KR101595166B1

KR101595166B1 - 스키르푸신 ｂ 함유 조성물 및 스키르푸신 ｂ 함유 조성물의 제조방법

Info

Publication number: KR101595166B1
Application number: KR1020137030311A
Authority: KR
Inventors: 쇼코 사노; 겐키치 스기야마
Original assignee: 모리나가 세이카 가부시키가이샤
Priority date: 2011-04-22
Filing date: 2011-04-22
Publication date: 2016-02-17
Also published as: WO2012144064A1; US20140039049A1; US9376416B2; JP5830529B2; JPWO2012144064A1; AU2011366060B2; NZ615639A; CA2833436C; EP2700322A4; EP2700322B1; MX341686B; EP2700322A1; AU2011366060A1; CA2833436A1; KR20130140886A; CN103501640B; CN103501640A; MX2013012298A; HK1192826A1; KR20160013265A

Abstract

천연물 유래의 조성물로서 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 스키르푸신 B 함유 조성물 및 그 스키루프신 B 함유 조성물의 제조방법을 제공한다.
스키루프신 B 함유 조성물을 패션푸르트 종자로부터 추출하여 얻는다. 또한 그 스키루프신 B를 추출할 때, 패션푸르트 종자를 분쇄한 후, 함수 알코올계 용매 및 함수 케톤계 용매로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 상기 용매 중에 스키루프신 B를 추출한다.

Description

스키르푸신 Ｂ 함유 조성물 및 스키르푸신 Ｂ 함유 조성물의 제조방법{Composition containing scirpusin B, and process for producing composition containing scirpusin B}

본 발명은 패션푸르트 종자 유래의 스키르푸신 B를 함유하는 스키르푸신 B 함유 조성물 및 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

패션푸르트는 시계꽃속 시계초과의 식물로, 별명：쿠다모노 토게이소(과일시계초)로 불리며, 그 열매는 달콤새콤하여 과일로서 열매를 그대로 먹거나, 그 과즙을 주스로 하여 마시거나, 젤리, 케이크 등의 음식품에 배합하여 풍미를 부여하는데 사용되고 있다. 패션푸르트의 종자는 딱딱하여 주스 등으로 하는 경우에는 과실로부터 제거되고, 과실을 씨째 먹고 마신 경우에도 그 외피는 딱딱하여 소화되기 어렵기 때문에 그대로 배설되어 버린다.

종래 패션푸르트 종자는 이용할 용도도 없어 폐기되고 있었지만, 본 출원인은 패션푸르트의 종자 추출물을 멜라닌 생성 억제를 위한 유효성분이나 콜라겐의 생산을 촉진하기 위한 유효성분으로서 유효하게 이용할 수 있는 것을 보고하였다(특허문헌 1, 2). 그리고 그 유효성분이 폴리페놀류 화합물인 피세아타놀(Piceatannol)인 것을 보고하였다(특허문헌 3).

한편 피세아타놀의 이량체인 스키르푸신 B(Scirpusin B)에 대해서는, 그것이 항HIV 활성을 갖는 것이나(비특허문헌 1), 슈퍼옥시드 음이온 제거 활성을 갖는 것이나(비특허문헌 2), α-아밀라아제 활성 저해활성을 갖는 것이나(비특허문헌 3), 크산틴옥시다아제 저해활성을 갖는 것(비특허문헌 4)이 보고되어 있다.

일본국 특허공개 제2009-102298호 공보 일본국 특허공개 제2009-102299호 공보 일본국 특허공개 제2010-30911호 공보

Guo-xun Yang, Jin-tao Zhou, Ya-zun Li, and Chang-qi Hu「Anti-HIV Bioactive stilbene dimers of Caragana rosea.」 Planta. Med. 71 (2005), p569-571. Ting Xiang, Toshio Uno, Fumino Ogino, Cuoqian Ai, Jie Duo, and Ushio Sankawa「Antioxidant constituents of Caragana tibetica.」 Chem. Pharm. Bull. 53 (9) (2005), p1204-1206. Kyoko Kobayashi, Tamaki Ishihara, Eriko Khono, Toshio Miyase, and Fumihiko Yoshizaki「Constituents of stem bark of Callistemon rigidus showing inhibitory effects on mouse α-amylase activity.」 Bioi. Pharm. Bull, 29 (6), (2006) p1275-1277. G. Schmeda-Hirschmann, M.I.Gutierrez, J.I.Loyola, and J.Zuniga「Biological activity and xanthine oxidase inhibitors from Scirpus californicus (C. A. Mey.) Steud.」 Phytotherapy Research, 10, (1996) p683-685.

식품 안전에 관한 일반적 관념으로부터는 기능성 식품이나 건강식품 등의 음식품에 배합되는 스키르푸신 B는 천연물 유래의 것인 것이 바람직하다. 그러나 종래 알려져 있던 스키르푸신 B를 포함하는 천연물은 그 함유량이 적고, 매우 저함유의 스키르푸신 B 조성물밖에 얻을 수 없었다.

따라서 본 발명의 목적은 천연물 유래의 조성물로서 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 스키르푸신 B 함유 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은 상기 목적을 달성하기 위해 예의 연구한 결과, 종래 이용할 용도도 없어 폐기되고 있었던 패션푸르트 종자에 스키르푸신 B가 풍부하게 포함되어 있는 것을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물은 패션푸르트 종자로부터 얻어지고 스키르푸신 B를 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물에 의하면, 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 천연물 유래의 조성물을 제공할 수 있다. 그리고 천연물 유래의 조성물이기 때문에 화장품이나 의약품, 더 나아가서는 기능성 식품이나 건강식품 등의 음식품에 배합하기에도 적합하다.

한편 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법은 패션푸르트 종자에 함수 알코올계 용매 및 함수 케톤계 용매로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 상기 용매 중에 스키르푸신 B를 추출하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 의하면, 패션푸르트 종자에 함수 알코올계 용매 및 함수 케톤계 용매로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 상기 용매 중에 스키르푸신 B를 추출하기 때문에, 천연물 유래의 조성물로서 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 것을 수율 좋게 제조할 수 있다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서는, 상기 패션푸르트 종자는 패션푸르트의 생 종자(raw seed) 또는 패션푸르트의 생 종자를 건조한 종자인 것이 바람직하다.

또한 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서는, 상기 함수 알코올계 용매가 함수 에탄올 또는 함수 1,3-부틸렌글리콜이고, 또는 상기 함수 케톤계 용매가 함수 아세톤인 것이 바람직하다. 이것에 의하면 스키르푸신 B의 추출 효율이 보다 좋다.

또한 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서는, 추출 후 용매의 제거를 행하거나 추가로 농축, 스프레이 드라이, 동결건조, 정제 등의 처리를 행할 수 있다.

한편 본 발명의 다른 하나는 패션푸르트 종자 유래 스키르푸신 B를 첨가한 음식품이다.

또한 본 발명의 또 다른 하나는 패션푸르트 종자 유래 스키르푸신 B를 첨가한 화장품이다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물에 의하면, 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 천연물 유래의 조성물을 제공할 수 있다. 그리고 천연물 유래의 조성물이기 때문에 화장품이나 의약품, 더 나아가서는 기능성 식품이나 건강식품 등의 음식품에 배합하기에도 적합하다. 한편 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 의하면, 패션푸르트 종자에 함수 알코올계 용매 및 함수 케톤계 용매로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 상기 용매 중에 스키르푸신 B를 추출하기 때문에, 천연물 유래의 조성물로서 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 것을 수율 좋게 제조할 수 있다.

도 1은 패션푸르트 종자로부터의 스키르푸신 B의 정량 분석용 HPLC 크로마토그램을 나타내는 도면이다.
도 2는 패션푸르트 종자로부터의 스키르푸신 B의 질량 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 3은 패션푸르트 종자로부터의 추출물 분획용 HPLC 크로마토그램을 나타내는 도면이다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물은 패션푸르트 종자로부터 얻어진 조성물로서 스키르푸신 B를 함유하는 것이다. 그 형상은 액상, 고형상, 반고형상, 겔 등이면 되고, 그 스키르푸신 B 함유 조성물 중의 스키르푸신 B의 함유량에 대해서는 바람직한 범위로서 1×10^-6 질량%~99.9 질량%인 것을 예시할 수 있으며, 보다 바람직한 범위로서 1×10^-4 질량%~20 질량%인 것을 예시할 수 있고, 더욱 바람직한 범위로서 1×10^-3 질량%~5 질량%인 것을 예시할 수 있다. 또한 그 스키르푸신 B의 고형분 환산 함유량에 대해서는 바람직한 범위로서 0.01~99.9 질량%인 것을 예시할 수 있고, 보다 바람직한 범위로서 0.05~30 질량%인 것을 예시할 수 있으며, 더욱 바람직한 범위로서 0.1~20 질량%인 것을 예시할 수 있다.

스키르푸신 B(Scirpusin B)는 하기 화학식 1로 표시된다.

패션푸르트는 시계꽃속 시계초과의 식물로, 별명：쿠다모노 토케이소(과일시계초)로 불리며, 그 열매는 달콤새콤하여 과일로서 열매를 그대로 먹거나, 그 과즙을 주스로 하여 마시거나, 젤리, 케이크 등의 음식품에 배합하여 풍미를 부여하는데 사용되고 있다. 패션푸르트의 종자는 딱딱하여 주스 등으로 하는 경우에는 과실로부터 제거되고, 과실을 씨째 먹고 마신 경우에도 그 외피는 딱딱하여 소화되기 어렵기 때문에 그대로 배설되어 버린다. 본 발명은 종래 이용할 용도도 없어 폐기되고 있었던 패션푸르트 종자에 스키르푸신 B가 풍부하게 포함되어 있는 것을 발견한 것에 기초하는 발명이다. 또한 본 발명에 사용되는 패션푸르트 종자는 종래로부터의 패션푸르트의 식경험으로부터도 뒷받침되는 바와 같이, 기능성 식품이나 건강식품 등의 음식품에 배합해도 그 안전성에는 문제가 없는 것이다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물은 바람직하게는 예를 들면 생 그대로, 또는 건조시킨 패션푸르트 종자를 그대로, 또는 분쇄하고 각종 용매를 사용하여 추출하는 방법으로 얻을 수 있다. 그 패션푸르트 종자에는 추출 효율을 좋게 하기 위해 적당히 산 또는 알칼리 분해, 효소 분해 등의 화학적 처리를 실시하여 그것으로부터 추출해도 된다. 또한 하기에 설명하는 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 의하면, 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 조성물을 특히 수율 좋게 얻을 수 있기 때문에 그 방법으로 얻는 것이 가장 바람직하다.

아래에 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 대해서 설명한다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서는, 패션푸르트 종자는 생 그대로 또는 건조시킨 패션푸르트 종자를 사용할 수 있다. 또한 패션푸르트 종자는 추출 효율을 좋게 하기 위해 적당히 분쇄, 착유, 산 또는 알칼리 분해, 효소 분해 등의 화학적 처리를 실시하여 그것으로부터 추출해도 된다. 분쇄는 주지의 분쇄기를 사용해서 행할 수 있다. 또한 패션푸르트 종자에는 유분이 많기 때문에 분쇄 후에는 페이스트상이 되는 경우가 있다.

다음으로 패션푸르트 종자에 함수 알코올계 용매 및 함수 케톤계 용매로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 그 용매 중에 스키르푸신 B를 추출한다. 이 때 교반, 진탕 또는 가열환류 등을 행하여 추출하는 것이 바람직하다.

함수 알코올계 용매로서는 에탄올, 메탄올, 프로판올, 1,3-부틸렌글리콜 등의 함수 용매를 사용할 수 있고, 특히 함수 에탄올 또는 함수 1,3-부틸렌글리콜이 바람직하다. 또한 함수 케톤계 용매로서는 아세톤, 메틸에틸케톤, 디에틸케톤, 클로로아세톤 등의 함수 용매를 사용할 수 있고, 특히 함수 아세톤이 바람직하다.

그 함수율로서는 함수 에탄올의 경우에는 에탄올을 20~99.9 체적% 포함하는 것인 것이 바람직하고, 40~99.9 체적% 포함하는 것인 것이 더욱 바람직하며, 60~80 체적% 포함하는 것인 것이 가장 바람직하다. 함수 1,3-부틸렌글리콜의 경우에는 1,3-부틸렌글리콜을 10~90 체적% 포함하는 것인 것이 바람직하고, 20~60 체적% 포함하는 것인 것이 더욱 바람직하며, 30~50 체적% 포함하는 것인 것이 가장 바람직하다. 함수 아세톤의 경우에는 아세톤을 20~99.9 체적% 포함하는 것인 것이 바람직하고, 40~99.9 체적% 포함하는 것인 것이 더욱 바람직하며, 60~80 체적% 포함하는 것인 것이 가장 바람직하다. 상기 범위를 벗어나면 스키르푸신 B의 추출 효율이 나빠지는 경향에 있기 때문에 바람직하지 않다. 또한 이하 함수 용매의 함수율의 표기에 대해서는 간편화를 위해, 예를 들면 20 체적%로 함수시킨 80 체적% 에탄올을 「80% 함수 에탄올」로 표기한다. 또한 예를 들면 30 체적%로 함수시킨 70 체적% 에탄올을 「70% 함수 에탄올」로 표기한다. 또한 예를 들면 70 체적%로 함수시킨 30 체적% 1,3-부틸렌글리콜을 「30% 함수 BG」로 표기한다. 또한 예를 들면 30 체적%로 함수시킨 70 체적% 아세톤을 「70% 함수 아세톤」으로 표기한다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서 그 추출은 주지의 진탕장치를 사용해서 행할 수 있다. 그 온도조건은 15~40℃ 정도, 진탕시간은 0.5~3시간 정도인 것이 바람직하다. 또한 이 추출을 초음파진동을 수반하는 진탕에 의해 행하는 것도 가능하다. 이것에 의하면, 분쇄되어 상기 각 용매에 접한 패션푸르트 종자에 유효하게 진동이 부여되기 때문에, 패션푸르트 종자로부터의 상기 각 용매 중으로의 스키르푸신 B의 추출 효율을 높일 수 있다. 그 초음파진동을 수반하는 진탕은 주지의 초음파장치 등에 의해 부여할 수 있다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서, 그 추출은 상기 함수 알코올계 용매 또는 함수 케톤계 용매를 사용하여 주지의 가열환류 방법으로 행할 수 있다. 그 가열온도는 60~95℃ 정도, 환류시간은 1~2시간 정도인 것이 바람직하다.

또한 본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서는 추출 후 상기 용매를 감압 증류 제거하는 것도 가능하다. 이것에 의하면, 유기 용매를 포함하지 않는 조성물로 할 수 있고, 기능성 식품이나 건강식품 등의 음식품에 배합하기 위한 식품 소재로서 그 안전성의 기준 등에 적합하게 하는 것이 가능하다.

본 발명의 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법에 있어서는 복수의 용매로 단계적인 추출을 행할 수 있다. 이것에 의해 스키르푸신 B를 고함유로 함유하는 스키르푸신 B 함유 조성물을 보다 수율 좋게 제조할 수 있다.

구체적으로는 예를 들면 패션푸르트 종자를 분쇄한 후, 상기 함수 알코올계 용매 및 상기 함수 케톤계 용매 중 어느 한쪽을 첨가하고 진탕 또는 가열환류 등을 행하여, 그 용매 중에 스키르푸신 B를 추출하여 제1 추출물을 얻는다. 원심 등에 의해 추출물과 그 추출물로서 회수되지 않은 잔사로 분리하여, 그 잔사에 상기 용매 중 선택하지 않은 다른 쪽을 첨가하고 진탕 또는 가열환류 등을 행하여, 그 용매 중에 스키르푸신 B를 추출하여 제2 추출물을 얻는다. 그리고 상기 제1 추출물과 제2 추출물을 혼합한다. 또한 이 제2 추출물 단독으로도 패션푸르트 종자의 추출물로서 이용 가능한 것은 물론이다.

이와 같이 복수의 용매로 단계적인 추출을 행함으로써, 패션푸르트 종자가 상기 함수 알코올계 용매 또는 상기 함수 케톤계 용매에 의한 제1 추출처리를 받아 그 물성 등의 특성이 추출에 적합한 것으로 변화되는 것이 생각되기 때문에, 계속되는 제2 추출처리시에는 상기 함수 알코올계 용매 또는 상기 함수 케톤계 용매를 사용하는 경우는 물론, 그 이외의 용매를 사용하는 경우라도 그 추출 효율이 개선되는 것을 기대할 수 있다.

상기 방법으로 얻어진 패션푸르트 종자의 추출물은 그 추출물 중의 스키르푸신 B의 함유량에 대해서는 바람직한 범위로서 1×10^-6 질량%~99.9 질량%인 것을 예시할 수 있고, 보다 바람직한 범위로서 1×10^-4 질량%~20 질량%인 것을 예시할 수 있으며, 더욱 바람직한 범위로서 1×10^-3 질량%~5 질량%인 것을 예시할 수 있다. 또한 그 스키르푸신 B의 고형분 환산 함유량에 대해서는 바람직한 범위로서 0.01~99.9 질량%인 것을 예시할 수 있고, 보다 바람직한 범위로서 0.05~30 질량%인 것을 예시할 수 있으며, 더욱 바람직한 범위로서 0.1~20 질량%인 것을 예시할 수 있다. 이것을 그대로 또는 농축하여 액체상의 것을 스키르푸신 B 함유 조성물로 하는 것도 가능하다. 또한 동결건조 또는 분무건조에 의해 분말화하여 분말상의 것을 스키르푸신 B 함유 조성물로 하는 것도 가능하다. 또한 이들 형태에 제한되는 것은 아니다. 추출물 중에 포함되는 불용물은 적당히 여과 등으로 제거할 수 있다. 불용물은 추가로 분쇄하여 미립자상으로 해도 된다.

또한 상기와 같이 하여 얻어지는 패션푸르트 종자로부터의 1차적 추출물을 이온 교환, 사이즈 배제 칼럼크로마토그래프법, HPLC법, 겔여과, 막분리 등에 의해 스키르푸신 B를 지표로 분획, 정제하여 이것을 스키르푸신 B 함유 조성물로 하는 것도 가능하다.

즉 패션푸르트 종자로부터의 스키르푸신 B를 하기 조건에서 분석용 HPLC에 제공했을 때는 그 스키르푸신 B는 12.54분 부근에 용출된다(도 1 참조, 또한 도 1 중 8.9분 부근에 용출되는 물질은 피세아타놀(Piceatannol)이다.). 또한 질량 분석 장치에 의한 질량 스펙트럼 측정을 행하면 음이온 모드의 시그날로서 m/z 485를 나타낸다(도 2 참조).

［HPLC 조건］

·칼럼：ODS-3 직경 4.6 ㎜, 길이 150 ㎜(지엘 사이언스 주식회사 제조)

·칼럼온도：45℃

·용출조건：유속 0.75 ㎖/min, 15% 아세토니트릴(0 min)→40% 아세토니트릴(20 min)→45% 아세토니트릴(25 min)

·UV 검출：280 nm

따라서 본 발명에 있어서는, 상기에 예시되는 바와 같은 분석수단에 의해 패션푸르트 종자로부터의 스키르푸신 B의 존재를 확인하면서 적당히 분획, 정제하여, 스키르푸신 B 함유량이 높여진 패션푸르트 종자 유래의 스키르푸신 B 함유 조성물을 조제할 수 있다.

패션푸르트 종자 유래의 스키르푸신 B는 필요에 따라 약학적으로 허용되는 기재나 담체를 첨가하고 정제, 과립제, 산제, 액제, 분말, 과립, 캡슐제, 젤리상제 등의 형태로 하여 이것을 의약에 이용할 수 있을 뿐 아니라, 연고제, 크림제, 젤, 팩, 화장수, 화장료 등의 형태로 하여 이것을 화장품으로서 이용할 수 있다.

또한 패션푸르트 종자 유래의 스키르푸신 B는 특정 보건용 식품, 영양 보조식품, 기능성 식품 등에 배합하여 섭취하는 것도 가능하다. 이러한 식품으로서는 예를 들면 초콜릿, 비스킷, 껌, 캔디, 쿠키, 구미, 타정과자 등의 과자류；시리얼；분말음료, 청량음료, 유음료, 영양음료, 탄산음료, 젤리음료 등의 음료；아이스크림, 셔벗 등의 얼음과자를 들 수 있다. 또한 메밀, 파스타, 우동, 소면 등의 면류도 바람직하게 예시할 수 있다. 또한 특정 보건용 식품이나 영양 보조식품 등의 경우라면 분말, 과립, 캡슐, 시럽, 정제, 당의정 등의 형태의 것이어도 된다.

패션푸르트 종자 유래의 스키르푸신 B를 음식품 또는 화장품에 첨가하여 이용하는 경우, 그 음식품 중 또는 화장품 중의 스키르푸신 B의 함유량에 대해서는 바람직한 범위로서 1×10^-6 질량%~50 질량%인 것을 예시할 수 있고, 보다 바람직한 범위로서 1×10^-4 질량%~20 질량%인 것을 예시할 수 있으며, 더욱 바람직한 범위로서 1×10^-3 질량%~5 질량%인 것을 예시할 수 있다. 또한 그 스키르푸신 B의 고형분 환산 함유량에 대해서는 바람직한 범위로서 0.01~80 질량%인 것을 예시할 수 있고, 보다 바람직한 범위로서 0.05~30 질량%인 것을 예시할 수 있으며, 더욱 바람직한 범위로서 0.1~20 질량%인 것을 예시할 수 있다.

실시예

아래에 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하나 이들 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

＜시험예 1＞(패션푸르트로부터의 스키르푸신 B의 회수·정제·동정)

패션푸르트 종자를 동결건조 분쇄시킨 분쇄물(30~60 메시 패스)의 60 g에 80% 아세톤 200 ㎖를 첨가하고, 실온에서 교반하여 종자 추출액을 제작하였다. 이것을 ODS 칼럼을 사용한 HPLC에 의해 분획하였다. HPLC에 의한 분획조건은 아래와 같이 하였다.

·칼럼：ODS-3 직경 20 ㎜, 길이 250 ㎜(지엘 사이언스 주식회사 제조)

·칼럼온도：실온

·용출조건：유속 5 ㎖/min, 10% 아세토니트릴(0 min)→50% 아세토니트릴(70 min)→80% 아세토니트릴(75 min)→80% 아세토니트릴(90 min)

·UV 검출：280 nm

도 3에는 그 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 그 결과 유지시간 51분 부근에 최대 피크가 보였다. 또한 유지시간 57분 부근에 제2 피크가 보였다.

상기 유지시간 57분 부근에 용출되는 성분이 어떠한 물질인지를 아래와 같이 동정하였다.

먼저 유지시간 57분 부근에 용출되는 분획을 분취하고, 추가로 HPLC로 순도 97% 정도가 될 때까지 정제하였다. 이것을 HPLC/질량 분석(아질렌트 테크놀로지 주식회사 제조, 장치명 「Agillent 1100 LC/MC System」) 및 NMR 분석을 행하였다. 그 결과는 아래와 같았다.

이상의 NMR 분석결과는 하기 화학식 1로 표시되는 스키르푸신 B(Scirpusin B)인 것을 나타내고 있었다.

[화학식 1]

또한 상기 57분 부근에 용출되는 성분의 선광도 측정(일본 분광 주식회사 제조, 장치명 「P-2200 선광계」)의 결과는 [α]_D ²³：0.0^o이고, 푸리에 변환 적외분광 광도계(일본 분광 주식회사 제조, 장치명 「FT/IR-6200 Fourier-Transform Infrared Spectrometer」)에 의한 적외 흡수 스펙트럼의 결과에서는, 1605 ㎝^-1, 1520 ㎝^-1, 1445 ㎝^-1, 1339 ㎝^-1, 1282 ㎝^-1, 1197 ㎝^-1, 1156 ㎝^-1, 1116 ㎝^-1, 1002 ㎝^-1에 흡수 피크가 있었다. 이들 결과도 상기 동정결과와 모순되는 것은 아니었다. 또한 「Kyoko Kobayashi et al,; Biol. Pharm. Bull. 29(6), (2006) p1275-1277」에도 스키르푸신 B의 NMR, 선광도, 적외 흡수 스펙트럼 등의 분석결과가 기재되어 있다.

한편 유지시간 51분 부근에 용출되는 성분은 별도로 하기 화학식 2로 표시되는 피세아타놀(Piceatannol)로 동정되었다.

이상으로부터 상기 종자 추출물의 상기 분획용 HPLC 분석에서의 57분 부근의 피크는 스키르푸신 B의 피크로, 패션푸르트의 종자에는 스키르푸신 B가 많이 포함되어 있는 것이 명확해졌다. 또한 패션푸르트의 과피나 과육으로부터는 스키르푸신 B는 검출되지 않았다.

＜시험예 2＞(패션푸르트 종자로부터의 스키르푸신 B의 추출)

패션푸르트 종자로부터의 스키르푸신 B의 추출방법에 대해서 검토하였다. 구체적으로는 하기의 추출방법으로 스키르푸신 B의 추출 효율을 조사하였다.

(1) 함수 에탄올 및 함수 아세톤에 의한 진탕 추출

분쇄한 종자 60 g에 80% 함수 에탄올 200 ㎖를 첨가하고, 30분간 실온에서 진탕하여 추출을 행하고 그 상청을 회수하였다. 이 공정을 2회 반복하였다. 추가로 그 잔사 고형물에 80% 함수 아세톤 200 ㎖를 첨가하고, 30분간 실온에서 진탕하여 추출을 행하고 그 상청을 회수하였다. 이 공정을 3회 반복하였다. 그리고 회수한 상청을 모아 얻어진 추출액을 농축하고, 80% 함수 에탄올로 200 ㎖로 정용하여, 그 10 ㎕를 분석용 HPLC에 제공하였다. 그리고 사전에 고순도로 정제한 것(97%)을 표준으로 하여 검량선을 작성하고, 그 추출물에 포함되는 스키르푸신 B의 양을 정량하였다.

(2) 함수 에탄올에 의한 가열환류 추출

분쇄한 종자 300 g에 80%, 90% 또는 95%의 함수 에탄올 3 L를 첨가하고, 92℃에서 90분간 가열환류 추출을 행하였다. 그리고 얻어진 추출액을 농축하고, 80% 함수 에탄올로 200 ㎖로 정용하여, 그 10 ㎕를 분석용 HPLC에 제공하였다. 그리고 사전에 작성한 검량선에 의해 그 추출물에 포함되는 스키르푸신 B의 양을 정량하였다.

(3) 함수 1,3-부틸렌글리콜(함수 BG)에 의한 교반 추출

열풍 건조한 종자 또는 추가로 분쇄한 종자 10 g에 20%, 40%, 50%, 60% 또는 80%의 함수 BG 약 100 ㎖를 첨가하고, 80℃에서 1시간의 가열환류 추출을 행하였다. 그리고 얻어진 추출액의 일부를 HPLC 분석에 제공하고, 사전에 작성한 검량선에 의해 그 추출액에 포함되는 스키르푸신 B의 양을 정량하였다.

결과를 하기 표 1, 2에 정리하였다. 또한 이 표 1에서는 (A) 추출에 사용한 종자 100 g당 추출되는 스키르푸신 B의 양(㎎) 또는 (B) 추출액의 고형분 중의 스키르푸신 B 함유량(질량%)으로 환산하여 나타내고 있다.

표 1에 나타내어지는 바와 같이, 패션푸르트 종자 100 g당 220 ㎎~363 ㎎의 스키르푸신 B가 추출되었다. 각 추출방법에 있어서의 추출액의 고형분 중의 함유량으로서는 진탕 추출에서는 2.5 질량%이고, 80% 함수 에탄올 가열환류 추출에서는 2.1 질량%이며, 90% 함수 에탄올 가열환류 추출에서는 3.2 질량%이고, 95% 함수 에탄올 가열환류 추출에서는 1.9 질량%였다. 따라서 추출방법의 비교에서는 90% 함수 에탄올에 의한 가열환류 추출에 의해 가장 효율적으로 스키르푸신 B가 추출되었다. 또한 패션푸르트 종자에 포함되는 스키르푸신 B의 함유량을 가장 추출 효율이 높은 값으로부터 환산하면, 패션푸르트 종자는 적어도 0.36 질량% 정도의 고함유량으로 스키르푸신 B를 포함하는 것이 명확해졌다. 그리고 그것을 효율적으로 추출할 수 있는 것이 명확해졌다.

또한 표 2에서는 (A) 추출에 사용한 종자 100 g당 추출되는 스키르푸신 B의 양(㎎) 또는 (B) 추출액 중의 스키르푸신 B 함유량(㎍/mL)으로 환산하여 나타내고 있다.

표 2에 나타내어지는 바와 같이, 함수 1,3-부틸렌글리콜(함수 BG)에 의한 교반 추출에 의해 패션푸르트 종자 100 g당 92.6 ㎎~401 ㎎의 스키르푸신 B가 추출되었다. 또한 50% 함수 BG의 경우에는 분쇄를 행하지 않은 전 종자(whole seed)로부터 추출을 행한 결과이다. 추출 효율이 약간 저하되었지만 분쇄를 행하지 않고도 추출할 수 있는 것이 확인되었다.

Claims

패션푸르트 종자에 함수 알코올계 용매 및 함수 케톤계 용매로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 상기 용매 중에 스키르푸신 B를 가열환류에 의해 추출하고, 추출한 스키르푸신 B를 분획 또는 정제하는 것을 특징으로 하는 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 패션푸르트 종자는 패션푸르트의 생 종자 또는 패션푸르트의 생 종자를 건조한 종자인 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 함수 알코올계 용매가 함수 에탄올 또는 함수 1,3-부틸렌글리콜이고, 또는 상기 함수 케톤계 용매가 함수 아세톤인 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,
추출 후 용매를 증류 제거하는 스키르푸신 B 함유 조성물의 제조방법.
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