KR101625262B1 - 레보캐리마이신, 약학 조성물, 제조방법 및 응용 - Google Patents

레보캐리마이신, 약학 조성물, 제조방법 및 응용 Download PDF

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Abstract

본 발명은 레보캐리마이신(levocarrimycin), 약학 조성물, 제조 방법 및 이의 용도를 개시한다. 레보캐리마이신은 이소발레릴스피차마이신 III, II 및 I을 주로 하는 혼합물이며, 일정한 양의 이소부티르스피라마이신 III 및 II, 부티르스피라마이신 III 및 II, 프로피오닐스피라마이신 III 및 II, 뿐만 아니라 아세틸스피라마이신 III 및 II를 함유하고, 이 중 이소발레르스피라마이신 III의 함량은 30 wt% 이상이고, 이소발레르스피라마이신 III, II 및 I의 총 함량은 60 wt% 이상이며, 아실스피라마이신의 함량은 80 내지 98 wt%이다. 상기 레보캐리마이신의 고유 광회전도는 25℃, 0.02g/ml 클로로포름 용액에서 [α]D = -52°내지 -57°이다. 또한, 이소발레르스피라마이신 III, II 또는 I의 결정을 함유하는 레보캐리마이신, 및 이 레보캐리마이신을 함유하는 약학 조성물도 개시한다. 이 레보캐리마이신 또는 이의 약학 조성물 중의 활성 성분은 선광성이 있고 항감염 효과가 우수하다.

Description

레보캐리마이신, 약학 조성물, 제조방법 및 응용{LEVOCARRIMYCIN, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS, PREPARATION METHODS AND USES THEREOF}
본 발명품은 캐리마이신 원료약품 및 그에 관한 약품제제 영역에 관한 것이다. 구체적으로 말하면 마크로라이드계 유전자 공학 항생제에 관한 것이고 특히 레보캐리마이신 약품, 그의 제조방법, 그리고 그를 이용하여 감염성 질환을 치료하고 예방하는 약품을 제조하는 분야에 관한 것이다.
캐리마이신은 유전자 공학 기술을 이용하여 연구해 내는 새로운 스피라마이신 파생물이다. 원래 이름은 바이오테크스피라마이신이고 생기마이신이라는 이름도 사용해 본 적이 있다. [특허번호:ZL97104440.6] 중국 약품 통용적인 명명 원칙에 따라 국가 약전 위원회가 기술 심사와 연구를 통해 그의 이름을 캐리마이신로 정하고 영어 이름은 Carrimycin이다.
캐리마이신은 유전자공학균을 발효한 산물이다. 그 화학구조에는 4-이소발레르스피라마이신이 주요성분이고 4-이소발레르스피라마이신 IㆍIIㆍIII이 포괄되고 또 약 6개의 4-수산기가 아실화 반응된 스피라마이신도 있다. 이에 따라 그 화학명은 4-아실스파라마이신으로 통칭된다.
(l)은 캐리마이신의 주성분의 화학구조이다.
Figure 112012107314159-pct00001
그 중에서,
Figure 112012107314159-pct00002
캐리마이신은 16원자 환식 마크롤라이드계 항생물질이며 박테리아리보솜과 결합함으로써 그의 단백질 합성을 억제하는 효과가 있다.
체외시험결과에 따르면 캐리마이신은 그람양성균에 대하여, 특히 어떤 내성균(베타-락탐에 내성이 있는 황색포도상구균, 에리트로마이신에 내성이 있는 황색포도상구균등)에 대하여 효과가 있으며 동류 약품과의 교체 저항성이 뚜렷하지 않다. 또한 이는 마이코플라스마나 클라미디아에 대하여 항균력이 좋고 일부 그람 음성의 박테리아에도 항균력이 있다. 게다가 톡스플라스마곤디이나 레지오넬라에도 항균력이나 조직 통과성이 좋고 면역력을 조절하는 잠재력도 있다. 체외보다 체내항균력이 더 좋다[ZL200310122420. 9]. 온상연구에 따르면 5~7일에 매일 0.2-0.4mg씩 캐리마이신 정제를 복용하면 화농성연쇄구균으로 인한 급성 세균형 인두염ㆍ급성화농성편도염, 민감형 세균으로 인한 세균형부비강염ㆍ급성 기관지염,폐렴 연쇄구균이나 인플루엔자균 ㆍ 폐렴마이코플라스마로 인한 가벼운 폐렴,마이코플라스마나 클라미디아로 인한 비특이성요도염,민간형 세균으로 인한 피부와 연조직 감염ㆍ차주염ㆍ중이염등 감염성 질환을 치료할 수 있다. 효율은 92.68%에 달한다. 그러므로 캐리마이신은 안전적이고 효과적인 것이다.
약물동력학 연구결과에 의하면 캐리마이신에 활성이 있는 주요성분은 이소발레르스피라마이신 IㆍIIㆍIII이다. 캐리마이신이 인체내에 들어가면 스피라마의신으로 빠르게 대사한다. 모체약물 이소발레르스파라마이신 IㆍIIㆍIII과 활성 대사 산물 스피라마이신 IㆍIIㆍIII 중의 모든 AUC0-t의 양을 계산하면 복용하는 절대적인 유효성의 평균 수치가 91. 6%이다. 문헌 보도에 의하면 스피라마이신을 내복하는 절대적인 유효성 수치는 30-40%이다[Frydman AM et al J Antimicrob Chemother.1988,22(suppl B):93-103]. 이를테면 이소발레르스파라마이신의 조직으로 인하여 활성성분, 즉 스피라마이신의 생물학적 이용 가능성이 뚜렷하게 개선된다. 한번만 약을 복용하면 캐리마이신이 해소되는 형상이 르럿하게 발생하고 T1/2은 23-27시간이다.
캐리마이신 유효 구성 요소의 연구에 따르면, 그 중에 활성 있는 유효성분 이소발레르스파라마이신 I, II, III의 화학구조에 키랄의 탄소 원자가 여러개 있다. 그리고 분자 비대칭성(Chirality)은 3차원 물체의 기본 속성이자 자연계의 본질적 속성중의 하나이다. 단백질·다당류·리보오스·엔자임등과 같은 생명 활동을 유지하는 기본적인 생체 고분자물들은 거의 다 분자 비대칭성을 가지고 있다. 이런 생체 고분자들은 항상 인체 안에 중요한 생리 기능을 발휘하고 있다. 키랄 약품(chiral drug)이란 약물 분자구조에서 비대칭 중심을 수용한 후에 얻은 서로 실물과 거울상이 되는 거울상체이다. 이런 거울상체가 물질적이고 화학적인 성질이 거의 비슷하고 선광도에만 차이가 있다. 따로따로 R형 혹은 L형, 라세미체라고 명명된다. 요즘 20년에 약학 연구가 날로 발달하면서 친화력 약물 입체 선택성(stereoselectivity)이 다르면 그와 수용기의 친화력이 달라짐으로 약리작용에도 큰 차이가 나타난다는 연구결과가 나왔다. 키랄의 약물중에 활성이 높은 거울상체가 우거울상체Eutomer）라고 부르고 활성이 낮거나 없는 것이 열거울상체（Distomer）라고 부른다. 항상 열거울상체는 약효가 없을 뿐만 아니라 일부 우거울상체의 약효를 상쇄시킬 수 있고 심지어 심한 부작용이 나타나는 가능성도 있다. 이것은 약효 차이의 복잡성을 반영하고 또 단독 거울상체가 그 라세미와 사이에 큰 치료지수 차이가 있다는 것을 결정한다. 예를 들어 우리가 잘 아는 DL-(+-)의 테라마이신의 치료효과가 D(-)클로로미이세틴의 일반에 불과하고 프로프라놀롤(propranolol)L-이성질체의 약물 활성은 D-이성질체의 100배나 된다. (-)메사돈은 강한 진통제이지만 (+)메사돈은 이런 약효가 없다. 또한 특성에도 차이가 존재한다. 예를 들어 탈리도마이드(thalidomide)의 두 거울상체가 시험용쥐를 진정시키는 데 효과가 비슷하지만 S(-)이성질체와 그의대사물만 배아가형을 유발시킬 수 있다. 또한 케타민은 마취와 진통제로 넓게 응용하지만 환각을 유발하는 부작용이 있는데 연구 결과에 따르면 S(+)체의 약효가 R(-)체보다 3-4배나 더 크지만 부작용이 뒷 것과 관련이 있다는 것이 분명하다. 키랄의 약용효과의 큰 차이 때문에 그에 관한 연구개발과 분리 분석의 발전이 촉진된다. 분자 비대칭성 기술을 이용함으로써 약물에 작용이 없거나 부작용이 있는 거울상체를 쉽게 제거하고 단일정향구조의 순화 키랄의 약품을 생산함으로써 약물 성분을 더 순수하게 만들고 질병을 치료할 때 효과가 더 빠르고 치료기간이 더 짧다. 그러므로 요즘 라세미체 연구는 세계적으로 신약품 개발 쌉합중의 하나가 되며 여러나라 정부와 각 의약회사가 거액을 투자하고 키랄의 약품제제, 키랄 원재료와 키랄 중간체등 영역에 연구개발을 진행하고 세계적인 키랄약품 시장을 점령하기도 한다. 이외에 분자 비대칭성 기술의 계속 개선으로 인하여 특히 액체 크로마토그래피를 빠른 속도로 널리 응용함으로 인하여 키랄의 약물거울상체의 분리 분석과 출정이 적극적으로 추진되었다. 단일거울상체 키랄 약물은 이미 넓은 영역에서 응용하고 있다.
본 발명자들은 캐리마이신이 광학활성 있는지 없는지에 대해 많은 연구를 해왔다. 배양과 발효 조건을 개선함으로써 선광 활성이 있는 레보캐리마이신을 뜻밖에 발견하였다. 이는 더 좋은 항감염 활성을 나타낸다. 그래서 본 발명품은 레보캐리마이신과 그 제조방법 그리고 그로 감염성 질병을 예방하거나 치료하는 약물 제조방법을 제공한다.
본 발명의 첫 번째 목적은 한 레보캐리마이신을 제공하는 것에 있다. 이 레보캐리마이신은 선광성이 있는 동시에 더 좋은 항감염 활성이 있다.
본 발명의 두 번째 목적은 레보캐리마이신 약학 조성물을 제공하는 데에 있다. 그 약학 조성물에는 본 발명이 제공하는 선광성이 있는 레보캐리마이신이 있고 약학적으로 용인할 수 있는 운반체가 있다.
본 발명의 세 번째 목적은 레보캐리마이신의 제조방법을 제공하는 데에 있다. 그 방법은 생산공예가 간단하고 질량 표준이 쉽게 통제할 수 있다. 제조해 내는 레보캐리마이신이 효과가 좋고 선광성이 있으며 항감염 활성도 더 좋다.
본 발명의 네 번째 목적은 전술한 레보캐리마이신이나 그의 약학 조성물로 감염성 질병을 치료하거나 예방하는 약품을 제조하는 응용을 제공하는 데에 있다. 특히 항세균, 항마이코플라스마 혹은 항클라미디아 분야에 좋은 효과가 있고 감염성 질병 약물로 쓸 수 있다.
본 발명의 첫 번째 목적을 달성하기 위하여 다음과 같은 기술 방안이 채택된다.
레보캐리마이신은 이소발레르스피라마이신 I, II, III 세가지 구성요소를 위주로 하는 결합물이며 또 일정량의 이소부티르스피라마이신 II, III이나, 부티르스피라마이신 II, III, 프로피오닐스피라마이신 II, III, 아세틸스피라마이신 II, III이 있다. 그 중에 이소발레르스피라마이신 III의 양은 30wt%를 넘고 이소발레르스피라마이신 I, II, III의 총량은 60wt%를 넘어야 한다. 아실스피라마이신의 함량은 80-98wt%이고 더 바람직하게는 85-98wt%이고 좀더 바람직하게는 90-98wt%이고 가장 바람직하게는 95-98 wt%이다. 온도가 25℃일 때 0.02 g/ml의 클로로포름 용액 중에서 상기 레보캐리마이신의 고유 광회전도는 [α]D = -52°~ -57°이고 바람직하게는 -54°~ -56°이고 좀 더 바람직하게는 -55°이다.
본 발명자들은 캐리마이신에 대해 많은 연구를 해왔다. 배양과 발효 조건을 조절하고 개선 최적화함으로써, 특히 pH 규제로 발효 과정 중의 pH 수치를 엄격하게 제어함으로써 pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선을 세가지 지속적인 단계 형태로 만든 것이다. 각 단계마다 특정한 방정식을 만족한다. 그렇게 함으로써 광학활성을 가진 레보캐리마이신을 얻어냈다. 이 배양과 발효조건 밑에서 광학활성을 가진 구성요소 함량이 변화가 생길 가능성도 있고 그의 광학 구조가 변할 가능성도 있다.
본 발명 중의 레보캐리마이신의 고유 광회전도를 측정하는 방법이 다음과 같다. 얻은 레보캐리마이신을 정밀하게 측정한 후 클로로포름으로 용해하고 1ml 마나 약 20mg 함량이 있는 용액으로 희석한다. 납 스펙트럼 D선(589.3nm)으로 선광도를 측정한다. 측정 길이는 1dm이고 온도는 25℃이다. 사용하는 선광기는 이미 검정해 놓고 수치가 0.0001°까지 정확하게 읽을 수 있어야 한다.
본 발명의 레보캐리마이신의 용융 온도 범위는 112~122℃이고 바람직하게는 114~120 ℃이고 좀더 바람직하게는 116~118℃이다.
측정방법: 건조한 시험품 적당량을 녹는 점 측정용모세관에 넣고 녹는 점을 측정한다. 세번 측정한 후에 평균 수치를 취한다.
본 발명의 레보캐리마이신은 선광성을 가지고 있다. 현대 약리학 연구에 따르면 약품 거울상체의 입체 선택성이 다르기 때문에 그와 수용가의 친화력이 달라짐으로 약리작용에도 큰 차이가 나타났다. 본 발명은 체내 약효와 체외 약효를 통하여 레보캐리마이신이 효과가 좋고 약리활성이 강하다는 것을 입증한다. 그러므로 감염성 질병의 치료에 대해 새로운 약물을 제공하고 캐리마이신의 키랄의 약물 제제를 개발하는 데에 기초를 다진다.
체내외 시험에 의하면 본 발명은 예민도가 높고 내약성이 작다. 내약성이 있는 황색포도상구균에 효과가 있을 뿐만 아니라 항생제 남용으로 인한 세균감염에도 예측하기 어려운 가치가 있다. 예를 들어 항생제 내성 세균(MRSA)이나 초 스펙트럼 베타-락타마제（ESBL)로 인한 대장균 감염, 클로스트리듐 디피실리균(C-diff)으로 인한 전염병은 다 항생제 남용으로 발생한 것이다. 레보캐리마이신이 출시되면 이를 제어하는 가능성이 있기도 하다.
본 발명은 스피라마이신 III과 다른 구성요소도 포함한다. 그 중에 스피라마이신 III의 양은 1.0%를 넘어서는 안된다. 다른 구성요소의 총 함량은 2.0～19wt%이고，바람직하게는 2.0～14.0wt%이고，좀 더 바람직하게는 2.0～9.0wt%이고，가장 바람직하게는 2.0～4.0wt%이다.
본 발명에서 상기 다른 구성요소가 최소로 개선되는 스피라마이신 동족체 3가지가 있다.
본 발명은 이소발레르스피라마이신 I, II, III을 위주로 형성한 결합물이며 상기 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물이고, 혹은 이소발레르스피라마이신 II는 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이고, 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이다.
이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물일 때 Cu-Kα방사선으로 그 결정체 화합물을 측정하면 X-방사선 파우더가 회전하는 2θ 수치에 8.0°, 10.0°, 11.2°, 11.7°, 16.4°, 19.1°, 19.6°, 20.0°, 21.4°, 22.9°, 23.6°및 29.4°때 특징 최고점이 나타났다.
이소발레르스피라마이신 II는 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물일 때 Cu-Kα방사선으로 그 결정체 화합물을 측정하면 X-방사선 파우더가 회전하는2θ 수치에10.0º、11.6º、16.4º、17.3º、19.1º、21.2º、22.1º、22.7º、26.4º、26.9º、27.5º과31.5º 때 특징 최고점이 나타났습니다.
이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물때 Cu-Kα방사선으로 그 결정체 화합물을 측정하면 X-방사선 파우더가 회전하는 2θ 수치에7.6°, 8.0°, 10.0°, 11.4°, 16.4°, 17.0°, 17.5°, 17.9°, 19.5°, 22.7°, 23.7°및 24.4°때 특징 최고점이 나타났다.
더 깊게 연구하는 결과에 따르면 레보캐리마이신을 순화 분리 후 얻은 이소발레르스피라마이신 III, II 혹은 I 중의 하나가 재결정하여 얻은 이소발레르스피라마이신 I, II, III 결정체가 레보캐리마이신과 결합하면 얻은 것은 이소발레르스피라마이신 III, II 혹은 I이 이소발레르스피라마이신 III, II 혹은 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다. 체내 약효 시험 결과에 따르면 이소발레르스피라마이신 III, II 혹은 I이 이소발레르스피라마이신 III, II 혹은 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신의 약효가 보통 레보캐리마이신보다 훨씬 좋다.
본 발명의 두번째 목적을 달성하기 위하여 다음과 같은 기술 방안을 채택한다.
레보캐리마이신 약학 조성물이다. 그 약학 조성물에는 본 발명이 제공하는 레보캐리마이신이 있고 약학적으로 용인할 수 있는 운반체가 있다.
이 약학 조성물 중에 레보캐리마이신의 함량은 안전적인 유효량이다. 우선 바람직한 양은 약학 조성물의 10～90wt%이고，좀 더 바람직하게는 25～75wt%이고，가장 바람직하게는 40～60wt%이다.
여기서 말했던 안전적인 인체나 다른 포유동물의 질병을 완화하거나 돌리거나 치료하는 동시에 복용한 약물이나 약제가 포유동물의 조직에 심한 부작용이 없는 약품이나 화합품, 조성물, 상품, 약제의 적당한 양이다.
여기서 말했던 약학적으로 용인할 수 있는 운반체란 약학 영역에 있는 일반적인 약물 운반체이다. 예를 들어 물 같은 시너나 첨가제, 전분이나 사카로즈같은 충전제, 셀룰로오스파생물, 알긴산염, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈과 같은 접착제, 글리세린 같은 습윤제, 한천, 탄산칼륨, 탄산수소 나트륨 같은 붕해제, 제4급암모늄화합물 같은 흡수촉진제, 세탄올 같은 계면활성제, 카올린이나 비누석 같은 흡착운반체, 탤컴파우더, 스테아르산칼슘, 마그네슘, 폴리에틸렌글리콜 같은 윤활제 등이다. 이외에 조성물에 향미제, 감미료 등 같은 보조재료도 첨가할 수 있다.
이 조성물에 안전적인 유효량의 시너, 붕해제, 윤활제, 충전제, 접착제, 습윤제, 흡수촉진제, 계면활성제, 첨가제 및 본 영역에 일반적인 약품 운반체를 마음대로 사용할 수 있다.
본 발명 중 말했던 레보캐리마이신 약학 조성물은 약용에 적당한 제제 형태로 존재한다. 형태로는 액체 제제, 고체 제제, 반고체 제제, 기체 제제가 있다.
그 중에 액체 제제는 주사약, 수용액, 혼합액, 시럽, 틴크제, 교질용액, 방향수제, 글리세린제, 콜로이드 용액, 점액제, 현탁액, 유화액이 있다.
고체 제제는 주사용 파우더, 동결건조 주사용 파우더, 정제, 캡슐, 가루약, 과립형, 알약, 박막제가 있다.
반고체 제제는 연고, 석고, 좌약, 추출, 젤이 있다.
기체 제제는 연무제, 방취제가 있다.
본 발명 중 레보캐리마이신의 용량은 단위별로 10～1500mg이고 바람직하게는100～1000mg이고，좀 더 바람직하게는 200～500mg이다.
본 발명의 세 번째 목적을 달성하기 위하여 다음과 같은 기술 방안을 실시한다.
레보캐리마이신의 제조방법. 그 과정에 배양 발효와 추출을 포함하고 있다. 배양 발효과정은 4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 사면 한천에 배양한 후 시드 배양기에 접종하여 배양한다. 그 후에 발효배양기에 접종하고 pH 규제로 발효과정을 조절하여 발효를 진행시킨다. pH 수치가 6.0～9.0이고 바람직하게는 6.0~8.0이고，좀 더 바람직하게는 6.0~7.5이다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=k1x1+6.0 (0.0227≤k1≤0.1364，0＜x1≤22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=k2x2+b2 (-0.0735≤k2＜0，6.5＜b2≤10.62，22≤x2≤56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=k3x3+ b3 (0＜k3≤0.0078, 6.06≤b3＜6.5，56≤x3≤120)를 만족시킨다.
본 발명 중에 배양과 발효 조건의 조정과 최적화로, 특히 pH 규제로 발효과정 중의 pH 수치를 엄격하게 통제함으로써 발효 과정 중의 pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세가지 지속적인 단계의 형태로 나타나고 단계마다 일정한 방정식을 만족한다. 이를 통하여 광학활성을 가진 레보캐리마이신을 만든다.
본 발명 중에 발효과정은 관건이고 수시로 pH 수치를 점검해야 한다. pH 수치의 통제는 pH 규제의 첨가로 실현된다. 말했던 pH 규제는 포도당, 구연산, 초산, 염산, 암모니아수, 수산화나트륨, 수산화칼륨 중의 하나 또는 그들의 배합물이다. 바람직하게는 포도당, 구연산, 초산, 암모니아수 또는 그들의 배합물이고 좀 더 바람직하게는 포도당, 암모니아수나 그들의 배합물이다.
본 발명 중에 말했던 추출은 배양 발효 후 얻은 발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.5-9.0의 환경 하에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.0-2.5의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 4.5-5.5 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물 같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.5-9.0의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
본 발명 중에 말했던 사면 배양기에 콩분말 2%, 포도당 1%, 전분 3%, CaCO3 0.5%, NaCl 0.4% 그리고 한천 2%가 있다.
시드 배양기에 콩분말 1.5%, 전분 3.0%, NaCl 0.4%, CaCO3 0.5%, 펩톤 0.3% 그리고 KH2PO4 0.05%가 있다.
발효 배양기에 포도당 0.5%, 전분 6.0%, 효마가루 0.5%, 어분 2.0%, NH4NO3 0.6%, NaCl 1.0%, CaCO3 0.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.1%, 콩기름 0.5% 그리고 소포제 0.02%가 있다.
또 사면 배양기 배양조건은 온도 28~38℃이고 시간은 8-15일이다.
시드 배양기 배양조건은 온도 25~30℃이고 시간은 40~80시간이다.
사면 배양기 배양조건은 온도 26~30℃이고 시간은 72~120시간이다.
레보캐리마이신에 이소발레르스피라마이신 I, II, III의 결정체가 있을 때 제조방법 중에 다음과 같은 절차도 있다.
a) 레보캐리마이신을 분리순화함으로 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III을 얻는다.
b) 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III을 재결정하여 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III의 결정체 화합물을 얻는다.
c) a)를 통하여 만들어진 레보캐리마이신을 회전증발함으로 시안화메틸을 제거하여 1배량의 초산 에틸로 추출한다. 회전증발로 추출액 주의 초산 에틸을 제거하여 크림같은 제품을 얻는다. 석유 에테르로 제품을 재용하여 회전증발로 석유 에테르를 제거한 후에 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
d) b)에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III의 결정체 화합물과 c)에서 얻은 레보캐리마이신을 결합하여 얻은 것은 바로 이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III은 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
특히 a)중에서 말했던 분리순화는:
고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 최초 분리하여 얻은 레보캐리마이신을 순화시키는 것이다. ODS 크로마토그래피 컬럼을 이용하여 시안화 메틸과 아세트산 암모늄 완충액으로 순서대로 씻어 없앤다. 분리 과정에서 UV 스펙트럼을 기록하여 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III에 대한 목표 최고점을 채집한다.
크로마토그래피：ODS 크로마토그래피 컬럼；
유동 페이즈：시안화 메틸(A)，100mM아세트산 암모늄 용액(B)；
경사도 조건：직선 경사도를 선택하여 0~60분 때，A는25%～65%；61～90분 때，A는 65%～90%；
유동 속도：260 mL/min；
제품을 첨가하는 양：10mL；
제품을 첨가하는 농도：0.5g/mL；
점검 파장：231nm；
수집방식：자외선 촉발 수집；
L-이소발레르스피라마이신 I의 유지시간이 RT 44.759분 때 L-이소발레르스피라마이신 I 제품을 수집하거나 L-이소발레르스피라마이신 II의 유지시간이 RT 43.34분 때 L-이소발레르스피라마이신 II 제품을 수집하거나 L-이소발레르스피라마이신 III의 유지시간이 RT 48.009분 때 L-이소발레르스피라마이신 III 제품을 수집한다. 그 다음 회전증발함으로써 시안화메틸을 제거하여 1배량의 초산 에틸로 추출한다. 회전증발로 추출액 주의 초산 에틸을 제거하여 크림 같은 제품을 얻는다.석유 에테르로 제품을 재용하여 회전증발로 석유 에테르를 제거한 후에 얻은 흰색 가루고체가 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III이다.
또 그 중에
이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신의 결정체 화합물일 때, 그 결정체가 다음과 같은 재결정 방법으로 얻을 수 있다. 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 흰색 가루 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽하고 온도가 5℃～15℃로 내릴 때까지 계속 반죽하면 L-이소발레르스피라마이신의 결정체를 얻을 수 있다. 그 혼합용액 중에 초산 에틸, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 체적 비율은 1：0.1～10：0.5～1이고，바람직하게는 1：2～8：0.8～1이다.
그 중에 가장 우선 선발 기술 방안은 첨가하는 순수의 체격은 초산 에틸, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 2-9배이고 바람직하게는 2.5-7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 4~10ml이고 바람직하게는 분당 6~8ml이다.
두 번째 우선 선발 기술 방안은 혼합용액 중에 초산 에틸, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 체적 비율은1：0.1～10：0.5～1이고，바람직하게는 1：2～8：0.8～1이다.
세 번째 우선 선발 기술 방안은 순수를 첨가할 때 반죽하는 속도가 분당 30~60회이고 바람직하게는 분당 45~60회이며 순수를 첨가한 후에 반죽하는 속도가 분당 10~30회이고 바람직하게는 분당 10~20회이다.
네 번째 우선 선발 기술 방안은 순수가 첨가된 후에 온도를 내리게 하는 속도가 시간당 1~3℃이고 바람직하게는 1~1.5℃이다.
이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신의 결정체 화합물일 때, 그 결정체가 다음과 같은 재결정 방법으로 얻을 수 있다. 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 흰색 가루고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽하고 온도가 5℃～15℃에 내릴 때까지 계속 반죽하면 L-이소발레르스피라마이신의 결정체를 얻을 수 있다. 그 혼합용액 중에 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 체적 비율은1：0.1～10：0.5～1이고，바람직하게는 1：2～8：0.8～1이다.
그 중에 가장 우선 선발 기술 방안은 첨가하는 순수의 체격은 초산 에틸, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 2-9배이고 바람직하게는 2.5-7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 4~10ml이고 바람직하게는 분당 6~8ml이다.
두 번째 우선 선발 기술 방안은 혼합용액 중에 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 체적 비율은1：0.1～10：0.5～1이고，바람직하게는 1：2～8：0.8～1이다.
세 번째 우선 선발 기술 방안은 순수를 첨가할 때 반죽하는 속도가 분당 30~60회이고 바람직하게는 분당 45~60회이며 순수를 첨가한 후에 반죽하는 속도가 분당 10~30회이고 바람직하게는 분당 10~20회이다.
네 번째 우선 선발 기술 방안은 순수가 첨가된 후에 온도를 내리게 하는 속도가 시간당 1~3℃이고 바람직하게는 1~1.5℃이다.
이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신의 결정체 화합물일 때, 그 결정체가 다음과 같은 재결정 방법으로 얻을 수 있다. 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 IIII의 흰색 가루고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽하고 온도가 5℃～15℃에 내릴 때까지 계속 반죽하면 L-이소발레르스피라마이신의 결정체를 얻을 수 있다. 그 혼합용액 중에 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 체적 비율은 1：0.1～10：0.5～1이고，바람직하게는 1：2～8：0.8～1이다.
세 번째 우선 선발 기술 방안은 순수를 첨가할 때 반죽하는 속도가 분당 30~60회이고 바람직하게는 분당 45~60회이며 순수를 첨가한 후에 반죽하는 속도가 분당 10~30회이고 바람직하게는 분당 10~20회이다.
네 번째 우선 선발 기술 방안은 순수가 첨가된 후에 온도를 내리게 하는 속도가 시간당 1~3℃이고 바람직하게는 1~1.5℃이다.
본 발명은 레보캐리마이신이나 레보캐리마이신 약학 조성물이 감염성 질병을 치료하는 약물 제조에의 용도도 제공한다.
감염성 질병은 그램 양성의 박테리아, 황색포도상구균, 폐렴연쇄구균, 폐렴마이코플라스마, 폐렴클라미디아, 유레아플라즈마균, 트라코마 클라미디아, 화농성 연쇄구균, 카타르성 구균, 임균, 바실루스 인플루엔자, 레지오넬라 뉴모필라와 혐기성 생물 감염으로 인한 질병이다.
더 나아가 본 발명은 레보캐리마이신이나 레보캐리마이신 약학 조성물이 항균 약물 제조에의 응용도 제공한다. 균 중은 폐렴연쇄구균, 범주A 연쇄구균, 화농성 연쇄구균, 장구균, 황색포도상구균, 표피포도구균, 카타르성 구균, 임균, 바실루스 인플루엔자, 장구균, 대장균, 독소원성대장균, 장병원성 대장균, 녹농균, 폐렴간균, 낭창 프로테우스, 장티푸스균, 아시네토박터, 구연산간균, 적변세균, 존네이질균, 시켈라이질균, 칸디다 알비칸스;L.p, L.g, L.b, L.d, L.j, L.m 같은 레지오넬라 뉴모필라; 비.디스타소니스(B.distasonis), 비.루미니콜라(B.ruminicola), 비.프레보텔라 아사카롤리티에(B.prevotella asaccharolytiaes), 비. 프레보테라프랄리스(B.prevotellapralis), F.n, 푸소박테륨, 비피도박테륨, 젖산균, 펩토스트렙토콕쿠스, 프로피온산균, 클로스트리듐 페르프린젠스, 효모유사균 같은 혐기성 생물이다.
본 영역의 전문가들이 알다시피 치료용 활성 성분의 함량은 여러 가지 요소에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어 질병의 성질, 환자의 연령이나 병세 등. 마지막으로 그 사용량은 주치의가 결정하는 것이다. 본 발명의 레보캐리마이신 약학 조성물은 단위별로 레보캐리마이신의 용량은 10~1500mg이고 바람직하게는100~1000mg, 좀 더 바람직하게는 200~500mg이다. 매일 섭취량은 단일 제량이나 분제량 형식으로 주면 된다.
체외 시험 결과에 따르면 본 발명이 제공하는 레보캐리마이신과 그의 약학 조성물 중에의 활성성분이 광학활성이 있어서 좋은 항감염 효과가 있다. 그램 양성의 박테리아, 특히 베타-락탐이나 에리트로마이신에 내성있는 황색포도상구균, 폐렴연쇄구균, 화농성 연쇄구균에 대해 좋은 항균활성이 있을 뿐만 아니라 카타르성 구균, 임균, 바실루스 인플루엔자 같은 일부 음성균, 일부레지오넬라 뉴모필라와 혐기성 생물에도 효과가 있다. 특히 폐렴마이코플라스마와 폐렴클라미디아에 대한 활성이 뚜렷하다.
현재 기술에 비하여 본 발명은 다음과 같은 장점이 있다.
1) 본 발명의 레보캐리마이신은 선광성을 가지고 있다. 현대 약리학 연구에 따르면 약품 거울상체의 입체 선택성이 다르기 때문에 그와 수용가의 친화력이 달라짐으로 약리작용에도 큰 차이가 나타났다. 본 발명은 체내 약효와 체외 약효를 통하여 레보캐리마이신이 효과가 좋고 약리활성이 강하다는 것을 입증한다. 그러므로 감염성 질병의 치료에 대해 새로운 약물을 제공하고 캐리마이신의 키랄 약물 제제를 개발하는 데에 기초를 다진다. 체내 약효 결과에 따르면 이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III은 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신은 시험용 쥐가 12주균 감염을 치료할 때 더 좋은 보호작용이 나타났다.
2) 본 발명 중에 배양과 발효 조건의 조정과 최적화함으로써, 특히 pH 규제로 발효과정 중의 pH 수치를 엄격하게 통제함으로써 발효과정주의 pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세가지 지속적인 단계의 형태로 나타나고 단계마다 일정한 방정식을 만족한다. 이를 통하여 광학활성을 가진 레보캐리마이신을 만든다.
3) 본 발명이 제공하는 레보캐리마이신 제조방법은 생산 공정이 간단하고 대규모 공업적인 생산에 적용할 수 있다.
도 1 : 본 발명을 실시하는 예1 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도
도 2 : 본 발명을 실시하는 예2 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도
도 3 : 본 발명을 실시하는 예3 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도
도 4 : 캐리마이신 샘플의 액체 크로마토그래피, 그 중
1 - 레보캐리마이신Ⅲ
2 - 아세틸스피라마이신 II
3 - 아세틸스피라마이신 III
4 - 프로피오닐스피라마이신 II
5 - 프로피오닐스피라마이신 III
6 - (이소)부티르스피라마이신 II
7 - 이소발레르스피라마이신 I
8 - (이소)부티르스피라마이신 III
9 - 이소발레르스피라마이신 II
10 - 이소발레르스피라마이신 III
도 5 : 본 발명을 실시하는 예 4에서 제공하는 레보캐리마이신 샘플의 액체 크로마토그래피
도 6 : 본 발명의 L-이소발레르스피라마이신 I 결정체 화합물의 X-방사선 파우더 회전선
도 7 : 본 발명의 L-이소발레르스피라마이신 II 결정체 화합물의 X-방사선 파우더 회전선
도 8 : 본 발명의 L-이소발레르스피라마이신 III 결정체 화합물의 X-방사선 파우더 회전선
다음은 본 발명을 구체적으로 실시하는 방안이다. 본 발명을 제한하기 위해 하는 것이 아니라 발명을 더 깊게 설명하기 위하여 하는 것이다.
[실시예1] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 사면 한천에 배양한 후 시드 배양기에 접종하여 배양한다. 그 후에 발효배양기에 접종하고 포도당과 암모니아수로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~9.0의 환경에서 120시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.1364x1+6.0 (0＜x1≤22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=-0.0735x2+10.64 (22≤x2≤56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56≤x3≤120)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도는 도 1과 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2)추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 PH 9.0의 환경에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.5의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 4.5 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.5의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 제품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 2] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 사면 한천에 배양한 후 시드 배양기에 접종하여 배양한다. 그 후에 발효배양기에 접종하고 포도당과 수산화나트륨으로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~8.0의 환경에서 110시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.0909x1+6.4 (0＜x1＜22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식y2=-0.0441x2+7.8 (22＜x2＜56)를 만족하고 셋 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56≤x3≤110)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도는 도 2과 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2) 추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.9의 환경에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.2의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 4.2 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.6의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 3] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 사면 한천에 배양한 후 시드 배양기에 접종하여 배양한다. 그 후에 발효배양기에 접종하고 포도당과 구연산으로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~7.5의 환경에서 115시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.0682x1+6.0 (0＜x1＜22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=-0.0294x2+8.147 (22＜x2＜56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56＜x3＜115)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도는 도 3과 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2)추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.6의 환경에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.3의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 5.2 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물 같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.7의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 4] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 콩분말 2%, 포도당 1%, 전분 3%, CaCO3 0.5%, NaCl 0.4% 그리고 한천 2%를 가진 사면 한천에 28℃밑에서 15일 동안 배양한 후 콩분말 1.5%, 전분3.0%, NaCl 0.4%, CaCO3 0.5%, 펩톤 0.3% 그리고 KH2PO4 0.05%가 있는 시드 배양기에 접종하여 25℃ 하에서 80시간을 거쳐 배양한다. 그 후에 0.1%의 접종량으로 포도당 0.5%, 전분 6.0%, 효마가루 0.5%, 어분 2.0%, NH4NO3 0.6%, NaCl 1.0%, CaCO3 0.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.1%, 콩기름 0.5% 그리고 소포제 0.02%가 있는 발효배양기에 접종하고 포도당과 암모니아수로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~9.0의 환경 하에서 120시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식y1=0.1364x1+6.0 (0＜x1≤22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=-0.0735x2+10.64 (22≤x2≤56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56≤x3≤120)를 만족한다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2) 추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.5의 환경 하에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.0의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 4.5 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.5의 환경에서 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 5] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 콩분말 2%, 포도당 1%, 전분 3%, CaCO3 0.5%, NaCl 0.4% 그리고 한천 2%를 가진 사면 한천에 38℃ 하에서 8일 동안 배양한 후 콩분말 1.5%, 전분3.0%, NaCl 0.4%, CaCO3 0.5%, 펩톤 0.3% 그리고 KH2PO4 0.05%가 있는 시드 배양기에 접종하여 30℃ 하에서 40시간을 거쳐 배양한다. 그 후에 20%의 접종량으로 포도당 0.5%, 전분 6.0%, 효마가루 0.5%, 어분 2.0%, NH4NO3 0.6%, NaCl 1.0%, CaCO3 0.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.1%, 콩기름 0.5% 그리고 소포제 0.02%가 있는 발효배양기에 접종하고 포도당과 암모니아수로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~7.5이고 온도가 30℃의 환경 하에서 115시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.0682x1+6.0 (0＜x1＜22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식y2=-0.0294x2+8.147 (22＜x2＜56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56＜x3＜115)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도가 도 3과 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2) 추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 9.0의 환경 하에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.5의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 4.5~5.5 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 9.0의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 6] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 콩분말 2%, 포도당 1%, 전분 3%, CaCO3 0.5%, NaCl 0.4% 그리고 한천 2%를 가진 사면 한천에 30℃에서 12일 동안 배양한 후 콩분말 1.5%, 전분3.0%, NaCl 0.4%, CaCO3 0.5%, 펩톤 0.3% 그리고 KH2PO4 0.05%가 있는 시드 배양기에 접종하여 28℃에서 60시간을 거쳐 배양한다. 그 후에 10%의 접종량으로 포도당 0.5%, 전분 6.0%, 효마가루 0.5%, 어분 2.0%, NH4NO3 0.6%, NaCl 1.0%, CaCO3 0.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.1%, 콩기름 0.5% 그리고 소포제 0.02%가 있는 발효배양기에 접종하고 포도당과 암모니아수로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~7.5이고 온도가 28℃의 환경에서 90시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.0682x1+6.0 (0＜x1＜22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=-0.0294x2+8.147 (22＜x2＜56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56＜x3＜90)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도는 도 3과 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2) 추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.7의 환경에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.2의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다.그 다음 pH 5.0 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.7의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 7] 레보캐리마이신의 제조
1) 배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 콩분말 2%, 포도당 1%, 전분 3%, CaCO3 0.5%, NaCl 0.4% 그리고 한천 2%를 가진 사면 한천에 35℃에서 10일 동안 배양한 후 콩분말 1.5%, 전분3.0%, NaCl 0.4%, CaCO3 0.5%, 펩톤 0.3% 그리고 KH2PO4 0.05%가 있는 시드 배양기에 접종하여 26℃에서 55시간을 거쳐 배양한다. 그 후에 15%의 접종량으로 포도당 0.5%, 전분 6.0%, 효마가루 0.5%, 어분 2.0%, NH4NO3 0.6%, NaCl 1.0%, CaCO3 0.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.1%, 콩기름 0.5% 그리고 소포제 0.02%가 있는 발효배양기에 접종하고 포도당과 암모니아수로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~7.5이고 온도가 27℃의 환경에서 115시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.0682x1+6.0 (0＜x1＜22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=-0.0294x2+8.147 (22＜x2＜56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56＜x3＜110)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도가 도 3과 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2) 추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.6의 환경에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.3의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다.그 다음 pH 4.8 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.8의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 8] 레보캐리마이신의 제조
1)배양 발효
4-이소아밀기 아실기전이효소유전자를 가진 스피라마이신의 복제 균주 WSJ-195이 콩분말 2%, 포도당 1%, 전분 3%, CaCO3 0.5%, NaCl 0.4% 그리고 한천 2%를 가진 사면 한천에 36℃밑에서 13날 동안 배양한 후 콩분말 1.5%, 전분 3.0%, NaCl 0.4%, CaCO3 0.5%, 펩톤 0.3% 그리고 KH2PO4 0.05%가 있는 시드 배양기에 접종하여 27℃에서 75시간을 거쳐 배양한다. 그 후에 0.5%의 접종량으로 포도당 0.5%, 전분 6.0%, 효마가루 0.5%, 어분 2.0%, NH4NO3 0.6%, NaCl 1.0%, CaCO3 0.5%, KH2PO4 0.05%, MgSO4 0.1%, 콩기름 0.5% 그리고 소포제 0.02%가 있는 발효배양기에 접종하고 포도당과 암모니아수로 발효과정을 통제한다. pH 수치가 6.0~8.0이고 온도가 29℃의 환경에서 98시간을 거쳐 발효를 진행한다. pH 수치가 시간에 따라 변화하는 곡선이 세 가지 지속적인 단계의 형태가 나타난다. 첫 번째 단계는 방정식 y1=0.0909x1+6.4 (0＜x1＜22)를 만족하고 두 번째 단계는 방정식 y2=-0.0441x2+7.8 (22＜x2＜56)를 만족하고 세 번째 단계는 방정식 y3=0.0078x3+6.06 (56≤x3≤110)를 만족한다. 발효과정에서 시간에 따른 pH 수치의 변화 곡선도가 도 2와 같다. 최종적으로 발효액을 얻는다.
2) 추출
발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 얻은 여과액을 pH 8.9의 환경에서 아세트산부틸로 추출한다. 얻은 추출액은 염수와 1% NaH2PO4로 헹구어 pH 2.4의 수로 추출한 후에 수양추출액을 얻는다. 그 다음 pH 4.6 환경에서 아세트산부틸을 휘발시키고 물같은 추출물을 얻는다. 이 추출물을 여과하여 여과액을 pH 8.6의 환경에 침전시킨다. 정제수로 침전물을 씻어 얻은 습품을 건조하여 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다.
[실시예 9] 레보캐리마이신의 HPLC 정량 측정 방법
액체 크로마토그래피법(중국 약전 2005년 2판 부룩V D)에 의하여 측정
Venusil XBP C18(L)150Å（200mm×4.6mm，5um）크로마토그래피 컬럼（AGELA TECHNOLOGIES）을 이용하여 유동 페이즈 A는 시안화 메틸，B는 0.01 mol·L-1의 아세트산 암모늄 용액이다(암모니아수로 pH 수치를 7.0로 조절함). 다음 도면에 따라 순서대로 씻어 없앤다. 점검 파장이 232nm이고 유동 속도가 분당 1.0 mL이고 컬럼 온도가 25℃이고 제품을 첨가하는 양은 20㎕이다.
Figure 112012107314159-pct00003
크로마토그래피 조건과 시스템 적용성 시험때 캐리마이신 샘플의 액체 크로마토그래피(도 4)에 의거하여 크로마토그래피 조건을 조절할 수 있다. 필요할 때 유동 페이즈를 씻어 없애는 조건을 바꿔서 시험하는 캐리마이신 구성요소의 컬럼을 샘플(도 4)과 일치하게 만든다.
샘플 용액 : 일정한 샘플을 가지고 0.01mol/L의 아세트산 암모늄 용액(암모니아수로 pH 수치를 7.0로 조절함)- 시안화 메틸(65:35)의 혼합역으로 샘플을 희석하여 0.4mg/ml-0.6mg/ml의 샘플 용액을 만든다.셰이크하고 예비용으로 준비한다.
시험용 용액 : 50mg 샘플을 가지고 0.01mol/L의 아세트산 암모늄 용액(암모니아수로 pH 수치를 7.0로 조절함)- 시안화 메틸(65:35)의 혼합역으로 샘플을 희석하여 50ml의 시험용 용액을 만든다. 셰이크하고 예비용으로 준비한다.
외부표준법에 의하여 이소발레르스피라마이신 III 최고점 면적을 계산한다. 이소발레르스피라마이신 III은 30%에 비해 적으면 안 되고 이소발레르스피라마이신(I+II+III)의 양은 60%에 비해 적으면 안된다. 9가지 스피라마이신 구성요소의 충함량은 80%에 비해 적으면 안 되며 스피라마이신 III의 양은 1.0%를 초과하면 안 되고 남은 미지 성분의 총함랴은 5.0%를 초과하면 안된다. 계산하는 공식이 다음과 같다.
이소발레르스피라마이신Ⅲ%=A이소발레르 Ⅲ×WS×P /(AS×WT)×100%
이소발레르스피라마이신（Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ）%=（A이소발레르 Ⅰ+A이소발레르 Ⅱ+A이소발레르 Ⅲ）×WS×P/(AS×WT)×100%
아실스피라마이신의 총 함량 %=（A아세틸Ⅱ+A아세틸Ⅲ+A프로피오닐Ⅱ+A프로피오닐Ⅲ+A이소부티르Ⅱ+A이소발레르Ⅰ+A이소부티르Ⅲ+A이소발레르Ⅱ+A이소발레르Ⅲ）×WS×P/(AS×WT)×100%
아실스피라마이신Ⅲ%=A스피라마이신Ⅲ×WS×P /(AS×WT)×100%
미지 성분%=AW×WS×P /(AS×WT)×100%
공식 중에：WS - 샘플 중량，g；AS - 샘플 중에 이소발레르스피라마이신Ⅲ의 최고점 면적； WT - 시험용 용품의 중량，g； AW - 시험용 용품중에 미지 성분의 최고점 총 면적； P - 샘플 중에 이소발레르스피라마이신Ⅲ의 순도.
[실시예 10] 레보캐리마이신의 HPLC 정량 측정 방법
실시예 4에서 제공하는 레보캐리마이신 추출과정과 실시예 9에서 제공하는 HPLC 정량 측정 방법으로 8차 발효액을 추출하여 얻은 제품의 각 구성요소의 HPLC 정량 측정 결과가 표 1과 같다. 액체 크로마토그래피는 도 5와 같다.
표 1: 8차 레보캐리마이신 제품 각 구성요소의 HPLC 정량 측정 결과
Figure 112012107314159-pct00004
본 발명 중의 다른 실시예로 만들어진 레보캐리마이신도 이와 같은 측정을 실시하여 얻은 액체 크로마토그래피는 도 5와 같다.
[실시예 11] 레보캐리마이신의 고유 광회전도의 측정
실시예에서 얻은 레보캐리마이신을 정밀하게 측정한 후 클로로포름으로 용해하고 1ml 마나 약 20mg 함량이 있는 용액으로 희석한다. 납 스펙트럼 D선(589.3nm)으로 선광도를 측정한다. 측정 길이는 1dm이고 온도는 25℃이다. 사용하는 선광기가 이미 검정해 놓고 수치가 0.0001°까지 정확하게 읽을 수 있어야 한다.
표 2 : 고유 광회전도 측정결과
Figure 112012107314159-pct00005
[실시예 12] 레보캐리마이신 정제（10000알로 계산함）
서방： 실시예 4에서 얻은 레보캐리마이신 1000g
L-HPC（5%） 92.5g
카복시메탈스타치나트륨(CMS-Na)（3%） 55.5g
스테아린산마그네슘（1%） 18.5g
전분 총 중량-다른 원료과 보조재료
총 중량 1850g
제조과정 : 적당한 전분을 농도 15%로 희석한 후에 크림처럼 될 때까지 가열하여 접착제를 만든다. 주 재료 캐리마이신, 보조 재료 전분, L-HPC, 카복시메탈스타치나트륨, 스테아린산마그네슘을 따로따로 눈이 100개인 체로 칩니다. 서방에 따라 적당량의 주재료와 보조재료를 가지고 캐리마이신과 전분, L-HPC를 완전히 섞은 후 아까 말했던 전분 크림에 놓고 연제를 만든다. 눈이 14개인 체로 치고 알을 만든다. 50℃~60℃ 온도에서 건조하여 수분은 3~5%내에 통제해야 한다. 그 다음 다시 눈이 14개인 체로 침으로써 알을 정리하고 카복시메탈스타치나트륨과 스테아린산마그네슘을 섞는다. 마지막으로 알의 함량에 따라 중량을 계산하여 정제로 만든다. 정제 중량 차이를 검정하여 합격한 후 포장하면 된다.
[실시예 13] 레보캐리마이신 캡슐（10000알로 계산함）
서방：실시예4에서 얻은 레보캐리마이신 1000g
전분（약용） 1080-캐리마이신의 중량
약용3호 캡슐 1000알
액체 파라핀 50ml
제조 과정 : 서방에 따라 주재료 캐리마이신과 보조재료 약용 전분을 혼합기에 넣고 1.5-2시간을 거쳐 충분히 혼합한다. 표본을 추출하여 측정하는 수치가 이론수치와 일치 여부를 확인한다(캡슐마다 포함량 약 0.105g). 자동 캡슐기기 요구에 따라 검증합격한 3호 캡슐과 포장을 기다리고 있는 원료를 따로따로 충전기에 넣어 충전한다. 충전된 캡슐을 검증하여（±10%이내，＜0.3g）합격한 캡슐을 풀리싱 머시인에 넣고 액체 파라핀을 첨가하여 15~20분의 풀리싱 과정 후 완성품을 꺼내면 된다. 완성품을 검증한 후에 포장하면 된다.
[실시예 14] 레보캐리마이신 당의정（10000알로 계산함)
서방 ： 실시예 12와 같다.
제조 과정 : 실시예 12의 방법에 따라 검증합격한 재료를 당의솥에 넣고 만들어진 당액(농도65-70%)을 천천히 솥에 넣습니다. 그 다음 온도를 40℃ 안팎으로 높게 하고 적당한 탤컴파우더를 넣은 후 송풍하면서 건조시킨다. 25~30분 정도 여러번을 거쳐 가루층을 입힌 후 15~20분 정도 당의층을 입히는 거쳐야 한다. 마지막으로 필요한 색깔을 입히는 과정이다. 만들어진 색풀을 당액에 넣어 반죽한 후에 솥에 넣는다. 한 번에 약 15~20분을 거치고 골고루 반죽해야 한다.
[실시예 15] 레보캐리마이신 드라이 시럽（10000팩으로 계산함）
서방：실시예 4에서 얻은 레보캐리마이신 1250g
구연산（0.5%） 15g
사카로즈 총 중량-다른 원료과 보조재료
총 중량 약 500g
색소(쿠르쿠민) 약 1g
제조 과정 : 캐리마이신, 구연산, 사카로즈를 따로따로 고속 제트 분쇄기로 알갱이를 만든다. 그 중에 85%는 눈이 300개인 체로 치고 나머지 15%는 눈이 180개인 체로 친다. 서방에 따라 만들어진 가루를 1~1.5시간 동안 충분히 반죽한 후에 함량을 측정한다. 팩당 함량을 계산하고(이론적인 팩당 함량500mg) 혼합물을 기기에 넣고 알루미늄박지도 잘 넣은 후 요구에 따라 분장한다. 팩당 함량 차이가 ±5%내에 통제해야 하고 검증 합격 후 포장하면 된다.
[실시예 16] 레보캐리마이신 장용정（10000알로 계산함）
서방 ：실시예 12와 같다.
제조 과정 : 실시예 12의 방법에 따라 당의솥에 넣고 농도 60%~70%의 당액과 탤컴 파우더로 3층을 입힌 후 격리층도 입혀야 한다. 10%의 제인 알코올 용액을 넣고 롤링법으로 10~15분 정도의 건조를 거친다. 그 다음 솥에서 프탈산 디에틸 아세톤, 셀룰로오스 아세트산염 프탈레이트와 알코올 용액으로 만들어진 장용액을 넣고 룰링법으로 2~3번씩 10~15분 정도의 건조를 거친다. 검증 합격 후 실시예 7처럼 당의 입힌 과정을 진행하면 된다.
[실시예 17] 레보캐리마이신 위용정（10000알로 계산함）
서방 ：실시예 12와 같다.
제조 과정 : 실시예 12의 방법에 따라 원재료를 제조하여 코팅기기에 넣는다. 표준에 맞는 코팅 파우더(지용성, 수용성)를 요구에 따라 코팅액으로 만든 후에 그 중에 콜로이드 밀가루를 넣어 여과하고 예비용으로 준비한다. 그 다음 준비했던 솥을 가열하여 회전속도를 분당 5~10회로 온도를 45~60℃로 통제한다. 에어로졸 노즐(눈이 300개 이상)로 코팅액을 솥에 뿜은 후 25~35분 정도의 건조를 거칩니다. 골고루 코팅하도록 8~12회 반복한다. 마르고 검증 합격 후 포장하면 된다.
[실시예 18] 레보캐리마이신 과립형（10000팩으로 계산함）
서방 ：실시예 5에서 얻은 레보캐리마이신 1250g
정제 설탕 20000g
덱스트린 9000g
5% PVP-K30 적당량
제조 과정 : 먼저 캐리마이신, 정제 설탕과 덱스트린을 눈이 120개인 체로 쳐야 한다. 서방에 따라 측정한 캐리마이신, 정제 설탕과 덱스트린을 골고루 혼합하여 5%PVP-K30 점액을 이용하여 연재를 만든다. 진동 과립기로 과립을 만들고 70℃의 온도에 건조시킨다. 과립을 정리하여 검증 합격한 후에 포장하면 된다.
[실시예 19] 레보캐리마이신 동결건조 주사용 분말
실시예 6에서 만들어진 레보캐리마이신 원료 500mg를 측정하여 몰 량이 같은 아디프산과 혼합하여 5ml의 정제수에 용해하여 담천황색 투명액체를 얻을 수 있다. 그 pH 수치는 4.6~5.6이다. 그 다음 동결 건조 프롭프엔트로 40mg의 마니톨을 넣고 저온에 신속하게 냉동하여 9시간을 거쳐 담천황색 푸석한 덩어리를 얻을 수 있다. 사용 전에 10ml의 무균수로 용해하면 된다.
[실시예 20] 레보캐리마이신 동결건조 주사용 분말
실시예 4에서 만들어진 레보캐리마이신 원료 500mg를 측정하여 몰 량이 같은 구연산과 혼합하여 5ml의 정제수에 용해하여 담천황색 투명액체를 얻을 수 있다. 그 pH 수치는 4.6~5.6이다.그 다음 동결 건조 프롭프엔트로 40mg의 마니톨을 넣고 저온에 신속적으로 냉동하여 9시간을 거쳐 담천황색 푸석한 덩어리를 얻을 수 있다. 사용 전에 10ml의 무균수로 용해하면 된다.
[실시예 21] 레보캐리마이신 동결건조 주사용 분말
실시예 5에서 만들어진 레보캐리마이신 원료 500mg를 측정하여 몰 량이 같은 말레산과 혼합하여 5ml의 정제수에 용해하여 담천황색 투명액체를 얻을 수 있다. 그 pH 수치는 4.6~5.6이다. 그 다음 동결 건조 프롭프엔트로 40mg의 마니톨을 넣고 저온에 신속적으로 냉동하여 9시간을 거쳐 담천황색 푸석한 덩어리를 얻을 수 있다. 사용 전에 10ml의 무균수로 용해하면 된다.
[실시예 22] 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
실시예 1에서 얻은 레보캐리마이신을 분리 순화시킵니다.
L-이소발레르스피라마이신 I의 분리순화는 : 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 최초 분리하여 얻은 레보캐리마이신을 순화시키는 것이다. ODS크로마토그래피 컬럼을 이용하여 시안화 메틸과 아세트산 암모늄 완충액으로 순서대로 씻어 없앤다. 분리 과정에서 UV 스펙트럼을 기록하여 L-이소발레르스피라마이신 I에 대한 목표 최고점을 채집한다.
크로마토그래피：ODS크로마토그래피 컬럼；
유동 페이즈：시안화 메틸(A)，100mM아세트산 암모늄 용액(B)；
경사도 조건：직선 경사도를 선택하여 0~60분 때，A는25%～65%；61～90분 때，A는65%～90%；
유동 속도：260 mL/min；
제품을 첨가하는 양：10mL；
제품을 첨가하는 농도：0.5g/mL；
점검 파장：231nm；
수집방식：자외선 촉발 수집；
L-이소발레르스피라마이신 I의 유지시간이 RT 44.759분일 때 L-이소발레르스피라마이신 I 제품을 수집한다. 그 다음 회전증발함으로 시안화메틸을 제거하여 1배량의 초산 에틸로 추출한다. 회전증발로 추출액 중의 초산 에틸을 제거하여 크림같은 제품을 얻는다. 석유 에테르로 제품을 재용하여 회전증발로 석유 에테르를 제거한 후에 얻은 흰색 가루고체가 L-이소발레르스피라마이신 I이다.
결정체를 만들기 위하여 얻은 L-이소발레르스피라마이신 가루고체를 재결정해야 한다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 1에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 화합물 고체를 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:10:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 2.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 4ml이고 반죽하는 속도가 분당 30회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 1℃씩 온도를 5℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 10회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 X-방사선 파우더가 회전하는 2θ 수치에 7.6°, 8.0°, 10.0°, 11.4°, 16.4°, 17.0°, 17.5°, 17.9°, 19.5°, 22.7°, 23.7°, 24.4°때 특징 최고점이 나타났다. 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 6과 같다.
분리 순화 후 얻은 레보캐리마이신을 회전증발함으로 시안화메틸을 제거하여 1배량의 초산 에틸로 추출한다. 회전증발로 추출액 주의 초산 에틸을 제거하여 크림같은 제품을 얻는다. 석유 에테르로 제품을 재용하여 회전증발로 석유 에테르를 제거한 후에 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다. 이 레보캐리마이신은 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물과 결합하면 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신을 얻을 수 있다.
[실시예 23] 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 22와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 1에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 화합물 고체를 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:10:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 9배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 10ml이고 반죽하는 속도가 분당 60회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 3℃씩 온도를 15℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 10회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 6과 같다.
[실시예 24] 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 22와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 1에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 화합물 고체를 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:5:0.8이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 6ml이고 반죽하는 속도가 분당 40회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 2℃씩 온도를 10℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 15회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 6과 같다.
[실시예 25] 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차는 실시예 22와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 1에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 화합물 고체를 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:2:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 8ml이고 반죽하는 속도가 분당 45회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 2.5℃씩 온도를 12℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 20회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 6과 같다.
[실시예 26] 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 22와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 1에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 화합물 고체를 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:5:0.8이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 7ml이고 반죽하는 속도가 분당 60회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 1.2℃씩 온도를 12℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 15회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 6과 같다.
[실시예 27] 이소발레르스피라마이신 II는 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
실시예 2에서 얻은 레보캐리마이신을 분리 순화시킨다. 구체적인 절차가 실시예 22와 같다. 다른 것은 L-이소발레르스피라마이신 II의 유지시간이 RT 43.34분일 때 L-이소발레르스피라마이신 II 제품을 수집한다.
결정체를 만들기 위하여 얻은 L-이소발레르스피라마이신 가루고체를 재결정해야 한다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 2에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올,무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:10:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 2.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 4ml이고 반죽하는 속도가 분당 30회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 1℃씩 온도를5℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 10회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 X-방사선 파우더가 회전하는 2θ 수치에 10.0°, 11.6°, 16.4°, 17.3°, 19.1°, 21.2°, 22.1°, 22.7°, 26.4°, 26.9°, 27.5°및 31.5°일 때 특징 최고점이 나타났다. 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 7과 같다.
분리 순화 후 얻은 레보캐리마이신을 회전증발함으로써 시안화메틸을 제거하여 1배량의 초산 에틸로 추출한다. 회전증발로 추출액 중의 초산 에틸을 제거하여 크림같은 제품을 얻는다.석유 에테르로 제품을 재용하여 회전증발로 석유 에테르를 제거한 후에 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다. 이 레보캐리마이신은 얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물과 결합하면 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신을 얻을 수 있다.
[실시예 28] 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 27와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 화합물 고체를 무수 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:10:0.8이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 9배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 10ml이고 반죽하는 속도가 분당 60회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 3℃씩 온도를 15℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 10회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 7과 같다.
[실시예 29] 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 27와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:5:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 6ml이고 반죽하는 속도가 분당 40회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 2℃씩 온도를 10℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 15회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 7과 같다.
[실시예 30] 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 27와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:3:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 8ml이고 반죽하는 속도가 분당 45회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 2.5℃씩 온도를 12℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 20회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 7과 같다.
[실시예 31] 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 27와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:6:0.8이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 7ml이고 반죽하는 속도가 분당 60회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 1.2℃씩 온도를 12℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 15회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 7과 같다.
[실시예 32] 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
실시예 3에서 얻은 레보캐리마이신을 분리 순화시킵니다. 구체적인 절차가 실시예 22와 같다. 다른 것은 L-이소발레르스피라마이신 III의 유지시간이RT 48.009분 때 L-이소발레르스피라마이신 III 제품을 수집한다.
결정체를 만들기 위하여 얻은L-이소발레르스피라마이신 가루고체를 재결정해야 한다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 실시예 3에서 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:10:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 2.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 4ml이고 반죽하는 속도가 분당 30회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 1℃씩 온도를 5℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 10회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 X-방사선 파우더가 회전하는 수치에 8.0°, 10.0°, 11.2°, 11.7°, 16.4°, 19.1°, 19.6°, 20.0°, 21.4°, 22.9°, 23.6°과 29.4°일 때 특징 최고점이 나타났다. 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 8과 같다.
분리 순화 후 얻은 레보캐리마이신을 회전증발함으로 시안화메틸을 제거하여 1배량의 초산 에틸로 추출한다.회전증발로 추출액 주의 초산 에틸을 제거하여 크림같은 제품을 얻는다. 석유 에테르로 제품을 재용하여 회전증발로 석유 에테르를 제거한 후에 얻은 것은 바로 레보캐리마이신이다. 이 레보캐리마이신은 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물과 결합하면 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신을 얻을 수 있다.
[실시예 33] 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 32와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:10:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 9배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 10ml이고 반죽하는 속도가 분당 60회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 3℃씩 온도를 15℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 10회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 8과 같다.
[실시예 34] 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 32와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:5:0.8이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 6ml이고 반죽하는 속도가 분당 40회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 2℃씩 온도를10℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 15회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 8과 같다.
[실시예 35] 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 32와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:2:1이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 7.5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 8ml이고 반죽하는 속도가 분당 45회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 2.5℃씩 온도를12℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 20회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 8과 같다.
[실시예 36] 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신 제조
재결정 방법 외에 다른 절차가 실시예 32와 같다. 재결정 방법은 다음과 같다.
(1) 먼저 얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 화합물 고체를 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 혼합용액에서 용해한다. 혼합용액에서 무수의 메틸알코올, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 비율은 1:5:0.8이다.
(2) 그 다음 순수를 첨가하면서 반죽한다. 첨가하는 순수의 체격은 초산에테르, 무수의 에탄올과 무수의 아세톤의 총 체격의 5배이다. 순수를 첨가하는 속도가 분당 7ml이고 반죽하는 속도가 분당 60회이다.
(3) 순수를 첨가한 후 한 시간 1.2℃씩 온도를12℃에 내리게 하고 그 동시에 계속해서 반죽한다. 반죽하는 속도가 분당 15회이다. 마지막으로 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물이다.
얻은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물을 Cu-Kα방사선으로 측정하면 그 X-방사선 파우더 회절 무늬는 도 8과 같다.
[실시예 37] L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체을 포함하는 레보캐리마이신 정제
서방과 제조 과정은 실시예 12와 같다. 다른 것은 레보캐리마이신 원료는 실시예 22에 얻은 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
[실시예 38] L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체을 포함하는 레보캐리마이신 정제
서방과 제조 과정은 실시예 12과 같다.다른 것은 레보캐리마이신 원료는 실시예 27에 얻은 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
[실시예 39] L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체을 포함하는 레보캐리마이신 정제
서방과 제조 과정은 실시예 12와 같다. 다른 것은 레보캐리마이신 원료는 실시예 32에서 얻은 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
[실시예 40] L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체을 포함하는 레보캐리마이신 캡슐
서방과 제조 과정은 실시예 13과 같다. 다른 것은 레보캐리마이신 원료는 실시예 23에 얻은 이소발레르스피라마이신 I은 L-이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
[실시예 41] L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체을 포함하는 레보캐리마이신 캡슐
서방과 제조 과정은 실시예 13과 같다. 다른 것은 레보캐리마이신 원료는 실시예 28에서 얻은 이소발레르스피라마이신 II은 L-이소발레르스피라마이신 II의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
[실시예 42] L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체을 포함하는 레보캐리마이신 캡슐
서방과 제조 과정은 실시예 13과 같다. 다른 것은 레보캐리마이신 원료는 실시예 33에서 얻은 이소발레르스피라마이신 III은 L-이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신이다.
이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III은 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신의 다른 제제가 필요한 보조재료와 제조방법은 앞에 있는 것과 같다.
[시험예 1] 체내 약효
시험방법 : 감염 균액 제조:-80℃ 냉장고에 보존했던 시험균을 꺼내고 1시간 동안 실온에서 넣는다. 폐렴연쇄구균, 화농성 연쇄구균과 장구균 0.1ml씩을 따로따로 2ml MH탕에서 접종한다. (10%비활성화 혈청첨가) 0.1ml황색포도상구균 균액도 이와 같은 방법으로 2ml MH탕에서 접종한다. 37℃의 인큐베이터에서 18시간 동안 배양한 후에 원균액을 얻는다. 5% 위무친으로 원균액을 희석하고 동물로 하여금 100%감염하는 치명균수가 감염균액이 된다.
레보캐리마이신의 임상용법은 구복하기로 하고 따라서 시험할 때 위관영양법으로 약을 복용시킵니다. 시험용 쥐의 복강에서 0.5ml 치명균을 주사한 후에 활동감소, 조용히 누움, 털이 늘썽하는 증세가 나타난다. 감염후 0.5~6시간에 시험용 쥐 한마리씩에 0.2ml를 주사하여 아무 부작용이 없습니다. 7일 후 사망수를 관찰하여 Bliss프로그램으로 약품에 따라 쥐가 감염된 후에 반수의 보호제량（ED50）을 계산하고 비교한다.
체내 약효의 시험결과는 표 3 및 표 4와 같다.
표 3: 4가지 항생제가 시험용쥐 복강에 6주 염쇄균 감염을 치료하는 효과 비교
Figure 112012107314159-pct00006
표 4: 4가지 항생제가 시험용 쥐 복강에 장구균과 황색포도상구균 감염을 치료하는 효과 비교
Figure 112012107314159-pct00007
시험 결과에 의하면 레보캐리마이신이 시험 쥐 12주균 감염을 치료하는 효과는 표 3과 4에서 보여지는 것처럼, 다 좋은 효과가 나타났다. 그리고 이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III은 L-이소발레르스피라마이신 I, II 혹은 III의 결정체 화합물인 레보캐리마이신의 경우 보호효과가 더 좋다.
본 발명 중의 다른 실시예로 만들어진 레보캐리마이신이나 그의 약학 조성물 제제로 똑같은 시험을 진행하고 얻은 결과는 비슷하다.
[시험예 2] 체외 약효
임상 분리균의 측정:
시험방법 : 2배 한천 희석법: 적당량의 한천 배양기를 계열 약물 농도가 있는 평면 한천 배양기에 넣고 약액과 혼합한다 (연쇄균과 장구균은 5%탈섬유 양혈을 첨가함으로써 혈배양기를 만듦. 바실루스 인플루엔자는 7%의 탈섬유 양혈을 첨가함. 임균은 임균배양기에 7% 탈섬유 양혈을 첨가함으로써 초콜릿배양기를 만듦). 응고한 후에 신성한 배양균액을 106 CFU/mL로 희석하여 본 발명 실시예 4의 레보캐리마이신 그리고 비교용 아지스로마이신, 아세틸스피라마이신, 에리트로마이신이 있는 평면 한천 배양기에 접종한다. 37℃ 환경에서 18시간을 거쳐 배양한다. 임균은 5% CO2의 인큐베이터에서 24시간을 거쳐 배양하고 레지오넬라 뉴모필라는 5% CO2의 인큐베이터에서 48시간을 거쳐 배양하여 혐기성 생물은 혐기성균 배양실에서 37℃ 환경에서 48시간을 거쳐 배양한다. 항균약이 세균성장을 억제하는 최저농도, 즉 최저억균농도（MIC를 관찰하고 MIC50, MIC90과 대조 약물을 비교한다.
비고:
MIC50: 50% 세균의 성장을 억제하는 최저억균농도
MIC90: 90% 세균의 성장을 억제하는 최저억균농도
시험 결과는 아래의 표 5와 같다.
표 5 : 캐리마이신의 임상분리균에 대한 예민 분포
Figure 112012107314159-pct00008
본 발명 중의 다른 실시예로 만들어진 레보캐리마이신이나 그의 약학 조성물 제제로 똑같은 시험을 진행하고 얻은 결과는 비슷하다.
[시험예 3] 체외 항트라코마 클라미디아와 폐렴클라미디아의 측정
시험방법:
1. HEp-2와 McCoy 세포계를 96구멍의 세균 배양판에서（Costar화사）접종하여 37℃의 환경에서 5% CO2로 48시간을 거쳐 단층 세포를 만든다.
2. 접종하려는 균주를 10000~20000 ifu（봉입체 형성 단위）/ml로 희석하여 하나씩 0.1ml/로 접종한다. 트라코마 클라미디아 혈청형B/TW-5/OT、D/UW-3/Cx는 McCoy 세포 배양판에 접종하고 폐렴클라미디아 CWL-029는 HEp-2 세포 배양판에 접종한다. 먼저 96구멍의 세포배양액을 없애고 구멍당 0.1ml/로 접종한다. 그 중에 A11～D11 그리고 C12와 D12에는 균주를 접종하지 않는다.
3. 접종이 끝난 후에 Beckman-Coulter 회사의 원심 분리기 J-6MC를 사용하여 96공의 세포 배양판에서 원심분리작업을 실시한다. 원심력이 1500g이고 온도가35℃이고 시간은 60분이다.
4. 작업 후, 접종한 트라코마 클라미디아와 폐렴클라미디아에 희석한 네 가지 항생제 약물 (즉 본 발명 실시예 4의 레보캐리마이신 그리고 비교용 아지스로마이신, 아세틸스피라마이신, 에리트로마이신)을 첨가한다. 구멍씩 0.1ml/이다.
5. 37℃에서 5% CO2로 배양하여 트라코마 클라미디아 시험판이 48시간을 거치고 폐렴클라미디아가 72시간을 거쳐 배양한 후 PBS（0.01M, pH 7.4）로 항생제 약품 용액을 씻고 100%의 포름알데히드로 실온에 15분 정도 고정한다.
6. 간접적인 면역 형광 검사법: 트라코마 클라미디아와 폐렴클라미디아 시험판에서 순화한 항트라코마 클라미디아 단복제항체（N54복제）와 폐렴클라미디아P33복제는 구멍당 50㎕, 37℃ 환경에서 습하는 박스에 30분 정도로 배양한다. 그 다음 플레이트 와셔로 플레이트를 씻은 후 형광 항체（Sigma화사） 구멍당 50㎕/를 첨가한다. 같은 방법과 조건으로 배양한 후 플레이트를 씻는다. 클리세린 구멍당 100㎕/를 첨가한다. Nikon의 도치 형광 현미경(Diaphot-200)으로 결과를 관찰한다.
7. MIC의 정의: 96공 시험판 중 트라코마 클라미디아와 폐렴클라미디아 봉입체 성장이 완전히 익히는 구멍(구멍에 형광 염색의 봉입체를 발견하지 ?음)의 최소 항생제 희석 농도이다.
시험 결과는 다음과 같다.
표 6 : 네 가지 매크로라이드 항생제가 트라코마 클라미디아와 폐렴클라미디아에 대해 체외 작용의 최소 억균 농도(MIC）
Figure 112012107314159-pct00009
1.트라코마 클라미디아 혈청형B/TW-5/OT에 대하여 캐리마이신의 MIC는 0.25 g/ml이고 다음은 에리트로마이신과 아지스로마이신（0.5 g/ml）이고 아세틸스피라마이신(MIC는 4 g/ml）이 제일 낮다.
2. 트라코마 클라미디아 혈청형 D/UW-3/Cx에 대하여 캐리마이신과 아지스로마이신이 MIC는 0.25 g/ml이며 체외효과가 비슷하고 예민한 편이다. 다음은 에리트로마이신（0.5 g/ml）이다. 아세틸스피라마이신（MIC槨2?g/ml）은 제일 낮습니다.
3. 폐렴클라미디아CWL-029에 대하여 캐리마이신과 에리트로마이신이 MIC≤0.016mg/ml이며 체외 작용이 제일 예민한다. 다음은 아지스로마이신（MIC는0.032mg/ml）이다. 아세틸스피라마이신（MIC는 0.5g/ml）은 제일 낮다.
4. 요컨대 본 발명 제조한 레보캐리마이신이 다른 시험 약물에 비하여 클라미디아에 대한 효과가 더 좋습니다.
본 발명 중의 다른 실시예로 만들어진 레보캐리마이신이나 그의 약품결합품 제제로 똑같은 시험을 진행하고 얻은 결과는 비슷하다.
[시험예 4] 체외 항유레아플라즈마균과 폐렴클라미디아
1. 시험 방법 : 무균 12구멍 세포 배양판 각 구멍에U-PPLO 0.8ml를 첨가한다 (균액 대조공에 0.9ml를 첨가하고 배양기 대조공에 1.0ml를 첨가함).
2. 각 시험공에 104CCU/ml의 Uu 균액 0.1ml를 첨가하여 구멍 중의 최종 균량은 103 CCU/ml이다(배양기 대조공에 균액을 첨가하지 않음).
3. 세 팀을 나누고(100μg/ml, 10μg/ml, 1μg/ml의 항생제 원액) 두 배 체감 농도의 순서대로 무균 팁(Tip)으로 시험공에 시험용 항생제(본 발명의 실시예 6의 레보캐리마이신 그리고 비교용 아지스로마이신, 아세틸스피라마이신, 에리트로마이신)를 첨가한다. 순서대로 각 100㎕，50㎕，25㎕，12.5㎕이다(균액 대조공, 배양기 대조공에 항생제를 첨가하지 않음. 동시에 항생제 대조공을 설치함).
4. 각 구멍을 골고루 혼합하여 테이프로 배양판을 밀봉하고 37℃의 따뜻한 박스에서 배양한다.
5. 시험 후 17~24시간에 Uu의 성장 상황을 관찰한다. Uu 균액 대조공에 양성 성장이 나타날 때 Uu의 성장을 억제하는 최저항생제 농도는 그 제품의 최저 MIC이고 시험이 끝날 때의 MIC는 최종 MIC이다(24시간).
항유레아플라즈마균주에 대해 MIC 측정을 실시한다. 4차 결과는 다음과 같다.
레보캐리마이신 0.025-0.125㎍/ml，
아세틸스피라마이신 0.5㎍/ml，
에리트로마이신 5㎍/ml,
아지스로마이신 0.025-0.125㎍/ml.
이 결과에 따르면 캐리마이신은 항Uu의 효과가 좋고 그 효과가 아지스로마이신과 비슷하고 아세틸스피라마이신보다 더 좋다. 이번 시험에서 에리트로마이신은 항Uu의 효과가 제일 낮았다.
본 발명 중의 다른 실시예로 만들어진 레보캐리마이신이나 그의 약학 조성물 제제로 똑같은 시험을 진행하고 얻은 결과는 비슷하다.

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  7. 배양, 발효 및 추출 과정을 포함하는, 레보캐리마이신의 제조 방법으로서,
    상기 레보캐리마이신은
    이소발레르스피라마이신 III, Ⅱ, 및 Ⅰ의 혼합물; 및
    일정한 양의 이소부티르스피라마이신 Ⅲ 및 Ⅱ, 부티르스피라마이신 Ⅲ 및 Ⅱ, 프로피오닐스피라마이신 Ⅲ 및 Ⅱ, 및 아세틸스피라마이신 Ⅲ 및 Ⅱ
    을 함유하고,
    그 중, 이소발레르스피라마이신 Ⅲ의 함량은 30wt% 이상이고,
    이소발레르스피라마이신 Ⅲ, Ⅱ 및 Ⅰ의 총 함량은 60wt% 이상이며,
    아실스피라마이신의 함량은 80 내지 98wt%이고,
    상기 레보캐리마이신의 고유 광회전도는 25℃, 0.02g/ml 클로로포름 용액에서 [α]D= -52°내지 -57°이며,
    이소발레르스피라마이신 Ⅲ은 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅲ의 결정체 화합물이거나, 이소발레르스피라마이신 II가 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅱ의 결정체 화합물이거나, 또는 이소발레르스피라마이신 I이 좌선이소발레르스피라마이신 I의 결정체 화합물이며,
    상기 이소발레르스피라마이신 Ⅲ이 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅲ의 결정체 화합물일 때, 본 결정체 화합물은 Cu-Kα방사선을 통해 측정한 X레이 분말 회절이 2θ에서 8.0°, 10.0°, 11.2°, 11.7°, 16.4°, 19.1°, 19.6°, 20.0°, 21.4°, 22.9°, 23.6°, 29.4°에 특징적인 최고점이 있고,
    상기 이소발레르스피라마이신 II가 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅱ의 결정체 화합물일 때, 본 결정체는 Cu-Kα방사선을 통해 측정한 X레이 분말 회절이 2θ에서 10.0°, 11.6°, 16.4°, 17.3°, 19.1°, 21.2°, 22.1°, 22.7°, 26.4°, 26.9°, 27.5°, 31.5°에 특징적인 최고점이 있으며,
    상기 이소발레르스피라마이신 Ⅰ이 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ의 결정체 화합물일 때, 본 결정체는 Cu-Kα방사선을 통해 측정한 X레이 분말 회절이 2θ에서 7.6°, 8.0°, 10.0°, 11.4°, 16.4°, 17.0°, 17.5°, 17.9°, 19.5°, 22.7°, 23.7°, 24.4°에 특징적인 최고점이 있고,
    상기 배양 및 발효는 4"-이소아밀기 아실기전이효소 유전자를 함유하는 스피라마이신에 의해 생성된 균 복제 균주 WSJ-195를 경사 배양 배지에서 배양 후 종자 배지에 이식하여 배양하고, 다시 발효 배지에 이식하고, pH 조절제로 발효 과정을 조절하며, pH를 6.0～9.0로 조절하고;
    시간에 따른 pH 변동 곡선은 3가지 연속 단계를 나타내는데,
    첫 번째 단계는 방정식 y1=k1x1+6.0을 만족시키며 그 중 0.0227≤k1≤0.1364，0＜x1≤22이며,
    두 번째 단계는 방정식 y2=k2x2+ b2을 만족시키며 그 중 -0.0735≤k2＜0，6.5＜b2≤10.62，22≤x2≤56이며,
    세 번째 단계는 방정식 y3=k3x3+ b3이며 그 중 0＜k3≤0.0078, 6.06≤b3＜6.5，56≤x3≤120이고,
    상기 식에서 x1, x2, 및 x3은 각각 시간(h)을 나타내고, y1, y2, 및 y3은 각각 pH 값을 나타내며,
    상기 레보캐리마이신의 제조 방법은
    a) 레보캐리마이신을 분리 정제를 통해 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ, Ⅱ, 또는 Ⅲ을 수득하는 단계;
    b) 수득된 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ, Ⅱ, 또는 Ⅲ을 재결정하여 좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ,Ⅱ, 또는 Ⅲ의 결정체 화합물을 수득하는 단계;
    c）단계 a)에서 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ, Ⅱ, 또는 Ⅲ을 분리 정제한 후의 잔류 레보캐리마이신 중의 시안화 메틸을 회전 증발기를 통해 없앤 다음, 1배량의 초산 에틸로 추출하고, 이 추출물 중의 초산 에틸을 회전 증발을 통해 제거하여 페이스트 샘플을 수득하고; 수득된 샘플을 석유 에테르로 재용하고, 이 석유 에테르는 회전 증발을 통해 제거하여 레보캐리마이신을 수득하는 단계;
    d) 단계 b)에서 얻은 좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ,Ⅱ 또는 Ⅲ의 결정체 화합물과 단계 c)에서 얻은 레보캐리마이신을 혼합하여 얻은 이소발레르스피라마이신 Ⅰ,Ⅱ, 또는 Ⅲ이 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ, Ⅱ 또는 Ⅲ의 결정체 화합물인 레보캐리마이신을 수득하는 단계
    를 포함하는,
    레보캐리마이신의 제조 방법.
  8. 제7항에 있어서, 추출 과정이
    발효액을 황산알루미늄으로 처리하여 여과액을 얻고 pH를 8.5-9.0로 조절하고,
    아세트산 부틸을 이용하여 추출하며,
    아세트산 부틸 추출액을 무염수 및 1% NaH2PO4로 각각 세척한 후, 다시 pH 2.0-2.5의 물로 추출하여 수성 추출물을 얻고,
    pH를 4.5-5.5로 조절한 후 남은 아세트산 부틸 추출액을 휘발, 제거하여 수성 추출물을 얻고, 여과하고,
    여과액의 pH를 8.5-9.0으로 조절하여 침전물을 얻고, 정제수를 이용하여 침전물을 세척하고 건조시켜 레보캐리마이신을 수득하는, 제조방법.
  9. 제7항에 있어서, 사면 배양 배지에서의 배양이 28～38℃의 온도 조건에서 8~15일간 지속되고;
    종자 배양에서의 배양은 25～30℃의 온도 조건에서 40~80시간 지속되며;
    발효 배지에서의 발효는 26～30℃의 온도 조건에서 72~120시간 지속되는 제조 방법.
  10. 삭제
  11. 제7항에 있어서, 단계 a)에서의 분리 및 정제가 제조형 고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 예비 분리를 통해 얻은 레보캐리마이신을 정제하고, ODS를 이용하여 크로마토그래피 컬럼을 만들고 시안화 메틸과 아세트산 암모늄을 구배 용출물 중의 이동상으로 이용하고; 자외선 검출을 통해 분리된 UV 스펙트럼사진을 기록하고, 좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ,Ⅱ, 또는 Ⅲ 구성 성분 목표 최고점을 수집하는 것이며;
    크로마토그래피 컬럼 : ODS 정제용 크로마토그래피 컬럼;
    이동상 : 시안화 메틸(A), 100mM아세트산 암모늄 수용액(B);
    순서 조건 : 선형 순서 0~60분, A 25%～65%; 61~90분, A 65%～90%;
    유속 : 260 mL/min;
    주입량 : 10mL;
    샘플링 농도 : 0.5g/mL;
    파장 검사 : 231nm;
    수집 방식 : 자외선 유발 수집;
    좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ의 체류시간 RT 44.759min에 따라 좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ 샘플을 수집하고; 또는 이소발레르스피라마이신 Ⅱ의 체류시간 RT 43.34min에 따라 이소발레르스피라마이신 Ⅱ 샘플을 수집하며; 또는 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅲ의 체류시간 RT 48.009min에 따라 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅲ 샘플을 수집한 다음;
    회전 증발을 이용하여 시안와 메틸을 없앤 후 1배수 초산 에틸로 추출하고 회전 증발을 이용해 추출액 중 초산 에틸을 없애어 페이스트 샘플을 수득하고;
    수득한 샘플을 석유 에테르로 재용해하고, 회전 증발을 이용하여 석유 에테르를 없애어 좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ,Ⅱ 또는 Ⅲ의 백색 고체 분말을 수득하는 제조 방법.
  12. 제11항에 있어서, 이소발레르스피라마이신 Ⅰ이 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ의 결정체 화합물일 때, 이 결정체 화합물은 다음와 같은 재결정 방법:
    좌선이소발레르스피라마이신Ⅰ의 백색 분말 고체를 무수 메탄올, 무수 에탄올 및 무수 아세톤의 혼합 용매에 녹인 후, 교반하면서 정제수를 첨가하고,
    그 후 온도를 5℃～15℃로 낮추며 계속 교반하여, 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅰ의 결정체 화합물을 수득하되,
    상기 혼합 용매 중의 초산 에틸 대 무수 에탄올 대 무수 아세톤의 부피 비가 1:0.1 내지 10:0.5 내지 1인 공정
    을 통해 수득되며;
    이소발레르스피라마이신 Ⅱ가 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅱ 결정체 화합물일 때, 이 결정체 화합물은 다음과 같은 재결정 방법:
    좌선이소발레르스피라마이신 Ⅱ의 백색 분말형 고체를 무수 메탄올, 무수 에탄올 및 무수 아세톤의 혼합 용매에 녹인 후, 교반하면서 정제수를 첨가하고,
    그 후 온도를 5℃～15℃로 낮추며 계속 교반하여 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅱ의 결정체 화합물을 수득하되, 상기 혼합 용매 중의 무수 메탄올 대 무수 에탄올 대 무수 아세톤의 부피 비가 1：0.1～10：0.5～1인 공정
    을 통해 수득되며;
    이소발레르스피라마이신 Ⅲ이 좌선이소발레르스피라마이신 Ⅲ의 결정체 화합물일 때, 이 결정체 화합물은 다음과 같은 재결정 방법:
    좌선이소발레르스피라마이신 Ⅲ의 백색 분말형 고체를 무수 메탄올, 무수 에탄올 및 무수 아세톤의 혼합 용매에 녹인 후, 교반하면서 정제수를 첨가하고,
    그 후 온도를 5℃～15℃로 낮추며 계속 교반하여 좌선이소발레르스피라마이신 III의 결정체 화합물을 수득하되, 상기 혼합 용매 중의 무수 메탄올 대 무수 에탄올 대 무수 아세톤의 부피 비가 1：0.1～10：0.5～1인 공정
    을 통해 수득되는 제조 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8778896B2 (en) * 2010-05-25 2014-07-15 Shenyang Tonglian Group Co., Ltd. Levoisovalerylspiramycin I, II or III, preparations, preparation methods and uses thereof
WO2012018320A1 (en) * 2010-08-04 2012-02-09 Ima Life North America Inc. Bulk freeze drying using spray freezing and stirred drying
US9945611B2 (en) 2010-08-04 2018-04-17 Ima Life North America Inc. Bulk freeze drying using spray freezing and agitated drying
CN103694295B (zh) * 2014-01-08 2016-01-20 华东理工大学 一种优化可利霉素组分的方法
CN105497053B (zh) * 2015-12-31 2018-02-13 沈阳福洋医药科技有限公司 可利霉素在抗结核分枝杆菌感染中的应用
AU2018247555B2 (en) * 2017-04-06 2024-04-18 Shenyang Fuyang Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Use of carrimycin and pharmaceutically acceptable salt thereof for manufacture of medicament for treatment and/or prevention of tumors
ES2912734T3 (es) * 2017-07-04 2022-05-27 Shenyang Fuyang Pharmaceutical Tech Co Ltd Uso de isovaleril espiramicina I o III en la preparación de fármaco para tratar y/o prevenir el tumor y fármaco
RU2771046C2 (ru) * 2018-01-19 2022-04-25 Шенянг Фуянг Фармасьютекал Технолоджи Ко., Лтд. Применение карримицина или его активных ингредиентов
CN110051845A (zh) * 2018-01-19 2019-07-26 沈阳福洋医药科技有限公司 一种mTOR抑制剂、药物组合物及其应用
CN110384710B (zh) * 2018-04-17 2023-01-10 沈阳福洋医药科技有限公司 一种用于预防和/或治疗疼痛的药物、组合产品及其应用
CA3098205A1 (en) * 2018-04-17 2019-10-24 Shanghai Tonglian Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament for preventing and/or treating pain and/or fever, composite product and use thereof
CN110384802B (zh) * 2018-04-17 2021-09-17 沈阳福洋医药科技有限公司 一种用于预防和/或治疗发热的药物、组合产品及其应用
CN108992416A (zh) * 2018-09-27 2018-12-14 上海同联制药有限公司 一种可利霉素肠溶片及其制备方法
WO2020228477A1 (zh) * 2019-05-16 2020-11-19 沈阳福洋医药科技有限公司 一种用于预防、缓解和/或治疗纤维化的药物、组合产品及其应用
CN112239483B (zh) * 2019-07-18 2023-10-27 沈阳福洋医药科技有限公司 一种化合物及药物组合物
CN111450066B (zh) * 2020-04-24 2022-06-21 沈阳信达泰康医药科技有限公司 一种可利霉素冻干粉针制剂及其制备方法
WO2021219112A1 (zh) * 2020-04-30 2021-11-04 沈阳福洋医药科技有限公司 异戊酰螺旋霉素类化合物或其组合物在制备治疗脓毒症疾病药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100405299C (zh) 2004-10-19 2008-07-23 Lg电子株式会社 用于安装监视器驱动器的装置和方法
CN100554355C (zh) 2007-04-11 2009-10-28 华南理工大学 一种纳米复合水性隔热外墙涂料及其制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5334788A (en) * 1976-09-11 1978-03-31 Sanraku Inc Antibiotics spiramycin derivatives
CN1169947C (zh) * 2002-11-19 2004-10-06 中国医学科学院医药生物技术研究所 必特螺旋霉素的基因工程菌株螺旋霉素链霉菌wsj-195
CN1237976C (zh) * 2003-12-23 2006-01-25 沈阳同联集团有限公司 必特螺旋霉素及其在抗感染性疾病中的应用
BRPI0514254A (pt) * 2004-08-12 2008-06-03 Glaxosmithkline Zagreb uso de conjugados célula-especìficos para o tratamento de doenças inflamatórias do trato gastrintestinal
CN101054553A (zh) * 2007-04-09 2007-10-17 中国医学科学院医药生物技术研究所 异戊酰螺旋霉素i基因工程菌株的构建
CN101649325B (zh) * 2009-07-03 2011-09-07 中国医学科学院医药生物技术研究所 一种提高基因工程异戊酰螺旋霉素主组分含量的基因串连技术
US8778896B2 (en) * 2010-05-25 2014-07-15 Shenyang Tonglian Group Co., Ltd. Levoisovalerylspiramycin I, II or III, preparations, preparation methods and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100405299C (zh) 2004-10-19 2008-07-23 Lg电子株式会社 用于安装监视器驱动器的装置和方法
CN100554355C (zh) 2007-04-11 2009-10-28 华南理工大学 一种纳米复合水性隔热外墙涂料及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Acta Pharmaceutica Sinica. Vol. 44, No. 10, pp. 1183-1186 (2009)
Journal of Chromatography B. Vol. 791, pp. 45-53 (2003)

Also Published As

Publication number Publication date
EP2578596A1 (en) 2013-04-10
RU2012156419A (ru) 2014-06-27
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WO2011147316A1 (zh) 2011-12-01
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CA2800019A1 (en) 2011-12-01
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US20130150316A1 (en) 2013-06-13
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KR101706519B1 (ko) 2017-02-14
EP2578596A4 (en) 2013-11-06
MY164230A (en) 2017-11-30
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US9089586B2 (en) 2015-07-28
KR20130020906A (ko) 2013-03-04
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ZA201209739B (en) 2014-03-26
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MX346873B (es) 2017-03-30

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