CN114430771A - 蛋白质粘合剂、接合体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供一种含有蛋白质的蛋白质粘合剂、接合体及其制备方法。本发明的蛋白质粘合剂含有50KDa以下的蛋白质。一种实施方式的接合体包含第一物体、第二物体、介于所述第一物体与所述第二物体之间的粘合层，其中，第一物体及第二物体通过粘合层接合，粘合层是由含有50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。

Description

蛋白质粘合剂、接合体及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种蛋白质粘合剂。
背景技术
用作成型体加工用材料的粘合剂中出于提高强度等目的会用到甲醛。然而，甲醛是挥发性有机化合物(VOC)，毒性强，释放到空气中会对人体造成不良影响，因此需要一种不含甲醛的粘合剂。
已知蛋白质粘合剂可作为一种不含甲醛的粘合剂(非专利文献1、专利文献1～2)。
另一方面，已知渗透固化处理工法可作为一种用于增强地基强度的地基改良工法。这是一种用注射泵等将注入材料注到砂地基等软地基中来增加地基剪切强度的工法(非专利文献4)。注入材料可大致分为非药液类和药液类。非药液类可以例举出水泥类材料等。然而，采用水泥类注入材料的情况下，土壤中所含的某些粘土矿物或有机物容易导致水泥原料中所含的天然来源铬等重金属溶出，从而会污染土壤。药液类材料除水玻璃类药剂外，例如，还可以例举出丙烯酰胺、尿素类、氨基甲酸乙酯类等高分子类药剂。然而，挖掘经水泥或氨基甲酸乙酯树脂等改良的地基时所产生的土壤由于混入了树脂或水泥等多余物质，因此目前被当作工业废弃物处理。
因此，将可在地底微生物作用下被分解的可生物降解聚合物应用到地基改良用注入材料的技术已开展过研究(非专利文献5)。该文献着眼于可生物降解聚乙烯醇(PVA)，对其作为地基改良注入剂的适应性开展了研究。然而，将其他可生物降解聚合物应用到地基改良用注入材料的可能性尚不明确。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2005-133224号公报
专利文献2：日本特表2018-531169号公报
非专利文献
非专利文献1：木下武幸，《减少甲醛类粘合剂的甲醛释放量》，日本接着学会志38.6(2002):212-216。
非专利文献2：斋藤育江等，《根据水性粘合剂释放的化学物质预测室内污染浓度》，室内环境学会志8.1(2005):15-26。
非专利文献3：Frihart,Charles R.,ChristopherG.Hunt,and MichaelJ.Birkeland."Soy proteins as wood adhesives."In:Recent Advances in AdhesionScience and Technology,edited by Woiciech(Voytek)Gutowski,and HannaDodiuk.2014；pp.277-290.16(2014)：277-290.
非专利文献4：渗透固化处理工法研究会事务局网页(URL：https://www.pgm-koho.jp/method/)
非专利文献5：加贺宗彦等，工业技术：东洋大学工业技术研究所报告，第36号，p44-47，2014
发明内容
发明要解决的问题
本发明的目的在于提供一种含有蛋白质的蛋白质粘合剂、接合体及其制备方法。
用于解决问题的方法
本发明人等对有效利用宿主细胞来源残渣以蛋白质作为粘合剂开展研究，发现一种不含甲醛且可用作蛋白质粘合剂的蛋白质。
本发明提供以下[1]～[24]。
[1]
一种蛋白质粘合剂，其中，其含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质。
[2]
如[1]所述的粘合剂，其中，其还包含功能附加材料。
[3]
如[1]或[2]所述的粘合剂，其中，上述30KDa以上50KDa以下的蛋白质含量相对于上述粘合剂总质量为20质量％以上。
[4]
如[1]～[3]中任一项所述的粘合剂，其中，上述30KDa以上50KDa以下的蛋白质的主成分为膜蛋白。
[5]
如[4]所述的粘合剂，其中，其还含有核糖体蛋白、脂蛋白及/或糖蛋白。
[6]
如[1]～[5]中任一项所述的粘合剂，其中，小于30KDa的蛋白质含量相对于上述粘合剂总质量为5质量％以上。
[7]
如[6]所述的粘合剂，其中，上述小于30KDa的蛋白质的主成分为核糖体蛋白。
[8]
如[1]～[7]中任一项所述的粘合剂，其中，上述30KDa以上50KDa以下的蛋白质是宿主细胞残渣中所含的蛋白质，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述宿主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣。
[9]
一种粘合剂，其中，其是含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣。
[10]
一种接合体，其包含第一物体、第二物体、介于上述第一物体与上述第二物体之间的粘合层，其中，上述第一物体及上述第二物体通过上述粘合层接合，上述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。
[11]
一种接合体，其中，其包含多个被粘合物体、以介于上述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆上述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，上述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。
[12]
如[10]或[11]所述的接合体，其中，上述粘合剂中还含有功能附加材料，上述粘合层至少在其表面及/或内侧含有功能1附加材料。
[13]
如[10]～[12]中任一项所述的接合体，其中，上述粘合层是上述粘合剂通过干燥或加热加压处理得到的层。
[14]
如[10]～[13]中任一项所述的接合体，其中，上述50KDa以下的蛋白质含量相对于上述粘合层总质量为50质量％以上。
[15]
如[12]所述的接合体，其中，上述功能附加材料为纤维素。
[16]
如[10]～[15]中任一项所述的接合体，其中，上述30KDa以上50KDa以下的蛋白质是宿主细胞残渣中所含的蛋白质，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述宿主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣组成的粘合层。
[17]
一种接合体，其包含第一物体、第二物体、介于上述第一物体与上述第二物体之间的粘合层，其中，上述第一物体及上述第二物体通过上述粘合层接合，上述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述宿主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣。
[18]
一种接合体，其中，其包含多个被粘合物体、以介于上述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆上述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，上述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述宿主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣。
[19]
一种制备方法，其是接合体的制备方法，上述接合体包含第一物体、第二物体、介于上述第一物体与上述第二物体之间的粘合层，其中，上述第一物体及上述第二物体通过上述粘合层接合，上述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述制备方法包含将上述第一物体、上述粘合剂及上述第二物体依次层压，通过干燥或加热加压处理将上述粘合剂形成粘合层，从而使上述第一物体及第二物体接合的工序。
[20]
一种制备方法，其是接合体的制备方法，上述接合体包含多个被粘合物体、以介于上述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆上述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，其中，上述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述制备方法包含将上述多个被粘合物体与上述粘合剂混合，通过干燥或加热加压处理将上述粘合剂形成粘合层，从而使上述多个被粘合物体接合的工序。
[21]
一种制备方法，其是接合体的制备方法，上述接合体包含第一物体、第二物体、介于上述第一物体与上述第二物体之间的粘合层，其中，上述第一物体及第二物体通过上述粘合层接合，上述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述宿主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣，上述制备方法包含将上述第一物体、上述粘合剂及上述第二物体依次层压，通过干燥或加热加压处理将上述粘合剂形成粘合层，从而使上述第一物体及第二物体接合的工序。
[22]
一种制备方法，其是接合体的制备方法，上述接合体包含多个被粘合物体、以介于上述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆上述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，其中，上述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，上述宿主细胞残渣是从上述宿主细胞中回收上述目标物质后的细胞残渣，上述制备方法包含将上述多个被粘合物体与上述粘合剂混合，通过干燥或加热加压处理将上述粘合剂形成粘合层，从而使上述多个被粘合物体接合的工序。
[23]
一种用于增强地基强度的地基改良用注入材料，其中，其含有[1]～[9]中任一项所述的粘合剂。
[24]
一种灰浆类似体或混凝土类似体，其中，其含有[1]～[9]中任一项所述的粘合剂。
发明效果
根据本发明的蛋白质粘合剂，可提供不同于以往的粘合剂组成，并且可有效利用以往被废弃的细胞残渣。此外，本发明的蛋白质粘合剂可将不同材料彼此粘合，进而，通过添加功能附加材料可赋予附加功能。
附图说明
图1是示出用含乙醇溶剂对实施例1废弃离心上清液处理前、处理后及放置一天后状态的照片。
图2是实施例2宿主细胞残渣作为固体物沉淀的状态的照片。
图3是示出实施例1宿主细胞残渣中蛋白质分析结果的照片。
图4是示出实施例2宿主细胞残渣中蛋白质分析结果的照片。
图5是示出使用分析软件Image Lab对实施例1及2宿主细胞残渣进行分子量分析的结果的图表。
图6是示出实施例3木片接合体的照片。
图7是示出实施例4木片合体的照片。
图8是示出木屑接合体(木屑残渣复合成型体)照片及外观观察结果的表。
图9是示出木屑接合体(木屑残渣复合成型体)弯曲强度的图表。
图10是示出木屑接合体(木屑残渣复合树脂成型体)弯曲试验后破坏程度及外观考察结果的表。
图11是示出实施例3宿主细胞残渣中蛋白质分析结果的照片。
图12是示出使用分析软件Image Lab对实施例3宿主细胞残渣进行分子量分析的结果的图表。
图13是将含有实施例2宿主细胞残渣的灰浆类似体涂在基板上的状态的照片。
图14是含有实施例2宿主细胞残渣的混凝土类似体的照片。(a)是成型为立方体的混凝土类似体，(b)是成型为立方体及圆锥体的混凝土类似体。
具体实施方式
〔蛋白质粘合剂〕
一种实施方式的蛋白质粘合剂含有30Da以上50kDa以下的蛋白质。该30Da以上50kDa以下的蛋白质是蛋白质粘合剂的主成分，其含量相对于粘合剂总质量含有20质量％以上，例如，30质量％以上、35质量％以上、40质量％以上、50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、90质量％以上，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下、60质量％以下、50质量％以下。该30kDa以上50kDa以下的蛋白质相对于粘合剂总蛋白，优选含有40质量％以上，例如，含有50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、或90质量％以上。
50KDa以下的蛋白质的主成分可以是膜蛋白，蛋白质粘合剂还可以含有核糖体蛋白、脂蛋白及/或糖蛋白。
此外，蛋白质粘合剂还可以含有小于30KDa的蛋白质，小于30KDa的蛋白质的主成分是核糖体蛋白。小于30KDa的蛋白质相对于粘合剂总质量含有5质量％以上，例如，10质量％以上、20质量％以上、30质量％以上、40质量％以上，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下、60质量％以下、50质量％以下。该小于30kDa的蛋白质相对于粘合剂总蛋白，优选含有20质量％以上、40质量％以上，例如，含有50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、或90质量％以上。
蛋白质粘合剂中，50kDa以下的蛋白质的合计量即30Da以上50KDa以下的蛋白质与小于30KDa的蛋白质的合计量相对于粘合剂总质量，优选可以超过50质量％，例如，含有60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、90质量％以上。此外，该50kDa以下的蛋白质相对于粘合剂总蛋白，优选含有40质量％以上，例如，含有50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、或90质量％以上。
粘合剂相对于粘合剂总质量含有20质量％～90质量％的总蛋白，例如，含有30质量％～85质量％、40质量％～80质量％、40质量％～70质量％或50质量％～90质量％的总蛋白。例如，粘合剂相对于粘合剂总质量含有20质量％以上、30质量％以上、35质量％以上、40质量％以上、50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、90质量％以上的总蛋白，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下、60质量％以下、50质量％以下的总蛋白。
一种实施方式的蛋白质粘合剂中，30Da以上50KDa以下的蛋白质可以是宿主细胞残渣中所含的蛋白质，宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，宿主细胞残渣是从宿主细胞中回收目标物质后的细胞残渣。即，蛋白质粘合剂可以含有上述宿主细胞残渣，优选只含有上述宿主细胞残渣作为30Da以上50KDa以下的蛋白质。
一种实施方式的蛋白质粘合剂是含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂，宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，宿主细胞残渣是从宿主细胞中回收目标物质后的细胞残渣。
宿主细胞残渣相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有20质量％～90质量％的总蛋白，例如，含有30质量％～85质量％、40质量％～80质量％、40质量％～70质量％或50质量％～90质量％的总蛋白。例如，宿主细胞残渣相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有20质量％以上、30质量％以上、35质量％以上、40质量％以上、50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、90质量％以上的总蛋白，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下、60质量％以下、50质量％以下的总蛋白。总蛋白中，除宿主细胞来源膜蛋白、核糖体蛋白、糖蛋白、脂蛋白等宿主细胞来源蛋白质外，可以含有少量残留的重组蛋白。
本实施方式的蛋白质粘合剂的形态没有特别限定，可以是干粉、溶液、颗粒、丸状、薄膜。
(目标物质)
本发明提供产生目标物质的宿主细胞残渣的有效利用。宿主细胞生产的“目标物质”只要是细胞产生的化合物即可，没有特别限定。可以是有机物或无机物，可以是保留在细胞中的物质或分泌到细胞外的物质，无论是合成所得物质还是分解所得物质皆可。例如，可以例举出核酸、氨基酸、糖、糖蛋白、脂肪酸、维生素、肽、抗体、激素等。目标物质优选核酸、氨基酸或重组蛋白，重组蛋白可以是可溶性或不溶性。
(重组蛋白)
本实施方式的重组蛋白可以是在目标蛋白质生产系统中生产的重组蛋白，也可以是在宿主细胞中生产目标物质所需的重组蛋白，其种类没有特别限定。目标蛋白质例如可以是构筑生物结构的结构蛋白，也可以是酶、激素、抗体等功能蛋白。此外，可以是宿主细胞内表达的蛋白质，也可以是分泌到宿主细胞外的蛋白质。进而，重组蛋白可以是可溶性或不溶性。功能蛋白可以例举出酶等具有催化作用的蛋白质、激素、神经递质、阻遏物等具有调控作用的蛋白质、抗体、纤维蛋白等具有生物防御作用的蛋白质、血红蛋白、肌红蛋白、白蛋白等参与物质运输的蛋白质等。产生目标物质所需的重组蛋白可以是结构蛋白，也可以是功能蛋白，可以例举出在宿主细胞中发挥作用的酶等。
例如，结构蛋白可以例举出天然存在的丝心蛋白、胶原蛋白、节肢弹性蛋白、弹性蛋白及角蛋白等天然结构蛋白。作为天然存在的丝心蛋白，已知昆虫及蜘蛛类产生的丝心蛋白。本实施方式中，结构蛋白优选含有选自天然蛛丝蛋白及源自天然蛛丝蛋白的多肽构成的群中的至少一种。
昆虫产生的丝心蛋白例如可以例举出家蚕(Bombyx mori)、野桑蚕(Bombyxmandarina)、天蚕(Antheraea yamamai)、柞蚕(Anteraea pernyi)、枫蚕(Eriogynapyretorum)、蓖麻蚕(Pilosamia Cynthia ricini)、樗蚕(Samia cynthia)、樟蚕(Caligurajaponica)、印度柞蚕(Antheraea mylitta)、琥珀蚕(Antheraea assama)等蚕产生的蚕丝蛋白、雀蜂(Vespa simillima xanthoptera)幼虫吐出的蜂丝蛋白。
蜘蛛存在最多7种丝腺，产生性质各异的丝心蛋白(蛛丝蛋白)。蛛丝蛋白按其来源器官被命名为具有高韧性的大壶状腺蛛丝蛋白(major ampullate spider protein、MaSp)、具有高伸长能力的小壶状腺蛛丝蛋白(minor ampullate spider protein、MiSp)、以及鞭状腺(flagelliform(Flag))、管状腺(tubuliform)、聚状腺(aggregate)、葡萄状腺(aciniform)及梨状腺(pyriform)的各种蛛丝蛋白。
天然来源的丝心蛋白的更具体示例可以进一步例举出在NCBI GenBank中登录有序列信息的丝心蛋白。例如，可以通过从NCBI GenBank中登录的序列信息中的包含INV作为分类码(DIVISION)的序列中提取出在定义(DEFINITION)中记载有蛛丝蛋白、壶状腺、丝心蛋白、“丝和多肽”或“丝和蛋白质”作为关键词的序列、从CDS中提取出指定产物的字符串、从来源(SOURCE)中提取出在组织类型(TISSUE TYPE)中记载有指定字符串的序列来确认。
结构蛋白可以是源自上述天然结构蛋白的多肽，即重组多肽。例如，重组丝心蛋白在多个异种蛋白质生产系统中产生，其制备方法利用了转基因山羊、转基因蚕、重组植物或哺乳类细胞(参见Science，2002年，295卷，pp.472-476)。
重组丝心蛋白例如可以通过从克隆得到的天然来源的丝心蛋白的基因序列中使一个或多个编码(A)n基序的序列缺失来获得。此外，例如，也可以设计出相当于从天然来源的丝心蛋白的氨基酸序列中缺失一个或多个(A)n基序的氨基酸序列，并通过化学合成编码所设计的氨基酸序列的核酸来获得。在任意情况下，除了可进行相当于从天然来源的丝心蛋白的氨基酸序列中缺失(A)n基序的改造外，还可以进一步进行相当于置换、缺失、插入及/或添加一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列改造。氨基酸残基的置换、缺失、插入及/或添加可以通过部位特异性突变诱发法等本领域技术人员熟知的方法来进行。具体而言，可以根据Nucleic Acid Res.10，6487(1982)、Methods in Enzymology，100，448(1983)等文献中记载的方法来进行。
大吐丝管牵引丝蛋白质的重组多肽例如可以表示为包含式1：[(A)n基序-REP]m所示的结构域序列的蛋白质(此处，式1中，(A)n基序表示由4～20个氨基酸残基构成的氨基酸序列，并且(A)n基序中的丙氨酸残基数相对于总氨基酸残基数为80％以上。REP表示由10～200个氨基酸残基构成的氨基酸序列。m表示8～300的整数。多个存在的(A)n基序可以为彼此相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列。多个存在的REP可以为彼此相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列)。
胶原蛋白的重组多肽例如可以例举出包含式2：[REP2]o所示的结构域序列的蛋白质(此处，式2中，o表示5～300的整数。REP2表示由Gly-X-Y构成的氨基酸序列，X及Y表示除Gly以外的任意氨基酸残基。多个存在的REP2可以为彼此相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列。)。
节肢弹性蛋白的重组多肽例如可以例举出含有式3：[REP3]p表示的结构域序列的蛋白质(在此，式3中，p表示4～300的整数。REP3表示由Ser-J-J-Tyr-Gly-U-Pro构成的氨基酸序列。J表示任意的氨基酸残基，特别是优选为从由Asp、Ser以及Thr构成的群中选择的氨基酸残基。U表示任意的氨基酸残基，特别是优选为从Pro、Ala、Thr以及Ser构成的群中选择的氨基酸残基。多个存在的REP3可以是彼此相同的氨基酸序列，也可以是不同的氨基酸序列)。
弹性蛋白的重组多肽例如可以例举出NCBI的Genbank登录号AAC98395(人)、I47076(羊)、NP786966(牛)等具有氨基酸序列的蛋白质。
角蛋白的重组多肽例如可以例举出山羊(Capra hircus)的I型角蛋白等。
酶例如可以例举出聚合酶、谷氨酰胺酶等，激素例如可以例举出胰岛素、褪黑激素等，抗体例如可以例举出免疫球蛋白G、免疫球蛋白M等。
例如，通过下述方法将编码重组蛋白的核酸(有时称为“重组蛋白基因”)导入宿主细胞中，可以在宿主细胞中表达重组蛋白。
(宿主细胞)
本发明中的“宿主细胞”是指产生目标物质的宿主细胞，“产生目标物质”是指用培养基培养细胞时具有可从细胞或培养基中回收目标物质程度的生产能力。优选细胞是经过基因工程改造的宿主细胞，并且与该细胞野生型菌株或非改造菌株相比具有生产更多目标物质的能力。宿主细胞优选重组宿主细胞，例如通过将重组蛋白基因导入宿主细胞来获得。
宿主细胞可以是具有重组蛋白表达结构用于表达重组蛋白的重组宿主细胞。重组蛋白表达结构是用于选择性表达重组蛋白的结构，可以使用众所周知的重组蛋白表达结构。通过具有重组蛋白表达结构，可以大量表达重组蛋白。具有重组蛋白表达结构的目标物质生产细胞例如可通过将具有编码重组蛋白的DNA的表达载体导入细胞来获得。
本实施方式的宿主细胞是能够表达外源蛋白即能够表达重组蛋白的细胞，通过利用基因工程方法将重组蛋白基因导入宿主细胞来获得。另外，在本说明书中，宿主细胞是指经重组蛋白基因重组的重组细胞，只在明显不会混淆的情况下，经重组蛋白基因重组前的细胞有时也会称为宿主细胞。
编码重组蛋白的核酸的制备方法没有特别限制。例如，采用编码改造丝心蛋白的核酸的情况下，可以利用编码天然丝心蛋白的基因，通过聚合酶链式反应(PCR)等进行扩增和克隆，然后通过利用基因工程方法改造的方法或者化学合成的方法来制备所需核酸。核酸的化学合成方法也没有特别限制，例如，可以根据从NCBI网络数据库等获取的蛋白质的氨基酸序列信息，利用PCR等对使用AKTA oligopilot plus 10/100(GE Healthcare Japan株式会社)等自动合成得到的寡核苷酸进行连接，通过这种方法化学合成基因。此时，为了便于对蛋白质进行纯化及/或确认，可以合成编码如下蛋白质的核酸，该蛋白质由在上述氨基酸序列N末端添加由起始密码子及His10标签组成的氨基酸序列后得到的氨基酸序列组成。
调控序列是控制宿主细胞中重组蛋白表达的序列(例如，启动子、增强子、核糖体结合序列、转录终止序列等)，可根据宿主细胞种类适当选择。启动子可以使用在宿主细胞中发挥功能且能够诱导表达重组蛋白的诱导型启动子。诱导型启动子是可根据诱导物质(诱导表达剂)的存在、阻遏分子的不存在、或者温度、渗透压或pH值的上升或下降等物理因素来控制转录的启动子。
表达载体种类可根据宿主细胞种类来适当选择质粒载体、病毒载体、柯斯质粒载体、福斯质粒载体、人工染色体载体等。表达载体优选使用能够在宿主细胞中自主复制或者能够整合到宿主细胞染色体中且在能够转录编码蛋白质的核酸的位置含有启动子的载体。
用于转基因的宿主细胞的种类只要是用于转基因即可，并没有特别限定，但优选使用原核生物、以及酵母、丝状真菌、昆虫细胞、动物细胞及植物细胞等真核生物中的任意种类。例如，可以选自大肠杆菌、酵母、芽孢杆菌属微生物、棒状杆菌属微生物、丝状真菌及动物细胞构成的群中。
原核生物的宿主细胞的优选示例可以例举出属于埃希氏菌属、短芽孢杆菌属、沙雷氏菌属、芽孢杆菌属、微杆菌属、短杆菌属、棒状杆菌属及假单胞菌属等的细菌。属于埃希氏菌属的微生物例如可以例举出大肠埃希氏菌等。属于短芽孢杆菌属的微生物例如可以例举出土壤短芽孢杆菌等。属于沙雷氏菌属的微生物例如可以例举出液化沙雷氏菌等。属于芽孢杆菌属的微生物例如可以例举出枯草芽孢杆菌等。属于微杆菌属的微生物例如可以例举出嗜氨微杆菌等。属于短杆菌属的微生物例如可以例举出叉开短杆菌等。属于棒状杆菌属的微生物例如可以例举出产氨棒杆菌等。属于假单胞菌(Pseudomonas)属的微生物例如可以例举出恶臭假单胞菌等。
以原核生物作为宿主细胞时，导入编码蛋白质的核酸的载体例如可以例举出pBTrp2(勃林格殷格翰公司制)、pGEX(Pharmacia公司制)、pUC18、pBluescriptII、pSupex、pET22b、pCold、pUB110、pNCO2(日本特开2002-238569号公报)等。
真核生物的宿主细胞例如可以例举出酵母及丝状真菌(霉菌等)。酵母例如可以例举出属于酵母属、毕赤酵母属、裂殖酵母属等的酵母。丝状真菌例如可以例举出属于曲霉属、青霉属、木霉(Trichoderma)属等的丝状真菌。
以真核生物作为宿主细胞时，导入编码重组蛋白的核酸的载体例如可以例举出YEp13(ATCC37115)、YEp24(ATCC37051)等。向上述宿主细胞中导入表达载体的方法只要是向上述宿主细胞中导入DNA的方法均可以使用。例如，可以例举出使用钙离子的方法〔Proc.Natl.Acad.Sci.USA,69,2110(1972)〕、电穿孔法、原生质球法、原生质体法、乙酸锂法、感受态法等。
基于利用表达载体进行转化后的宿主细胞的核酸表达方法除直接表达外，还可以依据分子克隆第2版中记载的方法等进行分泌生产、融合蛋白表达等。
重组蛋白例如可采用如下方法制备，即在培养用培养基中培养利用表达载体进行转化后的宿主细胞，使该蛋白质在培养用培养基中生成并蓄积，然后从该培养用培养基中收集该蛋白质。在培养用培养基中培养宿主细胞的方法可以遵照培养宿主细胞的常用方法。
宿主细胞是大肠杆菌等原核生物或酵母等真核生物时，培养用培养基只要是含有宿主细胞可同化的碳源、氮源及无机盐类等且能够高效进行宿主细胞培养的培养基即可，可以使用天然培养基、合成培养基中的任意种类。
碳源只要是上述转化微生物可同化的物质即可，例如，可以使用葡萄糖、果糖、蔗糖以及含有这些糖的糖蜜、淀粉及淀粉水解物等碳水化合物、乙酸及丙酸等有机酸、以及乙醇及丙醇等醇类。氮源例如可以使用氨、氯化铵、硫酸铵、乙酸铵及磷酸铵等无机酸或有机酸的铵盐、其他含氮化合物、以及蛋白胨、肉提取物、酵母提取物、玉米浆、酪蛋白水解物、豆粕及豆粕水解物、各种发酵菌体及其消化产物。无机盐类例如可以使用磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸镁、硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜及碳酸钙。
大肠杆菌等原核生物或酵母等真核生物的培养例如可以在振荡培养或深部通气搅拌培养等需氧条件下进行。培养温度例如为15～40℃。培养时间通常为16小时～7天。培养中的培养用培养基的pH值优选保持在3.0～9.0之间。培养用培养基的pH值的调整可以使用无机酸、有机酸、碱溶液、尿素、碳酸钙及氨等进行。
此外，培养中可根据需要在培养用培养基中添加氨苄青霉素及四环素等抗生素。对利用使用诱导型启动子作为启动子的表达载体进行转化后的微生物进行培养时，可根据需要在培养基中添加诱导剂。例如，对利用采用lac启动子的表达载体进行转化后的微生物进行培养时，可以在培养基中添加异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷等；对利用采用trp启动子的表达载体进行转化后的微生物进行培养时，可以在培养基中添加吲哚丙烯酸等。
所表达的重组蛋白的分离及纯化可按照常用方法进行。例如，该蛋白质在宿主细胞内以溶解状态表达时，培养结束后通过离心分离回收宿主细胞，使其悬浊于水系缓冲液中，然后利用超声波破碎机、弗氏细胞压碎器、Manton-Gaulin高压匀浆器及戴诺研磨机等将宿主细胞破碎，从而获得无细胞提取液。单独或组合使用蛋白质分离纯化常用方法，即酶处理法、溶剂提取法、利用硫酸铵等的盐析法、脱盐法、利用有机溶剂的沉淀法、使用二乙氨基乙基(DEAE)-琼脂糖及DIAION HPA-75(三菱化成公司制)等树脂的阴离子交换层析法、使用S-Sepharose FF(Pharmacia公司制)等树脂的阳离子交换层析法、使用丁基琼脂糖及苯基琼脂糖等树脂的疏水层析法、使用分子筛的凝胶过滤法、亲和层析法、色谱聚焦法、等电点电泳等电泳法等方法，可以从对该无细胞提取液进行离心分离后得到的上清液中获得纯化标准品。
此外，蛋白质在细胞内形成不溶体来表达时，同样地在回收宿主细胞后，将其破碎并进行离心分离，从而作为沉淀分层回收蛋白质不溶体。回收的蛋白质的不溶体可以利用蛋白变性剂进行可溶化。执行该操作后，利用与上述同样的分离纯化法可以获得蛋白质的纯化标准品。该蛋白质分泌到细胞外时，可以从培养上清液中回收该蛋白质。即，通过利用离心分离等方法对培养物进行处理来获得培养上清液，通过使用与上述同样的分离纯化法可以从该培养上清液中获得纯化标准品。
(宿主细胞残渣)
本实施方式的宿主细胞残渣是从宿主细胞中回收目标物质(如果目标物质是重组蛋白即为重组蛋白)后的细胞残渣。如上述所示，虽然重组蛋白的分离纯化方法根据重组蛋白的状态(溶解状态或不溶体)可能有所不同，但是重组蛋白的回收方法通常都会包含将重组蛋白与宿主细胞来源的蛋白质分离的工序，以避免宿主细胞来源成分、尤其是宿主细胞来源的蛋白质作为杂质混入。因此，回收目标物质后残留的细胞残渣含有宿主细胞来源成分、尤其是宿主细胞来源的膜蛋白、核糖体蛋白等作为主成分。
宿主细胞来源的膜蛋白没有特别限定，可以例举出OmpA、OmpC、OmpF、OmpT、LamB等。膜蛋白的分子量根据宿主细胞种类有所不同，例如是大肠杆菌等时，具有约30kDa以上50kDa以下的分子量。核糖体蛋白具有大约小于30kDa的分子量。
一种实施方式的宿主细胞残渣包含宿主细胞来源的蛋白质，其主成分是宿主细胞来源的膜蛋白或核糖体蛋白。虽然宿主细胞残渣中含有宿主细胞膜蛋白的含量根据宿主细胞种类及分离工序有所不同，但是其相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有20质量％以上，例如，含有30质量％以上、35质量％以上、40质量％以上、50质量％以上，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下。此外，一种实施方式的宿主细胞残渣中含有宿主细胞核糖体蛋白的含量相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有20质量％以上，例如，含有30质量％以上、35质量％以上、40质量％以上、50质量％以上，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下。
另一种实施方式的宿主细胞残渣中含有宿主细胞来源的50kDa以下的蛋白质。宿主细胞来源的50kDa以下的蛋白质例如可以例举出宿主细胞来源的膜蛋白、核糖体蛋白、糖蛋白、脂蛋白等。该50kDa以下的蛋白质相对于宿主细胞残渣干燥物总质量优选含有50质量％以上，例如，含有60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、90质量％以上。此外，该50kDa以下的蛋白质相对于宿主细胞残渣总蛋白优选含有40质量％以上，例如，含有50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、或90质量％以上。
另一种实施方式的宿主细胞残渣可以含有30kDa以上50kDa以下的宿主细胞来源的蛋白质，该30kDa以上50kDa以下的蛋白质可以例举出膜蛋白。该30kDa以上50kDa以下的蛋白质相对于宿主细胞残渣干燥物总质量优选含有20质量％以上，例如，含有30质量％以上、35质量％以上、40质量％以上、50质量％以上，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下、60质量％以下、50质量％以下。该30kDa以上50kDa以下的蛋白质相对于宿主细胞残渣总蛋白优选含有40质量％以上，例如，含有50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、或90质量％以上。
另一种实施方式的宿主细胞残渣中还可以含有小于30kDa的宿主细胞来源的蛋白质，该小于30kDa的蛋白质可以例举出核糖体蛋白。该小于30kDa的蛋白质相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有5质量％以上，例如，含有10质量％以上、20质量％以上、30质量％以上、40质量％以上，此外，例如，含有90质量％以下、80质量％以下、70质量％以下、60质量％以下、50质量％以下。该小于30kDa的蛋白质相对于宿主细胞残渣总蛋白优选含有40质量％以上，例如，含有50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、或90质量％以上。
宿主细胞残渣相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有20质量％～90质量％的总蛋白，例如，含有30质量％～85质量％、40质量％～80质量％、40质量％～70质量％或50质量％～90质量％的总蛋白。总蛋白中，除宿主细胞来源膜蛋白、核糖体蛋白、糖蛋白、脂蛋白等宿主细胞来源蛋白质外，可以含有少量残留的重组蛋白。
宿主细胞残渣中含有重组蛋白的含量相对于宿主细胞残渣干燥物总质量含有10质量％以下、5质量％以下，例如，含有3质量％以下、2质量％以下、1质量％以下或0.5质量％以下。宿主细胞残渣中含有重组蛋白的含量超过0质量％，其含量可以为低于检测极限的量。
宿主细胞残渣中除蛋白质外，还可以含有各种细胞来源成分。例如，可以含有宿主细胞来源的脂质、糖类、盐类及/或核酸。脂质的主成分为细胞膜来源的磷脂，除此之外还可能含有饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸，另外有些脂质检测方法作为脂质还会检测到脂蛋白。大肠杆菌细胞膜中的磷脂谱主要有三种，分别是磷脂酰乙醇胺(PE)0～60％左右、Phosphatidylglycerol(PG)0～30％左右、Cardiolipin(CL)0～17％左右。这类脂质的化学结构中全都含有名为甘油的增塑剂成分。专利国际公开WO/2017/047504号中制作蛋白质树脂成型体时将水的含有率控制在一定量作为增塑剂发挥作用。因此，宿主细胞残渣的细胞膜磷脂(PE、PG、CL)同样可作为增塑剂发挥作用，脂质含量极有可能对含有宿主细胞残渣的成型体的成型温度造成影响。糖类可以包含葡萄糖、果糖、核糖、甘油醛等。核酸可以包含脱氧核糖核酸、核糖核酸。宿主细胞残渣例如可以包含5质量％～20质量％的脂质、0.1质量％～5质量％的糖类、0.1质量％～5质量％的核酸、0.1质量％～5质量％的盐类。蛋白质以外的宿主细胞残渣来源的核酸类、糖类等可能因加热等对成型体的着色性造成影响。着色原理可能有美拉德反应等。
(宿主细胞残渣的制备方法)
宿主细胞残渣成型体的制备方法包含将产生目标物质的宿主细胞破碎，将目标物质与宿主细胞残渣分离，回收宿主细胞残渣。宿主细胞是表达重组蛋白的宿主细胞时，包含将表达该重组蛋白的宿主细胞破碎，将重组蛋白与宿主细胞残渣分离，回收宿主细胞残渣。
制作表达重组蛋白的宿主细胞如上述所示。用于表达重组蛋白的宿主细胞培养结束后，通过离心分离等回收宿主细胞，使其悬浊于水系缓冲液中，然后将其破碎。破碎方法没有特别限定，可以例举出超声波破碎机、弗氏细胞压碎器、Manton-Gaulin高压匀浆器及戴诺研磨机等，例如可以使用高压匀浆器。
将所得破碎物中的重组蛋白与宿主细胞残渣分离的方法根据重组蛋白性质而有所不同。重组蛋白在宿主细胞内以溶解状态表达时，通过对破碎宿主细胞后所得的无细胞提取液进行离心分离，从而分离成含有重组蛋白的上清液分层与含有宿主细胞残渣的沉淀分层。另一方面，重组蛋白在宿主细胞内形成不溶体来表达时，同样地在回收宿主细胞后将其破碎，然后进行离心分离，从而分离成含有重组蛋白不溶体的沉淀分层与含有宿主细胞残渣的上清液分层。
宿主细胞残渣通过离心分离作为与重组蛋白分离的上清液分层或沉淀分层回收。一种实施方式中，宿主细胞残渣通过离心分离作为上清液分层与沉淀分层的重组蛋白分离。这种情况下，重组蛋白是不溶性。可以对所得上清液分层即宿主细胞残渣进行热处理、酸凝集或乙醇类凝集，使宿主细胞残渣沉淀，将其作为沉淀分层回收。此外，作为沉淀分层回收后，可以适当清洗。回收的宿主细胞残渣可以在成型前进一步纯化。纯化可以通过用碱或酸清洗等来进行。进而，从保存角度来看，可以将回收的宿主细胞残渣制成冻干粉。
另一种实施方式中，宿主细胞残渣通过离心分离作为沉淀分层与上清液分层的重组蛋白分离。这种情况下，重组蛋白是水溶性。可以直接使用该沉淀分层，也可以清洗沉淀分层，作为清洗上清液回收后，使其再次沉淀。这种回收工序例如可以是将表达重组蛋白的宿主细胞破碎，作为沉淀分层回收与重组蛋白分离的宿主细胞残渣，用水溶液清洗沉淀分层，作为清洗上清液回收宿主细胞残渣的工序。重组蛋白与宿主细胞残渣的分离例如可以通过离心分离进行。清洗所得沉淀分层时，可以用水或水溶液清洗，水溶液例如可以是含有表面活性剂的水溶液。表面活性剂可以例举出阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、中性表面活性剂等。优选阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂可以例举出羧酸型、磺酸型、硫酸酯型、磷酸酯型等，硫酸酯型可以例举出十二烷基硫酸钠(SDS)、烷基硫酸酯盐(AS)、聚氧化乙烯烷基硫酸酯盐(AES)。硫酸酯型优选十二烷基硫酸钠(SDS)。表面活性剂清洗优选使用对宿主细胞残渣中所含蛋白质以外成分例如脂质的含量造成影响且能够使部分脂质含在清洗上清液中的表面活性剂。作为清洗上清液回收后，例如可以通过热处理、酸凝集或乙醇类凝集使其凝集，将宿主细胞残渣作为沉淀分层回收。
回收或纯化的宿主细胞残渣例如可以制成干粉、溶液、颗粒、丸状、薄膜等。干燥方法可以例举出冻干、真空冻干、热风干燥等。冻干例如可以使用冻干机FDU-1200型(EYELA东京理化器械株式会社)进行。
(功能附加材料)
粘合剂除蛋白质外，还可以含有功能附加材料。功能附加材料是用于向粘合剂附加功能的材料，上述功能附加材料例如可以例举出用于附加强度(尤其是弯曲强度)的强度附加剂、用于附加保水性和吸水性的吸水剂、用于附加除臭效果的除臭剂等。功能附加材料具体而言例如可以是木屑等纤维素，可以是木炭、活性炭、多孔质体等，多孔质体可以是二氧化硅、陶瓷(废料)、碳酸钙(贝壳)、多孔混凝土等无机类多孔质体。功能附加材料优选强度附加材料，该强度附加剂的耐热温度只要为100℃以上即可，例如优选110℃以上、120℃以上、130℃以上。功能附加材料相对于上述粘合剂总质量为5质量％以上，优选10质量％以上、40质量％以上、小于50质量％。
(被粘合物体)
本发明的粘合剂可用于粘合各种物体(被粘合物体)。被粘合物体例如可以例举出金属材料、纤维素材料、蛋白质材料、树脂材料、矿物及无机质材料、纤维材料等物体。金属材料可以例举出铁、铜、合金类等，纤维素材料可以例举出木片、纸、纸浆、纤维素纤维等，蛋白质材料可以例举出丝心蛋白、蛛丝蛋白等，树脂材料可以例举出尿素树脂、三聚氰胺树脂、酚醛树脂、聚乙烯树脂、ABS、聚乳酸等，多孔质体、石膏可以例举出二氧化硅、碳酸钙、硅藻土等，纤维材料可以例举出纤维、丝、布料等。
本说明书中，两个以上被粘合物体利用本发明的粘合剂粘合(接合)而得到的物体称为接合体。接合体中，两个以上被粘合物体可以是相同材料，也可以是不同材料。接合体中，两个以上被粘合物体通过粘合剂粘合，粘合剂以与被粘合物体至少一部分接触或者包覆被粘合物体周围至少一部分的方式将两个以上被粘合物体彼此之间粘合。
〔接合体〕
一种实施方式的接合体包含第一物体、第二物体、介于第一物体与第二物体之间的粘合层，其中，第一物体及第二物体通过粘合层接合，粘合层是由含有50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。
第一物体及第二物体没有特别限定，可以例举出金属材料、纤维素材料、蛋白质材料、树脂材料、矿物及无机质材料、纤维材料等。金属材料可以例举出铁、铜、合金类等，纤维素材料可以例举出木片、纸、纸浆、纤维素纤维等，蛋白质材料可以例举出丝心蛋白、蛛丝蛋白等，树脂材料可以例举出尿素树脂、三聚氰胺树脂、酚醛树脂、聚乙烯树脂、ABS、聚乳酸等，多孔质体、石膏可以例举出二氧化硅、碳酸钙、硅藻土等，纤维材料可以例举出纤维、丝、布料等。第一物体及第二物体可以是相同材料的物体，也可以是不同材料的物体。
粘合剂如上述所示。粘合层是通过例如干燥或加热加压处理等将粘合剂树脂化等而形成的层。粘合层形状没有特别限定，其厚度也没有特别限定，只要在发挥粘合层功能的范围内即可，例如可以是50μm～1000μm。
粘合剂可以含有功能附加材料，这种情况下粘合层至少在其表面及/或内侧含有功能附加材料。粘合层利用粘合剂的蛋白质及/或功能附加材料将第一物体及第二物体接合。
粘合层相对于粘合层总质量含有20质量％～90质量％的总蛋白，例如，含有30质量％～85质量％、40质量％～80质量％、40质量％～70质量％或50质量％～90质量％的总蛋白。
另一种实施方式的接合体包含多个被粘合物体、以介于多个被粘合物体彼此之间及/或包覆多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，上述粘合层是由含有50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。此处的被粘合物体可以是上述第一物体及第二物体，多个物体可以相同，也可以不同。粘合剂可以含有功能附加材料，这种情况下接合体至少在其表面及/或内侧含有功能附加材料。
〔接合体的制备方法〕
一种实施方式的接合体的制备方法，上述接合体包含第一物体、第二物体、介于第一物体与第二物体之间的粘合层，其中，第一物体及第二物体通过粘合层接合，粘合层是由含有50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层，上述制备方法包含将第一物体、粘合剂及第二物体依次层压，通过干燥或加热加压处理将粘合剂形成粘合层，从而使第一物体及第二物体接合的工序。层压方式根据粘合剂的形态有所不同，粘合剂为干粉、颗粒、丸状、薄膜等固体时，可以直接层压到第一物体或第二物体上形成层。此外，粘合剂为溶液等液体时，可以通过将其涂布到第一物体及/或第二物体上形成涂膜来进行层压。
另一种实施方式的接合体的制备方法，上述接合体包含多个被粘合物体、以介于该多个被粘合物体彼此之间及/或包覆该多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，其中，粘合层是由含有50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层，制备方法包含将多个被粘合物体与粘合剂混合，通过干燥或加热加压处理将粘合剂形成粘合层，从而使上述多个被粘合物体接合的工序。混合方法没有特别限定，本领域技术人员可根据粘合剂及被粘合物体的形态适当选择该混合方法，例如，可以使用搅拌机进行混合。搅拌机可以例举出V型搅拌机等。
粘合剂是液体涂膜时，可通过使其干燥来形成接合体。干燥温度例如可以是20～60℃。干燥时间例如可以是12～48小时。加热加压可以通过模压成型来进行，加热温度没有特别限定，例如，可以是100℃以上、110℃以上、120℃以上、130℃以上，此外，可以是200℃以下、170℃以下、150℃以下，例如，优选110℃～170℃、或者130℃～150℃。加压没有特别限定，只要是10Pa～100Pa即可，例如可以是20Pa～80Pa、或者30Pa～50Pa。
〔地基改良用注入材料〕
一种实施方式的粘合剂可以用作地基改良用注入材料。地基改良用注入材料是注入砂地基等软地基中用于增加地基剪切强度的材料。本发明的粘合剂是可生物降解粘合剂，因此在使用含有本发明粘合剂的本发明地基改良用注入材料对地基进行过强化的土壤中，注入材料会随着时间逐渐分解，因而不含土壤不需要的成分，具有挖掘地基时产生的土壤能直接再利用的优点。
一种实施方式的地基改良用注入材料除作为粘合剂的宿主细胞残渣外，还可以含有水等使注入顺畅的液体、其他可生物降解聚合物等。注入方法只要是普通的渗透固化处理工法即可，注入量可根据所需地基强度由本领域技术人员任意选择。使用地基改良用注入材料的地基可以例举出沙地、山坡斜面、普通住宅或大型建筑用软土地基等，但并不限定于此。
〔灰浆类似体及混凝土类似体〕
一种实施方式的粘合剂可用作建筑用灰浆的替代品(本说明书中称为“灰浆类似体”)。普通灰浆由水泥与沙子等细骨材混合搅拌而成。水泥是指通过水或液剂等进行水合或聚合后硬化的粉体，广义上是指沥青、胶、树脂、石膏、石灰等以及将这些组合而成的所有粘合剂。一种实施方式的灰浆类似体含有作为粘合剂的宿主细胞残渣，进而，还可以含有氢氧化钙等碱性物质、氧化铝、氢氧化钠或石膏等普通水泥成分，此外，可以含有或不含沙子等细骨材。灰浆类似体可通过将宿主细胞残渣、其他成分与水适量混合搅拌来获得。
向上述灰浆类似体中混合沙子等细骨材及小石子(砂砾)等粗骨材后用作混凝土的替代品(本说明书中称为“混凝土类似体”)。一种实施方式的混凝土类似体除作为粘合剂的宿主细胞残渣外，还含有沙子等细骨材及小石子(砂砾)等粗骨材。此外，另一种实施方式的混凝土类似体除上述灰浆类似体外，还含有沙子等细骨材及小石子(砂砾)等粗骨材。此处，细骨材直径为5mm以下，粗骨材直径超过5mm。将混凝土类似体设为1重量份，分别以0.5～3重量份及0.5～5重量份混入细骨材及粗骨材，即可获得灰浆类似体。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行更详细的说明，但只要不偏离本发明的技术思想，本发明并不限于这些实施例。
(1)制作目标结构蛋白表达菌株
从GenBank网站数据库获得金纺蜘蛛(Nephila clavipes)来源的丝心蛋白(GenBank登录号：P46804.1、GI：1174415)的碱基序列及氨基酸序列后，出于提高生产效率的目的，实施氨基酸残基的置换、插入及缺失，进而在N末端附加序列号2所示氨基酸序列(标签序列及铰链序列)，设计出具有序列号1所示氨基酸序列且为不溶性蛋白质的重组丝心蛋白(PRT799)。同样地，出于提高生产效率的目的，实施氨基酸残基的置换、插入及缺失，进而在N末端附加序列号2所示氨基酸序列(标签序列及铰链序列)，设计出具有序列号3所示氨基酸序列且为不溶性蛋白质的重组丝心蛋白(以下也称为“PRT643”)。同样地，出于提高生产效率的目的，实施氨基酸残基的置换、插入及缺失，进而在N末端附加序列号2所示氨基酸序列(标签序列及铰链序列)，设计出具有序列号4所示氨基酸序列的重组干扰素γ(以下称为“PRT662”)。
接着，分别委托合成编码PRT643、PRT799及PRT662的基因。其结果得到在基因5'末端上游不远处附加NdeI位点并在3'末端下游不远处附加EcoRI位点的基因。将该基因克隆到克隆载体(pUC118)中后，利用NdeI及EcoRI进行限制酶处理，重组成蛋白质表达载体pET-22b(+)。
(2)表达目标结构蛋白
用分别含有编码上述所得PRT643、PRT799及PRT662的基因的pET22b(+)表达载体对大肠杆菌BLR(DE3)进行转化。在含有氨苄青霉素的2mL LB培养基中培养转化后大肠杆菌15小时后，将该培养液添加到100mL表1所示种子培养用培养基中，使OD600达到0.005。将培养液温度保持在30℃，用烧瓶继续培养约15小时，直至OD600达到5，得到种子培养液。
[表1]
试剂 浓度(g/L)
葡萄糖 5.0g/L
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 4.0g/L
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> 9.3g/L
酵母提取物 6.0g/L
氨苄青霉素 0.1g/L
将所得种子培养液添加到加有500mL表2所示生产培养基的发酵缸中，使OD600达到0.05。将培养液温度保持在37℃，将pH值恒定控制在pH6.9，将培养液中的溶解氧浓度维持在溶解氧饱和浓度的20％进行培养。另外，消泡剂使用ADEKA NOL LG-295S(株式会社ADEKA制)。
[表2]
试剂 浓度(g/L)
葡萄糖 12.0g/L
KH<sub>2</sub>PO<sub>1</sub> 9.0g/L
MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 2.4g/L
酵母提取物 15.0g/L
FeSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 0.04g/L
MnSO<sub>4</sub>·5H<sub>2</sub>O 0.04g/L
CaCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O 0.04g/L
LG-295S(消泡剂) 0.1mL/L
生产培养基中的葡萄糖完全消耗后，立即以1mL/分钟的速度添加料液(葡萄糖455g/1L、酵母提取物120g/1L)。将培养液温度保持在37℃，将pH值恒定控制在pH6.9进行培养。此外，将培养液中的溶解氧浓度维持在溶解氧饱和浓度的20％，培养20小时。然后，向培养液中添加1M的异丙基-β-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)水溶液，使其最终浓度为1mM，并诱导表达目标蛋白质。在添加IPTG后经过20小时的时间点，对培养液进行离心分离，回收菌体。使用由添加IPTG前和添加IPTG后的培养液调配的菌体进行SDS-PAGE，出现取决于添加IPTG的目标蛋白质尺寸条带后，确认表达目标蛋白质。
(3)纯化结构蛋白
将添加IPTG后经过2小时回收的菌体用20mM Tris-HCl缓冲液(pH7.4)清洗。使清洗后菌体悬浊于含有约1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)的20mM Tris-HCl缓冲液(pH7.4)中，使用高压匀浆器(GEA Niro Soavi公司)对菌体进行反复破碎。用离心分离机(久保田公司制造的“Model7000”)对破碎后细胞进行离心分离(11,000g、10分钟、室温)，获得沉淀物。用20mMTris-HCl缓冲液(pH7.4)或表面活性剂3w/v％SDS清洗所得沉淀物，直至其达到高纯度。使清洗后沉淀物悬浊于8M胍缓冲液(8M胍盐酸盐、10mM磷酸二氢钠、20mM NaCl、1mM Tris-HCl、pH7.0)中，使其达到100mg/mL的浓度，在60℃下用搅拌机搅拌30分钟，使其溶解。溶解后，使用透析管(三光纯药株式会社制造的纤维素管36/32)用水进行透析。将透析后所得白色凝集蛋白质离心分离后回收，用冻干机除去水分，回收冻干粉。
(4)再次纯化表达目标结构蛋白的宿主细胞残渣
(a)从清洗废液中获得的宿主细胞残渣
对经过编码PRT643的基因转化的大肠杆菌，清洗上述破碎后细胞沉淀物(含有PRT643的沉淀物)时，使用3％表面活性剂。用离心分离机对清洗后细胞进行离心分离(11,000g、10分钟、室温)获得废弃离心上清液。在80℃下对该清洗废弃离心上清液进行2小时灭活处理，再添加等体积的clynsolveP-7(日本酒精销售株式会社)，放置一天，获得含有蛋白质的沉淀物(图1)。然后使用离心分离机，在室温下以11,000g离心分离10分钟，回收含有凝集蛋白质的沉淀物。接着，使用离子交换水清洗沉淀物，进行离心分离回收沉淀物，将该清洗工序重复3次后，用冻干机除去水分，获得实施例1(PRT643)的宿主细胞残渣的冻干粉。
(b)从细胞破碎液的离心上清液中获得的宿主细胞残渣
对重组成PRT799的宿主细胞，用上述高压匀浆器(GEA Niro Saovi公司制造的“Panda Plus 2000”)破碎细胞，使用离心分离机(久保田公司制造的“Model7000”)在室温下以11,000g离心分离10分钟，使目标蛋白质沉淀，回收含有宿主细胞残渣的离心上清液。在80℃下对所得离心上清液进行2小时灭活处理，宿主细胞残渣作为固态物沉淀(图2)。在室温下以11,000g对固体物进行10分钟离心分离将其回收，使其再次悬浊于离子交换水中，使用5N氢氧化钠进行中和，将pH值保持在7左右，在室温下用搅拌机搅拌2小时。然后进行离心分离，使固体物再次悬浊于离子交换水中，使用3M柠檬酸，将pH值调节到3.5，使固体物中的蛋白质凝集，使用离心分离机在室温下以11,000g离心分离10分钟，回收含有凝集蛋白质的沉淀物。接着，使用离子交换水清洗沉淀物，进行离心分离回收沉淀物，将该清洗工序重复3次后，用冻干机除去水分，获得实施例2(PRT799)的宿主细胞残渣的冻干粉。对重组成PRT662的宿主细胞也进行相同操作，获得实施例3(PRT662)的宿主细胞残渣的冻干粉。
(5)宿主细胞残渣的定性及定量分析
通过BCA法测量所得实施例1～3的宿主细胞残渣冻干粉中的蛋白质浓度。另外，通过BCA法测量蛋白质时使用了Takara Bio公司制造的Pierce(注册商标)BCA ProteinAssay Kit。测量结果表明，实施例1的宿主细胞残渣冻干粉含有约61.5±1.5质量％的蛋白质，实施例2的宿主细胞残渣冻干粉含有约81.5±3.7质量％的蛋白质，实施例3的宿主细胞残渣冻干粉含有约57.2±5.0质量％的蛋白质。
同时对实施例1～3的冻干粉进行了SDS-PAGE电泳。通过Oriole染色确认蛋白质存在，使用分析软件Image Lab(Bio-RAD Laboratories Inc.)进行图像分析，从而确认主条带为约39kDa的蛋白质(图3：实施例1、图4：实施例2、图11：实施例3)。根据文献(例如，Meuskens,I.等人，A new strain collection for improved expression of outermembrane proteins.Frontiers in cellular and infection microbiology,7,464(2017))推测宿主细胞残渣主成分即约39kDa的蛋白质是分子量约为39kDa的OmpF(OuterMembrane Protein F)及OmpC(Outer Membrane Protein C)的膜蛋白。推测其他可能的膜蛋白例如有LamB(＜49kDa)、OmpA(＜35kDa)等。另一方面，推测宿主细胞残渣的其他成分即分子量约为4～30kDa的蛋白质为宿主细胞的核糖体蛋白。
使用分析软件Image Lab对实施例1～3的宿主细胞残渣的分子量分布进行分析，用于确认实施例1～3的宿主细胞残渣中所含蛋白质的组成和分布。其结果如图5所示。图5(a)表示实施例1的宿主细胞残渣的分子量分布百分比和发光强度的结果，图5(b)表示实施例2的宿主细胞残渣的分子量分布百分比和发光强度的结果，图12表示实施例3的宿主细胞残渣的分子量分布百分比和发光强度的结果。根据图5可以确认，实施例1中，约39kDa的蛋白质(OmpF/OmpC)占宿主细胞残渣中总蛋白的约38质量％，而分子量约为4～30kDa的蛋白质(核糖体蛋白)占宿主细胞残渣中总蛋白的约56质量％，并且目标蛋白质占宿主细胞残渣中总蛋白的2质量％以下。可以确认，实施例2中，约39kDa的蛋白质(OmpF/OmpC)占宿主细胞残渣中总蛋白的约35质量％，而分子量约为4～30kDa的蛋白质(核糖体蛋白)占宿主细胞残渣中总蛋白的约57质量％，并且目标蛋白质占宿主细胞残渣中总蛋白的1质量％以下。此外，根据图12可以确认，实施例3中，约39kDa的蛋白质(OmpF/OmpC)占宿主细胞残渣中总蛋白的约75质量％，而分子量约为4～30kDa的蛋白质(核糖体蛋白)占宿主细胞残渣中总蛋白的约19质量％，并且目标蛋白质占宿主细胞残渣中总蛋白的1质量％以下。
表3总结出上述测量的实施例1及2宿主细胞残渣的冻干粉(实施例1及2的蛋白质粘合剂)的组成。
[表3]
Figure BDA0003562409790000271
(6)接合体及其制备方法
(a)制备木片接合体
木片接合体用加压成型机制备。加压成型机的不锈钢夹具(模具)为圆柱形，具有剖面为35mm×15mm长方形的通孔。在不锈钢夹具上设置35mm×15mm×2mm柏木木片，作为第一被粘体。此外，称取上述所得实施例1的粘合剂0.7g，导入到第一被粘体上形成大致均匀的层，作为粘合层的前驱体。进而，将另一块35mm×15mm×2mm柏木木片(第二被粘体)设置在粘合剂的层上，使用热压机以温度130℃、压力30MPa加热加压5分钟，获得木片接合体(实施例3)。可以确认到两块木片(被粘体)之间形成有由宿主细胞残渣即粘合剂组成的约1mm厚的粘合层(图6)。
(b)制备木片接合体
木片接合体使用与上述相同的加压成型机制备。在不锈钢夹具上设置35mm×15mm×2mm柏木木片，作为第一被粘体。此外，称取上述所得实施例1的粘合剂0.7g，导入到第一被粘体上形成大致均匀的层，作为第一粘合层的前驱体。将另一块35mm×15mm×2mm柏木木片(第二被粘体)设置在粘合剂的层上，并导入实施例1的粘合剂0.7g，形成大致均匀的层(第二粘合层的前驱体)，进而，将再一块35mm×15mm×2mm柏木木片(第三被粘体)设置在粘合剂的层上。使用热压机以温度130℃、压力30MPa对该层压体进行加热加压5分钟，获得木片接合体(实施例4)。可以确认到第一被粘体与第二被粘体之间、以及第二被粘体与第三被粘体之间分别形成有由宿主细胞残渣即粘合剂组成的约1mm厚的第一粘合层及第二粘合层(图7)。
(c)制备木屑接合体(木屑残渣复合成型体)
通过使用(岩谷产业粉碎混合机800DG IFM-800DG)将5mm×5mm×1cm柏木工件破碎来准备木屑接合体(木屑残渣复合成型体)。将准备好的木屑与实施例2的宿主细胞残渣的冻干粉按图8所示混合比例混合，按照(6)的(a)的制备方法以130℃或150℃温度制作出实施例5-1、实施例5-2、实施例6-1及实施例6-2的木屑接合体(木屑残渣复合成型体)。所得接合体的照片及外观考察如图8所示。
(d)制备木屑接合体(木屑残渣复合成型体)
按照上述(a)的制备方法以外部加压条件73kN(约50MPa)、成型温度130℃制作出35mm×25mm×1.75mm长方体的成型体。成型体中的木屑/宿主细胞残渣的比例分别为100/0(比较例2的成型体)、80/20(实施例7的木屑接合体(木屑残渣复合成型体))、50/50(实施例8的木屑接合体(木屑残渣复合成型体))、0/100(比较例3的成型体)。
在Autograph(岛津制作所株式会社制、AG-X)上使用笼状夹具对比较例2的成型体、实施例7及8的木屑接合体、比较例3的成型体进行三点弯曲试验。使用的负载传感器为50kN。此时，将三点弯曲的支点间距离固定为27mm，将测量速度设为1mm/分钟。此外，用微型游标卡尺测量模压成型体的尺寸，将其设置在夹具上进行测量。弯曲模数根据0.05～0.25％的位移(形变)求出。其结果如图9所示。将比较例2的成型体的弯曲强度设为1单位，实施例7的木屑接合体的最大应力为1.43单位，实施例8的木屑接合体的最大应力为1.66单位。比较例3的成型体的最大应力为1.37单位。弯曲试验后的破坏程度和表面考察如图10所示。即，木屑比例越大，成型体的破坏形态就越倾向于延性破坏。
(7)灰浆类似体及混凝土类似体的制备方法
(a)灰浆类似体
称取上述所得宿主细胞残渣的冻干粉(实施例2)1.0g，按表4所示组成依次添加氢氧化钙、氯化铝、氢氧化钠、离子交换水，混合均匀，获得灰浆类似体。将该灰浆类似体随机涂到基板上(图13)。该灰浆类似体具有类似灰浆的物性。
[表4]
组成(添加顺序) 重量(g) 质量百分率(％)
宿主细胞残渣 1.0 14.9
Ca(OH)<sub>2</sub> 0.5 7.5
A1Cl<sub>3</sub>·6H<sub>2</sub>0 0.2 3.0
5N NaOH水溶液 1.3 19.4
离子交换水 3.7 55.2
灰浆类似体合计 6.7 100
(b)混凝土类似体
向上述所得灰浆类似体添加约1/3重量的海沙(富士胶片和光纯药)和约1/3重量的小石子后进行混合(表5)。将该混合物成型为立方体或圆锥形，在室温下放置，获得宿主细胞残渣的混凝土类似体(图14)。通过灰浆类似体粘合的海沙及小石子坚硬，即使用手指等施加压力按压，也不会破碎。
[表5]
Figure BDA0003562409790000301
序列表
<110> 丝芭博株式会社
<120> 蛋白质粘合剂、接合体及其制备方法
<130> FP20-0241
<150> JP2019-180475
<151> 2019-09-30
<160> 4
<170> PatentIn 3.5 版
<210> 1
<211> 2375
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT799
<400> 1
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
20 25 30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr
35 40 45
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
50 55 60
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
65 70 75 80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
85 90 95
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
100 105 110
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
115 120 125
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130 135 140
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
145 150 155 160
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala
165 170 175
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
180 185 190
Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
195 200 205
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly
210 215 220
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
225 230 235 240
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
245 250 255
Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
260 265 270
Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
275 280 285
Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln
290 295 300
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
305 310 315 320
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
325 330 335
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
340 345 350
Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln
355 360 365
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
370 375 380
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
385 390 395 400
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
405 410 415
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
420 425 430
Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser
435 440 445
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
450 455 460
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
465 470 475 480
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly
485 490 495
Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
500 505 510
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
515 520 525
Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
530 535 540
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
545 550 555 560
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
565 570 575
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
580 585 590
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
595 600 605
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser
610 615 620
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
625 630 635 640
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
645 650 655
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
660 665 670
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly
675 680 685
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser
690 695 700
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln
705 710 715 720
Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln
725 730 735
Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr
740 745 750
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
755 760 765
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
770 775 780
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
785 790 795 800
Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
805 810 815
Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
820 825 830
Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr
835 840 845
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn
850 855 860
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
865 870 875 880
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
885 890 895
Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
900 905 910
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly
915 920 925
Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
930 935 940
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala
945 950 955 960
Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
965 970 975
Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
980 985 990
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
995 1000 1005
Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly
1010 1015 1020
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro Gly
1025 1030 1035
Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
1040 1045 1050
Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
1055 1060 1065
Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly
1070 1075 1080
Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly
1085 1090 1095
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala
1100 1105 1110
Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
1115 1120 1125
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
1130 1135 1140
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser
1145 1150 1155
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
1160 1165 1170
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
1175 1180 1185
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala
1190 1195 1200
Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
1205 1210 1215
Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
1220 1225 1230
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
1235 1240 1245
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
1250 1255 1260
Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly
1265 1270 1275
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
1280 1285 1290
Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly
1295 1300 1305
Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln
1310 1315 1320
Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln
1325 1330 1335
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala
1340 1345 1350
Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala
1355 1360 1365
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
1370 1375 1380
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly
1385 1390 1395
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
1400 1405 1410
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala
1415 1420 1425
Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
1430 1435 1440
Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr
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Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
2720 2725 2730
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
2735 2740 2745
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
2750 2755 2760
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
2765 2770 2775
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro
2780 2785 2790
Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro Gly Ser
2795 2800 2805
Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
2810 2815 2820
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
2825 2830 2835
Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln
2840 2845 2850
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
2855 2860 2865
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala
2870 2875 2880
Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
2885 2890 2895
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly
2900 2905 2910
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly
2915 2920 2925
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
2930 2935 2940
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly
2945 2950 2955
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala
2960 2965 2970
Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser
2975 2980 2985
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
2990 2995 3000
Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
3005 3010 3015
Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
3020 3025 3030
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro
3035 3040 3045
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala
3050 3055 3060
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
3065 3070 3075
Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr
3080 3085 3090
Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr
3095 3100 3105
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala
3110 3115 3120
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser
3125 3130 3135
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln
3140 3145 3150
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
3155 3160 3165
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
3170 3175 3180
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
3185 3190 3195
Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
3200 3205 3210
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly
3215 3220 3225
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
3230 3235 3240
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
3245 3250 3255
Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr
3260 3265 3270
Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
3275 3280 3285
Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
3290 3295 3300
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
3305 3310 3315
Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
3320 3325 3330
Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
3335 3340 3345
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
3350 3355 3360
Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
3365 3370 3375
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro
3380 3385 3390
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
3395 3400 3405
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
3410 3415 3420
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser
3425 3430 3435
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser
3440 3445 3450
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala
3455 3460 3465
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
3470 3475 3480
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
3485 3490 3495
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly
3500 3505 3510
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala
3515 3520 3525
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala
3530 3535 3540
Ser
<210> 4
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRT662
<400> 4
Met His His His His His His Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu
1 5 10 15
Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn
20 25 30
Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp
35 40 45
Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe
50 55 60
Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg
85 90 95
Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val
100 105 110
Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser
115 120 125
Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg
130 135 140
Gly Arg Arg Ala Ser Gln
145 150

Claims (24)

1.一种蛋白质粘合剂，其中，其含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质。
2.如权利要求1所述的粘合剂，其中，其还含有功能附加材料。
3.如权利要求1或2所述的粘合剂，其中，所述30KDa以上50KDa以下的蛋白质含量相对于所述粘合剂总质量为20质量％以上。
4.如权利要求1～3中任一项所述的粘合剂，其中，所述30KDa以上50KDa以下的蛋白质的主成分是膜蛋白。
5.如权利要求4所述的粘合剂，其中，其还含有核糖体蛋白、脂蛋白及/或糖蛋白。
6.如权利要求1～5中任一项所述的粘合剂，其中，小于30KDa的蛋白质相对于所述粘合剂总质量含有5质量％以上。
7.如权利要求6所述的粘合剂，其中，所述小于30KDa的蛋白质的主成分是核糖体蛋白。
8.如权利要求1～7中任一项所述的粘合剂，其中，
所述30KDa以上50KDa以下的蛋白质是宿主细胞残渣中所含的蛋白质，
所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，
所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣。
9.一种粘合剂，其中，
其是含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂，
所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，
所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣。
10.一种接合体，其包含第一物体、第二物体、介于所述第一物体与所述第二物体之间的粘合层，其中，
所述第一物体及所述第二物体通过所述粘合层接合，
所述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。
11.一种接合体，其中，
其包含多个被粘合物体、以介于所述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆所述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，
所述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层。
12.如权利要求10或11所述的接合体，其中，
所述粘合剂还含有功能附加材料，
所述粘合层至少在其表面及/或内侧含有功能附加材料。
13.如权利要求10～12中任一项所述的接合体，其中，
所述粘合层是所述粘合剂通过干燥或加热加压处理得到的层。
14.如权利要求10～13中任一项所述的接合体，其中，
所述30KDa以上50KDa以下的蛋白质的含量相对于所述粘合层总质量为20质量％以上。
15.如权利要求12所述的接合体，其中，
所述功能附加材料为纤维素。
16.如权利要求10～15中任一项所述的接合体，其中，
所述30KDa以上50KDa以下的蛋白质是宿主细胞残渣中所含的蛋白质，
所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，
所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣。
17.一种接合体，其包含第一物体、第二物体、介于所述第一物体与所述第二物体之间的粘合层，其中，
所述第一物体及所述第二物体通过所述粘合层接合，
所述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣。
18.一种接合体，其中，
其包含多个被粘合物体、以介于所述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆所述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，
所述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣。
19.一种制备方法，其是接合体的制备方法，所述接合体包含第一物体、第二物体、介于所述第一物体与所述第二物体之间的粘合层，其中，
所述第一物体及所述第二物体通过所述粘合层接合，
所述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层，
所述制备方法包含将所述第一物体、所述粘合剂及所述第二物体依次层压，通过干燥或加热加压处理将所述粘合剂形成粘合层，从而使所述第一物体及第二物体接合的工序。
20.一种制备方法，其是接合体的制备方法，所述接合体包含多个被粘合物体、以介于所述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆所述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，其中，
所述粘合层是由含有30KDa以上50KDa以下的蛋白质的蛋白质粘合剂组成的粘合层，
所述制备方法包含将所述多个被粘合物体与所述粘合剂混合，通过干燥或加热加压处理将所述粘合剂形成粘合层，从而使所述多个被粘合物体接合的工序。
21.一种制备方法，其是接合体的制备方法，所述接合体包含第一物体、第二物体、介于所述第一物体与所述第二物体之间的粘合层，其中，
所述第一物体及所述第二物体通过所述粘合层接合，
所述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣，
所述制备方法包含将所述第一物体、所述粘合剂及所述第二物体依次层压，通过干燥或加热加压处理将所述粘合剂形成粘合层，从而使所述第一物体及第二物体接合的工序。
22.一种制备方法，其是接合体的制备方法，所述接合体包含多个被粘合物体、以介于所述多个被粘合物体彼此之间及/或包覆所述多个被粘合物体周围至少一部分的方式形成的粘合层，其中，
所述粘合层是由含有宿主细胞残渣的蛋白质粘合剂组成的粘合层，所述宿主细胞是产生目标物质的宿主细胞，所述宿主细胞残渣是从所述宿主细胞中回收所述目标物质后的细胞残渣，
所述制备方法包含将所述多个被粘合物体与所述粘合剂混合，通过干燥或加热加压处理将所述粘合剂形成粘合层，从而使所述多个被粘合物体接合的工序。
23.一种用于增强地基强度的地基改良用注入材料，其中，
其含有如权利要求1～9中任一项所述的粘合剂。
24.一种灰浆类似体或混凝土类似体，其中，
其含有如权利要求1～9中任一项所述的粘合剂。
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Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1085451A (zh) * 1992-07-06 1994-04-20 N·科万柯 粘合剂组合物及其用法
JPH0873612A (ja) * 1994-09-08 1996-03-19 Riken Vitamin Co Ltd 改良された生分解性成形体
US5766331A (en) * 1996-10-25 1998-06-16 Protein Technologies International, Inc. Protein adhesive binder and process for forming a protein adhesive binder
CN1423659A (zh) * 1999-11-12 2003-06-11 法布罗根股份有限公司 重组明胶
CN1871252A (zh) * 2003-09-05 2006-11-29 Gtc生物治疗学公司 在转基因哺乳动物奶中生产融合蛋白的方法
CN1989152A (zh) * 2004-03-26 2007-06-27 Posco公司 贝类生物粘合剂
CN101151148A (zh) * 2005-03-31 2008-03-26 巴斯福股份公司 多肽作为增附剂的用途
CN101460585A (zh) * 2006-06-01 2009-06-17 阿克佐诺贝尔国际涂料股份有限公司 粘合剂体系
WO2015126480A2 (en) * 2013-11-13 2015-08-27 Massachusetts Institute Of Technology Self-assembling underwater adhesives
CN105031717A (zh) * 2015-08-27 2015-11-11 中国人民解放军国防科学技术大学 生物粘合剂及其制备方法和应用
US20150328363A1 (en) * 2012-08-17 2015-11-19 Amsilk Gmbh Use of self-assembling polypeptides as tissue adhesives

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3753945B2 (ja) 2001-02-14 2006-03-08 ヒゲタ醤油株式会社 大腸菌とブレビバチルス属細菌間のプラスミドシャトルベクター
JP2005133224A (ja) 2003-10-29 2005-05-26 Takaaki Maekawa 生分解性樹脂成形材料及びそれを用いた食品容器
CA2458159A1 (en) * 2004-01-22 2005-07-22 The State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Educ Ation On Behalf Of Oregon State University Formaldehyde-free adhesives and lignocellulosic composites made from the adhesives
CA2609552A1 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 Universitat Regensburg Molecular glue
JP2008214432A (ja) * 2007-03-01 2008-09-18 Q P Corp 粘着材組成物および粘着ラベル
JP2015104331A (ja) * 2013-11-29 2015-06-08 キユーピー株式会社 卵アレルギー減感作療法用食品、卵アレルギー減感作療法剤、卵アレルギー減感作療法用食品の製造方法及び卵アレルギー減感作療法剤の製造方法
EP3766686A1 (en) 2015-09-17 2021-01-20 Roberto Velozzi Jerez Load-bearing composite panels, materials, products, and processes to make and use same
JP6830604B2 (ja) 2015-09-18 2021-02-17 Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 モールド成形体及びモールド成形体の製造方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1085451A (zh) * 1992-07-06 1994-04-20 N·科万柯 粘合剂组合物及其用法
JPH0873612A (ja) * 1994-09-08 1996-03-19 Riken Vitamin Co Ltd 改良された生分解性成形体
US5766331A (en) * 1996-10-25 1998-06-16 Protein Technologies International, Inc. Protein adhesive binder and process for forming a protein adhesive binder
CN1423659A (zh) * 1999-11-12 2003-06-11 法布罗根股份有限公司 重组明胶
CN1871252A (zh) * 2003-09-05 2006-11-29 Gtc生物治疗学公司 在转基因哺乳动物奶中生产融合蛋白的方法
CN1989152A (zh) * 2004-03-26 2007-06-27 Posco公司 贝类生物粘合剂
CN101151148A (zh) * 2005-03-31 2008-03-26 巴斯福股份公司 多肽作为增附剂的用途
CN101460585A (zh) * 2006-06-01 2009-06-17 阿克佐诺贝尔国际涂料股份有限公司 粘合剂体系
US20150328363A1 (en) * 2012-08-17 2015-11-19 Amsilk Gmbh Use of self-assembling polypeptides as tissue adhesives
WO2015126480A2 (en) * 2013-11-13 2015-08-27 Massachusetts Institute Of Technology Self-assembling underwater adhesives
US20160220727A1 (en) * 2013-11-13 2016-08-04 Massachusetts Institute Of Technology Self-assembling underwater adhesives
CN105031717A (zh) * 2015-08-27 2015-11-11 中国人民解放军国防科学技术大学 生物粘合剂及其制备方法和应用

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