Бек Бе Авросіу зіп ув уУщ1 Тух Ат Тс І1е Аїа Ав ТЕ Адр таї за5 400 95 410 чеЯ чої бач сезч зас Час аа Яес бас ста чує чо абЯ аз дос час -лза
Аза Атїа Тер Рго Ав біу цуаз Уві Тук пе) Б1Уу Уаї тв о Гув Уаії дяр 415 мВ) 425
ЕЕ бос сад бас дає дас сад зад оаасо да аос тес асс сад асс тас 2гна7
Ре дек іп Тук Авр ляр вії МПув Ап з1й тв бек ти Бі ТЕ Отух 430 455 440 час сс вад сяє аас ває дає сас дос бос дос сад Час сбсс абс дас 255
Авр о бВет ГПув Аг двт о Авп бію нів уві бек Аїа бів Авр Бех Ііїе Авр 445 450 455 сад ста обсе ос чЧаЗз асо ас Час дач ссс сту даєт аву дособасо тес ех -іп ГПем ЕЖОо Рго 51 Тк Те дво ЗіБ Ро без Бій пув Аїа Тук Бег
Бест) 465 470 сає сау соя аас бас ся ду де Ес су абЯ саа дає сдсе ваЯ че 2351 нів біп Ббец да Тут Атїа бій був Рпєє ей Мебє бій Ар Ат дра щу 475 180 85 490 асе або сбсс бо со асо буд асо бас суб сСсо до дає со сс вас зоз3а
Таж ІТїе Рго Рпе Рпе Тс Тер о Тйх Нів Ак бек Уві Авр Рпе Ріреє Ав 495 БОЮ ОБ асс асо час дес зад 'ава ас асо ссву собу сос а Ус аву дос бас зЗ087
ТЕ ІтТе Авр о Аїа бій Пув Т1є Тпх іп пед Бго Уві Маї Був Аа Тук зТО з15 ЗЕО чес сс ес се дує дес тост абс абс чад де пса аоо со взсо Я 3135
Аїа Без бег Вет сіу Аїа Бет Іїе Іі сій сіу Рго щу РПе ТК у 28 ЗО зав час аво сс сабаЯа бсе ся азу даЗ Сес ссз вас се асе чес зад вс зі183 сіу да Тем Гей Ріє Гей ув 510 Бек Зеї Авп Беї Ті АТа пу Рпе з4о зав зе зач дес асо ста айс бос дос дес бу са сва со бас вус дес сос зе
Тув Маї Тк Те Авпобек А1їа йТа Гей їй сій АКо Тух Ах Уа дк зв 263 570 ас сує бас дсо Ессе авсс асу вас свое сас ска сЕсС ЯдБе сяд аванс со Зала
Іле Ага Тук Аїя Бек Тае о тТвкоАвап рем Ага Мей Ре Ма) 51п Ап Зех 875 ово 9295 зас вас час сс сб дос абс Бас абс зас аву асс асу вас о ава здає зЗа97
Авп о Аяп дер Рі Ген Уві І1е Тух Тїе Ав Бує ТОЖ Мес дяп Гу о Авр 5ЗО оо 600 чат дає ста асс бас са асс гос дас сьо ос асо ас вас бсб аво 2795.
Авр о Авр Гей ТІ Тут біп Тпг Ре Ар цен АТа ТЕ ТЕ Авоп век о Ав 6О5 вто ві5 ака дус сс сс дус дас зад наб чдаа сб абс ас дує вс два бос заз
Ме СТУ Ре вег з1у Ар Був Два сід цей ї116е Ії бі Аза бі бег ве в25 65ЗО
Екс дес бос вас даз вад абс гас абс пас аву асс дач сс атс сов зАті
Рпе Ма1і бек Авп о с1їч МПув І1е Тут Іїе Аяр пув Ііе біш Ррбе Тіе Ркго ез5 во вії со с сач стад да тачдааєтеє чатЕдаваесе Едсабосуєє содасавата 3523 уаї 5іп опе сесавтсацу сбучачосав срок чЧає доутуєзсуа чосесечоса Усесвасчад зав асассесває акроасусЕсс стрсессаеі Яассхтеосяата стграгосває судставсса зеваз ссвасачасєє соддесдЧатуаа баавсцвацдаа абянассавє стсасеьскда дсдсававав з7то3 зачадаваєсе зт «810» 15 «1» 653 «2122 Білок, р1їЗ» Штучна послідовність кре» «223» Синтетична конструкція «доз 15
Ме АТа Ави Ріо Ап оАвда Ага беж стій Нія Авр ТП ї1е пув Уаї ТНК 1 5 10 15
Ркго Авопобек обіч Пен б51п Тпх Аво Нів Авпосбіп о Тук Рко тей Ата Авр 2О о Зо
Авип бко Ава сек тис обецй СІЯ ІТ Бей АБа Тук Пув сім Ре цем доф
Щ5
Мет ТЕ ЗІ АБрозехкх пек Тс с Уа1ї пей др Авп осей тт Уа1ї ГУБ 5О 55 БО
Авр о АТа Уаї с1у Тис обіУу Ії Беї Уаї Уві сіу іп їТ1е Бей біу Уаї вх КЗ, же во
Маї пу тязі Бго Рйе Атїа біу Аїа Тем ТЬс бЗес Ріе Тус бІтп Зек Рре 85 зо 5 їв Авп Тк Тіє Тер Ро бек АБО АТа Авр о рко ТЕр був Аїа Роє Мес 169 105 110
Аіа бів уаї 61 Ха! Гей ІТ1є Авр Був був Іїе Сіп 61 Тур АтТа Був 115 19 125
Зет їцув Атїа тей Аїа 5ЗїЇМ Пей 51 Б51у еп вів Ап Ав БПпПе сли Авр
НЕТ) 135 1450
Тук Маї два о Аїа Гей Авп бек Тер о Пув Був ЧЕ Бко бецп бек пен о Аку 145 150 І55 169
Бех Був Акта бек біп Авр Ак ТІТе Акад зін Пец Рле Заг о Біп Ада вій 155 179 175 рек Нів РПе Ага два бек Меї Ро Бех Ре Аїа Маї Бек Був РПе сі 180 185 150 чаї без Ре Тец Рго Тис Тук Аіа іп Атїа діа Авип те нія пейп пей 195 2гпа 205
Те» тей пмув Авр Ата сїп Уа1ї Ве сб1іу біш сій Тр обіу Тук Зевс дек
То 215 го сіло Авр. Уаї Атїа си Ре Тут Ага Ага сів пей ув цем ТВЕ іп бід 225 дви 255 240
Туг ТЕ дер Нів Су Уаї Авп Тгр Тук Авй уві 01у тей Ав с1у їец 245 25 во
Ак с1у Бек ТВк Тук Авр о Аза ТЕр Ууаї Туя Ре доза о Ага РНе Агу Аг 2560 2 та сія Меє Таг Тем Тпт Узі цец Ар Пец ТІ18е Уві тей Ре Рко Рібе Туг 275 2е8О0 285
Авр о тіе Ака Геч Туг дек Пув сІу Уаі Пув Тс сі Печ ТвЕ Ага Авр 250 295 зЗ00
І1е Рпе тп Авр Его І1їе Рпе рей беш Таг ТЕ Те б51п Ппув Тук у зО5 з10 зЗіз хо
Рго Тс Рпе Гей дес т1їе січ Ав бек тів АгЯд ув Рхо Нівз Ппей РДде 325 330 з35
Авр оТук Геш бів С1у Ііє біш ББе Нія Тс АхЯ Тв Ага Рго біу Туг 4 345 зЗ5О0
Рис сту Був Авр Бек Ррпе Авп отут Тер бек біу Авп тус Уві сота тп зво збу 255
Ак Рко дет ІТ1іе 5іу дер бек Пув ТБ ч11є ТЕ дек Рко Рпе Тук Ш1У зо з75 Зв
Авр о їув бек ТИг бій ро уві бів гпув ей век пе Ар осзту сп о Пув з85 90 295 оо уаі Тук Ака ТБк Ті АТа Аєп Тс Авр уаї Атїа Аїа Ттр Его Авпосіу 405 410 115
Був Уаі Туг Ге біу "аї Тйпк Був Уаї Ар Епе бек біп Тугк Авро Авр 429 ща 430 зій пув Авй бі ТЕ бек ТЕ Сів Тр тує Авр Бек був Ако Ав Ав
АВ 44 445 5-1у нів Ууаї бес дів 5і1п Ар Бех ті АБрю бСіп Пе Бго Бго бій ТЕ а45О ав 460
Тих о Авзросім Вго Тїєц сї4 Бус Ата Тук Зет Нів сіп Темп Авп Тукє А1а 155 470 Ал 4850 спі Сув Ре Пен Меб піп дар о Ага Ага с1у ТвЕ л1іе Рго Рре РрБе ТП 195 150 495
ТЕР ТЕ Нів Аг Бех уаї Авр Рів Рре Авй ТЕБЕ ІТе Авр лів Ту гув зо 505 Іо
Ії тк сій Гей РБРро уаї Ууаї Був АТа Тух Ата по беж Беж ТУ Аа 515 52О 5ах
Зег Ііїіе те іч 5іу Рхо Б1у Рпе Тр б1у 51іу Авпотеч Тец Ріре Тец
Зо з оо пув сіл дес цек Авп дет І1е Аїа пу Рпе пув Уаї Тк реу Авп бегс 5а5 5 59 60
Аї1а Атїа тес гей з1п Акад Тух дку Уаї АКу тт1е АКко тТук Аїа бек ТК
Зб То 578
ТЕ Авп Гейп Аг Пез оре Уві біп Авт Бе Авп Ав Авр о Ре тей Уаї зай 585 530
Те тує тіє Ава Гув Тих Меж Явт Був Аво АвродДвроїви Лвг Ту сіп
БО во5
ТЕ Ре Авр Пец Аза ТЕ ТП Авап беж Авп Мет соту Ропе бек 01Уу Авр
БІО 615 с20
Був Авв осі Гей ТІ1е Ії с-1у АТа бін дек Рпе уаї бек Авп СІ пуз --5 530 б са т11е тує т112е Авр рув чІ1є бій Рпе тТї1е Рко Маї Зіш Ппей
АБ 65 «8105 6 «2115 4370 «12 ДНЕ «їз» Штучна послідовність «и» «без» показана нуклеотидна послідовність, що являє смисловий ланцюг касети експресії ДНК, яка включає в себе рекомбінантний тен, сконструйований для кодування і експресії білка 5- енолпірувілшикімат--фосфат-синтави ЕРБЕБ) «005 16 дасазесзаса бос есссатї сазсвсадцау совеачачеача дасааааче дссадсасуцєе бо сасссссоасс чдрсасассач ссассочеса чососссеове асувсеоваєса ссачауасав 120 чессрацсас адесассуєсєт ссассоссво свссоасасєта ссетачссбес доссвасадо 180 сассатсває дескссвссс сдрсвасава ауачададва едавЗадаво ваБадссаву гай
Бадавачадодач чаакачсаса гЧдчодасссас одсссодева стаєте вдЯ чЧеЕсСоссяаавеу в. ЗО тадассзаєтав аоддчоацдазуда севачссаєс сусевудава чдассасьдас дачею збо
ЕсСвастадва срогсввнааа аязасацсс уаднассаєсс сусадчаочає уссдсеваво 42 заадаєдесс стадцдасаєс авастосава ачвасаєстоа ааавассссо сседавувада 480
ЕсЕаєазсса стааавевас сесжесвасссу аачодчадсьс вавасваєса ваарсвеуєе ай сядаасєдаде вЕсаарвтса сЕгбавосос Бсдаваєсс Свабуосаваа асаєсвасся ой чесачдєсачс асудєвсвкЕ єтаєсестет СазазачаЧс бавсосасава сачавзксяава ебО асгавасачис асадсссавча ссосасссдадч савасвнасаєч ассвасачасс вадсседеса, то ссасєсовсовс сотоссочсЕ бесосіокру ааєтсСсваайа бссваавааса сеудсасває 780 гчддссозссуа содацесдоаде чдадааваєдас сдчавсоввссс стсочавскес вессссавчста во сцессассва сссасасусо астдасаатс седесссасс ствер дасс саєсстсаснад зва сававседсса всодстсоса довасовуєУ дасссовосос севусчацеч чсодатадає Зб сЕдаастовЕ восовосово асгянавсаава ассЗсаєдаа басєсевадсас Євавнасесто 15820 здаааваєье суабасссов зассадчьіаса чЕссаєдавс всЕддадаяа освачоасуцча їпва чЧчеччаднуса авастузуаа вастьвавссда сусучісава суовавнасо ссодадасуєсс 1140 тссесдеогсва садавзадоаду ачдчачсудсча чдасодазассо стассасасс усачачааад 12950 чеасесссЯас асрсдсстсь сбосусоссс бесстсочесу ссадстсчусесоа седсасе 1250 седесуєсає судстаосса Єссадоабава асевасаваа асузасестєда бодсеєкссарфе 1320 сетсесЯьЕс гсотачрачо дсдетссдає стотадЧєсЯа акостоасбчєча состададса 1380
БадеЕссасс саресчавацч аєстояссЯавь счасескучас Ессе чсечаваесс 1440 ччаассЕЧечє сЕвЧЧатсває Чдусаустесоє счувсточеся ааавуєтева сасстадсад 1500 їадвдасаста азаассоачача аасодвсдова бассачеадовд чесссочава чсодаєссеовеє 1560 чаавссвобев дістсесстас ЕцаваанскУу Ексевісвсво сгацаєсстеау ач важва 18520
Ед ОдЯа асачаєстав бсааєосєсьу ЕСЕЧЬЕСЕЕ саваєссЕєсЕ асстадатса їева таїадчтааєся чдсасдсадає стддЕбадає Бдссаєчаєс счсосвдчавна бдоссссв ва їтао чЧчеЕтдатадає стечасатве басєдесувЕ сасстівцаєь Боєвсессся сеЕсбабасьта ї5О0й вира сСсост састатовакє ачасстосва сосвуссаса Сесасочасо давав 1860 асстагадба сдкасаєтао гоасвсадстаз дчазесгассос азвадсвачса садававаяа 15320 багссадаса частудуєав сраєтедаву чЕстсводса ссаєдеєввка бач дюєсУ 1980 тЕСсСтоЯсЯсад тавссоктса васссувьсто вачасачасу стассатаєє сскявачусе 2540 аєггадавасяс Басстуавад дегсаувассас дбосажєсодеЕ Єсасстдвва обсостуєьс 200 дсесЕсСЯЬсСтє давазаєсст дедатсаайзав вавососсва дасадлааєсє «сеЕдазнаєст 2150
БЯдЕЕсБассо Басосадсся часссасусс дсаваєраде ачачнессоася аєуадсесаса вай чаасссаєвесс сттасесоса абБсесссдав агссауєютва сусаавсско ссттавсдає ВО вЕСтстава асусвчсвас асссасуатче срассесзаво бедесевсЯс чаддаєвава го чавчацчача акцасаєтан стдассстда девжесдссстї сстгвацесосв субСеввесає 2400
Есссасядед сдсанчдевсс асдЧдЕдсаяу сачсевсдудсесос дсвассуссо дсаааєсеоюе гав тчддссЕсвос ддадссятссо дсаєссосця сдасвачеься асотессасо дасесверсах вий чЧессадсоуче сссосовусу чеуаавзсусо сасбсасочос собссодавуа дсудауачаєсує 2580 сагсзабася щдосавудеса гусадччсєчає саддесадсоесує ассссбавауя вададсчасає БО сзкддассаєс чаєчоєзься дсавісуєсчу сесЕвсідуєч ссрвдаваєус сдевсчасье 2790 счдсвасдсс дессасчддусє дессассвБдаос чаєоЧаєсьс дссчачавес ведчатессда 27 саддсассоксс ассоусЧасЯ себечустсас вавосусосучу асудчссова сассддавссо 2820 стоасусуза авБуоддчеасуас адудсдаваєс давав асдас дассссссо ссаєтасосе 26850 чедсдодоесво задасусода сдосуватсас стассосУуєд ссуасдассює ссдсасауде 2540 чуаадессуєс дЕдстдеєсЯ ссадсовоОаа сасовсоздас вссасцасца ссаєодадес зпо0 чаєтсатчаєса сусчассаєа сеадчайвначає чдосусачуєє вБЕБсчсусся всоббассУє зува счачасодає чсдЧаасаддся Едсдсассав сечсссоачаа дссаєсдаса адстсасосчу зі ссазадссацс часчхоссча дсдасседос стстласчасс стсссостаЯ сдсацесеь зів чЧаЕсЯДЕЕсСсо дадсЕссдаєсєд бсассаксостя саасяаєдевЯ ассаасссся єссасасесаа зга сосЕсассстра асчдсгдсача азасчдадесдс счасаєсдва чдссассавсо сусцесЕ Бас ззои счасаЧчдсдаа часечсудсаЯяд асстчоцевь бсостсеБос всасеуаавач чдечесасчае зво чесадавцас ссусуєсьт суаєуаєсда сувататосу аксессссУ седссуссдо 3420 стссадсчдава чдодесчасесу бчдасуваєсоча бссодавава стссоасякса зочавнадчеда зава седостсбсЯ дссадєсадоса абададостова дсесвавацсе чдсодатецос асчачоадеда з5Б40 часуссчоєсе дЕсабБадсувуд досадссстца сдосаваудууя сЕсддовасу остсадасає зво сцесадвсусєсс асссакстсу асассодсає сессаїдадес ссосссчсса соддасстеае збо
ЧчеЕсчдЧазавс сстчксасчоа БоачЧчассаєсучє сасчаєчаєто здссастачес ссссуцчадчсе зтда саєочасстя апдчссадас Єдадесасавда чассавасте сссчабасзча аводесбусега 3780 аєсдадєєссоа чдЧоадЕЕсСгтда сЕддДЕссстЕ ддсаведеєю даграстаєв дебсаєсетає 384о чагєтаєсся сараддасЕсс Багбссаєсяд сок агас Час сдаа вансатсс де звоо вЕБЕсЯаєта Бубзоддакве дсетеовсадеє єссуєваастаЯа сСозсосаввє суєсвасува збо васептсьтіб дрддсасстть свасаєсссва опосабоадсЕ сдссусавав сдвачестсю 4020 аствсубааа дЕбдЕдєста бадсаєєсдаа весЯвБЕьсЕв восгодадана баастЯєдЗас ово сЕрсадеводЯ сдЕдазаєсса дев содава Богдаєестьс вУудеЕссасав Ес ЕдЧадаве 4140
Чесачесстс зодечЧчадеса адтчаасуєксє спазаказає десссесвасс вудзатасука 4290 чегасадгдваа взадачвасас чдсчаасася ачесчгУусна вдчасвувасс ссвачтьавас 42.60 сЕсСацедаєсе сЕКсоЯосЕСсоОда ссЕсСТтВаєтье адвааасаєтсе дастодвадо вуссачадся дЗ2о асасссвадеЕ сссвастає чавазазевуа ссосаЧЕвнаса давассаєса 4аз'й «ВО» 7 «11» 51 «г1и» Білок «Ч«Ч1З3» Штучна послідовність «вто» «два» є трансляцією амінокислотної посліловності в нуклеотидних позиціях від 2186 ле 3781 ВО То МО:16 к2гО» «2215 тівс Хеаїцре «виг 11). (6) «раз» транзитний пептид хлоропласту (СТР) їв Акарі«орвзів гсрпаїіста (арабідопсис Таля) «иах «пгї» Ммівс теваєитге «кре» ОСТ, 5313 «253» тан 5Б-єнслпірувілшикімат-З-фосфат-синтази (СЕРБРБ) їз штаму СРА
Ачрорассетішиа вр. «-4005 17
Меє АТїа сіп Уаі бек вка І1їе був Ав сіу Уаї біп Авип Евро век Гей 1 З 10 15
ТІ1е бек Ав ге беж Пув бек бек соІп АКО пувз бет Рго Ппей бек Заї 29 25 о)
Зеї Ге) тув Тих Бій сбіп Ні Рко Аку Аза Тук Рко ті Бес ек ве ва 40 4ї5
Тер у Ге Пув Пув бек б1у Меб Тбе бе) тіє бу бек зі Тез Акд
ЗО за бо
Рго їеч Іув Уві Мехс Вег ес Уаї Бек Тис АтТа Суя Мес Пец Нів су та 75 по
Аз1їа беж беж Ага Ркго АТїа Тк дів Акта був веж веж 5Б1У Тєц век щЩЩУ ва зо ЗВ
Тапг уаії Ах Іїє Рко сбіу Авр Був Вес 11є беву Нів.Агбд Бех Пе Меє 199 105 їїо
Рпе б5іу сіу Без діа Бек З1у 5БІчЧ Тв Ага ї1їе Тк у пе бем о зІй 115 120 125 е1у ст Авроуаї ІІїеоАвп Тс птіУу Був Аїв Меє сів АТа Меє с1у Аїа 130 135 І140
Акод тіє Агу гув сіЯ 1у Авр ТТН Тгр Іч1Іїе т11е Авр сту Ууаї 51у АВ 145 150 155 160 зЗіУу біУу їей Тємі АТа ро сів Ата Бго цей Авро Ре 51у Азп Ада АТа 155 170 175
Тпк біу Сув йга Тей ТВЕ Меє Ту Пен Ууаї біу Уаї Тук Авр Рре Авр 180 І85 190
Бек ТПх Ейе І1їе сту Авр Ата век Те ТІ пув Аг Рго Ме СбІУу Аку 1955 го 295 уавБ Бей Ави Рго Ге Аку сі Меє сту с Ууаї біп Уаї Ппув Беж си. Авр 210 215 ДО сіу Авр Аку Гей Рео Уаї Так Без Аку б1у БРЕо Гуз Тс о РЕо ТЕ рРего
Ко 23 235 80
І1е тп Тут Ат Ча1 Рко Ме АТа бек Аза сій уаї гпувБ бБег Аїа Уаї ра 25 259
Те реа А1а Сіу беш Аза о Тс обро сту 118 Те Тр оуаі ів Їм Ро 2бо 265 ТО
Тїе Месє Ти Ак Абвр о пів тТаг ЗІ ув мес печ бів О01Уу Рпе бі1у А1а 275 289 дв
Авип опе ТПпг о Маїі 51 Те Авр АТа Авр о о1у Уві Авц ТЕ ї1тїе Ар оте 2980 295 Зоо сій біу Ак біу Ппув Тєсй Тс б1іу біп оуаї Іїє АДвр Увїі Ркбо біу Авр за5 310 315 320
Рго бБеї Бек ТйЕ АТа Епе Рго Меп Уві Аза АТа Гей Тез уУаі Ра Щ1У за зо 35 беїт Авробаї Тпї тТіє ГПем Авії Уві Гей Мет Авп о рго ТВ Ака ТП щу за заА5 зви
Теч ТТ пеш ТПж Гео біп сій Меж б5іу Аза Авр ї11їе ст Уаї І1е Авп 355 360 Зо
Рго АхЯч Печм Аїа б5іу сіу 513 Авр Уа1 А18 Ар їй Ага Маї Ага Векг
Зо 375 зво вет ТпЕ Пец Був сіу Маї Ті Уаї Ро спіш Авр Ага Аза Рго Зек о Мех з 389 Зав 409. т1тїе Аврсіїо тут РкЕо ІІТе теп дів Уа1ї Аїа Аіїа Аїа Ре АТа 1ц сЗ1у щО5 410 415
Аіа тих Чаї Меє Авп бСТУу пев стій біз цезп Ата Уаї Ппув свіч Век дер 480 425 439 дк Гез Вес Аза Маї АТїа Аеп 5Ту Гей Ппув лем Ави бу Маї Авр. Суя 435 А4о Аль
Анр Бій сіу січ ТпгобБек Пец уаї Уві Ако бїу да Рко АвробіУу ШпУув а55 хв сіу пец сІу Аяй діа Бек с1у Аїя АТа Уа1ї Атїа те снія пе Аеронів 455 470 та 480
Ак 116 Аа Меї бех Ріе цец Уа1 Меб сіу це Уві бек зіц Авп о рко 485 480 495
Уаї Тс уві Авр Авр Атїа Тс Мес Т1е Аза Тс оБет Бе Его 5їм РВЕ 5ОВ 205 5ІЙ
Меє Авр ре) Меж АтТа сту рей СІ Аїа пу ТІе 510 Гей Бег Дяр Таг зо Ба пу АтТа Аза
ЗО
«ші» 18 «2115 283 «212 ЦДНЕ «г135 Штучна послідовність «Ов «аа» є нуклеотидною послідовністю синтетичного оліговуклеотицу, під назвою 502701 «005 18 зачдазваса адаачесааа асаствааєо 2 «Рісхж 19 «115 ТА «2125 ДНК. «213» Штучна послідовність «йтОх «ваз є нуклестидною послідовністю синтетичного олігонуклесотилу, під назвою РВЗ55У «00 15 ссчдасавда адее 14 «105 щ20 «к115 6 «г12х щик «рьЗ» Штучна послідовність «вро» «ри» є нуклеотидною послідовністю синтетичнотіс олігонуклесотицу, під назвою 5БОЗОВО «2005 80 астсаєтасеЕ чаєссабота часско Б че Оо» 81 «11» 80 «12з ДНК «в13» Штучна послідовність «ве «рез» є нуклестидною послідовністю об'єкта МОМ 657511, шо відповідає позиціям віл 462 до 541 БК ТОЮ МО: «Об» 21 задчазааса авдадччсазва асасєтваєча атачетвасиь часексаваує ссдачдававо бо
Ттасасддаєс адсваєтоадч є. що «ТО» 22
«2115 15 «р1тРз» ДНК «щ13з Штучна послідовність «ве» «гоЗ5 є нуклесотидною послідовністю зинтетичного олігонуклесотиду під назвою ОТО «апОж 2 асаєсвсста чачедсеса 19 «рі св «2415 5 «5125» ЦК «13» Штучна послідовність «Ор «реа» в о нуклесотидною послідовністю синтетичного олігонуклеотиду під назвою РВ11500 «ВО» 23 греазастає сауєдтєкач адаає Кв «2105 ад 211» 25 «10» ДНК «гі» Штучна послідовність «аг» «рез є нуклеотидною послідовністю синтетичного слігонуклеотиду під назвою 59256977 дах св чзачсачаєсса абасасєстач ачуссвага 29 «ВО 28 яа1ї5 75 «їй» ДднНЕ -2185 Штучна послідовність «ато «Чай є вуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 57411,
шо відповідає пПозиніям від 11710 до 117854 БО І10ОМО:1 «Об» 25 асассасста дадсдчесяс чЧЕсСазаєса гсавстаєЕса чЗасваєссаса вассгстацча ба тасастааєс бассо 75 «ВО» 25 «115 11743 «їй» дДдНЕ «йк13з Штучна послідовність «ио» чага» конструкція ДНК 417 «вах «221» промотор
«дна? (2627). (3255) «рев» показана зворотно комплементарна послідовність посиленого промотору Саму зв «вед» «215 промотор «ри» (2627)... (4213) «иа» показана область ливергентного праомотору, яка запускає цдвонаправлену транскрипцію «дО» «221» промотор «Ре» (3РББ),. (РІЗІ «2283» промотор Согп РІЇС «ОО» 256 зазадсссва пасудаєсає бесассдеос счаксустсає собУседада ддзачасдса 60 сагдастсва сістова од аваєссатеста сесвассячадєс ссацсссбос чсачдавасса, 120 асагадсвачс Ессасецуав дсаназсцує вздсудсвадса ччасасаєьсавассаранає 180 часЕвесварує ссддачвавсс басабцдаєєс вадсваєцвнас аосасудссв всагсадавеа 2АЙ азачазачдад тавссассова сек сса всссояававє дсадасассс дсацечеває зоо тасавзаасча ааутасає сь сдасраазасу асаваєсвнод абсодосуєа ссбагбачуєса зей взавосавваа асаваєвєвать стааєсвсядЗа вассжесаєсь ссочвсЯваве Єасаєтсаєу; 450 їссазасода част тачдасо адаавоєтса очаєссчасаєс дчовассаєє седвачусодад во чіаседорЧас саатсаатсу дсавлчссара ааасдсаєта аазаатчаєсо ссатаєсссаа 540 стасваатсс абдачсасав стабааскаг вваавочсвасов ссазваєсьо асаачцавье ой гддаазаєтса сагразазуан адеЕссагавна сЧусставнаайнос асавувудчає асасвраває БО товадєазвзсає гедсВЯаевЕв єСсСтаяуссто аазитатавє саЄеосстач сдааснадеса т2а тасгсдасаса асбтасавуасУ век асеЕсоє сабаєтваєсс ссудесаєса овудсосасда тво
Есоадсасає сет састссавз васававасутє ссооосаєбаєсос ссовбасваюево сяаасвЕсаас вл асасзасача сбеавадачаваа шасавнатаві аствасесба сдавесвасва ваччассакта во гсактссаєста астовсстсв акоссарскос асЕвсагадь бсозсадесуа зазссодчваса Зб наааасясацч сбзавігасаа чдсасвасавава бач асвача аавасачевс бсссчагрдєес 1090 агвасастса аасссачтач чЧатсскочсу сасусуєзає чЧеанассдаса сассодаассие Т1580
Часочвасуєс десодвнасоу агдасасовна содавачесву чЧчестсаедсда чсвсосУессоо 150 зчЧаєстваєс сатоавівісЯя Єдановісабє стасвссова аєсстєаєда дсЕсЕесеєтав 1290 ччдчсаєстяас ацесаєстсссс асадваєеоса агасачоває восжєватадска усвосєвсда ї2во чдадебжсссї стдсасекса акачесвугав ддавкосатс бБакєЕкосачє садексЕевЕ 1350 ссзассчьвЕ сьжстсеєву адеадеесвача дсадсавссеє ссбавевосє туасодсваювьв 1380 тег сдедес ссбусацасо дссдсоасвча гбдаддвачсоса атсаассЯдсеа содачавтаде 1550 чаєсвачзяч аєдЕсЯчссда чадсчаєдад Багбдасавс сстадідаєа гокаасадчав 1590 чагассовєда газадечібра асдсчаєсос адеаєсттадса агуаавнаася счксдаааава 1550 гаазачадЕь доастсвдаадч сссгсазава чавдчавасуа ссоадазавда сссваєстаєса 1620 засадатодча асссттасав стастоваває Чевовуччва усосссувач дадстадсас тво ваасассостї деастадаюь стасцавава сбустасадчає десессвадча авйдессараа 1740 чаазссвовас дтачасласад Ексасцатває сабочатчучєс абсцсвсвас чдастчдевуаа 15080 чаасаїсаава сіссесдсісЯ чсасскдсах Еасазісаза гузусваача ставеєааа 1860 засасточіє азсасьачуча ачазодцсаєс дЧчачсаачата счсасосава чачавасаві ї8-0 акадсдссва кЕдЧтадата стадатаєса Єсадузоадса ваоузададсва сазазазчдаав 1980 аскЕсссгавс сЕЕвачсісг ЯдрЕасазсва асавусачає савсочсаєса вазкястуєе 2040 васастраєк єстосацабСа асавсвста взавовазтос абссстувосьє дастбасуає 2100 сасазтзчазу3 чдадевувуає дазовісвва акСтсдусас єсаваєстає воссресауче 2160 чЧчЕсвасвасс гавзсвусаса савасваааа сачааєбзчда асасссваєє сбудеазаса 2220 асааусьстья сауасуваса зассасрата дгакобоста свагтасчавс оостакаста гг
Есдасессаєба бСадсасдзач сстьовссста васьаавсаєдо ваасствое ба ввосааовоає 2-й сстабаяасас свпасвідбадс стааасават ассоставаує ассовавісас асавссоїсд 2300 таєсоастоова гаддссстак ськсусьсод састассаєя песесасбате сбсустассає йо завзлпасадс вазсавлсаа сСасаччсаза асасчатссе вадЧчазьававь ссрвачавеса жага
Чдетааассає сстсвусває саєсасаєва цесдчадеартс ацачавасує удсадеааса 25во зацоасасачдоа дедвнадсвдау сусувасеоцча ацасастоса чдоедевдвесве сссазавдаа 25АЙ абадазаствос сєтасарадад чаадусьсете сеодаводЧаса чуда восвав дсуєсаьссо 2790 їХасоєсвує дуацчавасса сабсаазбоса сЄсЧеєтсда еддасосадеьс адуваасосеве 260 сЕСвЕрссає чдасоасксство отадосадов Ччоссаєсесес сочдассастя ссзддсачачу шо сзаєсестсаає чаєчууєське сс ассчєе ааєцчаєзууса вссесаддад сбассвросе 2гаво
ЕсБссастає стісвсвата вазі часача Бачсточояара абочавсеся вачачасскс ака сдчасассас сессотостда ааадсессава бссоодвосасео абабевасос асо а зво вачасубуачс содвасаєсев бас срсеса счасусссоес сасочусачч дасссавесу 3060 тчЧддассасв дЕсодосадач чсабовісга сувсдосовЄЕ бОособеєнксо савасодаеуде зІ20 аггкасадча дссавсстсс СЕ совзоба бестоасонає ваауєчасна асаустудас зво зас дазнаєсс чадададаусЕс ссадасаєта сестєтаскЯ заявуєстса ассцдаєсстьу зай сачесстосву чесачЧедаса суссасаває сасадассає баасестасєє сасдосесяа зз00 ог асссаас асасасстас саавасісва аксакаїєєсть сдвасасьсас ссдадасоса 33560
Газсаєздує асоаваєсдає Савчесвааєт абасчдеєвс ссеатевдаєс асСадаєсоде зага стачдіасоота чеЕдасаєтьо састассасос абс аєод сбудбассіча сачдедаєате зЗяво засассчдує саБоадеєста спассачавєа ч«суачазеча ссессасбаєє чссайассає Зеча застазадчдас стссваєссає букссочатс ставудоєссвУ застчауєтав вассстрасса зво стасаччусєтоа свадсасасєтс ччсасвасаве басоадоаесаваа садавнассяв ядсябасевоо зевбо сзсєчасоєва аасоуасаба авоссстаєсс агагасвавуа сваєсавстсв вабесуФдфуєв зт чадесасода Есассачача бсосічавєссс одеса сСачся сдсавессьсцає осад сясед зво таїсовачач чдасаєасаа заїсабсаєса срЕсрозачяа дадесусєсас вччаваєаака. 3545 чебсасссаса чддадсесдосо ссдсасааса сазваєсзаса сдаєчсаєцдса сесасассад зчо00 тсссдатава абавінатад сауссавачсодЗа ссобавсяву Сесачссазс асвравресає 60
Есскасаєсв асстусесає асавдсвсуе вестсуєсєва чсвдавтссуа сяЕдатсстає дого сазскЕтдессо свдаєсоссвса сстодаєсва пессесасатса зсоасуЯдесЯа ЕсчЧЕсСстата 4080 гессаєдаса зссаодусазо дсксавадсеа сасаеасоєцсю чесдассаос сусщцевнсдее 4140 ччссавдсасо агадсаосьс сотесасасео осбссаєтсвос табаввававосс абуссвауса 4290 сесЕдтдааа адссоссячча ассатсюсос асасаєсссва дсосасаєбає баддадаавсяє 4 аснодучасава сасасосатав: часбесавоасо азасостосцє счосдссаує аассасососяЯ їз сесстстесо стек сенс о сессесдсстсЯя усотсдчасся ссоудесссоча 4380 гавсстодас чадсчачвао счасоссУса сусцессовув сбсадсесасо чавоавачеча 4440 чаєстодсча стцдоддустоє счесуцвоцво дасеосуцесе удцаєессЧе уаавсцача 500 сЕстсудавоа гадатеєосд агседессує деЕгсдсаЗдад асвдасддацаяа де Еаавааєя 45Ба тссадссубс гавзасвадаї оздчаводадчу уаавадуєс астасоазєсв асавесстає 4620 агавсестчс Будсєксубса Чеусссачасо сустадаєоє Єб5есесевєьс СЕБЕ саЧа 4евО тадаасссча айссесксачсо абссасссаєс давав стовесаєча ссвоаоравасва 4740 акдсацессс чідесодачесв ЕЕ огачу гасвауічав сваєсасуда савсоссвас доб вагодсрося адсводаєсас датсвачУуєо вссососавеє сесдяачссеса чассаасясво 4вео азесачдтасс саоссудсоча саасссозас бссассосссоуч задачесова стасавуччад 4520 їсеседдсуса сдассдвуда сосососасу дводссоводя авсвасьссас сЯассавуданес 4550 чесдісаддда соддсаєсто суссуєвравчо садаєвсствсу дсаєсосєда садбесестсе З654О чсачадєЧевс ресассовесеє стаєсадеся СЕсСстЯаавса ссатстдддсс сессвдасдос зо часєссотуде адчесесав дасссвачес озвачеоссов тсачасаадаа даксазучав зіва тасдссвачі ссазудсссв дчссчачессу савчудсссаєс азаасавосо счадчастас г чесавсосас сдвасіссто даадавувся ссбосакссос сасЯастосавв чеастоссад заВо чЧассЯдсаєсс дсдадссусе стессадасе дачдтосваає сесодсвассо свагадссаес зва гссЯяассцдьес ссаачеєсла дулессЯднс стасебасоє асусссадас сдосаасасс зо сасевесстУуЕ гастузазчдчда сусасачаєеє сесоодсЗау;а ваєчазЗзачеса ссосоєсачад або часдєсоссу адеЕкставссу бсстсачесту вадстуассс ваасвувасаєс сУвссасєтою З5га чЧчЕсВаасточо асавоуусад сстрдвасацо стовадчедоає ссасстасцда соасасоавас ЗО задчеЕссвасс чдстлсспевад оцдазчасувсс стчасеоцссс сддвсесдав сдбБесбеасьо вад сестестася асаєссусої дтастссвау спос свача сссадетрдвас осусвчасаєо зт тГссасадасє ссаєсвбссот дстсасчаєс стссадвадче асудессссас ссовссьавсс з'вбО аксаадаваст ссасбссддсава зссесассву сссдаєсєстаєс вссавудздсає счаческосас 520 всечечдостза доссачаста ссусудсяаваа часесестса астассаувес сяадсвассас во чсесдадасса чддсссссосав суусссстод звачасувсоса осстсесессоє стасадчечає за зачдсссвося адоссадссеса савачесцєсо Еесдасоудос вувзадусева ссусаєсаве 6а9о десвасассод асуссасддо ссадесуаає дусавоадеьесю. ассічадеоє сасчаачувс вобо чассьстссс аухаоуасуа ссазваднас дадавосіссба сссадассса сдастосавоу 2120 вадсазсваєа досасуєствсо сусесаддає Ессавсдасо вдстдседес сдацаєсася віво часчадссос Бадачаачує спассессавс сачеобсаваов асасоадасчса сЕтесточатсд било саацассуса чоадасассак сссесстосткс ассетадчЧаєсо ассоцстосчє счаствесе Гео) васассатсЯ асусосчачуав чассасссву стосесазбодч Ссавудсоста сассосвувесе бл
ЕсЯддаєдсст ссассаєктаа дуадсссачоує сгбсасоцеата осавесєцеє фссссрузчад вІлО чадесстоуа астссаєсяас саваєссаязу чдебсвесессда астосадстао сеЕсосеЕдсаві ваВО садсгтассадся босчсавосу стасчсововс весасуваєс сосдосстусе сасссачааю ав5лО ссазсваєд аскссссудЕ сабссасаєс васвадаєса бузасвауча суавдаєсто 60 асетассача сстссчасеє суссвосасу аастссваса содасьсесо дсоадедчасаце евео заєдазсьча вата ас Єдадссоссс ссесссвасяч вувачаєста сабсчаснає 6Бт2у весчвуассса сесосаубсса чека гвасву даассьстьчає єЧчвасестос асдсЧЕсваа ства асарпасчстс астезуЧіса дадсеоваєсс одасдчасаЯ кобвдодадьх сстудсоааднке 5840 тчасуачаса ссесетоасасє ад сссво ссссвагаво єссратасте чдегсвавсдчу ездо стаассусса асадассосдч суаєднаєсеав абодвдаваса еасбуєостоа асЕсвуадса ЗО саааавававна чугаєтседає ссрдрудкоарос сеЕсЕсодаєс ссвоєтсода свадосвдео того
Есдадасавс аасатуєстє рсаєсвасаї одаучузаса зодачудчатча ааусоаресуєсе 7о8о
Бачдосасстс сакссурсаса стадссаєбу доспадсвслс ссаслассаєс аасдссадчд т140 ччедачдссеьса дсасвоассас суссссассї ссассассос астассетач стгсасссаа 7290 садосассяє савасодєстсс ЄсЕссЯссва сабвачададЧ вавуаодаацча давадачсавас тей сагадсчддвосча човодавіад баса осдаде стаєсу о чусаваєсаєе ссодассдсо 7 заєссазчодсс вазаравчдоча чучавксьадоє сассвоуеса дЧазачУєсає сочеацеавва зав тсвБЕЕттасс адазсЯтсяа аавазазавта Чоседасаче саєтссоодчача чсуасасеЯсе 7 счЕсачаочь астсттадаа сассаввє сс сацвававосов гседавававнь ссесссувоу 7200 зачаєсвата ассаставава стядсесстєва Ексузвачача сі ксававса весавнаєтса 75БО0 кЧЕредЧдавЕї: дадеЕсЕсває Єксаствсва осо два вбсЕсваєца сазавсатса тва асссдарсача бадсавадеє свв сасЕс срвксяваза дадесваєса сазасадаве 16589 сазавстсаас адстачцссс вадчасссавс счачеаваса абапчпассава стуєсачессх, то десассяороо ссосесстссї чдсссссасо стоовдаєссс вавасосава вагагесзодса 78590 счассдасео ссдасададо додудсучаваа дазсдуваса ассеессчав гестасссса тво зсгасдссса ссавоссаса суссасєтчдво васосдорос сяссяессуса чудессаєоста 320 саачсчачаєс чосадссас сусаусаасс вукудасося ссвсссвзава ас 7аво адасссоддає ссстассосас ссасавссава свавасодса сувнатасссе дсастававс вола ссісаулаава акессдаває БЕссаваєсяв Еасачібссос чдассяєбаддча даваассавад 190
Бдчдадсдвдач Бдсяазаєсоу чдваавоксва БсувзуоучаєЄ Еваавсусава засосодачо іє садсстсссус бстасачазаа зчоацасчас сасЧчачосадса аасестаєсєса сассусадчас вдий завадсарсс ксувасссядс сксрстсоде дсосксобссе ососуссчссо уссасеаее 280 деЕсссодссЯ ссасєсуаска досаєссауу Єаваасвавс ааавасуЧчає ссдавасьсе вза савеЕссетосЯя тЕсстедвау бадечесдее статеву єда дсочасстоа вбечавссстьяад вай чагасаЧдеес чЧеЕбсвувксо абачаєстоає судтодаєсь дососЕстає дач єсдає вАбо чессадЧдаєссес чЧедеЕквквЧчасє сачсасавади ссуБачасес досуаваєує сЕБоаЧасєсту вва чсвасФдачас дстваачаатс чодчавнакцає ссвасвесач сададасьссса часадчачакс щВ5ВО састазваєста чссвосбсься сЕдсісаєава ев сСьсось вЕсозсаччає свуцеЕвавсе ве такБядвсЕсоЄєсє ссудчагачає сіцдаєсявся сова свасЕ єс ссавави ЕСебасстад вто
ЧчсеЕдсасауд аагчуєсвсоє зузсосаце дчассоассає часседсаос даваєцессо вто
Ісгкоазссодає дваєесссСдавє ассссассос сусСсевовса часта сСнсс ссскссага 6520 астааєсєсЯаЄ сдсстаєтає уазасасчаєоє дсавствасу сасавограто часадаєтає во чеччаєсьвв аццравдсаса стосстасчау стаачавзста те сачацчся вчдсасацчаяа во вавасяЕсса часадаєточ чдесваастаєтї саєудуське даБассаєудє сс автас з0бо
ЕсесвеЕстос чурадсвааєссв сєтеЕЧарвстаа всгоавчата дУбадстасся вабссостаава зво чагсастача асдстассто ваасадстра грбасосачає савссвсассє дсавсьсость 120 чЧЕЕсЯакстрва весЕЧЧарава СЄсссоасдава аасвавааєсс СЕвадосаба асетеарсдав з180 ассссесьЕЄє дЕсстаєдса дсоссвчдаєсса Сдсочовзаде радсававно сдсавкачса Заг
Басадаассс абевасватс бессааєстсь садаватосвау Ссааєзсаавз соссвесврає зво садЕЕКсСвсес даздасасау сачсасссяас садесскаврсс уасьссуєоу ссеусачдчає зз5БО їазачавнова содчасдвася стат сачек стоваствоЯд ссптсстава чссасусеве 20 ссЧдЕскссас ддсчсосасд ськсасоауєу савосацесо дсссдсавсо чдесесдсваве завО секстдчось сБосодаасс уссстсаєеЕс осучодасва чубсдасеюсс сассауєсею захо їсабадаєтсуяч содссЕсуєд ачдечдосдава содсосавсаєс ссддесьссоч чдавчасвасцча ЗБОЮ асчісассав гасчоачеаау чессаросачу счасчсоцсоус ссчусасссто зачочувачеаса зевбо всазстадас сассчнсдас чісзЗадсавкоа Чдсоссессоє дадсдсессчад зсчесасссоу зт20 ассссудсва сассдессасу ддскрусесусс тодвзедасдоч остєдссоца достаєсчаєь зва боцасадсає сЕрсассуде дбаєсєчестобо гсасавадчея ссочасачас сасубасуа зво асесЯястдсд саазасодас засаду єста ваєсойвача сочедчассує ствсссуєва а50о ссепсрусодсЯяч дссодваадаєсд ссуасасода бсасовбассу суєдсодава уосеЕссусас зей аваддЕвдавауєс садссобосту сесдссудес Єсаасасдсс содсаєсасо васдчесаєсу 100570 здссуатсає часусусдчає саєасудава ечабастадся дедесссоаде досавоверса 10080 седсслачас зччаатасодуає дчсапосаса ссасессуєсс чудзачоссто чЧасавчссеса 10170 севдассвачі сагсчвоуа ссдодсодасе сассстсчас оуссстсссу спасе да 10290 ссстдетсЯєЄ Есодоадетеос дасдесаєса сосусавоуе Чдсвасудває сссасосацеса т02БО сецассксає сстчцаєдсету садчавасод дечседасає содвачессаве авссесчсуєс 10320 гЕсассдпадсдд свачасова чсоацчассвоє сс одеоссос ссосасуєстча вадудсавса тОоз8О сччсассоча адассусуєд ссттссасода содасуваса босчаєсосос ссбоаксессУ 10440 ссдссттсаєс догачадоуєа ассясчаєса асоссстьуда здавсессос здссавначаза 10500 чдедассясе сісчадссябс чдесвасоцдес Ссавасосва Бопечсочасє счсдаеднас 105560 чусчачасоєс чесодЕсоуєа сукдчосусо сідассозчсва ча сЕСсЧос васяссточа 19620 чедесцавЧчс сассасссав сбодассзос дсавеуссво дадессессс дссакудуєа 19680
Тесс ссода авассссуєс асуусадсасчу асдесводас Ччабсдескоя адессссоозу 10740 ацевсагсуда сота одсо чададссодасд сувадаєсса асьстесдає асдавудчесу то8500 сстааєудацо бссадудієс ссочесстудед ссстуддонає всЕсдаєтаянс судоЄвоваво і0660 збакчвавстЯ БосУуєУуєдаду сЕрстасста бсвауєтвусЯ асстучееє Едававасає 10950
Екасверьсо аскатсурача дека сєкав адсвесечеє дссаБдаєсь дувусвсеєєва 199850 тагаавссьс скоса дадса кстосвабає ссесавзастсо дессвоссоєЄ ававасячавоо 11040 скЕстаськсоя тааадесува Єстатадов гадавансяво сбЕСссосіся адааєавссу 11100 таассттрад сСтддчсабуза астачсЕєва дабавосаве сегегочско дсваєсоєда Т1150 чавсяссоасі чсррачаЕЧа ЧестаачЗсдар чвеЕсесквдадс ваведорссю сассадаава 11520 сабадстласу сдаззвачада асусусчває авесчраустоє усавачатсу сУуссесаваає 11280 вавостсвочс дасте сода ва ассвачавас вевечассуй чадсачетат 11340 адесасассс вауссестава старцдакбаза дібдссскУує засадававзає ассаєстада 11800 чеодасосчоЧЕ сбавасбсаєо аутаєксдас ачтаагатаєь сосудасрава сствачадчаа 1146о зададсчЕвв аїсадаасаа ГсддасаєЕє азаадодЧеці даавачУчвс ассосЯєведче 11559 ссарстовтає чдідсасдеса ассяавачоест бесостсасоа аЧбессьсяс весоесасоса 11580 всвасчасьс стустсвассо асссавасос сддвнавоусоу дасзасоачає садсавсоса 11540 авазачесос сеЕдасссуєа Єдудссачев вдзвачусева чсоадчесаес дсадосгедає їїтоо састсазоус додбсдесодаєс црадецдсаде Чесууаававе се 11743 аб» ов «211» 12389 «ДКІих днк «віз» Штучна послідовність «вв» рез конструкція ДИКО Я1Є «ОО» я завачтссса сакеадатсає бссзссцдесес сассчстсас сУгБускоечеУ чаначусаса БИ савддсєтсад ЕсстсаатЯд азасктансту сеєцасосуує ссауссстус чсадааваосая 120 зсакасвадс гссасеуодав цсазадецчве ацсодчсудса давенсаєсе васєаєавнає 180 чассЕсасує сосдоуцазаєсс Євсассуаєюс вусваєуаєс ебуасозєва асагручадаав г азадзазадваа гаатскассав ЄТЕКСссвкса абсісвеаває дсачасесес дсадсуєтає 00
ТагазачзєЧча азасасаєвки гдасвнадаса асавастасоа асосисечса сстабачуєст збо аваачдеваєаа асаваєскаєе сеЕааєссува ааєссьтаєсь бсвдасабуєєс басаєвксясае 2 гссавзасодча часттаяадасо адчааасьЕсса счасссвкос ададссассаєє счаччєсуву во чсассчсрУує саассавті са дсазтуссвсаба ваасдсвсста зазаасасєто ссабасссяв зАо ссасававісс абБувагатсав ссасвеассас вагссоваєсда ссаувасеса асваччаєес БО тудазавзссСа сагазавздава адсбоарага ЄУуєстазавос асавуаадає асасєвбоває еБО тсадбаасав гЕдСауст СЕ сокаддЕссу аавасарасє УЕсдОоссва сувагсавєа т20 таасадбаса астасааеву ЕврЕастсосі сабаєтаасє тседесаєсса сдадесевиооа тво
ТЕрБдасасає сЕЕрасстсава засаваатав вБсдсабаєвсє ссбаєЄааєсь сазаєвсвгасє о4й асасвасава свачадаана васаватсвнас аксвастеса Чдаасааасавв авачассата. зай сасссагрра ассстєсстсс асесаєсоссо аскссасаоє Ссоаєвоосда авассуавата зей адавасасач газастасаа дсасаасавда сдотасваса аазасвассє сосозаєусо 1050 аєвасасіса аастовзоаБач чаєсстцав Басасоагаво дЧазастчавоч сарана Т1о8о часдавасуєс чесддвавссу агчактасосва суваауссвУ усстсвусуа дсассучссоя 1140 счасствасс саувасаєсся сдвасабовак ссасасссва ВЕссстаєда сот ссства 1200 чЧчадсассвдс адсаєсссесс втазчавнска агвсозоудсаце акта єаства чЧебесєведа 1250 чадесЕсосї срдсаєсіса агаоскясаа сода сссаєс саєссарачі бадуубсеюьЕ 13920 ссвдакєсЯввс сттссЕвЕва аччассотада чодсаастов сЕСасьсксс дасачдсаєсе 1380 сосЕссусасть сстусвоадеЯ чесасосоаса сбчаччачсса абсопчссаба суачавУєох тадо чаєсчачсаа абуссуссда чачвсчдакава гассчастас зссачсдчата сасачсачаа 1590 чагассаєча бавадсцді са асдсувссусє вубвсісадса аадвавнасу суєсаванав 1560 базазувЯас дсаєтссвац ссессісанава чЧаадавзаєцча ссочававна сссазесаєса 16720 азаїзадасудуда ассоссясаза стаєсозвзаає сдовузоачааа чсостечаноа дадссавчсає їево аазсастодєсс дЕаєссачась стасчавава бадстесадавє пссестався аадесбсатав ха чаавстдзає чдрадасвдаєу ЕЕсассасає саєгудаєсдоб ебсосасабдс двассодседадч 18500 чаасуєсвдад сЕссосцдстсе ядсасерцдеві Басваєуааа бовосавача сБаєоесоаце 1860 засастоауєс азасаствуду адалустаєс дассваачаса сабасутаза чдачавосавь 19250 аквасассач Єродчсадвса сгтадазасеса ссвоачазаса ваосачачсва саванах 1580 астсттраєс стЕраваєстст діІтасазесвна асвацевучвне сазечсаєов азавагасьое задо адЕастваве СстЕсацаса асаатастста ааасвнадсде вВсстваваєсесе даствавдах 2150 сасвасазаєч чадсвдадаїє азасаєсасва веевсдссво ттатавстає ссстсачає щ1бо чЧЕкавасавтст бваасвзусаса Савасвназаа сачазсбачаа всвоставає ссучдсавата гей асаачдессья сачасдааса аассаскаба Ччсаседсста саатаєчавс ссссрабаста 2280
ГЕдасссаєа Бадтасозау сстобоссра аваєраасадс авассіссчЧа авосавуєує 2340 секБагазчсас сдвасавкядбБадс СЕаавсявас ассоссваос ассаавстає всаєтестса оч) таєсастоово бБадУуєеєстав ссроеуєекеод бастассаєу Бессрабаєє ггсадстостає 2450 звазаачасодус авуєвассад сасадоосача асаеасчаєсьс ачазсеснає ссгадчакоса, ва
Четазассає соговдсває сассасаєсга сводзудсавссо едачаваєсує дчсадеадаса 25ВО задасазчачч чсучадсдац сасувасода гдасуднтеса вдова сссєс сссазаедаав БА абдзасєтесс гкасасауач чвназавссте ссовабдава чсусдасвує дсдєсаєссю 2700 їгасуєсаче уачасаєса саєсваєсса сссоссссЯа ачасусччое чадвасуєесве ле срЕсссссас чдабустісстс чдраЧусоваЯ вессаєсест Чазассаєсоя ссдадсачада 2820 ваєссіІсває чдакчддествь севБеЕсарсос взаєсдчагддса СЕУ єаддва ссаєстьсессяь заво гсЕссавасрає сіссасваба аадсдасазча Сасстдочса абєдчавсосо аччдачасесе еВ) сачаваєстас сорта азачсобева сеодассаєс впсаєсоваєсе асссбуєссста задо заздасясачс сдчдавсЯатею бовексрсса суведетост сусчоаусоачУ чуєсесвоее зОобо тадддассасєт деЕсчосачач чсасесссова сдасадесто бсессссавеса савасчасоаде зійди астєссведа досасессксс ЕвкЕбссаєва Бстссасавос авацчсодасву веачсободаце 180 взаєочазЕсся чачдчачаєвЕ ссччатваєва осотстосста вавазсскса вЕсдчасстьу ЗО сачестосач здстацсауєд сассодцавує бавастрацнса ссдсуватас вочасувосяй во сзудсстасва сдсасаасоте сттадсабаа васесттсаав Бссваєдссс стаєсстоадаав зав чессгачоса ссусусавнахє чбаавасвсс састесуєсь састсвстає ссзавасацча 420 чсакадасот ссдасацаєсь оддсяасессав оаддінассвба зааєцдаєсес воессаєЄсссь завоа гсассудзача аврсадуаав судссстово ссссгоЧеча ваесаседаса гобдаавадеса. звАО сстзадесчаєс астсддсовузо бддасвасає сбавасаавтс, аазвссозвзаса свагбодуєває зоб задосссдає десвосбсвад садову ссасечовоу ссссвасува усуссавача ЗБ вадссЕсудса частссваєу стара сосвцдаває ЕЕодавсдва задавссуєса зай чачесеєсса дсасозачає стсесадюсая сбааресдає адссаваасе аачавачатва зтво сеававасато часестоаусч адчдсасосавнас ассттатач усосестсасо совтаасати зв
Ессадассва адодссстоавй асоаесавнать сесстасссоу сусисосаса субасаавеос зво таєссстста сЕсСавеааавн стдеєводєвтс ассудЕссте базвававаа адваєстьвою зввБо сЕдЕссоддда адаадачвав Евраєсеувд ацаеасасачач ваачаеазчацчаєч адачачадчаа 4020 зчдадачаачеа ададаодчачча сессовпуадоєЄ Єсоаосасстуєсєс саасстсбаЯас ссстдєсаде 1580 ссаздазуаа бсоссавуусоає ссабудуєто дсадсобсаос асууасесає сбадсхсеобаєс 8140 гсадстаєоб азосоддасса асссвацтасс басобосста ясоатасчаєса вадежаеснаа 4280 дссацсаздча адеоводеога свпаєчаоасаве Ссресестцсе ссгечсасбас обуавнасав 4760 асосвучсва чессгадаарс сСЕссгасссу Ссцдсастода асассоаоса вЕсссасясве 432 чесессдавтає состесдубе ссдсссага сдасдссосе весстуєудсєчЧча ссасочадеся 4380 васастссса авсудусавав Чававссасо васттвосса сусауєсяся сгусСасеусу 4440 зЧаводосаву сосоЗвівддо сазвацаєсЯсд аунсваваса асаяасесвасо ассаєбавауда 4500 засаавуссся сучас діся бавусадесва бестудксає жЕбосочдаєєс чадєЕвовеса 4560 аддсбвнасєся ааваєссудс счаєдавста асасатвтатс вдсдкадато сасачвасуає 46750 їкасраасва абвстасдадс стедссадач садова всеє дссадесавє ссачабводесс 4600 сс ахсдса сстсасаєо абодссададс аз сьсаса гавусьстав счвасочаютса. да аскааєссосяЯя адаслсдаєсь атачасасс сеставасссос веЕчаксаавна сссосоавдав 4890 зсасстЕссса сасастсвгадч ссасастанс сдаудаасаса бадаччасаадс ваСассаєаава 50 асєссозачоача часстссодоє чесЯасоачЕа ассвосесусє ссесестосте Есе ове 4520 сабеЕквЕЕс сесоасеседу сстеаєсте Судесттусть аусесодчЧво чдусчачачою 4 зад чЧастсозоадс дсдсосача: счздсоасадссу сдасочдаеччч вестсосаде содаасеове ЗОо4о0 чдесаддсоавдад агссддсесу дасстсєдо ддвасддадс Єскезчавав адассєаєсда 5ІО0 тссадссусєвЯа сбочодовада сЧчаєчазада ЕЕ аваанс ссуссодрдеоє авасаацчаєс БО зачдаачаччч чЧававчауеса стасозкеква бавевсвата сбасессествася дсЕсрсоасосаа за чеєачаєує адстадасєове бесеЕкевсоє ЄсСЕвЯсодас аддазсссува ссосроводса 5280 тЕхЯасссясся дач стсс срЕссСагчас Спусчасава бусавчсстсу сосададесе зва тЕесрасаочє адавусцасо ааєсасоучес вассессоваса абсессоча дсасачсаєа задо ассаздчіса ссосснаєсс суадессову ассовассаса зссвчусбассс чдогачесдає 5АбО азссссовдаєсс ссасссвода ачачесаваєс Басазвоачадче, сесосусасає дассавзучає зЗ2го тсссосасчз аддсоссууда саассссасо дссовасовод ссассудчає сдусавесес 550 чЧссосвдуде адаєсстадду сдедЕваЯс дбсосоєсоя саддбаєтеє сасотествес Зеяо тассадтост ссстдзасає сабеасадесс бесдасуєся ассосгеачва пасесвеЕватсд 5700
Ччессавуєссо аадксссуат счасавгулач ассдаусачес асуссаауво сазудссета 8150 чесчадсьус ааучостоса айзсаастсс туваастасу гсаасзсЯась звасоссьда зага задзацаєдс стояв додексосвау осчдстсосацча асечевісеу суадевуєсе зва тоссацосса ацесссаєсєть соудсеоваєтео асадсештсот ссечесусссо саазсесдЧад вдо чЧросЕдсврос бдсосасоба сусосовудає десавасовоссо ассСостсеєв добуаасораю во щцессадеусеє ссуудсувуда асудчссосає єссбсоудавчч асоссодссда ядЕвесбаседе ОБО сдссадевча адссдассса асадсасаєсс дассаєстчся ссавсбадса сазсЯссуде відо згдаасявдас Бцдачоаододексе сасстасцає чсасаддаосса во ссааєсвя сеЕСссаснус 5180 чацаєдаєсссо сдассябсою чдчдассічасо досставЕсс сесссстаєча сакссясста Ге) тастесавачо чедссавчає суацекоуаос сесчвовст вбасудаєсос сабеєссста 5300 сссасудсесся сссвовауса судссосаєсс гростасссов содачдваєтс сагтссусаву азбо взессассвас содастассю ссацдасаєс садевссаса сдсосчеставна дссадаєтают 5 гЕсдадсазцач астсосссав ссастадчуссо ддсвастводяд Жосдадассяа уссствосаво бАВО честсстсчЧа ачасчатсяс сЕсссевсюс Басуздодчаса адсссаєссова дсосаєбссад 6550 задесбусссо бсдасддсса дазддвсокас сусаєсаєсту ссвасасода сотечедаєь свой тадссодвасЯа чдсзадуєста ссродасуєс асодвавадчанся астоссесса доасачасчас ваБО садавчдався адассіссає ссачасостає астосавадо чдсавсвкаєуч ссасакесес 6720 чсссаччдаес ссатсдасса стадосЯасоє дадасовову асудадсосое дадвчдаадвусо елаво гастсессасс ачстдвасса сусучачеве єбестцасує вачасочеву Чуадсассавс ва сесстЕстлвса сстоацасссяа ссоустссатс дасттоєвса асассассуа суссчадавя евОой вссасссачс бодссоуучас саачадостас десссесстадссоє соддососеве сабсаевдад своо
ЧЕссавоачдебє Єсассччкчда свасеосоуєвкУу Ексетооваца аЧкестсчава стресаєсуєсо то20 звадрссаачуа бсасссвуав сьсстевбасо Ебуссссаво зсвівасецдоу оссусаєесяс това тїасадсстоса ссаєдаасст дедессаєЕс Чдіоссадвааєсс ссазсваєчда ссовсстаФвЕс т14о акбтасаєса асазузсєсав заасавзддво даєчассьоа сесвесадає себссдасево 1200 дссассясза астіссвнасаї яуасесСсоса часоасвача вссяассчає сассцдоасосі 72560 чадссствсо єстесазода двадаєсстас зісчасвача Бедвоаєсає ссоссатеосяд 732о стадєчЧасачта авассстоасьЕ чдааєсєссуева гас єодда сабасастса ссеачдчЕса9 73З8о ачесааєсса ЧдЕЕудасогас застає Есасачаувев чЧавзасасас ссовеваєсд п7Ао тЯдЕссстрьс сссадбуєсть согувассту бодсважєсоддс вассусеова садавссуде 7500 чатцаасавза бдадчааасва аєсоаввесва ЕСстдадсоє ваавааааае дааєстадаюєс 75БО
БЯБЧдрЯвЯБЕ ЕсСЕЕддавсс сассєрсЯвс вадссіусоє сдчадасався асаєусетв сою ТЕО саєсаасату чадоадавузау зчтачуцзадав аусусодест додссасстсс ассуссасає 7 68О гавссастчЯа ссавдостоссес сасасовсса акостсвааодч седазстесаво сасадссавсс та чеЕссасстс сассасесуса стасестаде сгсусосавос ацеосассуво васадсстьссть 7 стссадтсаво абаададчада цдцадаслаацчад дачдвоубадес авсосоададвя бачуааєаее тава асагодчдцоас гассоєстуу сзадесаєкє ЄуосЗєкдеса ауссасоасва асаазувчоеаоваа 7 зго ччаєсстчадсос асссоуєсоч ваздуєсаст содчасаосає сстестаста зчазЕсассаа 7980 зазаваасач сссодзчачес абсссочачає дчаваоссуєсь сссадчачасо сосесачувае ОО ассаваєсьосагааававасає садааазаьс ссессзабов возвесстагбаа ссвсєзанас в10о0 гдоссссває ссуазчддоуау СЕсаваасва гавазвісве я5Есодваєся васеєссванєье 160 теасстгавзо ссссссдаза сстсавсдУує вазасасова осоФдтесвачо зУусаєкчУвсо в2го
ІсеЕссраєссс сЕсСсвававау адтсвагсас вассадвасс вавастансьв чсбадасСоса в28О аЧаасссаєрсс дадовановза бвдяссаєбцд сосадосоєад бсассавесоє ссосестестга 8ЗзЗ40 стоссчеве бЕЧаваєставз авассовава агаєодоасає чдастачессодс сдасададсо 8450 часоадававі часочдаасаа ссостеуаає бобасоссва сбасусссає саасссасає або чессастчаса абБседусссс впсасосудкау дсссасссає аадсоачаса бссадбесчстьео 5 чсадсвасса чгдодсссас сбсссвобда дедчесачаса чЧасссаддчаєє сстасесаєс 5 васаставає азазсдчоасав дааксаєсвссо састаавасс сстсаддвавйаа Бсесчаванє 840 ссавассадчс асачсссога ассагсочад дчадссазаде чздачсочачЕ дсвавассЧ аа чЧазасссазе счзачччаУюс айасчовава асусеосчачує сстсосуєє стабачавад 760 чачасчачся чЧачоанааа вассесстаєсас восусачача ааччсцсеве сусасвсодес авг гстссесосоа сссісстссу ссассоустса ссоассцевоЯд весссусеот сассадоетає ваво ссасссведЕ аваавсаваса аваасцувЕс ЄдавАсдеввсс абкестесяє вссесувачь вдо вдосдсдствс даєстдвуда Єдааесесаод Едасостдоая оБуєдеасьсу сеекеасереа. Зоо тачдаєстдьс доаєадаєстоа десеєсЕЧдЕо Чеворсчава сссочавсья сЯвеЕбесдаєс щ06О зачабЧдасаде сдеччЧасото сдсазаасячвє ссссаєсьоч сассчачаса ссзачаассс 120 ааавнсчаса саагагсеазу часа асоодоврес асстуавстад секобетеосо зво
Бадстачбаве седсссесве єкуДдоводакес таввтсвасевє абасЕсЯссє суддаєачаєсе зада гзаєсавсаєс ЄЕдДЕССУВСЕ сстсваат вс хСсЗзсстача єсовасачовва абсудсаєуаєсд ззо9о часссосчсса чаєсоссаса всссуєдєво вавсадссося, сечаєєчасо чавсквдаса з360 тЕррастоєсб ЧЕссасстад ассвусраскс зедсскаваєс єсСвасєссаєв уссєаксаво зага взасадавста бвасьсачуєс асаєдчктаєає аоссдадвася содасссдба двагсдтасає 480
Бадстдсдачо гвадаастає сгсадецесва дсасадаваа авагассксва асачаєсвечо зва саастатьта акочсестсеа чдвассанцоє сестаусцсє сЯвсссьдсса сачтааеее зоб
Есвдасстдає стоадазасав оссеассассаек асссттувава оссясткачва составсьда зе задаседває сараєазась дуЕссасєсву дастосота гссадсестаує сстдававає зт ссвЕдеЕцаєза азааааєтсв гзаадасЯсва ЄЕсСЕесотЕдава соєва ксЯа сестаєдсад зво астдаєссає чадсоасавауєЕ адсачаасоє сезваєодчтоє дсадавсеовса собесбавсь ЗВ сезааєстьсюьс дазаєссаді савасчсваає своссєтаєс собєссссва вадасосадо 00 засакссасяа ассссбасссоя авсбсуксоє счдбодачаєсс давача сачавчасає або гаассдасвс БдачессоецЕ ссбсісваачуа ссасадбессе вБогеєсосасо чеугасаєсцо 10020
ЕЕсасодідс аздсауосуд сседсааеосу сссусавасс сестудесЕЕ Сссоадавосо 19080 тесадсаскос судсдасавач ссувостсос восудссеоєь сасеасксоче дассксдсда 19150
Чдедагонавс дсусаєсясо засо сссоч вабдсавоча суссаєстає асчадевачу 10250 ссасдсачус чагуддсдес сусасссоба аудавоавдоса сасстоФаєс ассчасодеа тО0260 тсудсавасцча счдсевостад чЧечессдаду сдссустсдуа ЖЕСЕсучсав: уссдссасаа 10320 чЧчегадссуссє дасчасоудо сЕосуссудад бсбасувеосв сдудасадсасс ЄЕсаєсоуаа ТЛоз50 асадсстсоєє сасзазаєас ссочасоцасс са содаа ссоустасуєс тазасачоасу 19540 тцсадусчав апсчцазчас дусааседос Беусосаєсає сесасосодоа ссчвначасоас 19500 сдасдссдає сасстассас дгассчаєод сессочсаса часбудваедесо десЯяас Часта 108580 тсдесчддрасЄ саадсавасчосо додсатсаєсзча сдозсасоса чсочаєссасея асчсадсдате 19550 згасядааза чанчесдсач чусевеядасу ссавостьас сЯабсдачаєсу украсудаса 19єва чечдвасосас сасосусєсту давачуссочеу девадетсвес судссазуво ассчасуєою тат74о пгачоасчассс деЕсстодвасд чессстосооо счоБсвдедас сесдсвоев сседодссссу т103800 асчдєсассас ссієсєваєсодед стьдатсавсс сставосеоцевс сдасстсаво седасчссоє 198560 зачазаєозад сдосцдасаєс чаадесаєса асосцдсясос гдссдссаде даачасасад їоч2а садчасстася сатссчсьсс гссаєчсотоа аздцдосувсаєс дчсадеседаа чассасасче ТО989 стесзасдає счасдаасає ссаасосоу ссоссуссос сдостососа учаачочасзча 11050 ссасчасова садсстоадчав чдвасуссася їсавусвава счассосссс седассоса 11190 сеазсуаЯасСоє савусссває ддсасачдавь дссагоувчвч сдачасчсеса сотодсечвав ї1160 чЧдечаЧдседесо сдаєдустач судсєсодса асассееуая сдосясецЕс досасаосате 11250 гтечассасосд сагосдосаєіа адсвесобод БЄсабодосст. собуседадва аассетавев 11280 сддсуддасача Боссасуася абсассасда дестоссдда всЕсасодає осуаруусеса 118340 чаесЕаЧасЧдс даадаєссдва сесеЕссдата судвадусьсо седасдадеє ссачадеєесх т11400
БадссраяддЕце сргЕоддсаасу стЕЧаєтаєє дегастасос Баєдчасстяє соусу 11460
Есссарсрає садтсратет ЯдеЕсСтУувесс дяааавазсаюю суотсєсета срасоаседає 11550 вЕсастсоса астессасра стастассеса касСтересас дсосовасесье стра содсає 11580 срегразраєс сзачеЕссава ЯдЕЕсдЕСУЧва вавсданадеє севсЕссУує вазуєвБусаЕ їтедо статаусаєє давав Есе сБосва даатсаваєсує дасеєссаце єдадсЯєдааа тт 7оа стадеЕсжвоад абассезчаві стосу воу сааесестоява ассадесуста сстачесеаа 1176о стазуєчавоа Єбссвааура васдсєостс вссадаазсас дсаустявоє даавачадчаа 11850 сасаєдваса согадссова гавадакьсоє оссссеавадса васессасоа аск 11880 ч«чавссссаа ггеадаваса сЕсозссуєу адсадесада десавсаєсса адссоствас т15540 тТагадвсавацє вБЕдстІсбура асачаавааса ссеатеєачва савесесчєє Сазваставсєв, 12000
Ччсасссдаса чддасасасся дсудусавас ссвададава зуадсасста ссачавсває 12560 садагасста авзадодсясо вавадавєста сссосдусодос савссусанса гдсавассна 1212820 ссасацудеє сососсодда чБасебдаса Есссдбдоца бваєдаєєсс єдЕссвасся 12180 сссавасувс чдуаазауоста асуасачадео гдсасжЕосва ваауатсоюст суддсвоужеє пе, чассудчдсса чдазчассуач Бдаосвуєтея ЄдасбтдЧаєсо ссгсаасдсо вдесасядасе т-300 тТаусасядесо ссдвазаавто ст, 2322 «2105 28
8119 11787 «р1тРз» ДНК «213з Штучна послідовність «вод» «ге конетрукція ДИК 418 «Об» 28 вазачсссста са вдассаєс сссутдосо содссастсас согоасечаЧа сопадесаса бо сацдастсац Єкстсвакта ававтсаєсву сствассуяде ссацілевас чдеадазасса 120 асасдсавцо босассоуаЕ доазацдоддс ачосусадеа ччвакасавкс ааєтсуєаааи 180 часвЕсавує ссчодаааєс Гасасччаєс адсваєсчачс абовсосчєса всаєсадчаєна шо заздзазуач гааттассваа СЕТ ссвБоВ асЕсадваас дсадасддссс дсаздсасках 00 їаганачсза аадгтасвіст Сбдасвазаса асаваєсаса абсосЯкста сстагбачоса збо авадсвнаєаа асвавсгтаве ставессоцча внассгісасе єедведтаєс басаєссяса 20 босазаєдчз чдастсавцчасо ававсьєса совассдакас дассассяєе савччесЯад 480 чкассЯсвае савссаваісо чдсануссава завсосатса вааавасаєесє єсарасссав за стасвавісс авБувубасаа стасваєссаєс авадевасда ссСсводвасеса асвачувесс БОЮ тадазаавса саєазаччва ачдьєЕсавсаявав Есшссобаававо асавчачдає ввасстеюват бо
Есадраасає ЕбдсаусЕсЕ бстачУєсва вгавагасасє єЧЕєсосствач Бодвасавауса тега таасоадтаса астасавуєу сеЕвасьсос сасавнаяоє сседдесаєста чдаччеосасдча 780
ЕсБадасасає СЕСрастсав аасаваане ссосасаєсс сттрасваєсє савасесвас ва асасаавсана сазчазчаван аасаватзнає ассзаєссца удачедвасаа задчассата зо тсакссаєса астствеаєсс аксеассссео асетсвсяує ссосдасадеча пваасечава Зо задвасасає саааєтасаа дсасавсяасва БбЄдоаорасвазча авдаасауссв соссаасоасо 195920 агаасастсв застсаусач чЧассессаево сусосусавс давассчасеа саєбдаасте 1о8о0 часчаасусо здссоваассоя атдчасасава счавачесад ядсстсачеча дсассусват 1150 счаєстааес саєчасаєсуа бдавасассає стасаєбссва абстестаєча я ссЕсав 1790 чадсаєстоас ачсавкесрс агбачзазЕєса агасассвоє аБстабаєка чскЕсстсосда 1260 чачдессеост свдасаєсстса абадссоуєЄав ода сосасе бабседбаче чада 1320 сезассЯєс сЕсестсссу аддасстовча дсдсавосос єстасесрсо Часосаюссє 1380 сетЕсачдвуве согосаддся чссцдоотоаца ЄувЗідадчеса аєсодЕсвсоа ЕчадчачЕ ває 1440 чзасоцачсядч акусодсосуда чачрцаєдад бачає ядсеадедака. сдсадсаедаа 1590 часавБсоаєча бвааадсотта асусчарсус ачбаствуса вадааавато суєсававаа 1550 їазаздадьє чсастосвач ссосссазава Зазчавасча ссочааазув сосавстяюса 1620 вагачасачав ассстсасаа стаєсссчазає девовосава дсссосуава сдвастасас 1580 зазсассост діаєтасаєьЕ стаєсдчавава гадстадсачає дсоскгаача авачстсагаав 1740 чаассеоаає чіачассчаєа сСссассатає сакдчасцчоє аксасасачс дастоастдат 1550 ччаасяассдач сБесосчаєтУ Чдвагсгусває басваєдуаза ЄСчдадсавадча сабо або засастЧясс засаствуду ачазуссактс садсвацата сусасосаав чадваадесаає ївв асадсовсад ссудкадаса стадасаєсєса ссвадвдаса вусзаачова сазававоаа 1585 астссввавсе ЄєкЕсавасосю дскасааесва асаачевчає саасасаєса вавкастуво 2040 ачеасвраєт ссіЕєсадаса васаасаєства ваваасвзачьцдсо вбсЕдатевЕ дасвваєаає іа сасзаєсааач чЧачсавчачає авасассава асеЕссавсає статавсрає ссськсачає 2160
ЧЕтавсазет гаасацсаса саазсазаава сасваєсачоа абасстаавсо ссучдесвавса рЕФО вквадстсса садасуваса вассастака драсссасста саатасчавс сестарасса удо
Егдасесара садсасдазу сстасбчсста вастінаєсвос зааєтссєуа асесаачтао 24 ссрагаясас сваєвсцвас ссзавсянзає ассоствадче вссовавсотасо асасевссса КА дО тахвоассоаса садсостає сЕшсУуєвссо бЄдссассаєц беостатаєє свусваєстає 2460 зазудчасудас аадтвассад сасадусада асасчаєсвтс воувабеусСаве сстачавсєеа 252 четазассас ссЕсадсває сассасасав Часдачдсаєсо адачЧавасує чдсадсачеваса 2580 зачасадчача чЧсодчаеазчсдат счсуєассса ечасчассся дсабоссосбс вссаваєсдаа 25 асдвластьсс блатасауау чдаачузкстс дсоваучаса усоававеса дсссаєсся 2790
Есасяатсаде чаачарасса сассаасеса ссросісс ув абасекечео давасусево 2тва евБЕЕсросаєс чдасдстосьс дЕдочЕоОЧаЯ вЕссаєетв удадвсосаєссу седасададчу во саїсьтсаво дЧдатеодесьев сежетассвяс ааєозЕуава сссбачдсаддач ссасествесся 2880
ЕбЕссастає сгбсвсаара аадсчдасадча басскодааса асуздавсссуч ачдсачдуєевко вай сччасаєсас сстєЕсдЕсоа вавдссбсва Есодассаєс всаєсоваєсс астбуєтьку зп задасосячо Содавсасев боБссскоса очдасасьсос счсодзосоЧча чавссаєско зЗ050 счддаассаєї чісчадсазач чзсаєосссава счасядессе Ессессаєсо сазгдасече 3120 аєЕсасчдча чдесасесбрссс СвБЕсСссаєса Гесовсаве аавчусчЧасва вбачссачас зЗ180 засчаазассос чдадчаЧчассь ссудатаєса ссесттсатЯ заааєскса зссоддасека зго садсстодсва дссводсоаЗоу сусодоадаєс садвавасває всабачасбеє варкессосре ззоо сЕСБсдеаст саваянссадча асааєекаєє єсжєсасесвє бсабсобсда асосаєєдає зво частачссда сЕасСасвачЕ асадаазаса обацачавач ваасасааса сацачаєдве заго
Ісаксачаєсє сасавуваєєв сусасвсяса Єсавассоваве содостстссаас седавесоває 3480 асасусссва асдсатодсач взасссазютса чадвосссає сасачесода содчдачасдаг з54О0 сесзассьса седчатоасача сссосеУсЕ сдувоасечавуч чдасссвусассавсдносад зво
ЕссаврЕства ссяссасдада вдсссаваєь зцдачссава дсаддсддаду сдавачавсво зве чсачдассача ЕсассЯувост Дт Есараде стсуєтвдасяа задассасса чддайаесаєе зчаа чЕБаЯдачексс сацчасчавса чусасачав саесачЕЗачач осасачсчва сосодасчса зТа чкачсясЕодс адсавучсау сеччачснсаду Чусовосться вастодусув сУзачсвесда зво зчассестсс вздаасадса чав оссасо досдавасос додвассессва счасоадчачас зо асссоуводас адудсосадуд с ссибдассас дддвадсночя дедасессьев соддсчєсдав звво чавЕасЕдаво аадчесцчасоац вусадедеади осачеєставо ваччадчасод Бассосгаед дпрРО чЧЕсвЕсдсаєс адчавчсаєє ссдсобадчеЕв сачесводдься дадтсаччєсе сстссачада 4080 ствассадся дестсадЧсу ссадосодуво даєдавасесо Бочосоддача сугадаесавь 4150 овеЕвасаєста чдадтсусазо сСегадакада чсасстсцгос ссставссво собастьвдаа 4290 чаадссдавс сссдтдаедо ссацуєачає сскуссасс удссавдсса счасЯаседа 426О чЧегадчсдЧчаєса чЕдесЧчасваа сстоссаддес десуваадчає адессесцча сечастсуце 4320 чЧчасстасед ссусвувазу чачачаєЧдає суєсстедавч чазсоедаєча ачадевсад 4380 сісдасчрад сєБдссудаєс аадрадевоава ддадссосту ссаавесаче сбудосьсво 48240 чЧесдсогсаєЧо засксчавідс сстадачата зссуавсава тададевьде чаасаааФве 4500 стсдавоадас аддавчоатаво. часесчраєсЕє стовчасоучіс асавосачча ачаєчеадаве 455ей сакадзачатоа ссоасчаочтса стече о дбасусєсстто чадтасачас чаасассява 4650 чавачадчавс вадасчасса ччсесвочас одссацавсс востсссосце чавадесчаве 40 чаастрдасс саграсоагедЕ адасувачеас сеєсвуцеса гсовучесуа суседсасса Дт чЧЕЕдасасяч судеЕсЯЧваЕ астаєсудав садсетєсаде садодасучць адаасесуде 4850 часзсссгос чадаавусаус ссовевосто досдаачасс соЗзадсоссею ссаудсаваса бо чачоесучуєу єБдддсачссє чудссадує адусачоавс вудасссода ассбучадає 4590 часачааоачаєс досасччаче будсадаваєа счасосудос соаддчадааса дслсасоадає 4580 дедассстуа чадодевсау вдасаовдоадчЧа савазчдеасе всстсесвч адвгсвасас зОо40 часа сестсцвааячЄ СвДксСсвосву десттасвує сочЧчесаччч ссесачасВе 5БІОЮ часадсСастсос тсдатестев сдрсувссад дастсссваст тоавдесаєча зчасесоеса 5160 чЧчавассоадсая ссудададсс ачасдЧвУєс саздаводчає состачавоя засад ададе 5280 асстдсдаач чЧачасусова судасусосау саєстососа асовсодада єЧесуцЕвсо 5280 часчдсесчєсс бЕЧасдабча ачдсводссвад даєстсоява дасчачессо сдуєсвсдесо зЗ40) садчавнстсс сгдсадекса чдесствесад даєучдачеьвЯ дадеЕвоссда ссачсувува з40а стччвечБоЯа сБадЧдессада десстдаче чадо сдаєсс стчаєсаває сокадслосдча ЗО чечасставса чдодестодеса гчассосдаєса ссбстасста сСаававачеє» сосодсасаада з5а0 ссвдсаєсвує сасаваєсавє даасадчавааз ествосдає васзасцсса взаддарссав ЗВО асЕстассса сазавачаад аваачавадчає стаусасаєс таазадссьчЧас чаадсадсаф зЗедо заасагагаа ааасабазає сасацічесе кеесрососвс сосстуаєссє сдвссачеас 5796 часадаваєсс стазасссос сатсаєстос ссосвасазсу усочассуса чдасстасаєо з'БО счадЧадесстс абьсососусо ачассодчсс ссдовссеасу ссечодсовева ссесвчссда заго чадаєсссдс сосксесоуєсдосавесдаксво ддсодсодсаєу задесадєсстс всусосассо во ваасрассва дуссаавцчає счадчаєссзву асудаазаза вавсдсаоава адзааачачеа з540 чзачачадчеччч зсадесвассд чдедасодсод ададссгссо садвосветає чеавоагоеєеае вОоОо сссотасбчвчо бстссвабад сасадевсоа ссатасзчаа дсассассссс здача сасисоу 5060 вічасестьос ваагоудаає чдваасадсоссо ссебасаова дчавсссь сасачесуєе 120 асєтасуєксо єсасвсусває бедбуварад одсєсаєсовоава садесет сю ссасатсаєь 5ІВО гсасссссса сЕСосастац ачдавсссос ЕсСасСессвто свасаначає авадарасе 6249 стЕдчсадоаса сусссавнова ссссусаєсв ЕсесосовЕсЕ Чсссуоуссе сасялачесад 5300 стдстсдава вБуасвнадає сСасстссава часооссовоюї васоєссавос остсаусудча езей тасбебеБскс бдаазаєєстас Едассаєдає асасдїєдева даасадсаче сбасеседає 6420
Бадзадатвссв Есаєтдався ссокоаєачеве БЕдЯдстваєч ссєкодачаєс єставасеость бівО часстсоєта аддасстсуда стдачааєсс сесстсасва асстоєчачеа асучоавасе 6510 ствЕсстодеЕс сровосзасбас свасссцдвак аавокщасво одстсзвасе срассуаєта вва засесаавьстї сддвасускаєс саааєссеотодв чЧчесссавцаста астертсєває явдссдссаєсь бБеБО чЧчоедЕссцдьса сасаосаєвтау дач дудсе дсесвосасая ссср ссоса сдебакесву 620 вбосесастс чрастачачу ааєсстсовкє аєссєкусва беаведсава дався б'во чрачдакчсце стаасааєсс Бусассаєвсе слі сстасс будсосеосає застессадеву ба сЕсчасоєсся асаачаєсас бессавачає ссосасєсаас стсаадссто соєва 00
ЗЕжЕсСтстча аасттасічда ссаєчаєсува вБоБЧусЕЗзуаа сачкавьсса свстдаєьча БО вчдассстюса вбЕдатсссоє дразсьЕсро Чесваєчасє Чдаачастеє дсассстдас того ссрЕдссозуч сіссудасосЯа адазссатоб бсосвасаавасє бссссуача свзасавасяато тво свеЕсЕсносСа асасоодадчач вадачачасу саовавуєає сусссудесьв сстссвесце т140 сасастауєс ваободдссаудо бсЕсосасає сасоваєусо аодадддедадсе ЕсСКадсасад 7200 ссаосЯсьвс ассотосасов ссусавтасе осбазсксосдо ссаасадеся соуссвасоцс Тео абресебесбсоЯд Єсазсаєазу адачададчаюд аадачдауад Бадссаєува садаччечаа 735 асадрасато чадестассу стЕдчсавав Баєютесоччає сдссаачеся чдссвакаау зво чачвачучасс соддссабсосо чдЕтадвавоая ббастачавє ваабасськес бастадааєо Та чссаваавала аатадссЕда дадссаєссоа дадвасчавдє гасссоуеве воадеаевеве ЗО зазчдасассза агсссаєааа аасатсачаа авасвоссоте чагсовавадчаєе сакєдассаєє т5БО зааасєтоассс псдвасьеодуаа чучатьсева азсааттаза ассасуєссу акесбааувє 762 саастстсасс стазасесссте буазаєсстова асудевазає асовасссує саучтадсає 7680
Часто асеьсобтсса аназуаанта ассвасвааса чуавссававе спиасаФгерає 7740 чЧессавзаоачес саєсссдавчса аасзасацчаєс сабодеуссву десседессасо воссесбесосо 7воо0 тссрадстрсс садскЕствцав ЄЕесазавіс саававнатсаєс тудсаєдчасьу цосдсоздаєд ве чачесччоасуч азаасчасачд засавссосстї сосчтвавтсстаєс сссвастаст ссосассаваєсс не сасасдссас гуасазасосу скссоассої сакдадссса сствсазаоасеа здасєсадчь 7980 састсусвує аассавусаздо сссаєстесс вубовассадс сусвтачаєсс чдадасвЕсссво 3040 сеасссасас бавасазаао сдодсяаєдавра БбЕстасвста авасестсваа зававксєса в10о авассесаза ссачівсадЕ сссбдасосяс Бодададедос звавоусудачс удача саза в160 акгтадазаас тжваавсоача чадесвавод сававасдес даздсовессс ссдстетата гай чазачучоао чадечудача содавасось ассвовосус воувздавачоає ссЕссугасє в2гва тсадссогстсв содсодсесстс сессусосЯєс осЕсдссдсєю 5Ексуєссес дсодссвсоу 8340 чЧстЕацесатєс садчтааваєс аваєсвававс дчасоваасоа оссосарсео восЯбЕєере ва чсадсачедес четодатст ЧдеЕчачсаЧчас споссдічасс свЕдЧчадеавра чЧЕссасЕсУ або
ЕсБаасвовс стоаточасаа асссодсеть сота седасеакссояу аресасус ваг
ЕдассадечаЯа садсссакад асссуєвсоцаа ас єсаца бсєчасадєчву аудаєцеваад во заєсауддаза гЧасдєваава ггадавудає сссодаєадода чаєссаєстца аєсадессає ве ссросстастя агаваєсствувЕ остео вчаєскадусь адедсавсаєт са еЕссоадає 700 ачаєстчаєс аакуеєсквУуєЕ Бас єтоссса васссьссас стачаєссчса падчаааєоячо втба акодсаоФдавсо дотсучаєва ссасчдактсося бБасстдвваса ссоссьсЯчє сдасадвдавсо ваО їчабаєссеєса сідосдЕсса сстачасбссу Састессзсв батасссває ссоксассва заво гадає ав асгаєаасс Гасудсаєвсо бабодасоаоза Базеадах сочцсаоракя вла тасаєсєсчсто счадссзача астясессад восавіусаєса Чеаназавнаса сстадасада зво тсдаЧченасс атссдасаае сьссдаваєс агостерава чоадссодвсв ссесоаваова, забо аєсвЕсЕгодає стчавєстдаа дагазовоасзе астабаєсст базауоєсає Євудавсуєта 2120 стдаваудо БбоаогассасдЕ очасвачссо асохкуєдавє сосвавссУє оссвдБовБсда зво тавабссбує дабазавчаза агустваауд счєватьсЯяє дававеєса сЕЕвавсстга 250 бдсадеасьда бссаєдосадє вадссадсву взассвасває деБуБдсяда асссасатев ззодо тасссссавс стсссодааає ссачдссавсу савасоїєсс зтатссаєвс ссссдаавчас 2350 чсачсачсає ссасдадчесь ахсочавскс чЕзоєсуєода даватооаача адачеєЧчаває 820 часЯясбаате чдодастстчачеа СЕсарсстог сСаводотсаку бессстуєьеЕ ссасудсЯта ча8о савастссас дагасзвзауса чЧесуцдцеасеце азссусосує ваавссоевУ сс ксоеао задо зассорссуєс актсосесоесУ асавусстає ссьсссасодча сестосатує ссучеУЧееє зей счсдадсодь давасусуса ссассудлеост бссбодвачос уасодасуєса ссаабаєчау зебо сазчадссатуа саузсчаста дсасссуєаєс ссесвачува сусцасасст садвЕсаєеса 720 ткчдасажсодс аагддсудсс босічосасо Едачусосвуа свсдається чдоваєдесяс зтво сасчадчевує суссочасєча Гддассесксої содцодсстаєс дасессчаса дсаєссьсовай зво сзасзасаос подсотовнсав адсассодчаї уасдссосаса свдвасссуєс сусасааває 500 чачеасоасваач чрдванссзд вачасоавсда сезсскссос зупасостос чЧечадесодва збо часдссдасо ссдатсвесь ассдосвдрусс вдасудоєстсс чсасвачсча адеЕссассає 15520 чЧагадстІсдсо досстсваса сусосудсво сасуасучдес ассуачсеєда Ссасцасуєа 1008 счдассагасу чЧазавчнкЯс бдсядодеке Бдуасоабссаво сесвссаксоЯ ачасучаєсає 10146 ччасадсуво ссавосаєсс дессдодааЗу ссосасдовад сосасодадсс явадссассда 10200 задгдссддас дасссуєсст счасудестю ссоустдаєє дсуавссебде ссдекссоуау т10960 сусосасабс ассаєсссеса асдгадскаво даассосовдос счогсосучес всаєсствас 10320 чЧчетасадпав акдчддечоссу асаєсссавує саєсавсосу суссскуссоа дсодсовача 193850 сасадсодас стдсчсасосю дсгосстссво зссоовазаус пссасучєое созчавчвесо 10б45а садсдсетрса акдаєсвасу вагаксечає сссосдеогаєе дсочссуєсь седедадазау 10505
Часдассудва асдааєсудєс сдудаадваст осасоаєсзад давачодаєсо дсоссксоае 10550 сгагсадссває чддссісааче саасодсесче осодаєстосзчає дазадосзчача сабсдосеу то9овго сдбасдвучс суссстдасу дсвадодасе суусвасчос беодасясся ссуєсуссас 10680 ссвасстсєцчас сассщдеаєса ссасудачевкЕ ссрсчсеаса аддослеосає сочавнаассс 10740 счдЕСВсвчаба часчасдоса очаєчаєсяєс сасчачЧессе сосчдчаєссосса счудассосеає 108500 ччесцдЧсса чдасчодаача Сбодавокесо счдаетастава чссусосЯає садекосада това чЧесестчсст часдсессоач савзсусьєЗа сразсастос тассосаєча сстосссука 19920 тачастссва сссвісвуєЄь сагаєдвсеву сссстовавна асасврасто росЯднессавга 13550 тадоадЕсьЯдс єгЕдвбадстсе состустЯявд взвостдсУуєва сЕсасосадва оссЕбсСвЕтає 11540 часавсьста акасосваучє ссоравЕссУ сСсдсСавнаса вадссвстає ЕЄсоЯараавцє 11750 гасаБесраса дсастдавнає сЯБЕСвЕстУу сесуадвата асвадаєдаєся сбачЕрадео 11160
Бадаазстачо срлеадасасс счЧассосста Чдексдсаватє ссчадчатоядо соскасттад з1220 чедадстава счдасаєсссть вадравабоудс бесссассву впакасобадес сатасачаваа. 11280 чачЧавсечсЯяхє давасасобад стасчсааач асеадсасссос вассаваєст сааедавфнве 11340 гаєссааЧчатс стваарестад авасасьсуа стсучачесваЯа стачадосас воссаачессе т1590 стаастаєУа сазачьвусть стасбаасавза азасаєссаєс тачдачечуєв чечЕсЕавас 1146а тассадкядєс сдасвучата сакеуссотоу савасотаву аЧававуавує зссраєвсадча 11529 авсвассозчовЕ асттазавуд чсоаосодававу вдвссавесує гсасссаювє сао васає т15вОо чдесазссаса чодссссст сцадчаціусоь Бддосзсвссо сдсцчасааву вого бесьо 11540 вассасссва асуєсучааа чссєзасочас счдассвоасавос їссававааача соссвЕдаст 11700 сассЕчоаЧЕє здудссзчазад Есдводбаддоєс Бостабдасо сдавссстса всасаоєесЯае Т7бо чаасасааса сачдедесаза аааюесе 11787 «АД» а «112 19382 «125 ДНК «піз» Штучна посліцовність «Ох «д23» конструкщія ДНК 419 «ПО» са вазадтссса Багодаєсаєс Еседбвдсос сеєсосксає собасЕдода ддаваодаєдса бо саєвадчстсва єБестсзаєчоа авастаєссва сосівасочдаєс гсадсобсгадс чсадааасса: ї2го асасодсаадче бссаседуд савзацеадс вустосоуса ччататаєсо заткрасававе 180 частссацук ссдвадаваєо бясасзчасс аддсватзачс Всовсзесся ягасачадаа Аа азавдазеавдац саассассав СЕС са агссааааве Одсачасасос чсавчсеєває за таєазазьда вадгасавьв єдасаааасу асаеаваєсава восодесава сссасаддеу зво засодсавасаа асваарвасі сткавессодда взабоєкваєс сєсуасосоасо Єасаєссаєси го
Хссазавача чусєкачаєу ауавзасссса сувсосдабус дуссяасесасо сузоачЧесоау і4вО чівссесвЯс свассваєва зсавоссаба аввсчсаєстса вавнасавсо ссабасесва зай сврасаваєас агдадсатаа скараавеває звазчеавсча бсбазавсоссу абвзаччаєссео во гддавзачі са сагаазнодаа ачгссакава БчЕсстввавс асаачеччвс ввасбсаває вба тсаАдсзасає ссдсадссвЕ сссаЧассгЯа вавасасасю бобсусссаа счвасбавєся 7 тазасЗуваса ассасвауєу сстсвссесе сасбасєваєєс седоасесвеса чЧачоссаовча. то тт ддасасає євЕссассоза аасадварев Есадовсвссю сЕкасваєть саватєвсяає 540 зсасавсава гаацдадаеаав авсаваєсаас абсваєседа даасдаасяа авддассата зво тсаєссабса асбоєссетес акссаєнсос акгЕтсасаче ссчасадсда вавсставва 60 вазазсасач пвазсьласав дсасавасава Бач сасаача аавасачювсє всссвавуєс їі всазсасрса авасісацтіад чассесовсаЯя Бадссдсоасаві Чеавастчаса сатедвассь 1080 часодвасоувЕ дЕсзаваасся агсдагасдва суєвачобач дсслсадода дсасвсоастад 1150 сзасбстаатс саєсчдасатсЯд гдаасаєсає стасаєтісва автгссотаїча чес ваа 1290 чачдсаєссгус ачсатьеєЕсс акачаасева абасацевачс ВеЕсЯкчста чебестеосца 125560 чЧчачдеЕрсессес стдсаестсяа асачессутаа Чеудетвосаєс бастсоосаує сучас їЗз2а ссвасозсс серсессускоа ачудессача сдсосавевоє Естассссве часове 13850
ЕСсТтЕсдоедев сстодсадцоса дсозсц ода Єдводачєста абссуцдесчвУу гавазоуваць 184о0 чаєсчачьяо асдесубсда чачсчаєдау ЕдЕвзасусь сБеЕзосдчава бЧсдегадаа їзда чзасакєсовча бавацсаєва асчсдчаксоє адбассвоаса васваваася сачесдавава. 15569 тзаааздаде чдсассосаад ссстсавзава дазчавасова сочдоваавача сссаасстаєа 1620 нагачасуча асссттасаа стаєєсдчавас десвсасччаа ссесточавау чачестаево 15580 азасастуєст чгагсадавь стабудваваа Свдстдовадає чессссавчца вачсссагаа 1740 чзавсетдавс дЕачасцасу срсасцчвєтас сабочаєЄаав ассдсвсвас Часедасуа 800 чЧчдасавочад сбсоссустса дтасссасає басвеасбчава боадсвавача стабсатоаває 1860 засассдуєс аасассадад здаазасаєс чдаоссавоааса субасСасава чЗадавусаає 1820 агадбубсад сСтоддтадаса стадасасса Есеудадуса зодададсая свававддая 1980 асЕссттавЕ єгставаств ятвасазсва асвачсачає сававдсасся ааабастебо 2040 апсасттатс ссттсачаса асаатанста азасазурас асосдаєосве част ас 252190 сасаасваза часачачаєс айзсачзсава абсссстсво гсасакеває ссссссваде 2160 дЕгаасааєс сазасавусаса саваєсавзнаа сяадчаазтавачча асаєстаавеь ссададсаваєта ав азсвацетсвд садасчазаса ааЕсассаєа вдбасстсста баввасчавеь ссстакваєка гева
Ебдасссаєц гадсаєчвад остасоасста васксваасачс азасесстЯда асосавуавує зай сетасазсас савасавубсаєс Єгазасеває взссуобавус ассаватсає асаєвкЕсься 200 тТассчдссавяа бадасксрав сопе са бассассаба сссєсбабаво ссустастас 2460 заводасочде вадсваєсад саСачосача всасчасссс ачЗачссессває себачаєосєсв 2гвоеО чЧчеБавассас ссгсвадсває сяасєсвсаєва чачачсассос адвуавасзс часачеавааса ОО задчсачачо чедчаЧчсдач счодсвессуа вада стса чедсуєсеєс сосаваєдчав 2640 акрдаветссс сСтасагадад чавЗдовеве десовазуваса соодвдасває чечесасеосо 2790 стасдрозас доводасвіса сарсавіссва седесеєссоа едасуєдааєє вавасуєси 2760 сЄЕЕрЕсСсазє чдасдосостс чУчсаЗадсодад вЕссаєсвсє додзчасвсаєсєа ссоудсвуача 2 ваєссстсвас чабуддастев совБЕсаєсує азаєдатуадса Екдкаддад ссасовЕссая 2850
ТЕрссастає срксасавса зачдсдасача Бадссочаса атачаасосяЯ адчачуєєьс 2540 сачдасаграс сосбстосіча вазассісва Гсддвосас є всатсваєсс астрасесосу зо зачасчвочЕ соддаасЯяаєсв СсСЕсЕсЕсса счаццдстсоє сабо дасесевесве завО
Здадассаєс чЧісодсадчадч дсаєсстьсвга счдасддесс посі стаїсо сааєсчає дає зЗ150 аквгдтгвода чссасессжеє СЕЕссоаева сесстісасаву вазусасач асСачеосасає З18о засадаяассс чадаача ссучасатта состекауссУЯ аазвусстов ассучасстя зай сашсстусад дстадсодесу соассдазаєс садзазавсас васасачаєссв аабсоссеюе Зз90
ЕСЕ ЕсЯдсасв сававаєсадча асвавесравєс Бсососзеесає ссассдесяа вес свуде ззво чаєгсадсоча сбасасазаує асадазавса обосодстяааач вавсясваса садачаєтьо ЗАгО хсабсачась содсавдааєт содсасасаса гсаассваас садссссавс срдавесдчаде заво акасасссав асесасосад васксвзасовз чЧасстсестас сасачебоча сузачасава зо сусанісстьа седасусСада сосссісасс сдвчасоавна Частсачсаєс савзечатсву Зоо
ЕссвВсСтсЕра сдессцада адосовсцуге ддвУєсседса усоддевадує судвадчєєта зевбо чЧевачІсаудя всаєсусесї бЧЕссагав ссСсотеЕдата своазсуаєтае чуувачесасє зтяй
ЧЕ ЧЧдВаЧЕссС годасуваса часосвудеє суєуаседач ссасаодсяча сусчсдасЧсу зтво чадеуєсас адсааудсад соаодуадевосву чдобсдасосту вастьсудчева соуавсссда 3840 дадаасрссткс аддаасадса даБЕдссасс ддЕдавдссть удасссьсва садасчаачас зво асссуачадаас аддеасчсаду сосгдассво дадсавосад седвдавоскссю сечеубссває зей чакассозач ладтсчасч адсочсЧчаЧе ссачобчавч аадсчачасчеа споссескеєт 4050 чЕстсвдсаєс ааддаадовсть ссдсосвась саосттузі че дчассваочесе ссссадчада ав срсдссавадса чЕстсачуєд дсадевдуво вдасдчавссє Єдачсадача сувадесаєие 140 чЧЕБадсЯєтТва дадесасаду став ува ддЕстесусье єсссоадссав судваседуча ОО часєчссдасс вЕсувБуасоус ссадусачас ссбдсодесвс доссавусову саасуєсаде 125БО чЧчесоаадсодвву дбодсодусада ссссссддсє десоваодчає востсссоада соудесвсЯуе 4320 ччасЕвоїся ссосбачавач чодвчаччкаає садссессечадч дЧчасессавада водасстоаає 4350 звгсчдасаєваяа ггдосадасс адсачсвдава осчадссоссссад содавасацеа свучесссає дао чЧчесЧдсаЕЧдЕада аасссцавадє ссегадачасуса доссазвсаяуя єЧочаосстос счабдчачее 45ОЮ стечасчдас заЧазадсоч чассусаєстсе совбувасасе чсдачсваача зчасачвсео 4560 счгчначаня ссусодаєса докодассво басдссесс чадсасачас чдадасавсова, 1620 чдалчаддучзас зачасдвнуса ЗассовдЧдас Чдаєсвадас аєстосоєдс дадвадсауєе 4680 чаасвсцЧаєсєс сагадсабсує азадгроддадсс с остсавдасод ссадасовда сдсєадсасса тло деЕдасоасач бдуссадатає астасвучЯє савсосюсадче аддсдчаєдує адавобсуде АВО0 чуасчбвестсс чадчачсадо сесаєвсстс доесчдавзцаєсс сщодесуєосю всадсаасад 40 чачасчавЯа стдодсацесі счдадсабацчоє соадсвадаавс ваоадассосза асгеочачас 4550 чЧеасчаачцдає чусаєдвадчь бдсачазаєу ддасссудос содчадайса детсдезват 4880 чесдасссьда чачедесЕда адодсзадчода сасадусЯасе кеЕОтссовча вуєссачоде зола чЕБЧасягад сссточавзЯабЄ СЧЕссСдево дессттогадес ссадссацчедч ссссбацась зі часатасвес редчасестев суссочансач дасттеоувасє сучсчссатча адсствеса зЗівбо чачасСсечасоа бсуададес ачасодбасс саосавочас сдосадчавоа аодсадаваде заг асстосодвач доддасодссаа суасудсссво давбсгдссса зсдасадача вдесудЕссе го часодсяЕсс єсдасачіац вуседеосву овоскеосуса дачаваоатост судесасдеу Зз340 сачадаасєвся ба свзявЕса дстсоссоссва чабодачнвя дадеЕсоссодФ ссачсзаваеа. БОЮ сптучдссчвчеа стало сачда чоссечсачьо часа зчаєсс вЕсовассасас сгастсоача 560
Ччечассоєссе додетуавсса судссвдасса стсссвоста сававвачес сеусасача з520 стдсаствдє сасаваєсав дваначаваа взсгассвчасч аасвасчєба авудщавсеєва ЗВО авгстассса свазавовач ваазчвавнчвс стадеовсаєс бсавуєсєсувс уавзасадевоу Бай азасатасаа яавсаснаво сасвуєдесе ЕсЕЄСсосте сЕостовкоє суссбадчове 500 ччсдчававе сЕдядсссос савсвессссо сссвасавнодя псадатсуса Чаєстасаєс Й счацадссссо аксосссусу адасосоудас содцассосасу ссочдсдадад ссесадесяеє зи чЧачарссода состсссусо сасечаєсво дасдсссасо авдосуєссто бБедессавсо 5Зево завасіассав чдоссваауат стачаєсєсоуаЯч восуавзаава аазсздадаа здававчвода ЗО чаваадчсаа чо сасся ссаддседево азосетссет реадавссеває ударах водо ссстцдЕЯеЯЄ Ессссавтад сода сьЕЧа са Евава уасечессос. чудеса вОвБо азєсаєцчадає садеоцадчова Еврабадссу ацдосссудда ссвасстааєо дассяєсена 5120 чегсасдєда асосстусост соваесабодє дчассчсусає асувасасча Єсбуддаєтув біво сгЧасачаас асстцссоса дсазчоасстся сачаставасс васачаєсояє асбасаєсє 6240 асасЕдаєаа поса ставак сапедуєсса всесссудс вчссосчаво састсачатссе з садсаваєсдаєс савчуаєскасе дсасасовов саЕсаесдцоє вЕЯдЕВБсЄСВЕ авуаєсаєссе 536 чекав сс сасстсдсча Соксчасєса гесчачсесчсЯя стЕсаочеча Єадсадечсча бо стасачсчачс аадстодсда сетер ссотссвада зсосскадссс сосчассяся 5480 сазвоавувоуда сассасабуа ассоувосассу дводавсасс чЧевдосаєчоє чадаєсудьа 6б54й чагдссосад босвгвсодує ааднасаєскс Бавуствасо сучдудсьюдеє євсасуваєсуч ве сдааддаєза чудаадасдс саєвдевзусу боассжоста своддсосуєс авоЄвгааво вве тасасрадчс асудбсаустаєс Бачдоссудос суєвсацаса дсгтавачсав ястьадаєсваоу 6720 тссабдчсаа асідссадсс сатачосасс ксочпаєвсте сесадодссва сачавоєсаца ство ччагтадасав сосодвадесі дазаасессс стсогостьє бстсовссстое Сексересесе 63
Бевєссеєсте сестсхсасда атачаарсст оссСвссосод васадудєтва асессевеве евдо гсЕсСзатоова ссачодадссо ассаарьвса сесвагадчавду чЗаасавнааєо дсасаєдоеде взво зачдсясазає адаааааЕнс ассувобева счсестЕсцує седчаасаєсує свавачарав 17920 чесасстаєсс зачасуєтьс дссссусса авуасссоаво» сссчадсатос сеосттавове то їачссавсадч астазуссасс ччваздобоск десаостсдава васстстчеЧча сеессвссве 7140
Ессазаваєс стадуєваст загазсаєта дастссуєсва дуссссевсв дадсдесесае 200 хаддаасарчс даадестсс саєссаєєєсда обачеоцесда часЕсосєас сабвасяєса тва
ЧчЕСввасєвя БЕСасавдвє дЕссадісту сазудбодбєсуєс стадаєьсьь їсасабавєсь 7-й асассссусс ачччазучсозу сдсесчсссос сдасрсссоссо чдасаазчдата сазаєсчавас 7380 савссссдас сСасссовесчад Стассавассо ссочачасс сасаєсстає сссодатаво 7450 авудссвауєс авачедазвгав ЄЕК асВІтто сусудсвссє адудестсса дагадчдуса 7зва гсвазаєсстча адогсавсо ссвадавнчює чЕЧдедкЕаса дассваєсуєс ядссагрававь т550 счесакдасс аудбсвустов саєссседає ваччеоссусст соадасяаса асасасткею тео сассваасатра дадодаадад ссазудадваа васассосою вдуєсассьсє астдбсасає 7680 їадссастдд ссадесстсс свсассаєса абоссадусу сцдачсвкскад сасадсесаєс 77уаа чевбСасстс сассассуса спасессвачс вссадосоває ачосасссосо аасдсстосе тео ссссуєссаас якаацадцада уададааааоч часаорачдоес абсдзададає дадчдаавачь 7860 асакладаасс гассасттаа сазассате седокрзссоса вуса сса авгвачудааа зво ччасеЕсддсс акссдаєкад ааачуєгакєт дучасасьве стесстасса чаасгсеассаа за завзаваанач ТЕ задасєс аг сестаацчад даготіудсоя дставдадава сЕсгкаддає воло ассазаєвос агаазваайсяаї совдаавнаавнь ссстсЗаєца адаєссаєаа ссастаааваю ой тасссєсває ссузадудач Єгпсвзавзасава сСовазетсавє дБЕсдваєса аувевсвате 160 їсасЕсразе ссосссковава ссевнакдсос аавасвесва сссассачує васавеУєес ож гЕЕЕсасваос гсбоваавад аа бааєсгасє вазсачдааєс азааставса Здоесадчессв ува вдсессябсс дадсзнасаа Гачассабуд десадаєсстя ссассасово ссссстоста зло чЧчекессдЧдсссес свдаасссса ааасссазавз абассуасвс Частудсоуєс счасочадеса вя90
ЧасозаднавсІ дасоднасав сесосодвнає госвососва стасдссево савессасова з4бо чдесастчдаса арсоддЕсосо асоссбадсед всосовествс аадсдадцасо єсадєсдчосе 520 садсавсоса дЕдаддсесає стсссадеоца дсаспававаса чаєоєцдаєс сесасосаєс зво счасаствавс аваасудсає днавасвсса саставаассо ссовуаанавза сеосадавави вело ссвдазссачі асадтссосто зсосЯссоаау дадссаваачс зчдчадсудчачеь усваваєюяу вто чЧчааасставас счачоудцась ваасусавава асуссаваос чЧестссодес стабачавад БО чачдаччадса ддЧеазасодаа всоссстасово есодсачаба ваадусоєоєс сдрастсдсо Ве20 гсвсгосова состеостося сосдессосвоЯя сессдосдсссЯа бсресдосаяс сассдастад аво ссакссадує азаасвавса айаасздаєе чаєадеквос вВебсстосоє єребсусацче зо адсдсодесвсс тасстусудяа сучЧасстоауа сдатсстача усаєчасвод сссвасесоа зво хавасевасс догодасссу зсессосвасо бссаседаєц сссзвавсва сусрссєоавсе зпео ачЕцоаовачЕсв сосоаочуасеса дсдаваєУуєс єкоуаєсстуд сасдедвдчасу ствачався 5120
Ччадаааєчавєо саасаєсзуч чудаскксоуд авдсдтасос всещдавокавя св бстосо ЗВО тасвдабааб сідссссюве Екддбачаєс Бодствадьяс абоабевБУавс сачасбадчаєс г
ЕЧдаксавакЧе кЕДФЕКЕЧУв сЕсСсСавзаєьє БсЕасстада БЕБЕстасауча всудсасаса зо чакегзасса чаєтдссасо асествста анасчвосяє течсечасу част евата збо
ЕЕессассдоє дЕбсвссгад агсрубаєте сестісевтаєс тгавтсєсаєює дсттатсаса заго загацдаєста сзасттадчас асасбдраєсу асецачсбата бвсвоесдса вас саса за Во кустасчадес гавзчвастає стсяувуєсваа дсвсвозава заасасеєво асачаєсучдУ 540 сазвстатства авуувестсЯа дсассасусь Єсовастосю суєссосСадася сСсауєвавсье зво
Есдасстудає сідаадасау чдЕдсествавсавє абстовтразву Зссаєтадава саставстеа зевбо заддасваврає сасакодасЕ Ядасссасова Бдасьсоста ЕвсусоЄсУє сєтдасаває зтгй секадсчарава лаааваєтск сааччусуєсаа собу содава песо постатосвсас УВО севчатссає часова адсачавись усавказсУс осачувааєссяа ссресваресє за ссааєсстссс давасссавдс сазсчсаває стсесктаєєс даЕссссссу вацчасусаде зво засаєссасоа адостассоу аєессувсяє сеоссчочаєс давадчавдао чЗачавчасає заво гаасєдосеєс сдачстсосЯі остосваавця бсарадсствс торЕкссасу бсосчвдбасоє 15020 їтсасдуєчс авзусауссуу сссосавсся сссдсааасс состоачЧесве сеосудаассо 10080 їссасавЕсс содсдасвач ссдчассокосс ассодсессс св сосЧус чдассссдєсда 10150 чЧесдасдаавс додеассаєс досі ссгоу аасуєдачов собсассває ведадсаавчої 10700 ссасцсядус дв ацдчечсс сусасосуса адцаасачсзЗа сасстечавс «Сеча часо тоб гтедасвнасчо судестсова дсусотоаЗУ сесеодосова всесудсаау дссуєоєсаєс9а 19320 естоассосесс часові оаудс ссосасоодач сссвовдасос сувсвусякес сссаєсудед 10350 засчсєстоузе сасавазодо ссднсодаос содкдсвдаа оссдсєдедсес дазаєуауса 19440 тдсаддбудза аксодавдає чавчассяба сЕсСсСОдквас скЕдсясуда осуачздасоЯо 105850 адасаоссуає сасстассцєс чЕдссдасод сеєссусаса дасовадчссс дсадкаЯастає Т05560 ксадссддссо свасаєсоєсс здусассаєсча стчуссассча дсочассава асчечечавс 196 асасяодавава чабоасідева сс одсЯ ссвасоєссво счгсчачасо чатсасадасу 106859 чедтдсудсає сацседссто дааодчосасо дсавосссаєс седесвадес ассдасагає 10740 садасчасєсс чіЕсссечасуа досЕрсосас сдЧтЕдсЯаое остасЕсЯвЕ ссодадстоса 1985290 зсяссассаюв сстсазеута свааєдаасе ссасеосусає содсстсаве січасастає 10660 задддазацдуд сдосцасаєтс чдавачкссатса авсссдецесть суосоучсцуєс даачасасоя тТаз2о сгадчассотогуа са кодавсс сссасоастдча ачосесаюсас часосечава сассадсоасдс 10580 сЕссдаєчає садасдванвакє ссааксесвсу сецрсдсесус сдосттсдея двадудаєсда 11040 ссагбаваєдаа содЕстодав даасіссясу Есаводсдвазуа сцдаєсосстс сЄсаддссятеу 11160 ссваєдоассв саачсеЕсває дусабавчавєє ссчардвааца счадасуєся срсдєсЯавас 11160 чеЕудссчессс гаасочсазу паддессесадовз всссосбсчуч соусочесаос дссасосясс 11220
Ісчдассвсоса сассусевнод адсосостся свсоцадсеу себассадаа внасестясса 11280 счддсацдасча сассвсцаєу агсдссаєсцча одссуссєдова чсксасадно ствдакааеса 118350 часЕчудЧдеУус давзчаассуав сьесбесоава соувадчаскас совзасуацев ссаччаєссеє 11490 куессдчбує сбтчддсвасеа стевдассасє чдосУуссавсс бавчасокує ссубатвоачає 11460 тЕстаєстає саувсувас дбссодБсс дааваасвсх Єдссєссова ссаБавадача 11520
ЕсЕасЕБуба дос всЯсту сЕдЕдассвя Баестаюссає убадвасеосве СЕБЕ Чесає 115850 ссЕБаатаєс сват сЯсбу сг арсЯва вагасувачес бсбассссУує ваза боса 11540 стасаусатєс чазассянох ЄєвБЕсустсда Чзасавоскоєс часетссаче соадсасдава 11700 ствассстетва аСассравс ссстазьссоо саасстсстува ассуссчста сссадассад 11760 стсавоєдчаса Ессставува аасдсвссто восавувнарає усадссаваує чазавцчадаав То сасчєдваса сугадеєову єгавеачассав «дсоссвадьра васоєсацтва асссьЕдсе т1тТаво ччасєвсваа стсдсаавса гбсчасьічоач вусодосаца дссасассса ачбссстсааю 11550 такдаєзазвза ссусесосуба всадазався сосасссбадау судесосуєє базасватса 12000 чіесЕсдаса довсакаєва пса сававс стеавчачавна здачеосеса ссадваавав 12060 счдасасеЕба ааачодсУба вавачеакссра Сесостецсе сасреєсссбабя счсаєдосав 12120 ссасвучаєсє сссстІсєдоча част одса ЄсесЯсуеза бвзасчастсо Сбассавчноса 12180 сссзазедсс чддавадсоса асувосуаує авосаєссссва заачасссех садекесареє 12240 чачссоадсьа давгадісдад бадастоста бадсієдаос сессавсуєся чдососувасу 12300 тадсдсвадвд содавнанато с 123292 «210 Зо «РІ11з ТататТ «85125 ЦДНЕ «213» Штучна послідовність «вах «223» конструкція ДНК 405
4005 ЗО зазазссоса Бдєдчаєосваа босовсурос сЯгсоассас сао сваЧач ччдваачдаваса бо савадсссадЯд сЕстозавдо азаєссавеву сегаасодчує ссадусстссує Чгадчадасса 120 асасосавачє сесасечцудЕ дсазацечос вусучочцеса удаватсатво ваассасСаає 180
Част ссацув ссуддванаєс басасозавсо адсваєсчаус всоавозуєса агагощчачав по азачавачацєц Єваєсаєсєсаваа ЕЕ са агсозававс сдгачасувєсо чдсадсеавсав зо0 таєазазіча аауєасатнс буабазавсод асавастасд вбседседва 5Есабазасу зва завнадсаабаа асазаєтавс стааєсбсуда вабсьсвавс ссчасубаєс тасаєссасяа о сссавасодча часттачаку ачачасстоз счассЗабоо сддссассасо счуачассчадч 80 стазс3ссосє саассввісо чсвадсосака анасчусвасса ваваасассо севсассева Зло стасазаєос асдадсзгаа старавістає зазоосавіова гачдавісса авсаадчарсе ра садчазнавсва сагааводава адЕсСсвагава БаСстававас зсавадваЧас асасееесаю БО птсачсяасас седевдстос сесвудьсто вавасакаєє сувсуєскавоа соавнбаадчея т20 тазсудсаса астасвадся серрасбосо сасасжєавною Єсодесавєтса чадассасаа тва
ЕсЕдасасавв сЕЕсастсаа аасааааєав Бсасараєся сстатааєвє саваєтсаас ща асасвасава свадаеацавав васавнаесавс аєсваєсса даасовасвяа аачавосатра Зоо тсасссарта аслессстеос абссасттоє апстсвсаєт содасеачеча ваассчвакта зво вававсасач сдвавачсасав ссасаавсава севтасвача давзасачесе ссесвавасе аг асаасасрса азастсоватад дажсссодуву сЧдЕдсудсаве уазвсьвдаву саседавеве 1080
ЧасдасадесЧеЕв дЕссавассод агдатасува ставасссач десесадеча деассастад 1140 сдассеваєс сабсоавхратсо гдаасвьсає стасасссва аврсєтаєча сок сссаай 1290 чччесасстадс адсаєвевсс асадааєста абасаєсаче вс саста дсесствсаа 1260 чадсЕрсссь сідсакєссса абсачссасва садоссссаєс саствосадь содоавеве ізн ссаасецвЕс субессеКсвЯа воадассгдчЧа ссоравесст ЕСЕасеЕсссс дасасаєьее 1580 гсБсгососоі сстадсавадуєсу дссазсяБцдча Бчазчавчеса ассдтабсакеа Сава сать 1550 чассчаЧчьчо асдассусбоча часі всзчад састдасаєт чстадсдаса асодвсадаїв 1500 чакассоаєсуа сававосоуєсв асдодаєсос аусвоєсдсв вадаваанся сусбсдЧавнана 1550 павзаздачсе дсвовссаач сссбовавав савовавосса СБодавнада сссянастаса 1650 засазавуча ассосттвсав стассдаває дсазцадчадаа дссоведаач чдаустьвусає БО ваатастоуст чдкастачаєь сваєудваавав Буекосадає дссссєнада вадесксвисаа 1740 зуає«сстЧааб усадасчдасо спсаєсзчатає сакоузаваУо ассусасачс частостдад чо щасЯассцас ссасоддачає ссустпаовоаЯ сег са сстасаєтас авг чавасоа. 1850 чЧсааачаєта сотчачсаас асточесавс астадачада вадшесвассодву свадчарасує 1820 асдсавачадч аадсваєасра чдбдссадевя агсадаєбаєта дагассаїса одчачасааЧа 19880 зчачсаасва азаччаавасю спасе азаєкЕкуює всавасаваса аодсачаєсаа года тасаєсявава састдесаде аствастосо Соводвоваса асавссавав свачтасаєс 2100 їчдасствдає стасодусає аасезвадчач сасичасава сасбсвававс ссугсвевса 2160
Бареєсаввсс брсадчсодск аавасзастссва сацезсвсва асававасву вагачуаажва грІО стаз сво дсаавєвара зусстдово асоувасавнає Багбасадва Есадостагава 22 тагадааєсссс батасваєва асссабсуєадч Бавовадесо сдсбудссбраває саасаучсава 2зАО сЕтсрдааво свачідессв абадсовосва саєувосьса ваасзаасасс устазасасо 2400 ваассасаса сСЕЕстсатає пуста сосва ссостасессу сеостссясас СбасстанЯссс 2460 стасгастЕсд стдстасааа осЧасузсовад бавссазесвс аздсадавсва счаєсєвсяда 252 чедЕнасссс ачдаєссвусе авассасісї сацдсоваєбсво сясасвачЧвя вдсаєессава 2580 чаззвсусуде адтлвсвазу чсаачУвдсо Ччасвдадчоде чсассузача счдсоауасо 240 сткасддсав дЕсОвсссід СавБУуєссссо васачковод ссєвачсава судувадаєао то
ЕсдЕатсвда бдаєсссєсса аагочсасааьв васусессся такатсачаче адваєествеве 2760 чсадчдреобса срдсдрссЯає сасаєдсаєт вагаассача осотсачаво адесесвЕсое авг сасядсраввс бдкксвсово стсастауа счдвассосусє стасссесос затавадчаса 2880 зачасдскЕс садсазасас ассгаасває себосвсесве сесускЕЕсУ ссраядвсесе ав асазадссеаус бдсоскочакцє суасаадавт асшттовавоа асодсесаєса астесавадеье зпоо
Ессоддтодає дес Есв дазасссасе дассаєдава саєчвуєтца васачвадее зп тастєтдваєв давоавеЕвові саеєчЧаєсето стае тодссваєсчд сстуддачась зіга сгдБассста ассєкуєвов Чессстудає суауаетсоЄ бессбвсава сссєвазвацда з1ів8о тчачадеєст сЕсссЯдасЕЕ бдосоасаєсс васссозаста засьсчасаса чстседбассю вед счЕсвдасЕчЧа ассоваєсота чдвнаєчердеє ваассстчвч сісаваастаа свое Есее зво0 чесЗзЕсасва счсссуссає асясаєкачо чачсцачевяа ЕСвВучасаяс ссср ссас Зав чЧекасссрає сесесастся сассабазуа асстдсстта весссодсазу заадодсазад заго авасекссСуа садасцсдес бавовавссо бсасевоссос тп Етавеє дассосссаса заво ацесадевус сочатдвсда саздаєтаєеь Ессавачаєу ссоаставосє Єсаадеевсе з5АЙ чтагдвасчвє СЕЄЕЄсССдав абссзовдас сассаєдсає ядссосєцдавс вдсадеетає 350
ЕвЕдаєседав чаєсссвсає Едаєстостя басоєсвсЯЯ ссаяаасоУчЕсЕ ддачасєсса зБвБвбОо тассстдасс сБадстуачас сткодчЧастаа дааевачеко ссассосдЧава сера єбавосс зт тцдсадуєсва соадедецдесо дазаставсї адссассасу васасасчас дасаєсоуєс зво
Гасаасосає аасттссіда сатаававоаєсь БечаасЕссва сасссебраєсо соадаауесея зала зідсассдея савасуєаза асаєстсосьє одесгдадссе дЕасссааа аразазтатнту з9590 чассовссдас адчаєстчасава сссасацдава ассозвачасоа осессаєЄевУа ссоссссове зв чавчсаясса чдазасадсс стеваостест Чеусудчацчесоє адавасуєув аадаавенса 49520
Чдечасасьсо савчдассачаєсє авасаесчбава садзаисвадас савсесчссава чдсавдсвадсе 40850
ЕсЧдасустас Єсаазусадед оддацодссаяасс осад свсса зсдвадедес вавздазвадес 4140 гЕдсачасвс баавуєвавс зусстсоссву часассєдда вбсцдаавадва сосусададчее 42
Тсссадсасс азчацесввЕсс дадсадстаче стчарадеса авааєсвачча чачаєсчесава 4260 асакадатат гудсодоасас сдаадсассве даєачоаєоадс ЕБбассттьсва всавчєссда ага дссавачасо сЕдадасазЕ авацвестсст асссодечесу сосаосасабас варєтсваєсо 4з4до стєБаєсссва сааввсгуаде ддсрсвстад бЕСВсЄвава заававдавоі стадо дадОо сччанадчаза адчасскає ссяасдадавда чавдачачаеача уадачачада чачедчачава 4500 чазачсчачдач чадувсстсо авасьседсв Есдсссвасс сесвустясто свучдесевад 4560 зацаасссса чдасдесссаєа сассддсадо Єбасевсосодда ссевсосСаєс обвостсадо 4520 таїсраяавудєса ддссдасста дбадстасує асстадваса дакєЕвааору вдадсадвассад аеВо саччавасса сустадасавасо ясаєессєсо осгосестсод счєасуєоава аасававоса; тай часвацета чаатсссост доссусада срсосуасасс сасесзаєсосо ассасассеос 4500 чарастсстс саакесозас ссагесцаву сесістессоа суБунксасу чуазсвадеа ща б
ЕстсСазасуЯ сазазуаван сбосзсеаваеве десасоценвна бсасдесцева седесцдедаад 420 сзчасассоуа садасевадча гсдсчадаєа аавасласаасє савьчассяє зваччавзаєсав 4 580 чЧчессасЧава єдбсоракус адоваєсстко зссаєтвуся доаєссоваасу сстбсасадеє вОдДО аассвавзрає бсдуєсвдаєу астбазсаса ЄбабсвосуєЄ зуасдтасдє зсчаєтекаьх Зоо загсаарста совоасссЕас гачадсадає ссопссодссва ссавсссача ссдсссесає зів агдсасастс асаєсчаєададс воаодасачацас Ссасаїсаує єсівасочос даствастав 5Б52О гсосадоадсс суастабааа бассвсосєса асссовічає саваассосо садчачнесатс в2вОо
ЕрБесасасас ссавусєсаса стабсодача всасасзчодч асяасвсавос зсвачасеся 540 вадавудссс сосуссдсосуєс содсавсесво оссоссостє бостестссеє ЄСосссуєтє 490
ЄЕСБСвссЯЄ срсадостся ассесвбдаос ЕссуєнЯаєє бочЕдовдсдча чадчсавосе заБбо сЯдгадсдсуєс свзуаєссудеа сасоддачочу чдсадчЗаєсстс вдодустдада сєесгодсса 5виО адсЕдааЕсоЯ дососддаєст садсачадчавь ддсуєстсься дакдкадаєс садсчабссас 29 сачссчсроча чуачасаава зач каа ваксоссчсс дкадссаваса адаєссачдаг БО чаччаддавава чоадсассаво чеЕсбабаєсь гсастасаєст стасвадсеєссс досади сьса. ОО чаєдрусєтад ябБсЕєссвре слесбееевд кБададсадаає сеЧчааєсост свсаюквавие тей саєсяадтадс СЕБЕсСтеЕсо акчаєсвавЯ асаваєддесвуа сстечЕчсяв вуса зво
Бач«чсацчазУ сдавозасса сучЧасазесо савсавієус ссозазсася асасцаєсва з880 чавсассссс звастссчадс бссауассва сСсовсаассовуУу басоссуєстуу ссуасавссюя зЗ840 савссссасєс сточавдвас сдвассвова дово тестоа сосасовоса водасвеске бо00 саєдовоадЕС студаєваст ссасесуєсва ддваодосуєс дудасесдудса вобесуєсав во гдчдасадаєс сбуддусоссоу ЄбддсЯсосо стссусвдде пдостоссарос ссеротсасва 61950 чЧчеЕссЕвсстЯя азсассавст додсссьссода садссдассесс сбодваччєесе бсаєачесся 6180 заєсзазаассо стаалодаса ачдазлаєсста учдачсасусс вачсссавуу сосстодЧчееза бело чекасавуде ссудсанвасв ассссдавда ствочуксвас чсассовасо осточЧавува 63090 чаєдсстсса єссстадсусь ссавнусасте ссводаєсєсес абвссчсувас суссстесса во часечачісо сасгсссоуса астосабдєеє ЯдессотЕсдас удсссссваче вочадасость во чЧЕссССТЯссс асосводссо аудуссоссава саєсссавосе сбаєсоекча ачдасчесся 5480 ччссьссодас дадовасодая дегсасьсотс додвочасоаюс бсесдачсвсов ассрсусса 50 чегдвадсва асесвасаць асасссаєсса стсосутсавс содсаснасо Єсдчсседаа ве счдадссБдача чЧаскоссасся, асчасусаєо дассавЗіссс авгосодсткссес чсвоаччаває бвей чассстдасєс чісстучасс счасксоксоє стессостос пасдасаєсссо чостасасте 6750 саачачсдсс вадассчвас садасссдсесча сассттсабч Чассесаєссо ссссасксас тва часесстссацд звадсасаусс ссасосгсех дессаєсчва аастесаєос чесвацесоса ев ссвадасЕсцдасєс гасстесзау дсаєссдаЯзЕ осасасуєсде содавчадссва бдсбасвссчу во сасєддаєтос вЕсавссасії чуадссосуєва стасуссува ассадаєсеє ссарсадеке вабо сгсдвадасоа абсаєссссс сстсетасуд сувевеуєос вссувоссся ссадавуєє то8а
ЧчЕсСсЕссЧає доссадаача Собасодсас сабсадссваас ассуаєсчьсо содессадее тов чавсоцдсава чсБасстоду здедксасуаа со ксдасссс Бсссвоабасо ввудассадаа 17140 чааваоцачасс хссвоссада ссотасцлаєссо садусоваає забууссавсе сстссасеса тою ччассссаєс чдассвзустоає сусссоводає састдчасчач ссоссдчача зчасссассо 13250 ссассадстоа авастасчдсуу адтассттост даСдовадає сусауудцсв ссарсссоре тва сЕєсасабао восовосЯдс ссабосаєсть ссєовасасо аєсуведеса адвадаєває тво ссадсбцдеєє ЧчЕдаксвадо савасяасосо дЕссссудує вссвсбаєся соуачууєсо 7440 аддесксвас чдабБддсааєс БЯсЕдЕБссї вавудадеся тсавастося Ссудсосавеуве 7590 сазоачесасс сбудзаєсссу стасссвась дсаасассає сусуєессаса вссодсбасус тей срссассася аасстдсуєс кЧусссосса давстосавс вакаасьсос теадесасока 7820 ваєсвасава ассатдаваса вудасчаєсса сесчЧасотаєс сачасеєсся ассгсдссас ЗУ 680 сасадзаєтес аасасччоуєт стосдвосдда савуваєава сБдассаєсьа чдедсгавуєе ТО ствредссрсос азочачавзча сСстасасеза савчатечач сссасоссехєу ссосадесава тво зсачсдаяссс сдаєссуваєвс стусасчусоє спродавоцусат усссавссау дстадчадеса 7850 аеро ча соатетасусв ачесесвасо ачсссвдавда часасесева бабою тло ссрЕССсСССсСву ботокса аскеусуєва Ессостьтвасс дсесвасачатв зсудчдсчаєсоа 7в8о0 асавакдача ааказаксаю бстдаєсссво ачкросаваза вавацдсаасс вдудатсвасає зо4о чЧеЕФвЕЖЖЕвЯ чЧассссавех гГсдасвадсї Босевсдчадча свасавса»я собсссавса 5100 асагодчадча азазудозач садааадсоеє сасоссуувса севесаєссає сасаствдєсс 81650 аскЕдассаваує сстсосавсає сассавагасс вччочечадче сссвзсасву ссвссасосо гай аєстссасса ссдесвстасо стадессісцє ссвзасачеса обсусевасчус стессесеса в2ва босздасаказа асачадачЧач вдададоанаву гачссвгодсоа дадачачачаа асанубасаву зз40 чЧччдсстассод скЕдадасначо сассссучеє єдсовауьса ддосавтавно задавав лоб тддосавссЯя дЧЕгОдавада стасквдодос васасссво тассачавес уссававава ва засадсьсда дадссаєькя дадачсава досту єсвЯ задсасссвЕ аддасаєсяаа во асеЕссатава авсассадав вааскокскс чЧчасдавЗаєє габвассаєє аавастдосо в5во їсавастслава чодадсссяа аасаастава агпсавуєссЯ аассодвуюте сааєсрсаєсе вело
Есаасессстг газаасосса асазсвавнасє ассвассосує садусСачсво удесеюуєе втой астесттрса зазадазчтса агтасазчвов цеавісааавос базсацчеєсад чессаадаєе вто саєссцадеа азаозасацає саєчєдесву деосадссаоєс вссовссссо сестачесес вага садсбсЕсдаа стЕсвадаєо свпававннако судсасувосЯ дссчоссуасч саосучаєса зва аазасдасцо аасаассося суаваєтсотає сссавосвод сссассяасс сасасуссас вало їавасаарсся зссссасеек гусаддссоса сстасвначса вадасссбсаде сасосасаде 5090 зассачбрадачеа ссосассотосс адсдассоче зчусдсачарсв чдовосостас ссвоссасає зоб тавасазаас чдоасахчдавзра СЕссСчусаєвса авасостсвуа ааваассеося вбаєтссааа з120 ссачсасзує сессуасодь соді сачос вазусодаос ччадсосаза зссоддвчавнає зіво
Ісвассдауа дадеЕсвавоу сававасуссо двддодетос седссесяисеа ЧазазУчоад зай чадедчодача боусвасост васововосас аувовавдос дсстведває Єсдестетет зо ссудадасесьс сагссасодес Ядаоссдосясе дес осос досусоасся чдсрачссавс зво садабазлайс адасвааааєс чдчакєстдаєа сбткосаєьсюя восавЕвсве чеачвадсоас з450 ччЧевссЧарсо чбучасоадчає стедавдаєс стодчавата Ядвссовтова вспчасадає зво сратесавва акссоддсесь сбасчуЯвоає свасасссоя акстасУєть содассачсоу 55
БГадессУувяуч яБсеЕддсдаа ахаЯасЕсваЧча ссдасвава вааведосавуа ваєссачаднав Зо таасасаата гсеЕвоадачЧочЕ ЕСОЯОЧаєадяа часссастса аккадЕссЯє ссссостадога зевбо аквавстове ссреЕсеЕОаЄ ачасстяав ачсстасчеєс саєсссоЯдає ачассьдавс 72 засастлаєс своє стса завексостас ставучдетеста бадставсоус асусучассяю зтао чЧаЕреачаєса ссасзатсося боссчававу ссссстсчає гцасчзаюсть соавсавевса зало ссдесадвса сстрачасесд Євсбсссаус Бабастваве єпевсосвба втаєцаатає Зв аєсобаєзвасс садасасаєд басодасада остасобадає ссобаєсаєу тасаєтасьд зве спадстаача астасвьссад адсазачсаса дЧавазаавата сгсачасачда ссдоадсавась тОо02о акткоаасаЧЕ стЕтодсавс абастссава ссссесувЕв стасуєачва зеевевесдах 19080 стчассєтова часвоусась ассагакссс гаавусісву Садчавсясса сседавацче 101540
Басастаєає чваассдцесво ассруєдаеь сесоадєсесве стввсстсца баваєссьях ї1929О чагазазаза авсетгавду сачравенЕос взазавесту ЕСЕ ссСевса гдсадеекеа 10260 тссасодсче вадуссацесваа васссусаає зуєчсйсада асесасскоє табсвбссває 10320 сісксувавае сосадссваєд сазаєебосо ЄбабовавсЕ соссдвачає усадсацсає 10280 ссасєдадсте апесзавссс чдесобсоєає счарєовача едадсадаве ввесчеЕсваве 10450 часісвдачеа ЄБечтсстоює Євадачссабу БсссовастЕ ссасоадсаса сасаястєсас 10500 часасазоаса чосоадеассаєю аассусосоує авзатессстя соте кссча зассусседе 10550 аєвБоссоасаЯ асадчрочає стсосаседо сссуксвія ссддсочесо содсчвачсацЕ 1062 чавасцдедса ссассудосзЕ сстеаазчодс Чеадоасцсса бсавсвсчуд савадесавад товао садоасчабдд дсодссседсає ссуєсааддвна дасозсасоє давЕсассдча содсассдае тоа74о загддсудос Босгоусосс гЧаддсоєся стсдаєсссЯя дсавсоссус сасудаевує т9890 счсстдЧчасуа Єддасесвсзє судадесосас дасттодаса дсаєстосає сддсчасуєо 10860 тсдсісасва адсосссууає ддадсосдсяба Єбувасосоєс сосостааво зодсабасаєч 10820 чЧчедавассча азадасоасіда седвовссоєс осЕасерсос дедочоєуаа дасдостаса 10580 ссчаєсяссо ассяасубуєс чдасадчдесссо десасасцквда азсссяЯясьяє чсевассосес 11050 чавсссваса сасссодсаї сасчасудсс абсувусова бсаєуаєсдоо счаєссасаса 11190
Ччазавнчяасчс сСасвоудассє бадодссаає сбсвосуєвЯ асасоауавас давсодсУву 11150 зусассаєссс дастоднача ссасзоссвауд сесассддсо еааазсассда субассдчуде 11220 часосадрест суасудесьє сосуссодУсєс дсаддасоває єсоссосуда сессвдасвс 11580 ассаросіся асубаседав дайсссостасс сусассодсоє всаєостьдає чессасадеа 11359 асадддедссо асассузадчь саєсваєсст соусовссся дсадсуазача сугачЧчечдас 11500 срасЯясУрьс дсбссіссас дскааводос вдусасоачеос содаасассо сасесессса 11450 асдаєссцчасу аакахтссуав СсЕсзогаєс дсодосусаох тсавоааачу дасвчасеФава 11550 асдавасудтс Бддавуваєт ссасассвад давнавдоцасс чесустсдас єдЕсадссавь 11580 часеєсвачде ссвдасчасаєЄ счаєсвосчаг дачоадсЗача суєсаосеЯдь сдвБадсасаче 11еча сасесстЧчасу чЧевадучусе счусавсцес СечЧудоцеся ссатсуссаєс ссассвечає 11700 сассцдсаксЯ ссасдадеве сстсуссата доассссавує создававсос суссасде 11760 чаєцасосса саєуаседс свочацевЕс ссууачдесса суддвсесчає садседааева, 11870 часасдЧдавата ссдаасьосєс суаєаєдчаву оссдостуає дадососачу чес адсею 11880 часадсствчч сеасадевЕда Стассастоє Баєсстасда ссгдсссдоч сададесвсеста 118540 весгарсадеє каска сову акт свава всасььоссь вЕесодаєтава баодадсвоо 12000 тсЯасвосьс состоассуєд асстасасса ссосасасава сесосЕстоє чдоасаєстюга 12060 агасссвач ксЯясЧуЯЕк ЕсСудрававод вавсстстає сссвавує ЄДдеЕдсесата 12120 даасгднавс сдвЕссєсу стсудвавава асСосСдвасес єсСадстаЧеч Єдаваєвтачі 195180 сЕсСоЧдасаєс сдастскоса одсесусавко Есчачакоде сосстенєво дсдааствад 122А0 тдасусєсессо ааугавасдє соссосасову васаоссвос сУбесдавна. чЗадаасосУє 12300
Чаавасабач стдсесавач аєсавсьсос дастравассою садбадаєься бавБЕБадаве Т12360
Гсваакєтвад авасатссда: стаддчадеса сбадачосає ассвавеуєсо ссвастатєтча: 12420 тазачдстуосо статвасачда азасаєстаєс сасчадсцадсо чЧсосставаас саксадчсее 12480 гадаасадчаєя гассудозао Савааноствнау адавваазаус чессасраза абавеечеа 1254а астсазаача чЧсясдаваад дЕжЕсаєстдЕ бодесрарье одтаєчсасає цесавссаса 12600 чадЕсососо суудадесосв єдосаєвосо гбодсосаєвава асЕєсраєсюв зассаєссайв тї2вбво асдссяддчаза чоссдасдає здадсводсає Босавазвадча ссосесбддоеє сЯягосаваке 12720 чЧччстадчавзчо бсдаусауас Бадссасудет сщабссосса асдсууссує засадаєаєсоу 12781 сацесдсецчана азвайссі ТУ 8 «ОО» 1 «211» 1Т2гРІВ 212» ДНК «2132 Штучна послідовність «Ох «РОЗ» конструкнія ДНК 403 «00» З1 зазадессса Баогодассає сосуєкоосо осУдссуастсаєс суд тддоя удаачевзса бо сакчастсвч стсссаасу азаєтаєстя сесбвассуєдє всацевссос Ядрачанасся 150 асасбдсватс песассудчв аслаазчсасс ачдсочечоза чдчаратассс вассуєааа т, 180 чЧастссагас седудазаєс басасоадасс адсваєчаєє акачавочеса абасоцчадчав 2гАй зазадааадач тавастассава СКК Есса асссававає дсевуаєаєся дсадсавтає здо тагаваєчьда ааотасатєст Чавававося асавантася авБссаєсЯдва собабадЧчеу збо заачсвазчаа асаааєсасс стааєссава аасстеЕсаєє ссчасуєуве сасаєкєсасо 420 тссазатчуЗ частсачаєту адазастоса сувесуакоє удосассвос сувчасесчая 480 чЕвссчввес сваєссваєтоа чсавоссавта авасасавса вавнасаюес ссасасссва 10 ссасзваєсс агудачраєаа ставаантає аавосавеча сбацчавссву всвзачдаєво вО0 тчддазазсЕа сатавазччав зусссаєавга ЕдЕсразазс всавувадає акасеватає бо їсачдсЕаавсабс бЕдсавасьвке гстадуксва вавасрававс сасвусстач счааєсавчса тео тзакоадсаза астасазацту стаєте сакатіваст Бсдуссаста дауадссаєзча 780
Гссансасас сбгссрасссва аасаваасас Совсасвусє сесасваєсо саваєссває в-5О асасаазсазаа баводвздавзаз авсаязвзабаає вбЕваєстса дчааєчвасва вазцаєсяка зпо сасвевста асбессстос абсовеЕгссв аЕСтсвсачс ссоасвуєдЧа ававосявата. збо азазасасад газассясаа дсасавсзава бус асзача ааавсваєеє ссоссавнодеє 1020 аєсвасасіса аастевугад дасссточву бдсооововає днавсодаєа сасеєваасье 108а часоавасуєє дісдааасся аєдасзасєдав суаваадссва дсстсадсда двассястод 11450 счаєстаасс саєдабаєсу бдаасеаєсві сбасаєссва агбостасча чосЕвБесЕсаа 12500 чадсассвоас адсассстсс ахгачавнста агасаусаєс акссакчста дсжссоососда 1250 чачестсссс стдасвоссса асзессасва зав кссасе гакссогадчь содасетво 1320 ссаасеЯчесе сссевестсЯ адддевсвучЧа всдсавнесст стра сЕсе дасасавсюе 1з8О ксБЕсдсудеє сстосаудсу дсссадБдва сЄдасоаавуєвта ассеадчссаса сдвададеее тал чагсдачвда акдссуводча чадсчаєдаеау ЄдеЕдатась дссвасчаста са бадаа 1590 ччесассоєча базаудсаєса асусчавсує адсаєсстуєса васаазаасу содссаавава 1560
Гаваачаусо дсасоссвадч сососадава Чавсазаєсда ссочдавааача сссавстаса 150 вабазасоача азсстсбасаа статі сова дсавдадоцаа десеводава двнуссвусає 1680 нзаасаєссосо чдбагтядаєс стасчавнавна БУустцсвчає чдссссбавча вадесгбсабаа 175О чаасссчаає чсадасчаса стевосатав сасучасувє збосдовсаче дассоаскдад 185800 чаасуєсЯачі ссасоодачає сосоєацасу ссостеєчеава бстосесрас звасчаваєва 1550 чдеаазцасса бадакдадЕвнао асродесває ядожєадоадача едудсаєодад свачасавдае 1850 агукавадач аздсазсаєв чсарсачссу дсазаєасєта дасбассоаєся чддачаєавчЧчу вМаво ачачсаасва авдачаававев сЕрЕавЕскЕ лаву со асавсаєчаса васачаєсав гово
Бадсассаааа пастор сачь аствавессь Бсачасааєса атасогазая саеачсасавс 2100 с-щассстдчас стасододссас васаававодчач сачачатава беаксаваавес едесавска 2150 таєтравссссе гБсадусуєЕ васяаасссаз садсасасаа асавазасадч вабачаваса 2220
Істааттьга чдсааасаєчса адсвсосбЯдсач асовасававае багсабадта всадсставбаа питай тавчдаасссс тараса асссагуєа Басовадсос пдродсстазає свасачсааа га сЕбстуааєс саваасусссот агсаасассяв сатосусстта ваабвавасассо детваадсаєсс 2490 вавссасаса бек сссадвав сосстоасамлач весссассть сусссечеве сассавасес 2 бо ставав стуєсаєсвав ддасуссвад Баассацевс аЧдасавдаавса сдаеессада -ЗЕО чЧчеарааєсьстї адаєссауов ааассасссї сацусозаєсавс сасасвачадч зодсаєсєсазча гав чазасчтсдує адчтавсавад ссачаччдся чачідадедс дтасссавчда сааєдеачеса 2БАО сттасучеЧі ЧЕ есоту бавассовБос вабсачьосод состава садзаазчаєаа гл 00 гхасассессза суасоссса вагсадчавка вабоссеє басасачачеу Чавес лей чдассавса стдедсреде сасясвсвее адеЕдвосдвч ссдсевоадно адесересе 287О сасЧвтасЕс сдвЕссссаєс срасастаба чдеваесадав єсасоссссас васазачуса во азчасЯсьсс годсвудсоас дссвавсває бобосвсесає бессосеєса ссбудвесее 2840 асвауссачс Бостедавдс сдасаацдаєь ассосссаваед всдсссаєта асстравуєс Зоо
Ессоадтддає дяассжЕсЕссСТ дяваасесаєс сассає часа сасасаєбба васадесвуве зобо тастрвоавє даачаєсстЕ саєсдаєссовс сгасачосс Ецассваєсуя ст ачавасть зіга ссчсассста асстсустча час сачає садвддаавсвою сеоттасаза сстссовоадча з180 рававасьсе сеЕсттдасьс сдаастасасс вассковаєсв васечараво чссяавассе зЕда гдЕссанеда асссвасеска даасдстцає ачассогоавна сстовачесаа ссср соевад ззвоо
ЧчЕсЯаєсасвда сг еЕсЯдєссає асосаєсвасс дачеЕдадсева ссаддасаце овес ессас 3360 чорасесвуав бососастсУ Єасгасазчаа аєстудовеєва єсоєссосаває. аавудсава за аєдествкда гадудсдсуоє баасавесстї дсассавтсос БЕ сЯссс ядуєсоссяса заівО зассадсеває бсвасачссЯаа савадаскаст єссвазуаво сссасставео соаадеьесвве 8540 чаєодчасадвс сів сокадаза асігассддас саєдаєусав дбчессоддавно адтадевсасє зедо гсвЯавЕсдаа чассстссає сбдассЕсстЯ БачстсекоЯя стваєсччес счачассова ев
Бассстаос ссдстдауає сЕсддаостча савссвасось осаєссчаза сосассбачео зп72о гдсазуствоа соадсусадссв сазассовову дссвсдвасс стаєстарос єсСесдавссоає ЗВО ссаасасаса сЕєасснава стсаавньсає десотідаса деісасьсдаа асесатсаавсая 3840 тдуасасува бсддаєсасдЕ сааєбаєсаєд раса Есасс вдастаєсача ссудостаде 900 асчсаднуає ассєкссаста чсастоваяє Баєдоасвува себроаеаєадсо вбабсяосає звбва счччассавча свстастасс ачатачсаау ачесдасссьє акассочрсач астосачсва ого авачасссссв апсасіцдсс дчассствоаЯя сстсачавеса ваобававесс татсассата дово чЧесідсадса састсядовав атасЕсяаєсод дссазсадаа ассугосуса ссагадєсзесаа 4140 гЗдгЕавааарцда асатаавосо Гасссабаба саасдоватста астссвуєсо доаєстадаесс по ассадссбадс адчачаресту авеЕссудєод Бастадцтадес сссасоуав сдссчвасса 4260 тадазачЧчаса сСагазавтсяа буєсастоте савучдуачся ссовсаваав свагазуває дзгй гсчсздодчачес содссосоуса чаасасвава баводсявус авсссасасче вссацевес 1380 асзазававс аабадедчеса дсокчассуда асаваєуссво сгацдевстаа ваБаюєсеста до саєтааєстя ссгасасаває адстасстс осєсасідає вЕвдасаєдча 5Есабсвась ізо0а тастссчаєс сіасавєсьсд абсцдабєстсс асаесдасвчає дЯсвУсваєс стясаєсссса 560 кчЧасзассва чдсаасцсссяа задсасасає дсассодссда Бсассеусас абуссавсва вдо дсазсадачачс асстоссетсс асассоягсса Ссвостасава завссасуєс вадевссстоа 4580
Бдазазоасос судазасесав сртссвсавса сісавуєсвс асбвссоддав звасасвнсяда 474о
Часазсвасає свсвадаєос яаададдацоасо ксоуосуєся ссоусаасса соссоуєссость вдо атесксссесс сеЕСсесуЄс сс ссо Боєсайвосс Чавсестаде стадах ї860 тчдчдасдддса ададусудесс ссасродсосос осавсаєсооє ссодсочддаса дасаадаєеє 4820 чсадсаастдЯач асЕстсдсся дечЕдваєссс ддесосядаєс всясЧддчдяа бадчдесесве 4 550 чаєдвачає срдеочдаєсссот сосдссаєссу дачачасаає дача ссса аанесЕсече зола сасадстразає аадассвуда азасусчава адоудсастає чавссававе сстасаратс 5100
ЕебБастоасто сассачасьс ачасесаета чассткоєсть сексскесо усчацдеасана зіва
ЕсБдаавтсос ссачсаскає ссассвоєад ссстессье саєчатссає Часаваєдєса. вро честсЧБдсд дадсевЕвЕев дцтадасадна чсЕчессазос воодадссвасо сосаасваєсед БиВО сросдадсас часасуатса аодассовосос сазобосуваЯ ссосасаєсвса аСсасваєсса ЗО чЧеаєссусву чдесдасваєс ссааєстсосає остдуазува ссоаваєсаса вода, 540 чЧесзсасдасс задаасссеє ссасоодчадчеає ссебодасавс сссассчсса водчасоаседе або счудассоздує асскссоьсу сЕдодсачає єссЕЗадечсе дЕсачесвсос сссссасача 5вогО гчдсісссассо сесскссасс адгсствєсть давасассвос Чоссосеся всссчасес ЗО стучазудас сосатуддосо авудбсоссавує сесуассчЧчас задавачасосо зададсасдо 5ЕДО савассессава дссстуддсоу адссдосвасч оссусввавсес вастсечаноа астасусова зтТой зцесдстуаає состоднача адасусаовоб сссостдосо Оссовадедоє сссадуаєсяу БО сагосдсуза сво бсос задесавауєо осассЕосує васьссаєуде сдабестЕсас 5ВиО ерЕсбссаач гЕсдзуадесс ЕдвЕССВОЮЄ сасотасуює садоастчсоя всассевоеси 2850 севрабсосво авдчдасоссс ачасссвсач стаччвасяч дустастост содаччасув 5 сассдачьсс сассусуєс вустувачеє дасосавасву сасассчаєсс астоесассав 5000 ссдадрасває дЕсядесіда асдасогаад доудстсосасо басоведса» дадеЕсвадье впво саассцевтс садсадоачача бчдасеостдає сдЕсстодає сгдассаєоо саЕссосоте в1ійо стаслдасзсаєєс сяЯасстусасЕ ссаасчучець саавасочач стсасосуєч асаєбсессас 6180 чЧччаассссаєс стосстустса счасостеса Чавосасудеь сссасостюс сутесабсда бло зчавссссассосодсавуасос ассестеастода ссесетесач часасечаде пссасасоєса 5300 сстцдавдосса чдадстассксо дсааусаєкс стсозастас еудЕсесЯдева всгасуєеда збо чассавдчосс бсосатеозусоє сстсодвачає дчаєсаєсьос ссвегсогасу цпсдасааасе ба рОо сасєсчадчест зіссавчазас бадсссоктсоа счддссачавоа ЯдЕстассдса ссаєссуссва вбАВО сабйсчасябо чдедЧсесвадао сдадсоцева дуксЕвссба досуссаєста зуддбсчаєсьь 6Б-4о стсосватас часчассада адаасчадчас стесвасосва асстасчасо ссвачеченвна во свабадуссас адЕсссецдесо адуассосає сузесачеса сбсусесдача ссастуаєда вевбОо дасеостддза аадасссвс сссассвуаєстї чЧавгстасчсвя дачесчеєстес гдаєсадсвача бтяй ссуусаччдує ассатсссст Сстесвоста дассосасоде сесодсечаоо сосевасає бло сассуасуєсс дадуаауаєса сосадеобусо сабсоддесавуд бостасдссе рдасбсстісудчу ев40 тадсебесаєс ахвєдадоуєс саедасексас сдогсддсаво сбадсвоасісс сдавачадве 5800 стсдааєссс аксуссаваує бслачаєсвс осгвдавобос дсбусосссас Бадсавсуеса ей ссдсубссус акгссдесасу сстссессяєс давссєдеос стоєсссуєссо адазсоссоаа 7050 саасчасьсс стчссасст асассаасва чассатсоаас васздвсосчасу асссадасеса зав ссадаєсьсс дасстсдосза ссасчаасто савсаєвчує ссосопаддоу васвадавесда 7150 астЕдаєсаве даохБасвкуває сесвсдвсто саасовЗача асстасаєся асавааєева то чорсасосос чессвустую чзакадсяааає стоаєсддаво ссптусасосу ссбудасоава 72ЕБО
Кастсавтсса дуксодаддсес вассєсасьоа абсобБаєосос дачссосскодє чдачестЧчас вра ачасаєстсь Фбассядвоуве бобссососа черева саствососа ассадераяь зво сцссаасача сгсчоаовцаєу вагбазаєсдау вазгсавассу ЕссЕДДасєсо дадеасавнав ТтадОо наававзчаас бадатсбуєра Секс счатесссаєс єСсдЧасавос Содестсодна 750О0Ю асавазсзасає чоссстсабо аасасодачоа савувусчач чдачавачьа сосдесваве 7-60 вестссвсса ссасассвує сассдосеву сбсІсссавса ссассвасос сваадзчечад 7620
ЕК БадсОаса дасасодосЕ сассьссваос восасассво остацесод сосвасасесо тево зссабсавсв осстсотгОоссс чдрсавсвясва дачазчачандча даачачодава єсвассаєахє ТТ чеаддадчаче аагсадсасає даачсесстасс деЕстодсав ЕБаєтеЕсоЯа ЕЕдссавеуєе 7859о здассаабаа чадчачадає єЄсодуссаєсс даскосавач дстаєвдадяа садсасесое твщео
Ссассачавс сабсвазаза ваабрачьеса ададесвест удачасчасяа сасстеюка тва0 чадасусєтьст тадчасаєса вас сссасбаз азасагосваба аазакссьсо сдаєуаадає 7вво їсасзассає Газаастдсо стсвасєЕсуа ачечадеєса агасваєсаа аабсаєаєсе воОяО чаассдадее ссвавьесає сргаавсесь сЕваавтсте ваєчутавав сарсвасоса 190 тсачдбадса судесестЕв сасбостьктс заваачачет застасавас ачаассвава Ві бо ствасачеса дассовачеас ссассозаос авасзасача ссасузуєсае часссуссас 88220 саєсстсссс стоссоудесс ссЯястсрвда атсосававс ссавававаєв содсаєсвчаєсюв вегво чассадссдас чдачсачуся Зааааєчасу овасаассоос тозсваєтоса ссесавастсає з340 чЧсесассазе ссасвсдсса сідасваєссе дадбсссасос стовудеасос всстрасваче вАдо чачасчссва ссзсстодсад саассадсод дсссассссс сачсчачсая сууавачасо зібо пачЧасістта сссвосевсв стаавсавна счосаєчаве веьсссвдсась вазасестса Бей чаазазагвос даватссеза ассвусасад Еєссгуувеса єЕЗаваодачс савадсудав вввоа сачачсдсза ааггдудцааа сьтавссаву чадо свааво дсазавасчс сцчачавасс зва сесдстовасє ядаазудоача ччассочаад свазаавоссе бассясасоя садачазаду ато сябссссута сБсеуоссссс сосусдсось ссбседчосус сусссуседе сдссоувссє втей садссдссассо дастадссав ссадчдкааав савастайва содаюсвдає дстрбссаєве вий стсосубжссЕ сдсадрадсу сясткодЧаєс Багоддоавача бсєдеччає сстачча кає ваВО чЧаєседосесс чЧіставасачда сопокпсоавя даєстьоЧчесс пекасчеассеа седЧчасаєоса ало чавссасасс ссдассазса всазссстасо дтдасскзасуа вався асесеасває зов чадасцєенаа чаазссзаван асдчаєссвтає ассадувсоача сЕедчаєауч ддасссаєсту зав завєсацчесвад Сстссеєдсев цдаграасерав соте ссоЯ бачаєсссувь сацеавасає з120
ЕбасЕссача садавссдав сваєчесвесає бро сеевс авдаєсесета согадаєво з1во агаддазєча саєдєсудаєс бууссодас дссаєдаєбос дсцебоваво щшссссссьоу 5240 гсдакадаєє ссодасасфсеЕ ассоасооуєсс асссасассс одбсассессує сСабасебаа зз90
Ек ассасЕс асрасдаака чассгсогавасе Ссбздадсасав чдбеавдсаєсца вабавасеца зво гсЕЯагачтасє дгасакгсусє додачекаву застасткса чдассаваєвс вананавчавс заго астадасао ассудусаасє сатсссаєсод бостсазтає сасвдеєскує забудете заАвОо їстоасуваує авсеттісСсуда сстоавсссца ауасачуєдє сястабарсо єсвазацеса зай сЕадзасуєєт абстдавача студвасваву Єдодавтодее Сасстоваає єсостуєвесЯ зебо ства єссва аказасосту бСачдасбаначава вгасеаєЕснагЯя водсваєтья єЕсуазвзатеве зве двЕвБдЕссї агдовдсстя акосасудод савуєтачса дааєсвдсава садесавасад з7Т20 васссаєстс трасстссава бсссосоцава Бссачссваає дсаваєссос стбавочувь зтви їстссдаача содсадсвадса кссасдчачеє Бабосавесе сессабсдса садчаєсавад 840 задач зода гдасассаав Єдасьеоєдад осСвсувбосто сбЕЗадорсяє дсесЕСВОУВЕ зво їссасчддсчс чдсагдсстса создедсавос адссчдсося бавзесасссоя саваєссосься зЗ9бо часеоБссссаЯ чаасосчессЯя саєссосаде часвацієчЧа бсЕсссассу чсессЕсатд 19020
ЕрсадсЧасс сечецачоду сЧдавасосус авгсасоцоєсс сессадавча счвачастве 10089 ассавгасца дсваддссав чсачасдзата доусасседса бесоабавоса ададсавевес 19140 гпдЧдассаєсця агудоасоаседа свавчсасудс сесетоучеце сповддечеос чЧдебечавсьо 19200 часазтщдосоа ссасочдоастяд ссодсстчасу асусцдсосоФд созадеасова сувЕсЕсцЯасє 1026 засасстЕса бсочочсчасас стсасстсаса вачесдесседа соадаєсеасЯї добдвасеся їоз20 стусоасоава гачачЧедсаса сасдавзасоу чЧаазсасзчса ассесбосссс састасстько 10380 сасоачоссча адасуссдчає чосаваісвсо басоусумес са чудессс сасасачуса ї0440 авассесяасосо сассустедо сдусосссває взссосовадса всаєдвесЯцє сяЕсдвчєса їозОО арсасуаває чдсчвісарає соузавацаєу стадсацочес єсоЧецдссва ссрсчобаве 10550 чЧачасядчаса садасччодеЕ чдсадсассаєс сусстодавч дссдсодева дсбсаседас 19620 сазассасса асегуссудЯа ссассооссо бсдасодсою оседссадЬ рдседасссьу що стгЕдскссдд доєссдасуає сассавестіс адасуєадсода сдавссесаєс ссдсаєссуде 1074о0 стсареєстуча саскдсачдда ваксодусасс дасаєссівач бсассавосо чдчочдассасо 108600 часаЯадсоазвац асотоаусуда сстусосвавс сустестсоса саосдвадас саоєсасаат 10850 ссаддавачасс чодсчссс с дасчассчас дватсасоссув босісосся сдссдсоЧес 10820 гссдсаддава чдодедасосцє даєчаасуцї стодаацавое сседецессава чуувавасває таза счссетсосоуЯд седесадсосаа сддасссаяау сесваєудесдяд сасасвдєсча сдададсдад тод зедссдсвся седсдсоасач осусасьуас оддсавудуєєс тсудсвасус сссуддуєсуєо 11190 есчссусва сссапсссда Бсассусаєбс сссаєчачеє бБесессосах чадесЕсУсо 11160 їсачаавасс стаосСсасоучЕ счасчаксадсе асчасвсасся ссассавясоо сосададтке ТО агдчасстча БдвдосадасЕ чаодечедчавзу вссдавесосв ссчабасчна чзЧчсетасстова 11789 гчадессссад чдасссЕсуєс Сбозсчсесссвд чдеавтаєтся аєстасерчеєа ссассстата 11350 агерасесчє авоадуєсссеь апебассаує свт сатесв чес есЕдаза засаєседає 11490
ЕсЕсувесає дЕадодсєсо сссаєацево ссостоасрає чассрусаєє чесеавуєдча 11450 асесвсстіта бауоаостск аврасссаеу ЄссубодУєєю дссдасанавас даачдсеога 11520 сЕкОодсаава сБЕДдЕдЕстає яасаєсоааа се сЕКЕсЕ всЕсдадая: аакЕдвудасо 11580
ЕЕ адсЕдас дЕдазастач ЕЕсЕЧдатаї стоаєосься дає Есодсаве ссгдачаєсо 11650
Ксадстуства чаєдадстаа стчасасюсст Базставатя сстосссасса чдазасувад 11700 сратасдаваа адачавсоясо сЧаасасяса дебоасатава чдассасасессвачсавасо 11750
Бсадесуасьє єЕодоЕЕСодавє сеЕсСвзаєста даавсассод астуддадса дстададесса 11820 сасссвацтіє ссетаастасу ахгазасевоє сосгдєаасау агаквсассає сєказадсдас 118550 счсабгсСаза стассзаБЯЕ сеЕдЧасаччає абсаєстоусує ссааасстазч туачававасад 1154а сабстасвад загсазвссуда сакстазавад Чеусяовуазва уусвсассову сссувесать 12500 їасБасчдьосга боссавесаєс ачудівсосо сСсоодававас Есдсаросе дсосазесває 12050 чаєєссвувс сваєсаєсса авозісоудаа вудсетоувсоцча сЧавадсачсв вбесазавад 17170 аєсссткочо ссуєстодає счуустадавгу обсосачедая сбадстогроде 5ЕЧавбсесто 12180 засядсачЧчЕся сочасубачсес дсацдсдосяв вавасссть 12218 «Іо» ЗЕ «2115 121797 «12» ДНК «р1з» Штучна послідовність яр ох «тез» конструкція ДНЕ 404 «00» 8 : зазачсссса Бабодассає сосаєсоссо одбсастьсас сука соддеа Уудначуєуса бо сагддасвсад гГесксаасду аязаєбасстуя ссєвассдоє всаднсеЕстьос врадчаваєсса 120 асагчесваче сссассдачЕ чславдсасс ачдсочечаза ччдасатаєссс авассоусааа ев. 180 чассссаврує ссоачцаваєс басаточаєс ачсвасбоває асоасччсса асагсочадаа р) азачаввчав газесассава ССС ссса асссававає ссаувсессо усаасаврає ло таєзазаєчда задсасатвт суасаааводш асвааєтаєсєд асеєсчссчта єстасадасу зво завоасазвзіза асаваєсаве стае седва ааєстекаве сссасуєцєе сасаєєсаєсд 320 тссавасудя чассЕачасу адавасеЕєса суавсуаєос доссассасеє. савудЕсоаа 480 чЧраєсєсдесЧє сваєсааєсу дсаадтсаба авагчсасбса вавватаєео бсвьасссяа ЗЛО скгасазааєсс аїчадкасаа ссасзаєсає вагосвнаєсуа стадавостя асаадааєсто 0 гЯддаазаєса саєсазаочаа ват ксвсава БОБ ставаайс есазудаедає авасекоатає бо гсадгаясає сбЕдсвзЧче Сстадавссд ававзтвтасє ос тостач Счвнатачуєа то
Бпавасоддсаса астасавусч сЕссасьсоб саєассзяст бечдчсеясга чадууссасая 780
Ісгоавседсасє сЕСтассСсав аасаввасиє грдсавбаєсос сттясварсо саваєссавне вай асасавасСаза гавовоуназча авасянавіьває астввасєссоа дваєуавнсва ааздассата зо тсакрсаєта астсткотсс абссаєттссоо аГаєсеваснує Єссатадсуа авасодавса Зео ваваасасвч Сааассасав чЧеастасавва Сусдрасвасча аачасачесЕ Єсосавнсуєсс 1550 асзасастса авастсадіач чдатссссвуаєУу вБассасас давастсдаса сабссчаасьв їо50 часзавецс пдгсдавассо асдагпасодава счавадчдесевоу чЧестсвуєсча сдсассяцессай 1150 счаєсестааєе саєсзчаєбаїєся ЄдагсаровЕ стасаєссва аЕссстасда дек Есегав 12590 чзадсаєссьдс адсасе ето ахадавеЕста агасадсаве авБЕсадєЕчста ссксстсода 1250 чачеБссссв стаасаєсеєса акадчессусаа счвнссаєсс таєссутадь сочасесрве 1320 ссааєсЧчЕсс стЕСТЕствУ ачуческоЧа доссаассоет себасосеве часясавнюки ізо стр содсосо сствсвачса чссасабача сСовочдвавса весодассява псевдо 1440 чагсоаозовадц агоутсоаседча дадечдауад дав сікадедава васачсадаа 150 чаБєассчЕчта бааауєчіса асчсзаєсутс ачсасссдса васававаєу счссцаваза ізо їзаазачачьс дсассссвад соссесавааава дЧавовавсда сродававча сссавссаса 1ї8-О забачзасоуа ассостбасава стат сааає дсачазодаа дссосодаваа дадстадево їево ваасвссосс дасте стсасдваавна Гассусачає сдсосссотааоа вачстсаква 1740 чааєстааааЕ чЕадвсдаву Єссводанрає сасудаєчеає ассясаєсвас чдчастрдеєвдад 18500 чавечгсдує ссагдучачає сстсотаеадаву сесустєччата осєдсавеєбас вача ча 860 десазачасса суєувакаво ассодссоває вобзайЧача зоддсвссодад саачатсавдає 1820 аєдсавадач аваусаасаса здбассассву дгвсакаста дабассаєся чдаваєвзачу 1880 ачдадсавасаа авададавнасть сЕрЕавссвс вааарЕтвась асавсаааса васадаєсаа 2040
Бадсаєсвава гастдісадЕ асссастссо Бсадасваса абасстазач савзабаєсаво 2100 гчассттоає статаусово аатлавочадч сасачасава сасбсзаваєе сссеасета 25150 тасстсастсс геЕсачасуєє аясавеьссва сасасасав есававасвоу парачдавса гг
ЕстааєтьсЯ чЧсзазвсааса адессстдсау аосаваоваве гассасасва ссадссваєсаа гро таєдзаєссс сатассавьу асссасбуєсад баєозадсоя дра ставає саасаучсаваг гай свісЕдааєс саачєдсост абавовоссав сабосоуєсста засСвавсасо десаавасаєсо. 2409 азавсасаса сЕЕсСЕсУсає бусрусасад дсссететесь собєбсарає тассакуєео 2460 стасаєесся сідссасааа ддчасодсаво бБавсовусаєс взоддсадааса одаєрссача 2вВгй чЕЯгазсЕст адасссачсЕ ваассасрог сачдсаассСсаєс савсасвачву вчсаєсесава гав чаваєдсдодс адсвасваадч девзачечсу сачсетуачеоє доавссчавоса содЕЧачеса БО себасдчває аесутесова са сеесос васадсатод стевачсова саддаазчас9а 2790
Ісвасасєстуа сачаєвесссв аагодоаваєсч васудссствос сягсасСвукоя Чавес ессею 2750 чдедассасса стдодексаЄ сасвоссаєє ауєдаасдоч сбаєсвадає ацдевстеєюсе 285890 сасаєстаюес бегросасає сСтдрастаца чдавсосвявЕ жЕрассевеєсоує авсазачаєса 2880 зачаєсдавкє Бдусадутас чдесевасаав Бсусассве ЕСсоБЕЕБЕв Естедбсвос -ЗАО асзацесачс тастсуаєчЕ єдаєвачаєь аствосазвад абсдсссаєта асбббазуве зп
Еессзадсадас ЯЕсЕссс соазассгась дЧассаєчасуч сасасостЗч аасадрачее 35560 тастрЕЗавсє дагзчавсссв савєдчавєове обасбадовс садесваєчч ЕсЕадЧачась 3120 сгдбассста асстооєтда дасЕггсочає сдачуаассоє ссоггасаза соте дадЧа зіво
Баадчадессс света ЧЕСЄ суЧдочавасе аасттоваєса вачсчарасу дереуєасося ЗЕ тасссаседа асссваєсту двасустост ававесотувУу ссовадестав ссерееваЯ зво чЧЕсоассаста сасЕсугсав асадсаєстаои дассздассоя бсаоддасадє сессресас збо
ЧЧеЕрасвьвде ЄссссаєсєтеоЯд гассацауда ассодевста ссессудсває вавчусваво зай аєдсесЕЕсЗа садасдсдсс саасазесся ддсассаєсес вЕБЕСсЯаЄсСЕ дубссоссаса ЗАВО зассадерає бсдасчсєда сазцаєкась бгсааауавд сссасгтаась їсваадестьс зо чаєодчасабс сет оессадава асстастудво саєчаєосас двссодавс адсаадЕсас зера тсСсансСсова чаєтегссак судассосеса базсьеЕсеяЯ ссьвасечссь чдавчассеса об тассстдаєс сеЕдстдаудо Ектаувстда давогачесв осваєссуава ссрассвасе зга судсадуєсза соддеддсцеса зчаєсснава аасвсвсава ударесвавтс ссрссєве зЗ'ВОо деасссваза ссвувасаво стасссосся єсбасстаєс Чесаватсту своучдечаєся 3840 чседастаса сааутасауа заасавебуду даваачаванса свасасачаеч абуєоссаєс 3800 ачасрсдсавя даастсдсас асасаєсває саватвтдасе ссавссєдава Едацдсабасу збо їссазаєдса сдсачааєсс ваксадчадес состаєсасач стачасачаа асщтаастовча 4020 кестсасечає чтачасстссо содскоуауа суаачдуаєсо адсассзаєс ассадвосає щово веЕстагсодсе саязданассс арассудасі седсустоує чуавуссчаву Уусссяуєваза 1140
Есадареаєс дЕсстраксс акдеєстедЕ да цЕачЧнЕ удассачавач Єсасваєсагу 41295 зуабЕстадас давсвадуєсдо адуєвєсдвад єдавуссава дсодасдева зсусадваве дг во чсЕдсачсва чосадеазоавад сксачадвда ссттдавось чдадсчасадач ссочачаваєсь 4350 сетрБсадцаа саусаууєту ссассоуксова адсстеуасс стеваєчасеа дадасассся 4380 завдасачачє збадачсства ассаєчодчса остачавчає сесессвцея бедчавасьає дАдОо сдазазадес чдасчдадсяу баддасссачу Сдавадвачуч чдасчасоасос седесдаеюеве 4500 дсассаздаа чсастєсуєву базсссадес садова са чдасоссЄстес вадачесеае 45 садсачсссс звадцедчусацю боддсссасад весессбадчасє чоадчечсча ссастсоєвдє дего
Чет єес дкадоагсвоау зсдадвоаосес суссеєсеса дуссаседсас годзадзавнацче 4550 зчЧаєсттсЯє дчдасоассосача бвдносьбваде суєосодоса адосуєдасо ЄсдаБуєсаЯ 4740 счактоадвудєса чЕадасотсс бадесаяавода годазадчесЕ своаодасдадє соуавБаЧась 4800 гдЕсадссуба чдазадазчач чзЕдагссуєої гсоваддаусс даксуадддєс седчксєсда 14860 счрацеродсс здуассачіач стааводась сестссчаа чдсадсокоаче стьсачЧчєдсу 4550 тагодавсіс Забоассостяа вадасасьсза асвочсодчаяч стгасочаво чдадесстеда 4580
Баддасачодза чат чоадчасся ЄасєсЕстасча Здасодсдад саччвачаєсеа дадЕссагаа во ачасадєсова чадссадстся дЕсЕтвсасоєс ссєЕгддачсіа садасочасєся ссогачаача здо чЧааасазчддас чансачачесс аччасзаєса чсчоссасссс сстусудаач сочЕсозасе зів таасссабас зчеЕсссачува дадсссстоа Чуссцдсесву усстасуєсеа сассазесоа древо счсаваатсчосс дасдкастувє сода ссвусь бсвастучсЯ всаодсадавт ссоддсаасає з28О0 сстссачдаєдча дкачссссаю Єсебсцсеєсда вдвостчадЧе двсестевас васачцачае Зззао чааБеЕкоачЧс адестдчуся Єачасодаса одаасвочас сссзавексу зачасчдсва Баосой зачастосас здддассвасаяд задсодчдась соддсстчада давасачекст сачаєсчасЯадч Або сстчдауваса ство сас вудчасачач Чеасевость ссвоичачсос вуєсчсасьаа БагО сатаассссо давастасс сСусадасеєь девосксадс сасчасостс часове оо асєтестодає стьстодсд вісвучастс садаєєс есдас сакчяавучдес ЄбссаЧчадчає веда сччечІсоуа чочесацчасу чрасесвовда вовасєччса увачовУчсЯа вдачдсаєсту З7т9а сдавЧаддас чдосавсдасу сссядоабсовб доссовасчаєс ддчачасасооя доссоЧасда Зз7тбо себоссссдає чосодачссЯа сосаддаєсь осевоусадоа псбсессуодсе асусасавузча зва астсствура дЕссаустсю Ессадаодсає ауєсоавадє 5бсодссабо вадсасеує ЗВО
БаБаУстаЧЕ сьддчачсеЕсу чачскодасо Баасожрдає суєдсоявсас ссададеває 54 таєсадаУс чпоссарауєт даксасттос всетасаава аадехссодса счачасстєа водо
ЕсБассасавда абсачсчавав сазааастас счасчавсвва сустчачоава стеававьс боб асссасаана адаачаваде аачаєстадс аовстваацче ссовсуаауое адсацаваєа віла гаєазазаса савассавау дсессвркКа осоєстюсоя дареаєеаюсс вдсасудечУу 5180 авасЕссавда сосссосатса бопсососав Савоудсчоба зтсчеачаєсс асасбссозЗача БО цесссавтос ссусуаудаєс судассадає ососасусодос дачадсссса досадсечачакє во сседсссстієс ссусщдеасся атсбодасос сасчдачос яссотсбечес сасссаваєсє оз60 ассаацасса аздаседчача ссчачасуча ааваааааваєсу бачавачава даузчачадчоау БІО чесчавачвсоачЕ сассдчецдде чдасачасусо бесстсучає сесасччває чсесвассссга вава втугассесос аагадсотоач сскдассару сддавовзсоу вссседУдча гссвдаєсає 5 чачассвоуа аддсас Стає адродацессе счвуаєсавс савассдасеся ЕсСсвузвастса бедО гЧгазасост дасовдссає саруєссадчод Бусабасдва досчаєекєда асбБаддсьудае БЕБО здаасасєста ссстаусаац чеавесдкачає гаассвасва вЕсУукасуєа сабстасдєе 6т20 чаєтаасувчє базаєсаєсу чЧесуавсаве буяє садесЯ сдавусассс даєссссюаа 657 асдассвача сбдстудсаса суасасаєтсу стдоассвае сесттасочає сасвачавеяє 6240 тартсвравсс соосчасстьяЯа чдсебассдода суссастсу саесаачсдсач счгвдастчсд з
Базасаазеє асотчавсьсс стЕсЧссЯаю гбааоваєчос тасосоуєда ссасасаада вдо чачдчаасаєса саєчавассча чассоддачоача агассддавсес аєда сачЧчає сдоасачаєсае 70250 себСачтссва садеусвацаава чЧаєсстваве басекЗчУє єсасскесав усСасасдаау ово часачччааа часоссатту сачеусадеє Состдосуче ссассавасво бваассбасає 7140 хапасасоса дстассачеає соддоесочесх ачасачесва засадессяя севодвесає 7200
Чагазастдс саусссатчта дсясесодда Ексттеєсуа дсевасадчаа чсавчачесва. т250 часазечдочЧа адестчдавав босіссвсстї осєвобосбес ссесбосексо ссвстосе т732а сЕСтвСсСвстсв сасчваєааа абсесїсккся Ессодавсад дсрауавессь БЕРЕ сева т7з8о асуавссачі дадссассваа сЕссатсудва Сасвчддваса взавесосаса сусасавуєу Та савасачаза астгтівнссак стсавосдесь Совоссосчдаа сасаустбавава чоаравассво 7590 стаєсвачах чЕсссдсусо садссавзадаос сагувсссоЯд сабеєссессе васкссудев вва ассадаєсза ссаєсозаач сосстцасоєс бзавзаваєсо счесвдассвае ЕСсатєсессза т6а0 акавсстачуа саастансаєй саєббадчадчес БЄусаводосю сбевессодедс свеаесводав тево сасдсудсяч осісосасса ссвуадбаде чбсоводете всбесоасна. сдсеаувсье 774 асЕБаєБсас акдсвааєссае, чдФеЕстдсавУ здбсуєотача сс кЕсаса бакстасаєь 7500 ссусовоадач чбдадоддсся ЕсЕсСсрдавс оссвсувова адесоеєвсає чанассавьь. 7вео тсдастассс асоучаєссуєсєс аасетоаксоа адотессатас сепасоссчвса асазсавуєе 7520 адесчаваса аваресьссас астсесдеду сасстазаде оссавзаса уочсавеоева 7 вва астдаадеве стаєсдссвад аачскврЧе сготадаеся асдссуєссає чрасссассу 640 таздасьрадеса дстеЕсеавев ссдасаацев Бадсостсдада савоавсаєяа сббсссвоса 1650 асагучадут аадачузчазчу ЗадазавЯєає сдсогодеса осгросасєЯє сасастадчев 8160 аскддссвчс боксссасає сассазбусс ачусдасуаус бебадсясає ссассустьтсо вага асесссодсса ссасассаєс стачссксос ссвасвнуєса ссобсвасус сссссссосу вБ2ВИ їсаасасава адачацазач вадачсачач Сачссасчсяа чдочадаачча вва баскго во чаідссрасся вБЕтадсвазс ГатссрочаюЄ дссавачтса чзадссавсава сочацчечать вою
Бддесагосо чеЕсодазачя сБассоудчав ачсасосесю гассяуанасо чдосаазачаз або вагацтсесуа чдчадессвсєсо чедадчовсоє сусесеассяна адотостесе воуасассяа 5 атіссаграла засатєсадчаа авабсссісте Ччасовачаєсе бакавассавосє авааастдсся 58 тсзасссуза чзудадессав авсааєтава ашсасатЕся ваєсдачеЕх сваєтьсасх БО
ЕбСаавсоссостеє гдазаєстса абчосвазвас аксавсссоє сауакачсає ФУЄсобЕсБе ато асвсссрса авазуадеєса аттасазаса Чаассваваєс савасауєсва уесесвачаєсс ве сатссдваса авасавівуає сасодассач чдасьдосасс вдссстсессс соссдаєесесо 38520 счдессттдаа сгтсваваєс сваєаанаєс дадсасвчассод сдсссодчаса дачсадЧчасаа вВаво азавасчЧасда аасавсесост стааєсстає сссовастася ссовесавес сасасасовги вла
БаасааєссУ чдЧБессваосст сЧЕачасеса сегасавчесд вчасЯаксадь сдсгсусаче зво зазссачсЯдУд сссасстссос ачечЧасесоус чЧудтачассть удаскостас ссасссасає З0бо їавасаввас досатдаваса боса свота авасестсвч вавнасьсса асасссеоваа 120 ссачрасаде Єсстуаєсеяе гддаусацдес ававогочацче дЧацчсосава вес ддавас з180 їгаассчача ЧдоддеЕкавасу саавазодсео чачЧчасдосто сочесобаса чсазачучдаач ЗА чзачсачоаачя бочавасссю ассасчассоє ачдавоваваде ЯєЕссссчвас ссЯассесься 900 седсдссове стосусосдсо зесечевдос сесЕсувсссо дососсасся дсгаддесаво зУєо сачасачавао авасанааає ччасстчдата стоссас ес ссезсесссс чсвчагадсоо 420 чесєссцдаєст аЕдадесцає стувдуєцаєе седчдаєчва чсвсдссса єсЕатсадає зава стаєсдчдсуд аксгддаеєссЕ стасдаєтоює севаеуєссояя асесдесаесЕ єдаєссауєча з54й таздессоасао асссодсоза васоавесвата єосєуасаасц асасусєтавно аабсодчаваї зе00 тдасусаата вБЕаодудоче сосоазасчоу чассевовода асбадьстав ссссстасьу зве асаабебБуєє сот свдаЄ адаєстдЯєє ачуєдваваєс вас Ексудає вдасствваве 9720 завасвтавЕ БЯсЕКСсЕСаВа вассеЕрствс сбадуєвата гвадааєсодс абусучассє зтво чаєсоачаєта ссатчаєосу соадстчааваєя ссестстчає суатсаочаєтеє счагавосвта зво стассадетса сстадатсса Сасссосачсе сасвстхтавс ссассосеса срасадарад зво асстарнаст садоаосасавад сагечасуда часа ЕцЧеве ссосаасаву сасаєсуєтад заво садвоастзада астатеєссау адсаадсаса дазваазатра ссбаедасаца седоддсваєсє 1002 авесдасадв сЕсгодсравсо абсдоссєтака ссодогтодевс ссадечсадва асо сереає 0080 стЕчЧасстодла чагачесуст атрасбаєсст газачаутсає пачваєсчсва ссдааачоає 10150 тТасаєсавас дсассчасвс асссобдуасєст состеабесос сесусстсда савааєссьЯе 19200 чабававава астоссавзоау сдраасесеє счЧавзансессУу ЕСсвБассста сусадсстоа 19760 гссакдчеус аву гтнасач васогасваєс чесстасача асссаєстеє Саєстовавне 19390 стеседаває ссадтснасч саваясстсос Єбрасеуаев стосувадас дсадсачесає то380 ссасзадстс авсечасссс дссасвосоя адассавада воаваесчадеє часаєсвасє 10440 чдасвстдаде єЕБрсабсстсє бвадодєсаєуо єожєсстеєє осасудсдса саєдстєсає 10550 чтасдсаадса дссоддсеосуєс авосцосоодє аааєаостота щдостстсода вассабссяЯс 10560 арісссодад асазадаєсдає сесссвосуд бсствовоЯе сусвсодесе сцдсдадчеУае 19650
Чазасуєсдєса ссассудссє бсстддавдас дадоасаста ссозаєсасода са«ддссаву т065О0 сачасчаєодч чдсдсессасаї ссабаводаев садсстасассо дчвасовосза сЧасаседае 10740 заєддсудсе вескЕуддсуєс Єдадасавсо ободавсєва дсваєососдо сасачастде 108550 садсстічаєча БодадсеєсЯЕ содадтсотаєс ваєскЕодаса дсасстьсає суддсчасуєс 10560 ресясесасва адсчсесоцає сучсеЗсУєУ сЄудвасесує бСадсуєЗаває Уодчеукасад 158520
Чдедавзаєсуд зачдасудтда ссодбостсос уссвсоєвує усуачасоддза часусодаса таз8о ссузссасстї ассусусуєс засадесосо дсасвауєда вубессосоов уссдстедес 11040 чЧасссісваса сусссодесає саочасоауес ассуадссца ссаєсувсчеоУ сдвєсаваєсц 11100 чазазчаєдс бдсадачзевЕ Будсуєсває оєсяссоасод вдасоддаєоє содасадеФва 11160 спдсассаєся здсессдчазад ссдсддусава стсассдаос васчесвосуа сардссацас її28О часссусссот суасодцевее сссассоЧье десусссьоє Есутссесоау ссесчаєсувео 11280 ассасестса асубассчак даассосасо садсассуаос СсассосчЧас чесасадува 11340 агдачдасяассо асассувадь свісавссод суссргассу чЧчеддедаача сугаддечуав тТ14ро стаєчеЧссо дсресіссає шотгавацаває чдесвсадкас сасвачаста сясясассод 11460 аєчассдасу загасссцає сепсусваке досчссуссю седесусаадо дасчасеява 11520 аєдаасодіс Бодавоуваєс ссусуссаву чаваачсовес оссесьсюсуєє сдесчесває 11580 чдассрсваде Єсаавдасує допаєвссядає дасддсдача собсестссвє счбБасасдас 11650 садсссвдасоа дсазадооє сдасавгсасо Бсаздчсдосо осоєбсдесає ссасрстсдає 11700 сассасався ссатдчачост сстеуссакя чдедсстсурає садааваассо сассасоаеа 11750 часаатасса саасдвісас сасчачевос седдацессв бечасстяво чассадасса 1182а часадсцдаача ссцчдаассссс счасасодвач чЧчеєдестеавеЕ удачвесссааду чеЕсесрдость 11880 чЧчавдсстводд савабуєєсьча ЕгвБастдєсвас Баєсстаєда ссєасссЯса одеса 115 гсгаєсавдаєв бобаосдувова чеЕвссодаавсвяа вовжЕкщдосЕ зЕодастаєу садудбсьодо 12500
Ед БадеКЕЄ сустуєєсуєу ассрусеаєво сссатесувза ссбсстосує ядусасссюьта 12060 асасссвачс ссасчавЕва ссосвадасу авацдесгераєс сесасаваде сасаєстата 1210 ччсатсдаває сєдеЕвскЕвУ сЕсозовава асеЕосдаєсь Ебсадссодея бдааасвачь 1218580
ЕЕБаччасаєс сдаєкссстід деЕсСЯбавсо ЕБбадаєсоє счдссооосстач чседадесаза ПВ) вчасскост аадсзавідо бсебсаосад васасусаос тотдгсуваза дадааедеде 12300
Ччаасасоасач свБусогавач ассаєодвоесо вадсавасос сачсдаєссє гоавевачаве Те сЕсааєссад завсанссода стдцувєвцо обададесас асссавцєсс ставастатєда 124950
Баазадевуєт стдбазсада авасасосаєс гадачсудес дсадсєтаваєс сбавсазакаве Т2АВО дасаддаєа баєтадсдау бааасстазоу ауававоаче зБЕБаєрада веаакссоюва То асбсаазачоа чсдсдааваач десварвссяьв всобосавнє дтавсусасяає ууеосавосаюєа 2500
Час ссссес соадчаосаєь гдасастссу гадастаєвася асстсстаєсс авассасссав 12550 асцдісучаза чесЕдасцас ддадсадсав Босаваааада сесбсєроддсеся сєдеЕстсадаеве 12720 чзассацдаача Есчаччадас ЕдсвдсЯдЧов Сдатсостса асусадьояо чддасасадса 17780 садсяссдаа ааасаєв 12797 «105 З «211» 11906 «ігр» ДНЕ «3» Штучна послідовність «вв» «223» конструкція ДК 423 «ро» 35 зазадсссва пасудаєсає бесассдеос счаксустсає собУседада ддзачасдса 60 сагдастсва сістова од аваєссатеста сесвассячадєс ссацсссбос чсачдавасса, 120 асагадсвачс Ессасецуав дсаназсцує вдсудсядса чзававаєрс анессатачає 180 часЕвесварує ссддачвавсс басабцдаєєс вадсваєцвнас аосасудссв всагсадавеа 2АЙ азачазачдад тавссассова сек сса всссояававє дсадасассс дсацечеває зоо тасавзаасча ааутасає сь сдасраазасу асаваєсвнод абсодосуєа ссбагбачосу зво вавосавваа асаваєвєать стааєесядЗа васовтсаєсь ссадавсдваве Сасаєтсасу 420 їссазасода част тачдасо адаавоєтса очаєссчасаєс дчовассаєє седвачусодад во чЧсассасаса садасесвак сосисок о скстсасісва аягсадаастса вставте 540 савтсастьса єссставис Сас зсчав саосесаєссв сасбсаазсаса зававсаєва со чЧчадазадана сасазврасад адасуєстевеа бовдасссце аадвасссус асасасаєса БО зссаваєьда сессавосту авасчЧадсаєа саєссвазся сабБадсадаве. ссааєсвдвад т20
Ебосрассас адсгодасчуч ччаєсчвнасто дасбоксоався асачасачаєсє оссдсрада тав часчваччас бсацсассав буассвауєьс акосттобеч сссувоаваче ссабуєсоава вл чеЕгсасочся дсаачассча ачасссчавба сассачавса ссавесерає ссаєЄдеавево во
Чдаидасввева асдассазчада воаоссасвцчес очадвсіссуч васевавасачцс дссзвзадЕсее зво чагадсвачодся садсочЧчаврадс чдчасчсочса дечстасвує азочсачеча васссачуче 1020 чЧассстЧдаас сводсдасач адтссосбазуа ссососссводч засачесвочи сессассуде Т1580
Чавоасстуда ссстсвасуа бодадосаєс сдаудасачяа чесоасавудеся єдассасучо 1150 садссчдчдеЯд асссссксадч суєсдатаче ЧсЕдаясава ссуасоудачес дабадуєсса 1200 час даачазоа чдадасдавде соссодосаусе сСеасаєовад вассаосося сдсадеесад 1-0 врдабдаЗач баддадссЕкс ссаччдуєєс десвалаус ссасусудся ястдабсуає 1350 ччачеесьЯоа чсдчачасає чаассавсасев дсасвсзчач ссовачавсо доачсочадчех їз сьезсссьс содссассає астоадсчадчава дстассьсс укаасососа сабадасось 1440 чЧесЯдсЕСсСдус сагчссосаа суботаса ддосаєддеЯ састадаєст сстадесовве 1550 чзадчасадс ГІстоачасяаа дстечдвеада стсуводесЯ бадаавчдча вудеЕчаєеое 1550 ствосдазоза ссчагччдадо чЧесесаБеєс чдассотацзькоа ссодчассачдео адеЕсадасча 1620
ЧЕссткоссу зачдкауссту дссссачасу сусовудавс сстасдссес чдувчасачке ї68О чавсачаєоч дасттдсчча сода окс сдасодвсазча ваасочаве суубасеессе 1740 чадаотсоєад адсаудзада Едачасссдс дагдасєсу сдавссадсє содбоєкдас 18050 чесстьвдЧад сасадудсуда буссакадава сдоддовзасачу всзоасоваче ссадчасов 1860 сачацдчдвсаєс бссстчсуда ачечдаскава ствовсессає дсобсосаде сададесессь ї8-0 сачассявсс аЧассцасЯ барбассачье ЧасосассосЯ вЕсчасебасо чада саУ 15552 сетрсевоаєсЗа суасчусача астедасаас дрссіссчадч савтауессс вогестьодсо 2040 чаацасстад адсдссстса дсансвоцчад ЯдеоУдсаста чсадестоача субадчєчав 2100 сачаднасауз асосгсозавсї будадасчоє чаводчасяде асосчадеєсас ддвачьсцаоча 2160 сЕсцЯдсевуЯд чадазвсвяус сусочавсасЯ десосовчавч сасссочадес дсачауасад 2220 аддсчссттс вЕссаудаць ссачсасуєс дасосадвсес єсдавчєте сстусаууес гг
Есдсадссся дессладасс Еддасвваде драстосься абствсевьвє стаєссасюоає 2-й
Гссдаствуа досасдаачоа сопсвовоасо чдесадсесвя чадодссадча гачсЯсЕсазд 2800 чазадчассочч бадавучачу счачассаос сусуазцчоч асоссвасєта сопссосзвадчає лабо сьтчдсссвасч асучачасас сччдссосчас одеотсстсоа асадточачь сусссадеас р срсседгдааа чадссесссдд ссасдсдсво давссоссва бадсссадоеє стресачадєе аю
ЧазаєгодуЧЯа сЕдеЕсаддеса дсддасаєта ФеЕготаусва дестодаден сдчадеЕс ад гей чагдассьья агсчсаувосді чдестсуцачоу аАеєсоєтдчдсЯ удосаєад ссдаєсасе 2790 стасстасва азазусєтосу сасууавасдстаЯа сасстоутсас вавсосасбудва авачаааваєь 260 асечасодачсес азсостдача сасссаваєє сосасссасва авачазчава чавачанекюка. «ше
Чсасатства чострасчаа дсадсвоааа їабасавайа Басзааєсає звубщесаесь 2880 гсоссберсс срдасессваЄ сСгадсасуцуо счавнаськса аасссоссво сабсбссоєс го засзасччес чассусавуає стасасосча дадессссасс ососуєчача босчадчесаУу з5оа асссвсодссеЯ дсодвоовасос садосасавч ароседесос тоссасасас сЯдвнессудае збо чедсасчаац ссусстсіся сссяноссвава сбассавзвдос сазацаєсовза чассдавчаса зІ20 чЧазававаза содадавада агзчаддачад дачсасЗадва чдеЕасодаса усудвачача зво асіссстеЕяУ ассстакуає чЕдЧЕвОЄсСОсС БУЄЧЕУЕСсВ ссавсачвє дасскааУувУ 3250
Басоадаздає чЧасстадчач часссостач вдссасчссскояа ссадсуюасс свсвссааав зз00 чааасчдаасс босттабсагса садсаводоає ссбосовача абадсоччає сасесасеає 3350 сестрасове адічдадара бсасаєсаає ссассідсвс гдакчасува асЕоуаасае за20 асЕсгЕСЬЕсС сасавасчобо стісдтодавЯя сдсдЕсосаєо сеЕчодасса ссоссадсад зЗяво зчадсаїсстсс аасчаводцєеє СЕбастьсає сасваєчаєа ссасскусач уачдесасове Зеча ссвЕЕрссас бассстсаса асазачсспас вувсачсьоу усавсодчває ссувачачоє зва гссочаває бассобтубас сувааааансї саасбечадаос вісасассва пссасевЧєсе зебо
ЕсдЧазчасчв дос уддвасяд ЄствоесреЕС ссводавуєє сскеусаЧеає чсадацссав зт сЕсрадчасс асідссоудса дадасаєстья саасцаєдаєс сеЕвБЕСсСестЕва ссусваєдчає зво часаєвсцва чддадссаєсст ЄссбЕбЕсса стацесвсас вагзавубда сачаєачска зва часавзсадаа посчадовад сЕсСссодавра ссвесесьва Бсдавааауос ссзавсодас БІВ) стчаасассояос сохсанссав сСеісдсвааасс асвавнав'яса Ствававаса сбсссСасась 60 свассасава сссатавува вассвсва; басСяваєсва 5засевучває стдасвадаа 4920 гсстдузаза сСЕасагавац бдбазадекове ваазсукєстаа засасвачава часараству 4080 тахнсадсаа саєстдсадо сессобачеє спчаявавнтає асесуєтасс садсоватах 4140 чеасаасодЯав асавассрасаа збасЕрась зессатаєста всеЕссяуєса сова сеа 4209 счдаєстдаса саввеескєзаст савайсазав Єшсвосаса вскстваєаа сБЕсазаєвсо іга засасасаас аваказдада вазавоваас вагастівасє Едадаасночвач сазвазудчасо їз асассатсса стаастотес сосатссаюс сессавстісво аЧдесссдасаєч стазаассздча 4380 асаавааваса сязсавасса сааосасвас авасчатаса всававасву сеЕсссссва ло чдесасавьає ссаавстсад садчаєгеву доц Ецеце аасчавассу асчсаєсдадаа 450 сЕБЕдасцазче ЧЕТ еедааа седаєЧаєсво даасчаваде бададсстсва одадеснессае 45БО тчддасчдаєсста агссакчава гсасдвнасає саєсбсотасаєс Савдаєтсєсва єдачевевесю лего азадудсаєс Будсаусассе ЄгпсаєЄауват сбватаесадуес водбасссбува сввадстсств 4евО счаччдевссє сстслдсавв саабадеся бавочавсос асстасстає вассоадоевес 4740 гбЕссаваарся ЕсБоссссвв сЕдадоадесь дчвасЄцдєаає кегЕставьс свесцдасасає 485000
СРС с Яделостасад довудсодеь счасдачава єтвассояЧЕс чечеЕЧавчаче в засдЧасесччад гаЧатасочЕ суадасєсцає дастассдає чсевссваса згасававса 45820 чавазсвсся сачаєававвоуєу ссаасасчво сусауєассс досвааданва асусувсуава 4550 азатаазача чЕсодсастсо авдсостсга аавуавасава созЕсдоаана ачассеваст 040 зсааасадає чдуаавосоїва саастаєсзуа сабсувачадуоа деачсосксу аададзассад зо сасваврасє дебБтаєтау аєстаАсдчав аавгчсовчса дасоссобса вовавассса зіва тїазодзассто авкадтачаво атасссаєсча Баксабоачає чдубаєсасає адесчастуєх ши чачачасцс чдабссасоча дассосссач ваудесасься дтасссасає сасаардавна 280
Едадсазача стаєдсвадь васаєтудціє аасаєтачуд адвачодсаєс дачсаачава зо савасцдтаза чадаацчєват ахасдгоєсавяа сссувачаса огачасбасса ссачдчдавчухєа задо задачазчсаа сазаавачуава асстаєеваку ссгааатьно ссвасаваасва асгадсачає заб саасоасаєса заасастувс адвасстак сосесацаса асавсаєстссв азасаавуєою З5га апстчавсіс дастітатчєе сасваєсваавау дасдсацчачає вавсассава ассссуссве ЗО
ЕсасавЕбас Єсстссаводс дскаасаввЕс ЕЄзасаводсаса сазвасвавза сачваєзуда зва асасстзаавєс студосавара впавтуссоту садастваса вастсассаса драссосста зт їзасасдаас сссстаБаста Гтдасссава Бадтабчавза ссідцбоєста вагсваасаче з'вбО заасссстча агссавдвасає ссосатаасає саасаєзсбос Єбазасаває вссаставас зна вссавассас асастгетсу баксустасеа СавеосЕсгає себечЕсСтеу Сассассато за8о гєсссаграєк седетдссас авацдувсуяцеє завдінассву сасводесавуа асасаявесе Ззао зчзадеугаазе ссрауаєсса составасзво гсссвацсавс сяссасасва чазадсаєве 6одо ачачаазосче Чдасачснаса аайдсвуацоа осЯадвасадач сосубасоса ачасочсЧчаа б5ОБбо седосрбасяч БобовБоувсс ссабусостс беоваєвосу боддетсодаєь усуБадавача 2120 тадЕсдраєс Бдасдаєссть Есаваєсудаа аковаєсчссь вБеставбавао вадчаааессеє 5180 гсЕарадьсЯ састадсУЄв сЯбсасбаєсс астачеааа зчдесаєсрад часадеверт, вхо гсссасуєта ска соссо састнсотасс адвадааєою устьссавсве сосаасаеаазвзия свой чеваачанзс СЕ аеча сСасососвас васістосвсе сапосстЕсе среасскуєее вав сссасавадсєс адокасссда соуєсдасавац агеасксрса зачвсчссса стваасессаа бБалО чЧЕсЕЕсцядвЯа датенесвев єстцааваєть астосассавра всдсагеаєче сочаавсвуєа БаВО чвЕрассссу агбдвачавс сексаєєдає сссогобадче сЄЕсєдоссаа садессавав вз4о аскстуєвзос стдасстсЯає боадусьсьо дастдаудазео бебБесестває аваассвстада веой чаасчавчачс сессссстед срсогодесуве асесвасеєсоа асавачсчає асудестесоува. 65 езсЕБаєсдає бодаасосаває сЕдазаєсаоє деєаааєссе бдадессавацла саавЕосвЕве ТО чадЕсдсса сБдсукссає сатасуєсвсс адбдесьооя сьовсадаас аеасЕсЕсеЕс ство сасастастеєеЕ садссссссоаєс стубастаЧа давасосєт всаєстсткчс авсвзаваудсеа вало вачарусстс соадеачавуас дсссвасаває сссссвссво бостсссрса єстацессоес 600 асаадссаде бдсссдвЯаЄ Єдасавдаєє дожсьсвавд абдсесаста асЕсЕвнадсс ЗО
ЕЕсЯЗагудддав дЕсЕсЕсссЕ дазасттасс бдассаєдчатоа саєувчовча авсадеадвее того тасЕствЧдаєє даазчасвсьв сареЕдаєстьс сгогадссвв гдастаавуд ЄеЕДдоаовс т798о стдсасссто ассстуєєча зУсессуаас кдачавсач сесссасосся зачевскевєва т140 асстадсачуєс сацедадсуса ссачоствоє стуасавачєст дсотосадас аасвзасасоче 7290
Есстсаєссва сасудаоуда вздадчавасо едававсуво дсстодесає ссбесаєедве уже асастадчеса стдассауої стоссасаос ассваєосса чзодассадее ссадсасаде 7 сасодстьса сстосвзасає сусаствеосе гадстеЕсаас савсауссае субсвасасо 73 тсстстссує саасатсвада Чдадачачача ауаоучасчась ауосасуєву сувачадава 7440 хІзшсасаєча досстассає ссоддсавзаєт ассвседасс песзадссва зссезаравда 7500 заачоаочаввс ддссаєседа Евадчазацає Бассдадата страсессвве асгтачвнаєва, 75БО0 тїсавазазава асачееецац вуссаєєсод ачачцащес дссєдссача чдбастетва тва ччасассаза сЕссабазваа асассачава вавіссстоя абовачаєсе воавассаєта во заастоасссот сваттодаау счЧчадсстсава всваєтаава бсасяссоста всодчдачсьсо то ваксгєвсьс саасосетої давасстсва гад сваваса Ссвасосусс вачасадсаса 790 чЕвссесесЕра сссстогсзаа авададсаа ббавсвавсву забсяаавнаєє авсвасевад 7 сосазачзесо агосдадсав асвабачаєс агбздодссача себадессассв сосесоссс 320 сстЧдадсгосс здстессдазе стсваваєсс вавахасбаєсч чсасуазекуд ссуссуасдаУ 7аво адсдЧусодча авзатуасуда зсавсосотс даассссовос ссвастасає осассаасес З0о40 асасадассавсє дасаваєсссоу Есссассстює дгсддсссає сбасвадсба вводЕсаувєе 10 чеЕсусадса ассадтддде ссаєсьссса одечдачсдася чУБавассоса чассствасо іє сасссасасєс азасвавасу дсасчаатає ссвосаства аасестсача вавзассссздча вдий гавсссазає саубасауєє ссегчассуєу одчвададссв вадсозавчся зачсасаваа вав гсдддазчасс саассчачад ЯдщЕсаазеос ачваасцеса ацдадедестос сусесвавад вза завзаччзсада адічодчачав вддадассста ссасассцса дасавачася ссеЕссусаєт вада садосЕстотс сдсдсосьсо бссчасдєся сусдсодосЯя ссодсесосу соуссаєссой За бо стачессаросадсааваса васавававсу чЧчасстчдасос шоссатосст ссдеЕЕсСТЬсЯ вва тадсадесяся сісстаєсста буаасудаєс васосоасос сода сесая ссавсеває щВ5ВО гЕдасачаєс кБадссодкача єстодесвве вот асс басассєдуа себе вело чаєсва3асоадчЕ ачсссабода Ссгачдечава Я сучЧає свочсачеза сасяставаа влою агедадцазає часодсавсає садучааас ссоЧчасочдоч асосаєсчва ссачсессУто вто гсссрусєсдуа сваєстаєсс ссссгочва асссадеса усотасассе усеесацчаса 6520 чаєстдаєса аідеаєсроюеє Ус сеЕтсва асЕсвсваєс баудеваває аддзасодеса во тадасадаєстяа чЧчЕсодастдс савчаєсодії дебсоваакує соссєпачЕс Чавачавеве во чабсаєтЕсасє бдссаЯасксає стадаввсує асЕссоусвє абасетєавате саєвасєЕтає з0бо тагсодзатача сседтаасьв адасасатоав асочасачач сабуБучаєс соаавассаває зо0БО асагсдсрас дадстаачаа сбассссвода девачсвсву ваавававтає Зачасадгає 9120
Едавддсааста єЕтчабоауюс Єтачгасса Бас двад тасссуєсєе гоасЯяєЄвагав 180 сс есатсо бдакстовач абадачагсоаста сСсатасссовс ааачаєсаєі адаасаястає Заг стадааачусе чраєтавуга чаєссуссса сеготцасте сседустодве сгерекссчає за ззассстоасу аказзвавааа стсстазачує ЧоваєсктсУуєст уазасесскує ссвавсстає зз5БО
Чдсаздссотуве ссасодечса ачесвосача ацссасвасч ча сусаєва ссеаєссове 20 асстссвакєс Єсссдаваєс сауесааесдс ааассссост савеуачсвЕсо Есгтцаздаєсч заво садсадчсавс сасчадства босааєєссу Есоссцідада чабєдвадва чадечучаса зх асавЕааєтя дсетсочачеє бсадбсексЕв вадорсаєає свсессосЕсс сасчасавас ЗБОЮ акчссссаса чЕадсазоасад ссддесоува вссусєссуса васссістод сессессодча зво ассагесоса сгоссудсдча свазсодаєо ссссвсодає сесосасусь сададсцасеосе зт20 чедзнасадЕа аавасусадсав саєсчассто ссоуаводсЯя ачсовесчссвас сзарасчЗде зва заччеєсавсчдс адудесчасчаЯ сусососаєс сядсбзачдоава чдссвсассва чассаєседає зва чдчечдссодса акудсчассє севодчсуесе сазцейссоде бечасстсод саасоседсе зоб асцдастдсесс дсестчдасчає сддесьсатс сачасстасо воєсстасва сасстрсвос зей часдвсЯдссв садсксасава дсадсссзава сдусодсдвоє гдавссодеє дсдсодававу 100570 часчрадасача Єдазассуда: адаєчававс счдссрбосоя сбассссоаса садассчааа 10080 асдссласчєс сатсасста ссЯасусасоя аподсстссу сасвадечаа дсессассУса 19140 стдссецсся чдсстосвасає чесоздосаєсс асдвссяссв тессадоесдас сасчасчече 10290 чаєсаєсасуд завазачасуєЕ дсачуєстЕх дусуєсоваєсс гсассуссза часаяадаєдсд 102560
Часчвдсз дос дсаєсаєсод сстуддаауво сусодсазує ссассудеса адісаєсдчає 10320 чбассподдся асссуксово часчасоско ссочдокочева содессссоцдає са есодаде 9380
Кссоадсуєбса ссаєтестсав сувдстадаво авассссасос дсаєсоудестя сабесвЕдЧаєсу 10440 стідсадоаааа содасасесча сабедаваєс абссаасосоуєс сссесдссод содсдвачає 10500 чевддечавнас кдсчедкс сЕосіссасу єгбовадоацец Есасудьуос ддвачассяо 105560 чсчсастссуа дасочасча акассочарь стос цкосЯя ссеосесесеско сасачачуча 19620 чЧчечассчсча сваасуЧісь здано вастс сесуєссваду заадодаєсся ссссісуусе 109680 уссочссдвнасо дсстсввусь савасдоссоУвУ дассусцчася ададсдачас чссуєскосдєе 10740
ЧчЧчЕЧсЯЕдОєсС дасовБднода савудодесес сусавсдося суддсоссде садбсоасевео ово саєовсчаве ассчдоассяєс сакчадчдессеа ожодесавуч вдссесяєЄадЕс удвнаавассює і0660 чссасудчЕчУу асуватуєсає чарчавєсяєс асодвасвсся сдаачЕнса в чаасовеавсу 19350 ссччЧсвЯо додедаачає счааєвстсс Чакасччавауч стоассвдчавеа адссссадад 199850 состсдесва чдбдсстсдас васасстває бассастасть абсеваєдвсь ссавосасоає 11040 чедасЕСТтТає стаксадевЕ дЕдсЯдссвод ЕсСессдвааава сасседевсо седаєсааю 11100 зічдасЕадес єДдкачесьсо дстасгсоаєда осбдкЧєсоає всасодєчдавс сестра т11560 чсавстсраа сарссзвзацуюю счвачсЕсо сасаавасчча вЧдсстогаєь осавбазчачьс 11520 чЧчЕдЕставад саскдаваєс дежекосуує сСедедаасва ссоатувасево садсвадвео 11280 чазваствусс сточасаєсь чассссстоя СбСсесодсвавос туачассяве дсобесевевВщс т134о
Едадссваде дасеассссса вукаваєуєєь сствозесача абасугачесв чечЕдавава 11800 адаасчсуєд аагасуєаде бусоаєзавцда Ебсовдаєссва вобаавестьс вудбдаєсттьь 11460 чЧчеЕсвоадаввс стаасьсача засаєсссдає Бодцдоводсаде Саддавуссаса сссавоаєссс ї1Б5БЕО
Езассатсдає азачсодевс басячасачаа васассабст ачЧчасодасся савесааяесх 11580 вісачсчсьс дасаддуатає абсоадсцаас енасосваса заваачачев сстагсрадвна 11540 тЕнассудаєа сеЕсававуду сдідававцу бЕсаесоЄдЕв соБсвсатсса НЕ Чсасу 11700 совдвассясва давЕоссстсо судачсасЕс десявесоав дсоасваєча севстбассса 11760 асесвсссзавз сутсдувазу серуасчаса чЧассвоасасю ссававачає ссосбудвее 11820 чесводосса дстадаадає ссазеводсо дебоасодст давссосова сддсааесуєу 119580 часосадеде адедесявав. аа. 119506 «2105 34 «2115 7155 «крій» ДНК «2135 Штучна послідовність «ЕрОх «го3Зх конструкція ДК 405 «АОО» 4 аадачьсосса субовассає Босзседссо осдеЕсдоссвес счогасвоадаЧч одаачагаса во сакддсвсва сссєсазбоу ааассабссо соссвасосдує бсзауєтевсує ядеадаааєса 12а асасдсааче сСссассоадає дсаааусчоєс адсоадсучсоа счатабассс вассчсаває 180 чес ссавче ссаяддддаааєс баса очаєс вдсваєсаче абсвбассосса вгагочавав то нзаваазаччач сзаєтаяассяаа СВБЕССвЕсса асесазвнаві звчЧасчьес спезасассає Зою
Багзазаєта аадсасатсрЕ бдасазааод всавассасч асосуєсоява сссабадчуєса збо вазвочасаясва асава Сас ссзаєгсуса васесеЕграсс ссовсусаєс басахєссасу ай гссазаєсоддоа часстасаєса аданасьєсв сувусавкас дасссасара даєсаєссосу 480
Екакссссза азббодасає сачрвЕсдеобо дбасасуєса сучссадсує ссудсаєвдас 50 сбрадсводас аадсовдцаєч БавЕСявеєка ЕсСатасуусо чесгасссоад саваєсяаєсс ОО
Есасстстасє гвазсзчаччв здувсаччавьв доссчасчача сстассессясе десссасачу во адасчдачава сассттсваає базсебовос десяте стедссаєод спасацоасаєс тай засЯастічача дасечсЕаЕ сваєсваєто дсавдгсаса аваточваєта аваааараюєьь ТВО їсасбсастсоза стіасвавіссо абдачсаєаа статаасрає ааачсваїча ссазчааєста еВ) асаваччаєсс сааавазаєса саєаваадава адесасаза Єасессаааве асавазачає Зо асасттчвас ссачсавсає стусацетее босу аазастасавс сУссаестац збо їазасавосга бвасодтаса асстеасававеа ссссастсоє сабассваст ссуздссавса 1020 чадчдессасдца БЕсдасасає Екбастсва васнавакує єбадсаваєсь серабаасьх 1080 сазваєтсаас асасазасаав савададавага васазатавао вбєваєссєса чазесдаасва то зачцдассата бсаєсссаєта астсссстсс абесаєввсос ассесвсвує ссчаєадчедча ї290 завассдазта заазасасад Саазісасаа усасавсавза буцусасаача взазасачвсе 1260 їсссовасоссе абавіноессв васссвосавя сасосєчасЯа Сесососавио чазасьчата 1320 сагбазассс чдасадзвзасувь ЧдЕсдавассд вгсагасудзва суавадетав достсадеда 138Оо чевассодсстЯа счаєставсс сасчаєряносу счавсвссвс ставсаєссва всбсвгасаа 1440 десвссссла додевсостос адсавсвстс вевуааєсоса абасадеачє асеЕсдечева 1500 чесоствсда дадсвобсссо сбчсаєссса аква косва додссосаєє Сасесусаде 15560 тадабБевБскє ссваєсоєть серессЕЕста адоуєюьява ЗБадсавевбея ЄсваютЕЄвес тей часчсаєььЕ ЄстЕ десЯавє ссрдсацасо чдесасасача суадодвасса аєсадесава і5ВО гачдачадсачс чатедачеоч абБчдссосса чдастдасава соаоссдасоке дссаасдчата 1740 гасодгадаа чдагассасда сСававнссосса есдствтсує вубастряаса ааднанавсо 500 сабсдазана сазазчачс дсастссвац состсавава Чнесавасуа ссоддаавнацда ї18560 сосаастаса авагадаєуда ассеєсаєвта статтсазає дсачачадава дсссесдаад 1520 чацдскадчсас авагассоуєсї чбБаєсадаєє статдавава состосадчає обсоссстбаавада 1580 вачексаєаа чааєссуане угадасдабо сСвсястабає сабсддабудо аксусасаде 2040 чаєтастдач досасдеЕсуадч слсссусьса ссеасссусає басвасчава соаваосавчата. 2190 сзгагасєцдаче аасассучєс ваСсасгаччу вцавчдеаєс дадсевачаса сабаєасаад 2160 чадавоаєває агачтяссадч СЕЗЧгачаса стасасєвсса ссвузвачса вадачачена 28220 савзазуучаа ассестоссаве сЕсзавесосв осєасавовза асавоусачає свасусасся г2гва вавсастуєє адрастсасе ссгсседаса асавсассста ававабавусос вСосчасео 234 часєтсагсуде сасваваіназа Чадсасацчає аавовісава аєсесоюсає єсаравесає 2400 гссєссадао дЕрласваєь саасадсаса сзавасвавнаа сачавтацчеа абсакставвє ДАО
Есддсавзаєса агадваскссу сачасоваса аваєбатсаса 9бБаєсассса Єватабова шва ссстасаста сбдасссаво бзадбасуаау сесесссоста аастаасаус зазствостща го воссвачрадс ссбатазасас саасабобос Гбазасвнаво ассадставос о ассаваєтас 2540 асаєьЕстсо таскдесура бадабестає осСєсувсвод басставссавяа єсестававєь Ту гсдсесадсрас аазаздасудо аадсаваесаач сасачусача асасувиссо вдачсаєсавае 27350 свацдаєсса чсгравассає Сессадсває сассСасаєза Часчачеаєссес аазчааавоса гг часачеваса зачоасачачо чЧсччацьзлач сусутасодча ацасуцсесос ссазасочваа 28850 асчватсчссу ссттасасач ачоадваєтек сСссоєаавоЯд гсассосяве суссавасцс 2540 астадчсдаде чдодуесоассад дасаудсенесвЕс Ексезецста ска сссоос сасевуавасяе зооо адазчавзЕсо дев ЕкавссЕ бусзаєавау дсавачаєдо секс ссСача сдедюєставо зово заєсстодсає саєссссвЕЕ СтдссоодЕос ссосасавусс вдсвоєтсяа бЯдссдасваФ зіго актастсвса азадатцевсяа стадеоссваа сістЕсоудба васувовьве сбсгдазваєть зіво астдносабра адсаг ас аєс Судавсачка ссссвасссса весуавчасо сстсвесдве за стеєссусадче сЕБсСудессаа ЄЧдусссоцчад весСегосасс ставестсУє Єдаваєтьсу зо частчадаве вссЕосскаєс дазсосстІба соавеЕуадвав бсесєсеєсаЯ сс ачедає забо ассваєтсьчда аказавуєаає асчсссдва сесвастдає бсоавсесавасє стучазоЧеу за20 чедсуссавач сЕсстусадя сосваєсуву ассссжоевас вавудасаво асссадавас зав сбссрсддає бссавсдссс аадскеавстає саствкраєбЯа Есаздатваве чававачуаа зБАО чаБаусЕсст асазаєдсеса Есасбасаві вавддавачча ссавсуєксча ачаєаастою зе чЧчесдадзсзуч чЧіссосавача соудчдасссссосва сссасуачча дсассосодча зазачавуас з6бО чЧчЕвссвасса садсстрсвав ссавазсочає счасусавоя ссссвдаеаєєча частесвсяд зт саавчудеава бБассесудаав сстсстсуча срсесаєсасє свастгаєссту єсаєсьесаєе зтво
ЧчеЕчазцчаєач судаавауда ачдстдессе басвавнаєсцдеас віосаєсруєча сазаччавнад за чесаєсусьса азадавусосс єдосчасаде одуєосовавя абудасссоо асссасвачЧа зво васассуєча азазаудвада суссессавст асусєєстсва еудсавобода едасоасаав зава аєстссяастя асасвачоча бчасосаєсва бссосаєтаєс ссосусвада сссєсосьсо ого агахтазвчадаа чіксаскрса сЕгродайавчу асасасідас авдсесчаєсссас бвусачаєеое 4080 гсрадансса сссгссасає астесвачеса свстаєсосода давасасасавч чдасвнасаса 14 ссаазуаєс сазадудчдауаєе стссусодос оссудсвасо асоседесос сесеєбетс 4290 сбЕсссссуЄ СЕС сСссс досссоадсст сдасеєсвоя сессодсноє єсочдосудУє 4250 чадададсуде єЕрсабдсядсЯа сссаднісцу Едсадсавдава дадсддааєсс ЄсдсдуєтЯау 4З20 часЕсЕсуєсс досовудаєсо садеседдає оссовозача асочочексо содаводзацча 4580
Есгасцдаєсс дсєчЕсотсУ дачдоасчаєча Єусудедеве зазаєЕсося ссдвоастаава 4440 сазчассауо аздадоадова вададдсасса суабвсасає собсасасає весвдессаєь 4500 тсагсачдес сеадахтобаєт ачасесьсев бесстокеЕст гогасссада асгєдавься 4550 сссачдсавьЯа єбсахтсоаура дес ссвЕР ксасуасева савесвваєуое адссесагас 46520 зчзаадеЕЕ єдкачуєбача ачдевассаас сабудосаас ссосвдасаасо чекосавачса 580 счасаєзаєєс аадууєсасос ссавестсвта дессссадаос вассяисСаасс адеасссасе алт7Ад чЧчассдасаас сссавстссяа ссоссусавуа чЧесовассвє засдтадсовос судсусавуає АЗо0 сгадводасьсс бссаосудвочяу ссстодвова стсовсеядцсс вачасуєссяЯ ссусаассдс 4850 сабспссаєс дЕсоуадсадча Есесусуєде суєтдасЯвс ссетссасву Чдедсествас 295) сЕссЕжстас садесстьтсо буаасассаї обучоссбес засусецасс остачаваао 4980 сЕс саводсє саачісавад Єссбдуаєсог сазувачаєс даддадсасу ссвачіссва водо чассстеадос дадстадсаад ссссдсаава савзесссчаоа дсастасаєса зсусостодза 5100 стссгуЧчавза задасуєсьс гугесстаса спсесвачедс ссесаучасс чевВЕсеусча з1і6б0 чевасСтстос сададсецадь ссевесісод савегссасч осбусестсеа ссабстесяа пра чЧчеЕсчадЧдаєо свдЕссстадє ссасоссасос ссаводчдесдсос васасєссвес ос ассдає ЗВО чазачоазсуєсс садуєсстса чеанудаака саассассес сеузадаася бсдсочадве 5340 стасосуєсас садстуавує ссдасссзаса дсасасодас састудсуєса астядсасва БО задїсадеста аасддсстда дадастесас стасуасуса сададссваде ссавссодсве заБо ссядсадодач абдасссьда содссокоаса остааєоядсс свабсоссос єстасчасаєх зо сседсстабас боссавучуєсу ссазааєссува чЧосбуасссос дасасессса судассссає ЗВО севсстоссс асудассстсс ачавачсасчу бессасоссс стасссассо аавастссвє зе ссдсаадесс сасстуєтод астаєстсса одчсакссава ссосасасує чеседачасе зт задсрастьве ддсзачцасв сежесааєта ссвоссосддє вастьвасуєся адассвадесє 5Ттвоа свросаєссдас сосгсдавча счаєстосто сестЕсстаєс досстасаааче ссдссуадЧео вий сдєссадавзоа ссуєсссссу асудссадаа дусствосує вассабсдуеса асассдаєсов 5880 сасадчдеввуя ссадасчуєа ачасбссвассті сдададсассаса ваддассчась сспесссваета. 840 счатадазссадч аадаасозчда ссгссвассов дасстаєдає Бссваздедеа зезаєадцоса 5О0О счгсрососсо свучасссса Содаєсєсадес десосстчва ассастчаєсєя васесстуда во чавчадсстас поссассачо бдавнстасує одадкусссосе стчасдсаза зосусачода 6120 сассавксссс свссрсассї удачдассоассу сбосуводає ссссссвавнсв ссяссумоЯе 6180 зцачдваачаєс восовддссао ссуєуаєсав дасотасцес скаєссюсова чдодестесат вдо сас:кдадчуЧчв ссаддестса сочуєаодсав оссоавЕдЕсс свдавчдаце осьсдавово ез00 сатгсоассвад гГЕсавузєса сссвдвнасьс суєсєтоасссвЯ ссосаведеоє всаодсаєссе 6бзЗбО савссуссає честссаєсса счлаєсскасу сесбесссчдєс сачаастося асваєчаськ баг сстадссасс сасахсцваса вцассвідава саводчасаво Часевдасео ассадасоке вав счасстсуєс ассасуваєв ссазсебаоа осЄєсссудає дассацавья засьуаєсах 65340 тадсастудад бсостсеЯст ссаасцадаа чаєсстасаєс часвачсаєсв ауєєсаєося бо счбссазчста садасачдчає сесдаєьчдва ссстадсаєує ссЕсаЗасає ассесссаАрес во азддскчЧчадсес сааєсссочс чдавчеосато сувовЕсьсеЯ суачсостЧає чадасановсто ото їабастоувес сЕсСттврассос ас сьсст одсасстеавос вассдчуссма спсоуссвасас 5780 асісодсдає даатазатча даазасазаєс одтібстдаєвс єдносдсаяа вазаавоадаа во гЕадакстяє дЕЧдБЧєвЕнЕ бБозаєссоясс дчасадасстс вавєдсцаче 5ЕСсСЕаатть 500 савастаєтє додестааст СвЕКсодобасда Едасуєвдаєс садсазчаса бабассЯєка ЗО їзассзаче бочку оває аадкссстеає ссатаєсвас ЕссвассЯсьс ссуєсаваче 7020 дсадсосатс ссассузаса адгсдастав аксдаєссая ссесетчасува ссуссувоуао то8о чаадссаєсє гавадсадсуда агддуватад вЕжЕгеуєсвЕ асавсуачас дасадаасяс 7140 сесасуудаєсо чдадетссу 7158 «210» 85 «211» ВщОВ «ДКІих днк «віз» Штучна послідовність «вв» рез конструкція ДИКО ОЯОЄ ко» 35 завачтссса сакеадатсає бссзссцдесес сассчстсас сУгБускоечеУ чаначусаса БИ савддсєтсад ЕсстсаатЯд азасктансту сеєцасосуує ссауссстус чсадааваосая 120 зсакадсвадео гссасеууаЕ дсавзадсуве восодсудса давватаювое авссаєавват 180 чассЕсасує сосдоуцазаєсс Євсассуаєюс вусваєуаєс ебуасозєва асагручадаав г азадзазадваа баатскассав ЄТЕсссвкса асссвевавс дсвуаєсесес ядсадсоустав зоай
ТагазааєЧда азасасаєтЕ єуасвлавасу асавастасоя асседтсЯса сстагачуєса збо аваачдеваєаа асаваєскаєе сеЕааєссува ааєссьтаєсь бсвдасабуєєс басаєвксясае 2 гссавзасдчяа часттадаєо ачааасьЕсса счасссвкос дадсссасакеа чаєсаєсссвка во
ЕгБасесстач авасссдарає савуєссусто дсоддссасса сдссвЧчсцс содсвсдо А ссваградоосс авдсадчаяо бБагсссавсву сроосусодоє Усоссвасва чЧесеЕссуснкд БО0 дессєдаєсда дасстскова савадодсаев БаЕосодава осьсобсдда єсссатєдеє еБО садчосаєстоа ссастт бас увуаачасау Годаавначуа вооздБучеоксс сасазавуєє т20 арсаєтосдча бвазддавач чдесаєссаєка аадаєуссто ассдасаце дасссавад 780 асадассссс асссасчачу зудсассуюач ваззачаача сУусьссазсес асусесвесав о4й аасазвчсача ставах суссесвчаєтя ачасьсісса васавасччка асакссоачаа 00 асстссссяд атсссасвує ссачессаєст дєсаєсьстає сасСоаздата дсуодаазаду ва згадачсЧоастс стасваанцо са сасьЯася агагадчава чавсассдеє чаачакавось То2о стдосчдасад садеЕоОссааа часдчцасесо сасссасачаа Чассатоусу уааавачаачу 1б0вО асувкссаває сасоасестсяа зачсавУутод ассдакоасса басбссосвоб часта 1140 вчасодсаса акссовеваї ссеьссосавач ассестестсо табсасавада аадсссвеЕрс 1200 аствсосдачац дасасчстча свачесувсес ствосачцаєвс сбстадавсо вбсесекесаса 1250 састсвадсс асастаєсоду зчавсасавса соддасавасвс восасвачає ссзвачучачу 1ї32а себссоассяє содссддсаас сассссдссю шесьссьськ сесБеЕЕсСЕссЯя БЕБЕЕСЕЕЕс 1389 счеЕсссчаве Бодатестту сесєтодвву ЄсСЕдуоІЯдоЧ совдадасуЯ сеЕбсваєдо тдла
ЧчесвазяассУ чрдсасаздча чусдсоаваас стеосочеса суаесоссас садедроадає 1550 седасесоча Естедеучавч аасдучасте Єсочатссвча авссчсчаєсс сдессавсУуєе 1560 чачачачаса акдадачУсЕ базавсттсс чдесураассва зсазачаєсву Ччавзчачудча т620 азачччсаст акудеЕскаса сесссвката єсєстостьос сЕСЯссядде стачасаває їево тацаєстсьсе БЕсСвоостсг среародасву васссвавос ссесачсаво усесавсуде ха адеесевсвє стсавдаввк: дедасазаєд садсосісува содадеєьсЕ ЄвЕдбадактад 18500 зачеєчЧаєссва ссакодщесава: ссоєсвасаві сочдосссЗадес асчасасчає савучучссасо 1860 сесвастосу адсотссауає саастаєсваєс садчтассссо судесчаєсєва соссвассесс 1520 ассссвдцчаза адстувасса сазеусадесес зсосусасув ссуавочасьс стесасавчад 1550 деЕсстуддаса астссассцє сазачаєсцас Чісуддаєсяа осаєстссує суседуддсад 24 асссеЕцадед Ссдекаддсав сесеєседса ЯдудЕостссзЗза согосьсста ссацдесостюе 2190 срдвасасса сстодссово счуасчсочас ссстддвача ссессасучо совачдсовтаа 21560
ЧЕсессдавсд асазувауає суадтаусає десазессса еуассессбуде сузаєстодсаа гей часскдсача асазстссча чдассасаєс аасосояссба ассостеяачаа чсавачасоєвсо 2280 зЕдгесстус дотосавчсу сЕсссвадддає сдсассосаєу азстуєосте сбаддсеває 2340 гсосвоссосс чдсаастосає чдесасссссо десосстєса азсесчачеає сстасесста щОю ссесасстасо сесацустаєс саасассосас сссегбастос товаддасує ссаддсестко 2450
ЧасоавоудЧавсІ дадастассс спсоадазудає Здбсдосчвує сссаседес ссвуєссуавад 252й сЕдассозає адгасасода ссассосуєсс вастдовсаса асуєсудееє двасдусєссу 2580 здудастсса сстаодасує абсочудссвау СЕсвасодоє Жссусадада чакдассста БА аєсябессбдя асссдаєсяє ссвасваесос Есстасцаса. васавсостата стосаазууче 2790 уссавзчассо адсрдассся счасчавсясс асодаєсста сскжестосо сасчасосто тей сачавугаса пдсссасссь сстассовос дачвастсса сссадсвпадес свассестоЯюксе 2820 частасстьсс адучсассда дЕбссасасо сусстувдаос садудєтасес сдасавоадвас 2880 тссбсаває астодіссяд саваастасєоанс савсассачос остесассдеа ссосстедаава еВ) асчаєсасст сссствЕста судочасвау бссассЗадсе ссусесачЧаз девоасбессве зп часадодссача адчкстассу саєсаєсопцеос авасасоцасч ссусочсевУ досуаваєчою зоб зашпасСеваєс соусу ссас зааддссвас ссСобосеваує ассзбзЗасса заасазасає з120 асстссавссс адаєстаєдча стсосавуєдс васаваєччесасоувесвесяс? ссазчаєтесс зів ассоаассачс сдосдссіда чассассдаєс чачсссос вда вдаавасссва сгоссассад зга сЕдавстася созацеадсвс соїдабсасва дчассадсадуд дсассвьссес сьБобссасе оо кдЧдасссазсе дсЕссцдбеда сістсоаво вссоабсуаєсєд ссдачаауає сасссавдеба зав ссесагзчсса асдсогасає сстасссосяа чабоссісса са свачо сесацасосо 420 ассаадбоадса асстустуве сстдавацчад Єсессбсуваєє ссаєсуєссвва дессвадчуєе зЗаво зесстузасс ссусєтасесЕ состчєвасос таседсурос девжссаста сассбеобасо зв4й асузасовує чдоссадсЕсає ссазуавсссс васвзаєсчасє, сессудссвао стасаєсває зео0 зацассасча асаздуасча сСдасстдасо бвссабаєст єсдасосовес сассасдаас ЗБ тссаваасаєду доєксссуду сдасаауває савоєоаєса Буддкаєсвва ввосстбсуве зго їссазсодачда ачаєстасає сдчаєвацаєєс чЧадстрсарос ссавосачЧеє чзечавачавдаа зво сстесдатсда астесусаєу суп ацася сабоостсоатс саучстадав ссааєссече зв гаасатокУукє чсдачссссо вдосдачсстов счвосасасес стасакеясУ сеосовсесе зво садасвЕвеєсс вЧдкасьтсува саассвдева вагсусєоваса уаеєсссаста єдаававаєд зввБо ацдааатааас гФдЕрсвувВев Егдадсдсва аазсваавадчода аставаєсстя тадсдБавс 4020
Ебадасосос чоодасачосу стасоссавоє вавесавость сассеваєсть авааєдачеєа а8О чЧеЕзочавєву сбдзудаддає бдссессасвоа сесбусачооа дасудадаває воссевавсе 4140 засацдарсас асассатуаа ссоссвасоксяк сдсебссвасюсс ядсссавсаса сасстбассяа. 4209 вастсвааєс асдксскіда садесвасноу оуасєсасаа сасозЗабасо бабсдаєстає 4560 чуссавастаєса асчЕкесрса Ссазаєктаса час дсеста кас бачев вається 4320 тадсасєсуво чеЕсатудоса сасстсасад сдаслабсаоас зссчадссвх дустоваєта 4380 ссзвазсвуса ададсдасєсьї срасвсотуєс ауеассасавсе савочдаєсссс сатяесаєссоцє 4440 гсудаєссса чдасстасавс бвадсваває ЕЄставсвота баддобасво сасастедде 4500 акакаєтуав чудсеоваесац авгасвакдсу басокаєдсує даєдтаааан: Уудасакавас 4560 астасссаєба басаасдсва Баасесеесксає сесуєоєдоЯ ссассачеса дсадачеєссс 46750
Бчасоосоаде чдкачедваса чеввчаєсьа дбесарсабає счсадчачача вабсабаваає 4600 сагассасес стдавоодуаа сусссвовова заївасвоась асгсасудада соссасессосу 4740 садавсасва аахаадоасада дсастрасає дсаксауевє сдасвавата абвзасачеде лад саде дався зчаасваїтсо адстассаоє ааєдвасьсс тудсасєдаєс сс асаса 50 асакядстаєс ссастчЧчауючу авБЕссддасаь часекоссва ссвдскссда бостараресє 4520 счдасстлавсс ссасаєчасу асгудчесеєтоу сСесстдкарсс сасчтасавосос ауусаавсУєь 4880 савачсвсаєс абусоустусс чассвосось дсасаседос вацесасчавна чсасерессе ЗОо4о0 ссасасєсаєссассачедає ссдатбодвда сесстеваса засчусаавава весддвався 5ІО0
Бостсдававєс ссаєсчдссса дстаєссосасе асттгратсудс саачасачеьва чдааазвоачаву зієй чоадсвоста севасчссає састостсаєа вачоававоуде савєсувсдаа чагсассісвка 2-5 ссчасачеда поссазачає здасососає ссасчазчач сассусуддва зазодвачасо 5280 гЕссовассао дістісвазоу свадсодаєс часбоссасча ссечаєссчач ассесссаво зз40 авачачеавЕ асссддаває скестсачав вес баєсс ваеастаєстчє састесассу зада гчаачакачс даавзавоадав зчЕЧдсгесі асазаєуєса ссахєсусуве ававачавачу ваби ссабсусвда ядасодсстос дссчасачьа дбсосазача бучвсссосза сссасузчда 552 чсассубБодча азаздаадає дсвссазоса о3бссжоваа бсвадсддає сувзБавцава 550 тсуіссасьда содбазчачає дасосаєсзває сесесаєтавою БЕсцесвадає ссесотсвба Зеяо
Тавазаддааа ЄЕсаттссає стадададса свсостдавес счбосвсчає асчечдеєсас 5700 кесдесстес чдеостсравса седссасУєс ссесвуваєд сбобсесусо садсдассує 5ЛбО гавндаачсдає сеадссозає стазавссас астсссаває сусосросуєс ср судєвах заг тассрдесУєЄ сстссусадс адезааанає ачудчасаєцуд бадсасуваа сувацаваєда зЗвао зостасасач савагаєдчадча азЕЧЕдЧЕВяав Єсвогсссвта дсочвассса сесавусаєса БО тЯгсСгрдасааєс агадочсаєсь бодаєєсада зує скасвоє сваєссаочо асадуврсса бо басрасаєча дЕсазбвадса баддуавсса сассабадує дабасєтаєаа баасекуєсое вОоБО
ЧчЕссдсадач сісаскасьє досазааєса часассоста сессевьсс дсвсУувавае відо
ІЯЕБазасса Егаасодсеву вдадозасава аєваавічає давассссча сУусссасесо бів
Гадсссстіса вБгдгсданссає вачссвачаєс сацатсвавс ес саває все сеє ба чЧчаачазасаа чсастдасач сатсскоару састчасеосу стае дсаасваавнає 5а39о тсванансва ададеесссю сессоусвасо сбостсвасос севуврачЧсе сстадкаєее баб
Щаесвастцуає астатбаєстцао свстесЕсас агасдбассю саосодаєає сесЕстессга ДО чЕчЧЕвдасса дЕдсвассав саваціснсс дсвсаєсьса єсоваваєсоса уабассявує бАВО дададоєсда садбсосстсач садеЕсяеовує депатассве ссаєдаваєс дедавсясса 6580
Естасаєссса авшссткаву адссссстба здддсасста сачсаєеосе сабачаавесв бо вагасачсач савстобаєсь вдсрестса адулестссс сстасаєтьс аагадрсока воеБО задавЕСсСяЕ стаєєсоєад СтдадяссвеЕ ресваєсявс бестесевсес дадачевад ет20 аз адсааєтс сЕсєТтаєєьЕ стасасавюье ссстЕсосваа дсастоасдає счсчєсаасяа ство ствгтаєссаєсу абасосеЕста ссасабаєса зсбадсазсає сазсясссаво сассоеєсчає е84о часаєссасєтс саєссастає бсусасаєда сочаєскаась сосссвасссас додасесаесеє ово
Чусадавасує авадаавваає зсоссдваава асававувус босассссва дсссссавав 6500 ацдааданасцч аксочуазвад асесваєтас аваасачаєче авйссестсаса аставсдава 7820
Бдсазадода адессссдая здуадстадса сазабаєсос габассадає Єссабдааза това азсадсЕдсача ГдсссЕбаад вазодсьсава адвасівдвга сасзуаєчає ЗусБсаєсдвава зіло гсакададатса даксоссадс часяссовусь удасуєссадо вЕссодЕссує весассЯядее 1200
Ісдасавдсояї седссвауоє свасодсаєса сс ссвігес дсасасасса савасссгась 250 чачЕссдачи аскатаддсав годудававеє дЕкЕссеста вассяасісцуЄ сувастсуха 732о авЕєастЯдєЯ сЕрЕсТавсс ус ксасї аЕсдаастоас давеасуданаа єдчаєсадача 780 ачачстяасо заєуасаисоає ссср саєсссесвава сбаясаєтає соус ТААО тстраєтрає бобовБустда асссдазаєс аЕвачадаса удсавасаєє ссуєсесдад 755а їавазаБуєа бсаваєссувуа десЕставьвд асодуавоаєса ебБасавучдає сваввсасви 7550 чеачЧсвабас саєвсатсдссЕ аїгссастасча савасавасрає аксєвссачво сЕвдаавначое тво гасазатуєс астоавзасаєа адратовсоє стедхкуєеєсю адасаєєсає чаветросеє 7 68О
Есагасзаєс свЕссвадвнатю стреассвчає ссгвнатсаєто сосессабаве сасачетаєа та сссаєсудаєє єЧдкадессдад сасдааавнса сс Єваєа саеаєсстаєча сетвассваєие 7 чЧчаєєсавдасазче чдугасечесу цсечадеьвь дечісткцддес дсадосвацчаа Чаасявесед тава сврасстсада ассчєтатад єбадавесотя вравсосачсс асодатааса очодтаавсаво 7 зго чцасадаєстс ааттусваде ЄКЕствасьє сазаєсаєсс дудессаасс ЄЕБдЧЧКавда 7 во
Гаасчссдає подсаудава Бапасодіса бавсебчуаос ссовБаваааєс вався 9040 чеавасвЕечЧеЕ кгдаксоКЕЕ сек ода дсаосссась бсассоаодаса адбсодастад відо аВЕгБЯдвЕссад ссстцчагдаа стдссесзачеу сдаачсосяксе єЧвусясчоа асуачачсЧа во актосусрає асавсудачає часвудвасас ссавдусаєс дчаченсоя 295 «КО» зв «11» 63 «кій» ДНК «йк13з Штучна послідовність «ато чего» конструкція ДНК. 850 -0005 зб аазазачссссв сабоадаєссаєс ссассоссс субсчдетсвс сера сдазачсоса БО ваєддсссазуд БсСЕсваєуд аваскбабовд сетвасоЯддс ссаУссстуєс дсгдазвасса 120 асасбдсаадо госассочучЕ дсаавассдас адсудосаса зсастаєаєсо вактеасааає 80 часвесарує ссодчдаааєс басавчцчаєе ачсваєЗадс есчасучеса асСасацадаа АЙ ззачазачач савассассав стек сса асссавазат усачтасуєсос дсавчсоевкає зо0й їасазлавнісча авчбсасасюе сувсвавасу асавнассаса весесчдссяава пебабадєса 360 азачсваєаа асаваєсаєст стаанссуда авассекивавс ссовсоесауво васатесаєсц 70 тКссазаєоза дЧасєЕсачаєц вчааваськсса суасодасус дадсесдстєва бЕавачусасу 4вО ссадскадссо дсасцесвуєса часссдаєва ачаськвсса асавачеччса асасссЯаваа. 5АО асстессосчеа аптссаєстасє ссадогасоє дссасттваєс буубсвачаса усудазвачас воо0 нхачасЗасоо стасанас ас сатсасгаса агравасчава сдссасесцсо чавзчаарусс во стдссчасає соадссссаза часдувссос сасссаєсчвч чадсяассава дававаданав 720 зедссссазо саоЧдісстса явадсовацісу аєсСцсаєцрча сучучЧЕсочаЕ чачастьстес тво засвазачуце засасссуда вассссобсо саєЄюссавесу ссовуєтаєс субсассюоа ч40
Есдсчаводає адсудзавнад даазуєодсь ссстасовавнсу ссабсассоєс Часаавудав зой аддссавсде бдаачаєдсес ссьсессчаса дао сссва ачасбадаєсся ссаєссаста зво адачсассує дчдазазадав часЯсссова сосасубостс ааадсвачса чаресчаєсева 1020 асасссссас саасцдлвачу чдасцасосаєс вассссаєта пестосчдсва дчасссссосе т1о080 стабтасзача яаазсессасс сасссзцаса учасасоасстоя адуадессассе чЕесеЕсвчата 1150 сасдсреасс содесссега ссіскЕвЕвас судсеваовоек сстогаваєує секевсцвдЕ 1200 чЧчаєЕдаєьдес дададевев сбадстодцаєе бачааеЕсаза состоадвааєое дЕцЕсссудес 1260 тЯгастдаєтє асссбоассувео сессусагса сеававасаса додасасуче ачбасуаваю 13950 чЧчазоасацаз сстасасацчс вабасувува абубуЄваєє бБоддтадсставач содбатоває їв
Гсваадсасас зсСтощдеаєва гасадсаєсск счдасссачаа ЯссвБесвБасо вассєсачаса 14450 садоаствсає астасаєчацу бсаатадсає вчдодчаєтсав асбгавсадася вгассасває 1500 зансвЕдсєсся сесгдсвдаде ЕВ сбаксса ссававесву авасссостає сскаосЕРсЕд 15560
ЕЕЕдсСЯдсуст ЯдеЕсазастає саастусогуа вадсвабазає асавасчасо звассссдчає тТеє20 двЕсаєсссє дсссостстає сдгавассаба вубсавчуаос ааасадсасто чек анага 1650 сЕДЕСЧЕсСтд задавнаєвнавч басбдасачь асєсроаавксс аєкзавеєусе єБЯсЕвоєсо 1749
БЕаасаавааатв гаааазсаав чачсвссоєт среЕсдДсЕдстс Єсссрассєс ссуасдуєає 1850 ебадбаєстяа ссаассдаєв ставаєвасю БсЕсвеєваса Басдкаєсввє дстсдаєдас 1860 їссессестач пгаєсдассач Едевасксвас абадссвскоа стсавестсяє водтазсчсад 1850 всассавасЯа здачсісчає чдрссоебевос адсочстасоЯ сдабассасс сатчдатаєсо 1880
Едазасаєсає стасаєссаваа асеЕсегасса се сссєва доадесвсстує адсаєтвсво 20280 асадааєста акасаусачї авсбЕдсоска доагсстусда чоддесЕсосе ссдсавесса -825190 акгачетогаа чадЕеЕнссарсє саєєсечваци гадесстсо ссааєсуЄєєє сссеєевсву 2160 аздУдчстлача чеЕдесвастою ствтакскстс сасусатєвост сссесодсвау састсчєдаєтс рон)
Чечссавсцс всрассасява басстістстас сасасассас гавсвасаве адсасревсес ВО астсссдасц асатссаєсєсс даксастасо стсеасасчвс счаєссвасво сбсатсесаєсц 24 счдссдосва садчачсуса задаазавід сдксцаваза їавазатацчеьс дсасєссазу Ада сестісаваза чаачазасча ГтЕддазааоа сессвастаса вагзувбоача ассостбасаа або стасдазає чдсачадодав ссссісдаву чЧасссадсас азатассьзсс чсассавчавь гг стасчдачаза состудсачає чоссгсСвача вадстсасава чавосЕчаві ссачасватя 2550
Ессасдаває саєадаєтау аєсоссвясоя дбаєгсзсста ачадесесадес ве 2637 «МЛ З «2115 195 «2155 ДНК -213» йеа таув «ев «ві? тівс беваїиге «рез» показаний сепмент інтеграційновро сайту в геномі кукурудзи НІЛ, в о який була вставлена Т-ДНК їз конструкції ДНК ОЖ417 для створення об'єкта МОМ 87811 «Ов 37 задчазаачаса зазадусван асастазеда асачсєваци дцЕсавсессе сдававєсаа БО тсЕСсСараєза сатанчаєсс сасесссбува абеавстксваЯ бавессаєта адаєсавчстсат 120 ачЕбаачеьса сдбаагасаї гдацасоаздає вубБасссаса даассасаава собстачасн 180 таєтаавста ссс 195 «105 38 -2115 28 «го» ДНК «213» Штучна послідовність «гр кро» є нуклестидною послідовністю, що являє синтетичний олігонуклеотий під назвою 5Оо20221 «0005 зв
Усгдаставав астдасадав стасаває 28 «й1іоз за «115 й «212» днк -2135 Штучна послідовність «ех
«РОЗ» є нуклеотидною послідовністю, що являє.
синтетичний олітовуклеотил о під назвою РВІі0065 «005 39 чесевБасдає пгасочацчауч сЕса р «10» 40 «їх ра «2125 ДНЕ «3» Штучна послідовність «Ре цх к«ега є нуклесотидною послідовністю, що являє.
синтетичний олігонуклеотид під назвою 5ОгО0ршг «а» о каста ога детссаєвст дасеЕнсьда В «1 41 «115 50 «195 днк «піз» Штучна послідовність «др» чеа3» є нуклеотидною послідовністю об'єкта МОМ 87411 «00 41 часадстусса ссаєтесчача гоадуктасо ЧдовБобсвзаєс вассоччдсава ссасвавактоу бо «-Оо5 45 «811» 8 «155 ДНК «-2135 Штучна послідовністль «Де х «роз» Унікальна з'єднувальна послідовність в межах транепенноюї.
вставки із об'єкта МОМ В'Я1 «00» 42 код бсдавас суаєдабсасу васуавзауеї адуссєсаус дассаседес чдусдаєства ва їссакдаває сосдвасавс атесбасаве да «ОО» 43 -2115 956 «2125 ДНК «2132 Штучна послідовність «веОмх «реЗ» Унікальна з'єднувальна послідовність в межах транстенної вставки із об'єкта МОМ В'71 «-400з 83 ваєгасачаєа асуєєсасова бабсасодає дутаєссусає водсувесуєє чачеччасавсе ва чацессЕссеуде сгдеасасства сассяасаавбо вався зв «і» Ай «2115 ЗА7
«2125 ДНК «гі1Зз Штучна послідовність «Во» «реЗрР унікальна з'єднувальна послідовнієств в межах трансгенної вставки із об'єкта МОМ 89411 «ОО» 44 гассстювас совавадестї саассодасо ацсасвосва бссасссест соус бо
ЧЕвддаася Єсетерсвок ссасувіусес ссродечсачс сдЧадаесав сессуавася 170 аскдссоддса дадасавськ саасчаєдує оєЕвосівБа їсасавтдчає додсавессаса 180 чаадссассв бссссЕвсса стасськсас вабазвадоса сачасваусья часавасауяа шо вебсазачача кт ссодата сСсасоссвву єсавазачсс всвасодуає стусачеєба Зо садассядся деудсцдссаса вагсасачаєс сабодассеє астсаєу з47 «105 45 «Кі1їх 76 «Ріг» ДНЕ «із» Штучна послідовність «220» «раз» унікальна з'єднувальна послідовність в межах трансгенної вставки їз об'єкта МОМ 87411 «00» 45 чЧстгасавава ссовсуєсавау сассосусов вавоссссоч давассвиссо ссасасаєсо 60 задссасаєст аксадуа 75 «х1Оо5 46 «211їх 86 «рів» днЕ те1їЗ3» Штучна послідовність свя» «ІВ» унікальна послідовність в межах трансгенної вставки їз об'єкта МОМ 87411 «005 46 астастададч аасасасацу Засаасасає саєвадасос вадочадуєва Сссссуєєсу во ссуддбаноса сссосодесосеою стсвсо я 105 47 «2115 79 «Біг» ДдНЕ «із» Штучна послідовність «ви «раз» унікальна послідовність в межах транспенної вставки їз сб'єкта МОМ 87411 «4005 87 чдаседсстсвся БЧеччадевЕ сссЕЧкацчеує вуавачєсасс вассатоечсс вассссаваєв бо ассдссссуда чеасдасає та
«о» 48 «211» 85 «12» ДНК «135 Штучна послідовність «про» «го28З» св'єднувальна послідовність в межах траногенної вставки 13 собБ'якта МОМ 8411 «-4005 4898 тсдасаздає сзчачексаюс сосчєссвус ЕдЕЧасадча всвсотовева аабєестасає ва чсевЕВОоЧає збасдсвсає Єсвадска9 ща «о» Ка «11» ОВ «12 ДНК «р1з» Штучна послідовність «ех «Рез» унікальна з'єднувальна послідовність в межах транстенної вставки із об'єкта МОМ 8781. -400» 45 бсгчдаквЕва адіцсававаа зааачоваск ачасстасас дбав дасссесаюье ба їсдасазчсб соаосстсдчача саасавсаву ствсвсасса асавучаєч 108 «-Оо5 50 «к«РТї1» їТо8 «155 ДНК «-2135 Штучна послідовністль «Ох «роз» Унікальна з'єднувальна послідовність в межах транепенноюї.
вставки із об'єкта МОМ 87411 «А0О» БО ваєвеєжаза чедєваєстту Єпдааабсост Фссстдссоє есоцсадессе ажссакєдаєа ва саваєсадса завсстадсава бчабсобасад васссвестю Сеат 1095 «ЩО» 51 -211» 197 «2125 ДНК «2132 Штучна послідовність «Ох «реЗ» Унікальна з'єднувальна послідовність в межах транстенної вставки із об'єкта МОМ В'71 «Об» 1 тдассдадчес чудсосванч яосдвасстсї ссуатеасува ддссосеєча бдвустссяд ва чассствЕдесс бодсдесЕва чдевасуствяа ассаєсуєта ссавсесь 197 «іх 5 «211» 103
«212595 ДНК
«гі1З» Штучна послідовніств
«дос»
«газ є нуклеотипною послідовністю об'єкта МОМ 87411 ч«адб» Ба тагдасявад сестра асачававса севіствчвеу сУдесусаво садасваєса ба чЧЕчЧЕстрваодвуа аврсасавас стссачареає ассвнавтевас сс 195
Claims (1)
1. Молекула рекомбінантної ДНК, яка містить нуклеотидну послідовність, вибирану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2, 5ЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО І МО: 5, 5ЕО І МО: 6, ЗЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 9, ЗЕО ІО МО: 10, ЗЕО ІО МО: 21 їі 5ЕО ІЮ МО: 25 та їх комплементів, що вказує на присутність трансгенного об'єкта, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА- 12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ХЕО 10 МО: 1.
2. Молекула рекомбінантної ДНК, яка містить нуклеотидну послідовність, що має щонайменше 99 95 ідентичності з ЗЕО ІЮ МО: 1 або з її повним комплементом, що вказує на присутність трансгенного об'єкта, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ЕО ІО МО: 1.
3. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1 або 2, при цьому вказана молекула рекомбінантної ДНК виявляється в зразку, що включає рослину кукурудзи, клітину рослини кукурудзи, насіння кукурудзи, потомство рослини кукурудзи, частину рослини кукурудзи або товарний кукурудзяний продукт.
4. Зонд ДНК, який містить полінуклеотидний сегмент достатньої довжини суміжних нуклеотидів ЗЕО ІЮ МО: 1 або її комплементу, щоб у зразку функціонувати як зонд ДНК для індикації присутності трансгенного об'єкта або конструкції, що міститься в ньому, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА- 12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить БЕО ІО МО: 1, який гібридизується в жорстких умовах гібридизації з молекулою ДНК, що містить нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО І МО: 2, 5ЕО І МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІО МО: 5, 5ЕО ІО МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 7, 5ЕО ІО МО: 8, 5ЕО ІО МО: 9, БО ІЮ МО: 10, 5ЕБЕО ІЮО МО: 21 і 5БЕО ІЮ МО: 25, і їх комплементів.
5. Пара молекул ДНК, що містить першу молекулу ДНК і другу молекулу ДНК, відмінну від Зо першої молекули ДНК, при цьому кожна з вказаних першої і другої молекул ДНК містить полінуклеотидний сегмент достатньої довжини з послідовних нуклеотидів ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІО МО: 2, або 5ЕО ІЮО МО: 3, або 5ЕО ІО МО: 4, які діють як праймери ДНК при їх спільному використанні в реакції ампліфікації із зразком, що містить матричну ДНК трансгенного об'єкта, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить ЗЕО ІЮ МО: 1, для одержання амплікону, який є діагностичною ознакою вказаної ДНК трансгенного об'єкта у вказаному зразку.
б. Спосіб виявлення присутності у зразку молекули ДНК з трансгенного об'єкта або конструкції, що міститься в ньому, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ЕО ІО МО: 1, при цьому вказаний спосіб включає: (а) приведення в контакт вказаного зразка з зондом ДНК за п. 4; (Б) вплив жорстких умов гібридизації на вказаний зразок і на вказаний зонд ДНК; і (с) виявлення гібридизації вказаного зонда ДНК з молекулою ДНК у вказаному об'єкті, при цьому гібридизація вказаного зонда ДНК із вказаною молекулою ДНК вказує на присутність у вказаному зразку молекули ДНК із вказаного трансгенного об'єкта або конструкції, що міститься в ньому.
7. Спосіб виявлення присутності у зразку молекули ДНК з трансгенного об'єкта, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСОС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ЕО ІО МО: 1, при цьому вказаний спосіб включає: (а) приведення в контакт вказаного зразка з парою молекул ДНК за п. 5;
(р) проведення реакції ампліфікації, достатньої для одержання амплікону ДНК; і (с) виявлення присутності вказаного амплікону ДНК у вказаній реакції, при цьому вказаний амплікон ДНК містить нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО І МО: 2, 5ЕО І МО: 3, 5ЕО ІО МО: 4, 5ЕО І МО: 5, 5ЕО ІЮ МО: 6, ЗЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 8, ЗЕО ІЮ МО: 9, ЗЕО ІО МО: 10, ЗЕО ІО МО: 21 їі 5ЕО ІЮ МО:
25.
8. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи, що містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу, яка містить нуклеотидну послідовність зЕО ІЮ МО: 1.
9. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи за п. 8, при цьому рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи є толерантною до обробки гербіцидом гліфосатом.
10. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи за п. 8, при цьому рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи є інсектицидною у випадку присутності в раціоні видів Д/іабгоїса.
11. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи за п. 10, при цьому вид Д/іабгоїйса вибирають з групи, що складається з Оіабгоїса уїгоїега мігуїега (блішка довговуса західна, М/СВ), Діабгоїйса брагбегу (блішка довговуса північна, МОСК), Д/абгоїса уїгдіега 7еае (блішка довговуса мексиканська, МСЕК), Оіабгоїїса байеага (блішка довговуса бразильська (В2К) або комплексу блішок довговусих бразильських (ВСК), що складається з Д/абгоїса уігідиа і Піабргоїса зресіоза) і Оіабгоїйса ипаесітрипсіаїа поу/агаї! (блішка довговуса південна, ЗСК).
12. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи за п. 8, при цьому вказана рослина надалі визначається як потомство рослини будь-якого покоління від рослини кукурудзи, що містить трансгенний об'єкт, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить ФБЕО ІЮ МО-1.
13. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи за п. 12, при цьому вказана рослина кукурудзи являє собою гібридне розведення, де щонайменше один з батьків містить трансгенний об'єкт, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ЕО ІО МО.
14. Насіння кукурудзи, що містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу, яка містить Ко) нуклеотидну послідовність БЕО ІЮ МО: 1.
15. Рослина кукурудзи або частина рослини кукурудзи, що містить ДНК, яка функціонує як матриця при аналізі способом ампліфікації ДНК, при цьому при здійсненні вказаного способу ампліфікації ДНК з використанням вказаної матриці створюється амплікон, який є діагностичним відносно присутності трансгенного об'єкта або конструкції, що міститься в ньому, при цьому репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, був депонований в АТСС під Мо доступу РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ХЕО 10 МО: 1.
16. Спосіб одержання рослини кукурудзи, толерантної до гербіциду гліфосату, який включає введення в геном рослини кукурудзи трансгенного об'єкта, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ЕО 10 МО: 1.
17. Спосіб вирощування трансгенних рослин кукурудзи, що містять трансгенний об'єкт, де репрезентативний зразок насіння, що містить вказаний трансгенний об'єкт, депонований під номером АТСС РТА-12669, і вказаний трансгенний об'єкт містить 5ЕО ІЮО МО: 1, який включає вирощування в полі рослин кукурудзи, які містять вказаний трансгенний об'єкт, і обробку вказаного поля ефективною кількістю гліфосату для контролю росту бур'янів на вказаному полі без ушкодження вказаних рослин кукурудзи, що містять вказаний трансгенний об'єкт.
18. Спосіб за п. 17, при цьому вказана ефективна кількість гліфосату становить від 0,014 грама до 0,717 грама на квадратний метр.
19. Неживий рослинний матеріал, який містить виявлювану кількість молекули рекомбінантної ДНК за п. 1 або 2.
20. Спосіб захисту поля з рослинами кукурудзи проти зараження комахами виду Оіабгоїса і від гліфосату, що включає культивування на полі рослин кукурудзи, де на полі міститься від 50 до 100 процентів рослин кукурудзи, які містять молекулу рекомбінантної ДНК за п. 1.
тк чик 3. з Ку жу зах Є ЗК НО мк а звів понині : гу З АДУ и 5ЕО ЗМО в ка о МО: З е -- ЗЕ МО З й пня ооо ї сиктх, ке ме і маки ЇБ1ЄЖ ше ЗЕ) ЦО МО: 8 з ЗО МО. 8 чи. Ну Ек - Це Кт пу з ЗЕОНО МОЇ ія в КО КОХ З ЗО ЕХ па рен м яз ; От РЕВНО 1Е п очЕО ОК Я ад ВУ ЗВ ОХ Я НУ хх жу «й а житя ха т ЗБОЮ МО: 18 завоваввава вв овов вода вв вові вва ва вва вав вва в вав ер ме ЗБЕ НІ МО і зарита пІЗМО 25 ще" У Я ОКО НІНО и КЕ У ре п г Ми НЕНЬ ВИ ІК: я ЗО НК 29 ВІ: Я Й У пут у Кия 1дЕСНТ ВСЮ ОВ ВЕ КМУ: 8 Бе мк, Я нн
Ко . Ка МО: а
Фк. 1 ту
У
1.8 та ШО пити Дфранестанноя комен и нпдстетте я твтете отак єтиля нт ндвтацжьня. ГЕ ДЕ Воо ЗЗНИ пет тс ІННИ НИМИ ДНИВН с МИ І Н її З ТК ртутний сяяти МО Мне зовано ен но : «3? КЗ НЕ деко тк! м дв ме НИ м - рое с Хея лено хркох Ге кох же му і до КОМ ей З МТК ви ха ІДД ле А ї спало у щохма! деуеткжих фустаюеї с: ко МК, Ппаеомк! Мих с ЗУ; щі. жа ТОК ОТІНОЗМОВАрІ п фе) Н ще ков Ша РИМУ МУ КИКОЯ покер тез опи Мк : ІВ: МН Бунт ння слу люк і о 00 Ол Гума І МКК ромом : ИН Н і Її с нн ши ж и у и вн і БР . ІВ Й тож І ЛЮКИ ПИхехюрі В г ік Н Н : Н Ї деенмхети . Токякі Макомомя фею; гами і мм ЯК з ром ЛожшЕ :форох У Н г: Н о Н й що сао ям шою 1 озхжо да «У ВИНО 1005 пехевко: ї пн ч : : ї З рентні уч емнцв: им) еко: зу ї жк Її р у о: пха пре: вжу роя нет Ч г: В і їж нн нн нини нн ска І НН . йді Е мові М «х ПИ АН НЯ У ій оо топа паху І ї : Н ї Ї пваеммію . ке кл Теми РУКтУКІ ЗКУ З ОКХ т ще інуром ої МКмо ПУ Н НИ : о рення С віниор Ше 1 уд 1 5 1 ідфвюмі ху сюохені ЗБ ; 1 Н а У УМХ и нн пив нь ИН ї рої умам Уго ЗЕ і : і т КОХ З НИ и делдддя мі с здам ІМ ЛУК й Н Н Н о Кс о тудкямі жхуснсомю фун пк ГНН нав СУМ : і : МОЯ і сом ко сен хо ім Же УК: СЕМ ех: іх? Шрий о: Люхро діди й Н : : Н С фдлннннчннннняня ЩО вх рент ну БК ОЇ м Її МО ігюнкаі судо дес мохом: хе Й ЗА. : о ке їх звшиу т в нити дою ор ІМ І Б Ор Ток ріс . 000 КОфоодиоуі юхнучех со і Ли Пе: Кв іні ох іл ВО сок . пежнла у муках, ПММ косе: ОКУ і б жд: бе ж» оБоржі щих ТНК ідеї уви п Ми СА я Мам Му Ж і рре МУ 0 Й НН боса Шохеюм: мому | жеевож ВУ БО: 1 му 5 : ха щ ТОЖ ам ро Ши Й ни Я Її ді пеню том її ри хи Е шко сакотоККХ я ОМ УК : й ПУЩА у зе вчи Н Н ромом с оо екран Кн дммкюМ зум і ве зо, поки Здеро с Змірню і ит ще і: : . рен ВІ їй Я Ди ЗК ЗЕСН В В рих о ШИШезнись філе КОКО ро: : А їх» ВКА іТТМІКшХ ши г ПИ КИ НИМИ мом мак їі. : Но худа марних фс і Км ТНК ле ми тт дченннння : го: і -В Ї еесмкеяв В теммляу поь фУКЕчИКокконк: МУ РГмжті Мазок ої Бр ОКУ а в 11 : З фен устя М.Ю ЖЖ зам ЇЇ КЕ ї мон кзвсася схоу о пожимо сх ДВ ; НИ : ХХ КМ ВІК нн о а п А На Те 0 здо; 2 БМ І ОХ і р: Н і зх Тк ЕЙ Й ірив : Дух Пам т це наук ОВ ААВКВІ д икмя Н НН Н Ї вкохмню се зем ПЖОЮ ую ММ І МКМ 1 Імкай зенннну опоюм о фе ФИрохоою: Н г: : Данкчжинххтюннихх Ще патини ми Її ЗМО ЗО їж осо ОЗМеКОюММО фугу иююиї «щх МОЮ ; о: Н МОЗ і й 5 петтня кн по а и ДЯ і У му пзпоріІМ ого цк ос іж т з 1 х Н : ї 1 КУ х ужьхормкх їжею ЩЩехюМ. й ; км оо ес ПН Шин лляні Я : : Н З - Я ддрелекх ни яйбевях очи 1рКеЖІ о. УК и п а ї З едлятх традею нелронкя Митехи МУ М БО: Я Нік: СВК: пеммі МА ПО ЕС Мн тех Мо Я ЯМ до дах ОЇ ОХ ВИ БОМ суму ПМОМЮЖІ шк -- п і: ДО тех хефеех у Ж лек ЕСЕ З ік сх яю: рху «ку жу Х-оїіз МЕЗ п сосна КО тет НК ДО пек: ПКУ і Ех У ТК ХЕ ох рух М щи і ан нин зи КО х сет. М ЗІ МОМ САУ Віхи хх НА А ННЬ пух т сетля ик их крони о ЖД У ух Віихемомі вже ОЗЖМЮО 0 Укрії Вфоохурех томарІ ЛОХФ рен ОТЖЕ нене фен М-. МБ РОМУ рми Її му я уко о, : ді фр хму Муфатхер фоптнаню/ рт Кіхуз З СУК 7 АХ : оз: ЗО ох І па пох Хе КЗ Тв дн ев пев МК У ЗЛ інн Ве вай С що Зоо ма ватекімне МЖК МТУ СИМУ ІМК, з й ооо о чинни КОМУ " но. м . КО де МОХ сна ллг сно поїв у Фоуробнвнає спрямованість касети кора наліво, вео ВО ОХ Сава спримоввитв Ко : зве примовки кота ка направо. СЗЗ жан тва! : Ві ІРО шк т З | К ев М шин и наш: ; Їй ід і С Ко . НІ ш її . «Кк! шк НЕ шк ІЧ ЇМ) реееанєюння СШЗШВБ М і Ден оон ши: з15345
Фе. З су пуУюЦів Гравння З ще Е г» - і У - і Гузкнив Кохворукців Її Кщехві | Казав Е Карета З : Ре об енжесненнния кгсоосгоогсвх І ях У і ртннняЯМ, : : Н У : Са : ї і зяб» Звіо СНЕВерннй 0 су и таіюріювАС 100 ОБЛИАМОТИОЕряИКО Е і РОМІВ 18 ІОВ і нут а нари і СРАТТОВАХ В і ка і : КЗ ШК ! в ! в ШИ ШЕ : У і зах Шеаба ЗНммерннй 1 т Китайнавіоваюх 1 Оз ЛюеАМСТРВ Ева ; виска. і ї8 УТ ЕЖЇ ї сУЗВВтанчи лі : пеаНтТНВАЖИІ НЕ Н ІІІ Н фо УУ Ти УК имени, : ї : ї Н вся НИ АВ НА ПИ НИ СКМ Н ДИ: і І Ї Зах Жито сЯбзерннй : бейеутаіеювоОвАє 0 белфАМОТВаЕРаи вка ЦО. Іа Е слуга мар ; ства В ії ВЕ ! ! Я есоосоосооесессееенне і оЖоеохтети сосок осли : зтенннятк тут чнеттнненннни Й зл Н ! РО о т Ко Ї пня тенту - ! Її езбБадж Бмто БНмерння 0 О5АосювлаіеюіювАєм ОБ ЛИБАМИТРОВВЕОВ рмоміиша: ві ІМ Н сування : сеантавАХМІЗ 1 ВВ
Чіг. З
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261644368P | 2012-05-08 | 2012-05-08 | |
| PCT/US2013/040173 WO2013169923A2 (en) | 2012-05-08 | 2013-05-08 | Corn event mon 87411 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA120246C2 true UA120246C2 (uk) | 2019-11-11 |
Family
ID=49551447
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201812984A UA126903C2 (uk) | 2012-05-08 | 2013-05-08 | Об'єкт кукурудзи mon 87411 |
| UAA201413078A UA120246C2 (uk) | 2012-05-08 | 2013-05-08 | Молекула рекомбінантної днк, яка вказує на присутність об'єкта кукурудзи mon 87411 та спосіб її виявлення |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201812984A UA126903C2 (uk) | 2012-05-08 | 2013-05-08 | Об'єкт кукурудзи mon 87411 |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US9441240B2 (uk) |
| EP (2) | EP3278661B1 (uk) |
| JP (1) | JP6315481B2 (uk) |
| CN (1) | CN104427861B (uk) |
| AR (2) | AR090981A1 (uk) |
| BR (1) | BR112014027503B1 (uk) |
| CA (1) | CA2872183C (uk) |
| CL (1) | CL2014003010A1 (uk) |
| CO (1) | CO7151535A2 (uk) |
| CR (1) | CR20140557A (uk) |
| ES (2) | ES2746748T3 (uk) |
| MX (2) | MX371413B (uk) |
| RU (1) | RU2648155C2 (uk) |
| UA (2) | UA126903C2 (uk) |
| UY (1) | UY34799A (uk) |
| WO (1) | WO2013169923A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA201407692B (uk) |
Families Citing this family (108)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104427861B (zh) | 2012-05-08 | 2018-05-04 | 孟山都技术公司 | 玉米事件mon 87411 |
| US9365863B2 (en) | 2013-05-08 | 2016-06-14 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for deploying a transgenic refuge seed blend |
| BR102014031844A2 (pt) | 2013-12-20 | 2015-10-06 | Dow Agrosciences Llc | ras oposto (rop) e moléculas de ácido nucleico relacionadas que conferem resistência a pragas de coleópteros e hemípteros |
| KR20160093728A (ko) | 2013-12-20 | 2016-08-08 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 딱정벌레류 해충에 대한 저항성을 부여하는 rnapii-140 핵산 분자 |
| PE20211797A1 (es) * | 2014-03-20 | 2021-09-13 | Monsanto Technology Llc | Evento de maiz transgenico mon 87419 y metodos para su uso |
| AU2015255995B2 (en) | 2014-05-07 | 2018-05-10 | Dow Agrosciences Llc | Dre4 nucleic acid molecules that confer resistance to coleopteran pests |
| US20160194658A1 (en) | 2014-12-22 | 2016-07-07 | Dow Agrosciences Llc | Nucampholin nucleic acid molecules to control coleopteran insect pests |
| EP3067424A1 (en) | 2015-03-13 | 2016-09-14 | Dow AgroSciences LLC | Rna polymerase i1 nucleic acid molecules to control insect pests |
| CN104830847B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-01-11 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测玉米植物dbn9936的核酸序列及其检测方法 |
| CN104830983B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-01-15 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测玉米植物dbn9968的核酸序列及其检测方法 |
| CN104878095B (zh) * | 2015-04-30 | 2018-10-26 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法 |
| CN104878091B (zh) * | 2015-04-30 | 2019-05-17 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 用于检测玉米植物dbn9978的核酸序列及其检测方法 |
| BR102016012010A2 (pt) | 2015-05-29 | 2020-03-24 | Dow Agrosciences Llc | Molécula de ácido nucleico, de ácido ribonucleico (rna) e de ácido ribonucleico de filamento duplo (dsrna), usos de célula, planta e semente, produto primário, bem como métodos para controlar uma população de pragas coleópteras e/ou hemípteras, para melhorar o rendimento de uma cultura, e para produzir uma célula vegetal transgênica e uma planta transgênica |
| CN105063068A (zh) * | 2015-07-17 | 2015-11-18 | 河南省农业科学院 | 编码突变的epsps基因、其表达载体、表达产物及其应用 |
| JP6873979B2 (ja) | 2015-09-11 | 2021-05-19 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | Ｈｐｐｄ変異体および使用方法 |
| US9993006B2 (en) | 2015-10-12 | 2018-06-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biologicals and their use in plants |
| CN105766992B (zh) * | 2016-03-22 | 2018-06-22 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 除草剂耐受性蛋白质的用途 |
| CN105746255B (zh) * | 2016-03-22 | 2019-01-11 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 除草剂耐受性蛋白质的用途 |
| MX2019006560A (es) * | 2016-12-12 | 2019-08-26 | Syngenta Participations Ag | Proteinas pesticidas modificadas y metodos para controlar plagas de plantas. |
| EP3555056A1 (en) | 2016-12-19 | 2019-10-23 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3342780A1 (en) | 2016-12-30 | 2018-07-04 | Dow AgroSciences LLC | Pre-mrna processing factor 8 (prp8) nucleic acid molecules to control insect pests |
| BR112019015338B1 (pt) | 2017-02-21 | 2023-03-14 | Basf Se | Compostos de fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso dos compostos e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| US20200045974A1 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-13 | Basf Se | Substituted Oxadiazoles for Combating Phytopathogenic Fungi |
| WO2018188962A1 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2018202491A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CN110621669A (zh) | 2017-05-04 | 2019-12-27 | 巴斯夫欧洲公司 | 防除植物病原性真菌的取代5-卤代烷基-5-羟基异噁唑类 |
| WO2018219797A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| US20200190043A1 (en) | 2017-06-19 | 2020-06-18 | Basf Se | 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi |
| CN107254526A (zh) * | 2017-06-22 | 2017-10-17 | 中华人民共和国黄埔出入境检验检疫局 | 转基因玉米mon87411品系特异性实时荧光pcr检测引物、探针、方法和试剂盒 |
| WO2019025250A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019038042A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| US11076596B2 (en) | 2017-09-18 | 2021-08-03 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3713936B1 (en) | 2017-11-23 | 2021-10-20 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| EP3740070A1 (en) | 2018-01-18 | 2020-11-25 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Alginate encapsulation of fungal microsclerotia |
| WO2019145221A1 (en) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | BASF Agro B.V. | New agrochemical formulations |
| KR102258496B1 (ko) * | 2018-02-02 | 2021-05-31 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 옥수수 이벤트 mon87429 및 이의 사용 방법 |
| US20200354321A1 (en) | 2018-02-07 | 2020-11-12 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| WO2019154665A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| WO2019166257A1 (en) | 2018-03-01 | 2019-09-06 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions of mefentrifluconazole |
| MX2020011329A (es) | 2018-04-27 | 2021-02-09 | Pioneer Hi Bred Int | Evento de maiz dp-023211-2 y metodos para la deteccion del mismo. |
| WO2019219464A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| CA3104156A1 (en) * | 2018-07-30 | 2020-02-06 | Monsanto Technology Llc | Corn transgenic event mon 95379 and methods for detection and uses thereof |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| BR112021006121A2 (pt) | 2018-10-23 | 2021-07-20 | Basf Se | compostos, uso dos compostos de fórmula (i), mistura de pesticidas, composições agroquímicas ou veterinárias, métodos para controlar pragas invertebradas e para tratar ou proteger animais e semente |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| US20220015372A1 (en) | 2018-12-14 | 2022-01-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biologicals and their use in plants |
| EP3670501A1 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-24 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EP3908584B1 (en) | 2019-01-11 | 2023-04-26 | Basf Se | Crystalline forms of 1-(1,2-dimethylpropyl)-n-ethyl-5-methyl-n-pyridazin-4-yl-pyrazole-4-carboxamide |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2020239517A1 (en) | 2019-05-29 | 2020-12-03 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| BR112021021028A2 (pt) | 2019-06-06 | 2021-12-14 | Basf Se | Uso dos compostos de fórmula i, compostos da fórmula i, composição e método para combater fungos fitopatogênicos |
| WO2020244970A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | New carbocyclic pyridine carboxamides |
| WO2020244969A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | Pyridine derivatives and their use as fungicides |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| WO2021063736A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | Bicyclic pyridine derivatives |
| WO2021063735A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | New bicyclic pyridine derivatives |
| WO2021076346A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-202216-6 and dp-023211-2 stack |
| KR102593311B1 (ko) * | 2020-04-24 | 2023-10-25 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 유전자이식 옥수수 이벤트 mon95275 및 검출방법 그리고 이의 용도 |
| EP3903584A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| EP4143167B1 (en) | 2020-04-28 | 2024-05-15 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3903583A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii |
| EP3903581A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2021249800A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| CN116209355A (zh) | 2020-10-27 | 2023-06-02 | 巴斯夫农业公司 | 包含氯氟醚菌唑的组合物 |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022090071A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| MX2023006990A (es) | 2020-12-14 | 2023-06-26 | Basf Se | Plaguicidas de sulfoximina. |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| CN117479836A (zh) | 2021-05-03 | 2024-01-30 | 巴斯夫欧洲公司 | 提高农药微生物的农药有效性的添加剂 |
| EP4091451A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-23 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| AU2022279357A1 (en) | 2021-05-18 | 2023-11-30 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicides |
| CN117355520A (zh) | 2021-05-18 | 2024-01-05 | 巴斯夫欧洲公司 | 用作杀真菌剂的新型取代喹啉类 |
| BR112023024017A2 (pt) | 2021-05-18 | 2024-02-06 | Basf Se | Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| IL310497A (en) | 2021-08-02 | 2024-03-01 | Basf Se | (3-quinolyl)-quinazoline |
| WO2023011958A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Basf Se | (3-pirydyl)-quinazoline |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| WO2023156402A1 (en) | 2022-02-17 | 2023-08-24 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2024028243A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Basf Se | Pyrazolo pesticidal compounds |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| EP4361126A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-01 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv |
| WO2024104818A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104823A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | New substituted tetrahydrobenzoxazepine |
| WO2024104815A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104822A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides |
| EP4389210A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Basf Se | Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests |
| CN116676304B (zh) * | 2023-07-20 | 2023-09-26 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 转基因玉米事件lp016-1及其检测方法 |
| CN116640761B (zh) * | 2023-07-20 | 2023-09-22 | 隆平生物技术(海南)有限公司 | 转基因玉米事件lp018-1及其检测方法 |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US6069298A (en) * | 1993-02-05 | 2000-05-30 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods and an acetyl CoA carboxylase gene for conferring herbicide tolerance and an alteration in oil content of plants |
| US6648930B2 (en) * | 1999-02-11 | 2003-11-18 | Renessen Llc | Products comprising corn oil and corn meal obtained from high oil corn |
| US6501009B1 (en) | 1999-08-19 | 2002-12-31 | Monsanto Technology Llc | Expression of Cry3B insecticidal protein in plants |
| US6252148B1 (en) | 1999-12-06 | 2001-06-26 | Holden's Foundation Seeds Llc | Inbred corn line LH244 |
| BR122013026754B1 (pt) * | 2000-06-22 | 2018-02-27 | Monsanto Company | Molécula de dna e processos para produzir uma planta de milho tolerante à aplicação do herbicida glifosato |
| US20060127889A1 (en) * | 2000-07-25 | 2006-06-15 | Dotson Stanton B | Method for assessing transgene expression and copy number |
| US9816104B2 (en) | 2000-10-06 | 2017-11-14 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for deploying a transgenic refuge as a seed blend |
| US7612194B2 (en) | 2001-07-24 | 2009-11-03 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid sequences from Diabrotica virgifera virgifera LeConte and uses thereof |
| MEP35008A (en) | 2002-07-29 | 2011-02-10 | Monsanto Technology | Corn event pv-zmir13 (mon863) plants and compositions and methods for detection thereof |
| NZ543450A (en) | 2003-05-02 | 2008-03-28 | Pioneer Hi Bred Int | Insect resistant maize plant TC1507 and assays for detecting the presence of corn plant TC1507 DNA in a sample and compositions thereof |
| EP1687435B1 (en) | 2003-11-17 | 2011-09-28 | Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation | Insect resistance using inhibition of gene expression |
| AU2004299829B2 (en) | 2003-12-15 | 2007-08-16 | Monsanto Technology Llc | Corn plant MON88017 and compositions and methods for detection thereof |
| WO2005103301A2 (en) | 2004-03-25 | 2005-11-03 | Syngenta Participations Ag | Corn event mir604 |
| US20060021087A1 (en) | 2004-04-09 | 2006-01-26 | Baum James A | Compositions and methods for control of insect infestations in plants |
| EP1794308B1 (en) | 2004-09-29 | 2013-08-28 | Pioneer-Hi-Bred International, Inc. | Corn event das-59122-7 and methods for detection thereof |
| US8404927B2 (en) | 2004-12-21 | 2013-03-26 | Monsanto Technology Llc | Double-stranded RNA stabilized in planta |
| US8088976B2 (en) | 2005-02-24 | 2012-01-03 | Monsanto Technology Llc | Methods for genetic control of plant pest infestation and compositions thereof |
| AR053269A1 (es) | 2005-05-16 | 2007-04-25 | Monsanto Technology Llc | Plantas y semillas de maiz con mejoramiento de asparagina y proteina |
| EP3508582B1 (en) | 2005-09-16 | 2021-01-13 | Monsanto Technology LLC | Methods for genetic control of insect infestations in plants and compositions thereof |
| CN105385679B (zh) | 2006-02-13 | 2020-05-26 | 孟山都技术有限公司 | 选择和稳定dsRNA构建体 |
| CN101495635B (zh) | 2006-05-26 | 2017-05-17 | 孟山都技术有限公司 | 对应于转基因事件mon89034的玉米植物和种子及其检测和使用方法 |
| EA021187B1 (ru) | 2006-06-03 | 2015-04-30 | Зингента Партисипейшнс Аг | Хромосомный целевой сайт кукурузы и способ получения трансгенной кукурузы |
| WO2009075860A2 (en) | 2007-12-12 | 2009-06-18 | Monsanto Technology, Llc | Transgenic plants with enhanced agronomic traits |
| US20120005773A1 (en) | 2008-10-01 | 2012-01-05 | Aasen Eric D | Transgenic plants with enhanced agronomic traits |
| AU2009333348B2 (en) | 2008-12-16 | 2014-08-21 | Syngenta Participations Ag | Corn event 5307 |
| US20110258735A1 (en) | 2008-12-22 | 2011-10-20 | Marie Coffin | Genes and uses for plant enhancement |
| WO2011034946A1 (en) | 2009-09-15 | 2011-03-24 | Metabolix, Inc. | Generation of high polyhydroxybutrate producing oilseeds |
| CA2992347C (en) | 2009-11-23 | 2022-04-12 | Monsanto Technology Llc | Transgenic maize event mon 87427 and the relative development scale |
| KR101355918B1 (ko) | 2010-09-17 | 2014-02-05 | 서울여자대학교 산학협력단 | 유전자 변형 옥수수 ｍｏｎ８６３ 및 ｍｏｎ８１０ 검출용 키트 |
| CN104427861B (zh) | 2012-05-08 | 2018-05-04 | 孟山都技术公司 | 玉米事件mon 87411 |
| US9365863B2 (en) | 2013-05-08 | 2016-06-14 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for deploying a transgenic refuge seed blend |
| US20230000278A1 (en) | 2021-07-02 | 2023-01-05 | Ming-Chia Tai | Steam stove |
-
2013
- 2013-05-08 CN CN201380033654.8A patent/CN104427861B/zh active Active
- 2013-05-08 US US13/890,027 patent/US9441240B2/en active Active
- 2013-05-08 BR BR112014027503-3A patent/BR112014027503B1/pt active IP Right Grant
- 2013-05-08 ES ES13787568T patent/ES2746748T3/es active Active
- 2013-05-08 MX MX2014013700A patent/MX371413B/es active IP Right Grant
- 2013-05-08 UA UAA201812984A patent/UA126903C2/uk unknown
- 2013-05-08 EP EP17170125.3A patent/EP3278661B1/en active Active
- 2013-05-08 JP JP2015511667A patent/JP6315481B2/ja active Active
- 2013-05-08 UY UY0001034799A patent/UY34799A/es active IP Right Grant
- 2013-05-08 AR ARP130101584A patent/AR090981A1/es active IP Right Grant
- 2013-05-08 EP EP13787568.8A patent/EP2846621B1/en active Active
- 2013-05-08 ES ES17170125T patent/ES2903185T3/es active Active
- 2013-05-08 UA UAA201413078A patent/UA120246C2/uk unknown
- 2013-05-08 RU RU2014149189A patent/RU2648155C2/ru active
- 2013-05-08 CA CA2872183A patent/CA2872183C/en active Active
- 2013-05-08 WO PCT/US2013/040173 patent/WO2013169923A2/en active Application Filing
-
2014
- 2014-10-22 ZA ZA2014/07692A patent/ZA201407692B/en unknown
- 2014-11-06 CL CL2014003010A patent/CL2014003010A1/es unknown
- 2014-11-10 MX MX2019011997A patent/MX2019011997A/es unknown
- 2014-12-02 CO CO14264578A patent/CO7151535A2/es unknown
- 2014-12-03 CR CR20140557A patent/CR20140557A/es unknown
-
2016
- 2016-07-28 US US15/222,789 patent/US10316330B2/en active Active
-
2019
- 2019-05-06 US US16/404,513 patent/US11414672B2/en active Active
-
2020
- 2020-06-01 AR ARP200101546A patent/AR119062A2/es unknown
-
2021
- 2021-07-23 US US17/384,358 patent/US11788099B2/en active Active
- 2021-07-23 US US17/384,344 patent/US11859198B2/en active Active
-
2022
- 2022-06-30 US US17/854,421 patent/US20230002783A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA120246C2 (uk) | Молекула рекомбінантної днк, яка вказує на присутність об'єкта кукурудзи mon 87411 та спосіб її виявлення | |
| US20220010326A1 (en) | Transgenic Maize Event MON 87419 and Methods of Use Thereof | |
| CN101027396B (zh) | Cry1F和Cry1Ac转基因棉花株系及其事件特异性鉴定 | |
| CN104830847B (zh) | 用于检测玉米植物dbn9936的核酸序列及其检测方法 | |
| CN104878091B (zh) | 用于检测玉米植物dbn9978的核酸序列及其检测方法 | |
| UA124407C2 (uk) | Рекомбінантна молекула днк, яка надає рослині стійкості до лускокрилої комахи-шкідника, і спосіб її виявлення та використання | |
| CN112512305B (zh) | 玉米转基因事件mon 95379及其检测方法和用途 | |
| CN104878094B (zh) | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9888的核酸序列及其检测方法 | |
| CN109868273A (zh) | 用于检测玉米植物dbn9501的核酸序列及其检测方法 | |
| CN110144363A (zh) | 抗虫耐除草剂玉米转化事件 | |
| CN104878096B (zh) | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9868的核酸序列及其检测方法 | |
| CN104583404A (zh) | 昆虫抗性和除草剂耐受性大豆事件pDAB9582.816.15.1 | |
| US11578339B2 (en) | Transgenic corn event MON95275 and methods for detection and uses thereof | |
| CN104878092B (zh) | 用于检测玉米植物dbn9953的核酸序列及其检测方法 | |
| ES2961522T3 (es) | Evento transgénico de algodón MON 88702 y procedimientos para su detección y usos | |
| CN109971880A (zh) | 用于检测玉米植物dbn9508的核酸序列及其检测方法 | |
| CN104878095B (zh) | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法 | |
| US9365863B2 (en) | Compositions and methods for deploying a transgenic refuge seed blend | |
| JP2020503020A (ja) | エリートイベントｅｅ−ｇｍ４ならびに生物学的試料中でそのようなイベントを同定するための方法およびキット | |
| CN104846084B (zh) | 用于检测玉米植物dbn9927的核酸序列及其检测方法 | |
| CN104878090B (zh) | 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9877的核酸序列及其检测方法 |