RU2006134336A - Биоадгезив мидии - Google Patents

Claims (49)

1. Адгезивный белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6.

2. Адгезивный белок по п.1, который дополнительно содержит пептид для улучшения физико-химического свойства адгезивного белка, который присоединен к карбокси- и/или аминоконцам данного белка.

3. Адгезивный белок по п.2, где физико-химическое свойство выбрано из группы, состоящей из растворимости, силы адгезии, образования поперечных связей и улучшения экспрессии белка, очистки и степени извлечения.

4. Адгезивный белок по п.2, где пептид происходит из адгезивного белка.

5. Адгезивный белок по п.4, где адгезивный белок происходит из адгезивного белка мидии.

6. Адгезивный белок по п.2, где пептид представляет собой аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, тандемно повторяющуюся от 1 до 10 раз.

7. Адгезивный белок по п.6, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10, аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12, и аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 14.

8. Адгезивный белок по п.2, где пептид содержит 6 остатков гистидина.

9. Адгезивный белок по п.8, где адгезивный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 16, аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 18, аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 20, и аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 22.

10. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую адгезивный белок по п.1.

11. Полинуклеотид по п.10, где нуклеотидная последовательность, кодирующая адгезивный белок, содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5.

12. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую адгезивный белок по п.2, где пептид для улучшения физико-химического свойства данного адгезивного белка присоединен к карбокси- и/или аминоконцам адгезивного белка, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6.

13. Полинуклеотид по п.12, где пептид представляет собой аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, тандемно повторяющуюся от 1 до 10 раз.

14. Полинуклеотид по п.13, где нуклеотидная последовательность, кодирующая пептид, выбрана из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 26-31, тандемно повторяющихся от 1 до 10 раз.

15. Полинуклеотид по п.13, где полинуклеотид выбран из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 9, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11, и нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13.

16. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую адгезивный белок по п.8.

17. Полинуклеотид по п.16, где нуклеотидная последовательность, кодирующая адгезивный белок, выбрана из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 17, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 19, и нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 21.

18. Вектор, который содержит функциональным образом встроенную нуклеотидную последовательность, кодирующую адгезивный белок по любому из пп.1-9.

19. Вектор по п.18, где нуклеотидная последовательность, кодирующая адгезивный белок, выбрана из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 5, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 9, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 17, нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 19, и нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 21.

20. Вектор по п.18, где вектор представляет собой pMDG05 (KCTC 10291ВР) или pENG151 (KCTC 10766BP).

21. Трансформант, трансформированный вектором по п.18, выбранный из группы, состоящей из прокариот, эукариот и клеток, происходящих из эукариот.

22. Трансформант по п.21, где прокариот представляет собой E.coli или Bacillus sp.

23. Трансформант по п.21, где эукариот выбран из группы, состоящей из дрожжей, насекомых, растений и животных.

24. Трансформант по п.21, где клетки, происходящие из эукариот, выбраны из группы, состоящей из растительных клеток, клеток насекомых и клеток млекопитающих.

25. Способ продуцирования адгезивного белка, включающий стадии

(а) конструирования вектора, который содержит функциональным образом встроенный нуклеотид, кодирующий адгезивный белок по п.1;

(б) конструирования трансформанта путем трансформации вектором клетки-хозяина; и

(в) продуцирования рекомбинантного адгезивного белка путем культивирования трансформанта.

26. Способ по п.25, где адгезивный белок дополнительно содержит пептид для улучшения физико-химического свойства адгезивного белка, присоединенный к карбокси- и/или аминоконцам данного белка.

27. Способ по п.26, где физико-химическое свойство выбрано из группы, состоящей из растворимости, силы адгезии, образования поперечных связей и улучшения экспрессии белка, очистки и степени извлечения.

28. Способ по п.26, где пептид происходит из адгезивного белка.

29. Способ по п.28, где адгезивный белок происходит из адгезивного белка мидии.

30. Способ по п.26, где пептид представляет собой аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, тандемно повторяющуюся от 1 до 10 раз.

31. Способ по п.30, где адгезивный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10, аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12, и аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 14.

32. Способ по п.26, где пептид состоит из 6 остатков гистидина.

33. Способ по п.32, где адгезивный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 16, аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 18, аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 20, и аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 22.

34. Способ очистки адгезивного белка, включающий стадии:

(а) лизиса трансформанта по п.21 и затем центрифугирования для разделения супернатанта и осадка;

(б) приготовления суспензии путем добавления кислотного органического растворителя к осадку и его суспендирования; и

(в) центрифугирования суспензии для отделения супернатанта.

35. Способ по п.34, где кислотный органический растворитель имеет рН от 3 до 6.

36. Способ по п.34, где кислотный органический растворитель представляет собой один или более чем один растворитель, выбранный из группы, состоящей из уксусной кислоты, лимонной кислоты и молочной кислоты.

37. Способ по п.36, где уксусная кислота представляет собой 5-30%-ный (об./об.) водный раствор.

38. Способ по п.34, где супернатант, полученный на стадии (в), дополнительно подвергают гель-фильтрационной хроматографии.

39. Адгезив, содержащий адгезивный белок по любому из пп.1-9 в качестве активного компонента.

40. Адгезив по п.39, где от 5 до 100% общего количества остатков тирозина в адгезивном белке модифицировано в 3,4-дигидроксифенил-L-аланин (DOPA).

41. Адгезив по п.39, который прилипает к субстрату, выбранному из группы, состоящей из пластика, стекла, металла, эукариотических клеток, прокариотических клеток и растительных клеточных стенок и липидов.

42. Адгезив по п.39, который наносят на биологический образец.

43. Адгезив по п.39, который дополнительно содержит одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из поверхностно-активного вещества, оксиданта и наполнителя.

44. Адгезив по п.43, где поверхностно-активное вещество представляет собой додецилсульфат натрия или додецилбензолсульфонат натрия.

45. Адгезив по п.43, где оксидант представляет собой тирозиназу или H₂O₂.

46. Адгезив по п.43, где наполнитель выбран из группы, состоящей из коллагена, гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфата, эластина, ламинина, казеина, гидроксиапатита и альбумина, фибронектина и гибрина.

47. Адгезив по п.39, который наносят на субстраты, используемые в подводных условиях.

48. Способ регуляции силы адгезии адгезива по п.39, включающий стадию обработки веществом, выбранным из группы, состоящей из оксиданта, наполнителя и поверхностно-активного вещества, или стадию регулирования концентрации адгезивного белка, который является активным компонентом адгезива.

49. Покрывающий агент, содержащий адгезивный белок по любому из пп.1-9 в качестве активного компонента.