CZ20021657A3

CZ20021657A3 - Léčení rozedmy pouľitím selektivních retinoidových antagonistů RAR

Info

Publication number: CZ20021657A3
Application number: CZ20021657A
Authority: CZ
Inventors: Paula Nanette Belloni; Michael Klaus
Original assignee: F. Hoffmann-La Roche Ag
Priority date: 1999-10-19
Filing date: 2000-10-13
Publication date: 2002-10-16
Also published as: US6300350B1; HUP0203295A3; JO2178B1; JP2007302689A; BR0015225A; YU29002A; HK1051002A1; EP1225878A1; PE20010678A1; TR200201071T2; ES2274810T3; NO20021823L; IL149151A0; DE60031790T2; RU2257383C2; WO2001030326A1; CA2387844A1; KR100485581B1; PL357499A1; CA2387844C

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká použití antagonistů receptorů retinové kyseliny (RAR) a zejména antagonistů receptorů retinové kyseliny, které jsou selektivní pro RARy.

Dosavadní stav techniky

Chronická obstruktivní plicní choroba (COPD) je významnou příčinou nemocnosti a úmrtnosti a je na třetím až čtvrtém místě jako příčina smrti v Evropské unii a Severní Americe. COPD se vyznačuje redukcí maximálního respiračního průtoku, který se nemění po několik měsíců a přetrvává 2 nebo více následujících let. Pacienti s nejvážnější formou COPD obecně vykazují značný stupeň rozedmy.

Rozedma je anatomicky definována trvalým zvětšením vzdušného prostoru distálně ke koncovým průdušinkám a postupnou ztrátou zpětného rázu plic, poškozením alveol, zmenšením plochy povrchu alveol a výměny plynu, což vede ke snížení FEV 1 (American Thoracic Society: Am. J. Resp. a Critical Care 152: S77-S124, 1995). Pacienti s rozedmou charakteristicky trpí fyziologickými poruchami, jako je snížená výměna plynů a redukce výdechového. Příznakem pacientů s těžkou rozedmou je zkrácení dechu i při minimální fyzické aktivitě.

Nejběžnější příčinou rozedmy je kouření cigaret, přestože k ní mohou přispívat i další potenciální toxiny životního prostředí. Tato škodlivá činidla aktivují v plicích jako nadměrný ochranný mechanismus destruktivní procesy včetně uvolnění aktivních proteas a oxidantů volných radikálů. Neřízené uvolnění aktivních proteas vytváří v plicích nerovnováhu proteasa/antiproteasa, která vede ke zničení elastinové matrice, ztrátě elastického zpětného rázu, poškození tkáně a plynulému poklesu funkce plic. Rychlost tohoto poškození lze snížit odstraněním škodlivých činidel (například nekouřením), ale ani pak nedochází k obnovení alveolárních struktur a funkce plic.

Per-trans retinová kyselina (ATRA) je multifunkční modulátor buněčného chování s potenciálem měnit jak metabolismus extracelulární matrice tak diferenciaci normálního epitelu. V plicích bylo u ATRA dokázáno, že moduluje různé aspekty plicní diferenciace interakcí se specifickými receptory retinové kyseliny (RAR) , které jsou dočasně a prostorově exprimovány. Koordinovaná aktivace RARP a RARy byla spojována s větvením plic, alveolizací/septací a genovou aktivací tropoelastinu u novorozených krys.

Během alveolární septace dochází ve fibroblastickém mesenchymu obklopujícím alveolární stěny k růstu granulí, kde se ukládá retinonová kyselina (retinyl-estery) increase (Liu a kol.; Am. J. Fysiol. 265: L430-L437, 1993; McGowan a kol.; J. Fysiol. 269: L463-L472, 1995), a k expresi RARy v plicních vrcholech (Ong D. E. a Chytil F., Proč. Nati. Acad. Sciences 73: 39763978, 1976; Gruffimer M. A., Thet L. a Zachman R. D., Pediatr. Pulm. 17: 234-238, 1994). Vyčerpání těchto zásob retinyl-esteru probíhá paralelně s ukládáním nové elastinové matrice a septací. Tento koncept podporuje publikace autorů Massaro a Massaro (Massaro D. a Massaro G., Am. J. Fysiol. 270, L305-L310, 1996), která uvádí, že postnatální podávání retinové kyseliny zvyšuje u krys počet alveol. Podávání dexamethasonu novorozeným krysám • · · ·· · ·· · ·· ·· • · · · · · · ···· ·· ··· ·· · ·· ···· inhibuje septaci plic. Tento efekt lze překonat doplňkovou léčbou retinovou kyselinou. Navíc ATRA u vyvíjecích se plic u krys ruší schopnost dexamethasonu bránit expresi CRBP a RARp mRNA a následné alveolární septaci.

Současné studie dokazují, že ATRA může ve zvířecím modelu rozedmy vyvolat tvorbu nových alveol a obnovit elastickou pružnost téměř na původní úroveň (Massaro D. a Massaro G., Nátuře Med. 3: 675-677, 1997; „Strategies to Augment Alveolization, National Heart, Lung, and Blood Institute, RFA: HL-98-Oll, 1998) . I když mechanismus, kterým tato změna probíhá zůstává nejasný.

Retinoidy jsou skupinou sloučenin strukturně příbuzných s vitaminem A a zahrnují přírodní i syntetické sloučeniny. Několik skupin retinoidů se ukázaly jako klinicky vhodné pro léčení dermatologických a onkologických chorob. Per-trans retinová kyselina (ATRA) a její další přírodní retinoidová analoga (9-cis retinová kyselina, per-trans-3,4-didhydroretinová kyselina, 4oxoretinová kyselina a retinol) jsou pleiotrofické regulátory sloučenin, které modulují strukturu a funkci široké škály zánětlivých, imunních a strukturních buněk. Zároveň jsou důležitými regulátory proliferace epitelových buněk, diferenciace a morfogenéze v plicích. Retinoidy uplatňují své biologické účinky prostřednictvím řady nukleárních receptorů, které jsou ligandově indukovatelnými transkripčními faktory, které patří skupiny steroidních/thyroidních receptorů.

Retinoidové receptory se dělí do dvou skupin: receptory retinové kyseliny (RAR) a receptory retinoidů X (RXR), z nichž každá skupina má tři odlišné subtypy (α, β a γ) . Každý subtyp skupiny genů RAR kóduje různý počet isoforem vycházející z různého spojení dvou primárních RNA transkriptů. ATRA je fyziologický hormon pro receptory retinové kyseliny a váže se s přibližně stej► · ··· · nou afinitou ke všem třem subtypům RAR. ATRA se neváže na RXR receptory; místo toho je přírodním ligandem pro tyto receptory

9-cis retinová kyselina.

V řadě neplicních tkání mají retinoidy protizánětlivé účinky, upravují progresi diferenciace epitelových buněk a inhibují produkci stromální buněčné matrice. Tyto vlastnosti vedly k vývoji topických retinoidových léčiv pro dermatologické poruchy, jako je psoriasa, akné a hypertrofické kožní jizvy. Mezi další aplikace patří ovlivňování akutní promyelocytické leukémie, karcinomu adenomózních a šupinovitých buněk a hepatické fibrosy. Terapeutické použití retinoidů jinde než u rakoviny je ale omezeno relativní toxicitou přírodních retinoidů, ATRA a 9cis RA. Tyto přírodní ligandy nejsou selektivní, a proto mají v těle pleiotrofické účinky, které jsou často toxické.

V současnosti byly popsány různé retinoidy, které selektivně nebo specificky interagují s RAR nebo RXR receptory nebo s jejich specifickými subtypy (α, β, γ) . Při použití těchto nových retinoidů byla oddělena transrepresní AP-1 aktivita a transaktivační aktivita retinoidů. (Li J. J. a kol., Cancer Research 56: 483-489 (1996); Fanjul A. a kol., Nátuře, 372: 107 III (1994); Schule R. a kol., PNAS, 88: 6092-6096 (1991); Nagpal a kol., Journal of Biological Chemistry 270: 923-927 (1995)). Navíc receptorové selektivní sloučeniny vykazují in vitro a in vivo nižší obecnou aktivitu. (Chandraratna R., J. Am. Acad. Dermatology, 39: S149 - S152, 1998; Look J. a kol., Am. J. Fysiol. 269: E91 - E98, 1995).

Podstata vynálezu

V jednom z aspektů tento vynález poskytuje použití selektivních antagonistů RAR γ pro léčení rozedmy a spojených plicních chorob. Použití retiniodů, které jsou alespoň RARy selektivní a ·· · ····<· ·· · · • · · · ·« · · * « « • · ··· ·· » ·· ····

RARa šetrné, podporuje regeneraci bez vyvolání nežádoucích účinků na hladinu plasmových triglyceridů.

V dalším aspektu tento vynález poskytuje použití RARy selektivních antagonistů pro stimulaci exprese tropoelastinového genu v lidských plicních fibroblastech.

Zde použitý termín (C_x-C_y) alkylová skupina znamená lineární nebo rozvětvený plně nasycený uhlovodíkový zbytek obsahující x ažo y atomů uhlíku; (C_x-C_y) f luoralkylová skupina znamená alkylový zbytek definovaný výše, kde je jeden nebo několik atomů vodíku připojených k uhlíkové kostře nahrazenou jedním nebo několika atomy fluoru.

Zde použitý termín (C_x-C_y)cykloalkylová skupina znamená plně nasycený cyklický uhlovodíkový zbytek obsahující x až y kruhových atomů uhlíku a zahrnuje bicyklické, polycyklické a přemostěné kruhové systémy, jako je cyklopropylová skupina, cyklopentylová skupina, dekalinylová skupina, adamantylová skupina apod.; termín cyklofluor-(C_x-C_y)-alkylová skupina znamená cykloalkylový zbytek definovaný výše, kde je jeden nebo několik atomů vodíku připojených k uhlíkové kostře nahrazenou jedním nebo několika atomy fluoru.

Zde použitý termín „E označuje stereochemickou konfiguraci na dvojné vazbě uhlík-uhlík, kde jsou 2 atomy vodíku připojené k různým atomům uhlíku na opačných stranách dvojné vazby uhlíkuhlík. Termín „Z označuje stereochemickou konfiguraci na dvojné vazbě uhlík-uhlík, kde jsou 2 atomy vodíku připojené k různým atomům uhlíku na stejné straně dvojně vazby uhlíkuhlík. (Pure Appl. Chem., 45, 13-30 (1976)).

• · 4 4 4 · · · · • · « « · · ·

4 4

4 4 4 « ··» ·· ·

Zde použitý termín ED označuje efektivní dávku a je použit v souvislosti se zvířecími modely. Termín EC označuje efektivní koncentraci a je použit v souvislosti s in vitro modely.

Zde použitý termín „ED₅₀ retinoidu pro receptor retinové kyseliny označuje molární koncentraci retinoidu ve zvířecím modelu, která transaktivuje konkrétní receptor příslušné retinové kyseliny na 50 % maximální transaktivace, kterou lze dosáhnout uvedeným retinoidem. Zde použitý termín „EC_S0 retinoidu pro receptor retinové kyseliny označuje molární koncentraci retinoidu ve zvířecím modelu, která transaktivuje konkrétní receptor příslušné retinové kyseliny na 50 % maximální transaktivace, kterou lze dosáhnout uvedeným retinoidem.

Zde použitý termín „retinoid je libovolná sloučenina schopná transaktivace libovolného nebo všech receptorů α, β nebo y RAR nebo RXR s hodnotou ED_S0 ve výši 1000 nm nebo méně.

Zde použitý termín „transaktivace označuje schopnost retinoidu aktivovat transkripci genu, kdy je transkripce genu zahájena vazbou ligandu na příslušný receptor testované retinové kyseliny tj . RARa, RARp nebo RARy. Stanovení schopnosti sloučeniny transaktivovat receptor retinové kyseliny lze provést metodami, které jsou v této oblasti techniky známé. Příklady těchto metod lze nalézt v publikaci Bernard a kol., Biochem. Biophys. Res. Commun. 186: 977-983 (1992) a C. Apfel a kol., Proč. Nat. Sci. Acad. (USA) 89: 7129-7133 (1992).

Zde použitý termín „RARy selektivní antagonista označuje sloučeninu, která je schopná selektivní vazby na RARy receptor a podpory aktivace RARy. RARy selektivní antagonisté se na RARy receptor váží při značně nižších koncentracích (>10 násobná selektivita, vhodně 50 až 100 násobná selektivita) než na recep• 4 4 · · 4 · · 4

4·· · « ·

444 44 « tory RARa a RARp. Vhodný profil aktivity nezpůsobí aktivaci receptoru RARa, což vede k vyšší selektivitě biologické reakce.

Zde použitý termín „RARy/β selektivní antagonista označuje látku, která se selektivně váže k receptorům RARy a RARP, což podporuje aktivaci receptorů RARy a RARP a neaktivuje receptory

RARa.

Zde použitý termín „RAR antagonista, který je alespoň gama selektivní a RAR a šetrný označuje látku, která je RARy selektivní nebo RARy/β selektivní.

Zde použitý termín „RAR pan antagonista je látka, která se váže na receptory RARa, RARP a RARy s podobnou afinitou a podporuje aktivaci RARa, RARP a RARy.

„Předléčivo je sloučenina, která, pokud se podává savcům, uvolňuje in vivo aktivní původní léčivo. Předléčiva se připraví modifikací funkčních skupin přítomných v aktivních léčivech tak, že modifikované skupiny mohou být in vivo štěpeny za uvolnění původní sloučeniny. Předléčiva zahrnují sloučeniny, kde je hydroxyskupina aktivního léčiva vázána na libovolnou skupinu, která může být in vivo odštěpena za regenerace volné hydroxylové skupiny. Příklady předléčiv zahrnují (ale nejen) estery (např. acetát, formiát a benzoát), karbamáty (např. N,N-dimethylaminokařbonylová skupina) a ethery apod. hydroxylové funkční skupiny aktivních léčiv. Tyto sloučeniny snadno připraví odborníci v této oblasti acylací nebo etherifikací hydroxylové skupiny původní sloučeniny.

Autoři předkládaného vynálezu objevili, že selektivní antagonisté RARy transaktivuji ve fibrolastech expresi tropoelastino«· 0« • · · · vého genu v plicích u lidí. Podobně bylo dokázáno, že RARy selektivní sloučeniny podporují reparaci a/nebo regeneraci krysích plicních alveol. Zatímco RARy selektivní retinoidoví ^rantagonisté indukují expresi tropoelastinu ve fibroblastech lidských plic, ani RARP ani RARa selektivní antagonisté tak nečiní. Proto je jedním z aspektů předkládaného vynálezu podpora produkce extracelulární matrice obsahující elastin u savců podáváním antagonisty, který je alespoň RARy selektivní.

Odborníci v této oblasti ale vědí, že předkládaný vynález zahrnuje použití všech RARy selektivních antagonistů a není omezen na RARy selektivní antagonisty popsané v předešlých odkazech nebo známé v rámci dosavadního stavu techniky. Obecně jsou všechny sloučeniny mající alespoň RARy selektivní antagonistickou aktivitu vhodné pro použití a způsoby podle předkládaného vynálezu.

Jedna skupina RARy selektivních antagonistů vhodných pro zde popsané způsoby je popsána v americkém patentu 5,700,836 z 23. prosince 1997 a odpovídá vzorci I

(I)

0 0000

000 0· · 0· 0000 kde R¹ je zbytek vzorce

R² je alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku nebo skupina -OCH₂R³;

R³ je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku;

R⁴ až R⁹ jsou každá nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; nebo R⁸ a R⁹ dohromady tvoří skupinu (CR^aR^b)n, kde R^a a R^b jsou nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a n je číslo 1, 2 nebo 3 a R⁴ až R⁷ jsou stejné, jako je uvedeno výše;

R¹⁰ je karboxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku nebo mono- nebo di-(C^galkyl) karbamoylová skupina;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

• 4 4 · · 44

449· 9« · 4999

44« 494 • 4 · 4 · 99 · 9 · 4444

Zejména vhodné jsou v této skupině sloučeniny vzorce

Ia nebo Ib:

(la) kde R² je alkylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku skupina, nebo skupina -OCH₂R³ alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku.

Konkrétněji R² je n-pentylová skupina, n-hexylová skupina, n-propoxyskupina, n-pentoxyskupina nebo n-hexanoylová skupina.

(Ib) kde R² je hexylová skupina nebo n-pentoxyskupina.

Další skupinou RARy selektivních antagonistů vhodných pro zde popsaný způsob je uvedena v americkém patentu 5,726,191 z 10. března 1998 a odpovídá vzorci II

O

(II) • 9 • t · *<· · «

t · · · · · kde R¹ je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

R² je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo adamantylová skupina;

R³ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo hydroxyskupina; nebo

R² a R³ spolu dohromady tvoří skupinu -(CR⁶R⁷)n- kde R⁶ a R⁷ jsou atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a n je číslo 3, 4 nebo 5);

R⁴ je alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku nebo skupina -OCH₂R⁵;

R⁵ je alkylová Skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku,·

Y je atom kyslíku nebo síry;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Zejména vhodné jsou v této skupině sloučeniny vzorce Ha •COOH

Ha a zejména ty, kde R⁴ je n-pentylová nebo n-hexylová skupina.

· 44 44 4 4

4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 »4 444 44 ·

4 4

444

Třetí skupina RARy selektivních antagonistů vhodných pro způsoby podle předkládaného vynálezu je popsána v americkém patentu číslo 5,498,795 z 12. března 1996 a odpovídá vzorci III

kde R¹ až R³ a R⁵ jsou nezávisle atomy vodíku, nižší alkylové skupiny obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, rozvětvené alkylové nebo cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 15 atomů uhlíku, nižší alkylové substituované cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 15 atomů uhlíku;

R⁴ je nižší alkylová skupina obsahující 1 6 atomů uhlíku, rozvětvená alkylová nebo cykloalkylové skupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku nebo nižší alkylová skupina substituovaná cykloalkylová skupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku;

Y je fenylová skupina nebo heteroarylová skupina vybraná ze skupiny, kterou tvoří pyridylová skupina, thienylová skupina, furylová skupina, pyridazinylová skupina, pirimidinylová skupina, pyrazinylová skupina, thiazolylová skupina, imidazolylová skupina a oxazolylová skupina a uvedené skupiny substituované skupinou R⁵ uvedenou výše;

A je skupina (CH₂)„, kde n je číslo 0 až 5, nižší rozvětvená alkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkylové skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a 1 nebo 2 dvojné vazby, alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a 1 nebo 2 trojné vazby,·

	« • ·	«« ♦ *<»«	·· • ·	«· • ·
• •	9
					♦
•	»♦	• * · ·	• · · ·· »	• ·	• ··♦·

B je atom vodíku, skupina COOH nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, skupina COOR⁸, skupina CONR⁹R¹⁰, skupina -CH2OH, skupina CH20R^1:l, skupina CHjOCOR¹¹, skupina CHO, skupina CH(OR¹²)2, skupina CHOR¹³O, skupina -COR⁷, skupina CR⁷(OR¹²)₂ nebo skupina CHOR¹³O, kde R⁷ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina nebo alkenylová skupina obsahující 1 až 5 atomů uhlíku, R⁸ je alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, nebo je R⁸ fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku nebo fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R¹¹ je nižší alkylová skupina, fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R¹² je nižší alkylová skupina a R¹³ je dvojvazný zbytek obsahující 2 až 5 atomů uhlíku.

Zejména vhodné RARy selektivní antagonisté jsou sloučeniny vzorce lila

Čtvrtou skupinou RARy selektivních antagonistů vhodných pro způsoby podle předkládaného vynálezu jsou sloučeniny popsané v americkém patentu 5,760,084 z 2. června 1998 a odpovídají vzorci IV · 00 ·«··

0 0 0 0 0 · *0 0 0 • 0 0 ·

0 0 0 ·· •0 000 00 «

0 0 0 0 00 0·

kde X je atom fluoru, atom chloru, hydroxyskupina nebo methylová skupina;

Y je atom vodíku nebo atom fluoru;

R¹ až R⁶ je každá nnezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

n je celé číslo 1 až 4; a

R⁷ je atom vodíku nebo chránící skupina karboxylu;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Zejména vhodné sloučeniny z této skupiny RARy selektivních antagonistů odpovídají vzorci IVa (BMS-961)

IVa

Pátou skupinou RARy selektivních antagonistů vhodných pro způsoby podle předkládaného vynálezu jsou sloučeniny popsané v americkém patentu 5,130,335 z 12. července 1992 a patentu 5,231,113 z 27. července 1993 a odpovídají vzorci V

kde R jsou nezávisle atomy vodíku nebo nižší alkylové skupiny;

A je skupina -C(0)0-, skupina -0C(0)-, skupina -C(O)S- nebo skupina SC(O)-;

n je celé číslo 0 až 5; a

Z je atom vodíku, skupina -COB, skupina -0E, skupina -CHO nebo její acetalový derivát nebo skupina -COR³, kde

B je skupina -OR¹, kde R¹ je esterotvorná skupina, nebo B je skupina -N(R)₂, kde R je atom vodíku nebo nižší alkylová skupina;

E je atom vodíku, etherotvorná skupina nebo skupina -COR², kde R² je atom vodíku, nižší alkylová skupina, fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina;

R³ je skupina -(CH₂)_raCH₃, kde m je číslo 0 až 4 a součet n a m nepřekračuje číslo 4.

Zejména vhodné sloučeniny z této skupiny RARy selektivních antagonistů jsou sloučeniny Va

• 4 ·	• 9 4 4	• 44 4 4	• 4 4 4	4· 4 4
4	4	4«
4
4	4	4	4 4	4	4 4	4
	4·	444	4·	4	« 4	44 4 4

Šestou skupinou RARy selektivních antagonistů vhodných pro způsoby podle předkládaného vynálezu jsou sloučeniny popsané PCT publikaci WO 97/37648 a francouzské patentové přihlášce FR2739557-A1 z 11. dubna 1997 a odpovídají vzorci VI

kde R¹ až R^s jsou popsány v poblikaci WO 97/37648.

Zejména je R¹ skupina C(O)R® nebo skupina CH₂OH (kde R⁶ je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku);

R² je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 15 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalifatická skupina,·

R³ je atom vodíku, hydroxyskupina, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, dihydroxyalkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalifatická skupina; a

R⁴ a R⁵ jsou nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku.

4 • 4 44	«4 ·«« » • 4 4	«4 • ·	44 4 4
• · · ··	• 4 · 4· 4	• 4 • 4	• • 4* » 4

Zejména vhodné sloučeniny z této skupiny RARy selektivních antagonistů jsou sloučeniny vzorce Via (CD-437) a vzorce VIb (CD2247) popsané v publikaci Biochem. Biophys. Res. Commun. 179: 1554-1561 (1991), Biochem. Biophys. Res. Commun. 186: 977-984 (1992) a Int. J. Cancer 71: 497 (1997).

(Via) (VIb)

Další zajímavé sloučeniny jsou X a XI ((R) a (S) enantiomery) COl. 8: 292-299 (1995) ) .

sloučeniny vzorce VII, VIII, IX, popsané v publikaci Skin Pharma-

I-Adamantyl (VII)

(X) (IX)

4* 9	99	4*99	• 4	49
•	•	··	9 9	9	4	•	4 9
•	•	•	• 4	4	4	4	1
•
•	4	4	4 4	4	4	4	4
• 4		• «4	44	•	49		444 4

(xi)

Další sloučeniny vhodné pro způsoby podle předkládaného vynálezu uvádí vzorec XII (J. Med. Chem. 39: 2411-2421 (1996) a Cancer Res. 55: 446 - 4451 (1995))

(XII) a vzorec XIII a XIV (Cancer Letters 115: 1-7 (1997))

(XIII) (XIV).

Další zajímavé sloučeniny představuje vzorec XV (J. Med. Chem. 32: 834-840 (1989) a japonský patent 62/053981, 1987)

RARy selektivní sloučeniny musí vykazovat minimálně lOx vyšší selektivitu než u RARa a RARP v testu transaktivace a vhodně více než lOOx vyšší selektivitu než u RARa.

(XV) .

	0 00 0	00 • «>	0000 • · • 0	' 00 • 0 <0 0	• 0 0 · •
• •	• 0
•	•	0	0	0 0	0 0	•
• 0		·♦*	0#	•	··	• 000

RARy antagonistickou selektivitu sloučenin lze stanovit rutinním testem ligandové vazby, které jsou odborníkům v této oblasti známé, jako je test popsaný v publikaci C. Apfel a kol., Proč. Nat. Sci. Acad. (USA), 89: 7129-7133 (1992); M. Teng a kol., J. Med. Chem. 40: 2445-2451 (1997); a PCT přihláška WO 96/30009.

Zde uvedení RARy selektivní antagonisté jsou vhodní pro podporu regenerace poškozených alveol a septace nových alveol. Jako takové jsou tyto sloučeniny vhodné pro léčení chorob, jako je rozedma.

Konkrétní dávkování RAR antagonistů nebo RARy selektivních antagonistů podle předkládaného vynálezu potřebné pro podporu reparace/regenerace alveol závisí na závažnosti léčeného stavu, způsobu podávání a dalších faktorech, které musí zhodnotit ošetřující lékař. Perorální dávkování je typicky v rozsahu 1,0 mg/kg tělesné hmotnosti a den (mg/kg/den) až 0,01 mg/kg/den, vhodně od 0,1 do 0,05 mg/kg tělesné hmotnosti a den. U člověka s hmotností 50 kg je perorální dávka aktivní složky od 50 do 0,5 mg, vhodně od 5 do 2,5 mg. Tuto dávku lze podat běžným farmaceutickým prostředkem jednorázově, několikanásobně nebo řízeným uvolňováním podle potřeby k dosažení nej lepších výsledků. Očekává se, že lokální aplikace aerosolem do plic sníží efektivní dávku lOx až lOOx (10 gg/kg/den na 0,1 Bg/kg/den). Podávání trvá tak dlouho jak vyžaduje medicínská indikace, která podle závažnosti choroby může být několik týdnů až několik měsíců.

Farmaceuticky přijatelný prostředek, jako je sůl nebo předléčivo RAR antagonisty se typicky podává ve farmaceuticky přijatelném nosiči nebo ředidle. V kontextu předkládaného vynálezu za•O 4 4 4 ···· 49 49

4949 99 9 9994 ••4 44 4 94 4444 hrnuje farmaceuticky přijatelná sůl libovolnou chemicky vhodnou sůl, která je známá v oblasti retinoidů jako vhodná pro podávání lidským pacientům. Příklady běžných solí, které jsou v této oblasti známé zahrnují soli alkalických kovů, jako jsou sodné a draselné soli, soli kovů alkalických zemin, jako jsou vápenaté a horečnaté soli, a amonné a alkylamoniové soli. Zejména vhodná předléčiva RARy antagonistů zahrnují hydrolyzovatelné estery, jsou aromatické a benzylové estery nebo (nižší alkyl)estery např. ethyl-, t-butyl-, cyklopentyl- apod. estery.

Mezi reprezentativní způsoby podávání patří perorální, parenterální (včetně podkožního, svalového a nitrožilního), rektální, bukální (včetně podjazykového), transdermální, plicní a nosní podávání. Jeden ze způsobů plicního podávání zahrnuje aerosolizaci vodného roztoku RAR antagonisty. Aerosolizované prostředky mohou,obsahovat sloučeniny obalené v reverzních micelách nebo liposomy. Jiným způsobem plicního podávání je podávání suchého prášku inhalačním zařízením a kapalné kompozice retinoidového antagonisty s polyethylenglykoly nebo vodným ethanolem pomocí elektrohydrodynamického inhalačního zařízení. Typické plicní a respirační podávači systémy jsou popsány v amerických patentech 5,607,915, 5,238,683, 5,292,499, a 5,364,615 a publikaci „Aerosol delivery liposomal ATRA to the lungs, Parthasarathy R., Gilbert B. M. a Mehra K., Cancer Chemotherapy Pharmacol, 43: 277-283, 1999.

Podle předkládaného vynálezu se rovněž jako léčiva, např. ve formě farmaceutické kompozice pro systemické podávání, používají RARy antagonisté v současné nebo následné kombinaci s dalšími aktivními činidly pro zlepšení mukokélové čistoty dýchacích cest nebo redukci viskozity hlenu. Reprezentativními příklady aktivních činidel pro zlepšení mukokélové čistoty dý• · · · · · chacích cest jsou například blokátory sodných kanálů (např. amilorid) nebo antibiotika (např. duramycin, nisin nebo subtilin) . Reprezentativní aktivní činidla pro redukci viskozity hlenu zahrnují N-acetylcystein, homocystein a fosfolipidy.

RARy antagonisté se typicky podávají jako farmaceutické prostředky ve směsi s farmaceuticky přijatelným netoxickým nosičem. Jak je uvedeno výše, lze tyto prostředky připravit pro parenterální podávání (podkožní, svalové nebo nitrožilní), zejména ve formě kapalných roztoků nebo suspenzí; pro perorální nebo bukální podávání zejména ve formě tablet nebo kapsulí; pro nosní podávání zejména ve formě prášků, nosních kapek nebo aerosolů; a pro rektální nebo transdermální podávání. Při tom lze použít libovolné běžné nosiče. Nosičem může být libovolný organický nebo anorganický nosič, jako je voda, želatina, arabská guma, laktosa, škrob, stearan hořečnatý, mastek, polyalkylenglykoly, vazelína apod.

Kapalné kompozice pro parenterální podávání nebo pro perorální mohou jako přísadu obsahovat sterilní vodu nebo šalin, alkylenglykoly, jako je propylenglykol, polyalkylenglykoly, jako je polyethylenglykol, oleje rostlinného původu, hydrogenované naftaleny apod. Dále mohou obsahovat mírně kyselé pufry v rozmezí pH od 4 do 6. Vhodné pufry zahrnují acetát, askorbát a citrát s koncentrací od 5 mM do 50 mM. Při perorálním podávání lze kompozice doplnit přidáním žlučových solí nebo acylkarnitinu.

Kompozice pro bukální podávání mohou být pevné a mohou jako typické přísady obsahovat cukry, stearan vápenatý, stearan hořečnatý, preželatinovaný škrob apod.

Pevné formy pro perorální podávání zahrnují tablety, tobolky z tvrdé a měkké želatiny, pilulky, pytlíčky, prášky, granule ♦ · · ······ ·· ·· • · · · · · · ···« • · · · · ·· · ·· ··· · apod. Každá tableta, pilulka nebo pytlíček může obsahovat od 5 do 200 mg RARy antagonisty, vhodně 10 až 50 mg. Mezi výhodné pevné petorální lékové formy patři tablety, dvoudílné tobolky z tvrdé želatiny a tobolky z měkké želatiny (SEG). Velmi zajímavé jsou SEG tobolky, protože mají oproti ostatním dvěma formám zřetelné výhody (viz. publikace Seager H., „Soft gelatin kapsules: a solution to many tableting problems, Pharmaceutical Technology 9: (1985). Některé z výhod použití SEG tobolek j sou::

a) homogenní dávka, protože se léčivo rozpustí nebo disperguje v kapalině, kterou lze přesně do tobolky dávkovat;

b) léčivo ve formě SEG tobolky vykazuje dobrou biologickou dostupnost, protože je rozpuštěno, solubilizováno nebo dispergováno ve s vodou mísitelné nebo olejové kapalině, a proto když se uvolňuje do těla, tak se rozpustí nebo emulguje za vzniku disperze léčiva s velkým povrchem; a

c) skořepina brání rozkladu léčiv, která jsou citlivá na oxidaci během dlouhodobého skladování.

Kompozice pro nosní podávání může být pevná a může obsahovat přísady, jako je laktosa nebo dextran, nebo se může jednat o vodný nebo olejový roztok pro použití ve formě nosních kapek nebo dávkovaného spreje. Vhodné nosní kompozice jsou suché prášky vhodné pro konvenční inhalátory suchého prášku (DPI), kapalné roztoky nebo suspenze vhodné pro rozprašování a kompozice s hnacím plynem vhodné pro použití v dávkovačích (MDI).

Při přípravě kompozice pro nosní podávání lze zlepšit absorpci nosní sliznicí použitím povrchově aktivní kyseliny, jako je například glykocholová kyselina, cholová kyselina, taurocholová kyselina, ethocholová kyselina, deoxycholová kyselina, chenode23 oxycholová kyselina, dehydrocholová kyselina, glykodeoxycholová kyselina, cyklodextriny apod., v množství 0,2 až 15 % hmotnostních, vhodně 0,5 až 4 % hmotnostní percent, nejvýhodněji kolem 2 % hmotnostních.

Podávání sloučenin podle předkládaného vynálezu pacientům po delší dobu, například 1 týden až 1 rok, lze realizovat jednorázovým podáním systému s řízeným uvolňováním, který obsahuje dostatečné množství aktivní složky pro celé požadované období. Pro tento účel lze použít různé systémy s řízeným uvolňováním, například monolitický nebo zásobníkový typ mikrokapsulí, zásobníkové implantáty, osmotické pumpy, měchýřky, micely, liposomy, transdermální náplasti, iontoforetické prostředky a alternativní injekční lékové formy. Další výhodou některých systémů s dlouhodobým uvolňováním je lokalizace v místě požadovaného působení aktivní složky, což může být přínosné při léčení některých chorob.

Následují reprezentativní farmaceutické kompozice vhodné pro podporu regenerace elastinové matrice a septace alveol při použití RARy selektivních antagonistů popsaných výše.

Tabletová kompozice

Níže uvedené složky se důkladně promísí a lisují se do tablet se žlábkem. V tabulce jsou uvedena množství v jedné tabletě obsahující 1,0 až 50 mg aktivní složky:

Složka _množství v tabletě (mg)

RAR antagonista 10 kukuřičný škrob 50 kroskarmelosa sodná 25 laktosa stearan hořečnatý

120

5,0

Tobolková kompozice

Níže uvedené složky se důkladně promísí a plní do tobolek z tvrdé želatiny. V tabulce jsou uvedena množství v jedné tobolce obsahující 5 mg aktivní složky:

Složka_množství v tobolce (mg)

RAR antagonista 5 rozstřikem sušená laktosa 148 stearan horečnatý 2

Suspenzní kompozice

Následující složky se smíchají za vzniku suspenze pro perorální podávání:

Složka

RAR antagonista fumarová kyselina chlorid sodný diethylparaben propylparaben granulovaný cukr sorbitol (70% roztok) Veegum K (Vanderbilt Co.) příchuť barvivo destilovaná voda množství 1,0 až 50 mg 0,5 g 2,0 g 0,15 g 0,05 g 25,5 g 12,85 g 1,0 g 0,035 ml 0,5 mg do 100 ml

Injekční kompozice

Následující složky se smíchají za vzniku injekční kompozice:

Složka množství

RAR antagonista

100 mg

0,4 M roztok octanu sodného (pufr)

1M HC1 nebo 1M NaOH voda (destilovaná, sterilní) , O ml do požadovaného pH do 20 ml

Nosní kompozice

Následující složky se smíchají za vzniku suspenze pro nosní podávání :

Složka

RAR antagonista kyselina citrónová citrát sodný benzalkoniumchlorid sorbitol taurocholát nebo glykocholát sodný množství mg/ml 0,2 mg/ml 2,6 mg/ml 0,2 mg/ml 35 mg/ml 10 mg/ml

Následují kompozice a příklady jsou zde uvedeny, aby odborníci v této oblasti lépe pochopili předkládaný vynález, a jako praktická ukázka provedení předkládaného vynálezu. Jejich účelem není vymezení vynálezu, ale jeho ilustrace a reprezentace.

Uvedené příklady využívají jednoho nebo několik RAR antagonistů uvedených v následující tabulce.

00

0 0 0 0 ·· • 9 9 09 ·90·

Tabulka I

RAR antagonisté použití v příkladech

R

ÁR ant:

ag

onista /

Stři

iktura t

ύ

t fJ F-^

F

^:ř

A ^S'F

i<£/~ ť

-c

ooh :

2

: : upr^

O Hlu : ;

k.l

-ΟαΰΜ . :

3
4
5	0

PŘÍKLAD 1

RAR transaktivace tropoelastinového genu v ustáleném stavu

Transaktivace tropoelastinového genu v normálních fibroblastech lidských plic (CCD-16Lu) se provádí následujícím způsobem: buňky se kultivují na stok, kdy se k základní kultuře přidá čerstvé médium +/- ATRA nebo selektivní retiniod. ATRA a/nebo selektivní retiniody se použijí s koncentrací lxlO'⁷ M. Buněčná vrstva se hydrolyzuje za použití pufru na bázi guanidinia (TRIZOL/Sigma) za účelem RNA extrakce a analýzy. Amplifikace tropoelastinu a GAPDH RNA se provede standardní kvantitativní

4« ·

« ·♦ 4··· ·

4444

RT-PCR (TAQMAN ód firmy Perken/Elmer) za použití příslušných selektivních primerů. Exprese tropoelastinového genu se normalizuje za exprese standardního genu bazálního metabolismu (GAPDH).

Každý pokus se provádí paralelně třikrát. Výsledky jsou uvedeny níže v tabulce II. Výsledky dokazují, že ATRA (RAR antagonista 4) indukuje indukci tropoelastinového genu v porovnání s kontrolním pokusem a s pokusem, kde RAR-γ selektivní antagonista (RAR antagonista 3) zjevně indukuje indukci tropoelastinového genu, jen nepatrně. Naproti tomu RARa a RARP selektivní antagonisté (RAR antagonisté 1 a 2) tropoelastinový gen neindukují.

Tabulka II

RARy podpora exprese tropoelastinového genu ve fibroblastech lidských plic

Látka přidaná		Transaktiva ϊ?ρ,_Λ ι'ηΜ'ι	ce Vazba <	Exprese ; troDoelastinu
do buněčné kultur				(Elastin/GAPDH)xlO⁵
RARAgoništl	Pí ) β 7 =	16.5 / 10000 1000Q	Λ ³⁰⁰ ιοοοό 10000 η	13.93 =;
	•ft	2000: -aft	1000 <	i ^:ό·<^:
·. XvAJtv Λ§ΟΠ15ΐ Z:	P : 7	160 :	300	Í.o5
	;tt :	1000;: ;	:: ΤΪΟΟ: <
: RAR Agonist3	β	88 =·	3000 :	68.58
	X-	15 J:	210

9 9» 99·« 9« 99

99 «9 9 9 9 9 9

999 9«« 9 9 4

999 999 999

999 99 « «9 9999

	ATRA RAR antagonista	4	a : β Ύ ·	6.7 3.8 2.5						14 : : 14 : 14 :					35.50
	kontrolní pokus ccd-ióLu i		a β Ύ	NA NA NA											30.90

PŘÍKLAD 2

RAR selektivní antagonisté v krysích plicích

V krysím modelu elastasou indukované rozedmy se hodnotí účinky per-trans retinové kyseliny (ATRA) a RAR selektivní antagonistů na regeneraci alveol (Massaro G. a Massaro D., Nátuře díl 3 č. 6: 675-677 (1997)). U samců Sprague Dawley krys se jednorázovým nakapáním pankreatické elastasy (vepřový původ, Calbiochem, 2 U/gram tělesné hmotnosti) vyvolá plicní zánět a poškození alveol.

Tři týdny po poškození se v DMSO rozpustí (20 mg/ml) ATRA nebo RAR selektivní antagonista a roztok se skladuje při -20 °C. Pracovní roztoky se připravují vždy v den použití zředěním v kukuřičném oleji na finální koncentraci 2 mg/ml. Zvířatům léčeným ATRA a RAR selektivním antagonistou (0,5 mg/Kg i.p.) se tato látka podá jednou denně intraperitoneální injekcí, začne se 21 dnů po poškození. Kontrolní skupina se aktivuje elastasou a po 21 dnech se 14 dnů léčí nosičem (DMSO/PBS) . 24 hodin po poslední dávce se zvířata usmrtí odkrvením v hluboké narkóze. Krev se při odkrvení uschová pro analýzu změn následkem jednotlivých druhů léčby.

Potom se plíce zvířat naplní 10% neutrálně pufrovaným formalinem intratracheálním nakapáním s konstantní rychlostí

•	«4	•	• * 4	4* 4	4	4 4·· 4	• 4 4	9	44 4 9
•		•	•	4	4	4	4	4	4
•		•	4	4	4	4	4	4	4
	44		* 44	44		4	4 4		4 4 4 4

(1 ml/gram tělesné hmotnosti min'¹) . Plíce se pak vyjmou a před zpracováním se ponoří na 24 hodin do fixativa. Standardním postupem se pak připraví 5 μτη segmenty, které se pak barví hematoxylinem a eosinem (H%E). Průměrná velikost a počet alveol se pak stanoví počítačovou morfometrickou analýzou.

Výsledky jsou uvedeny níže v tabulce III a dokazují, že ATRA (RAR antagonista 4) indukuje regeneraci alveol za eliminace poškození způsobeného podáním elastasy. Znatelnou regeneraci alveol indukují i RARy a RARy/β selektivní antagonisté (RAR antagonisté 3, 5, 6 a 7) . Naproti tomu RARP a RARa selektivní antagonisté (RAR antagonisté 1, 2 a 9) regeneraci alveol neindukuj i.

Navíc byly pořízeny světelné mikrogramy segmentů plic a to z normálních krysích plic, krysích plic poškozených elastasou a pak léčených RAR antagonistou 1 (a selektivní), krysích plic poškozených elastasou a pak léčených RAR antagonistou 2 (β selektivní) , krysích plic poškozených elastasou a pak léčených RAR antagonistou 3 (y selektivní). Mikrografy odhalily ohromné strukturní rozdíly mezi segmenty plic, které byly léčeny různými způsoby. Mikrograf plic léčených RARy selektivním antagonistou vykazují plochu alveol podobnou jako u plic normálních krys. Mikrograf plic léčených RARa selektivním antagonistou a mikrograf plic léčených RARP nevykazuje žádný vliv na změny způsobené elastasou.

·« 00

0 0

Tabulka III - RAR selektivní antagonisté v krysích plicích

0« 0 • · 00

9999

0··

0

0000

Leč

ení

Tra ECi

nsak ů (ni/

tiva 0 i

cě _;

Ve i ic

izba io (n

< 7 M)

F

’loch alved

a 1 :

□bnc

vy

Kontro (bez e

lni p last;

>oku asý)

s

'ď β γ

NA NA NA

16

37+/-

153

ŇA

Elastasa + nosič

α β ϊ

NA NA NA.

35

70+/-

315

i:

ná ;

ATRA RAR antagi

onis

ta 4

o. β T

6.8 3,8 2.5;

14 : 14 14 =

26

07+/

- 10

1

50 :

RAR antagi

qnis

tát

α β : -Ύ .

16-5 100 100

00 ; 00 <

300 ^1000í 1000(

3 3 i

30

58+/

-16

Ó

<20:

: RAR i antac

jqnií

sta2

]

A iP = J;

200 39 160

ό ’·;

1Q0Q : 28 300

36

53 +/

'-55

0

<20

RAR : antag

jonií

sta 2

l:

A p ! r

100 88: 15

o

2700 ( 3000 210

= 1S

»29-b

'-15

0

>70

99

9 9 9

9« 9 • 999 9

9 9 9 ·» 9999 • 9 • 9 9 9 9 9 •9 999 9« 9

;R a

AR itag

onis

ta 5

c f Ί

l r r

100( 1ÓO( 104

30 30

2300 5400 770

2

502-

Ϊ43

56.

F a

?AR ntac

loni*

sta €

c í

t í f·

10CK 16 15

30

3100 2100 2410

1

909-

'07

>70

1

^AR arita;

gohí

sta j

i

í f J

L J /

270< 230< 9 :

3 3

6500 4600 310

i

817-

h/- 2

E41

>70

f ·£

ÚR jntac

joni;

Sta í

)i

i f

l i

3 : 25; 40

39 : 870 4500

.3

1323-

ij-4

106

<20

PŘIKLAD 3

Účinek RAR pan-antagonisty a RARy a RARy/β selektivních retinoidových antagonistů na hladinu triglyceridů v plasmě

Experimentální rozedma se u krys indukuje stejně jako v příkladu 2. Tři (3) týdny po poškození se zvířatům perorálně podá nosič (Capmulův roztok) nebo retinoid v Capmulově roztoku v dávce 1, 3 a 10 mg/kg hmotnosti těla. Zvířata se léčí 14 dnů a pak se studie ukončí. Zpracování plic a krve se provede stejně jako v příkladu 2.

Stanovení obsahu trilyceridů v plasmě krys se provede použitím zavedených postupů v kontaktním klinickém laboratorním prostředku. Plasmové triglyceridy se převedou do dihydroxyacetonu a H₂O₂ postupným zpracováním plasmy přídavkem lipasy a glycerokinasy podle pokynů výrobce triglycerid/GPO sady (Boehringer Mannheim #1488872) . H₂0₂ se stanoví kolorimetricky v chemickém analyzátoru Hitachi 911. U krys je normální hladina triglyceridů 75 až 175 mg/dl.

4» · • · · «« ·»*« *4 • <· ·

444 444 444

444 4« 4 4 6 · β 4

Získané výsledky uvádí tabulka IV níže. Tyto výsledky dokazují, že RAR pan-antagonisté (RAR antagonisté 4 (ATRA), 8 a 10) posunují u krys hladinu trialyceridů k horní hranici normálu nebo nad ni. Naproti tomu RARy selektivní retiniody (RAR antagonisté 3, 7 a 5) a RARy/β selektivní retinoidy (RAR antagonista 6) nezvyšují hladinu triglyceridů; u těchto RARa šetrných retinoidů zůstává hladina triglyceridů ve středu až minimu normálního rozmezí. Proto se zdá, že je RARa selektivní aktivita spojena se zvýšenou hladinou triglyceridů.

Tabulka IV

RARy podporuje obnovu alveol a nezvyšuje triglyceridy

léčba ;;

Š

ele

kti’

dta re

čei

ÓtÓ

ru

obnc

/cerid)

11

·: ATRA RAR antagonista 4

α,ίβ,Ι

ř:

37.6

182;

RAR antagonista 8

α,β,ϊ

t:

57.1

178

RAR antagonista IC

α,β,ύ

t-

58.3

273·

RAR antagonista Q\

γ,β

' 39

140

:RÁR antagoriišta 3

• γ :

73.7

92

RAR antagonista 7

‘ v =

66

: Π4

RAR antagonista 5

7 ·

40

119

PŘÍKLAD 4

Klinické zkoušky

Muži a ženy v této studii byli ve věku 45-75 let, historicky měli rozedmu a minimálně 6 měsíců před vstupem do zkoušek přestali kouřit. Navíc musely být splněny 2 z následujících 3 podmínek plicní funkce:

·	·· ·*··	··
• · ··	• · ·	» · · 1
• · ·	• · ·	i · ·
• 4 9··	·* 0	·« <4··

- postbronchodialátor TLC (celková plicní kapacita) >110 % předpovídané hodnoty (udávající hyperinfláci)

- postbronchodialátor FEV1 (nucený výdechový objem) < 70 % předpovídané hodnoty (udávající průměrné zablokování průtoku vzduchu)

- DLCO (zředění plicního oxidu uhelnatého) < 65 % předpovídané hodnoty (udávající střední až těžké poškození struktury alveol) .

Navíc pacienti v CT snímku evidentní mírnou až střední rozedmu, dostatečnou funkci ledvin a jater a normální kostní dřeň.

Pokud se u pacienta projevila jedna z následujících hodnot, byl vyloučen ze studie:

FEVl<0,8 litru, nevysvětlitelná ztráta hmotnosti >10 % obvyklé hmotnosti za rok, opakované plicní infekce > 2x za rok s objemem chrchlů více než 3 polévkové lžíce/den, bronchiextasa, nestabilní angína, hypertriglyceridy >300 mg% , hypercholesteremie >220 %, perorální závislost na steroidech, současná medikace, u které je známá interference s P450 hepatickými systémy, akutní nebo chronické onemocnění jater následkem nadměrného požívání alkoholu nebo historická alergie na retinoidy.

Návrh studie

Skupina	N	Dávka	Režim
A	60	placebo	5 dnů/týden
Bl	60	1 mg/kg	5 dnů/týden
B2	60	1 mg/kg	1 den/týden
Cl	60	0,1 mg/kg	5 dnů/týden
C2	60	0,1 mg/kg	1 den/týden

Všichni pacienti budou sledováni 3 měsíce po ukončení aktivní léčby za účelem stanovení trvalého zlepšení stavu plic nebo toxicity. Každé 3 měsíce bude prováděno testování plicní funkce (PFT) a budou vyplňovány systematické dotazníky. Vyšetření HRCT se provádí pouze na začátku a po ukončení léčby. Jednotlivci, kteří dostávají vysoké nebo nízké dávky retinoidů mohou vykazovat jednu nebo několik následujících reakcí: redukce sestupu ve FEV1 od 63 ml/rok do 31 ml/rok; počáteční 5% zlepšení FEV během prvního roku léčení; zlepšení v DLCo (5-10 %) ; zlepšení kvality života podle standardního dotazníku.

PŘÍKLAD 5

Stanovení výměny plicních plynů

Před ukončením studie se u elastasou poškozených krys stanoví plyny v plicích a tepenné krvi ± léčba retinoidy. Krysy se pentobarbitalem (50 mg/kg i.p.) uvedou do hluboké narkózy a zavede se tracheální kanyla (PE 240) . Zároveň se nasadí umělá ventilace (f = 90, TV= 0,5 ml/100 g BW) za použití respirační pumpy pro malá zvířata (Harvard). U každého zvířete se parametry pumpy upraví tak, aby byla hladina tepenného CO₂ v plicní tepně (PCO₂) 4 až 4,7 kPa (30-35 torr) . Pak se z břišní aorty (AO2) odeberou 0,2 ml vzorky krve a okamžitě se stanoví pHO_x krevní plyn. Výsledky se vyjádří jako podíl (%) obnovy vzhledem ke krysám léčeným elastasou + nosičem.

Jak je uvedeno dole, léčení retinoidy u krys poškozených elastasou zlepšuje výměnu plynů. Zejména RARy selektivní antagonista 3 je účinnější než pan-antagonista (ATRA). Tento výsledek odpovídá účinku na obnovu alveol v příkladech uvedených výše.

Zlepšená výměna plynů koreluje s poklesem zkrácení dechu spoje·· ·· • · · něho s rozedmou. Proto léčení pacientů RARy selektivními antagonisty vede ke zlepšení hlavních příznaků rozedmy.

Sloučenina	Dávka mg/kg	PCO2	P02	AO2
ATRA antagonista 4	3,0	69,1	49,1	74,8
RAR antagonista 3	0,01	84,6	49,8	100

Vynález byl kvůli srozumitelnosti popsán některými detaily a to ilustrací příklady. Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že v rámci připojených nároků lze provést řadu změn a modifikací. Proto se rozumí, že -výše uvedený popis je pouze ilustrativní a není omezující. Rámec vynálezu je proto stanoven s odkazem na následující připojené nároky, které zahrnují i celou škálu možných ekvivalentů.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití RAR antagonisty, který je alespoň gama selektivní a a je RARa šetrný, pro výrobu léčiv obsahujících jednoho nebo několik takových antagonistů pro léčení rozedmy.
2. Použití podle nároku 1, kde RAR antagonista je RARy/β selektivní antagonista.
3. Použití podle nároku 1, kde RAR antagonista je RARy selektivní antagonista.
4. Použití podle nároku 3, kde se RARy selektivní antagonista váže na RARy receptor a transaktivuje s EC_S0 alespoň 200 nM.
5. Použití podle nároku 3, kde je selektivita RARy selektivního antagonisty pro RARy receptor alespoň 20násobná oproti RARa a RARp receptořům.
6. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce I (I) ·» 4 4 4 4444 44 44

4444 44 4 444 ·· 444 444 ·· ·44 44 4 φ» ··· kde R¹ je zbytek vzorce

R² je alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku nebo skupina -0CH₂R³;

R³ je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku;

R⁴ až R⁹ jsou každá nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; nebo R⁸ a R⁹ dohromady tvoří skupinu (CR^aR^b)n, kde R^a a R^b jsou nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a n je číslo 1, 2 nebo 3 a R⁴ až R⁷ jsou stejné, jako je uvedeno výše;

R¹⁰ je karboxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku nebo mono- nebo dialkylkarbamoylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

• 4 * * · 4 4 4 4 4 · · ·

4«·· 4 · · ««· ·· 444 44 · 44 444
7. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce II (II) kde R¹ je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

R² je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo adamantylová skupina;

R³ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo hydroxy s kup i na ,· nebo

R² a R³ spolu dohromady tvoří skupinu -(CR^sR⁷)n-, kde R⁶ a R⁷jsou atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a n je číslo 3, 4 nebo 5);

R⁴ je alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku nebo skupina -OCH₂R^S;

R⁵ je alkylová Skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku;

Y je atom kyslíku nebo síry;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

• · * 444444 4· 4· • 4 4 4 ·· 4 ···· ••4 444 44 · • 4 444 444 ·· ··· 44 · 444444
8. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce III kde R¹ až R³ a R⁵ jsou nezávisle atomy vodíku, nižší alkylové skupiny obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, rozvětvené alkylové nebo cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 15 atomů uhlíku, nižším alkylem substituované cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 15 atomů uhlíku;

R⁴ je nižší alkylová skupina obsahující 1 6 atomů uhlíku, rozvětvená alkylová nebo cykloalkylové skupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku nebo nižším alkylem substituovaná cykloalkylové skupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku;

Y je fenylová skupina nebo heteroarylová skupina vybraná ze skupiny, kterou tvoří pyridylová skupina, thienylová skupina, furylová skupina, pyridazinylová skupina, pirimidinylová skupina, pyrazinylová skupina, thiazolylová skupina, imidazolylová skupina a oxazolylová skupina a uvedené skupiny substituované skupinou R⁵ uvedenou výše;

A je skupina (CH₂)_n, kde n je číslo 0 až 5, nižší rozvětvená alkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkylové skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a 1 nebo 2 dvojné vazby, alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a 1 nebo 2 trojné vazby;

• 0 · ·· ··«· ·· «· ···· · · · « ♦ « «

B je atom vodíku, skupina COOH nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, skupina COOR⁸, skupina CONR^SR¹⁰, skupina -CH2OH, skupina CH2OR^1:L, skupina C^OCOR¹¹, skupina CHO, skupina CH(OR¹²)2, skupina CHOR¹³O, skupina -COR⁷, skupina CR⁷(OR¹²)₂ nebo skupina CHOR¹³O, kde R⁷ je alkylová skupina, cykloalkyl ová skupina nebo alkenylová skupina obsahující 1 až 5 atomů uhlíku, R⁸ je alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, nebo je R⁸ fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku nebo fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R¹¹ je nižší alkylová skupina, fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R¹² je nižší alkylová skupina a R¹³ je dvojvazný alkylový zbytek obsahující 2 až 5 atomů uhlíku.
9. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce IV kde X je atom fluoru, atom chloru, hydroxyskupina nebo methylová skupina;

Y je atom vodíku nebo atom fluoru;

R¹ až R⁶ je každá nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; n je celé číslo 1 až 4; a

R⁷ je atom vodíku nebo chránící skupina karboxylu;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
10. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce V kde R jsou nezávisle atomy vodíku nebo nižší alkylové skupiny;

A je skupina -C(0)0-, skupina -0C(0)-, skupina -C(O)S- nebo skupina SC(O)-;

n je celé číslo 0 až 5; a

Z je atom vodíku, skupina -COB, skupina -0E, skupina -CHO nebo její acetalový derivát nebo skupina -COR³, kde

B je skupina -OR¹, kde R¹ je esterotvorná skupina, nebo B je skupina -N(R)₂, kde R je atom vodíku nebo nižší alkylová skupina;

E je atom vodíku, etherotvorná skupina nebo skupina -COR², kde R² je atom vodíku, nižší alkylová skupina, fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina;

R³ je skupina -(CH₂)_mCH₃, kde m je číslo 0 až 4 a součet n a m nepřekračuje číslo 4.
11. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonista sloučenina vzorce VI ·· · *· ·»♦· «« ·· • · ·« 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 ··· ·· ♦ · * 999 9

R, (VI) kde R¹ je skupina C(O)R^S nebo skupina CH₂OH (kde R⁶ je hydroxyskupina nebo aikoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku);

R² je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 15 atomů uhlíku, aikoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalifatická skupina;

R³ je atom vodíku, hydroxyskupina, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, dihydroxyalkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, aikoxyskupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalifatická skupina; a

R⁴ a R⁵ jsou nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, aikoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku.
12. Použití podle nároku 3, kde je RAR antagonistou sloučenina vzorce VII (VII).
13. Použití podle nároku 2, kde je RAR antagonistou sloučenina vzorce VIII • 4

44 4

4 4 9 4 4 4 ·· ♦ 44 ·· (VIII).

gama selektivní
14. Použití RAR antagonistů, kteří jsou alespoň a jsou RARa šetrní, pro výrobu léčiv obsahujících jednoho nebo několik takových antagonistů pro léčení chorob spojených s poškozením alveol.
15. Použití podle nároku 14, kde je RAR antagonistou RAR γ/β selektivní antagonista.
16. Použití podle nároku 14, kde je RAR antagonistou RARy selektivní antagonista.
17. Použití podle nároku 16, kde se RARy selektivní antagonista váže na RARy receptor a transaktivuje s EC₅₀ alespoň 200 nM.
18. Použití podle nároku 16, kde je selektivita RARy selektivního antagonisty pro RARy receptor alespoň 20násobná oproti RARa a RARP receptorům.
19. Použití podle nároku 16, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce I (I) • 9 999 · ·· ·· » ·· 4 kde R¹ je zbytek vzorce nebo ,10 atomů uhlíku, alkvR² je alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 lová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku nebo skupina -0CH₂R³;

R³ je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku;

R⁴ až R⁹ jsou každá nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; nebo R⁸ a R⁹ dohromady tvoří skupinu (CR^aR^b)n, kde R^a a R^b jsou nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a n je číslo 1, 2 nebo 3 a R⁴ až R⁷ jsou stejné, jako je uvedeno výše;

R¹⁰ je karboxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku nebo mono- nebo dialkylkarbamoylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

00 0 00 0 • 0 0 0 000 0 0 0 0 0 00 • 0 00 • · 0 * • 0 0 • 0 0 0 0 0 0 0 0 0 • 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ··· 0
20. Použiti podle nároku 16, kde ja RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce II (II) kde R¹ je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

R² je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo adamanty1ová skupina;

R³ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo hydroxyskupina; nebo

R² a R³ spolu dohromady tvoří skupinu -(CR⁶R⁷)n- kde R⁶ a R⁷ jsou atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a n je číslo 3, 4 nebo 5);

R⁴ je alkanoylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku nebo skupina -OCH₂R⁵;

R⁵ je alkylová Skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku;

Y je atom kyslíku nebo síry;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
21. Použití podle nároku 16, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce III kde R¹ až R³ a R⁵ jsou nezávisle atomy vodíku, nižší alkylové skupiny obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, rozvětvené alkylové nebo cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 15 atomů uhlíku, nižším alkylem substituované cykloalkylové skupiny obsahující 3 až 15 atomů uhlíku;

R⁴ je nižší alkylová skupina obsahující 1 6 atomů uhlíku, rozvětvená alkylová nebo cykloalkylové skupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku nebo nižším alkylem substituovaná cykloalkylové skupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku;

Y je fenylová skupina nebo heteroarylová skupina vybraná ze skupiny, kterou tvoří pyridylová skupina, thienylová skupina, furylová skupina, pyridazinylová skupina, pirimidinylová skupina, pyrazinylová skupina, thiazolylová skupina, imidazolylová skupina a oxazolylová skupina a uvedené skupiny substituované skupinou R⁵ uvedenou výše;

A je skupina (CH₂)_n, kde n je číslo 0 až 5, nižší rozvětvená alkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkylové skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a 1 nebo 2 dvojné vazby, alkynylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a 1 nebo 2 trojné vazby;

*

4 4* >44 •4 4444

B je atom vodíku, skupina COOH nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, skupina COOR³, skupina CONR^SR¹⁰, skupina -CH2OH, skupina CHjOR¹¹, skupina CHjOCOR¹¹, skupina CHO, skupina CH(OR¹²)2, skupina CHOR¹³O, skupina -COR⁷, skupina CR⁷(OR¹²)₂ nebo skupina CHOR¹³O, kde R⁷ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina nebo alkenylová skupina obsahující 1 až 5 atomů uhlíku, R⁸ je alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku, nebo je R⁸ fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R⁹ a R^la jsou nezávisle atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalkylová skupina obsahující 5 až 10 atomů uhlíku nebo fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R¹¹ je nižší alkylová skupina, fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina, R¹² je nižší alkylová skupina a R¹³ je dvojvazný zbytek obsahující 2 až 5 atomů uhlíku.
22. Použití podle nároku 16, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce IV kde X je atom fluoru, atom chloru, hydroxyskupina nebo methylová skupina;

Y je atom vodíku nebo atom fluoru;

R¹ až R⁶ je každá nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; n je celé číslo 1 až 4; a

R⁷ je atom vodíku nebo chránící skupina karboxylu;

9999 99 9· • • • · • 9 9 9 • · • 9 • 4 9 9 9 • • « 9 • 9 9 9 9 • · 99 • ·« 99 9 99 ···

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
23. Použití podle nároku 16, je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce V (V) kde R jsou nezávisle atomy vodíku nebo nižší alkylové skupiny;

A je skupina -C(O)O-, skupina -0C(0)-, skupina -C(O)S- nebo skupina SC(O)-;

n je celé číslo 0 až 5; a

Z je atom vodíku, skupina -COB, skupina -0E, skupina -CHO nebo její acetalovy derivát nebo skupina -COR³, kde

B je skupina -OR¹, kde R¹ je esterotvorná skupina, nebo B je skupina -N(R)₂, kde R je atom vodíku nebo nižší alkylová skupina;

E je atom vodíku, etherotvorná skupina nebo skupina -COR², kde R² je atom vodíku, nižší alkylová skupina, fenylová skupina nebo nižší alkylfenylová skupina;

R³ je skupina -(CH₂)_mCH₃, kde m je číslo 0 až 4 a součet n a m nepřekračuje číslo 4.
24. Použití podle nároku 16, kde je RAR antagonista vybrán ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny vzorce VI (VI) kde R¹ je skupina C(O)R⁶ nebo skupina CH₂OH (kde R⁶ je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku);

R² je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 15 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalifatická skupina,·

R³ je atom vodíku, hydroxyskupina, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, dihydroxyalkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku nebo cykloalifatická skupina; a

R⁴ a R⁵ jsou nezávisle atom vodíku, hydroxyskupina, alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku.
25. Použití podle nároku 16, kde je RAR antagonistou sloučenina vzorce VII