PL205559B1 - Sposób syntezy peptydów w roztworze, sposób kombinatoryjnej syntezy biblioteki peptydów i sposób zautomatyzowanej syntezy peptydów w roztworze - Google Patents
Sposób syntezy peptydów w roztworze, sposób kombinatoryjnej syntezy biblioteki peptydów i sposób zautomatyzowanej syntezy peptydów w roztworzeInfo
- Publication number
- PL205559B1 PL205559B1 PL355125A PL35512502A PL205559B1 PL 205559 B1 PL205559 B1 PL 205559B1 PL 355125 A PL355125 A PL 355125A PL 35512502 A PL35512502 A PL 35512502A PL 205559 B1 PL205559 B1 PL 205559B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- scavenger
- amine
- anion
- component
- carried out
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 111
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 46
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 45
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims abstract description 37
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 27
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 70
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 35
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 26
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 9
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 9
- CANCPUBPPUIWPX-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-aminopropanoate Chemical group NCCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 CANCPUBPPUIWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 claims description 5
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 claims description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 abstract description 6
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 46
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 24
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 23
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 23
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- -1 1,1-dioxobenzo [b] thiophene-2-ylmethoxycarbonyl Chemical group 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 11
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 description 7
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCYLJGNWDVJRA-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=C(Cl)C=C2N(O)N=NC2=C1 TZCYLJGNWDVJRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 125000004391 aryl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 2
- 125000000086 dCMP group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- XYXYXSKSTZAEJW-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 XYXYXSKSTZAEJW-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- DYWUPCCKOVTCFZ-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-amino-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C(C[C@H](N)C(O)=O)C2=C1 DYWUPCCKOVTCFZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- WCOJOHPAKJFUDF-LBPRGKRZSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-5-yl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CN=CN1 WCOJOHPAKJFUDF-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- AHYFYYVVAXRMKB-KRWDZBQOSA-N (2s)-3-(1h-indol-3-yl)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 AHYFYYVVAXRMKB-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- TXDGEONUWGOCJG-LBPRGKRZSA-N (2s)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TXDGEONUWGOCJG-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- YKVBQSGNGCKQSV-SFHVURJKSA-N (2s)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 YKVBQSGNGCKQSV-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-phenyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- RWQCKACYKKSOKK-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 RWQCKACYKKSOKK-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- VIXIDUNQMRFCFO-UHFFFAOYSA-N 3-(ethyliminomethylideneamino)-n-methylpropan-1-amine Chemical compound CCN=C=NCCCNC VIXIDUNQMRFCFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USPFMEKVPDBMCG-LBPRGKRZSA-N N-benzyloxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 USPFMEKVPDBMCG-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XAKBSHICSHRJCL-UHFFFAOYSA-N [CH2]C(=O)C1=CC=CC=C1 Chemical group [CH2]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAKBSHICSHRJCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O ammonium group Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004342 dicyclopropylmethyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- IUNMPGNGSSIWFP-UHFFFAOYSA-N dimethylaminopropylamine Chemical compound CN(C)CCCN IUNMPGNGSSIWFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O phosphonium Chemical compound [PH4+] XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000005201 scrubbing Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical class CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób syntezy peptydów w roztworze, w którym nie ma potrzeby wyodrębniania rosnącego peptydu przed złożeniem żądanej sekwencji, sposób kombinatoryjnej syntezy biblioteki peptydów i sposób zautomatyzowanej syntezy peptydów w roztworze.
Peptydy syntetyzuje się na stałym nośniku albo w roztworze. W obydwu tych podejściach etapy sprzęgania i odblokowania powtarza się naprzemiennie i można je oddzielić etapami okresowego oczyszczania. W syntezie w fazie stałej sekwencję składa się całkowicie, gdy jest ona przyłączona do stałego nośnika, a na końcu odszczepia się ją od nośnika. Nadmiar reagentów i produkty uboczne usuwa się przez sączenie. Synteza w fazie stałe ma dwie wyraźne zalety: w mniejszym lub większym stopniu nadaje się do stosowania i jest łatwa do zautomatyzowania. Jednakże, synteza ta ma również kilka poważnych wad. Przykładowo, reakcje są kontrolowane przez dyfuzję i zwykle w stosowanych niejednorodnych warunkach przebiegają raczej powoli: aby uniknąć delecji sekwencji konieczne są stosunkowo duże nadmiary reagentów. Ponadto, wszystkie reaktywne łańcuchy boczne rosnącego peptydu muszą być chronione, a ponieważ nie stosuje się etapów okresowego oczyszczania, reakcje uboczne związane z obecnością niechronionych łańcuchów bocznych mogą prowadzić do zanieczyszczeń końcowego produktu. Synteza w fazie stałej jest trudna do przeprowadzenia w skali przemysłowej i kosztowna pod względem reagentów i materiałów.
Z drugiej strony, klasyczna synteza w roztworze jest ł atwiejsza do prowadzenia w skali przemysłowej i mniej kosztowna w odniesieniu do reagentów i materiałów. Na ogół nie są wymagane całkowicie chronione aminokwasy, ponieważ produkty uboczne wytworzone w reakcjach ubocznych niechronionych łańcuchów bocznych można usunąć na drodze okresowego oczyszczania. Jednakże synteza w roztworze wymaga specyficznych dla danej sekwencji metod, a wytworzenie kompletnej sekwencji jest bardzo czasochłonne.
Z uwagi na wady tych podejść, istnieje zapotrzebowanie na sposób, który połączy zalety obydwu klasycznych metod, zwłaszcza przy wytwarzaniu peptydów w dużej skali. Nowy sposób powinien być szybki, łatwy do prowadzenia w skali przemysłowej i ogólnie możliwy do stosowania.
W syntezie w roztworze, korzystnie w każ dym etapie sprzęgania stosuje się nieznaczny nadmiar aktywowanego składnika karboksylowego w celu uzyskania ilościowego sprzęgania ze składnikiem aminowym; w ten sposób można zapobiec wystąpieniu delecji sekwencji w końcowym produkcie. Zakłada się na ogół, że resztkowy aktywowany składnik karboksylowy jest niszczony i usuwany podczas okresowej obróbki wodą. Jednakże, wstawki sekwencji peptydowych często uważa się za zanieczyszczenia produktu końcowego z uwagi na niecałkowite usunięcie resztkowego (aktywowanego) składnika karboksylowego po etapie sprzęgania, który następnie sprzęga się po odblokowaniu. Aby uniknąć wystąpienia tych reakcji ubocznych, bezpośrednio po etapie sprzęgania można wprowadzić etap zmiatania w celu zmiecenia (inaktywowania) resztkowych aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych. Jako zmiatacze zwykle stosuje się aminy. Stosowanie poliamin jako zmiataczy prowadzi do wymiecenia związków, które można aktywnie ekstrahować do - korzystnie kwaśnej - fazy wodnej, w zależ noś ci od ich polarnoś ci [np. L. Kisfaludy i in., (1974) Tetrahedron Lett. 19, 1785-1786]. Ekstrakcję tę prowadzi się zwykle przed etapem odblokowania, aby uniknąć straty rosnącego peptydu do fazy wodnej. Stwierdzono jednakże, że w wielu przypadkach procedura ta prowadzi do niecałkowitego okresowego oczyszczenia, co wiąże się z hydrofobowością zmiatanego związku: hydrofobowość wewnętrzna aminoacylowej części składnika karboksylowego zwiększa się z uwagi na nadal obecne grupy ochronne dla grupy aminowej. A zatem, ekstrakcja wodna nie jest całkowicie skuteczna.
L.A. Carpino i in. [(1999) J. Org. Chem., 64, 4324-4338] opisali ostatnio ulepszenia w sposobie zmiatania. W sposobie tym, oprócz stosowania poliaminy jako zmiatacza grupy ochronnej dla grupy aminowej, stosuje się również 1,1-dioksobenzo-[b]tiofeno-2-ylometoksykarbonyl (Bsmoc). Grupa funkcyjna Bsmoc ma bardzo wysoką labilność względem zasady, w wyniku czego resztkowe aktywowane karboksylowe grupy funkcyjne zmiata się i grupy funkcyjne Bsmoc usuwa się w jednym i tym samym etapie przy użyciu poliaminy. Zastosowanie grupy funkcyjnej Bsmoc opisano jako znaczne ulepszenie wytwarzania (oligo)peptydów technikami szybkiej ciągłej syntezy w roztworze, pozwalające na złożenie peptydu w jednej serii etapów w stosunkowo krótkim czasie.
Opracowano obecnie nowy sposób szybkiej ciągłej syntezy peptydów w roztworze, w którym stosuje się zmiatacz, który umożliwia zasadniczo dowolny wybór grupy ochronnej dla grupy aminowej (grupa ochronna przy N-końcu aktywowanego składnika karboksylowego). Inaczej niż w sposobie według Carpino, odblokowania N-końcowej grupy funkcyjnej nie trzeba prowadzić w tych samych
PL 205 559 B1 warunkach reakcji, w których miało miejsce zmiatanie nadmiaru aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych. Tak więc, sposób według wynalazku zasadniczo znacznie bardziej nadaje się do stosowania niż sposób według Carpino.
Nowym sposobem według wynalazku jest sposób szybkiej syntezy peptydu w roztworze, w organicznym rozpuszczalniku lub mieszaninie organicznych rozpuszczalników, który obejmuje powtarzalne cykle etapów (a)-(d):
(a) etap sprzęgania, z zastosowaniem nadmiaru aktywowanego składnika karboksylowego, w celu acylowania skł adnika aminowego, (b) etap wygaszenia, w którym stosuje się zmiatacz, w celu usunięcia resztkowych aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych, przy czym zmiatacz można również stosować do odblokowania rosnącego peptydu (tj. peptydu, który się tworzy), (c) jedną lub więcej ekstrakcji wodnych oraz ewentualnie (d) oddzielny etap odblokowania, po którym możliwa jest jedna lub więcej ekstrakcji wodnych, i charakteryzuje się tym, ż e obejmuje co najmniej jeden etap (b), okreś lany tu jako etap (b'), w którym jako zmiatacz resztkowych aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych stosuje się aminę zawierającą wolny anion lub utajony anion.
W czasie sposobu wedł ug wynalazku nie ma potrzeby wyodrę bniania rosną cego peptydu aż do otrzymania końcowej sekwencji peptydu (tj. produktu końcowego sposobu według wynalazku). Tak więc, sposób jest znacznie mniej czasochłonny niż klasyczne sposoby syntezy w roztworze i łatwy do prowadzenia w skali przemysłowej. Sposób według wynalazku pozwala na wysoce skuteczne usuwanie resztkowego aktywowanego składnika karboksylowego i eliminuje problemy hydrofobowości występujące w innych znanych w technice sposobach, w których jako zmiatacze stosuje się poliaminy. Sposobem tym uzyskuje się peptydy o wysokim stopniu czystości.
Korzystnie, w etapie (a) sposobu według wynalazku ilości molowe reagentów stosuje się w malejącym porządku: składnik karboksylowy, dodatek sprzęgający > reagent sprzęgający > składnik aminowy. Ponadto, korzystny jest sposób, w którym w etapie (a) stosuje się aktywowany wstępnie składnik karboksylowy.
W innym korzystnym wykonaniu, w etapie (b') jako zmiatacz stosuje się aminę zawierają c ą utajony anion. Korzystnie utajony anion zmiatającej aminy obejmuje tymczasową grupę ochroną, którą można selektywnie usunąć w obecności dowolnej ze stałych grup ochronnych przyłączonych do rosnącego peptydu. W szczególnie korzystnym wykonaniu grupa ochronna utajonego anionu w zmiatającej aminie ma labilność podobną do labilności tymczasowej grupy ochronnej obecnej przy N-końcu rosnącego peptydu. Umożliwia to odblokowanie zmiatacza, co prowadzi do uzyskania anionu i do odblokowania N-końca rosnącego peptydu w jednym etapie sposobu. Szczególnie korzystny jest sposób według wynalazku, w którym tymczasowe grupy ochronne, obecne przy N-końcu rosnącego peptydu i ewentualnie obecne w zmiataczu, są usuwalne na drodze hydrogenolizy, zaś stałymi grupami ochronnymi są grupy usuwalne na drodze acydolizy. Korzystnie, takimi tymczasowymi grupami ochronnymi są grupy typu grup benzylowych, np. (podstawiona) grupa benzylowa i grupa benzyloksykarbonylowa. Korzystnym zmiataczem jest pierwszorzędowa amina obejmująca wolny anion lub utajony anion, a zwłaszcza chroniona przy C-końcu pochodna aminokwasu. Oprócz grup karboksylanowych zmiatająca amina może obejmować inne anionowe grupy funkcyjne, takie jak, ale nie wyłącznie, grupy sulfonianowe, siarczanowe, fosfonianowe, fosforanowe lub fenolanowe. Do stosowania jako zmiatacz wysoce korzystnym aminokwasem jest β-alanina lub jej pochodna (np. pochodna estrowa lub sililoestrowa). Najkorzystniejszym zmiataczem jest β-alaninian benzylu lub jego sól.
Zamiast aminy zawierającej wolny lub utajony anion w sposobie według wynalazku jako zmiatacz można również stosować tiol zawierający wolny lub utajony anion.
Zmiatacz korzystnie stosuje się w dwu- do sześciokrotnym nadmiarze molowym w stosunku do resztkowego składnika aktywnego, który ma być zmieciony.
Stosowanie zmiatacza zgodnie z niniejszym wynalazkiem prowadzi do uzyskania hydrofilowych zmiecionych związków, które można aktywnie wyekstrahować do zasadowej fazy wodnej po etapie odblokowania: po odblokowaniu (jeśli jest stosowane) hydrofilowość wzrasta w wyniku obecności w zmiecionych związkach zarówno wolnej aminowej, jak i wolnej karboksylowej, grupy funkcyjnej. Tak więc, w sposobie według wynalazku uzyskuje się bardzo skuteczne okresowe oczyszczanie, dzięki możliwości aktywnego wyekstrahowania hydrofilowego zmiecionego związku. Ponadto, ewentualnie obecny nadmiar składnika
PL 205 559 B1 karboksylowego, który nie został aktywowany, a jego tymczasowe grupy ochronne usunięto w czasie odblokowania, jest ekstrahowany z mieszaniny reakcyjnej w tym samym czasie.
W sposobie według wynalazku, co najmniej jeden cykl, ale ewentualnie również więcej cykli sposobu, obejmuje etap (b'), w którym jako zmiatacz resztkowych aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych stosuje się wolny lub utajony anion. Jednakże, zgodnie z innym wykonaniem wynalazku, sposób obejmuje również jeden lub więcej cykli, w których w etapie (b) jako zmiatacz stosuje się poliaminę, taką jak 3-dimetyloamino-1-propyloamina.
Inny korzystny sposób według wynalazku obejmuje jeden lub więcej cykli, w których w etapie (b) nie prowadzi się odblokowania (a zatem warunki dobiera się w taki sposób, że zmiatacz stosuje się jedynie do wygaszenia, np. przy użyciu grupy ochronnej Z i aminy zawierającej utajony anion jako zmiatacza), zaś następny etap (c) obejmuje kolejne ekstrakcje zasadą, kwasem i zasadą, które korzystnie prowadzi się w obecności chlorku sodu lub azotanu potasu. Sposób ten obejmuje następny etap (d) obejmujący odblokowanie i kolejne ekstrakcje zasadą i w warunkach obojętnych, które korzystnie prowadzi się w obecności chlorku sodu lub azotanu potasu.
Inny korzystny sposób według wynalazku obejmuje jeden lub więcej cykli, w których w etapie (b) prowadzi się zarówno wygaszanie, jak i odblokowanie (np. stosując grupę ochronną Bsmoc i poliaminę jako zmiatacz), a następny etap (c) obejmuje kolejne ekstrakcje w warunkach zasadowych i oboję tnych, które korzystnie prowadzi się w obecnoś ci chlorku sodu lub azotanu potasu.
Również korzystny jest sposób, w którym w ostatnim cyklu etapu (a) grupy ochronne składnika karboksylowego mają labilność podobną do labilności stałych grup ochronnych składnika aminowego, a w etapie (b) jak zmiatacz stosuje się poliaminę .
Sposób według wynalazku można prowadzić w kilku rozpuszczalnikach organicznych, które są powszechnie stosowane przy wytwarzaniu peptydów. Wysoce korzystnym rozpuszczalnikiem organicznym jest octan etylu. Również korzystne są mieszaniny octanu etylu i innych rozpuszczalników organicznych, takich jak dichlorometan, 1-metylo-2-pirolidynon, N,N-dimetyloformamid lub tetrahydrofuran.
Sposób według wynalazku można prowadzić w temperaturach, które stosuje się w technice dla takich etapów w klasycznej syntezie peptydów w roztworze. Jednakże, korzystnie sposób prowadzi się w temperaturze w zakresie 0 do 50°C, a zwł aszcza w temperaturze otoczenia.
Sposób według wynalazku jest szczególnie odpowiedni do kombinatoryjnej syntezy bibliotek peptydów, z zastosowaniem metody rozszczepiania i mieszania. Sprzęgania prowadzi się oddzielnie i mieszaniny z poszczególnych etapów sprzęgania łączy się do ekstrakcji i odblokowania.
Sposób kombinatoryjnej syntezy biblioteki peptydów, w którym syntezę prowadzi się sposobem według wynalazku, wchodzi w zakres wynalazku.
Sposób według wynalazku nadaje się do zautomatyzowania zgodnie ze standardowymi sposobami i taki sposób zautomatyzowanej syntezy peptydów w roztworze jest także przedmiotem wynalazku.
Nowy sposób według wynalazku jest wysoce skuteczny i korzystnie może być stosowany do wytwarzania oligo- i polipeptydów o wysokim stopniu czystości.
W korzystnym sposobie według wynalazku nadmiar składnika karboksylowego sprzęga się ze składnikiem aminowym, przy czym karboksylową grupę funkcyjną aktywuje się najpierw lub aktywuje się in situ, stosując reagent sprzęgający i, w razie potrzeby, substancję dodatkową. Po etapie sprzęgania resztkowe aktywowane grupy funkcyjne zmiata się przez dodanie zmiatacza do mieszaniny reakcyjnej i mieszanie, a następnie na ogół prowadzi się ekstrakcję wodą. Po lub podczas zmiatania tymczasowe grupy ochronne usuwa się, stosując odpowiednie, znane w technice sposoby, a następnie usuwa się zmieciony związek przez ekstrakcję wodną. W tym samym czasie z mieszaniny reakcyjnej wyekstrahowuje się ewentualnie obecny nadmiar składnika karboksylowego, który nie był aktywowany i z którego podczas odblokowania usunięto tymczasowe grupy ochronne, jak również inne rozpuszczalne w wodzie reagenty i produkty uboczne. Następnie, w zależności od długości żądanego peptydu, można prowadzić następny cykl etapów sprzęgania, wygaszania, odblokowania i ekstrakcji.
Określenie „składnik aminowy” odnosi się do cząsteczki zawierającej wolną aminową grupę funkcyjną. Składnikiem aminowym może być zwłaszcza amina, aminokwas lub oligopeptyd, który zawiera wolną aminową grupę funkcyjną, i którego inne grupy funkcyjne są chronione w taki sposób, aby nie zakłócały żądanej reakcji sprzęgania. C-końcową grupę funkcyjną stosowanego aminokwasu lub oligopeptydu można chronić jako podstawiony lub niepodstawiony amid lub jako ester, a przykł adami tego ostatniego są, ale nie wyłącznie, ester metylowy, etylowy, t-butylowy, benzylowy, fenacylowy, 3-(3-metylo)pentylowy (Mpe), 2-(2-fenylo)propylowy (Pp), 2-chlorotritylowy (Clt), difenylo(4-pirydylo)metylowy (PyBzh), dicyklopropylometylowy (Dcmp), 9-fluorenylometylowy (Fm),
PL 205 559 B1 allilowy (All), 2-(trimetylosililo)etylowy (Tmse), 4-{N-[1-(4,4-dimetylo-2,6-dioksocykloheksylideno)-3-metylobutylo]amino}benzylowy (Dmab) oraz estry rozszczepialne enzymatycznie [R.W. Roeske (1981) w: The Peptides, vol. 3 (wyd. E. Gross i J. Meienhofer), Academic Press, Nowy Jork, str. 101-136; dla
Mpe: A. Karlstrom i A. Unden (1996), Tetrahedron Lett. 37, 4343-4246; dla Pp: C. Yue i in. (1993) Tetrahedron Lett. 34, 323-326; dla Clt: P. Athanassopoulos i in. (1995) Tetrahedron Lett. 36, 5645-5648; dla PyBzh: M. Mergler i in. (2001) P154, 2nd International Peptide Symposium & 17th American Peptide Symposium; dla Dcmp: L.A. Carpino i in. (1995) J. Org. Chem. 60, 7718-7719; dla Fm: F. Al-Obeidi i in. (1990) Int. Peptide Protein Res. 35, 215-218; dla All: H. Kunz i in., (1985) Int. Peptide Protein Res. 26, 493-497; dla Tmse: P. Sieber (1977) Helv. Chim. Acta 60, 2711-2716; dla Dmab: W.C. Chan i in. (1995) J. Chem. Soc. Commun., 2209-2210]. Do stałej ochrony innych grup funkcyjnych składnika aminowego korzystne są grupy funkcyjne typu t-butylowych lub grupy funkcyjne o podobnej labilności, które obejmują, ale nie wyłącznie, t-butyl (tBu) do ochrony łańcuchów bocznych Asp, Glu, Ser, Thr i Tyr, t-butoksykarbonyl (Boc) do ochrony łańcuchów bocznych Lys i Trp, trityl (Trt) do ochrony łańcuchów bocznych Asp, Gln i His oraz 2,2,5,7,8-pentametylochromano-6-sulfonyl (Pmc) lub 2,2,4,6,7-pentametylodihydrobenzofurano-5-sulfonyl (Pbf) do ochrony łańcucha bocznego Arg [G. Barany i R.B. Merrifield (1980) w: The Peptides, vol. 2 (wyd. E. Gross i J. Meienhofer), Academic Press, Nowy Jork, str. 1-284; dla Trp(Boc): H. Franzen i in. (1984) J. Chem. Soc. Chem. Commun.. 16991700; dla Asn(Trt) i Gln(Trt): P. Sieber i B. Riniker (1998), Tetrahedron Lett. 32, 739-742; dla His(Trt): P. Sieber i B. Riniker (1998), Tetrahedron Lett. 28, 6031-6034; dla Prac: R. Ramage i J. Green (1987) Tetrahedron Lett. 28, 2287-2290; dla Pbf: L.A. Carpino i in. (1993) Tetrahedron Lett. 34, 7829-7832].
Określenie „składnik karboksylowy” odnosi się do cząsteczki zawierającej wolną karboksylową grupę funkcyjną. Składnikiem karboksylowym może być zwłaszcza dowolny kwas karboksylowy, aminokwas lub oligopeptyd, który zawiera wolną karboksylową grupę funkcyjną, i którego inne grupy funkcyjne są chronione w taki sposób, aby nie zakłócały żądanej reakcji sprzęgania. W korzystnym wykonaniu, grupa aminowa stosowanego aminokwasu lub oligopeptydu jest tymczasowo chroniona przez benzyloksykarbonylową (Z) grupę funkcyjną; inne przykłady obejmują, ale nie wyłącznie, grupy funkcyjne, takie jak Boc, Trt, fluoren-9-ylometoksykarbonyl (Fmoc), 2-(metylosulfonylo)etoksykarbonyl (Msc), alliloksykarbonyl (Alloc), grupy funkcyjne typu grup arylosulfonylowych, takie jak ortonitro-benzenosulfonyl (o-NBS) oraz rozszczepialne enzymatycznie grupy funkcyjne [R. Geiger i W. Konig (1981) w: The Peptides, vol. 3 (wyd. E. Gross i J. Meienhofer), Academic Press, Nowy Jork, str. 1-99; dla Alloc: H. Kunz i C. Unverzagt (1984) Angnew Chem., 96, 426-427; dla arylosulfonylu: T. Fukuyama i in. (1997) Tetrahedron Lett. 38, 5831-5834]. Do stałej ochrony innych grup funkcyjnych składnika karboksylowego korzystne są grupy funkcyjne typu grup t-butylowych lub grupy funkcyjne o podobnej labilności, jak opisane powyżej dla składnika aminowego. Składnik karboksylowy można najpierw aktywować jako aktywny ester, korzystnie jako N-hydroksysukcynimid, benzotriazol-1-il, pentafluorofenyl lub ester 4-nitrofenylowy, jako halogenek, bezwodnik kwasu N-karboksylowego lub jako symetryczny bezwodnik. Alternatywnie, składnik karboksylowy można aktywować in situ jak mieszany bezwodnik lub przy użyciu reagenta sprzęgającego, takiego jak karbodiimid, korzystnie N,N'-dicykloheksylokarbodiimid (DCC) lub chlorowodorek 1-(3'-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu (EDC), sól uroniowa lub fosfoniowa, ewentualnie w obecności obecności dodatku sprzęgającego, korzystnie N-hydroksysukcynimidu (HONSu), 1-hydroksybenzotriazolu (HOBt), 3-hydroksy-4-okso-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazyny (HOOBt), 1-hydroksy-7-azabenzotriazolu (HOAt) lub 6-chloro-1-hydroksybenzotriazolu (Cl-HOBt), i, w razie potrzeby, w obecności trzeciorzędowej aminy [„The Peptides”, vol. 1 (1979) (wyd. E. Gross i J. Meienhofer) Academic Press, Nowy Jork; P. Li i J.-C. Xu (2000) Chin. J. Chem. 18, 456-466].
Tymczasowe grupy ochronne można usunąć sposobami znanymi w technice (patrz powyżej). Grupę funkcyjną Z można usunąć przez hydrogenolizę standardowymi sposobami, w których stosuje się na przykład gazowy wodór lub mrówczan jako donor wodoru. Podczas takiego procesu usuwa się wszystkie grupy ochronne typu grup benzylowych, z zachowaniem grup ochronnych typu grup t-butylowych lub grup funkcyjnych o podobnej labilności. Te ostatnie grupy można usunąć przez acydolizę sposobami znanymi w technice.
Znaczenie terminu „zasadowa ekstrakcja wodna” będzie oczywiste dla specjalisty w tej dziedzinie techniki. Jednakże, zasadowe ekstrakcje wodne korzystnie prowadzi się stosując wodne roztwory wodorowęglanu sodu lub węglanu sodu, w razie potrzeby w obecności chlorku sodu lub azotanu potasu. Określenie „aktywna ekstrakcja wodna” odnosi się do ekstrakcji, w której ekstrahuje się składnik aminowy w kwasowych warunkach w formie protonowanej (amoniowej), albo składnik karboksylowy ekstrahuje się w warunkach zasadowych w deprotonowanej formie (karboksylanowej).
PL 205 559 B1
Wynalazek zilustrowano następującymi przykładami, które nie ograniczają zakresu wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Boc-Gly-Phe-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu
Cykl 1: Do roztworu 4,34 g H-Ser(tBu)-OtBu w mieszaninie octanu etylu i dichlorometanu w temperaturze 20°C podczas mieszania dodano 3,24 g 1-hydroksybenzotriazolu, 7,76 g Z-Asp(OtBu)-OH, 4,20 g chlorowodorku 1-(3'-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu i 2,42 ml 4-metylomorfoliny. Otrzymany roztwór mieszano aż do zakończenia reakcji, po czym dodano 1,21 ml 4-metylomorfoliny i 3,51 g β-alaninianu benzylu, w postaci p-toluenosulfonianu jako soli. Mieszaninę mieszano jeszcze przez 30 minut, po czym ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl, 5% KHSO4/10% NaCl i 5% Na2CO3/10% NaCl. Warstwę organiczną zawierającą chroniony dipeptyd Z-Asp-(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu poddano katalitycznej hydrogenolizie w obecności palladu na węglu drzewnym. Po zakończeniu reakcji dodano 5% Na2CO3/10% NaCl i otrzymaną zawiesinę przesączono. Pozostałość przemyto mieszaniną octanu etylu i dichlorometanu i połączone przesącze organiczne ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl i 30% NaCl.
Cykl 2: Do warstwy organicznej zawierającej dipeptyd H-Asp-(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu w temperaturze 20°C dodano 3,24 g 1-hydroksybenzotriazolu, 7,18 g Z-Phe-OH, 4,20 g chlorowodorku 1-(3'-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu i 2,42 ml 4-metylomorfoliny. Otrzymany roztwór mieszano aż do zakończęnia reakcji, po czym dodano 1,21 ml 4-metylomorfoliny i 3,51 g β-alaninianu benzylu, w postaci p-toluenosulfonianu jako soli. Mieszaninę mieszano jeszcze przez 30 minut, po czym ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl, 5% KHSO4/10% NaCl i 5% Na2CO3/10% NaCl.
Warstwę organiczną zawierającą chroniony tripeptyd Z-Phe-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu poddano katalitycznej hydrogenolizie w obecności palladu na węglu drzewnym. Po zakończeniu reakcji dodano 5% Na2CO3/10% NaCl i otrzymaną zawiesinę przesączono. Pozostałość przemyto mieszaniną octanu etylu i dichlorometanu i połączone przesącze organiczne ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl i 30% NaCl.
Cykl 3: Do warstwy organicznej zawierającej tripeptyd H-Phe-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu w temperaturze 20°C dodano 3,24 g 1-hydroksybenzotriazolu, 4,21 g Boc-Gly-OH, 4,20 g chlorowodorku 1-(3'-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu i 2,42 ml 4-metylomorfoliny. Otrzymany roztwór mieszano aż do zakończenia reakcji, po czym dodano 1,25 ml 3-dimetylo-1-propyloaminy. Mieszaninę mieszano jeszce przez 30 minut, po czym ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl, 5% KHSO4/10% NaCl, 5% Na2CO3/10% NaCl i wodą. Warstwę organiczną odparowano do suchości i pozostałość roztarto z eterem metylowo-tertbutylowym i wysuszono, uzyskując żądany chroniony tetrapeptyd z wydajnością 95% w odniesieniu do substancji wyjściowej, H-Ser(tBu)-OtBu. Wytwarzanie zakończono w ciągu 6 godzin.
Czystość: 98,1%, zgodnie z HPLC z odwróconymi fazami (24 do 68% acetonitrylu w 0,1% kwasu trifluorooctowego w ciągu 29 minut przy 220 nm, 2,0 ml/min., kolumna C18 5 mikronów). Tożsamość: m/z 425, 4 [M-Boc-3tBu+H]+, 469,4 [M-4tBu+H]+, 525,4 [M-3tBu+H]+, 581,4 [M-2tBu+H]+, 637,4 [M-tBu+H]+, 693,4 [M+H]+, MS z jonizacją przez elektrorozpylanie; 1H NMR (CDCl3) δ 1,16 (s, 9H), 1,44 (m, 27H), 2,59 (dd, 1H), 2,79 (dd, 1H), 3,09 (m, 2H), 3,51 (dd, 1H), 3,69-3,86 (m, 3H), 4,47 (m, 1H), 4,67-4,68 (ra, 2H), 5,20 (szer. s, 1H), 6,68 (d, 1H), 7,12- 7,34 (m, 7H).
P r z y k ł a d 2
H-His-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Leu-Leu-Orn(Boc)-Pro-OtBu
Cykl 1: Do roztworu 1300 g H-Pro-OtBu.HCl w octanie etylu w temperaturze 20°C podczas mieszania dodano 1014 g 1-hydroksybenzotriazolu, 2756 g Z-Orn(Boc)-OH, 1378 g chlorowodorku 1-(3'dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu i 1495 ml 4-metylomorfoliny. Otrzymany roztwór mieszano aż do zakończenia reakcji, po czym dodano 377 ml 4-metylomorfoliny i 1105 g β-alaninianu benzylu, w postaci p-toluenosulfonianu jako soli. Mieszaninę mieszano jeszcze przez 30 minut, po czym ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl, 5% KHSO4/10% NaCl i 5% Na2CO3/10% NaCl.
Warstwę organiczną zawierającą chroniony dipeptyd Z-Orn(Boc)-Pro-OtBu poddano katalitycznej hydrogenolizie w obecności palladu na węglu drzewnym. Po zakończeniu reakcji dodano 5% Na2CO3/15% NaCl i otrzymaną zawiesinę przesączono. Pozostałość przemyto mieszaniną octanu etylu i połączone przesącze organiczne ekstrahowano układem 5% Na2CO3/15% NaCl i 30% NaCl. Oddzielone warstwy wodne ponownie ekstrahowano octanem etylu.
Cykl 2: Do połączonych warstw organicznych zawierających dipeptyd H-Orn(Boc)-Pro-OtBu w temperaturze 20°C dodano 1-hydroksybenzotriazolu, 1993 g Z-Leu-OH, 1320 g chlorowodorku 1-(3'-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu i 754 ml 4-metylomorfoliny. Otrzymany roztwór mieszano aż do zakończenia reakcji, po czym dodano 377 ml 4-metylomorfoliny i 1105 g β-alaninianu benzylu,
PL 205 559 B1 w postaci p-toluenosulfonianu jako soli. Mieszaninę mieszano jeszcze przez 30 minut, po czym ekstrahowano układem 5% Na2CO3/10% NaCl, 5% KHSO4/10% NaCl i 5% Na2CO3/10% NaCl.
Warstwę organiczną zawierającą chroniony tripeptyd Z-Leu-Orn(Boc)-Pro-OtBu poddano katalitycznej hydrogenolizie w obecności palladu na węglu drzewnym. Po zakończeniu reakcji dodano 5% Na2CO3/15% NaCl i otrzymaną zawiesinę przesączono. Pozostałość przemyto mieszaniną octanu etylu i połączone przesącze organiczne ekstrahowano układem 5% Na2CO3/15% NaCl i 30% NaCl.
Cykl 3: Do połączonych warstw organicznych zawierających tripeptyd H-Leu-Orn(Boc)-Pro-OtBu w temperaturze 20°C dodano 1014 g 1-hydroksybenzotriazolu, 1993 g Z-D-Leu-OH, 1320 g chlorowodorku 1-(3'-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu i 754 ml 4-metylomorfoliny. Otrzymany roztwór mieszano aż do zakończenia reakcji, po czym dodano 377 ml 4-metylomorfoliny i 1105 g β-alaninianu benzylu, w postaci p-toluenosulfonianu jako soli. Mieszaninę mieszano jeszcze przez 30 minut, po czym ekstrahowano 5% Na2CO3, 5% KHSO4 i 5% Na2CO3.
Warstwę organiczną zawierającą chroniony tripeptyd Z-Leu-Leu-Orn(Boc)-Pro-OtBu poddano katalitycznej hydrogenolizie w obecności palladu na węglu drzewnym. Po zakończeniu reakcji dodano 5% Na2CO3 i otrzymaną zawiesinę przesączono. Pozostałość przemyto octanem etylu i połączone przesącze organiczne ekstrahowano 5% Na2CO3 i 10% NaCl.
Cykle 4 do 7: Cykle te prowadzono sposobem opisanym dla trzeciego cyklu, zastępując 1993 g Z-D-Leu-OH odpowiednio, Z-Tyr(tBu)-OH (uwolnionym z 4497 g odpowiedniej soli dicykloheksyloamoniowej), 2218 g Z-Ser(tBu)-OH, 2538 g Z-Trp-OH i 2172 g Z-His-OH. Jednakże, od piątego cyklu w etapie zmiatania stosowano dodatkowe ilości 4-morfoliny i β-alaninianu benzylu w postaci p-toluenosulfonianu jako soli. W piątym cyklu ekstrakcje po etapie zmiatania prowadzono w temperaturze 35°C. W siódmym cyklu sprzęganie prowadzono w temperaturze 3°C, 1014 g 1-hydroksybenzotrialu zastąpiono 2561 g 6-chloro-1-hydroksybenzotriazolu i po 1 godzinie sprzęgania dodano dodatkową porcję 132 g chlorowodorku 1-(3'-dimetylopropylo)-3-etylokarbodiimidu. W siódmym cyklu ekstrakcje po hydrogenolizie prowadzono również w temperaturze 35°C. Pod koniec siódmego cyklu warstwę organiczną odparowano do suchości i otrzymano żądany nonapeptyd z wydajnością 73% w odniesieniu do wyjściowego H-Pro-OtBu. HCl (co oznacza średnio 98% na każdy etap syntezy chemicznej).
Czystość: 90,6%, zgodnie z HPLC z odwróconymi fazami (24 do 68% acetonitrylu w 0,1% kwasu trifluorooctowego w ciągu 29 minut przy 220 nm, 2,0 ml/min., kolumna C18 5 mikronów). Tożsamość: m/z 543,6 [M-Boc-2tBu+2H]2+, 571,6 [M-Boc-tBu+2H]2+, 599,6 [M-Boc-tBu+2H]2+, 649,8 [M+2H]2+, 1298,0 [M+H]+, MS z jonizacją przez elektrorozpylanie.
Wnioski: Chronione peptydy wytworzono bez wyodrębniania związków przejściowych w trakcie procesu. Czystość i tożsamość produktu otrzymanego w pierwszym przykładzie wskazują, że nadmiar (aktywowanych) składników karboksylowych całkowicie usunięto we wszystkich etapach sposobu i w sposobie według wynalazku nie miały miejsca żadne insercje sekwencji peptydowych. Synteza w drugim przykładzie wykazuje ponadto, że sposób według wynalazku można łatwo stosować w skali przemyślowej. Produkty w obydwu przykładach otrzymano z wysoką wydajnością i wysoką czystością w stosunkowo krótkim czasie.
Claims (26)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób syntezy peptydów w roztworze w organicznym rozpuszczalniku lub w mieszaninie organicznych rozpuszczalników, obejmujący powtarzalne cykle etapów (a)-(d):(a) etap sprzęgania, z zastosowaniem nadmiaru aktywowanego składnika karboksylowego do acylowania składnika aminowego, (b) etap wygaszenia, w którym stosuje się zmiatacz, w celu usunięcia resztkowych aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych, przy czym zmiatacz można również stosować do odblokowania rosnącego peptydu, (c) jedną lub więcej ekstrakcji wodnych oraz ewentualnie (d) oddzielny etap odblokowania, po którym prowadzi się jedną lub więcej ekstrakcji wodnych, znamienny tym, że sposób obejmuje co najmniej jeden etap (b), określany tu jako etap (b'), w którym jako zmiatacz resztkowych aktywowanych karboksylowych grup funkcyjnych stosuje się aminę zawierającą wolny anion lub utajony anion.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w etapie (a) ilości molowe stosowanych reagentów stosuje się w malejącym porządku: składnik karboksylowy, dodatek sprzęgający > reagent sprzęgający > składnik aminowy.PL 205 559 B1
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w etapie (a) stosuje się aktywowany wstępnie składnik karboksylowy.
- 4. Sposób według zastrz. 1-3, znamienny tym, że w etapie (b') jako zmiatacz stosuje się aminę zawierającą utajony anion.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że utajony anion zmiatającej aminy obejmuje tymczasową grupę ochronną, którą można selektywnie usunąć w obecności dowolnej ze stałych grup ochronnych przyłączonych do rosnącego peptydu.
- 6. Sposób według zastrz. 4 albo 5, znamienny tym, że utajony anion w zmiatającej aminie zawiera grupę ochronną, która ma labilność podobną do labilności tymczasowej grupy ochronnej obecnej przy N-końcu rosnącego peptydu.
- 7. Sposób według zastrz. 5 albo 6, znamienny tym, że tymczasowymi grupami ochronnymi są grupy usuwalne na drodze hydrogenolizy, zaś stałymi grupami ochronnymi są grupy usuwalne na drodze acydolizy.
- 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że tymczasowymi grupami ochronnymi są grupy typu grup benzylowych.
- 9. Sposób według zastrz. 4-8, znamienny tym, że jako zmiatacz stosuje się pierwszorzędową aminę zawierającą wolny anion lub utajony anion.
- 10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że pierwszorzędową amina jest pochodną aminokwasu chronioną przy C-końcu.
- 11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że aminokwasem jest β-alanina lub jej pochodna.
- 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że zmiataczem jest β-alaninian benzylu lub jego sól.
- 13. Sposób według zastrz. 1-8, znamienny tym, że zamiast aminy zawierającej wolny lub utajony anion jako zmiatacz stosuje się zawierający wolny lub utajony anion tiol.
- 14. Sposób według zastrz. 1-13, znamienny tym, że obejmuje jeden lub więcej cykli, w których w etapie (b) jako zmiatacz stosuje się poliaminę.
- 15. Sposób według zastrz. 1-14, znamienny tym, że w etapie (b) nie prowadzi się odblokowania, a następny etap (c) obejmuje kolejne ekstrakcje zasadą, kwasem i zasadą.
- 16. Sposób według zastrz. 15, znamienny tym, że ekstrakcje prowadzi się w obecności chlorku sodu lub azotanu potasu.
- 17. Sposób według zastrz. 15 albo 16, znamienny tym, że następny etap (d) obejmuje odblokowanie i kolejne ekstrakcje zasadą i w warunkach obojętnych.
- 18. Sposób według zastrz. 17, znamienny tym, że ekstrakcje prowadzi się w obecności chlorku sodu lub azotanu potasu.
- 19. Sposób według zastrz. 1-14, znamienny tym, że obejmuje jeden lub więcej cykli, w których w etapie (b) prowadzi się zarówno wygaszanie, jak i odblokowanie, a następny etap (c) obejmuje kolejne ekstrakcje w warunkach zasadowych i w warunkach obojętnych.
- 20. Sposób według zastrz. 19, znamienny tym, że ekstrakcje prowadzi się w obecności chlorku sodu lub azotanu potasu.
- 21. Sposób według zastrz. 1-20, znamienny tym, że w ostatnim cyklu etapu (a) grupy ochronne składnika karboksylowego mają labilność podobną do labilności stałych grup ochronnych rosnącego peptydu, a w etapie (b) jak zmiatacz stosuje się poliaminę.
- 22. Sposób według zastrz. 1-21, znamienny tym, że jako rozpuszczalnik organiczny lub mieszaninę rozpuszczalników organicznych stosuje się octan etylu lub mieszaninę octanu etylu i dichlorometanu, mieszaninę octanu etylu i 1-metylo-2-pirolidynonu, mieszaninę octanu etylu i N,N-dimetyloformamidu lub mieszaninę octanu etylu i tetrahydrofuranu.
- 23. Sposób według zastrz. 1-22, znamienny tym, że prowadzi się go w temperaturze w zakresie 0 do 50°C.
- 24. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że prowadzi się go w temperaturze otoczenia.
- 25. Sposób kombinatoryjnej syntezy biblioteki peptydów technikami rozszczepiania i mieszania, znamienny tym, że syntezę prowadzi się sposobem określonym w zastrz. 1-24.
- 26. Sposób zautomatyzowanej syntezy peptydów w roztworze, znamienny tym, że prowadzi się go stosując sposób określony w zastrz. 1-25.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01202753 | 2001-07-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL355125A1 PL355125A1 (en) | 2003-01-27 |
| PL205559B1 true PL205559B1 (pl) | 2010-05-31 |
Family
ID=8180656
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL355125A PL205559B1 (pl) | 2001-07-19 | 2002-07-19 | Sposób syntezy peptydów w roztworze, sposób kombinatoryjnej syntezy biblioteki peptydów i sposób zautomatyzowanej syntezy peptydów w roztworze |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20030018164A1 (pl) |
| EP (1) | EP1291356B1 (pl) |
| JP (1) | JP4142907B2 (pl) |
| KR (1) | KR100861031B1 (pl) |
| CN (1) | CN1254483C (pl) |
| AR (1) | AR034869A1 (pl) |
| AT (1) | ATE302792T1 (pl) |
| BR (1) | BRPI0202783B1 (pl) |
| CA (1) | CA2390358C (pl) |
| DE (1) | DE60205693T2 (pl) |
| DK (1) | DK1291356T3 (pl) |
| EC (1) | ECSP024291A (pl) |
| ES (1) | ES2248485T3 (pl) |
| HR (1) | HRP20020609B1 (pl) |
| HU (1) | HUP0202369A2 (pl) |
| IL (1) | IL150601A (pl) |
| MX (1) | MXPA02006998A (pl) |
| NO (1) | NO324245B1 (pl) |
| PE (1) | PE20030214A1 (pl) |
| PL (1) | PL205559B1 (pl) |
| PT (1) | PT1291356E (pl) |
| RU (1) | RU2237673C2 (pl) |
| SG (1) | SG119160A1 (pl) |
| TW (1) | TWI247012B (pl) |
| ZA (1) | ZA200205409B (pl) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL150601A (en) * | 2001-07-19 | 2010-06-30 | Organon Nv | Process for rapid synthesis of peptides within a solution using the back of an activated carboxyl component and destruction of the residual activated carboxyl component |
| EP1801086A1 (en) * | 2005-11-25 | 2007-06-27 | Synthacon GmbH | Synthesis of carbon acid amides |
| EP1790656A1 (en) * | 2005-11-25 | 2007-05-30 | Nanokem S.A. | Solution-phase synthesis of leuprolide |
| BRPI0706400A2 (pt) * | 2006-01-17 | 2011-03-29 | Organon Nv | processos para a hidrólise enzimática seletiva de terc-butil ésteres c-terminais de substratos de peptìdeo, para a sìntese convergente de um peptìdeo de dois ou mais fragmentos de peptìdeo, para a sìntese enzimática por etapas de um peptìdeo na direção do terminal c, e para a sìntese de peptìdeo |
| ES2729197T3 (es) | 2006-03-01 | 2019-10-30 | Kaneka Corp | Método de producción de péptidos |
| DE602008004350D1 (de) * | 2007-06-25 | 2011-02-17 | Organon Nv | Verfahren zur umsetzung von c-terminalen peptidestern oder -säuren zu amiden unter verwendung von subtilisin in gegenwart von ammoniumsalzen |
| US8124372B2 (en) | 2007-06-25 | 2012-02-28 | N.V. Organon | Selective enzymatic amidation of C-terminal esters or acids of peptides |
| CA2753224C (en) * | 2008-12-30 | 2018-04-17 | Gkl-Biotec Ag | Peptide combination |
| KR101032399B1 (ko) * | 2010-02-11 | 2011-05-03 | 주식회사 이너트론 | 밴드패스필터의 철재하우징 및 그 제조방법 |
| EP2409982A3 (en) * | 2010-02-25 | 2012-02-08 | Corning Incorporated | Chemical processes generating solid(s) carried out continuously within microreactors |
| JP6136934B2 (ja) | 2011-12-15 | 2017-05-31 | 味の素株式会社 | Ｆｍｏｃ基の除去方法 |
| DK3266792T3 (da) | 2015-03-04 | 2021-02-01 | Jitsubo Co Ltd | Fremgangsmåde til peptidsyntese |
| ES2924473T3 (es) | 2015-12-21 | 2022-10-07 | Univ Texas Tech System | Sistema y procedimiento de síntesis de péptidos GAP en fase de solución |
| CN111971293B (zh) | 2018-04-13 | 2024-07-30 | Jitsubo株式会社 | 肽合成方法 |
| US12024537B2 (en) | 2018-05-31 | 2024-07-02 | Sederma | Compositions and methods for chemical synthesis |
| FR3090636B1 (fr) * | 2018-12-24 | 2021-01-01 | Strainchem | Procédé de synthèse de peptides |
| EP3917937A4 (en) | 2019-02-01 | 2022-11-23 | Sederma | SYNTHETIC STRATEGY FOR A SPLIT PROTECTION GROUP |
| JP7505498B2 (ja) * | 2019-08-30 | 2024-06-25 | 日産化学株式会社 | ペプチド化合物の製造方法 |
| KR20220119421A (ko) | 2019-12-27 | 2022-08-29 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 펩타이드 화합물의 합성법 |
| JP7659541B2 (ja) * | 2020-03-27 | 2025-04-09 | 株式会社カネカ | アミド結合含有化合物の製造方法 |
| JP7063408B1 (ja) | 2021-07-02 | 2022-05-09 | ペプチスター株式会社 | 液相ペプチド製造方法 |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1991A (en) * | 1841-02-23 | Manner of fastening bedsteads | ||
| US5221754A (en) * | 1989-06-09 | 1993-06-22 | Research Corporation Technologies, Inc. | Reagents for rapid peptide synthesis |
| US5101059A (en) * | 1989-12-05 | 1992-03-31 | Research Corporation Technologies, Inc. | Amino acid protecting groups |
| US5877278A (en) * | 1992-09-24 | 1999-03-02 | Chiron Corporation | Synthesis of N-substituted oligomers |
| US5516892A (en) * | 1992-12-28 | 1996-05-14 | Indiana University Foundation | Polymer-bound mixed carboxylic anhdrides as a stable form of activated carboxylic acids |
| US6310180B1 (en) * | 1993-06-21 | 2001-10-30 | Vanderbilt University | Method for synthesis of proteins |
| US5516639A (en) * | 1993-07-22 | 1996-05-14 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Antibodies specific for human prostate glandular kallkrein |
| US6001966A (en) * | 1995-10-19 | 1999-12-14 | Proligo Llc | Method for solution phase synthesis of oligonucleotides and peptides |
| US5698676A (en) * | 1995-11-30 | 1997-12-16 | Abbott Laboratories | Use of propylene oxide as an acid scavenger in peptide synthesis |
| US5849954A (en) * | 1996-01-18 | 1998-12-15 | Research Corporation Technologies, Inc. | Method of peptide synthesis |
| US6306959B1 (en) * | 1996-05-03 | 2001-10-23 | Warner Lambert Company | Rapid purification by polymer supported quench |
| US6121488A (en) * | 1997-09-24 | 2000-09-19 | Warner-Lambert Company | Quenching reagents for solution phase synthesis |
| JPH11217397A (ja) * | 1997-11-27 | 1999-08-10 | Saburo Aimoto | ペプチドチオールエステルの製造方法 |
| FR2780061B1 (fr) * | 1998-06-22 | 2001-09-07 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveau procede de preparation de derives de cyclosporine |
| WO2000071569A1 (en) * | 1999-05-26 | 2000-11-30 | Abbott Laboratories | Minimal isolation peptide synthesis process using ion-exchange resins as scavenging agents |
| US20020127219A1 (en) * | 1999-12-30 | 2002-09-12 | Okkels Jens Sigurd | Lysosomal enzymes and lysosomal enzyme activators |
| CA2410898A1 (en) * | 2000-07-19 | 2002-01-24 | Pharmacia & Upjohn Company | Substrates and assays for .beta.-secretase activity |
| IL150601A (en) * | 2001-07-19 | 2010-06-30 | Organon Nv | Process for rapid synthesis of peptides within a solution using the back of an activated carboxyl component and destruction of the residual activated carboxyl component |
| TWI243826B (en) * | 2001-07-19 | 2005-11-21 | Akzo Nobel Nv | Process for the preparation of peptides |
| US7893187B2 (en) * | 2005-06-17 | 2011-02-22 | Eastman Chemical Company | Glass laminates comprising polyester compositions formed from 2,2,4,4-tetramethyl-1,3-cyclobutanediol and 1,4-cyclohexanedimethanol |
-
2002
- 2002-07-04 IL IL150601A patent/IL150601A/en active IP Right Grant
- 2002-07-04 TW TW091114832A patent/TWI247012B/zh not_active IP Right Cessation
- 2002-07-05 JP JP2002197550A patent/JP4142907B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-05 ZA ZA200205409A patent/ZA200205409B/xx unknown
- 2002-07-15 DK DK02077830T patent/DK1291356T3/da active
- 2002-07-15 PT PT02077830T patent/PT1291356E/pt unknown
- 2002-07-15 DE DE60205693T patent/DE60205693T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-15 ES ES02077830T patent/ES2248485T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-15 AT AT02077830T patent/ATE302792T1/de active
- 2002-07-15 EP EP02077830A patent/EP1291356B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-15 SG SG200204298A patent/SG119160A1/en unknown
- 2002-07-17 MX MXPA02006998A patent/MXPA02006998A/es active IP Right Grant
- 2002-07-17 PE PE2002000637A patent/PE20030214A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-07-18 NO NO20023446A patent/NO324245B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-07-18 CN CNB021261911A patent/CN1254483C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-18 CA CA002390358A patent/CA2390358C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-18 AR ARP020102687A patent/AR034869A1/es active IP Right Grant
- 2002-07-18 RU RU2002119630/04A patent/RU2237673C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-07-18 HU HU0202369A patent/HUP0202369A2/hu unknown
- 2002-07-18 KR KR1020020041898A patent/KR100861031B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-18 BR BRPI0202783A patent/BRPI0202783B1/pt active IP Right Grant
- 2002-07-19 EC EC2002004291A patent/ECSP024291A/es unknown
- 2002-07-19 PL PL355125A patent/PL205559B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2002-07-19 HR HR20020609A patent/HRP20020609B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-07-19 US US10/199,805 patent/US20030018164A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-10-22 US US10/692,354 patent/US20040082760A1/en not_active Abandoned
- 2003-10-23 US US10/693,802 patent/US7435791B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-23 US US10/693,123 patent/US20060063918A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1291356B1 (en) | Process for rapid solution synthesis of peptides | |
| HU205091B (en) | Process for producing amino acid-n-carboxyanhydrides protected with urethane group | |
| KR100869520B1 (ko) | 펩티드 제조 방법 | |
| KR20210046730A (ko) | Wnt 헥사펩티드에 대한 용액상 경로 | |
| AU2002300066B2 (en) | Process for Rapid Solution Synthesis of Peptides | |
| HK1050904B (en) | Process for rapid solution synthesis of peptides | |
| HK1050905B (en) | Process for the preparation of peptides | |
| NZ520268A (en) | Process for the preparation of peptides | |
| JPH09136870A (ja) | ジベンゾスベレニルアルギニン誘導体及びこれを用いるペプチド製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20110719 |