PT2049478E - N-fenilmetil-5-oxo-prolina-2-amidas substituídas como antagonistas do recetor p2x7 e seus métodos de utilização - Google Patents

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Laura J Chambers
Robert Gleave
Stefan Senger
Daryl Simon Walter
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Description

ΡΕ2049478 1 DESCRIÇÃO "N—FENILMETIL—5—OXO—PROLINA—2—AMIDAS SUBSTITUÍDAS COMO ANTAGONISTAS DO RECETOR P2X7 E SEUS MÉTODOS DE UTILIZAÇÃO" A presente invenção diz respeito a derivados de amida heterocíclicos que modulam a função do recetor P2X7 e são capazes de antagonizar os efeitos de ATP no recetor P2X7 (antagonistas dos recetores P2X7), a processos para a sua preparação, a composições farmacêuticas que os contêm, e à utilização de tais compostos em terapia. 0 recetor P2X7 é um canal iónico com abertura ativada por ligando que é expresso em células da linhagem hematopoiética, e.g. macrófagos, micróglia, mastócitos e linfócitos (T e B) (ver, por exemplo, Collo et al., Neuropharmacology, 36 (1997) 1277-1283) e é activado por nucleótidos extracelulares, particularmente adenosina--trifosfato (ATP) . A ativação de recetores P2X7 tem sido implicada na formação de células gigantes, desgranulação, morte celular citolitica, derrame de CD62L, regulação da proliferação celular e libertação de citocinas pró-inflamatórias, tais como interleucina 1 beta (IL-Ιβ) (e.g. Ferrari et al., J. Immunol., 176 (2006) 3877-3883) e factor de necrose tumoral alfa (TNFa) (e.g. Hide et al., Journal of Neurochemistry, 75 (2000) 965-972). Os recetores P2X7 estão também localizados em células apresentadoras de 2 ΡΕ2049478 antigénio, queratinócitos, células parótidas, hepatócitos, eritrócitos, células eritroleucémicas, monócitos, fibro-blastos, células de medula óssea, neurónios e células mesangiais renais. Além disso, o recetor P2X7 é expresso por terminais pré-sináticos nos sistemas nervosos central e periférico e tem sido demonstrado mediar a libertação de glutamato em células gliais (C. Anderson et al., Drug. Dev. Res., 50 (2000) 92). A localização do recetor P2X7 para as células-chaves do sistema imunitário, acoplado com a sua capacidade para libertar importantes mediadores inflamatórios a partir destas células sugere um papel potencial de antagonistas do recetor P2X7 no tratamento de uma larga gama de doenças incluindo dor e desordens neurodegenerativas. Estudos in vivo pré-clinicos recentes têm implicado diretamente o recetor P2X7 em ambas as dores inflamatória e neuropática (Dell'Antonio et al., Neurosci. Lett., 327 (2002) 87-90. I. P. Chessell et al., Pain, 114 (2005) 386-396; Honore et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 319 (2006) 1376-1385) enquanto há in vitro evidência de que os recetores P2X7 medeiam a morte induzida por célula microglial de neurónios corticais (S. D. Skaper et al., Glia, 54 (2006) 234-242). Além disso, a sobrerregulação do recetor P2X7 tem sido observada em torno de placas β-amiloide num modelo de rato transgénico da doença de Alzheimer (L. Parvathenani, et al., J. Biol. Chem., 278(15) (2003) 13309-13317). A presente invenção proporciona compostos que 3 ΡΕ2049478 modulam a função do recetor P2X7 e são capazes de antagonizar os efeitos de ATP no recetor P2X7 (antagonistas do recetor P2X7). Num primeiro aspeto, é proporcionado um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
em que: R1 representa metilo ou etilo ou cicloalquilo C3-C5 não substituído, piridinilmetilo, fenilo ou benzilo; R2 e R3 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, alquilo C1-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo; e qualquer dos referidos alquilo C1-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; R4, R5 e R6 representam independentemente hidrogénio, flúor ou metilo; e R7, R8, R9, R10 e R11 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo, e qualquer dos referidos alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2~C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; ou R10 e R11 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados 4 ΡΕ2049478 formam um anel de benzeno que é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; com a condição de que quando R7 e R11 são ambos selecionados de entre hidrogénio ou flúor, pelo menos um dos R8, R9 e R10 é um átomo de halogéneo, ou R8, R9 e R10 são selecionados de entre o grupo constituído por hidrogénio e CF3 e um, mas não mais do que um, dos R8, R9 e R10 é CF3.
Numa forma de realização, é proporcionado um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
em que: R1 representa metilo ou etilo, ou (cicloalquilo C3-C5) -fenilo não substituído ou benzilo; R2 e R3 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, alquilo C1-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6) metilo; e qualquer dos referidos alquilo Ci-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6) metilo pode ser facultativamente substituído com átomos de halogéneo 1, 2 ou 3; R4, R5 e R6 representam independentemente hidrogénio ou flúor; e 5 ΡΕ2049478 R7, R8, R9, R10 e R11 representam, independentemente, hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo, e qualquer dos referidos alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo pode ser facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; com a condição de que quando R7 e R11 representam independentemente hidrogénio ou flúor, pelo menos um dos R8, R9 e R10 é um átomo de halogéneo.
Numa forma de realização, é proporcionado um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
(l) em que: R1 representa alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6, (cicloalquil C3-C6)metilo ou piridinilmetilo, qualquer dos quais é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; ou fenilo ou benzilo não substituído; arilmetilo, R e R representam, independentemente, hidrogenro, halogéneo, alquilo Ci-Ce, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-Ce) metilo; e qualquer dos referidos alquilo C1-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, 6 PE2049478 alcinilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; R4, R5 e R6 representam, independentemente, hidrogénio, flúor ou metilo; e R7, R8, R9, R10 e R11 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo Ci-C6, alcenilo C2~Ce, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo, e qualquer dos referidos alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; ou R10 e R11 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel de benzeno que é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; com a condição de que quando R7 e R11 são ambos selecionados de hidrogénio ou de flúor, pelo menos um dos R8, R9 e R10 é um átomo de halogéneo, ou R8, R9 e R10 são selecionados de entre o grupo constituído por hidrogénio e CF3 e um, mas não mais do que um, dos R8, R9 e R10 é um grupo CF3, para utilização no tratamento ou prevenção da dor, inflamação ou uma doença neurodegenerativa.
Conforme aqui utilizado, o termo "alquilo" (quando usado como um grupo ou como parte de um grupo) refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada contendo o número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, alquilo C1-C6 significa uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada contendo pelo menos 1 e 7 ΡΕ2049478 no máximo 6 átomos de carbono. Exemplos de alquilo incluem, mas sem constituir limitação, metilo (Me), etilo (Et), n-propilo, isopropilo, n-hexilo e iso-hexilo.
Conforme aqui utilizado, o termo "alcenilo" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada contendo o número especificado de átomos de carbono em que pelo menos uma ligação carbono-carbono é uma ligação dupla. Exemplos de alcenilo incluem, mas sem constituir limitação, etenilo, propenilo, n-butenilo, isobutenilo, n-pentenilo e isopentenilo.
Conforme aqui utilizado, o termo "alcinilo" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada contendo o número especificado de átomos de carbono em que pelo menos uma ligação carbono-carbono é uma ligação tripla. Exemplos de alcinilo incluem, mas sem constituir limitação, etinilo, propinilo, butinilo, isopentinilo, n-pentinilo, iso-hexinilo e n-hexinilo. 0 termo "cicloalquilo" significa, a menos que indicado de outra forma, um anel não aromático de 3 a 6 membros fechado, por exemplo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo. 0 termo "arilo" conforme aqui utilizado refere-se a um anel hidrocarboneto monociclico ou biciclico C6-C10 em que pelo menos um anel é aromático. Exemplos de tais grupos incluem fenilo e naftilo. ΡΕ2049478 0 termo "halogéneo" é aqui utilizado para descrever, a menos que indicado de outra forma, um grupo selecionado de entre flúor, cloro, bromo ou iodo.
Em certas formas de realização da invenção, R1 representa cicloalquilo C3-C5, piridinilmetilo, fenilo ou benzilo. Em ainda outra forma de realização, R1 representa metilo ou etilo.
Em certas formas de realização da invenção, R2 e R3 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, alquilo C1-C6, benzilo, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo; e qualquer dos referidos alquilo Ci-C6, benzilo, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6) metilo pode ser facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo.
Numa forma de realização, R2 e R3 representam independentemente hidrogénio ou halogéneo; alquilo C1-C6 não substituído, benzilo, alcenilo C2-C6, alcinilo C2“C6 ou (cicloalquil C3-C6) metilo.
Numa outra forma de realização, R e R representam independentemente hidrogénio, flúor ou metilo. Numa forma de realização adicional, R2 e R3 representam ambos hidrogénio.
Numa forma de realização da invenção, R4 e R5 9 ΡΕ2049478 representam independentemente hidrogénio ou metilo. Numa outra forma de realização, R6 representa hidrogénio ou metilo. Numa forma de realização adicional, R4, R5 e R representam todos hidrogénio.
Numa outra forma de realização da invenção, R7, R8, R9, R10 e R11 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, ciano, trifluorometilo ou alquilo C1-C6 não substituído; ou R10 e R11 em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel de benzeno não substituído. Numa forma de realização adicional, R7, R8, R9, R10 e R11 representam independentemente hidrogénio, halogéneo, ciano, metilo ou trifluorometilo; ou R10 e R11 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel de benzeno não substituído. Em ainda outra forma de realização, R7, R8, R9, R10 e R11 representam independentemente hidrogénio, cloro, flúor, bromo, metilo ou trifluorometilo.
Numa forma de realização da invenção, é proporcionado um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: R1 representa não substituído metilo, etilo, ciclo-alquilo C3-C5, piridinilmetilo, fenilo ou benzilo; R2 e R3 ambos representam hidrogénio; R4, R5 e R6 representam independentemente hidrogénio ou metilo; e R7, R8, R9, R10 e R11 representam independentemente hidrogénio, cloro, flúor, bromo, metilo ou trifluorometilo; 10 ΡΕ2049478 com a condição de que quando R7 e R11 são ambos selecionados de entre hidrogénio ou flúor, pelo menos um dos R3, R9 e R10 é um átomo de halogéneo, ou R8, R9 e R10 são selecionados de entre o grupo consistindo de hidrogénio e CF3 e um, mas não mais do que um, de R8, R9 e R10 é CF3.
Os compostos particulares de acordo com a invenção incluem os compostos dos Exemplos 1, 3, 6, 7, 9-37, 39-42, 50-96, 101-117, 119-124 e 126-136, conforme mostrado abaixo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Os compostos particulares para utilização de acordo com a invenção incluem os compostos dos Exemplos 1-136, conforme mostrado abaixo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Os antagonistas de P2X7 podem ser úteis na prevenção, tratamento ou melhoria de uma variedade de estados de dor (por exemplo, dor neuropática, dor inflamatória crónica e dor visceral) , inflamação e neurodege-neração, em particular na doença de Alzheimer. Os Antagonistas de P2X7 podem também constituir agentes terapêuticos úteis na gestão da artrite reumatoide e doença inflamatória intestinal.
Os compostos da presente invenção, que modulam a função do recetor P2X7 e são capazes de antagonizar os efeitos de ATP no recetor P2X7 (antagonistas dos recetores P2X7) podem ser antagonistas competitivos, agonistas inversos, moduladores alostéricos negativos ou moduladores indirectos da função do recetor. 11 PE2049478
Certos compostos de fórmula (I) podem, em algumas circunstâncias, formar os seus sais de adição de ácido. Será apreciado que, para utilização em medicina, os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na forma de sais, caso em que os sais devem ser f armaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os descritos por Berge, Bighley e Monkhouse, J. Pharm. Sei., 66 (1977) 1-19. Os compostos básicos de fórmula (I) podem formar sais com ácidos farmaceuticamente aceitáveis incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem ácido acético, benzenossulfónico, benzóico, canforsulfónico, cítrico, etanossulfónico, fumárico, glucó-nico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiónico, láti-co, maleico, málico, mandélico, metanossulfónico, múcico, nítrico, pamóico, pantoténico, fosfórico, succínico, sul-fúrico, tartárico, p-toluenossulfónico e semelhantes.
Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os formados a partir ácido maleico, fumárico, benzóico, ascórbico, pamóico, succínico, clorídrico, sul-fúrico, bismetilenossalicílico, metanossulfónico, etano-dissulfónico, propiónico, tartárico, salicílico, cítrico, glucónico, aspártico, esteárico, palmítico, itacónico, glicólico, p-aminobenzóico, glutâmico, benzenossulfónico, ciclo-hexilsulfâmico, fosfórico e nítrico.
Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados na forma cristalina ou não cristalina, e, se cristalina, 12 ΡΕ2049478 pode facultativamente ser solvatada, e.g., na forma do hidrato. Esta invenção inclui dentro do seu âmbito e alcance solvatos estequiométricos (e.g. hidratos), bem como compostos contendo quantidades variáveis de solvente (e.g. áqua).
Os compostos de fórmula (I) são capazes de existir em formas estereoisoméricas (e.g., diastereómeros e enantiómeros) e a invenção estende-se a cada uma destas formas estereoisoméricas e às suas misturas incluindo racematos. As diferentes formas estereoisoméricas podem ser separadas uma da outra pelos métodos usuais, ou qualquer isómero dado pode ser obtido por sintese estereoespecifica ou assimétrica. Nos exemplos em que a composição estereoquimica do produto final foi determinada por HPLC quiral (mais especificamente pelos métodos (A) , (B) , (C) ou (D), tal como estabelecido nos Exemplos), o nome e a estrutura estereoespecificos correspondentes foram atribuídos ao produto final em que o excesso enantiomérico do referido produto é maior do que 70%. A atribuição da estereoquimica absoluta é baseada na quiralidade conhecida do material de partida. Nos exemplos em que a composição do produto final não foi caracterizado por HPLC quiral, a estereoquimica do produto final não foi indicada. No entanto, a quiralidade do componente principal da mistura de produto será esperada como refletindo a do material de partida e o excesso enantiomérico dependerá do método sintético utilizado e é provável que seja semelhante à medida para um exemplo análogo (quando um tal exemplo existe). Assim, os compostos 13 ΡΕ2049478 mostrados numa forma quiral são esperados ser capazes de ser preparados na forma quiral alternativa usando o material de partida apropriado. Alternativamente, se materiais de partida racémicos são utilizados, é de esperar que um produto racémico seja produzido e os enantiómeros individuais podem ser separados pelos métodos usuais. A invenção também se estende a quaisquer formas tautoméricas e suas misturas. A presente invenção também inclui compostos marcados isotopicamente, os quais são idênticos aos citados na fórmula (I) e seguintes, exceto para o facto de que um ou mais átomos são trocados por um átomo tendo uma massa atómica ou número de massa diferente da massa atómica ou número de massa mais comummente encontrados na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio, fósforo, flúor, iodo e cloro, tais como 3H, nC, 14C, 18F, 123I e 125I.
Os compostos da presente invenção e sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos que contêm os isótopos acima mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos estão dentro do âmbito e alcance da presente invenção. Os compostos marcados isotopicamente da presente invenção, por exemplo aqueles nos quais isótopos radioativos tais como 3H e 14C são incorporados, são úteis em ensaios de distribuição nos tecidos de fármaco e/ou de substrato. Os isótopos tritiados, isto é, 3H, e de carbono- 14 ΡΕ2049478 14, isto é, 14C, são particularmente preferidos pela sua facilidade de preparação e detetabilidade. Os isótopos X1C e 8F são particularmente úteis em PET (ou TEP - tomografia •η o c por emissão de positrões) , e os isotopos I também são particularmente úteis em SPECT (TCEFU - tomografia computorizada por emissão de fotão único). PET e SPECT são úteis em imagiologia do cérebro. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados tais como deuteno, isto e, H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo semi-vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagem reduzidos e, por conseguinte, pode ser preferida em algumas circunstâncias. Os compostos isotopicamente rotulados de fórmula (I) e na sequência da presente invenção podem geralmente ser preparados realizando os procedimentos revelados nos Esquemas e/ou nos Exemplos abaixo, substituindo um reagente isotopicamente rotulado prontamente disponível por um reagente não isotopicamente rotulado.
Além disso, os compostos de fórmula (I) podem ser administrados como pró-fármacos. Conforme aqui utilizado, um "pro-f ármaco" de um composto de fórmula (I) é um derivado funcional do composto que, após administração a um paciente, eventualmente liberta o composto de fórmula (I) in vivo. A administração de um composto de fórmula (I) na forma de um pró-fármaco pode capacitar o perito na técnica para fazer um ou mais dos seguintes: (a) modificar o início do composto in vivo; (b) modificar a duração da acção do composto em in vivo; (c) modificar o transporte ou a dis- 15 ΡΕ2049478 tribuição do composto in vivo; (d) modificar a solubilidade do composto in vivo; e (e) superar ou ultrapassar um efeito secundário ou outra dificuldade encontrada com o composto. Os derivados funcionais típicos utilizados para preparar pró-fármacos incluem modificações do composto que são quimicamente ou enzimaticamente clivados in vivo. Tais modificações são bem conhecidas dos peritos na arte.
Preparação de compostos
Os compostos de fórmula (I), em que as variáveis são conforme acima definidas, e seus sais e solvatos podem ser preparados pela metodologia descrita a seguir, constituindo um aspeto adicional da presente invenção.
Um processo de acordo com a invenção para a preparação de um composto de fórmula (I) que compreende: (a) 0 acoplamento de um ácido carboxílico de fórmula (2) (ou um seu derivado ativado) com uma amina de fórmula (3) (ver Esquema 1), em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 são conforme acima definidos. Os compostos (2) e (3) são facultativamente protegidos; (b) A reacção de um composto dicarbonilo de fórmula 16 ΡΕ2049478 (4), um isocianeto de fórmula (5) e uma amina de fórmula (6) num solvente adequado tal como metanol e a uma temperatura adequada, tal como 100 °C (ver Esquema 2) , em que R1, R2, R3, R4, R5, R7, R8, R9, R10 e R11 são conforme acima definidos e R6=H ou metilo. Os compostos (4), (5) e (6) são facultativamente proteqidos. Os processos deste tipo têm sido descritos anteriormente na literatura química (e.g. H. Tye e M. Whittaker, Org. Biomol. Chem., 2 (2004) 813-815; G. C. B. Harriman WO 9900362 Al) ; (c) A desproteção de um composto de fórmula (I) que está protegido. Exemplos de grupos de proteção e os meios para a sua remoção podem ser encontrados em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed., J. Wiley and Sons, 1999); ou (d) A interconversão de compostos de fórmula (I) a outros compostos de fórmula (I). Exemplos de procedimentos de interconversão convencionais incluem epimerização, oxidação, redução, alquilação, substituição aromática, substituição nucleófila, acoplamento de amida e hidrólise do éster.
Esquema 1
17 ΡΕ2049478 0 acoplamento de um ácido de fórmula (2) e uma amina de fórmula (3) compreende tipicamente a utilização de agentes de ativação, tais como hidrocloreto de N-(3--dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida ou carbodiimida suportada por polímero, 1-hidroxibenzotriazole (HOBT) ou l-hidroxi-7-azabenzotriazole (HOAt) e, facultativamente, uma base adequada tal como um alquilamina terciária (e.g. diisopropiletilamina, N-etilmorfolina, trietilamina) ou piridina, num solvente adequado tal como DMF e/ou diclo-rometano e a uma temperatura adequada, e.g. entre 0 °C e a temperatura ambiente. Alternativamente, o acoplamento de (2) e (3) pode ser realizado por tratamento com hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-Ν,Ν,Ν',N'-tetrametilurónio e uma alquilamina terciária adequada tal como diisopropiletilamina num solvente adequado tal como dimetilformamida a uma temperatura adequada tal como a temperatura ambiente. Alternativamente, o composto de fórmula (2) pode ser empregue como um derivado ativado (e.g., cloreto de ácido, anidrido misto, éster ativo (e.g. O-acil-isoureia)), e sob tais circunstâncias o processo (a) compreende tipicamente o tratamento do referido derivado ativado com uma amina (Μ. A. Ogliaruso, J. F. Wolfe, The Chemistry of Functional Groups, S. Patai Ed., Supl. B: "The Chemistry of Acid Derivatives, Pt. 1", John Wiley and Sons, 1979, p 442-8; A. L. J., The Chemistry of Functional Groups, S. Patai Ed., Supl.B: "The Chemistry of Amides", J. Zabricky Ed., John Wiley and Sons, 1970, p 73 ff). ΡΕ2049478 18
Esquema 2
Métodos representativos para a preparação de compostos de fórmula (2) são mostrados nos Esquemas 3-9 abaixo:
Esquema 3
m m em que R1, R2, R3, R4 e R5 são conforme acima definidos, R6=H ou F, e P1 e P2 representam grupos de proteção adequados tais como alquilo Ci-Ce ou P1 e P2=H.
Processos análogos aos descritos abaixo para as transformações descritas no Esquema 3 foram descritos anteriormente na literatura quimica (e.g. G. Verardo, P. Geatti, E. Pol e A. G. Giumanini, Can. J. Chem., 80 (2002) 19 ΡΕ2049478 779-788; T. Godet, et al. , Organic Letters, 6 (19) (2004) 3281-3284). 0 Passo (i) compreende tipicamente o tratamento inicial de (7) com uma base tal como hidróxido de sódio num solvente adequado tal como metanol a uma temperatura adequada tal como 0 °C, seguida por alquilação redutora que tipicamente compreende o tratamento subsequente com um aldeido ou cetona e um ácido, tal como ácido acético, e em seguida a adição de um agente de redução tal como tetra--hidretoborato de sódio a uma temperatura adequada tal como entre 0 °C e a temperatura ambiente. O Passo (ii) pode ocorrer espontaneamente, caso em que (9) é isolado directamente a partir da reacção de (7), conforme descrito no passo (i) acima, mas mais tipicamente o composto (8) é aquecido a uma temperatura adequada, tal como 110 °C, num solvente adequado, tal como tolueno, para produzir o composto (9). O Passo (iii) de desproteção compreende tipicamente um procedimento padrão para a conversão de um éster carboxilico a um ácido, tal como o uso de um sal de hidróxido apropriado (e.g., hidróxido de sódio) num solvente apropriado tal como metanol a uma temperatura adequada tal como entre 0 °C e a temperatura ambiente. ΡΕ2049478 20
Esquema 4
em que R1, R2, R3, R4 e R5 são conforme acima definidos, R6=H ou F, L1 é um grupo adequado, tal como halogéneo (e.g. cloro ou bromo) ou um ácido borónico ou éster borónico e P3 representa um grupo de proteção adequado, como alquilo Ci-C6.
Processos análogos aos descritos abaixo para as transformações delineadas no Esquema 4 foram descritos anteriormente na literatura química (e.g. T. Itoh, et al., Tetrahedron, 59 (2003) 3527-3536; T. Simandan e Μ. B. Smith, Synthetic Communications, 26(9) (1996) 1827-1838). O passo (i) compreende tipicamente o tratamento de (10) com uma base tal como hidreto de sódio e um agente de alquilação tal como um halogeneto de alquilo num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como entre 0 °C e a temperatura ambiente ou alternativamente ele pode compreender o tratamento de (10) com um halogeneto de arilo ou ácido (ou éster) aril- ou alcenil-borónico num solvente adequado tal como tolueno na presença de um catalisador adequado tal 21 PE2049478 como uma mistura de tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) e Xantphos™ (9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino) xanteno) e uma base adequada tal como carbonato de césio, a uma temperatura adequada tal como 120 °C. A desproteção (ii) compreende tipicamente um procedimento padrão para a conversão de um éster carboxilico a um ácido, tal como o uso de um sal hidróxido apropriado (e.g., hidróxido de sódio) num solvente apropriado tal como metanol a uma temperatura adequada tal como entre 0 °C e a temperatura ambiente; ou a utilização de um ácido apropriado (e.g., ácido trifluoroacético) num solvente apropriado tal como diclorometano a uma temperatura adequada tal como entre 0 °C e a temperatura ambiente.
Esquema 5
em que R1, R2, R3, R4 e R5 são conforme acima definidos e R6=H ou F.
Processos análogos aos descritos abaixo para a transformação delineada no Esquema 5 foram descritos 22 ΡΕ2049478 anteriormente na literatura química (e.g. S. Aoki, et al., Tetrahedron, 60 (2004) 7053-7059) O passo (i) compreende tipicamente o aquecimento de (12) num tubo de autoclave ou vedado num solvente adequado, tal como água, e a uma temperatura adequada, tal como 100-140 °C, com ou sem irradiação de micro-ondas.
Esquema 6
em que R1, R4 e R5 são conforme acima definidos, R2 representa um grupo conforme acima definido diferente de hidrogénio ou de halogéneo, R6=H ou F, L1 é um grupo separável adequado tal como halogéneo (e.g. cloro ou bromo), e P4 e P5representam grupos de proteção adequados tais como alquilo Ci-C6 e (alcoxi Ci-C6)carbonilo, respecti-vamente.
Processos análogos aos descritos abaixo para as transformações descritas no Esquema 6 foram descritos PE2049478 anteriormente na literatura química (e.g. A. Bassoli et al., Eur. J. Org. Chem., (2005) 2518-2525). 0 passo (i) compreende tipicamente a proteção de (13) por protocolos padrão, tais como o tratamento com um anidrido de alcoxicarbonilo, tal como dicarbonato de di-terc-butilo, e uma base tal como trietilamina e um catalisador tal como 4-dimetilaminopiridina, num solvente adequado tal como diclorometano a uma temperatura adequada tal como a temperatura ambiente. O Passo (ii) compreende tipicamente o tratamento de (14) com uma base, tal como bis(trimetilsilil)amideto de lítio e um agente alquilante tal como um halogeneto de alquilo num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como entre -78 °C e a temperatura ambiente. O Passo (iii) compreende tipicamente a desproteção de (15) por protocolos padrão, tais como, para o caso quando P5 é um grupo terc-butoxicarbonilo, o tratamento com cloreto de hidrogénio num solvente adequado tal como dioxano, e a uma temperatura adequada tal como a temperatura ambiente. O Passo (iv) compreende tipicamente o processo descrito acima para os passos mostrados no Esquema 4. ΡΕ2049478 - 24 -
Esquema 7
em que R1, R2, R3, R4 e R5 são conforme acima definidos e R6=H ou F. P5, P6 e P7 representam grupos de proteção adequados, e.g. P5 pode ser um (alcoxi Ci-Cô) carbonilo e P6 e P7 podem ser alquilo C1-C6 (P6 e P7 não precisam de ser o mesmo). L1 é um grupo separável adequado tal como halogéneo (e.g. cloro ou bromo). 0 passo (i) compreende tipicamente o tratamento de (17) com uma base adequada, tal como hexametil-dissilazoteto de potássio, e um agente alquilante tal como um halogeneto de alquilo num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como entre -78 °C e a temperatura ambiente. 0 Passo (ii) compreende tipicamente um procedimento padrão para a conversão de um éster carboxílico de um ácido, tal como o tratamento com um ácido adequado (e.g., ácido trifluoroacético) num solvente apropriado tal como diclorometano a uma temperatura adequada tal como a temperatura ambiente. ΡΕ2049478 25
Esquema 8
em que R1, R2, R3, R4 e R5 são conforme acima definidos e R6=H ou F. P8, P9 e P10 representam grupos de proteção adequados tais como alquilo Ci-C6 nos casos de P8 e P9 (P8 e P9 não precisam de ser iguais) e um grupo derivado de uma cetona cíclica ou acíclica adequada no caso de P10.
Processos análogos aos descritos abaixo para as transformações descritas nos passos (i)-(iii) do Esquema 8 foram descritos anteriormente na literatura química (e.g. J. Wehbe, et al., Tetrahedron: Asymmetry, 14 (2003) 1123- -1126). O passo (i) compreende tipicamente o tratamento de (19) com uma cetona apropriado, tal como (IR, 2R, 5R) -2- 26 ΡΕ2049478 -hidroxipinan-3-ona, e um ácido de Lewis tal como eterato de trifluoreto de boro num solvente adequado tal como tolueno a uma temperatura adequada, tal como 110 °C. O Passo (ii) compreende tipicamente o tratamento de (20) com um reagente de Grignard, tal como brometo de metilmagnésio, e uma base, tal como 1,8-diazabiciclo-[5.4.0]undec-7-eno, seguido por tratamento com um éster insaturado (21), tal como crotonato de etilo num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como -30 °C. O Passo (iii) compreende tipicamente um procedimento padrão para a conversão de uma imina a uma amina, tal como o tratamento com um ácido adequado (e.g., ácido cítrico aquoso 15%) num solvente apropriado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como a temperatura ambiente. O Passo (iv) compreende tipicamente o aquecimento de (23) num solvente adequado, tal como tolueno, a uma temperatura adequada tal como entre a temperatura ambiente e 120 °C. O Passo (v) compreende tipicamente o processo descrito acima para os passos mostrados no Esquema 4. ΡΕ2049478 27
Esquema 9
em que R1, R4, R5 e R6 são conforme acima definidos, R2 e R3 representam, cada um, um grupo tal como definido acima com excepção de halogéneo, L1 e L2 são grupos de sarda adequados, tais como halogéneo (e.g. cloro ou bromo), e P11 representa um grupo de proteção adequado tal como tritilo. 0 passo (i) compreende tipicamente o tratamento de (25) com uma base tal como hidreto de sódio e um agente alquilante tal como um halogeneto de alquilo num solvente adequado tal como dimetilformamida a uma temperatura adequada tal como entre 0 °C e a temperatura ambiente. 0 Passo (ii) compreende tipicamente o tratamento de (26) com uma base tal como di-isopropilamideto de litio e um agente alquilante tal como um halogeneto de alquilo num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como entre -78 °C e a temperatura ambiente. 28 ΡΕ2049478 0 Passo (iii) compreende tipicamente o tratamento de (27) com uma base tal como di-isopropilamideto de litio e um agente alquilante tal como um halogeneto de alquilo num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano a uma temperatura adequada tal como entre -78 °C e a temperatura ambiente. 0 Passo (iv) compreende tipicamente um procedimento padrão para a desproteção de um álcool. Por exemplo, quando P11 é um grupo tritilo, o tratamento de (28) com um ácido adequado tal como Amberlyst 15® num solvente adequado tal como metanol e a uma temperatura adequada tal como a temperatura ambiente. 0 Passo (v) compreende tipicamente um protocolo padrão para a oxidação de um álcool ao ácido carboxilico correspondente tal como o tratamento do álcool (29) com um agente oxidante tal como uma combinação de clorito de sódio, TEMPO (radical livre 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidi-niloxi) e lixivia (solução de hipoclorito de sódio) num solvente adequado, tal como uma mistura de solução tampão de fosfato de sódio monobásico aquoso e acetonitrilo a uma temperatura adequada, tal como 40 °C. O passo (ii) ou passo (iii) pode ser omitido 2 conforme requerido para preparar compostos em que R =H ou R3=H, respectivamente.
Os compostos das fórmulas gerais (3), (4), (5) 29 ΡΕ2049478 (6), (7), (10), (12), (13), (17), (19), (21) e (25) estão tipicamente disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparados por uma pessoa perita na técnica utilizando métodos descritos na literatura química (ou usando métodos análogos).
Onde relevante, os sais f armaceuticamente aceitáveis podem ser preparados convencionalmente por reacção com o ácido ou derivado de ácido apropriado.
Indicações Clínicas
Acredita-se que à medida que os compostos da presente invenção modulam a função do recetor P2X7 e são capazes de antagonizar os efeitos de ATP no recetor P2X7 eles podem ser úteis no tratamento da dor, incluindo dor aguda, dor crónica, dor articular crónico, dor musculo-esquelética , dor neuropática, dor inflamatória, dor visceral, dor associada com cancro, dor associada com enxaqueca, dor de cabeça de tensão e aglomerados de dores de cabeça, dor associada com distúrbios intestinais funcionais, dor da região lombar e de garganta/pescoço, dor associada a entorses e luxações, dor simpaticamente mantida; miosite, dor associada com gripe ou outras infecções virais, tais como o resfriado comum, dor associada com febre reumática, dor associada com isquemia do miocárdio, dor pós-operatória, quimioterapia do cancro, dor de cabeça, dor de dentes e dismenorreia. 30 ΡΕ2049478
As condições de dor articular crónica incluem artrite reumatoide, osteoartrite, espondilite reumatoide, artrite gotosa e artrite juvenil. A dor associada com distúrbios intestinais funcionais inclui dispepsia não ulcerativa, dor torácica não cardíaca e síndrome do intestino irritável.
As síndromes de dor neuropática incluem: neuro-patia diabética, dor ciática, dor lombar não específica, neuralgia trigeminal, dor da esclerose múltipla, fibromialgia, neuropatia relacionada com o VIH, neuralgia pós-herpética, neuralgia trigeminal e dor resultante de trauma físico, amputação, síndrome do membro fantasma, cirurgia da coluna vertebral, cancro, toxinas ou condições inflamatórias crónicas. Além disso, as condições de dor neuropática incluem dor associada com sensações normalmente não dolorosas como "alfinetes e agulhas" (parestesias e disestesias), aumento da sensibilidade ao toque (hiperes-tesia), sensação dolorosa após estimulação inócua (alodinia dinâmica, estática, térmica ou fria), sensibilidade aumentada aos estímulos nocivos (térmico, frio, hiperalgesia mecânica), sensação de dor continuada após remoção da estimulação (hiperpatia) ou uma ausência de um défice nos caminhos sensoriais selectivos (hipoalgesia).
Outras condições que podem potencialmente ser tratadas por compostos da presente invenção incluem febre, inflamação, doenças imunológicas, doenças da função 31 ΡΕ2049478 plaquetária anormal (e.g., doenças vasculares oclusivas), impotência ou disfunção erétil, doença óssea caracterizada pelo metabolismo ou reabsorção anormal do osso, efeitos secundários hemodinâmicos de fármacos anti-inflamatórios não esteroides (AINEs) e inibidores de ciclo-oxigenase-2 (COX-2), doenças cardiovasculares, doenças neurodegenerati-vas e neurodegeneração, trauma a seguir a neurodegeneração, zumbidos no ouvido, dependência dum agente indutor de dependência, tal como opioides (e.g., morfina), depressores do SNC (e.g., etanol), psicoestimulantes (e.g., cocaina) e nicotina; complicações da diabetes Tipo I, disfunção renal, disfunção do figado (e.g., hepatite, cirrose), disfunção gastrointestinal (e.g. diarreia), cancro do cólon, bexiga hiperativa e incontinência com urgência. Depressão e alcoolismo poderiam potencialmente também ser tratadas por compostos da presente invenção.
Inflamação e as condições inflamatórias associadas com a referida inflamação incluem doenças da pele (e.g., queimaduras solares, queimaduras, eczema, dermatite, dermatite alérgica, psoríase), meningite, doenças oftálmicas, tais como glaucoma, retinite, retinopatias, uveite e de lesão aguda do tecido do olho (e.g. conjuntivite), distúrbios inflamatórios pulmonares (e.g., asma, bronquite, enfisema, rinite alérgica, síndrome da angústia respiratória aguda, doença do criador de pombos, pulmão do agricultor, doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC), hiper-responsividade das vias aéreas), distúrbios do trato gastrintestinal (e.g., úlcera aftosa, doença de Crohn, PE2049478 gastrite atópica, gastrite varioliforme, colite ulcerativa, doença celíaca, ileíte regional, síndrome do intestino irritável, doença inflamatória intestinal, doença de refluxo gastrointestinal); transplante de órgãos e de outras condições com uma componente inflamatória tais como doença vascular, enxaqueca, periarterite nodosa, tiroidite, anemia aplástica, doença de Hodgkin, esclerodermia, mias-tenia grave, esclerose múltipla, sarcoidose, síndrome nefrótica, síndrome de Bechet, gengivite, isquemia do miocárdio, pirexia, lúpus eritematoso sistémico, polimio-site, tendinite, bursite e síndrome de Sjogren.
As doenças imunológicas incluem doenças auto-imunes, doenças de deficiência imunológica ou transplante de órgãos.
As doenças ósseas caracterizadas por metabolismo ou reabsorção anormal do osso incluem osteoporose (especialmente osteoporose pós-menopáusica), hipercalcemia, hiperparatiroidismo, doenças de Paget óssea, osteólise, hipercalcemia de malignidade com ou sem metástase óssea, artrite reumatoide, parodontite, osteoartrite, ostealgia, osteopenia, cancro, caquexia, calculose, litíase (especialmente urolitíase), carcinoma sólido, gota e espondilite anquilosante, tendinite e bursite.
As doenças cardiovasculares incluem hipertensão ou isquemia miocardíaca, aterosclerose, insuficiência venosa funcional ou orgânica; terapia varicosa; hemorrói- 33 ΡΕ2049478 das, e estados de choque associados com uma queda acentuada na pressão arterial (e.g. choque sético).
As doenças neurodegenerativas incluem demência, particularmente demência degenerativa (incluindo demência senil, demência com corpos de Lewy, doença de Alzheimer, doença de Pick, coreia de Huntington, doença de Parkinson e doença de Creutzfeldt-Jakob, esclerose lateral amiotrófica (ELA) e doença do neurónio motor); demência vascular (incluindo demência do enfarte múltiplo), bem como demência associada com lesões ocupando o espaço intracraniano, trauma, infecções e condições relacionadas (incluindo infeção por VIH, meningite e herpes zóster); metabolismo, toxinas, anoxia e deficiência de vitamina, e deficiência cognitiva suave associada ao envelhecimento, particularmente perda da memória associada à idade.
Os compostos de fórmula (I) podem também ser úteis para a neuroproteção e no tratamento de trauma na sequência de neurodegeneração, tal como acidente vascular cerebral, paragem cardiaca, bypass pulmonar, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinal ou semelhantes.
Os compostos da presente invenção podem também ser úteis no tratamento do crescimento da célula maligna e/ou metástase, e leucemia mioblástica.
As complicações da diabetes Tipo 1 incluem microangiopatia diabética, retinopatia diabética, nefropa- 34 ΡΕ2049478 tia diabética, degeneração macular, glaucoma, sindrome nefrótica, anemia aplástica, uveite, doença de Kawasaki e sarcoidose. A disfunção renal inclui nefrite, glomerulo-nefrite, particularmente glomerulonefrite proliferativa mesangial e sindrome nefritica. É para ser entendido que a referência a tratamento inclui não só o tratamento de sintomas estabelecidos mas também o tratamento profilático, a menos que explicitamente indicado de maneira diferente.
De acordo com um aspeto adicional da invenção, nós, por conseguinte, proporcionamos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso em medicina humana ou veterinária.
De acordo com um outro aspeto da invenção, nós proporcionamos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de uma condição que é mediada por recetores P2X7.
De acordo com um aspeto da invenção, proporcionamos um composto de fórmula (I) ou um seu sal f armaceuticamente aceitável para uso no tratamento ou prevenção da dor, inflamação ou uma doença neurodegenerativa.
De acordo com um aspeto adicional da invenção, 35 ΡΕ2049478 nós proporcionamos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento ou prevenção da dor inflamatória, dor neuropática ou dor visceral.
De acordo com um aspeto adicional da invenção, nós proporcionamos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento ou prevenção da doença de Alzheimer.
De acordo com um outro aspeto da invenção, nós proporcionamos o uso de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma condição que seja mediada pela ação de recetores P2X7.
De acordo com um outro aspeto da invenção, nós proporcionamos o uso de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção da dor, inflamação ou uma doença neurodegenerativa.
De acordo com um outro aspeto da invenção, nós proporcionamos o uso de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção da dor inflamatória, dor neuropática ou dor visceral.
Num aspeto da invenção, nós proporcionamos o uso 36 ΡΕ2049478 de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceutica-mente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção da doença de Alzheimer. A fim de utilizar um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o tratamento de seres humanos e outros mamiferos, ele é normalmente formulado de acordo com a prática farmacêutica padrão na forma de uma composição farmacêutica. Portanto, num outro aspeto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, adaptadas para uso em medicina humana ou veterinária. A fim de usar os compostos de fórmula (I) em terapia, eles serão normalmente formulados numa composição farmacêutica de acordo com a prática farmacêutica padrão. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica, a qual compreende um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e facultativamente um agente de suporte farmaceuticamente aceitável.
Uma composição farmacêutica da invenção, a qual pode ser preparada por mistura, adequadamente à temperatura ambiente e pressão atmosférica, está normalmente adaptada para administração oral, parentérica ou retal e, como tal, pode estar na forma de comprimidos, cápsulas, preparações liquidas orais, pós, grânulos, pastilhas, pós reconsti-tuíveis, soluções ou suspensões injectáveis ou infundiveis 37 ΡΕ2049478 ou supositórios. As composições administráveis por via oral são geralmente preferidos.
Os comprimidos e as cápsulas para administração oral podem estar na forma de dose unitária, e podem conter excipientes convencionais, tais como agentes ligantes, agentes de enchimento, lubrificantes para fazer comprimidos, desintegrantes e agentes molhantes aceitáveis. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal.
As preparações liquidas orais podem estar na forma de, por exemplo, suspensões, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, aquosos ou oleosos, ou podem estar na forma de um produto seco para reconstituição com água ou outro veiculo adequado antes da utilização. Tais preparações liquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, agentes emulsificação, veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), conservantes e, se desejado, aromatizantes ou corantes convencionais.
Para administração parentérica, as formas de dosagem unitárias fluidas são preparadas utilizando um composto da invenção ou seu sal farmaceuticamente aceitável e um veículo estéril. 0 composto, dependendo do veículo e da concentração utilizada, pode ser suspenso ou dissolvido no veículo. Na preparação de soluções, o composto pode ser dissolvido para injecção e esterilizado por filtração antes de enchimento num frasco ou ampola adequados e selagem. 38 ΡΕ2049478
Vantajosamente, adjuvantes tais como um anestésico local, conservantes e agentes de tamponização são dissolvidos no veiculo. Para aumentar a estabilidade, a composição pode ser congelada após enchimento no frasco e a água removida sob vácuo. As suspensões parentéricas são preparadas substancialmente da mesma maneira, excepto que o composto é suspenso no veiculo em vez de ser dissolvido, e a esterilização não pode ser conseguida por filtração. 0 composto pode ser esterilizado por exposição a óxido de etileno antes da suspensão num veiculo estéril. Vantajosamente, um agente tensioativo ou molhante é incluído na composição para facilitar a distribuição uniforme do composto. A composição pode conter de 0,1% a 99%, numa base ponderai, de preferência de 10 a 60%, numa base ponderai, do material ativo, dependendo do método de administração. A dose do composto utilizado no tratamento das desordens acima mencionadas variará de maneira usual com a gravidade das desordens, o peso do doente, e outros factores semelhantes. No entanto, como guia geral, as doses unitárias adequadas podem ser de 0,05 a 1000 mg, mais apropriadamente de 0,05 a 200 mg, por exemplo 20 a 40 mg; e tais doses unitárias serão preferivelmente administradas uma vez por dia, ainda que a administração mais de uma vez por dia possa ser necessária; e tal terapia pode estender-se por numerosas semanas ou meses.
Todas as publicações, incluindo mas sem 39 ΡΕ2049478 constituir limitação patentes e pedidos de patentes citados nesta especificação, são aqui incorporadas por referência como se cada publicação individual fosse especificamente e individualmente indicada para ser aqui incorporada por referência, como se fosse totalmente estabelecido.
As Descrições e Exemplos seguintes ilustram a preparação de compostos da invenção e/ou compostos para utilização de acordo com a invenção, mas não se destinam a constituir limitação.
Exemplos
Os métodos gerais (a)-(d), juntamente com os métodos sintéticos descritos nos Esquemas 1-9 acima, para a preparação de compostos da presente invenção, são ainda ilustrados pelos exemplos seguintes.
Exemplo 1 N— [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-(fenilmetil)- -prolinamida (El)
5-Oxo-l-(fenilmetil)-prolina (0,176 g, 0,80 mmol, preparado conforme descrito abaixo) foi dissolvido em diclorometano (3 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxi-benzotriazole (0,119 g, 0,88 mmol), trietilamina (0,113 mL, 40 PE2049478 0,81 mmol), [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,134 g, 0,84 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'--etilcarbodiimida (0,169 g, 0,88 mmol) sob uma atmosfera de árgon. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi diluida com diclorometano e lavada sequencialmente com cloreto de hidrogénio 2 M aquoso e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi filtrada através de um separador de fases e, em seguida, evaporada para dar o produto bruto. O material bruto foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-(fenil-metil)-prolinamida pura (0,112 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 361,2; tempo de retenção = 2,55 minutos. A 5-oxo-l-(fenilmetil)-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue: (i) Hidrocloreto de L-glutamato de dimetilo (0,500 g, 2,37 mmol) foi dissolvido em metanol (10 mL) e arrefecido a 0 °C. A mistura foi em seguida tratada com hidróxido de sódio (0,099 g, 2,49 mmol) seguido por ácido acético (0,136 mL, 2,37 mmol) e benzaldeido (0,361 mL, 3,55 mmol). Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, tetra-hidretoborato de sódio (0,088 g, 2,37 mmol) foi adicionado e a mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi novamente arrefecida a 0 °C e tratada com uma quantidade adicional de tetra-hidretoborato de sódio 41 ΡΕ2049478 (0,044 g, 1,18 iranol) . A mistura foi novamente deixada a aquecer à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A evaporação do metanol deu um residuo que foi recebido em acetato de etilo e filtrou-se. 0 filtrado foi em seguida lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, filtrado através de um separador de fases (com agitação) e evaporado para dar um óleo límpido (0,56 g). O óleo foi dissolvido em metanol e aquecido num tubo selado num reactor de micro-ondas a 120 °C durante 10 minutos e em seguida durante 15 minutos a 140 °C (LC/MS indicou que esta fase de aquecimento não tinha alterado a composição da mistura significativamente). O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica, eluindo com um gradiente de 15-20% de acetato de etilo em hexano, para dar 5-oxo-l-(fenilmetil)-prolinato de metilo puro (0,212 g) na forma de um óleo límpido. LC/MS [M+H]+ = 234; tempo de retenção = 2,15 minutos. (ii) 5-Oxo-l-(fenilmetil)-prolinato de metilo (0,212 g, 0,91 mmol) foi dissolvido em água (3 mL) e metanol (0,5 mL) e tratado com hidróxido de sódio aquoso 2 M (0,682 mL, 1,36 mmol). A mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e em seguida lavada com diclorometano. A camada aquosa foi evaporada e o resíduo foi tratado com um excesso de cloreto de hidrogénio 1 M em éter (~5 mL). A mistura foi evaporada mais uma vez e o resíduo foi triturado com diclorometano. O material sólido foi descartado e as frações de diclorometano 42 ΡΕ2049478 combinadas foram evaporadas para darem 5-oxo-l-(fenil-metil)-prolina (0,182 g) na forma dum óleo amarelo que foi utilizado sem purificação adicional. LC/MS [M+H]+ = 220, tempo de retenção =1,72 minutos.
Exemplo 2 N- [(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(1-metiletil)-5-oxo- -prolinamida (E2)
1-(1-Metiletil)-5-oxo-prolina (0,060 g, 0,35 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em diclorometano (3 mL) e dimetilformamida (1 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxibenzotriazole (0,052 g, 0,39 mmol), [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,061 g, 0,39 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimi-da (0,074 g, 0,39 mmol) sob uma atmosfera de árgon. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi diluida com diclorometano e lavada sequencialmente com cloreto de hidrogénio 2 M aquoso e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi filtrada através de um separador de fases e, em seguida, evaporada para dar o produto bruto. O material bruto foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [(2-cloro-4-fluorofenil)metil]-1-(1-metiletil)-5-oxo-prolinamida pura (0,032 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 313,1; tempo de retenção = 2,26 minutos. 43 ΡΕ2049478 A 1-(1-metiletil)-5-oxo-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue: (i) Hidrocloreto de L-glutamato de dimetilo (0,500 g, 2,37 mmol) foi dissolvido em metanol (4 mL) e tetra-hidrofurano (8 mL) e a mistura foi então tratada com hidróxido de sódio moido (0,099 g, 2,49 mmol) durante 10 minutos. A esta fase ácido acético (0,136 mL, 2.37 mmol) e acetona (0,261 mL, 3,55 mmol) foram adicionados em conjunto à mistura na forma duma solução em tetra-hidrofurano (1 mL) . Após agitação durante 10 minutos, a mistura foi arrefecida até 0 °C e tratada com péletes de tetra-hidretoborato de sódio (0,088 g, 2.37 mmol). A mistura foi em seguida deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A evaporação do metanol deu um residuo que foi recebido em acetato de etilo e filtrou-se. O filtrado foi em seguida lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, filtrada através de um separador de fases (com agitação) e evaporada para dar um óleo limpido (0,217 g) . O óleo foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica para dar N-(1-metiletil)-glutamato de dimetilo puro (0,200 g). (ii) N- (1-Metiletil)-glutamato de dimetilo (0,200 g) foi dissolvido em metanol e aqueceu-se num tubo vedado num reactor de micro-ondas a 140 °C durante 20 minutos. A cromatografia em camada fina indicou que o material de partida permaneceu intacto de maneira que o solvente foi 44 ΡΕ2049478 evaporado e substituído por tolueno. A mistura foi aquecida à temperatura de refluxo durante ~3 horas e depois evaporada para dar 1-(1-metiletil)-5-oxo-prolinato de metilo (0,152 g) na forma de um óleo amarelo claro, o qual foi utilizado no passo subsequente sem purificação adicional. (iii) 1-(1-Metiletil)-5-oxo-prolinato de metilo (0,152 g, 0,82 mmol) foi dissolvido em água (3 mL) e metanol (0,5 mL) e tratado com hidróxido de sódio aquoso 2 M (0,682 mL, 1,36 mmol). A mistura foi agitada durante ~4 h à temperatura ambiente e em seguida lavada com diclorometano. A camada aquosa foi evaporada e o resíduo foi tratado com um excesso de cloreto de hidrogénio 1 M em éter (~5 mL). A mistura foi evaporada mais uma vez e o resíduo foi triturado com diclorometano. 0 material sólido foi descartado e as frações de diclorometano combinadas foram evaporadas para darem 1-(1-metiletil)-5--oxo-prolina (0,060 g) na forma dum óleo amarelo que cristalizou em repouso.
Exemplo 3 N-[(2-Cloro-4-fluorofenil)metil]-l-etil-5-oxo-prolinamida (E3)
l-Etil-5-oxo-prolinato de metilo (0,135 g, 0,79 mmol, preparado conforme descrito abaixo) foi dissol- 45 ΡΕ2049478 vido em metanol (4 mL) e tratado com hidróxido de sódio aquoso 2 M (0,592 mL, 1,18 mmol) . A mistura foi agitada durante 4 h à temperatura ambiente e, em seguida, evaporada para dar um resíduo que foi em seguida tratado com um excesso de cloreto de hidrogénio 1 M em éter (5 mL) durante 10 minutos. A mistura foi evaporada mais uma vez e o resíduo foi dissolvido em diclorometano (4 mL) e dimetilformamida (2 mL) e filtrada para remover os sólidos. A solução resultante foi transferida para um tubo de reacção e 1-hidroxibenzotriazole (0,117 g, 0,87 mmol), [ (2 — -cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,138 g, 0,87 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi-imida (0,167 g, 0,87 mmol) foram em seguida adicionados. A mistura foi purgada com árgon e em seguida agitada à temperatura ambiente durante o fim de semana. A mistura foi em seguida diluída com diclorometano e lavada sequencialmente com cloreto de hidrogénio 2 M aquoso e hidrogeno-carbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi filtrada através de um separador de fases e, em seguida, evaporada para dar o produto bruto. O material bruto foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-prolinamida pura (0,086 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 299,1; tempo de retenção = 2,13 minutos.
Excesso enantiomérico = 100,0%, conforme determinado por cromatograf ia quiral método B, indicativo de IV-[ (2--cloro-4-fluorofenil)metil]-l-etil-5-oxo-L-prolinamida; tempo de retenção = 8,05 minutos 46 ΡΕ2049478 Ο l-etil-5-oxo-prolinato de metilo usado no procedimento anterior foi preparado como se segue: (i) Hidrocloreto de L-glutamato de dimetilo (0,500 g, 2,37 mmol) foi dissolvido em metanol (4 mL) e tetra-hidrofurano (8 mL) e a mistura foi em seguida tratada com hidróxido de sódio moido (0,099 g, 2,49 mmol) durante 10 minutos. Nesta fase de ácido acético (0,136 mL, 2,37 mmol) e acetaldeido (0,199 mL, 3,55 mmol) foram adicionados em conjunto à mistura na forma duma solução em tetra-hidrofurano (1 mL) . Após agitação durante 10 minutos, a mistura foi arrefecida a 0 °C e tratada com péletes de tetra-hidretoborato de sódio (0,088 g, 2,37 mmol). A mistura foi em seguida deixada a aquecer até à temperatura ambiente. Uma vez a mistura ter atingido a temperatura ambiente, ela foi diluída com acetato de etilo (30 mL) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, filtrada através de um separador de fases (com agitação) e evaporada para dar um resíduo oleoso. O óleo foi dissolvido em tolueno e aquecido em refluxo durante 4 horas. Para assegurar a reacção completa, a mistura foi em seguida aquecida durante a noite em refluxo. O solvente foi em seguida evaporado e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica, eluindo com um gradiente de 30-50% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-oxo-prolinato de metilo bruto (0,135 g) na forma de um óleo límpido que foi utilizado sem purificação adicional. 47 ΡΕ2049478
Exemplos 4-8
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 3 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 1) foram preparados substituindo o aldeído apropriado (ou cetona) para o acetaldeído usado no procedimento acima. Todos os aldeídos e cetonas usados para fazer os compostos apresentados na Tabela 1 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparados utilizando caminhos descritos anteriormente na literatura química.
Tabela 1
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E4 N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-oxo-5-1-propil-prolinamida 313,1 2,30 E5 0 α N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(2-metilpropil)-5-oxo-prolinamida 327,1 2,46 E6 N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-ciclopentil-5-oxo-prolinamida 339,1 2,47 ΡΕ2049478 48
Exemplo 9 N- [(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-fenil-prolinamida (E9)
5-0xo-l-fenil-prolina (0,047 g, 0,23 iranol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em dicloro-metano (~2 mL) e dimetilformamida (1 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxibenzotriazole (0,034 g, 0,25 mmol), [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,040 g, 0,25 mmol), N-etilmorfolina (0,032 mL, 0,25 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,048 g, 0,25 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4,5 h. A mistura foi diluida com mais diclorometano e lavada 49 ΡΕ2049478 sequencialmente com cloreto de hidrogénio 2 M aquoso e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi filtrada através de um separador de fases e, em seguida, evaporada para dar o produto cru. 0 material cru foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-fenil-prolinamida pura (0,032 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+= 347,1; tempo de retenção, = 2,51 min. A 5-oxo-l-fenil-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue: (I) 5-0xo-L-prolinato de metilo (0,204 mL, 1,75 mmol) foi dissolvido em tolueno (5 mL) e tratado com tris-(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (0,024 g, 0,03 mmol), bromobenzeno (0,184 mL, 1,75 mmol), carbonato de césio (0,795 g, 2,45 mmol) e Xantphos™ (0,040 g, 0,07 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 120 °C durante ~18 h e em seguida deixada arrefecer até à temperatura ambiente. A mistura foi diluida com acetato de etilo e lavou-se sequencialmente com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M, hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado e água salgada. A filtração através de um separador de fases, seguido por evaporação deu um óleo amarelo/castanho (~0,200 g). O material cru foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar 5-oxo-l-fenilprolinato de metilo puro (0,054 g) na forma de um óleo que cristalizou em repouso. LC/MS [M+H]+= 220, tempo de retenção = 2,03 minutos. 50 ΡΕ2049478 (ii) 5-Oxo-l-fenilprolinato de metilo (0,054 g, 0,25 mmol) foi combinado com hidróxido de sódio aquoso 2 M (0,160 mL, 0,32 mmol) em metanol (1 mL) e agitado durante a noite à temperatura ambiente. O solvente foi em seguida evaporado e o resíduo foi recebido em acetato de etilo e lavado com cloreto de hidrogénio aquoso 2 Μ. A camada aquosa foi separada e lavada mais duas vezes com acetato de etilo e, em seguida, as camadas combinadas de acetato de etilo foram secas usando um separador de fases e evaporadas para darem 5-oxo-l-fenil-prolina (0,047 g) na forma de um óleo límpido.
Exemplo 10 N- [(2,4-Diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxo-prolinamida (E10)
0,4 mmol l-Metil-5-oxo-prolina (0,057 g
preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em diclorometano anidro (6 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxibenzotriazole (0,060 g, 0,4 mmol), [ (2,4-dicloro--fenil)-metil]amina (0,055 mL, 0,4 mmol), di-isopropilamina (0,140 mL, 0,8 mmol) e hexafluorofosfato de O-(7-azabenzo-triazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (0,152 g, 0,4 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente (20 °C) sob árgon durante 3 horas e em seguida durante a noite. A mistura foi diluída com mais diclorometano (25 mL) e lavada sequencialmente com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M 51 ΡΕ2049478 (20 mL), hidrogeno carbonato de sódio aquoso saturado (20 mL) , carbonato de sódio aquoso a 10% (20 mL) e água salgada (20 mL). A camada orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e em seguida evaporada para dar o produto cru. O material cru foi dissolvido numa mistura de dimetilsulfóxido (0,9 mL) e acetonitrilo (0,9 mL) e em seguida purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [(2,4-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxo-proli-namida pura (0,085 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 301, tempo de retenção = 2,16 minutos. A l-metil-5-oxo-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue: (I) Ácido N-metil-L-glutâmico (0,500 g, 3,1 mmol) foi dissolvido em água (1 mL) e aquecido num tubo vedado a 140 °C durante 30 minutos num reator de micro-ondas. A água foi em seguida evaporada e o residuo foi triturado com éter para dar, após secagem, l-metil-5-oxo-prolina (0,298 g) na forma dum sólido branco. N- [(2,4-Diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxo-proli-namida também pode ser preparada conforme descrito abaixo: l-Metil-5-oxo-prolina (36,79 g, 0,257 mol, preparada conforme descrito acima) foi suspensa em DCM (diclorometano) (500 mL). EEDQ (2-etoxi-l-etoxicarbonil--1,2-di-hidroquinolina, 66,7 g, 0,27 mol, 1,05 eq) foi adicionada numa porção. Todo o material pareceu dissolver-se para dar uma mistura opaca e a temperatura caiu de 52 ΡΕ2049478 21 °C para 10 °C. Isto foi agitado durante 20 minutos sob árgon e em seguida uma solução de 2,4-diclorobenzilamina (36 mL, 0,27 mol, 1,05 eq) em DCM (100 mL) foi adicionada gota a gota ao longo de um período de 40 minutos. Durante a adição, um precipitado branco formou-se no funil de gotejamento. A mistura borbulhou suavemente e um banho de gelo/água foi usado para manter a temperatura entre 15-20 °C. Após a adição completa da amina, o funil de gotejamento foi lavado com DCM adicional (50 mL) para lavar todo o precipitado na mistura de reacção. A mistura foi então deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante aprox. 18 horas. Hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 mL) foi adicionado à mistura e agitou-se durante 5 minutos. A camada orgânica foi então separada e lavada com HC1 2 N (3 x 250 mL) . Durante as lavagens ácidas, os cristais começaram a formar-se na camada orgânica, de modo que esta foi diluída com DCM adicional (200 mL). A camada orgânica foi seca por passagem através de uma frita hidrofóbica e, em seguida, concentrada sob vácuo para dar 65 g de sólidos cor de rosa. Os sólidos tinham formado grandes grumos de modo que o material em bruto foi triturado num almofariz com pilão. Estes foram em seguida triturados com éter dietílico (400 mL) e os sólidos separados por filtração e lavados com mais Et20 (2 x 200 mL) . A secagem deu em seguida 52, 96 g de sólidos cor de rosa pálidos. Este material foi combinado com 2 lotes adicionais, preparados da mesma maneira, (141,42 g no total) e, em seguida, suspenso em etanol (430 mL) e água (715 mL) e gradual- 53 ΡΕ2049478 mente aquecido a 65 °C (temperatura de solução). A mistura deu uma solução quase límpida (rosa escuro), com exceção de uma suspensão de sólidos muito finos. Após o aquecimento a 65 °C durante 20 minutos, o balão foi retirado do calor e deixa-se aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. Após este tempo, agulhas brancas precipitaram da solução. A mistura foi arrefecida num banho de gelo durante 20 minutos para assegurar que todos os sólidos tinham precipitado. Os sólidos brancos foram em seguida separados por filtração a partir da solução cor de rosa e lavados com porções de Et0H/H20 3:5 (2 x 400 mL) , que tinha sido arrefecida num banho de gelo. Os sólidos foram secos num forno de vácuo (40 °C) durante um total de 5 dias para dar N- [ (2,4-dicloro-fenil)metil]-l-metil-5-oxo-prolinamida pura (125,37 g) na forma de cristais incolores. LC/MS [M+H]+= 301, tempo de retenção = 2,34 minutos. 1H-NMR (CDC13, 500 MHz) δ 2,01 (m, 1H) , 2,34 (m, 1H) , 2,37 (m, 1H) , 2,46 (m, 1H) , 2,80 (s, 3H) , 3,99 (dd, 1H, J= 9,1, 4,2 Hz), 4,49 (dd, 1H, J= 14,9, 5,9 Hz), 4,55 (dd, 1H, J= 14,8, 6,1 Hz), 6,56 (t largo, 1H, J= 5,7 Hz), 7,24 (dd, 1H, J= 8,2, 2,1 Hz), 7,33 (d, 1H, J= 8,2 Hz), 7,40 (d, 1H, J= 2,1 Hz); 13C-NMR δ 175, 9, 171,3, 134,5, 134,3, 133, 7, 131,5, 129, 6, 127,5, 63, 8, 41,2, 29, 4, 29,2, 23,4.
Excesso enantiomérico = 99,5%, conforme determinado pelo método de cromatografia quiral A, indicativa de N- [2,4-diclorofenilmetil]-l-metil-5-oxo-L-prolinamida; 54 ΡΕ2049478 tempo de retenção = 9,89 minutos; [a]D = -2,1° (c=l, MeOH); temperatura = 29,3 °C; comprimento de onda = 589 nm; ponto de fusão = 144,0-144,8 °C.
Exemplo 11 N- [(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-metil-5-oxo-prolinamida (Eli)
l-Metil-5-oxo-prolina (0,050 g, 0,35 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em dicloro-metano anidro (7 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxiben-zotriazole (0,047 g, 0,42 mmol), [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,056 mL, 0,42 mmol), N-etilmorfolina (0,166 mL, 1,04 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,067 g, 0,42 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Uma aliquota adicional de [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,100 mL, 0,8 mmol) foi adicionada à mistura e a agitação continuou por mais algum tempo, mas a HPLC indicou que não se formou mais produto. A mistura foi lavada sequencialmente com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M (5 mL) e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (5 mL). A camada orgânica foi recolhida e evaporada para dar o produto cru. O material cru foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [(2-cloro-4-fluorofenil) -metil]-l-metil-5-oxo-prolinamida pura (0,015 g) na 55 ΡΕ2049478 forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 285; tempo de retenção = 2,04 minutos. A l-metil-5-oxo-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue: (i) Éster metilico do ácido (L)-piroglutâmico (1 g, 6,99 mmol) foi dissolvido/misturado com tetra-hidrofurano (10 mL) e arrefecido a 0 °C usando um banho de gelo. Hidreto de sódio (0,201 g de uma suspensão a 60% em óleo, 8,38 mmol) foi adicionado à mistura. Após o borbulhamento ter parado, iodeto de metilo (0,522 mL, 8,38 mmol) foi adicionado e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e, em seguida, agitada durante 1 h. O solvente foi evaporado e foi adicionada água (1 mL). A camada aquosa foi em seguida extraida com diclorometano. A evaporação do diclorometano deu l-metil-5-oxo-prolinato de metilo cru (0,308 g) , o qual foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (ii) l-Metil-5-oxo-prolinato de metilo (0,308 g, 1,96 mmol) foi dissolvido em metanol (~ 10 mL) e a isto foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (0,157 g, 3,92 mmol) em água ( — 10 mL) . A mistura foi aquecida a refluxo durante 3 horas, depois arrefecida e evaporada para deixar uma quantidade minima de água. Isto foi acidificado até pH 1 usando cloreto de hidrogénio aquoso 2 Μ. A camada aquosa foi lavada com diclorometano e em seguida separada e evaporada para dar l-metil-5-οχο-prolina na forma dum sólido branco (0,300 g). 56 ΡΕ2049478
Exemplo 12 l-Etil-5-oxo-W- [(2,3,4-trifluorofenil)-metil]-prolinamida (E12)
l-Etil-5-oxo-prolina (0,050 g, 0,32 mmol) foi dissolvida em diclorometano anidro (~7 mL) e dimetilforma-mida (1 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxibenzotriazole (0,052 g, 0,38 mmol), [(2,3, 4-trifluorofenil)-metil]amina (0,103 g, 0,64 mmol), N-etilmorfolina (0,151 mL, 0,95 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi-imida (0,073 g, 0,38 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante o fim de semana. Uma alíquota adicional de [ (2,3,4-trifluorofenil)-metil]amina (0,051 g, 0,32 mmol) foi adicionado à mistura e a agitação continuou por mais algum tempo até HPLC indicou que nenhum produto adicional foi formando. A mistura foi diluida com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M (5 mL) e depois filtrada através de um separador de fases. A camada orgânica foi em seguida lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado e de novo filtrada através de um separador de fases. A camada orgânica foi em seguida evaporada para dar o produto cru. O material cru foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar l-etil-5-oxo-iV- [ (2,3,4-trifluorofenil) -metil]-prolinamida pura (0,032 g) . LC/MS [M+H]+ = 301, tempo de retenção = 2,03 minutos. 57 ΡΕ2049478 A l-etil-5-oxo-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue (Método A): (i) Hidrocloreto de L-glutamato de dimetilo (5,0 g, 23,7 mmol) foi dissolvido em metanol (100 mL) e a mistura foi em seguida tratada com hidróxido de sódio moido (1,0 g, 24,9 mmol) sob árgon à temperatura ambiente. Após 5 minutos, acetaldeido (1,99 mL, 35,5 mmol) foi adicionado e a agitação continuou durante 10 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C e tratada com grânulos de tetra-hidretoborato de sódio (0,701 g, 18,95 mmol). A agitação continuou durante 1 h a 0 °C e em seguida o metanol foi separado por evaporação e o resíduo foi recebido em acetato de etilo e filtrado. O filtrado foi em seguida lavado com água salgada e a lavagem de água salgada foi extraída com acetato de etilo. As frações de acetato de etilo combinadas foram filtradas através de uma frita hidrofóbica e evaporadas para darem um óleo límpido (3,2 g) . 0 óleo foi dissolvido em tolueno (30 mL) e aquecida em refluxo durante a noite. 0 tolueno foi em seguida evaporado para dar um resíduo cor de laranja claro que foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica, eluindo com um gradiente de 20-60% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-οχο--prolinato de metilo parcialmente puro (1,9 g) na forma de um óleo límpido. Este foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (ii) l-Etil-5-oxo-prolinato de metilo (1,91 g, 58 ΡΕ2049478 11,17 mmol) foi dissolvido em metanol (25 mL) e tratado com hidróxido de sódio aquoso 2 M (7,3 mL, 14,52 mmol). A mistura foi agitada durante 4 horas à temperatura ambiente e, em seguida, lavada com diclorometano. A camada aquosa foi evaporada e o residuo foi tratado com um excesso de cloreto de hidrogénio 1 M em éter (~5 mL). A mistura foi evaporada mais uma vez e o residuo foi triturado com diclorometano. 0 material sólido foi desprezado e as frações de diclorometano combinadas foram evaporadas para dar um óleo limpido que cristalizou em repouso. A trituração com hexano e éter e secagem deu l-etil-5-oxo-prolina pura (0,271 g) na forma dum sólido branco.
Alternativamente, l-etil-5-oxo-prolina pode ser preparada como segue (Método B): (i) 5-Oxo-L-prolinato de 1,1-dimetiletilo (2,7 g, 12 mmol, preparado conforme descrito no Synth. Comm., 35 (8) (20 05) 1129) foi adicionado a uma suspensão de hidreto de sódio (0,428 g (suspensão a 60% em óleo), 10,7 mmol) em tetra-hidrofurano (6 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. Iodeto de etilo (1,67 g, 10,7 mmol) foi em seguida adicionado e a mistura foi aquecida a 40 °C durante 2 h. Uma quantidade adicional de hidreto de sódio (0,24 g) foi adicionada e a agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente. Uma quantidade adicional de iodeto de etilo (0,86 mL) foi adicionada à mistura, nesta fase, 59 ΡΕ2049478 e a mistura foi deixada a repousar à temperatura ambiente durante o fim de semana. Água (~ 10 mL) foi adicionada à mistura e esta foi agitada durante 15 minutos. 0 tetra--hidrofurano foi evaporado e a camada aquosa restante foi extraída com diclorometano (2 x 50 mL) e uma mistura 3:1 de clorofórmio e isopropanol (50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram filtradas através de uma frita hidrofóbica e evaporadas para darem um óleo amarelo. Tolueno foi adicionado à mistura e em seguida evaporada até um óleo amarelo, mais uma vez. Este material foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 15-100% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5--oxo-prolinato de 1,1-dimetiletilo puro. (ii) l-Etil-5-oxo-prolinato de 1,1-dimetiletilo (0,965 g) foi dissolvido em diclorometano (~5 mL) e tratado com ácido trifluoroacético (1 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h e em seguida evaporada. 0 material resultante era principalmente material de partida de modo que uma quantidade adicional de ácido trifluoroacético (1 mL) e diclorometano (~5 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 36 horas. A mistura foi evaporada e, em seguida, foi adicionado tolueno ao resíduo e este foi, por sua vez, também evaporado. Após repetir este processo mais uma vez, l-etil-5-oxo-prolina crua foi obtida na forma de um óleo amarelo escuro o qual foi utilizado sem purificação adicional. 60 ΡΕ2049478
Alternativamente, l-etil-5-oxo-prolina pode ser preparada do seguinte modo (Método C): (i) Hidrocloreto de 5-metil-L-glutamato de 1-(1,1--dimetiletilo) (5,0 g, 19,71 mmol) foi dissolvido numa mistura de metanol (30 mL) e tetra-hidrofurano (60 mL) e a mistura foi então tratada com hidróxido de sódio mordo em pó (0,828 g, 20,69 mmol) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente. Após agitação durante 10 minutos, acetaldeido (1,11 mL, 19,71 mmol) e ácido acético (1,13 mL, 19,71 mmol) foram adicionados e a agitação continuou durante 10-15 minutos. A mistura foi arrefecida a 0 °C num banho de gelo e tratada com péletes de tetra-hidretoborato de sódio (0,746 g, 19,71 mmol). A agitação continuou durante -lha 0 °C sob árgon. A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente para dar uma suspensão espessa. Sólidos brancos finos foram separados por filtração e em seguida o metanol foi evaporado e o residuo foi recebido em diclorometano (-50 mL) e lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (-25 mL). A camada orgânica foi separada usando um separador de fases e, em seguida, a camada aquosa foi novamente extraída com mais diclorometano (2 x 20 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram evaporadas para darem uma óleo incolor (-4 g). O óleo (3 g, assumir 14,8 mmol) foi dissolvido em tolueno (30 mL) e aqueceu-se ao refluxo durante -16 h durante a noite para dar uma solução cor de laranja. O tolueno foi em seguida evaporado para dar um óleo cor de laranja (2,6 g) . Este foi combinado com um 61 ΡΕ2049478 lote adicional de óleo (0,850 g) que foi obtido da mesma maneira e em seguida purificado por cromatografia flash em coluna de silica automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 20-80% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-oxoprolinato de 1,1-dimetiletilo puro (2,14 g) . (ii) l-Etil-5-oxoprolinato de 1,1-dimetiletilo (0,933 g) foi dissolvido em diclorometano (~5 mL) e tratado com ácido trifluoroacético (1 mL). A mistura foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente e depois evaporada. O resíduo foi tomado em tolueno e evaporado uma vez mais. Isto deu l-etil-5-oxo-prolina parcialmente pura (>95%) na forma de um óleo cor de laranja/amarelo (0,914 g) o qual foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplos 13-36
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 12 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 2) foram preparados substituindo a amina apropriada (ou um seu sal) pela [ (2,3,4-trifluorofenil)-metil]amina utilizada no procedimento acima. Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 2 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando rotas descritas anteriormente na literatura química ou por métodos análogos àqueles. A l-etil-5-οχο--prolina utilizado na reacção foi preparada, em cada caso, pelo método indicado. Onde determinado (por HPLC quiral), o excesso enantiomérico (ee) do isómero mostrado também está 62 ΡΕ2049478 listado juntamente com o seu nome estereoespecífico, o método de separação quiral usado entre parêntesis e o tempo de retenção correspondente (t.r.) naquele método.
Tabela 2
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) Método usado para preparar l-etil-5-οχο-prolina ee E13 yJ 0 Br N- [(2-bromo-fenil)metil]-l-etil-5-oxo-prolinamida 327 2,04 A E14 0 Cl N- [(2-cloro-6-fluorofenil)-metil]-1-3til-5-oxo-prolinamict 299 2,03 A E15 J o N- [ (3-cloro-fenil)metil]-l-etil-5-oxo-prolinamida 281 2,13 A E16 J 0 N- [ (4-cloro-fenil)metil]-l-etil-5-oxo-prolinamida 281 2,07 A ΡΕ2049478 63 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) Método usado para preparar l-etil-5-οχο-prolina ee E17 yl O Cl N-[(2,4-di-clorofenil)metil]-1-etil-5-oxo-prolinamick 315 2,39 A N- [(2,4-diclo-rofenil)metil]-1-etil-5-oxo-L-prolinamida 96,9% (C) t.r. = 8,78 min E18 J o cf3 l-etil-5-oxo-i\7-{ [2-(trifluorometil)fe-nil]metil}-prolinamict 315 2,29 B E19 nr=J \ η ( || N- [(4-cloro-2-metilfenil)-metil]-1-2til-5-oxo-prolinamict 295 2,37 B E20 N- [(2-cloro-3,6-difluorofenil)metil]-l-etil-5-οχο-prolinamida 317 2,15 B E21 N- [ (2-cloro-fenil)metil]-l-etil-5-oxo-prolinamida 281 2,10 B ΡΕ2049478 64 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) Método usado para preparar l-etil-5-οχο-prolina ee E22 J 0 N-[(3,4-di-clorofenil)metil]-1-2til-5-oxo-prolinamid= 315 2,36 B 82,8% (C) N-[ (3,4-diclorofenil)metil]-l-etil-5-oxo-L-prolinamida tr = 5,37min E23 1-Etil-AH[4-fluoro-2-(trifluorometil)-fenil]metil}-5-oxo-prolinamida 333 2,33 B E24 N- [(2, 4-dime-tilfenil)metil]-1-Btil-5-oxo-prolinamidc 275 2,24 B E25 N- [(2-cloro-6-metilfenil)metil]-1-Btil-5-oxo-prolinamidc 295 2,28 B 79,0% (C) N-[(2-cloro-6-metilfenil)-metil]-l-etil-5-οχο-L-prolinamida tr = 6,91 min E26 a Xjl Jli N- [(2-cloro-6-fluoro-3-metilfenil)-metil]-l-etil-5-οχο-prolinamida 313 2,31 B ΡΕ2049478 65 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) Método usado para preparar l-etil-5-οχο-prolina ee E27 J 0 F N- [(6-cloro-2-fluoro-3-metilfenil)-metil]-l-etil-5-οχο-prolinamida 313 2,20 B E28 «==0γ!υρία / ο α N- [(2,3-diclorofenil) -metil]-l-etil-5-oxoprolinamida 315 2,29 C E29 o3» 3t ti 3*^3C. J 0 1 N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 295 2,30 C E30 rJjÇ) yJ O Cl N-[(2,6-di-clorofenil)metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 315 2,19 C E31 c3'1 JLJL J I l-Etil-N-{[4-fluoro-3-(trifluorometil) -fenil]metil}-5-oxoprolinamida 333 2,35 C ΡΕ2049478 66 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) Método usado para preparar l-etil-5-οχο-prolina ee E32 \ H 1 ΊΓ S 0 N-{[4-cloro-3-(trifluorometil)fenil] metil}-l-etil-5-oxoprolinamida 349 2,49 C 99,1 (A) N-{[4-cloro-3- (trifluorometil)feni 1]metil}-l-etil-5-oxo-L-prolinamida tr = 5,44 min E33 °^pYNjy N- [(4-bromo-2-fluorofenil)metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 345 2,24 C E34 J 0 1-Etil-W- [(2-metilfenil)-metil]-5-oxoprolinamida 261 2,00 C E35 / 0 Cl N-{[2-cloro-3-(tritluorometil)fenil] metil}-l-etil-5-oxoprolinamida 349 2,45 C 100,0 (A) N-{[2-cloro-3- (trifluorometil)feni 1]metil}-l-etil-5-oxo-L-prolinamida tr = 5,51 min E36 N- [(2-cloro-3,4-di-fluorofenil)metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 317 2,22 C 0 hidrocloreto da [ (2-cloro-3,4-difluorofenil) - 67 PE2049478 metil]amina necessário para a síntese de N- [ (2-cloro-3,4--difluorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida (Exemplo 36) foi preparado do modo seguinte: (i) Uma solução de N,N,N',N'-tetrametiletileno-diamina (39,6 mL, 264 mmol) em tetra-hidrofurano (170 mL) foi arrefecida sob atmosfera de árgon a -70 °C antes da adição de sec-butil-lítio (205 mL, 288 mmol). A esta mistura, ácido 3,4-difluorobenzóico (19 g, 120 mmol) foi então adicionado na forma duma solução em tetra-hidrofurano (80 mL) ao longo de um período de 40 minutos, assegurando que a temperatura da mistura não subiu acima de -60 °C. A mistura foi então agitada a uma temperatura de -68 °C até -70 °C durante 1 h antes da adição duma solução de hexacloroetano (100 g, 422 mmol) em tetra--hidrofurano (170 mL) durante um período de 35 minutos, enquanto se mantinha a temperatura da mistura abaixo de -60 °C. A mistura foi agitada a uma temperatura de -65 °C até -70 °C durante 2 h. A mistura foi deixada a aquecer até -10 °C e, em seguida, água (500 mL) foi adicionada para parar a reacção. A mistura foi diluída com éter dietílico (250 mL) e as duas camadas resultantes foram separadas. A camada aquosa foi acidificada até pH 1 usando cloreto de hidrogénio aquoso concentrado e depois extraída com 2 x 500 mL alíquotas de éter dietílico. Os extratos orgânicos combinados foram passados através de uma frita hidrofóbica e reduzidos em vácuo para darem um sólido amarelo. Este foi recristalizado em acetato de etilo para dar duas colheitas (8,35 g e 4,47 g) de ácido 2-cloro-3,4-difluorobenzóico puro. 68 ΡΕ2049478 (ii) Ácido 2-cloro-3,4-difluorobenzóico (2 g, 10,4 mmol) foi tratado com cloreto de tionilo (3,04 mL) e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 90 minutos. A mistura foi em seguida arrefecida e reduzida em vácuo. O residuo foi dissolvido em 1,4-dioxano anidro (10 mL) e a mistura foi em seguida arrefecida num banho de gelo-água. Amoníaco 0,88 (aquoso, 25 mL) foi adicionado gota a gota à mistura a qual foi subsequentemente deixada a aquecer a 22 °C ao longo de um período de 2 h. Este processo foi repetido utilizando 10,8 g de ácido 2-cloro-3,4-difluorobenzóico, 8,2 mL de cloreto de tionilo e 45 mL de amoníaco 0,88 e, em seguida, ambas as misturas foram combinadas e repartidas entre acetato de etilo (150 mL) e água (100 mL) . A camada aquosa foi separada e extraída com 2 x 150 mL de alíquotas de acetato de etilo. Os extratos orgânicos combinados foram então lavados com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL), secos utilizando uma frita hidrofóbica, e reduzidos em vácuo para darem 2-cloro-3,4-difluorobenzamida (11,86 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+= 192/194; tempo de retenção = 1,69 minutos.
(iii) 2-Cloro-3,4-difluorobenzamida (11,85 g 62 mmol) foi dissolvida em tetra-hidrofurano (200 mL) e tratada com borano 1 M em tetra-hidrofurano (247 mL, 247 mmol) . A mistura foi aquecida a 70 °C e agitada durante 18 h. A mistura foi em seguida arrefecida num banho de gelo-água e cloreto de hidrogénio aquoso concentrado (150 mL) foi adicionado gota a gota. O 69 ΡΕ2049478 aquecimento, com agitação, a 70 °C foi, em seguida, retomado durante mais 2 h. A mistura foi então deixada arrefecer e o solvente foi evaporado em vácuo. O resíduo foi repartido entre acetato de etilo (200 mL) e cloreto de hidrogénio aquoso 2 N (200 mL) . A camada aquosa foi separada e o pH foi ajustado para 8-9 por adição gota a gota de hidróxido de sódio aquoso 5 N. A suspensão turva resultante foi extraída com acetato de etilo (4 x 200 mL) e os extratos orgânicos combinados foram em seguida passados através duma frita hidrofóbica e reduzidos em volume para ~200 mL. A mistura foi em seguida acidificada pela adição de um cloreto de hidrogénio etéreo 1 M (100 mL) , resultando na formação de um precipitado. O solvente foi evaporado em vácuo para dar um sólido branco. O sólido foi recristalizado em álcool metilado (60 mL) para dar três colheitas de hidrocloreto de [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]amina puro (massa combinada = 4,46 g) na forma dum sólido branco.
Exemplo 37 N-[(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-4--(fenilmetil)-prolinamida (E37)
crua l-Etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolina (0,052 g, 0,09 mmol, preparada conforme descrito abaixo) 70 ΡΕ2049478 foi suspensa numa mistura de diclorometano (0,5 mL) e dimetilformamida (0,5 mL) e a esta mistura foi adicionada N-etilmorfolina (0,034 mL, 0,27, mmol) o que causou a dissolução da maior parte do material. 1-Hidroxibenzotria-zol (0,016 g, 0,12 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilami-nopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,022 g, 0,12 mmol) foram em seguida adicionados e a mistura foi agitada durante 10 minutos antes da adição de [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-amina (0,019 g, 0,12 mmol). A mistura foi então deixada em repouso à temperatura ambiente durante a noite. Hidrogeno-carbonato de sódio aquoso saturado (~2 mL) foi adicionado à mistura e agitou-se durante 10 minutos. A camada orgânica foi isolada por filtração através de um separador de fases e, em seguida, lavou-se com cloreto de hidrogénio aquoso 2 Μ. A camada orgânica foi separada novamente e evaporada para dar um óleo amarelo que foi purificado por HPLC automatizada de dirigida à massa para dar N- [ (2-cloro-4--fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolinami-da pura (0,004 g) na forma de um óleo incolor. LC/MS [M+H]+= 389; tempo de retenção = 2,90 minutos. A l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue (Método A): (i) (S)-(+)-2-pirrolidinona-5-carboxilato de etilo (0,85 g, 5,94 mmol) foi dissolvido em diclorometano (5 mL) e tratado com trietilamina (0,869 mL, 6,24 mmol) e 71 ΡΕ2049478 4-dimetilaminopiridina (0,010 g). A isto foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (1,36 g, 6,24 mmol) e a solução cor de laranja resultante foi deixada a agitar durante a noite. A mistura tornou-se azul/cinza e a evaporação do solvente deu um óleo cinzento (1,4 g). Este foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-60% de acetato de etilo em hexano, para dar 2-metil-5-oxo-l,2-pirrolidinodicarboxilato de 1-(1,1--dimetiletilo) (1,37 g) na forma de um óleo incolor que cristalizou em repouso. (ii) 2-Metil-5-oxo-l,2-pirrolidinodicarboxilato de 1-(1,1-dimetiletilo) (0,324 g, 1,33 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (3 mL) e a mistura foi arrefecida a -78 °C , usando um banho de acetona/gelo seco, sob uma atmosfera de árgon. Uma solução 1 M de bis(trimetil-silil)amideto de litio em tetra-hidrofurano (1,4 mL, 1,40 mmol) foi adicionado gota a gota e agitou-se sob árgon durante 1 hora. A isto foi em seguida adicionado brometo de benzilo (0,174 mL, 1,46 mmol) e a mistura foi agitada a -78 °C durante mais 2,5 h. A mistura foi em seguida deixada aquecer até à temperatura ambiente e arrefecida bruscamente pela adição de cloreto de amónio aquoso saturado (~5 mL) e em seguida deixou-se repousar durante a noite à temperatura ambiente. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi diluída com mais água (5 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 10 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de 72 ΡΕ2049478 sódio anidro e em seguida filtradas e concentradas para darem um óleo amarelo (0,700 g). Este foi purificado por cromatografia em coluna de silica flash automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-35% de acetato de etilo em hexano, para dar 2-metil-5-oxo-4-(fenilmetil)-1,2-pirrolidinodicarboxilato de 1-(1,1-dimetiletilo) na forma dum sólido branco (0,418 g) após evaporação do solvente. (iii) 2-Metil-5-oxo-4-(fenilmetil)-1,2-pirrolidinodicarboxilato de 1-(1,1-dimetiletilo) (0,415 g, 1,24 mmol) foi dissolvido em cloreto de hidrogénio 4 M em dioxano (2 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 h. O solvente foi evaporado para dar um óleo incolor que cristalizou em repouso para dar 5-oxo-4-(fenilmetil)--prolinato de metilo na forma dum sólido cremoso/branco (0,205 g). Este foi usado sem purificação adicional no passo seguinte. (iv) 5-Oxo-4-(fenilmetil)-prolinato de metilo (0,205 g, 0,88 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (2,5 mL) e tratado com iodeto de etilo (0,077 mL, 0,97 mmol). A mistura foi em seguida arrefecida a 0 °C e tratada com hidreto de sódio (0,037 g de uma suspensão a 60% em óleo, 0,92 mmol). Após agitação a 0 °C durante 10-15 minutos, a solução foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante mais 3,5 horas. A mistura foi em seguida tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (~2 mL) e subsequentemente diluida com dicloro- 73 PE2049478 metano (5 mL). A camada orgânica foi separada por filtração através de uma frita hidrofóbica (lavagem da fase aquosa com aliquotas adicionais de diclorometano (2x5 mL)). A evaporação das fases orgânicas combinadas deu um óleo castanho (~0,100 g). Este foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica automatizada, eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolinato de metilo (0,024 g) parcialmente purificado (~90% puro) na forma de um óleo amarelo que foi utilizado no passo subsequente sem purificação adicional. (v) l-Etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolinato de metilo (0,024 g, 0,09 mmol) foi dissolvido em metanol (0,5 mL) e arrefecido a 0 °C num banho de gelo. Hidróxido de sódio aquoso 2 M (0,137 mL, 0,27 mmol) foi adicionado à mistura e a agitação continuou a 0 °C durante 3 h. O solvente foi evaporado e o residuo foi acidificada por tratamento com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M (~0,2 mL) para dar uma solução turva. A evaporação em seguida deu l-etil-5-οχο-4-(fenilmetil)-prolina crua (0,052 g) como uma mistura de sólidos brancos e residuos oleosos amarelos. Esta foi usada sem purificação adicional.
Alternativamente, l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)--prolina pode também ser preparada da maneira seguinte (Método B): 74 ΡΕ2049478 (i) (S)- ( + )-L-5-tritiloximetil-2-pirrolidinona (1,88 g, 20 mmol) foi dissolvida em dimetilformamida (9 mL) a 0 °C e tratada com hidreto de sódio (suspensão a 60% em óleo , 0,220 g, 5,5 mmol). A mistura foi agitada a 0 °C durante 30 min e em seguida tratada com iodeto de etilo (0,444 mL, 5,5 mmol). A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e em seguida agitada durante a noite. A mistura foi então repartida entre acetato de etilo e cloreto de amónio aquoso saturado e extraida com acetato de etilo (x3) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados sequencialmente com água, solução aquosa a 50% de cloreto de sódio (x2) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e em seguida foi seca sobre sulfato de sódio. A concentração deu um sólido bege que foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de silica automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-{[(trifenilmetil)-oxi]metil}-2-pirroli-dinona pura (1,78 g).
(ii) Uma solução 2 M de di-isopropilamideto de litio em tetra-hidrofurano (1,050 mL, 2,1 mmol) foi adicionada, a -78 °C, a uma solução de l-etil-5-{[(trifenilmetil)--oxi]-metil}-2-pirrolidinona (0,771 g, 2 mmol) em tetra--hidrofurano (10 mL) e a mistura resultante foi agitada durante hora a -78 °C. Brometo de benzilo (0,262 mL, 2,2 mmol) foi em seguida adicionado e após agitação durante mais 1 hora a -78 °C e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. A 75 ΡΕ2049478 mistura foi extinta com cloreto de amónio aquoso saturado e, em seguida, extraída com acetato de etilo (x3) . Os extratos orgânicos combinados foram em seguida lavados com água e depois com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (x2), secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados até um óleo cru (1,27 g) . 0 sólido cru foi purificado por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de sílica (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar o produto desejado (isto é, l-etil-3-(fenilmetil)-5-{[(tri-fenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirrolidinona (0,561 g)) o qual foi utilizado no passo seguinte, bem como o material de partida que não reagiu e o produto de dialquilação, 1--etil-3,3-bis(fenilmetil)-5-{[(trifenilmetil)-oxi]--metil}-2-pirrolidinona (0,053 g). (iii) l-Etil-3-(fenilmetil)-5-{[(trifenilmetil)--oxi]-metil}-2-pirrolidinona (0,561 g, 1,1 mmol) foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente numa mistura de acetonitrilo (21 mL) e ácido fórmico (3 mL). A reacção não estava completa nesta fase de modo que o solvente foi evaporado e substituído por ácido fórmico (10 mL) e a agitação foi continuada durante 3 horas. A reacção não estava ainda completa e por isso a mistura foi concentrada em vácuo (azeotropia com metanol para remover todo o ácido fórmico) e em seguida dissolvida em metanol (20 mL) . Amberlyst 15® foi em seguida adicionada à mistura e a agitação foi continuada à temperatura ambiente durante a noite. A resina foi separada por 76 ΡΕ2049478 filtração, lavagem com mais metanol e o filtrado foi concentrado até uma goma (0,625 g). A goma foi purificada por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de silica (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5- (hidroximetil)-3-(fenilmetil)-2-pirrolidinona (0,170 g) que foi utilizada no passo seguinte. (iv) l-Etil-5-(hidroximetil)-3-(fenilmetil)-2--pirrolidinona (0,748 g, 3,21 mmol) foi dissolvida em acetonitrilo (5 mL) e uma solução tampão de fosfato de sódio monobásico aquoso 1 M (3,69 mL , 3,69 mmol), alguns cristais de TEMPO (radical livre 2,2,6,6-tetrametil)-1--piperidiniloxi) e clorito de sódio (0,580 g, 6,41 mmol) foram adicionados e a mistura foi aquecida a 40 °C. Aproximadamente 1 gota de lixívia (solução de hipoclorito de sódio, cloro disponível > 12%) foi em seguida adicionada à mistura e a agitação continuou a 40 °C durante 3 h. A mistura foi em seguida vertida sobre gelo-água contendo sulfito de sódio 1% m/m e a mistura resultante foi ajustada para pH 2 utilizando cloreto de hidrogénio aquoso 5 N e em seguida extraída com acetato de etilo (x3) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com cloreto de sódio aquoso saturado e depois secos sobre sulfato de magnésio e concentrados para darem l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)prolina (0,807 g) na forma dum sólido que foi utilizado sem purificação adicional. ΡΕ2049478 77
Exemplo 38 N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(2-metil-2-propen-l- -il)-5-oxoprolinamida (E38)
crua 1-(2-Metil-2-propen-l-il}-5-oxoprolina (-0,075 g, -0,41 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em diclorometano (5 mL) e a isto foi adicionado 1-hidroxibenzotriazole (0,061 g, 0,45 mmol), [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,068 g, 0,43 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimi-da (0,087 g, 0,45 mmol). A mistura foi em seguida agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura foi diluída com mais diclorometano e em seguida lavada sequencialmente com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi filtrada através de um separador de fases e evaporada para dar um resíduo castanho que foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N-[(2--cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(2-metil-2-propen-l-il)-5--oxoprolinamida pura (0,018 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 325,1; tempo de retenção = 2,40 minutos. A 1-(2-metil-2-propen-l-il)-5-oxoprolina usada no procedimento anterior foi preparada como se segue: (i) Metanol (55 mL) foi arrefecida até -10 °C (utilizando um banho de gelo seco/tetracloreto de carbono) 78 ΡΕ2049478 com agitação e, em seguida, cloreto de tionilo foi adicionado gota a gota ao longo de 45 minutos. Ácido (D)-glutâmico (10 g, 67,96 mmol) foi então adicionado em três porções ao longo de ~5 minutos e em seguida a reacção foi agitada durante 3 h, enquanto se aqueceu a 21 °C. Os solventes foram evaporados em vácuo para dar um óleo limpido (15 g) o qual foi dissolvido numa mistura de água (150 mL) e dioxano (150 mL). A isto foi em seguida lentamente adicionado carbonato de sódio (46 g, 340 mmol) com agitação. Cloroformato de benzilo (9,64 mL, 68 mmol) foi em seguida adicionado e a agitação continuou durante a noite. A mistura foi cuidadosamente tratada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N (250 mL) e, em seguida, extraída com acetato de etilo (2 x 250 mL) . As frações orgânicas combinadas foram lavadas com água salgada e depois secas e evaporadas para darem um óleo límpido (18,7 g) . Este foi dissolvido em diclorometano (400 mL) e tratado com ácido sulfúrico concentrado (1 mL). Um grande excesso de isobutileno foi em seguida condensado na mistura e em seguida agitado durante a noite a 21 °C. Hidroge-nocarbonato de sódio aquoso saturado (-400 mL) foi então cuidadosamente adicionado à mistura e em seguida a fase orgânica foi separada, lavada com água salgada, seca e evaporada em vácuo para dar um óleo límpido (21,9 g) . Este foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel, eluindo com uma mistura 3:1 de ciclo-hexano e acetato de etilo, para dar 5-metil-N-{[(fenilmetil)-oxi]carbonil}glutamato de 1-(1,1-dimetiletilo) (4,87 g). 79 ΡΕ2049478 (ii) A uma solução de hexametildissilazoteto de potássio (10 mL de uma solução 0,6 M em tolueno, 6 mmol) em tetra-hidrofurano (25 mL) a -70 °C, foi adicionada gota a gota uma solução de 5-metil-iV-( [ (fenilmetil) -oxi] -carbonil}glutamato de 1-(1,1-dimetiletilo) (1,05 g, 3 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) durante ~5 minutos. A mistura foi agitada a -70 °C durante lhe, em seguida, tratada com iodeto de metalilo (2,18 g, 12 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) . A agitação foi continuada a -78 °C durante 2 h e em seguida aquecida a 21 °C. Após agitação durante mais 1 hora, a mistura foi vertida em cloreto de hidrogénio aquoso 1 N e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com água salgada, secos e evaporados em vácuo, para darem um óleo amarelo (1,03 g). Este foi purificado por cromatografia em coluna de sílica, eluindo com uma mistura 4:1 de ciclo-hexano e acetato de etilo, para dar 1-(2-metil-2-propen-l-il)-5-oxoprolinato de 1,1-dimetiletilo puro na forma de um óleo límpido (0,322 g) . (iii) 1,1-dimetiletil 1-(2-metil-2-propen-l-il)-5--oxoprolinato de (0,099 g, 0,41 mmol) foi dissolvido numa mistura de diclorometano (2 mL) e ácido trifluoroacético (2 mL) e agitou-se durante a noite à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado (azeotropia com tolueno para remover traços de ácido trifluoroacético) para dar a 1-(2-metil-2-propen-l-il)-5-oxoprolina crua na forma de um óleo castanho o qual foi utilizado sem purificação adicional. 80 ΡΕ2049478
Exemplo 39 1-Ciclopropil-W-[(2,4-diclorofenil)metil]-5-oxoprolinamida (E39)
A uma solução de isocianeto de (2,4-dicloro-fenil)metilo (0,047 g, 0,25 mmol) e ácido 4-oxobutanóico (15% em água, 0,26 mL, 0,4 mmol) em metanol (1,75 mL) foi adicionada ciclopropilamina (0,042 mL, 0,6 mmol). A mistura foi aquecida a 100 °C durante 30 minutos em um reator de micro-ondas. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar 1-ciclopropil-N- [ (2,4-diclorofenil)metil]-5-oxoprolina-mida (0,072 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 326/328; tempo de retenção = 2,29 minutos.
Exemplo 40 N-[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-ciclopropil-5- -oxoprolinamida (E40)
CF, 4 α A uma solução de isocianeto de [2-cloro-3-(tri-fluorometil)fenil]metilo (0,088 g, 0,4 mmol) e semialdeído succínico (15% em água, 0,26 mL, 0,4 mmol) em metanol (1,75 mL) foi adicionada ciclopropilamina (0,042 mL, 81 ΡΕ2049478 0,6 mmol). A mistura foi aquecida a 100 °C durante 30 minutos num reator de micro-ondas. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N-{[2-cloro-3-(trifluoro-metil)fenil]metil}-l-ciclopropil-5-oxoprolinamida (0,076 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 361/363; tempo de retenção = 2,39 minutos. 0 isocianeto de [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil] metilo usado no procedimento anterior foi preparado como se segue: (I) Uma solução de { [2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}amina (1,05 g, 5 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (10 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de N-formilbenzotriazole (0,772 g, 5,25 mmol) em tetra--hidrofurano anidro (10 mL) . A reacção foi agitada a 22 °C durante 18 horas, em seguida reduzida em vácuo e o resíduo foi repartido entre diclorometano (75 mL) e hidróxido de sódio aquoso 2 N (40 mL). A camada orgânica foi separada e extraída com hidróxido de sódio aquoso 2 N (40 mL) . A camada orgânica foi passada através de uma frita hidrofóbica e reduzida em vácuo para dar um sólido branco. O produto cru foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de solvente de 0-10% de acetato de etilo em diclorometano, para dar {[2-cloro-3-(trifluo-rometil)fenil]metil}formamida na forma dum sólido branco. (ii) Uma solução de {[2-cloro-3-(trifluorometil)fe- 82 ΡΕ2049478 nil] metil}formamida (0,67 g, 2,82 mmol) em diclorometano anidro (20 mL) foi arrefecida sob árgon num banho de gelo-água antes da adição de diisopropilamina (1,78 mL, 12,7 mmol) seguido por cloreto de fosforilo (0,393 mL, 4,23 mmol). A reacção foi agitada a entre 2-5 °C durante 2 h. A mistura foi em seguida reduzida em vácuo e o resíduo foi tratado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (20 mL) e extraída com diclorometano (20 mL) . A camada orgânica foi passada através de uma frita hidrofóbica e reduzida em vácuo para dar um sólido amarelo. A secagem adicional em vácuo deu isocianeto de [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metilo na forma duma goma cor de laranja (0,66 g) que foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplo 41 N-[(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-ciclopropil-5--oxoprolinamida (E41)
[2-cloro-4-semialdeído em metanol (0,042 mL, durante 30 lvente foi A uma solução de isocianeto de -fluorofenil-]metilo (0,068 g, 0,4 mmol) e succínico (15% em água, 0,26 mL, 0,4 mmol) (1,75 mL) foi adicionada ciclopropilamina 0,6 mmol). A mistura foi aquecida a 100 °C minutos em um reator de micro-ondas. O so
removido em vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC PE2049478 automatizadsL dirigida à massa para dar uma goma incolor que foi triturado com éter dietilico para dar N-[(2-cloro-4--fluorofenil)-metil]-l-ciclopropil-5-oxoprolinamida na forma dum sólido creme pálido (0,058 g) . LC/MS [M+H]+ = 310; tempo de retenção = 2,16 minutos. O isocianeto de [2-cloro-4-fluoro-fenil]metilo utilizado como material de partida foi preparado de uma maneira análoga à descrita para a preparação de isocianeto de [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metilo no Exemplo 40 mas usando 2-cloro-4-fluorofenil]-metil}amina no lugar de 2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}amina}.
Exemplo 42 N-[(2,4-Diclorofenil)metil]-l-etil-4,4-dimetil-5--oxoprolinamida (E42)
Isocianeto de (2,4-diclorofenil)metilo (0,075 g, 0,4 mmol) e ácido 2,2-dimetil-4-oxobutanóico cru (0,115 g, 0,6 mmol) foram dissolvidos em metanol (2 mL) . Solução de etilamina (2 M em água, 0,3 mL, 0,6 mmol) foi adicionada e a mistura foi aquecida num vaso vedado a 100 °C durante 30 minutos num reator de micro-ondas. A mistura foi deixada em repouso durante o fim de semana e, em seguida, o solvente foi removido em vácuo e o óleo cor de laranja resultante foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para 84 ΡΕ2049478 dar uma goma oleosa clara que foi triturada com éter dietílico para dar N- [(2,4-diclorofenil)metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida na forma dum sólido branco (0,024 g) . LC/MS [M+H]+ = 343; tempo de retenção = 2,57 minutos. O ácido 2,2-dimetil-4-oxobutanóico utilizado como material de partida no procedimento acima foi preparado como se segue: (i) Ácido 2,2-dimetil-4-pentenóico foi dissolvido em diclorometano (25 mL) e arrefecido a -78 °C num banho de CC>2/acetona e oxigénio foi borbulhado através da mistura durante 5 minutos. O gerador de ozono foi ligado e o ozono foi borbulhado através da mistura durante 15 minutos. O fluxo de ozono foi em seguida parado e a mistura foi lavada com oxigénio durante 5 minutos e, em seguida, com árgon durante 2 minutos. TLC indicou que a reacção não tinha progredido significativamente e por isso o ozono foi borbulhado através da mistura durante mais 15 minutos, após o que uma cor azul pálida persistiu e tinha-se formado uma suspensão. O fluxo de ozono foi desligado e a mistura foi lavada com oxigénio durante 5 minutos e, em seguida, com árgon durante 10 minutos (até que o gás de escape deu uma resposta negativa ao papel de amido/iodo molhado). Sulfureto de dimetilo (1,72 mL, 23,41 mmol) foi em seguida adicionado à mistura e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após agitação à temperatura ambiente durante 2 horas a 85 ΡΕ2049478 mistura foi concentrada para dar um óleo incolor (1,5 g). 1,4 g deste material foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica, eluindo com um gradiente de 0-50% de acetato de etilo em diclorometano, para dar o ácido 2,2-dimetil-4-oxobutanóico na forma de um óleo incolor (0,649 g).
Exemplo 43 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-(1-metiletil)- -5-oxoprolinamida (E43)
1-(1-Metiletil)-5-oxoprolina (0,100 g, 0,58 mmol) foi dissolvida em diclorometano (20 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'--etilcarbodiimida (0,111 g, 0,58 mmol), 1-hidroxibenzotria-zole (0,078 g, 0,58 mmol) e N-etilmorfolina (0,223 mL mmol, 1:75). Finalmente {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-amina foi adicionada à mistura e a agitação continuou durante ~48 h. A mistura foi em seguida tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (20 mL) e agitou-se vigorosamente. A camada aquosa foi removida utilizando um separador de fases e, em seguida, o solvente foi removido da camada orgânica utilizando uma unidade de «blow-down» de árgon. 0 resíduo resultante foi tratado com uma mistura de água e acetato de etilo (25 mL, 1:1) e a camada aquosa foi subsequentemente desprezada. A camada 86 ΡΕ2049478 orgânica foi filtrada através de um separador de fases e evaporada para dar um óleo. Este foi triturado com éter dietilico para dar um sólido e este foi subsequentemente purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N-{ [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-(1-metiletil)--5-oxoprolinamida (0,097 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 363; tempo de retenção = 2,48 minutos. A 1-(1-metiletil)-5-oxoprolina usada no procedimento acima foi preparada de uma maneira análoga à descrita anteriormente para a sintese de l-etil-5-οχο--prolinato de metilo (ver Exemplo 3), mas utilizando acetona em vez de acetaldeido e com a adição de um passo subsequente de desproteção do éster (utilizando condições padrão, isto é hidróxido de sódio em metanol) a ser realizado (em oposição à desproteção combinada e acoplamento de amida descrito no Exemplo 3).
Exemplos 44-49
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 43 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 3) foram preparados substituindo a { [2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}amina utilizada no procedimento acima pela amina apropriada (ou um seu sal) . Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos mostrados na Tabela 3 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparados usando caminhos descritos anteriormente na literatura química, a menos que indicado de outra maneira. 87 ΡΕ2049478
Tabela 3
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E44 0==% 3l ιι JL n^n>^Y^cf, A 0 1-(l-metiletil)-N-{[2-metil-3-(trifluo-rometil)fenil]metil}-5-oxoprolinamida 343 2,48 E45 o=\ A ο α N- [(2,3-diclorofenil)metil]-1-(1-metiletil)-5-oxoprolinamida 329 2,35 E46 A 0 o N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-1-(l-metiletil)-5-oxoprolinamida 331 2,26 E47 r>=/~3 h f ii Λ ο α N- [(2,4-diclorofenil)metil]-1-(1-metiletil)-5-oxoprolinamida 329 2,4 E48 °=' A 0 a N- [(2,3-dicloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(l-metiletil)-5-oxo-L-prolinamida 346,9 2,41 E49 A o 1 N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-1-(1-metiletil)-5-oxoprolinamida 309 2,34 88 ΡΕ2049478 0 hidrocloreto da [ (2,3-dicloro-4-fluorofenil)--metil] amina necessário para a síntese de N-[(2,3-dicloro--4-fluorofenil)-metil]-1-(1-metiletil)-5-oxo-L-prolinamida (Exemplo 48) foi preparado da seguinte maneira: (i) Nitrito de sódio (0,172 g, 2,5 mmol) foi adici onado a uma solução agitada de 2-cloro-6-fluoro-3-metil-fenilamina (0,400 g, 2,5 inmol) em água (20 mL) e cloreto de hidrogénio aquoso 37% (5 mL) a -5 °C. A mistura foi agitada a -5 °C durante 5 minutos e, em seguida, adicionada de uma vez a uma solução de cloreto de cobre (I) (0,742 g, 7,5 mmol) em cloreto de hidrogénio aquoso a 37% (5 mL), enquanto se mantinha a temperatura a -5 até 0 °C. A mistura de reacção foi aquecida a 38 °C e agitada durante 1 h, em seguida a mistura foi arrefecida e éter dietílico (20 mL) foi adicionado. A fase orgânica foi separada e lavada com cloreto de hidrogénio aquoso 1 N e depois com água. A camada orgânica foi em seguida seca sobre sulfato de sódio e concentrada em vácuo. 0 resíduo cru foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica, eluindo com éter de petróleo, para dar 2,3-dicloro-l-fluoro-4-metilbenzeno (0,090 g, 0,5 mmol) na forma dum sólido branco. (ii) 2,3-Dicloro-l-fluoro-4-metilbenzeno (0,090 g, 0,5 mmol) foi adicionado a uma mistura agitada de dicromato de potássio (0,284 g, 1 mmol) em ácido acético (1 mL). Ácido sulfúrico 97% (0,5 mL) foi então adicionado lentamente à mistura que foi subsequentemente aquecida a 89 ΡΕ2049478 100 °C durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, água e gelo foram adicionados e o sólido verde assim obtido foi filtrado e lavado com água fria para dar ácido 2,3-dicloro-4-fluorobenzóico (0,056 g, 0,27 mmol) na forma dum sólido branco. (iii) Uma solução de ácido 2,3-dicloro-4-fluorobenzóico (0,200 g, 0,92 mmol) em diclorometano (~4 mL) foi tratada com 1-hidroxibenzotriazole (0,162 g, 1,2 mmol), hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'--etilcarbodiimida (0,230 g, 1,2 mmol) e trietilamina (0,56 mL, 4,0 mmol) sob atmosfera de árgon à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 40 minutos, em seguida tratada com hidróxido de amónio aquoso 32% (0,088 mL) e agitou-se durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com diclorometano e lavada sequencialmente com água e depois com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de sódio, em seguida concentrada para dar 2,3-dicloro-4-fluoroben-zamida (0,156 g) na forma dum sólido branco que foi usada sem purificação adicional. (iv) Uma solução de 2,3-dicloro-4-fluorobenzamida (0,750 g, 3,62 mmol) em tetra-hidrofurano seco (2 mL) foi aquecida a 90 °C sob azoto. Uma solução 10 M de complexo de hidreto de boro-sulfureto de dimetilo em tetra-hidrofurano (1,05 mL, 5,43 mmol) foi adicionado à solução quente e a agitação foi continuada durante 4 horas. A mistura foi então tratada com cloreto de hidrogénio 90 PE2049478 aquoso 6 N e o aquecimento continuou durante 30 minutos. Os solventes foram evaporados e o residuo cru foi purificado por cartucho de SCX e subsequente cromatografia flash em coluna de silica eluindo com 5% de metanol em diclorometano. A amina obtida foi tratada com cloreto de hidrogénio etéreo para dar hidrocloreto de [ (2,3-dicloro--4-fluorofenil)-metil]amina (0,360 g) na forma dum sólido branco.
Exemplo 50 N- [(2,3-dimetilfenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida (E50)
l-Etil-5-oxoprolina (0,080 g, 0,51 mmol, preparada de uma maneira análoga à descrita para o Exemplo 12, Método A) foi dissolvida em diclorometano (5 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,117 g, 0,61 mmol), N-etilmorfolina (0,195 mL, 1,53 mmol) e 2,3-dimetilbenzilamina (0,082 g, 0,61 mmol). A mistura foi agitada durante ~17 h e em seguida deixada em repouso durante o fim de semana. A mistura foi em seguida tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (~3 mL) e agitada vigorosamente durante ~10 minutos. A camada orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica e a camada aquosa foi extraída com mais diclorometano (~2 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas para darem um óleo amarelo ( — 0,2 g) . 91 ΡΕ2049478
Este foi ainda purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [(2,3-dimetilfenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida pura (0,072 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 275; tempo de retenção = 2,12 minutos.
Exemplo 51 N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-metil-5--oxoprolinamida (E51)
l-Metil-5-oxoprolina (2,27 g, 15,88 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em diclorometano (150 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (3,35 g, 17,47 mmol) e 1-hidroxibenzotriazole (2,36 g, 17,47 mmol). A mistura foi agitada durante ~10 minutos e em seguida trietilamina (2,21 mL, 15,88 mmol) e { [2-cloro-3-(trifluorometil )fenil]metil}amina (3,66 mL, 17,47 mmol) foram adicionados e a mistura foi deixada em agitação durante a noite à temperatura ambiente (—17 h). Um precipitado branco formou-se durante este tempo. A mistura foi em seguida tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (-100 mL) e agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica e, em seguida, cloreto de hidrogénio aquoso 2 N foi adicionado e misturado e separou-se outra vez. A camada orgânica foi concentrada para dar sólidos brancos (-2,5 g). O sólido foi dissolvido 92 ΡΕ2049478 em acetato de etilo (-200 mL) e lavado com água (4 x 50 mL) seguido por água salgada (50 mL). A camada orgânica foi em seguida seca por passagem através de um separador de fases e concentrada para dar iV-{ [2-cloro-3-(trifluorometil) fe-nil] metil}-l-metil-5-oxo-L-prolinamida pura na forma dum sólido branco fino (2,48 g). LC/MS [M+H]+ = 335, tempo de retenção = 2,24 minutos. ΧΗ- -RMN (CDCls, 500 MHz) δ 2,02 (m, 1H) , 2,35 (m, 1H) , 2,3 9 (m r 1H) , 2,47 (m, 1H) , w \—1 00 CN 3H), 4, 00 (dd , 1H , J= co , 4, 2 Hz) , 4,60 (dd, 1H, J= 15,1, 6, 2 Hz), 4, 65 (dd, 1H, J= 15, 1 r 6, 2 : Hz), 6,56 (t largo, 1H , J= 5,8 Hz) , 7,38 (t, 1H, J= 7 ,7 Hz), 7 , 60 (dd, 1H, J= 1, r 6, 1,0 Hz) , 7 , 68 (dd, 1H, J= 7 9 r J r 1,2 Hz); 13C-RMN δ 176,0 , 171,5, 137,5 , 133,9, 131 ,7, 129, 3 , 127, 4, 127,0, 122,8, 63,8, 41, 8, 29, 4, 2 9,2, 23,4 . A l-metil-5-oxoprolina utilizada como material de partida foi preparada da seguinte maneira. (i) Ácido IV-metil-L-glutâmico (9,81 g, 60,87 mmol) foi dividido em dois lotes iguais e cada um foi suspenso em água (15 mL) e aquecido num tubo vedado a 140 °C durante 30 minutos num reator de micro-ondas para dar um solução clara. Os dois lotes foram então combinados e a água foi evaporada e foram secos sob vácuo para dar um sólido branco. O sólido foi triturado com éter, em seguida filtrado e lavado com mais éter para dar, após secagem, l-metil-5-oxo-prolina (7,47 g) na forma dum sólido branco. 93 ΡΕ2049478 Ν-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-metil-5-oxoprolinamida pode também ser preparada conforme descrito abaixo: l-Metil-5-oxoprolina (49,0 g, 0,342 mol, preparada conforme descrito acima) foi suspensa em DCM (600 mL) (temperatura interna cai de 20 °C para 13,7 °C). EEDQ (2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina, 75,26 g, 0,359 mol, 1,05 eq) foi adicionada numa porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Uma solução de 1-[2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metanamina (88,77 g, 0,359 mol, 1,05 eq) em DCM (250 mL) foi então adicionada gota a gota à mistura ao longo de 20 minutos (exotermia ligeira até 19 °C) e quaisquer sólidos remanescentes foram em seguida lavados na mistura utilizando DCM adicional (150 mL) . A mistura foi então agitada à temperatura ambiente durante a noite.
Hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (300 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente. A camada orgânica foi separada e lavada sequencialmente com água (300 mL) , cloreto de hidrogénio aquoso 2 N (3 x 300 mL) , água (300 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (300 mL) . A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada em vácuo. O sólido resultante foi em seguida triturado com éter (~500 mL) e o sólido foi recolhido, lavado com éter e seco (30 °C, forno de vácuo ao longo do fim de semana) para dar um sólido incolor (91,1 g, 80%). Este material foi combinado 94 ΡΕ2049478 com um lote semelhante, preparado de forma análoga, e o material combinado (total de 178 g) foi dissolvido em acetato de etilo (2,75 L) com aquecimento (refluxo suave, agitação de topo). A solução límpida quente resultante foi suavemente agitada e arrefecida até à temperatura ambiente durante a noite. 0 sólido foi recolhido, lavado com acetato de etilo frio (500 mL) e seco (50 °C em forno de vácuo, ~3 dias) para dar IV-{ [2-cloro-3-(trif luoro-metil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida, na forma de agulhas incolores (148,4 g). LC/MS [M+H]+ = 335/337; tempo de retenção = 2,26 minutos. ΧΗ· -RMN (CDCls, 500 MHz) δ 1,8 6 (m, 1H) , 2, r 21 (m 1H) , • 2, 24 (m, 1H) , 2 ,28 (m, 1H), 2, 64 (s, 3H) , 4, 12 (dd 1H, J= 8,3 , 3 ,5 Hz) , . 4,47 (d, 2H, J= 5, 8 Hz) , , 7 , 58 (t 1H, J= 7,8 Hz) , 7,65 (dd, 1H , J= 1, 8, 1,0 Hz) , 7, 80 (dd 1H, J= 7,8, 1, 2 Hz) , 8,81 (t largo, 1H , J= 5,7 Hz) t 13C-RMN δ 174,4, 171,4, 138,8, 133,1, 129 ,8, 127,5 127, 1, 126, 6, 122,9, 61,6, 4C >,2, 29, 1, 28, C 1, 22 ,5.
Excesso enantiomérico = 99,1%, como determinado pelo método de cromatografia quiral A, indicativa de N-{[2--cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxo-L--prolinamida; tempo de retenção = 6,99 minutos; [a]d = -0,8 ° (c = 1, MeOH) ; temperatura = 29,3 °C; comprimento de onda = 589nm; ponto de fusão = 173 °C. 95 ΡΕ2049478
Exemplo 52 N— [(2,3-Dicloro-4-fluorofenil)-metil]-l-metil-5--oxoprolinamida (E52)
l-Metil-5-oxoprolina (0,060 g, 0,42 mmol, preparada conforme descrito acima para o Exemplo 51) foi dissolvida em diclorometano (5 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimi-da (0,096 g, 0,5 mmol), 1-hidroxibenzotriazole (0,068 g, 0,5 mmol) e N-etilmorfolina (0,160 mL, 1,26 mmol). A mistura foi agitada durante ~10 minutos e em seguida hidrocloreto da [(2,3-dicloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,081 g, 0,42 mmol, preparado conforme descrito anterior-mente, para o Exemplo 48) foi adicionado e a mistura foi deixada a agitar durante a noite (~17 h) e em seguida durante o fim de semana. A mistura foi então tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (~3 mL) e agitou-se vigorosamente durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica, lavando a fase aquosa com diclorometano adicional (~2 mL). As frações orgânicas combinadas foram concentradas para darem um sólido de cor creme. O sólido foi repartido entre acetato de etilo ( — 20 mL) e água ( — 10 mL) e a camada orgânica foi em seguida separada por passagem através de um separador de fases e concentrada para dar N- [(2,3-dicloro--4-fluorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida pura na forma dum sólido esbranquiçado. LC/MS [M+H]+ = 319; tempo de retenção = 2,2 minutos. 96 ΡΕ2049478
Exemplos 53-64
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 52 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 4) foram preparados substituindo o hidrocloreto de [(2,3-dicloro-4--fluorofenil)-metil]amina utilizada no procedimento acima pela amina apropriada (ou um seu sal) . Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 4 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando os caminhos descritos anterior-mente na literatura química ou utilizando métodos análogos.
Tabela 4
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E53 1 0 Cl N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-1-meti1-5-oxoprolinamida 303 2,04 E54 N- [(4-cloro-2-metilfenil)-metil]-1-metil-5-oxoprolinamida 281 2,29 E55 0 ..A-F 1 0 F V N-{[4-fluoro-2-(trifluorometil)-fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida 319 2,29 ΡΕ2049478 97 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E56 N- [(2,3-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 301 2,28 E57 N-[(2, 6-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 301 2,15 E58 N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-1-metil-5-oxoprolinamida 281 2,27 E59 N- {[2-fluoro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida 319 2,32 E60 N- [(3-cloro-2-fluorofenil)-metil]-1-metil-5-oxoprolinamida 285 2,14 E61 σ 1 0 N- [(2, 4-dicloro-6-metilfenil)-metil]-1-metil-5-oxoprolinamida 315 2,3 98 ΡΕ2049478 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E62 l-metil-W-{[2-metil-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxoprolinamida 315,1 2,26 E63 N-[(2-bromo-4-fluorofenil)-metil]-1-meti1-5-oxoprolinamida 330,9 2,0 E64 N-{[3-fluoro-2-(trifluorometil)fe-nil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida 319 2,1
As aminas requeridas para a sintese dos Exemplos 62-64 foram preparadas de acordo com os procedimentos descritos, respectivamente, abaixo: 1) Hidrocloreto da {[2-metil-3-(trifluorometil)- fenil]metil} amina (amina utilizada para preparar o Exemplo 62) Borano em tetra-hidrofurano (1 M, 39,4 mL, 39,4 mmol) foi adicionado a uma solução de 2-metil-3--trifluorometil-benzamida (2 g, 9,85 mmol) em tetra-hidro- 99 ΡΕ2049478 furano (75 mL) e agitada a 70 °C durante 5 horas. LCMS mostrou reacção incompleta de modo que o aquecimento a 70 °C sob atmosfera de árgon foi continuado durante a noite e, em seguida, durante mais 5 horas após isto. A mistura reaccional foi tratada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N e agitada a 100 °C durante 4 horas e em seguida deixada arrefecer durante o fim de semana. A mistura foi reduzida até à secura sob vácuo e em seguida repartida entre diclorometano e hidróxido de sódio aquoso 2 N. A camada orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica e reduzida para dar um residuo que foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica (eluindo com 0-5% de amoníaco 2 N/metanol em diclorometano). O solvente foi evaporado e o resíduo foi recebido em éter dietílico e tratado com cloreto de hidrogénio 1 M em éter. O sólido que precipitou foi recolhido por filtração e este foi em seguida triturado com diclorometano e depois da filtração de foi obtido hidrocloreto de 2-metil-3-(trifluorometil)-fenil]metil}amina (1,4 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 173; tempo de retenção = 1,30 minutos. 2) Hidrocloreto de [(2-bromo-4-fluorofenil)-metil]-amina (amina utilizada para preparar o Exemplo 63) (i) Brometo de 2-bromo-4-fluorobenzilo (5 g; 18,8 mmol) e ftalimida de potássio (4 g, 21,6 mmol) foram combinados em dimetilformamida (200 mL) e agitou-se a 80 °C durante 18 h durante a noite. A mistura foi reduzida sob vácuo e o resíduo foi repartido entre éter 100 ΡΕ2049478 dietílico e água. Os sólidos foram separados por filtração e a camada aquosa foi lavada com mais éter (2 x 50 mL) . As camadas de éter foram combinadas e secas sobre sulfato de sódio e em seguida filtradas e evaporadas para darem um sólido esbranquiçado (3,36 g). O sólido foi triturado com metanol e a filtração deu 2- [ (2-bromo-4-fluorofenil)-metil]-lH-Isoindol-1,3(2H)-diona na forma dum sólido (2,06 g) que foi utilizada sem purificação adicional no passo seguinte. LC/MS [M+H]+ = 334; tempo de retenção = 3,30 minutos. (ii) Hidrato de hidrazina (0,655 mL, 21 mmol) foi adicionado a uma suspensão de 2-[(2-bromo-4-fluorofenil)--metil]-lH-Isoindol-1,3 (2H) -diona (2 g, 6 mmol) em etanol (60 mL) e agitado à temperatura ambiente durante a noite. A reacção não estava completa nesta fase de modo que a mistura foi aquecida a 100 °C durante um total de 2 h (a mistura virou para branco e turvou durante este tempo). A mistura foi filtrada para remover sólidos, em seguida arrefecida e filtrada de novo. Os sólidos foram lavados com etanol frio e em seguida as frações de etanol combinadas foram evaporadas até à secura sob vácuo. 0 residuo resultante foi repartido entre cloreto de hidrogénio aquoso 2 N e diclorometano. A fase orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica. A camada aquosa foi lavada com mais diclorometano e separada novamente. A camada aquosa foi em seguida reduzida sob vácuo para deixar um sólido amarelo pálido (0,876 g). O sólido foi recebido em solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e 101 ΡΕ2049478 extraída com diclorometano. A separação por frita hidrofóbica e evaporação deu um resíduo que foi dissolvido em éter dietílico e tratado com cloreto de hidrogénio etéreo. Um sólido amarelo pálido precipitou a partir da mistura. A evaporação e a secagem proporcionaram hidrocloreto de [(2-bromo-4-fluorofenil)-metil]-amina (0,78 9 g) . LC/MS [M+H]+ = 203; tempo de retenção = 1,08 minutos. 3) Hidrocloreto de {[3-fluoro-2-(trifluorometil)-fenil]metil}amina (amina utilizada para preparar o Exemplo 64)
Borano em tetra-hidrofurano (1 M, 19,2 mL, 19,2 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3-fluoro-2-(trifluorometil)benzamida (1 g, 4,8 mmol) em tetra-hidrofurano (40 mL) sob atmosfera de árgon à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 70 °C e em seguida uma aliquota adicional de borano em tetra-hidrofurano (10 mL, 10 mmol) foi adicionada e o aquecimento a 7 0 °C foi continuado durante o fim de semana. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e depois tratada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M (15 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 minutos. Solução aquosa de hidróxido de sódio foi adicionada até o pH da mistura estar entre CO 1 e em seguida a mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram filtradas através de uma frita hidrofóbica e em seguida evapora- 102 ΡΕ2049478 da sob vácuo. O resíduo foi redissolvido em diclorometano, filtrado através de uma frita hidrofóbica e evaporada para dar um óleo amarelo. O óleo foi dissolvido em cloreto de hidrogénio aquoso 2 M. Um precipitado branco formou-se e este foi recolhido por filtração sob vácuo e em seguida carregado igualmente em colunas SCX 4 x 10 g. As colunas foram lavadas com metanol e água e em seguida amoníaco aquoso foi usado para lavar o produto. Estas últimas frações foram reduzidas sob vácuo para dar um óleo amarelo (0,4 g). O óleo foi dissolvido em éter dietílico e tratado com cloreto de hidrogénio etéreo 1 M até não se formar mais precipitado. A mistura foi reduzida sob vácuo para dar hidrocloreto da { [3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-metillamina na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 193, tempo de retenção = 1,15 minutos.
Exemplos 65-69
Os exemplos tabelados abaixo (Tabela 5) foram preparados de uma maneira análoga à descrita para o Exemplo 12, substituindo a amina apropriada (ou seu sal) pela [(2,3,4-trifluorofenil)metil]amina utilizada no procedimento descrito para o Exemplo 12. Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 5 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas usando caminhos descritos previamente na literatura química, a menos que indicado em contrário. A 1-etil-5-oxo-prolina utilizada para preparar estes exemplos foi por sua vez preparada utilizando o método C conforme 103 ΡΕ2049478 descrito para o Exemplo 12 para além de no caso do exemplo 65, onde o método A foi usado.
Tabela 5
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E65 «"Oy-jÇjC,, ο α N-[(2,3-dicloro-4-fluorofenil)-metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 333 2,31 E66 /1 ° l-etil-5-oxo-i\7- [ (2,4, 6-trimetilfenil) -metil]-prolinamida 288 2,41 E67 »=CXir»>jÇfr __' - O F N-[(2, 3-difluorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida 283 1,96 E68 K J 0 N-[(3, 5-diclorofenil)metil-l-etil-5-oxoprolinamida 315 2,39 E69 o J 0 N- [(3-cloro-2-fluorofenil)-metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 299 2,22 104 PE2049478
Exemplo 70 N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida (E70)
l-Etil-5-oxoprolina (0,100 g, 0,64 mmol) foi dissolvida numa mistura de diclorometano (3 mL) e dimetil-formamida (0,5 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,147 g, 0,77 mmol), 1-hidroxibenzotriazole (0,104 g, 0,77 mmol) e N-etilmorfolina (0,244 mL, 1,92 mmol). A mistura foi agitada durante 10 minutos e em seguida 2-cloro-4-fluorobenzilamina foi adicionado à mistura e a agitação continuou durante a noite (~16 h) à temperatura ambiente. A mistura foi em seguida tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (~2 mL) e agitada vigorosamente durante ~10 minutos. A camada aquosa foi removida utilizando um separador de fases e extraída com mais diclorometano (2x1 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram concentradas para darem um óleo amarelo e este foi posteriormente purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-D-prolinamida (0,065 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 2 99, tempo de retenção = 2,16 minutos. Excesso enantiomérico = 80,9%, conforme determinado por cromatografia quiral método B, indicativa de N- [(2-cloro-4--fluorofenil)metil]-l-etil-5-oxo-D-prolinamida; tempo de retenção = 5,91 minutos. 105 ΡΕ2049478 A l-etil-5-oxoprolina usada no procedimento anterior foi preparada conforme descrito abaixo: (i) Éster de etilo do ácido D-piroglutâmico (4,17 g, 26,53 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (30 mL) e foi adicionado iodeto de etilo (2,23 mL, 27,86 mmol) para dar uma solução amarela pálida. Esta foi arrefecida a 0 °C e hidreto de sódio (60% em óleo, 1,11 g, 27,86 mmol) foi adicionado em porções. Após adição de todo o hidreto de sódio, a mistura foi agitada a 0 °C durante mais 20 minutos até a maior parte do borbulhamento ter parado. A mistura foi em seguida aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante a noite sob árgon. A mistura foi então tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (~5 mL) . A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com mais diclorometano (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas por passagem através de um separador de fases e em seguida concentradas até um óleo verde/castanho (3,2 g). Este foi purificado por cromato-grafia flash em coluna de sílica automatizada (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar o l-etil-5-oxoprolinato de etilo na forma de um óleo amarelo (1,33 g) o qual foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (ii) l-Etil-5-oxoprolinato de etilo (1,33 g, 7,18 mmol) foi dissolvido em etanol (10 mL) e arrefecido a 0 °C num banho de gelo. A isto foi adicionada uma 106 ΡΕ2049478 solução aquosa de hidróxido de sódio 12,5 M (1,72 mL, 21,53 mmol) e a mistura foi agitada durante ~4 horas a 0 °C. 0 etanol foi evaporado sob vácuo e o residuo aquoso foi acidificado com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N até pH 1. O volume da fase aquosa foi reduzida para ~3 mL sob vácuo e em seguida extraída com uma mistura 3:1 de clorofórmio e isopropanol utilizando um separador de fases. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até um óleo amarelo pálido que por secagem em vácuo cristalizou para dar l-etil-5-oxoprolina na forma dum sólido branco (1,12 g).
Exemplos 71-82
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 70 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 6) foram preparados substituindo a 2-cloro-4-fluorobenzilamina usada no procedimento acima pela amina apropriada (ou um seu sal) . Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 6 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando caminhos descritos anteriormente na literatura química, a menos que indicado em contrário. Onde determinado (por HPLC quiral), o excesso enantiomérico (ee) do isómero mostrado também está listado juntamente com o seu nome estereoespecífico, o método de separação quiral usado entre parêntesis e o tempo de retenção correspondente (t.r.) nesse método. 107 ΡΕ2049478
Tabela 6
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) ee E71 77- [(2,4-diclorofenil)me-til]-l-etil-5-οχο-prolinamida 315 2,36 75,6% (C) 77-[(2,4-diclorofenil)metil]-1-etil-5-oxo-D-prolinamida tr = 6,18 min E72 Ιο α f 77-{ [2-cloro-3- (tri-fluorometil)fenil]metil}-l-etil-5-oxoprolinamida 349 2,44 76,4% (A) 77-{ [2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-l-etil-5-oxo-D-protinamida tr = 4,44 min E73 d 0 77-{ (4-cloro-3- (tri-fluorometil)fenil]metil}-l-etil-5-oxoprolinamida 349 2,5 77,3% (A) 77-{ [4-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-l-etil-5-oxo-D-prolinamida tr = 4,45 min E74 77- [ (2-cloro-6-metilfenil) -metil]-l-etil-5-oxoprolinamida 295 2,23 77,6% (C) 77-[ (2-cloro-6-metilfenil)-metil] -1-etil-5-oxo-D-prolinamida tr = 5,08 min E75 J 0 77- [ (3,4-diclorofenil)metil] -l-etil-5-οχο-prolinamida 315 2,38 76,3% (C) 77-[(3,4-diclorofenil)metil]-1-etil-5-oxo-D-prolinamida tr = 4,38 min ΡΕ2049478 108 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) ee E76 i\7- [ (2-clorofenil) metil] -1-etil-5-oxoprolinamida 281 2,06 E77 ο α N-[(2,6-diclorofenil)metil] -l-etil-5-οχο-prolinamida 315 2,11 E78 0 i\7- [ (2-cloro-3, 4-di-fluorofenil)metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 317 2,13 E79 °=N __^ 0 N- [(4-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-etil-5-οχο-prolinamida 295 2,24 E80 s 0 N- [(2,3-diclorofenil)metil] -l-etil-5-οχο-prolinamida 315 2,23 109 ΡΕ2049478 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) ee E81 J 0 ρφρ l-etil-W-{[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-metil}-5-oxoprolinamida 333 2,25 E82 N- [(3-cloro-2-fluorofenil)-metil]-1-etil-5-oxoprolinamida 299 2,1
Exemplo 83 N-{[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5- -oxoprolinamida (E83)
N- { [4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]metil}-l--metil-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a síntese de N-[(2-cloro-4--fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida (Exemplo 70), mas l-etil-5-oxoprolina foi substituída por l-metil-5--oxoprolina (preparada conforme descrito abaixo) e 2-cloro--4-fluorobenzilamina foi substituída por { [4-fluoro-2-- (trifluorometil)fenil]metil}amina. LC/MS [M+H]+= 319, tempo de retenção = 2,14 minutos. 110 ΡΕ2049478 A l-metil-5-oxoprolina usada no procedimento anterior foi preparada conforme descrito abaixo: (i) Éster de etilo do ácido D-piroglutâmico (4,0 g, 25,5 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (25 mL) e arrefecido a 0 °C. Iodeto de metilo (1,66 mL, 26,7 mmol) foi adicionado e a agitação continuou durante 10 minutos sob árgon a 0 °C. Hidreto de sódio (60% em óleo, 1,6 g, 26,7 mmol) foi então adicionado em porções (permitindo a cada porção reagir) . Após adição de todo o hidreto de sódio, a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante a noite sob árgon. A mistura foi em seguida tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (—15 mL) e agitada durante 4 horas. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraida com mais diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio e depois concentradas até um óleo escuro. Este foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica, eluindo com um gradiente de 0-75% de acetato de etilo em hexano, para dar l-metil-5-oxoprolinato de etilo na forma de um óleo incolor (0,27 g) o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. (ii) l-Metil-5-oxoprolinato de etilo (0,27 g, 1,58 mmol) foi dissolvido em etanol (5 mL) e arrefecido a 0 °C num banho de gelo. A isto foi adicionada uma solução aquoso 2 M de hidróxido de sódio (3 mL) e a mistura foi 111 ΡΕ2049478 agitada durante ~4 horas a 0 °C. 0 etanol foi evaporado sob vácuo e o resíduo aquoso foi acidificado com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N até pH 1. 0 volume da fase aquosa foi reduzida para ~3 mL sob vácuo e em seguida extraído com uma mistura 3:1 de clorofórmio e isopropanol utilizando um separador de fases. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas para darem l-metil-5-oxoprolina que foi utilizada sem purificação adicional.
Exemplos 84-90
Além disso, e também de uma maneira análoga à descrita para o Exemplo 70 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 7) foram preparados substituindo a 2-cloro-4-fluorobenzilamina utilizada no Exemplo 70 pela amina apropriada (ou um seu sal). Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 7 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando caminhos descritos anteriormente na literatura química, a menos que indicado em contrário. l-Etil-5-oxoprolina utilizada no Exemplo 70 foi substituída por l-metil-5-oxoprolina (preparada conforme descrito acima para o Exemplo 81). Onde determinado (por HPLC quiral), o excesso enantiomérico (ee) do isómero mostrado também está listado juntamente com o seu nome estereoespecífico, o método de separação quiral usado entre parêntesis e o tempo de retenção correspondente (tr) naquele método. 112 ΡΕ2049478
Tabela 7
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) ee E84 N- [(2,3-diclorofenil)me-til]-l-metil-5-οχο-prolinamida 301 2,11 E85 ο α F f N-{[2-cloro-3-(trifluo-rometil)fenil]metil}-l-meti1-5-oxoprolinamida 335 2,27 94,1% (A) N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-l-metil-5-oxo-D-prolinamida tr = 5,17 min E86 N- [(2,6-dicloro-fenil) metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 301 1,98 E87 /11 | a N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 281 2,11 E88 O f N-{[2-fluoro-3-(trifluo-rometil)fenil]metil}-l-meti1-5-oxoprolinamida 319 2,16 113 ΡΕ2049478 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tertpo de retenção (min) ee E89 N- [(5-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 281 2,1 E90 1 O F N- [(3-cloro-2-fluorofenil)-metil]-1-meti1-5-oxoprolinamida 285 1,98
Exemplo 91 N-[(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-fenil-prolinamida (E91)
5-0xo-l-fenil-prolina (0,072 g, 0,35 iranol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em dicloro-metano (~2 mL) e dimetilformamida (0,5 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν'--etilcarbodiimida (0,081 g, 0,42 mmol), 1-hidroxibenzo-triazole (0,057 g, 0,42 mmol) e N-etilmorfolina (0,134 mL, 1,05 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente 114 ΡΕ2049478 durante 30 minutos e em seguida [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metiljamina (0,067 g, 0,42 mmol) foi adicionada. A agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente e, em seguida, a mistura foi diluída com mais diclorometano e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada aquosa foi separada e extraída com mais diclorometano (3 alí-quotas). As camadas orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com água salgada antes da secagem sobre sulfato de magnésio. A evaporação do solvente em seguida deu um óleo amarelo que foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa. Finalmente, a trituração do material assim obtido com uma mistura 1:1 de diclorometano e éter dietílico deu, após filtração e secagem, N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-fenil-prolinamida pura (0,031 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ =347, tempo de retenção = 2,46 minutos. A 5-oxo-l-fenil-prolina utilizada no procedimento atrás referido foi preparada como se segue: (i) Éster de etilo do ácido D-piroglutâmico (0,200 g, 1,27 mmol) foi dissolvido em dioxano (5 mL) e tratado com tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (0,058 g, 0,06 mmol), bromobenzeno (0,351 mL, 1,53 mmol), carbonato de césio (0,621 g, 1,91 mmol) e Xantphos™ (0,110 g, 0,19 mmol). A mistura resultante foi aquecida em refluxo durante a noite e, em seguida, deixada arrefecer até à temperatura ambiente. A mistura foi PE2049478 diluída com metanol e filtrada. O filtrado foi evaporado sob vácuo e em seguida repartido entre diclorometano e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada aquosa foi extraída com mais diclorometano (3 alíquotas) e, em seguida, as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água salgada e secas sobre sulfato de magnésio. A evaporação do solvente deu um resíduo amarelo brilhante que foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica, eluindo com um gradiente de 0-50% de acetato de etilo em hexano, para dar 5-oxo-l-fenil-prolinato de metilo (0,078 g) na forma de um óleo amarelo. Este foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (ii) 5-Oxo-l-fenilprolinato de metilo (0,078 g, 0,36 minol) foi combinado com hidróxido de sódio aquoso 2 N (2 mL) em etanol (2 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada entre -10 °C e 0 °C durante 5 horas. O solvente foi em seguida evaporado em vácuo e o resíduo foi acidificado até pH 1 pela adição de cloreto de hidrogénio aquoso 2 M. A isto foi adicionado diclorometano e a mistura foi passada através de um separador de fases. A camada aquosa foi lavada com mais diclorometano e depois as camadas de diclorometano combinadas foram evaporadas para dar 5-oxo-1-fenil-prolina (0,072 g) na forma duma goma amarela que foi utilizado sem purificação adicional no passo seguinte. 116 ΡΕ2049478
Exemplo 92 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l--(fenilmetil)-prolinamida (E92)
F
P
F 5-Oxo-l-(fenilmetil)prolina (0,100 g, 0,46 iranol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida numa mistura de diclorometano (2,5 mL) e dimetilformamida (0,5 mL) e a esta foram adicionados hidrocloreto de N-(3-dime-tilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,105 g, 0,55 iranol), 1-hidroxibenzotriazole (0,074 g, 0,55 iranol) e N-etilmor-folina (0,143 mL, 1,37 iranol). A mistura foi agitada durante 10 minutos e em seguida { [2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil] metil} amina (0,115 g, 0,55 iranol) foi adicionada e a mistura foi agitada durante 1 h. Hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada vigorosamente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada com um separador de fases e fase aquosa foi lavada com alíquotas adicionais de diclorometano (3 x 10 mL) . As frações orgânicas foram combinadas e secas sobre sulfato de magnésio. O solvente foi em seguida evaporado e o residuo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- { [2-cloro-3-(trifluorometil) fenil]metil}-5-oxo-l-(fenilmetil)-D-prolinamida pura. LC/MS [M+H]+ = 411; tempo de retenção, = 2,77 minutos.
Excesso enantiomérico = 100,0%, conforme determinado por cromatografia quiral método D, indicativo de AT— { [2 — -cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l-(fenilmetil)--D-prolinamida; tempo de retenção = 10,58 minutos. 117 ΡΕ2049478 A 5-oxo-l-(fenilmetil)prolina utilizada no método acima descrito foi preparada como se segue: Ácido D-glutâmico (1,47 g, 10 mmol) foi dissolvido em hidróxido de sódio 2 N aquoso (10 mL, 20 mmol) e agitou-se durante 15 minutos. A mistura foi em seguida tratada com uma solução de benzaldeido (1,1 mL, 10 mmol) em etanol (3 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida a 0 °C e tratada com tetra-hidretoborato de sódio (0,030 g) . A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente com agitação durante 4 horas e, em seguida, lavado com éter dietilico (três vezes) antes de acidificação com ácido clorídrico concentrado até pH 2. O precipitado resultante foi filtrado e lavado com éter dietilico antes da suspensão em etanol e destilação azeotrópica três vezes com mais etanol. Finalmente, o material restante fez uma pasta em etanol (50 mL) e foi aquecido em refluxo durante 16 h. A mistura foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e evaporada em vácuo. A secagem produziu 5-oxo-l-(fenilmetil)prolina pura.
Exemplo 93 N- [(2-Cloro-4-fluorofenil)metil]-5-oxo-l--(fenilmetil)prolinamida (E93)
118 ΡΕ2049478 Ν- [ (2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-(fenil-metil)-prolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita para a síntese de N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-5-oxo-l-(fenilmetil)-prolinamida (Exemplo 92) acima mas usando [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina no lugar de {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}amina. LC/MS [M+H]+ = 361; tempo de retenção = 2,54 minutos.
Exemplo 94 N-[(2-Cloro-4-fluorofenil)metil]-l-ciclopentil-5--oxoprolinamida (E94)
F l-Ciclopentil-5-oxoprolina (0,100 g, 0,51 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida numa mistura de diclorometano (2,5 mL) e dimetilformamida (0,5 mL) e a isto foram adicionados hidrocloreto de N-(3-dimetilamino-propil)-N'-etilcarbodiimida (0,117 g, 0,61 mmol), 1-hidro-xibenzotriazole (0,082 g, 0,61 mmol) e N-etilmorfolina (0,2 mL, 1,52 mmol). A mistura foi agitada durante 10 minutos e em seguida [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]amina (0,097 g, 0,61 mmol) foi adicionada e a mistura foi agitada durante a noite. Hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada vigorosamente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada com um separador de fases e fase aquosa foi lavada com alíquotas adicionais de diclorometano (3 x 10 mL) . As frações orgânicas foram combinadas e secas sobre sulfato de 119 ΡΕ2049478 magnésio. 0 solvente foi em seguida evaporado e o residuo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-ciclopentil-5-ox-oprolinamida pura. LC/MS [M+H]+ = 339; tempo de retenção =2,4 minutos. A 1-ciclopentil-5-oxoprolina usada no procedimento anterior foi preparada como se segue: (i) Hidrocloreto de D-glutamato de dimetilo (2,1 g, 10,00 mmol) foi dissolvido em metanol (7,5 mL) e tetra--hidrofurano (15 mL) e a mistura foi em seguida tratada com hidróxido de sódio moido (0,402 g, 10,05 mmol) durante 20 minutos, sob árgon. Nesta fase, ácido acético (0,575 mL, 10,05 mmol) e ciclopentanona (0,889 mL, 10,05 mmol) foram adicionados à mistura. Após agitação durante 10-15 minutos, a mistura foi arrefecida a 0 °C num banho de gelo e tratada com péletes de tetra-hidreto-borato de sódio (0,380 g, 10,05 mmol). A mistura foi agitada durante 3 horas sob árgon e deixada aquecer até à temperatura ambiente. Uma vez a mistura ter atingido a temperatura ambiente, o metanol foi separado por evaporação e o residuo foi diluído com diclorometano (20 mL) e lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado ( — 25 mL) . A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com mais diclorometano (2 x 20 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram concentradas em vácuo para darem um óleo. O óleo foi dissolvido em tolueno (10 mL) e aquecido em refluxo durante a noite. O solvente foi em seguida evaporado e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash 120 ΡΕ2049478 em coluna de sílica, eluindo com um gradiente de metanol 0- 10% em diclorometano, para dar o l-ciclopentil-5--oxoprolinato de metilo cru, o qual foi utilizado sem purificação adicional no passo seguinte. (ii) l-Ciclopentil-5-oxoprolinato de metilo (0,560 g, 2,65 mmol) foi dissolvido em etanol (10 mL) e arrefecido até 0 °C num banho de gelo. Hidróxido de sódio aquoso 2 M (5 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura do gelo durante 4 h. O etanol foi então evaporado sob vácuo e o resíduo aquoso foi acidificado até pH 1 pela adição de cloreto de hidrogénio aquoso 2 N. O volume da mistura aquosa resultante foi reduzido sob vácuo para -3 mL e isto foi em seguida extraído com uma mistura 3:1 de clorofórmio e isopropanol, respecti-vamente, usando um separador de fases. A camada aquosa foi lavada com mais diclorometano e depois as frações orgânicas combinadas foram evaporadas para darem origem a 1- ciclopentil-5-oxoprolina a qual foi usada em reacções subsequentes sem purificação adicional.
Exemplos 95-99
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 94 acima, os compostos tabelados abaixo (Tabela 8) foram preparados substituindo a [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-amina utilizada no procedimento acima pela amina apropriada (ou um seu sal) e/ou substituindo a ciclopentanona usada no procedimento acima pelo aldeído ou cetona apropriados. Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 8 estão disponíveis a partir de 121 ΡΕ2049478 fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando caminhos descritas anteriormente na literatura quimica, a menos que indicado de outra maneira.
Tabela 8
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E95 N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]me-til}-l-ciclopentil-5-oxoprolinamida 389 2,66 E96 N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-ciclobutil-5-oxoprolinamida 325 2,35 E97 N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(1-metiletil)-5-oxoprolinamida 313 2,19 E98 N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-(1-metilpropil)-5-oxoprolinamida 327 2,35 E99 "ÍV-Py: N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]me-til}-l-(1-metilpropil)-5-oxoprolinamida 377 2,6 122 ΡΕ2049478
Exemplo 100 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-(2,2--dimetilpropil)-5-oxoprolinamida (E100)
1-(2,2-Dimetilpropil)-5-oxoprolina (0,100 g, 0,5 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi dissolvida em diclorometano (5 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,191 g, 1 mmol) e 1-hidroxibenzotriazole (0,135 g, 1 mmol). A mistura foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente e em seguida {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-amina (0,209 g, 1 mmol) foi adicionada e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi em seguida lavada sequencialmente com água, solução aquosa de ácido cítrico 3 N, e três vezes mais com água, e em seguida seca por filtração através de um cartucho de Hydromatrix (Varian 5 g) . O solvente foi em seguida evaporado e o resíduo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil] metil}-1-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolinamida pura. LC/MS [M+H]+ = 391/393; tempo de retenção = 2,78 min. A 1-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolina usada no método acima descrito foi preparada como se segue: Ácido L-glutâmico (1,47 g, 10 mmol) foi 123 ΡΕ2049478 dissolvido em hidróxido de sódio aquoso 2 N (10 mL, 20 mmol) e tratado com uma solução de trimetilacetaldeido (1,09 mL, 10 mmol) em etanol (5 mL) e depois agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida a 0 °C e tratada com tetra-hidretoborato de sódio (0,130 g) . A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente com agitação durante 4 h e em seguida acidificada até pH neutro. A concentração em vácuo foi seguida por fazer uma pasta em etanol e destilação azeotrópica três vezes com mais etanol. Finalmente, o material restante foi suspenso em etanol (50 mL) e aquecido em refluxo durante 48 horas. A mistura foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente, os sais foram removidos por filtração e o solvente foi evaporado em vácuo para dar uma goma. A trituração com éter dietilico seguida por secagem proporcionou 1-(2,2--dimetilpropil)-5-oxoprolina sólida pura (1,1 g).
Exemplo 101 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l- -(fenilmetil)-prolinamida (E101)
N- {[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo--1-(fenilmetil)-D-prolinamida foi preparado de uma maneira análoga à descrita para a sintese de N-{[2-cloro-3-(trifluorometil) fenil]metil}-l-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoproli- 124 ΡΕ2049478 namida (Exemplo 100) acima mas usando 5-oxo-l-(fenilmetil)-prolina em vez de 1-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolina. LC/MS [M+H]+ = 411/413, tempo de retenção = 2,77 minutos.
Excesso enantiomérico = 100,0%, conforme determinado por cromatograf ia quiral método D, indicativo de N-{[2--cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l-(fenilmetil)--D-prolinamida; tempo de retenção = 8,09 minutos. 5-Oxo-l-(fenilmetil)prolina foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a síntese de 1-(2,2--dimetilpropil)-5-oxoprolina (Exemplo 100), mas utilizando benzaldeído no lugar de trimetilacetaldeído.
Exemplo 102 N— [(2,4-Diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida (E102)
N-[(2,4-Diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolina-mida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a síntese de N- {[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-metil}-l-metil-5-oxoprolinamida (Exemplo 83), mas {[4-fluo-ro-2-(trifluorometil)fenil]-metil-amina} foi substituída por [(2,4-diclorofenil)metil]amina. LC/MS [M+H]+ = 300,9; tempo de retenção =2,13 minutos.
Excesso enantiomérico = 97,8%, conforme determinado pelo método A de cromatografia quiral, indicativa de N- [(2,4-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxo-D-prolinamida; tempo de retenção = 6,25 minutos 125 ΡΕ2049478
Exemplo 103 1-Etil-N- ([2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil]metil)-5- -oxoprolinamida (E103)
l-Etil-N-{[2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil]-metil}-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à acima descrita (ver Exemplo 70) para N-[(2-cloro--4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-D-prolinamida mas usando 2-fluoro-3-trifluorometilbenzilamina em vez de 2-cloro-4-fluorobenzilamina. LC/MS [M+H]+ = 333; tempo de retenção = 2,24 minutos.
Exemplos 104-109
Os exemplos tabelados abaixo (Tabela 9) foram preparados de uma maneira análoga à descrita para o Exemplo 12, substituindo [(2,3,4-trifluorofenil)-metil]amina utilizada no procedimento descrito para o Exemplo 12 pela amina apropriada (ou um seu sal). Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 9 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparados utilizando caminhos descritos anteriormente na literatura química, a menos que indicado em contrário. A 1-etil-5-oxo-prolina usada para preparar estes exemplos foi por sua vez preparada utilizando o método C, tal como descrito para o Exemplo 12. 126 ΡΕ2049478
Tabela 9
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E104 •5V? N N- [(2-cianofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida 272 1,63 E105 o=aOk JL JL ^ 0 II N N-([2-ciano-3-(trifluorometil)-fenil]metil)-l-etil-5-oxoprolinamida 340 2,11 E106 1-etil-N-(1-naftalenilmetil)-5-oxoprolinamida 297 2,17 E107 »=9v.jOrCF· 0 l-etil-5-oxo-i\7-{ [4- (trifluorometil)fenil]metil}prolinamida 315 2,30 E108 °=0. JL JL fií 'CF> ^ O F l-etil-i\7-{ [2-fluoro-3- (trifluorometil-)fenil]metil}-5-oxoprolinamida 333 2,39 E109 o==OL^n^JljL O l-etil-5-oxo-N-{[3- (trifluorometil)fenil]metil}prolinamida 315 2,34 127 ΡΕ2049478 0 trifluoroacetato de 2-(aminometil)-6-(trifluo-rometil)benzonitrilo necessário para a sintese do Exemplo 105 foi preparado como se segue: (i) {[2-Fluoro-3-(trifluorometil)fenil]metil}amina (1,93 g, 10 mmol) foi dissolvida em diclorometano (40 mL) e tratada com uma solução de dicarbonato de bis(l,l-di-metiletilo) (2,18 g, 10 mmol) em diclorometano (10 mL) . Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, o solvente foi evaporado para dar um sólido amarelo pálido o qual foi purificado por cromatografia em coluna de gel de silica, eluindo com um gradiente de 1:10-1:5 de acetato de etilo em hexanos, para dar { [2-fluoro-3-(tri-fluorometil)fenil]metil}carbamato de 1,1-dimetiletilo puro (2 g). (ii) {[2-Fluoro-3-(trifluorometil)fenil]metil}carbamato de 1,1-dimetiletilo (1,17 g, 4 mmol) foi dissolvido em dimetilsulfóxido (5 mL) e tratado com cianeto de potássio (0,260 g, 4 mmol) . A mistura foi em seguida aquecida a 80 °C sob árgon durante 1,5 h e depois a 120 °C durante a noite (16 h). Cianeto de potássio adicional (0,260 g, 4 mmol) foi em seguida adicionado e o aquecimento continuou a 120 °C durante mais 24 h. A mistura foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente, extinta com água e diluida com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram separados e lavados três vezes com água e em seguida com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A secagem e evaporação deu uma goma castanha que foi purificada por cromatografia em 128 ΡΕ2049478 coluna de gel de sílica, eluindo com um gradiente de 1:10-1:5 de acetato de etilo em hexanos, para dar {[2--ciano-3-(trifluorometil)fenil]metil}carbamato de 1,1-di-metiletilo parcialmente puro na forma dum sólido/semissó-lido escuro gue foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. LC/MS [M-BOC + H]+ = 201; tempo de retenção = 1,19 minutos. (iii) {[2-Ciano-3-(trifluorometil)fenil]metil}carbamato de 1,1-dimetiletilo (0,190 g, 0,63 mmol) foi dissolvido em diclorometano (4 mL) e tratado com ácido trifluoroacético (4 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h e em seguida evaporada. O resíduo foi duas vezes recebido em diclorometano e evaporado novamente para dar origem a trifluoroacetato de 2-(aminometil)-6-(trifluorometil)benzonitrilo que foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplo 110 1-Metil-N- (1-naftalenilmetil)-5-oxoprolinamida (E110)
o l-Metil-5-oxoprolina (0,050 g, 0,35 mmol, preparada de um modo análogo ao descrito acima para o Exemplo 51), hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbo-diimida (0,081 g, 0,42 mmol), 1-hidroxibenzotriazole (0,057 g, 0,42 mmol), N-etilmorfolina (0,166 mL, 1,05 mmol) e (1-naftalenilmetil)amina foram combinados em dicloro- 129 ΡΕ2049478 metano (~8 mL) e a mistura foi agitada durante ~20 h à temperatura ambiente. A mistura foi em seguida lavada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 M (5 mL) e a camada orgânica foi separada usando um separador de fases. A camada orgânica foi lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, separada como anteriormente e, em seguida, evaporada. 0 resíduo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar 1-metil-iV- (1-naftalenilmetil)-5--oxoprolinamida pura na forma dum sólido branco (0,062 g). LC/MS [M+H]+ = 283; tempo de retenção =2,1 minutos.
Exemplo 111 N-{[2-Cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l--metil-5-oxoprolinamida (Elll)
l-Metil-5-oxoprolina (0,057 g, 0,4 iranol, é preparada de um modo análogo ao descrito acima para o Exemplo 51) dissolvida em diclorometano (4 mL) e tratada com 2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina (0,104 g, 0,42 mmol). Hidrocloreto da {[2-cloro-4-fluoro-3--(trifluorometil)fenil]metil}amina (0,105 g, 0,4 mmol, preparada conforme descrito abaixo) foi então adicionada e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso
saturado (10 mL) e agitada durante 5 minutos. A fase orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica e, em seguida, lavada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N 130 ΡΕ2049478 (2 χ 10 mL) . A evaporação da fase orgânica deu em seguida N- { [2-cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1--metil-5-oxoprolinamida pura (0,106 g). LC/MS [M+H]+ = 353; tempo de retenção = 2,49 minutos. O hidrocloreto de { [2-cloro-4-fluoro-3- (tri-fluorometil)fenil]metil}amina utilizado no método descrito acima foi preparado como se segue: (i) l-Cloro-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzeno (10 g, 50 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (100 mL) , arrefecido a -70 °C sob árgon, e tratado com uma solução 1,4 M de sec-butil-lítio em ciclo-hexano (37,5 mL, 52,5 mmol). A agitação continuou durante 2 h e, em seguida, cloreto de trimetilsililo (6,7 mL, 52,5 mmol) foi adicionado e a agitação continuou, ainda a -70 °C, durante mais 1 h. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e o tetra-hidrofurano foi em seguida removido em vácuo. O resíduo foi repartido entre éter dietílico e água e em seguida a camada orgânica foi separada e lavada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N. A fase orgânica foi separada e concentrada para dar o produto cru que foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica, eluindo com hexano, para dar [4--cloro-2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil](trimetil)silano puro na forma de um óleo límpido (10,35 g). (ii) 2,2,6,6-Tetrametilpiperidina (3,3 mL, 19,44 mmol) foi adicionada lentamente a uma solução de n-butil-lítio (2,5 M em tolueno, 7,7 mL, 19,44 mmol) em tetra-hidro- 131 PE2049478 furano (75 mL) a -75 °C sob árgon e agitou-se durante 15 minutos. Uma solução de [4-cloro-2-fluoro-3-(trifluoro-metil)fenil](trimetil)silano (5 g, 18,5 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) foi em seguida adicionada gota a gota à mistura, assegurando que a temperatura da mistura era mantida abaixo de -65 °C, e a agitação foi continuada durante 2 h. 0 dióxido de carbono sólido em excesso, o qual tinha sido previamente lavado com tetra-hidrofurano a -65 °C, foi adicionado em pedaços e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 2 horas. A mistura foi reduzida sob vácuo para dar um sólido amarelo pálido. Este material foi repartido entre água que tinha sido acidificada a pH 1 (200 mL) e éter dietilico (200 mL). A camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de sódio anidro. A evaporação deu um sólido castanho pálido que foi recristalizado em tolueno para dar ácido 2-cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)-5-(trime-tilsilil)-benzóico puro (3,85 g, em 3 lotes) na forma de agulhas brancas. LC/MS [M-H]~ = 312; tempo de retenção =3,29 minutos. (iii) Uma solução de fluoreto de potássio (0,367 g, 9,55 mmol) em água (15 mL) foi adicionada a uma solução de ácido 2-cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)-5--(trimetilsilil)-benzóico (1 g, 3,18 mmol) em tetra--hidrofurano (50 mL) e a mistura foi agitada a 100 °C durante a noite. Uma alíquota adicional de água (15 mL) e fluoreto de potássio (0,370 g, 9,62 mmol) foi adicionado e o aquecimento a 100 °C foi continuado durante mais 4 h. 132 ΡΕ2049478 0 tetra-hidrofurano foi evaporado em vácuo e substituído com dimetilformamida suficiente para dissolver todos os sólidos. A mistura foi aquecida durante a noite a 100 °C, mas o material de partida ainda permanecia e por isso mais fluoreto de potássio (0,367 g, 9,55 mmol) foi adicionado e o aquecimento a 100 °C continuou durante 7 dias. Nesta fase quase todo o material de partida tinha desaparecido de modo que a reacção foi evaporada até à secura sob vácuo e retomada em cloreto de hidrogénio aquoso 2 N (75 mL) e éter dietílico (50 mL) . A camada aquosa foi separada e extraída com mais éter dietílico (2 x 50 mL) e em seguida as frações orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e evaporadas para darem o produto cru na forma dum sólido branco. Este foi purificado por recristalização em tolueno para dar o ácido 2-cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)-benzóico puro (0,566 g) na forma dum sólido branco.
(iv) Ácido 2-cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)-benzóico (0,560 g, 2,31 mmol), 1H-1,2,3-benzotriazol-l-olate de amónio (0,534 g, 3,47 mmol, preparado conforme descrito abaixo), hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,643 g, 3,47 mmol) e N-etilmorfolina (0,594 mL, 4,62 mmol) foram agitados em conjunto em diclorometano (30 mL) durante um total de 3 h. Hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (30 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 15 minutos. A camada orgânica foi separada usando uma frita hidrofóbica e em seguida lavada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N 133 PE2049478 (2 x 50 mL) . A separação da camada orgânica, novamente usando uma frita hidrofóbica, e a evaporação em vácuo dão 2-cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)-benzamida (0,493 g) na forma dum sólido esbranquiçado que foi utilizado sem purificação adicional no passo subsequente. O lH-1,2,3-benzotriazol-l-otate de amónio utilizado no passo acima descrito foi preparado como se segue:
Hidróxido de amónio (4,15 mL, 75 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução de 1-hidroxibenzo-triazole (10 g, 74 mmol) em tetra-hidrofurano (100 mL) a 0 °C (banho de gelo) e agitou-se durante 2 horas. A filtração e lavagem com tetra-hidrofurano deu lH-1,2,3--benzotriazol-l-olate de amónio (10,57 g) na forma dum sólido branco. (v) 2-Cloro-4-fluoro-3-(trifluorometil)benzamida (0,490 g, 2,03 mmol) foi tratada com borano 1 M em tetra--hidrofurano (20,33 mL, 20,33 mmol) e agitada a 60 °C durante a noite. A mistura foi em seguida tratada com cloreto de hidrogénio aquoso 2 N até a evolução de gás ter cessado e, em seguida, agitada a 100 °C durante 2 h. A mistura foi reduzida em vácuo e o resíduo foi recebido num mínimo de água e lavado com diclorometano (30 mL) . O pH da camada aquosa foi ajustado a pH 11 por adição de solução aquosa de hidróxido de sódio 2 N e em seguida extraiu-se com diclorometano (2 x 25 mL) . As camadas de diclorometano foram separadas usando uma frita hidrofóbica, combinadas e evaporadas em vácuo para deixarem um óleo amarelo pálido. Uma solução 1 M de cloreto de 134 ΡΕ2049478 hidrogénio em éter dietilico (3 mL, 3 mmol) foi adicionada e o sólido branco resultante foi separado por filtração para dar hidrocloreto de { [2-cloro-4-fluoro-3--(trifluorometil)fenil]metil}amina puro (0,210 g) que foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplo 112 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-ciclobutil-5- -oxoprolinamida (E112)
l-Ciclobutil-5-oxoprolina (0,238 g, 0,82 mmol) foi suspensa em diclorometano (3 mL) e a isto foi adicionado hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi-imida (0,188 g, 0,98 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (0,132 g, 0,98 mmol) e N-etilmorfolina (0,313 mL, 2,46 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e em seguida { [2-cloro-3-(trifluorometil) fenil] -metiljamina (0,205 g, 0,98 mmol) foi adicionada à mistura e a agitação continuou durante ~20 h à temperatura ambiente. A mistura foi em seguida diluida com mais diclorometano e tratada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada de diclorometano foi separada e a camada aquosa foi extraída com 3 alíquotas adicionais de diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e em seguida com água salgada, secos sobre sulfato de magnésio 135 ΡΕ2049478 anidro e evaporados em vácuo para dar o produto cru. Este foi ainda purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1--ciclobutil-5-oxoprolinamida pura (0,105 g) na forma de um sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 375; tempo de retenção = 2,53 minutos. A l-ciclobutil-5-oxoprolina usada no procedimento acima foi preparada de uma maneira análoga à descrita anteriormente para a síntese de l-etil-5-oxo-prolinato de metilo (ver Exemplo 3), mas usando ciclobutanona no lugar de acetaldeído e com a adição de um passo subsequente de desproteção do éster a ser realizado (usando condições padrão, isto é, hidróxido de sódio em metanol) (em oposição à desproteção e acoplamento amida combinados descrito no Exemplo 3).
Exemplos 113-117
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 112 acima os compostos tabelados abaixo (Tabela 10) foram preparados substituindo a {[2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}amina utilizada no procedimento acima pela amina apropriada (ou um seu sal) . Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos mostrados na Tabela 10 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando caminhos descritas anteriormente na literatura química, a menos que indicado de outra forma. 136 ΡΕ2049478
Tabela 10
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E113 N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-1-ciclobutil-5-oxoprolinamida 321 2,39 E114 6 ° α l-ciclobutil-i\7- [(2,4— diclorofenil)metil]-5-oxoprolinamida 341 2,46 E115 “ F N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-1-ciclobutil-5-oxoprolinamida 343 2,32 E116 ό ° " 1-ciclobutil-N- [(2,3-diclorofenil)metil]-5-oxoprolinamida 341 2,38 E117 6 ° l-ciclobutil-I7-{[2-metil-3-(trifluorome-til)fenil]metil}-5-oxoprolinamida 355 2,51 O hidrocloreto da [ (2-cloro-3,4-difluorofenil) - 137 ΡΕ2049478 metiljamina necessário para a síntese de N- [ (2-cloro-3,4--difluorofenil)metil]-l-ciclobutil-5-oxoprolinamida (Exemplo 115) foi preparado conforme descrito acima para o Exemplo 36.
Exemplo 118 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-(2,2--dimetilpropil)-5-oxoprolinamida (E118)
N- {[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l--(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita para o Exemplo 100 mas usando 1-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolina preparada conforme descrito abaixo. LC/MS [M+H]+ = 391/393; tempo de retenção = 2,76 minutos. A 1-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolina utilizada no método acima descrito foi preparado como se segue: Ácido D-glutâmico (2,21 g, 15 mmol) foi dissolvido em hidróxido de sódio aquoso 2 N (15 mL, 30 mmol), arrefecido a 0 °C e tratado com uma solução de trimetil-acetaldeído (1,63 mL, 15 mmol) em etanol (3 mL) e depois agitado a temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura foi novamente arrefecida a 0 °C e tratada em porções com tetra-hidretoborato de sódio (0,189 g, 5 mmol). A mistura foi deixada aquecer até à temperatura 138 PE2049478 ambiente com agitação durante 4 h, em seguida, após lavagem com éter dietilico, foi acidificada até pH 4 utilizando ácido clorídrico concentrado. 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com éter dietilico e em seguida seco num forno de vácuo durante a noite. 0 sólido foi em seguida suspenso em etanol (50 mL) e a mistura foi aquecida em refluxo durante 24 h. A concentração e trituração com hexano proporcionou em seguida 1-(2,2-dimetilpropil)-5-oxoprolina (1,51 g) na forma dum sólido que foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplo 119 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l-(2--piridinilmetil)-prolinamida (E119)
5-Oxo-l-(2-piridinilmetil)prolina (0,220 g, 1 mmol, preparada conforme descrito abaixo), hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,384 g, 2 mmol) e 1-hidroxibenzotriazole (0,308 g, 2 mmol) foram agitados em conjunto em diclorometano (10 mL) à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi em seguida tratada com {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}amina (0,314 g, 1,5 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada e 139 ΡΕ2049478 repartida entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. A camada aquosa foi separada e extraida com acetato de etilo e, em seguida, as frações combinadas de acetato de etilo foram lavadas com 3 porções de água e depois com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A secagem sobre sulfato de sódio e a concentração deram um residuo sólido que foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N- {[2-cloro-3--(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l-(2-piridinilmetil)--prolinamida (0,263 g) na forma dum sólido de cor amarela clara. LC/MS [M+H]+ = 412/414, tempo de retenção = 2,15 minutos. A 5-oxo-l-(2-piridinilmetil)prolina utilizada no método acima descrito foi preparada como se segue: Ácido D-glutâmico (2,21 g, 15 mmol) foi dissolvido em hidróxido de sódio aquoso 2 N (15 mL, 30 mmol) a 0 °C e, em seguida, tratado com piridina-2--carboxaldeido (1,43 mL, 15 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos e em seguida arrefecida a 0 °C e tratada com tetra-hidretoborato de sódio (0,189 g, 5 mmol). A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente com agitação durante 4 horas, em seguida, após lavagem duas vezes com éter dietilico, foi acidificada até pH 5-6. A camada aquosa foi concentrada, em seguida azeotropada três vezes com tolueno e depois com uma mistura de etanol:tolueno 1:1 e, finalmente, com etanol. O residuo foi em seguida recebido 140 ΡΕ2049478 em etanol (50 mL) e submetido a refluxo durante 8 h. A concentração deu um óleo que, quando seco em vácuo, deu 5-oxo-l-(2-piridinilmetil)prolina (2,60 g) na forma duma espuma que foi usada sem qualquer purificação adicional.
Exemplo 120 N—{[2-Cloro—3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l—(3--piridinilmetil)-prolinamida (E120)
5-Oxo-l-(3-piridinilmetil)prolina (0,210 g, 1 mmol, preparada conforme descrito abaixo), hidrocloreto de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,383 g, 2 mmol) e 1-hidroxibenzotriazole (0,306 g, 2 mmol) foram agitados em conjunto em diclorometano (10 mL) à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi em seguida tratada com {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}amina (0,314 g, 1,5 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada e repartida entre acetato de etilo e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. A camada aquosa foi separada e extraída com mais acetato de etilo e, em seguida, as frações de acetato de etilo combinadas foram lavadas sequencialmente com 3 porções de água e depois com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A secagem sobre sulfato de magnésio e a 141 ΡΕ2049478 concentração deram um resíduo sólido que foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar IV-{ [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-l-(3-piridinilmetil)-prolinamida pura (0,031 g) . LC/MS [M+H]+ = 412/414; tempo de retenção = 1,83 minutos. A 5-oxo-l-(3-piridinilmetil)prolina utilizada no método acima descrito foi preparada como se segue: Ácido D-glutâmico (2,21 g, 15 mmol) foi dissolvido em hidróxido de sódio aquoso 2 N (15 mL, 30 mmol) a 0 °C e, em seguida, tratado com piridina-3-carboxaldeído (1,41 mL, 15 mmol) em etanol (3 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e em seguida arrefecida a 0 °C e tratada em porções com tetra-hidretoborato de sódio (0,189 g, 5 mmol). A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente com agitação durante 4 horas, em seguida após lavagem com éter dietílico foi acidificada até pH 5-6 usando ácido clorídrico concentrado. O precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco em vácuo. Este material foi em seguida recebido em etanol (50 mL) e refluxado durante a noite. Os sólidos finos foram removidos por filtração e em seguida a concentração deu 5-oxo-l-(3-piridinilmetil)prolina (2,04 g) na forma dum sólido branco que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. 142 ΡΕ2049478
Exemplo 121 N- [(2,4-Diclorofenil)metil]-5-oxo-l-(3-piridinilmetil)- -prolinamida (E121)
N- [ (2,4-Diclorofenil)metil]-5-oxo-l-(3-piridinil-metil)prolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a síntese de N- { [2-cloro-3-(trifluoro-metil)fenil]metil}-5-oxo-l-(3-piridinilmetil)-prolinamida (E120 ), mas utilizando [(2,4-diclorofenil)metil]amina em vez de {[2-cloro-3-(tritluorometil)fenil]metil}amina. LC/MS [M+H]+ = 378/380/382; tempo de retenção = 1,70 minutos.
Exemplo 122 1-Ciclopropil-W-[(2,4-diclorofenil)metil-2-metil-5--oxoprolinamida (Ε122)
A uma solução de isocianeto de (2,4-dicloro-fenil)metilo (0,047 g, 0,25 mmol) e ácido levulínico (0,041 mL, 0,4 mmol) em metanol (2 mL) foi adicionada ciclopropilamina (0,042 mL, 0,6 mmol). A mistura foi aquecida a 100 °C durante 30 minutos num reator de micro- 143 ΡΕ2049478 -ondas. 0 solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar 1-ciclopropil-IV- [ (2,4-diclorofenil) metil ] -2-metil-5-oxopro-linamida (0,054 g) na forma dum sólido branco. LC/MS [M+H]+ = 341/343; tempo de retenção = 2,57 minutos.
Exemplos 123-126
De uma forma análoga à descrita para o Exemplo 122 acima dos compostos tabelados abaixo (Tabela 11) foram preparados substituindo a ciclopropilamina usada no procedimento acima pela amina apropriada. Todas as aminas utilizadas para fazer os compostos apresentados na Tabela 11 estão disponíveis a partir de fontes comerciais ou podem ser preparadas utilizando caminhos descritos anteriormente na literatura química.
144 ΡΕ2049478 (continuação)
Exemplo n° Nome químico [M+H]+ Tempo de retenção (min) E125 η r T 0 Cl N-[(2,4-diclorofenil)metil]-2-metil-l-(1-metiletil)-5-oxoprolinamida 343/345 2,64 E126 ^ o a N-[(2,4-diclorofenil)metil]-1,2-dimetil-5-oxoprolinamida 315 2,39
Exemplo 127 N- [(2,4-Diclorofenil)metil]-1,3,3-trimetil-5-oxoprolinamida (E127)
A uma solução de isocianeto de (2,4-dicloro-fenil)metilo (0,094 g, 0,5 mmol) e ácido 3,3-dimetil-4-oxo-butanóico (0,065 mg, 0,5 mmol, preparado conforme descrito abaixo) em metanol (2 mL) foi adicionada metilamina (0,080 mL de solução, 33% em etanol). A mistura foi aquecida a 100 °C durante 30 minutos num reator de micro--ondas. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar uma goma incolor que foi triturada com éter dietílico para dar N- [(2,4-diclorofenil)metil]-1,3,3-trimetil-5-oxoproli- 145 ΡΕ2049478 namida (0,043 g) na forma dum sólido branco pegajoso. LC/MS [M+H]+ = 329/331; tempo de retenção = 2,42 minutos. 0 ácido 3,3-dimetil-4-oxobutanóico usado no procedimento acima descrito foi preparado como se segue: Ácido 3,3-dimetil-4-pentenóico (1,3 g, 10,14 mmol) foi dissolvido em diclorometano (25 mL) e arrefecido a -78 °C num banho de CCh/acetona. Oxigénio foi borbulhado através da mistura durante 5 minutos, seguido por ozono durante 25 minutos (dando uma solução azul) . Oxigénio foi borbulhado através da mistura durante mais 5 minutos, seguido por árgon, durante 10 minutos. Sulfureto de dimetilo (2,23 mL, 30,4 mmol) foi em seguida adicionado à mistura e a mistura foi removida do banho de arrefecimento e agitou-se durante 2,5 h. A solução incolor resultante foi reduzida em vácuo para dar ácido 3,3-dimetil-4-oxobutanóico na forma de um óleo incolor que foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplo 128 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l,3,3-trimetil- -5-oxoprolinamida (E128)
N- {[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l,3,3--trimetil-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a sintese de N- [(2,4-dicloro- 146 PE2049478 fenil)metil]-1,3,3-trimetil-5-oxoprolinamida (E127), mas usando isocianeto de [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]-metilo (preparado conforme descrito no Exemplo 40) em vez de isocianeto de (2,4-diclorofenil)metilo. LC/MS [M+H]+ = 363/365; tempo de retenção = 2,49 minutos.
Exemplo 129 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l,3-dimetil-5- -oxoprolinamida (E129)
1,3-Dimetil-5-oxoprolina (0,620 g, 3,6 mmol, preparada conforme descrito abaixo), hidrocloreto de N-(3-di-metilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,822 g, 4,3 mmol), 1-hidroxibenzotriazole (0,581 g, 4,3 mmol), IV-etilmorfolina (1,4 mL, 10,8 mmol), e {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]-metiljamina (0,828 g, 3,96 mmol) foram combinados numa mistura de diclorometano (10 mL ) e dimetilformamida (5 mL) e agitou-se sob árgon durante a noite. A mistura foi em seguida lavada sequencialmente com água (50 mL), cloreto de hidrogénio aquoso 0,5 N (50 mL) , água (50 mL) , hidrogeno-carbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) e água (50 mL) . A camada de diclorometano foi passada através de uma frita hidrofóbica e evaporada em vácuo para dar o produto cru. Este foi ainda purificado por HPLC automatizada dirigida à massa (10 x 0,100 g injecções) para dar IV-{ [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1,3-dimetil-5-oxoprolinamida pura (0,613 g). 147 ΡΕ2049478 LC/MS [M+H]+ = 34 9; tempo de retenção = 2,31, 2,38 minutos (dois diastereoisómeros). A 1,3-dimetil-5-oxoprolina usada no procedimento anterior foi preparada como se segue: (i) (R,R,R)-2-Hidroxipinen-3-ona (10,9 g, 64,8 mmol) e glicina (t-butiléster) (13 g, 97,2 mmol) em tolueno anidro (200 mL) foi tratada com trifluoreto de boro-eterato de dietilo (0,460 g, 3,24 mmol) e, em seguida, aquecida sob árgon durante 6 horas ao refluxo. A mistura foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A filtração através de uma sinterização seguida por evaporação deu uma goma amarela que foi purificada por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de silica (Biotage SP4), eluindo com uma mistura de acetato de etilo 25% em hexano, para dar algum iV-[(lA,2A,5A)-2-hidroxi-2,6,6--trimetilbiciclo[3,1,1]hept-3-ilideno]glicinato de 1,1--dimetiletilo puro (3,68 g) e algumas frações mistas. O material impuro foi purificado, usando novamente cromatografia flash em coluna de gel de silica automatizado (Biotage SP4), mas eluindo com um gradiente de 0-25% de acetato de etilo em hexano (0-15% em 10 volumes de coluna e 15-25% em 5 volumes de coluna), para dar uma colheita adicional de N- [(IR,2R,5R)-2-hidroxi--2,6,6-trimetilbiciclo[3,1,1]hept-3-ilideno]glicinato de 1,1-dimetiletilo puro (1,73 g) . Os dois lotes de 148 ΡΕ2049478 Ν-[(IR,2R,5R)-2-hidroxi-2,6,6-trimetilbiciclo[3,1,1]hept--3-ilideno]glicinato de 1,1-dimetiletilo puro foram combinados (5,41 g) e este material foi utilizado no passo seguinte. (Nota: A glicina (t-butiléster) utilizada acima também pode ser trocada por hidrocloreto de glicina-(t-butiléster) e um equivalente molar de carbonato de potássio) (ii) Uma solução de N- [(IR,2R, 5R)-2-hidroxi--2,6,6-trimetilbiciclo[3,1,1]hept-3-ilideno]glicinato de 1,1-dimetiletilo (11,05 g, 39,3 mmol) em tetra-hidro-furano anidro (100 mL) foi arrefecida a -30 °C e tratada com uma solução 3 M de brometo de metilmagnésio em éter dietilico (17,1 mL, 51,1 mmol). 1,8-Diazabiciclo [5.4.0]-undec-7-eno (7,78 g, 51,1 mmol) foi então adicionado e a mistura foi agitada durante um adicional de 20 minutos a -30 °C. A mistura foi então tratada com crotonato de etilo e a agitação continuou durante 1 h. A mistura foi extinta por adição de solução aquosa saturada de cloreto de amónio (35 mL) e depois extraida com acetato de etilo (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para darem um óleo amarelo. Este material foi purificado por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de silica (usando uma Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-20% (mais de 5 volumes de coluna) e depois de 20-35% (mais de 14 volumes de coluna) de acetato de etilo em hexano, para dar 5-etil-IV- [ (IR, 2R, 5R) -2-hidroxi-2, 6, 6- 149 ΡΕ2049478 -trimetilbiciclo[3,1,1]hept-3-ilideno]-3-metilglutamato de 1-(1,1-dimetiletilo) (4,2 g) que foi utilizado no passo seguinte. (iii) Uma solução aquosa a 10% de ácido citrico (11 mL, 5,6 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-etil--N- [ (IR,2R,5R)-2-hidroxi-2,6,6-trimetilbiciclo[3,1,1] — hept-3-ilideno]-3-metilglutamato de 1-(1,1-dimetiletilo) (2 g) em tetra-hidrofurano (10 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. A mistura foi evaporada e o resíduo suspenso em água (50 mL) e lavado com éter dietílico (100 mL) . A fase aquosa foi então ajustada para pH~7 usando solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e, em seguida, extraída com éter dietílico (3 x 100 mL) . As frações orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para darem 5-etil-3-metilglutamato de 1—(1,1-dimetiletilo) (1,1 g) na forma de um óleo amarelo que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (iv) 5-Etil-3-metilglutamato de 1-(1,1-dimetiletilo) (1,1 g, 4,5 mmol) foi deixado em repouso, ligado a uma linha de alto vácuo, durante a noite, e em seguida ao longo de um fim de semana. O material de partida era ainda evidente nesta fase, de modo que foi adicionado tolueno (30 mL) e a mistura resultante foi aquecida a 110 °C durante a noite. A evaporação deu 3-metil-5-oxo-prolinato de 1,1-dimetiletilo (0,79 g) que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. 1,1-dimetiletilo (v) 3-Metil-5-oxoprolinato de PE2049478 (0,79 g, 3,96 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (8 mL) e tratado com iodeto de metilo (0,27 mL, 4,36 mmol). A mistura foi em seguida arrefecida a 0 °C e tratada em porções com hidreto de sódio (60% em óleo, 0,170 g, 4,36 mmol). A mistura cessou de borbulhar após 30 minutos a 0 °C e foi em seguida deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi extinta por adição de solução aquosa saturada de cloreto de amónio (10 mL) e a camada orgânica foi separada e posta de lado. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 20 mL) e os extratos combinados foram secos usando uma frita hidrofóbica. Todas as frações orgânicas (incluindo a posta de lado anterior) foram combinadas e evaporadas para dar origem a 1,3-dime-til-5-oxoprolinato de 1,1-dimetiletilo (0,770 g) na forma duma goma amarela que foi usada sem purificação adicional. (vi) 1,3-Dimetil-5-oxoprolinato de 1,1-dimetiletilo (0,770 g, 3,62 mmol) foi suspenso em diclorometano (5 mL) e tratado com ácido trifluoroacético (0,4 mL, 5,4 mmol). A mistura foi agitada durante 5 horas e depois evaporada. Azeotropando o resíduo resultante com tolueno em seguida deu o material de partida que não reagiu (0, 600 g) . Este foi de novo recebido em diclorometano (2 mL) e tratado com ácido trif luoroacético (2 mL) mais uma vez. Após agitação durante 2 horas a mistura foi evaporada e o resíduo novamente azeotropado com tolueno (10 mL) para dar a 1,3-dimetil-5-oxoprolina (0,760 g) que foi usada sem qualquer purificação adicional. ΡΕ2049478 151
Exemplo 130 N-[(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-4,4-dimetil-5- -oxoprolinamida (E130)
l-Etil-4,4-dimetil-5-oxoprolina (0,130 g, 0, 702 irimol, preparada conforme descrito abaixo), 1-hidroxibenzotriazole (0,161 g, 1,053 mmol) e hidrocloreto de N-(3-dimetilami-nopropil)-N'-etilcarbodiimida (0,202 g, 1,053 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (5 mL) e agitou-se durante 15 minutos à temperatura ambiente. [ (2-cloro-4-fluorofenil) -metil]amina (0,134 g, 0,842 mmol) e diisopropiletilamina (0,184 mL, 1,053 mmol) foram então adicionados à mistura e a agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi em seguida concentrada em vácuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo e água e extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sequencialmente com ácido cítrico 3 N, água, carbonato de sódio aquoso saturado, água (x3) e depois com água salgada e secou-se sobre sulfato de sódio anidro. A concentração deu um sólido cru que foi subsequentemente purificado por HPLC automatizada dirigida à massa para dar N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-1-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida (0,146 g) na forma dum sólido. LC/MS [M+H]+= 327/329, tempo de retenção = 2,35 minutos. 152 PE2049478 A l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolina usada no procedimento anterior foi preparada conforme descrito abaixo : (i) (S)-(+)-L-5-Tritiloximetil-2-pirrolidinona (7,51 g, 20 mmol) foi dissolvida em dimetilformamida (25 mL) a 0 °C e tratada em porções com hidreto de sódio (suspensão a 60% em óleo, 0, 880 g, 22 mmol) . A mistura foi agitada a 0 °C durante lhe, em seguida, tratada com iodeto de etilo (1,78 mL, 22 mmol). A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e em seguida agitada durante a noite. A mistura foi em seguida vertida sobre gelo e extraída com acetato de etilo (x3) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados sequencialmente com água, solução aquosa 50% de cloreto de sódio (3x) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e em seguida secos sobre sulfato de sódio. A concentração deu um sólido cru que foi purificado por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de sílica (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-{[(trifenilmetil)-oxi]metil}-2--pirrolidinona pura (7,09 g). (ii) A uma solução 2 M de di-isopropilamideto de lítio em tetra-hidrofurano (1,912 mL, 3,82 mmol) a -78 °C foi adicionada, gota a gota, uma solução de l-etil-5--{[(trifenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirrolidinona (1,34 g, 3,48 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) e a mistura resultante foi agitada durante lha -78 °C. Foi em seguida adicionado iodometano (0,239 mL, 3,82 mmol) e 153 ΡΕ2049478 após agitação durante mais 1 hora a -78 °C, a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 3 horas. A mistura foi em seguida rearrefecida a -78 °C e tratada, gota a gota, com uma alíquota adicional de uma solução 2 M de di-isopropilamideto de litio em tetra--hidrofurano (1,912 mL, 3,82 mmol). Após agitação durante mais uma hora a -78 °C, a mistura foi novamente tratada com iodometano (0,239 mL, 3,82 mmol) e, em seguida, a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi extinta com cloreto de amónio aquoso saturado e, em seguida, extraída com acetato de etilo (2x) . Os extratos orgânicos combinados foram então lavados com água (3x) e em seguida com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio anidro e concentrados até um sólido oleoso cru (1,7 g) . O sólido cru foi purificado por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de sílica (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar frações do produto puro (isto é, l-etil-3,3-dimetil-5-{[(tri-fenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirrolidinona (0,468 g)) , bem como material monoalquilado puro (isto é, l-etil-3-metil--5-{[(trifenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirrolidinona (0,524 g)) e uma mistura destes dois (0,240 g). O produto desejado foi posto de lado, enquanto a l-etil-3-metil-5-{[(trifenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirrolidinona e o material misturado foram combinados e dissolvidos em tetra-hidrofurano (20 mL) . Esta solução foi em seguida adicionada gota a gota a uma solução 2 M de di-iso- 154 ΡΕ2049478 propilamideto de lítio em tetra-hidrofurano (1,912 mL, 3,82 mmol) a -78 °C e a agitação a esta temperatura foi mantida durante 1 h. Iodometano (0,239 mL, 3,82 mmol) foi em seguida adicionado à mistura e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 4 horas. A manipulação conforme descrito acima deu um lote adicional de l-etil-3,3-dimetil-5-{[(trifenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirrolidinona (0,846 g) na forma de um óleo que foi combinado com o material posto de lado anterior (massa total = 1,08 g) e utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (iii) Amberlyst 15® (5,56 g, 26,1 mmol) foi lavada três vezes com metanol e em seguida uma solução de l-etil-3,3-dimetil-5-{[(trifenilmetil)-oxi]-metil}-2--pirrolidinona (1,08 g, 2,61 mmol) em metanol (50 mL) foi adicionado. A mistura foi deixada em repouso durante 4 dias a temperatura ambiente e em seguida a resina foi removida por filtração (lavagem com metanol). As frações de metanol combinadas foram concentradas para dar um óleo cru (1,62 g) o qual foi purificado por cromatografia flash automatizada em coluna de gel de silica (Biotage SP4), eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em hexano, para dar l-etil-5-(hidroximetil)-3,3--dimetil-2-pirrolidinona (0,376 g) na forma de um óleo que solidificou em repouso. (iv) l-Etil-5-(hidroximetil)-3,3-dimetil-2-pirroli-dinona (0,366 g, 2,1 mmol), clorito de sódio (0,387 g, 4,3 mmol), e uma solução tampão de fosfato de sódio mono- 155 ΡΕ2049478 básico aquoso 1 M (2,46 mL, 2,46 mmol) foram combinados em acetonitrilo (3 mL) e aquecidos a 40 °C. Alguns cristais de TEMPO (radical livre 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidiniloxi) e aproximadamente 1 gota de lixívia (solução de hipoclorito de sódio, cloro disponível > 12%) foram então adicionados à mistura e a agitação continuou a 40 °C durante 4 h. A mistura foi em seguida vertida sobre gelo contendo sulfito de sódio 1% m/m e a mistura resultante foi extraída com acetato de etilo (x3) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com cloreto de sódio aquoso saturado e depois secos sobre sulfato de magnésio e concentrados para darem l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolina (0,392 g) na forma dum sólido branco que foi utilizado sem purificação adicional. LC/MS [M+H]+= 186.
Exemplo 131 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-etil-4,4- -dimetil-5-oxoprolinamida (E131)
N- { [2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1- -etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a síntese de N-[(2--cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoproli-namida (E130), mas utilizando { [2-cloro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}amina em vez de [ (2-cloro-4-fluorofenil)--metil]amina. LC/MS [M+H]+ = 377/379; tempo de retenção = 2,63 minutos. 156 ΡΕ2049478
Exemplo 132 N- [(2-Cloro-3,4-difluorofenil)metil]-l-etil-4,4-dimetil-5- -oxoprolinamida (E132)
N- [(2-Cloro-3,4-difluorofenil]metil]-l-etil-4,4--dimetil-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a sintese de N- [ (2-cloro-4--fluorofenil)-metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida (E130) mas utilizando hidrocloreto de [(2-cloro-3,4--difluorofenil)metil]amina (preparada tal como descrito acima para o Exemplo 36) no lugar de [ (2-cloro-4-fluoro-fenil)-metil]amina. LC/MS [M+H]+ = 345/347; tempo de retenção = 2,43 minutos.
Exemplo 133 N- [(2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-4,4--bis(fenilmetil)prolinamida (Ε133)
N- [ (2-Cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-οχο--4,4-bis(fenilmetil)prolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a sintese de N-[(2--cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoproli- 157 ΡΕ2049478 namida (E130) mas utilizando l-etil-5-oxo-4,4-bis(fenil-metil)prolina no lugar de l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolina. l-Etil-5-oxo-4,4-bis(fenilmetil)prolina foi preparada de uma maneira análoga à descrita para l-etil-4,4-dimetil-5--oxoprolina no Exemplo 130 acima, mas usando l-etil-3,3--bis(fenilmetil)-5-{[(trifenilmetil)-oxi]-metil}-2-pirroli-dinona (isolada como um produto secundário no método B, Exemplo 37) em vez de l-etil-3,3-dimetil-5-{[(trifenilmetil )-oxi]-metil}-2-pirrolidinona. LC/MS [M+H]+ = 479/481; tempo de retenção = 3,32 minutos.
Exemplo 134 N-{[2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-etil-5-oxo-4--(fenilmetil)prolinamida (E134)
N- { [2-Cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1--etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a síntese de N-[{2--cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil) --prolinamida (E37), mas utilizando { [2-cloro-3-(trifluorometil) fenil ] metil} amina em vez da [ (2-cloro-4-fluorofenil)--metil]amina. O Método B, conforme descrito no Exemplo 37, foi usado para preparar a l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)--prolina. LC/MS [M+H]+ = 439/441; tempo de retenção = 2,99 minutos. 158 ΡΕ2049478
Exemplo 135 N-{[2-Ciano-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-
-oxoprolinamida (E135) 0=\. 1 M
N- { [2-Ciano-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-me-til-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a sintese de N- {[2-ciano-3-(trifluorometil )fenil]metil}-l-etil-5-oxoprolinamida (E105), mas utilizando l-metil-5-oxo-prolina em vez de l-etil-5-οχο-prolina. LC/MS [M+H]+ = Tempo de retenção 326, = 2,02 minutos. N- (2-Bifenililmetil)-l-etil-5-oxoprolinamida (E136)
Exemplo 136
N- (2-Bifenililmetil)-l-etil-5-oxoprolinamida foi preparada de uma maneira análoga à descrita acima para a sintese de N- [(2,3-dimetilfenil)metil]-l-etil-5-oxopro- linamida (E50), mas utilizando (2-bifenililmetil)amina em vez de 2,3-dimetilbenzilamina. LC/MS [M+H]+ = 323; tempo de retenção = 2,38 minutos. 159 ΡΕ2049478
Reator Micro-ondas
Onde indicado nos exemplos acima, o reator de micro-ondas utilizado foi um Biotage Initiator™. As reacções foram realizadas utilizando saída de potência normal a menos que especificado em contrário. HPLC automatizada dirigida à massa
Onde indicado nos exemplos acima, a purificação por HPLC automatizada dirigida à massa foi realizada usando o seguinte equipamento e condições:
Equipamento/«Hardware» Módulo de Gradiente Binário Waters 2525
Waters 515 Makeup Pump Módulo de Controle de Bomba Waters
Waters 2767 Injectar Recolher
Gestor de Fluidos de Coluna Waters
Detector com Arranjo de Díodos Waters 2996
Espetrómetro de Massa Waters ZQ
Coletor de fração Gilson 202
Coletor de resíduos Gilson ASPEC
Software
Waters MassLynx versão 4 SP2
Coluna
As colunas utilizadas são Waters Atlantis, cujas dimensões são 19 mm x 100 mm (pequena escala) e 160 ΡΕ2049478 30 mm x 100 mm (grande escala) . O tamanho de partícula da fase estacionária é 5 μΜ.
Solventes A: Solvente aquoso = Água + Ácido fórmico 0,1% B: Solvente orgânico = Acetonitrilo + Ácido fórmico 0,1%
Solvente de manipulação = Metanol : Água 80:20 Solvente de lavagem da agulha = metanol Métodos
Existem cinco métodos utilizados dependendo do tempo de retenção analítica do composto de interesse. Eles têm um tempo de execução de 13,5 minutos, que compreende um gradiente de 10 minutos seguido por uma lavagem da coluna de 3,5 minutos e passo de re-equilibração.
Grande/Pequena Escala 1,0-1,5 = B 5-30%
Grande/Pequena Escala 1,5-2,2 = B 15-55%
Grande/Pequena Escala 2,2-2,9 = B 30-85%
Grande/Pequena Escala 2,9-3,6 = B 50-99%
Grande/Pequena Escala 3,6-5,0 = B 80-99% (em 6 minutos, seguido por 7,5 minutos de lavagem e re-equilibração)
Velocidade de fluxo
Todos os métodos acima têm uma velocidade de fluxo de ou 20 mL/min (Pequena Escala) ou 40 mL/min (Grande Escala). HPLC quiral
Aparelhos e condições utilizadas para caraterizar a pureza enantiomérica das amostras selecionadas foram como se segue: 161 ΡΕ2049478 Método (A)
Instrumento: Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram Coluna: Chiralpak AD (250 mm x 4,6 mm; tamanho de partícula 10 μιη)
Fase móvel: Heptano:Etanol absoluto (70:30) v/v bomba mista
Velocidade de fluxo: 1 mL/min
Temperatura: Ambiente
Comprimento de onda em U.V.: 215 nm Método (B)
Instrumento: Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram Coluna: Chiralpak AD (250 mm x 4,6 mm; tamanho de partícula 10 μιη)
Fase móvel: Heptano:Etanol absoluto (50:50) v/v bomba mista
Velocidade de fluxo: 1 mL/min
Temperatura: Ambiente
Comprimento de onda em U.V.: 215 nm Método (C)
Instrumento: Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram Coluna: Chiralpak AD (250 mm x 4,6 mm; tamanho de partícula 10 μιη)
Fase móvel: Heptano:Etanol absoluto (80:20) v/v bomba mista
Velocidade de fluxo: 1 mL/min
Temperatura: Ambiente
Comprimento de onda em U.V.: 215 nm 162 ΡΕ2049478 Método (D)
Instrumento: Agilent 1100 Series Liquid Chromatogram Coluna: Chiralpak AS (250 mm x 4,6 mm; tamanho de partícula 10 μιη)
Fase móvel: Heptano:Etanol absoluto (80:20) v/v bomba mista
Velocidade de fluxo: 1 mL/min
Temperatura: Ambiente
Comprimento de onda em U.V.: 215 nm
Cromatografia Líquida/Espetrometria de Massa A análise dos Exemplos acima por Cromatografia Líquida/Espetrometria de Massa (LC/MS) foi realizada usando o seguinte equipamento e condições:
Equipamento/«Hardware»
Bomba de Gradiente Agilent 1100 Autoamostrador Agilent 1100 Detetor DAD Agilent 1100 Desgaseificador Agilent 1100 Forno Agilent 1100 Controlador Agilent 1100 Espetrómetro de Massa Waters ZQ Sedere Sedex 85
Software
Waters MassLynx versão 4.0 SP2 Coluna A coluna utilizada é uma Waters Atlantis, as dimensões 163 PE2049478 da qual são 4,6 mm x 50 mm. 0 tamanho de partícula da fase estacionária é 3 pm.
Solventes A: Solvente aquoso = Água + Ácido Fórmico 0,05% B: Solvente orgânico = Acetonitrilo + Ácido Fórmico 0,05% Método O método genérico usado tem um tempo de execução de 5 minutos.
Tempo/min % B 0 3 0,1 3 4 97 4,8 97 4, 9 3 5, 0 3 0 método acima tem uma velocidade de fluxo de 3 mL/min. 0 volume de injecção para o método genérico é 5 μΐ. A temperatura da coluna é 30 °C. 0 intervalo de detecção de UV é de 220 a 330 nm.
Dados farmacológicos
Os compostos da atividade biológica in invenção podem ser testados à vitro no recetor P2X7, em conformidade com os seguintes estudos: 164 ΡΕ2049478
Ensaio de Acumulação de Etidio
Os estudos foram realizados utilizando tampão de ensaio de NaCl com a seguinte composição (em mM) : NaCl 140 mM, HEPES 10, N-metil-D-glucamina 5, KC1 5,6, D-glucose 10, CaCl2 0,5 (pH 7,4). Células HEK293, expressando recetores P2X7 recombinantes humanos, foram cultivadas em placas de 96 cavidades pré-tratadas com poli-L-lisina durante 18-24 h. (A clonagem do recetor P2X7 humano é descrita em US 6 133 434) . As células foram lavadas duas vezes com 350 pL de tampão de ensaio antes da adição de 50 pL de composto de teste. As células foram em seguida incubadas à temperatura ambiente (19-21 °C) durante 30 min antes da adição de ATP e de etidio (concentração de ensaio final 100 pM) . A concentração de ATP foi escolhido para estar próximo da CEgo para o tipo de recetor e foi 1 mM para estudos sobre o recetor P2X7 humano. As incubações foram continuadas durante 8 ou 16 min e foram terminadas por adição de 25 pL de sacarose 1,3 M contendo 5 mM do antagonista do recetor P2X7 reativo preto 5 (Aldrich). A acumulação celular de etidio foi determinada por medição da fluorescência (comprimento de onda de excitação de 530 nm e comprimento de onda de emissão de 620 nm) a partir da parte de baixo da placa com um Canberra Packard Fluorocount (Pangbourne, RU) ou um Flexstation.il (Molecular Devices). Os valores pCIso de antagonista para as respostas de bloqueio de ATP foram determinados usando técnicas de ajuste de curva iterativo. 165 ΡΕ2049478
Ensaio de Ca de Leitor de Placa de Imagens Fluorescentes (FLIPR)
Foram realizados estudos utilizando tampão de ensaio de NaCl com a seguinte composição (em mM) para P2X7 humano: NaCl 137; HEPES 20; KC1 5,37; NaHC03 4,17; CaCl2 1; MgS04 0,5; e 1 g/L de D-glucose (pH 7,4). Células HEK293, expressando recetores P2X7 recombinantes humanos, foram cultivadas em placas de 384 cavidades pré-tratadas com poli-L-lisina durante 42-48 h. (A clonagem do recetor P2X7 humana é descrita em US 6 133 434) . As células foram lavadas três vezes com 80 pL de tampão de ensaio, carregadas durante 1 hora a 37 °C com Fluo4 2 μΜ (Teflabs), lavadas três vezes novamente, e deixadas com 30 pL de tampão antes da adição de 10 pL de composto de teste 4x concentrada. As células foram em seguida incubadas à temperatura ambiente durante 30 min antes da adição (em linha, por instrumento FLIPR384 ou FLIPR3 (Molecular Devices)) de benzoilbenzoil-ATP (BzATP) a concentração de ensaio final 60 μΜ. A concentração de BzATP foi escolhida para estar perto da CEso para o tipo de recetor. As incubações e leitura foram continuadas durante 90 s, e o aumento de cálcio intracelular foi determinado por medição da fluorescência (comprimento de onda de excitação de 488 nm e comprimento de onda de emissão de 516 nm) a partir da parte de baixo da placa, com câmara CCD de FLIPR. Os valores PCI5o de antagonista para as respostas 166 ΡΕ2049478 de bloqueio de BzATP foram determinados usando técnicas de ajuste de curva iterativo.
Os compostos dos Exemplos 1-136 foram testados no Ensaio de Ca FLIPR e/ou o Ensaio de Acumulação de Etidio para atividade antagonista do recetor P2X7 humano e verificou-se ter valores pCI5o > 4,7 no Ensaio de Ca de FLIPR e/ou valores pCIso > 5,5 no Ensaio de Acumulação de Etidio.
Dados In Vivo
Modelo de rato de dor neuropática
Colocando ligaduras frouxamente constritivas em torno do nervo ciático comum, uma mononeuropatia periférica pode ser produzida, o que proporciona por esse meio um modelo de rato de dor neuropática, Bennet et al., Pain, 33 (1988) 87-107. Ratos Hooded aleatórios machos adultos (180— 200 g) de Charles River, RU, foram anestesiados com isoflurano (3%) . O nervo ciático na perna esquerda foi exposto ao nivel médio da coxa e 4 ligaduras frouxas de intestino Chromic 4.0 amarradas ao redor do nervo, como descrito por Bennet et al., Pain, 33 (1988) 87-107. A ferida foi fechada e presa com agrafos. Ratos de controlo foram submetidos ao mesmo procedimento, mas as ligaduras frouxas não foram aplicados. A presença de alodinia mecânica (tátil) foi avaliada usando a aplicação manual de monofilamentos de cabelo de Von Frey. Os monofilamentos foram aplicados em ordem ascendente para a região plantar 167 ΡΕ2049478 da pata posterior (intervalo: 1,4 g-26 g). Cada cabelo foi aplicado durante aprox. 3-5 segundos até uma resposta retirada da pata ser observada. Após confirmação com reaplicação de cabelos inferiores e/ou superiores, o cabelo mais baixo para dar uma retirada da pata foi registada como a resposta limiar (g) . Quando a alodinia estável foi estabelecida os ratos foram doseados oralmente 26-33 dias após a cirurgia com o composto duas vezes por dia durante 8 dias com medições de alodinia registadas pelo menos três vezes durante o período de dosagem. N-[(2,4-Dicloro-fenil)metil]-l-metil-5-oxo-prolinamida (E10) e N- {[2-cloro--3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida (E51) reverteram significativamente a alodinia mecânica induzida por CCI em comparação com a resposta do veículo.
Modelo de rato da dor articular
Através da medição de hipersensibilidade após injecção intra-articular de FCA no joelho, a eficácia de um analgésico potencial na reversão da hipersensibilidade induzida por FCA pode ser avaliada num modelo de dor articular de dor inflamatória crónica. Ratos Hooded aleatórios adultos machos (150 g-180 g) de Charles River, RU, foram brevemente anestesiados com isoflurano (3%) . Os ratos foram em seguida injectados com 150 μ]1 de adjuvante completo de Freund (FCA) na articulação do joelho esquerdo (intra-articularmente, i.art). A capacidade de suportar o peso sobre cada um dos membros posteriores (capacidade de suporte de peso, g) foi medido antes e depois da cirurgia 168 ΡΕ2049478 utilizando um Dual Channel Weight Averager (Linton Instruments). Quando uma diferença estável na capacidade de suporte de peso foi estabelecida entre as patas injectada e contralateral, os ratos foram tipicamente doseados oralmente (normalmente 13-17 dias pós-cirurgia) com composto duas vezes por dia durante 5 dias com as medições da capacidade de suporte de peso registadas diariamente. N-[(2,4-Diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxo-prolinamida (E10) e N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida (E51) reverteram significativamente a diferença induzida por FCA (i.art) na capacidade de suportar peso em comparação com a resposta do veiculo e produziram DE5o' s < 20 mg/kg obtidas a partir de cálculos da Área Sob a Curva (AUC).
Modelo de rato de dor inflamatória aguda
Um modelo animal útil para a dor inflamatória aguda é o modelo de inflamação induzida por adjuvante completo de Freund (FCA). Um modelo semelhante utilizando carragenina em vez de FCA é descrito por Clayton et al., Br. J. Pharmacol.), 120 (1997) 219P. Ratos Hooded aleatórios adultos machos (180 g-220 g) de Charles River, RU, receberam uma injecção intraplantar (i.pl) de 100 μ]Ι de FCA na superfície plantar da pata posterior esquerda. A capacidade de suportar o peso de cada membro posterior (capacidade de suporte de peso, g) foi medida antes e 24 horas após a injecção de FCA usando um Dual Channel Weight Averager (Linton Instruments). Depois da leitura pós-FCA, 169 ΡΕ2049478 os ratos foram tipicamente doseados oralmente com o composto, após o que as medições da capacidade de suporte de peso foram registadas. N-[(2,4-Diclorofenil)metil]-1--metil-5-oxo-prolinamida (E10) e N-{[2-cloro-3-(trifluoro-metil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida (E51) reverteram significativamente a diferença na capacidade de suporte de peso induzida por FCA (i.pl) em comparação com a resposta do veiculo e produziram DE50's < 20 mg/kg obtidas a partir das curvas de resposta à dose.
Lisboa, 9 de Julho de 2012

Claims (14)

  1. ΡΕ2049478 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
    em que: R1 representa metilo ou etilo, ou cicloalquilo C3-C5 não substituído, piridinilmetilo, fenilo ou benzilo; R2 e R3 representam, independentemente, hidrogénio, halogéneo, alquilo C1-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-Ce) metilo; e qualquer dos referidos alquilo Ci-Cs, arilmetilo, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; R4, R5 e R6 representam, independentemente, hidrogénio, flúor ou metilo; e R7, R8, R9, R10 e R11 representam, independentemente, hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo, e qualquer dos referidos alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8 ou fenilo é facultativamente substituído 2 PE2049478 com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; ou R10 e R11 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel de benzeno que é facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; com a condição de que quando R7 e R11 são ambos selecionados a partir de hidrogénio ou flúor, pelo menos um dos R8, R9 e R10 é um átomo de halogéneo, ou R8, R9 e R10 são selecionados de entre o grupo constituído por hidrogénio e CF3 e um, mas não mais do que um, dos R8, R9 e R10 é CF3.
  2. 2. Um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
    em que: R1 representa metilo ou etilo, ou cicloalquilo C3-C5 não substituído, fenilo ou benzilo; R2 e R3 representam, independentemente, hidrogénio, halogéneo, alquilo Ci-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6) metilo; e qualquer dos referidos alquilo Ci-C6, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo pode ser facul- 3 ΡΕ2049478 tativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; R1, R2 e R3 representam, independentemente, hidrogénio ou flúor; e R4, R8, R9, R10 e R11 representam, independentemente, hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2_C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo, e qualquer dos referidos alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo pode ser facultativamente substituído com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; com a condição de que quando R4 e R11 representam independentemente hidrogénio ou flúor, pelo menos um dos R8, R9 e R10 é um átomo de halogéneo.
  3. 3. Um composto de fórmula (I), conforme definido na reivindicação 1, ou um seu sal farmaceutica-mente aceitável, em que: R2 e R3 representam ambos hidrogénio; R1, R2 e R3 representam, independentemente, hidrogénio ou metilo; e R4, R8, R9, R10 e R11 representam, independentemente, hidrogénio, cloro, flúor, bromo, metilo ou trifluorometilo. 1 Um composto de fórmula (I), ou um seu sal, 2 conforme definido na reivindicação 1, o qual é um composto, 3 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, conforme 4 descrito abaixo:
  4. 4 ΡΕ2049478 Nome químico Estrutura N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l- (fenilmetil)-prolinamida Cr ° " N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida y o ci N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-ciclopentil-5-oxoprolinamida «“ÇouÇT ó ° Cl N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-ciclobutil-5-oxoprolinamida <p( - N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-5-oxo-l-fenil-prolinamida °Όγίθί)Χ 6' ' N- [(2,4-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida n==/ "l η Γ ΓΓ 1 o ci N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida ^ O Cl l-etil-5-οχο-Ν- [(2,3,4-trifluorofenil)-metil]-prolinamida Jnr^r* N- [(2-bromofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida A O Br N-[(2-cloro-6-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida °ΚΡγΟ^) A O Cl N- [(3-clorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida O £ o N-[(4-clorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida _A_2_ N-[(2,4-diclorofenil)metil]-l-etil-5-οχο-prolinamida \ H [ |T °^ΗΧγΗ-Αγ A o Cl ΡΕ2049478 5 (continuação) Nome químico Estrutura l-etil-5-oxo-W-{[2-(trifluorometil)fenil]metil}-prolinamida A 0 CF, N- [(4-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida N- [(2-cloro-3,6-difluorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida °ssQyOÇ^F / o Cl N-[(2-clorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida A o Cl N-[(3, 4-diclorofenil)metil]-l-etil-5-οχο-prolinamida oA. JL, _A_0_ l-etil-W-{[4-fluoro-2-(trifluorometil)-fenil]metil}-5-oxoprolinamida IZ & o N- [(2,4-dimetilfenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida N- [(2-cloro-6-metilfenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida A 0 ' N-[(2-cloro-6-fluoro-3-metilfenil)-metil]-1-etil-5-oxopro1inamida o A zx / o N-[(6-cloro-2-fluoro-3-metilfenil)-metil]-1-etil-5-oxopro1inamida N- [ (2,3-diclorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida Ao α N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida 0=\ ll ΰ A ° 1 N-[(2,6-diclorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida A ο α l-etil-W-{[4-fluoro-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-5-oxoprolinamida °A. η X. _A_J_ ΡΕ2049478 6 (continuação Nome químico Estrutura N- { [4-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-etil-5-oxo-prolinamida n—/"""1 H \ || _A_o_ N- [(4-bromo-2-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida n=/\ H 1 í A o F l-etil-W- [(2-metilfenil)-metil]-5-oxoprolinamida FIM A o 1 N- { [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-etil-5-oxopro1inamida 0=\ Jb /N lT A o Cl N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida xz & o p N-[(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxo-4-(fenilmetil)-prolinamida c\ l-ciclopropil-iV- [(2,4-diclorofenil)metil]-5- oxoprolinamida YY _Q_ N- {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-ciclopropil-5-oxoprolinamida À ° N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-ciclopropil-5- oxoprolinamida À ° N- [(2,4-diclorofenil)metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida o ZI )=-¾ o N- [(2,3-dimetilfenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida N- {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida 0:^ 3·^ CF3 ^ O Cl N- [ (2,3-dicloro-4-fluorofenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 33 JÍ. ^ n Cl ΡΕ2049478 7 (continuação Nome químico Estrutura N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida _!_0_Cl_ N- [(4-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 1 o N-{[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida | 0 F F N- [(2,3-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 1 0 N- [(2,6-diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida CIY1 1 ο N-[(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 1 ο N-{[2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida N- [(3-cloro-2-fluorofenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida 1 ο N-[(2,4-dicloro-6-metilfenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida l-metil-W-{[2-metil-3-(trifluorometil)-fenil]metil}-5-oxoprolinamida çMéf· ο Ψ N- [(2-bromo-4-fluorofenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida ç6^- _Ω_ N-{[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida _Ω_ N-[(2,3-dicloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida °ΛΛ^ΝνΧλ Ν ^ CI __Ο_CI_ ΡΕ2049478 (continuação Nome químico Estrutura l-etil-5-oxo-W-[(2,4,6-trimetilfenil)-metil]-prolinamida __ N- [(2,3-difluorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida N-[(3,5-diclorofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida _J_°_ N-[(3-cloro-2-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-oxoprolinamida J ° N-[(5-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-metil-5-oxoprolinamida N- {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l- ciclopentil-5-oxoprolinamida 0 ci A N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-1-(fenilmetil)-prolinamida fr ° l-etil-W- {[2-fluoro-3-(trifluorometil) -fenil]metil}-5-oxoprolinamida Jl C(% N- [(2-cianofenil)metil]-l-etil-5-oxoprolinamida -Oy^O U O || _tJ_ N- { [2-ciano-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-etil-5-oxopro1inamida ,Ν^γ '^yvcF3 ^ 0 II _N_ l-etil-W-(1-naftalenilmetil)-5-oxoprolinamida o z l-etil-5-oxo-W-{[4-(trifluorometil)-fenil]metil}prolinamida __Q_ l-etil-5-oxo-W- {[3-(trifluorometil)-fenil]metil}prolinamida °=^pYN'-^^CF3 ΡΕ2049478 9 (continuação) Nome químico Estrutura l-metil-W-(1-naftalenilmetil)-5-oxoprolinamida N-{[2-cloro-4-fluoro-3-(trifluoro-metil)fenil]metil}-1-metil-5-oxoprolinamida o=\ 3. JLJl cf3 1 O Cl N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l-ciclobutil-5-oxoprolinamida ó” Cl N- [(3-cloro-2-metilfenil)-metil]-l-ciclobutil-5-oxoprolinamida 1-ciclobutil-W- [(2,4-diclorofenil)metil]-5-oxoprolinamida Ó 1 “ N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-1-ciclobutil-5-oxopro1inamida ó ° α l-ciclobutil-N- [(2,3-diclorofenil)metil]-5-oxoprolinamida JL. ci 6 ° a l-ciclobutil-W-{[2-metil-3-(trifluorometil) fenil]metil}-5-oxoprolinamida ό 0 N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-1-(2-piridinilmetil)prolinamida c3 0 N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-5-oxo-1-(3-piridinilmetil)prolinamida .JUybS σ' · N-[(2, 4-diclorofenil)metil]-5-oxo-l-(3-piridinilmetil)prolinamida ^via" cf · 10 ΡΕ2049478 (continuação) Nome químico Estrutura l-ciclopropil-N- [(2,4-diclorofenil)metil]-2-metil-5-oxopro1inamida A ° N- [(2,4-diclorofenil)metil]-l-etil-2-metil-5-oxoprolinamida O ( xz £ o l-ciclobutil-W- [(2,4-diclorofenil)metil]-2-metil-5-oxopro1inamida ó1 α N- [(2,4-diclorofenil)metil]-1,2-dimetil-5-oxoprolinamida ^ O Cl N- [(2,4-diclorofenil)metil]-1,3,3-trimetil-5-oxoprolinamida ^ n ci N-{[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-l, 3,3-trimetil-5-oxoprolinamida o=' ^ O Cl N- { [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1,3-dimetil-5-oxoprolinamida 0=\ JL 1 n cl f N- [ (2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida N- {[2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida J 0 Cl F I N- [(2-cloro-3,4-difluorofenil)metil]-l-etil-4,4-dimetil-5-oxoprolinamida r"Ph N- [(2-cloro-4-fluorofenil)-metil]-l-etil-5-οχο-4,4-bis(fenilmetil)prolinamida Ph / N- { [2-cloro-3-(trifluorometil)fenil]metil}-1-etil-5-oxo-4-prolinamida(fenilmetil) J O Cl F 11 PE2049478
  5. 5. Um composto de fórmula (I) ou um seu sal, conforme definido na reivindicação 1, que é N-{[2-cloro-3-- (trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxoprolinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  6. 6. Um composto de fórmula (I) ou um seu sal, conforme definido na reivindicação 1, que é N-{[2-cloro-3--(trifluorometil)fenil]metil}-l-metil-5-oxo-L-prolinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  7. 7. Um composto de fórmula (I) ou um seu sal, conforme definido na reivindicação 1, o qual é iV-[(2,4- -diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxoprolinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  8. 8. Um composto de fórmula (I) ou um seu sal, conforme definido na reivindicação 1, o qual é IV-[(2,4- -diclorofenil)metil]-l-metil-5-oxo-L-prolinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 12 ΡΕ2049478
  9. 9. Uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula (I) ou um seu sal, conforme definido em qualquer reivindicação precedente, e um agente de suporte ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
  10. 10. Um composto, ou seu sal f armaceuticamente aceitável, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, para utilização em terapia.
  11. 11. Um composto, ou um seu sal, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, para utilização no tratamento ou prevenção da dor, de inflamação ou duma doença neurodegenerativa.
  12. 12. Um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
    R7
    N H 13 ΡΕ2049478 halogéneo, alquilo Ci-C8, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6) metilo; e qualquer dos referidos alquilo Ci-C8, arilmetilo, alcenilo C2-C6, alci-nilo C2-C6 ou (cicloalquil C3-C6)metilo é facultativamente substituido com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; R4, R5 e R6 representam, independentemente, hidrogénio, flúor ou metilo; e R7, R8, R9, R10 e R11 representam, independentemente, hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo, e qualquer dos referidos alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 ou fenilo é facultativamente substituido com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; ou R10 e R11 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel de benzeno que é facultativamente substituido com 1, 2 ou 3 átomos de halogéneo; com a condição de que quando R7 e R11 são ambos selecionados entre hidrogénio ou flúor, pelo menos um dos R8, R9 e R10 é um átomo de halogéneo, ou R8, R9 e R10 são selecionados de entre o grupo constituído por hidrogénio e CF3 e um, mas não mais do que um, de R8, R9 e R10 é CF3, para utilização no tratamento ou prevenção da dor, de inflamação ou duma doença neurodegenerativa.
  13. 13. Um composto de fórmula (I), ou um seu sal, para utilização no tratamento ou prevenção da dor, de inflamação ou duma doença neurodegenerativa, conforme definido na reivindicação 12, em que: 14 ΡΕ2049478 R1 representa alquilo C1-C4 não substituído, alcenilo C1-C4, cicloalquilo C3-C5, piridinilmetilo, fenilo ou benzilo; 2 3 R e R representam ambos hidrogénio; R4, R5 e R6 representam, independentemente, hidrogénio ou metilo; e R7, R8, R9, R10 e R11 representam, independentemente, hidrogénio, cloro, flúor, bromo, metilo ou trifluorometilo.
  14. 14. Um composto de fórmula (I), ou um seu sal, para utilização no tratamento ou prevenção da dor, inflamação ou uma doença neurodegenerativa, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 11 a 13, em que o uso é para o tratamento ou prevenção de dor inflamatória, dor neuropática ou dor visceral, ou para o tratamento ou prevenção da doença de Alzheimer. Lisboa, 9 de Julho de 2012 1 ΡΕ2049478 REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição • WO 9900382 Â1, G. C, B. rts-Triírssrs « US 6133434 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * Coilo «t aí. N&msphmmsetog?. 1897, *sf. 3®. 1277-1283 • Ferrari et«f. J. fumomí., 2806. eoí, 1?S, 3877-3SS3 * Hásie ei sf. JtoamtiefòimM&mtès&y, 2000, vsh 75, 985>9?2 • ÀffltersoR, ei aà Biuq. i&w, Rss,, 2000, vot, 50, 92 » Da8*Antortò» st at S®™. Leíl, 2002, ·νοϋ» 827, 87-00 * Chesseit 8». sí aL Psm, 2SQ5, vot 114, 3S8-396 • Heno» et ai. J. Phamscol. Βφ. Ther„ 20®, y&l. 313, 1378-1385- * Skaper, S.D·, et aí. Sásf 2096, wi 54, 234-242 • ParvailiMtHii, L. aí aL J. Bitó. Ctisrn,, 2803. yd. 27»(t5J> 13389-13317 • H.Tya; frl.Whíits&er, 2304, vsL 2, SI 3-615 * T,W,. Smen»; Ρ.β,Μ, Wtsís, Prtàx&m Gfoupa io Oígante Syattsesfe. JJfôfêsy and Scstís, 1989 * 76-8 CheGíistry of Fum&cnai Garapa, (^bna», HA,;W<c4í*,4.F, The Chejnssífyot AcsáQshysSvss, Jchn Vfôíey and Sor®, 1379,442-8 * T6« CMÉy oi Fiiocteal Groups, Bscfcwíth, A.t.J, StsppS.B; The Gheaissi^· eíAfréáes. Jo&nW&By and Sons. 1970, voi. S, 73 # * G» Verardo j P. Gsatd; E. Pd; AM, Gtusnsíwrw., CmJ.OMn., %m, vol. 88,778-788 * 1L Godet. Qr^fc LeSars, 2Q>34, voi, 6 (19.?, 3281-3284 * T,, itofe. TsífsftePfDfs, 2803, vst 58, 3E27-353S * f. SSffiafidan ; SS:,E. SmPíft. SyB&etfc Oossis^jíce-íksíís, 1895, ¥«l 29 (t), 1827-1938 * S. Aetó. TeUsímtm, 2*334, voí. 69, 7S53-70S9 * A. SassoS. Em. 8. Grg. Cfsni, 29SS, 2518-2:525 * 4.. Wefsfes, Te#-s,9fi:9>s.>r As.7»5wse9>'., 2803, eot. 1:4, 1123-112S * Bennei et &í> Fsér, 1888, vcsL 33, 37-107 CiayteRetat.Sr. J.Píi&rmm^., 1987,120,213F
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