CN101151148A - 多肽作为增附剂的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含化合物的多层复合材料或贴面基材，其中以重量计所述化合物的至少40％由作为复合材料的至少两个相邻层之间或涂层与基材之间的增附剂的通过肽键连接的α－氨基酸(下文中简称为多肽)组成。

Description

多肽作为增附剂的用途
本发明涉及包含化合物的多层复合材料或贴面基材，其中以重量计该化合物的至少40％由作为复合材料的至少两个相邻层之间或涂层与基材之间的增附剂的通过肽键连接的α-氨基酸(下文中简称为多肽)组成。更具体地，本发明涉及疏水蛋白(Hydrophobin)作为增附剂的用途。
疏水蛋白是大约100至150个氨基酸的小蛋白质，为丝状真菌，例如裂褶菌(Schizophyllum commune)所特有。它们最常见地具有8个半胱氨酸单位。
疏水蛋白具有对界面的显著亲和力并且因而适合于涂布表面。因此有可能将疏水蛋白涂于特富龙(Teflon)上而得到疏水表面。
疏水蛋白可以从天然物质中分离。我们先前的申请DE 10 2005 007 480.4公开了用于制备疏水蛋白的方法。
疏水蛋白在多种应用中的用途已经在现有技术内提出。
WO 96/41882提出疏水蛋白作为乳化剂、增稠剂、表面活性剂用于使疏水表面亲水化、用于改善亲水性基材的防水性、用于水包油乳状液或油包水乳状液的制备。还提出在药学中应用，例如制备软膏剂或乳膏剂，并且还在化妆品中应用，如皮肤保护或者制备洗发香波或护发液。
EP 1 252 516公开了用含疏水蛋白的溶液在30℃至80℃对窗户、接触透镜、生物传感器、医学装置、用于开展实验或用于贮存的容器、船身、固体粒子或载客交通工具的底盘或主体的涂布。
WO 03/53383公开了疏水蛋白用于在化妆品应用中处理角蛋白材料的用途。
WO 03/10331公开了疏水蛋白涂层的传感器，例如测量电极，其中已经将其它非共价的物质例如电活性物质、抗体或酶附着至该传感器。
先前，极为不同的增附剂例如已经用于改善涂层对类型繁多的基材的粘合。根据Rmpp Chemie Lexikon(1990编辑)，合适的增附剂是例如钛酸盐、硅烷、不饱和羧酸的铬络合物。对于粘合剂，特别提到的增附剂是乙烯/丙烯酰胺共聚物、聚合异氰酸酯或活性有机硅化合物。
聚氨基甲酸酯和聚乙烯亚胺也是已知的增附剂。
本发明的目的旨在提供具有良好应用特性并且实现特别良好地粘合多层复合材料的各层或在基材上涂层的替代性增附剂。
因此，找到了如本文开始所定义的多层复合材料或贴面基材。
增附剂
多层复合材料或贴面基材包含在本文开始所定义的多肽作为增附剂。
多肽由通过肽键连接的以重量计至少40％、优选至少70％、特别优选至少90％和极特别优选至少95％或99％的α-氨基酸组成。
在具体的实施方案中，多肽仅由通过肽键连接的α-氨基酸组成。
特别合适的α-氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
多肽优选地包与其它α-氨基酸混合的α-半胱氨酸。
多肽特别优选地由以重量计至少0.1％、特别优选至少0.5％、极特别优选至少1％的半胱氨酸组成。多肽内半胱氨酸含量以重量计通常不超过15％、尤其是10％并且极特别优选地不超过7％。
在具体的实施方案中，多肽是疏水蛋白。
根据本发明的术语“疏水蛋白”意指具有下面通用结构式(I)的蛋白质：Xn-C1-X1-50-C2-X0-5-C3-X1-100-C4-X1-100-C5-X1-50-C6-X0-5-C7-X1-50-C8-Xm(I)，其中X可以是20种天然存在氨基酸(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)中的任意氨基酸。各个X可以相同或不同。紧跟X的各个下标表示氨基酸数目，C是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸，标为C的残基中至少4个残基是半胱氨酸，并且下标n和m彼此独立地是0至500、优选地是15至300的自然数。
根据式(I)的多肽还具有如此的特性，即在每一情况下与具有未涂层玻璃表面的大小相似的水滴的接触角相比，在室温对玻璃表面涂层后，水滴的接触角增加至少20°、优选地至少25°并且特别优选地是30°。
标为C1至C8的氨基酸优选地是半胱氨酸；然而，它们还可以由空间大小相似的其它氨基酸替换，优选地是丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸或甘氨酸。然而，位置C1至C8中至少4个、优选地至少5个、特别优选地至少6个并且尤其至少7个位置由半胱氨酸组成。半胱氨酸可以处于还原状态或可以在彼此间形成二硫桥。特别优选在分子内形成C-C桥，尤其是具有至少1个、优选地2个、特别优选地3个和极特别优选地4个分子内二硫桥。以上所述的半胱氨酸由空间大小相似的其它氨基酸置换有利地包含成对置换可以在彼此间形成分子内二硫桥的那些C位置。
如果半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸也用于由X标示的位置内，通式中各个C位置的编号可以相应改变。
为实施本发明，优选采用具有通式(II)的疏水蛋白：Xn-C1-X3-25-C2-X0-2-C3-X5-50-C4-X2-35-C5-X2-15-C6-X0-2-C7-X3-35-C8-Xm(II)其中X、C及紧跟X和C的下标如上定义，但是下标n和m是0至300间的数字，并且蛋白质还通过以上提及的接触角改变得到区分。
特别优选利用具有式(III)的疏水蛋白：Xn-C1-X5-9-C2-C3-X11-39-C4-X2-23-C5-X5-9-C6-C7-X6-18-C8-Xm(III)，其中X、C及紧跟X和C的下标如上定义，下标n和m是0至200间的数字，并且蛋白质还通过以上提及的接触角改变得到区分，并标为C的残基中至少6个残基是半胱氨酸。特别优选全部残基C是半胱氨酸。
残基Xn和Xm可以是与疏水蛋白天然连接的肽序列，然而，两种残基之一或两种残基还可以是不天然地与疏水蛋白连接的肽序列。这也包括那些残基Xn和/或Xm，在其中天然存在于疏水蛋白内的肽序列已经由不天然存在于疏水蛋白内的肽序列延长。
若Xn和/或Xm是不天然地与疏水蛋白连接的肽序列，则此类序列的长度通常是至少20个、优选地是至少35个、特别优选地是至少50个并且极特别优选地是至少100个氨基酸。不天然地与疏水蛋白连接的这类残基还将在下文中称为融合配偶体。这将表达这样的事实，即蛋白质可以由在自然界中不以这种形式一起存在的至少一个疏水蛋白部分和一个融合配偶体组成。
融合配偶体可以选自多种蛋白质。还有可能多种融合配偶体与一个疏水蛋白部分连接，例如与所述疏水蛋白部分的氨基末端(Xn)及与羧基末端(Xm)连接。然而，还可能例如将两个融合配偶体部分连接至本发明蛋白质的一个位置(Xn或Xm)。
特别合适的融合配偶体部分是天然存在于微生物内、尤其大肠杆菌(E.coli)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)内的蛋白质。此类融合配偶体部分的实例是序列yaad(SEQ ID NO：15和16)、yaae(SEQ ID NO：17和18)和硫氧还蛋白。所述序列中这样的片段或衍生物也是适合的，即其仅包含该序列的一部分，优选地是70-99％、特别优选地是80-98％，或与所提及序列相比，在其中各个氨基酸或核苷酸已经被改变，其中所给出的每一百分数指氨基酸数目。
还可能根据本发明所用的蛋白质的多肽序列已经例如通过糖基化作用、乙酰化作用或还通过例如与戊二醛的化学交联而修饰。
根据本发明所用的蛋白质的一个特征是当表面用所述蛋白质涂层时表面特性发生改变。表面特性的改变可以通过测量在用蛋白质对表面涂布之前或之后的水滴接触角并确定两个量值间的差异而实验性测定。
接触角的测量对技术人员而言一般是已知的。量值基于室温和51水滴。对于(例如适用于)测量接触角方法的确切实验条件在实验部分说明。在那里所提及的条件下，本发明所用的蛋白质具有这样的特性，即在全部情况下与具有未涂层的玻璃表面的大小相似的水滴的接触角相比，接触角增加至少20°、优选地至少25°、特别优选地至少30°。
迄今已知的疏水蛋白中疏水蛋白部分的极性和非极性氨基酸的位置是保守的，产生特征性的疏水性曲线。生物物理特性和疏水性的差异导致将迄今已知的疏水蛋白分成两类，即I和II(Wessels等1994，Ann.Rev.Phytopathol.，32，413-437)。
组装的I类疏水蛋白膜在很大程度上是不溶解的(甚至在升高的温度上对1％十二烷基硫酸钠(SDS))并且仅可以借助浓三氟乙酸(TFA)或甲酸再次解离。相反，组装的II类疏水蛋白形式具有较低稳定性。它们可以由甚至60％强度乙醇或1％SDS(在室温)再次溶解。
氨基酸序列的比较显示半胱氨酸C3和C4间区域的长度在II类疏水蛋白中比在I类疏水蛋白中明显较短。II类疏水蛋白还比I类疏水蛋白具有更多的带电荷氨基酸。
特别优选用于实施本发明的疏水蛋白是在以下序列表内加以结构表征的dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basf1、basf2型的那些疏水蛋白。它们还可以仅是所述类型疏水蛋白的部分或衍生物。还可能使相同或不同结构的多个疏水蛋白部分、优选地是2或3个疏水蛋白部分彼此连接或使之连接至不天然地与疏水蛋白连接的相应的合适多肽序列。
特别适合实施本发明的是具有SEQ ID NO：20、22、24内所示多肽序列的融合蛋白及其编码性核酸序列，尤其是根据SEQ ID NO：19、21、23的序列。特别优选的实施方案还是这样的蛋白质，该蛋白质从SEQ IDNO：20、22或24内所示的多肽序列开始，因置换、插入或缺失至少1个、至多10个、优选地是5个氨基酸、特别优选地是5％的全部氨基酸而产生，并仍具有起始蛋白质至少50％的生物学特性。蛋白质的生物学特性在本文中意指以上所述的接触角增加至少20°。
根据本发明所用的蛋白质可以通过已知的肽合成方法进行化学制备，例如通过根据Merrifield的固相合成。
天然存在的疏水蛋白可以借助合适的方法自天然来源分离。例如，参考Wsten等，Eur.J Cell Bio.63，122-129(1994)或WO 96/41882。
融合蛋白可以通过这样的遗传工程方法优选地进行制备，即在遗传工程方法中一种编码融合配偶体的核酸序列、尤其DNA序列和编码疏水蛋白部分的一种核酸序列以如此方式组合以致所需的蛋白质通过所组合的核酸序列在宿主生物内基因表达而产生。此类制备方法在我们先前的申请DE 102005007480.4内公开。
可以在本文中适用于所述制备方法的宿主生物(生产者生物)是原核生物(包括古细菌(Archaea))或真核生物，特别是包括嗜盐菌(halobacteria)和甲烷球菌(methanococci)的细菌、真菌、昆虫细胞、植物细胞和哺乳动物细胞，特别优选大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽胞杆菌(Bacillusmegaterium)、米曲霉(Aspergillus oryzea)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、假单胞菌种(Pseudomonas spec.)、乳酸杆菌(lactobacilli)、多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、SF9(或相关细胞)及其它。
本发明还涉及表达构建体的用途，其中该表达构建体包含处于调节性核酸序列的遗传性控制下的编码本发明所用多肽的核酸序列，并且还涉及包含这些表达构建体中至少一种表达构建体的载体。
所用的构建体优选地包含在全部情况下列均与编码序列有效连接的特定编码序列5’上游的启动子和3′下游的终止子序列以及根据需要的其它常见调节元件。
“有效连接”意指启动子、编码序列、终止子及根据需要的其它调节元件以如此方式顺序排列，以致每一种调节元件能够充分履行它在表达编码序列中所需要的功能。
可有效连接序列的实例是靶向性序列以及还有增强子、聚腺苷酸化信号等。其它调节元件包含选择标记、扩增信号、复制起点等。合适的调节序列例如描述于Goeddel，Gene Expression Technology：Methods inEnzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)。
除了这些调节序列之外，这些序列的天然调节作用仍可以存在于实际结构基因上游并且根据需要可能已经以如此方式被遗传性改变，以致关闭天然调节作用并增加基因的表达。
优选的核酸构建体还有利地包含与启动子功能性连接的并能够增加核酸序列表达的一种或多种上述增强子序列。额外有利的序列如其它调节元件或终止子也可以插入于DNA序列3’末端。
核酸可以以一个或多个拷贝存在于构建体内。构建体还可以包含根据需要使用的旨在选择该构建体的额外标记，如抗生素抗性基因或营养缺陷型互补基因。
有利地用于本发明方法的调节序列存在于例如启动子如cos、tac、trp、tet、trp-tet、lpp、lac、lpp-lac、lacIq-T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、λ-PR或在λ-P启动子内，所述的启动子有利地用于革兰氏阴性菌内。其它有利的调节序列例如存在于革兰氏阳性菌启动子amy和SPO2、存在于酵母启动子或真菌启动子ADC1、MFα、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH内。
还可能使用人工启动子用于调节。
为在宿主生物内表达，将核酸构建体有利地插入例如能够在宿主内使基因优化表达的载体如质粒或噬菌体内。除质粒和噬菌体之外，载体还意指技术人员已知的任何其它载体，即例如病毒如SV40、CMV、杆状病毒和腺病毒、转座子、IS元件、噬粒、粘粒和线性DNA或环状DNA并且还意指农杆菌(Agrobacterium)系统.
这些载体可以在宿主生物中自主地复制或随染色体复制。这些载体构成本发明的又一实施方案。合适质粒的实例是大肠杆菌内的pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHS1、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III″3-B1、tgt11或pBdCI；链霉菌(Streptomyces)内的pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361；芽孢杆菌(Bacillus)内的pUB110、pC194或pBD214；棒状杆菌(Corynebacterium)内的pSA77或pAJ667；真菌内的pALS1、pIL2或pBB116；酵母内的2α、pAG-1、YEp6、YEp13或pEMBLYe23或植物内的pLGV23、pGHlac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。所述质粒是可能质粒的一小部分。其它质粒是技术人员众所周知的并且可以例如在图书Cloning Vectors(编者Pouwels P.H.等，Elsevier，Amsterdam-New York-Oxford，1985，ISBN 0 444 904018)内找到。
为表达存在的其它基因，核酸构建体还有利地包含用来增加表达的3’-末端调节序列和/或5’-末端调节序列，其中选择调节序列以便不依赖于宿主生物和所选基因而优化表达。
这些调节序列能够使基因和蛋白质特异性表达。取决于宿主生物，这可以意指例如基因仅在诱导后才表达或过表达，或者基因立即表达和/或过表达。
在本上下文中，调节序列或调节因子可以优选地正向影响并因而增加已经导入的基因的表达。因此，调节元件可以通过使用强转录信号如启动子和/或增强子有利地在转录水平上受到加强。然而，除此之外，还有可能通过例如改善mRNA的稳定性而加强翻译。
在载体的又一个实施方案中，包含本发明核酸构建体或本发明核酸的载体还有利地以线性DNA形式导入微生物并通过同源重组或异源重组整合至宿主生物基因组内。这种线性DNA可以由线性化载体如质粒组成，或仅由核酸构建体或核酸组成。
为在生物内优化地表达异源基因，有利地根据生物内采用的特定密码子选择改变核酸序列。密码子选择可以借助计算机分析所述生物的其它已知基因而容易地确定。
表达盒通过融合合适的启动子至合适的编码核苷酸序列以及终止子信号或聚腺苷酸化信号而制备。为此目的，使用如描述于例如T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1989)以及T.J.Silhavy，M.L.Berman和L.W.Enquist，Experiments with Gene Fusions，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1984)及Ausubel，F.M.等，Current Protocols in Molecular Biology，GreenePublishing Assoc.和Wiley Interscience(1987)内的常见重组技术和克隆技术。
为实现在合适宿主生物内的表达，将重组核酸构建体或基因构建体有利地插入能够使基因在宿主内优化表达的宿主特异性载体中。载体是技术人员众所周知的并且可以例如在“Cloning Vectors”(编者Pouwels P.H.等，Elsevier，Amsterdam-New York-Oxford，1985)内找到。
有可能借助载体而制备例如用至少一种载体转化并可以用于产生本发明所用的蛋白质的重组微生物。有利地，将以上所述的本发明重组构建体导入合适的宿主系统并进行表达。在此上下文中，优选地使用技术人员已知的常见克隆方法和转染方法例如共沉淀、原生质体融合、电穿孔、逆转录病毒转染等以便引起所述核酸在特定表达系统内表达。合适的系统描述于例如Current Protocols in Molecular Biology，编者F.Ausubel等，WileyInterscience，New York 1997或Sambrook等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual.2nd edition，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989内。
还有可能制备同源重组的微生物。为此目的，制备如此载体，其包含根据本发明待使用的基因的至少一部分和编码序列的至少一部分，在所述的编码序列中根据需要已经导入至少一个氨基酸缺失、氨基酸添加或氨基酸置换以修饰(例如功能性破坏)序列(敲除载体)。导入的序列还可以例如是来自相关微生物的同系物或衍生自哺乳动物、酵母或昆虫。备选地，用于同源重组的载体可以以如此方式设计以致内源基因在同源重组情况下被突变或改变，但是仍编码有功能的蛋白质(例如上游调节区域可能已经以使得内源性蛋白质的表达被改变的方式被改变)。本发明所用的基因中已改变的部分处于同源重组载体内。构建适用于同源重组的载体例如描述于Thomas，K.R.和Capecchi，M.R.(1987)Cell 51：503。
合适于本发明所用的核酸或核酸构建体的重组宿主生物原则上是任何原核生物或真核生物。有利地，使用微生物如细菌、真菌或酵母作为宿主生物。有利地使用革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌，优选地是肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、假单胞菌科(Pseudomonadaceae)、根瘤菌科(Rhizobiaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)或诺卡氏菌科(Nocardiaceae)的细菌，特别优选地是埃希杆菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、诺卡氏菌属(Nocardia)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、沙门氏菌属(Salmonella)、农杆菌属(Agrobacterium)或红球菌属(Rhodococcus)细菌。
取决于宿主生物，以技术人员已知的方式生长或培养在制备融合蛋白过程中所用的生物。通常使微生物在温度0℃至100℃间、优选地在10℃至60℃间生长在液体培养基内，同时供应氧气，其中所述的液体培养基包含碳源(通常是糖形式)、氮源(通常是有机氮源形式如酵母提取物或盐形式如硫酸铵)、微量元素如铁盐、锰盐和镁盐以及根据需要含有维生素。在本上下文内，营养液体的pH在培养期间可以保持或可以不保持在固定值上，即可以受到或可以不受调节。培养可以以间歇式、半间歇式或连续地实施。营养素可以在发酵开始时最初加入或在半连续或连续方式中随后加入。酶可以通过实施例内所述的方法自生物分离或作为粗制提取物加以利用。
可以如此制备根据本发明所用的蛋白质或其功能性生物活性片段，即借助重组方法用正在培养的产生蛋白质的微生物，根据需要诱导蛋白质的表达并从所述培养物中分离蛋白质。根据需要，蛋白质还可以工业规模地以此方式产生。重组微生物可以通过已知的方法进行培养和发酵。例如，细菌可以在TB培养基或LB培养基内并在温度20至40℃及pH 6至9下进行培养。合适的培养条件例如详细描述于T.Maniatis、E.F.Fritsch和J.Sambrook，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold SpringHarbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1989)内。
如果根据本发明所用的蛋白质没有分泌至培养基内，则随后破碎细胞并从裂解物内通过已知的蛋白质分离方法得到产物。细胞可以如所述通过高频超声波、通过高压例如在French压力室内、通过渗透裂解、通过去垢剂、裂解酶或有机溶剂的作用、通过匀浆器或通过两种或多种以上所列方法的组合进行破碎。
根据本发明所用的蛋白质可以使用已知方法如分子筛(凝胶过滤)例如Q Sepharose层析、离子交换层析和疏水层析，以及其它常用方法如超滤、结晶、脱盐、透析和天然凝胶电泳进行纯化。合适的方法例如描述于Cooper，F.G.，Biochemische Arbeitsmethoden，Verlag Walter de Gruyter，Berlin，New York或于Scopes，R.，Protein Purification，Springer Verlag，NewYork，Heidelberg，Berlin内。
可以有利地通过使用载体系统或寡核苷酸分离重组蛋白质，其中所述的载体系统或寡核苷酸将cDNA延长特定的核苷酸序列并且因此编码用来例如简化纯化的已改变的蛋白质或融合蛋白。这类合适修饰的实例是起锚钩作用的“标签”，如已知为6组氨酸锚钩或可由抗体识别的抗原表位(在Harlow，E.和Lane，D.，1988，Antibodies：A Laboratory Manual.ColdSpring Harbor(N.Y.)Press内描述)的修饰作用。其它合适的标签是例如HA、钙调蛋白-BD、GST、MBD；壳多糖-BD、链亲和素-BD-avi-标签、Flag-标签、T7等。这些锚钩可以例如用来将蛋白质附着至可以例如装填于层析柱内或可以用在微量滴定平板表面或另一种支持物表面的固体支持物，如多聚体基质。相应的纯化方案可以从商业的亲和标签供应商处得到。
如所述制备的蛋白质可以作为融合蛋白直接使用，或在切下并去除融合配偶体后作为“纯”疏水蛋白使用。
如果意图去除融合配偶体，推荐将潜在切割位点(蛋白酶的专一性识别位点)在疏水蛋白部分与融合配偶体部分之间加至融合蛋白内。合适的切割位点尤其是在疏水蛋白部分和融合配偶体部分均不存在的可以通过生物信息学工具容易确定的那些肽序列。例如，BrCN对甲硫氨酸的切割或用因子Xa、肠激酶切割、凝血酶切割、TEV切割(烟草蚀纹病毒蛋白酶)的蛋白酶介导性切割是特别合适的。
对序列表内DNA和多肽序列所赋予的序列名称
 dewA DNA和多肽序列 SEQ ID NO：1
 dewA多肽序列 SEQ ID NO：2
 rodA DNA和多肽序列 SEQ ID NO：3
  rodA多肽序列   SEQ ID NO：4
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  hypA多肽序列   SEQ ID NO：6
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  hypB多肽序列   SEQ ID NO：8
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  sc3多肽序列   SEQ ID NO：10
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  yaad-Xa-basf1-his DNA和多肽序列   SEQ ID NO：23
  yaad-Xa-basf1-his多肽序列   SEQ ID NO：24
多层复合材料
多层复合材料科用于多种极为不同的目的，例如作为包装用具(尤其是复合材料薄膜)或自粘性制品(至少具有支持物和粘性层的多层复合材料)。
多层复合材料包含至少两层、优选地2至5层，各个层例如有可能具有0.01至5mm的厚度。各个层可以由天然多聚体或合成多聚体组成或由金属组成。层尤其是多聚体膜、纸、金属箔、金属化的多聚体膜等。
将以上的多肽用作多层复合材料的至少两个相邻层之间的增附剂。优选地，相邻层中至少一层是天然多聚体层或合成多聚体层。合适的多聚体尤其是缩聚物如聚酯、聚加合物如聚氨基甲酸酯、聚酰胺、聚碳酸酯或聚苯醚或聚苯硫醚或通过烯键式不饱和化合物的自由基聚合或离子型聚合可得到的多聚体(简称为自由基多聚体)。此类自由基多聚体优选地由以重量计至少60％、特别优选地至少80％的“主单体”组成，其中主单体选自C1至C20烷基(甲基)丙烯酸酯、包含至多20个碳原子的羧酸的乙烯基酯、具有至多20个碳原子的乙烯基芳香化合物、烯键式不饱和腈、乙烯基卤化物、包含1至10个碳原子的醇的乙烯基醚、具有2至8个碳原子和1个或2个双键的脂肪族烃，尤其是乙烯和丙烯。
本发明的多肽尤其还合适作为非极性多聚体的增附剂；因而相邻层中至少一层优选地由非极性多聚体组成。
多聚体极性的度量是空气(21℃)中的表面张力。表面张力越低，多聚体的非极性越强。
因此，相邻层中的至少一层优选地由表面张力小于50mN/m(毫牛/米)、尤其小于40mN/m的非极性多聚体组成。此类非极性多聚体的实例是聚酰胺66(42.5mN/m)、聚苯乙烯(43.5mN/m)、PVC(38.4mN/m)、聚乙烯(36.1mN/m)、聚丙烯(29mN/m)或聚四氟乙烷(22.5mN/m)。
特别优选相邻两层均由此种非极性多聚体组成。
粘合促进作用所需要的多肽量通常是从0.01至1000mg(毫克/m2(平方米))，尤其是从0.01至100mg/m2并且特别优选地是从0.1至10mg/m2。
多肽可以应用于两个相邻层中的任一层，并且备选地，如果这两层均已预加工则还可以应用于这两个层。
多肽优选地为水溶液的形式；溶液的多肽含量优选地是从0.01至5份重量的多肽对100份重量的水。为本发明的用途，溶液的浓度优选地进一步稀释至从每毫升水1μg至10000μg，尤其从每毫升水10μg至1000μg。
因此应用后还首先进行干燥过程以去除水。
其次，两个相邻层可以通过常用方法结合，例如通过层压法。
多肽尤其还可以应用至相邻层中的一层(第一层)，并且另一相邻层(第二层)可以随后通过应用多聚体分散液、多聚体溶液或无溶剂多聚体至第一层而制备，前提是存在增附剂并且随后形成薄膜和/或进行热固化或光化学固化。为此目的，多聚体尤其处于水分散液或溶液的形式，特别优选地是乳液多聚体、优选是以上所列的任意自由基多聚体的水分散液形式。在应用多聚体后，随后根据需要实施干燥过程。
贴面基材
基材因极为不同的目的而进行涂层。特别应当提到的是装饰性涂层或保护性涂层(一般术语：涂层)或粘合层，有可能应用粘合层至基材或者以自粘性制品形式(标签或粘性带)自身结合。
基材或基材表面可以由任何材料组成。类似地，涂层或涂层的面向基材的表面可以由任何材料组成。
优选地，基材表面或涂层、或涂层的面向基材的表面由天然多聚体或合成多聚体组成。
合适的多聚体尤其是缩聚物如聚酯、聚加合物如聚氨基甲酸酯、聚酰胺、聚碳酸酯或聚苯醚或聚苯硫醚或通过烯键式不饱和化合物的自由基聚合或离子型聚合可得到的多聚体(简称为自由基多聚体)。
对自由基多聚体的结构及其主要单体含量而言，适用以上所做的描述。
本发明的多肽尤其还适合作为增附剂用于非极性多聚体；因此至少基材表面或涂层的面向基材的表面优选地由非极性多聚体组成。
就作为极性度量的接触角而言，类似地适用以上所做的描述。
特别优选基材表面和涂层的面向基材的表面均由此种非极性多聚体组成。
为粘合促进所需要的多肽量对应于以上所提到的量。
多肽可以是施加至基材表面、涂层的面向基材的表面或这两种表面。如果已经预加工所述涂层，即如果简单的薄膜或多层复合材料(见以上)将应用于基材上，则应用至涂层面向基材的表面是可能的。
多肽优选地为水溶液的形式；所述溶液的含量如上所述。
因此在施用后有可能首先实施干燥过程以去除水。
涂层可以通过常规方法应用于基材；薄膜或多层复合材料可以例如层压在基材上。
尤其，涂层还可以通过应用多聚体分散液、多聚体溶液或无溶剂多聚体至面向基材的表面而制备，前提是存在增附剂并且随后形成薄膜和/或进行热固化或光化学固化。为此目的，多聚体尤其处于水分散液或溶液形式，特别优选地是乳液多聚体、优选是以上所列的任意自由基多聚体的水分散液形式。在应用多聚体后，随后根据需要实施干燥过程。
本发明的多层复合材料和贴面基材具有显著增加的强度。通过使用多肽作为增附剂，涂层对基材的粘合作用更强并且多层复合材料的各层彼此间极好地粘合。
在本发明的又一个优选实施方案中，基材是金属。原则上，金属可以是任何金属。金属基材的实例包括铁、钢、锌、锡、铝、铜和所述金属与自身及与其它金属的合金。它们尤其可以是钢、镀锌钢、锌合金、铝或铝合金。特别优选锌或锌合金或具有它们的基材，例如镀锌钢。
Zn或Al合金是技术人员已知的。技术人员根据所需应用目的选择合金成分的类型和量。锌合金的代表性成分尤其包括Al、Pb、Si、Mg、Sn、Cu或Cd。铝合金的代表性成分尤其包括Mg、Mn、Si、Zn、Cr、Zr、Cu或Ti。合金还可以是包含大约等量Al和Zn的Al/Zn合金。可以商业性获得用此类合金涂层的钢。
金属可以具有任意形状，然而优选金属箔、金属带或金属片。金属还可以是具有金属表面的复合材料。它可以例如是带多聚体膜和金属的复合材料。
金属表面将用作为增附剂的根据本发明所用多肽、优选疏水蛋白进行涂层。这可以使用所述多肽的水溶液实施。涂层过程的细节已经如上提及。
涂层尤其可以是用于涂布金属表面的代表性漆或漆系统。它们可以是热固化、光化学固化或通过其它机制固化的涂料。
用于涂布金属表面的代表性漆包含至少一种粘合剂并且还包含可交联成分。可交联成分可以是除粘合剂以外的另外采用的交联剂，或它们可以是与粘合剂连接的可交联基团。粘合剂当然还可以具有可交联基团并且交联剂可以额外地进行应用。在此情况下，可设想多种可能的组合。例如，粘合剂和交联剂可以彼此分开地进行应用。粘合剂在此情况下包含可以与交联剂内互补性活性官能团起反应的活性官能团。另一种组合是包含这样的活性官能团的自我交联粘合剂，其中所述的活性官能团能够与它们同类的基团(“与自己”)或与相同多聚体上的互补性活性官能团发生交联反应。交联剂还有可能排他性与自身发生反应。
合适的粘合剂的实例包含(甲基)丙烯酸(共)聚物、部分水解的聚乙烯基酯、聚酯、醇酸树脂、聚内酯、聚碳酸酯、聚醚、环氧树脂-胺加成物、聚脲、聚酰胺、聚酰亚胺或聚氨基甲酸酯。当然还有可能使用多种多聚体的混合物，只要所述的混合物不产生不想要的效应。
交联成分可以具有热交联基团或光化学交联基团。合适的热交联剂的实例是基于环氧化物、基于三聚氰胺或基于封闭性异氰酸酯的交联剂。对光化学交联合适的交联剂尤其是具有多个烯键式不饱和基团的化合物，尤其是双官能或多官能的丙烯酸酯。
多肽、优选疏水蛋白的根据本发明的用途以有利方式改变涂料在基材上的粘合。还实现了漆层在防蚀试验中的改良抗蠕变性。
如下实施例意图更详细的说明本发明：
A)部分：疏水蛋白的制备
实施例1用于克隆yaad-His6/yaaE-His6的预备工作
借助寡核苷酸Hal570和Hal571(Hal 572/Hal 573)实施聚合酶链式反应。所用的模板DNA是细菌枯草芽孢杆菌的基因组DNA。得到的PCR片段包含枯草芽孢杆菌yaaD/yaaE基因的编码序列并且在全部情况下在它们的末端分别包含NcoI和BglII限制性切割位点。纯化PCR片段并用限制性内切核酸酶NcoI和BglII切割。使用DNA片段作为插入物并克隆至来自Qiagen的已经事先用限制性内切核酸酶NcoI和BglII线性化的载体pQE60内。由此得到的载体pQE60YAAD#2/pQE60YaaE#5可以用于表达分别由YAAD::HIS6和YAAE::HIS6组成的蛋白质。
Hal570：gcgcgcccatggctcaaacaggtactga
Hal571：gcagatctccagccgcgttcttgcatac
Hal572：ggccatgggattaacaataggtgtactagg
Hal573：gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc
实施例2 yaad疏水蛋白DewA-His6的克隆
用寡核苷酸KaM 416和KaM 417实施聚合酶链式反应。所用的模板DNA是霉菌构巢曲霉的基因组DNA。得到的PCR片段包含疏水蛋白基因dewA和N-末端的因子Xa蛋白酶切割位点的编码序列。纯化PCR片段并用限制性内切核酸酶BamHI切割。使用此DNA片段作为插入物并克隆至事先用限制性内切核酸酶BamHI线性化的载体pQE60YAAD#2内。
由此得到的载体#508可以用于表达由YAAD::Xa::dewA::HIS6组成的融合蛋白。
KaM416：GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGC
KaM417：CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
实施例3 yaad疏水蛋白RodA-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 434和KaM 435，将质粒#513类似地克隆至质粒#508内。
KaM434：GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGC
KaM435：CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG
实施例4 yaad疏水蛋白BASF1-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 417和KaM 418，将质粒#507类似地克隆至质粒#508内。采用的模板DNA是人工合成的DNA序列-疏水蛋白BASF1(见附件)。
KaM417：CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
KaM418：CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
实施例5 yaad疏水蛋白BASF2-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 417和KaM 418，将质粒#506类似地克隆至质粒#508内。采用的模板DNA是人工合成的DNA序列-疏水蛋白BASF2(见附件)。
KaM417：CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
KaM418：CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
实施例6 yaad疏水蛋白SC3-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM464和KaM465，将质粒#526类似地克隆至质粒#508内。采用的模板DNA是裂褶菌cDNA(见附件)。
KaM464：CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGC
KaM465：GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT
实施例7重组大肠杆菌菌株yaad疏水蛋白DewA-His6的发酵
在15ml Greiner管内用表达yaad疏水蛋白DewA-His6的大肠杆菌菌株接种3ml的LB液体培养基。在37℃于每分钟200转的振荡器内温育8小时。在全部情况下，具有挡板和250ml LB培养基(+100μg/ml氨苄青霉素)2个1L锥形烧瓶用1ml预培养物接种并在37℃于每分钟180转的振荡器内温育9小时。用0.5L预培养物接种20L发酵管内13.5L的LM培养基(+100μg/ml氨苄青霉素)(相对H2O测量时OD600nm 1∶10)。在OD600nm约3.5添加140ml的100mM IPTG。3小时后，冷却发酵罐至10℃并通过离心去除发酵肉汤。细胞沉淀用于进一步纯化。
实施例8纯化重组疏水蛋白融合蛋白(纯化具有C-末端His6标签的疏水蛋白融合蛋白)
100g细胞沉淀(100-500mg的疏水蛋白)用50mM磷酸钠缓冲液，pH 7.5补齐至总体积200ml并重悬。混悬液用Ultraturrax T25型(Janke和Kunkel；IKA-Labortechnik)处理10分钟，为了降解核酸，随后与500单位Benzonase(Merck，Darmstadt；订单号：1.01697.0001)在室温温育1小时。在胞破碎细前，使用玻璃滤芯(P1)实施过滤。为破碎细胞和剪切剩余的基因组DNA，在1500bar下实施两轮匀浆(Microfluidizer M-110EH；Microfluidics Corp.)。将匀浆物离心(Sorvall RC-5B，GSA转头，250ml离心杯，60分钟，4℃，每分钟12000转，23000g)，上清液放置在冰上并将沉淀重悬于100ml磷酸钠缓冲液，pH 7.5。离心和重悬重复三次，第三次用包含1％SDS的磷酸钠缓冲液重悬。在重悬后，搅拌溶液1小时，随后进行终末离心(Sorvall RC-5B，GSA转头，250ml离心杯，60分钟，4℃，每分钟12000转，23000g)。根据SDS-PAGE分析，疏水蛋白存在于终末离心后的上清液内(图1)。实验显示疏水蛋白可能以包涵体形式存在于相应的大肠杆菌细胞内。将50ml包含疏水蛋白的上清液加至以50mM的pH8.0 Tris-Cl缓冲液平衡的50ml镍Sepharose高性能17-5268-02柱(Amersham)。该柱用50mM Tris-Cl缓冲液，pH 8.0洗涤，并且随后疏水蛋白用包含200mM咪唑的50mM Tris-Cl缓冲液，pH 8.0洗脱。为了去除咪唑，将溶液对50mM Tris-Cl缓冲液，pH 8.0透析。
图1描述所制备疏水蛋白的纯化：
道1：施用于镍Sepharose柱的溶液(1∶10稀释)
道2：流过液＝洗涤步骤的洗脱液
道3-5：洗脱级分的OD280峰。
图1的疏水蛋白具有大约53kD的分子量。某些较小的带代表疏水蛋白的降解产物。
实施例9性能测试；通过改变水滴在玻璃上的接触角表征疏水蛋基材：
玻璃(窗户玻璃，Süddeutsche Glas，Mannheim，德国)：
疏水蛋白浓度：100μg/mL
玻璃片在50mM乙酸钠pH 4+0.1％Tween20内过夜温育(温度80℃)，随后进行涂层，在蒸馏水内洗涤
随后在蒸馏水内的1％SDS溶液中于80℃温育10分钟
在蒸馏水内洗涤
样品在空气中干燥并且测定5μl水液滴的接触角(度)。
接触角在软件为SCA 20.2.0(2002年11月)的Dataphysics ContactAngle System OCA 15+仪器上测量。测量根据制造商说明书实施。
未处理的玻璃产生30±5°的接触角，具有根据实施例8的功能性疏水蛋白(yaad-dewA-his6)的涂层产生75±5°的接触角。
B)部分：多肽作为增附剂的用途
实施例10聚乙烯基材
所用材料：
所用溶液：
在性能实验中采用根据实施例8所制备的融合蛋白yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：19)水溶液。溶液内的疏水蛋白浓度：100μg/ml(以重量计0.01％)。
基材：聚乙烯的成型体(小盘)
涂层：
聚酯薄膜用Acronal A 240(来自BASF的用于压力敏感性粘合剂的商业化含水聚丙烯酸酯分散液)涂层并干燥，并切成宽度2.5cm的条。得到的粘性条用于对PE小盘涂层。
方法：
将多肽溶液应用于聚乙烯盘并干燥(预处理的聚乙烯盘)。
随后将粘性条结合在预处理的聚乙烯盘上和未处理的聚乙烯盘上(为了比较)，并测定除去粘性条所需要的力量(剥离强度N)
具有作为增附剂的多肽的剥离强度：4.7N
没有作为增附剂的多肽的剥离强度：2.6N
实施例11金属基材
在性能实验中采用根据实施例8制备的融合蛋白yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：19)的水溶液。溶液内疏水蛋白浓度：100μg/ml(以重量计0.01％)。
使用如下试验薄板作为金属基材：
  编号  基材
  实施例11-1  钢(ST2型(材料编号：1.0330))
  实施例11-2  镀锌钢(森吉米尔-镀锌钢薄板GARDOBOND OEHDG/2(Chemetal))
  实施例11-3  铝(AlMgSi AA 6016 GARDOBOND未处理(Chemetal))
所用漆是基于醇酸三聚氰胺的烘烤面漆。
实验描述
将铝薄板浸渍于碱性清洁浸渍槽内(60g/l NaOH，60℃，1分钟)并用蒸馏水淋洗。薄板随后在酸性除锈槽(NHO3/H2O(1∶1))内于室温进行除锈15秒。用蒸馏水淋洗并用加压空气吹干。
镀锌钢薄板和钢薄板用热河水淋洗，随后用蒸馏水淋洗并用加压空气吹干。
在全部情况下，通过在室温下将薄板浸渍于以上提及的溶液内而用疏水蛋白对薄板涂层。铝薄板浸渍16小时。镀锌钢薄板和钢薄板浸渍4小时。薄板随后用蒸馏水淋洗并用加压空气吹干。
在用作为增附剂的疏水蛋白涂层后，将薄板浸渍在塑料碗内的基于醇酸三聚氰胺的烘烤面漆内15秒并且在空气中预干燥大约1小时。随后在干燥炉内于190℃干燥30分钟并进行固化。
为了比较，在全部情况下，以相同方式用无疏水蛋白增附剂的漆制备另外的样品。
性能测试
薄板的性能通过EN ISO 2409(划格法)、EN ISO 4628-8(蠕变)和DIN53156(Erichsen杯突法)评估。
划格试验基于预定标准在漆表面划十字后评估该表面的外观。这包括评估漆因所产生的十字而脱离表面的程度。评估以已知方式借助等级0至5完成，其中0为最佳，并且5为最差。
漆层的蠕变通过薄板的标准侵蚀试验(暴露于盐雾室(SS DIN 50021)内)加以确定。在298小时后评价铝薄板的蠕变，在50小时后评价钢薄板的蠕变并且在190小时后评价镀锌钢薄板的蠕变，测定在全部情况下均基于预定标准并使用从0至5的等级，以0为最佳计分，并且5为最差计分。
Erichsen杯突法包括将球对样品背面压迫并产生凹痕。基于预定标准评估在标记处的漆外观，在此例子中5为最佳计分并且0为最差计分。
性能测试的结果总结如下。
实施例11-1：钢基材
与无疏水蛋白的样品相比，使用疏水蛋白作为增附剂未改变蠕变(等级5)。在每一情况下划格试验(数值较低)和Erichsen杯突试验(数值较高)产生了优良结果。
实施例11-2：镀锌钢基材
Figure A20068001024500272
在镀锌钢上使用疏水蛋白作为增附剂在全部三种情况下产生优于无增附剂的记分(对于划格和蠕变数值较低，对于Erichsen杯突法数值较高)。在侵蚀保护完整性(蠕变)方面，实现最明显的改善(具有增附剂时等级为1，与之相比无增附剂时等级为4)。
实施例11-3：铝基材
Figure A20068001024500281
在铝基材的情况下，划格和蠕变在无增附剂时甚至更好。Erichsen杯突法仍产生略微的改善。
序列表
<110>巴斯福股份公司(BASF Aktiengesellschaft)
<120>多肽作为增附剂的用途
<130>AE 20040837
<160>24
<170>PatentIn 3.1版
<210>1
<211>405
<212>DNA
<213>basf-dewA
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(405)
<223>
<400>1
atg cgc ttc atc gtc tct ctc ctc gcc ttc act gcc gcg gcc acc gcg    48
Met Arg Phe Ile Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala
1               5                   10                  15
acc gcc ctc ccg gcc tct gcc gca aag aac gcg aag ctg gcc acc tcg    96
Thr Ala Leu Pro Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser
            20                  25                  30
gcg gcc ttc gcc aag cag gct gaa ggc acc acc tgc aat gtc ggc tcg    144
Ala Ala Phe Ala Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser
        35                  40                  45
atc gct tgc tgc aac tcc ccc gct gag acc aac aac gac agt ctg ttg    192
Ile Ala Cys Cys Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu
    50                  55                  60
agc ggt ctg ctc ggt gct ggc ctt ctc aac ggg ctc tcg ggc aac act    240
Ser Gly Leu Leu Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr
65                  70                  75                  80
ggc agc gcc tgc gcc aag gcg agc ttg att gac cag ctg ggt ctg ctc    288
Gly Ser Ala Cys Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu
                85                  90                  95
gct ctc gtc gac cac act gag gaa ggc ccc gtc tgc aag aac atc gtc    336
Ala Leu Val Asp His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val
            100                 105                 110
gct tgc tgc cct gag gga acc acc aac tgt gtt gcc gtc gac aac gct    384
Ala Cys Cys Pro Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala
        115                 120                 125
ggc gct ggt acc aag gct gag                                        405
Gly Ala Gly Thr Lys Ala Glu
    130                 135
<210>2
<211>135
<212>PRT
<213>basf-dewA
<400>2
Met Arg Phe Ile Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala
1               5                   10                  15
Thr Ala Leu Pro Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser
            20                  25                  30
Ala Ala Phe Ala Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser
        35                  40                  45
Ile Ala Cys Cys Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu
    50                  55                  60
Ser Gly Leu Leu Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr
65                  70                  75                  80
Gly Ser Ala Cys Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu
                85                  90                  95
Ala Leu Val Asp His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val
            100                 105                 110
Ala Cys Cys Pro Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala
        115                 120                 125
Gly Ala Gly Thr Lys Ala Glu
    130                 135
<210>3
<211>471
<212>DNA
<213>basf-rodA
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(471)
<223>
<400>3
atg aag ttc tcc att gct gcc gct gtc gtt gct ttc gcc gcc tcc gtc    48
Met Lys Phe Ser Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
gcg gcc ctc cct cct gcc cat gat tcc cag ttc gct ggc aat ggt gtt    96
Ala Ala Leu Pro Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
ggc aac aag ggc aac agc aac gtc aag ttc cct gtc ccc gaa aac gtg    144
Gly Asn Lys Gly Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val
        35                  40                  45
acc gtc aag cag gcc tcc gac aag tgc ggt gac cag gcc cag ctc tct    192
Thr Val Lys Gln Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser
    50                  55                  60
tgc tgc aac aag gcc acg tac gcc ggt gac acc aca acc gtt gat gag    240
Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu
65                  70                  75                  80
ggt ctt ctg tct ggt gcc ctc agc ggc ctc atc ggc gcc ggg tct ggt    288
Gly Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly
                85                  90                  95
gcc gaa ggt ctt ggt ctc ttc gat cag tgc tcc aag ctt gat gtt gct    336
Ala Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala
            100                 105                 110
gtc ctc att ggc atc caa gat ctt gtc aac cag aag tgc aag caa aac    384
Val Leu Ile Gly Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn
        115                 120                 125
att gcc tgc tgc cag aac tcc ccc tcc agc gcg gat ggc aac ctt att    432
Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile
    130                 135                 140
ggt gtc ggt ctc cct tgc gtt gcc ctt ggc tcc atc ctc                471
Gly Val Gly Leu Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu
145                 150                 155
<210>4
<211>157
<212>PRT
<213>basf-rodA
<400>4
Met Lys Phe Ser Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
Ala Ala Leu Pro Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
Gly Asn Lys Gly Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val
        35                  40                  45
Thr Val Lys Gln Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser
    50                  55                  60
Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu
65                  70                  75                  80
Gly Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly
                85                  90                  95
Ala Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala
            100                 105                 110
Val Leu Ile Gly Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn
        115                 120                 125
Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile
    130                 135                 140
Gly Val Gly Leu Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu
145                 150                 155
<210>5
<211>336
<212>DNA
<213>basf-HypA
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(336)
<223>
<400>5
atg atc tct cgc gtc ctt gtc gct gct ctc gtc gct ctc ccc gct ctt    48
Met Ile Ser Arg Val Leu Val Ala Ala Leu Val Ala Leu Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
gtt act gca act cct gct ccc gga aag cct aaa gcc agc agt cag tgc    96
Val Thr Ala Thr Pro Ala Pro Gly Lys Pro Lys Ala Ser Ser Gln Cys
            20                  25                  30
gac gtc ggt gaa atc cat tgc tgt gac act cag cag act ccc gac cac    144
Asp Val Gly Glu Ile His Cys Cys Asp Thr Gln Gln Thr Pro Asp His
        35                  40                  45
acc agc gcc gcc gcg tct ggt ttg ctt ggt gtt ccc atc aac ctt ggt    192
Thr Ser Ala Ala Ala Ser Gly Leu Leu Gly Val Pro Ile Asn Leu Gly
    50                  55                  60
gct ttc ctc ggt ttc gac tgt acc ccc att tcc gtc ctt ggc gtc ggt    240
Ala Phe Leu Gly Phe Asp Cys Thr Pro Ile Ser Val Leu Gly Val Gly
65                  70                  75                  80
ggc aac aac tgt gct gct cag cct gtc tgc tgc aca gga aat caa ttc    288
Gly Asn Asn Cys Ala Ala Gln Pro Val Cys Cys Thr Gly Asn Gln Phe
                85                  90                  95
acc gca ttg att aac gct ctt gac tgc tct cct gtc aat gtc aac ctc    336
Thr Ala Leu Ile Asn Ala Leu Asp Cys Ser Pro Val Asn Val Asn Leu
            100                 105                 110
<210>6
<211>112
<212>PRT
<213>basf-HypA
<400>6
Met Ile Ser Arg Val Leu Val Ala Ala Leu Val Ala Leu Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Val Thr Ala Thr Pro Ala Pro Gly Lys Pro Lys Ala Ser Ser Gln Cys
            20                  25                  30
Asp Val Gly Glu Ile His Cys Cys Asp Thr Gln Gln Thr Pro Asp His
        35                  40                  45
Thr Ser Ala Ala Ala Ser Gly Leu Leu Gly Val Pro Ile Asn Leu Gly
    50                  55                  60
Ala Phe Leu Gly Phe Asp Cys Thr Pro Ile Ser Val Leu Gly Val Gly
65                  70                  75                  80
Gly Asn Asn Cys Ala Ala Gln Pro Val Cys Cys Thr Gly Asn Gln Phe
                85                  90                  95
Thr Ala Leu Ile Asn Ala Leu Asp Cys Ser Pro Val Asn Val Asn Leu
            100                 105                 110
<210>7
<211>357
<212>DNA
<213>basf-HypB
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(357)
<223>
<400>7
atg gtc agc acg ttc atc act gtc gca aag acc ctt ctc gtc gcg ctc    48
Met Val Ser Thr Phe Ile Thr Val Ala Lys Thr Leu Leu Val Ala Leu
1               5                   10                  15
ctc ttc gtc aat atc aat atc gtc gtt ggt act gca act acc ggc aag    96
Leu Phe Val Asn Ile Asn Ile Val Val Gly Thr Ala Thr Thr Gly Lys
            20                  25                  30
cat tgt agc acc ggt cct atc gag tgc tgc aag cag gtc atg gat tct    144
His Cys Ser Thr Gly Pro Ile Glu Cys Cys Lys Gln Val Met Asp Ser
        35                  40                  45
aag agc cct cag gct acg gag ctt ctt acg aag aat ggc ctt ggc ctg    192
Lys Ser Pro Gln Ala Thr Glu Leu Leu Thr Lys Asn Gly Leu Gly Leu
    50                  55                  60
ggt gtc ctt gct ggc gtg aag ggt ctt gtt ggc gcg aat tgc agc cct    240
Gly Val Leu Ala Gly Val Lys Gly Leu Val Gly Ala Asn Cys Ser Pro
65                  70                  75                  80
atc acg gca att ggt att ggc tcc ggc agc caa tgc tct ggc cag acc    288
Ile Thr Ala Ile Gly Ile Gly Ser Gly Ser Gln Cys Ser Gly Gln Thr
                85                  90                  95
gtt tgc tgc cag aat aat aat ttc aac ggt gtt gtc gct att ggt tgc    336
Val Cys Cys Gln Asn Asn Asn Phe Asn Gly Val Val Ala Ile Gly Cys
            100                 105                 110
act ccc att aat gcc aat gtg                                        357
Thr Pro Ile Asn Ala Asn Val
        115
<210>8
<211>119
<212>PRT
<213>basf-HypB
<400>8
Met Val Ser Thr Phe Ile Thr Val Ala Lys Thr Leu Leu Val Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Asn Ile Asn Ile Val Val Gly Thr Ala Thr Thr Gly Lys
            20                  25                  30
His Cys Ser Thr Gly Pro Ile Glu Cys Cys Lys Gln Val Met Asp Ser
        35                  40                  45
Lys Ser Pro Gln Ala Thr Glu Leu Leu Thr Lys Asn Gly Leu Gly Leu
    50                  55                  60
Gly Val Leu Ala Gly Val Lys Gly Leu Val Gly Ala Asn Cys Ser Pro
65                  70                  75                  80
Ile Thr Ala Ile Gly Ile Gly Ser Gly Ser Gln Cys Ser Gly Gln Thr
                85                  90                  95
Val Cys Cys Gln Asn Asn Asn Phe Asn Gly Val Val Ala Ile Gly Cys
            100                 105                 1l0
Thr Pro Ile Asn Ala Asn Val
        115
<210>9
<211>408
<212>DNA
<213>basf-sc3
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(408)
<223>
<400>9
atg ttc gcc cgt ctc ccc gtc gtg ttc ctc tac gcc ttc gtc gcg ttc    48
Met Phe Ala Arg Leu Pro Val Val Phe Leu Tyr Ala Phe Val Ala Phe
1               5                   10                  15
ggc gcc ctc gtc gct gcc ctc cca ggt ggc cac ccg ggc acg acc acg    96
Gly Ala Leu Val Ala Ala Leu Pro Gly Gly His Pro Gly Thr Thr Thr
            20                  25                  30
ccg ccg gtt acg acg acg gtg acg gtg acc acg ccg ccc tcg acg acg    144
Pro Pro Val Thr Thr Thr Val Thr Val Thr Thr Pro Pro Ser Thr Thr
        35                  40                  45
acc atc gcc gcc ggt ggc acg tgt act acg ggg tcg ctc tct tgc tgc    192
Thr Ile Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Ser Leu Ser Cys Cys
    50                  55                  60
aac cag gtt caa tcg gcg agc agc agc cct gtt acc gcc ctc ctc ggc    240
Asn Gln Val Gln Ser Ala Ser Ser Ser Pro Val Thr Ala Leu Leu Gly
65                  70                  75                  80
ctg ctc ggc att gtc ctc agc gac ctc aac gtt ctc gtt ggc atc agc    288
Leu Leu Gly Ile Val Leu Ser Asp Leu Asn Val Leu Val Gly Ile Ser
                85                  90                  95
tgc tct ccc ctc act gtc atc ggt gtc gga ggc agc ggc tgt tcg gcg    336
Cys Ser Pro Leu Thr Val Ile Gly Val Gly Gly Ser Gly Cys Ser Ala
            100                 105                 110
cag acc gtc tgc tgc gaa aac acc caa ttc aac ggg ctg atc aac atc    384
Gln Thr Val Cys Cys Glu Asn Thr Gln Phe Asn Gly Leu Ile Asn Ile
        115                 120                 125
ggt tgc acc ccc atc aac atc ctc                                    408
Gly Cys Thr Pro Ile Asn Ile Leu
    130                 135
<210>10
<211>136
<212>PRT
<213>basf-sc3
<400>10
Met Phe Ala Arg Leu Pro Val Val Phe Leu Tyr Ala Phe Val Ala Phe
1               5                   10                  15
Gly Ala Leu Val Ala Ala Leu Pro Gly Gly His Pro Gly Thr Thr Thr
            20                  25                  30
Pro Pro Val Thr Thr Thr Val Thr Val Thr Thr Pro Pro Ser Thr Thr
        35                  40                  45
Thr Ile Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Ser Leu Ser Cys Cys
    50                  55                  60
Asn Gln Val Gln Ser Ala Ser Ser Ser Pro Val Thr Ala Leu Leu Gly
65                  70                  75                  80
Leu Leu Gly Ile Val Leu Ser Asp Leu Asn Val Leu Val Gly Ile Ser
                85                  90                  95
Cys Ser Pro Leu Thr Val Ile Gly Val Gly Gly Ser Gly Cys Ser Ala
            100                 105                 110
Gln Thr Val Cys Cys Glu Asn Thr Gln Phe Asn Gly Leu Ile Asn Ile
        115                 120                 125
Gly Cys Thr Pro Ile Asn Ile Leu
    130                 135
<210>11
<211>483
<212>DNA
<213>basf-BASF1
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(483)
<223>
<400>11
atg aag ttc tcc gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc    48
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
gcc gcc ctc cct cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc    96
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
ggc aac aag ttc cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc    144
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
gac aag tgc ggc gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc    192
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
tac gcc ggc gac gtc ctc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc    240
Tyr Ala Gly Asp Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly
65                  70                  75                  80
ctc ctc aag aac ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc    288
Leu Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly
                85                  90                  95
ctc ttc gac cag tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc    336
Leu Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly
            100                 105                 110
atc cct atc cag gac ctc ctc aac cag gtc aac aag cag tgc aag cag    384
Ile Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln
        115                 120                 125
aac atc gcc tgc tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc    432
Asn Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu
    130                 135                 140
gtc aac ctc ggc ctc ggc aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat    480
Val Asn Leu Gly Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His
145                 150                 155                 160
atg                                                                483
Met
<210>12
<211>161
<212>PRT
<213>basf-BASF1
<400>12
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
Tyr Ala Gly Asp Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly
65                  70                  75                  80
Leu Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly
                85                  90                  95
Leu Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly
            100                 105                 110
Ile Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln
        115                 120                 125
Asn Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu
    130                 135                 140
Val Asn Leu Gly Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His
145                 150                 155                 160
Met
<210>13
<211>465
<212>DNA
<213>basf-BASF2
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(465)
<223>
<400>13
atg aag ttc tcc gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc    48
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
gcc gcc ctc cct cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc    96
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
ggc aac aag ttc cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc    144
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
gac aag tgc ggc gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc    192
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
tac gcc ggc gac gtc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc ctc    240
Tyr Ala Gly Asp Val Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu
65                  70                  75                  80
ctc aag aac ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc ctc    288
Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu
                85                  90                  95
ttc gac cag tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc atc    336
Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile
            100                 105                 110
cct atc cag gac ctc ctc aac cag cag tgc aag cag aac atc gcc tgc    384
Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
        115                 120                 125
tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc gtc aac ctc ggc    432
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
    130                 135                 140
aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat atg                        465
Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met
145                 150                 155
<210>14
<211>155
<212>PRT
<213>basf-BASF2
<400>14
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
Tyr Ala Gly Asp Val Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu
65                  70                  75                  80
Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu
                85                  90                  95
Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile
            100                 105                 110
Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
        115                 120                 125
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
    130                 135                 140
Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met
145                 150                 155
<210>15
<211>882
<212>DNA
<213>basf-yaad
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(882)
<223>
<400>15
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg                                            882
Met Gln Glu Arg Gly Trp
    290
<210>16
<211>294
<212>PRT
<213>basf-yaad
<400>16
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp
    290
<210>17
<211>591
<212>DNA
<213>basf-yaae
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(591)
<223>
<400>17
atg gga tta aca ata ggt gta cta gga ctt caa gga gca gtt aga gag    48
Met Gly Leu Thr Ile Gly Val Leu Gly Leu Gln Gly Ala Val Arg Glu
1               5                   10                  15
cac atc cat gcg att gaa gca tgc ggc gcg gct ggt ctt gtc gta aaa    96
His Ile His Ala Ile Glu Ala Cys Gly Ala Ala Gly Leu Val Val Lys
            20                  25                  30
cgt ccg gag cag ctg aac gaa gtt gac ggg ttg att ttg ccg ggc ggt    144
Arg Pro Glu Gln Leu Asn Glu Val Asp Gly Leu Ile Leu Pro Gly Gly
        35                  40                  45
gag agc acg acg atg cgc cgt ttg atc gat acg tat caa ttc atg gag    192
Glu Ser Thr Thr Met Arg Arg Leu Ile Asp Thr Tyr Gln Phe Met Glu
    50                  55                  60
ccg ctt cgt gaa ttc gct gct cag ggc aaa ccg atg ttt gga aca tgt    240
Pro Leu Arg Glu Phe Ala Ala Gln Gly Lys Pro Met Phe Gly Thr Cys
65                  70                  75                  80
gcc gga tta att ata tta gca aaa gaa att gcc ggt tca gat aat cct    288
Ala Gly Leu Ile Ile Leu Ala Lys Glu Ile Ala Gly Ser Asp Asn Pro
                85                  90                  95
cat tta ggt ctt ctg aat gtg gtt gta gaa cgt aat tca ttt ggc cgg    336
His Leu Gly Leu Leu Asn Val Val Val Glu Arg Asn Ser Phe Gly Arg
            100                 105                 110
cag gtt gac agc ttt gaa gct gat tta aca att aaa ggc ttg gac gag    384
Gln Val Asp Ser Phe Glu Ala Asp Leu Thr Ile Lys Gly Leu Asp Glu
        115                 120                 125
cct ttt act ggg gta ttc atc cgt gct ccg cat att tta gaa gct ggt    432
Pro Phe Thr Gly Val Phe Ile Arg Ala Pro His Ile Leu Glu Ala Gly
    130                 135                 140
gaa aat gtt gaa gtt cta tcg gag cat aat ggt cgt att gta gcc gcg    480
Glu Asn Val Glu Val Leu Ser Glu His Asn Gly Arg Ile Val Ala Ala
145                 150                 155                 160
aaa cag ggg caa ttc ctt ggc tgc tca ttc cat ccg gag ctg aca gaa    528
Lys Gln Gly Gln Phe Leu Gly Cys Ser Phe His Pro Glu Leu Thr Glu
                165                 170                 175
gat cac cga gtg acg cag ctg ttt gtt gaa atg gtt gag gaa tat aag    576
Asp His Arg Val Thr Gln Leu Phe Val Glu Met Val Glu Glu Tyr Lys
            180                 185                 190
caa aag gca ctt gta                                                591
Gln Lys Ala Leu Val
        195
<210>18
<211>197
<212>PRT
<213>basf-yaae
<400>18
Met Gly Leu Thr Ile Gly Val Leu Gly Leu Gln Gly Ala Val Arg Glu
1               5                   10                  15
His Ile His Ala Ile Glu Ala Cys Gly Ala Ala Gly Leu Val Val Lys
            20                  25                  30
Arg Pro Glu Gln Leu Asn Glu Val Asp Gly Leu Ile Leu Pro Gly Gly
        35                  40                  45
Glu Ser Thr Thr Met Arg Arg Leu Ile Asp Thr Tyr Gln Phe Met Glu
    50                  55                  60
Pro Leu Arg Glu Phe Ala Ala Gln Gly Lys Pro Met Phe Gly Thr Cys
65                  70                  75                  80
Ala Gly Leu Ile Ile Leu Ala Lys Glu Ile Ala Gly Ser Asp Asn Pro
                85                  90                  95
His Leu Gly Leu Leu Asn Val Val Val Glu Arg Asn Ser Phe Gly Arg
            100                 105                 110
Gln Val Asp Ser Phe Glu Ala Asp Leu Thr Ile Lys Gly Leu Asp Glu
        115                 120                 125
Pro Phe Thr Gly Val Phe Ile Arg Ala Pro His Ile Leu Glu Ala Gly
    130                 135                 140
Glu Asn Val Glu Val Leu Ser Glu His Asn Gly Arg Ile Val Ala Ala
145                 150                 155                 160
Lys Gln Gly Gln Phe Leu Gly Cys Ser Phe His Pro Glu Leu Thr Glu
                165                 170                 175
Asp His Arg Val Thr Gln Leu Phe Val Glu Met Val Glu Glu Tyr Lys
            180                 185                 190
Gln Lys Ala Leu Val
        195
<210>19
<211>1329
<212>DNA
<213>basf-yaad-Xa-dewA-his
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1329)
<223>
<400>19
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg aga tcc att gaa ggc cgc atg cgc ttc atc    912
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Arg Phe Ile
    290                 295                 300
gtc tct ctc ctc gcc ttc act gcc gcg gcc acc gcg acc gcc ctc ccg    960
Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
gcc tct gcc gca aag aac gcg aag ctg gcc acc tcg gcg gcc ttc gcc    1008
Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser Ala Ala Phe Ala
                325                 330                 335
aag cag gct gaa ggc acc acc tgc aat gtc ggc tcg atc gct tgc tgc    1056
Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser Ile Ala Cys Cys
            340                 345                 350
aac tcc ccc gct gag acc aac aac gac agt ctg ttg agc ggt ctg ctc    1104
Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu
        355                 360                 365
ggt gct ggc ctt ctc aac ggg ctc tcg ggc aac act ggc agc gcc tgc    1152
Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr Gly Ser Ala Cys
    370                 375                 380
gcc aag gcg agc ttg att gac cag ctg ggt ctg ctc gct ctc gtc gac    1200
Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Asp
385                 390                 395                 400
cac act gag gaa ggc ccc gtc tgc aag aac atc gtc gct tgc tgc cct    1248
His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val Ala Cys Cys Pro
                405                 410                 415
gag gga acc acc aac tgt gtt gcc gtc gac aac gct ggc gct ggt acc    1296
Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala Gly Ala Gly Thr
            420                 425                 430
aag gct gag gga tct cat cac cat cac cat cac                1329
Lys Ala Glu Gly Ser His His His His His His
        435                 440
<210>20
<211>443
<212>PRT
<213>basf-yaad-Xa-dewA-his
<400>20
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Arg Phe Ile
    290                 295                 300
Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser Ala Ala Phe Ala
                325                 330                 335
Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser Ile Ala Cys Cys
            340                 345                 350
Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu
        355                 360                 365
Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr Gly Ser Ala Cys
    370                 375                 380
Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Asp
385                 390                 395                 400
His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val Ala Cys Cys Pro
                405                 410                 415
Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala Gly Ala Gly Thr
            420                 425                 430
Lys Ala Glu Gly Ser His His His His His His
        435                 440
<210>21
<211>1395
<212>DNA
<213>basf-yaad-Xa-rodA-his
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1395)
<223>
<400>21
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg aga tct att gaa ggc cgc atg aag ttc tcc    912
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
att gct gcc gct gtc gtt gct ttc gcc gcc tcc gtc gcg gcc ctc cct    960
Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
cct gcc cat gat tcc cag ttc gct ggc aat ggt gtt ggc aac aag ggc    1008
Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Gly
                325                 330                 335
aac agc aac gtc aag ttc cct gtc ccc gaa aac gtg acc gtc aag cag    1056
Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val Thr Val Lys Gln
            340                 345                 350
gcc tcc gac aag tgc ggt gac cag gcc cag ctc tct tgc tgc aac aag    1104
Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys
        355                 360                 365
gcc acg tac gcc ggt gac acc aca acc gtt gat gag ggt ctt ctg tct    1152
Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu Gly Leu Leu Ser
    370                 375                 380
ggt gcc ctc agc ggc ctc atc ggc gcc ggg tct ggt gcc gaa ggt ctt    1200
Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly Ala Glu Gly Leu
385                 390                 395                 400
ggt ctc ttc gat cag tgc tcc aag ctt gat gtt gct gtc ctc att ggc    1248
Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala Val Leu Ile Gly
                405                 410                 415
atc caa gat ctt gtc aac cag aag tgc aag caa aac att gcc tgc tgc    1296
Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys Cys
            420                 425                 430
cag aac tcc ccc tcc agc gcg gat ggc aac ctt att ggt gtc ggt ctc    1344
Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile Gly Val Gly Leu
        435                 440                 445
cct tgc gtt gcc ctt ggc tcc atc ctc gga tct cat cac cat cac cat    1392
Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu Gly Ser His His His His His
    450                 455                 460
cac                                                                1395
His
465
<210>22
<211>465
<212>PRT
<213>basf-yaad-Xa-rodA-his
<400>22
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
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            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Gly
                325                 330                 335
Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val Thr Val Lys Gln
            340                 345                 350
Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys
        355                 360                 365
Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu Gly Leu Leu Ser
    370                 375                 380
Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly Ala Glu Gly Leu
385                 390                 395                 400
Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala Val Leu Ile Gly
                405                 410                 415
Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys Cys
            420                 425                 430
Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile Gly Val Gly Leu
        435                 440                 445
Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu Gly Ser His His His His His
    450                 455                 460
His
465
<210>23
<211>1407
<212>DNA
<213>basf-yaad-Xa-BASF1-his
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1407)
<223>
<400>23
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg aga tct att gaa ggc cgc atg aag ttc tcc    912
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc gcc gcc ctc cct    960
Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc ggc aac aag ttc    1008
Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Phe
                325                 330                 335
cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc gac aag tgc ggc    1056
Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr Asp Lys Cys Gly
            340                 345                 350
gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc tac gcc ggc gac    1104
Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp
        355                 360                 365
gtc ctc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc ctc ctc aag aac    1152
Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu Leu Lys Asn
    370                 375                 380
ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc ctc ttc gac cag    1200
Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln
385                 390                 395                 400
tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc atc cct atc cag    1248
Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile GlyIle Pro Ile Gln
                405                 410                 415
gac ctc ctc aac cag gtc aac aag cag tgc aag cag aac atc gcc tgc    1296
Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
            420                 425                 430
tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc gtc aac ctc ggc    1344
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
        435                 440                 445
ctc ggc aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat atg gga tct cat    1392
Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met Gly Ser His
    450                 455                 460
cac cat cac cat cac                                                1407
His His His His His
465
<210>24
<211>469
<212>PRT
<213>basf-yaad-Xa-BASFl-his
<400>24
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
 1              5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Phe
                325                 330                 335
Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr Asp Lys Cys Gly
            340                 345                 350
Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp
        355                 360                 365
Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu Leu Lys Asn
    370                 375                 380
Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln
385                 390                 395                 400
Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile Pro Ile Gln
                405                 410                 415
Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
            420                 425                 430
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
        435                 440                 445
Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met Gly Ser His
    450                 455                 460
His His His His His
465

Claims (21)

1.包含化合物的多层复合材料或贴面基材，其中以重量计所述化合物的至少40％由作为复合材料的至少两个相邻层之间或涂层与基材之间的增附剂的通过肽键连接的α-氨基酸(下文中简称为多肽)组成。
2.根据权利要求1所述的多层复合材料或贴面基材，其中以重量计多肽的至少80％由α-氨基酸组成。
3.根据权利要求1或2所述的多层复合材料或贴面基材，其中多肽包含半胱氨酸作为组分。
4.根据权利要求1至3中任意项所述的多层复合材料或贴面基材，其中多肽由以重量计至少0.5％的半胱氨酸组成。
5.根据权利要求1或2所述的多层复合材料或贴面基材，其中多肽是下式的疏水蛋白：
Xn-C1-X1-50-C2-X0-5-C3-X1-100-C4-X1-100-C5-X1-50-C6-X0-5-C7-X1-50-C8-Xm(I)
其中各个X可以相同或不同并且可以是20种天然存在氨基酸(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)中的任意氨基酸，紧跟X的各个下标表示氨基酸的数目，并且C是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸，而标为C的残基中至少4个残基是半胱氨酸，并且下标n和m还彼此独立地是0至500、优选地15至300的自然数。
6.根据权利要求1至5中任意项所述的多层复合材料，其中相邻层中的至少一层由天然多聚体或合成多聚体组成。
7.根据权利要求1至6中任意项所述的多层复合材料，其中相邻层中的至少一层由表面张力小于50mN/m的(非极性)合成多聚体组成。
8.根据权利要求1至7中任意项所述的多层复合材料，其中邻近的两层均由天然多聚体或合成多聚体组成。
9.根据权利要求1至5中任意项所述的多层复合材料或贴面基材，其中一个层由金属或合金组成。
10.根据权利要求9所述的多层复合材料，其中相邻层是漆层。
11.根据权利要求9或10所述的多层复合材料，其中金属选自钢、镀锌钢、锌合金、铝或铝合金，或者是铝或铝合金。
12.用于制备多层复合材料的方法，其中
-将多肽应用于相邻层中的一层，
-根据需要，当多肽以水溶液形式应用时，实施干燥过程，并且
-另一相邻层随后压于上面或者通过形成天然多聚体或合成多聚体的薄膜而制备。
13.根据权利要求12所述的方法，其中另一层的天然多聚体或合成多聚体为水溶液或分散液的形式并且在薄膜形成后实施干燥过程。
14.根据权利要求1至5中任意项所述的贴面基材，其中基材表面或涂层的面向基材的表面由天然多聚体或合成多聚体组成。
15.根据权利要求1至5或14中任意项所述的贴面基材，其中基材表面或涂层的面向基材的表面由表面张力小于50mN/m的(非极性)合成多聚体组成。
16.根据权利要求1至5、14或15中任意项所述的贴面基材，其中基材表面或涂层的面向基材的表面由天然多聚体或合成多聚体组成。
17.制备根据权利要求1至5、14至16中任意项所述的贴面基材的方法，其中
-将多肽应用于基材表面或涂层剂的面向基材的表面，
-根据需要，当多肽以水溶液形式应用时，实施干燥过程，并且
-随后将涂层剂应用于基材。
18.制备根据权利要求17所述的贴面基材的方法，其中
-将多肽应用于基材表面，
-根据需要，当多肽以水溶液形式应用时，实施干燥过程，并且
-涂层随后通过在基材表面形成天然多聚体或合成多聚体薄膜加以制备。
19.根据权利要求18所述的方法，其中天然多聚体或合成多聚体为水溶液或分散液的形式并且在薄膜形成后实施干燥过程。
20.根据权利要求13或19所述的方法，其中水溶液或分散液是乳液多聚体的水分散液。
21.化合物的用途，其中以重量计所述化合物的至少40％由作为多层复合材料的至少两个相邻层间或贴面基材的涂层和基材间的增附剂的通过肽键连接的α-氨基酸(简称为多肽)组成。
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