PT2415743E

PT2415743E - Composição que contém piceatanol e método de produção da composição que contém piceatanol

Info

Publication number: PT2415743E
Application number: PT98426695T
Authority: PT
Inventors: Yuko Matsui; Masanori Kamei; Kenkichi Sugiyama
Original assignee: Morinaga & Co
Priority date: 2009-04-03
Filing date: 2009-04-03
Publication date: 2015-10-06
Also published as: BRPI0925037B1; AU2009343571A1; US20130165529A1; CY1116677T1; CA2755418C; EP2415743A1; ES2545975T3; JPWO2010113315A1; EP2415743A4; US8617620B2; CN102307837B; US9393191B2; KR101305846B1; EP2415743B1; PL2415743T3; DK2415743T3; CN102307837A; BRPI0925037A2; HUE027734T2; SI2415743T1

Description

DESCRIÇÃO

COMPOSIÇÃO QUE CONTÉM PICEATANOL E MÉTODO DE PRODUÇÃO DA COMPOSIÇÃO QUE CONTÉM PICEATANOL

Campo Técnico A presente invenção refere-se a uma composição que contém piceatanol, que contém piceatanol derivado de uma semente de Passiflora edulis Sims, e um método de produção de uma composição que contém piceatanol.

Antecedentes da Técnica A Literatura de Não Patente 1 abaixo descreve que o resveratrol e o piceatanol, que são compostos de polifenol derivados da uva, têm efeitos de inibição da produção de melanina através de células produtoras de melanina. Contudo, para efetuar um teste para confirmar os efeitos, é utilizado um reagente comercialmente disponível, e a literatura não descreve que é obtida uma composição que contém piceatanol, ou afins, derivada de uma substância natural, tal como a uva.

Entretanto, a Literatura de Patente 1 abaixo descreve que o resveratrol é concentrado e recolhido de modo pouco dispendioso, de forma seletiva e de forma eficaz a partir de um extrato de raízes de Reynoutria japonica Houtt. var. japnica. Além disso, a Literatura de Patente 2 abaixo descreve um extrato de murtinho que contém resveratrol. Mais ainda, as Literaturas de Patente 3 e 4 abaixo descrevem um extrato de maracujá (Passifloraceae, Passiflora sp.), em particular, um extrato de pericárpio de maracujá e a utilização do extrato nos alimentos, nos suplementos alimentares e nos campos médicos.

Contudo, nenhuma das técnicas descritas nas literaturas mencionadas acima fornece uma composição que seja obtida a partir de uma substância natural e contenha piceatanol num teor elevado.

Lista de Citação Literatura de Patente [PTL 1] JP 2005-281179 A [PTL 2] JP 2009-13159 A [PTL 3] JP 2007-302659 A [PTL 4] JP 2007-531734 A Literatura de Não Patente [NPL 1] Takako Yokozawa e You Jung Kim, "Piceatannol Inhibits Melanogenesis by Its Antioxidative Actions, Biological & Pharmaceutical Bulletin" Vol. 30 (2007) N.° 11 págs. 2007 a 2011 Sumário da Invenção Problema Técnico

De um ponto de vista geral de segurança alimentar, o piceatanol a misturar num alimento ou numa bebida, tal como um alimento funcional ou um alimento natural, é preferencialmente derivado de uma substância natural. Contudo, até agora, não é conhecida nenhuma substância natural que contenha piceatanol num teor elevado. As substâncias naturais, tais como uvas, contêm piceatanol num teor muito baixo.

Por conseguinte, o objeto da presente invenção é fornecer uma composição que contém piceatanol, que seja derivada de uma substância natural e contenha piceatanol num teor elevado, e um método de produção de uma composição que contém piceatanol.

Solução para o Problema

Os inventores da presente invenção realizaram estudos intensivos para alcançar o objeto mencionado acima. Como consequência, os inventores descobriram que a semente de Passiflora edulis Sims, cujas aplicações não foram encontradas, uma vez que a mesma foi outrora rejeitada, contém piceatanol num teor elevado, completando assim a presente invenção.

Ou seja, uma composição que contém piceatanol da presente invenção é obtida a partir da referida semente de maracujá e contém piceatanol num teor de 0,0001 a 99,9% em massa.

De acordo com a composição que contém piceatanol da presente invenção, é possível fornecer uma composição, que é derivada de uma substância natural e contém piceatanol num teor elevado. A composição é derivada de uma substância natural e é, por isso, misturada de modo adequado num cosmético, num fármaco e num alimento ou numa bebida, tal como um alimento funcional ou um alimento natural.

Entretanto, um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção inclui: a pulverização da semente de maracujá; a adição de pelo menos um tipo de solvente aquoso à base de álcool e um solvente aquoso à base de cetona selecionados; e a agitação da mistura para extrair o piceatanol para o solvente.

De acordo com o método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, uma composição, que é derivada de uma substância natural que contém piceatanol num teor elevado, pode ser produzida numa quantidade elevada, uma vez que o piceatanol é extraído da semente de maracujá utilizando um solvente aquoso à base de álcool ou um solvente aquoso à base de cetona. O método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção inclui preferencialmente: a pulverização da referida semente de maracujá; a adição de um solvente aquoso à base de álcool ou um solvente aquoso à base de cetona; a agitação da mistura para extrair piceatanol para o solvente, obtendo assim um primeiro extrato; a adição do outro não selecionado acima, entre o solvente aquoso à base de álcool e o solvente aquoso à base de cetona, ao resíduo não recolhido como o extrato; a agitação da mistura para extrair o piceatanol para o solvente, obtendo assim um segundo extrato; e a mistura do primeiro extrato e do segundo extrato. De acordo com esta forma de realização, uma composição que contém piceatanol, que contém piceatanol num teor elevado, pode ser produzida numa quantidade mais elevada, uma vez que a extração é efetuada por etapas com uma diversidade de solventes.

No método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, a semente de maracujá é preferencialmente uma semente crua de maracujá ou uma semente seca de maracujá, que é obtida através da secagem da semente crua de maracujá.

Além disso, no método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, o solvente aquoso à base de álcool é preferencialmente etanol aquoso, ou o solvente aquoso à base de cetona é preferencialmente acetona aquosa. Relativamente aos teores de água, o etanol aquoso contém preferencialmente 20 a 99, 9% em volume de etanol, e a acetona aquosa contém preferencialmente 20 a 99,9% em volume de acetona. De acordo com essas formas de realização, é fornecida uma maior eficácia de extração de piceatanol.

No método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, a agitação em cada um dos solventes é preferencialmente efetuada por agitação ou vibração ultrassónica. De acordo com esta forma de realização, é fornecida uma maior eficácia de extração de piceatanol.

Além disso, o método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção inclui ainda preferencialmente a destilação do solvente sob pressão reduzida após a extração. É possível obter um alimento ou uma bebida, tendo adicionada uma composição que contém piceatanol, que é obtida a partir da referida semente de maracujá e que contém piceatanol num teor de 0,0001 a 99,9% em massa. É possível obter um cosmético, tendo adicionada uma composição que contém piceatanol, que é obtida a partir da semente de maracujá e que contém piceatanol num teor de 0,0001 a 99,9% em massa. A presente invenção é conforme definido pelas reivindicações em anexo.

Efeitos vantajosos da Invenção

De acordo com a composição que contém piceatanol da presente invenção, é possível fornecer uma composição, que é derivada de uma substância natural e contém piceatanol num teor elevado. A composição é derivada de uma substância natural e é, por isso, misturada de modo adequado num cosmético, num fármaco e num alimento ou numa bebida, tal como um alimento funcional ou um alimento natural. Entretanto, de acordo com o método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, uma composição, que é derivada de uma substância natural e contém piceatanol num teor elevado, pode ser produzida numa quantidade elevada, uma vez que é utilizado um solvente aquoso à base de álcool ou um solvente aquoso à base de cetona como um solvente para extrair piceatanol da semente de maracujá. Além do mais, a extração pode ser efetuada por etapas com uma diversidade de solventes, cada um pertencendo ao solvente aquoso à base de álcool ou ao solvente aquoso à base de cetona, para produzir assim a composição numa quantidade mais elevada.

Breve Descrição das Figuras [FIG. 1] Diagramas que ilustram cromatogramas HPLC de extratos de sementes (A) , pericárpio (b) e sarcocárpio (C) .

[FIG. 2] Diagramas que ilustram um espetro de massa (A) e um espetro de UV (B) de um componente eluído em cerca de 41 minutos na análise por HPLC da FIG. 1.

[FIG. 3] Diagramas que ilustram um espetro de massa (A) e um espetro de UV (B) de resveratrol (peso molecular: 228) .

[FIG. 4] Diagramas que ilustram um espetro de massa (A) e um espetro de UV (B) de piceatanol (peso molecular: 244) .

[FIG. 5] Diagramas que ilustram, cada um deles, um efeito de um teor de água de etanol (A) ou acetona (B) como um solvente na eficácia de extração de piceatanol. Descrição das Formas de Realização A composição que contém piceatanol da presente invenção é uma composição, que é obtida a partir de sementes de maracujá e contém piceatanol num teor de 0,0001 a 99,9% em massa. A composição pode ter uma forma liquida, sólida, semissólida ou gelificada, por exemplo, e pode corresponder em si mesma a sementes de maracujá ou a um produto de sementes processadas, tal como uma pasta obtida através da pulverização das sementes ou um pó obtido através da pulverização de um produto liofilizado das sementes. O teor de piceatanol em termos de teor sólido é preferencialmente de 0,0001 a 99,9% em massa, mais preferencialmente de 0,01 a 50% em massa, ainda mais preferencialmente de 0,1 a 10% em massa. O piceatanol é representado pela seguinte fórmula química (1).

[Quím. 1]

O piceatanol representado pela fórmula química mencionada acima corresponde a trans-piceatanol com uma estrutura na qual dois grupos fenilo são ligados através de um grupo trans-alceno, mas na presente invenção, o piceatanol inclui igualmente cis-piceatanol com uma estrutura na qual dois grupos fenilo são ligados através de um grupo cis-alceno na fórmula química mencionada acima. 0 maracujá (Passiflora edulis Sims) é uma planta que pertence à família Passifloraceae do género Passiflora e é igualmente designado por Kudamonotokeisou, e o fruto tem um sabor agridoce e come-se como um fruto sem tratamentos, bebe-se como um sumo ou é utilizado como um aromatizante para misturar num alimento ou numa bebida, tal como uma gelatina ou um bolo. As sementes do maracujá são rijas e são removidas do fruto quando processadas para sumo ou afins, e mesmo que se coma ou beba o fruto com as sementes, as mesmas são excretadas, uma vez que as sementes têm cascas duras e são difíceis de digerir. A presente invenção baseia-se na descoberta de que as sementes de maracujá, cujas aplicações não foram encontradas e, por esse motivo, foram outrora rejeitadas, contêm piceatanol num teor elevado. Convém referir que se as sementes de maracujá utilizadas na presente invenção forem misturadas num alimento ou numa bebida, tal com um alimento funcional ou um alimento natural, não existe nenhum problema em termos de segurança, tal como demonstrado por experiências anteriores em que se comeu o maracujá.

Preferencialmente, a composição que contém piceatanol da presente invenção pode ser obtida, por exemplo, através de um método incluindo a pulverização de sementes cruas ou secas de maracujá e a realização da extração utilizando um solvente de uma variedade de solventes. Para aumentar a eficácia de extração, as sementes de maracujá podem ser submetidas de modo apropriado a um tratamento químico, tal como decomposição ácida ou alcalina, ou uma decomposição enzimática antes da extração. Além do mais, de acordo com o método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção conforme descrito abaixo, é possível obter uma composição que contém piceatanol num teor elevado numa quantidade particularmente elevada e, por isso, a composição é mais preferencialmente obtida através do método.

Em seguida, é descrito o método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção.

No método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, primeiro, as sementes de maracujá são pulverizadas. As sementes de maracujá a utilizar podem ser sementes cruas ou secas de maracujá, e para aumentar a eficácia de extração, o tratamento químico, tal como decomposição ácida ou alcalina, ou a decomposição enzimática pode ser efetuado de modo apropriado antes da extração. A pulverização pode ser efetuada utilizando um pulverizador conhecido. Convém referir que as sementes de maracujá têm um elevado teor de óleo, e por isso as sementes podem tornar-se tipo pasta após a pulverização.

Subsequentemente, pelo menos um tipo selecionado a partir de um solvente aquoso à base de álcool e um solvente aquoso à base de cetona é adicionado às sementes de maracujá pulverizadas, e a mistura é agitada para extrair piceatanol para o solvente. 0 solvente aquoso à base de álcool que pode ser utilizado inclui solventes aquosos, tais como etanol aquoso, metanol aquoso e propanol aquoso, e o etanol aquoso é particularmente preferido. Entretanto, o solvente aquoso à base de cetona que pode ser utilizado inclui solventes aquosos, tais como acetona aquosa, metiletilcetona aquosa, dietilcetona aquosa e cloroacetona aquosa, e a acetona aquosa é particularmente preferida.

Relativamente aos teores de água, o etanol aquoso contém preferencialmente 20 a 99,9% em volume de etanol, mais preferencialmente 40 a 99,9% em volume de etanol, ainda mais preferencialmente 60 a 80% em volume de etanol, e a acetona aquosa contém preferencialmente 20 a 99,9% em volume de acetona, mais preferencialmente 40 a 99,9% em volume de acetona, ainda mais preferencialmente 60 a 80% em volume de acetona. Se os teores não estiverem incluídos nos intervalos mencionados acima, a eficácia de extração de piceatanol pode deteriorar-se, o que não é preferido. Convém referir que, para simplificar as numerações dos teores de água dos solventes aquosos, por exemplo, 80% em volume de etanol contendo 20% em volume de água são referidos como "80% de etanol aquoso". Além do mais, por exemplo, 70% em volume de etanol contendo 30% em volume de água são referidos como "70% de etanol aquoso". Além disso, por exemplo, 70% em volume de acetona contendo 30% em volume de água são referidos como "70% de acetona aquosa".

No método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, a agitação em cada um dos solventes acima mencionados é preferencialmente efetuada por agitação ou vibração ultrassónica. Isto pode fornecer vibrações eficazmente às sementes de maracujá pulverizadas e que estão em contacto com cada um dos solventes acima mencionados, sendo por isso possível aumentar a eficácia de extração do piceatanol das sementes de maracujá para cada um dos solventes acima mencionados. A vibração ultrassónica pode ser fornecida por um dispositivo ultrassónico conhecido. A agitação pode ser fornecida por um dispositivo de agitação conhecido.

Além disso, no método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, os solventes mencionados acima são preferencialmente destilados sob pressão reduzida após a extração. Isto pode produzir uma composição que não contém nenhum solvente orgânico, o que pode cumprir as normas de segurança e afins de uma substância alimentar a ser misturada num alimento ou numa bebida, tal como um alimento funcional ou um alimento natural.

No método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a presente invenção, a extração pode ser efetuada por etapas com uma diversidade de solventes. Isto pode produzir uma composição que contém piceatanol, que contém piceatanol num teor elevado numa maior quantidade.

Especificamente, por exemplo, as sementes de maracujá são pulverizadas, qualquer um entre o solvente aquoso à base de álcool mencionado acima e o solvente aquoso à base de cetona mencionado acima é ai adicionado, e a mistura é agitada para extrair piceatanol para o solvente, de modo a obter assim o primeiro extrato. A centrifugação ou afins é efetuada para separar o extrato e o resíduo não recolhido como o extrato, e o outro não selecionado dos solventes mencionados acima é adicionado ao resíduo, e a mistura é agitada para extrair piceatanol para o solvente, de modo a obter assim o segundo extrato. Em seguida, são misturados o primeiro extrato e o segundo extrato. Convém referir que, escusado será dizer, o segundo extrato pode ser utilizado sozinho como o extrato de sementes de maracujá.

Além disso, se as sementes de maracujá forem submetidas ao primeiro tratamento de extração com o solvente aquoso à base de álcool mencionado acima ou o solvente aquoso à base de cetona mencionado acima, a propriedade, tal como a textura, pode mudar para uma preferida para a extração. Por conseguinte, é possível que o subsequente segundo tratamento de extração melhore a eficácia de extração, não só no caso da utilização do solvente aquoso à base de álcool mencionado acima ou do solvente aquoso à base de cetona mencionado acima, como também no caso da utilização de outro solvente. Além do mais, conforme ilustrado nos Exemplos abaixo, é possível que uma alta eficácia de extração no caso da utilização do solvente aquoso à base de álcool mencionado acima ou do solvente aquoso à base de cetona mencionado acima seja fornecida pela água contida no solvente. Em conformidade, se as sementes de maracujá forem submetidas ao primeiro tratamento de extração com água ou um solvente aquoso, é possível que o subsequente segundo tratamento de extração melhore a eficácia de extração, não só no caso da utilização do solvente aquoso à base de álcool mencionado acima ou do solvente aquoso à base de cetona mencionado acima, como também no caso da utilização de outro solvente. 0 extrato de sementes de maracujá obtido através do método mencionado acima pode ser utilizado para preparar uma composição que contém piceatanol numa forma líquida sem mais tratamentos ou após a concentração. 0 extrato pode ser ainda reduzido a pó através de liofilização ou secagem por pulverização para preparar uma composição que contém piceatanol numa forma em pó. A forma do extrato não é limitada a estas formas. A matéria insolúvel contida no extrato pode ser apropriadamente removida através de filtração ou afins. A matéria insolúvel pode ser ainda pulverizada em partículas finas.

Além disso, o extrato primário das sementes de maracujá obtido conforme descrito acima pode ser fracionado e purificado com base no piceatanol como um índice através de troca iónica, cromatografia em coluna de exclusão de tamanho, HPLC, filtração em gel, separação por membranas ou afins para preparar a composição que contém piceatanol.

Especificamente, por exemplo, conforme ilustrado nos Exemplos abaixo, quando a composição extraída das sementes de maracujá é submetida a HPLC nas condições seguintes, o piceatanol é eluido em cerca de 41 minutos. Entretanto, quando a fração eluída é submetida a espetrometria de massa utilizando um espetrómetro de massa, é apresentado um sinal de modo de iões negativos em m/z 243.

[Condições HPLC] • Coluna: Mightysil RP-18 GP 150-4.6, diâmetro: 4,6 mm, comprimento: 150 mm (fabricada por ΚΑΝΤΟ CHEMICAL CO. , INC. )

• Temperatura da coluna: 40 °C • Condições de eluição: taxa de fluxo: 1 ml/min, 0% de metanol, 30% de metanol (60 min) Deteção de UV: 280 nm

Por conseguinte, na presente invenção, é possível preparar uma composição que contém piceatanol, que é derivada de sementes de maracujá e tem um maior teor de piceatanol, efetuando de modo apropriado o fracionamento e a purificação com base nas propriedades físicas do piceatanol exemplificadas acima como índices.

Se necessário, a composição que contém piceatanol da presente invenção pode ser complementada com um portador ou uma base farmaceuticamente aceitável e utilizada como um fármaco numa forma de comprimido, fármaco granulado, fármaco em pó, liquido, pó, grânulo, cápsula, gelatina ou afins, ou pode ser utilizada como um cosmético numa forma de pomada, creme, gel, compressa, loção, preparação cosmética ou afins.

Entretanto, a composição que contém piceatanol da presente invenção pode ser misturada nos alimentos para uma utilização natural especificada, um suplemento alimentar, um alimento funcional ou afins antes da ingestão. Os exemplos de alimentos incluem: artigos de confeitaria, tal como um chocolate, um biscoito, uma pastilha, um doce, uma bolacha, uma goma, ou doçaria em tabletes; um cereal; uma bebida, tal como uma bebida em pó, uma bebida sem álcool, uma bebida com leite, uma bebida nutritiva, uma bebida gaseificada e uma bebida em gelatina; e uma sobremesa gelada, tal como um gelado ou um refresco de sumo de frutas. Além do mais, os exemplos preferidos dos mesmos incluem massas, tais como soba, pasta, udon e somen. Nos casos dos alimentos para uma utilização natural especificada, um suplemento alimentar e afins, a composição pode ter uma forma de pó, grânulo, cápsula, xarope, comprimido ou comprimido revestido de açúcar.

Exemplos 1 Em seguida, a presente invenção é descrita especificamente através de exemplos, mas o âmbito da presente invenção não é limitado pelos exemplos. <Exemplo de Teste 1> [Deteção e identificação do piceatanol a partir do maracujá] 0 maracujá foi dividido em três partes, pericárpio, sarcocárpio e sementes, e as partes foram separadamente liofilizadas e pulverizadas por um pulverizador (nome do produto "Sample mill type SK-M", fabricado por KYORITSU RICO K.K.), seguindo-se a extração das respetivas partes com 80% de etanol aquoso. Os produtos resultantes foram centrifugados, os sobrenadantes foram depois separados e concentrados por evaporação, e os concentrados foram liofilizados para obter pós. Os pós foram dissolvidos em água para obter extratos. Em seguida, o extrato de semente, o extrato de pericárpio e o extrato de sarcocárpio foram diluídos de modo a que as concentrações em termos de teor sólido correspondessem a 0,01 g/ml, 0,1 g/ml e 0,1 g/ml, respetivamente, e 5 ui de cada um dos extratos foram submetidos a HPLC.

As condições de análise para HPLC eram conforme descrito abaixo. • Coluna: Mightysil RP-18 GP 150-4.6, diâmetro: 4,6 mm, comprimento: 150 mm (fabricada por ΚΑΝΤΟ CHEMICAL CO., INC. )

• Temperatura da coluna: 40 °C • Condições de eluição: taxa de fluxo: 1 ml/min, 0% de metanol->300 de metanol (60 min) • Deteção de UV: 280 nm

As FIGs. IA a 1C ilustram cromatogramas HPLC dos respetivos extratos mencionados acima. Como consequência, conforme ilustrado na FIG. IA, no caso do extrato de semente, foi detetado um pico em cerca de 41 minutos. Por outro lado, nos casos do extrato de pericárpio e do extrato de sarcocárpio, não foi possível detetar o pico em cerca de 41 minutos, embora a concentração em termos de teor sólido de acordo com a injeção tenha sido 10 vezes superior à do extrato de semente.

Subsequentemente, as características do componente contido no extrato de semente e eluído no tempo de retenção de cerca de 41 minutos descritas acima foram identificadas conforme descrito abaixo.

Primeiro, foi medido um espetro de massa do componente utilizando um espetrómetro de massa/HPLC (fabricado por THERMO ELECTRON Co. , Ltd., nome do dispositivo "Thermo,-LCQ-MS/MS") (FIG. 2A). Embora a medição tenha sido efetuada em ambos os modos de iões positivos e negativos, foi detetado um ião preferido no modo negativo, e por isso foram utilizados os dados. Como consequência, um sinal maior em m/z 243 correspondia a (M-H)-, e foi possível atribuir os outros picos em m/z 279 e m/z 487 a (M+2H20-H)-e (MX2-H)-, respetivamente. Por conseguinte, foi possível determinar o peso molecular como 244. Além disso, quando foi medido um espetro de UV do componente, foram observados 220 nm, 304 nm e 322 nm como Àmáx. (FIG. 2B) .

Verificou-se que os resultados da espetrometria de massa e da espetrometria de UV eram semelhantes aos do resveratrol (peso molecular: 228), que é um polifenol contido no pericárpio de amendoim (consulte as FIGs. 3A e 3B) . Além disso, a adsorção de polivinilpolipirrolidona (PVPP), que correspondia a uma resina capaz de adsorver um polifenol, também foi confirmada separadamente. Além do mais, verificou-se que o pico de cerca de 41 minutos tinha um tempo de retenção curto para uma coluna de fase reversa em comparação com o tempo de retenção do resveratrol nas mesmas condições HPLC. Todos os resultados sugerem que o componente contido no extrato de semente mencionado acima e eluído no tempo de retenção de 41 minutos corresponde a piceatanol (peso molecular: 244), que é representado pela fórmula seguinte (1) e tem um peso molecular superior ao do resveratrol por um grupo hidróxi.

[Quim. 2]

Em seguida, foi analisado um composto puro de piceatanol (fabricado por Sigma-Aldrich Corporation) através de HPLC nas mesmas condições conforme descrito acima para fornecer ainda um espetro de massa e um espetro de UV (FIGs. 4A e 4B). Os resultados mostram que todos os tempos de retenção de HPLC e as atribuições do espetro de massa e do espetro de UV correspondem aos mencionados acima.

Isto revela que o pico em cerca de 41 minutos na análise por HPLC mencionada acima para o extrato de semente mencionado acima corresponde a um pico de piceatanol, e as sementes de maracujá contêm uma grande quantidade de piceatanol. Por outro lado, não foi detetado piceatanol em nenhum pericárpio e sarcocárpio do maracujá. <Exemplo de Teste 2> [Extração de piceatanol das sementes de maracujá (1)]

Foi examinado um método de extração de piceatanol das sementes de maracujá. Especificamente, foram determinadas as eficiências de extração de dois tipos de sementes de maracujá (nacional e de origem estrangeira) utilizando solventes diferentes. (1) Extração com 80% de etanol aquoso A 5 g de sementes pulverizadas, foram adicionados 50 ml de 80% de etanol aquoso, e a extração foi efetuada por aplicação de ultrassons (sonicação) durante 30 minutos. O sobrenadante foi recolhido, e a extração foi ainda efetuada duas vezes (três vezes no total) através dos mesmos procedimentos. Os extratos recolhidos foram combinados, e o volume do extrato resultante foi ajustado para 200 ml com 80% de etanol aquoso, e 10 ui da solução foram submetidos a HPLC. Em seguida, de acordo com um método convencional, o piceatanol contido no extrato foi quantificado atribuindo uma área abaixo do pico da análise por HPLC a uma curva de calibragem com base nas concentrações de um padrão. Convém referir que o resveratrol também foi quantificado para referência da mesma forma como descrito acima. (2) Extração com 70% de acetona aquosa

Ao resíduo de extração obtido após a extração com 80% de etanol aquoso descrito acima, foram adicionados 50 ml de 70% de acetona aquosa, e a extração foi efetuada por aplicação de ultrassons durante 30 minutos. O sobrenadante foi recolhido, e a extração foi ainda efetuada duas vezes (três vezes no total) através dos mesmos procedimentos. Os extratos recolhidos foram combinados, e o volume do extrato resultante foi ajustado para 200 ml com 70% de acetona aquosa, seguindo-se a quantificação de piceatanol e resveratrol contidos no extrato da mesma forma como descrito acima. (3) Extração com acetato de etilo A extração foi efetuada para as sementes do maracujá (de origem estrangeira acima mencionado) da mesma forma como no caso da extração com 80% de etanol aquoso, salvo ter sido utilizado acetato de etilo como o solvente, e foram quantificados o piceatanol e o resveratrol extraídos de 5 g de pó de sementes liofilizadas. (4) Extração com diclorometano A extração foi efetuada para as sementes do maracujá (de origem estrangeira acima mencionado) da mesma forma como no caso da extração com 80% de etanol aquoso, salvo ter sido utilizado diclorometano como o solvente, e foram quantificados o piceatanol e o resveratrol extraídos de 5 g de pó de sementes liofilizadas.

Os resultados são ilustrados coletivamente na Tabela 1. Convém referir que a Tabela 1 mostra valores obtidos através da conversão dos resultados das eficiências de extração em quantidades de piceatanol e resveratrol extraídos de 100 g de pó de sementes liofilizadas.

Conforme ilustrado na Tabela 1, mesmo a partir do resíduo de extração obtido após a extração com 80% de etanol aquoso, o piceatanol foi extraído numa quantidade superior à do caso da extração com 80% de etanol aquoso. Por outro lado, no caso da extração apenas com acetato de etilo, a eficiência de extração era baixa, ao passo que no caso da extração apenas com diclorometano, o piceatanol e o resveratrol não eram detetáveis. Por conseguinte, foi clarificado que a extração com 70% de acetona aquosa forneceu a eficiência mais elevada. Além do mais, foi clarificado que uma combinação da extração com 80% de etanol aquoso e da extração com 70% de acetona aquosa mostrou fornecer uma eficácia de extração ainda mais elevada. <Exemplo de Teste 3> [Extração de piceatanol das sementes de maracujá (2)]

Foi ainda examinado o método de extração de piceatanol das sementes de maracujá. Especificamente, foi investigado um efeito de um teor de água de etanol ou acetona como um solvente na eficácia de extração.

Para investigar o efeito, o piceatanol e o resveratrol extraídos de 5 g de pó de sementes liofilizadas do maracujá (de origem estrangeira mencionado acima) foram quantificados utilizando etanol ou acetona com diferentes teores de água como o solvente da mesma forma como no Exemplo de Teste 2. Convém referir que qualquer um dos solventes utilizados no Exemplo de Teste 2 acima, acetato de etilo e diclorometano, tem fraca compatibilidade com água, e por isso é impossível preparar solventes com os mesmos teores de água.

Os resultados são ilustrados coletivamente na Tabela 2 abaixo. Além disso, os resultados do piceatanol são ilustrados como um gráfico na FIG. 5. Convém referir que a Tabela 2 e a FIG. 5 mostram valores obtidos através da conversão dos resultados das eficiências de extração em quantidades de piceatanol e resveratrol extraídos de 100 g de pó de sementes liofilizadas.

Conforme ilustrado na Tabela 2 e na FIG. 5, no caso da utilização de etanol, a extração com 80% de etanol aquoso forneceu a eficácia mais elevada. Entretanto, no caso da utilização de acetona, a extração com 70% de acetona aquosa forneceu a eficácia mais elevada. <Exemplo de Teste 4>

Os extratos obtidos após a remoção dos solventes no Exemplo de Teste 2 acima (derivados do maracujá de origem estrangeira) foram pesados para calcular os teores de piceatanol em termos de teor sólido. A Tabela 3 mostra os valores resultantes.

Conforme ilustrado na Tabela 3, no caso da extração com 80% de etanol aquoso, verificou-se que a concentração de piceatanol em termos de teor sólido correspondia a 2,6 mg/100 mg do extrato (2,6% em massa). Entretanto, no caso da extração com 70% de acetona aquosa após a extração com 80% de etanol aquoso, verificou-se que a concentração de piceatanol em termos de teor sólido correspondia a 3,7 mg/100 mg do extrato (3,7% em massa). Por conseguinte, foi clarificado que a extração com 70% de acetona aquosa era capaz de fornecer uma maior quantidade de piceatanol (conforme ilustrado nos Exemplos de Teste 2 e 3) e uma pureza mais elevada de piceatanol.

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • JP 2005281179 A [0005] • JP 2009013159 A [0005] • JP 2007302659 A [0005] • JP 2007531734 A [0005]

Documentos de não patente citados na descrição • TAKAKO YOKOZAWA ; YOU JUNG KIM. Piceatannol Inhibits

Melanogenesis by Its Antioxidative Actions, Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2007, vol. 30 (11), 2007-2011 [0006]

Lisboa, 25 de Agosto de 2015

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição que contém piceatanol, que é um extrato de semente de Passiflora edulis e contém piceatanol num teor de 0,01 a 50% em massa em termos de teor sólido, em que o extrato pode ser obtido através de extração com um solvente aquoso.
2. Uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente aquoso é um solvente aquoso à base de álcool ou um solvente aquoso à base de cetona.
3. Uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o solvente aquoso é um etanol aquoso ou uma acetona aquosa.
4. Uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 3, em que o etanol aquoso contém 20 a 99,9% em volume de etanol.
5. Uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 3, em que a acetona aquosa contém 20 a 99,9% em volume de acetona.
6. Uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que a composição contém piceatanol num teor de 0,1 a 10% em massa em termos de teor sólido.
7. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol, compreendendo: a adição de um solvente aquoso a uma semente pulverizada de Passiflora edulis; e a agitação da mistura para extrair piceatanol para o solvente.
8. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 7, em que o método compreende: a adição de um solvente aquoso à base de álcool ou um solvente aquoso à base de cetona à semente de Passiflora edulis; e a agitação da mistura para extrair piceatanol para o solvente.
9. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 7 ou 8, em que o método compreende: a adição de um solvente aquoso à base de álcool e um solvente aquoso à base de cetona à semente de Passiflora edulis; a agitação da mistura para extrair piceatanol para o solvente, obtendo assim um primeiro extrato; a adição do outro não selecionado acima, entre o solvente aquoso à base de álcool e o solvente aquoso à base de cetona, a um resíduo não recolhido como o extrato; a agitação da mistura para extrair o piceatanol para o solvente, obtendo assim um segundo extrato; e a mistura do primeiro extrato e do segundo extrato.
10. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, em que a semente de Passi flora edulis é uma semente crua de Passiflora edulis ou uma semente seca de Passiflora edulis, que é obtida através da secagem da semente crua de Passiflora edulis.
11. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 10, em que o solvente aquoso à base de álcool é etanol aquoso, ou o solvente aquoso à base de cetona é acetona aquosa.
12. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 11, em que o etanol aquoso contém 20 a 99,9% em volume de etanol.
13. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com a reivindicação 11, em que a acetona aquosa contém 20 a 99,9% em volume de acetona.
14. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 13, em que a agitação em cada um dos solventes é efetuada através de agitação ou vibração ultrassónica.
15. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 14, compreendendo ainda a destilação do solvente sob pressão reduzida após a extração.
16. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 15, compreendendo ainda uma etapa de redução a pó do extrato de semente de Passiflora edulis através de liofilização ou secagem por pulverização.
17. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 16, compreendendo ainda uma etapa de filtração para remover matéria insolúvel contida no extrato de semente de Passiflora edulis Sims.
18. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 17, compreendendo ainda uma etapa de fracionamento e purificação do extrato primário de semente de Passiflora edulis Sims para concentrar o piceatanol ai contido.
19. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 18, compreendendo ainda a formulação da composição como um cosmético ou um fármaco.
20. Um método de produção de uma composição que contém piceatanol de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 18, compreendendo ainda uma etapa de mistura da composição que contém piceatanol para um alimento ou uma bebida.
21. Utilização de sementes de Passiflora edulis Sims como uma fonte de piceatanol. Lisboa, 25 de Agosto de 2015