PT1225878E

PT1225878E - Agonistas de retinóide selectivos para os rar-gama tendo em vista o tratamento do enfisema

Info

Publication number: PT1225878E
Application number: PT00972754T
Authority: PT
Inventors: Paula Nanette Belloni; Michael Klaus
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1999-10-19
Filing date: 2000-10-13
Publication date: 2007-01-31
Also published as: BR0015225A; CN1201730C; TWI288639B; IL149151A0; KR100485581B1; DK1225878T3; PL357499A1; HUP0203295A2; EP1225878B1; CA2387844C; NO20021823L; YU29002A; NZ518118A; CN1382042A; DE60031790T2; TR200201071T2; NO328738B1; CY1105941T1; ZA200202576B; MY129001A

Description

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DESCRIÇÃO "Agonistas de retinóides selectivos para os RAR-gama -tendo em vista o tratamento do enfisema" A presente invenção diz respeito à utilização de agonistas dos receptores do ácido retinóico (RAR), em particular de um agonista dos receptores do ácido retinóico que é selectivo para os RARy. A doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) constitui a principal causa de morbidez e de mortalidade, que corresponde ao terceiro e quarto lugares no que toca à causa de morte na União Europeia e na América do Norte, respectivamente. A COPD caracteriza-se por um fluxo expiratório máximo reduzido que não se altera durante vários meses e persiste durante 2 ou mais anos consecutivos. Os doentes com a forma mais grave de COPD apresentam, de uma maneira geral, um grau significativo de enfisema. 0 enfisema define-se sob o ponto de vista anatómico pelo alargamento do espaço aéreo permanente dos bronquíolos desde os distais até aos terminais, e caracteriza-se por perda gradual de retracçâo do pulmão, destruição alveolar, área superficial alveolar e permuta gasosa diminuídas, conduzindo a um FEV1 reduzido ("Forced Expiratory Volume") (American Thoracic Society: Am. J. Resp. and Criticai Care 152: S77 - S124, 1995). A permuta gasosa comprometida e a redução do fluxo expiratório constituem anomalias fisiológicas características de que sofrem os doentes com enfisema. O principal sintoma dos doentes gravemente afectados com enfisema é o encurtamento da respiração ("shortness of breath") durante períodos de actividade física mínima. 2

Muito embora outras toxinas potenciais para o meio ambiente possam contribuir, a causa mais comum de enfisema é o fumo do cigarro. Esses agentes prejudiciais activam processos destrutivos no pulmão, incluindo a libertação de proteases activas e de oxidantes com radicais livres em excesso por mecanismos protectores. A libertação descontrolada de proteases activas cria um desequilíbrio nas concentrações de protease/antiprotease nos pulmões o que conduz à destruição da matriz de elastina, à perda de retracção elástica, a danos tecidulares e ao declínio da função contínua pulmonar. A velocidade desse dano pode ser retardada por remoção dos agentes prejudiciais (por exemplo, deixando de fumar); no entanto, as estruturas alveolares danificadas não são reparadas e a função do pulmão não é recuperada. 0 ácido all-trans-retinóico (ATRA) constitui um modulador multifuncional do comportamento celular, apresentando um potencial para alterar tanto o metabolismo da matriz extracelular como a diferenciação epitelial normal. Nos pulmões, tem-se verificado que o ATRA modula diversos aspectos de diferenciação pulmonar mediante interacção com receptores específicos do ácido retinóico (RAR) que são expressos selectivamente no tempo e no espaço. Em camundongos no período neonatal, a activação coordenada dos RARP e dos RARy tem sido associada à ramificação do pulmão, à alveolização/septação e à activação genética da tropoelastina.

Durante a septação alveolar, os grânulos de ácido retinóico (retinil-ésteres) em depósito ("storage") aumentam o mesênquima fibroblástico que rodeia as paredes alveolares (Liu et al; Am J. Physiol. 265: L430 - L437, 1993; McGowan et 3 al Am. J. Physiol. 269: L463 - L472, 1995), e a expressão dos RARy nos pulmões atinge o valor mais elevado (Ong, D. E. and Chytil, F. , Proc. Natl. Acad. Of Sciences 73: 3976 - 3978, 1976; Grummer, M.A., Thet, L. e Zachman, R. D. Pediatr. Pulm. 17:234-238, 1994). A perda desses depósitos de retinil-éste-res decorre paralelamente à deposição de uma nova matriz de elastina e à septação. Como suporte desse conceito, Massaro e Massaro (Massaro, D. and Massaro, G., Am. J. Physiol. 270, L305 - L310, 1996) demonstraram que a administração pós-natal de ácido retinóico aumenta o número de alvéolos nos camundongos. 0 tratamento de crias de camundongos recém-nascidas com dexametasona inibe o processo de septação nos pulmões. Esse efeito pode ser ultrapassado mediante um tratamento suplementar com ácido retinóico. Além disso, a capacidade da dexametasona para prevenir a expressão das CRBP e do mARN ΕΑΡβ e a subsequente septação alveolar no desenvolvimento dos pulmões do camundongo foi anulada pelo ATRA.

Estudos recentes demonstraram que, em modelos animais de enfisema, o ATRA pode induzir a formação de novos alvéolos e fazer regressar a retracção elástica até próximo da normal (Massaro, D. e Massaro, G., Nature Med. 3: 675 - 677, 1997; "Strategies to Augment Alveolization", "National Heart, Lung, and Blood Institute, RFA: HL-98-011, 1998). No entanto, o mecanismo pelo qual isto ocorre permanece por esclarecer.

Os retinóides constituem uma classe de compostos estruturalmente afins da vitamina A, que compreendem compostos de origem natural e sintética. Tem-se verificado que diversas séries de retinóides são clinicamente úteis no tratamento de doenças dermatológicas e oncológicas. 0 ácido all-trans-retinóico (ATRA) e os seus outros análogos 4 retinóides de ocorrência' natural (ácido 9-cis-retindico, ácido all-trans-3,4-didesidro, ácido 4-oxo-retinóico e retinol) constituem compostos reguladores pleiotrópicos que modulam a estrutura e a função de uma ampla variedade de células inflamatórias, imunes e estruturais. Eles constituem reguladores importantes da proliferação, da diferenciação e da morfogénese de células epiteliais no pulmão. Os retinóides exercem os seus efeitos biológicos através de uma série de receptores nucleares que são factores de transcrição de ligandos susceptiveis de indução que pertencem à superfamília dos receptores esteróide/tiróide.

Os receptores dos retinóides classificam-se em duas famílias, os receptores do ácido retinóico (RARs) e os receptores X dos retinóides (RXRs), consistindo cada um de três subtipos distintos (α, β e γ). Cada subtipo da família de genes RAR codifica um número variável de isoformas que provêem de "splicing" diferencial de dois transcritos primários de ARN. Relativamente aos receptores do ácido retinóico, o ATRA representa uma hormona fisiológica e liga--se com uma afinidade aproximadamente igual a todos os três subtipos de RARs. 0 ATRA não se liga aos receptores RXRs; pelo contrário, para esses receptores, o ácido 9-cis-retinói-co é o ligando natural.

Em muitos tecidos não pulmonares, os retinóides apresentam efeitos anti-inflamatórios, alteram a progressão da diferenciação das células epiteliais, e inibem a produção matriz das células estromais. Essas propriedades conduziram ao desenvolvimento de terapêuticas tópicas com retinóides para perturbações dermatológicas tais como psoríase, acne e cicatrizes hipertróficas cutâneas. Outras aplicações incluem o controlo de leucemia promielocítica aguda, adenocarcinoma e 5 carcinoma de células escamosas, e fribose hepática. No entanto, o uso terapêutico de retinóides para além do cancro é limitado devido às toxicidades relativas observadas para os retinóides de ocorrência natural, ATRA e 9-cis-RA. Esses ligandos naturais são não selectivos e, por consequência, apresentam efeitos pleiotrópicos no corpo, que são frequentemente tóxicos. Recentemente, descreveram-se diversos retinóides como interactuando selectivamente ou especif icamente com os receptores RAR ou RXR ou com os subtipos específicos (α, β, y) no caso de uma classe. Utilizando esses novos retinóides, separaram-se as suas actividades de trans-repressão do AP-1 e de transactivação. (Li, J. J. et al, Câncer Research, 56: 483-489 (1996); Fanjul, A. et al., Nature, 372: 107 - 111 (1994); Schule R. et al., PNAS, 88: 6092-6096 (1991); Nagpal et al., Journal of Biological Chemistry 270: 923-927 (1995)). Além disso, os compostos selectivos dos receptores apresentam toxicidade geral reduzida in vitro e in vivo. (Chandraratna, R., J. Am. Acad. Dermatology, 39: S149 - S152, 1998; Look, J. et al., Am. J. Physiol. 269: E91 - E98, 1995).

De acordo com um aspecto, a presente invenção proporciona agonistas selectivos para os RARy para o tratamento do enfisema e de doenças pulmonares associadas. A utilização de retinóides que são selectivos , pelo menos, para os RARy e que se abstraem dos RARa promoverá uma reparação sem induzir efeitos adversos sobre níveis de triglicéridos no plasma.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de agonistas selectivos para os RARy para a estimulação da expressão genética da tropoelastina em um fibroblasto de pulmão humano. 6

Quando utilizada na presente memória descritiva, a expressão alquilo (Cx-Cy) significa um radical hidrocarbonado de cadeia linear ou ramificada completamente saturado compreendendo átomos de carbono de x a y; fluoroalquilo (Cx-Cy) é um radical alquilo, como definido anteriormente, em que se substituíram um ou mais dos átomos de hidrogénio ligados à estrutura carbonada por um ou mais átomos de flúor.

Quando utilizada na presente memória descritiva, a expressão cicloalquilo (CK-Cy) significa um radical hidrocarbonado cíclico completamente saturado com x a y átomos de carbono no anel e inclui sistemas anelares biciclicos, policíclicos e em ponte, por exemplo, grupos ciclopropilo, ciclopentilo, decalinilo, adamantilo e similares; a expressão ciclofluoro-alquilo (Cx-Cy) significa um radical cicloalquilo, tal como definido anteriormente, em que se substituíram um ou mais átomos de hidrogénio ligados à estrutura carbonada por um ou mais átomos de flúor.

Quando utilizado na presente memória descritiva, o termo "E" significa uma configuração estereoquímica respeitante a uma ligação dupla carbono-carbono de tal modo que os dois átomos de hidrogénio se encontram ligados a diferentes átomos de carbono e se encontram em lados opostos da ligação dupla carbono-carbono. 0 termo "Z" significa uma configuração estereoquímica respeitante a uma ligação dupla carbono-carbono de tal modo que os dois átomos de hidrogénio se encontram ligados a diferentes átomos de carbono e se encontram do mesmo lado da ligação dupla carbono-carbono. (Pure Appl. Chem., 45, 13 - 30 (1976)).

Quando utilizado na presente memória descritiva, o termo DE significa dose eficaz e utiliza-se em associação com 7 modelos animais. 0 termo CE significa concentração eficaz e utiliza-se em associação com modelos in vitro.

Quando utilizado na presente memória descritiva, o termo "DE50" de um retinóide tendo em vista um receptor do ácido retinóico significa a concentração molar do retinóide em um modelo animal que transactiva o receptor especifico do ácido retinóico em estudo em 50% da transactivação máxima que se pode obter com esse retinóide. Quando utilizado na presente memória descritiva, o termo "CE50" de um retinóide tendo em vista um receptor do ácido retinóico significa a concentração molar do retinóide em um modelo in vitro que transactiva o receptor especifico do ácido retinóico em estudo em 50% da transactivaçâo máxima que se pode obter com esse retinóide.

Tal como utilizado na presente memória descritiva, o termo "retinóide" é qualquer composto que é susceptivel de transactivaçâo de qualquer ou todos os subtipos α, β ou γ dos receptores RAR ou RXR com uma DE50 de 1000 nm ou inferior.

Tal como utilizado na presente memória descritiva, o termo "transactivaçâo" refere-se à capacidade de um retinóide para activar a transcrição de um gene em que se inicia a transcrição genética pela ligação de um ligando ao receptor específico do ácido retinóico que se está a ensaiar, isto é, RARa, RAR ou RARy. A determinação da capacidade de um composto para transactivar um receptor do ácido retinóico pode efectuar-se por métodos que os técnicos experientes na arte conhecem. Encontram-se exemplos de tais métodos em Bernard et al.r Biochem. Biophys. Res. Commun., 186: 977-983 (1992) and C. Apfel et ai., Proc. Nat. Sei. Acad. (USA), 89: 7129-7133 (1992). 8

Tal como utilizada na presente memória descritiva, a expressão "agonista selectivo para os RARy" refere-se a um composto que é capaz de se ligar de um modo selectivo ao receptor RARy e promover a sua activação. Os agonistas selectivos para os RARy ligar-se-ão a esses receptores em concentrações significativamente menores (uma selectividade maior que 10 vezes mais, por exemplo a select ividade de um agonista selectivo para os RARy é para esses receptores pelo menos superior a 20 vezes a selectividade relativa aos receptores RARa e RARp, selectividade especifica 50 a 100 vezes mais) do que aos receptores RARa e RARp. O perfil preferido de actividade prescindirá da activação dos receptores RARa, conduzindo a respostas biológicas mais selectivas.

Quando utilizada na presente memória descritiva, a expressão "agonista selectivo para os RARy/β" significa um agonista que se liga selectivamente aos receptores RARy e RARp, que promove tanto a activação dos RARy como a dos RARP e que prescinde da activação dos receptores RARa.

Tal como utilizada na presente memória descritiva, a expressão "agonista dos RAR que é selectivo pelo menos para o subtipo gama e que se abstrai dos RARa" é um agonista que é selectivo para os RARy ou selectivo para os RARy/β.

Quando utilizada na presente memória descritiva, a expressão "pan-agonista dos RAR" é um agonista que se liga a receptores RARa, RAP.p e RARy com uma afinidade similar, promovendo a activação desses receptores. 9 0 termo "pró-fármaco" significa qualquer composto que liberta um fármaco activo precursor in vivo quando se administra esse pró-fármaco a um mamífero. Preparam-se pró--fármacos mediante modificação de grupos funcionais presentes no fármaco activo de tal modo que essas modificações se possam cindir in vivo para libertar o composto precursor. Os pró-fármacos incluem compostos em que um grupo hidroxi no fármaco activo se encontra ligado a qualquer grupo que se pode cindir in vivo para regenerar o grupo hidroxilo livre. Exemplos de pró-fármacos incluem, embora sem carácter limitativo, ésteres (por exemplo, derivados de acetatos, formatos e benzoatos), carbamatos (por exemplo, N,N-dimetil-aminocarbonilo) e éteres de grupos funcionais hidroxi em fármacos activos e similares. Técnicos experientes na arte preparam tais compostos de um modo rotineiro mediante acilação ou eterificação do grupo hidroxi no fármaco precursor.

Os presentes inventores descobriram que os agonistas selectivos para os RARy transactivam a expressão genética da tropoelastina em fibroblastos do pulmão humano. De maneira análoga, verificou-se que os compostos selectivos para os RARy promovem a reparação e/ou a regeneração dos alvéolos pulmonares de camundongos. Embora agonistas de retinóides selectivos para os RARy tenham induzido a expressão de tropoelastina em fibroblastos do pulmão humano, isso não ocorreu nem com agonistas selectivos para os RARp nem com agonistas selectivos para os RARa. Por consequência, um aspecto da presente invenção consiste em promover a produção de elastina, que inclui uma matriz extracelular, em um mamífero mediante administração de um agonista que é selectivo pelo menos para os RARy. 10

No entanto, um técnico com experiência na arte reconhecerá que a presente invenção engloba a utilização de todos os agonistas selectivas para os RARy e não fica limitada aos agonistas selectivos para os RARy descritos nas referências anteriores ou aos presentemente conhecidos na arte. De uma maneira geral, todos os compostos que possuem pelo menos actividade agonista selectiva para os RARy são úteis para as utilizações e métodos de acordo com a presente invenção.

Uma família de agonistas selectivos para os RARy útil nos métodos descritos na presente memória descritiva encontra-se descrita na Patente de invenção norte-americana N.° 5 700 836, concedida em 23 de Dezembro de 1997 e é representada pela Fórmula geral I.

I na qual o símbolo R1 representa um resto de fórmula geral

ou

ou 11 o símbolo R2 representa um grupo alcanoílo 02-0β, alquilo C2-C8, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8 ou um grupo de fórmula geral -OCH2R3; o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-Ce, alcenilo C2-C6 ou alcinilo 02-08; os símbolos R4 a R9 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C9; ou os símbolos R8 e R9 representam, considerados conjuntamente, um grupo de fórmula geral (CRaRb)n, na qual os símbolos Ra e Rb representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C6, o símbolo n representa um número inteiro 1, 2 ou 3 e os símbolos R4 a R7 têm os significados definidos antes; o símbolo R10 representa um grupo carboxilo, alcoxi (Ci— -C6)-carbonilo ou mono- ou di- (alquil-Ci-6) -carbamoílo; e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Os compostos especialmente úteis dentro desta família são os compostos de Fórmula geral Ia ou Ib:

na qual o símbolo R2 representa um grupo alquilo C2-C8 ou alcanoílo C2-C8 ou um grupo de fórmula geral -OCH2R3. 12

Mais especificamente, o símbolo R2 representa um grupo n-pentilo, n-hexilo, n-propoxi, n-pentoxi ou n-hexanoílo.

COOH

Ib na qual o símbolo R2 representa um grupo hexilo ou n-pentoxi.

Uma outra família de agonistas selectivos para os RARy útil nos processos descritos na presente memória descritiva encontra-se descrita na Patente de invenção norte-americana N.° 5 726 191, concedida em 10 de Março de 1998 e é representada pela Fórmula geral II. 0

na qual o símbolo R1 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-C6; o símbolo R2 representa um grupo alquilo C1-C6 ou um grupo adamantilo; o símbolo R3 representa um grupo alquilo Cq-Cg ou um grupo hidroxi; ou os símbolos R2 e R3 representam, considerados conjuntamente um grupo de fórmula geral -(CR6R7}n_ (na qual os símbolos R6 e R7 representam um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Cq-C6 e o símbolo n representa um número inteiro 3, 4 ou 5); 13 o símbolo R4 representa um grupo alcanoílo C2-C8, alquilo c2-c8, alcenilo C2-C8/ alcinilo C2-C8 ou um grupo de fórmula geral -OCH2R5; o símbolo R5 representa um grupo alquilo Ci-Cê, alcenilo C2-C6 ou alcinilo C2-C6; o símbolo Y representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Os compostos especialmente úteis dentro desta família são os compostos de Fórmula geral lia.

principalmente aqueles em que o símbolo R4 representa um grupo n-pentilo ou n-hexilo.

Uma terceira família de agonistas selectivos para os RARy úteis nos processos de acordo com a presente invenção encontra-se descrita na Patente de invenção norte-americana N.° 5 498 795 concedida em 12 de Março de 1996 e é representada pela Fórmula geral III.

na qual os símbolos R1 a R3 e R5 representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior com 1 a 6 14 átomos de carbono, um grupo alquilo de cadeia ramificada ou cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono, um grupo cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono comportando como substituinte um grupo alquilo inferior; o símbolo R4 representa um grupo alquilo inferior com a 1 a 6 átomos de carbono, um grupo alquilo de cadeia ramificada ou cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono ou um grupo cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono comportando como substituinte um grupo alquilo inferior; o símbolo Y representa um grupo fenilo ou heteroarilo escolhido de entre um grupo que consiste em piridilo, tienilo, furilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, imidazolilo e oxazolilo, comportando os referidos grupos como substituinte um grupo representado pelo símbolo R5 definido anteriormente; o símbolo Δ representa um grupo de fórmula geral (CH2)n em que o símbolo n representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 5, um grupo alquilo inferior de cadeia ramificada com 3 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo com 3 a 6 átomos de carbono, alcenilo com 2 a 6 átomos de carbono e 1 ou 2 ligações duplas, alcinilo com 2 a 6 átomos de carbono e 1 ou 2 ligações triplas; o símbolo B representa um átomo de hidrogénio, um grupo COOH ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, -CH2OH, ou CHO, ou um grupo de fórmula geral COOR8, CONR9R10, CH2ORn, CH2OCOR11, CH(OR12)2, CH0R130, -COR7, CR7(OR12)2, ou CR70R130, em que o símbolo R7 representa um grupo alquilo, cicloalquilo ou alcenilo contendo 1 a 5 átomos de carbono, o símbolo R8 representa um grupo alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, ou um grupo cicloalquilo com 5 a 10 átomos de carbono, ou o símbolo R8 representa um grupo fenilo ou alquil (inferior)-fenilo, os símbolos R9 e R10 representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo 15 com 1 a 10 átomos e carbono, ou um grupo cicloalquilo com 5 a 10 átomos de carbono ou fenilo ou alquil (inferior)-fenilo, o símbolo R11 representa um grupo alquilo inferior, fenilo ou alquil (inferior)-fenilo, o símbolo R±2 representa um grupo alquilo inferior e o símbolo R13 representa um radical alquílico divalente com 2 a 5 átomos de carbono.

Um agonista selectivo para os RARy particularmente útil é um agonista de Fórmula geral Illa.

ffla

Uma quarta família de agonistas selectivos para os RARy útil nos processos de acordo com a presente invenção é descrita na Patente de invenção norte-americana N.° 5 760 084 concedida em 2 de Junho de 1998 e é representada pela Fórmula geral IV.

rv na qual o símbolo X representa F, Cl, OH ou CH3; o símbolo Y representa H ou F; os símbolos R1 a R6 apresentam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-C6; o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4; e 16 o símbolo R7 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical carboxilo; e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Um composto particularmente útil nessa família de agonistas selectivos para os RARy é o composto de Fórmula IVa (BMS-961) .

Uma quinta família de agonistas selectivos para os RARy útil nos processos de acordo com a presente invenção é descrita nas Patentes de invenção norte-americanas N.os 5 130 335, concedida em 12 de Julho de 1992 e 5 231 113 concedida em 27 de Julho de 1993 e é representada pela Fórmula geral V.

na qual os grupos designados pelo símbolo R são, independentemente, átomos de hidrogénio ou grupos alquilo inferior; o símbolo A representa um grupo -C(0)0-, -0C{0)-, -C(O)S- ou SC(O)-; 17 o símbolo η representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 5; e o símbolo Z representa um átomo de hidrogénio, um grupo -CHO ou um seu derivado acetálico, ou um grupo de fórmula geral -COB, -GE, ou -COR3 em que o símbolo B representa um grupo de fórmula geral -0R1 na qual o símbolo R1 representa um grupo formador da função éster, ou o símbolo B representa um grupo de fórmula geral ~N(R)2 na qual o símbolo R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; o símbolo E representa um átomo de hidrogénio, um grupo formador da função éter, ou um grupo de fórmula geral -COR2 na qual o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, fenilo, ou alquil (inferior)-fenilo; o símbolo R3 representa um grupo de fórmula geral -(CH2)mCH3 na qual o símbolo m representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 4, não excedendo a soma dos números representados pelos símbolos n e m o número 4.

Um composto especialmente útil nessa família de antagonistas selectivos para os RARy é o composto de Fórmula

Uma sexta família de agonistas selectivos para os RARy útil nos processos de acordo com a presente invenção encontra-se descrita na Publicação da Patente PCT WO 97/37648 e no Pedido de Patente de invenção francesa FR2739557-A1, 18 publicado em 11 de Abril de 1997 e é representada pela Fórmula geral VI.

na qual os símbolos R1 a R5 têm os significados definidos na patente de invenção internacional WO 97/367648.

Em particular, o símbolo R1 representa um grupo CH2OH ou um grupo de fórmula geral C(0)R6 (em que o símbolo R° representa um grupo hidroxi ou um grupo alcoxi Ci~C6) ; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-C15, alcoxi Ci-Cg ou cicloalifático; o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, alquilo Ci~C6, di-hidroxi-alquilo Ci~C6, alcoxi C1-C10 ou cicloalifático; e os símbolos R4 e R5 representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, alquilo Ci-C6 ou alcoxi C1-C6.

Um composto especialmente útil nessa família de agonistas selectivos para os RARy é o agonista de Fórmula Via (CD-437) e de Fórmula VIb (CD-2247), descrito em Biochem. Biophys. Res. Commum. 179: 1554 - 1561 (1991), Biochem. Biophys. Res. Commun. 186: 977 - 984 (1992), e Int. J. Câncer 71: 497 (1997) . 19 19

Via

Vft

Outros compostos de interesse são os de Fórmulas VII, VIII, IX, X e XI (enantiómeros (R) e (S) ) conforme descrito em Skin Pharmacol, 8: 292 - 299 (1995)).

l-Adamantilo

VII

l-Adamantilo

COOH

X 20

Outros compostos úteis nos processos de acordo com a presente invenção são representados pela Fórmula XII (J. Med. Chem. 39: 2411 - 2421 (1996) e Câncer Res. 55. 446 - 4451 (1995)).

e pelas Fórmulas XIII e XIV (Câncer Leuers, 115:1-7 (1997)).

OH xm

XIV

Um outro composto de interesse é representado pela Fórmula XV (J. Med. Chem. 32: 834 - 840 (1989) e publicação da patente de invenção japonesa 62/053981 (1987). 21 21

XV

Em ensaios de transactivação, e relativamente aos RARa e RARp, os compostos selectivos para os RARy devem demonstrar uma selectividade mínima 10 vezes superior e de preferência uma selectividade superior a 100 vezes em relação aos RARa. A selectividade de um composto agonista dos RARy pode determinar-se por ensaios rotineiros de ligação do ligando que os técnicos experientes na arte conhecem tal como os descritos em C. Apfel et al.r Proc. Nat. Sei. Acad. (USA), 89: 7129-7133 (1992); M. Teng et al. , J. Med. Chem. , 40: 2445-2451 (1997); e na publicação da patente de invenção PCT WO 96/30009.

Os agonistas selectivos para os RARy, tal como descritos na presente memória descritiva, são úteis para promover a reparação de alvéolos danificados e a septação de novos alvéolos. Como tal, esses compostos são úteis para o tratamento de doenças tais como o enfisema. O clínico assistente decidirá a posologia especifica de um agonista dos RAR ou de um agonista selectivo para os RARy necessária para promover a reparação/regeneração alveolar de acordo com a presente invenção que dependerá da gravidade da situação, da via de administração e de factores semelhantes. Caracteristicamente, a dosagem oral variará entre aproximadamente 1,0 mg/kg de peso do corpo por dia (mg/kg/dia) e 0,01 mg/kg/dia, de preferência entre aproximadamente 0,1 e aproximadamente 0,05 mg/kg de peso do corpo por dia. Para um indivíduo humano com o peso de 50 kg, 22 a dose oral diária de componente activo encontra-se compreendida entre aproximadamente 50 e aproximadamente 0,5 mg, de preferência entre aproximadamente 5 e aproximadamente 2,5 mg. Essa dosagem pode administrar-se sob a forma de uma composição farmacêutica convencional mediante uma única administração, através de aplicações múltiplas, ou por meio de libertação controlada, conforme necessário para se alcançar os resultados mais eficazes. É de esperar que a administração local do fármaco sob a forma de aerossol nos espaços aéreos pulmonares reduza a dose eficaz de 10 a 100 vezes (10 μρ/]<:9/ΜΪ3 a 0,1 μg/kg/dia). A dosagem perdurará desde que seja clinicamente indicada, a qual dependendo da gravidade da doença, pode variar desde algumas semanas até diversos meses.

Caracteristicamente, administra-se uma composição aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, tal como um sal ou um pró-fármaco do agonista dos RAR em um veiculo ou diluente aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. No contexto da presente invenção, os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico incluem qualquer sal conveniente sob o ponto de vista químico conhecido na arte dos retinóides como apropriado para a administração a doentes humanos. Exemplos de sais convencionais conhecidos na técnica incluem os sais de metais alcalinos tais como os sais de sódio e de potássio, os sais de metais alcalino-terrosos tais como os sais de cálcio e de magnésio e os sais de amónio e de alquilamónio. As composições de agonistas dos RARy que contêm um pró-fármaco, particularmente preferidas, incluem derivados hidrolisáveis de ésteres tais como ésteres aromáticos e benzílicos, ou ésteres alquílicos inferiores como, por exemplo, éster etílico, t-butílico, ciclopentílico e similares. 23

Modos de administração representativos incluem a via oral, parentérica (incluindo a subcutânea, a intramuscular e a intravenosa), rectal, bucal (incluindo a sublingual), transdérmica, pulmonar e intranasal. Um método de administração pulmonar inclui a dispersão em aerossol de uma solução aquosa de um agonista dos RAR. As composições para dispersão em aerossoles podem incluir um composto envolvido por micelas ou lipossomas de sinal oposto. Outros métodos para administração pulmonar incluem um pó seco administrado por meio de dispositivos inaladores de pós secos e uma formulação líquida do agonista do retinóide com polietileno glicóis ou etanol aquoso administrada por meio de dispositivos inaladores hidrodinâmicos eléctricos. Os sistemas de administração pulmonares e respiratórios característicos encontram-se descritos nas Patentes de invenção norte-americanas N.° 5 607 915, 5 238 683, 5 292 499 e 5 364 615 e em "Aerosol delivery of liposomal ATRA to the lungs", Parthasarathy, R., Gilbert, B.M., e Mehta, K., Câncer Chemotherapy Pharmacol, 43: 277-283, 1999.

De acordo com a presente invenção utilizam-se igualmente, como medicamentos, por exemplo sob a forma de uma preparação farmacêutica para administração sistémica de agonistas dos RARy em associação simultânea ou sequencial com outro componente activo para melhorar a eliminação mucociliar do muco das vias aéreas ou reduzir a viscosidade do muco. Os componentes activos representativos para melhorar a eliminação mucociliar incluem, por exemplo, bloqueadores dos canais do sódio (por exemplo amilorida) ou antibióticos (por exemplo duramicina, nisina ou subtilina). Componentes activos representativos para reduzir a viscosidade do muco incluem N--acetilcisteína, homocisteína e fosfolípidos. 24

Os agonistas dos RARy administrar-se-ão de um modo característico sob a forma de composições farmacêuticas em mistura homogénea com um veículo não tóxico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Conforme se mencionou anteriormente, essas composições podem preparar-se para administração por via parentérica (subcutânea, intramuscular ou intravenosa), principalmente sob a forma de soluções ou suspensões líquidas; para a administração oral ou bucal, principalmente sob a forma de comprimidos ou de cápsulas; para administração intranasal, principalmente sob a forma de pós, gostas nasais ou aerossoles; e para administração rectal ou transdérmica. Pode utilizar-se qualquer material veicular convencional. 0 material veicular pode ser qualquer material veicular orgânico ou inorgânico, tal como água, gelatina, goma-arábica, lactose, amido, estearato de magnésio, talco, polialquilenoglicóis, vaselina e similares.

As formulações líquidas para administração por via parentérica ou para administração por via oral contêm, como excipientes, água estéril ou soro fisiológico, alquilenoglicóis tais como propilenoglicol, polialquilenoglicóis tais como o polietileno-glicol, óleos de origem vegetal, naftalenos hidrogenados e similares. Elas podem utilizar tampões ligeiramente ácidos em limites de pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 6. Os tampões apropriados incluem acetato, ascorbato e citrato em concentrações compreendidas entre aproximadamente 5 mM e aproximadamente 50 mM. Para administração por via oral, a formulação pode melhorar-se pela adição de sais biliares ou de acil-carnitinas.

As formulações para administração por via bucal podem ser sólidas e podem conter como excipientes característicos 25 açúcares, estearato de cálcio, estearato de magnésio, amido pré-gelatinizado e similares.

As formas sólidas para administração oral incluem comprimidos, cápsulas de gelatina dura e mole, pílulas, saquetas, pós, grânulos e similares. Cada comprimido, pílula ou saqueta pode conter entre aproximadamente 5 e aproximadamente 200 mg de um agonista dos RARy, de preferência entre aproximadamente 10 e aproximadamente 50 mg. As formas de dosagem sólidas preferidas para administração oral incluem comprimidos, cápsulas de duas peças com invólucros duros e cápsulas de gelatina elástica mole (SEG) . 0 interesse nas cápsulas de SEG é especial porque as mesmas oferecem mais vantagens distintas do que as outras duas formas (ver Seager, H., "Soft gelatin capsules: a solution to many tableting problems", "Pharmaceutical Technology, 9: (1985). Algumas das vantagens da utilização de cápsulas SEG são: a) a uniformidade de teor em princípio activo é optimizada nas cápsulas de SEG visto que o fármaco se dissolve ou se dispersa em um líquido que se pode dosear rigorosamente no interior das cápsulas; b) os fármacos formulados como cápsulas de SEG apresentam excelente biodisponibilidade visto que o fármaco se dissolve, solubiliza ou dispersa em um líquido miscível com a água ou oleoso e, por consequência, quando libertadas no corpo, as soluções dissolvem-se ou emulsionam-se para originarem dispersões do fármaco de elevada área superficial; e c) evita-se a degradação dos fármacos que são sensíveis à oxidação durante uma armazenagem a longo prazo devido ao invólucro seco.

As formulações para administração nasal podem ser sólidas e podem conter excipientes, por exemplo, lactose ou 26 dextrano, ou podem ser soluções aquosas ou oleosas para utilização sob a forma de gotas nasais ou de spray de doses reguladas. As principais formulações nasais incluem pós secos apropriados para inaladores de pós secos convencionais (DPI's), soluções ou suspensões liquidas apropriadas para nebulização e formulações propulsoras apropriadas para utilização em inaladores de doses reguladas (MDI's).

Quando formuladas para administração nasal, a absorção através da membrana mucosa nasal pode ser melhorada por meio de ácidos tensioactivos, como por exemplo, ácido glicocólico, ácido eólico, ácido taurocólico, ácido etocólico, ácido desoxicólico, ácido quenodesoxicólico, ácido desidrocólico, ácido glicodesoxicólico, ciclodextrinas e similares, em uma quantidade entre aproximadamente 0,2 e 15% em peso, de preferência entre aproximadamente 0,5 e 4% em peso, mais preferivelmente aproximadamente 2% em peso. A administração dos compostos de acordo com a presente invenção a um indivíduo durante intervalos de tempo prolongados, por exemplo, durante períodos de uma semana a um ano, pode conseguir-se com êxito através de uma única administração de um sistema de libertação controlada que contém componente activo suficiente para o desejado período de administração. Com esta finalidade podem utilizar-se diversos sistemas de libertação controlada, tais como microcápsulas monolíticas ou do tipo reservatório, implantes de depósitos, bombas osmóticas, vesículas, micelas, lipossomas, emplastros transdérmicos, dispositivos ionoforéticos e formas de dosagem injectáveis alternativas. A localização no sítio em que se deseja a libertação do componente activo constitui uma característica adicional de 27 alguns dispositivos de libertação controlada, que se podem evidenciar úteis no tratamento de determinadas perturbações.

As seguintes são formulações farmacêuticas representativas tendo em vista a utilização de agonistas selectivos para os RARy conforme descritos na presente memória descritiva para promover a reparação da matriz mediada pela elastina e a septação alveolar.

Formulação de comprimidos

Misturam-se homogeneamente os componentes seguintes e comprimem-se para se obterem comprimidos com uma única ranhura.

Quantidade por comprimido que contém 1,0 a 50 mg de substância activa:

Ingrediente Quantidade por comprimido, mg Agonista dos RAR 10 Amido de milho 50 Croscarmelose de sódio 25 Lactose 120 Estearato de magnésio 5,0

Formulação de cápsulas

Misturam-se homogeneamente os componentes seguintes e acondicionam-se em uma cápsula de gelatina de invólucros duros.

Quantidade por cápsula que contém 5 mg de substância activa:

Ingrediente Quantidade por cápsula, mg Agonista dos RAR 5 Lactose, seca por atomízaçâo 148 Estearato de magnésio 2 28

Formulação de suspensões

Misturam-se os componentes seguintes para formar uma suspensão para administração oral:

Ingrediente Quantidade Agonista dos RAR 1,0 a 50 mg Ácido fumárico 0,5 g Cloreto de sódio 2,0 g Metilparabeno 0, 15 g Propilparabeno 0, 05 g Açúcar granulado 25,5 g Sorbitol (solução a 70%) 12,85 g Veegum K (Vanderbilt Co.) 1,0 g Aromatizante 0,035 ml Corantes 0,5 mg Águas destilada q.b. para 100 ml Formulação de um injectável Misturam-se os componentes formulação injectável: seguintes para realizar uma Ingrediente Quantidade Agonista dos RAR 100 mg Solução tampão de acetato de sódio 2,0 ml HC1 (IN) ou NaOH (IN) q.b. para pH apropriado Água (destilada, estéril) q.b. para 20 ml 29

Formulação de uma suspensão nasal

Misturam-se os ingredientes seguintes para realizar uma suspensão para administração nasal:

Ingrediente Quantidade Agonista dos RAR 20 mg/ml Ácido cítrico 0,2 mg/ml Citrato de sódio 2,6 mg/ml Cloreto de benzalcónio 0,2 mg/ml Sorbitol 35 mg/ml Taurocolato ou glicolato de sódio 10 mg/ml

Apresentam-se as preparações e exemplos seguintes para permitir que os peritos na matéria mais claramente compreendam e pratiquem a presente invenção. Essas preparações e esses exemplos não se devem considerar como limitativos do âmbito da invenção, mas meramente como seus exemplos e representantes.

Esses exemplos utilizam um ou mais dos agonistas dos RAR contidos no quadro seguinte

Quadro I

Agonistas dos RAR Utilizados nos Exemplos

30

EXEMPLO 1:

Transactivação do Gene da Tropoelastina no Estado Estacionário pelos RAR A transactivação do gene da tropoelastina em fibroblastos de pulmão humano normal (CCD-16Lu) realizou-se conforme se descreve abaixo. Desenvolveram-se células até à confluência altura em que se adicionou à cultura de base +/-ATRA ou um retinóide selectivo em meio preparado recentemente. Utilizou-se/utilizaram-se ATRA e/ou retinóides selectivos em uma concentração de 1 x IO"7 M. Utilizando um tampão à base de guanidinio (TRIZOL/Sigma) provocou-se a lise da camada celular para extracção e análise do ARN. Realizou--se a amplificação da tropoelastina e do ARN GAPDH mediante RT-PCR quantitativa convencional (TAQMAN, Perken/Elmer) utilizando iniciadores selectivos apropriados. Normalizou-se a expressão do gene da tropoelastina para a expressão do gene mantenedor ("housekeeping") convencional (GAPDH).

Realizaram-se as amostras em triplicado. Os resultados apresentam-se em baixo no Quadro II. Esses resultados demonstram que o ATRA (Agonista 4 dos RAR) estimula ligeiramente a indução do gene da tropoelastina quando comparado com o controlo e que o agonista selectivo para os RARy (Agonista 3 de dos RAR) estimula acentuadamente a indução do gene de tropoelastina. No entanto, os agonistas selectivos para os RARa e RARP (Agonistas 1 e 2 dos RAR) não induzem o gene da tropoelastina. 32

Quadro II RARy Dirige a Expressão do Gene da Tropoelastina em Fibroblastos do Pulmão Humano

Tratamento Transactivação Ligação Expressão da adicionado à CE50 (ηΜ) CI50 (ηΜ) Tropoelastina Cultura de Células (Elastina/GAPDH)xlO5 α 16,5 300 Agonista 1 dos RAR β 10000 10000 13, 93 Υ 10000 10000 α 2000 1000 Agonista 2 dos RAR β 39 28 1,95 Υ 160 300 α 1000 2700 Agonista 3 dos RAR β 88 3000 68, 58 Υ 15 210 ATRA α 6,7 14 Agonista 4 dos RAR β 3,8 14 35, 50 Υ 2,5 14 Controlo α ΝΑ 30, 90 CCD-16LU β ΝΑ Υ ΝΑ EXEMPLO 2 Ãgonistas Selectivos para os RAR no Pulmão de Camundongo

Avaliaram-se o ácido all-trans-retinóico (ATRA) e agonistas selectivos dos RAR quanto aos seus efeitos sobre a reparação alveolar no modelo de enfisema induzido pela elastase em camundongos (Massaro, G. e Massaro, D., Nature, Vol. 3 N.° 6: 675-677 (1997)). Dividiram-se os animais em grupos de tratamento de cerca de oito. Em camundongos machos Sprague Dawley, induziram-se nos pulmões um processo inflamatório e lesões alveolares mediante uma única instilação de 2U de elastase pancreática (derivado porcino, Calbiochem)/grama de massa do corpo. 33

Três semanas após a formação das lesões, dissolveu-se o ATRA ou um agonista selectivo dos RAR em DMSO (20 mg/ml) e guardou-se à temperatura de -20°C. Diariamente, recém-prepa-raram-se soluções base de trabalho ("working stocks") mediante diluição em óleo de milho até uma concentração final de 2 mg/ml. Aos animais tratados com ATRA e agonistas selectivos dos RAR (0,5 mg/Kg ip) administrou-se a dose uma vez por dia mediante injecção intraperitoneal, com inicio 21 dias após a formação das lesões. Estimularam-se ("were challenged") os grupos de controlo com elastase e 21 dias mais tarde trataram-se com Veículo (DMSO/PBS) durante 14 dias. Sacrificaram-se os animais 24 horas após a administração da última dose mediante exsanguinação sob anestesia profunda. Durante a exsanguinação, recolheu-se o sangue para estudo das alterações da química do sangue causadas pelos tratamentos respectivos.

Injectou-se ar para o interior dos pulmões com formalina tamponada neutra a 10% mediante instilação intratraqueal a uma velocidade constante (1 ml/grama de massa corporal/minuto). Excisou-se o pulmão e mergulhou-se em fixador durante 24 horas antes do processamento. Para preparar cortes em parafina de 5 pm utilizaram-se métodos convencionais. Coraram-se os cortes com Hematoxilina e Eosina (H%E). Para determinar o tamanho médio dos alvéolos e o número alveolar realizou-se uma análise morphométrica computadorizada.

Os resultados apresentam-se seguidamente no Quadro III. Esses resultados demonstram que o ATRA (Agonista 4 dos RAR) induz a reparação alveolar, invertendo a destruição alveolar provocada pelo tratamento com elastase. Os agonistas selectivos para os RARy e os RARy/β (Agonistas 3, 5, 6 e 7 34 dos RAR) induzem acentuadamente a reparação alveolar. No entanto, os agonistas selectivos para os RARP e os RARa (Agonista 1, 2 e 9 dos RAR) não induzem a reparação alveolar.

Além disso, realizaram-se micrografias ópticas dos cortes pulmonares. Realizaram-se micrografias de um pulmão normal de camundongo, um pulmão de camundongo danificado por elastase e tratado depois com o agonista 1 dos RAR (a selectivo), um pulmão de camundongo danificado por elastase e tratado depois com o agonista 2 dos RAR (β selectivo) , e um pulmão de camundongo danificado por elastase e tratado depois com o agonista 3 dos RAR (γ selectivo) . As micrograf ias revelaram enormes diferenças estruturais evidentes entre os pulmões que receberam os três tratamentos diferentes. Quando comparada com uma micrografia do pulmão normal de camundongo, a micrografia do pulmão tratado com um agonista selectivo para os RARy mostrou uma área alveolar semelhante à do pulmão normal de camundongo. A micrografia do pulmão tratado com o agonista selectivo para os RARa e a micrografia do pulmão tratado com o agonista selectivo para os RARP não inverteram a alteração provocada pelo tratamento com elastase. 35

Quadro III Agonistas Selectivos para os RAR no Pulmão do

Camundongo

Tratamento Admi ni s t rado Transactivação CE50 (nM) Ligação CX50 (nM) Área Alveolar Reparação em % Natural (não α NA tratado com p NA 1637 + /- 153 NA Elastase) NA Elastase + Veiculo α NA P NA 3570 + /- 319 NA r NA a 6,8 14 ATRA p 3,8 14 2607 + /- 191 50 Agonista 4 dos RAH γ 2,5 14 α 16,5 300 Agonista 1 dos RAR ρ 10000 10000 3058 +/- 160 <20 Ί 10000 1000 a 2000 1000 Agonista 2 dos RAR P 39 28 3653 +/- 550 <20 r 160 300 α 1000 2700 Agonista 3 dos RAR p 88 3000 1929 +/- 150 >70 T 15 210 α 10000 2300 Agonista 5 dos RAR p 10000 5400 2502 +/- 243 56 T 104 770 α 10000 3100 Agonista 6 dos RAR p 16 2100 1909 +/- 207 >70 T 15 2410 α 2700 6500 Agonista 7 dos RAR p 2300 4600 1817 +/- 241 >70 r 9 310 α 3 39 Agonista 9 dos RAR P 25 870 3323 +/- 406 <20 _r_ 40 4500 EXEMPLO 3

Efeitos de pan-agonistas dos RAR e de Agonistas de Retinóides Selectivos para os RARy e os RARy/β sobre os Níveis de Triglicéridos no Plasma

Induziu-se enfisema experimental em camundongos conforme descrito no Exemplo 2. Três (3) semanas após a formação das lesões trataram-se os animais com veículo (solução de Capmul) ou com retinóides preparados com Capmul e doseados oralmente a 1, 3 e 10 mg/kg de peso do corpo. Trataram-se os animais durante 14 dias antes do fim do estudo. Realizou-se a colheita do pulmão e a colheita de sangue conforme descrito no Exemplo 2. 36

Realizou-se a quantificação dos triglicéridos presentes no plasma dos camundongos após a utilização de processos estabelecidos nas instalações laboratoriais de uma clinica à qual nos associámos. Resumidamente, converteram-se os triglicéridos do plasma em di-hidroxiacetona e H2O2, mediante tratamento sequencial do plasma com lipase e gliceroquinase de acordo com as instruções descritas pelo fabricante do kit de triglicéridos/GPO (Boehringer Mannheim #1488872). Em um analisador químico Hitachi 911 Chemistry Analizer quantificou-se colorimetricamente a H2O2. Em camundongos normais os níveis de triglicéridos são 75 a 175 mg/dl.

Os resultados encontram-se indicados seguidamente no Quadro IV. Esses resultados demonstram que os pan-agonistas dos RAR (Agonistas 4 (ATRA) , 8 e 10 dos RAR) fazem com que os níveis de triglicéridos nos camundongos se encontrem ou na extremidade superior dos valores normais ou elevados. Em contraste, os retinóides selectivos para os RARy (Agonistas 3, 7 e 5 dos RAR) e os retinóides selectivos para os RARy/β (Agonista 6 dos RAR) não provocam a elevação dos níveis de triglicéridos; para esses retinóides que se abstraem dos RARa, os níveis de triglicéridos permanecem perfeitamente entre o valor médio e o valor mais baixo dos limites normais. Por consequência, parece que a actividade selectiva para os RARa se encontra ligada a níveis elevados de triglicéridos. 37

Quadro IV RARy Promove a Reparação e Abstrai-se dos Triglicéridos

Tratamento Administrado Selectividade do Receptor Reparação em % [Triglicéridos) mg/dl ATRA Agonista 4 dos RAR α,β,γ 37, 6 182 Agonista 8 dos RAR α,β,γ 57,1 178 Agonista 10 dos RAR α,β,γ 58,3 273 Agonista 6 dos RAR Υ,β 39 140 Agonista 3 dos RAR Υ 73,7 92 Agonista 7 dos RAR r 66 114 Agonista 5 dos RAR r 40 119 EXEMPLO 4

Estudo de um Ensaio Clínico

As condições, para os homens e as mulheres inscritos nesse estudo, são terem idades compreendidas entre 45 e 75 anos, uma história clinica de enfisema e terem deixado de fumar durante um intervalo de tempo de pelo menos 6 meses antes do início do estudo. Além disso, o paciente deve apresentar um mínimo de 2 ou de 3 dos seguintes critérios funcionais pulmonares: - TLC (capacidade total do pulmão) pós broncodilatador prevista > 110% (indicativo de hiperinflação). - FEV1 (volume expiratório forçado) pós broncodilatador previsto < 70% (indicativo de obstrução moderada da circulação do ar). - DLCO (diluição do monóxido de carbono no pulmão) prevista < 65% (indicativo de destruição moderada a grave das estruturas alveolares.

Além disso, os doentes devem apresentar evidência de enfisema suave a moderado por varrimento por TC, função renal e hepática adequadas e medula óssea normal. Os doentes que 38 possuírem um ou mais dos seguintes critérios serão excluídos do estudo: FEV1 <0,8 litros, perda de peso não explicada >10% do peso habitual por ano, infecções pulmonares recorrentes >2 por ano com expectoração em excesso de 3 colheres de sopa por dia, bronquiectasia, angina instável, hipertriglicéridos >300 mg por cento, hipercolesteroiemia >220%, dependência de esteróides orais, medicações simultâneas conhecidas por interferirem com os sistemas hepáticos P450, doença hepática aguda ou crónica resultante de um consumo excessivo de álcool ou história clínica de alergia aos retinóides.

Projecto do Estudo

Grupo N Dose Regime A 60 Placebo 5 dias/semana BI 60 lmg/kg/ 5 dias/semana B2 60 Img/kg 1 dia/semana Cl 60 0,lmg/kg/ 5 dias/semana C2 60 0,lmg/kg 1 dia/semana

Uma vez terminada a fase activa do tratamento observar--se-ão todos os doentes durante um período de 3 meses a fim de avaliar a melhoria ou a toxicidade residual pulmonar. O ensaio da função pulmonar (PFT) e os questionários baseados no sistema realizar-se-ão de 3 em 3 meses. 0 HRCT realizar--se-á apenas no início da despistagem e após a conclusão do tratamento. Os indivíduos que recebem uma dose elevada ou uma dose potencialmente baixa de retinóides podem demonstrar uma ou mais das seguintes respostas: redução em percentagem do declínio do FEV1 de 63 ml/anos até 31 ml/ano; mostrar uma melhoria inicial de 5% do FEV durante o primeiro ano de tratamento; melhoria da DLCO (5 a 10%); melhoria na qualidade de vida conforme determinado por um questionário padrão. 39 EXEMPLO 5

Determinação da Permuta Gasosa Pulmonar

Determinaram-se os gases no sangue pulmonar e arterial em um tratamento de camundongos que sofreram lesões + um tratamento com retinóides antes do fim do estudo. Submeteram-se os camundongos a uma anestesia profunda utilizando pentobarbital (50 mg/kg, i.p.) e inseriu-se uma cânula traqueal (PE 240). Ventilaram-se artificialmente os camundongos (f = 90, TV = aprox. 0,5 ml/100 g BW) utilizando uma pequena bomba respiratória para animais (Harvard). Para cada camundongo, ajustaram-se os parâmetros da bomba de modo a estabelecer um nível arterial de C02 para a artéria pulmonar (PC02) de 4-4,7 kPa (30-35 torr). Recolheram-se amostras do sangue arterial (aprox. 0,2 ml) a partir da aorta abdominal (A02) e analisaram-se imediatamente por meio do gás pHOx no sangue. Os dados apresentam-se sob a forma de percentagem (%) da recolha em relação aos camundongos tratados com elastase + veículo.

Conforme se mostra seguidamente, o tratamento dos camundongos com retinóides, que sofreram lesões com elastase, melhorou a permuta gasosa. Em particular, o Agonista 3 selectivo para os RARy foi mais eficaz e mais potente do que o pan-agonista (ATRA). Esse resultado é consistente com os efeitos sobre a reparação estrutural dos alvéolos nos Exemplos anteriores. A permuta gasosa melhorada correlaciona--se com uma redução do encurtamento da respiração ("shortness of breath") associada com o enfisema. Assim, o tratamento de um doente com um agonista selectivo para os RAR-gama terá como resultado o alívio de um dos sintomas principais do enfisema. 40

Composto Dose mg/kg PC02 P02 A02 ATRA Agonista 4 3, 0 69,1 49,1 74,8 Agonista 3 dos RAR 0,01 84,6 49, 8 100 A invenção anterior foi descrita com algum pormenor a titulo de ilustração e de exemplo, com a finalidade de clareza e compreensão. Será óbvio para um especialista com conhecimentos normais na matéria que poderá introduzir alterações e modificações no âmbito das reivindicações anexas. Por consequência, deve entender-se que a descrição anterior se destina a ser ilustrativa e não restritiva. 0 âmbito da presente invenção deve, por consequência, determinar-se com a informação das seguintes reivindicações anexas, conjuntamente com o âmbito completo de equivalentes às quais tais reivindicações se aplicam.

Lisboa, 2 de Janeiro de 2007

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um agonista selectivo para os RARy tendo em vista a preparação de medicamentos que contêm um ou mais desses agonistas para o tratamento do enfisema.

2. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que a selectividade dos agonistas selectivos para os RARy é, comparativamente com os receptores RARy, pelo menos, 20 vezes mais elevada do que a referente aos receptores RARa e RARp.

3. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que se escolhe o agonista selectivo para os RAR de entre compostos de fórmula geral I: fi'

I na qual o símbolo R1 representa um radical ("residue") de fórmula geral

ou

2 o símbolo R2 representa um grupo alcanoílo C2-C8, alquilo C2-C8, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8 ou um grupo de fórmula geral -OCH2R3; o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci~C6, alcenilo C2-C6 ou alcinilo C2-C6; os símbolos R4 a R9 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-C6; ou os símbolos R8 e R9 considerados conjuntamente representam um grupo de fórmula geral (CRaRb)n, na qual os símbolos Ra e Rb representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci~C6, o símbolo n representa R têm os o número inteiro 1, 2 ou 3 e os símbolos R4 significados definidos antes; o símbolo R10 representa um grupo carboxilo, alcoxi (Ci-—Cg) -carbonilo ou mono- ou di- (alquil-Ci-6) -carbamoílo; e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

4. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que se escolhe o agonista dos RAR de entre compostos de fórmula geral II: 0

na qual o símbolo R1 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo lí - Cg; o símbolo R2 representa um grupo alquilo Ci-Cè ou um grupo adamantilo; o símbolo R3 representa um grupo alquilo Ci~C6 ou um grupo hidroxi; ou 3 os símbolos R2 e R3 considerados conjuntamente representam um grupo de fórmula geral -(CR6R7)n- (na qual os símbolos R6 e R7 representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci~C6 e o símbolo n representa o número inteiro 3, 4 ou 5); o símbolo R4 representa um grupo alcanoílo C2-C8, alquilo C2-C8, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8 ou um grupo de fórmula geral -OCH2R5; o símbolo R5 representa um grupo alquilo Ci-Ce, alcenilo C2—Cê ou alcinilo C2-Cê; o símbolo Y representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

5. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que se escolhe o agonista dos RAR de entre compostos de fórmula geral III:

na qual os símbolos R1 a R3 e R5 representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono, um grupo alquilo de cadeia ramificada ou cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono, ou um grupo cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono comportando como substituinte um grupo alquilo inferior; o símbolo R4 representa um grupo alquilo inferior com a 1 a 6 átomos de carbono, um grupo alquilo de cadeia ramificada ou cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono ou um 4 grupo cicloalquilo com 3 a 15 átomos de carbono comportando como substituinte por um grupo alquilo inferior; o símbolo Y representa um grupo fenilo ou heteroarilo escolhido de entre um grupo que consiste em piridilo, tienilo, furilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, imidazolilo e oxazoliio, comportando os referidos grupos como substituinte um grupo representado pelo símbolo R5 definido anteriormente; o símbolo A representa um grupo de fórmula geral (CH2)n em que o símbolo n representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 5, um grupo alquilo inferior de cadeia ramificada com 3 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo com 3 a 6 átomos de carbono, alcenilo com 2 a 6 átomos de carbono e 1 ou 2 ligações duplas, alcinilo com 2 a 6 átomos de carbono e 1 ou 2 ligações triplas; o símbolo B representa um átomo de hidrogénio, um grupo COOH ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, -CH2OH, ou CHO, ou um grupo de fórmula geral COOR8, CONR9R10, CH2ORn, CH2OCOR11, CH(OR12)2, CH0R130, -COR7, CR7(OR12)2a ou CR70R130, em que o símbolo R7 representa um grupo alquilo, cicloalquilo ou alcenilo contendo 1 a 5 átomos de carbono, o símbolo R8 representa um grupo alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, ou um grupo cicloalquilo com 5 a 10 átomos de carbono, ou o símbolo R8 representa um grupo fenilo ou alquil (inferior)-fenilo, os símbolos R9 e R10 representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 10 átomos de carbono, ou um grupo cicloalquilo com 5 a 10 átomos de carbono ou fenilo ou alquil (inferior)-fenilo, o símbolo R11 representa um grupo alquilo inferior, fenilo ou alquil (inferior)-fenilo, o símbolo R12 representa um grupo alquilo inferior e o símbolo R13 representa um radicai divalente com 2 a 5 átomos de carbono. 5

6. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que se escolhe o agonista dos RAR de entre compostos de fórmula geral IV:

na qual o simbolo X representa F, Cl, OH ou CH3; o símbolo Y representa H ou F; os símbolos R1 a R6 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-C6; o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4; e o símbolo R' representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical carboxilo; e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

7. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que se escolhe o agonista dos RAR de entre compostos de fórmula geral V:

na qual os grupos designados pelo símbolo R são, independentemente, átomos de hidrogénio ou grupos alquilo inferior; 6 o símbolo A representa um grupo -C(0)0-, -0C(0)-, C(0)S- ou SC(0)-; o símbolo n representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 5; e o símbolo Z representa um átomo de H, um grupo ,-CHO ou um seu derivado acetálico, ou um grupo de fórmula geral -COB, -0E, ou -COR3 em que o símbolo B representa um grupo de fórmula geral -0R1 na qual o símbolo R1 representa um grupo formador da função éster ou o símbolo B representa um grupo de fórmula geral -N(R)2 na qual o símbolo R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; o símbolo E representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo formador da função éter ou um grupo de fórmula geral -COR2 na qual o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, fenilo, ou alquil (inferior)-fenilo; o símbolo R3 representa um grupo de fórmula geral -(CH2)mCH3 na qual o símbolo m representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e a soma dos números representados pelos símbolos nem não excede o número 4.

8. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que se escolhe o agonista dos RAR de entre compostos de fórmula geral VI

¥1 na qual o símbolo R1 representa um grupo CH2OH ou um grupo de fórmula geral C(0)R6 (em que o símbolo R6 representa um grupo hidroxi ou um grupo alcoxi Ci~C6) ; o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C15, alcoxi Cx-Ce ou cicloalifático; 7 o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, alquilo Ci-C6, di-hidroxi alquilo Ci-C6, alcoxi Ci-Cío ou cicloalifático; e os símbolos R4 e R5 representam, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, alquilo Ci-C6 ou alcoxi C1-C6.

9. Utilização de acordo com a reivindicação 1., em que o agonista dos RAR é um composto de fórmula geral VII:

Lisboa, 2 de Janeiro de 2007