RO114792B1

RO114792B1 - Derivat al acidului n-acetil neuraminic, metodă pentru prepararea acestuia, formulări farmaceutice pe baza acestui derivat

Info

Publication number: RO114792B1
Application number: RO96-01195A
Authority: RO
Inventors: Cristopher Williamson; William Jones White; Vipulkumar Patel
Original assignee: Biota Scientific Management Pty Ltd
Priority date: 1993-12-17
Filing date: 1994-12-15
Publication date: 1999-07-30
Also published as: MA23396A1; NO962545L; PL186384B1; CN1132829C; NZ277789A; DE69426726D1; OA10325A; PE31095A1; TW452577B; FI962464A0; GR3035681T3; EP0734382A1; IL112011A; US6294572B1; AU1314495A; CZ169396A3; SK282972B6; SI0734382T1; HK1014187A1; WO1995016680A1

Abstract

Invenţia se referă la un derivat al acidului N-acetil neuraminic utilizabil în medicină, acid 5-acetamido-2,3,4,5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic sub formă de cristale care au fie un raport dimensional redus, fie un raport dimensional mare.

Description

Prezenta invenție se referă la un derivat al acidului N-acetil neuraminic utilizabil în domeniul medical la metoda pentru prepararea acestuia la formulări farmaceutice preparate pe baza acestui derivat referindu-se mai ales la unele forme fizice particulare

Sunt cunoscuți derivați ai acidului N-acetil-neuraminic Astfel în PCT/AU 91/0016/publicație WO 91/16320 sunt descriși derivați ai acidului 5 acetamidino 2 3 5-trideoxi-D-glicero-Dgalacto non-2-enopiranozonic (acid 2 3 dideoxi-2 3 didehidro N-acetil-neuraminic DANA) incluzând 4-guanidino analog la DANA

Analogul 4-guanidino la DANA se prepară prin reacția corespunzătorului 4 amino analog al lui DANA protejat prin O acil prin reacție cu S-metilizouree urmată de deprotejare purificare prin cromatografie și liofilizare

Structura analogului 4-guanidino al DANA este prezentată mai jos

NH analogul 4-guanidino al DANA

Scopul prezentei invenții este realizarea acidului 5-acetamido 2 3 4 5-tetra deoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic (analogul 4-guanidino al DANA cunoscut de asemenea ca acid 5 (acetamido)-2 6-anhidro 3 4 5 trideoxi 4 guanidino-D-glicero-D galacto-non-enonic în forme fizice particulare care să faciliteze utilizarea în formulări farmaceutice cu caracteristici superioare

Invenția permite realizarea scopului propus prin aceea că acidul 5-acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero D-galacto-non-2-enopiranozonic are structura cristalină cu diferite forme de cristale astfel că acesta se prezintă fie sub forma unor cristale care au un raport redus între lungime și lărgime numitele cristale fiind de tip tabular fie că se prezintă sub forma unor cristale care au un raport ridicat între Iun gime și lărgime numitele cristale fiind de tip acicular respectivele forme sunt mono și di-hidrați cristalini având un conținut stabil de apă de-a lungul unui interval larg de umiditate relativă derivatul de tip tabular pierde în mod substanțial toată apa de ci is talizare într-un interval de temperatură cuprins între 80 și 90°C derivatul de tip acicular pierde într-un interval de temperatură cuprins între 84 și 90°C un mol de apă de cristalizare iar cel de-al doilea mol de apă de cristalizare se pierde într un interval de temperatură situat de la 135 la 143°C derivatul de tip tabular este practic lipsit de cristale cu forma cristalină aciculară derivatul de tip acicular este practic lipsit de cristale cu forma cristalină tabulară metoda de preparare a derivaților acidului N acetil neuraminic conform invenției constă în aceea că se supune cristalizării acid 5acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glycero-D-galacto-non-2-enopiranozonic dintr-o soluție apoasă a acestuia aflată la o temperatură egală sau superioară tem peraturii camerei metoda conform invenției de preparare a derivatului acidului Nacetil neuraminic de tip tabular constă în aceea că se prepară acest derivat dintr o soluție apoasă a acestora cu temperatură mai mare de 50°C în special cuprinsă între 50 și 55°C metoda conform invenției de preparare a derivatului acidului N-acetil

RO 114792 B neuraminic de tip acicular constă în aceea că se prepară respectivul derivat dintr o 50 soluție apoasă cu o temperatură mai mică de 40°C în special cuprinsă între 20 și 30°C metoda conform invenției de preparare a derivaților acidului N acetil neuraminic constă în aceea că soluțiile apoase sunt însămânțate în fiecare caz cu germenii cristalini ai cristalelor derivaților doriți metoda conform invenției de preparare a den vaților acidului N-acetil neuraminic constă în aceea că pentru fiecare tip de cristale 55 în soluția apoasă se adaugă un nonsolvent care este o cetonă sau un alcanol me toda conform invenției de preparare a derivatului acidului N-acetil neuraminic de tip tabular constă în aceea că se prepară prin interconversia formei cristaliane aciculare realizată prin îmbătrânirea soluției apoase sau adăugarea unei baze în soluție formu lare farmaceutică care cuprinde o cantitate eficientă de acid 5-acetamido 2 3 4 5 60 tetradeoxi-4-guanidino-D-glycero-D-galacto-non-2-enopiranozonic de formă cristalină și un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic și se prezintă fie sub formă de pulbere fie că este preparată sub forma unei soluții sau suspensii apoase obținută prin dizolvarea în apă a acidului 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino D glicero D-galacto-non-2-enopiranozonic în formă cristalină 65

Invenția prezintă ca avantaje prepararea unor formulări farmaceutice cu carac teristici superioare astfel în cazul cristalelor tabulare datorită proprietăților lor fizice privind bunele caracteristici de curgere și a conținutului de apă a hidratului respectiv care este legat de umiditatea relativă (UR) variind de la zero în cazul U R de 0% până la 10% în cazul UR de 90 100% iar în cazul cristalelor aciculare conținutul 70 constant de apă al acestora de-a lungul unui interval larg de umiditate (UF 1 □ 90%) reprezintă de asemenea un avantaj deosebit al acestei forme cristaline pentru utilizări farmaceutice

Un prim aspect al invenției este deci obținerea acidului 5-acetamido-2 3 4 5 tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto non-2-enopiranozoic sub forma cristalină 75 In plus s-a descoperit că respectivul compus de formula (I) poate fi t ealizat prin cristalizare în anumite condiții sub formă de hidrat cristalin (Hidrat I) în cazul ci ista lelor tabulare la care conținutul de apă este legat de umiditatea relativă (UR) variind de la zero în cazul UR = □% până la 10% în cazul UR = 90 100%

De asemenea compușii de formula (I) mai pot fi cristalizați în anumite condiții 80 sub formă de dihidrat [Hidrat II) în cazul cristalizării de formă aciculară 5 la cai e con ținutul de apă rămâne practic constant de-a lungul unui interval relativ larg de umiditate (UR =10 90%)

Deci un alt aspect al invenției este cristalizarea sub formă tabulară sau aci culară a acidului 5-acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D glicero D galacto non-2 85 enopiranozonic

In timp ce cristalele tabulare sunt privite ca tipice pentru Hidratul I iar crista lele aciculare sunt privite ca tipice pentru Hidratul II se va aprecia ca nefiind exclusă posibilitatea ca fie Hidratul I fie Hidratul II în unele circumstanțe să existe în forme cristaline alternative Este de la sine înțeles că și toate aceste forme alternative fac 90 parte din domeniul prezentei invenții

De asemenea acidul 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino D glicero-D galacto-non-2-enopiranosonic se prezintă sub formă de cristale care au conținut stabil de apă pe un interval larg de umiditate de exemplu UR=10 90%

Hidratul I pierde practic toată apa sa de cristalizare la circa 80 90°C 95

Descompunerea sa are loc la 299°C

Hidratul II pierde un mol de apă de cristalizare la circa 84 90°0 și un alt mol de apă de cristalizare la circa 135 143°C

RO 114792 B

De asemenea invenția prezintă un acid 5-acetamido-2 3 4 5 tetradeoxi 41 □□ guanidino-D-glicero-D-galacto-non-enopiranozonic sub forma unui hidrat cristalin care pierde un mol de apă de cristalizare la 84 9D°C și un alt mol de apă de cristalizare la 135 143°C

De asemenea în mod preferat invenția prezintă un acid 5-acetamido 2 3 4 5 tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D2galacto-non-2 enopiranozonic sub formă de Hidrat 105 I definit ca aici practic lipsit de Hidrat II definit ca aici

Intr-un alt aspect preferat invenția prezintă un acid 5-acetamido 2 3 4 5 tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic sub formă de Hidrat II definit ca aici practic lipsit de Hidrat I definit ca aici

Prin practic lipsit se înțelege conținând mai puțin de 5% hidrat alternativ 110 cum ar fi mai puțin de 2% de exemplu mai puțin de 1% hidrat alternativ

Acidul 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero D-galacto-non 2 enopiranozonic poate fi preparat în formă cristalină prin cristalizarea compusului din soluție

Fiecare dintre Hidratul I și Hidratul II poate fi preparat practic fără hidratul 115 alternativ prin controlarea concentrației soluției și a temperaturii la care are loc cristalizarea

In general acidul 5-acetamido-2 3 4 5 tetradeoxi 4-guanidino-D-glicero-D galacto-non-2-enopiranozonic sub forma Hidratului I poate fi obținut prin cristalizarea compusului din soluție apoasă la o temperatură mai mare de circa 50°C preferabil 120 55°0

In general acidul 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D galacto non-2-enopiranozonic sub forma Hidratului II poate fi obținut prin cristalizarea compusului din soluție apoasă la o temperatură sub circa 40°C preferabil circa 20 30°C

125 Cristalizarea acidului 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4 guanidino D glicero Dgalacto-non-enopiranozonic din soluție apoasă la o temperatură în intervalul de circa 40 50°C conduce în mod obișnuit la un amestec de cristale de formă tabulară și aciculară Astfel de amestecuri nu sunt agreate pentru prepararea formulărilor farmaceutice din cauza proprietăților fizice diferențiate ale Hidratului I și Hidratului II 130 în particular a proprietăților lor de scurgere

Insămânțarea unei soluții apoase de acid 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi 4 guanidino-D-glicero-D galacto-non-2-enopiranozonic cu cristale de Hidrat I sau de Hidrat II poate conduce la cristalizarea hidratului însămânțat Prepararea Hidratului I sau a Hidratului II trebuie prin urmare să fie condusă în absența însămânțării hidratului ne135 dorit Invers Hidratul I poate fi preparat prin însămânțarea unei soluții apoase de acid 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2 enopiranozolonic cu cristale de Hidrat I iar Hidratul II poate fi preparat prin însămânțarea unei soluții de acid 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto non 2 enopii a nozonic cu cristale de Hidrat II

140 Pentru prepararea Hidratului II este preferabil să se folosească o soluție apoasă relativ diluată de exemplu o soluție de acid 5-acetamido-2 3 4 5 tetradeoxi 4 guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic în 15 30 volume de apă de exemplu în 20 volume de apă Hidratul I poate fi cristalizat în mod avantajos dintr o soluție apoasă relativ concentrată de exemplu o soluție de acid 5-acetamido 2 3 4 5145 tetradeoxi-4-guanidino-D glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic în 12-20 volume de apă cum ar fi 12 15 volume de apă

S-a descoperit faptul că Hidratul II poate fi transformat în Hidrat I într o

RO 114792 B suspensie apoasă sau o soluție saturată Astfel de interschimburi pot fi efectuate prin îmbătrânirea prelungită a unei suspensii apoase sau a unei soluții saturate de Hidrat

II de exemplu îmbătrânire pe o perioadă de zile de exemplu mai mult de 10 zile cum 1 50 ar fi 15 zile Alternativ interschimbul poate fi efectuat în prezența unei baze de exemplu o bază organică cum ar fi imidazol

Recuperarea fie a Hidratului I fie a Hidratului II din soluție apoasă poate fi îmbunătățită prin adăugarea la soluție a unui contra solvent adecvat Contra solvenții adecvați sunt solvenți miscibili cu apa în care compusul de formula (I) are o slabă 155 solubilitate In mod convenabil contra solventul va fi o cetonă cum ar fi acetonă sau un alcanol cum ar fi 2-propanol Un contra solvent preferat este acetona

De asemenea s-a constatat că adăugarea unei soluții apoase de acid 5 acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino D-glicero-D-galacto -non-2-enopiranozonic la un volum similar dintr-un contra solvent definit ca mai înainte conduce la precipitarea 160 Hidratului II De exemplu adăugarea unei soluții de acid 5-acetamido 2 3 4 5 tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D galacto-non-2-enopiranozonic în 12 15 volume de apă la 12 20 volume de acetonă dă cristale de Hidrat II

Metodele pentru prepararea materialului cristalin și în particular metodele pentru prepararea Hidratului I și a Hidratului II descrise aici constituie aspecte supli 1 65 mentare ale prezentei invenții

Acidul 5-acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4 guanidino-D-glicero D ga-lacto non 2-enopira nozonic în formă cristalină poate fi utilizat ca agent antiviral așa cum se descrie în WO 91/16320 care este încorporat aici prin referință

Acidul 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D glicero-D-galacto-non-2- 170 enopiranozonic în formă cristalină poate fi formulat drept compoziție farmaceutică pentru utilizare ca agent antiviral așa cum se descrie în WO 91/16320

Formulările farmaceutice preferate ale acidului 5-acetamido-4 guanidino D glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic includ formulări sub formă de pulberi și soluții apoase sau suspensii Prepararea formulărilor sub formă de pulbere necesită 175 micronizarea substanței medicamentoase Bunele proprietăți de curgere ale Hidratului I îl fac deosebit de adecvat pentru micronizare Hidratul II are proprietăți adecvate de curgere și de asemenea o viteză deosebit de rapidă de dizolvare în apă Aceste pro prietăți fac Hidratul II deosebit de avantajos pentru prepararea soluțiilor apoase/ suspensiilor 1 80

Hidrații I și II au fost supuși studiilor de difracție cu raze X a pulberii Urmele de difracție au fost obținute utilizând un difractometru Siemens D-500 și radiație CuK_a Intensitățile Razelor-X sunt măsurate la creșteri de O 02° la intervale de 5 s utilizând un contor de scintilație între valorile de 5 și 55° 2Θ Distanțele - d și intensitățile liniilor obținute pentru Hidratul I și Hidratul II sunt arătate în tabelul 1 și res- 1 85 pectiv 2

Tabelul 1

d(A)	K%)
10 06	30 25
6 77	69 81
6 63	_____________89 61___________

RO 114792 B

Tabelul 1 [continuare)

d(A)	K%)
6 35	12 69
6 05	54 56
5 38	25 11
5 05	98 58
4 61	12 58
4 42	100 00
4 31	8 28
4 17	11 67
3 98	75 00
3 90	52 61
3 77	20 33
3 69	36 17
3 48	26 53
3 41	53 25
3 37	17 61
3 16	18 39
3 02	31 08
2 92	9 25
2 92	6 28
2 87	13 58
2 82	10 78
2 78	6 78
2 74	18 03
2 69	15 33
2 65	6 25
2 63	6 44
2 59	11 44
2 49	14 31
2 45	18 81
2 41	_______________8 64 ______

RO 114792 B

Tabelul 1 [continuare]

d(A)	l(%)
2 35	11 36
2 19	5 42
2 13	12 25
2 11	6 56
2 02	8 33
1 98	5 47

230

235

Tabelul 2

d(A)	K%)
16 88	66 34
10 38	50 60
9 50	16 08
8 47	40 46
7 12	100 00
5 84	11 78
5 33	18 83
5 21	33 99
4 78	12 94
4 57	75 81
4 32	16 37
4 25	18 49
4 14	43 26
3 96	10 33
3 76	22 11
3 64	25 16
3 57	37 04
3 52	15 69
3 40	16 85
3 34	21 20
3 17	13 52
3 13	____________17 04__

240

245

250

255

RO 114792 B

260

265

270

275

280

Tabelul 2 (continuai e)

d(A)	K%)
3 06	7 48
2 94	10 19
2 92	8 45
2 86	9 17
2 76	9 56
2 72	9 22
2 67	6 81
2 64	8 06
2 60	5 46
2 58	6 52
2 51	5 31
2 49	6 66
2 45	5 55
2 43	5 89
2 39	15 93
2 38	10 38
2 31	8 40
2 22	5 94
2 16	5 36
2 11	6 28
2 03	7 24
1 91	6 57

285

290

295

Așadar invenția are ca prim aspect obținerea acidului 5-acetamido 2 3 4 5tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D galacto-non-2-enopiranozonic sub formă cristalină Respectivul compus de formula (I) se obține prin cristalizare din soluție apoasă în condiții specifice fie cu monohidrat (Hidrat I) fie ca dihidrat (Hidrat II) Fiecare hidrat respectiv Hidrat I sau Hidrat II poate fi obținut singur prin controlul riguros al concen trației soluției și a temperaturii de cristalizare In timp ce Hidratul I se obține din soluții relativ concentrate respectiv o parte acid 5-acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4 guanidino D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic la 12 20 volume de apă respectiv la 12 15 volume de apă și la temperaturi de peste 50 55°0 Hidratul II cristalizează din soluții relativ diluate respectiv pentru o parte acid se iau 15 30 volume de apă preferabil 20 volume și la temperaturi de sub 40°C preferabil 20 30°C Cristalizarea acidului 5-acetamido-2 3 4 5-tetrahidroxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic din soluția apoasă într-un interval de temperaturi de 40 50°C conduce

RO 114792 B la amestecuri neindicate preparării unor formulări farmaceutice din motivul proprie tăților fizice diferențiate ale Hidratului I și ale Hidratului II în particular ale proprietăților de scurgere 3OO

Următoarele exemple ilustrează invenția dar nu se intenționează să fie interpretate ca o limitare la acesteia Toate temperaturile sunt în °C

Exemplul 1 Prepararea Hidratului I Un amestec 5 O g acid 5 acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic și 60 ml de apă se încălzesc la 100°C pentru a da o soluție limpede Soluția se răcește timp de 305 30 min la 55°C și se menține între 55 și 50°C timp de 4 h pentru a da o suspensie cristalină Se adaugă 80 ml acetonă pe timp de 90 min temperatura fiind menținută între 48 și 55°C Suspensia rezultată se agită o oră temperatura fiind lăsată să scadă la circa 20°C iar suspensia este lăsată să șadă 17 h la temperatura ambiantă Produsul se colectează prin filtrare la vid și filtrul și patul de filtrare se spală cu ace 310 tonă/apă 4 1 (2 x 10 ml] apoi cu 10 ml acetonă Produsul se usucă la aer la tempe ratură ambiantă și umiditate pentru a da 4 5 g Hidrat I (cristale tubulare) RMP(D₂0)2 04(3H s] 3 67(2H m) 4 23 (1H m] 4 42 (2H m] 5 63 (1H d J=2 5Hz] IR(Nujol) 3248 3338 3253 NH OH 1692 1666 1646 1619

1575 CO(CH₃CONH C0₂) CN 315

Conținut de apă 8 4% g/g calculat pentru C₁₂H₂₀N₄C₇ 1 7H₂0

Exemplul 2 Prepararea Hidratului I Un amestec din 15 O g acid 5 acetamido2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto non-2-enopiranozonic și 180 ml de apă se încălzește la 100°C pentru a da o soluție limpede Soluția se clarifică prin filtrare la vid printr-un filtru de hârtie apoi se răcește la circa 55°C și se menține între 320 55 și 50°C timp de 4 h lăsând să se definitiveze cristalizarea Se adaugă 210 ml de acetonă cu agitare timp de 2 h temperatura fiind menținută la 48 55°C Suspensia rezultată se agită și se răcește la 30°C și apoi este lăsată să șadă la temperatura ambiantă 17 h Solidul se filtrează și se spală cu 2 x 30 ml amestec acetonă/apă 4 1 și apoi cu 30 ml acetonă Solidul se usucă la aer la temperatură ambiantă și umiditate 325 pentru a da 12 □ g Hidrat I (cristale tabulare)

Caracterizare ca mai sus

Exemplul 3 Prepararea Hidratului II Un amestec din 10 O g acid 5 acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D galacto-non-2-enopiranozonic și 100 ml de apă se încălzesc la 95°C Soluția rezultată se limpezește prin filtrare la vid Soluția se 330 răcește apoi la 30°C timp de 5 min se adaugă cu agitare 250 ml acetonă Suspen sia albă consistentă rezultată este lăsată să stea la temperatura ambiantă20 h Solidul se colectează prin filtrare la vid și se spală cu 2 x 20 ml de amestec ace tonă/apă 4 1 și apoi cu 20 ml de acetonă Solidul se usucă într-o etuvă la vid la 35°C timp de 24 h și apoi se echilibrează cu umiditate atmosferică la temperatul ă ambiantă 335 și umiditate pentru a da 8 16 g de Hidrat II (cristale de formă aciculară)

Caracterizare ca mai sus

Conținut de apă 10 6% g/g calculat pentru C₁₂H₂₀N₄0₇ 2H₂C 9 8% g/g

Exemplul 4 Prepararea Hidratului II Un amestec de 10 O g acid 5 acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic și 400 ml apă 340 se încălzește la 20°C timp de 2 h Soluția rezultată se limpezește prin filtrare la vid Se adaugă 110 ml acetonă și solidul începe să cristalizeze Suspensia i ezultată se agită timp de 2 5 h la 20°C Solidul se colectează prin filtrare la vid si se spală cu 2 x 20 ml amestec acetonă/apă 4 1 v/v apoi cu 20 ml de acetonă Solidul se usucă într-o etuvă la vid la 30°C și apoi se echilibrează cu umiditatea atmosferică la tempe 345 ratură ambiantă și umiditate pentru a da 7 7 g Hidrat II (cristale sub formă aciculară)

RO 114792 B

Caracterizare ca mai sus

Conținut de apă 11 1% g/g calculat pentru C₁₂H₂₀N₄0₇ 2H₂C 9 8 g/g

Exemplul 5 Prepararea Hidratului II Un amestec din 50 g acid 5 acetamido 2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-p-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic și 1150 ml apă se încălzește la 75°C Soluția rezultată se limpezește prin filtrare la vid și spălare cu 100 ml apă Soluția se răcește apoi la 7°C timp de o oră și se adaugă 500 ml de acetonă Soluția rezultată se agită cu încetul timp de O 5 h timp în care începe să cristalizeze un solid Apoi la suspensie se adaugă 750 ml de acetonă de-a lungul a 2 h menținând temperatura la 5 10°C Solidul se colectează prin filtrare la vid și se spală cu 2 x 100 ml de amestec acetonă/apă 4 1 v/v și apoi cu 100 ml acetonă Solidul se usucă la aer la temperatura ambiantă și umiditate pentru a da 46 O g de Hidrat II (cristale sub formă aciculară)

Conținut de apă 9 8% g/g calculat pentru C₁₂H₂₀N₄0₇ 2H₂0 9 8% g/g

DRX concordă cu Hidrat II (>99%)

Exemplul 6 Precipitarea Hidratului II Un amestec de 50 g de acid 5 acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi 4 guanidino D-glicero-D galacto-non-2-enopiranozonic și 600 ml apă se încălzesc la 100°C Soluția limpede caldă rezultată se adaugă de a lungul a 8 min peste 700 ml acetonă agitată rapid la temperatura ambiantă provo când creșterea temperaturii amestecului de la 20 la 56°C și precipitarea unui solid Suspensia rezultată este lăsată să se răcească la 20°C cu agitare apoi solidul se co lectează prin filtrare la vid și se spală cu 2 x 100 ml amestec acetonă/apă 4 1 și apoi cu 100 ml de acetonă Solidul se usucă la aer la temperatură ambiantă și umiditate pentru a da 47 9 g de Hidrat II (cristale sub formă aciculară)

Conținut de apă 10 0 g/g calculat pentru C₁₂H₂₀N₄0₇ 2H₂0 9 8% g/g DRX concordă cu Hidratul II ( > 99%)

Exemplul 7 Cristalizarea Hidratului I din apă Un amestec din 37 7 g acid 5 acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic și 350 ml de apă se încălzește la 95°C pentru a da o soluție limpede Aceasta se ajustează la pH=7 O (de la pH=6 4) cu 100 pl soluție apoasă 10% de acid acetic Soluția rezultată este lăsată să se răcească la temperatura ambiantă cu agitare pentru a da o suspensie cristalină Produsul se colectează prin filtrare apoi se usucă la vid la temperatura ambiantă pentru a da 28 9 g Hidrat I (cristale tabulare]

IR-ul concordă cu Hidratul I

Exemplul 8 Precipitarea Hidratului II Un amestec din 30 O g de acid 5 acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto-non-2-enopiranozonic și 540 ml de apă se încălzește la 75°C pentru a da o soluție Soluția rezultată se limpezește prin filtrare și spălare cu 54 ml de apă Soluția se încălzește la 100°C se răcește la 40°C apoi se însămânțează cu O 3 g de Hidrat II Cristalizarea are loc pe măsură ce temperatura este redusă până la temperatura ambiantă Suspensia rezul tată se agită o oră la temperatura ambiantă se răcește la 5°C apoi se adaugă 600 ml de acetonă de-a lungul a 1 5 h Solidul se colectează prin filtrare la vid și se spală cu 2 x 60 ml de amestec acetonă/apă 4 1 v/v Și apoi cu 60 ml de acetonă Solidul se usucă la aer la temperatură ambiantă și umiditate pentru a da 26 5 g Hidrat II (cristale sub formă aciculară)

DRX 90-95% Hidrat II (5 10% Hidrat I)

Exemplul 9 Interconversla-Hidratului II În Hidrat I prin Îmbătrânire Un amestec din 10 0 g acid 5-guanidino 2 3 4 5-tetradeoxi 4 guanidino-D-glicero Dgalacto-non-2-enopiranozonic și 200 ml de apă se încălzește la 100°C pentru a da o soluție Soluția rezultată se răcește rapid la 30°C se însămânțează cu O 05 g de

RO 114792 B

Hidrat II și apoi este lăsată să stea neagitată peste noapte Microscopia cu iluminare arată în exclusivitate acele caracteristice de Hidrat II Suspensia se îmbătrânește neagitată la temperatura ambiantă timp de 11 zile (când microscopia cu iluminare arată prezența câtorva cristale de Hidrat I) apoi se agită timp de 3 zile Se adaugă 2OO ml de acetonă și suspensia se agită timp de o oră Solidul se colectează prin filtrare la vid și se spală cu 2 20 ml de acetonă/apă 4 1 v/v Solidul se usucă la aer la temperatură ambiantă și umiditate pentru a da 9 □ g de Hidrat I (cristale tabulare]

DRX concordă cu Hidratul I (> 99%)

Exemplul 10 Interconversia Hidratului II În Hidrat I utilizând bază O suspensie din 5 □ g de acid 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero D galacto non 2 enopiranozonic (5 g Hidrat II) în 30 ml de apă conținând 2 96 g de imidazol se agită și se încălzește la 30°C timp de 40 h Solidul rămas se colectează prin filtrare la vid și se spală cu apă (2 x 1 ml 2 x 5 ml) apoi se usucă la aer la temperatură ambiantă și umiditate pentru a da 3 98 g de Hidrat I [cristale tabulare)

IR-ul concordă cu Hidrat I

Exemplul 11 Prepararea Hidratului I prin însămânțate Un amestec din 5 O g de acid 5-acetamido2 3 4 5-tetradeoxi-4 guanidino-D-glicero-D galacto-non 2 enopira nozonic și 60 ml de apă se încălzește la 100°C pentru a da o soluție Soluția rezultată se limpezește prin filtrare la vid Soluția rezultată se răcește la circa 50°C se însămânțează cu Hidrat I se lasă neagitată la 50 55°C timp de o oră și apoi se agită o oră la 5 -55°C Se adaugă 70 ml de acetonă în timp ce se menține o temperatură de 48 55°0 Suspensia se agită timp de o oră la 50 55°C apoi se îmbă trânește neagitată peste noapte la temperatura ambiantă Solidul se colectează prin filtrare la vid și spălare cu 2 x 10 ml amestec acetonă/apă 4 1 v/v și apoi cu 2 x 10 ml de acetonă Solidul se usucă la vid apoi este lăsat să se reechilibi eze la tem peratură ambiantă și umiditate pentru a da 3 8 g de Hidrat I (cristale tabulare]

DRX Concordă cu Hidratul l(>99%)

Claims

1 Derivat al acidului N-acetil neuraminic caracterizat prin aceea că în scopul utilizării în medicină acidul 5-acetamido 2 3 4 5 tetradeoxi 4-guanidino D glicero D galacto-non-2-enopiranozonic are structură cristalină prezentându-se sub diferite forme de cristale

2 Derivat conform revendicării 1 caracterizat prin aceea că se prezintă sub forma unor cristale care au un raport redus între lungime și lărgime

3 Derivat conform revendicărilor 1 și 2 caracterizat prin aceea că numitele cristale sunt de tip tabular

4 Derivat conform revendicării 1 caracterizat prin aceea că se prezintă sub forma unor cristale care au un raport ridicat între lungime și lărgime

430

435

5 Derivat conform revendicărilor 1 cristale sunt de tip acicular

6 Derivat conform revendicărilor 1 cristale sunt mono și di-hidrați cristalini

7 Derivat conform revendicărilor 1 și 4 la 5 la 6 caracterizat prin caracterizat prin caracterizat prin aceea aceea aceea că ca că numitele numitele numitele cristale au un conținut stabil de apă de-a lungul unui interval larg de umiditate t elativă

8 Derivat conform revendicărilor 2 și 3 caracterizat prin aceea că în mod substanțial toată apa de cristalizare se pierde într-un interval de temperatură cuorins între 80 și 9D°C

440

RO 114792 B

9 Derivat conform revendicărilor 4 și 5 caracterizat prin aceea că într-un interval de temperatură cuprins între 84 și 90°C se pierde un mol de apă de cristalizare iar cel de-al doilea mol de apă de cristalizare se pierde într-un interval de temperatură de la 135 la 143°C

10 Derivat conform revendicărilor 2 3 și 8 caracterizat prin aceea că este practic lipsit de cristale cu forma cristalină revendicată în oricare din revendicările 4 5 7 și 9

11 Derivat conform revendicărilor 4 5 7 și 9 caracterizat prin aceea că este practic lipsit de cristale cu forma cristalină revendicată în oricare din revendi cările 2 3 și 8

12 Metodă de preparare a derivatului conform revendicării 1 caracterizată prin aceea că se supune cristalizării acidul 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi 4 guanidino-D-glicero-D-galacto non-2 enopiranozonic dintr-o soluție apoasă a acestuia aflată la o temperatură egală sau superioară temperaturii camerei

13 Metodă de preparare conform revendicării 12 caracterizată prin aceea că se prepară acel derivat având caracteristicile revendicate în oricare dintre revendicările 2 3 8 și 10 dintr-o soluție apoasă cu temperatura mai mare de 50°C

14 Metodă de preparare conform revendicării 13 caracterizată prin aceea că temperatura soluției apoase este cuprinsă în intervalul 50 55°C

15 Metodă de preparare conform revendicării 12 caracterizată prin aceea că derivatul se prepară având caracteristicile revendicate în oricare dintre revendi cările 4 5 7 9 și 11 dintr-o soluție apoasă a acestora cu o temperatură mai mică de 40°C

16 Metodă de preparare conform revendicării 15 caracterizată prin aceea că temperatura soluției apoase este cuprinsă între 20 și 30°0

17 Metodă de preparare conform revendicărilor 12 la 14 caracterizată prin aceea că soluția apoasă este însămânțată cu germeni cristalini ai cristalelor derivatului revendicat în oricare dintre revendicările 2 3 8 și 10

18 Metodă de preparare conform revendicărilor 15 la 16 caracterizată prin aceea că soluția apoasă este însămânțată cu germeni cristalini ai cristalelor derivatului revendicat în oricare dintre revendicările 4 5 7 9 și 11

19 Metodă de preparare conform oricăreia dintre revendicările 12 la 18 caracterizată prin aceea că în soluția apoasă se adaugă un nonsolvent

20 Metodă de preparare conform revendicării 19 caracterizată prin aceea că nonsolventul este o cetonă sau un alcanol

21 Metodă de preparare conform revendicării 20 caracterizată prin aceea că nonsolventul este acetonă

22 Metodă de preparare a derivatului conform revendicării 1 caracterizată prin aceea că se prepară derivatul în forma cristalină conform oricărei dintre revendicările 2 3 8 și 10 prin interconversia formei cristaline revendicată în reven dicările 4 5 7 9 și 11

23 Metodă de preparare conform revendicării 22 caracterizată prin aceea că interconversia se realizează prin îmbătrânirea soluției apoase

24 Metodă de preparare conform revendicării 22 caracterizată prin aceea că interconversia se realizează prin adăugarea unei baze în soluția apoasă

25 Metodă de preparare a derivatului conform oricăreia dintre revendicările 4 5 7 9 și 11 caracterizată prin aceea că se adaugă o soluție apoasă de acid

RO 114792 B

5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero-D-galacto non-2-enopiranozonic la un volum similar de nonsolvent

26 Metodă de preparare conform revendicării 25 caracterizată prin aceea că nonsolventul este acetonă

495

27 Formulare farmaceutică caracterizată prin aceea că cuprinde o can titate eficientă de acid 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero D-galacto non-2-enopiranosonic în formă cristalină si un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic

28 Formulare farmaceutică în conformitate cu revendicarea 27 5OQ caracterizată prin aceea că se prezintă sub formă de pulbere

29 Formulare farmaceutică conform revendicării 27 caracterizată prin aceea că este sub forma unei soluții sau suspensii apoase obținută prin dizolvare în apă a acidului 5-acetamido-2 3 4 5-tetradeoxi-4-guanidino-D-glicero D galacto non-2 enopiranosonic de formă cristalină 505