PL204245B1 - Preparat probiotyczny i zastosowanie preparatu probiotycznego - Google Patents

Preparat probiotyczny i zastosowanie preparatu probiotycznego

Info

Publication number
PL204245B1
PL204245B1 PL363366A PL36336602A PL204245B1 PL 204245 B1 PL204245 B1 PL 204245B1 PL 363366 A PL363366 A PL 363366A PL 36336602 A PL36336602 A PL 36336602A PL 204245 B1 PL204245 B1 PL 204245B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
product
probiotic
prebiotic
probiotics
combination
Prior art date
Application number
PL363366A
Other languages
English (en)
Other versions
PL363366A1 (pl
Inventor
Annika Mayra-Makinen
Tarja Suomalainen
Outi Vaarala
Original Assignee
Valio Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Valio Ltd filed Critical Valio Ltd
Publication of PL363366A1 publication Critical patent/PL363366A1/pl
Publication of PL204245B1 publication Critical patent/PL204245B1/pl

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065Microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745Bifidobacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/175Rhamnosus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51Bifidobacterium
    • A23V2400/529Infantis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/61Propionibacterium
    • A23V2400/617Freudenreichii

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
  • Revetment (AREA)

Description

Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy preparatu probiotycznego i zastosowania preparatu probiotycznego. Preparat probiotyczny jest preparatem zawierającym bakterie kwasu mlekowego, bakterie wytwarzające kwas propionowy i/lub bifidobakterie, w różnych połączeniach. Probiotyki są korzystnie łączone z odpowiednimi prebiotykami dla wytworzenia synbiotyku. Preparat według wynalazku może być spożywany jako taki lub w połączeniu z odpowiednim pokarmem, takim jak produkt nabiałowy lub napój i jest użyteczny terapeutycznie dla pobudzenia układu immunologicznego i dla ogólnej poprawy zdrowia.
Stan techniki
Probiotyki są żywymi mikroorganizmami, które, gdy są podane człowiekowi lub zwierzęciu wywołują dobre samopoczucie gospodarza przez poprawę równowagi mikroorganizmów w jelicie (Fuller, R. Probiotics in man and animals, 1989, J. Appl. Microbiol. 66:365-378). Najlepiej udokumentowane probiotyki obejmują L. rhamnosus LGG, L. johnsonii LA1, L. casei Shirota i Bifidobacterium lactis Bbl2. Ponadto, szereg innych probiotyków został opisany w literaturze specjalistycznej (patrz przykładowo M.E. Sanders i J.H. in't Veld 1999. Antonie van Leeuwenhoek 76:293-315, Kluwer Academic Publishers). Wpływ probiotyków poprawiających zdrowie obejmuje równoważenie i utrzymywanie flory jelitowej, pobudzanie systemu odpornościowego i aktywności przeciwnowotworowej. Pożyteczne wpływy probiotyków w ludzkich jelitach opierają się na szeregu czynnikach wywoływanych przez żywe komórki bakterii, ich struktury komórkowe i produkty metabolizmu. Probiotyki są zazwyczaj podane w odżywkach lub jako kapsułki.
Bakteria może być uznana jako probiotyk jeśli zasadniczo spełnia następujące wymagania (Lee, Y-K i Salminen, S. 1995 The coming age of probiotics. Trend Food Sci Technol, 6:241-245): pozostaje żywotna w warunkach powszechnie panujących w układzie pokarmowym (niskie pH w żołądku, kwasy układu pokarmowego, itp.); przyczepia się do ścian jelit; metabolizuje w jelicie; daje się obrabiać technologicznie (wytrzymuje obróbkę); ujawnia zbadany klinicznie i opisany wpływ na zdrowie i jest bezpieczna do spożywania.
Prebiotyki są nie ulegającymi trawieniu składnikami pokarmu poprawiającymi ludziom zdrowie przez wybiórcze pobudzanie wzrostu i aktywności pewnych probiotycznych bakterii w jelicie grubym (Gibson, G.R. i Roberfroid, M.B. 1995. Dietary modulation of the human colonie microbiota - introducing a concept of prebiotics. J. Nutr. 125:1401-1412). Prebiotyk jest zazwyczaj nie ulegającym trawieniu węglowodanem (oligo- lub polisacharyd) lub cukrolem (alkohol cukrowy), który nie jest degradowany lub absorbowany w górnej części układu pokarmowego. Znane prebiotyki użyte w komercyjnych produktach obejmują inulinę (frukto-oligosacharyd lub FOS) i transgalakto-oligosacharydy (GOS lub TOS).
Synbiotyk jest określony jako kombinacja prebiotyku i probiotyku, prebiotyk wspomaga żywotność dodanego mikroorganizmu i jego przyleganie do jelita, przez co sprzyja poprawie zdrowia (Gibson and Roberfroid 1995, powyżej). Gdy nie strawione węglowodany przechodzące przez jelito cienkie są fermentowane w jelicie grubym, tworzone są na przykład krótko łańcuchowe kwasy tłuszczowe, inne kwasy organiczne, alkohole, wodór i dwutlenek węgla (Gibson and Roberfroid 1995, powyżej). Pierwszorzędowe kwasy tłuszczowe wytworzone podczas fermentacji to kwas octowy, kwas masłowy i kwas propionowy (Cummings, J.H. Short-chain fatty acids, w: Human Colonic Bacteria: Role in Nutrition, Physiology and Pathology, G.R. Gibson i G.T. Macfarlane (wyd.), str. 101-130, CRC Press, Boca Raton, 1995). Ogólnie zwiększenie liczby krótko-łańcuchowych kwasów tłuszczowych byłoby korzystne. Nie strawione węglowodany są głównym substratem dla mikroorganizmów jelita grubego, choć mogą one również obejmować związki fermentacji jelitowej, która jest niekorzystna. (Gibson i Roberfroid, 1995, powyżej).
Układ pokarmowy człowieka jest zasiedlony licznymi bakteriami żyjącymi w symbiozie z gospodarzem. Istnieją ogromne różnice w zawartości bakterii pomiędzy różnymi częściami przewodu pokarmowego, około 95% wszystkich bakterii jelitowych występuje w jelicie grubym będącym najważniejszą częścią jelit. Zbadano, że ponad 400 gatunków bakterii rozwija się w jelicie grubym. Ponadto, znane są mikroorganizmy, które przejściowo występują w jelitach (G.R. Gibson i M.B. Roberfroid (wyd.) Colonic Microbiota; Nutrition and Health. Kluwer Academic Publisher, Dordrecht, 1999). Dominującymi gatunkami są: Bacteroides, Bifidobacterium, Coprococcus, Peptostreptococcus, Eubacterium and Ruminococcus. Szereg gatunków Lactobacillus, Streptococcus, Fusobacterium, Veillonella, Propionibacterium i Enterobacteriaceae jest nieznacznie rzadszych. Niektóre z tych gatunków reprezentują użyteczne mikroorganizmy, podczas gdy inne mogą nawet być szkodliwe. Średnia zawartość mikroorganizmów w odchodach wynosi 1012 cfu/g (na suchą masę). Bakterie degradują i fermentują te składPL 204 245 B1 niki pokarmu w jelicie grubym, które nie ulegają absorpcji w jelicie cienkim, w którym produkty końcowe fermentacji są zaabsorbowane dla wykorzystania przez organizm. Poza odżywianiem równowaga mikroorganizmów w jelicie grubym ma główne znaczenie dla stanu zdrowia człowieka (Tannock, G.W. 1998. Studies of the intestinal microflora: A prerequisite for the development of probiotics, Int. Dairy J. 8:527-533). Zmiany w składzie flory jelitowej lub nagła redukcja ich ilości (ze względu na ostrą biegunkę, leczenie antybiotykami, itp.) zwiększa zakażalność potencjalnie patogennymi szczepami, co może mieć poważne konsekwencje (powstanie alergii, chorób jelitowych, raka).
Enzymy β-glukuronidazowe wytworzone przez bakterie jelitowe są uważane za uczestniczące, przykładowo, w powstawaniu związków rakotwórczych. Steroidy i inne związki rakotwórcze, metabolizowane są w wątrobie i następnie są koniugowane z kwasem glukuronowym. Żółć dostarcza skoniugowanego związku glukuronowego do jelita cienkiego i z niego związek przechodzi dalej do jelita grubego gdzie enzymy glukuronidazowe mogą hydrolizować ten związek, co za tym idzie uwalniać toksyczne związki do jelita grubego (Rowland, I.R. 1995. Toxicology of the colon: role of the intestinal microflora, w: Human Colonic Bacteria, Role in nutrition, physiology, and pathology. Wydawcy: Gibson, G. R. i Macfarlane, G.T., str. 155-174, Boca Raton: CRC Press). Przypuszcza się, że gatunki Eubacterium, Bacteroides i Clostridium uwalniają większe ilości tych szkodliwych enzymów do jelit, niż przedstawiciele gatunków Bifidobacterium i Lactobacillus. Powinno to zatem być przyczyną dla której korzystnym będzie aby flora jelitowa składała się z bifidobakterii i bakterii kwasu mlekowego.
Ponadto, glikozydy pochodzące na przykład z warzyw i herbaty, przykładowo, nie są pobierane w jelicie cienkim i przechodzą do jelita grubego, gdzie mogą być hydrolizowane przez działanie β-glukozydazy tworząc toksyczne lub mutageniczne związki aglikanowe (Goldin, B.R. 1990. Intestinal Microflora: metabolism of drugs and carcinogens. Annals of Medicine 22:43-48).
Ponadto, flora jelitowa wytwarza enzym ureazę rozkładający mocznik do amoniaku. Duże ilości amoniaku mogą być toksyczne dla komórek nabłonkowych jelita (Mobley, H.L.T. i Hausinger, R.P. 1989. Microbial ureases: significance, regulation and molecular characterization. Microbiological Reviews 53:85-108).
Ludzka flora jelitowa tworzy się podczas wczesnych lat życia i potem już nie dochodzi do większych zmian w jej składzie. Mogą mieć jedynie drobne zmiany w obrębie gatunków (w bifidobakteriach, przykładowo).
Wraz z rosnącym zrozumieniem znaczenia flory jelitowej badania nad nią aktywnie ogniskują się na odkrywaniu czynników, które mogą być użyte dla wpływania na skład flory i jej działanie (żywotność) w taki sposób, że korzystne gatunki bakterii będą mogły być wzmacniane a szkodliwe ograniczane. Zakłada się, że działanie mikroorganizmów może być zaburzone przez prebiotyki wspierające korzystne bakterie. Intensywne badania przeprowadzono na galaktooligosacharydach (GOS), które są di-, tri- tetra-, penta- i heksasacharydami i które zawierają głównie jednostki galaktozy. Są one wytwarzane enzymatycznie z laktozy i zawartość produktu końcowego zależy od użytego enzymu (Matsumoto, K. i wsp., 1993. Galactooligosaccharides, w: Oligosaccharides. Production, properties and applications. Wyd. Nakakuki, T., Japanese Technology Reviews. tom. 3. nr 2., str. 90-116, Gordon i Breach Science Publishers, Szwajcaria, Australia). Wcześniej pokazano, że GOS wykazywały przykładowo właściwości bifidogeniczne, tj. takie, które wspomagają wzrost bifidobakterii (Ito, M. i wsp., 1990. Effect of administration of galactooligosaccharides on the human faecal microflora, stool weight, and abdominal sensation. Microb. Ecol Health Dis. 3:285-292).
Stan techniki
Zarówno produkty zawierające pojedynczy szczep probiotyczny i kombinacje wielkiej liczby różnych probiotyków były powszechnie opisane w literaturze naukowej. Synbiotyki były również opisane w literaturze naukowej.
Publikacja EP 904 784, N.V. Nutricia, przykładowo opisuje produkt probiotyczny zawierający Bifidobacterium, Enterococcus faecium i Lactobacillus. Ponadto, produkt ten może zawierać prebiotyki takie jak polisacharydy lub nie ulegającą degradacji skrobię i immunoglobuliny, witaminy, itp. Zgodnie z tą publikacją, produkt ten posiada działanie wspierające zdrowie w tym sensie, że przykładowo pobudza układ immunologiczny. Jednakże, efekt ten nie był pokazany w testach klinicznych ani nie badano żadnych innych aktywności biologicznych.
WO 00/33854, N.V. Nutricia opisuje produkt zawierający probiotyk i oligosacharydy. Probiotyki w szczególności odnoszą się do Lactobacillus i Bifidobacterium, choć Pediococcus, Propionibacterium, Leuconostoc i Saccharomyces sa również wspomniane. Uwzględnione prebiotyki obejmują transgalaktooligosacharydy (TOS) i fruktooligosacharydy (FOS). Zgodnie z publikacją, szczególnie korzystna
PL 204 245 B1 kombinacja obejmuje Lactobacillus rhamnosus i transgalaktooligosacharyd lub produkt hydrolizy galaktanu ziemniaka, kombinację tą i jej przygotowanie zilustrowano również w przykładach. Zgodnie z tą publikacją, produkt ma działanie poprawiające zdrowie i jest szczególnie użyteczny w leczeniu chorób jelitowych. Jednakże, jego aktywności nie zademonstrowano w jakikolwiek sposób.
W WO 97/34615, University of New South Wales, opisano probiotyczną kompozycję zawierającą dodatkowo jeden lub więcej probiotyków, odporną skrobię (nie degradowalną) i oligosacharyd, oraz synergiczny efekt uzyskany pomiędzy tymi trzema składnikami. Wspomnianymi probiotykami są Saccharomyces, Bifidobacterium, Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium, Propionibacterium, Lactococcus, Streptococcus, Enterococcus, Staphylococcus, Peptostreptococcus and Lactobacillus, i oligosacharydy obejmujące między innymi frukto- i galaktooligosacharydy. Przykłady pokazują synergiczny efekt bifidobakterii, skrobii kukurydzianej i fruktooligosacharydów w objętość bifidobacterii. Jednakowoż, żaden leczniczy efekt nie został opisany.
W US 5,895,648, Sitia-Yomo S.p.A., opisali probiotyczną kompozycję zawierają ca, w liofilizowanej postaci, żywe bakterie przynajmniej dwa gatunki bifidobakterii i przynajmniej dwa gatunki Lactobacillus lub Streptococcus połączone z jednym lub większą liczbą oligosacharydów. Kompozycja ta zawiera łącznie 4 do 20 części wagowych probiotyków i 5 do 22 części wagowych oligosacharydów, z których wspomniane są przykładowo galakto- i frukto-oligosacharydy, w szczególności inulina. Wspomniane probiotyki obejmują Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Streptococcus thermophilus i Streptococcus faecium. Zgodnie z publikacją mieszanina zawierająca probiotyki i prebiotyki może być dodana do deserów opartych na mleku, mleka lub soków dla zrównoważenia działania jelita. Jednakże, nie opisano żadnej aktywności biologicznej tej kombinacji.
Publikacja Milchwissenschaft (1988) tom 53, nr str. 603-605, opisuje mleko PAB zawierające trzy szczepy bakterii: Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii MTCC 1371, Lactobacillus acidophilus R. i Bifidobacterium bifidum NDRI. Prebiotyki nie zostały dodane do produktu. Zgodnie z tą publikacją mleko PAB jest użyteczne dla niemowląt i dzieci również tych, dotkniętych nietolerancją laktozy.
W WO 99/10476 opisano pobudzające działanie specyficznych szczepów bakteryjnych tj. Lactobacillus rhamnosus HN001 (NM97/09514) i HN067 (NM97/01925) i Lactobacillus acidophilus HN017 (NM97/09515) I Bifidobacterium lactis HN019 (NM97/09513), na system immunologiczny zmierzony jako zwiększona fagocytoza. Szczepy mogą być użyte pojedynczo lub dodane do produktów nabiałowych lub preparatów farmaceutycznych.
W US 5,902,578, Abbott Laboratories, odnosi się do sposobu zapobiegania i leczenia biegunki mieszaniną Lactobacillus reuterii, Lactobacillus acidophilus i Bifidobacterium infantis, mieszaninę, którą przygotowano jako proszek, płyn lub pigułki.
Biologiczne i lecznicze efekty probiotyków i synbiotyków powyższego rodzaju były również opisywane w stanie techniki. Jako przykład można wspomnieć Gallagher, D. i wsp., Journal of Nutrition (1996) tom 126, nr 5, str. 1362-1371, który opisuje wpływ bifidobakterii i Lactobacillus acidophilus na raka jelita grubego u szczurów i stwierdza, że najlepsze wyniki uzyskano stosując zarówno tą bakterię i jak i fruktooligosacharyd, i Kirjavainen, P. i wsp., Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology (listopad 1999) tom 6, nr 6, str. 799-802, który opisuje pozytywne skutki dwóch niezależnie zbadanych szczepów wytwarzających kwas mlekowy, Lactobacillus rhamnosus GG i Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii JS, na poziom limfocytów i co za tym idzie odpowiedzi immunologicznej myszy. Kombinacja tych dwóch bakterii nie została opisana lub zbadana.
Łączenie probiotyków z innymi substancjami posiadającymi wpływ terapeutyczny opisano również w stanie techniki. Przykładowo, WO 97/29762 i WO 97/29763, Procter & Gamble Company, opisali zastosowanie bakterii mlekowych i bifidobakterii w połączeniu z galakto- lub fruktooligosacharydami wraz z rośliną z rodzaju Ericaceae lub wyciągiem z niej dla leczenia infekcji dróg moczowych i chorób jelita, i WO 00/29007, Reddy, opisuje po łączenie probiotyków takich jak Lactococcus, Lactobacillus, Pediococcus, Streptococcus, Propionibacterium, Brevibacterium, Penicillium i Saccharomyces produktami naturalnymi z opartymi na roślinie i substancjami lekopodobnymi.
Choć probiotyki i synbiotyki były intensywnie badane, dobre i wszechstronne produkty komercyjne nie są dostępne w żadnym znaczącym zakresie. W konsekwencji istnieje ciągła potrzeba oferowania konsumentom nowych produktów o jasno wykazanych działaniach probiotycznych i wytworzonych w postaci pozwalającej na ich zastosowanie przykładowo jako części lub uzupełnienia codziennej diety.
PL 204 245 B1
Krótki opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest preparat probiotyczny charakteryzujący się tym, że zawiera mikroorganizmy Lactobacillus rhamnosus LGG (ATCC 53103), Lactobacillus rhamnosus LC705 (DSM7061), Propionibacterium freundenreichii ssp. Shermanii PJS (DSM7067) i bifidobakterie przy czym mikroorganizmy zawarte są w preparacie we wzajemnej proporcji każdego mikroorganizmu pomiędzy około 10:1 do 1:10.
W korzystnym wykonaniu preparatu wedł ug wynalazku jako bifidobakterie preparat zawiera Bifidobacterium infantis Bbi99 (DSM 13692). Także korzystnie preparat według wynalazku zawiera ponadto tradycyjne stosowane w mleczarstwie mikroorganizmy starterowe.
W innej korzystnej realizacji wynalazku preparat zawiera również prebiotyk lub jest uż yty wraz z prebiotykiem, którym to prebiotykiem bardziej korzystnie, moż e być oligosacharyd. Jako oligosacharyd, w najkorzystniejszym wykonaniu wynalazku jest galakto-oligosacharyd (GOS).
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie preparatu zdefiniowanego powyżej do zapobiegania lub leczenia chorób jelitowych, alergii, tworzenia się substancji rakotwórczych/szkodliwych i raka, jako dodatek do produktu spoż ywczego, produktu farmaceutycznego, produktu wzmacniają cego zdrowie lub produktu naturalnego.
Korzystnie, w zastosowaniu preparat jest dodany do produktu mlecznego, napoju, soku, zupy lub pokarmu dla dzieci.
Zgodnie z wynalazkiem stosowane są głównie dwa szczepy bakterii mlekowych, tj. Lactobacillus rhamnosus LGG (ATCC 53103) i Lactobacillus rhamnosus LC705 (DSM 7061). Bakteria propionowa jest zazwyczaj Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii PJS (DSM 7067). Bifidobakteria może być jakąkolwiek bifidobakterią posiadająca działanie probiotyczne, typowo użyte są szczepy należące do gatunków Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum and Bifidobacterium adolescentis.
Łączone są zazwyczaj co najmniej trzy z tych bakterii i kombinacja ta korzystnie obejmuje Lactobacillus rhamnosus LGG i/lub Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii PJS.
Najbardziej korzystną kombinacją jest mieszanina czterech szczepów Lactobacillus rhamnosus LGG (ATCC 53103), Lactobacillus rhamnosus LC705 (DSM 7061), Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii PJS (DSM 7067) i Bifidobacterium infantis Bbi99 (DSM 13692). Jednakże jeśli jest to pożądane jakakolwiek bifidobakteria (taka jak Bbl2) może być uwzględniona w kombinacji. Korzystnie użytym prebiotykiem jest galaktooligosacharyd (GOS).
Inną korzystną kompozycją jest kombinacja bifidobakterii i bakterii propionowych, w której jakakolwiek bifidobakteria może być użyta wraz z Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii PJS (DSM 7067).
Nowa kombinacja może być użyta jako taka lub jako część innego produktu takiego jak farmaceutyk lub produkt pokarmowy. Kombinacja według wynalazku ma korzystny wpływ na równowagę w jelicie człowieka w ten sposób, ze zwiększa wytwarzanie entero-laktonu i zmniejsza niekorzystnie wysoką wartość pH. Kombinacja wpływa również na odpowiedź immunologiczną przez zwiększenie ilości limfocytów i przez γ-interferon (IFN) oraz przez ograniczenie powstawania substancji rakotwórczych. Kombinacja według wynalazku jest zatem, użyteczna dla zapobiegania i leczenia zaburzeń jelitowych, uczuleń i nowotworu i dla zapewniania ogólnego stanu zdrowia.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem kombinacja jest również stosowana jako substancja lecznicza w wytwarzaniu substancji leczniczych.
Szczegółowy opis wynalazku
Szczepy użyte w wynalazku, Lactobacillus rhamnosus GG (LGG), Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC705 i Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii JS (PJS) były opisane w stanie techniki. Bifidobacterium infantis Bbi99, który może być zawarty w kombinacji jest nowym szczepem i będzie bardziej szczegółowo opisany poniżej.
Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) jest opisany przykładowo w dokumencie patentowym US 5,032,399, Gorbach i Goldin. Szczep ten wyizolowano z ludzkich odchodów, jest on zdolny do dobrego wzrostu przy pH 3 oraz przeżywa nawet przy niższych wartościach pH jak również przy wysokiej zawartości kwasu żółciowego. Szczep wykazuje znakomite przywieranie zarówno do komórek śluzówki jak i do komórek nabłonkowych. Wydajność wytwarzania kwasu mlekowego z glukozy jest dobra: gdy rośnie na pożywce MRS, szczep wytwarza 1,5 - 2% kwasu mlekowego. Szczep nie fermentuje laktozy i co za tym idzie nie wytwarza kwasu mlekowego z laktozy. Szczep wykorzystuje następujące węglowodany: D-arabinoza, ryboza, galaktoza, D-glukoza, D-fruktoza, D-mannoza, ramnoza, dulcy6
PL 204 245 B1 tol, inozytol, mannitol, sorbitol, N-acetyloglukozamina, amigdalina, arbutyn, eskulina, salicynian, 5 celobioza, maltoza, sacharoza, trehaloza, raelezytoza, gentybioza, D-tagatoza, L-fukoza i glukonian. Szczepy rosną dobrze przy +15 - 45°C, optymalna temperatura mieści się w zakresie 30 - 37°C. Lactobacillus rhamnosus GG jest zdeponowany w American Type Culture Collection pod numerem dostępu ATCC 10 53103.
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC705 jest opisany bardziej szczegółowo w dokumencie patentowym FI 92498, Valio Oy. LC705 jest Gram dodatnią krótką pałeczką występującą w łańcuchach; jest homofermentującą słabo proteolityczną; rosnącą dobrze w +15 - 45°C; nie wytwarza amoniaku z argininy; jest katalazo ujemna; gdy rośnie na pożywce MRS (LAB M), szczep wytwarza 1,6% kwasu mlekowego mającego aktywność optyczną o konfiguracji L(+); szczep rozkłada cytrynian (0,169%) co za tym idzie wytwarza diacetyl i acetoinę; szczep fermentuje co najmniej następujące węglowodany (cukry, cukrole): ryboza, galaktoza, D-glukoza, D-fruktoza, D-mannoza, L-sorboza, ramnoza, mannitol, sorbitol, metylo-D-glukozyd, N-acetyloglukozamina, amigdalina, arbutyn, eskulina, salicynian, celobioza, maltoza, laktoza, sacharoza, trehaloza, melezytoza, gentobioza, D-turanoza i D-tagatoza. LC705 przywiera słabo do komórek śluzówki, lecz średnio dobrze do komórek nabłonka. Żywotność szczepu jest dobra przy niskich wartościach pH i wysokich zawartościach kwasu żółciowego. Szczep przeżywa dobrze przy zasoleniu 5% i całkiem dobrze przy zasoleniu 10%. Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC705 jest złożony w Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM) pod numerem dostępu DSM 7061.
Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii JS (PJS) jest również opisana bardziej szczegółowo w dokumencie patentowym FI 92498, Valio Oy. PJS jest Gram dodatnią krótką pałeczką; fermentuje glukozę, fruktozę, galaktozę i laktozę; fermentuje dobrze mleczan i jego optimum wzrostu jest w temperaturze 32°C. Żywotność szczepu przy niskich wartościach pH i wysokich zawartościach kwasu żółciowego jest znakomita. Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii JS jest złożony w Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM pod numerem dostępu DSM 7067.
Bifidobacterium infantis Bbi99 wyizolowano z odchodów zdrowego noworodka. B. infantis Bbi99 jest Gram dodatnią pleomorficzną pałeczką. Szczep jest katalazo ujemny, fruktozo-6-fosforano-fosfoketolazo dodatni (F6PPK) i zarówno α- i β-galaktozydazo- i α- i β-glukozydazo-dodatni. B. infantis Bbi fermentuje poniższe węglowodany: ryboza, galaktoza, D-glukoza, D-fruktoza, D-mannoza, metylo-D-mannoza, N-acetyloglukozamina, eskulina, salicyna, celobioza, maltoza, laktoza, melibioza i gentybioza. Optymalna temperatura wzrostu jest 30 - 40°C i pH 6,5 - 7,0. Szczep ten gdy rośnie na podłożach zawierających heksozę, wytwarza kwas L-mlekowy i kwas octowy (w proporcji 2:3). Zawartość G + C w DNA wynosi 55 - 67% mol. Bifidobacterium infantis Bbi99 złożono w Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM), zgodnie z Układem Budapesztańskim pod numerem dostępu DSM 13692 28 sierpnia 2000.
Preparat według wynalazku może obejmować również inne mikroorganizmy takie jak mikroorganizmy i probiotyki zawarte w starterach używanych w przemyśle mleczarskim. Istnieje wiele dobrze udokumentowanych szczepów starterowych, które są komercyjnie dostępne u producentów takich jak Hansen A/S, Dania, i Danisco/Wiesby GmbH, Niemcy.
Dla przygotowania preparatu według wynalazku, mikroorganizmy są hodowane stosując sposoby konwencjonalne znane w stanie techniki. Mogą być one hodowane jako czyste hodowle lub jako różnie mieszane hodowle. Hodowle mogą być użyte jako takie lub jeśli to pożądane mogą być obrobione przykładowo przez oczyszczanie, zatężanie, liofilizowanie lub wykańczanie ich dla wytworzenia różnych preparatów.
W celu wytworzenia pożądanego efektu probiotycznego stosuje się łącznie odpowiednie ilości probiotyków. Ilość każdego takiego probiotyku może, co za tym idzie, różnić się w szerokim zakresie, w zależności od, przykładowo, użytych szczepów i ich liczby, całkowitej liczby komórek probiotyków, całkowitej dawki dziennej i od innych właściwości i składników produktu. Dzienna dawka preparatu zazwyczaj obejmuje około 106 - 1010 cfu probiotyków.
Jeden lub więcej probiotyków korzystnie dodaje się do kombinacji preparatu tworząc synbiotyk. Prebiotyk jest wybrany zgodnie z mikroorganizmami zawartymi w tej kombinacji rozpatrywanej tak, że będzie podtrzymywała wzrost mikroorganizmów. Odpowiednie prebiotyki mogą zawierać np. oligosacharydy, szczególnie galaktooligosacharyd (GOS), palatynozooligosacharyd, oligosacharyd sojowy, gentooligosacharyd, ksylooligomery, nie ulegającą degradacji skrobię, laktosacharozę, laktulozę, laktytol, maltytol, polidekstrozę lub im podobne. W celu wytworzenia efektu prebiotyku do synbiotyku dodaje się skuteczną ilość prebiotyku. To co jest ilością dostateczną jest określone przykładowo zgodPL 204 245 B1 nie z rozważanym szczepem, którego to dotyczy, ilość prebiotyków obejmuje i inne składniki i inne zastosowania produktu. Co za tym idzie, ilość również różni się w szerokim zakresie; może być od 0,5 do 5 g w dziennej dawce, przykładowo.
Prebiotyk nie musi koniecznie być uwzględniony w kombinacji. Zależnie od końcowego produktu i celu użycia, może być lepszym spożycie prebiotyku oddzielnie, choć w przybliżeniu w tym samym czasie co kombinacji probiotyku. W pewnych przypadkach wystarczającym może być spożycie jedynie kombinacji probiotyku, tak więc prebiotyk wcale nie będzie potrzebny. Przykładem tego jest przypadek gdy warunki jelitowe gospodarza są odpowiednie dla wzrostu probiotyków bez potrzeby dodania prebiotyków i gdy prebiotyk jest zawarty w normalnej diecie (jeśli jest spożyty przykładowo w owsiance lub chlebie ryżowym).
Niniejszy wynalazek pokazuje, że użyte mikroorganizmy spełniają kryteria postawione probiotykom: przeżywają dobrze w wymagających warunkach układu pokarmowego, przywierają dobrze do komórek jelita i namnażają się dobrze w jelitach. Pokazano również, że ujawniają one znakomite biologiczne efekty; przykładowo, zwiększają liczbę mikroorganizmów pożądanych z punktu widzenia zdrowia i ograniczają liczbę szkodliwych mikroorganizmów w jelicie, ograniczają aktywność szkodliwych enzymów i co za tym idzie tworzenie szkodliwych lub nawet rakotwórczych substancji i mają pobudzające działanie na odpowiedź immunologiczną.
Złożony preparat według wynalazku może być zastosowany jako taki lub w postaci kapsułek, pigułek lub tabletek, przykładowo wytworzonych w tradycyjnych procesach sporządzania farmaceutycznych produktów. Preparat według wynalazku może również być dodany do rozmaitych jadalnych produktów, takich jak pokarmy, napoje lub produkty konfekcjonowane, produkty zapewniające zdrowie, produkty naturalne, itp.. W kontekście niniejszego wynalazku preferowane są produkty zawierające preparat według wynalazku, takie jak produkty mleczne, szczególnie jogurty i inne produkty z mleka fermentowanego; sery i pasty, pokarm dla dzieci; soki i zupy oraz kapsułki. Produkt w postaci kapsułki zazwyczaj zawiera jedynie kombinację probiotyku, prebiotyk będzie spożyty niezależnie.
Produkty końcowe są przygotowane tradycyjnymi sposobami, a preparat dodaje się albo w trakcie z przygotowywania albo później, w czasie wykończania produktu końcowego.
P r z y k ł a d 1
Sporządzanie preparatu
Preparat przygotowano z mieszaniny bakterii, dodając, gdy jest to pożądane galakto-oligosacharydu (GOS) jako prebiotyku. Mieszanina bakteryjna została utworzona z hodowli bakterii (zatężonych lub zliofilizowanych) czterech szczepów, tj. Lactobacillus rhamnosus LGG (ATCC 53103), Lactobacillus rhamnosus LC705 (DSM 7061), Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii PJS (DSM 7067) i Bifidobacterium infantis Bbi99 (DSM 13692).
Zarówno LGG i bifidobakterie były hodowane indywidualnie.
LGG hodowano w pożywce zawierającej 5,0% przesączu serwatki (Valio Oy), 0,5% hydrolizatu kazeiny (Valio Oy), 0,5% drożdży technicznych, i 0,0015% MnSO4 x H2O. Składniki pożywki rozpuszczano w wodzie i pożywkę sterylizowano (przez 20 min w 120°C). Hodowlę prowadzono w temperaturze 37°C i przy pH 5,8 (ustawione NH4OH) przez około 18 godz., i mieszając przez prędkości 100 obr/min. Po hodowaniu komórki bakterii zatężono, płukano i liofilizowano stosując 10% (obj/obj) uzupełnienie czynnikiem zabezpieczającym, takim jak pożywka sacharozowa o stężeniu 46% lub podobna alternatywna, znana fachowcom. Końcowe stężenie bakterii w hodowli wynosiło więcej niż 1 x 109 cfu/ml, w koncentracie więcej niż 1 x 1010 cfu/g i w zliofilizowanym proszku więcej niż 1 x 1011 cfu/g.
Kompozycja pożywki hodowlanej dla bifidobakterii była jak następuje: przesącz serwatki 4% (Valio Ltd.), hydrolizat kazeiny 1,0% (Valio Ltd.), ekstrakt drożdży technicznych 1,0% (LAB M), cysteina-HCl 0,03% (Merck, Darmstadt, Niemcy). Inne składniki pożywki były najpierw rozpuszczane w wodzie, następnie dodawano cysteinę-HCl i pożywkę wysterylizowano (przez 20 min w 120°C). Hodowlę prowadzono przez około 18 - 20 godz., w temperaturze 37°C i przy pH 6,7 (ustawione NH4OH), mieszając przy prędkości 100 obr/min. Zawartość bakterii w hodowli wynosiła więcej niż 1 x 109 cfu/ml. Po hodowli bakterie zatężono, przemywano i zliofilizowano stosując 10% (obj/obj) uzupełnienie czynnikiem zabezpieczającym, takim jak 46% pożywka sacharozowa lub podobne, alternatywne, znane fachowcom. Zawartość bakterii w koncentracie była większa niż 1 x 1010 cfu/g i w zliofilizowanym proszku więcej niż 1 x 1011 cfu/g.
LC705 i PJS wyhodowano razem wyszczepiając komórki bakterii do pożywki opartej na serwatce w proporcji 1:2. Oparta na serwatce pożywka zawierała 3,5 - 5% przesączonej serwatki (Valio Oy), 1,0% hydrolizatu kazeiny i 1% ekstraktu z drożdży (Valio Oy). Szczepy hodowano przez trzy dni w 30°C,
PL 204 245 B1 pH pożywki utrzymywano na poziomie 4,5 przy pomocy automatycznego urządzenia do ustalania pH. Po hodowli, komórki bakterii zatężono, przemywano i liofilizowano stosując uzupełnienie 10% (obj/obj) czynnikiem zabezpieczającym, takim jak 46% pożywka sacharozowa lub inną podobną, znaną fachowcom. Zawartość każdej bakterii w koncentracie była >1 x 1010 cfu/g i w zliofilizowanym proszku >1 x 10 cfu/g.
Szczepy mogą również być hodowane niezależnie. W tym przypadku LC 705 hodowano jak opisano powyżej w przypadku łączonej hodowli, jedynie czas hodowli wynosił 1 dzień w 30°C. PJS hodowano w pożywce zawierającej 2% przesączu serwatki, 1,0% hydrolizatu kazeiny i 1% ekstraktu z drożdży. Szczep hodowano przez 3 dni w 30°C w pH 6,3 po czym obróbkę prowadzono jak wyżej.
Koncentraty lub proszki zmieszano w proporcji 1:1:1. Gdy LC705 i PJS hodowano niezależnie proporcje mieszania wynosiły 1:1:1:1. Otrzymana mieszanina koncentratów lub zamrożonych proszków jest użyta jako probiotyczna część w różnych zastosowaniach produktu będącego złożonym preparatem. Mieszanina ta jest dodawana do stosowanego produktu do otrzymania poniższych stężeń końcowych bakterii w produkcie:
LC705 >106 cfu/g produktu
LC707 >106 cfu/g produktu
PJS >106 cfu/g produktu
Bifidomacterium >106 cfu/g produktu
GOS (Valio Oy) dodano gdy było to pożądane, jako oddzielny produkt dla otrzymania stężenia GOS w produkcie wynoszącego około 0,5 - 5 g/dawkę.
P r z y k ł a d 2
Przywieranie szczepów i ich tolerancja w warunkach jelitowych
Przyleganie szczepów do śluzówki badano zgodnie z Ouweland i wsp. (Ouweland, A. C, Kirjavainen, P. V., Gronlund, M. - M., Isolauri, E., i Salminen, S. J. 1999. Adhesion of probiotic micro-organisms to intestinal mucus . Int. Dairy J. 9:623-630). LGG i będąca probiotykiem bakteria PJS przywierała znakomicie do śluzówki jelita, Bbi99 średnio i LC705 słabo. Przyleganie jest wymogiem wstępnym dla mikroorganizmu mającego korzystny wpływ na jelita. Z drugiej strony LC705 jest znany jako dobrze przylegający do komórek nabłonka, podobnie jak LGG (Lehto, E. i Salminen S. 1997. Adhesion of two lactobacillus strains, one lactococcus strain and one propionibacterium strain to cultured human intestinal CaCO-2 cell lines. Bioscience Microflora 16: 13-17). Właściwości te są korzystne gdy istnieje nierównowaga w jelicie i osłabiony został ochronny śluz.
T a b e l a 1
Właściwości adhezyjne (przyleganie) szczepów probiotycznych
Szczep Przyleganie % (+odchylenie std.)
LGG 26,3±1,3
LC705 0,7±0,2
PJS 24,9±2,2
Bbi99 4,6±2,3
Testy in vitro pokazały szczepy znoszące fizjologiczne zawartości soli żółciowych i niskie pH żołądka.
Szczepy przetestowano przy różnych wartościach pH na 5 pożywkach MRS, których pH ustalono kwasem mlekowym do wartości pH 4, pH 3 i pH 2. Zbadane szczepy (świeże hodowle) wyszczepiono na 1% pożywkę pH i hodowano w 37°C przez 3 godz., po czym określono zawartość żywych komórek stosując agar dogodny dla danego szczepu (patrz tabela 5). Szczepy zachowały znakomicie swoją żywotność w 3 godzinnym procesie przy wartości pH 3. Bakteria propionowa zachowała żywotność nawet w pH 2. W teście tym bakterie nie były chronione przez składniki niesione przez pokarm (takie jak tłuszcz) i co za tym idzie można założyć, zostaną zachowane nawet lepiej wtedy gdy zostaną spożyte in vivo wraz z pokarmem.
PL 204 245 B1
T a b e l a 2
Zawartość komórek szczepów hodowanych w pożywkach MRS z ustalonym pH
Wyjściowa zawartość cfu/ml pH 4 cfu/ml pH 3 cfu/ml pH 2 cfu/ml
Bbi99 1 x 107 2 x 107 >10 >10
PJS 1 x 108 9 x 107 3 x 107 1 x 104
LGG 1 x 107 2 x 107 1 x 107 >102
LC705 6 x 107 2 x 108 4 x 107 >102
W odniesieniu do badania tolerancji soli ż ó ł ciowych testowano szczepy w poż ywkach MRS, które zawierały 0,3% i 0,5% 20 soli żółciowej Oxgal (Sigma), przez zaszczepienie 1% świeżej hodowli w pożywce MRS z solą żółciową. Szczepy hodowano w pożywkach przez 3 godz., w 37°C, po czym zawartość żywych komórek określono przy pomocy agaru właściwego dla szczepu (patrz tabela 5). Wszystkie szczepy znakomicie przeżyły traktowanie.
T a b e l a 3
Zawartość komórek hodowanych przy zawartości soli żółciowej wynoszącej 0,3% i 0,5%
Wyjściowa zawartość (cfu/ml) 0,3% soli żółciowej 0,5% soli żółciowej
Bbi99 3 x 107 1 x 107 1 x 107
PJS 6 x 107 6 x 107 5 x 107
LGG 1 x 107 2 x 107 9 x 106
LC705 1 x 107 2 x 107 1 x 107
P r z y k ł a d 3
Selekcja prebiotyku użytecznego dla preparatu
Alternatywne prebiotyki były badane jako poszczególne szczepy przez hodowanie każdego szczepu w pożywce MRS wolnej od cukru, do której dodano 1% badanego prebiotyku. Każdy szczep hodowano przez 1 - 2 dni w optymalnej dla niego temperaturze. Wzrost bakterii obserwowano podczas testu, przez określenie zmętnienia hodowli, przy pomocy spektrofotometru.
Jak pokazano w tabeli 4 najlepszy promotor dla wzrostu dla wszystkich czterech szczepów był galaktooligosacharydem (GOS) uzupełnionym do 1%.
T a b e l a 4
Wpływ prebiotyków na wzrost bakterii
Prebiotyk LGG LC705 PJS Bbi99
GOS + + + + + + +
FOS - - - -
Xylooligomery + + + + +
Polidekstroza + + + + + -
Arabinooligomery - - - -
Pektynooligomery - - - -
Ksylitol - - - -
Maltitol - + + - -
Laktitol - + + - -
PL 204 245 B1
P r z y k ł a d 4
Przygotowanie produktu końcowego
Funkcjonalny napój (po fińsku „tehojuoma”; Valio Oy) użyto jako podstawę dla przygotowania soku (dawka 65 ml/dzień), do którego dodano 0,1 g zliofilizowanej mieszaniny bakterii/dawka (= 65 ml) i 3,8 g 70% syropu GOS/dawka (= 65 ml). Odpowiedni sok bez dodatku syropu GOS lub mieszaniny bakterii użyto jako kontroli.
Zawartości bakterii w przygotowanym soku były jak następuje:
LGG >107 cfu/ml
LC705 >107 cfu/ml
PJS >108 cfu/ml
Bbi99 >107 cfu/ml
Produkty użyto w poniższych testach klinicznych, w których pro = sok+uzupełnienie probiotykiem i syn = sok+uzupełnienie probiotykiem+prebiotykiem
P r z y k ł a d 5
Efekty kliniczne preparatu według wynalazku
Napój opisany w przykładzie 4, zawierający wyżej opisaną kombinację probiotyku (pro) lub kombinację probiotyku i prebiotyku (syn) badano klinicznie na 20 osobnikach płci męskiej. Badane osoby otrzymywały codziennie napój zgodnie z planem badania i podczas badania nie pozwolono im na spożywanie żadnych innych produktów zawierających probiotyk. Schemat badania był taki, że test rozpoczynano okresem wstępnym, kontynuowanym przez okres otrzymywania probiotyków trwający dwa tygodnie i następnie okres synbiotyków, zakończony okresem nazywanym okresem wypłukania.
Schemat i harmonogram badania
Tydzień 8 N (tydzień 11) N (tydzień 13) N (tydzień 15) N (tydzień 17)
I 3 tygodnie *I 2 tygodnie *I 2 tygodnie *I 2 tygodnie *I
Czas wstępny bez probiotyku pro syn Normalna dieta bez probiotyku
Na koniec każdego okresu badane osoby oddawały próbki kału i krwi (=N).
Mikroorganizmy i enzymy analizowano z próbek kału a zawartości enterolaktonu i odpowiedź immunologiczną z krwi.
Mikroorganizmy
Zawartość mikroorganizmów
Całkowita zawartość bakterii mlekowych, LGG, LC705, całkowita zawartość bakterii propionowych PJS i całkowita zawartość bifidobakterii została oznaczona przy pomocy znanych w stanie techniki sposobów i parametry pokazano w tabeli 5.
T a b e l a 5
Sposoby oznaczania mikroorganizmów
Oznaczanie Agar Hodowla temperatura/czas
Bakterie mlekowe MRS 37°C/3 dni beztlenowa
LGG MRS+0,005% wankomycyna (Sigma) 37°C/3 dni
LC705 MRS+0,005% wankomycyna 37°C/3 dni
Bakteria propionowa Mod. YEL 30°C/7 dni beztlenowa
PJS Mod. YEL 30°C/7 dni beztlenowa
Bifidobakteria Agar rafinozowy (RB) 37°C/2 dni beztlenowa
Wpływ na zawartość in vivo komórek bakterii jelitowych
Zawartość LGG, LC705 i PJS wzrastała znacząco w próbkach badanych osób w czasie okresu w którym używały one produkty zawierające probiotyk (tabela 6). Ponieważ zawartość bifidobakterii od
PL 204 245 B1 samego początku testu była bardzo wysoka, zmiany przypuszczalnie miały jedynie miejsce w ramach tych gatunków.
T a b e l a 6
Zawartość bakterii (log, cfu/g w próbkach kału; ±std.)
Początkowa zawartość cfu/g Po podaniu probiotyku cfu/g Po podaniu synbiotyku cfu/g Wypłukiwanie cfu/g
MHB (całkowita) 6,0 (±1,2) 6,2 (±1,2) 6,1 (±1,0) 4,5 (±1,6)
LGG 2,3(±1,0) 4,7 (±1,7) 5,3 (±1,2) 3,0 (±1,6)
LC705 2,0 (±0) 5,2 (±1,3) 5,4 (±1,0) 2,8 (±1,1)
Propionowa 2,7 (±1,4) 5,7 (±1,6) 5,6 (±1,4) 2,4(±1,7)
Bifidobakteria 8,2 (±1,5) 8,6 (±2,1) 8,8 (±2,2) 8,3 (±2,1)
Dodanie synbiotyku do produktu spożytego w teście pobierania poprawiała żywotność dodanych probiotyków w jelicie. Pokazano to na przykład przez zwiększenie zawartości LGG podczas okresu synbiotykowego.
Wpływ na wartość pH
Poziom pH u osób posiadających pH ponad 7 zmniejszał się w grupach, które otrzymywały mieszaninę probiotyku i synbiotyku, podczas gdy nie obserwowano obniżenia u osób o wyjściowej wartości pH niższej niż 7 (tabela 7).
T a b e l a 7
Zmiana PH po uzupełnieniu probiotykiem i synbiotykiem
Kontrola Sam probiotyk Synbiotyk
pH>7 7,2 6,9 6,7
pH<7 6,6 6,7 6,6
Enzymy
Próbki kału opracowywano jak opisali Ling i wsp. (Ling, W-H., Korpela, R., Mykkanen, H., Salminen, S., and Hanninen, O. 1994 Lactobacillus GG supplementation decreases colonic hydrolytic and reductive activities in healthy female adults. Journal of Nutrition 124, 18-24).
β-glukuronidaza i β-glukozydaza oznaczono jak opisano przez Freeman (Freeman, H. J. 1986. Effects of differing purified cellulose pectin, and hemicellulose fibre on faecal enzymes in 1,2-dimethylhydrazine-induced rat colon carcinogenesis. Cancer Research 46: 5529-5532) i ureazę według zaleceń producenta (Boehringer Mannheim nr katalogowy 542946).
W czasie okresów badania nastąpiło zmniejszenie zawartości β-glukuronidazy, ureazy i β-glukozydazy w czasie pobierania probiotyku i synibiotyku (tabela 8). Po pobraniu, poziomy enzymów powróciły do normalnego. Synbiotyk posiadał silniejsze działanie obniżające poziomy enzymu niż mieszanina probiotyku.
T a b e l a 8
Zmiany w zawartości enzymu (nmol/min/g kału)
Ureaza Glukuronidaza Glukozydaza
% zmiany % zmiany % zmiany
Początkowy poziom 1080 292 746
Probiotyk 895 -17 214 -27 673 -9,8
Synbiotyk 592 -45 186 -36 448 -40
Odpłu kiwanie 980 227 640
Metabolizm glukozydazy i glukoronidazy wytwarza związki rakotwórcze. Znaczące obniżenie aktywności enzymu wytworzone przez kombinację probiotyku i synbiotyku według wynalazku, jasno pokazuje pozytywny efekt w odniesieniu do zmniejszenia tworzenia się substancji karcinogennych.
PL 204 245 B1
Zawartość enterolaktonu
Zawartość eneterolaktonu określono metodą Adlercreutz i wsp. (Adlercreutz, H., Fostis, T., Lampę, J., Wahała, K., Makela, T, Brunow, G. i Hase, T. 1993. 20 Quantitative determination at lignans and isoflavonoids in plasma of omnivorous and vegetarian women by isotope dilution gas-chromatography mass-spectrometry. Scan J. Clin Lab Invest 53: 5-18).
Poziomy enterolaktonu u badanych osób z początkowym poziomem enterolaktonu mniejszym niż 10 nmol/l zwiększyły się znacząco w wyniku pobrania synbiotyku (do poziomu 11,2).
Nie zaobserwowano zmian podczas badania w poziomie enterolaktonu u osób, u których poziom enterolaktonu w surowicy był normalny (10<x>30) już na początku testu. Wyniki przedstawiono w tabeli 9.
T a b e l a 9
Zawartość enterolaktonu podczas badania (zgrupowane na podstawie wyjściowego poziomu)
10<x<30 nmol/l <10 nmol/l
Poziom początkowy 24,4 3,2
Probiotyk 19,8 2,6
Synbiotyk 23,9 11,2
Wykazano, że zawartość enterolaktonu jednoznacznie koreluje z zagrożeniem powstania nowotworu: większa zawartość, mniejsze ryzyko. Wynik ten pokazuje również korzystny efekt kombinacji probiotyku i synbiotyku według wynalazku na zmniejszenie zagrożenia rakiem.
Badania immunologiczne
Wpływ na funkcje limfocytu
Funkcje limfocytu badano przed pobraniem produktu synbiotyku i w cztery tygodnie po rozpoczęciu pobierania.
Funkcje limfocytów badano jak następuje:
Limfocyty wyizolowano z krwi obwodowej przy pomocy gradientu Ficoll. Limfocyty pobudzono mitogenem PHA (Sigma) w pożywce hodowlanej RPMI (National Public Health Institute; department of nutrient broths), która zawierała 5% zinaktywowaną surowicę AB+ (Fiński Czerwony Krzyż) i L-glutaminę. Po 48 godzinach zebrano pożywkę hodowlaną dla oznaczenia cytokin z czterech odpowiednich studzienek hodowlanych zawierających komórki o gęstości 200 000 komórek na 200 μl pożywki hodowlanej w studzience, zarówno z lub bez mitogenu. Komórki zebrano po 16 godzinach od dodania tymidyny i mierzono wbudowywanie radioaktywnej tymidyny do DNA (cpn). Zawartość cytokin IL-4, IL-5, TGF-e1 i IFN-γ określono w komórkowych pożywkach hodowlanych przy pomocy metody ELISA.
Podczas badań, nie zaobserwowano zmian w zawartości IL-4, IL-5 i TGF-e1 wydzielonych przez limfocyty. Zawartość IFN-γ wydzielonych przez limfocyty pobudzane przez PHA znacząco zwiększyła się, (p=0,009, test Wilcoxon, patrz fig. 1). Zarówno spontaniczna jak i pobudzona za pomocą PHA proliferacja limfocytów zwiększyła się podczas badań (p=0,0002 w obu przypadkach, test Wilcoxon, fig. 1 i 2).
Zgodnie z wynikami badań zastosowanie produktu synbiotyku zwiększało proliferację limfocytów i wydzielanie cytokiny IFN-γ u badanych osób. IFN-γ należą do cytokin znanych jako Th1, które wzmacniają cytotoksyczną funkcję limfocytu i są antagonistami IL-4 i cytokin TGF-e1. Niskie poziomy wydzielania IFN-γ obserwowano u osób podatnych na uczulenia. Ponadto, dzieci z predyspozycjami do reakcji atopowej i uczuleniowej przypuszczalnie dotknięte są wolnym dojrzewaniem wydzielania IFN-γ. Znaczący efekt pobudzający preparatu według wynalazku na wydzielanie IFN-γ potwierdza, zatem, jego skuteczność w zapobieganiu i leczeniu uczuleń.

Claims (8)

1. Preparat probiotyczny, znamienny tym, że zawiera mikroorganizmy Lactobacillus rhamnosus LGG (ATCC 53103), Lactobacillus rhamnosus LC705 (DSM7061), Propionibacterium freundenreichii ssp. Shermanii PJS (DSM7067) i bifidobakterie przy czym mikroorganizmy zawarte są w preparacie we wzajemnej proporcji każdego mikroorganizmu pomiędzy około 10:1 do 1:10.
2. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że jako bifidobakterie zawiera Bifidobacterium infantis Bbi99 (DSM 13692).
PL 204 245 B1
3. Preparat według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że ponadto zawiera tradycyjne stosowane w mleczarstwie mikroorganizmy starterowe.
4. Preparat według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera również prebiotyk lub jest użyty wraz z prebiotykiem.
5. Preparat według zastrz. 4, znamienny tym, że prebiotykiem jest oligosacharyd.
6. Preparat według zastrz. 5, znamienny tym, że oligosacharydem jest galakto-oligosacharyd (GOS).
7. Zastosowanie preparatu zdefiniowanego w zastrz. 1 do zapobiegania lub leczenia chorób jelitowych, alergii, tworzenia się substancji rakotwórczych/szkodliwych i raka, jako dodatek do produktu spożywczego, produktu farmaceutycznego, produktu wzmacniającego zdrowie lub produktu naturalnego.
8. Zastosowanie według zastrz. 7, znamienne tym, że preparat jest dodany do produktu mlecznego, napoju, soku, zupy lub pokarmu dla dzieci.
PL363366A 2001-01-25 2002-01-17 Preparat probiotyczny i zastosowanie preparatu probiotycznego PL204245B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20010157A FI109602B (fi) 2001-01-25 2001-01-25 Probioottiyhdistelmä
PCT/FI2002/000035 WO2002060276A1 (en) 2001-01-25 2002-01-17 Combination of probiotics

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL363366A1 PL363366A1 (pl) 2004-11-15
PL204245B1 true PL204245B1 (pl) 2009-12-31

Family

ID=8560139

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL363366A PL204245B1 (pl) 2001-01-25 2002-01-17 Preparat probiotyczny i zastosowanie preparatu probiotycznego

Country Status (25)

Country Link
US (1) US8309073B2 (pl)
EP (1) EP1359816B1 (pl)
JP (1) JP3984546B2 (pl)
KR (1) KR20040012717A (pl)
CN (1) CN100400645C (pl)
AT (1) ATE297664T1 (pl)
AU (1) AU2002229787B2 (pl)
BR (1) BRPI0206689B1 (pl)
CA (1) CA2434337C (pl)
CZ (1) CZ301673B6 (pl)
DE (1) DE60204662T2 (pl)
DK (1) DK1359816T3 (pl)
EE (1) EE05299B1 (pl)
ES (1) ES2243697T3 (pl)
FI (1) FI109602B (pl)
HK (1) HK1061501A1 (pl)
HR (1) HRP20030586B8 (pl)
HU (1) HU225790B1 (pl)
NO (1) NO325463B1 (pl)
NZ (1) NZ527172A (pl)
PL (1) PL204245B1 (pl)
PT (1) PT1359816E (pl)
RU (1) RU2291899C2 (pl)
WO (1) WO2002060276A1 (pl)
ZA (1) ZA200305458B (pl)

Families Citing this family (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI109602B (fi) * 2001-01-25 2002-09-13 Valio Oy Probioottiyhdistelmä
US20030175305A1 (en) * 2002-01-08 2003-09-18 Garner Bryan E. Compositions and methods for inhibiting pathogenic growth
DE10206995B4 (de) * 2002-02-19 2014-01-02 Orthomol Pharmazeutische Vertriebs Gmbh Mikronährstoffkombinationsprodukt mit Pro- und Prebiotika
ITMI20020399A1 (it) 2002-02-28 2003-08-28 Ct Sperimentale Del Latte S P Composizioni dietetiche e/o farmaceutiche per uso umano e/o animale abase di preparati microbici probiotici
EP1374878A1 (en) * 2002-06-20 2004-01-02 N.V. Nutricia Method and composition for preventing or alleviating symptoms of malabsorption from the gastrointestinal tract
US7105336B2 (en) * 2002-10-07 2006-09-12 Biogaia Ab Selection and use of lactic acid bacteria for reducing inflammation caused by Helicobacter
FI113057B (fi) * 2002-11-04 2004-02-27 Valio Oy Menetelmä hiivojen kasvun estämiseksi
US20040208863A1 (en) * 2003-01-30 2004-10-21 James Versalovic Anti-inflammatory activity from lactic acid bacteria
SE526711C2 (sv) 2003-01-31 2005-10-25 Probi Ab Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav
ES2326481T3 (es) * 2003-06-23 2009-10-13 Nestec S.A. Formula para recien nacidos o formula de continuacion.
WO2004112508A1 (en) * 2003-06-23 2004-12-29 Nestec S.A. Infant or follow-on formula
CN1870910B (zh) * 2003-10-24 2010-05-26 努特里奇亚有限公司 婴儿合生素组合物
US20050208034A1 (en) * 2004-03-17 2005-09-22 Jordan Lazonia V Natural vaginal yeast infection control
EP1597978A1 (en) * 2004-05-17 2005-11-23 Nutricia N.V. Synergism of GOS and polyfructose
US8252769B2 (en) * 2004-06-22 2012-08-28 N. V. Nutricia Intestinal barrier integrity
WO2006012536A2 (en) 2004-07-22 2006-02-02 Ritter Andrew J Methods and compositions for treating lactose intolerance
ATE361101T1 (de) * 2004-08-24 2007-05-15 Nutricia Nv Nahrungszusammensetzung die unverdauliche oligosaccharide enthält
ITMI20042189A1 (it) * 2004-11-16 2005-02-16 Anidral Srl Composizione a base di batteri probiotici e suo uso nella prevenzione e-o nel trattamento di patologie e-o infezioni respiratorie e nel miglioramento della funzionalita' intestinale
WO2006091103A2 (en) * 2005-02-28 2006-08-31 N.V. Nutricia Nutritional composition with probiotics
US20060233762A1 (en) * 2005-04-15 2006-10-19 Mcmahon Robert J Method for treating or preventing systemic inflammation in formula-fed infants
US7572474B2 (en) * 2005-06-01 2009-08-11 Mead Johnson Nutrition Company Method for simulating the functional attributes of human milk oligosaccharides in formula-fed infants
US8287931B2 (en) * 2005-06-30 2012-10-16 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional composition to promote healthy development and growth
US8075934B2 (en) * 2008-10-24 2011-12-13 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional composition with improved digestibility
CN101233231B (zh) * 2005-07-26 2011-06-29 内斯特克有限公司 抗肥胖剂及抗肥胖食品
SI1951272T1 (sl) * 2005-10-06 2016-10-28 Probi Ab Uporaba lactobacillus za zdravljenje virusnih infekcij
EP1776877A1 (en) * 2005-10-21 2007-04-25 N.V. Nutricia Method for stimulating the intestinal flora
BRPI0708689A2 (pt) * 2006-03-07 2011-06-07 Nestec Sa mistura simbiótica
BRPI0708701A2 (pt) 2006-03-10 2011-06-07 Nutricia Nv uso de um sacarìdeo não digerìvel solúvel em água
US20100166721A1 (en) * 2006-06-09 2010-07-01 Fabiola Masri Probotic compositions and uses thereof
US20110165127A1 (en) * 2006-06-09 2011-07-07 Fabiola Masri Dairy-derived probiotic compositions and uses thereof
US7387427B2 (en) 2006-10-20 2008-06-17 Bristol-Myers Squibb Company Method for blending heat-sensitive material using a conical screw blender with gas injection
WO2008054193A1 (en) * 2006-11-02 2008-05-08 N.V. Nutricia Nutritional products that comprise saccharide oligomers
RU2454239C2 (ru) * 2007-02-22 2012-06-27 Юрген ШРЕЗЕНМЕИР Пробиотические грамположительные бактерии для профилактики, подавления или устранения аллергических реакций у человека
WO2008106373A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Mead Johnson Nutrition Company Product containing inactivated probiotic for children or infants
ES2322116B1 (es) 2007-03-12 2010-03-29 Consejo Superior Investig. Cientificas Microorganismo productor de anticuerpos, elementos necesarios para su obtencion, anticuerpos asi producidos, composiciones terapeuticas y sus aplicaciones.
CN101273737B (zh) * 2007-03-28 2011-08-24 哈尔滨正方科技有限公司 一种在常温下保持高活菌数的发酵乳饮料的制备方法
WO2008153377A1 (en) * 2007-06-15 2008-12-18 N.V. Nutricia Nutrition with non-viable bifidobacterium and non-digestible oligosaccharide
EP2022502A1 (en) * 2007-08-10 2009-02-11 Nestec S.A. Lactobacillus rhamnosus and weight control
US20090118228A1 (en) * 2007-11-07 2009-05-07 Bristol-Myers Squibb Company Carotenoid-containing compositions and methods
FI121912B (fi) 2008-02-05 2011-06-15 Valio Oy Probioottien uusi käyttö
CA2714721C (en) * 2008-02-29 2016-02-23 Meiji Dairies Corporation Anti-allergic agent
FI20080321A0 (fi) * 2008-04-25 2008-04-25 Eino Elias Hakalehto Menetelmä suoliston bakteeritasapainon ylläpitämiseksi
JPWO2009150856A1 (ja) * 2008-06-13 2011-11-10 株式会社ヤクルト本社 酸素耐性付与遺伝子及びその利用
WO2010002241A1 (en) * 2008-06-30 2010-01-07 N.V. Nutricia Nutritional composition for infants delivered via caesarean section
FR2933848B1 (fr) 2008-07-18 2019-08-09 Roquette Freres Composition de fibres indigestibles solubles et d'organismes eucaryotes dotes d'une paroi polysaccharidique utilisees dans le domaine du bien etre
US8986769B2 (en) * 2008-10-24 2015-03-24 Mead Johnson Nutrition Company Methods for preserving endogenous TGF-β
WO2010059022A1 (es) * 2008-11-21 2010-05-27 Cruz Serrano Jose Antonio Método para obtener una mezcla de probióticos, prebióticos nutrientes con acción simbiótica sinergica
US8445426B2 (en) 2009-02-02 2013-05-21 Valio Ltd. Peptides and methods for producing them
EP2216036A1 (en) * 2009-02-10 2010-08-11 Nestec S.A. Lactobacillus rhamnosus NCC4007, a probiotic mixture and weight control
EP2216035A1 (en) * 2009-02-10 2010-08-11 Nestec S.A. Lactobacillus rhamnosus CNCM I-4096 and weight control
US8425955B2 (en) * 2009-02-12 2013-04-23 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional composition with prebiotic component
CN107320480A (zh) 2009-02-24 2017-11-07 里特制药股份有限公司 益生素制剂和使用方法
WO2010103132A1 (es) * 2009-03-10 2010-09-16 Hero España, S.A. Aislamiento, identificación y caracterización de cepas con actividad probiótica a partir de heces de lactantes alimentados exclusivamente con leche materna
AU2010223965A1 (en) * 2009-03-13 2011-10-06 Dsm Food Specialties Usa Inc. Prebiotic oligosaccharides
US8293264B2 (en) * 2009-05-11 2012-10-23 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional composition to promote healthy development and growth
CN106987525B (zh) 2009-05-26 2020-10-27 先进生物营养公司 包含生物活性微生物和/或生物活性材料的稳定干粉组合物及其制造方法
GB0915315D0 (en) * 2009-09-03 2009-10-07 Univ Manchester Use of non-digestible oligosaccharides
FI20096058A0 (fi) * 2009-10-13 2009-10-13 Valio Oy Koostumuksia ja niihin liittyviä menetelmiä ja käyttöjä
CN102665738B (zh) * 2009-12-10 2015-07-01 株式会社明治 用于预防流感感染的组合物
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
FR2955774A1 (fr) 2010-02-02 2011-08-05 Aragan Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation
DE102010009582A1 (de) * 2010-02-05 2011-08-11 Vitacare GmbH & Co. KG, 60318 Mittel zur Anwendung bei Lactasemangel und Lactoseintoleranz
CN101810222A (zh) * 2010-04-23 2010-08-25 陕西农产品加工技术研究院 一种合生元羊奶粉
WO2011137249A1 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Ritter Pharmaceuticals, Inc. Prebiotic formulations and methods of use
US8911348B2 (en) 2010-09-02 2014-12-16 Boston Scientific Scimed, Inc. Pelvic implants and methods of implanting the same
CN102524391B (zh) * 2010-12-21 2013-11-13 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 一种含有复合益生元及益生菌群的发酵乳制品
BR112013020312B1 (pt) 2011-02-09 2021-03-23 Synbiotics Ab Composições simbióticas para restauração e reconstituição da microbiota intestinal
US20120269929A1 (en) * 2011-04-22 2012-10-25 Hugh Lippman Fortified Milk-Based Nutritional Compositions
FR2974512B1 (fr) * 2011-04-28 2013-11-08 Roquette Freres Composition anti-inflammatoire de l'intestin comprenant du maltitol
US9125935B1 (en) * 2011-05-31 2015-09-08 Nutech Ventures Probiotics and methods of obtaining same
RU2482176C1 (ru) * 2012-02-16 2013-05-20 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации"(ГБОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) ШТАММ БАКТЕРИЙ Lactobacillus rhamnosus, ОБЛАДАЮЩИЙ ШИРОКИМ СПЕКТРОМ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПО ОТНОШЕНИЮ К ПАТОГЕННЫМ И УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМ МИКРООРГАНИЗМАМ
EP2852290B1 (en) * 2012-05-21 2018-10-10 DuPont Nutrition Biosciences ApS Strains of propionibacterium
CN104968780A (zh) * 2012-09-20 2015-10-07 普洛特拉有限公司 用于治疗肥胖和肥胖相关病症的益生菌组合物和方法
WO2014110685A1 (en) 2013-01-21 2014-07-24 Eth Zurich Baby food composition comprising viable propionic acid-producing bacteria
US11179427B2 (en) 2013-01-21 2021-11-23 Eth Zurich Baby food composition comprising viable propionic acid-producing bacteria
WO2016183535A1 (en) 2015-05-14 2016-11-17 University Of Puerto Rico Methods for restoring microbiota of newborns
WO2017019273A1 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Advanced Bionutrition Corporation Stable dry probiotic compositions for special dietary uses
RS57471B1 (sr) 2015-12-17 2018-09-28 Institut Za Molekularnu Genetiku I Geneticko Inzenjerstvo Univerzitet U Beogradu Nova probiotička starter kultura za humanu i animalnu primenu
US11564667B2 (en) 2015-12-28 2023-01-31 New York University Device and method of restoring microbiota of newborns
ITUA20163807A1 (it) * 2016-05-25 2017-11-25 Univ Degli Studi Di Foggia Metodo per la produzione di biofilm microbici probiotici e relativi usi
WO2018158450A1 (en) * 2017-03-03 2018-09-07 Biomillenia Sas Microparticle for cultivating and testing cells
US10695386B2 (en) 2017-05-11 2020-06-30 Shayne K. Morris Skin microbiome colonizer formulations and methods for use
IT201800003128A1 (it) * 2018-02-28 2019-08-28 Propharma Soc A Responsabilita Limitata Semplificata Composizione probiotica
US11168299B2 (en) 2018-04-11 2021-11-09 Shayne Morris Pairing probiotics and prebiotics, methods for growth and use, separately and in combination
US11291696B2 (en) 2018-04-11 2022-04-05 Shayne Morris Pairing probiotics and prebiotics, methods for growth and use, separately and in combination
CN109757731A (zh) * 2019-03-14 2019-05-17 广州普维君健药业有限公司 缓解乳糖不耐的益生菌组合物及其制备方法和应用
EP3760054A1 (en) * 2019-07-02 2021-01-06 Pepticus s.r.o. A method of preparing an individual probiotic composition according to analysis of the microbiome and medical history for human or veterinary use
CN111450122B (zh) * 2019-11-02 2023-04-25 吉安诺惠诚莘科技有限公司 一种复合菌剂及其在皮肤修复上的应用
KR102215596B1 (ko) * 2019-12-11 2021-02-15 주식회사 에이치이엠 신규한 스트렙토코커스 써모필러스 hem 14 균주, 및 상기 균주 또는 이의 배양물을 포함하는 장내 환경 개선용 조성물
KR102254752B1 (ko) 2020-01-09 2021-05-24 한국식품연구원 신규의 락토바실러스 플란타럼 WiKim87 균주 및 이의 용도
KR102254751B1 (ko) 2020-01-09 2021-05-24 한국식품연구원 신규의 락토바실러스 플란타럼 WiKim83 균주 및 이의 용도
CN111944727B (zh) * 2020-08-24 2021-12-03 汤臣倍健股份有限公司 一种短双歧杆菌207-1及其应用
CN113005049B (zh) * 2020-12-30 2022-11-01 江南大学 一株可缓解腹泻的短双歧杆菌及其应用
KR20220099914A (ko) * 2021-01-07 2022-07-14 (주)에스앤에이치바이오텍 유해균 억제를 통한 프로바이오틱스 활성화용 조성물
EP4373503A1 (en) * 2021-07-20 2024-05-29 ETH Zurich Treatment and/or prevention of digestive disorder by a bacterial composition of propionibacterium freudenreichii and bifidobacterium longum

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4839281A (en) 1985-04-17 1989-06-13 New England Medical Center Hospitals, Inc. Lactobacillus strains and methods of selection
CZ281386B6 (cs) * 1991-01-29 1996-09-11 MILCOM a.s. Výzkumný ústav mlékárenský Probiotický preparát pro výživu lidí a zvířat a způsob jeho výroby
FI92498C (fi) 1992-06-10 1994-11-25 Valio Meijerien Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
US5501857A (en) * 1992-07-24 1996-03-26 Midwestern Bio-Ag Products & Services, Inc. Oral nutritional and dietary composition
US5529753A (en) * 1993-07-09 1996-06-25 Dade International Inc. System for ultrasonic energy coupling by irrigation
US5529793A (en) * 1994-11-16 1996-06-25 Nutrition Physiology Corporation Compositions for improving the utilization of feedstuffs by ruminants
FI104465B (fi) * 1995-06-14 2000-02-15 Valio Oy Proteiinihydrolysaatteja allergioiden hoitamiseksi tai estämiseksi, niiden valmistus ja käyttö
US20020015756A1 (en) * 1996-02-12 2002-02-07 Evgeny Anatolievich Gutkevich Mixture for the preparation of ice cream
CA2245810A1 (en) 1996-02-14 1997-08-21 The Procter & Gamble Company Urogenital and intestinal compositions
EP0881905A1 (en) 1996-02-14 1998-12-09 The Procter & Gamble Company Urogenital and intestinal disorder compositions comprising a substance derived from plant species of the ericaceae family and a lactic acid bacteria growth factor
AUPN881396A0 (en) 1996-03-20 1996-04-18 Arnott's Biscuits Limited Enhancement of microbial colonization of the gastrointestinal tract
US5902578A (en) 1996-03-25 1999-05-11 Abbott Laboratories Method and formula for the prevention of diarrhea
DE69600525T2 (de) 1996-12-23 1998-12-10 Sitia Yomo Spa Lyophilisierte, lebende Bakerien enthaltende Nahrungszusammensetzung
DK1007625T3 (da) 1997-08-21 2010-11-01 New Zealand Dairy Board Immunitetsforstærkede mællkesyrebakterie
EP0904784A1 (en) 1997-09-22 1999-03-31 N.V. Nutricia Probiotic nutritional preparation
CN1119154C (zh) * 1998-01-20 2003-08-27 上海信谊药业有限公司 双歧三联活菌制剂及制备方法
US6080401A (en) 1998-11-19 2000-06-27 Reddy; Malireddy S. Herbal and pharmaceutical drugs enhanced with probiotics
NL1010770C2 (nl) 1998-12-09 2000-06-13 Nutricia Nv Preparaat dat oligosacchariden en probiotica bevat.
EP1020123A1 (en) * 1999-01-18 2000-07-19 Sitia-Yomo S.p.A. Beverages containing live lactic bacteria
CA2374937A1 (en) 1999-05-25 2000-11-30 Gregor Reid Oral administration of lactobacillus for the maintenance of health in women
FI109602B (fi) * 2001-01-25 2002-09-13 Valio Oy Probioottiyhdistelmä
CN1164186C (zh) * 2001-04-29 2004-09-01 上海光明乳业股份有限公司 益菌奶及其制造方法
CN1132927C (zh) * 2001-07-19 2003-12-31 上海交通大学 益生菌真菌共同发酵制备微生态制剂的方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE60204662T2 (de) 2006-05-18
WO2002060276A1 (en) 2002-08-08
JP2004524836A (ja) 2004-08-19
BR0206689A (pt) 2004-02-03
FI109602B (fi) 2002-09-13
HU225790B1 (hu) 2007-09-28
NZ527172A (en) 2004-11-26
WO2002060276A9 (en) 2002-10-03
NO20033283L (no) 2003-09-24
CZ301673B6 (cs) 2010-05-19
US8309073B2 (en) 2012-11-13
PT1359816E (pt) 2005-10-31
CN100400645C (zh) 2008-07-09
NO20033283D0 (no) 2003-07-21
RU2003125858A (ru) 2005-02-20
ATE297664T1 (de) 2005-07-15
KR20040012717A (ko) 2004-02-11
DE60204662D1 (de) 2005-07-21
CA2434337A1 (en) 2002-08-08
EP1359816A1 (en) 2003-11-12
ES2243697T3 (es) 2005-12-01
EE200300351A (et) 2003-12-15
HUP0401017A2 (hu) 2004-08-30
WO2002060276A8 (en) 2003-10-30
JP3984546B2 (ja) 2007-10-03
BRPI0206689B1 (pt) 2016-02-10
HRP20030586B1 (en) 2007-06-30
ZA200305458B (en) 2004-10-15
AU2002229787B2 (en) 2007-09-06
US20040062758A1 (en) 2004-04-01
FI20010157A (fi) 2002-07-26
PL363366A1 (pl) 2004-11-15
HK1061501A1 (en) 2004-09-24
RU2291899C2 (ru) 2007-01-20
HRP20030586A2 (en) 2005-06-30
EP1359816B1 (en) 2005-06-15
DK1359816T3 (da) 2005-08-15
CN1487798A (zh) 2004-04-07
CZ20031915A3 (cs) 2004-01-14
HRP20030586B8 (en) 2007-09-30
FI20010157A0 (fi) 2001-01-25
HUP0401017A3 (en) 2005-06-28
CA2434337C (en) 2010-12-21
NO325463B1 (no) 2008-05-05
EE05299B1 (et) 2010-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2291899C2 (ru) Композиция микроорганизмов (варианты)
AU2002229787A1 (en) Combination of probiotics
Fooks et al. Probiotics as modulators of the gut flora
Parracho et al. Probiotics and prebiotics in infant nutrition
Bengmark Ecological control of the gastrointestinal tract. The role of probiotic flora
US6596530B1 (en) Strain of Lactobacillus gasseri
US20070128178A1 (en) Probiotics for gut neuromuscular functions
CN102869366B (zh) 过敏性腹泻的预防和治疗
EP1513541A2 (en) Method and composition for preventing or alleviating symptoms of malabsorption from the gastrointestinal tract
WO2021256476A1 (ja) 乳酸菌の胃液・胆汁耐性向上方法
US20230270798A1 (en) Synbiotic composition
Sip et al. Probiotics and prebiotics
Baek et al. Probiotics and prebiotics as bioactive components in dairy products
KR102642548B1 (ko) 페디오코커스 에시디락티시 WiKim0170을 포함하는 숙취 해소 및 간 기능 개선용 조성물
KR102642547B1 (ko) 레비락토바실러스 브레비스 WiKim0168을 포함하는 숙취 해소 및 간 기능 개선용 조성물
KR20210064510A (ko) 장내 유익균 증가 효과를 가지는 락토바실러스 조성물
US20240156886A1 (en) Gos pre-conditioning lactobacillus strains and gos in final formulation
Minj et al. 10 Beneficial Effects of Dairy
Kumar et al. Probiotics: biotechnology in prolongation of life
Krishna et al. International Journal of Allied Medical Sciences and Clinical Research (IJAMSCR)
Minj et al. 10 Beneficial Effects of Dairy Foods Enriched with Prebiotics and Probiotics

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification