RS49702B - Stereoselektivna mikrobska redukcija racemskog tetralona - Google Patents
Stereoselektivna mikrobska redukcija racemskog tetralonaInfo
- Publication number
- RS49702B RS49702B YUP-551/99A YU55199A RS49702B RS 49702 B RS49702 B RS 49702B YU 55199 A YU55199 A YU 55199A RS 49702 B RS49702 B RS 49702B
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- formula
- atcc
- microorganism
- compound
- compounds
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
- C12P7/26—Ketones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/002—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by oxidation/reduction reactions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Postupak stereoselektivne mikrobske redukcije jedinjenja formule (I) do jedinjenja formula (II) i (III) koji obuhvata: dovodjenje u kontakt jedinjenja formule (I) sa mikroorganizmom, ili enzimskim redukcionim sistemom koji može da izvrši redukovanje, a koji sadrži jedan enzim izveden iz datog mikroorganizma i jedan ko-faktor za dati enzim, i inkubaciju dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije više jedinjenja formule (II) nego jedinjenja formule (III), ostavljajući više neizreagovanog jedinjenja formule (V) nego jedinjenja formule (IV), pri čemu se mikroorganizam bira iz sledeće grupe: Hansenula polymorpha ATCC No. 26012, Hansenula polymorpha ATCC No. 74449, Absidia coerulea ATCC No. 20317, Geotrichum candidum ATCC No. 34614, Geotrichum candidum ATCC No.62401, Mortierella isabellina ATCC No.42613, Mortierella isabellina ATCC No. 38063, Mortierella vinacea ATCC No.09515, Penicillum notatum ATCC No.36740, Blastoschizomyces capitatus ATCC No.28575, Monosporium olivaceuom v. major ATCC No.36300, Aureobasidium pullulans ATCC No. 16623, Debaryomyces polymorphus ATCC No.20280, Saccharomyces cerevisiae ATCC No.15248, Candida schatavii ATCC No.24409, Pichia fabianii ATCC No.16755 i Streptomyces rimosus ss. rimosus ATCC No.10970, i njihovi mutanti koji mogu da ostvare ovu reakciju.
Description
OBLAST PRONALASKA
Ovaj se pronalazak odnosi na nove postupke za pripremanje (4S) enantiomera 4-(3,4-dihlorfenil)-3,3-dihidro-l(2H)-naftalinon (u daljem tekstu naznačen i kao "hiralni tetralon" ili "(4S) tetralon") i, tačnije, odnosi se na stereoselektivnu mikrobsku redukciju recemskog 4-(3,4-dihlorfenil)-3,4-dihidro-l(2H)-naftalinona (u daljem tekstu naznačen i kao "racemski tetralon") i hiralni tetralon.
POZNATO STANJE TEHNIKE
Hiralni tetralon pripremljen postupkom prema prikazanom pronalasku može se dalje regaovati da bi se pripremio čisti cis-(lS)(4S)-N-metil-4-(3,4-dihlorfenil)-l,2,3,4-tetrahidro-l-naftalinamin, obično poznat pod nazivom sertralin. Sertralin je poznat kao koristan, na primer, kao sredstvo protiv depresije i sredstvo za suzbijanje apetita, i kod lečenja zavisnosti od hemijskih preparata, poremećaja povezanih sa uznemirenošću, prerane ejakulacije, raka i post-miokardijalnog infarkta.
Poznati su postupci za pripremanje sertralina kao, na primer, oni opisani u američkim patentima br. 4,536,518, 4,777,288, 4,839, 104, 4,055,500, 4,940,731, 4,962,128, 5,082,970, 5,130,338, 5,196,607, 5,248,699, 5,442,116, 5,463,126, 5,466,880, 5,597,826 i 5,750,794, i u radu W.M. Welch-a, Jr. i dr., koji je objavljen u Journal of Medical Chemistrv, Vol. 27, No.ll, str. 1508 (1984).
Nekoliko od ovih patenata odnosi se na sintezu mešavine cis- i trans-izo-mera racemskog N-metil-4-(3,4-dihlorfenil)-l,2,3,4-tetrahidro-l-naftalinamina. Kao što je tamo opisano, cis- i trans-izomeri, kao i njihovi (S) i (R) enantiomeri. mogu se razdvojiti postupcima koji su poznati stručnjacima, uključujući, na primer, frakcionu kristalizaciju ili hromatografiju.
Takođe je poznato da se konačna željena hiralnost bira ranije u toku sin-teze sertralina. Tako, na primer, napred pomenuti američki patent br. 5,750,794 prikazuje postupak za pripremanje hiralnog tetralona reagovanjem racemskog tetralona nekim asimetričnim ketonskim sredstvom za redukovanje da bi se dobili odgovarahući cis- ili trans-alkoholi u zavisnosti od hiralnosti primenjenog asimetričnog sredstva, a potom se ti alkoholi razdvojili i (1S, 4S) i/ili (1R, 4%) alkoholi oksidisali u (4S) tetralon.
Takođe je poznato da se hiralna jedinjenja mogu sintetizovati koristeći mikroorganizme, kao što su gljivice, na primer kvasac. Tako je, na primer, pri-mena kvasaca za redukovanje ketona u hiralne alkohole dobro poznata. Kao što će stručnjaci shvatiti, hemijski i optički prinosi, na primer određeni enantiomeri i njihove količine kod ovakvih mikrobskih redukcija znatno se menjaju u zavisnosti od, na primer, određenog izabranog mikroorganizma, kao i od supstituenata polaznog materijala.
U američkom patentu br. 5,049,497 opisan je postupak za razdvajanje jednog racemskog derivata biciklo[4.2.0] dovođenjem derivata u dodir sa pekarskim kvascem u uslovima dovoljnim da se dobije mešavina ketona i jednog alkohola velike enantiomerske čistoće. Kao što je tu opisano, samo je jedan enantiomer od predmetnog racemskog ketona redukovan da bi se dobio jedan alkohol.
U američkom patentu br. 5,560,764 opisan je jedan asimetrični redukcioni postupak koji koristi jedan netaknut mikroorganizam ili njegov preparat sa iskidanim ćelijama za pretvaranje jednog cikličnog ketona u odgovarajući hiralni alkohol.
U američkom patentu br. 5,618,707 opisan je postupak za stereoselektivnu redukciju ketonske podloge dodavanjem podloge u bujon za gajenje iliZygosaccharomyces bailiiATC (American Type Culture Collelction) br. 38924 iliSchizosaccharomyces octosporusATC br. 2479, inkubacijom dobijene smeše i izdvajanjem hidroksi jedinjenja konvencionalnim postupcima kao što je, na primer, ekstrahovanje organskim rastvaračima, adsorbovanjem na smolama, ili hromatografijom da bi se potom koristilia kao međuproizvod pri pripremanju sredstva za snižavanje holesterola u serumu. Ovde opisano izolovano hidroksi jedinjenje bilo je analizirano hiralnom tečnom hromatografijom (HPLC), obrnu-tofaznom HPLC, ili obema. U skladu sa onim što bi shvatio svaki stručnja iz ove oblasti, mnogi od velikog broja mikroorganizama koji su bili ispitivani u pogledu njihove sposobnosti da redukuju ketonsku grupu birane podloge nisu uspeli da redukuju ketonsku grupe sa željenom specifičnošču ili produktivnošću.
Neočekivano je utvrđeno da jedna široka lepeza mikroorganizama, uklju-čujući gljivice, na primer, kvasce, i aktinomicete, u suštini stereoselektivno redukuje recemski tetralon. Tačnije, predmetna stereoselektivna mikrobska redukcija selektivno redukuje (4R) tetralon iz racemske mešavine a ostavlja (4S) tetralon u suštini neredukovan. Pored toga, neželjeni (4R) tetralol proizveden predmetnim postupkom može se oksidisati i potom racemizovati u racemski tetralon a pred-etni postupak ponavljati da bi se dobilo još više (4S) tetralona. (4S) tetralon dobijen predmetnim postupkom može se koristiti u sintezi sertralina.
Svi dokumenti koji su ovde navedeni, uključujući i sledeće navedene, uključeni su ovde u celini kao literatura.
PREGLED PRONALASKA
Prikazani se pronalazak odnosi na mikrobiološko redukovanje karbonil-nih grupa koje obuhvata dovođenje u dodir jednog ketonskog jedinjenja, racemskog tetralona formule (I), sa jednim mikroorganizmom, ili enzimskim sistemom za redukovanje koji je u stanju da izvrši predmetno redukovanje a koji sadrži jedan enzim izveden iz pomenutog mikroorganizma i jedan ko-faktor za pomenuti enzim, i inkubaciju dobijene mešavine pod pogodnim uslovima, tako da se može obrazovati jedno jedinjenje koje ima jednu hidroksi grupu, tačnije, (4R) tetralol formule (II) i akumulisati u medijumu, dok jedno jedinjenje koje ima željenu stereohemiju, (4S) tetralon formule (V), ostaje u suštini nereagovano.
(4S) tetralon formule (5), tj. hiralni tetralon, može se potom ozdvojiti bilo kojim
pogodnim postupkom, na primer hromatografijom ili kristalisanjem. Pored toga, (4R) tetralol formule (II) može se izdvojiti od jedinjenja formula (III)-(V) i racemizovati u racemski tetralon i predmetna stereoselektivna mikrobska redukcija ponavljati da bi se dobilo još više željenog hiralnog ketona.
Prema tome, ovaj pronalazak ostvaruje postupak za vršenje sledeće stereospecifične mikrobske reakcije:
koji obuhvata: dovođenje u dodir jedinjenja formule (I) sa jednim mikroorganizmom, ili enzimskim sistemom za redukovanje koji je u stanju da izvrši predmetno redukovanje a koji sadrži jedan enzim izveden iz pomenutog mikroorganizma i jedan ko-faktor za pomenuti enzim, i inkubaciju dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije više jedinjenja formule (II) nego jedinjenja formule (III), čime se ostavlja nereagovano više od jedinjenja (V) nego nereagovanog jedinjenja formule (IV).
Predmetna stereospecifična reakcija se takođe može predstaviti sledećom šemom:
i obuhvata: dovođenje u dodir jedinjenja formule (I) sa jednim mikroorganizmom, ili enzimskim sistemom za redukovanje koji je u stanju da izvrši predmetno redukovanje a koji sadrži jedan enzim izveden iz pomenutog mikroorganizma i jedan ko-faktor za pomenuti enzim, i inkubaciju dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije (4R) tetralol formule (II) a (4S) tetralon formule (V) ostavlja u suštini nereagovan.
Stereoselektivna redukcija dalje sadrži, ako se želi, tazdvajanje (4S) tetralona formule (V) od (4R) tetralola formule (II). (4R) tetralol može se potom oksidisati da bi se dobio (4R) tetralon koji se potom reaguje, na primer sa nekom bazom, da bi se dobio recemski tetralon formule (I) pa se predmetna mikrobska redukcija može ponoviti da bi se dobilo još više željenog tetralona formule (V), tj. (4S) enantiomera racemskog tetralona formule (I).
Ovaj pronalazak daje postupak koji obuhvata stereoselektivno mikrobsko redukovanje jednog jedinjenja formule (I) u jedno jedinjenje formule (II): dovo-đenjem u dodir jedinjenja formule (I) sa jednim mikroorganizmom, ili enzimskim sistemom za redukovanje koji je u stanju da izvrši predmetno redukovanje a koji sadrži jedan enzim izveden iz pomenutog mikroorganizma i jedan ko-faktor za pomenuti enzim, i inkubacijom dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije jedno jedinjenje formule (II), pri čemu znatno više od jedinjenja (V) ostaje nereagovano nego od jedinjenja formule (IV), i proizvede se znatno više jedinjenja formule (II) nego jedinjenja formule (III).
Kod jednog preporučljivog izvođenja, jedinjenje formule (I) dovodi se u dodir sa jednim enzimskim redukcionim sistemom. Kod jednog drugog preporu-čljivog izvođenja, dodir jedinjenja formule (I) je sa jednim enzimskim redukcionim sistemom kod koga je enzim imobilisan. Kod jednog posebno preporučlji-vog sistema dodir jedinjenja formule (I) je sa enzimskim redukcionim sistemom izvedenim odHansenula polymorphaATCC No. 26012.
Kod drugog jednog preporučljivog izvođenja mikroorganizam je jedan njegov preparat sa iskidanim ćelijama. Kod jednog drugog izvođenja mikroorganizam je jedan njegov praškasti enzimski preparat u acetonu.
Kod jednog posebno preporučljivog rešenja ovog pronalaska koristi se jedan čitav mikroorganizam. Kod jednog preporučljivog izvođenja gde je mikroorganizam jedan čitav mikroorganizam, jedinjenje formule (I) dovodi se u dodir sa medijumom za fermentisanje, bujonom za gajenje ili rastvaračem koji sadrže mikroorganizam. Kod jednog drugog preporučljivog izvođenja kod koga je mikroorganizam jedan čitav mikroorganizam, jedinjenje formule (I) dovodi se u dodir sa ispranim čitavim mikrororganizmom. Kod još jednog preporučljivog jedinjenja kod koga je mikroorganizam čitav, jedinjenje formule (I) dovodi se u dodir sa imobilisanim čitavim mikroorganizmom.
Kod jednog posebno preporučljivog izvođenja ovog pronalaska, mikroorganizam je jedan čitav mikroorganizam koji je gajen u jednom mediumu za fermentisanje a dodir se ostvaruje dodavanjem jedinjenja formule (I) u taj medijum.
Kod jednog drugog posebno preporučljivog izvođenja ovog pronalaska, mikroorganizam je jedan čitav mikroorganizam koji je gajen u jednom medijumu za rašćenjc tokom oko četrdeset osam časova, a dodir se odvija u tom medijumu za rašćenje dodavanjem jedinjenja formule (I) u njega, a inkubacija traje oko pet dana.
Kod jednog sledećeg preporučljivog izvođenja ovog pronalaska, mikroorganizam je ili neka gljivica, na primer kvasac, ili jedna aktinomiceta, ili neki njihov mutant koji je u stanju da izvrši stereoselektivnu redukciju.
Kod još jednog preporučljivog izvođenja ovog pronalaska mikroorganizam je jedna gljivica. Kod još jednog preporučljivog izvođenja kod koga je mikroorganizam jedna gljivica,gljivica je Absidia coeruleaATCC No. 20137.
Kod jednog posebno preporučljivog izvođenja prikazanog pronalaska mikroorganizam je jedan kvasac. Kod jednog posebno preporučljivog izvođenja ovog pronalaska kod koga je mikroorganizam jedan kvasac, kvasac jeHansenula polymorphaATCC No. 26012, takođe deponovan kao ATCC No. 74449.
Kada se koristi Hansenula polvmorpha ATCC No. 26012, takođe depono-vana kao ATCC No. 74449, kao mikroorganizam, predmetna stereoselektivna mikrobna redukcija primetno redukuje samo jedan enantiomer jedinjenja formule (I) da bi se dobio odgovarajući alkohol, tj. jedinjenje formule (II), dok ostavlja drugi enantiomer jedinjenja formule (I), tj. jedinjenje formule (V), u suštini nereagovan.
Kao što je ranije rasmotreno, postupak prema pronalasku obuhvata, ako se želi, razdvajanje, na primer primenom kristalizacije ili hromatografije, jedinjenja formule (V) od jedinjenja formula (II)-(IV) i korišćenje tako izdvojenog jedinjenja formule (V) u sintezi sertralina koristeći za to ma koji poznati postupak.
Kao što je ranije takođe rasmatrano, poželjno je da se oksidiše izdvojen (4R) tetralol formule (II) u (4R) tetralon formule (IV). Dalje je poželjno da se racemizuje, poželjno reagovanjem (4R) tetralona nekom bazom, (4R) tetralon formule (IV) u racemski tetralon formule (I). Oksidacija i recemizacija recikluju nepoželjan (4R) tetralol za sledeću rundu stereoselektivne mikrobske redukcije postupkom prema ovom pronalasku. Reciklovanje nepoželjnog (4R) tetralola povećava količinu željenog (4R) tetralona i smanjuje bačenu količinu nepo-željnog (4R) tetralola. Oksidacija i racemizacija oksidisanog proizvoda mogu se izvesti bilo kojim za to pogodnim poznatim postupkom.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Stručnjaci će u potpunosti razumeti izraze koji su korišćeni da se opiše ovaj pronalazak, ali, ipak će izrazi koji sc koriste biti opisani u sledećem tekstu.
"Ko-faktor" podrazumeva svaki pogodan kofaktor koji obuhvata enzimski redukcioni sistem kao što su, na primer, NADH, NADPH, FADH, FMNH i/ili PQQ, ili bilo koji pogodan ko-faktor koji se pojavljuje sa enzimom u mikroorganizmu.
"Enzimski redukcini sistem" znači jedan pogodan mikrobski oksidoreduktazni enzim i redukovan oblik jednog ko-faktora za oksidoreduktazni enzim, pri čemu ko-faktor može biti ili izveden od izabranog mikroorganizma ili može biti iz bilo kog izvora. Enzim koji sadrži enzimski redukcioni sistem može biti bilo u slobodnom, bilo u imobilisanom stanju, na primer u nekom stubu ili vezan za neku granulu.
"Mikrobska redukcija" podrazumeva stereoselektivnu redukciju prema ovom pronalasku izvedenu enzimskim redukcionim sistemom, pri čemu mikrobska reduktaza obuhvata enzimski redukcioni sistem, čitav, nedirnut mikroorganizam ili bilo koji njegov preparat, i slično.
"Mikroorganizam" obuhvata svaki ceo, nedirnuti mikroorganizam ili preparat istog, uključujući, na primer, preparat mikroorganizma sa iskidanim ćeli-jama, neki dehidrirani preparat mikroorganizma, na primer praškasti enzimski preparat u acetonu, mikroorganizam ispran od, na primer, medijuma za fermen-taciju, bujona za gajenje, i sličnog, mikroorganizma koji je imobilisan, na primer u nekom stubu, vezan za neku granulu, i slično.
Postupak ostvaren ovim pronalaskom obuhvata stereoselektivnu mikrobsku redukciju jedinjenja formule (I) u jedinjenje formule (II):
dovođenjem u dodir jedinjenja formule (I) sa jednim mikroorganizmom, ili enzimskim sistemom za redukovanje koji je u stanju da izvrši predmetno redukovanje a koji sadrži jedan enzim izveden iz pomenutog mikroorganizma i jedan ko-faktor za pomenuti enzim, i inkubacijom dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije jedno jedinjenje formule (II), pri čemu znatno više od jedinjenja (V) ostaje nereagovano nego nego od jedinjenja formule (IV), i proizvede se znatno više jedinjenja formule (II) nego jedinjenja formule (III).
Kao što će stručnjaci shvatiti, jedinjenje formule (I), racemski tetralon, jeste mešavina (4S) tetralona i (4R) tetralona:
Jedinjenja, ili tačnije, tetraloli formule (II) jesu:
Jedinjenja, ili tačnije, tetraloli formule (III) jesu:
Jedinjenja formula (II) i (III) su opisana i zaštićena u napreci pomenutom američkom patentnu br. 5,750,794.
Željeno jedinjenje formule (V) može se izdvojiti, kao što će biti opisano, od neželjenih jedinjenja formule (II), i od bilo kog od jedinjenja formule (III) ili (IV) koja su ili proizvedena, ili su ostala nereagovana, što zavisi, na primer, od izabranog mikroorganizma i od uslova inkubacije.
Jedinjenja formule (II) mogu se pretvoriti u jedinjenje formule (I), na primer oksidacijom i racemizacijom, i podvrgnuti predmetnoj stereoselektivnoj mikrobskoj redukciji da bi se dobila sledeća količina (4S) tetralona formule (V).
Postupak prema ovom pronalasku izvodi se lako. Mikroorganizam je ili fermentovan (čitav, nedirnut mikroorganizam) ili inkubiran (preparat sa iskidanim ćelijama, dehidrovan preparat ili bilo koji pogodan preparat mikroorganizma) u prisustvu racemskog tetralona, predstavljenog formulom (I), radi modifi-kovanja racemskog tetralona, tačnije, radi redukovanja nepoželjnog (4R) enantiomera racemskog ketona u njegov odgovarajući alkohol, predstavljen formulom (II), ostavljajući pri tome željeni (4S) enantiomer, predstavljen formulom (V), u suštini nereagovan, čime se, u jednom stupnju, dobija optički obogaćen (4S) enantiomer. (4S) enantiomer može se potom dalje reagovati postupcima poznatim stručnjacima kao što su oni opisani, na primer, u američkim patentima br. 4,536,518, 4,777,288, 4,839,104, 4,055,500, 4,940,731, 4,962,128, 5,082,970, 5,130,338, 5,196,607, 5,248,699, 5,442,116, 5,463,126, 5,466,880, 5,597,826 i 5,750,794, i u pomenutom radu W.M. Welch-a, Jr. i dr., da bi se na kraju dobio sertralin.
Aktivna materija, postupci za ispitivanje aktivnih materija, doziranje, dozni oblici, postupci davanja i poznato stanje tehnike koje se odnosi na sertralin, opisani su, na primer, u napred pomenutim u američkim patentima br. 4,536,518, 4,777,288, 4,839,104, i u pomenutom radu W.M. Welch-a, Jr. i dr.
Bilo koji pogodan mikroorganizam može se koristiti u postupku prema prikazanom pronalasku. Kao što je ranije opisano, mikroorganizam koji se koristi u predmetnom postupku može biti čitav, nedirnut, može biti bilo koji njegov preparat, na primer preparat sa iskidanim ćelijama, dehidriran preparat, i može biti slobodan ili imobilisan. Međutim, ako se u ovom pronalasku koristi mikroorganizam koji nije čitav, nedirnut, kao, na primer, preparat sa iskidanim ćeli-jama, na primer ćelijski ekstrakt, praškasti enzimski preparat u acetonu, ili iz njih izveden enzim, stručnjaci će znati da je obuhvaćen i pogodan ko-faktor za enzim.
Stručnjaci će znati kako da na osnovu priloženog opisa i sopstvenog znanja pripreme pogodan preparat sa iskidanim ćelijama kao što je onaj koji su opisali R.N. Patel i dr. u članku "Oxidation of Secondarv Alcohols to Methyl Ketones by Yeasts" objavljenom uApplied and Environmenlal Microbiology,38(2), 219-223 (1979).
Stručnjaci će znati kako da na osnovu priloženog opisa i sopstvenog znanja pripreme pogodan praškasti enzimski preparat u acetonu kao što je onaj koji su opisali K. Nakamura i dr. u članku "Asymmetric Reduction od Ketones by the Acetone Povvder ofGeotrichum candidum",objavljenom uTetrahedron Letters,37(10), 1629-1632 (1996).
Pored toga, jedan enzim (na primer jedna oksidoreduktaza) bilo kog pogodnog mikroorganizma može se takođe koristiti u predmetnim postupcima, a taj se enzim može izdvojiti iz mikroorganizma bilo kojim pogodnim postupkom poznatim stručnjacima, a što se tiče celih, nedirnutih mikroorganizama, mogu se koristiti u predmetnom postupku bilo u slobodnom, bilo u imobilisanom obliku. Stručnjaci će znati kako da na osnovu priloženog opisa i sopstvenog znanja izdvo-je i prečiste enzim pogodnog mikroorganizma kako je uopšteno opisano u, na primer, člancima M. Wada i dr., "Purification and Characterization of NADPH-Dependent Carbonyl Reductase, Involved in Stereoselective Reduction of 4-Chloro-3-oxobulanoatc, fromCandida magnoliae"objavljenomu Biosci. Biotechnol Biochem.,62(2): 280-285 (1996), P. Trost i dr., "Purification and Properties of NAP(P)H:(quinone-acceptor) oxidoreductase of sugarbeet cells", objavljenom uEur. J. Biochem.,234: 452-458 (1995), K.M. Madyastha i T.L. Gururaja, "Purification and some of the Properties of a Novel Secondary Alcohol Dehydrigenase fromAlcaligenes eutrophus"objavljenom uBiochemical and Biophysical Research Communications,211(2): 540-546 (1995), O. Bortolini i dr., "Kinetic resolution of vic-diols byBacillus slearothermophilusdiacetil reductase" objavljenom uTetrahedron: Asymmetry,9: 647-651 (1998), R.N. Patel i dr. "Stereospecific microbal reduction of 4,5-dihydro-4-(4-methoxyphcnyI)-6-(trifluoromethvl-lH-l)-benzazepin-l-on" objavljenom uEnzyme Mycrob. TechnoL,3: 906-912 (1991) i R.N. Patel i dr., "Stereoselective microbial/ enzymatic oxidation of (exo, exo)-7-oxabicyclo [2.2.1] hcptane-2,3-dimetthanol to the corresponding chiral lactol and lactone" objavljenom uEnzyme Microb. TechnoL,14: 778-784 (1992) i američkim patentima br. 5,523,223 i napreci pomenutom 5,580,764.
Pogodni mikroorganizmi obuhvataju sledeće:Hansenula polymorphaATCC No. 26012,Hansenula PolymorphaATCC No. 74449,Absidia coerulesATCC No. 20137,Geotrichum candidumATCC No. 34614,Geotrichum candidumATCC No. 62401,Mortierella isabellinaATCC No. 42613,Morlierella isabellinaATCC No. 38063,Mortierella vinaceaATCC No. 09515,Penicillium notatumATCC No. 36740,Blastoschizomyces capilatusATCC No. 28575,Monosporium olivaceuom v. majorATCC No. 36300,Aureobasidium pullulansATCC No. 16623,Debaryomyces polymorphusATCC No. 20280,Saccharomyc. es cerevisiaeATC No. 15248,Candida schataviiATCCNo. 24409,Pichia fabianiiATTC No. 16755 iStreptomyces rimosus ss. rimosusATCC No. 10970, i njihovi mutanti koji su stručnjacima poznati ili ih oni inače mogu pribaviti, i koji mogu, uprkos tih mutacija, ostvariti ovde opisanu stereoselektivnu mikrobsku redukciju.
Preporučljivi celi mikroorganizmi biće oni koji suštinski redukuju (4R) tetralon a ostavljaju (4S) tetralon nereagovan, kada reagovanje obuhvata redukovanje ili bilo koju unutrašnju akivnost koja bi mogla razložiti ili inače negati-vno delovati na željeni (4S) tetralon u bilo kom stupnju predmetnog postupka. Kao što će stručnjaci sagledati iz ovog opisa, takva nepoželjna reakcija (4S) tetralona može se u suštini sprečiti, na primer, koristeći enzime izvedene iz izabranog mikroorganizma nasuprot ćelom, nedirnutom mikroorganizmu.
Mikroorganizmi pogodni za primenu u predmetnoj stereospecifičnoj mikrobskoj redukciji mogu se pripremati bilo kojim postupkom poznatim stručnja-cima. Primer pogodnog postupka za pripremanje jednog mikroorganizma od komercijalno nabavljenog materijala prikazan je u nastavku. U nastavku prikazan postupak može se koristiti za bilo koji mikroorganizam pogodan za primenu u prikazanom pronalasku, a stručnjaci će shvatiti iz prikazanog opisa kako da modifikuju bilo koji deo procedure, na primer postupak za pripremanje mikroorganizma, celog ili preparata, na primer sa iskidanim ćelijama ili dehidriranog, slobodnog ili ili imobilisanog, postupak pripremanja pogodnog enzima izvedenog od takvih mikroorganizama, postupak dovođenja racemskog tetralona u dodir sa mikroorganizmom ili enzimom koji sadrži enzimski redukcioni sistem izveden iz njega, komponente medijuma za rašćenje i uslove, na primer temperaturu, pH i slično, ili uslove inkubacije, da bi se ostvario željeni rezultat u bilo kom odre-đenom procesu.
Stručnjaci će shvatiti iz priloženog opisa i na osnovu sopstvenog znanja kako da pripreme pogodan imobilisan ceo mikroorganizam kao što su opisali, na primer, A. Bauer i dr. u članku "Polyvinyl alcohol-immobilized whole-cel preparations for biotransformation of nitriles" objavljen u Biotechnology Letters, 18(3): 343-348 (mart 1996).
Svaki pogodni postupak za dovođenje u dodir jedinjenja formule (I) sa mikroorganizmom ili enzimskim redukcionim sistemom može se koristiti u ovom pronalasku. Jedinjenje formule (I) može se dovesti u dodir sa mikroorganizmom ili enzimskim redukcionim sistemom po bilo kom pogodnom redosledu. Tako se, na primer, jedinjenje formule (I) može dodati nekom medijumu, na primer bujo-nu za gajenje, koji sadrži mikroorganizme, slobodne ili imobilisane, ili neku nji-hovu kombinaciju, ili medijum može da sadrži jedinjenje formule (I) pa se mikroorganizam može dodati takvom medijumu, ili se jedinjenje formule (I) i mikroorganizam mogu zajedno dodati tom medijumu, ili se jedinjenje formule (I) može dodati preparatu mikroorganizma sa iskidanim ćelijama, ili se jedinjenje formule (I) može može dodati dehidrisanom preparatu mikroorganizma, ili se jedinjenje formule (I) ili mikroorganizam ili enzimski redukcioni sistem može dodati nekom pogodnom rastvaraču koji sadrži one druge, i slično. Stručnjaci će sagledati iz priloženog opisa kako da modifikuju bilo koji deo predmetnog postupka ako se to želi.
Posebno je poželjno kod prikazanog pronalaska da se mikroorganizam, ili enzimski redukcioni sistem, izvede izHansenula polymorphaATCC No. 26012. Jedan liofilizovan uzorakHansenula polymorphaATCC 26012 (prvobitno ga dao D.W. Levine) deponovan je u ATCC koja se nalazi na adresi 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia, 10110-2209, SAD, prema uslovima Budim-peštanskog sporazuma na dan 26. juna 1996. Novodcponovana kultura dobila je novi broj depozita ATCC No. 74449. Zbog toga je takođe posebno poželjno da kod prikazanog pronalaska mikroorganizam budeHansenula polymorphaATCC No. 74449. Sva ograničenja na dostupnost javnosti kulture mikroorganizma ovako deponovanog biće nepovratno uklonjena nakon izdavanja patenta na osnovu specifikacije ovog pronalaska.
KultureHansenula polymorphaATCC No. 26012 mogu se dobiti od ATCC, i jedan primer pogodnog postupka za njegovo pripremanje od takvog komercijalno dobavljenog materijala dat je neposredno iza ovog teksta. Ovako dobijena kultura dodaje se u pogodan medijum za rašćenje, pa se inkubira uz vibriranje dok ne dođe do rasšćenja, pri čemu su stručnjaci upoznati sa oba procesa. Ovako pripremljena kultura može se koristiti za inokulisanje podloga, pri čemu su delovi tih podloga zamrznuti kao osnovni materijal. Alternativno, tečne standardne kulture mogu se pripremati tako što im se doda glicerol, od oko 10% do oko 20% pa se zatim smrznu na oko -80°C, poželjno u malim epruvetama za zamrzavanje.
Kao što će biti jasno stručnjacima, za svaki odabrani mikroorganizam, a posebno u potonjim primerima zaAbsisia coeruleaATCC No. 20137, i za naročito poželjnuHansenula polymorphaATCC No. 26012 ili ATCC No. 74449, pogodan postupak za pripremanje mikroorganizma jeste sledeći: mikroorganizam se inokuliše iz zamrznute osnovne kulture kao što je napred opisano (materijal sa oko 17% glicerola) u bocu ili u epruvetu sa metalnim poklopcem koja sadrži neki medijum za rašćenje (koji sadrži jedan alikvot od nekog sterilnog rastvora koji obuhvata Tvveen® 80, glicerol i destilisanu vodu) čiji je sastav opisan detaljnije u ovom opisu. Fermentisanje se vrši na temperaturi između oko 22°C do oko 32°C, poželjno na oko 29° uz pogodno vibriranje, poželjno od oko 200 min"<1>do oko 220 min"<1>, a najpoželjnije na oko 210 min"<1.>Ako se želi, pH medijuma za rašćenje može se održavati korišćenjem pogodnih pufera uključenih u medijum za fermentisanje i/ili periodičnim podešavanjem dodavanjem bilo baze, bilo kiseline, već prema potrebi.
Kod ovog se pronalaska može koristiti bilo koje pogodno trajanje rašćenja mikroorgamizma, uz dovođenje u dodir mikroorganizma sa jedinjenjem formule (I) i inkubiranjem jedinjenja formule (I) sa mikroorganizmom. Pogodno rašćenje mikroorganizma može se postići, na primer, u roku od oko 24 časa, tokom kog vremena se kulturi može dodavati neki pogodan alikvot rastvora racemskog tetralona u nekom pogodnom rastvaraču, poželjno etanolu. Fermentacija se potom može nastaviti, na primer od dva do šest dana, poželjno, na primer, oko pet dana, tokom kog vremena se može ekstrahovati fermentacioni bujon kori-steći svaki pogodan pustupak ekstrahovanja, pri čemu se nekim pogodnim ras-tvaračem, na primer etil acetatom, metil izobutilketonom, metil etilketonom, metilen hloridom i sličnim, poželjno etil acetatom, uklanja organska komponenata iz fermentacionog bujona. Posle ekstrahovanja fermentacionog bujona i izdvajanja organske i vodene faze, jedinjenja koja sadrže organski ostatak mogu se odrediti koristeći bilo koji pogodni postupak kao što je, na primer, hroma-tografija, poželjno hiralna HPLC.
Bilo koji medijum za rašćenje može se koristiti u procesu prema prikazanom pronalasku, a pogodan medijum za rašćenje će sadržati izvor ili izvore ugljenika i azota koji se mogu asimilovati i organske soli koje sadrže bitne minerale. U celini, mnogi ugljovodonici kao što su, na primer, glukoza, maltoza, manoza, saharoza, škrob, glicerin, gel od semena prosa, melasa, soja, i slično, mogu se koristiti kao izvor ugljenika koji se može asimilovati. Izvori azota koji se može asimilovati obuhvataju, na primer, materijale kao što su hidrolizati kvasca i kazeina, primarni kvasac, ekstrakti kvasca, brašno pamukovog semena, komadići soje, pšenične klice, mesni ekstrakti, pepton, tečnost od natopljenog kukuruza i amonijumove soli. Pogodni prehrambeni sastojci koji sadrže neorganske soli za primenu u medijumu za gajenje prema ovom pronalasku obuhvataju, na primer, uobičajene soli koje sadrže natrijum, gvožđe, magnezijum, kalijum, kobalt, fosfat i slično. Tačnije, medijum za rašćenje pogodan za upotrebu kod ovog pronalaska obuhvata, na primer, sledeće sastojke: (a) dekstroza (oko 20 g), ekstrakt kvasca (oko 5 g), sojino brašno (oko 5 g), NaCl (oko 5 g), K2HP04(oko 5 g) i destilisana H20 (oko 2 L), pH podešeno na oko pH 7,0 sa vodenim rastvorom H2S04, (b) dekstrin (oko 10 g), ekstrakt govedine (oko 3 g), ardamin pH (oko 5 g), NZ amin tipa E (oko 5 g), MgS047H20 (oko 0,5 g), KH2P04(oko 0,37 g), CaC03(oko 0,7 g) i destilisana H20 (oko 1 1), pH podešen na oko pH 7,1 sa vodenom HC1, posle čega sledi drugi stupanj glukoze (oko 10 g), Hy-Casc SP<®>(oko 2 g), ekstrakt govedine (oko 1 g), tečnost od natopljenog kukuruza (oko 3 g) i destilisana H20 (oko 1 L), pH podešeno na oko pH 7,0, (c) glukoza (oko 10 g), tečnost od natopljenog kukuruza (oko 6 g), KH2P04(oko 3 g), CaC03(oko 3,5 g), sojino ulje (sirovo, oko 2,2 ml), ekstrakt kvasca (oko 2,5 g) i destilisana H20 (oko 1 L), pH podešeno na oko pH 7,0 do oko pH 7,3 sa vodenom HC1, (d) sladni sirup (oko 20 g), sojino brašno (oko 5 g), kazein (oko 1 g), suvi kvasac (oko 1 g), NaCl (oko 5 g), i destilisana H20 (oko 1 L), (e) laktoza (oko 75 g), Pharmameđia<®>(zamena za ekstrakt kvasca, oko 40
g), CaC03(oko 10 g), Na2S04(oko 4 g) i destilisana H20 (oko 1 L),
(f) ISP #2 (videti, na primer, stranu 460 Handbook of Microbial Media
od R.M. Atlas-a, urednik L.C. Parks, CRC Press, Inc., 1993 ("Hanbook")),
(g) ISP #3 (videti stranu 460 iz "Handbook"),
(h) ISP #4 (videti stranu 461 iz "Handbook"),
(i) ISP #5 (videti stranu 461-462 iz "Handbook") i slično.
Posebno poželjan medijum za rašćenje je 2X od (a) navedenog napred.
Pominjanje određenih pufera, medijuma, reagensa, uslova dodira ili gajenja, i sličnog, nema cilj da stvara ograničenja, već ga treba shvatiti tako da obuhvata sve takve srodne materijale koje će prosečni stručnjak prepoznati da su interesantni ili korisni u datom kontekstu u kome je ovo rasmatranje vođeno. Tako je, na primer, često moguće zameniti jedan puferski sistem ili medijum za gajenje drugim, tako da se koristi drugi ali poznat način da bi se postigli isti ciljevi kako i sa predloženim postupkom, materijalom ili kompozicijom. Pored toga, podrazumeva se da ovaj pronalazak obuhvata proporcionalno povećanje predmetnog postupka za komercijalne svrhe.
Tako će prosečnom stručnjaku biti jasno da se promene medijuma za rašćenje, uslovi fermentacije i/ili količina racemskog tetralona mogu menjati da bi se regulisao prinos dobijenih jedinjenja i njihove relativne brzine proizvodnje. Opšte uzev, tehnike koje se koriste u ovom pronalasku biće birane vodeći računa o industrijskoj produktivnosti. Ovde opisani medijumi za rašćenje, uslovi fermentacije i relativne količine mikroorganizma, ili enzimskog redukcionog sistema, i racemskog tetralona samo su ilustracija široke lepeze medijuma, uslova fermentacije i količine polaznih materijala koji se mogu koristiti u ovom pronalasku, a koje će stručnjaci sagledati, te nisu ni u kom slučaju ograničavajući.
Bilo koji pogodni postupci za izdvajanje i/ili prečišćavanje bilo kog od proizvoda predmetnog postupka mogu se koristiti u ovom pronalasku uključujući filtriranje, ekstrahovanje, kristalizaciju, hromatografiju na stubu, tankoslojnu hromatografiju, pripremnu tečnu hromatografiju niskog pritiska ili HPLC, ili bilo koju pogodnu kombinaciju takvih postupaka.
Dalje će stručnjaku biti jasno da se nepoželjni odgovarajući alkohl (4R) tetralona, jedinjenje formule (II), dobijen ovde opisanim postupcima, može reci-klovati, na primer oksidisati i racemizovati, kako je ranije rasmatrano, bilo kojim pogodnim poznatim postupkom u racemski tetralon formule (I), i da se postupak prema ovom pronalasku može ponoviti da bi se opet dobio željeni (4S) tetralon formule (V). Oksidisanje (4R) tetralola u (4R) keton može se izvesti postupcima poznatim stručnjacima. Reakcija racemizacije može se izvesti na bilo koji pogodan način, ali se obično vrši na temperaturi od oko 0°C do oko 100°C, poželjno od oko 25°C do oko 65°C. (4R) tetralon se reaguje sa nekom bazom na temperaturi od oko 25°C do oko 85°C, poželjno od oko 50°C do oko 65°C. Pogodne baze za ovu rekaciju racemizovanja obuhvataju kalijum t-butoksid, natrijum hidroksid, natrijum metoksid i kalijum hidroksid. Najbolje kalijum t-butoksid.
Sledeći detaljni primeri pokazuju da jedna lepeza mikroorganizama, uključujući gljivice, na primer kvasce, i aktinomicete, stereoselektivno redukuje racemski tetralon, da bi se dobio željeni (4S) tetralon formule (V), tj. hiralni tetralon, koji se potom može razdvojiti od nepoželjnih komponenata i dalje reagovati prema poznatim postupcima da bi se dobio sertralin.
Prikazani je pronalazak ilustrovan sledećim primerima. Prethodni i sledeći opis ovog pronalaska i razna izvođenja nisu namenjena da ograniče pronalazak već da ga ilustruju. Zbog toga se podrazumeva da pronalazak nije ograničen na specifične detalje ovih primera.
PRIMER 1
REDUKOVANJE RACEMSKOG TETRALONA
KORISTEĆIHansenula polymorphaATCC No. 26012
A. Fermentisanje kvascaHansenula polymorphaATCC No. 26012 Jedna "kontrolna" kultura (Cl) i jedna "opitna" kultura (TI) pripremljene su na sledeći način: oko 2,5 ml sterilnog medijuma za rašćenje (oko 40 g.l dekstroze, oko 10 g/l sojinog brašna, oko 10 g/l ekstrakta kvascam oko 10 g/1 NaCl i oko 10 g/l K2HP04, sa pH podešenim na oko 7,0 sa H2S04) sipano je u svaku od dve staklene epruvete veličine 16 x 125 mm svaka od kojih ima metalni poklopac (Cl, TI), posle čega se svakoj od te dve kulture dodaje oko 0,2 ml rastvora A (oko 25 g Tween<®>80, oko 100 g glicerola i oko 250 ml destilisane vode, filtarski sterilisane). Oko 25/xl od oko 17% smrznutog glicerolskog materijalaHansenula polymorphaATCC No. 26012 inokulisano je u TI. Obe kulture u epruvetama su inkubirane na oko 29°C, uz vibriranje na oko 210 min"<1>. Posle oko 24 časa, oko 50p\osnovnog rastvora (oko 5 mg/ml u 100% etanolu, krajnja koncentracija od oko 100 u-g/ml) jednog racemskog tetralona (jedinjenje formule (I) koje sadrži jedinjenja formula (IV) i (V), u oko 5 mg/ml u etanolu) dodano je u Cl i u TI.
Posle oko 5 dana, svakoj od ove dve kulture u epruvetama dodan je po 1 ml NaCl (zasićene). Fermentacioni bujon od obe kulture u epruvetama (oko 3.6 ml) ekstrahovan je istom zapreminom etil acetata (čistog): dodan je etil acetat, kultura u epruveti je promešana a potom centrifugirana na oko 2000 min"<1>(IEC® Centrifuge, 300 Second Avenue, Needham heights. Massacusetts 02194). Etil acetatni sloj je uklonjen a vodeni je sloj ekstrahovan po drugi put. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni pod azotom u vodenom kupatilu na oko 50°C.
B. Konfiguracija preostalog ketona: jedinjenja formula (IV) i (V)
Svaki je od ekstrakta, pripremljenih kako je napred opisano, ponovo suspendovan u 1 ml etanola pa je oko 20pAod svakog suspendovanog ekstrakta analizovano ubrizgavanjem na jednu HPLC kolonu: Chiralcel OK zaštitnom kolonom (4,6 x 50 mm, Diacel Chemical Industries, LTD., 730 Springdale Drive, P.O. Box 564, Exton, Pennsvlvania 19341) spojenom sa jednom Chiralcel OK kolonom (4,6 x 250 mm, Diacel). Jedinjenja sadržana unutar svakog ubrizganog ponovo suspendovanog ekstrakta razdvojena su ravnomcrno sa oko 0,8 ml/min na jednu mobilnu fazu (etanobetil acetat, 85:15), a jedinjenja koja su sadržala ekstrakte bila su nađena koristeći jedan 996 PDA detektor (Waters<®>, 34 Maple Street, Milford, Massachusetts 01757) podešen na 254 nm.
Kao što je prikazano podacima za Cl i TI u sledećoj Tabeli I, analiza hiralne HPLC pokazuje da je uključivanje mikroorganizma, tj.Hansenula polymorphaATCC No. 28012, dalo odnos 16:1 ((4S) tetralona formule (V) nereagovanog prema (4R) tetralonu formule (IV) nereagovanom), što dalje ilustruje stereospecifičnost predmetnog mikrobskog redukcionog procesa. Navedeni rezultati zasnivaju se na poznatoj količini svakog od dodanih enantiomera (oko 50 ug/ml svakog od jedinjenja formula (IV) i (V)). Kao što je napred rečeno, početni racemski tetralon formule (I) ima koncentraciju od oko 100 jug/ml.
Rezultati hiralne analize pokazuju da kulturaHansenula polimorphaATCC No. 26012 (TI) u suštini redukuje (4R) tetralon a ostavlja u suštini nereagovan (4S) tetralon(ostaje oko 4,7% (4R) tetralona u odnosu na oko 76% (4S) tetralona). Za (4S) tetralon određeno je ovakvom hiralnom HPLC da se nalazi i oko 88% ee ("percent amount of enentomeric excess" - količina u procentima viška enantomera). Kao što se vidi iz podataka u Tabeli I, posebno iz odnosa (4S):(4R), 16 puta više (4S) tetralona ostaje nereagovano nego (4R) tetralona.
Prema tome, unošenje celog, netaknutog mikroorganizma, tj.Hansenula polymorphaATCC No. 26012, dovelo je do stereospecifične redukcije u suštini više od početnog (4R) tetralona formule (IV) nego od početnog (4S) tetralona formule (V) ((4S):(4R)), i dalo jc najviše (4R) tetralola formule (II) u odnosu na (4S) tetralol formule (III) (podaci nisu prikazani). Najveći deo dobijenog (4R) tetralola bio je (1S, 4R) tetralol, a najveći deo količinski manje dobijenog (4S) tetralola bio je (1S, 4S) tetralol.
PRIMER II
REDUKOVANJE RACEMSKOG TETRALONA
KORISTEĆIAbsidia coeruleaATCCNo.20137
A.Fermentacijagljivice Absisia coeruleaATCCNo.20137
Jedna "kontrolna" kultura (Cl) i jedna "opitna" kultura (TI) pripremljene su na sledeći način: oko 2,5 ml sterilnog medijuma za rašćenje (oko 20 g.l dekstroze, oko 5 g/l sojinog brašna, oko 5 g/l ekstrakta kvasca, oko 5 g/l NaCl i oko 5 g/l K2HP04, sa pH podešenim na oko 7,0 sa H2S04) sipano je u svaku od dve staklene epruvete veličine 16 x 125 mm svaka od kojih ima metalni poklopac (C2, T2).
Oko 25fi\ od oko 17% smrznutog glicerolskogmaterijala Absidia coemkaATCC No. 20137 inokulisano je u T2. Obe kulture u epruvetama su inkubirane na oko 29°C, uz vibriranje na oko 210 min"<1>. Posle oko 48 časova, oko 50 u.1 osnovnog rastvora (oko 5 mg/ml u 100% etanolu, krajnja koncentracija od oko 100/ig/ml) jednog racemskog tetralona (kako je opisan u Primeru I, oko 5 mg/ml u etanolu) dodano je u C2 i u T2.
Posle oko 5 dana, svakoj od ove dve kulture u epruvetama dodan je po 1 ml NaCl (zasićene). Fermentacioni bujon od obe kulture u epruvetama (oko 3.6 ml) ekstrahovan je sa oko 3 ml etil acetata (čistog): dodan je etil acetat, kultura u epruveti je promešana a potom centrifugirana na oko 2000 min"<1>(IEC<®>Centrifuge). Etil acetatni sloj je uklonjen a vodeni je sloj ekstrahovan po drugi put. Kombinovani organski ekstrakti su sušeni pod azotom u vodenom kupatilu na oko 50°C.
B. Konfiguracija preostalog ketona: jedinjenja formula (IV)i (V)
Svaki je od ekstrakta, pripremljenih kako je napred opisano, ponovo suspendovan u 1 ml etanola pa je oko 20[ i\od svakog suspendovanog ekstrakta analizovano ubrizgavanjem na jednu HPLC kolonu: Chiralcel OK zaštitnu kolonu (4,6 x50 mm) spojenu sa jednom Chiralcel OK kolonom (4,6 x 250 mm). Jedinjenja sadržana unutar svakog ubrizganog ponovo suspendovanog ekstrakta razdvojena su ravnomerno sa oko 0,8 ml/min na jednu mobilnu fazu (etanoketil acetat, 85:15), a jedinjenja koja su sadržala ekstrakte bila su nađena koristeći jedan 996 PDA detektor podešen na 254 nm.
Kao što jc prikazano podacima HPLC za C2 i T2 u sledećoj Tabeli II, uključivanje mikroorganizma, tj.Absidia coendeaATCC No. 20137 dovelo je do stereospecifične redukcije više početnog (4R) tetralona formule (IV) nego početnog (4S) tetralona formule (V).
Tačnije, rezultati hiralne analize pokazuju da kulturaAbsidia coeruleaATCC No. 20137 redukuje (4R) tetralon dok ostavlja u suštini nereagovan (4S) tetralon (ostaje oko 13,6% (4R) tetralona u odnosu na oko 40,5% (4S) tetralona). Utvrđeno je ovom hiralnom analizom da se (4S) tetralon nalazi u oko 50% ee.
Kao što jc prikazano podacima za C2 i T2 u sledećoj Tabeli II, hiralna HPLC analiza pokazuje da je unošenje mikroorganizma, tj.Absidia coendeaATCC No. 20137 (T2), dalo odnos od najmanje dva puta više (4S) tetralona nereagovanog prema nereagovanom (4R) tetralonu, što dalje ilustruje stereospecifičnost predmetnog mikrobskog redukcionog procesa. Navedeni rezultati zasnivaju se na poznatoj količini svakog od dodanih enantiomera (oko 50 n- g/ ml svakog od njih kako je opisano u Primeru I). Kao što je napred rečeno, početni racemski tetralon imao je koncentraciju od oko 100 jug/ml.
PRIMER 111
REDUKOVANJE RACEMSKOG TETRALONA
KORISTEĆI GLJIVICE, KVASCE IAKTINOMICETE
Kao što će shvatiti stručnjaci, za mikroorganizme navedene u Tabeli III koji su korišćeni za predmetnu redukciju,Geotrichum candidumATCC No. 62401,Mortierella isabellinaATCC No. 38063,Mortierella vinaceaATCC No. 09515,Penicillium notatumATCC No. 36740,Blasloschizomyces capitatusATCC No. 28575,Monosporium olivaceuom v. majorATCC No. 36300,Aureobasidium pullulansATCC No. 16623,Pichia fabianiiATTC No. 16755 iStreptomyces nmosus ss. rimosusATCC No. 10970 pripremani su kako je opisano u Primeru II.Geotrichum candidumATCC No. 34614,Mortierella isabellinaATCC No. 42613,Debaryomyces polymorphusATCC No. 20280 iSaccharomyces cerevisiaeATC No. 15248 pripremljeni su kako je opisano u Primeru II sem što je ponovljena ekstrakcija, aCandida schataviiATCCNo. 24409 pripremljena je na sledeći način.
Candida schataviiATCC No. 24409 pripremljena je i korišćena prema prikazanom pronalasku na sledeći način: oko 2,5 ml sterilnog medijuma za rašćenje (oko 20 g/l dekstroze, oko 5 g/l sojinog brašna, oko 5 g/l ekstrakta kvasca, oko 5 g/l NaCl i oko 5 g/l K2HP04, sa pH podešenim na oko 7,0 sa H2S04) sipano je u staklenu epruvetu veličine 16 x 125 mm koja ima metalni poklopac, posle čega je kulturi dodan 0,1 ml filtarski sterilisanog rastvora od oko 25 g Tween<®>80, oko 100 g glicerola i oko 259 ml destilisane vode. Potom jc oko
25/xl od oko 17% smrznutog glicerolskog materijalaCandid schataviiATCC No. 24409 inokulisano je u kulturu. Kultura je gajena na oko 29°C, uz vibriranje na oko 210 min"<1>. Posle oko 48 časova, oko 50/zl osnovnog rastvora (oko 5 mg/ml u 100% etanolu, krajnja koncentracija od oko 100 ju,g/ml) jednog racemskog tetralona (jedinjenje formule (I) koje sadrži jedinjenja formula (IV) i (V), oko 5 mg/ml u 100% etanolu) dodano je u kulturu.
Posle dodatna četiri, fermentacioni bujon ove kulture (oko 2,6 ml) ekstrahovan je sa jednakom zapreminom etil acetata (čistog), kultura je prome-šana a potom centrifugirana na oko 2000 min"<1>(IEC<®>Centrifuge). Ekstrahovanje je ponovljeno. Ekstrakti su sušeni pod azotom u vodenom kupatilu na oko 50°C. Ekstrakt je ponovo suspendovan u 1 ml etanola pa je oko 5/xl od suspendovanog ekstrakta analizovano ubrizgavanjem na jednu HPLC kolonu: Chiralcel OK zaštitnu kolonu (4,6 x 50 mm, Diacel Chemical Industries, LTD) spojenu sa jednom Chiralcel OK kolonom (4,6 x 250 mm, Daicel). Jedinjenja sadržana svakog ubrizganog ponovo suspendovanog ekstrakta razdvojena su ravnomerno sa oko 0,9 ml/min na jednu mobilnu fazu (heksan: izopropanol, 95:5), a jedinjenja koja su sadržala ekstrakt bila su nađena koristeći jedan 996 PDA detektor (Waters<®>) podešen na 254 nm.
Kao što je prikazano podacima hiralne HPLC (izvedena kao u Primeru I i II) iznetim u Tabeli III, svaki od mikroorganizama navedenih u sledećoj Tabeli III stereospecifično je redukovao više (4R) tetralona nego (4S) tetralona i ostvario je odnos od najmanje dva puta više (4S) tetralona nereagovanog prema nereagovanom (4R) tetralonu.
Treba napomenuti da mada celi, netaknutiMonosporium olivaceum v. majorATCC No. 36300, kako je prikazan u podacima u Tabeli III, redukuje u suštini više (4R) tetralona u odnosu na (4S) tetralona, pa bi na osnovu toga bio preporučljiv meikroorganizam za primenu u predmetnom postupku, međutim, i za (4R) tetralon i iza (4S) tetralon zapažena je nepoželjna degradacija ove kulture. Ta nepoželjna degradacija može biti prouzrokovana, na primer, drugim enzimima i sličnim koji sačinjavaju ceo, nedirnut mikroorganizam. Zbog toga će stručnjacima biti jasno iz postojećeg opisa da je poželjno da se koristi enzim izdvojen izMonospoiium olivaceum v. majorATCC No. 36300 umesto celogMonosporium olivaceum v. majorATCC No. 36300.
Claims (35)
1. Postupak stereoselektivne mikrobske redukcije jedinjenja formule (I) do jedinjenja formula (II) i (III)
koji obuhvata: dovođenje u kontak jedinjenja formule (I) sa mikroorganizmom, ili enzimskim redukcionim sistemom koji može da izvrši redukovanje, a koji sadrži jedan enzim izveden iz datog mikroorganizma i jedan ko-faktor za dati enzim, i inkubaciju dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije više jedinjenja formule (II) nego jedinjenja formule (III), ostavljajući više neizreagovanog jedinjenja formule (V) nego jedinjenja formule (IV). pri čemu se mikroorganizam bira iz sledeće grupe:Hansenula polvmorpha ATCC' No. 26012. Hansenula polvmorpha ATCC No. 74449. Absidia coerulea ATCC No. 20137. Geotrichum candidum ATCC No. 34614.
Geotrichum candidum ATCC No. 62401, Mortierella isabellina ATCC No. 42613, Mortierella isabellina ATCC No. 38063, Mortierella vinacea ATCC No. 09515, Penicillium notatum ATCC No. 36740.Blastoschizomyces capitatus ATCC No. 28575, Monosporium olivaceuom v. major A TCC No. 36300, Aureohasiclium pullulans A TCC No. 16623, Debaiyomycespolymorphus ATCC No. 20280, Saccharomyces cerevisiae ATC No. 15248, Candida schatavii ATCCNo. 24409. Pichia fahianii ATTC No. 16755 i Streptomyces rimosus ss. rimosus ATCC No. 10970,i njihovi mutanti koji mogu da ostvare ovu redukciju.
2. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se jedinjenje formule (V) razdvaja od jedinjenja formula (II). (III) i (IV).
3. Postupak prema zahtevu 2, naznačen time, što se razdvajanje vrši hromatografijom.
4. Postupak prema zahtevu 2, naznačen time, što se razdvajanje vrši kristalizacijom.
5. Postupak prema zahtevu 2, naznačen time. što se jedinjenje formule (II) razdvaja od jedinjenja formula (III) i (IV).
6. Postupak prema zahtevu 5, naznačen time, što se izdvojeno jedinjenje formule (II) reciklizuje u jedinjenje formule (I) oksidacijom izdvojenog jedinjenja formule (II) i racemizacijom oksidovnog jedinjenja u dato jedinjenje formule (I).
7. Postupak prema zahtevu 6, naznačen time. što recemizacija obuhvata reagovanje pomenutog oksidovanog jedinjenja sa bazom.
8. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time. što je jedinjenje formule (I) pripremljeno kako je definisano u zahtevu 6.
9. Postupak prema zahtevu 1. naznačen time. što se dovođenje u kontakt vrši sa pomenutim mikroorganizmom.
10. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time. što se dovođenje u kontakt vrši sa pomenutim enzimskim redukcionim sistemom.
11. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time. što je dati mikroorganizam, ceo intaktan mikroorganizam.
12. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time. što je dati mikroorganizam jedan njegov preparat sa iskidanim ćelijama.
13. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time. što je dati mikroorganizam, njegov dehidratisan preparat.
14. Postupak prema zahtevu 11, naznačen time, što ceo, intaktan mikroorganizam sadrži isprane ćelije datog intaktnog mikroorganizma.
15. Postupak prema zahtevu 14, naznačen time, što su isprane ćelije, imobilisane.
16. Postupak prema zahtevu 10, naznačen time, što je dati enzim enzimskog redukcionog sistema, imobilisan.
17. Postupak prema zahtevu 13, naznačen time. što je dehidratisan preparat, praškasti enzimski preparat u acetonu.
18. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time, što je dati mikroorganizam u hranljivom medijumu.
19. Postupak prema zahtevu 18. naznačen time. što se dovođenje u kontakt vrši dodavanjem datog jedinjenja formule (I) u hranljivi medijum.
20. Postupak prema zahtevu 10. naznačen time, što je dati enzimski redukcioni sistem u jednom rastvaraču.
21. Postupak prema zahtevu 20, naznačen time, što je dati rastvarao poželjno organski rastvarač.
22. Postupak prema zahtevu 10, naznačen time, što se dovođenje u kontakt vrši dodavanjem jedinjenja formule (I) u pomenuti rastvarač.
23. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time, što je dati mikroorganizam,Hansenula polymorphaATCC No. 26012 iliHansenula polymorphaATCC No. 74449 ili njihovi mutanti.
24. Postupak prema zahtevu 10, naznačen time, što je dati enzim koji sadrži enzimski redukcioni sistem, izveden odHansenula polymarphaATCC No. 26012 iliHansenula polymorphaATCC No. 74449 ili njihovih mutanata.
25. Postupak prema zahtevu 18, naznačen time. što je dati mikroorganizam,Hansenula polymorphaATCC No. 26012 iliHansenula polymorpha ATCCNo. 74449 ili njihovi mutanti.
26. Postupak prema zahtevu 19, naznačen time, što je pomenuti mikroorganizam,Hansenula polymorphaATCC No. 26012 iliHansenulapolymorphaATCC No. 74449 ili njihovi mutanti.
27. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time. što je pomenuti mikroorganizam,Absidia coeruleaATCC No. 20137 ili njegovi mutanti.
28. Postupak prema zahtevu 10, naznačen time, što je pomenuti enzim koji sadrži enzimski redukcioni sistem, izveden odAbsidia coeruleaATCC No. 20137 ili njegovih mutanata.
29. Postupak prema zahtevu 10, naznačen time, što je pomenuti enzim koji sadrži enzimski redukcioni sistem izveden odMonosporium olivaceum v. majorATCC No. 36300 ili njegovih mutanata.
30. Postupak za stereoselektivnu mikrobsku redukciju jedinjenja formule (I) u jedinjenja formula (II) i (III)
koji obuhvata: dovođenje u kontakt jedinjenje formule (I) sa mikroorganizmom i inkubaciju dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije više jedinjenja formule (II) nego jedinjenja formule (III), ostavljajući više neizreagovanog jedinjenja formule (V) nego jedinjenja formule (IV). pri čemu se mikroorganizam bira iz sledeće grupe:Hansenula polymorphaATCC No. 26012,Hansenula polvmorphaATCe No. 74449 i njihove mutante koji mogu da ostvare ovu redukciju.
31. Postupak prema zahtevu 3.0, naznačen time. što je dati mikroorganizam u hrani j ivom medij umu.
32. Postupak prema zahtevu 31, naznačen time. što se dovođenje u kontakt vrši dodavanjem datog jedinjenja formule (I) u hranljivi medijum.
33. Postupak za stereoselektivnu mikrobsku redukciju jedinjenja formule (I) u jedinjenja formula (II) i (III)
koji obuhvata: dovođenje u kontakt jedinjenje formule (I) sa jednim enzimskimredukcionim sistemom za koji može da izvrši redukciju, a koji sadrži enzim izveden iz datog mikroorganizma i jedan ko-faktor za dati enzim, i inkubaciju dobijene mešavine pod uslovima dovoljnim da se dobije više jedinjenja formule (II) negojedinjenja formule (III), ostavljajući više neizreagovanog jedinjenja formule (V) negojedinjenja formule (IV). pri čemu se mikroorganizam bira iz sledeće grupe:Hansenulapolymorpha ATCC No. 26012, Hansenulapolymorpha ATCC No. 74449i njihove mutante koji mogu da ostvare ovu redukciju.
34. Postupak prema zahtevu 33. naznačen time. što je pomenuti enzimski redukcioni sistem u rastvaraču.
35. Postupak prema zahtevu 34. naznačen time. što se dovođenje u kontak vrši dodavanjem jedinjenja formule (I) u pomenuti rastvarač.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10623398P | 1998-10-29 | 1998-10-29 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| YU55199A YU55199A (sh) | 2003-04-30 |
| RS49702B true RS49702B (sr) | 2007-12-31 |
Family
ID=22310267
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| YUP-551/99A RS49702B (sr) | 1998-10-29 | 1999-10-27 | Stereoselektivna mikrobska redukcija racemskog tetralona |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6589777B1 (sr) |
| EP (1) | EP0997535B1 (sr) |
| JP (2) | JP3106135B2 (sr) |
| KR (2) | KR100432309B1 (sr) |
| CN (1) | CN1252277C (sr) |
| AR (1) | AR018967A1 (sr) |
| AT (1) | ATE328107T1 (sr) |
| AU (1) | AU751282B2 (sr) |
| BR (1) | BR9904964A (sr) |
| CA (1) | CA2287560C (sr) |
| CY (1) | CY1105148T1 (sr) |
| CZ (1) | CZ293579B6 (sr) |
| DE (1) | DE69931574T2 (sr) |
| DK (1) | DK0997535T3 (sr) |
| ES (1) | ES2264244T3 (sr) |
| HU (1) | HUP9903941A3 (sr) |
| ID (1) | ID23591A (sr) |
| IL (1) | IL132500A0 (sr) |
| IN (1) | IN191494B (sr) |
| PL (1) | PL336331A1 (sr) |
| PT (1) | PT997535E (sr) |
| RS (1) | RS49702B (sr) |
| RU (1) | RU2235784C2 (sr) |
| TR (1) | TR199902668A2 (sr) |
| TW (1) | TWI224141B (sr) |
| ZA (1) | ZA996786B (sr) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN187170B (sr) * | 2000-01-04 | 2002-02-23 | Sun Pharmaceutical Ind Ltd | |
| US20050153408A1 (en) * | 2001-11-28 | 2005-07-14 | Tatsuya Honda | Process for preparation of 2-aminotetralin derivatives and intermediates thereof |
| WO2015071861A2 (en) * | 2013-11-14 | 2015-05-21 | Biocon Limited | Fungus mediated stereo-selective bioreduction of keto intermediates of pharmaceutically active compounds to their corresponding hydroxy compounds |
| CN104293856A (zh) * | 2014-10-30 | 2015-01-21 | 青岛科技大学 | 一种细胞催化生产氟吡啶乙酮的方法 |
| CN107418981B (zh) * | 2017-06-27 | 2020-04-07 | 中山大学 | 白地霉菌株不对称催化还原卤代芳香酮的方法 |
| CN107746861B (zh) * | 2017-11-20 | 2020-06-23 | 浙江工业大学 | 一种(r)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法 |
| CN116064688A (zh) * | 2022-09-20 | 2023-05-05 | 浙江工业大学 | 膨大弯颈霉zjph2105在生物催化制备手性芳香醇中的应用 |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4536518A (en) | 1979-11-01 | 1985-08-20 | Pfizer Inc. | Antidepressant derivatives of cis-4-phenyl-1,2,3,4-tetrahydro-1-naphthalenamine |
| US4857468A (en) * | 1985-04-13 | 1989-08-15 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for preparing optically active 2-halo-1-phenyl ethanol |
| US5049497A (en) | 1986-08-25 | 1991-09-17 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Novel process for the synthesis of the enantiomers of bicyclo(4.2.0)oct-2-en-7-one and derivatives |
| US4777288A (en) | 1987-06-11 | 1988-10-11 | Pfizer Inc. | Process for preparing a 4,4-diphenylbutanoic acid derivative |
| US4839104A (en) | 1987-06-11 | 1989-06-13 | Pfizer, Inc. | Process for preparing sertraline intermediates |
| US4855500A (en) | 1988-05-04 | 1989-08-08 | Pfizer Inc. | Process for preparing a ketimine |
| US5130338A (en) | 1989-08-30 | 1992-07-14 | Pfizer Inc. | Method of treating chemical dependencies using sertraline |
| US4940731A (en) | 1989-08-30 | 1990-07-10 | Pfizer Inc. | Method of treating premature ejaculation using sertraline |
| US4962128A (en) | 1989-11-02 | 1990-10-09 | Pfizer Inc. | Method of treating anxiety-related disorders using sertraline |
| US5082970A (en) | 1991-03-06 | 1992-01-21 | Pfizer Inc. | Process for recycling amine isomer |
| GB9114947D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline |
| GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
| US5196607A (en) | 1992-02-14 | 1993-03-23 | Pfizer Inc. | Process for preparing ketone enantiomer |
| JP3672307B2 (ja) | 1992-03-13 | 2005-07-20 | フォルシュングスツェントルム・ユーリッヒ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 新規ケトエステル‐還元酵素，その製造方法及びこれを酵素酸化還元反応に使用する方法 |
| US5248699A (en) | 1992-08-13 | 1993-09-28 | Pfizer Inc. | Sertraline polymorph |
| ATE144795T1 (de) | 1992-08-28 | 1996-11-15 | Zeneca Ltd | Enzymatisches asymetrisches reduktionsverfahren zur herstellung von 4h thieno (2,3-6) thiopyren derivaten. |
| US5466880A (en) | 1992-09-15 | 1995-11-14 | Pfizer Inc. | Process for preparing ketone enantiomer |
| JP2686366B2 (ja) * | 1993-11-30 | 1997-12-08 | ファイザー・インコーポレーテッド | キラルテトラロンの製造方法 |
| US5597826A (en) | 1994-09-14 | 1997-01-28 | Pfizer Inc. | Compositions containing sertraline and a 5-HT1D receptor agonist or antagonist |
| US5618707A (en) | 1996-01-04 | 1997-04-08 | Schering Corporation | Stereoselective microbial reduction of 5-fluorophenyl-5-oxo-pentanoic acid and a phenyloxazolidinone condensation product thereof |
-
1999
- 1999-10-21 IL IL13250099A patent/IL132500A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-10-22 IN IN1409DE1999 patent/IN191494B/en unknown
- 1999-10-25 AT AT99308422T patent/ATE328107T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-10-25 CZ CZ19993790A patent/CZ293579B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-10-25 DE DE69931574T patent/DE69931574T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-25 ES ES99308422T patent/ES2264244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-25 EP EP99308422A patent/EP0997535B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-25 TW TW088118421A patent/TWI224141B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-10-25 PT PT99308422T patent/PT997535E/pt unknown
- 1999-10-25 DK DK99308422T patent/DK0997535T3/da active
- 1999-10-26 TR TR1999/02668A patent/TR199902668A2/xx unknown
- 1999-10-26 US US09/427,424 patent/US6589777B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-27 AR ARP990105423A patent/AR018967A1/es active IP Right Grant
- 1999-10-27 CA CA002287560A patent/CA2287560C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-27 ID IDP990987D patent/ID23591A/id unknown
- 1999-10-27 RS YUP-551/99A patent/RS49702B/sr unknown
- 1999-10-28 JP JP11307272A patent/JP3106135B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-28 BR BR9904964-3A patent/BR9904964A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-10-28 HU HU9903941A patent/HUP9903941A3/hu unknown
- 1999-10-28 ZA ZA9906786A patent/ZA996786B/xx unknown
- 1999-10-28 PL PL99336331A patent/PL336331A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 AU AU57097/99A patent/AU751282B2/en not_active Ceased
- 1999-10-28 CN CNB991233883A patent/CN1252277C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-28 RU RU99122704/13A patent/RU2235784C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 KR KR10-1999-0047145A patent/KR100432309B1/ko not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-06-30 JP JP2000198150A patent/JP3359905B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-08-20 KR KR10-2003-0057440A patent/KR100432306B1/ko not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-08-10 CY CY20061101126T patent/CY1105148T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Patel et al. | Enantioselective microbial reduction of 3, 5-dioxo-6-(benzyloxy) hexanoic acid, ethyl ester | |
| Buisson et al. | Diastereoselective and enantioselective microbial reduction of cyclic alpha-alkyl beta-ketoesters | |
| US6001615A (en) | Enzymatic reduction of ketone groups in 6-cyano-3,5-dihydroxy-hexanoic alkyl ester | |
| RS49702B (sr) | Stereoselektivna mikrobska redukcija racemskog tetralona | |
| Barbieri et al. | Bioreduction of aromatic ketones: preparation of chiral benzyl alcohols in both enantiomeric forms | |
| US5393663A (en) | Stereoselective preparation of halophenyl alcohols from ketones | |
| US6451587B1 (en) | Microbial asymmetric reduction of 2-chloro-1-[-6-(2,5-dimethyl-pyrrol-1-yl)-pyridin-3-yl]-ethanone | |
| Nanduri et al. | Biochemical approaches to the synthesis of ethyl 5-(S)-hydroxyhexanoate and 5-(S)-hydroxyhexanenitrile | |
| JP2010532992A (ja) | ３，４−エポキシ酪酸エチルの微生物速度論的分割 | |
| Patel et al. | Synthesis of four chiral pharmaceutical intermediates by biocatalysis | |
| JP3310254B2 (ja) | ２−メチルキノキサリンの微生物転換 | |
| MXPA99009970A (en) | Microbial reduction stereoselectiva of a tetralone racém | |
| HK1027596B (en) | Stereoselective microbial reduction of a racemic tetralone | |
| WO1993004182A1 (en) | Process for the preparation of 3,4-epoxy benzopyrans and pyranopyridines by a microbial epoxidase | |
| McGregor-Jones | 10 Synthetic Applications of Enzyme-Catalyzed Reactions | |
| MXPA00001608A (en) | Microbial conversion of 2-methylquinoxaline | |
| WO2005083102A1 (ja) | 光学活性1,4-ベンゾジオキシン-2-カルボン酸誘導体の製造方法 | |
| HK1029374A (en) | Microbial conversion of 2-methylquinoxaline | |
| JPS6362505B2 (sr) |