PT1325749E - Agente melhorador do metabolismo ósseo - Google Patents

Description

ΕΡ 1 325 749 /PT DESCRIÇÃO "Agente melhorador do metabolismo ósseo"

Campo do invento 0 presente invento refere-se à utilização de leite de soja fermentado no fabrico de um agente melhorador do metabolismo ósseo, que é eficaz no tratamento e prevenção de doenças associadas a uma diminuição no metabolismo ósseo tal como a osteoporose.

Descrição da arte anterior

As mulheres são altamente susceptíveis a doenças associadas a um desequilíbrio no metabolismo ósseo tal como a osteoporose, em particular após a menopausa quando as hormonas femininas diminuem. As pessoas afectadas pela osteoporose são muito susceptíveis a fracturas ósseas devido à baixa densidade dos seus ossos. As pessoas mais velhas, em particular, podem tornar-se acamadas devido a essas fracturas ósseas. A prevenção desses problemas tem sido fortemente exigida.

Uma vez que para as pessoas que têm uma tendência para uma diminuição na densidade óssea é desejável o aumento da densidade óssea pelo melhoramento do metabolismo ósseo, existem algumas tecnologias referidas com um objectivo de melhorar o metabolismo ósseo. Por exemplo, foram referidos nos Pedidos de Patentes Japonesas disponíveis ao público Nos 1994-46797 e 1995-75525, e outras semelhantes, o efeito de promoção da absorção de cálcio do leite de soja e a substância de promoção de absorção de cálcio em leite de soja. No entanto, ainda não foi conseguido um efeito satisfatório.

Foi também referido que a isoflavona e uma composição que consiste em isoflavona e zinco ou um péptido aumenta o metabolismo ósseo (Pedidos de Patentes Japonesas disponíveis ao público Nos 1998-114653 e 2000-139411). No entanto, a obtenção desses componentes requer um processo complicado. Embora a isoflavona ou a composição possa ser utilizada como 2

ΕΡ 1 325 749 /PT fármaco, é difícil de dizer que a isoflavona ou a composição é adequada para utilizar em aplicações para tomar continuamente durante a vida normal para melhorar o metabolismo ósseo.

Actualmente, não é proporcionado um método para melhorar o metabolismo ósseo que satisfaça todas as características de eficácia, economia, e facilidade de ingestão. Um objectivo do presente invento é proporcionar um desses métodos.

Divulgação do invento

Como resultado de estudos extensivos para atingir o objectivo anterior, os actuais inventores verificaram que se o leite de soja, o qual já se sabia ter um efeito melhorador na absorção do cálcio, for fermentado, o efeito melhorador do metabolismo ósseo aumenta rapidamente. Esta verificação conduziu à conclusão do presente invento.

Especificamente, o presente invento proporciona a utilização de leite de soja fermentado como componente activo que se obtém por fermentação do leite de soja com um ou mais microorganismos seleccionados do grupo que consiste em Lactobacillus casei, Lactobacillus Mali, e Bifidobacterium breve.

Breve descrição dos desenhos A Figura 1 mostra os resultados do doseamento de desoxipiridinolina libertada na urina. A Figura 2 mostra os resultados da determinação da densidade óssea da tíbia. A Figura 3 mostra os resultados da determinação da densidade óssea do fémur. A Figura 4 mostra os resultados do doseamento do teor de minerais na tíbia. A Figura 5 mostra os resultados do doseamento do teor de minerais no fémur. 3

ΕΡ 1 325 749 /PT A Figura 6 mostra os resultados da determinação da densidade óssea da tibia. A Figura 7 mostra os resultados do doseamento do teor de cálcio no fémur.

Descrição detalhada do invento e concretização preferida 0 agente melhorador do metabolismo ósseo utilizado no presente invento controla a absorção óssea, e como consequência, aumenta a densidade óssea e o teor de minerais nos ossos. 0 leite de soja fermentado utilizado como componente activo no agente melhorador do metabolismo ósseo é preparado inoculando um ou mais microorganismos, seleccionados do grupo que consiste em Lactobacillus casei, Lactobacillus Mali, e Bifidobacterium breve, no leite de soja, e provocando a fermentação do leite de soja. 0 leite de soja utilizado como matéria bruta para o leite de soja fermentado pode ser produzido por qualquer método desde que se faça a suspensão ou a dissolução do componente soja, num liquido. Podem ser fornecidos, como exemplos, a soja inteira ou a soja sem gordura mergulhada em água ou hidratada, moída em pasta, e filtrada para remover os componentes insolúveis, e a proteína da soja dissolvida ou em suspensão em água.

Podem ser fornecidas, como exemplos de bactérias do ácido láctico e bifidobactérias utilizadas na produção do leite de soja fermentado utilizado como componente activo no agente melhorador do metabolismo ósseo do presente invento, sem quaisquer limitações, as bactérias Lactobacillus tais como L. acidophilus, L. gasseri, L. mali, L. plantarum, L. pentosus, L. buchneri, L. casei, L. johnsonni, L. gallinarum, L. amylovorus, L. brevis, L. rahmnosus, L. kefir, L. paracasei, L. crispatus, L. bulgaricus, L. fermentum, L. reuteri, L. alimentarius, e L. maltaromicus; bactérias Streptoccus tal como S. termophilus; bactérias Lactococcus tais como L. lactis e L. cremoris; bactérias Leuconostoc tais como L. cremoris; bactérias Bifidobacterium tais como B. bifidum, B. longum, B. pseudolongum, B. globosum, B. adolescentis, B. infantis, B. breve, B. catenulatum, B. pseudocatenulatum, B. lactis, B. animalis, B. angulatum, e B. gallicum; e similares. 4

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De entre essas bactérias, são preferidas as L. casei, L. mali, B. breve, L. plantarum, L. rahmnosus, L. paracasei, L. crispatus, L. lactis, B. adolescentis, e B. pseudo-catenulatum, singularmente ou em combinação de duas ou mais, devido ao maior efeito melhorador do metabolismo ósseo e ao bom paladar do leite de soja fermentado. Em particular, são preferidas as L. casei, L. mali e B. breve. Podem ser fornecidas, como exemplos específicos dessas bactérias, a estirpe YIT9029 (FERM BP-1366), a estirpe YIT0078 (ATCC393), e a estirpe YIT0123 (ATCC27216) de L. casei; a estirpe YIT0243 (ATCC27304) de L. mali; a estirpe YIT4065 (FERM BP-6223), a estirpe YIT4014 (ATCC15700) e a estirpe YIT4063 (FERM BP-2823) da B. breve; a estirpe YIT0103 da L. plantarum (ATCC10241); a estirpe YIT105 da L. rhamnosus (ATCC7469); a estirpe YIT0209 da L. paracasei (ATCC25302); a estirpe YIT0212 da L. crispatus (ATCC33820); a estirpe YIT2027 de L. lactis (FERM P-16074); a estirpe YIT4011 da B. adolescentis (ATCC15703); a estirpe YIT4072 da B. pseudocatenulatum (ATCC27919), e outras similares.

Adicionalmente, com as bactérias do ácido láctico e as bifidobactérias anteriores podem ser combinados outros microorganismos para produzir o leite de soja fermentado, por exemplo, bactérias Bacillus, tal como a B. subtilis; bactérias Acetobacter tais como a A. aceti e a A. xylinum, e leveduras pertencentes aos grupos Saccharomyces, Torulaspora, e Candida tais como S. cerevisiae, S. unisporus, K. marxianus, T. delbrueckii, e C. kefyr. 0 leite de soja fermentado utilizado no presente invento pode ser produzido utilizando métodos convencionais. Por exemplo, após a pasteurização, o leite de soja é inoculado com as bactérias do ácido láctico e bifidobactérias anteriores e cultivado, depois homogeneizado para produzir leite de soja fermentado. As condições de cultura para a fermentação do leite de soja podem ser correctamente seleccionadas. Por exemplo, se as bactérias forem anaeróbicas, o oxigénio no meio de cultura pode ser substituído por um gás inerte tal como o dióxido de carbono gasoso ou azoto gasoso, ou o oxigénio no meio de cultura pode ser removido usando um agente de reacção de oxigénio para proporcionar condições anaeróbicas antes da cultura das 5

ΕΡ 1 325 749 /PT bactérias. Se as bactérias forem aeróbicas, podem ser seleccionadas condições aeróbicas para a cultura.

Em conformidade com o tipo de microorganismo utilizado, podem ser correctamente estabelecidas outras condições. Por exemplo, quando for usado uma bactéria do ácido láctico ou bifidobactéria a cultura pode ser efectuada a 25°C-37°C durante cerca de 15-48 horas, e do ponto de vista de assegurar o efeito melhorador do metabolismo ósseo do leite de soja fermentado é preferível utilizar leite de soja a uma concentração de 1-20% numa base de sólido.

Ao leite de soja utilizado como matéria bruta, podem ser adicionados vários sacáridos, nutrientes e componentes, por exemplo, hidratos de carbono tais como a glicose, sacarose, xarope de frutose - glicose, e xarope de glicose - frutose, nutrientes tais como extracto de carne, extracto de levedura, péptido, e minerais, componentes de plantas tais como grãos, esporos de sementes em grão, vegetais, frutos, nozes, e ervas, componentes animais, e componentes de incubação de microorganismos, numa quantidade de 0,01-99% em massa. O agente melhorador do metabolismo ósseo é preparado proporcionando o leite de soja fermentado obtido anteriormente numa forma adequada tal como um fármaco ou alimento e num estado físico adequado tal como líquido, pasta ou sólido. O leite de soja fermentado pode ser utilizado tal como estiver, concentrado até um determinado grau, ou seco por congelação para formar um pulverizado sólido. Para atingir o efeito pretendido do agente melhorador do metabolismo ósseo, o leite de soja fermentado contendo um teor de componente sólido de soja de 6% é ingerido numa quantidade diária de 10-1000 g por pessoa, e de preferência 100-300 g diários por pessoa.

Quando o agente melhorador do metabolismo ósseo for usado na forma de um alimento, podem ser adicionados e combinados vários aditivos para melhorar o paladar e para proporcionar uma forma desejada, por exemplo. Também, pode ser adicionado um agente aromatizante. 6

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Podem ser fornecidos, como aditivos para adicionar e combinar com o agente melhorador do metabolismo ósseo, vários hidratos de carbono, agentes emulsivos, espessadores, edulcorantes, aditivos acres, sumos de fruta, e outros do género. Podem ser fornecidos, como exemplos específicos desses aditivos, os sacáridos tais como a glicose, sacarose, frutose, tagatose, trealose, trealulose, lactulose, xilo-oligossacárido, isomaltoligossacárido, lactose, galacto-oligossacárido, fruto-oligossacárido, rafinose, estaquiose, glicosamina, inulina, mel, xarope de ácer, e Amazake, álcoois de açúcar tais como o sorbitol, xilitol, eritriol, lactitol, e palatinito, edulcorantes de elevada intensidade tais como sucralose e aspartame, edulcorantes naturais tais como alcaçuz, Stevia, e glicósido de ácido de glicirrizina, agentes emulsivos tais como éster de ácidos gordos e sacarose, éster de ácidos gordos e açúcar glicerol, e lecitina, e espessantes (estabilizantes) tais como ágar, gelatina, carragenano, goma de guar, goma xantana, pectina, goma de alfarroba. Adicionalmente, para obter um delicioso sabor podem ser adicionados minerais tais como cálcio, magnésio, zinco, ferro, e dolomite, ácidos tais como ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido láctico, ácido acético, e aminoácido, materiais de enchimento tais como colagénio, sulfato de condroitina, hidroxiprolina, flavona, flavonol, isoflavona, antociano, catecina, e proantocianidina, vitaminas como a vitamina A, grupo das vitaminas B, vitamina C, vitamina E, grupo das vitaminas D, grupo das vitaminas K, betacaroteno, ácido retinóico, e ácido fólico, extractos de ervas tais como Cohosh preto, soja, sementes de nogueira-americana, sementes de romã, erva de São João, martírio, valeriana, Pueraria mirífica, rosmaninho, hortelã-pimenta, erva-cidereira, e malmequer, grãos e espigas de sementes em grão tais como arroz, trigo, cevada, centeio, aveia, e milho, vegetais tais como batata, batata doce, batata doce roxa, inhame, abóbora, beringela, tomate, melão amargo, pimenta verde, sementes de sésamo, couve, brócolos, couve-flor, alface, feijão vermelho, fava, soja, soja verde, ervilha, gengibre, bardana, aipo, rabanete japonês, rábano japonês, abacate, cenoura, espinafre, cebola, alho, lírio, chalota, Perila (Perilla frutescens), alho-porro, pastinaga, feto, rebentos de bambu, cogumelos Shiitake, e cogumelos, frutos tais como limão, maçã, uva, morango, laranja, 7

ΕΡ 1 325 749 /PT diospiro, goiaba, banana, mirtilho, goiaba-ananás, tomate-da-serra, acerola, lima, limão hirami, melão, pêssego, manga, citrinos Yuzu, papaia, ananás, pêra, ameixa, toranja, marmelo chinês, damasco, melancia, romã, kiwi, e tangerina, frutos secos tais como amendoim, amêndoa, coco, acaju, macadamiza, cacau, castanha, gincgo, e noz, produtos lacticinios tais como leite, leite desnatado, soro de leite coalhado, natas, leite fermentado, e iogurte.

Adicionalmente, como agentes aromatizantes que podem ser adicionados ao agente melhorador do metabolismo ósseo podem ser dados iogurte, bagas, laranja, marmelo chinês, Perila (Perilla frutescens), citrinos, maçã, menta, uva, pêra, leite creme, pêssego, melão, banana, tropical, ervas, chá, café e similares. Esses agentes aromatizantes podem ser utilizados singularmente ou numa combinação de dois ou mais.

Como recipientes para o agente melhorador do metabolismo ósseo obtido deste modo, podem ser dados recipientes herméticos possuindo permeabilidade ao oxigénio baixa ou elevada. Para além disso, o interior desses recipientes herméticos pode ser substituído por um gás inerte.

Exemplos 0 presente invento será descrito com maior detalhe através de exemplos, que não devem ser entendidos como limitadores do presente invento.

Exemplo 1

Produção de alimentos de leite de soja e alimentos de leite de soja fermentado (1) (1) Produção de pulverizado de leite de soja e pulverizado de leite de soja fermentado

Esterilizaram-se 20 litros de leite de soja base (fabricado por Shikoku Kakoki Co., Lda, contendo 0,8% de xarope de glicose-frutose) num esterilizador de placas a 135°C durante 3,5 segundos. Conservaram-se 10 litros do leite de soja esterilizado a 4°C. Inocularam-se os restantes 10 litros com uma solução de bactérias contendo 0,01% de L. 8

ΕΡ 1 325 749 /PT casei YIT 9029 e 1% de L. mali YIT 0234, depois fez-se a cultura a 30°C durante 24 horas para obter leite de soja fermentado. Submeteram-se respectivamente o leite de soja conservado e o leite de soja fermentado a secagem por congelação e esmagaram-se para obter pulverizados de leite de soja e leite de soja fermentado. (2) Preparação dos alimentos

Conduziu-se o exame que se segue usando alimentos preparados a partir dos componentes do Quadro 1. Como alimento de controlo, utilizou-se uma composição AIN-93G parcialmente alterada para ser um alimento pobre em cálcio com um teor de cálcio de 0,1%. Misturaram-se 4% de cada um dos pulverizados de leite de soja e leite de soja fermentado para formar um alimento de leite de soja e um alimento de leite de soja fermentado. Analisaram-se os teores de minerais dos pulverizados de leite de soja e de leite de soja fermentado e produziram-se três tipos de alimentos possuindo uma quantidade igual de cálcio, fósforo, e magnésio.

Quadro 1

Alimento de controlo Alimento de leite de soja Alimento de leite de soja fermentado Pulverizado de leite de soja - 4,00 - Pulverizado de leite de soja fermentado - - 4,00 Caseína 20,00 18,36 18,36 Óleo de soja 7,0 5, 84 5,80 Pulverizado de celulose 5,00 5, 00 5,00 Amido de milho 39,75 39, 75 39, 75 Amido de milho dextrinizado 13,20 13,20 13,20 Sucrose 9, 05 7, 93 7,97 Tartarato de colina 0,25 0,25 0,25 L-cisteina 0,30 0,30 0,30 Mistura de vitaminas 1, 00 1,00 1,00 Mistura de minerais sem Ca, P e Mg 3,50 3,50 3,50 CaC03 0,23 0,21 0,21 KH2P04 0,64 0,60 0,60 MgO 0, 08 0,06 0,06

Valores indicam % em peso

Exemplo 2

Teste de susceptibilidade de melhoramento do metabolismo ósseo (1)

Adquiriram-se 36 ratinhos do tipo SD com oito semanas de idade (fêmeas), efectuou-se uma ovariectomia nos dois ovários 9

ΕΡ 1 325 749 /PT de 27 ratinhos, e efectuou-se uma cirurgia placebo nos restantes 9 ratinhos. Após a administração do alimento de controlo, durante um período de recuperação de duas semanas, dividiram-se os ratinhos ovariectomizados em três grupos (n=9): o grupo de alimento de controlo ovariectomizado (aqui futuramente referido como "grupo de controlo"); o grupo de alimento de leite de soja ovariectomizado (aqui futuramente referido como "grupo do leite de soja") ; e o grupo do leite de soja fermentado ovariectomizado (aqui futuramente referido como "grupo do leite de soja fermentado") . Os ratinhos que sofreram cirurgia placebo são designados como o grupo de cirurgia placebo.

Durante um período de oito semanas, forneceu-se alimento de controlo aos grupos de cirurgia placebo e de alimento de controlo, forneceu-se alimento de leite de soja ao grupo do leite de soja, e forneceu-se alimento de leite de soja fermentado ao grupo do leite de soja fermentado. Alimentaram-se os animais por alimentação a pares para que a ingestão de alimento de cada grupo fosse quase igual e permitiu-se que ingerissem livremente água submetida a permuta iónica. Na oitava semana, recolheu-se a urina durante 24 horas utilizando uma gaiola metabólica. Após a medição do volume, guardou-se a urina a -20°C até à análise. Extraíram-se as células epiteliais da membrana da mucosa vaginal durante seis dias, a começar uma semana antes da dissecação, para observar a existência de células de queratose, pelo que se confirmou que o grupo de cirurgia placebo estava sexualmente excitado e que os outros grupos não estavam sexualmente excitados.

Sob anestesia com Nembutal, abateram-se os ratinhos drenando o sangue da aorta abdominal, dissecara-se e removeu-se o útero, fémur e tíbia. Determinou-se a densidade óssea da tíbia e do fémur medindo a massa e o volume após secagem a 100°C durante 24 horas. Depois, queimaram-se a tíbia e o fémur até às cinzas a 550°C durante 24 horas e depois mediu-se a massa. Indica-se a massa por volume como o teor de minerais no osso. Para processamento estatístico, efectuaram-se múltiplas comparações usando o método de Tukey após análise de variância (conforme se apresenta nos desenhos, existe uma diferencia significativa entre os grupos 10

ΕΡ 1 325 749 /PT que não possuem a mesma letra (P<0,05)). (Resultados)

Os resultados da medição de desoxipiridinona libertada na urina, indicam o grau de reabsorção, conforme estão apresentados na Figura 1. Os resultados da medição da densidade óssea da tibia e do fémur estão apresentam-se nas Figuras 2 e 3, respectivamente, e os resultados da medição do teor de minerais no osso estão apresentados nas Figuras 4 e 5, respectivamente. Mediu-se a quantidade de desoxipiridinolina usando um kit de exame clinico (Pyrilinks-D, fabricado por Mettler-Toledo International, Inc.) e a concentração por quantidade unitária de creatinina medida antecipadamente usando um teste de Creatinina B (fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) é indicada. A desoxipiridinolina é a substância para a reticulação do colagénio e existe principalmente no osso. Esta substância é conhecida como um excelente indicador da reabsorção óssea porque a substância é libertada em resposta à reabsorção óssea, é libertada na urina sem ter sido metabolizada, não é absorvida pelo canal alimentar, e não é influenciada pela dieta. Foi reportado que a desoxipiridinolina possui uma correlação negativa importante com a velocidade de redução óssea (Fledelius C. et al., Calcif. Tissue Int. 54, 381-384, 1994). É óbvio, a partir desses resultados, que o grupo do leite de soja fermentado possui uma concentração significativamente baixa na urina de desoxipiridinolina indicadora do metabolismo ósseo quando comparada com o grupo de controlo e com o grupo do leite de soja, e esta concentração é próxima da do grupo da cirurgia placebo. Também, a redução na densidade óssea e o teor de minerais nos ossos do grupo do leite de soja fermentado é menor do que a do grupo de controlo e do grupo do leite de soja, e a densidade óssea da tibia e o teor de minerais no fémur são significativamente superiores às do grupo de controlo. Por outro lado, embora a massa do útero descesse até 11% devido à ovariectomia, não existe nenhuma diferença significativa na massa de útero entre o grupo de controlo, o grupo do leite de soja, e o grupo do leite de soja fermentado. 11

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Exemplo 3

Produção de alimentos de leite de soja fermentado (2) (1) Preparação de pulverizado de leite de soja e pulverizado de leite de soja fermentado

Esterilizaram-se por vapor a 100°C, durante 90 minutos, 170 litros de leite de soja de base (fabricado por Shikoku Kakoki Co., Ltd) . Conservaram-se 80 litros do leite de soja esterilizado a 4°C. Inocularam-se os restantes 90 litros com uma solução de bactérias contendo 1% de Bifidobacterium breve YIT 4065, depois fez-se a cultura a 34°C durante 15 horas para obter leite de soja fermentado. Submeteu-se a secagem por congelação o leite de soja e o leite de soja fermentado conservados e esmagaram-se para obter pulverizados de leite de soja e de leite de soja fermentado. (2) Preparação do alimento

Utilizou-se, como alimento de controlo, uma composição AIN-76 parcialmente alterada para ser um alimento de preparação com um teor de proteínas de 25% e um teor de gordura de 17%. Prepararam-se alimentos de leite de soja e leite de soja fermentado contendo, respectivamente, 30% de pulverizado de leite de soja e 30% de pulverizado de leite de soja fermentado (ambos os pulverizados contendo 48% de proteína bruta e 24,3% de gordura bruta), adicionando caseína, óleo de milho, CaCC>3, KH2P04, MgO, e sacarose para tornar o teor de proteína bruta, gordura bruta, cálcio, fósforo, e magnésio igual ao do alimento de controlo.

Exemplo 4

Teste de susceptibilidade de melhoramento do metabolismo ósseo (2)

Dividiram-se em três grupos (n=8) 24 ratinhos Wistar com oito meses de idade já com descendência (fêmeas), ovariectomizadas e com a confirmação de não estarem sexualmente excitados: o grupo de controlo, o grupo do leite de soja, e o grupo do leite de soja fermentado. Também, proporcionou-se um grupo de cirurgia placebo, efectuando cirurgia placebo em oito ratinhos do mesmo tipo e confirmando 12

ΕΡ 1 325 749 /PT a presença de excitação sexual.

Durante doze semanas, forneceu-se alimento de controlo aos grupos de cirurgia placebo e de alimento de controlo, forneceu-se alimento de leite de soja ao grupo do leite de soja, e forneceu-se alimento de leite de soja fermentado ao grupo do leite de soja fermentado. Permitiu-se que os ratinhos ingerissem livremente água submetida a permuta iónica. Durante quatro horas não se forneceu comida aos ratinhos, anestesiaram-se com Nembutal, abateram-se drenando o sangue da aorta abdominal e dissecaram-se. Removeu-se o útero, o fémur e a tíbia. Determinou-se a densidade óssea da tíbia da mesma maneira que no Exemplo 2. Para determinar o teor de cálcio do fémur submeteu-se o fémur a secaqem por congelação e queimou-se até às cinzas a 550°C durante cinco horas. Analisou-se a cinza húmida, obtida adicionando ácido nítrico e ácido perclórico à cinza, utilizando um

Espectrómetro Sequencial de Plasma ICP-S2000 (fabricado por Shimadzu Corporation). (Resultados)

Os resultados da medição da densidade óssea da tíbia estão apresentados na Figura 6, e os resultados da medição do teor de cálcio do fémur estão apresentados na Figura 7. O teor de cálcio por massa seca e o teor de cálcio por volume do fémur para o grupo do leite de soja fermentado foram significativamente mais elevados do que os do grupo de controlo. O teor de cálcio para o grupo do leite de soja foi o mesmo que o do grupo de controlo. Também, a densidade óssea e o teor de cálcio por volume da tíbia para o grupo do leite de soja fermentado foram significativamente superiores do que os do grupo de controlo. O grupo do leite de soja apresentou os mesmos valores que o grupo de controlo. Para além disso, não houve diferença na massa do útero entre os três grupos ovariectomizados, e não houve diferenças significativas no peso inicial, peso final e ingestão de alimentos. É óbvio, a partir dos resultados anteriores, que, quando comparado com o leite de soja não fermentado, o leite de soja fermentado é eficaz na prevenção de uma diminuição na densidade óssea resultante de uma cirurgia de ovariectomia. 13

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Isto mostra que quando o leite de soja não fermentado não melhora o metabolismo ósseo, o leite de soja fermentado preparado a partir de Bifidobacterium breve YIT4065 é eficaz no melhoramento do metabolismo ósseo.

Aplicação industrial

As experiências anteriores mostram que o leite de soja fermentado, utilizado como agente melhorador do metabolismo ósseo, é útil para mulheres após a menopausa, quando a capacidade de sintetizar e segregar hormonas femininas está diminuída. 0 leite de soja fermentado é também útil como um alimento para prevenir distúrbios no metabolismo ósseo devido a perturbações nas hormonas femininas que aconteçam antes da menopausa. Para além disso, é óbvio, a partir das experiências anteriores, que o leite de soja fermentado possui um efeito superior no metabolismo ósseo quando comparado com o leite de soja.

Deste modo, o agente melhorador do metabolismo ósseo utilizado no presente invento é muito eficaz no tratamento e prevenção de doenças que acompanham um declínio do metabolismo ósseo tal como a osteoporose.

Lisboa

Claims (4)

1. ΕΡ 1 325 749 /PT 1/1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um leite de soja fermentado que se pode obter por fermentação de leite de soja com uma bactéria do ácido láctico ou uma bifidobactéria, no fabrico de um agente melhorador do metabolismo ósseo para o tratamento ou prevenção de osteoporose.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a bactéria do ácido láctico é Lactobacillus casei ou Lactobacillus mali.
3. 3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a bifidobactéria é Bifidobacterium breve.
4. 4. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que as bactérias são a estirpe Lactobacillus casei YIT9029, a estirpe Lactobacillus mali YIT0243, ou a estirpe Bifidobacterium breve YIT4065. Lisboa,