CZ287745B6 - Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu - Google Patents

Abstract

Sloučeniny vzorce I, kde B je zbytek purinové nebo pyrimidinové báze, vybraný ze skupiny, zahrnující adenin, xanthin, hypoxanthin, guanin, 8-bromguanin, 8-chloroguanin, 8-aminoguanin, 8-hydrazinoguanin, 8-hydroxyguanin, 8-methylguanin, 8-thioguanin, 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, thymin, cytosin, uracil, 5-bromuracil, 5-iodouracil, 5-ethyluracil, 5-propyluracil, 5-vinyluracil a 5-(2-bromvinyl)uracil; R je lineární alkyl s 1 až 2 atomy uhlíku, substituovaný azido nebo amino, lineární nebo větvený alkenyl s 2 až 6 atomy uhlíku, lineární nebo větvený alkinyl s 2 až 6 atomy uhlíku; monoester, diester odvozený od alkanolů s 1 až 5 atomy uhlíku a odpovídající sůl, odvozená od skupiny, zahrnující ionty alkalických kovů a kovů alkalických zemin nebo amoniových a kvartérně amoniových iontů, hydrát, jako monohydrát, dihydrát, trihydrát, a solvát, R nebo S izomer a jejich racemická směs. S předpokladem, že když R je azidomethyl nebo aminomethyl, potom B není adenin a když R je azidomethyl nebo aŕ

Description

Acyklické fosfbnomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu

Oblast techniky

Vynález se týká nukleotidových analogů, způsobu jejich přípravy a jejich kompozic a použití při léčení virových infekcí. Zejména se týká acyklických fosfonomethoxyalkylsubstituovaných alkenylových a alkinylových derivátů purinu a pyrimidinu.

Dosavadní stav techniky

Infekční virová onemocnění jsou považována za vážný lékařský problém. Pokrok proti infekčním virovým onemocněním vyžaduje vývoj léků se selektivní antivirovou aktivitou, zatím co zůstávají benigní k normálním buňkám. Rada antivirových přípravků, jež jsou nyní studovány a jež se zdají mít tuto selektivitu, jsou nukleosidové analogy. Obecně jsou tyto sloučeniny strukturními analogy přírodně se vyskytujících nukleosidů. Strukturní modifikace buď v jádře purinové nebo pyrimidinové báze a/nebo sacharidové komponenty vede k synteticky modifikovanému derivátu nukleosidu, který vbudovaný do procesu tvorby virové nukleové kyseliny, působí tak, aby přerušil další syntézu virové nukleové kyseliny. Účinnost těchto antivirových činidel závisí na selekční konverzi virovým enzymem nebo hostitelským enzymem na odpovídající analog nukleotidu, který je pak přeměněn na trifosfát a poté dochází k inkorporaci do virové nukleové kyseliny. Problémem této antivirové strategie je, že se objevily určité kmeny virů, jejichž enzymy velice chudě podporovaly fosforylaci nukleosidových analogů. K překonání tohoto problému se jeví jako potenciálně užitečné zabudování nedotčených nukleosidových analogů do virových nukleových kyselin jako antivirové prostředky.

Reist a Sturm ve WO 84/04748, zveřejněné 6. prosince 1984, popsali nové fosfonové kyseliny nukleosidových fosfátů, které jsou vhodné jako antivirové prostředky pro zabudování do virové DNA. Strukturní vzorec těchto sloučenin je ukázán níže jako 1.

(1)

V sloučeninách podle Reista je B purinová nebo pyrimidinová báze: R] a R2 spolu tvoří cukr βpentafuranózu nebo R] je H a R2 je H nebo hydroxymethyl; Rj je H nebo OH; X je H, OH nebo spolu s Y je karbonylový kyslík a Y může být také H; Z1 a Z2 jsou H nebo alkyl. Tyto sloučeniny se obecně odlišují od sloučenin podle předmětného vynálezu 1) etherickou kyslíkovou vazbou s uhlíkem připojeným k bázi, jejíž účelem je zachovat nebo napodobit acetálovou kyslíkovou vazbu pentafuranózového sacharidového kruhu; 2) modifikace fosfátu je

- 1 CZ 287745 B6 fosfonoalkylenovou vazbou. Naproti tomu acyklická sacharidová analogická složka předložených sloučenin sestává z uhlíkaté kostry až po fosfonomethoxy vazbu.

Podobně syntézu a aktivitu fosfátových a fosfonátových derivátů 9-[(l,3-dihydroxy-2-propoxy)methyl]-guaninu vzorce 2 proti Herpes-Virus popsal Prisbe et al, v J. Med. Chem., 1986, 29, 671.

(2) (X«o, ch₂)

Bližší vztah mají analogy adeninofosfonové kyseliny vzorce 3 a jejich syntézy, které byly popsány v GB patentové přihlášce Holý et al., Britský patent 2 134 907 A publikovaný 22. srpna 1984.

Ve vzorci 3, a R^ jsou H nebo spolu uzavírají ribonukleosidový kruh; a obě R^ jsou alternativně H a -CH2P(O) (OH)2 skupina.

Preferovaný příklad jedné z těchto sloučenin, známé jako (S - HPMPA) vzorce 4, byl popsán DeClercqem a spol. v Nátuře, 1986, 323, str. 464-467 a dříve Holým a spol., Nucleic Acids Research (výzkum nukleových kyselin), Sympoziová řada č. 14, 1984, str. 277-278.

-2CZ 287745 B6 (4)

Další velice příbuznou skupinou sloučenin jsou 9-(2-fosfonylmethoxyethyl) puriny vzorce 5, které byly popsány v československém autorském osvědčení autorů Holý a kol., AO č. 263 951. 5 Sloučeninou rozsáhle zkoumanou byl derivát adeninu, zejména PMEA, jak uvedeno v čs. AO

Holého a spol. č. 263 952. Různé testy s pokusnými zvířaty prokázaly jeho účinnost na virus Molonyho sarkoma, virus leukémie, simian virus imunodeficitu (SIV) a v tkáňových kulturách na HIV jak to popsal E. DeClercq v Antiviral Res., 12, 1 (1989).

B-CH₂-CH₂O-CH₂P(O) (OH)₂ (5)

Ve vzorci 5 B označuje purin-9-yl.

Rovněž jsou blízce příbuznou skupinou sloučenin N-(3-fluoro-2-fosfonylmethoxypropyl) deriváty purinových a pyrimidinových heterocyklických bází vzorce 6, jejich příprava a použití, 15 které jsou popsány v čs. patentu č. 285 420, Holý a kol.

B-CH₂-CH-CH₂F

I (6)

O-CH₂P(O) (OH)₂

Ve vzorci 6, B označuje purin-9-yl nebo pyrimidin-l-yl vazby a absolutní konfigurace na C-2 uhlíkovém atomu je S, R nebo RS. Sloučeniny vzorce 6 vykazují selektivní antiretrovirovou aktivitu.

A. Holý také popisuje syntézu racemických (RS), (R) a S 3'-azidomethylových a 3'-aminomet25 hýlových adeninoanalogů HPMPA v Collect. Czech. Chem. Commun., 54, 446 (1989).

V těchto referencích nejsou obsaženy nebo předpokládány jejich kombinace, ze kterých by byly známy tyto sloučeniny, jejich příprava a kompozice a použití podle předloženého vynálezu.

Nyní byly syntetizovány fosfonomethoxyalkenylové a azidoalkylové deriváty purinu a pyrimidinu a zjistilo se, že mají užitečnou antivirovou aktivitu. Stejnou aktivitu vykazovaly 30 alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu, které lze připravit stejným syntetickým postupem, který je používán pro přípravu alkenylových derivátů. Aminoalkylové deriváty lze připravit redukcí odpovídajících azidoalkyl derivátů. Tyto sloučeniny se odlišují od přírodních nukleotidů tím, že mají strukturní variace (změny) ve složce analogické cukru, což může být provázeno také změnou ve vazbě jejich nukleotidové báze. Navíc se tyto sloučeniny odlišují od přírodně se

-3CZ 287745 B6 vyskytující fosfátové struktury nukleotidů povahou vazeb kyslík - uhlík - fosfor v těchto fosfonomethoxy derivátech.

Podstata vynálezu

Předmětem předloženého vynálezu jsou acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované, alkenyl nebo alkinyl deriváty purinu a pyrimidinu vzorce I

(I), kde B je zbytek purinové nebo pyrimidinové báze, vybrané ze skupiny, zahrnující adenin, xantin, hypoxantin, guanin, 8-bromoguanin, 8-chlorguanin, 8-aminoaguanin, 8-hydrazinoguanin, 8hydroxyguanin, 8-methylguanin, 8-thioguanin, 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, thymin, cytosin, uráčil, 5-bromuracil, 5-ioduracil, 5-ethyluracil, 5-propyluracil, 5-vinyluracil a 5-(2bromvinyl)uracil; R je lineární alkyl s 1 až 2 atomy uhlíku, substituovaný skupinou azido nebo amino, lineární nebo větvený alkenyl s 2 až 6 atomy uhlíku nebo lineární nebo větvený alkinyl s 2 až 6 atomy uhlíku; a jeho monoester, diester a odpovídající sůl, hydrát, solvát, R nebo S izomer a jejich racemická směs (RS) s předpokladem, že když R je azidomethyl nebo aminomethyl, potom B není zbytek adeninu a když R je azidomethyl nebo azidoethyl, potom B není zbytek cytosinu.

Dále je předmětem vynálezu příprava těchto sloučenin, jejich zpracování do farmaceutických kompozicí a použití těchto kompozic pro léčení virových infekcí savců, včetně a zejména těch, způsobených HIV.

Farmaceutické kompozice podle vynálezu obsahují terapeuticky účinné množství antivirové látky podle předmětného vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, mono nebo diester, hydrát nebo solvát v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Příklady alkylů s 1 až 2 atomy uhlíku, substituovaných aminem nebo azidem, jsou:

-CH₂N₃, -ch₂ch₂n₃, -CH₂-NH₂, -CH₂-CH₂-NH₂.

Příklady řečeného alkenylu s 2 až 6 atomy uhlíku jsou:

-CH=CH₂, -ch₂-ch=ch₂, -ch=ch-ch₃,

-4CZ 287745 B6

-C=CH₂, -CH=CH-CH₂-CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃,

I ch₃

-ch₂-ch₂-ch=ch₂, -c=ch-ch₃, -ch=ch ch₂ch₂ch₃,

I ch₃

-ch=ch-ch-ch₃, -ch₂-c=ch ch₃, -ch₂-ch=ch-ch₂-ch₃,

I I ch₃ ch₃

-ch-ch=ch-ch₃, -ch₂-ch₂-ch₂-ch=ch₂,

I ch₃

-ch-ch₂-ch=ch₂, -ch₂-ch-ch=ch₂, -c=ch-ch₃,

I I I ch₃ ch₃ c₂h₅

-ch₂-ch=ch-ch₂-ch₂-ch₃, -CH₂-CH₂-CH₂-CH=CH-CH₃.

Příklady alkinylu s 2 až 6 atomy uhlíku jsou:

-OCH, -OC-CH₃, -CH-OCH, -CH₂-OC-CH₃,

-CH₂-CH₂-C=CH, -CH-C=CH, -oc-ch₂-ch₂-ch₃,

I ch₃

-ch₂-oc-ch₂ch₃, -ch₂-ch₂-ch₂-c=ch, -c=c-cii-ch₃,

I ch₃

-CH-C=C-CH₃, -CH-CH₂-OCH, -c=c-ch₂-ch₂-ch₂-ch₃,

I I ch₃ c₂h₄

-ch₂-c=c-ch₂-ch₂-ch₃, -ch-c=c_ch₂-ch₃, ch₃ ch₃

-5CZ 287745 B6

Monoestery a diestery jsou odvozené od alkanolů s 1 až 5 atomy uhlíku, jako například methanol, ethanol, propanol, izopropanol, butanol, izobutanol, pentanol atd. Preferovanou fosfonátovou jednotkou jsou monoester a kyselina.

Soli jsou farmaceuticky přijatelné netoxické soli. Takové fyziologicky přijatelné soli mohou zahrnovat ty, odvozené kombinací vhodných kationtů, jako iontů alkalických kovů a kovů alkalických zemin nebo amoniových a kvartemě amoniových iontů s kyselinovou aniontovou jednotkou - skupinou kyseliny alkylfosfonové. Dále také soli mohou být tvořeny adicí kyselin organických a anorganických s bázickými centry purinů a pyrimidinů. Takovými kyselinami jsou například HC1, HBr, H2SO4 a organické sulfonové kyseliny a podobně. Příklady kovových solí jsou Li⁺, K⁺, Na⁺, Ca⁺⁺ a Mg⁺⁺.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou existovat v různých tautomemích formách, ve své sjednocené formě, jakož i obojetné formě a/nebo ve formě solvátů a hydrátů, které jsou zahrnuté do rozsahu předloženého vynálezu. Příklady takových solvátů jsou methanolát, ethanolát, propanolát, izopropanolát, butanolát atd., a hydrátů, jako jsou monohydrát, dihydrát, trihydrát atd.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu existují jako optické izomery a oboje, tedy jak racemické (RS) a individuální chirální izomery R nebo S spadají do rozsahu vynálezu. Výhodný izomer je R, který neočekávaně vykazuje úplnou ochranu buňky proti HIV v širokém rozsahu koncentrací bez pozorovatelné cytotoxity.

Výhodné sloučeniny podle vzorce I jsou ty, kde B je guanin, adenin, uráčil, cytosin nebo thymin a R je lineární alkyl s 1 až 2 atomy uhlíku, které jsou substituované azido nebo amino skupinou, lineární alkenyl nebo alkinyl s 2 a 3 atomy uhlíku.

Nejvýhodnějšími sloučeninami podle vzorce I jsou ty, kde B je guanin, adenin, uráčil, cytosin nebo thymin a R je CH₂N₃, -CH=CH₂, -CH₂-CH=CH₂ nebo -C=CH.

Výjimečné sloučeniny podle vzorce I jsou (R)-9)-[(2-fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin ((R)2'-vinyl PMEG) a (R)-9-[(2-azidomethyl-2-fosfonomethoxy)propyl]guanin ((R)-2'-azidomethyl PMEG), které překvapivě a dramaticky vykazují ochranu buněk proti HIV v širokém rozmezí koncentrací bez pozorovatelné cytotoxicity.

Sloučeniny podle vzorce I, zejména chirální izomery (R) a (S), lze připravit stero-specifickou syntézou, začínající příslušným enantiomemím (chirálním) výchozím materiálem. Postup je znázorněn v reakčním schématu 1 pro (R) izomer. (S) izomer se připraví také podle reakčního schématu 1, s tím rozdílem, že se použije opačný enantiomemí (chirální) výchozí materiál.

Chirální izomery (R) a (S) lze také připravit opětným rozpuštěním racemické směsi (RS) dobře známými technikami, například separací diastereomerickými solemi, vytvořenými s opticky aktivními přísadami, například kyselinami nebo zásadami, následovanou konverzí na (R) a (S) izomer.

Racemická směs (RS) může být připravena za použití reakčního schématu 1 pro použití racemického výchozího materiálu.

-6CZ 287745 B6

Schéma 1

O

1. MMT-C1 || __________________ (R*O) ₂P

2. TsOCH₂PO(OR’)₂

l.MsCl: EtaN

OH ________________

2.B=purin nebo pyrimidin

II

III

R—ch₂-ch-ch₂, -ch-ch₂

R’“alkyl, jako methyl,ethyl,propyl nebo -OCH.CH₂N₃ atd.

i-propyl atd.

O II

O

II

hydrolýza

IV

R'= alkyl nebo H

Příprava chirálního (R)-izomeru vzorce I je ilustrována v reakčním schématu 1, začínající s (R)1,2-propandiolem vzorce II jako výchozí látkou. 1,2-propandiol vzorce II lze syntetizovat pomocí postupu, známého v tomto oboru za použití komerčně dostupných výchozích materiálů. Primární alkohol vzorce II může být selektivně chráněn p-anisylchlorodifenylmethanem (MMTio Cl) v přítomnosti dimethylaminopyridinu a triethylaminu za vzniku příslušného etheru, který lze potom alkylovat diizopropyl tosyloxymethanfosfonátem za vzniku odpovídajícího fosfonátového esteru. Fosfonátový ester lze potom hydrolyzovat kyselinou a odstranit etherovou skupinu za vzniku sloučeniny podle vzorce III. Primární alkohol vzorce II lze konvertovat na organickou odštěpitelnou skupinu jako halogenid, tosylát, mesylát a triflát v přítomnosti organické báze.

S výhodou lze reakci provést methylsulfonylchloridem a triethylaminem za vzniku odpovídajícího mesylátu. Kondenzaci purinové nebo pyrimidinové báze lze provést kopulační reakcí s mesylátem v inertním organickém rozpouštědle, jako je acetonitril, dimethylformamid a podobně, v přítomnosti přebytku anorganických zásad, jako je uhličitan česný nebo hydrid sodíku, za vzniku sloučeniny vzorce IV. Sloučenina vzorce IV se může nejdříve nechat reagovat s bromotrimetylsilanem, aby se získala příslušná bromová sloučenina, která může být poté hydrolyzována v kyselém prostředí, například 2N kyseliny chlorovodíkové (kyseliny solné), za vzniku opticky aktivního (R)-izomeru vzorce I. Sloučenina vzorce IV může být hydrolyzována zásadou za vzniku odpovídajících monoesterů vzorce V.

Příprava chirálního (S)-izomeru vzorce I vychází z (S)-l,2-propandiolu, ktetý je obchodně dostupný nebo může být syntetizován pomocí známých postupů z obchodně dostupných výchozích materiálů. Opticky aktivní (S)-izomer vzorce I se dá připravit z primárního alkoholu podle stejných obecných postupů a reakčních stupňů, znázorněných v reakčním schématu 1 pro přípravu (R)-izomeru vzorce I. Racemická směs (RS) sloučeniny vzorce I se dá připravit podle stejných obecných postupů a reakčních sekvencí, uvedených v reakčním schématu 1 pro přípravu (R)-izomeru vzorce I, ale za použití racemického (RS) 1,2-propandiolu vzorce II jako výchozího materiálu.

Alternativní cesta pro přípravu chirálních izomerů (S) a (R) sloučeniny vzorce I, když R je vinyl, je znázorněna v reakčním schématu 2.

Schéma 2

-8CZ 287745 B6

Schéma 2 - pokračování

ISttzSl

Et₃N.DMAP

2.H⁺

l.NaH. 0

II (i-Pr-O)₂PCH₂OTfl

ZHI

XX

M0M-C1.DIEA i i

I I (i-Pr-O),P^ OMOM

Ί. J V

H S

XX

-9CZ 287745 B6

Schéma 2 - pokračování

Pd(OB)₂

F

0		1.2-IOjPhSeai	0
II		BU3P	||
(i-Pr-O)2P^	OMOM I	2.¾¾	(Í-PR-O)2P^ on
y			Οχ.
			i
	OH
131

o

MsCl

Bt₃H

- 10CZ 287745 B6

Schéma 2 - pokračování

cs₂co_{3 g}6-C1

2. HC1

Cyt cs₂co₃

O

l.TKSBr

2.H₂O

XVIII

XIX

Komerčně dostupný chirální (S)-l,2,4-butantriol vzorce VI je konvertován na (S)-2-2diizopropyl-4-(2-hydroxyethyl)-dioxolan vzorce VII 2,4-di-methyl-3-pentanonem a kyselinou p-toluensulfonovou v inertním organickém rozpouštědle, například benzenu. Dioxolan vzorce VII se převede na (S)-4-O-benzyl-l,2,4-butantriol vzorce VIII s benzylbromidem a jodidem tetrabutylammonia v přítomnosti hydroxidu sodného za vzniku 4-O-benzyl-dioxolanu jako meziproduktu, který je pak hydrolyzován kyselinou na sloučeninu vzorce VIII. Primární alkohol sloučeniny vzorce VIII je selektivně chráněn s p-anisylchlordifenylmethanem (MMT-C1) v přítomnosti dimethylaminopyridinu a triethylaminu na sloučeninu vzorce IX. Sloučenina vzorce IX se alkyluje diizopropyltosyloxymethanfosfonátem na meziprodukt, který je potom hydrolyzován v přítomnosti kyseliny na sloučeninu vzorce X. Primární alkohol fosfonátového esteru vzorce X je chráněn chloromethylethyletherem (M0M-C1) v přítomnosti diizopropylethylaminu a methylenchloridu na sloučeninu vzorce XI. Benzylová ochranná skupina sloučeniny vzorce XI se pak selektivně odstraní katalytickou hydrogenolýzou za použití hydroxidu palladičitého na uhlíku v organickém prostředí, obsahujícím cyklohexan a ethanol, za vzniku sloučeniny XII. Sloučenina vzorce XII se převede na sloučeninu vzorce XIII 2-nitrofenylselenokyanidem a tributyl-fosfinem v bezvodém tetrahydrofuranu na nitrofenyl-selenylový meziprodukt, který se pak oxiduje peroxidem vodíku. Sloučenina vzorce XIII se převede na sloučeninu vzorce XIV hydrolýzou methoxymethyletherové skupiny sloučeniny XIII p-toluensulfonovou kyselinou v přítomnosti alkoholu, jako methanolu. Sloučenina vzorce XIV se převede na mesylát vzorce XV mesylchloridem v přítomnosti triethylaminu a inertního organického rozpouštědla, jako je methylenchlorid. Mesylát vzorce XV se kopuluje s purinovou nebo pyridinovou bází,

-11 CZ 287745 B6 například guaninem nebo cytosinem, v inertním organickém rozpouštědle, jako například acetonitrilu, dimethylformamidu a podobně v přítomnosti nadbytku organické zásady, jako uhličitanu česného nebo hydridu sodného, za vzniku sloučenin vzorců XVI a XVIII. Sloučeniny vzorců XVI a XVIII pak reagují s bromtrimethylsilanem za vzniku příslušných brómovaných meziproduktů, které jsou potom hydrolyzovány v kyselém prostředí, například 2N kyselinou solnou, za vzniku opticky aktivního (S)-izomeru vzorců XVII a XIX. Monoestery podle vzorců XVII a XIX lze připravit tak, že se sloučeniny vzorců XVI a XVIII podrobí alkalické hydrolýze. Opticky aktivní chirální (R) izomer sloučeniny vzorce I, kde R je vinyl, se připravuje z výchozího materiálu chirálního (R)-l,2,4-butantriolu a podle obecných postupů a reakčních sekvencí, ilustrovaných ve schématu 2, pro přípravu (S)-vinyl izomeru. Chirální (R)-l,2,4butantriol může být syntetizován postupy, známými v tomto oboru.

Racemická směr (RS) pro sloučeninu vzorce 1, kde R je vinyl, lze připravit z výchozího materiálu (RS)-l,2,4-butantriolu podle postupů a reakcí, ilustrovaných v reakčním schématu 2, pro přípravu (S)-vinyl izomeru. Racemická směs (RS) pro sloučeninu vzorce I, kde R je vinyl, se může rozštěpit na (R) a (S) izomer obecně známými metodami. (RS)-l,2,4-butantriol lze připravit metodami, v tomto oboru obecně známými.

Další cesta pro přípravu (S) a (R) chirálních izomeru sloučeniny vzorce I, když R je azidomethyl nebo aminomethyl, je znázorněna v reakčním schématu 3.

Schéma 3

(i-Pr-O)

l.NaN₃

2. BC1₃

3. MsCl.Et₃N

R - OBn.X - n₃ žxi R - OH.X - N₃ XXII

R - OMS.X « N₃ XXIII

- 12CZ 287745 B6

Schéma 3 - pokračování

II

_g6-C1

II ^C$2^CO3

l.TMSBr.BjO

2.2N BC1

C82CO3 o II

Cyt

XKZ o II

II (ho)₂p. t

TMSBr.H₂O

XXIX

- 13CZ 287745 B6 (R) -3-0-benzyl-2-0-(diizopropylfosfonometoxyl)-l-0-(methan-sulfonyl) glycerin vzorce XX, který se připravuje postupem podle J. J. Bronsona a kol., J. Med. Chem., 32, 1457, 1989 se převede na (R)-3-azido-l-0-benzyl-2-0(diizopropylfosfbnomethoxyl)-l,2-propandiol vzorce XXI azidem sodným v bezvodém organickém rozpouštědle, například N ,N-dimethylformamidu.

Sloučenina vzorce XXI se převede na R)-3-azido-2-0-(diizopropylfosfonomethoxyl)-l,2propandiol vzorce XXII bortrichloridem v inertním organickém rozpouštědle, jako je například methylenchlorid. Sloučenina vzorce XXII se potom převede na (R)-3-azido-2-0(diizopropylfosfonomethoxyl)-l-0-methansulfenyl-l,2-propandiol vzorce XXIII methansulfonylchloridem v přítomnosti organické báze, například triethylaminu v inertním organickém rozpouštědle, například methylenchloridu. Sloučenina vzorce XXIII se převede na (S)-2-amino9-[3-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]-6-chloro-purin vzorce XXIV kondenzací s 2-amino-6-chlorpurinem v přítomnosti uhličitanu česného a Ν,Ν-dimethylformamidu. Kondenzace sloučeniny vzorce XXIII s cytosinem nebo 4-O-methylthyminem v přítomnosti uhličitanu česného a Ν,Ν-dimethylformamidu dává sloučeninu (S)-[3-azido-2-[(diizopropylfosfonomethoxy)propyl)cytosin vzorce XXV nebo případně sloučeninu (S)-[3-azido-2[(diizopropylfosfonomethoxy)propyl)-4-0-methylthymin vzorce XXVI.

Sloučeniny vzorců XXIV nebo XXV nebo XXVI se potom nechají reagovat s bromotrimethylsilanem, načež následuje hydrolýza kyselinou nebo vodou za vzniku sloučeniny (S) -9-(3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl] guanin vzorce XXVII nebo (S)-9-(3-azido-2fosfonomethoxypropyl)cytosin vzorce XXVIII nebo (S)-9-(3-azido-2-fosfonomethoxy)propyl) thymin vzorce XXIX.

Chirální (R) izomer sloučenin vzorců XXVII nebo XXVIII se připraví z výchozího materiálu (S)-3-0-benzyl-2-0-(diizopropylfosfonomethoxyI)-l-0-(methansulfonyl)glycerin podle stejného reakčního sledu, jak je znázorněný v reakčním schématu 3.

(S) a (R) izomer aminomethylových sloučenin vzorců XXVII nebo XXVIII nebo XXIX lze připravit redukcí odpovídajících (S) nebo (R) azidomethylových sloučenin vzorců XXVII nebo XXVIII nebo XXIX.

Farmaceuticky akceptovatelné soli vzorce I se připravují způsoby o sobě známými v tomto oboru. Soli zahrnují soli amoniové a soli fyziologicky akceptovatelných kovů, jako jsou zejména lithium Li⁺, draslík K⁺, sodík Na⁺, vápník Ca⁺⁺, a hořčík Mg^4-1·, a představují další předmět vynálezu. Kovové soli lze připravit reakcí hydroxidu kovu se sloučeninou vzorce I podle předloženého vynálezu. Příklady solí kovů, které lze tímto způsobem připravit, jsou soli, obsahující Li⁺, Na⁺ a K⁺. Méně rozpustné soli lze připravit vysrážením z roztoku více rozpustné soli přidáním vhodné sloučeniny kovu.

Kyselé soli lze připravit reakcí sloučeniny vzorce I s anorganickou nebo organickou kyselinou, například chlorovodíkovou HC1, bromovodíkovou HBr, kyselinou sírovou H2SO4, s organickými sulfonovými kyselinami a podobně.

Solváty a hydráty sloučenin vzorce I lze připravit vykrystalováním sloučeniny vzorce I z rozpouštědla, jako je voda, methanol, ethanol atd.

Zkratky sloučenin

Zkratky, používané na identifikaci sloučenin této třídy nukleotidů, jsou o sobě známé a jsou zde použity, jak uvedeno dále:

PMEG: 9-[2-(fosfonomethoxy)ethyl]-guanin (sloučenina z příkladu 7 evropské patentové přihlášky EP-269 947 a sloučenina 5 v tabulce 2 evropské patentové přihlášky EP253 412), (S)-2'-vinyl-PMEG: (S)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin (sloučenina z příkladu 1),

-14CZ 287745 B6 (R) -2'-vinyl-PMEG: (R)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin (sloučenina z příkladu 2),

Racemický-2'-vinyl-PMEG: (RS)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin, (S) -2'-azidomethyl-PMEG: (S)-[3-azido-2-(fosfonoinethoxy)propyl]guanin (sloučenina z příkladu 4), (R) -2'-azidomethyl-PMEG: (R)-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]guanin (sloučenina z příkladu 5),

Racemický-2'-azido-PMEG: (RS)-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]guanin, (S) -2'-azidoethyl-PMEG: (S)-9-[4-azido-2-(fosfonomethoxy)butyl]guanin (sloučenina z příkladu 11), (S)-2-azidoethyl-PMEC: (S)-9-[4-azido-2-fosfonomethoxy)propyl]cytosin (sloučenina z příkladu 12), (S)-2'-azidomethyl-PMEC: (S)-9-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]cytosin (sloučenina z příkladu 6), (S)-2-vinyl-PMEC: (S)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]cytosin (sloučenina z příkladu 3), (S)-2'-azidomethyl-PMET: (S)-9[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]thymin (sloučenina z příkladu 8).

Biologická aktivita

Pro znázornění antivirové účinnosti proti viru lidské imunologické nedostatečnosti (HIV) jsou sloučeniny předloženého vynálezu a známá sloučenina PMEG uvedeny v tab. I a na obrázcích 1 až 7 spolu s relativními cytotoxicitami.

Zkoušky s virem (HIV)

Sloučeniny byly hodnoceny na účinnost proti viru (HIV) (HIV RF kmen, získaný od Luc Montagniera, Institut Pasteur, Paris, France) v CEM-SS buňkách (P. L. Nara, a kol., v AIDS Res. Human. Retroviruses, 1987, 3, 283-302) za použití zkoušek XTT, popsaných O. S. Weislowem a kol. v J. Nati. Cancer Instit., 1989, 81, 577-586. CEM-SS buňky byly získány od Owena Weislowa z Národního ústavu pro rakovinu. Buňky byly vystaveny účinku HIV a kultivovány na mikrotitračních miskách v přítomnosti testovacích sloučenin při koncentracích 0,32, 1, 3,16, 10, 31,6, 100, 316 a 1000 m. Na 7. den po infekci byl antivirový účinek měřen za použití XTT zkoušek, u kterých se dosáhne optická hustota odečtu při každé koncentraci léčiva. Optická hustota odečtu je úměrná počtu životaschopných buněk. Křivky závislosti koncentrace účinné látky na relativní optické hustotě odečtu jsou uvedeny na obrázcích obr 1 až

7. Hodnoty relativní optické hustoty byly odvozeny dělením pozorované optické hustoty vzorků hodnotou získanou pro kontrolní pokus. Zkoušky, prováděné s infikovanými buňkami, ukazují antivirový účinek testovaných sloučenin, kde vzrůst počtu životaschopných buněk (vyšší OD odečet) ukazuje ochrannou antivirovou účinnost sloučenin. Zkoušky, prováděné s neinfikovanými buňkami, poskytují míru buněčné toxicity.

Antivirový účinek je také vyjádřený (viz tab.l) jako koncentrace sloučeniny, která se snižuje s počtem životaschopných buněk v infikovaných kulturách na 50 % neošetřených, neinfikovaných kontrolních (srovnávacích) kultur (ED50). Buněčná toxicita je vyjádřena jako koncentrace sloučeniny, která snižuje počet životaschopných buněk na 50 % hodnoty neošetřených kontrol (TD50). Index selektivity (SI) je poměr TD50 k ED50.

Anti HlV-účinnost a buněčná toxicita testovaných sloučenin jsou naneseny na obr. 1 až 7 jako funkce relativní optické hustoty proti stoupajícímu logaritmu koncentrací testovaných sloučenin (XTT zkoušky). Obrázky 1 až 7 názorně ukazují výsledky relativní anti-HIV účinnosti

-15CZ 287745 B6 testovaných sloučenin na infikovaných buňkách (-O-) a buněčné toxicity těchž testovaných sloučenin na neinfikované buňky

Anti-HIV účinnost (R)-izomeru, (R)-2'-vinyl-PMEG podle předloženého vynálezu je ukázána na obr. 1 (CEM-SS buňky), a (Sfyizomer (S)-2'-vinyl-PMEG je ukázána na obr. 2 (CEM-SS buňka). Anti-HIV účinnost srovnávací sloučeniny PMEG je ukázána na obr. 7 (CEM-SS buňky). Anti-HIV účinnost (R)-2'-azidomethyl PMEG a (S)-2'-azidomethyl PMEG je znázorněna na obr. 3 a 4. Anti-HTV aktivita racemického (RS)-2-vinyl PMEG a (RS)-2'-azidomethyl PMEG je znázorněna na obr. 5 a 6. Obr. 1 ukazuje, že v koncentračním rozmezí od 5 do 100 μΜ, (R)2-vinyl-PMEG poskytuje kompletní ochranu před viry HIV v CEM-SS buňkách bez pozorované buněčné toxicity při koncentracích menších než 100 μΜ. Obr. 2 ukazuje, že (S)-2'vinyl-PMEG poskytuje úplnou ochranu před HIV v buňkách CEM-SS při 100 μΜ bez pozorované buněčné toxicity při koncentracích menších než 100 μΜ. Při porovnání, jak je ukázáno na obr. 7, PMEG vykazuje nějaký anti-HIV účinek v buňkách CEM-SS, ale buněčná toxicita PMEG brání ochraně před virem.

Index selektivity testovaných sloučenin

Další hodnocení účinnosti sloučeniny pro použití proti HIV v prevenci a/nebo léčení AIDS je index selektivity (in vitro terapeutický index) jako poměr toxické dávky 50 k účinné dávce 50. Index selektivity (SI) pro (RS), (R)- a (S)-2'-vinyl-PMEG a (RS), (R), (S)-2-azidomethyl PMEG podle předloženého vynálezu a pro srovnávací látku PMEG jsou ukázány v tab. 1. Údaje v tab. 1 jasně ukazují, že (R)-2'-vinyl PMEG a (R)-2'-azidomethyl PMEG jsou v porovnání s ostatními sloučeninami obě silná a selektivní činidla proti viru HIV.

Tabulka 1

Účinnost proti viru HIV v CEM-buňkách, hodnocená pomocí XTT zkoušek 6 dní po infekci.
Sloučenina	ED50 (μΜ)3	TD50(RM)b	SIC
PMEG	0,2	15	30
(R)-2'-vinyl-PMEG	12,6	>1000	>79
(S)-2'-vinyl-PMEG	48,5	>1000	>21
(R,S)-2'-vinyl-PMEGd	19,6	>1000	>51
(R)-2-azidomethyl PMEG	5,0	>1000	>200
(S)-2'-azidomethyl PMEG	51,0	>1000	>20
(R,S)-2-azidomethyl PMEGd	8,0	>1000	>125
(S)-2'-azidoethyl-PMEGc	>500	>500	NAf
(S)-2'-azidoethyl-PMECc	>500	>500	NAf
(S)-2'-azidomethyl-PMECc	>500	>500	NAf
(S)-2'-vinyl-PMECc	>500	>500	NAf
(S)-2'-azidomethyl-PMETg	>500	>500	NAf

a) Účinná dávka 50: v infikovaných buňkách koncentrace sloučeniny, která vede k zvýšení počtu životaschopných buněk na 50 % neinfikované srovnávací kontroly.

-16CZ 287745 B6

b) Toxická dávka 50: v neinfikovaných buňkách koncentrace sloučeniny, která vede k 50% poklesu životaschopných buněk.

c) Index selektivity: poměr TDjq k ED5Q

d) Vzorek byl připraven smícháním (R) a (S) izomeru v poměru 1 ku 1.

e) Sloučeniny byly hodnoceny použitím HIV viru kmene LAV BRU, získaného od Luc Montagniera, Pasteurův ústav, Paříž, Francie.

f) NA: není dostupné.

g) Sloučenina byla hodnocena v Southem Research Institute za použití viru HTV kmene HTLVIIB a MT-2 buňky (S. Harada a kol., Science, 1985, 229, 563).

Cytotoxicita PMEG, (R)2'-vinyl PMEG, (S)2'-vinyl PMEG a (R)-2'-azidomethyl PMEG byla stanovena zkouškou inhibice růstu buněk v CEM-SS buňkách. Hodnoty CC50 těchto čtyř sloučenin jsou uvedeny v tab. 2.

Tabulka 2

Zkouška inhibice růstu buněk v CEM-SS buňkách
Sloučenina	CC50(pM)*
PMEG	2,4
(R)-2'-vinyl PMEG	1600
(S)-2'-vinyl PMEG	1600
(R)—2 -azidomethyl PMEG	1400

* CC50 je koncentrace léčiva, která způsobuje 50% pokles v počtu buněk v porovnání s kontrolou (se srovnávací sloučeninou) v třetí den (72 hodin).

Shora uvedené hodnoty ukazují, že (R)-2'-vinyl PMEG, (S)-2'-vinyl PMEG a (R)-2'-azidomethyl PMEG jsou relativně netoxické v buňkách CEM-SS v porovnání s PMEG.

Protokol pro shora uvedenou zkoušku je uveden dále:

1. Volba správného rozsahu koncentrací farmaceuticky účinné látky (substance), která se vyhodnocuje.

2. Příprava zásobních roztoků farmaceuticky účinných látek (substancí) v RPMI 1640 prostředí v lOnásobku nejvyšší koncentrace potřebné při kultivaci buněk.

3. Příprava série zředění lOnásobných zásobních roztoků v RPMI 1640 podle potřeby, obvykle se používají čtyři různé koncentrace pro každou farmaceuticky účinnou látku (substanci).

4. Příprava suspenze CEM buněk v koncentraci 5x10^ buněk/ml.

5. Do každých 18 ml suspenze CEM buněk se přidají 2 ml roztoku dobře rozpuštěné farmaceuticky účinné látky (substance) (ze stupně 2 a 3) a zvlášť dobře se promíchají.

6. Do srovnávacího roztoku buněk se místo roztoků farmaceuticky účinných látek (substancí) přidají 2 ml RPMI 1640.

7. Dva ml roztoků z kroků 5 a 6 se rozdělí do misek 24místné očkovací Petriho misky, jak je ukázáno na následujícím grafů.

-17CZ 287745 B6

Koncentrace farmaceuticky účinné látky *

500 pg/ml

100 pg/ml pg/ml pg/ml

24h 48h 72h 96h

><
X

* koncentrace, používané pro N3 - a vinyl-analogy PMEG.

8. V nulovém čase se ve 4 miskách srovnávacího roztoku buněk (není přidána žádná farmaceuticky účinná látka - substance) spočítají buňky.

9. Potom se za 24, 48, 72 a 96 hodin po přidání farmaceuticky účinné látky spočítají buňky oboje, jak ošetřené, tak srovnávací (kontrolní).

10. Všechny pokusy se provádějí dvojmo, tedy pro každou farmaceuticky účinnou látku se použijí dvě 24 místné očkovací misky.

11. Počty buněk, získané z ošetřených kultur, se srovnávají se srovnávacími (kontrolními) 15 kulturami.

12. Koncentrace farmaceuticky účinné látky (substance), která způsobuje 50% pokles počtu buněk v porovnání se srovnávacím (kontrolním) vzorkem na třetí den (72 hodin), je označována jako CC5Q hodnota farmaceuticky účinné látky (drug).

Vynález zahrnuje sloučeniny vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli a jejich solváty, a s 20 výhodou sloučeniny vzorce I, kterou je (R)-izomer a jeho farmaceuticky přijatelné soli a jejich solváty pro použití v terapii nebo profylaxi virových infekcí, zejména viru HIV v lidských subjektech.

Sloučeniny podle vynálezu, včetně farmaceuticky přijatelných solí a jejich solvátů, mají požadovanou antivirovou aktivitu. Vykazují účinnost proti retrovirům. Zejména sloučenina 25 vzorce I vykazuje anti-HIV účinnost bez pozorovatelné cytotoxicity.

Pro použití proti virovým infekcím se sloučeniny podle vynálezu mohou míchat do farmaceutických přípravků každým vhodným způsobem, a proto do rozsahu vynálezu spadají také farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu podle vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo jejich solváty, upravené pro použití v humánní medicíně. Takové kompozice 30 mohou být připraveny k použití obvyklým způsobem ve směsi s jedním nebo vícerými farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo inertními pomocnými látkami. V literatuře Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 15th Edition E. W. Martin (Mark Publishing Company, 1975), jsou popsány typické nosiče a způsoby přípravy.

Pro antivirové účely lze sloučeniny podávat topicky nebo systemicky. Systemickým podáváním 35 se myslí podávání orální, rektální a parenterální (např. intramuskulámě, intravenózní, podkožní a nasální) cestou. Všeobecně se zjišťuje, že když se látka podle vynálezu podává orálně (per os), je potřebné větší množství látky k dosažení stejného účinku jako při podávání parenterálním.

-18CZ 287745 B6

V souladu s klinickou praxí je výhodné podávat předmětné sloučeniny v takové koncentraci, aby koncentrační hladina poskytovala účinný antivirový účinek, aniž by způsobila škodlivé nebo vedlejší účinky.

Terapeuticky a profylakticky jsou předmětné sloučeniny dány jako farmaceutické kompozice obsahující účinné antivirové množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelného nosiče, jak výše uvedeno. Farmaceutické kompozice, účinné pro léčbu, budou obsahovat největší nebo nejmenší množství, např. od 95 % do 0,5 %, nejméně jedné sloučeniny podle předloženého vynálezu, nosič, zahrnující jednu nebo více tuhých nebo polotuhých nebo tekutých rozpouštědel, plnidel a přísad do směsi, které nejsou toxické, jsou inertní a farmaceuticky přijatelné. Takovéto farmaceutické kompozice jsou s výhodou ve formě dávkovačích jednotek, například fyzikálních jednotek, obsahujících předem určené množství látky, odpovídající zlomku nebo násobku dávky, která podle kalkulace vytvoří požadovanou terapeutickou odezvu. Jiná terapeutická činidla mohou být také přítomna. S výhodou se používají farmaceutické kompozice, obsahující od asi 0,1 až do 500 mg účinné přísady na jednotkovou dávku a jsou běžně připraveny jako tablety, pastilky, kapsle, prášky, vodné a olejové suspenze, sirupy, elixíiy a vodné roztoky. Preferované orální kompozice jsou ve formě tablet nebo kapslí a mohou obsahovat běžné přísady jako pojivá (např. sirup, akácie, želatina, sorbitol, tragant nebo polyvinylpyrrolidon), plniva (např. laktóza, cukr, kukuřičný škrob, fosfát vápenatý), mazadla (např. stearan hořečnatý, mastek, polyethylenglykol nebo kysličník křemičitý), dezintegrátory (např. škrob) a smáčedla (např. laurylsulfát sodný). Roztoky a suspenze sloučeniny vzorce I s běžnými farmaceutickými látkami se používají pro parenterální kompozice, jako vodný roztok pro intravenózní injekce nebo olejová suspenze pro intramuskulámí injekce. Takové kompozice mající požadovanou čirost, stabilitu a adaptabilitu pro parenterální použití, se získají rozpuštěním od 0,1% do 10% hmotn. účinné látky ve vodě nebo v pomocných látkách, sestávajících z alifatického polyhydroxyalkoholu, jako je glycerin, propylenglykol a polyethylenglykol nebo jejich směsi. Polyethylenglykoly sestávají ze směsi netěkavých, běžně kapalných polyethylenglykolů, které jsou rozpustné jak ve vodě, tak v organických kapalinách, a mají molekulovou hmotnost v rozmezí od 200 do 1500.

Z hlediska biologické účinnosti, kterou mají sloučeniny podle předloženého vynálezu, je zřejmé, že tyto sloučeniny mají antivirové vlastnosti zejména vhodné pro jejich použití v boji proti AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) (syndrom získané imunologické nedostatečnosti).

Dalším předmětem předloženého vynálezu je způsob léčení infekcí, způsobených virem HIV u savců, včetně lidí, kteří potřebují léčení. Způsob zahrnuje systemické nebo topické podávání účinné dávky sloučeniny vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo jejich solvátů takovýmto savcům. Dalším předmětem předloženého vynálezu je léčení lidských buněk, infikovaných infekcemi HIV, které zahrnuje systemické a topické podávání účinné dávky sloučeniny vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo jejich solvátů takovýmto buňkám. Na základě zkoušek je očekávaná účinná dávka v rozmezí od 0,001 do 30 mg/kg tělesné hmotnosti. Počítá se s tím, že pro klinické antivirové aplikace budou sloučeniny předmětného vynálezu podávány a užívány stejným způsobem jako referenční léky AZT, DDI a DYT. Avšak pro klinické aplikace musí být v každém případě dávkování a dávkovači režim opatrně upraven podle profesionálního soudu lékaře s ohledem na věk, váhu a kondici pacienta, cestu podávání a povahu a vážnost nemoci. Obecně denní orální dávka představuje asi 0,1 až 750 mg, s výhodou 10 až 500 mg, sloučeniny vzorce I, podávaná 1 až 3krát denně. V některých případech může být dosažen dostatečný terapeutický účinek nižšími dávkami, v některých může být požadován vyšší.

Počítá se s tím, že sloučenina vzorce I může být podána v týdenních intervalech jako například jednou nebo dvakrát týdně; dávka, používaná při tomto režimu, může být upravena s ohledem na výše uvedené faktory a tak, aby se udržela hladina farmaceuticky účinné látky na účinné antiHIV úrovni.

- 19CZ 287745 B6

Popis specifických provedení vynálezu

V následujících příkladech jsou všechny teploty uvedené ve stupních Celsia. Teploty tání byly zaznamenány na elektrotermálním digitálním kapilárním zařízení pro teploty tání a teploty varů byly měřeny při specifických tlacích (mm Hg) a obě teploty jsou nekorigovány. Protonové magnetické rezonance (^H NMR) spektra byly zaznamenány spektrometrem Bruker AM 300 nebo Varian Gemini 300. Všechna spektra byla stanovena v CDCI3, DMSO-dg nebo D2O, pokud není uvedeno jinak, a chemické posuny jsou uváděny v jednotkách směrem dolů od mezinárodního standardu tetramethylsilanu (TMS), a konstanty spinové interakce jsou uváděny v hertzech (Hz). Štěpné modely jsou označeny následovně: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, quartet; m, multiplet; br, široké spektrum (pík); a dd, dublet z dubletu. Spektra nukleární magnetické rezonance uhlíku-13 (¹³ C NMR) byla zaznamenána na spektrometrech Bruker AM 300 nebo Varian Gemini 300 a byla širokopásmová proton decoupled. Všechna spektra byla stanovena v CDC1₃, DMSO-d6, nebo D₂O, pokud není uvedeno jinak, s mezinárodním deuteriovým blokem a chemické posuny jsou uvedeny v jednotkách směrem dolů od tetramethylsilanu, mezinárodního standardu.

Infračervená (IR) spektra byla stanovena na Perkin-Elmerově 1800 FT-IR spektrometru od 4000 cm'¹ do 400 cm'¹, kalibrovaném na absorpci 1600 cm’¹ polystyrenu a jsou uvedena v cm’¹. Optické rotace [a]²⁰ byly stanoveny na polarimetru Perkin-Elmer 41 v uvedených rozpouštědlech. Hmotová spektra byla zaznamenána na zařízeních Kratos MS-50 nebo Finnegan 4500 za použití metody rychlého bombardování atomu ((fast atom bombardment (FAB)) nebo technikou přímé chemické ionizace (DCI). Hmotová data jsou vyjádřena ve formě protonizovaného výchozího iontu (MH⁺).

Kolonová chromatografie, uvedená jako kolonová (flash) chromatografie, byla prováděna ve skleněné koloně za použití jemného silikagelu (32-64 m na silikagel-H) a tlaku něco nad atmosférickým tlakem s uvedenými rozpouštědly.

Všechny roztoky byly odpařovány za snížených tlaků. Celíte je zapsaná ochranná známka firmy Johns-Manville Products Corporation pro infuzoriovou hlinku (zeminu). Zde použitý termín hexany je směs izomemích Cg uhlovodíků, jak jsou specifikovány Americkou chemickou společností, a termín inertní atmosféra je argonová nebo dusíková atmosféra, pokud není uvedeno jinak.

Příklady

Příklad 1

Syntéza (S)-9-[(2-vinyl-2-fosfonomethoxy)ethyl]guaninu ((S)-2-vinyl PMEG) ((S)-9-[2-fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin) (5)-2,2-diizopropyl-4-(2-hydroxyethyl) dioxolan

V trojhrdlé baňce, opatřené mechanickým míchadlem, Dean-Starkovým odlučovačem a chladičem, se do 300 ml benzenu zamíchají (5)-l,2,4-butantriol (48 g, 0,45 mol), 2,4-dimethyl-

3-pentanon (180 ml, 1,27 mol) a p-toluensulfonová kyselina (0,35 g). Poté, co byla směs 20 h mírně vařena pod zpětným chladičem (refluxována), byla ochlazena na teplotu místnosti a bylo přidáno 10 ml triethylaminu. Rozpouštědlo bylo odpařeno. Zbytek byl čištěn (flash) chromatografií na silikagelu (aceton : methylenchlorid = 1 : 10 až 1 : 2) a získáno 77,2 g (84% výtěžek) produktu jako olej.

[a]²⁰D + 1,6° (C 15,6, CH₂C1₂).

-20CZ 287745 B6 ^JH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,33-4,23 (m, 1H, H-4), 4,14 (t, J = 7,0 Hz, H-5), 3,85-3,72 (m, 2H, H-2), 3,49 (t, J = 8,3 Hz, 1H, H-5), 2,10-1,97 (m, 2H, CHCH3), 1,90-1,65 (m, 2H, Η-Γ), 0,90-0,86 (m, 12H, CH3).

!3C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 116,7 (C-O-C), 77,2 (C-4), 72,2 (C- 5), 60,9 (C-2'), 35,0 (C-Γ), 34,3, 33,5 (CHCH3), 14,3, 17,2, 17,0 (CHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 203 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro Cj 1H22O3: C, 65,31; H, 10,96;

nalezeno: C, 65,25; H, 11,11.

(>S)-4-O-benzyl-l ,2,4-butantriol (5)-2,2-diizopropyl-4-(2-hydroxyethyl) dioxolan (76,2 g, 0,377 mol), benzylbromid (129 g, 0,753 mol) a jodid tetrabutylammonia (7 g, 19 mmol) byly v 3-hrdíé baňce, opatřené míchadlem a chladičem, míchány s koncentrovaným roztokem hydroxidu sodného (40 g v 90 ml vody, 2,26 mol). Po míchání při 110 °C po dobu 18 hodin byla směs ochlazena na teplotu místnosti a organická vrstva oddělena. Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (100 ml x 2). Spojené methylenchloridové extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek se nechal reagovat s 300 ml 1,5 M kyseliny sírové. Směs byla 8 hodin míchána při 100 °C, poté ochlazena na teplotu místnosti a přidán hexan (300 ml). Vodná vrstva byla promyta dvakrát hexanem (200 ml x 2) a pak pH upraveno koncentrovaným hydroxidem sodným na 8 až 9. Roztok byl extrahován ethylacetátem (200 ml x 3). Spojené ethylacetátové extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl čištěn frakční destilací ve vakuu (0,1 mm Hg, b.v. 150 - 170 °C), a získáno 68,3 g (92% výtěžek) žádané sloučeniny ve formě oleje.

^JH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,48-7,24 (m, 5 H, Ph), 4,51 (s, 2H, CH₂Ph), 3,96-3,84 (d, 1H, H-2), 3,74-3,53, 3,53-3,42 (m, 4 H, H-l a H-4), 2,24 (bs, 1H, OH), 3,08 (bs, 1H, OH), 1,88-1,58 (m, 2H, H-3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 137,9, 128,6, 128,0, 127,9 (Ph), 73,3 (CH₂Ph), 71,2 (C-2), 68,1 (C-4), 66,5 (C-l), 32,6 (C-3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 196 (MH⁺).

(S)-4-C)-benzyl-l-O-[p-methoxyfenyl)difenylmethyl]-l,2,4-butantriol (5)-4-0-benzyl-l,2,4-butantriol (68,3 g, 348 mmol), triethylamin (70,4 g, 969 mmol) a dimethylaminopyridin (3,42 g, 28 mmol) byly míchány s methylenchloridem (300 ml) v dusíkové atmosféře. K roztoku byl při 0 °C přidán p-anisylchlorodiphenylmethan (129,1 g, 418 mmol). Reakční směs byla 30 minut míchána při 0 °C a potom 5 hodin při teplotě místnosti. K směsi byl přidán nasycený bikarbonát sodný a výsledná směs byla 1 hodinu míchána při teplotě místnosti. Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (150 ml x 2). Spojené methylenchloridové extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl čištěn kolonovou chromatografií na silikagelu (ethylacetát: hexan = 1 : 5 až 1 : 1), přičemž bylo získáno 155,5 g (95% výtěžek) shora uvedené sloučeniny ve formě hustého oleje.

[a]²⁰ _D - 3,0° (c 3,29, MeOH).

-21 CZ 287745 B6

ΪΗ NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,43-7,40, 7,32-7,15, 6,82-6,79 (m, 14 Η, Ar), 4,44 (s, 2Η, CH₂Ph), 4,03-3,93 (m, 1Η, H-2), 3,76 (s, 3 Η, OC_H3), 3,64-3,50 (m, 2Η, Η-4), 3,12-3,05 (m, 2H, H-l), 2,80 (d, J = 2,0 Hz, 1H, OH), 1,80-1,70 (m, 2H, H-3).

13_C NMR (300 MHz, CDCI3) δ 158,7, 144,6, 138,2, 135,7, 130,5, 128,5, 127,9, 127,7, 127,0, 113,1, 88,2, 73,1 (CH₂Ph), 67,9, 67,2 (C-4 a C-l), 65,0 (OCH3), 33,2 (C-3).

Analýza: vypočteno pro C31H32O4: C,79,45; H, 6,88;

nalezeno: C,79,21; H, 7,05.

(S)-4-0-benzyl-C>-2-[(diizopropylfosfonomethyl)]-l,2,4-butantriol

K roztoku (S)-4-O-benzyl-l-O-[(p-methoxyphenyl)difenyl methyl]-l,2,4-butantriolu (153,5 g, 327,6 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (700 ml) byl po dávkách v atmosféře dusíku přidán hydrid sodný (80 % v minerálním oleji, 11,8 g, 393 mmol). Po 5ti hodinovém zahřívání pod zpětným chladičem byla směs ochlazena v ledové koupeli. Pak byl ke směsi pomalu přidáván tosyloxymethyldiizopropylfosfonát (137,7 g, 393,1 mmol) v 300 ml suchého tetrahydrofuranu. Směs byla 30 min míchána při 0 °C a 14 hodin při teplotě místnosti. Výsledná řídká kaše byla filtrována přes podložku z infuzoriové hlinky (celite^R). Filtrát byl odpařen a k odparku byly přidány methylenchlorid (400 ml) a voda (200 ml). Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (200 ml x 2). Spojené extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Roztok byl odpařen a byly přidány methanol (400 ml) a kyselina toluensulfonová (10 g). Směs byla míchána 8 hodin při asi 60 °C. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl čištěn (flash) chromatografii na silikagelu (ethylacetát: hexan = 1 :3 až 1:0, potom ethylacetát : ethanol = 10 : 1) a bylo získáno 44,1 g (37% výtěžek) požadované (v názvu uvedené) sloučeniny ve formě oleje.

^]H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,38-7,24 (m, 5 H, Ar), 4,80-4,63 (m, 2H, POCH), 4,49 (d, J = 12,0 Hz, 1H, CH₂Ph), 4,44 (d, J = 12,0 Hz, 1H, CH₂Ph), 3,87 (dd, J = 7,2, 14,1 Hz, 1H, CH₂P), 3,72 a 3,80-3,60 (dd over m, J = 9,0, 14,1 Hz, 2H, CH₂P a H-2), 3,60- 3,47 (m, 4 H, H-l a H-4), 1,82-1,70 (m, 2H, H-3), 1,36-1,25 (m, 12H, POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 138,8, 129,0, 128,3 (Ph), 82,1 (d, ³Jc, p = 8,7 Hz, C-2), 73,4 (CH2Ph), 72,0 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 71,6 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 66,7 (C-4), 65,4 (d, bc, p = 170 Ht, CH2P), 64,9 (C-l), 31,8 (C-3), 24,2 (m, POCHCH3).

(5)-4-C>-benzyl-2-0-(diizopropylfosfonomethyl)-l-0-methoxymethyl-l,2,4-butantriol

K roztoku (5)-4-C)-benzyl-0-2-[diizopropyl(fosfonomethyl)]-l,2,4-butantriolu (20 g, 53,42 mmol) a diizopropylethylaminu (13,8 g , 106,8 mmol) v 100 ml methylenchloridu bylo při 0 °C a v dusíkové atmosféře přidán chlormethylether (6,45 g 80,13 mmol). Výsledný roztok byl míchán 14 hodin při teplotě místnosti. Pak byly přidány methylenchlorid (100 ml) a 1 N kyselina solná (100 ml). Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (75 ml x 2). Spojené extrakty byly vyprány nasyceným roztokem bikarbonátu sodného (100 ml) a solanky (100 ml) a sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl čištěn kolonovou chromatografii na silikagelu (ethylacetát: petrolether = 1 : 1 až 1 : 0), čímž bylo získáno 21,9 g (výtěžek 98 %) olejovitého produktu.

!h NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,33-7,20 (m, 5 H, ArH), 4,76-4,62 (m, 2H, POCH), 4,58 (s, 2H, OCH₂Ph), 4,47 (S, 2H, OCH₂O), 3,94 (dd, J = 8,7, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,74 a 3,75-3,69 (dd

-22CZ 287745 B6 over m, J = 9,5, 13,6 Hz, 2H, CH₂P a H-2), 3,65-3,50 (m, 4 H, H-l a H-4), 1,80 (q, J = 6,2 Hz, 2H,H-3), 1,32-1,26 (m, 12H, POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 138,4, 128,3, 127,6, 96,4 (OCH2O), 77,9 (d, ³Jc, p = 13 Hz, C2), 72,7 (CH2Ph), 70,6 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 69,6 (C-l), 66,2 (C-4), 64,7 (d, Uc, p = 170 Hz, CH₂P), 54,9 (OCH3), 54,9 (OCH3), 31,5 (C-3), 23,6 (t, ³Jc, p = 6 Hz, POCHCH3).

MS (DCI, izobuten): m/e = 419 (MH⁺).

(S)-2-0-(diizopropylfosfonomethyl)-l-(?-methoxymethyl-l,2,4- butantriol

Hydroxid palladičitý na uhlíku (20%, 10 g) byl přidán do roztoku 4-O-benzyl-2-O(diizopropylfosfonomethyl)-l-0-methoxy methyl-l,2,4-butantriolu (21,9 g, 52,33 mmol) ve směsi ethanolu a cyklohexanu (každý po 200 ml). Výsledná směs byla 6 hodin zahřívána pod zpětným chladičem. Směs byla ochlazena na teplotu místnosti a filtrována. Filtrát byl odpařen a odparek byl čištěn kolonovou (flash) chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : methanolu = 20 : 1 až 10 : 1). Přitom bylo získáno 16,79 g (98% výtěžek) požadované sloučeniny ve formě oleje.

[a]²⁰ _D + 3,4° (c 2,33, MeOH).

^!H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,80-4,60 (m, 2H, 2 X POCH), 4,60 (s, 2H, OCH₂O), 4,03-3,80 a 3,67-3,48 (m, 7H, H-l, H-2, H-4, a CH₂P), 1,80-1,50 (m, 2H, H-3), 1,34-1,29 (m, 12H, POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 96,5 (OCH2O), 77,7 (d, ³Jc, p = 14 Hz, C-2), 71,1 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 70,2 (C-l), 64,7 (d, Úc, p = 167 Hz, CH2P), 57,9 (C-4), 55,0 (OCH3), 34,3 (c-3),

23,6 (t, ³Jc, p = 5 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 329 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro Ο^Η^ΟγΡ: C, 47,55; H, 8,90;

nalezeno: C, 47,50; H, 8,93.

(5)-2-O-(di izopropy lfosfonomethy 1)-1 -O-methoxymethy 1-3-buten-1,2-d iol

K roztoku (S)-2-0-(diizopropylfosfonomethyl)-l-methoxy methyl-l,2,4-butantriolu (9,0 g, 27,41 mmol)a 2-nitrofenyl-selenokyanidu (9,33 g, 41,12 mmol) vbezvodém tetrahydrofuranu (100 ml) byl pomalu při 0 °C pod dusíkem přidáván tributylfosfin (10,3 g, 41,12 mmol). Směs byla míchána 30 minut při 0 °C, potom 1 den při teplotě místnosti. Potom byla přidána voda (100 ml) a vodná vrstva oddělena a extrahována ethylacetátem (150 ml x 2). Spojené organické extrakty byly sušeny na síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl čištěn kolonovou (flash) chromatografií na silikagelu (ethylacetát : hexan = 1 : 1 až 1 :0 a potom ethylacetát : aceton 10: 1). Byl získán (»S)-2-C>-(diizopropylfbsfonomethyl)-l-0-methoxymethyl-4-(2-nitrophenyl) selenyl-l,2,4-butantriol ve formě hustého žlutého oleje.

^!H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,27 (dd, J = 1,5, 8,3 Hz, 1H, ArH), 7,60-7,49, 7,32-7,26, (m, 3H, ArH), 4,80-4,67 (m, 2H, POCH), 4,59 (s, 2H, OCH₂O), 3,99 (dd, J = 8,6, 13,7 Hz, 1H, CH₂P), 3,79 (dd, J = 9,3, 13,7 Hz, 1H, CH₂P), 3,79 (dd, J = 9,3, 13,7 Hz, 1H, CH₂P), 3,76-3,68 (m, 1H, H-2), 3,60 (dd, 1H, J = 5,1, 10,5 Hz, 1H, H-l), 3,56 (dd, J = 4,8, 10,5 Hz, 1H, H-l), 3,33

-23CZ 287745 B6 (s, 3 H, OCH₃), 2,90-3,01 a 3,17-3,06 (m, 2H, H-4), 2,06-1,98 (m, 2H, H-3), 1,26-1,34 (m, 12H, 4 X POCHCH3).

Získaný (.S)-2-O-diizopropylfosfonomethyl)-l-C>-methoxymethyl-4-(2-nitrofenyl)-selenyl1,2,4-butantriol byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (15 ml) a zreagován peroxidem vodíku (29%, 20 ml) při 0 °C. Roztok byl míchán 1 hod. při 0 °C a potom 16 hodin při teplotě místnosti. Pak byla přidána voda (40 ml) a ethylacetát (100 ml). Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (100 ml x 2). Spojené extrakty byly promyty nasyceným bikarbonátem sodným (50 ml) a sušeny nad síranem hořečnatým. Roztok byl odpařen a odparek čištěn kolonovou chromatografií na silikagelu (ethylacetát: hexan = 1 : 1 až 1 : 0). Bylo získáno 6,59 g (výtěžek 77 %) požadované sloučeniny ve formě oleje.

ÍH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 5,75-5,63 (m, 1H, H-3), 5,38-5,28 (m, 2H, H-2), 4,78-4,62 (m, 2H, 2 X POCH), 4,61 (s, 2H, OCH₂O), 4,05-3,96 (m, 1H, H-2), 3,79 (dd, J = 9,5, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,63 (dd, J = 8,4, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,62-3,50 (m, 2H, H-l), 3,57 (s, 3 H, OCH3), 1,35-1,28 (m, 12H, 4 X POCHCH3).

13c NMR (75 MHz, CDCI3) δ 134,5 (C-3), 119,8 (C-4), 96,5 (OCH₂O), 82,0 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2), 70,8 (t, J = 5 Hz, POCH), 69,7 (c-1), 63,0 (d, Uc, p = 169 Hz, CH₂P), 55,0 (OCH3), 23,7 (t, J= 5 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 311 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro Ci ιΗ₂₃05Ρ: C, 49,62; H, 8,71;

nalezeno: C, 49,26; H, 8,54.

(S)-2-O-(di izopropy lfosfonomethyl)-3-buten-1,2-diol (S)-2-0-(diizopropylfosfonomethyl)-l-0-methoxymethyl-3-buten-l,2-diol (3,45 g, 11,12 mmol) a kyselina kamforsulfonová (0,2 g, 0,8 mmol) byly smíchány v 45 ml methanolu. Získaný roztok byl zahříván 5 hodin pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl čištěn chromatograficky (ethylacetát: petrolether = 1 : 1 až 1 : 0, potom ethylacetát : methanol 20 : 1). Bylo získáno 2,73 g (92 %) žádané sloučeniny ve formě oleje.

^!H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 5,69-5,57 (m, 1H, H-3), 5,32-5,23 (m, 2H, H-4), 4,78-4,62 (m, 2H, POCH), 3,82 (dd, J = 8,8, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,56 (dd, J = 8,3, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,923,83 (m, 1H, H-2), 3,54 (d, J = 4,8 Hz, 2H, H-l), 3,13 (b s, 1H, OH), 1,34-1,26 (m, 12H, 4 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 134,1 (C-3), 119,0 (C-4), 84,0 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2), 70,5 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 70,7 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 64,3 (C-1), 62,8 (d, ^JJc, p = 170 Hz, CH₂P), 23,3 (t, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan-DCI): m/e = 267 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro Cj ιΗ₂₃05Ρ: C, 49,62; H, 8,71;

nalezeno: C, 49,26; H, 8,54.

-24CZ 287745 B6 (S)-methansulfonyl-2-(diizopropylfosfonomethyl)-3-buten (5)-2-(9-(diizopropylfosfonomethyl)-3-buten-l,2-diol (2,62 g, 9,84 mmol) byl míchán s triethylaminem (1,99 g, 19,68 mmol) a 4-dimethylaminopyridinem (10 mg) v 30 ml methylenchloridu. K roztoku byl při 0 °C pomalu přidáván mesylchlorid (1,35 g, 11,81 mmol). Směs byla míchána 30 minut při 0 °C, potom dalších 30 minut při teplotě místnosti. Byly přidány nasycený bikarbonát sodný (50 ml) a methylenchlorid (50 ml). Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (75 ml x 2). Spojené methylenchloridové extrakty byly sušeny na síranem hořečnatým. Roztok byl odpařen, odparek čištěn kolonovou chromatografií (ethylacetát : petrolether = 1 : 1 až 1 :0, potom ethylacetát : aceton = 5 :0 až 5 : 1). Získáno bylo 3,27 g (výtěžek 97 %) v názvu uvedené sloučeniny ve formě oleje.

^]H NMR (300 MHz, CDC1₃), δ 5,69-5,58 (m, 1H, H-3), 5,45-5,39 (m, 2H, H-4), 4,77-4,62 (m, 2H, POCH), 4,20 (d, J = 5,7 Hz, 2H, H-l), 4,17-4,05 (m, 1H, H-2), 3,77 (dd, J = 9,7, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,57 (dd, J = 8,8, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,05 (s, 3H, SCH3), 1,34-1,23 (m, 12H, 4 X POCHCH3).

13_C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 131,8 (C-3), 121,7 (C-4), 80,3 (d, ³J_C, p = 13 Hz, C-2), 70,8 a

70,7 (t over s, ²Jc, p = 6 Hz, POCH a C-l), 62,8 (d, ^]Jc, p = 171 Hz, CH₂P), 37,33 (SCH3), 23,5 (d, 3j_c, p = 5 Hz, POCHCH3).

MS (FAB): m/e = 344 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C^H^OyPS: C, 41,85; H, 7,32;

nalezeno: C, 41,89; H, 7,32.

(ó)-2-amino-6-chlor-9-[2-(diizopropylfosfonomethoxy)-3-butenyl]purin (S)-methansulfonyl-2-(diizopropylfosfonomethyl)-3-buten (1 g, 2,90 mmol) byl míchán s 2amino-6-chlorpurinem (0,59 g, 3,48 mmol) a uhličitanem česným (1,42 g, 4,35 mmol) v 8 ml suchého Ν',Ν'-dimethylformamidu. Směs byla 5 hodin míchána při 95 - 100 °C pod dusíkovou atmosférou. Směs byla ponechána vychladnout na teplotu místnosti a zfiltrována. Rozpouštědlo bylo odstraněno za mírného tlaku. Zbytek byl čištěn chromatografií v koloně na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 3:1 až 0: 1; podruhé methylenchlorid : methanol =15:1). Bylo získáno 675 mg (výtěžek 56 %) produktu, který byl vykrystalizován ze směsi ethylacetát diethylether a získáno 502 mg titulní sloučeniny. Bod tání 106- 108 °C.

Ή NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,90 (s, 1H, H-8), 5,70-5,54 (m, 1H, H-3'), 5,41-5,36 (m, 2H, H4'), 4,71-4,55 (m, 2H, POCH), 4,27-4,05 (m, 3H, H-Γ a H-2'), 3,49 (dd, J = 8,5, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 1,29-1,19 (m, 12H, POCHCH3).

!3cNMR(75 MHz, CDCI3) δ 159,3, 154,1, 151,3, 143,8 (G), 133,2 (C-3'), 124,9 (G), 121,9 (C4'), 80,7 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2'), 71,1 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 62,9 (d, ^JJc, p = 170 Hz, CH2P), 46,9 (C-Γ), 23,7 (d, ³JC, p = 4 Hz, POCHCH3).

MS (FAB): m/e = 418 (MH⁺), 456 (MK⁺).

(S)-9-[(2-vinyl-2-(fosfonomethoxy)ethyl]guanin ((S)-2'-vinyl-PMEG)) ((S)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin))

Bromtrimethylsilan (1,82 g, 12,0 mmol) byl pomalu přidáván k roztoku (5)-2-aminp-6-chlor9-[2-(diizopropylfosfonomethoxy)-3-butenyl]purinu (0,5 g, 1,2 mmol) v 10 ml bezvodého

-25CZ 287745 B6 acetonitrilu v dusíkové atmosféře. Roztok byl míchán při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl sušen ve vakuu. K odparku byly přidány voda (2 ml) a aceton (15 ml). Směs byla 14 hodin míchána při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl promyt acetonem a vodou a potom mírně zahříván pod zpětným chladičem v 20 ml 10% kyseliny chlorovodíkové po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl čištěn chromatografií na koloně v obrácené fázi (Cl8, voda : methanol = 1 : 0 až 10 : 1). Surový produkt byl rekrystalován z vody při zisku 186 mg žádané sloučeniny v krystalické formě. Matečný louh byl koncentrován a krystalizován, čímž se získalo dalších 62 mg produktu (celkový výtěžek 66 %). Teplota tání 275 °C.

[oc]²⁰ _D + 50,9° (c 0,46, IN HC1).

^!H NMR (300 MHz, D₂O) δ 8,82 (S, 1H, H-8), 5,79-5,68 (m, 1H, H-3'), 5,44-5,37 (m, 2H, H-4'), 4,45-4,36 a 4,30-4,22 (m, 3H, H-2' a Η-Γ), 3,69 (dd, J = 9,3, 13,0 Hz, 1H, CH₂P), 3,38 (dd, J = 9,3,13,0 Hz, 1H,CH₂P).

13_C NMR (75 MHz, D₂O) δ 161,8, 157,5, 155,0, 144,0, 136,9 (C-3'), 124,2 (C-4’), 117,5 (G),

83,8 (d, ³Jc, p = 13 Hz, C-2'), 67,8 (d, 1 Jc, p = 158 Hz, CH₂P), 50,0 (C-Γ).

UV (H₂O): 252 nm (e = 13,400).

MS (FAB): m/e = 316 (MH⁺).

IR (KBr): 3600-2600 (NH, OH), 1712 (C=O), 1668, 1650 (C=C, C=N), 1106, 1050, 992 (P-O) cm*l.

Analýza: vypočteno pro C10H14N5O5P: C, 38,10; H, 4,48; N, 22,21;

nalezeno: C, 37,95; H, 4,41; N, 22,05.

Příklad 2 (R)-9-[(2-vinyl-2-fosfonomethoxy)ethyl]guanin ((R)-2'-vinyl PMEG)) ((R)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]guanin))

Tato sloučenina byla syntetizována za použití stejného postupu jako v příkladu 1 z (R)-l,2,4butantriolu, připraveného z kyseliny D-jablečné postupem, popsaným v Can. J. Chem. 62, 2146 (1984). Teplota tání 278 °C.

[α]2θ₀ - 27,2° (c 0,41, H₂0).

[a]²⁰ _D - 46,7° (c 0,30, IN HC1).

UV (H₂O): 252 nm (e = 12,800).

MS (FAB): m/e = 316 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C1QH14N5O5P: C, 38,10; H, 4:48; N, 22,21;

nalezeno: C, 37,89; H, 4,48; N, 21,92.

-26CZ 287745 B6

Příklad 3 (S)-9-[(2-vinyl-2-fosfonomethoxy)ethyl]cytosin ((S)-2'-vinyl PMEC) ((S)-9-[2-fosfonomethoxy)-3-butenyl]cytosin) (S)-[2-(diizopropylfosfonomethoxy)-3-butenyl]cytosin (S)-methansulfonyl-2-(diizopropylfosfonomethyl)-3-buten (1 g, 2,9 mmol) byl smíchán s cytosinem (0,39 g, 3,48 mmol) a uhličitanem česným (1,42 g, 4,35 mmol) v 8 ml suchého Ν’,Ν'dimethylformamidu. Směs byla míchána 4 hodiny při 95 °C v atmosféře dusíku. Směs se nechala ochladnout na teplotu místnosti a byla zfiltrována. Pevná látka byla promyta methylenchloridem (50 ml). Filtrát byl odpařen a odparek byl čištěn kolonovou (flash) chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : methanol = 15 : 1 až 5 : 1). Bylo získáno 427 mg (výtěžek 41 %) produktu, který byl vykrystalizován z ethylacetát-etheru s výsledkem 345 mg žádané látky ve formě krystalů. Teplota tání 137 - 138 °C.

[apO_D + 84,0° (c 0,96, CH₂C1₂).

^]H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,39 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H-6), 5,77 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H-5), 5,72, 7,58 (m, 1H, H-3’), 5,46-5,32 (m, 2H, H-4’), 5,74-5,59 (m, 2H, POCH), 4,22-4,10 (m, 2H, Η-Γ), 3,74 (dd, J = 9,5, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,45 a 3,54-3,41 (dd over m, J = 9,5, 13,6 Hz, 2H, CH₂P a H-2'), 1,36-1,22 (m, 12H, 4 X POCHCH₃).

13c NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 166,6 (C-2), 156,9 (C-4), 146,8 (C-6), 133,8 (C-3'), 128,8 (C4'), 94,2 (C-5), 80,9 (d, ³Jc, p = 13,6 Hz, H-2'), 63,0 (d, ^]Jc, p = 170 Hz, CH2P), 70,9 (t, ²Jc, p = Hz, POCH), 53,1 (Γ- C), 23,7 (t, ³JC, p = 5 Hz, POCHCH₃).

MS (FAB): m/e = 360 (MH⁺), 398 (MK⁺).

Analýza: vypočteno pro Ci5H₂6N₃O5P: C, 50,14; H, 7,29; N, 11,69;

nalezeno: C, 49,96; H, 7,12; N, 11,68.

(S)-9-[2-(fosfonomethoxy)-3-butenyl]cytosin

K roztoku (S)-[2-(diizopropylfosfonomethoxy)-3-butenyl]cytosinu (377 mg, 1,05 mmol) v 8 ml bezvodého acetonitrilu byl pomalu v dusíkové atmosféře přidán bromtrimethylsilan (1,91 g,

12,6 mmol). Roztok byl míchán 16 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek vysušen ve vakuu. K odparku byla přidána voda (2 ml) a aceton (10 ml). Směs byla míchána 24 hodin při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla byl odparek triturován acetonem a čištěn chromatografícky v obrácené fázi (Cl8, voda : methanol = 10:1 až 5 : 1). Zachycený produkt byl rekiystalován z methanolu a vody. Bylo získáno 193 mg (výtěžek 67 %) žádané sloučeniny ve formě krystalů. Teplota tání 294 °C.

[a]20_D +84,0° (c 1,13, H₂O).

!h NMR (300 MHz, D₂O) δ 3,38 (dd, J = 9,2, 13,2 Hz, 1H, CH₂P), 3,67 (dd, J = 9,3, 13,2 Hz, 1H, CH₂P), 3,82 (dd, J = 7,9, 13,0 Hz, 1H, Η-Γ), 4,08 a 4,05-4,17 (dd over m, J = 3,5, 14,0 Hz, 2H, H-1'a H-2'), 5,37-5,44 (m, 2H, H-4'), 5,65-5,78 (m, 1H, H-3’, 6,11 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-5), 7,86 (d, J = 7,7 Hz, 1H, 6-CH).

¹²C NMR (300 MHz, D₂O) δ 55,63 (Γ-C), 67,85 (d, J = 12,4 Hz, CH₂P), 83,84 (d, J = 12,4 Hz, 2’-C), 98,14 (5-C), 123,70 (4’-C), 137,01 (3’-C), 152,42 (6-C), 158,96 (4-C), 167,72 (2-C).

-27CZ 287745 B6

Analýza: vypočteno pro C9H14N3O5P: C, 39,28; H, 5,13; N, 15,27;

nalezeno: C, 39,10; H, 5,06; N, 15,19.

MS (izobutan, DCI): m/e = 296 (MH⁺).

Příklad 4 (S)-9-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]guanin (S)-2'-azidomethyl-PMEG (7ř)-3-azido-2-(Xdiizopropylfosfonomethoxyl)l-C>-methansulfonyl-l,2-propandiol

K roztoku (R)-3-azido-2-0-(diizopropylfosfonomethoxyl}-l,2-propandiolu (6,4 g, 21,67 mmol) a triethylaminu (4,39 g, 43,4 mmol) v methylenchloridu (100 ml) byl pomalu přidáván methansulfonylchlorid (2,98 g, 26 mmol) při 0 °C v dusíkové atmosféře. Výsledný roztok byl 1 hodinu míchán při 0 °C a potom pomalu ohřát během hodiny na teplotu místnosti. K roztoku byla přidána voda (100 ml). Vodná vrstva byla oddělena a extrahována methylenchloridem (150 ml x 2). Spojené methylenchloridové extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek vyčištěn kolonovou (flash) chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 10:1 až 3 : 1). Bylo získáno 7,21 g (výtěžek 87 %) žádané sloučeniny ve formě oleje.

[a]²⁰ _D + 2,3° (c 16,76, CH₂C1₂).

^!H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,78-4,63 (m, 2H, POCH), 4,32 (dd, J = 4,6, 11,2 Hz, 1H, H-l), 4,26 (dd, J = 5,1, 11,2 Hz, 1H, H-l), 3,86 a 3,87-3,81 (d over m, J = 8,6 Hz, 3 H, CH₂P a H-2), 3,50 (dd, J = 4,7, 13,1 Hz, 1H, H-3), 3,42 (dd, J = 5,7, 13,1 Hz, 1H, H-3), 3,05 (s, 3H, SCH3), 1,30 (d, J = 6,2, Hz, 12H, 4 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) 8 78,1 (d, ³Jc, p = 10 Hz, C-2), 71,3 (t, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 65,2 (d,¹ Jc, p = 169 Hz, CH₂P), 50,5 (C-3), 37,2 (SCH3), 23,6 (t,³Jc, p = 5 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e= 374 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro Fj jH^^OyPS: C, 35,39; H, 6,48; N, 11,25;

nalezeno: C, 35,15; H, 6,29; N, 11,09.

(S)-2-amino-9-[3-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]-6-chlorpurin (19) (Jř)-3-azido-2-O-(diizopropylfosfonomethyl)-l-0-methansulfonyl-l,2-propandiol (2,0 g, 5,22 mmol) byl míchán s 2-amino-6-chloropurinem (3,40 g, 10,43 mmol) a uhličitanem česným (3,92 g, 12,0 mmol) v 15 ml bezvodého Ν',Ν'-dimethylformamidu. Směs byla míchána 3 hodiny při 90 °C v dusíkové atmosféře, potom ponechána vychladnout na teplotu místnosti a zfíltrována. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn 2x (flash) chromatografií v koloně na silikagelu (nejdříve - methylenchlorid : aceton = 3 :1 až 0:1; poté methylenchlorid : methanol = 15 : 1 až 10: 1). Byl získán hustý olej, který krystalizoval z ethylacetátu a diethyletheru, čímž se získalo 1,34 g (58 %) sloučeniny ve formě krystalů. Teplota tání 126 - 128 °C.

[α]²⁰β - 9,9° (c 0,89, MeOH).

ΪΗ NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,87 (s, 1H, H-8), 5,45 (br s, 2H, NH₂), 4,72-4,56 (m, 2H, 2 X POCH), 4,26 (dd, J = 4,3, 14,6 Hz, 1H, Η- 1'), 4,18 (dd, J = 5,6, 14,6 Hz, 1H, H-l’), 3,91-3,82 (m, 1H, H-2'), 3,71 (dd, J = 8,9, 13,9 Hz, 1H, CH₂P), 3,79 (dd, J = 8,6, 13,9 Hz, 1H, CH₂P), 3,43

-28CZ 287745 B6 (dd, J % 5,1, 13,2 Hz, 1H, H-3'), 3,25 (dd, J = 4,9, 13,2 Hz, 1H, H-3'), 1,27-1,19 (m, 12H, 4 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDC13) δ 159,4, 154,3, 151,4, 143,6, 124,8, 77,6 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2'), 71,2 (t, 2jc, p = 4 Hz, POCH), 65,0 (d, Úc, p = 170 Hz, CH₂P), 47,1 a 45,4 (C-1'a C-4'), 30,7 (C3’), 23,7 (d, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH3).

Analýza: vypočteno pro C^^zjClNgC^PS: C, 40,32; H, 5,41; N,25,08;

nalezeno: C, 40,36; H, 5,52; N, 24,94.

(S)-9-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]guanin ((S)-2-azidomethyl PMEG) (S)-2-amino-9-[3-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]-6-chloropurin (1,0 g, 2,24 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml acetonitrilu a pomalu reagován s bromtrimethylsilanem (3,43 g, 22,40 mmol) v dusíkové atmosféře. Reakční směs se nechala míchat 14 hodin při teplotě místnosti a potom bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl vysušen ve vakuu a pak reagován s acetonem (8 ml) a vodou 2 ml). Výsledná směs byla míchána 6 hodin při teplotě místnosti. Směs byla zfiltrována a zbytek promyt acetonem a vodou. Výsledná pevná látka v 10 ml 2N HC1 byla po dobu 5 hodin mírně zahřívána pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a odparek rekrystalován z vody, přičemž bylo získáno 533 mg požadované sloučeniny ve formě bledožlutých krystalů. Matečný louh byl koncentrován, čímž se získalo dalších 72 mg sloučeniny (celkový výtěžek 79 %). Teplota tání 263 °C.

[a]²⁰ _D-18,4° (c 0,38, IN HC1).

ΪΗ NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,69 (s, 1H, H-8), 4,13 (dd, J = 5,3, 14,8 Hz, 1H, Η-Γ), 4,06 (dd, J = 5,3, 14,8 Hz, 1H, Η-Γ, 3,79- 3,74 (m, 1H, H-2'), 3,46-3,40 (m, 2H, CH₂P a H-3'), 3,34 (dd, J = 9,4, 12,2 Hz, 1H, CH₂P), 3,18 (dd, J = 4,7, 13,3 Hz, 1H, H-3').

¹³C NMR (75 MHz, D2O-NaOD) δ 171,7, 164,6, 155,1, 142,7, 120,5, 80,8 (d, ³Jc, p = 11 Hz, C-2'), 71,1 (d, Úc, p = 151 Hz, CH2P), 53,7 (C-3'), 46,5 (C-Γ).

IR (KBr): 3600-2600 (NH, OH) 2110 (N3), 1712 (C=O), 1685, 1650 (C=C, C=N), 1106, 1000, 958^-0)011-¹.

MS (FAB): m/e = 345 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C9H]3NgO5P.l/2H₂O: C, 30,60; H, 4,00; N, 31,72;

nalezeno: C, 30,67; H, 3,79; N, 31,83.

Příklad 5 (R)-9-[3-azido-2-fosfonomethoxy)propyl]guanin ((R)-2'-azidomethyl PMEG) ((R)-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]guanin)

Uvedená sloučenina byla připravena za použití postupu popsaného v příkladu 4, s tím rozdílem, že byl použit (S) chirální výchozí materiál, (S)-3-0-benzyl-2-Ó-(diizopropylfosfonomethoxy!)-l-0-(methansulfonyl)glycerin.

-29CZ 287745 B6 [α]²θ₀+16,7° (c 0,63, IN HC1).

MS (FAB): m/e = 345 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C9H ] ₃N 3()5 P. 2/3 H₂O: C, 30,34; H, 4,05; N, 31,45;

nalezeno: C, 30,41; H, 3,84; N, 31,40.

Příklad 6 (S)-9-[3-azido-2-fosfonomethoxy)propyl]cytosin (S)-2-azidomethyl-PMEC (»S)-[3-azido-2-[(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]cytosin (7?)-3-azido-2-<9(diizopropylfosfonomethoxyl)-l-0-methan sulfonyl-l,2-propandiol (2,0 g, 5,22 mmol) byl míchán s cytosinem (0,7 g, 6,26 mmol) a uhličitanem česným (3,40 g, 10,43 mmol) v 15 ml bezvodého Ν',Ν'-dimethylformamidu. Směs byla tři hodiny míchána při 90 °C v dusíkové atmosféře, potom ponechána vychladnout na teplotu místnosti a zfiltrována. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn (flash) kolonovou chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : methanol = 15:1 až 5 : 1), čímž se získalo 1,00 g (49 %) žádané sloučeniny ve formě hustého oleje.

[a]²⁰D-37,6° (c 2,41, MeOH).

JH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H-5), 5,69 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H-6), 4,754,61 (m, 2H, 2 X POCH), 4,03 (dd, J = 3,7, 13,5 Hz, 1H, Η-Γ), 3,86 a 3,87-3,82 (dd over m, J = 8,7, 13,6 Hz, 2H, CH₂P a H-2'), 3,74 (dd, J = 6,7, 13,5 HZ, 1H, Η-Γ, 3,69 (dd, J = 9,4, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,62 (dd, J = 3,3, 13,3 Hz, 1H, H-3'), 3,26 (dd, J = 5,2, 13,3 Hz, 1H, H-3’), 1,30 (d, J = 6,3 Hz, 2 X POCHCH3), 1,28 (d, J = 6,1 Hz, 2 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 166,7, 157,1, 146,7, 94,8, 79,0 (d, ³Jc, p = 11 Hz, C-2', 71,4 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 71,3 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 65,2 (d, ^JJc, p = 169 Hz, CH₂P), 51,4,

50,6 (C-Γ a C-2'), 23,7 (t, ³Jc, p = 5 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 389 (MH⁺).

(S)-9-[3-azido-2-fosfonomethoxy)propyl]cytosin (S)-[3-azido-(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]cytosin (0,85 g, 2,2 mmol) byl rozpuštěn v 9 ml bezvodého acetonitrilu a pomalu byl přidáván bromtrimethylsilan (4,06 g, 37,7 mmol) v dusíkové atmosféře. Reakční směs se nechala míchat 12 hodin při teplotě místnosti a potom bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl sušen ve vakuu a pak přidány aceton (10 ml) a voda (2 ml). Vzniklá směs byla míchána 6 hodin při teplotě místnosti. Směs byla filtrována a promyta acetonem a vodou. Spojené pevné látky byly rekrystalizovány z roztoku voda- methanol, čímž bylo získáno 370 mg (výtěžek 55 %) žádané sloučeniny ve formě bílých krystalů. Teplota tání 210 °C.

[a]²⁰D-75,0° (c 0,32, IN HC1).

!h NMR (300 MHz, D₂O) δ 7,73 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-5), 6,00 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-6), 4,00 (dd, J = 6,6, 17,7 Hz, 1H, Η-Γ), 3,81-3,72 (m, 2H, H-Γ a H-2’), 3,66 (dd, J = 9,0, 13,1 Hz, 1H, CH₂P), 3,57 (dd, J = 3,9,13,5 Hz, 1H, H-3'), 3,42 (dd, J = 9,5,13,1 Hz, 1H, CH₂P), 3,28 (dd, J = 3,6, 13,5 Hz, 1H, H-3').

-30CZ 287745 B6 ¹³C NMR (75 MHz, D2O) δ 170,0, 151,7, 150,7, 95,2, 78,6 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2'), 66,9 (d, Uč, p = 158 Hz, CH2P), 51,2, 51,0 (C-Γ a C-2’).

IR (KBr): 3500-2500 (OH, NH), 2110 (N₃), 1722 (C=O), 1680 (C=N, C=C), 1116, 1060, 930 (PO) cm‘I.

MS (FAB): m/e = 305 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro CgH^NgOjP: C, 31,59; H, 4,31; N, 27,62;

nalezeno: C, 31,37; H, 4,52; N, 27,90.

Příklad 7 (R) -9-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]cytosin

Uvedená sloučenina byla připravena za použití postupů podle příkladu 6, ale začínající s výchozím materiálem (S)-3-azido-2-č>-(di>zopropylfosfonomethoxy)-l -O-methansulfonyl-

I, 2-propandiol.

[a]²⁰ _D + 60,6° (c 0,46, IN HCI).

MS (FAB): m/e = 305 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro CgH]₃N6O5P.l/3H₂O: C, 30,93; H, 4,44; N, 27,06;

nalezeno: C, 30,83; H, 4,41; N, 27,07.

Příklad 8 (S) -9-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]thymin ((S)-2'-azidomethyl-PEMT) (S)-[3-azido-2-[(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]-4-0-methylthymin (/?)-3-azido-l-O-methansulfonyl-2-C>-(diizopropylfosfonomethyl)-l,2-propandiol (1 g, 2,61 mmol) byl míchán s 4-O-methylthyminem (0,44 g, 3,13 mmol) a uhličitanem česným (1,27 g, 3,91 mmol) v 10 ml bezvodého Ν',Ν'-dimethylformamidu. Směs byla míchána 5 hodin při 95 °C v dusíkové atmosféře. Směs byla ponechána vychladnout na teplotu místnosti a zfiltrována. Pevná látka byla promyta methylenchloridem. Filtrát byl odpařen a odparek byl čištěn (flash) chromatografii v koloně na silikagelu (methylenchlorid : methanol = 10:1 až 5: 1) a bylo získáno 270 mg (výtěžek 27 %) žádané sloučeniny ve formě hustého oleje.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,41 (s, 1H, H-6), 4,63-4,78 (m, 2H, 2 X POCH), 4,08 (dd, J = 3,4, 13,4 Hz, Η-Γ), 3,96 (s, 3 H, OCH₃), 3,96-3,80 (m, 3 Η, H-Γ, H-2’ a CH₂P), 3,71-3,62 (m, 2H, CH₂P a H-3'), 3,26 (dd, J = 5,2, 13,5 Hz, H-3’), 1,93 (s, 3 H, CH₃), 1,32-1,27 (m, 12H, 2 X POCHCH₃).

¹³C NMR (75 MHz, CDC13) δ 171,1 (C-2), 156,8 (C-4), 145,8 (C- 6), 104,2 (C-5), 78,8 (d, ³Jc, p = 10 Hz, C-2'), 71,0 (d, ²Jc, p = 7 HZ, POCH), 70,9 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 65,2 (D, Uc, p = 169 Hz, CH2P), 54,2 (OCH₃), 51,3 a 50,6 (C-Γ a C-3'), 23,4 (t, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH₃),

II, 4(5-CH₃).

MS (izobutan, DCI): m/e = 417 (MH⁺).

-31 CZ 287745 B6 (S)-9-[3-azido-2-fosfonomethoxy)propyl]thymin (S)-[3-azido-2-[(diizopropylfosfonomethoxy)propyl]-4-O-methylthymin (200 mg, 0,52 mmol) byl rozpuštěn v 5 ml acetonitrilu a pomalu reagován s bromtrimethylsilanem (1,19 g, 7,8 mmol) v dusíkové atmosféře. Reakční směs se nechala při teplotě místnosti 14 hodin míchat a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl vysušen ve vakuu a potom k němu byl přidán aceton (5 ml) a voda (1 ml). Výsledná směs byla míchána 16 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl čištěn chromatografií v obrácené fázi (Cl8, voda : methanol = 10 : 0 až 5 : 1) a získalo se 103 mg žádané sloučeniny ve formě bílé pěny.

[a]20_D. 25,0° (c 0,22, H₂O).

^!H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,20 (s, 1H, H-6), 3,77 (dd, J = 3,1, 13,9 Hz, 1H, Η-Γ), 3,68 (dd, J = 8,9, 13,4 Hz, 1H, CH₂P), 3,64-3,57 (m, 1H, H-2'), 3,57-3,47 (m, 2H, H-Γ a CH₂P), 3,35 (dd, J = 4,0, 13,3 Hz, 1H, H-3‘), 3,11 (dd, J = 4,9, 13,3 Hz, 1H, H-3'), 1,61 (s, 3H, CH3).

¹³C NMR (75 MHz, CD3OD) δ 167,7 (C-2), 153,8 (C-4), 145,0 (C- 6), 111,2 (C-5), 80,7 (d, ³Jc, p = 11 Hz, C-2’), 66,7 (d, ^JJc, p = 166 Hz, CH₂P), 52,6 a 50,6 (C-Γ a C-3'), 12,4 (5-CH₃).

IR (KBr): 3600-2600 (NH, OH), 2108 (N3), 1678 (C=O), 1608 (C=C, C=N), 1114, 1004, 940 (PO) cm'l.

MS (FAB): m/e = 320 (MH⁺).

Příklad 9 (R) -9-[3-azido-2-fosfonomethoxy)propyl]thymin

Uvedená sloučenina byla připravena za použití postupů podle příkladu 8 s tím rozdílem, že byl použit (S) chirální výchozí materiál.

Příklad 10

Aminomethylové sloučeniny z příkladů 4 až 9

Aminomethylové analogy sloučenin z příkladů 4, 5, 6, 7, 8 a 9 lze připravit redukcí sloučenin z příkladů 4 až 9.

Příklad 11

Syntéza (S)-9-[4-azido-2-(fosfonomethoxy)butyl]guanin ((S)-azidoethyl-PMEG)) (S) -2-C)-(diizopropylfosfonomethyl)-4-0-methansulfonyl-l-0-methoxymethyl-l,2,4butantriol

Mesylchlorid (2,14 g, 18,64 mmol) byl pomalu přidán k roztoku (S)-2-0-(diizopropylfosfonomethyl)-l-O-methoxymethyl-l,2,4-butantriolu v 50 ml methylenchloridu při 0 °C v dusíkové atmosféře. Směs byla míchána 5 minut při 0 °C a poté byl během 30 minut přidán triethylamin. Směs byla potom míchána 30 minut při 0 °C a přidán nasycený bikarbonát (50 ml). Vodný roztok byl extrahován methylenchloridem (50 ml x 2). Spojené extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Filtrací a odpařením byl získán odparek, který byl čištěn (flash) chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 5 : 1 až 2 : 1. Bylo získáno 6,22 g (99% výtěžek) žádané sloučeniny ve formě oleje.

-32CZ 287745 B6 [a]²⁰ _D -17,9° (c 0,67, MeOH).

NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,62-4,88 (m, 2H, 2 X POCH), 4,58 (s, 2H, OCH₂O), 4,28-4,42 (m, 2H, H-4), 3,95 (dd, J = 8,8, 13,7 Hz, 1H, CH₂P), 3,73 a 3,67-3,74 (dd over m, J = 9,3, 13,7 Hz, 2H, CH₂P a H-2), 3,51-3,61 (m, 2H, H-l), 3,32 (s, 3H, OCH3), 3,00 (s, 3H, CH₃SO₂), 1,83-

2.30 (m, 2H, H-3), 1,27-1,31 (m, 12H, POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 96,3 (OCH2O), 76,6 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2), 70,7 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 70,6 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 68,7 (C-4), 66,4 (1-C), 64,5 (d, Úc, p = 170 Hz, CH2P), 54,9 (OCH3), 36,71 (SCH3), 31,2 (C-3), 23,5 (t, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 407 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro Ciz^jOgPS: C, 41,37; H, 7,69;

nalezeno: C, 41,54; H, 7,39.

(S)-4-azido-2-O-(diizopropylfosfonomethoxy)-l_J2-butandiol (S)-2-0-(diizopropyIfosfonomethyI)4-0-methansulfonyl-l-0-methoxymethyl-l,2,4butantriol (5 g, 12,30 mmol) a azid sodný (1,2 g, 18,45 mmol) v 10 ml bezvodého Ν',Ν'dimethylformamidu byly míchány 3 hodiny při 130 °C v dusíkové atmosféře. Směs byla ochlazena na teplotu místnosti a filtrována. Filtrát byl odpařen a odparek čištěn (flash) chromatografií (methylenchlorid : methanol = 20 : 1 až 10 : 1). Byl získán (S)-4-azido-l-Omethoxymethyl-2-O-(diizopropylfosfonomethoxy)]-l,2-butandiol.

^]H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,79-4,60 (m, 2H, POCH), 4,59 (s, 2H, OCH₂O), 3,96 (dd, J = 8,7, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,74 (dd, J = 9,5, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,69-3,61 (m, 1H, H-2), 3,55 (d, J = 4,5 Hz, 2H, H-l), 3,43 (t, J = 6,8 Hz, 2H, H-4), 3,33 (s, 3 H, OCH 3), 1,80-1,73 (m, 2H, H-3),

1.30 (d, J = 6,2 Hz, 6 H, POCHCH3), 1,29 (d, J = 6,2 Hz, 6 H, POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) 5 96,5 (OCH2O), 77,7 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2), 70,8 (t, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 69,1 (C-l), 64,7 (d, Úc, p = 170 Hz, CH2P), 55,1 (OCH3), 47,4 (C-4), 30,8 (C-3),

23,6 (t, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH3).

MS (FAB): m/e = 354 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C^H^NjOgP: C, 44,19; H, 7,99; N, 11,89;

nalezeno: C, 43,90; H, 8,02; N, 11,50.

Získaný (S)-4-azido-l-0-methoxymethyl-2-0-(diizopropyl fosfonomethoxy)]-l,2-butandiol byl reagován s 50 ml methanolu a 0,5 g kyseliny kafrsulfonové. Výsledná směs byla 16 hodin zahřívaná pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl čištěn (flash) chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 5:1 až 2 : 1). Bylo získáno 2,53 g (výtěžek 67 %) požadované sloučeniny ve formě oleje.

^JH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,81-4,63 (m, 2H, POCH), 3,91 (dd, J = 7,2, 14,1 Hz, 1H, CH₂P), 3,73 a 3,76-3,68 (dd over m, J = 9,1, 14,1 Hz, 2H, CH₂P a H-l), 3,58-3,46 (m, 2H, H-2 a H-l), 3,40 (d, J = 5,9 Hz, 1H, H-4), 3,37 (d, J = 5,9 Hz, 1H, H-4), 1,88- 1,60 (m, 2H, H-3), 1,31 (d, J = 4,8 Hz, 6 H, 2 X POCHCH3), 1,29 (d, J = 4,8 Hz, 6 H, 2 X POCHCH3).

-33CZ 287745 B6

13_C NMR (75 MHz, CDC1₃) 8 80,8 (d, 3j_c, p = 9 Hz, C-2), 71,5 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 71,1 (d, ²Jc, p = 7 Hz, POCH), 64,7 (d, Uc, p = 170 Hz, CH₂P), 63,6 (C-l), 47,6 (C-4), 30,4 (C-3),

23,6 (m, POCHCH3).

MS (DCI, izobuten): m/e = 309 (MH⁺).

IR (čistý): 3388 (OH), 2098 (N3), 1240 (P=O), 1106 (C-O), 994 (P-O-C).

Analýza: vypočteno pro Cj ]Η₂4Ν₃θ5Ρ: C, 42,71; H, 7,82; N, 13,58;

nalezeno: C, 42,74; H, 7,87; N, 13,32.

(S)-4-azido-2-0-(diizopropylfosfonomethoxy)-l-0-methansulfonyl-l,2-butandiol

K roztoku (5)-4-azido-2-0-[(diizopropylfosfonomethoxy)]-l,2-butandiolu (2,50 g, 8,08 mmol) v 30 ml methylenchloridu byl pomalu přidáván mesylchlorid (1,11 g, 9,7 mmol) při 0 °C.

V průběhu 30 minut byl přidán triethylamin (1,64 g, 16,16 mmol). Směs byla míchána 30 minut při 0 °C a přidán nasycený bikarbonát sodný (40 mmol). Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (75 ml x 2). Spojené extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek čištěn chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 5 : 1 až 2 : 1). Bylo získáno 3,05 g (výtěžek 97 %) žádané sloučeniny ve formě oleje.

^JH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,80-4,64 (m, 2H, 2 X POCH), 4,34 (dd, J = 3,6, 11,2 Hz, 1H, H1), 4,26 (dd, J = 5,3, 11,2 Hz, 1H, H-l), 3,87 (dd, J = 8,8, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,75 a 3,83-3,74 (dd a m, J = 9,7, 13,6 Hz, 2H, CH₂P a H-2), 3,48 (t, J = 6,6 Hz, 2H, H-4), 3,06 (s, 3 H, SCH3), 1,90-1,68 (m, 2H, H-3), 1,32 (d, J = 6,2, Hz, 6 H, 2 X POCHCH3), 1,31 (d, J = 6,2, HZ, 6 H, 2 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) 5 76,7 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C-2), 71,1 (d,²Jc, p = 6 Hz, POCH), 71,0 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 69,9 (C-l), 65,1 (d, Úc, p = 170 Hz, CH₂P), 47,0 (C-4), 37,3 (SCH3),

30,2 (C- 3), 23,7 (d, ³Jc, p = 5 Hz, POCHCH3).

MS (DCI, izobuten): m/e = 374 (MH⁺).

IR (čistý): 3388(OH), 2098 (N₃), 1240 (P=O), 1106 (C-O), 994 (P-O-C).

Analýza: vypočteno pro C j jH^^OjP: C, 42,71; H, 7,82; N, 13,58;

nalezeno: C, 42,74; H, 7,87; N, 13,32.

(5)-4-azido-2-O-(di izopropylfosfonomethoxy)-1 -O-methansu lfony 1-1,2-butand iol

K. roztoku (S)-4-azido-2-O-[(diizopropylfosfonomethoxy)]-l,2-butandiolu (2,50 g, 8,08 mmol) v 30 ml methylenchloridu byl pomalu přidáván mesylchlorid (1,11 g, 9,7 mmol) při 0 °C.

V průběhu 30 minut byl přidán triethylamin (1,64 g, 16,16 mmol). Směs byla míchána 30 minut při 0°C a přidán nasycený bikarbonát sodný (40 ml). Vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (75 ml x 2). Spojené extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek čištěn chromatografií na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 5 : 1 až 2 : 1). Bylo získáno 3,05 g (výtěžek 97 %) žádané sloučeniny ve formě oleje.

^JH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,80-4,64 (m, 2H, 2 X POCH), 4,34 (dd, J = 3,6, 11,2 Hz, 1H, H1), 4,26 (dd, J = 5,3, 11,2 Hz, 1H, H-l), 3,87 (dd, J = 8,8, 13,6 Hz, 1H, CH₂P), 3,75 a 3,83-3,74 (dd a m, J = 9,7, 13,6 Hz, 2H, CH₂P a H-2), 3,48 (t, J = 6,6 Hz, 2H, H-4), 3,06 (s, 3H, SCH3),

-34CZ 287745 B6

1,90-1,68 (m, 2H, H-3), 1,32 (d, J = 6,2, Hz, 6H, 2 X POCHCH3), 1,31 (d, J = 6,2, Hz, 6H, 2 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 76,7 (D, ³Jc, p = 12 Hz, C-2), 71,1 (d, ²Jc, p = 6Hz, POCH), 71,0 (d, ²Jc, p = 6 Hz, POCH), 69,9 (C-l), 65,1 (d, ^JJc, p = 170 Hz, CH₂P), 47,0 (C-4), 37,3 (SCH3), 30,2 (C-3), 23,7 (d, ³Jc, p = 5 Hz, POCHCH3).

MS (DCI, izobuten): m/e = 374 (MH⁺).

(S)-2-amino-9-[4-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)]butyl]-6-chlorpurin (S)-2-amino-9-[4-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)butyl]-6-chlorpurin (1,0 g, 2,58 mmol) byl smíchán s 2-amino-6-chloropurinem (0,53 g, 3,10 mmol) a uhličitanem česným (1,26 g, 3,87 mmol) v 10 ml suchého Ν',Ν’-dimethylformamidu. Směs byla míchána 4 hodiny při 95 100 °C v atmosféře dusíku. Směs byla ponechána vychladnout na teplotu místnosti a filtrována. Pevný zbytek byl vyprán methylenchloridem. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn (flash) chromatografíí na silikagelu (methylenchlorid : aceton = 3 : 1 až 0 : 1; poté - methylenchlorid : methanol = 15:1 až 10:1). Bylo získáno 681 mg (výtěžek 57 %) žádané sloučeniny ve formě hustého oleje.

^!H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,94 (s, 1H, H-8), 5,14 (br s, 2H, NH₂), 4,78-4,63 (m, 2H, 2 X POCH), 4,30 (dd, J = 3,5, 14,7 Hz, 1H, Η-Γ), 4,15 (dd, J = 5,2, 14,7 Hz, 1H, Η-Γ), 3,89-3,81 (m, 1H, H-2'), 3,76 (dd, J = 9,5, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,72 (dd, J = 9,5, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,47 (t, J = 5,9 Hz, 2H, H-4'), 1,78- 1,50 (m, 2H, H-3’), 1,32-1,25 (m, 12 Hz, 4 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 159,4, 154,3, 151,4, 143,6, 124,8, 77,6 (D,³Jc, p = 12 Hz, C-2'),

71,2 (t, ²Jc, p = 4 Hz, POCH), 65,0 (d, Úc, p - 170 Hz, CH₂P), 47,1 a 45,4 (C-Γ a C-4'), 30,7 (C-3'), 23,7 (d, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH3).

MS (DCI, izobuten): m/e = 461 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C]6H₂6ClNgO4P: C, 41,70; H, 5,68; N, 24,31;

nalezeno: C, 41,55; H, 5,50; N, 24,00.

(S)-9-[4-azido-2-(fosfonomethoxy)butyl]guanin ((S)-azidoethyl-PMEG) ((S)-4-azido-2-(fosfonomethoxy)butylguanin

Bromtrimethylsilan (1,99 g, 13 mmol) byl pomalu přidáván k roztoku (S)-2-amino-9-[4-azido2-(diizopropylfosfonomethoxy)]butyl]-6-chlorpurinu (0,6 g, 1,3 mmol) v 7 ml bezvodého acetonitrilu v dusíkové atmosféře. Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek byl sušen ve vakuu. Ke zbytku byly přidány voda (2 ml) a aceton (15 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Sraženina byla odfiltrována a pevná látka byla v 10 ml 2N kyseliny solné 6 hodin jemně zahřívána pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo bylo odpařeno a produkt vykrystalován z vody. Bylo získáno 287 mg (výtěžek 62 %) uvedené látky v krystalické formě. Teplota tání 245 °C.

[a]²⁰ _D-0,45° (c 0,44,1N HC1).

iH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 10,6 (bs, 1H, NH), 7,71 (s, 1H, H-8), 6,44 (br s, 2H, NH₂), 4,17 (dd, J = 3,9, 14,2 Hz, 1H, Η- Γ), 4,02 (dd, J = 4,7, 14,2 Hz, 1H, Η-Γ), 3,80-3,71 (m, 1H, H

-35CZ 287745 B6

2'), 3,66 (dd, J = 9,3, 13,2 Hz, 1H, CH₂P), 3,51 (dd, J = 9,8, 13,2 Hz, 1H, CH₂P), 3,46 (t, J = 6,9 Hz, 2H, H-4'), 1,65-1,50,1,50-1,38 (m, 2H, H-3').

¹³CNMR(75 MHz, DMSO-dg) δ 157,1, 154,0, 151,8, 138,6, 116,1,77,0 (d, ³Jc, p = 12 Hz, C2'), 65,4 (d, ¹ Jc, p = 162 Hz, CH₂P), 47,0 a 44,4 (C-1'a C-4'), 30,8 (C-3').

IR (KBr): 3500-2500 (ΟΗ,ΝΗ), 2106 (N₃), 1708 (C=O), 1102 (O-C), 1016, 950 (P-O), 772 (PC).

UV (H₂O): 252 nm (e = 11,600).

MS (FAB) m/e: 359 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro CqHjjNgOsP.lMH^jO: C,33,10; H, 4,31; N, 30,89;

nalezeno: C, 33,32; H, 4,16; N, 30,50.

Příklad 12 (S)-9-[4-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)butyl]cytosin (S)-azidoethyl-PMEC (5)-4-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)butylcytosin (5)-4-azido-2-C)-(dnzopropylfosfonomethoxy)-l-0-methan sulfonyl-l,2-butandiol (1,0 g, 2,58 mmol) byl smíchán s cytosínem (0,34 g, 3,10 mmol) a uhličitanem česným (1,26 g, 3,87 mmol) v 10 ml suchého Ν',Ν'-dimethylformamidu. Směs byla míchána při 95 - 100 °C 6 hodin v dusíkové atmosféře. Směs byla ponechána vychladnout na teplotu místnosti a zfiltrována. Pevná látka byla praná methylenchloridem. Filtrát byl odpařen a odparek vyčištěn (flash) chromatogra20 fií na silikagelu (methylenchlorid : methanol = 10 : 1 až 5 : 1). Bylo získáno 440 mg (výtěžek 42 %) požadované sloučeniny ve formě hustého oleje.

’H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H-5), 5,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H, H-6), 4,754,60 (m, 2H, 2 X POCH), 4,00 (dd, J = 2,1, 12,9 Hz, 1H, Η-Γ), 3,82-3,69 (m, 3H, CH₂P, H-Γ a H-2'), 3,63 (dd, J = 9,5, 13,5 Hz, 1H, CH₂P), 3,52-3,38 (m, 2H, H-4'), 1,90-1,63 (m, 2H, H-3'), 25 1,31-1,27 (m, 12H, 4 X POCHCH3).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI3) δ 167,2, 157,5, 146,9, 95,3, 78,5 (d, ³Jc, p = 5 Hz, C-2'), 71,6 (t, ²Jc, p = 5 Hz, 2 X POCH), 65,5 (d, bc, p = 171 Hz, CH₂P), 52,5 (C-Γ), 47,6 (C-4’), 31,3 (C-3'),

24,2 (d, ³Jc, p = 4 Hz, POCHCH3).

MS (izobutan, DCI): m/e = 403 (MH⁺).

(S)-9-[4-azido-2-(fosfonomethoxy)butyl]cytosin ((S)-azidoethyl-PMEC)

K roztoku (S)-4-azido-2-(diizopropylfosfonomethoxy)-butyl-cytosinu (0,32 g, 0,98 mmol) v 5 ml bezvodého acetonitrilu byl přidán bromtrimethylsilan (1,49 g, 9,75 mmol) v atmosféře dusíku. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek vysušen ve vakuu. K odparku byly přidány voda 35 (2 ml) a aceton (10 ml). Směs byla míchána 20 hodin při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla byl surový produkt čištěn (flash) chromatografií v obrácené fázi (Cl8, voda : methanol = 10:1 až 5 : 1). Získaný produkt byl rekrystalizován z methanolu a vody. Bylo získáno 194 mg (výtěžek 63 %) uvedené sloučeniny v krystalické formě. Teplota tání 247 °C.

-36CZ 287745 B6 [a]20_D + 32,6° (c 0,32, H₂O).

^!H NMR (300 MHz, D₂O) 8 7,86 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-5), 6,13 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-6), 4,12 (d, J = 11,5 Hz, 1H, Η-Γ), 3,88- 3,75 (m, 2H, H-Γ a H-2’), 3,68 (dd, J = 9,6, 13,0 Hz, 1H, CH₂P), 3,54 (dd, J = 9,7, 13,0 Hz, 1H, CH₂P), 3,49 (t, J = 6,8 Hz, 2H, H-4'), 1,81 (q, J = 6,6 Hz, 2H, H3')·

13_C NMR (75 MHz, D₂O) δ 164,2, 154,3, 153,7, 97,7, 80,6 (d, ³J_C, p = 13 Hz, C-2'), 69,4 (d, !jc, p = 158 Hz, CH₂P), 54,9 a 50,3 (C-Γ a C-4'), 33,2 (C-3').

IR (KBr): 3500-2500 (OH, NH), 2100 (N₃), 1722 (C=O), 1680, 1658 (N=C, C=C), 1114, 1072, 930 (P-O), 770 (P-C).

UV (H₂O): 274 nm (e = 9,000),

198 nm (e = 20,200).

MS (FAB): m/e = 319 (MH⁺).

Analýza: vypočteno pro C9HJ5N5O5P: C, 33,96; H, 4,75; N, 26,40;

nalezeno: C, 33,94; H, 4,65; N, 26,13.

Claims (8)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu obecného vzorce I

   O g

   kde

   B je zbytek purinové nebo pyrimidinové báze, vybrané ze skupiny, zahrnující adenin, xanthin, hypoxanthin, guanin, 8-bromguanin, 8-chlorguanin, 8-aminoguanin, 8-hydrazinoguanin, 8hydroxyguanin, 8-methylguanin, 8-thioguanin, 2-aminopurin, 2,6-diaminopurin, thymin,

   -37CZ 287745 B6 cytosin, uráčil, 5-bromuracil, 5-ioduracil, 5-ethyluracil, 5-propyluracil, 5-vinyluracil a 5-(2bromvinyl)uracil; R je lineární alkyl s 1 až 2 atomy uhlíku, substituovaný skupinou azido nebo amino, lineární nebo větvený alkenyl s 2 až 6 atomy uhlíku, lineární nebo větvený alkinyl s 2 až 6 atomy uhlíku; a jeho monoester, diester odvozený od alkanolů s 1 až 5 atomy uhlíku, odpovídající sůl, odvozená od skupiny, zahrnující ionty alkalických kovů a kovů alkalických zemin nebo amoniových iontů, hydrát, jako monohydrát, dihydrát, trihydrát, a solvát, jako methanolát, ethanolát, propanolát, izopropanolát, butanolát, R nebo S izomer a jejich racemická směs (RS), s předpokladem, že když R je azidomethyl nebo aminoethyl, potom B není zbytek adeninu a když R je azidomethyl nebo azidoethyl, potom B není zbytek cytosinu.
2. 2. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu podle nároku 1, vzorce I, kde B je guanin-9-yl, adenin-9-yl, uracil-l-yl, thymin-1yl nebo cytosin-l-yl; R je lineární alkyl s 1 až 2 atomy uhlíku, substituovaný azido nebo amino, lineární alkenyl s 2 až 3 atomy uhlíku nebo lineární alkinyl s 2 až 3 atomy uhlíku.
3. 3. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu podle nároku 1, vzorce I, kde B je guanin-9-yl, adenin-9-yl, uracil-l-yl, thymin-1yl nebo cytosin-l-yl; R je -CH₂N₃, -CH₂CH₂N₃, -CH₂NH₂, -CH₂CH₂N₂, -CH=CH₂, -CH₂CH=CH₂ nebo -C=CH, řečené sloučeniny jsou R nebo S izomer nebo jejich racemická směs.
4. 4. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu podle nároku 1, kterými jsou (RS) nebo (R) nebo (S)-9-[(2-vinyl-2-fosfonomethoxy)ethyl]guanin.
5. 5. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu podle nároku 1, kterými jsou (RS) nebo (R) nebo (S)-9-[(2-vinyl-2-fosfonomethoxy)ethyl]cytosin.
6. 6. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu podle nároku 1, kterými jsou (RS) nebo (R) nebo (S)-9-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]guanin.
7. 7. Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu podle nároku 1, kterými jsou (RS) nebo (R) nebo (S)-l-[3-azido-2-(fosfonomethoxy)propyl]thymin.
8. 8. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství antivirové látky podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, mono nebo diester, hydrát nebo solvát v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem.