RU2012156419A

RU2012156419A - Лекарственная форма левокарримицина, способ его получения и использования

Info

Publication number: RU2012156419A
Application number: RU2012156419/04A
Authority: RU
Inventors: Янг ДЖИАНГ; Уюуоу ХАО
Original assignee: Шенянг Тонглиан Груп Ко., Лтд.
Priority date: 2010-05-25
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2014-06-27
Also published as: KR20130020906A; BR112012029905B1; ES2633737T3; MY164230A; RU2593499C2; BR112012029905A2; JP5866737B2; ZA201209739B; CA2800019C; MX346873B; KR20160019970A; IN2012MN02623A; CN102247396A; EP2578596A4; KR101625262B1; MX2012013469A; KR101706519B1; CN102247396B; WO2011147316A1; US9089586B2

Abstract

1. Левокарримицин, отличающийся тем, что указанный левокарримицин представляет смесь изовалерилспирамицина III, II и I в качестве основных компонентов и содержит один из следующего: изобутирилспирамицин III и II, бутирилспирамицин III и II, пропионилспирамицин III и II, а также ацетилспирамицин III и II, при этом содержание изовалерилспирамицина III не менее 30% по массе, суммарное содержание изовалерилспирамицина III, II и I не менее 60% по массе, а содержание ацилспирамицина 80-98% по массе, более предпочтительно 85~98% по массе, еще более предпочтительно 90~98% по массе и наиболее предпочтительно 95~98% по массе; угол оптического вращения указанного левокарримицина [α]D=-52°~-57° в растворе 0,02 г/мл хлороформа при температуре 25°С, предпочтительно -54°~-56° и более предпочтительно -55°.2. Левокарримицин по п.1, отличающийся тем, что указанный левокарримицин также содержит спирамицин III и другие соединения, среди которых содержание спирамицина III не превышает 1,0%, а суммарное содержание других компонентов составляет 2,0~19% по массе, предпочтительно 2,0~14,0% по массе, более предпочтительно 2,0~9,0% по массе и наиболее предпочтительно 2,0~4,0% по массе.3. Левокарримицин по п.2, отличающийся тем, что указанная температура плавления указанного левокарримицина составляет 112~122°С С, предпочтительно 114~120°C C и более предпочтительно 116~118°C C.4. Левокарримицин по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный изовалерилспирамицин III является кристаллическим соединением изовалерилспирамицина III, изовалерилспирамицин II является кристаллическим соединением изовалерилспирамицина II или изовалерилспирамицин I является кристаллическим соединением изовалерилспирамицина I;когда �

Claims

1. Левокарримицин, отличающийся тем, что указанный левокарримицин представляет смесь изовалерилспирамицина III, II и I в качестве основных компонентов и содержит один из следующего: изобутирилспирамицин III и II, бутирилспирамицин III и II, пропионилспирамицин III и II, а также ацетилспирамицин III и II, при этом содержание изовалерилспирамицина III не менее 30% по массе, суммарное содержание изовалерилспирамицина III, II и I не менее 60% по массе, а содержание ацилспирамицина 80-98% по массе, более предпочтительно 85~98% по массе, еще более предпочтительно 90~98% по массе и наиболее предпочтительно 95~98% по массе; угол оптического вращения указанного левокарримицина [α]D=-52°~-57° в растворе 0,02 г/мл хлороформа при температуре 25°С, предпочтительно -54°~-56° и более предпочтительно -55°.

2. Левокарримицин по п.1, отличающийся тем, что указанный левокарримицин также содержит спирамицин III и другие соединения, среди которых содержание спирамицина III не превышает 1,0%, а суммарное содержание других компонентов составляет 2,0~19% по массе, предпочтительно 2,0~14,0% по массе, более предпочтительно 2,0~9,0% по массе и наиболее предпочтительно 2,0~4,0% по массе.

3. Левокарримицин по п.2, отличающийся тем, что указанная температура плавления указанного левокарримицина составляет 112~122°С С, предпочтительно 114~120°C C и более предпочтительно 116~118°C C.

4. Левокарримицин по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный изовалерилспирамицин III является кристаллическим соединением изовалерилспирамицина III, изовалерилспирамицин II является кристаллическим соединением изовалерилспирамицина II или изовалерилспирамицин I является кристаллическим соединением изовалерилспирамицина I;

когда изовалерилспирамицин III представляет кристаллическое соединение с левоизовалерилспирамицином III, дифракция рентгеновских лучей на порошке указанного кристаллического соединения, измеренная с применением излучения Cu-Ka, имеет характерные пики при 2θ=8,0°, 10,0°, 11,2°, 11,7°, 16,4°, 19,1°, 19,6°, 20,0°, 21,4°, 22,9°, 23,6° и 29,4°;

когда изовалерилспирамицин II представляет кристаллическое соединение с левоизовалерилспирамицином II, дифракция рентгеновских лучей на порошке указанного кристаллического соединения, измеренная с применением излучения Cu-Ka, имеет характерные пики при 2θ=10,0°, 11,6°, 16,4°, 17,3°, 19,1°, 21,2°, 22,1°, 22,7°, 26,4°, 26,9°, 27,5° и 31,5°;

когда изовалерилспирамицин I представляет кристаллическое соединение с левоизовалерилспирамицином I, дифракция рентгеновских лучей на порошке указанного кристаллического соединения, измеренная с применением излучения Cu-Ka, имеет характерные пики при 2θ=7,6°, 8,0°, 10,0°, 11,4°, 16,4°, 17,0°, 17,5°, 17,9°, 19,5°, 22,7°, 23,7° и 24,4°.

5. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит левокарримицин по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что содержание указанного левокарримицина составляет 10~90% по массе фармацевтической композиции, предпочтительно 25~75% по массе и более предпочтительно 40~60% по массе.

7. Способ приготовления левокарримицина по любому из пп.1-3, который включает культивирование и процесс экстрагирования, где упомянутое культивирование и ферментирование является биологическим ферментированием клонированных грибковых штаммов WSP-195, осуществляемое с применением спирамицин-содержащего гена 4”-изовалерилтрансферазы на поверхности среды скошенного агара, последующий посев на поверхность среды для посева, затем введение в среду ферментирования после культивирования и контроль процесса ферментирования с применением регулятора pH; контроль pH на уровне pH 6,0~9,0, предпочтительно 6,0~8,0 и более предпочтительно 6,0~7,5, кривые изменения pH со временем показывают три непрерывные фазы, первая фаза удовлетворяет формуле y1=k1x1+6,0, где 0,0227≤k1≤0,1364, 0<x1≤22; вторая фаза удовлетворяет формуле y2=k2x2+b2, где -0,0735≤k2<0, 6,5<b2≤10,62, 22≤x2≤56; и третья фаза удовлетворяет формуле y3=k3x3+b3, где 0<k3≤0,0078, 6,06≤b3<6,5, 56≤x3≤120.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что процесс экстрагирования включает обработку ферментационной жидкости сульфатом алюминия для получения фильтрата, стабилизирование pH фильтрата на уровне 8,5~9,0, экстрагирование с бутилацетатом, промывание бутилацетата несоленой водой и раствором 1% NaH₂PO₄, соответственно, затем экстрагирование с водой при pH 2,0~2,5 для получения водосодержащего экстракта, стабилизирование pH на уровне 4,5~5,5, испарение и устранение остаточного бутилацетата для получения водного экстракта, фильтрацию и стабилизирование pH на уровне 8,5~9,0, осаждение осадка, промывание осадка дистиллированной водой и его сушку для получения левокарримицина.

9. Способ по п.7, отличающийся тем, что культивирование на среде скошенного агара осуществляется 8~15 суток при температуре 28~38°С; культивирование на среде для посева осуществляется 40~80 часов при температуре 25~30°С; и ферментация в среде ферментации продолжается 72~120 часов при температуре 26~30°С.

10. Способ по любому из пп.7-9, отличающийся тем, что указанный способ приготовления также включает следующие этапы:

a) сепарирование и очищение левокарримицина для получения левоизовалерилспирамицина I, II или III;

b) рекристаллизация левоизовалерилспирамицина I, II или III для получения кристаллического соединения левоизовалерилспирамицина I, II или III;

c) устранение ацетонитрила в остаточном левокарримицине после сепарирования и очищения левоизовалерилспирамицина I, II или III на этапе a) с применением метода роторного испарения, затем экстрагирование равным количеством этилацетата и устранение этилацетата из экстракта с применением роторного испарения для получения пастообразной пробы; повторное растворение пробы с применением петролейного эфира, устранение петролейного эфира посредством роторного испарения для получения левокарримицина;

d) смешивание кристаллического соединения левоизовалерилспирамицина I, II или III, полученного на этапе b), с левокарримицином, полученным на этапе c), для получения левокарримицина, в котором изовалерилспирамицин I, II или III является кристаллическим соединением левоизовалерилспирамицина I, II или III.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанное сепарирование и очищение на этапе a) включает:

очистку левокарримицина, полученного при предварительном сепарировании, с применением препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии, применение хроматографической колонки ODS, использование буферного раствора ацетонитрила и ацетата аммония в качестве подвижной фазы для градиентного элюирования; регистрацию УФ-спектрограмм с применением УФ-детектирования и определение пиков мишеней компонентов левоизовалерилспирамицина I, II или III:

хроматографическая колонка: препаративная хроматографическая колонка ODS;

Подвижная фаза: ацетонитрил (А), 100 мМ раствор ацетата аммония (В);

Градиентные условия: выдержка линейного градиента в течение 0~60 мин А - 25%~65%; и 61~90 мин, А - 65%~90%;

Скорость фильтрации: 260 мл/мин;

Объем вводимой пробы: 10 мл;

Концентрация пробы: 0,5 г/мл;

Длина волны измерения: 231 нм;

Способ отбора: отбор с применением УФ-триггера;

Отбор пробы левоизовалерилспирамицина I в соответствии со временем удерживания в 44,759 мин левоизовалерилспирамицина I; или отбор пробы левоизовалерилспирамицина II в соответствии со временем удерживания в 43,34 мин левоизовалерилспирамицина II; или отбор пробы левоизовалерилспирамицина III в соответствии со временем удерживания в 48,009 левоизовалерилспирамицина III; затем устранение ацетонитрила в остаточном левокарримицине с применением метода роторного испарения, экстрагирование равным количеством этилацетата и устранение этилацетата из экстракта с применением роторного испарения для получения пастообразной пробы; повторное растворение пробы с применением петролейного эфира, устранение петролейного эфира посредством роторного испарения для получения твердого белого порошка левоизовалерилспирамицина I, II или III.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что:

когда изовалерилспирамицин I представляет кристаллическое соединение с левоизовалерилспирамицином I, получение кристаллического соединения осуществляется в соответствии со следующим процессом рекристаллизации: растворение твердого белого порошка левоизовалерилспирамицина I в смешанном растворе абсолютного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, добавление дистиллированной воды при перемешивании, далее охлаждение до 5°С ~ 15°С при постоянном перемешивании, получение кристаллического соединения левоизовалерилспирамицина I, в котором объемное соотношение этилацетата, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона в смешанном растворителе составляет 1:0,1~10:0,5~1, предпочтительно 1:2~8:0,8~1;

когда изовалерилспирамицин II представляет кристаллическое соединение с левоизовалерилспирамицином II, получение кристаллического соединения осуществляется в соответствии со следующим процессом рекристаллизации: растворение твердого белого порошка левоизовалерилспирамицина II в смешанном растворе абсолютного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, добавление дистиллированной воды при перемешивании, далее охлаждение до 5°С~15°С при постоянном перемешивании, получение кристаллического соединения левоизовалерилспирамицина II, в котором объемное соотношение абсолютного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона в смешанном растворителе составляет 1:0,1~10:0,5~1, предпочтительно 1:2~8:0,8~1;

когда изовалерилспирамицин III представляет кристаллическое соединение с левоизовалерилспирамицином III, получение кристаллического соединения осуществляется в соответствии со следующим процессом рекристаллизации: растворение твердого белого порошка левоизовалерилспирамицина III в смешанном растворе абсолютного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, добавление дистиллированной воды при перемешивании, далее охлаждение до 5°С~15°С при постоянном перемешивании, получение кристаллического соединения левоизовалерилспирамицина III, в котором объемное соотношение абсолютного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона в смешанном растворителе составляет 1:0,1~10:0,5~1, предпочтительно 1:2~8:0,8~1.

13. Применение указанного левокарримицина по любому из пп 1-4 или указанной фармацевтической композиции по любому из пп 5-8 для изготовления лекарственного средства для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.

14. Применение по п.13, отличающееся тем, что указанные инфекционные заболевания представляют заболевания, вызванные заражением грамположительными бактериями, золотистыми стафилококками, стрептококками пневмонии, микоплазмами пневмонии, хламидиями пневмонии, уреаплазмами уреалитикум, хламидиями трахоматис, пиогенными стрептококками, катаральными микрококками, гонококками, гриппозными бациллами, легионеллами или анаэробами.

15. Применение указанного левокарримицина по любому из пп 1-4 или указанной фармацевтической композиции по любому из пп 5-8 для изготовления бактерицидного лекарственного средства, против указанных бактерий, включающих стрептококки пневмонии, стрептококки группы A, пиогенные стрептококки, энтерококки, золотистые стафилококки, эпидермальные стафилококки, катаральные кокки, гонококки, гриппозные бациллы, кишечные палочки, энтеротоксигенные кишечные палочки, энтеропатогенные кишечные палочки, энтероинвазивные кишечные палочки, синегнойные палочки, палочки Фридлиндера, вульгарный протей, брюшнотифозные палочки, ацинетобактерии, цитробактерии, серрации, шигеллы Зонне, шигеллы Флекснера, грибок Tritirachium album; легионеллы, такие как легионелла pneumophila, легионелла gormanii, легионелла bozemanii, легионелла dumoffii, легионелла jordanis и легионелла micdadei; анаэробы, такие как бактероиды фрагилис, бактероиды thetaiotaomicron, бактероиды vulgatus, бактероиды bacteroides, бактероиды prevotella, превотелла asaccharolyticus, превотелла oralis, палочка Плаута, фузобактерии russell, бифидобактерии, лактобациллы, пептострептококки, пропионовые бактерии акне, клостридии перфрингенс и дрожжеподобные грибки.