PT2245037E - Novos compostos e métodos para terapêutica - Google Patents

Description

ΕΡ2245037Β1

DESCRIÇÃO "NOVOS COMPOSTOS E MÉTODOS PARA TERAPÊUTICA"

Análogos de nucleótidos contendo grupos fosfonato são divulgados, por exemplo, nas Patentes U.S. N.° 4.659.825, 4.808.716, 4.724.233, 5.142.051, 5.302.585, 5.208.221, 5.352.786, 5.356.896, 5.663.159, 5.977.061 e 05459256, nos números de publicação EP EP 421.819, 434.450, 481.214, 468.119, 269.947, 481.214, 630.381, 369.409, 454.427, 618.214 e 398.231 e nos documentos WO 95/07920, 27002808A1, 09526734A1, 94/03467, 94/03467, 95/07920, 07/002912, 05/066189, 02/08241 e 94/03467, CN 101066981. Daluge et al. (34th Interscience

Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Out. 4-7, 1994), Cihlar et al., "Antimicrobial Agents and Chemotherapy" 39(1) :117-124 (1995) e Holy et al., "ACS Symp. Ser." 401:57-71 (1989) e Holy, "Kem. Ind." 38(10):457-462 (1989), Naessens et al., "Biochem. Pharmacol." 1999 Jul 15; 58(2):311-23,

Valerianova et al. "Anticancer Res." 2001 Mai-Jun; 21(3B):2057-64, Parker WB, Shaddix SC, Rose LM, Pham PT, Hua M, Vince R Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2000 Abr; 19(4):795-804, Daluge SM, Good SS, Faletto MB, Miller WH, St Clair MH, Boone LR, Tisdale M, Parry NR, Reardon JE, Dornsife RE, Averett DR, Krenitsky TA. Antimicrob Agents Chemother. 1997 Mai; 41 (5): 1082-1093, e no documento WO 2007/136650. A presente invenção fornece um composto tendo a estrutura (5): OR10

1 ΕΡ2245037Β1 em que cada Rb é independentemente alquilo Ci-C8, ou alquenilo C2-C8, ou alquinilo C2-C8, ou arilo C6-Ci0-alquilo Ci-C4; R10 é alquilo Ci-C8, ou alquenilo C2-C8, ou alquinilo C2-C8, em que alquilo Ci-C8 é opcionalmente substituído por um grupo alcoxi Ci-C4; em que alquilo significa um hidrocarboneto saturado ramificado, normal ou cíclico; e sais terapeuticamente aceitáveis e/ou isómeros ópticos enriquecidos dos mesmos.

Outras formas de realização da invenção incluem um composto (5) em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável, a utilização do dito composto no tratamento de doenças malignas ou para a profilaxia ou terapêutica de infeções virais, e a combinação de um composto (1) com outros agentes antivirais ou antitumorais. A presente invenção prevê compostos de fórmula (5) , composições farmacêuticas empregando tais compostos e métodos de utilização de tais compostos. Para efeitos de interpretação desta memória descritiva, aplicar-se-ão as seguintes definições e, sempre que necessário, os termos usados no singular também incluirão o plural e vice-versa.

Como aqui utilizado, e a menos que modificados pelo contexto imediato:

Alquilo significa hidrocarbonetos saturados ramificados, normais ou cíclicos C1-C15. Preferivelmente, o alquilo compreende 1 a 8 átomos de carbono, ou 1 a 6 átomos de carbono, ou 1 a 4 átomos de carbono. Os exemplos representativos de alquilo incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, propilo, ciclopropilo, ciclobutilo, isopropilo, n-, sec-, iso- e tert-butilo, pentilo, isopentilo, 1-metilbutilo, 1-etilpropilo, neopentilo, e t-pentilo, n-hexilo, 3-metilhexilo, 2,2-dimetilpentilo, 2,3-dimetilpentilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo e semelhantes. Alquenilo significa hidrocarbonetos ramificados, normais ou cíclicos C2-Ci5 contendo pelo menos 1 (geralmente 1-3) ligação 2 ΕΡ2245037Β1 dupla conjugada ou não conjugada cis ou trans orientada, incluindo alilo, etenilo, propenilo, isopropenilo, 1-, 2- e 3-butenilo, 1- e 2-isobutenilo e semelhantes.

Alquinilo significa hidrocarboneto ramificado, normal, ou cíclico C2-C15 portador de pelo menos 1 (geralmente 1-3) ligação tripla, por exemplo, 2-propinilo.

Alcoxi significa alquil-O-, em que alquilo é definido aqui acima. Os exemplos representativos de alcoxi incluem, mas não estão limitados a, metoxi, etoxi, propoxi, 2-propoxi, butoxi, tert-butoxi, pentiloxi, hexiloxi, ciclopropiloxi-, ciclohexiloxi- e semelhantes. Como aqui utilizado, o termo "alcoxi inferior" refere-se aos grupos alcoxi com 1-7 carbonos e preferivelmente 1-4 carbonos.

Como aqui utilizado, o termo "halo" ou "halogénio" refere-se a flúor, cloro, bromo, e iodo.

Haloalquilo significa alquilo como aqui definido, que é substituído por um ou mais grupos halo como definidos aqui. Preferivelmente, o haloalquilo pode ser monohaloalquilo, dihaloalquilo ou polihaloalquilo incluindo perhaloalquilo. Um monohaloalquilo pode ter um iodo, bromo, cloro ou flúor dentro do grupo alquilo. Os grupos dihaloalquilo e polihaloalquilo podem ter dois ou mais dos mesmos átomos de halo ou uma combinação de diferentes grupos halo dentro do alquilo. Preferivelmente, o polihaloalquilo contém até 12, 10, ou 8, ou 6, ou 4, ou 3, ou 2 grupos halo. Os exemplos não limitantes de haloalquilo incluem flurometilo, difluorometilo, trifluorometilo, clorometilo, diclorometilo, triclorometilo, pentafluoroetilo, heptafluoropropilo, difluoroclorometilo, diclorofluorometilo, difluoroetilo, difluoropropilo, dicloroetilo e dicloropropilo. Um perhaloalquilo refere-se a um alquilo com todos os átomos de hidrogénio substituídos com átomos de halo.

Alquilamino significa alquilo-NH-, em que alquilo é definido aqui.

Heteroalquilo significa um radical hidrocarboneto de 3 ΕΡ2245037Β1 cadeia linear ou ramificada, ou combinações do mesmo, consistindo do número estabelecido de átomos de carbono e de um a três heteroátomos selecionados de 0, N, Si, e S, e em que os átomos de azoto e enxofre podem ser opcionalmente oxidados e o heteroátomo de azoto pode ser opcionalmente quaternizado. 0(s) heteroátomo(s) 0, N e S podem ser colocados em qualquer posição interna do grupo heteroalquilo. 0 termo "arilo" refere-se a grupos hidrocarboneto aromático monociclico ou biciclico com 6-14 átomos de carbono na porção do anel. Preferivelmente, o arilo é um arilo (Cô-Cio) · Os exemplos não limitantes incluem fenilo, bifenilo, naftilo ou tetrahidronaftilo, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído por 1-4 substituintes, tais como alquilo, trifluorometilo, cicloalquilo, halo, hidroxi, alcoxi, acilo, alquil-C(0)-0-, aril-0-, heteroaril-O- opcionalmente substituídos, amino, tiol, alquiltio, ariltio, azoto, ciano, carboxi, alquil-O-C(0)-, carbamoilo, alquiltiono, sulfonilo, sulfonamido, heterocicloalquilo e semelhantes opcionalmente substituídos.

Além disso, arilo significa um substituinte aromático contendo somente átomos de carbono no anel que pode ser um anel aromático único, ou múltiplos anéis aromáticos que estão fundidos em conjunto, ligados covalentemente, ou ligados a um grupo comum tal como uma fração metileno ou etileno. 0 grupo de ligação comum também pode ser um carbonilo como em benzofenona ou oxigénio como em difenil éter ou azoto como em difenilamina. Arilamino significa aril-NH2-.

Aralquilo significa aril-alquil-, em que arilo e alquilo são aqui definidos.

Aralquenilo significa aril-alquenil-, em que arilo e alquenilo são aqui definidos.

Aralquinilo significa aril-alquinil-, em que arilo e alquinilo são aqui definidos.

Cicloalquilo significa anéis de hidrocarbonetos saturados, monocíclicos ou bicíclicos, tendo geralmente um 4 ΕΡ2245037Β1 número especificado de átomos de carbono que compreendem o anel (isto é, cicloalquilo C3-C7 refere-se a um grupo cicloalquilo com 3, 4, 5, 6 ou 7 átomos de carbono como membros do anel). 0 cicloalquilo pode estar ligado a um grupo ou a um substrato em qualquer átomo do anel, a menos que tal ligação violasse os requisitos de valência.

Isómero refere-se a diferentes compostos que têm a mesma fórmula molecular. Também como aqui utilizado, o termo "um isómero óptico" refere-se a qualquer das várias configurações estereoisoméricas que podem existir para um dado composto da presente invenção e inclui isómeros geométricos. Entende-se que um substituinte pode ser ligado num centro quiral de um átomo de carbono. Portanto, a invenção inclui enantiómeros, diastereómeros e racematos do composto. "Enantiómeros" são um par de estereoisómeros que são imagens de espelho não sobreponiveis uma da outra. Uma mistura 1:1 de um par de enantiómeros é uma mistura "recémica" . 0 termo é utilizado para designar uma mistura recémica onde apropriado. "Diastereoisómeros" são estereoisómeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens de espelho uns dos outros. A estereoquimica absoluta é especificada de acordo com o sistema R-S ou de Cahn-Ingold-Prelog. Quando um composto é um enantiómero puro a estereoquimica em cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Os compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida podem ser designados (+) ou (-) dependendo da direção (dextro- ou levorrotatória) em que giram a luz plano-polarizada no comprimento de onda da linha D do sódio. Alguns dos compostos aqui descritos contêm um ou mais centros assimétricos e podem, assim, dar origem a enantiómeros, diastereómeros, e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquimica absoluta, como (R) - ou (S)-. A presente invenção pretende incluir todos estes isómeros possíveis, incluindo misturas recémicas, formas opticamente puras e misturas intermediárias. Os isómeros (R) - e (S)~ opticamente ativos 5 ΕΡ2245037Β1 podem ser preparados utilizando sintões quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos utilizando técnicas convencionais. Se o composto contém um ligação dupla, o substituinte pode estar numa configuração E ou Z. Se o composto contém um cicloalquilo dissubstituído, o substituinte de cicloalquilo pode ter uma configuração cis- ou trans-. Todas as formas tautoméricas também se destinam a ser incluídas.

Como aqui utilizado, o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a sais que retêm a eficácia e propriedades biológicas dos compostos desta invenção e, os quais não são indesejáveis biologicamente ou de outro modo. Em muitos casos, os compostos da presente invenção são capazes de formar sais ácidos e/ou básicos em virtude da presença de grupos amino e/ou carboxilo ou grupos semelhantes aos mesmos (por exemplo, fenol ou ácido hidroxâmico) . Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos. Os ácidos inorgânicos a partir dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes. Os ácidos orgânicos a partir dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido salicilico e semelhantes. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas. As bases inorgânicas a partir das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, sódio, potássio, litio, amónio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e semelhantes; são particularmente preferidos os sais de amónio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. As bases orgânicas a partir das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, 6 ΕΡ2245037Β1 aminas primárias, secundárias, e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas de permuta iónica básicas, e semelhantes, especificamente tais como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, e etanolamina. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir de um composto de origem, uma fração básica ou ácida, por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados pela reação de formas ácidas livres destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na, Ca, Mg, ou K, ou semelhantes), ou por reação de formas básicas livres destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são tipicamente levadas a cabo em água ou num solvente orgânico, ou numa misturas dos dois. Geralmente, meio não aquoso tipo éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, ou acetonitrilo são preferidos, onde praticável. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985), o qual é aqui incorporado por referência.

Um transportador farmaceuticamente aceitável inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensioativos, antioxidantes, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes de retardamento da absorção, sais, conservantes, fármacos, estabilizadores de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, corantes, tais como materiais e combinações dos mesmos, como seriam conhecidos por um perito vulgar na especialidade (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Salvo o caso em que qualquer transportador convencional seja incompatível com 7 ΕΡ2245037Β1 o ingrediente ativo, a sua utilização nas composições terapêuticas ou farmacêuticas é contemplada.

Como aqui utilizado, o termo "transportador/excipiente farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensioativos, antioxidantes, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes de retardamento da absorção, sais, conservantes, fármacos, estabilizadores de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, corantes, tais como materiais e combinações dos mesmos, como seriam conhecidos por um perito vulgar na especialidade (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Salvo o caso em que qualquer transportador convencional seja incompatível com o ingrediente ativo, a sua utilização nas composições terapêuticas ou farmacêuticas é contemplada. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente invenção refere-se a uma quantidade do composto da presente invenção que suscitará a resposta biológica ou médica de um sujeito, ou melhorará os sintomas, abrandará ou retardará a progressão da doença, ou prevenirá uma doença, etc. Numa forma de realização preferida, a "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade que inibe ou reduz a proliferação de células cancerígenas, ou inibição ou redução do crescimento de tumores/cancros in vitro ou in vivo, ou inibição ou redução de uma doença neoplástica num sujeito tal como um mamífero. Noutra forma de realização preferida, também se refere uma quantidade que reduz o tamanho de tumores/cancros primários, inibe a infiltração de células cancerígenas em órgãos periféricos, abranda ou pára as metástases tumorais, ou alivia pelo menos até certo ponto um ou mais sintomas associados ao tumor ou cancro, etc.

Como aqui utilizado, o termo "sujeito" refere-se a um 8 ΕΡ2245037Β1 animal. Preferivelmente, o animal é um mamífero. Um sujeito também se refere a, por exemplo, primatas (por exemplo, seres humanos), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratazanas, ratinhos, peixes, aves e semelhantes. Numa forma de realização preferida, o sujeito é um ser humano.

Como aqui utilizado, o termo "um distúrbio" ou "uma doença" refere-se a qualquer desarranjo ou anormalidade de função; um estado mórbido físico ou mental. Veja-se Dorland's Illustrated Medicai Dictionary, (W.B. Saunders Co. 27th ed. 1988).

Como aqui utilizado, o termo "inibição" ou "inibir" refere-se a uma redução ou supressão de uma dada condição, sintoma, ou doença, ou a uma diminuição significativa na atividade de base de uma atividade ou processo biológico. Numa forma de realização, refere-se à capacidade para causar a redução do crescimento de um tumor ou cancro, ou a redução do tamanho do tumor ou cancro.

Como aqui utilizado, o termo "tratar" ou "tratamento" de qualquer doença ou distúrbio refere-se, numa forma de realização, a melhorar a doença ou distúrbio (isto é, deter ou reduzir o desenvolvimento da doença ou pelo menos de um dos sintomas clínicos da mesma). Noutra forma de realização, "tratar" ou "tratamento" refere-se a melhorar pelo menos um parâmetro físico, o qual pode não ser discernível pelo paciente. Ainda noutra forma de realização, "tratar" ou "tratamento" refere-se a modular a doença ou distúrbio, quer fisicamente, (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente, (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Ainda noutra forma de realização, "tratar" ou "tratamento" refere-se a prevenir ou retardar o aparecimento ou desenvolvimento ou progressão da doença ou distúrbio.

Como aqui utilizado, o termo "um/uma/uns/umas", "um/uma/uns/umas", "o/a/os/as" e termos semelhantes utilizados no contexto da presente invenção (especialmente no 9 ΕΡ2245037Β1 contexto das reivindicações) , devem ser interpretados para cobrir tanto o singular como o plural, a menos que aqui indicado em contrário ou claramente contraindicado pelo contexto. A recitação de intervalos de valores pretende aqui servir apenas como um método abreviado de referir individualmente cada valor separado que cai dentro do intervalo. A menos que aqui indicado em contrário, cada valor individual é incorporado na memória descritiva como se fosse aqui individualmente relatado. Todos os métodos aqui descritos podem ser realizados em qualquer ordem adequada a menos que aqui indicado em contrário ou, de outro modo, claramente contraindicado pelo contexto. A utilização de qualquer ou todos os exemplos, ou linguagem exemplificativa (por exemplo, "tal como") aqui fornecidos pretender apenas iluminar melhor a invenção e não representa uma limitação no âmbito da invenção de outro modo reivindicada. Nenhuma linguagem na memória descritiva deveria ser interpretada como indicando qualquer elemento não reivindicado essencial à prática da invenção.

Alcarilo, alquenilarilo, alquinilarilo, arilalquilo, arilalquinilo, ou aralquenilo significa alquilo, alquinilo ou alquenilo substituídos com pelo menos 1 (geralmente 1-3) grupos arilo, ou arilo substituído com pelo menos 1 (geralmente 1-3) grupos alquilo, alquinilo ou alquenilo.

Qualquer átomo de carbono assimétrico nos compostos da presente invenção pode estar presente na configuração (R) (S) - ou (R, S) preferivelmente na configuração (R) - ou (S)~. Os substituintes em átomos com ligações insaturadas podem, se possível, estar presentes na forma cis (Z)- ou trans (E) -. Portanto, os compostos da presente invenção podem estar na forma de um dos isómeros possíveis ou misturas dos mesmos, por exemplo, como isómeros geométricos (cis ou trans) substancialmente puros, diastereómeros, isómeros ópticos (antípodas), racematos ou misturas dos mesmos.

Quaisquer misturas resultantes de isómeros podem ser separadas com base nas diferenças físico-químicas dos 10 ΕΡ2245037Β1 constituintes, nos isómeros geométricos ou ópticos puros, diastereómeros, racematos, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracionada.

Quaisquer racematos resultantes de produtos finais ou intermediários podem ser resolvidas nos antípodas ópticos por métodos conhecidos, por exemplo, por separação dos sais diastereoméricos dos mesmos, obtidos com um ácido ou base opticamente ativo, e libertando o composto ácido ou básico opticamente ativo. Em particular, a fração hidroxiamina ou sulfonamida pode, assim, ser empregada para resolver os compostos da presente invenção nos seus antípodas ópticos, por exemplo, por cristalização fracionada de um complexo metálico (por exemplo, Zn2+) formado com um co-ligando opticamente ativo, por exemplo, L- ou D-histidina. Os produtos recémicos podem também ser resolvidos por cromatografia quiral, por exemplo, cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) usando um absorvente quiral.

Finalmente, os compostos da presente invenção são obtidos tanto na forma livre, como um sal dos mesmos.

Quando um grupo básico está presente nos compostos da presente invenção (tal como num grupo substituinte), os compostos podem ser convertidos em sais de adição de ácido dos mesmos, preferivelmente sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Estes podem ser formados com ácidos inorgânicos ou ácidos orgânicos. Os ácidos inorgânicos adequados incluem, mas não estão limitados a, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, um ácido fosfórico ou hidrohálico. Os ácidos orgânicos adequados incluem, mas não estão limitados a, ácidos carboxílicos, tais como ácidos alcanocarboxílicos (C1-C4) os quais, por exemplo, são não substituídos ou substituídos por halogénio, por exemplo, ácido acético, tal como ácidos dicarboxílicos saturados ou insaturados, por exemplo, ácido oxálico, succínico, maleico ou fumárico, tal como ácidos hidroxicarboxílicos, por exemplo, ácido glicólico, láctico, málico, tartárico ou cítrico, tal como ácidos aminados, por 11 ΕΡ2245037Β1 exemplo, ácido aspártico ou glutâmico, ácidos sulfónicos orgânicos, tais como ácidos alguilssulfónicos (C1-C4) , por exemplo, ácido metanossulfónico, ou ácidos arilssulfónicos os quais são não substituídos ou substituídos, por exemplo, por halogénio. Os sais preferidos são formados com ácido clorídrico, ácido metanossulfónico e ácido maleico.

Quando um grupo ácido está presente nos compostos da presente invenção, os compostos podem ser convertidos em sais com bases farmaceuticamente aceitáveis. Tais sais incluem sais de metais alcalinos, como sais de sódio, lítio e potássio; sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de cálcio e magnésio; sais de amónio com bases orgânicas, por exemplo, sais de trimet ilamina, sais de dietilamina, sais de tris(hidroximetil)metilamina, sais de diciclohexilamina e sais de Af-metil-D-glucamina; sais com aminoácidos tais como arginina, lisina e semelhantes. Os sais podem ser formados utilizando métodos convencionais, vantajosamente na presença de um solvente etéreo ou alcoólico, tal como um alcanol inferior. A partir das soluções do último, os sais podem ser precipitados com éteres dietilicos, por exemplo, éter dietílico. Os sais resultantes podem ser convertidos nos compostos livres por tratamento com ácidos. Estes ou outros sais podem também ser utilizados para purificação dos compostos obtidos.

Quando tanto um grupo básico como um grupo ácido estão presentes na mesma molécula, os compostos da presente invenção também podem formar sais internos.

Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo os seus sais, podem também ser obtidos na forma dos seus hidratos, ou incluírem outros solventes utilizados para a sua cristalização.

Tipicamente, R10 é relativamente pequeno, na ordem de 1 a 6 átomos de carbono. R10 geralmente não é um grupo de proteção hidroxilo tal como benzilo. Habitualmente, R10 é alquilo Ci-C6; cicloalquilo C3-C6 ou cicloalquilo C3-C4; cicloalquilo C3-C4 12 ΕΡ2245037Β1 substituído com alquilo Ci-C2; cicloalquilo C3-C4 o qual é mono-, di- ou tri-substituído com alquilo Ci-C3; alilo; alquilo Ci-C6-0-alquilo Ci-C6, ou alquilo C3-C6-0-alquilo C3-C6, ou alilo, em cada caso 1 ou 2 átomos de H são opcionalmente substituídos com alquilo C1-C3. R10 é n-, s- ou ciclo-propilo, n-, s-, t- ou ciclo-butilo, n-, s-, t- ou ciclo-pentilo, n-, s-, t- ou ciclo-hexilo. R10 inclui -CH2<, -CH(CH3)<, - (CH2) 2OCH2<, -CH2CH=CH2, -CH=CH2, -CH(CH3) (CH=CH2) , - (CH2) 2OCH3, - (CH2) 2och (CH3) 2, -CH2CH=CHCH3 ou -ch2c=ch.

Os grupos R10 podem suportar átomos de C quirais. Estes são adequadamente utilizados como as misturas recémicas ou diastereoméricas, ou podem ser quiralmente puros. Em geral, prefere-se que sejam quiralmente puros.

Os compostos da presente invenção são úteis na inibição do crescimento de células tumorais/cancerígenas ou da proliferação celular de células tumorais/cancerígenas, no abrandando a progressão do ciclo celular em células tumorais/cancerígenas. Em adição, os compostos da presente invenção induzem apoptose. A indução da apoptose tem sido utilizada como uma importante abordagem quimioterápica no tratamento de cancro/tumor. Por conseguinte, os compostos da presente invenção têm propriedades farmacêuticas valiosas, e podem ser úteis como agentes antiproliferação e antitumorais/anticancerígenos.

Portanto, num aspeto, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para inibir a proliferação celular tanto in vitro como in vivo. Numa forma de realização, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para inibir a proliferação celular numa célula tumoral/cancerígena contactando a célula tumoral/cancerigena com uma quantidade eficaz dos ditos compostos. Numa forma de realização, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para tratar doenças ou condições com proliferação celular. As ditas doenças podem incluir, mas não estão limitados a, cancro, doença 13 ΕΡ2245037Β1 autoimune, distúrbio fúngico, artrite, rejeição de enxerto, doença inflamatória do intestino, proliferação celular induzida após procedimentos médicos, incluindo, mas não limitados a, cirurgia, angioplastia, e semelhantes.

Noutro aspeto, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para inibir o crescimento de tumores/cancros tanto in vitro como in vivo. Numa forma de realização, os compostos podem ser utilizados para inibir o crescimento de células tumorais/cancerigenas contactando a célula tumoral/cancerigena com uma quantidade eficaz dos ditos compostos. Numa forma de realização, a invenção fornece um método de utilização dos compostos da presente invenção para inibir o crescimento de tumores ou cancros. Os tumores ou cancros que são tratáveis de acordo com os métodos incluem, por exemplo, doenças malignas hematológicas tais como leucemia, leucemia linfoide aguda, leucemia linfoide crónica, leucemia granulocitica crónica, leucemia granulocitica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia de células pilosas e semelhantes, tumores ou cancros localizados na mama, pulmão, tiroide, linfonodo, sistema génito-urinário, rim, uréter, bexiga, ovário, testículo, próstata, sistema musculoesquelético, osso, músculo esquelético, medula óssea, trato gastrointestinal, estômago, esófago, intestino delgado, cólon, reto, pâncreas, fígado, músculo liso, sistema nervoso central e periférico, cérebro, medula espinal, nervos, cabeça, pescoço, ouvido, olho, nasofaringe, orofaringe, glândula salivar, sistema cardiovascular, cavidade oral, língua, laringe, hipofaringe, tecidos moles, pele, cérvix, ano, retina, e/ou coração de um mamífero.

Numa forma de realização a invenção fornece um método de utilização dos compostos da presente invenção para tratar uma doença neoplástica, ou um tumor/cancro. Como aqui utilizado, o termo "doença neoplástica" refere-se a qualquer crescimento anormal de células ou tecidos que é benigno (não cancerígeno) ou maligno (cancerígeno). As doenças neoplásticas que são 14 ΕΡ2245037Β1 tratáveis de acordo com os métodos da invenção incluem, por exemplo, neoplasmas de leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide crónica, leucemia mieloide crónica, linfoma de células T cutâneo, linfoma de células pilosas e linfoma não Hodgkin.

Os compostos desta invenção são úteis no tratamento de cancros ou tumores (incluindo displasias tais como displasia uterina). Estes incluem doenças malignas hematológicas, carcinomas orais (por exemplo, do lábio, língua e faringe), órgãos digestivos (por exemplo, esófago, estômago, intestino delgado, cólon, intestino grosso, ou reto), fígado e passagens biliares, pâncreas, sistema respiratório tal como laringe ou pulmão (célula pequena ou célula não pequena), osso, tecido conjuntivo, pele (por exemplo, melanoma), mama, órgãos reprodutivos (útero, cérvix, testículos, ovário, ou próstata), trato urinário (por exemplo, bexiga ou rim), cérebro e glândulas endócrinas tais como a tiroide. Em suma, os compostos desta invenção são empregues para tratar qualquer neoplasma, incluindo não só doenças malignas hematológicas, mas também tumores sólidos de todos os tipos.

As doenças malignas hematológicas são amplamente definidas como distúrbios proliferativos de células sanguíneas e/ou dos seus progenitores, nas quais estas células proliferam de uma maneira incontrolável. Anatomicamente, as doenças malignas hematológicas estão divididas em dois grupos primários: linfomas - massas malignas de células linfoides, principalmente, mas não exclusivamente, em linfonodos, e leucemias - neoplasma derivado tipicamente de células linfoides ou mieloides e principalmente afetando a medula óssea e sangue periférico. Os linfomas podem ser subdivididos em Doença de Hodgkin e Linfoma Não Hodgkin (NHL). 0 último grupo compreende várias entidades distintas, as quais podem ser distinguidas clinicamente (por exemplo, linfoma agressivo, linfoma indolente), histologicamente (por exemplo, linfoma folicular, linfoma de células do manto), ou com base na origem 15 ΕΡ2245037Β1 da célula maligna (por exemplo, linfócito B, linfócito T). As leucemias e doenças malignas relacionadas incluem leucemia mieloide aguda, (AML), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia linfóide aguda (ALL) e leucemia linfóide crónica (CLL) . Outras doenças malignas hematológicas incluem as discrasias de células plasmáticas incluindo mieloma múltiplo, e as sindromes mielodisplásicas.

Adicionalmente, a presente invenção fornece: um composto da presente invenção para utilização como um medicamento; um composto da presente invenção para utilização na inibição da proliferação celular de células tumorais/cancerigenas, ou no abrandamento da progressão do ciclo celular em células tumorais/cancerigenas; um composto da presente invenção para utilização no tratamento de doenças ou condições com proliferação celular; um composto da presente invenção para utilização na inibição do crescimento de tumores/cancros tanto in vitro como in vi vo; um composto da presente invenção para utilização no tratamento de uma doença neoplástica; um composto da presente invenção para utilização no tratamento de um tumor ou cancro; um composto da presente invenção para utilização no tratamento de doenças malignas hematológicas.

Os compostos desta invenção são também adequados para o tratamento ou profilaxia de infeções virais, incluindo por vírus de DNA e vírus de RNA, em particular HSV e HIV. Os vírus a serem tratados dependerão da atividade antiviral do fármaco de origem subjacente. Por exemplo, os compostos das séries PME são úteis tanto contra vírus de DNA como retrovírus, enquanto os compostos PMP são eficazes contra retrovírus.

As infeções virais exemplificativas incluem infeções causadas por vírus de DNA ou RNA incluindo herpesvírus (CMV, 16 ΕΡ2245037Β1 HSV 1, HSV 2, EBV, vírus varicela-zóster [VZV], herpesvírus bovino tipo 1, herpesvírus equino tipo 1, HHV-6) , papilomavírus (HPV tipos 1-55 incluindo HPV carcinogénico), flavivírus (incluindo vírus da febre amarela, vírus da febre suína africana e vírus da encefalite japonesa), togavírus (incluindo vírus da encefalomielite equina venezuelana), vírus influenza (tipos A-C), retrovírus (HIV-1, HIV-2, HTLV-I, HTLV-II, SIV, FeLV, FIV, MoMSV), adenovírus (tipos 1-8), poxvírus (vírus da vaccinia), enterovirus (poliovirus tipos 1-3, Coxsackie, vírus da hepatite A, e echovírus), vírus de gastroenterites (vírus Norwalk, rotavírus), hantavírus (vírus Hantaan), poliomavírus, papovavírus, rinovírus, vírus parainfluenza tipos 1-4, vírus da raiva, e vírus sincicial respiratório (RSV).

Portanto, a presente invenção fornece um composto da presente invenção para utilização no tratamento de infeções virais.

Os compostos terapeuticamente úteis desta invenção são úteis em formas orais ou de libertação prolongada. Nestas utilizações um grupo éster ou outro é removido in vivo, por exemplo, hidrolisado ou oxidado, de modo a produzir, por exemplo, um grupo amino ou hidroxilo livre. Protetores ou precursores ésteres ou amidados adequados são selecionados com base na especificidade do substrato de esterases e/ou peptidases esperadas serem encontradas dentro das células onde a hidrólise do precursor é desejada. Na medida em que a especificidade destas enzimas é desconhecida, um exibirá uma pluralidade de análogos de nucleótidos desta invenção até que a desejada especificidade do substrato seja encontrada. Isto será evidente a partir do aparecimento de fosfonato livre ou de atividade antitumoral ou antiviral. Um geralmente seleciona compostos que são (i) não hidrolisados ou hidrolisados lentamente comparativamente no intestino superior, (ii) intestino e célula permeável e (iii) hidrolisados no citoplasma celular e/ou circulação sistémica. Painéis com células de 17 ΕΡ2245037Β1 tecidos particulares são utilizados para identificar precursores que são libertados em órgãos suscetíveis a uma infeção virai ou microbiana alvo, por exemplo, no caso do fígado, fármacos precursores capazes de hidrólise no fígado. Outras infeções, por exemplo, CMV ou HIV, são opcionalmente tratadas com um precursor que é hidrolisado substancialmente à mesma taxa e substancialmente no mesmo grau em todos os tecidos. Os ensaios conhecidos na técnica são adequados para estes fins, incluindo ensaios de estabilidade do lúmen intestinal, permeação celular, estabilidade em homogenado de fígado e estabilidade plasmática. Estes ensaios são utilizados para determinar as características de biodisponibilidade dos precursores. No entanto, mesmo que os derivados não sejam convertidos in vivo, permanecem úteis como intermediários químicos.

Os compostos aqui e os seus sais f isiologicamente aceitáveis (de aqui em diante coletivamente referidos como os ingredientes ativos) são formulados para administração por qualquer via apropriada à condição a ser tratada. Os compostos e formulações serão preferivelmente estéreis.

Os ingredientes ativos são colocados em formulações farmacêuticas. As formulações, tanto para utilização veterinária como humana, compreendem pelo menos um ingrediente ativo, como definido acima, juntamente com um ou mais transportadores aceitáveis e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos. 0(s) transportador(es) deve(em) ser "aceitável (eis) " no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não deletério para o recipiente.

As formulações são convenientemente apresentadas em formas farmacêuticas unitárias e devem ser preparadas por qualquer dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Em geral, as formulações são preparadas colocando, uniformemente e intimamente, em associação o ingrediente ativo com transportadores líquidos ou com transportadores sólidos finamente divididos ou ambos, e em seguida, se necessário, dar 18 ΕΡ2245037Β1 forma ao produto.

As formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas tais como cápsulas, saquetas ou comprimidos, cada contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão num liquido aquoso ou num liquido não aquoso; ou como uma emulsão liquida óleo-em-água ou uma emulsão liquida água-em-óleo. 0 ingrediente ativo pode também ser apresentado como um bolo, electuário ou pasta.

Para infeções externas do olho ou outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são preferivelmente aplicadas como uma pomada ou creme tópicos contendo o(s) ingrediente (s) ativo (s) numa quantidade de, por exemplo, 0,075 20% p/p (incluindo o(s) ingrediente (s) ativo (s) num intervalo entre 0,1% e 20% em incrementos de 0,1% p/p tal como 0,6% p/p, 0,7% p/p, etc.), tipicamente 0,2 a 15% p/p e mais tipicamente 0,5 a 10% p/p. Quando formulados numa pomada, os ingredientes ativos podem ser empregues com uma base de pomada ou parafínica ou miscivel em água. Alternativamente, os ingredientes ativos podem ser formulados num creme com uma base do creme óleo-em-água.

Se desejado, a fase aquosa da base do creme pode incluir, por exemplo, pelo menos 30% p/p de um álcool polihidrico, isto é, um álcool tendo dois ou mais grupos hidroxilo tais como propilenoglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietilenoglicol (incluindo PEG 400) e misturas dos mesmos. As formulações tópicas podem incluir desejavelmente um composto que potência a absorção ou penetração do ingrediente ativo através da pele ou outras áreas afetadas. Os exemplos de tais potenciadores da penetração dérmica incluem dimetilsulfóxido e análogos relacionados. A fase oleosa das emulsões desta invenção pode ser constituída a partir de ingredientes conhecidos de uma maneira conhecida. Esta fase pode compreender um emulsionante isolado, 19 ΕΡ2245037Β1 ou uma mistura de pelo menos um emulsionante com uma gordura ou um óleo ou tanto com uma gordura como com um óleo. Preferivelmente, um emulsionante hidrofilico é incluído juntamente com um emulsionante lipofílico que atua como um estabilizador. É também preferido incluir tanto um óleo como uma gordura. Os estabilizadores da emulsão adequados para utilização na formulação da presente invenção incluem Tween® 60, Span®80, álcool cetoestearílico, álcool benzílico, álcool miristílico, monoestearato de glicerilo e laurilsulfato de sódio. Os óleos ou gorduras adequados incluem ésteres alquílicos de cadeia linear ou ramificada, mono ou dibásicos tais como di-isoadipato, estearato de isocetilo, diéster de propilenoglicol de ácidos gordos do coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo ou palmitato de 2-etilhexilo. Estes podem ser utilizados isolados ou em combinação dependendo das propriedades requeridas. Alternativamente, lípidos com elevados pontos de fusão tais como parafina branca mole e/ou parafina liquida ou outros óleos minerais podem ser utilizados.

As formulações adequadas para administração tópica no olho também incluem gotas para olhos em que o ingrediente ativo é dissolvido ou suspenso num transportador adequado, especialmente um solvente aquoso para o ingrediente ativo. O ingrediente ativo está tipicamente presente em tais formulações numa concentração de 0,01 a 20% em peso.

As formulações adequadas para administração nasal em que o transportador é um sólido incluem um pó grosso com um tamanho de partícula, por exemplo, no intervalo de 20 a 500 mícron (incluindo tamanhos de partículas num intervalo entre 20 e 500 mícron em incrementos de 5 mícron tais como 30 mícron, 35 mícron, etc.), que é administrado por inalação rápida através da via nasal a partir de um recipiente do pó. As formulações adequadas em que o transportador é um líquido, para administração como, por exemplo, um pulverizador nasal ou como gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do 20 ΕΡ2245037Β1 ingrediente ativo. As formulações adequadas para administração por aerossol podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais e podem ser entregues com outros agentes terapêuticos tais como pentamidina para o tratamento de pneumocistose.

As formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulação de pulverização contendo em adição ao ingrediente ativo tais transportadores como são conhecidos na técnica como sendo apropriados.

As formulações adequadas para administração parentérica incluem soluções injetáveis estéreis aquosas e não aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do recetor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose única ou multidose, por exemplo, ampolas e frascos selados, e podem ser armazenadas num estado criodessecado (liofilizado) que requer apenas a adição do transportador liquido estéril, por exemplo, água para injetáveis, imediatamente antes da utilização. As soluções e suspensões de injeções extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós, grânulos ou comprimidos estéreis do tipo previamente descrito. As formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dose diária ou uma subdose diária unitária, como aqui acima relatado, ou uma fração apropriada das mesmas, de um ingrediente ativo. A presente invenção fornece ainda composições veterinárias compreendendo pelo menos um ingrediente ativo como acima definido, juntamente com um transportador veterinário do mesmo. Os transportadores veterinários são materiais para administrar a composição e podem ser matérias sólidos, líquidos ou gasosos que são, pelo contrário, inertes ou aceitáveis na técnica veterinária e são compatíveis com o 21 ΕΡ2245037Β1 ingrediente ativo. Estas composições veterinárias podem ser administradas por via oral, parentérica ou por qualquer outra via desejada.

Os compostos aqui são opcionalmente utilizados em formulações farmacêuticas de libertação controlada contendo como ingrediente ativo um ou mais compostos ativos, nas quais a libertação do ingrediente ativo é controlada e regulada para permitir uma dosagem menos frequente ou para melhorar o perfil farmacocinético ou de toxicidade de um dado composto. Em geral, os compostos são administrados a partir de sistemas de libertação controlada tais como o implante intravitreo do documento WO 92/14450 ou na Patente U.S. 5.098.443, ou as matrizes da Patente U.S. 4.740.365 ou da Patente U.S. 5.141.752. Muitos outros são conhecidos e são adequados para utilização aqui.

As vias adequadas para administração incluem oral, retal, nasal, tópica (incluindo ocular, bucal e sublingual), vaginal e parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravitrea, intravenosa, intradérmica, intratecal e epidural). A via de administração preferida dependerá da condição do paciente, da toxicidade do composto e do sítio de infeção, entre outras considerações conhecidas para o clínico.

Para cada uma das indicações terapêuticas acima indicadas a quantidade requerida de um ingrediente ativo (como acima definida) dependerá de um número de fatores incluindo se a utilização é antitumoral ou antiviral, a gravidade da condição a ser tratada, o agente infeccioso, ou se a utilização é profilática ou para tratar uma infeção aguda, do sitio de infeção ou tumor (por exemplo, a retinite por CMV é tratada sistemicamente ou por injeção intravitrea, ou no tratamento de HHV-6 em pacientes com esclerose múltipla, opcionalmente por administração intratecal) e outros fatores, em última análise, a critério do médico ou veterinário responsável. Em geral, no entanto, uma dose adequada para apreciação pelo clínico estará no intervalo de metoxifosfonatos análogos (ver acima), tendo 22 ΕΡ2245037Β1 em conta diferenças na potência, geralmente 0,1 a 250 mg por quilograma de peso corporal do recetor por dose (incluindo o (s) ingrediente(s) ativo(s) num intervalo entre 0,1 mg e 250 mg/kg/dose em incrementos de 0,5 mg/kg/dose tal como 2,5 mg/kg/dose, 3, 0mg/kg/dose, 3, 5 mg/kg/dose, etc.), tipicamente no intervalo de 0,5 a 50 mg por quilograma de peso corporal por dose e mais normalmente no intervalo de 1 a 15 mg por quilograma de peso corporal por dose. A dose desejada é administrada em intervalos apropriados em formas farmacêuticas unitárias, normalmente com uma dose de indução relativamente maior e doses de manutenção menores, menos frequentes. No caso de infeções virais, os compostos são também utilizados profilaticamente, por exemplo, por administração de cerca de 1 a 7 dias antes da infeção virai. Os tumores ou crescimentos e lesões de herpes por HPV frequentemente são tratadas topicamente, ou por injeção local ou por géis tópicos, pomadas ou semelhantes.

Os compostos da invenção são opcionalmente empregues em combinação com um, dois, ou mais de outros agentes terapêuticos para o tratamento ou profilaxia das infeções ou tumores acima indicados. Os exemplos de tais agentes terapêuticos adicionais incluem agentes que são eficazes para o tratamento ou profilaxia de infeções virais ou para o tratamento de tumores e condições relacionadas.

Outros agentes terapêuticos incluem 3' -azido-3'-deoxitimidina (zidovudina, AZT) , 2'-deoxi-3'-tiacitidina (3TC), 2', 3' -dideoxi-2', 3' -didehidroadenosina (D4A), carbocíclica), 5-fluorotimidina, (BVDU), 2',3'-dideoxi-2',3'-didehidrotimidina (D4T), carbovir (2' ,3'-dideoxi-2',3'-didehidroguanosina 3' -azido-2',3'-dideoxiuridina, (E)-5-(2-bromovinil)-2'-deoxiuridina 2-cloro-2'-deoxiadenosina, 2-deoxicoformicina, 5-fluorouracilo, 5-fluorouridina, 5-fluoro-2'-deoxiuridina, 5-trifluorometil-2'-deoxiuridina, 6-azauridina, ácido 23 ΕΡ2245037Β1 5-fluoroorótico, metotrexato, triacetiluridina, 1-(2' -deoxi-2' -fluoro-l-beta-D-arabinosil)-5-iodocitidina (FIAC) , tetrahidroimidazo(4,5,1-jk)-(1,4)-benzodiazepin-2(1H)-tiona (TIBO), 2'-nor-cíclicoGMP, 6-metoxipurina arabinosídeo (ara-M), 2'-O-valerato de 6-metoxopurina arabinosídeo, citosina arabinosídeo (ara-C), 2',3'-dideoxinucleósidos tais como 2',3'-dideoxicitidina (ddC), 2',3'-dideoxiadenosina (ddA) e 2', 3'-dideoxilnosina (ddl) , nucleósidos aciclicos tais como aciclovir, valaciclovir, penciclovir, famciclovir, ganciclovir, nucleótidos aciclicos tais como HPMPC, PMEA, PMEG, PMPA, PMPDAP, FPMPA, HPMPA e HPMPDAP, (2R,5R)-9-[tetrahidro-5-(fosfonometoxi)-2-furanil]adenina, (2R,5R)-1-[tetrahidro-5-(fosfonometoxi)-2-furanil]timina, outros antivirais incluindo ribavirina (adenina arabinosídeo), 2-tio-6-azauridina, tubercidina, ácido aurintricarboxílico, 3-deazaneoplanocina, neoplanocina, rimantidina, adamantina, e foscarnet (fosfonoformato trisódico), citoquinas incluindo TNF e TGF-beta, interferões incluindo IFN-alfa, IFN-beta e IFN-gama, interleucinas incluindo interleucina 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, fatores de estimulação de colónias de macrófagos/granulócitos incluindo GM-CSF, G-CSF, M-CSF, antagonistas das citoquinas incluindo anticorpos anti-TNF, anticorpos anti-interleucina, recetores de interleucina solúveis, inibidores da proteína cinase C e, particularmente no tratamento de HIV, co-terapêutica com IFN-alfa, IL-2 ou IL-12.

Adicionalmente, outros agentes terapêuticos são agentes antitumorais/cancerígenos que são selecionados a partir de antineoplásticos incluindo, por exemplo, adjuvantes (por exemplo, levamisol, nitrato de gálio, granisetron, sargramostim, cloreto de estrôncio-89, filgrastim, pilocarpina, dexrazoxano, e ondansetron); inibidores de andrógenos (por exemplo, flutamida e acetato de leuprolida); derivados de antibióticos (por exemplo, doxorrubicina, sulfato 24 ΕΡ2245037Β1 de bleomicina, daunorrubicina, dactinomicina, e idarrubicina); anti-estrogénios (por exemplo, citrato de tamoxifeno, análogos do mesmo, e anti-estrogénios não esteróides tais como toremifeno, droloxifeno e roloxifeno); anti-metabolitos (por exemplo, fosfato de fludarabina, interferão alta-2b recombinante, metotrexato sódico, plicamicina, mercaptopurina, e tioguanina); agentes citotóxicos (por exemplo, doxorrubicina, carmustina [BCNU], lomustina [CCNU], citarabina USP, ciclofosfamida, fosfato sódico de estramutina, altretamina, hidroxiureia, ifosfamida, procarbazina, mitomicina, bussulfano, ciclofosfamida, mitoxantrona, carboplatina, cisplatina, interferão alfa-2a recombinante; paclitaxel, teniposide, e estreptozocina); hormonas (por exemplo, acetato de medroxiprogesterona, estradiol, acetato de megestrol, acetato de octreotido, difosfato de dietilestilbestrol, testolactona, e acetato de goserelina); imunomoduladores (por exemplo, aldesleucina); derivados de mostarda nitrogenada (por exemplo, melfalano, clorambucilo, mecloretamina, e tiotepa) e esteróides (fosfato sódico de betametasona e acetato de betametasona) e semelhantes.

Outros agentes terapêuticos adicionais incluem os seguintes agentes anticancerigenos: abarelix (Plenaxis depot®); aldesleucina (Prokine®); aldesleucina (Proleukin®); Alemtuzumab (Campath®); alitretinoina (Panretin®); alopurinol (Zyloprim®); altretamina (Hexalen®); amifostina (Ethyol®); anastrozol (Arimidex®); trióxido de arsénio (Trisenox®); asparaginase (Elspar®); azacitidina (Vidaza®); bevacuzimab (Avastin®); cápsulas de bexaroteno (Targretin®); gel de bexaroteno (Targretin®); bleomicina (Blenoxane®); bortezomib (Velcade®); bussulfano intravenoso (Busulfex®); bussulfano oral (Myleran®); calusterona (Methosarb®); capecitabina (Xeloda®); carboplatina (Paraplatin®); carmustina (BCNU®, BiCNU®); carmustina (Gliadel®); carmustina com implante de polifeprosano 20 (Gliadel Wafer®); celecoxib (Celebrex®); 25 ΕΡ2245037Β1 cetuximab (Erbitux®); clorambucilo (Leukeran®); cisplatina (Platinol®); cladribina (Leustatin®, 2-CdA®); clofarabina (Clolar®); ciclofosfamida (Cytoxan®, Neosar®); ciclofosfamida (Cytoxan Injection®); ciclofosfamida (Cytoxan Table®) ; citarabina (Cytosar-U®) ; citarabina lipossomal (DepoCyt®); dacarbazina (DTIC-Dome®), dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen®); darbepoetina alfa (Aranesp®); daunorrubicina lipossomal (DanuoXome®); daunorrubicina, daunomicina (Daunorubicin®); daunorrubicina, daunomicina (Cerubidine®); diftitox denileucina (Ontak®); dexrazoxano (Zinecard®); docetaxel (Taxotere®); doxorrubicina (Adriamycin PFS®); doxorrubicina (Adriamycin®, Rubex®); doxorrubicina (Adriamycin PFS Injection®); doxorrubicina lipossomal (Doxil®); propionato de dronstanolona (dromostanolone®); propionato de drostanolona (masterone injection®); Solução de Elliott B (Elliott's B Solution®); epirrubicina (Ellence®); Epoetina alfa (epogen®); erlotinib (Tarceva®); estramustina (Emcyl®); fosfato de etoposido (Etopophos®); etoposido, VP-16 (Vepesid®); exemestano (Aromasin®); filgrastim (Neupogen®); floxuridina (intra-arterial) (FUDR®); fludarabina (Fludara®); fluorouracilo, 5-FU (Adrucil®); fulvestrant (Faslodex®); gefitinib (Iressa®); gemcitabina (Gemzar®); gemtuzumab ozogamicina (Mylotarg®); acetato de goserelina (Zoladex Implant®); acetato de goserelina (Zoladex®); acetato de histrelina (Histrelin implant®); hidroxiureia (hydrea®); Ibritumomab tiuxetano (Zevalin®); idarrubicina (Idamycin®); ifosfamida (IFEX®); mesilato de imatinib (Gleevec®); interferão alfa-2a (Roferon A®); interferão alfa-2b (Intron A®) ; irinotecano (Camptosar®); lenalidomida (Revlimid®); letrozol (Femara®); leucovorina (Wellcovorin®, Leucovorin®); acetato de leuprorrelina (Eligard®); levamisol (Ergamisol®); lomustina-CCNU (CeeBU®); mecloretamina, mostarda nitrogenada (Mustargen®); acetato de megestrol (Megace®); melfalano, L-PAM (Alkeran®); mercaptopurina, 6-MP (Purinethol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex tabs®) ; metotrexato (Methotrexate®); 26 ΕΡ2245037Β1 metoxsaleno (Uvadex®); mitomicina C (Mutamycin®); mitotano (Lysodren®); mitoxantrona (Novantrone®); fenpropionato de nandrolona (Durabolin-50®); nelarabina (Arranon®); nofetumomab (Verluma®); oprelvekin (Neumega®); oxaliplatina (Eloxatin®); paclitaxel (Paxene®); paclitaxel (Taxol®); partículas de paclitaxel ligadas a proteínas (Abraxane®); palifermin (Kepivance®); pamidronato (Aredia®) ; pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargase (Oncaspar®); pegfilgrastim (Neulasta®); pemetrexedo dissódico (Alimta®); pentostatina (Nipent®); pipobromano (Vercyte®); plicamicina, mitramicina (Mithracin®); porfímero sódico (Photofrin®); procarbazina (Matulane®); quinacrina (Atabrine®); rasburicase (Elitek®); rituximab (Rituxan®); sargramostim (Leukine®); sargramostim (Prokine®); sorafenib (Nexavar®); estreptozocina (Zanosar®); maleato de sunitinib (Sutent®); talco (Sclerosol®); tamoxifeno (Nolvadex®); temozolomida (Temodar®); teniposide, VM-26 (Vumon®); testolactona (Teslac®); tioguanina, 6-TG (Thioguanine®); tiotepa (Thioplex®); topotecano (Hycamtin®); toremifeno (Fareston®); Tositumomab (Bexxar®); Tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®); Trastuzumab (Herceptin®); tretinoína, ATRA (Vesanoid®); uramustina (Uracil Mustard Capsules®); valrubicina (Valstar®); vinblastina (Velban®); vincristina (Oncovin®); vinorelbina (Navelbine®); e zoledronato (Zometa®).

Além disso, as combinações como descritas acima podem ser administradas a um sujeito através de administração (utilização) simultânea, separada ou sequencial. A administração (utilização) simultânea pode ter lugar na forma de uma combinação fixa com dois ou mais ingredientes ativos, ou administrando simultaneamente dois ou mais compostos que são formulados independentemente. A administração (utilização) sequencial significa preferivelmente a administração de um (ou mais) compostos ou ingredientes ativos de uma combinação num ponto temporal, outros compostos ou ingredientes ativos num 27 ΕΡ2245037Β1 ponto temporal diferente, isto é, numa forma escalonada cronicamente, preferivelmente de tal modo que a combinação mostra mais eficácia que os compostos isolados administrados independentemente (mostrando especialmente sinergismo). A administração (utilização) separada significa preferivelmente a administração dos compostos ou ingredientes ativos da combinação independentemente uns dos outros em diferentes pontos temporais, significando preferivelmente que dois compostos são administrados de tal modo que não há sobreposição dos niveis sanguíneos mensuráveis de ambos os compostos presentes de uma forma sobreponível (ao mesmo tempo).

Na medida em que qualquer composto desta invenção não pode ser produzido/sintetizado pelos métodos análogos àqueles estabelecidos nos exemplos abaixo, outros métodos serão evidentes para o especialista. Veja-se, por exemplo, Liotta et al. "Compendium of Organic Synthesis Methods" (John Wiley & Sons, Nova York), Vol. 1, lan T. Harrison e Shuyen Harrison, 1971; Vol. 2, lan T. Harrison e Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus e Leroy Wade, 1977: Vol. 4, Leroy G. Wade, Jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; e Vol. 6, Michael B. Smith; Março, J., "Advanced Organic Chemistry, Terceira Edição", (John Wiley & Sons, Nova York, 1985); bem como "Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. In 9 Volumes", Barry M. Trost, Editor-in-Chief (Pergamon Press, Nova York, impressão de 1993). A síntese dos derivados de 6-alcoxipurina desta invenção é convenientemente alcançada pelo deslocamento de um grupo de saída na posição 6 com o ácido fosfónico protegido de um modo adequado.

28 ΕΡ2245037Β1

Assim, aquecendo um éster dialquílico de ácido [2-(2-amino-6-halo-purin-9-il)-etoximetil]-fosfónico tal como aquele descrito no pedido de patente WO2005/066189 juntamente com um álcool adequado na presença de uma base tipicamente utilizada para gerar o alcóxido, tal como hidreto de sódio, hexametildisilazida de sódio, carbonato de césio, ou t-butóxido de potássio, opcionalmente num solvente tal como tetrahidrofurano, dimetoxietano ou dimetilformamida, fornece o intermediário de 6-alcoxipurina desejado. Esta transformação pode ser facilitada por irradiação de micro-ondas. A remoção dos grupos de proteção do ácido fosfónico é convenientemente alcançada, neste caso, por desalquilação com um reagente tal como bromotrimetilsilano ou iodotrimetilsilano, opcionalmente na presença de um sequestrante de ácido e catião tal como um derivado de lutidina e/ou um solvente aprótico, a temperaturas tipicamente, mas não necessariamente, ambiente baixas. Será evidente para o especialista que outros grupos de proteção do ácido fosfónico tais como (mas não limitado a) ésteres de benzilo ou p-metoxibenzilo podem também ser úteis para este fim, sendo removidos por métodos típicos tais como hidrogenação ou tratamento com agente oxidantes ou ácidos fortes.

As diamidas fosfónicas desta invenção são tipicamente geradas por ativação dos ácidos fosfónicos correspondentes com um reagente de acoplamento, seguido pela condensação com o nucleófilo de amina desejado.

Os reagentes de acoplamento adequados incluem aqueles frequentemente utilizados na formação de ligações peptídicas tais como diciclohexilcarbodiimida ou PyBOP, bem como dissulfureto de 2,2'-dipiridilo em combinação com trifenilfosfina, na presença de uma base orgânica tal como uma trialquilamina, piridina ou lutidina e opcionalmente num 29 ΕΡ2245037Β1 solvente inerte tal como DMF. A reação pode ser facilitada pelo aquecimento numa atmosfera inerte.

Estes métodos são também úteis para a síntese de monoamidas de monoariléster de ácido fosfónico desta invenção. Estas são convenientemente obtidas sob condições semelhantes, mas com a adição do álcool desejado para formar a ligação éster. Alternativamente, são acessíveis a partir do diéster de ácido fosfónico necessário, seguindo-se saponificação para o monoéster por tratamento com um reagente, tal como um hidróxido de metal alcalino num solvente etéreo, tal como THF; o monoéster é submetido às condições de acoplamento descritas acima para formar a fosfonamida desejada.

Os diésteres de ácido fosfónico desta invenção podem ser sintetizados por alquilação dos ácidos fosfónicos correspondentes.

Exemplos

Uma cromatografia em sílica gel foi realizada utilizando sistemas de cromatograf ia Teledyne ISCO e colunas de 12 g, com diclorometano e metanol a 50% em diclorometano como solventes A e B, respetivamente. A eluição por gradiente típica foi de 0% a 30% de B durante volumes de 55 colunas, mas variou ligeiramente para otimizar cada separação individual.

Uma cromatografia por HPLC analítica foi realizada utilizando um Phenomenex Gemini 5μΜ Cis com coluna de 4,6 x 50 mm, com acetonitrilo a 1%/ácido fórmico a 0,05% em água como solvente A e 1% água/ácido fórmico a 0,05% em acetonitrilo como solvente B. A eluição por gradiente foi de 5% a 100% de B em 2,5 minutos, com 1 minuto adicional em 100% de B para um tempo total de execução de 3,5 minutos. Os dados da MS foram recolhidos usando ionização por eletropulverização (ESI) num detetor ThermoFinnigan.

Uma cromatografia por HPLC preparativa foi realizada utilizando um Phenomenex Synergi 4μΜ Hydro Combi-HTS com coluna 30 ΕΡ2245037Β1 de 30 x 150 mm, com água como solvente A e acetonitrilo como solvente B. A eluição por gradiente típica foi de 2% a 80% de B durante 20 minutos, mas variou ligeiramente para otimizar cada separação individual.

Exemplo 1 Ácido

[[2-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)etoxi]metil]-fosfónico, bis(1-metiletil)éster, foi preparado como descrito na patente W02005/066189.

Uma alíquota de n-propanol (7 ml, 93 mmol) foi purgada com N2 e, em seguida, arrefecida num banho de gelo/água até 0 °C. Hexametildisilazida de sódio (como solução THF a 1,0 M, 8 ml, 8 mmol, 5 eq.) foi adicionada gota-a-gota e a solução foi depois agitada 30 minutos. Esta solução foi, em seguida, adicionada a um frasco de micro-ondas de 20 ml contendo ácido fosfónico, P-[[2-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)etoxi]metil]-, bis (1-metiletil)éster I (625 mg, 1,6 mmol, 1 eq.), e a mistura foi aquecida por microondas até 140 °C durante 20 minutos. A mistura foi depois purgada num balão, evaporada a um sólido, e deixada em vácuo elevado durante a noite. Diclorometano e acetonitrilo (8 ml de cada) foram depois adicionados ao balão, e a mistura de reação foi novamente arrefecida num banho de gelo/água até 0 °C. 2,6-Lutidina (3,7 ml, 32 mmol, 20 eq.) foi adicionada ao balão, e em seguida bromotrimetilsilano (3,1 ml, 24 mmol, 15 eq.) foi adicionado gota-a-gota. O banho de gelo foi removido após a adição estar concluída, e a reação foi 31 ΕΡ2245037Β1 agitada durante a noite. A reação foi depois saciada pela adição lenta de metanol (30 ml) com 1 hora de agitação. A solução foi evaporada a um sólido e re-dissolvida em água (8 ml) . (1) foi isolado a partir desta solução por HPLC de fase reversa como um sólido branco (318 mg, 0,96 mmol, 60%). 1H RMN (300MHz, CD3OD) d =8,20 (s, 1H), 4,48 (t, J=6,7 Hz, 2H) , 4,36 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,91 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,70 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 1,87 (m, 2H) , 1,07 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 16,47. LC/MS: r.t. = 1,48 min (3,5 min execução), massa = 332 (M+l).

Exemplos 2 e 3: (2)-(3) foram preparados pelo mesmo método que (1) utilizando o álcool de iniciação apropriado. Ácido [2-(2-amino-6-metoxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfónico (2)

(2) , -_η ^ , to) como um sólido branco (376 A HPLC de fase reversa deu mg, 1,2 4 mmol, 77%) . i η o 05 (s, 1H) , 4,32 (t, J=5,05 3H RMN (300 MHz, CD30D) d = ° ' u v t = 5,05 Hz, 2H) , 3,64 (d, J Hz, 2H) , 4,06 (s, 3H) , 3,90 (t, J ' '' ' = 8,9 Hz, 2H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d l5'43* t n / i\/r o +. η ,1 /-3 5 min execução), massa = 304 LC/MS: r.t. = 1,21 mm (M+l) . 32 ΕΡ2245037Β1 Ácido _ . . _ .„_9-il)-etoximetil]-fosfónico [2-(2-amino-6-1sopropoxi-purin-* (3)

(3) A HPLC de fase reversa deu (3) como um sólido branco (202 1H) , 4,48 (t, J = 6, 7 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 1,07 (t, J = 7,5 Hz, mg, 0,61 mmolí 38%). ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) d = 8,20 (s,

Hz, 2H) , 4,36 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,91 3,70 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 1,87 (m, 2H) , 3H) . 31P RMN (35 MHz, CD3OD) d 16,47. LC/MS = 332 (M+l).

Exemplo 4 Ácido

P-[[2-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)etoxi]metil]~ r bis(1-metiletil)éster (727 mg, 1,86 mmol, 1 eq.) e carbonato de césio (1,21 g, 3,72 mmol, 2 eq.) foram pesados num balão pequeno e purgados com N2. 1,2-Dimetoxietano (8 ml) e 33 ΕΡ2245037Β1 n-propanol (0,68 ml, 7,44 mmol, 4 eq.) foram, em seguida, adicionados, e a mistura foi agitada durante 10 minutos. Tert-butóxido de potássio (como solução a 1,0 M em tetrahidrofurano, 2,05 ml, 2,05 mmol, 1,1 eq.) foi depois adicionado gota-a-gota. A reação foi agitada 2,5 horas à temperatura ambiente e, em seguida, concentrada a um sólido. A seguir à suspensão em diclorometano, os sólidos foram removidos por filtração. A concentração do filtrado produziu um óleo amarelo a partir do qual o produto foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 12% em diclorometano) como um óleo claro (616 mg, 1,435 mmol, 77%). Este foi então dissolvido em diclorometano (8 ml) sob uma atmosfera de N2, e o balão de reação foi arrefecido num banho de gelo/água até 0 °C. 2,6-Lutidina (3,7 ml, 32 mmol, 20 eq.) foi adicionada, e em seguida bromotrimetilsilano (3,1 ml, 24 mmol, 15 eq.) foi adicionado gota-a-gota. O banho de gelo foi removido após a adição estar concluída, e a reação foi agitada durante a noite. A reação foi depois saciada pela adição lenta de metanol (30 ml) com 1 hora de agitação. A solução foi depois evaporada e o resíduo foi re-dissolvido em água (8 ml) . O composto (4) foi isolado a partir desta solução por HPLC de fase reversa como um sólido branco (399 mg, 1,16 mmol, 62%) . ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD) d=8,35 (s, 1H) , 4,55 (t, J=6,0 Hz, 2H) , 4,40 (sl, 2H) , 3,93 (sl, 2H) , 3,73 (d, J= 9,1 Hz, 2H) , 1,83 (m, 2H) , 1,54 (m, 2H) , 1,01 (t, J = 7,35 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 17,19. LC/MS: r.t. = 1,67 min (3,5 min execução), massa = 346 (M+l).

Exemplos 5-11 (5)-(12) foram preparados pelo mesmo método que (4), utilizando o álcool de iniciação apropriado. 34 ΕΡ2245037Β1 Ácido [2-(2-amino-6-etoxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfónico

(5) A HPLC de fase reversa deu (5) como um sólido branco (306 mg, 0,965 mmol, 78%) • ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD ) d = 7, 98 (s, 1H) , , 4, 54 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 4,30 (t, J = = 4,9 Hz, 2H), 3,88 (t, J = = 4,9 Hz, 2H) , 3,59 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 1,43 (t, J = 7,2 Hz, 3H) . 3 lp RMN (75 MHz, CD3OD) d 14,69. LC/MS: r.t. = 0,82 min (3,5 min execução), massa = 318 (M+l) . Ácido [2-(2-amino-6-ciclohexiloxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfóni co (6)

(6) A HPLC de fase reversa deu (6) como um sólido acastanhado (306 mg, 0, 965 mmol, 78% ) · TH RMN (30 0 MHz, cd3 OD) d = 8, 67 (s, 1H), 5,38 (m, 1H) 4,45 (t, J = 4, 7 Hz, 2H) , 3, 96 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,76 (d. <q 11 co , 9 Hz, 2H) , 2 ,06 (lm, 2H) , 1 ,84 (lm, 2H), 1, 65 (m, 3H) 1,4. 35 ΕΡ2245037Β1 (m, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 17,94. LC/MS: r.t. = 1,52 min (3,5 min execução), massa = 372 (M+l) . Ácido [2-(2-amino-6-pentiloxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfónico

(7) A HPLC de fase reversa deu (7) como um sólido branco (164 mg, 0,457 mmol, 47% ) · 3H RMN (300 MHz , cd3 OD) d = = 8, 17 (s, 1H) , 4,51 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 4,3 <6 (t , J = 4, 8 Hz, 2H) , 3,91 (t, J = 4, 9 Hz, 2H), 3, 69 (d, J = 9,1 Hz, 2H) , 1, 84 (m, 2H), 1, 45 (m, 4H) , 0, 953 (t, J = 7,2 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz , CD 3OD) d 16, , 36. LC/MS: r.t. = 1,57 min (3,5 min execução), massa = 360 (M+l) . 36 ΕΡ2245037Β1 Ácido [2-(2-amino-6-ciclopropoxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfónic o (8)

(8) A HPLC de fase reversa deu (8) como um sólido branco (315 mg, 0, 957 mmol, 47%) . 3Η RMN (300 MHz, CD3OD) d = 8,02 (s, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,31 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,89 (t, J = 5,0 Hz, 2H) , 3,62 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 0,84 (s, 4H). 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 15,32. LC/MS: r.t. = 1,02 min (3,5 min execução), massa = 330 (M+l) . Ácido [2-(2-amino-6-ciclobutoxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfónico (9)

CR

(9) A HPLC de fase reversa deu o composto do Exemplo 9 como um sólido branco (253 mg, 0,738 mmol, 69%). 3H RMN (300 MHz, CD30D) d = 8, 14 (s, 1H) , 5,42 (m, 1H) 4,34 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 3,90 (t, J = 5,0 Hz, 2H) , 3,68 (d, J=8,9 Hz, 2H), 2,52 (m, 2H), 2,23 (m, 2H), 1,80 (m, 2H). 37 ΕΡ2245037Β1 31P RMN (75 ΜΗζ, CD3OD) d 16,22. LC/MS: r.t. = 1,29 min (3,5 min execução), massa = 344 (M+l) . 38 ΕΡ2245037Β1 Ácido [2-(2-amino-6-ciclopentiloxi-purin-9-il)-etoximetil]-fosfón ico (10)

A HPLC de fase reversa deu (10) como um sólido bege (319 mg, 0,738 mmol, 6 9%) . 3Η RMN (300 MHz, CD30D) d = 8,11 (s, 1H), 5,68 (m, 1H), 4,34 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,90 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 1,85 (lm, 8H) , 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 15,85. LC/MS: r.t. = 1,66 min (3,5 min execução), massa = 358 (M+l) . Ácido [2-(2-amino-6-(2-metoxi-etoxi)-purin-9-il)-etoximetil]-fosf ónico (11)

(11) A HPLC de fase reversa deu o composto do Exemplo 11 como um sólido branco (450 mg, 1,3 mmol, 62%). 3H RMN (300 MHz, CD3OD) d = 8,11 (s, 1H) , 4,63 (t, J = 4, 6 39 ΕΡ2245037Β1

Hz, 2H) , 4,33 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 3,91 (t, J = 5,0 Hz' 2H) ' 3,79 (t, J = 4,8 Hz, 2H) , 3,68 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 3,41 (s, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 16,01. LC/MS: r.t. = 1,03 min (3,5 min execução), massa 348 (M+l).

Exemplos 13 (Referência)

(1) (52 mg, 0,159 mmol, 1 eq.) e cloridrato de éster n-butilico de L-alanina (200 mg, 1,10 mmol, 7 eq. ) foram pesados num balão pequeno e purgados com N2. Piridina (1 ml) foi adicionada e a mistura foi aquecida até 60 °C com agitação. Uma solução de aldritiol-2 (243 mg, 1,10 mmol, 7 eq.), trifenilfosfina (289 mg, 1,10 mmol, 7 eq.) e trietilamina (265 ml, 1,90 mmol, 12 eq.) em 1 ml de piridina foi adicionada. A reação foi agitada a 60 °C sob N2 durante a noite. A reação foi, depois, concentrada a um sólido e deixada sob vácuo elevado durante 1 hora para remover a piridina residual. A cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) forneceu o produto desejado como um sólido amarelo (25 mg, 0, 042 mmol, 27%). 3H RMN (30 0 MHz, CD3OD) d=7,93 (s, 1H), 4,44 (t, J=6,6 Hz, 2H), 4,30 (m, 2H), 4,10 (m, 4H), 3,89 (m, 4H), 3,76 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 1,85 (m, 2H), 1,61 (m, 4H), 1,40, (m, 10H), 1,07 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 0,92 (m, 6H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23, 49. LC/MS: r.t. = 2,39 min (3,5 min execução), massa = 586 40 ΕΡ2245037Β1 (M+l) .

Os compostos (20) a (25) foram preparados 3 partir de (1) pelo mesmo método que (13) exceto para diferenças no reagente de acido aminado. "Mesmo método como aqui utilizado significa o mesmo procedimento geral, com ajustes apropriados ao reagente(s).

(20) O composto (20) foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido branco (80 mg, 0,113 mmol, 54%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDsO0^ d 7,82 1H^' 7,33 10H^' 5,09 (m, 4H) , 4,42 (t, J = 6,7 Hz' 2H) ' 4,21 (m' 4H) ' 3,6_3,9 (lm, 4H) , 2,9-3,2 (lm, 4H) , 2,05 (m' 2H) ' 1,Γ 6-1,9 (lm' 8H> ' 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) LC/MS: r.t = 2,34 min (M+l). d 23,26. (3,5 min execução), massa 706 41 ΕΡ2245037Β1

Exemplo 21

0 composto (21) foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido incolor, vítreo (43 mg, 0, 074 mmol, 36%) . 3Η RMN (300 MHz, CD3OD) d=7,89 (s, 1H) , 4,45 (t, J=6,6 Hz, 2H) , 4,31 (m, 2H) , 3,9-4,2 (lm, 8H) , 3,82 (m, 2H) , 3,0-3,3 (lm, 4H) , 2,11 (lm, 2H) , 1,7-1,95 (lm, 8H), 1,25 (m, 6H) , 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23,27. LC/MS: r.t = 1,90 min (3,5 min execução), massa = 582 (M+l) .

Exemplo 22

O composto (22) foi isolado por cromatografia em coluna (SiC>2, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido branco (68 mg, 0,123 mmol, 59%). 42 ΕΡ2245037Β1 TH RMN (300 ΜΗζ, CD3OD) d = 7,88 (s, 1H) , 4,45 (t, J=6,5 Hz, 2H) , 4,32 (m, 2H) , 4,21 (m, 1H) , 4,18 (m, 1H) , 3,99 (m, 1H) 3,76 (lm, 3H) , 3,66 (m, 6H) , 3, 08-3,24 (lm, 4H) , 2,09, (m, 2H) , 1,85 (lm, 8H) , 1,06 (t, J = 7,4 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23,34. LC/MS: r.t = 1,97 min (3,5 min execução), massa = 554 (M+l).

Exemplo 23

O composto (23) foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido acastanhado (52 mg, 0,085 mmol, 41%). XH RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7, 88 (s, 1H) , 4,45 (t, J = 6, 6 Hz, 2H), 4,26 (m, 3H) , 4,10 (m, 6H) , 3,88 (m, 3H) , 3,19 (m, 4H) , 2,11 (m, 2H) , 1,85 (lm, 8H) , 1,68 (m, 4H) , 1, 065 (t, J=7,4 Hz, 3H), 0,93 (m, 6H). 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23,28. LC/MS: r.t = 2,43 min (3,5 min execução), massa = 610 (M+l) . 43 ΕΡ2245037Β1

Exemplo 24 ΕΡ2245037Β1

0 composto (24) foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido branco (47 mg, 0,077 mmol, 37%). RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,89 (s, 1H) , 4,93 (m, 2H), 4,45 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 4,33 (lm, 2H) , 4,17 (lm, 1H) , 4,02 (m, 2H), 3,87 (m, 3H), 3,25 (lm, 4H), 2,11 (m, 2H), 1,84 (m, 8H) , 1,21 (m, 12H) , 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23,19. LC/MS · r t = 3, 56 min (6 min execução) , massa =610 (M+l) .

Exemplo 25 (26) . |gO O composto (25) fo1 em (Si02, MeOH a 0-15% acastanhado claro (75 mÇ/· XH RMN (300 MHz, CDs OD) d lado por cromatografia em coluna diclorometano) como um sólido 0 118 mmol, 57%). 7,88 (s, 1H), 4,45 (t, J = 6,7 44 ΕΡ2245037Β1

Hz, 2H) , 4,32 (m, 2H) , 4,21 (m, 1H) , 4,08 (m, 6H) , 3,87 (m, 3H) , 3,19 (m, 4H) , 2,07 (m, 2H) , 1,81 (lm, 9H) , 1,61 (m, 2H) , 1,38 (m, 5H) , 1,06 (t, J = 7,35 Hz, 3H) , 0,95 (m, 6H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23,31. LC/MS: r. t = 4,03 min (6 min execução) , massa = 638 (M+l) . Exemplo 2 6

(26) O composto (26) foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um óleo amarelo (8 mg, 0,012 mmol, 9%) . 3H RMN (300 MHz, CD3OD) d=7,88 (s, 1H), 4,45 (t, J=6,7 Hz, 2H) , 4,32 (m, 2H) , 4,21 (m, 1H) , 4,04 (m, 6H) , 3,90 (m, 3H) , 3,19 (m, 4H) , 2,11 (m, 2H) , 1,81 (lm, 8H) , 1,61 (lm, 4H) , 1,38 (m, 12H) , 1,07 (t, J = 7,35 Hz, 3H) , 0,91 (m, 6H) . 31P RMN (75 MHz, CD30D) d 23,35. LC/MS : r . t = 4,71 min ( 6 min execução) , massa = 6 94 (M+l) . 45 ΕΡ2245037Β1

Exemplo 40

0 composto (40) foi isolado por cromatografia em coluna (S1O2, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido esbranquiçado (70 mg, 0,113 mmol, 63%). 3Η RMN (300 MHz, CD3OD) d = 8,42 (s, 1H), 5,37 (m, 1H), 4,40 (m, 2H) , 4,12 (m, 6H) , 3,91 (m, 4H) , 3,23 (m, 2H) , 3,12 (m, 2H) , 2,11 (m, 4H) , 1,83 (m, 8H) , 1,65 (m, 3H) , 1,34 (m, 3H) , 1,24 (m, 6H) 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23,38. LC/MS: r.t = 2,07 min (3,5 min execução), massa = 622 (M+l) .

Exemplo 44

(44) O composto (44) foi isolado por cromatografia em coluna (SÍO2, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido amarelo pálido (61 mg, 0,105 mmol, 51%). 3H RMN (300 MHz, CD3OD) d = 8,60 (s, 1H) , 4,62 (m, 1H) , 4,43 (m, 2H), 4,11 (lm, 6H), 3,91 (m, 4H), 3,21 (m, 3H), 2,10 46 ΕΡ2245037Β1 (m, 3H), 1,80 (m, 6H), 1,23 (m, 6H), 0,87 (s, 4H). 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 23, 38, 24,49. LC/MS: r.t = 2,10 min (3,5 min execução), massa = 572 (M+l).

Exemplos 52 (Exemplo referência):

(52)

Acido [[2-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)etoxi]metil]-fosfónico, bis(1-metiletil)éster (78 mg, 0,239 mmol, 1 eq.), fenol (112 mg, 1,193 mmol, 5 eq.), e cloridrato de éster n-butilico de L-alanina (78 mg, 0,43 mmol, 1,8 eq.) foram pesados num balão pequeno e purgados com N2. Piridina (1 ml) foi adicionada e a reação foi aquecida até 60 °C com agitação. Uma solução de aldritiol-2 (368 mg, 1,67 mmol, 7 eq.), trifenilfosfina (438 mg, 1, 67 mmol, 7 eq. ) e trietilamina (400 pL, 2,86 mmol, 12 eq. ) em 1,5 ml de piridina foi adicionada. A reação foi agitada a 60 °C sob N2 durante a noite. A reação foi, depois, concentrada a um sólido e colocada sob vácuo elevado durante 1 hora para remover a piridina residual. A cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) forneceu o produto desejado como um sólido amarelo pálido (70 mg, 0,131 mmol, 55%). 3Η RMN (30 0 MHz, CD3OD) d=7,90 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,29 (m, 2H) , 7,16 (m, 1H) , 7,05 (m, 2H) , 4,44 (m, 2H) , 4,32 (m, 2H) , 4,04 (m, 3H) , 3,94 (m, 4H) , 1,86 (m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 1,35 (lm, 4H) , 1,23 (m, 2H) , 1,06 (t, J = 7,5Hz, 3H) , 0,92 (m, 3H) . 47 ΕΡ2245037Β1 31P RMN (75 ΜΗζ, CD3OD) d 22,885, 24,02 (diastereómeros) . LC/MS: r.t. = 2,18 min (3,5 min execução), massa = 535 (M+l) .

Os diastereómeros foram separados por HPLC quiral preparativa, utilizando uma coluna Chiral-Pak AS e fase móvel de metanol:etanol a 50:50. O isómero B (52b) (o primeiro isómero a eluir da coluna) foi isolado após a remoção do solvente como um sólido branco (7 0 mg) . 3H RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,88 (s, 1H), 7,28 (m, 2H), 7,15 (m, 1H) , 7,05 (m, 2H) , 4,44 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 4,32 (t, J = 5,0 Hz, 2H) , 4,05 (m, 3H) , 3,90 (m, 4H) , 1,86 (m, 2H) , 1,58 2H) , 1,35 (m, 4H), 1,23 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,06 (t, J Hz, 3H) , 0,91 (t, J = 7 , 3Hz, 3H) . 3 lp RMN i (75 MHz, CD3OD) d 24, 02 . LC/MS: r.t. = 2,18 min (3,5 min execução), massa = 535 (M+l) . O isómero A (52a) (o segundo isómero a eluir da coluna) foi isolado após a remoção do solvente como um sólido branco (65 mg). 3H RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,90 (s, 1H), 7,29 (m, 2H), 7,16 (m, 1H) , 7,05 (m, 2H) , 4,44 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 4,33 (t, J = 5,0 Hz, 2H) , 4,05 (m, 3H) , 3,94 (m, 4H) , 1,86 (m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 1,35 (m, 2H) , 1,23 (d, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 0,91 (t, J = 7,3 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 22,88. LC/MS: r.t. = 2,18 min (3,5 min execução), massa = 535 (M+l) . 48 ΕΡ2245037Β1Exemplo 56 H2f

ΐ5β) 0 composto (56) foi sintetizado de uma forma análoga ao Exemplo 52 e foi isolado por cromatografia em coluna (Si02, MeOH a 0-15% em diclorometano) como um sólido incolor vítreo (11 mg, 0,0185 mmol, 4%) . 3Η RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,88 (s, 1H), 7,33 (lm, 7H), 7,16 (m, 1H) , 7,03 (m, 2H) , 5,10 (m, 2H) , 4,43 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 4,32 (m, 3H), 4,05 (m, 1H), 3,85 (m, 4H), 3,07 (m, 2H), 2,03 (m, 1H) , 1,5 (m, 4H) , 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD3OD) d 21,84, 22,72 (diastereómeros) . LC/MS: r.t = 2,23 min (3,5 min execução), massa = 595 (M+l).

Exemplo 57

(57)

O composto (57) foi sintetizado de uma forma análoga ao Exemplo 52 e foi isolado por cromat ograf ia em coluna (Si02, MeOH 49 ΕΡ2245037Β1 a 0-15% em diclorometano) como um sólido incolor vítreo (10 mg, 0,019 mmolf 6%). iH RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,89 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,31 (m, 2H) , 7,17 (m, 1H) , 7,04 (m, 2H) , 4,44 (m, 2H) , 4,33 (m, 3H) , 4,12 (m, 3H) , 3,97 (m, 4H) , 3,10 (m, 2H) , 2,00 (m, 1H) , 1,85 (m, 6H) , 1,23 (m, 3H) , 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31p RMN (75 MHz, CD3OD) d 21,83, 22,79 (diastereómeros) . LC/MS: r.t = 2,00 min (3,5 min execução), massa = 533 (M+l).

Exemplo 62

Ba&e de Huninq PPha DIAD fJfctoroíTietano

(D

HCL

Cl

DfiSAP Base à& Hunírtg PySrOP díclorcrmetano

Trifenilfosfina (60 mg, 0,23 mmol, 1,25 eg.) foi pesada num balão pequeno e purgada com N2, em seguida dissolvida em 2 ml de diclorometano. Azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD, 46 mg, 0,23 mmol, 1,25 eq.) foi depois adicionado e em seguida foi adicionado cloridrato de éster etílico de L-prolina (165 mg, 0,92 mmol, 5 eq.) . N, N-diisopropileti lamina (200 uL, ~1,1 mmol, ~6 eq.) foi adicionada e a mistura de reação agitada 15 minutos. Ácido [[2-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)etoxi]metil]-fosfónico, bis (1-metiletil) éster (61 mg, 0,184 mmol, leq.) foi pesado num balão pequeno e purgado com N2. A mistura de reagentes foi, depois, adicionada rapidamente ao balão contendo ácido [[2-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)etoxi]metil]-fosfónico, bis(1-metiletil)éster e a reação foi agitada à temperatura ambiente sob N2 durante 2 horas. A reação foi então concentrada 50 ΕΡ2245037Β1 a um óleo, re-dissolvida em metanol, e o intermediário foi isolado a partir desta solução por HPLC de fase reversa como um sólido branco (30 mg, 0, 066 mmol, 36%) . P-clorofenol (17 mg, 0,132 mmol, 2 eq.), DMAP (4 mg, 0,033 mmol, 0,5 eq.) e PyBroP (62 mg, 0,132 mmol, 2 eq.) foram todos pesados no balão contendo o intermediário. Este balão foi purgado com N2 e em seguida 1 ml de diclorometano e N,N-diisopropiletilamina (69 uL, 0,396 mmol, 6 eq.) foram adicionados. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi então concentrada a um óleo, e re-dissolvida em metanol. O composto 62 foi isolado a partir desta solução por HPLC de fase reversa como um sólido branco (8 mg, 0,014 mmol, 8%). XH RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,89 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,30 (m, 2H) , 7,11 (m, 2H) , 4,44 (m, 2H) , 4,33 (m, 2H) , 4,13 (m, 3H) , 3,96 (m, 3H) , 3,17 (m, 2H) , 2,01 (m, 1H) , 1,86 (m, 6H) , 1,23 (m, 3H) , 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H) . 31P RMN (75 MHz, CD30D) d 22,33, 23, 31 (diastereómeros) . LC/MS : r . t = 2, 98 min ( 6 min execução) , massa = 568 (M+l) .

Exemplo 63

(63) 0 composto (63) foi preparado pelo mesmo método descrito no Exemplo 62 exceto que p-cianofenol foi substituído por p-clorofenol. 0 composto (63) foi isolado por HPLC de fase reversa como um sólido branco (31 mg, 0,056 mmol, 18%). 51 ΕΡ2245037Β1 ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD) d = 7,90 (d, J = 9 Hz, 1H) , 7,70 (d, J = 9 Hz, 2H) , 7,31 (m, 1H), 7,; 2 0 (m, 1H) , 4,44 (m, 2H) , 4,33 (m , 2H) , 4, 12 (m, 4H), 4,00 (m , 2H) , 3, 20 (m, 2H) , 2,02 (m, 1H) , 1,85 (m, 6H), 1,23 (m, 3H) , 1,06 (t, J = 7,5 : Hz, 3H) . 31P RMN (' 75 MHz, CD3OD) d 22 ,66, 23,72 (diastereómeros). LC/MS: r. t = 2, 98 min (6 min execução) , massa = 558 (M+l).

Exemplo 64

Ensaio Citostático em Cultura Célulares (GI50) 0 ensaio está baseado na quantificação de contagens celulares por uma deteção colorimétrica das proteínas associadas às células. 0 ensaio conta com a capacidade da sulforhodamina B (SRB) para se ligar a componentes proteicos de células que foram fixas a placas de cultura de tecidos por ácido tricloroacético (TCA) . A SRB é um corante de aminoxanteno rosa brilhante com dois grupos sulfónicos que se ligam a resíduos de aminoácidos básicos sob condições moderadamente ácidas, e dissociam-se sob condições básicas. Como a ligação de SRB é estequiométrica, a quantidade de corante extraída das células coradas é diretamente proporcional à massa celular.

Linhas celulares: Todas as linhas celulares foram obtidas de ATCC (Manassas, VA). 0 meio de cultivo contendo Glutamax, e tripsina foi comprado em Invitrogen (Carlsbad, CA). Doxorrubicina, clofarabina, TCA e SRB foram de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). A gemcitabina foi obtida de Moravek Biochemicals (Brea, CA) .

Protocolo do ensaio: 1. Mantenha as linhas celulares no meio listado na Tabela 1. Tripsinize as células sub-confluentes, conte-as, e ajuste as concentrações celulares de acordo com as contagens celulares listadas na Tabela 1. 2. Distribua as células nas placas de 96 poços em 150 μΐ de meio. Incube as placas durante a noite numa incubadora a C02 52 ΕΡ2245037Β1 humidificada a 37 °C. 3. Fixe uma placa de cada linha celular com TCA. Descarte o meio de cultura das placas sacudindo-as suavemente e adicione 100 ul de TCA a 10% (vol/vol) frio a cada poço. Incube as placas a 4 graus no frigorifico durante 1 hora. Descarte o TCA das placas sacudindo-as suavemente. Lave as placas quatro vezes numa bacia de lavagem contendo água da torneira. Armazene as placas à temperatura ambiente. Estas placas representam contagens celulares no dia zero. 4. Prepare um conjunto de soluções de meio contendo várias concentrações dos compostos testados fazendo 5 diluições seriadas por placa de 96 poços. Adicione 50 μΐ dos compostos diluídos por poço. Inclua controlos com células não tratadas e células tratadas com doxorrubicina, clofarabina e gemcitabina. 5. Incube as placas durante 5 dias a 37 °C. 6. Fixe as placas com TCA. Descarte o meio de cultura das placas sacudindo-as suavemente e adicione 100 ul de TCA a 10% (vol/vol) frio a cada poço. Incube as placas a 4 graus no frigorifico durante 1 hora. Descarte o TCA das placas sacudindo-as suavemente. Lave as placas quatro vezes numa bacia de lavagem contendo água da torneira. 7. Remova a água em excesso batendo suavemente nas placas viradas para baixo sobre uma toalha de papel. Permita que as placas sequem ao ar à temperatura ambiente. 8 . Adicione 100 ul de solução de SRB a 0, 057% em ácido acético a 1% (vol/vol) a cada poço das placas fixadas com TCA no dia zero e cinco. Deixe à temperatura ambiente durante 30 minutos. 9. Sacuda as placas suavemente para descartar a SRB. Lave as placas quatro vezes com ácido acético a 1% (vol/vol). 10. Armazene as placas a 37 graus numa incubadora para facilitar a secagem mais rápida. 11. Uma vez que as placas estão completamente secas, adicione 200 ul de solução base de Tris a 10 mM (pH 10,5) a cada poço. 53 ΕΡ2245037Β1

Deixe à temperatura ambiente durante 30 minutos para a SRB solubilizar. 12. Meça a OD a 500 nm num leitor de microplacas. 13. Calcule a percentagem de inibição do crescimento celular utilizando a seguinte fórmula: % de crecimento celular control = lOOx (ODamostra - ODdiao medio) / (ODcontrolo neg ODdiaO medi o)

Para a determinação de GI50, trace uma curva de dose-resposta entre a concentração do composto e a percentagem de inibição do crescimento. Os valores de GI50 podem ser derivados ajustando as curvas de dose-resposta utilizando uma equação de dose-resposta sigmoidal. LINHA CELULAR Meio Densidade de Sementeira Agente de Dissociação HCT 116 RPMI, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 800 células/poço Tripsina HCT 15 RPMI, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 1600 células/poço Tripsina BT549 RPMI, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 4000 células/poço Tryple Express (Invitrogen) HS 578 RPMI, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 4000 células/poço Tryple Express (Invitrogen) PC3 F12K, 10% FBS, IX Pen/Estrep 2500 células/poço Tripsina DU145 MEM, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 800 células/poço Tripsina H23 RPMI, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 6000 células/poço Tripsina A54 9 RPMI, FBS a 10%, IX Pen/Estrep 1500 células/poço Tripsina 54 ΕΡ2245037Β1 A tabela seguinte mostra que os compostos da presente invenção inibem 0 crescimento de células cancerígenas. GI50 (μΜ) Composto HCT-116 HCT-15 BT-549 Hs-57 8 PC3 Du-145 NC1-H23 A54 9 Exemplo 1 1,10 0,886 0,900 3, 81 1,10 0,076 0,287 1,24 Exemplo 2 5,9 4,65 4, 87 2,01 3,70 0,475 0,589 2,42 Exemplo 3 2,44 2,53 2,48 2,45 1,38 0, 177 0,551 2,98 Exemplo 4 3, 13 2,98 3,76 3,32 1,44 0,235 0,633 4,54 Exemplo 5 3,59 2,44 2,00 2,59 2,48 0,223 0,639 2,84 Exemplo 6 >10 13 17 11 3, 01 0,439 6, 0 >10 Exemplo 7 2,45 2,61 2,57 1,57 0,595 0, 101 0,596 3,36 Exemplo 8 5,4 4,14 2,71 3,34 2,83 0,536 0,675 2,82 Exemplo 9 1,72 1,22 1,55 1,55 0,955 0,077 0,359 1,83 Exemplo 10 1,79 2,38 2,99 2,26 1, 01 0,054 0,603 3, 06 Exemplo 11 11 >10 >10 5,1 3, 76 0,805 1,98 11 Exemplo 13 0,013 1,09 0, 061 0,105 0, 011 0,002 0,004 0,052 Exemplo 20 0,264 2,35 0, 167 0,132 0, 111 0,027 0,030 0,530 Exemplo 21 0,041 6,7 0,033 0, 017 0,026 0, 002 0, 002 0, 128 Exemplo 22 0, 194 >10 0, 116 0, 082 0,121 0, 035 0, 038 0, 640 Exemplo 23 0,028 2,47 0,007 0, 004 0,011 0, 001 0, 003 0,317 Exemplo 24 0,979 >10 0,386 0,452 0,634 0, 138 0, 124 3, 82 Exemplo 25 0,043 1,49 0, 015 0,008 0,016 0,002 0, 002 0,450 Exemplo 26 0,119 1,95 0,067 0,097 0,081 0,002 0,009 1,05 Exemplo 40 2,44 >10 1,78 0,276 0,109 0,074 0,252 8,8 Exemplo 44 0,154 9,1 0,016 0,026 0,183 0,003 0,227 1,25 Exemplo 56 1,93 3, 86 1,09 1,49 1,25 0,722 0,389 2,13 Exemplo 57 1,61 5,2 1, 12 1, 11 0,696 0,372 0,241 2,42 Exemplo 62 2,79 10,0 4,44 1,07 0,044 0,001 0,049 1,87 Exemplo 63 0,184 3,35 0,282 0,007 0,002 0,001 0,001 0,014

Ensaio de Citotoxicidade em Culturas Celulares (CC50) : 0 ensaio baseia-se na quantificação de números celulares através da medição dos níveis de ATP intracelulares. Luciferase recombinante Ultra-Glo na presença de ATP celular converte a luciferina de escaravelho em oxiluciferina e luminescência, 55 ΕΡ2245037Β1 que é proporcional ao número de células, é registada.

Materiais: a linha celular MT4 foi obtida de ATCC (Manassas, VA) . Meio de cultura, HEPES, e albumina sérica bovina foram comprados em Invitrogen (Carlsbad, CA) . As placas de cultura celular Nunc de 383 poços negras foram de VWR, e o ensaio Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability foi comprado em Promega.

Protocolo do ensaio para determinação de CC50: 1. Mantenha as células MT-4 em meio RPMI-1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%, Hepes a 10 mM e antibióticos. 2. Prepare um conjunto de soluções contendo várias concentrações dos inibidores testados fazendo 5 diluições seriadas por placa de 384 poços (20 μΐ/poço) em meio de cultura. Distribua as células na placa de 384 poços (2000 células em 20 μΐ/poço). Inclua amostras com células não tratadas como um controlo. 3. Incube as células durante 5 dias a 37 °C, C02 a 5% numa incubadora humidificada. 4. Prepare solução CellTiter Glo misturando substrato CellTiter-Glo com tampão CellTiter Glo no escuro. Adicione 40 μΐ da solução a cada poço. 5. Após 3 minutos de incubação, leia a quimiluminescência. 6. Trace a percentagem de luminescência relativa para o controlo não tratado e estime o valor de CC5o como a concentração do fármaco que resulta numa inibição de 50% do crescimento celular. Considere a luminescência como diretamente proporcional aos números celulares.

Os compostos (1)-(57) foram ensaiados e encontrou-se terem toxicidade aceitável e atividade contra as células tumorais.

Exemplo 65 O composto (21) foi avaliado para a eficácia num cão com linfoma não Hodgkin de ocorrência natural (NHL) . O NHL canino provou ser um modelo relevante para a avaliação pré-clinica de 56 ΕΡ2245037Β1 novos agentes terapêuticos, tanto para indução inicial como para o resgate em recidivas resistentes ao fármaco (Referência Vail DM, Thamm DH. Spontaneously occurring tumors in companion animais as models for drug development. Em: Teisher BA, ed. Anticancer Drug Development Guide. 2nd ed. Totowa (NJ) : Humana Press Inc; 2004; 259-286.) A avaliação de novas abordagens terapêuticas em cães com cancro espontâneo oferece potencial benefício para pacientes caninos e uma rápida apreciação do índice terapêutico. Porque os tumores surgem espontaneamente num hospedeiro imunologicamente intacto e têm muito mais heterogeneidade que as linhas celulares resultantes de várias passagens, não é surpreendente que as respostas a agente quimioterápicos padrão em doenças malignas caninas sejam semelhantes àquelas dos tumores correspondentes no Homem e que os resultados pré-clínicos atingidos possam ser mais preditivos da atividade em seres humanos (referências: Khanna C, Paoloni M. Translation of new câncer treatments from pet dogs tohumans. Nature Rev Câncer. 2008; 8:7-16.; Vail DM, Young KM. Canine lymphoma and lymphoid leukemia. Em: Withrow SJ, Vail DM, eds. Small Animal Clinicai Oncology. 4th Ed. St. Louis (MO): Saunders; 2007; p. 699-733.) O linfoma não Hodgkin em cães representa uma população relativamente homogénea com respeito ao tipo histológico como definido pelo REAL/WHO ou pelo esquema de Formulação de Trabalho do NCI (isto é, 85% são NHL de células B de médio a alto grau) com a maioria sendo linfoma de células B grande difuso (referência Jacobs RM, Messick JB, Valli VE. Tumors of the hemolymphatic system. Em: Meuten DJ. editor. Tumors in Domestic Animais. 4th Ed. Ames (IA) : Iowa State Press; 2002; 119-198.)

Os cancros em cães domésticos são caracterizados por crescimento tumoral durante longos períodos de tempo num cenário de um sistema imune intacto, heterogeneidade interindividual e intratumoral, desenvolvimento de doença recorrente ou resistente, e metástases a sítios relevantes distantes. Desta forma, os cancros de cães capturam a 57 ΕΡ2245037Β1 "essência" do problema do cancro humano de uma forma não possível com outros sistemas de modelos animais. Para muitos destes cancros, são vistas semelhanças forte com os cancros humanos, incluindo aparência histológica, genética tumoral, comportamento biológico e resposta a terapêuticas convencionais. 0 curso comprimido de progressão do cancro visto em cães permite a avaliação atempada de novas terapêuticas para o cancro. 0 composto (21) foi administrado numa dose de 0,3 mg/kg de peso corporal por infusão IV durante 30 minutos em injeção de soro fisiológico estéril (cloreto de sódio a 0, 9% para injeção) (volume total 2 ml/kg ou 100 ml) uma vez cada 21 dias a um cão que tinha linfoma não Hodgkin envolvendo múltiplos linfonodos. O diagnóstico foi confirmado por avaliação histológica do tumor. O efeito do tratamento no tumor foi medido utilizando as Diretrizes dos Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (RECIST) (Therasse et al., 2000) . O tamanho dos tumores e resposta ao tratamento foram avaliados nestes linfonodos perifericamente acessíveis, medindo a maior dimensão utilizando calibres e avaliando as alterações nas medidas individuais dos tumores e nas suas somas. A resposta ao tratamento é mostrada por uma redução significativa no tamanho tumoral iniciada no Dia 7 após o primeiro tratamento e continuando com melhorias continuadas até ao dia 42. A redução no tamanho tumoral, soma total de todos os tumores, foi caracterizada como uma Resposta Parcial (PR) se pelos menos uma diminuição de 30% na soma das LD das lesões alvo, tomando como referência a soma da linha de base, e como uma Resposta Completa (CR) se os linfonodos regressaram a um tamanho dentro dos limites normais. A confirmação foi feita por exame citológico de uma biopsia aspirada para confirmar a ausência de células tumorais. O tratamento com o composto (21) neste cão com linfoma não Hodgkin resultou numa Resposta Parcial após um tratamento e com tratamento continuado resultou numa Resposta Completa com 58 ΕΡ2245037Β1 ΕΡ2245037Β1 eliminação completa do tumor. Cão tratado com o composto (21) Tratamento #1 Tratamento 0,3 mg/kg #2 Tratamento #3 Dia 0 0,3 mg/kg 0,3 mg/kg Linfonodos Pré-tratamento Dia 1 Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 28 Dia 42 L SMLN 3,1 2,0 1,1 1,0 2,3 1,5 WNL** R SMLN 2,9 3,1 1,0 1,0 2,0 1,0 WNL L PSLN 5,0 3,9 1,0 1,2 2,8 1,5 WNL R PSLN 3,6 3,6 1,0 1,0 2,7 1,5 WNL L PopLN 2,3 2,1 1,6 1,0 1,3 WNL Soma (cm) 16, 9 14,7 5,7 5,2 11,1 5, 5 Alteração -2,2 -11, 2 -11, 7 -5, 8 -11,4 % de Alteração -13,0 -66, 3 -69,2 -34,3 -67,5 -100% Resposta SD PR PR PR PR CR ** WNL refere-se a quando um linfonodo é diminuido para um tamanho considerado dentro dos intervalos normais para aquele linfonodo.

Abreviaturas ATCC DMF DMSO dt Et EDTA FAB gem HR i IR m m Me MeOH MeONa MS v RMN o

American Type Culture Colection dimetilformamida dimetilsulfóxido dupleto de tripletos etilo ácido etilenodiaminotetracético bombardeamento rápido de átomos geminai alta resolução ipso espectroscopia de infravermelho multipleto meta metilo metanol metóxido de sódio espectrometria de massa número de ondas ressonância magnética nuclear orto 59 ΕΡ2245037Β1

Ρ para Ph fenilo PPh3 trifenilfosfina Py piridilo pyrr pirrolilo q quarteto rei. relativo RT temperatura ambiente s singleto sat. saturado(a) sol. solução t tripleto TBS tert-butildimetilsililo td tripleto de dupletos TDA-1 tris[2-(2-metoxietoxi)etil]amina THF tetrahidrofurano TFA ácido trifluoroacético TPPTS trissulfonato de trifenilfosfina sódico Tr tritilo, trifenilmetilo vic vicinal HPLC cromatografia líquida de alta pressão FBS soro bovino fetal RPMI Royal Park Memorial Institute TCA ácido tricloroacético DIAD azaodicarboxilato de di-isopropilo PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitripirrolidinofosfónio DME dimetoxietano DCM diclorometano ACN acetonitrilo NaHNDS hexametildisilazida de sódio SRB sulforhodamina B 60 ΕΡ2245037Β1

REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para a conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento de Patente Europeia. Embora tenha sido tomado muito cuidado na compilação das referências, não se poderão excluir erros e omissões e o IEP nao assume qualquer responsabilidade neste sentido.

Documentos de Patente citados na descrição us 4659825 A [0001] us 4808716 A [0001] us 4724233 A [0001] us 5142051 A [0001] us 5302585 A [0001] us 5208221 A [0001] us 5352786 A [0001] us 5356896 A [0001] us 5663159 A [0001] us 5977061 A [0001] us 05459256 A [0001] EP 421819 A [0001] EP 434450 A [0001] EP 481214 A [0001] EP 468119 A [0001] EP 269947 A [0001] EP 630381 A [0001] EP 369409 A [0001] EP 454427 A [0001] EP 618214 A [0001] EP 398231 A [0001] WO 950792C ) A [0001] WO 27002808 AI [0001] WO 09526734 AI [0001] • WO 9403467 AI [0001] • WO 9507920 AI [0001] 61 ΕΡ2245037Β1 • WO 07002912 AI [0001] • WO 05066189 AI [0001] • WO 0208241 AI [0001] • CN 101066981 [0001] • WO 2007136650 A [0001] • WO 9214450 A [0060] • US 5098443 A [0060] • US 4740365 A [0060] • US 5141752 A [0060] • WO 2005066189 A [0071]

Literatura de não patentes citada na descrição • DALUGE et al. 34th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 04 October 1994 [0001] • CIHLAR et al. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1995, vol. 39 (1), 117-124 [0001] • HOLY et al. ACS Symp. Ser., 1989, vol. 401, 57-71 [0001] • HOLY. Kem. Ind., 1989, vol. 38 (10), 457-462 [0001] • NAESSENS et al. Biochem. Pharmacol., 15 July 1999, vol. 58 (2), 311-23 [0001] • VALERIANOVA et al. Anticancer Res., May 2001, vol. 21 (3B), 2057-64 [0001]

• PARKER WB ; SHADDIX SC ; ROSE LM ; PHAM PT ; HUA M ; VINCE R. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, April 2000, vol. 19 (4), 795-804 [0001]

• DALUGE SM ; GOOD SS ; FALETTO MB ; MILLER WH ; ST CLAIR

MH ; BOONE LR ; TISDALE M ; PARRY NR ; REARDON JE ; DORNSIFE RE. Antimicrob Agents Chemother, May 1997, vol. 41 (5), 1082-1093 [0001] • Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, 1985 [0016] • Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Printing

Company, 1990, 1289-1329 [0017] • Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Printing 62 ΕΡ2245037Β1

Company, 1990, 1289-1329 [0018] • Dorland's Illustrated Medicai Dictionary. W.B. Saunders Co, 1988 [0021] • LIOTTA et al. Compendium of Organic Synthesis Methods. John Wiley & Sons, 1971, vol. 1 [0069] • LAN T. HARRISON ; SHUYEN HARRISON. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1974, vol. 2 [0069] • LOUIS S. HEGEDUS ; LEROY WADE. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1977, vol. 3 [0069]

• LEROY G. WADE, JR. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1980, vol. 4 [0069]

• LEROY G. WADE, JR. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1984, vol. 5 [0069] • MICHAEL B. SMITH ; MARCH, J. Advanced Organic Chemistry.

John Wiley & Sons, 1985, vol. 6 [0069] • Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. Pergamon Press, 1993, vol. 9 [0069] • Spontaneously occurring tumors in companion animais as models for drug development. VAIL DM ; THAMM DH. Anticancer Drug Development Guide. Humana Press Inc, 2004, 259-286 [0231] • KHANNA C ; PAOLONI M. Translation of new câncer treatments from pet dogs to humans. Nature Rev Câncer., 2008, vol. 8, 7-16 [0231] • Canine lymphoma and lymphoid leukemia. VAIL DM ; YOUNG KM.

Small Animal Clinicai Oncology. Saunders, 2007, 699-733 [0231]

• Tumors of the hemolymphatic system. JACOBS RM ; MESSICK JB ; VALLI VE. Tumors in Domestic Animais. Iowa State Press, 2002, 119-198 [0231]

Lisboa, 15 de Outubro de 2014 63

Claims (14)

1. ΕΡ2245037Β1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de estrutura (5): h2n

   Rb (5) em que cada Rb é independentemente alquilo Ci-C8, ou alquenilo C2-C8, ou alquinilo C2-C8, ou arilo C6-Ci0-alquilo Ci-C4; R10 é alquilo Ci-C8, ou alquenilo C2-C8, ou alquinilo C2-C8, em que alquilo Ci~C8 é opcionalmente substituído por um grupo alcoxi Ci-C4; em que alquilo significa um hidrocarboneto saturado ramificado, normal ou cíclico; e sais terapeuticamente aceitáveis e/ou isómeros ópticos enriquecidos dos mesmos.
2. 2. Um composto da reivindicação 1, em que cada Rb é independentemente alquilo C1-C4, ou benzilo, R10 é alquilo Ci-C4; e sais terapeuticamente aceitáveis e/ou isómeros ópticos enriquecidos dos mesmos. 1 ΕΡ2245037Β1
3. 3. Um composto da reivindicação 1 selecionado a partir de

   2 ΕΡ2245037Β1

   ΕΡ2245037Β1

   e sais terapeuticamente aceitáveis e/ou isómeros ópticos enriquecidos dos mesmos. 4 ΕΡ2245037Β1 4. Um composto selecionado a partir de:

   e ΕΡ2245037Β1

   e sais terapeuticamente aceitáveis e/ou isómeros ópticos enriquecidos dos mesmos.
4. 5. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4.
5. 6. A composição farmacêutica da reivindicação 5 compreendendo ainda um segundo agente terapêutico selecionado a partir de um agente antiviral ou um agente antitumoral/cancerígeno.
6. 7. A composição farmacêutica da reivindicação 6, em que o agente antiviral é selecionado a partir de um grupo que consiste em 3'-azido-3'-deoxitimidina (zidovudina, AZT), 2'-deoxi-3'-tiacitidina (3TC), 2' , 3' -dideoxi-2',3'-didehidroadenosina (D4A), 2',3'-dideoxi-2',3'-didehidrotimidina (D4T), carbovir (2',3'-dideoxi-2',3'-didehidroguanosina carbocíclica), 3'-azido-2', 3'-dideoxiuridina, 5-fluorotimidina, (E)-5-(2-bromovinil)-2'-deoxiuridina (BVDU), 2-cloro-2'-deoxiadenosina, 2-deoxicoformicina, 5-fluorouracilo, 5-fluorouridina, 5-fluoro-2'-deoxiuridina, 6 ΕΡ2245037Β1 5-trifluorometil-2'-deoxiuridina, 6-azauridina, ácido 5-fluoroorótico, metotrexato, triacetiluridina, 1-(2'-deoxi-2'-fluoro-l-beta-D-arabinosil)-5-iodocitidina (FIAC) , tetrahidroimidazo(4,5,1-jk)-(1,4)-benzodiazepin-2(1H)-tiona (TIBO), 2'-nor-cíclicoGMP, 6-metoxipurina arabinosídeo (ara-M), 2'-O-valerato de 6-metoxopurina arabinosídeo, citosina arabinosídeo (ara-C), 2',3'-dideoxinucleósidos, nucleósidos acíclicos, nucleótidos acíclicos, ribavirina (adenina arabinosídeo), 2-tio-6-azauridina, tubercidina, ácido aurintricarboxílico, 3-deazaneoplanocina, neoplanocina, rimantidina, adamantina, foscarnet (fosfonoformato trisódico), citoquinas, interferões incluindo, interleucinas, fatores de estimulação de colónias de macrófagos/granulócitos, antagonistas das citoquinas, recetores de interleucina solúveis, e inibidores da proteína cinase C.
7. 8. A composição farmacêutica da reivindicação 6, em que o agente antitumoral/cancerigeno é selecionado a partir de um grupo que consiste em abarelix (Plenaxis depot®); aldesleucina (Prokine®); aldesleucina (Proleukin®); alemtuzumab (Campath®); alitretinoína (Panretin®); alopurinol (Zyloprim®); altretamina (Hexalen®); amifostina (Ethyol®); anastrozol (Arimidex®) ; trióxido de arsénio (Trisenox®); asparaginase (Elspar®); azacitidina (Vidaza®) ; bevacuzimab (Avastin®); cápsulas de bexaroteno (Targretin®); gel de bexaroteno (Targretin®); bleomicina (Blenoxane®); bortezomib (Velcade®); bussulfano intravenoso (Busulfex®); bussulfano oral (Myleran®); calusterona (Methosarb®); capecitabina (Xeloda®); carboplatina (Paraplatin®); carmustina (BCNU®, BiCNU®); carmustina (Gliadel®); carmustina com implante de polifeprosano 20 (Gliadel Wafer®); celecoxib (Celebrex®); cetuximab (Erbitux®); clorambucilo (Leukeran®); cisplatina (Platinol®); cladribina (Leustatin®, 2-CdA®); clofarabina 7 ΕΡ2245037Β1 (Clolar®); ciclofosfamida (Cytoxan®, Neosar®); ciclofosfamida (Cytoxan Injection®); ciclofosfamida (Cytoxan Tablet®); citarabina (Cytosar-U®); citarabina lipossomal (DepoCyt®); dacarbazina (DTIC-Dome®); dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen®); darbepoetina alfa (Aranesp®); daunorrubicina lipossomal (DanuoXome®); daunorrubicina, daunomicina (Daunorubicin®); daunorrubicina, daunomicina (Cerubidine®); diftitox denileucina (Ontak®); dexrazoxano (Zinecard®); docetaxel (Taxotere®); doxorrubicina (Adriamycin PFS®); doxorrubicina (Adriamycin®, Rubex®); doxorrubicina (Adriamycin PFS Injection®); doxorrubicina lipossomal (Doxil®); propionato de dronstanolona (dromostanolone®) ; propionato de drostanolona (masterone injection®); Solução de Elliott B (Elliott's B Solution®); epirrubicina (Ellence®); Epoetina alfa (epogen®); erlotinib (Tarceva®); estramustina (Emcyt®); fosfato de etoposido (Etopophos®); etoposido, VP-16 (Vepesid®); exemestano (Aromasin®); filgrastim (Neupogen®); floxuridina (intra-arterial) (FUDR®); fludarabina (Fludara®); fluorouracilo, 5-FU (Adrucil®) ; fulvestrant (Faslodex®); gefitinib (Iressa®); gemcitabina (Gemzar®) ; gemtuzumab ozogamicina (Mylotarg®); acetato de goserelina (Zoladex Implant®); acetato de goserelina (Zoladex®); acetato de histrelina (Histrelin implant®) ; hidroxiureia (Hydrea®); Ibritumomab tiuxetano (Zevalin®); idarrubicina (Idamycin®); ifosfamida (IFEX®); mesilato de imatinib (Gleevec®); interferão alfa-2a (Roferon A®); interferão alfa-2b (Intron A®) ; irinotecano (Camptosar®); lenalidomida (Revlimid®); letrozol (Femara®); leucovorina (Wellcovorin®, Leucovorin®); acetato de leuprorrelina (Eligard®); levamisol (Ergamisol®); lomustina-CCNU (CeeBU®); mecloretamina, mostarda nitrogenada (Mustargen®); acetato de megestrol (Megace®); melfalano, L-PAM (Alkeran®); mercaptopurina, 6-MP (Purinethol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex tabs®) ; metotrexata (Methotrexate®); metoxsaleno (Uvadex®) ; mitomicina C (Mutamycin®) ; mitotano (Lysodren®); mitoxantrona (Novantrone®) ; fenpropionato de 8 ΕΡ2245037Β1 nandrolona (Durabolin-50®); nelarabina (Arranon®); nofetumomab (Verluma®); oprelvekin (Neumega®); oxaliplatina (Eloxatin®); paclitaxel (Paxene®); paclitaxel (Taxol®); partículas de paclitaxel ligadas a proteínas (Abraxane®); palifermin (Kepivance®); pamidronato (Aredia®); pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargase (Oncaspar®); pegfilgrastim (Neulasta®); pemetrexedo dissódico (Alimta®); pentostatina (Nipent®); pipobromano (Vercyte®); plicamicina, mitramicina (Mithracin®); porfimero sódico (Photofrin®) ; procarbazina (Matulane®); quinacrina (Atabrine®); rasburicase (Elitek®); rituximab (Rituxan®); sargramostim (Leukine®); sargramostim (Prokine®); sorafenib (Nexavar®); estreptozocina (Zanosar®); maleato de sunitinib (Sutent®); talco (Sclerosol®); tamoxifeno (Nolvadex®); temozolomida (Temodar®); teniposide, VM-26 (Vumon®); testolactona (Teslac®); tioguanina, 6-TG (Thioguanine®); tiotepa (Thioplex®); topotecano (Hycamtin®); toremifeno (Fareston®); Tositumomab (Bexxar®); Tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®); Trastuzumab (Herceptin®); tretinoína, ATRA (Vesanoid®); uramustina (Uracil Mustard Capsules®); valrubicina (Valstar®); vinblastina (Velban®); vincristina (Oncovin®); vinorelbina (Navelbine®); e zoledronato (Zometa®).
8. 9. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização na inibição do crescimento de tumores/cancros num sujeito.
9. 10. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização na inibição da proliferação celular em células tumorais/cancerígenas num sujeito.
10. 11. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização no tratamento de uma doença com proliferação celular num sujeito. 9 ΕΡ2245037Β1
11. 12. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização no tratamento de uma doença neoplástica num sujeito.
12. 13. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização no tratamento de uma doença maligna hematológica num sujeito.
13. 14. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização no tratamento de linfoma não Hodgkin (NHL).
14. 15. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8 para utilização na inibição do crescimento de tumores/cancros num sujeito. Lisboa, 15 de Outubro de 2014 10