KR20110095929A - 항비만제 및 항비만 식품 - Google Patents

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Abstract

락토바실러스 루테리에 속하고, 서열표의 1, 3, 5로 표시되는 아미노산 서열 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 리파아제를 생산하는 미생물을 유효성분으로 하는 항비만제를 제공한다. 이 항비만제는 통상의 식사를 취하면서, 비만의 커다란 원인이 되는 지질이 체내에 흡수되는 것을 방지할 수 있는 것이다.

Description

항비만제 및 항비만 식품{Anti-obesity agent and anti-obesity food}
본 발명은 항비만제 및 항비만 식품에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 지질의 소화관으로부터 들어가는 것을 억제하여, 비만이 되는 것을 방지할 수 있는 항비만제 및 항비만 식품에 관한 것이다.
비만은 체지방의 과잉을 특징으로 하는 체중 제어계의 질환이다. 근대 사회에서는 운동부족과 칼로리 과잉 식사의 결과, 체내에서 중성지방이 축적되어, 비만으로 판단되는 사람이 증가일로를 걷고 있어 큰 문제가 되고 있다.
이 비만을 방지하기 위해서는 섭취하는 지방을 소모하기에 충분한 운동을 하는 것이 제일 좋지만, 현실적으로는 운동을 하는 것은 어려워, 지방의 섭취를 줄이는 것이 요구되고 있다.
그러나, 무리한 식사제한으로 비만을 억제하고자 하면, 다른 필요한 영양소의 섭취량이 부족하거나, 균형을 무너뜨리는 결과, 몸에 악영향을 주는 경우도 있었다. 이것은 이른바 다이어트 식품으로 불리는, 영양소가 적음에도 불구하고 만복감을 주는 식품을 섭취한 경우에도 동일하다고 할 수 있다.
따라서, 통상의 식사를 취하면서 비만의 커다란 원인이 되는 지질(트리아실글리세롤)이 체내에 흡수되는 것을 방지할 수 있는 수단의 개발이 강하게 요구되고 있었다.
본 발명자는 지질이 체내에 흡수되는 메커니즘에 주목하고, 비만의 억제방법에 관하여 연구를 행한 결과, 장내의 미생물총(microorganism flora)이 지질을 섭취분해하면, 결과적으로 인간이 섭취하는 지질은 감소하여, 자연스레 비만을 방지할 수 있는 것을 알게 되었다. 그리고, 이와 같은 지질을 섭취분해할 수 있는 미생물에 대해서 예의 검색을 행하고 있던 바, 유산균에 속하는 미생물 중에 그와 같은 작용을 갖는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
즉 본 발명은 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri)에 속하고, 이하의 (1) 내지 (3)의 아미노산 서열 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 리파아제를 생산하는 미생물을 유효성분으로 하는 항비만제이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 리파아제 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00001
또한 본 발명은 락토바실러스 루테리에 속하고, 상기 (1) 내지 (3)의 아미노산 서열 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 리파아제를 생산하는 미생물을 유효성분으로 하는 항비만 음식품이다.
또한 본 발명은 하기 (5) 내지 (7)로 표시되는 아미노산 서열 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 서브유닛으로 구성되는 글리세롤 분해효소이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 글리세롤 분해활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00002
또한 본 발명은 다음의 (8)로 표시되는 아미노산 서열 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 장관(腸管) 부착성 프로테인이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 유산균을 장관 점막세포 근방에 부착시키는 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00003
본 발명의 항비만제 및 항비만 음식물은 이것을 섭취함으로써 통상의 식사를 하면서도 지질의 장관으로부터의 흡수를 방지할 수 있는 것이다. 그리고, 유산균은 예전부터 요구르트나 발효유 등의 발효식품의 제조에 사용되고 있는 것으로서, 안전성도 매우 높은 것이기 때문에 안심하고 섭취할 수 있는 것이다.
도 1은 L.루테리 JCM1112T의 대사 지도를 나타내는 도면이다.
도 2는 L.루테리 JCM1112T를 투여한 랫트군의 경시적인 체중증가를 비교군 및 대조군과 대비하여 나타낸 도면이다.
본 발명의 항비만제 및 항비만 음식품(이하, 「항비만제 등」이라고 하는 경우가 있다)의 유효성분인 미생물은, 유산균인 락토바실러스 루테리에 속하고, 상기 (1) 내지 (3)의 아미노산 서열(서열표의 1, 3, 5에 각각 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 리파아제(이하, 「본 발명 리파아제류」라고 한다)를 생산할 수 있는 것이다(이하, 「본 발명 유산균」이라고 한다).
이 본 발명 리파아제류는 장관 점막세포 근방에 존재하는 지질(트리아실글리세롤) 지방산과 글리세롤로 분해되어, 본 발명 유산균 중에 들어간다. 그리고, 도 1에 나타내는 바와 같이 들어간 지방산은 균체 구성요소로서 이용되고, 글리세롤은 각종 대사경로를 거쳐 이산화탄소, 아세톤, 에탄올, 락테이트 또는 루테린이 된다.
본 발명 유산균은 상기 리파아제류를 생산하는 능력, 즉 상기 리파아제를 코드하는 뉴클레오티드 서열(유전자)을 갖는 것 외, 트랜스포터를 코드하는 유전자로서 다음의 (4)로 표시되는 뉴클레오티드 서열(서열표의 8에 대응)을 갖는 것이 바람직하다. 또한, 본 발명에는 하기 (4)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세롤 트랜스포터 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (4)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트(stringent)한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 글리세롤 트랜스포터 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00004
이 유전자는 글리세롤을 본 발명 유산균의 세포내에 집어넣는 트랜스포터를 코드하는 것으로서, 들어간 글리세롤은 도 1과 같이 유산균 내의 효소에 의해 대사를 받는다.
또한, 본 발명 유산균은 상기 식 (5) 내지 (7)로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 9, 11, 13에 각각 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 서브유닛으로 구성되는 글리세롤 분해효소를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 서브유닛 (5) 내지 (7)로 구성되는 글리세롤 분해효소는 pdu(propanediol utilization) 오페론(operon) 중에서 기능하는 글리세롤 데히드라타제(glycerol dehydratase)로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다.
또한, 이 서브유닛 (5) 내지 (7)을 코드하는 뉴클레오티드 서열 (9) 내지 (11)(서열표의 서열번호 10, 12, 14에 각각 대응)을 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (9) 내지 (11)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세롤 분해활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (9) 내지 (12)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 글리세롤 분해활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00005
Figure pat00006
또한, 본 발명 유산균은 다음의 (8)의 아미노산 서열(서열표의 서열번호 15에 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 장관 부착성 프로테인을 보유하는 것인 것이 보다 바람직하다.
Figure pat00007
이 장관 부착성 프로테인은 유산균을 장관 점막세포 근방에 부착시키는 작용을 갖는 것으로서, 이것을 갖는 본 발명 유산균은 일정기간 장관 점막 근방에 존재하여, 안정하게 지질을 집어넣는 것이 가능해진다. 또한, 이 프로테인을 코드하는 다음의 (12)로 표시되는 유전자(서열표의 서열번호 16에 대응)를 공지의 수법으로 다른 유산균에 삽입함으로써, 장관내에서의 체재시간이 긴 유산균을 얻는 것이 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (12)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 유산균을 장관 점막세포 근방에 부착시키는 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (12)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 유산균을 장관 점막세포 근방에 부착시키는 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00008
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (16) 내지 (20) 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 17, 19, 21, 23, 25에 각각 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 글리세롤 분해효소를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 글리세롤 분해효소는 알코올 데히드로게나아제(alcohol dehydrogenase; 도 1 중의 ADH(8))로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 글리세롤 분해활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00009
Figure pat00010
또한, 이 글리세롤 분해효소 (16) 내지 (20)을 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (32) 내지 (36)(서열표의 서열번호 18, 20, 22, 24, 26에 각각 대응)을 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (32) 내지 (36) 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세롤 분해활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (32) 내지 (36) 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하디브리다이즈하고, 또한 글리세롤 분해활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00011
Figure pat00012
Figure pat00013
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (21) 또는 (22)로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 27, 29에 각각 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 글리세롤 분해효소를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 글리세롤 분해효소는 알코올 데히드로게나아제(alcohol dehydrogenase; 도 1 중의 ADH(8))로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 글리세롤 분해활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00014
또한, 이 글리세롤 분해효소 (21) 또는 (22)를 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (37) 내지 (38)(서열표의 서열번호 28, 30에 각각 대응)을 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (37) 또는 (38)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세롤 분해활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (37) 또는 (38)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 글리세롤 분해활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00015
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (23) 내지 (25) 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 31, 33, 35에 각각 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 알데히드 데히드로게나아제(aldehyde dehydrogenase)를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 알데히드 데히드로게나아제는 도 1 중에 나타내는 알데히드 데히드로게나아제(9)로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 알데히드 데히드로게나아제 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00016
Figure pat00017
또한, 이 알데히드 데히드로게나아제 (23) 내지 (25)를 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (39) 내지 (41)(서열표의 서열번호 32, 34, 36에 각각 대응)을 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (39) 내지 (41) 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 알데히드 데히드로게나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (39) 내지 (41) 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 알데히드 데히드로게나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00018
Figure pat00019
Figure pat00020
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (26)으로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 37에 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 글리세린산 키나아제(glycerate kinase)를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 글리세린산 키나아제는 도 1 중에 나타내는 글리세린산 키나아제(10)로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 글리세린산 키나아제 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00021
또한, 이 글리세린산 키나아제 (26)을 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (42)(서열표의 서열번호 38에 대응)를 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (42)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세린산 키나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (42)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 글리세린산 키나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00022
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (27)로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 39에 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 글리세롤 키나아제(glycerol kinase)를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 글리세롤 키나아제는 도 1 중에 나타내는 GK(5)로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 글리세롤 키나아제 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00023
또한, 이 글리세롤 키나아제 (27)을 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (43)(서열표의 서열번호 40에 대응)을 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (43)으로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세롤 키나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (43)으로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 글리세롤 키나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00024
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (28)로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 41에 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 글리세롤 3인산 데히드로게나아제(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 글리세롤 3인산 데히드로게나아제는 도 1 중에 나타내는 GPD(6)로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 글리세롤 3인산 데히드로게나아제 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00025
또한, 이 글리세롤 3인산 데히드로게나아제 (28)을 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (44)(서열표의 서열번호 42에 대응)를 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (44)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 글리세롤 3인산 데히드로게나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (44)로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 글리세롤 3인산 데히드로게나아제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00026
또한, 본 발명 유산균은 하기 식 (29) 내지 (32) 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열(서열표의 서열번호 43, 45, 47에 대응) 또는 당해 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 복수개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 아미노산 서열로 표시되는 트리오스인산 이소머라제(triosephosphate isomerase)를 갖는 것인 것이 바람직하다. 이 트리오스인산 이소머라제는 도 1 중에 나타내는 트리오스인산 이소머라제(15)로서, 본 발명 리파아제의 작용에 의해 발생한 글리세롤을 효율적으로 대사할 수 있는 것이다. 여기에서 말하는 1개 또는 복수개의 아미노산의 결실, 치환, 역위, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열이란, 이들의 원래 서열과 등가의 서열을 의미하고, 여전히 트리오스인산 이소머라제 활성을 유지하는 서열을 말한다. 이와 같은 아미노산 서열로서는 80% 이상의 상동성을 나타내는 것을 들 수 있다.
Figure pat00027
Figure pat00028
또한, 이 트리오스인산 이소머라제 (29) 내지 (31)을 코드하는 하기 뉴클레오티드 서열 (45) 내지 (47)(서열표의 서열번호 44, 46, 48에 대응)을 유전자 공학의 수법으로 다른 유산균 등에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균을 얻는 것도 가능해진다. 또한, 본 발명에는 하기 (45) 내지 (47) 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 상동성이 80% 이상이고, 또한 트리오스인산 이소머라제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열 및 하기 (45) 내지 (47) 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 서열과 스트린전트한 조건하에서 하이브리다이즈하고, 또한 트리오스인산 이소머라제 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도 포함된다.
Figure pat00029
Figure pat00030
이상 설명한 본 발명 유산균은 락토바실러스 루테리에 속하는 미생물을 통상의 방법에 따라서 유전자 해석함으로써 얻을 수 있다. 예를 들면, 많은 락토바실러스 루테리에 속하는 미생물에 대해서, 리파아제 (1) 내지 (3)을 코드하는 하기의 유전자 (13) 내지 (15)(서열표의 서열번호 2, 4, 6에 각각 대응)와 상동성이 높은 뉴클레오티드 서열이 존재하는지 여부를 조사함으로써, 목적으로 하는 본 발명 유산균을 얻을 수 있다.
Figure pat00031
본 발명에 있어서 「스트린전트한 조건」이란, 예를 들면 6×SSC(1×SSC의 조성: 0.15 M의 NaCl, 0.015 M의 구연산나트륨, pH 7.0), 0.5% SDS, 5×덴하르트, 100 ㎍/mL의 열변성 청어 정자 DNA를 포함하는 용액 중에서, 프로브와 함께 50~65℃의 온도에서 하룻밤 보존하여 하이브리다이즈시킨다고 하는 조건을 들 수 있다.
또한, 트랜스포터 유전자(4)를 갖는 본 발명 유산균, 글리세롤 분해효소 서브유닛을 코드하는 유전자 (9) 내지 (11), 글리세롤 분해효소를 코드하는 유전자 (32) 내지 (38), 알데히드 데히드로게나아제를 코드하는 유전자 (39) 내지 (41), 글리세린산 키나아제를 코드하는 유전자 (42), 글리세롤 키나아제를 코드하는 유전자 (43), 글리세롤 3인산 데히드로게나아제를 코드하는 유전자 (44), 트리오스인산 이소머라제를 코드하는 유전자 (45) 내지 (47), 또는 장관 부착성 프로테인을 코드하는 유전자 (12)를 갖는 본 발명 유산균도 상기와 동일하게 하여 얻을 수 있다.
상기한 본 발명 유산균의 대표적인 것으로서는 이화학 연구소의 표준주인 락토바실러스 루테리 JCM1112T를 들 수 있다.
본 발명의 항비만제는 상기의 본 발명 유산균을 경구투여 가능하고 살아 있는 그대로 장관에 도원(到遠)시킬 수 있는 생균제로 함으로써 조제된다. 이 제형에 대해서는 특별히 제약은 없고, 예를 들면 분말제, 과립, 정제, 캡슐제 등의 고형, 젤리, 페이스트 등의 반고형, 현탁액, 시럽 등의 액상이어도 된다. 이들의 각 제형은 제약분야에서 공지의 방법으로 제조할 수 있다.
상기 항비만제에 배합되는 본 발명 유산균은 공지의 유산균의 배양방법을 적용하여 배양을 행할 수 있다. 이 배양방법으로서는 통상의 방법에 따라 본 발명 유산균을 액체 배양하고, 얻어진 배양물을 그대로 이용해도, 또한 이 배양물로부터 원심분리 등의 수단으로 균체를 모아 사용해도, 또는 배양물을 동결건조하여 분말상으로 한 것을 사용해도 된다.
고형상인 본 발명 비만제의 일반적인 제법으로서는 본 발명 유산균을 물, 전분, 미세결정 셀룰로오스, 밀가루, 설탕 등의 담체와 함께 배합하여, 목적하는 형태로 하는 방법을 들 수 있다. 상기 담체도 공지로서, 사용형태에 맞추어 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는 통상의 방법으로 배양하여 얻어진 본 발명 유산균의 균체를 동결건조 분말로 하고, 이 설탕과 혼합함으로써 분말제를 조제해도 된다. 또한, 본 발명 유산균의 균체를 적절한 정제용(錠劑用) 담체와 함께 혼합하고, 이것을 통상의 방법에 따라서 타정하여 정제를 얻는 것도 가능하다. 또한, 본 발명 유산균의 습(濕)균체를 시럽 중에 현탁하여 시럽제로 해도 된다. 본 발명의 항비만제의 조제에 있어서는 필요에 따라서 다른 성분, 예를 들면 다른 미생물이나 유효성분, 또는 감미료, 향료, 착색제 등을 함유하고 있어도 된다.
상기와 같이 하여 얻어지는 항비만제의 투여량은 대상의 신체적 상황, 예를 들면 건강상태, 체중, 연령, 기왕증, 사용되는 다른 성분 등을 고려하여 적절히 결정할 수 있는데, 일반적으로는 본 발명 유산균의 균수로서, 어른 1인당 대략 108부터 109 CFU/일 정도 전후이다.
또한, 본 발명 유산균을 사용하여 항비만 음식물을 조제하기 위해서는, 종래 공지의 유산균의 배양방법을 이용하여 경구섭취 가능한 발효식품으로 하면 된다. 구체적으로는, 요구르트 등의 발효유, 유산균 음료, 발효 소시지 등의 식품으로 할 수 있고, 이들 식품의 제조는 사용 유산균의 일부 또는 전부를 본 발명 유산균으로 함으로써 행할 수 있다. 또한, 본 발명 유산균을 보다 많이 포함하는 형태로 하여, 건강식품이나 기능성 식품으로 하는 것도 가능하다. 이 항비만 음식품의 조제에 있어서는 본 발명 유산균 단독이 아니라 다른 유산균을 포함하고 있어도 되는 것은 물론이며, 또한 식품첨가물 또는 조미료 등을 첨가해도 된다.
본 발명 유산균은 후기 실시예에 나타내는 바와 같이 유의한 체중증가 억제효과(슬리밍효과)가 인정되는 것인데, 그 이유는 다음과 같이 생각된다.
즉, 도 1에 나타내는 바와 같이, 본 발명 유산균은 소화관 내의 지방분을 3개의 리파아제(리파아제 (1)~(3))의 작용에 의해 글리세롤과 지방산으로 분해한다. 그리고 분해된 글리세롤은 본 발명 유산균이 갖는 트랜스포터(PduF; (4)의 뉴클레오티드가 코드하는)에 의해 균체 내에 집어넣고, 추가로 균체내의 글리세롤 분해효소 유전자(PduCDE; 서브유닛 (5) 내지 (7)로 구성되는)에 의해 대사되어, 루테린을 생산, 또는 본균 자신의 에너지원으로 변환된다.
한편, 지방산은 본균의 균체성분으로서 이용되고, 이것이 생채내로 흡수되는 경우는 없다. 또한, (8)의 펩티드는 본 발명 유산균이 인간이나 포유동물의 장관에 정착하기 위한 기능을 가져, 일정시간 안정하게 본 발명 유산균이 장관내에 존재하는 것을 가능하게 한다.
이상과 같이, 본 발명 유산균은 안정하게 장관내에 존재하여, 적극적으로 지방을 분해하고, 또한 그 대사물을 이용 내지는 추가로 대사하기 때문에, 지질이 장관으로부터 채내로 흡수되는 것을 억제하여, 통상의 식사를 섭취하는 경우에도 비만을 방지해, 슬리밍효과의 유지와 향상을 가져올 수 있는 것이다.
또한, 본 발명의 하나의 태양으로서, 본 발명 유산균의 비만증의 예방 또는 치료를 위한 사용을 포함하는 것이며, 또한 본 발명 유산균의 항비만제의 제조를 위한 사용을 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 하나의 태양으로서, 비만증의 환자에게 본 발명 유산균을 투여하는 것을 특징으로 하는 비만증의 치료방법을 포함하는 것이며, 또한 본 발명 항비만제를 투여하는 것을 특징으로 하는 비만증의 치료방법을 포함하는 것이다.
실시예
이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 의해 어떠한 제약도 되지 않는다.
실시예 1
L.루테리 JCM1112T의 항비만효과 시험:
하기의 재료 및 방법으로 L.루테리 JCM1112T의 항비만효과를 조사하였다.
사용재료 및 시험방법:
(1) 사용 실험동물
SPF 그레이드의 위스타(Wistar)계 랫트(8주령-수컷;일본 SLC 주식회사)의 체중 약 180~200 g인 것을 사용하며, 실험실 반입일로부터 7일간 길들이는 기간을 두고, 실험을 개시하였다. 사육환경은 온도 22±1℃, 습도 55±5%, 조명시간 12시간(8시~20시)으로 설정하고, 랫트는 한마리/게이지로 하여 멸균증류수를 급수병(給水甁)에서, 또한 랫트용 방사선 멸균 고형시료*(CE-2, 일본 클레아)를 급이기(給餌器)에서, 각각 자유 섭취로 하였다. 사용한 사육기구는 전부 고압증기 멸균기로 멸균한 것을 사용하였다.
* 사육 번식용(조(粗)지방 4.6%)
(2) 실험대상 균액의 조제
실험대상 균으로서 L.루테리 JCM1112T(이화학 연구소의 표준균으로서, 같은 곳에서 분양을 받았다) 및 L.람노서스 ATCC53103(GG주)을 사용하였다. 이들 실험대상 균은 MRS 액체배지(Oxid)에 접종하고 37℃에서 하룻밤 배양하여, 예비 배양액으로 하였다. 이 예비 배양액을 1%량이 되도록 새로운 MRS 액체배지에 첨가하고, 37℃에서 18시간 배양한 것을 실험대상 균액으로 하였다.
(3) 실험대상 균액의 투여
상기 실험동물을 각 실험대상 균 투여군 및 대조군(1군은 각 5마리)으로 나누고, 상기 실험대상 균액을 실험대상 균 투여군에 경구투여에 의해 투여하였다. 실험대상 균액의 투여는 존데를 사용하여 강제적으로 행하였다. 투여균액은 용시(用時)조제하고, 투여균량은 랫트 한마리당 109 CFU로 하였다. 또한, 대조군에는 동일한 용량의 PBS를 투여하였다.
(4) 체중측정 및 일반 증상의 관찰
실험동물의 체중은 매일, 체중계로 측정하였다. 일반 증상은 매일 관찰하였다. 증상은 개체별로 기록하고, 현저한 변화가 보인 증상 항목을 발현 개체수로 표시하였다.
(5) 결과
도 2에 상기 락토바실러스속 세균을 각각 투여한 랫트군 및 무투여 랫트군에 대해서 경시적인 체중 증가의 양상을 나타낸다. 이 도면으로부터 명확한 바와 같이, 무투여군에 비해 L.루테리 JCM1112T 투여군은 유의하게 체중의 증가가 억제되어 있고, 이 정도는 L.람노서스 ATCC53103 투여군보다 컸다.
또한, 실험동물의 건강상태가 양호한 것은 순조로운 체중증가의 추이로 나타내어지는 동시에, 각 군의 랫트의 검진으로부터 확인하였다.
실시예 2
L.루테리 JCM1112T의 게놈 해석:
L.루테리 JCM1112T로부터 다음의 약품을 사용하여 이하의 방법으로 DNA를 취득하고, 게놈 해석을 행하였다.
DNA 취득방법:
(약품)
·Nuclei Lysis solution(Wizard genome DNA purification kit; Promega사제)
·생리식염수
·50 mM EDTA(pH 7.0)
·50 ㎎/㎖ 리소자임 용액(사용 당일에 소정량의 리소자임을 TE 완충액, 0.25 M Tris-HCl(pH 8.0) 또는 10 mM Tris-HCl(pH 8.0)/ 10 mM EDTA/0.5% SDS로 용해하여 조제한다)
·2 ㎎/㎖ EDTA
·페놀·클로로포름·이소아밀알코올(25:24:1) 혼액
(이하, 「PCI」로 약칭한다)
·클로로포름·이소아밀알코올(24:1) 혼액(이하, 「CIA」로 약칭한다)
·99% 에탄올
·70% 에탄올
·TE 완충액
(방법)
1. L.루테리 JCM1112T를 정치(靜置) 조건하 37℃에서 24시간 배양하고, 얻어진 배양액(50 ㎖)을 3,500 r.p.m으로 15분간 원심분리 후, 생리식염수로 현탁한다.
2. 1.에서 얻어진 현탁액을 3,500 r.p.m으로 15분간 원심분리하고, 상청을 버리고 50 mM EDTA 5 ㎖로 현탁한다.
3. 2.에서 얻어진 현탁액에 50 ㎎/㎖ 리소자임 용액을 200 ㎕ 첨가하고, 37℃에서 60분간 인큐베이트한다(이 때, 에어 인큐베이터를 사용하는 경우에는 인큐베이트 시간을 2-3시간으로 한다.).
4. 인큐베이트 후, 3,500 r.p.m으로 15분간 원심분리하고, 상청을 버린다.
5. 4.에서 얻은 침전물에 Nuclei Lysis Solution 5 ㎖를 첨가하고, 80℃에서 10분간 인큐베이트한다.
6. 2 ㎎/㎖ RNase A 1 ㎕를 첨가하고, 37℃에서 45분간 인큐베이트한다.
7. PCI 10 ㎖를 첨가하고, 혼합하여 3,500 r.p.m으로 15분간 원심분리한다.
8. 상청을 새로운 튜브로 옮기고, 추가로 PCI 10 ㎖를 첨가하여 혼합한다.
9. 동일한 조작을 합계 3회 반복한다(단백질층을 확인할 수 없게 될 때까지 행한다).
10. CIA 10 ㎖를 첨가하고, 차분하게 혼합한 후, 3,500 r.p.m으로 15분간 원심분리한다(페놀의 제거).
11. 상청을 새로운 튜브로 옮기고, 에탄올 침전을 행한다.
12. 11.에서 얻은 침전물을 TE 완충액 1 ㎖에 용해하고, 유산균 DNA를 얻는다.
게놈 해석방법:
상기와 같이 하여 얻은 DNA에 대해서, 구조 유전자 예측과 어노테이션(annotation)을 행하였다. 이 구조 유전자 예측 등은 GENOMEGAMBLER(Sakiyama, T., Takami, H., Ogasawara, N., Kuhara, S., Kozuki, T., Doga, K., Ohyama, A., Horikoshi, K., An automated system for genome analysis to support microbial whole-genome shotgun sequencing., Biosci. Biotechnol. Biochem., 64: 670-673. 2000.), GLIMMER 2.0(Salzberg, SL., Delcher, AL., Kasif, S., and White, O., Microbial gene identification using interpolated Markov models., Nucleic. Acid. Res., 26: 544-548. 1998.) 및 BLAST program blastp (Altschul, SF., Gish, W., Miller, W., Myers, EW., and Lipman, DJ., Basic local alignment search tool., J. Mol. Biol., 215: 403-410. 1990.)의 결과를 병용하여 행하였다.
또한, 도메인 구조의 해석은 INTERPRO(Mulder, NJ., Apweiler, R., Attwood, TK., Bairoch, A., Barrell, D., Bateman, A., Binns, D., Biswas, M., Bradley, P., Bork, P., Bucher, P., Copley, RR., Courcelle, E., Das, U., Durbin, R., Falquet, L., Fleischmann, W., Griffiths-Jones, S., Haft, D., Harte, N., Hulo, N., Kahn, D., Kanapin, A., Krestyaninova, M., Lopez, R., Letunic, I., Lonsdale, D., Silventoinen, V., Orchard, SE., Pagni, M., Peyruc, D., Ponting, CP., Selengut, JD., Servant, F., Sigrist, CJ., Vaughan, R., and Zdobnov, EM., The InterPro Database, 2003 brings increased coverage and new features., Nucleic. Acids. Res., 31: 315-318. 2003.; http://www.ebi.ac.uk/interpro)를, 분자계통수의 제작에는 CLUSTALW(Thompson, JD., Higgins, DG., and Gibson, TJ., CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice., Nucleic. Acids. Res., 22: 4673-4680. 1994.; http://clustalw.genome.ad.jp/)를 사용하였다.
또한, 사용한 DNA 및 아미노산 시퀀스는 National Center of Biological Information(NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov) 및 KEGG database(Ogata, H., Goto, S., Sato, K., Fujibuchi, W., Bono, H., and Kanehisa, M., KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes., Nucleic. Acids. Res., 27: 29-34., 1999.; http://www.genome.ad.jp/kegg/kegg2.html)로부터 락토바실러스속 세균의 드래프트 시퀀스는 DOE JOINT GENOME INSTITUTE(JGI; http://www.jgi.doe.gov/JGI_microbial/html/index.html)로부터 입수하였다.
이상의 정보를 토대로 (13) 내지 (15)로 나타내어지는 유전자는 각각 리파아제를 코드하는 것과, (4)로 나타내어지는 유전자는 트랜스포터 유전자를 코드하는 것과, (9), (10) 및 (11)로 나타내어지는 유전자는 글리세롤 분해효소를 코드하는 것과, (12)로 나타내어지는 유전자는 접착성 유전자인 것이 각각 판명되었다. 또한, (32) 내지 (38)로 나타내어지는 유전자는 글리세롤 분해효소를 코드하고, (39) 내지 (41)로 나타내어지는 유전자는 알데히드 데히드로게나아제를 코드하며, 유전자 (42)로 나타내어지는 유전자는 글리세린산 키나아제를 코드하고, (43)으로 나타내어지는 유전자는 글리세롤 키나아제를 코드하며, (44)로 나타내어지는 유전자는 글리세롤 3인산 데히드로게나아제를 코드하고, (45) 내지 (47)로 나타내어지는 유전자는 트리오스인산 이소머라제를 코드하는 것으로 판명되었다.
실시예 3
글리세롤 분해 유전자의 증폭:
실시예 2에서 정제된 DNA를 템플릿(template), 다음의 뉴클레오티드 서열을 프라이머(primer)로 하고, 하기 반응액을 사용하여 PCR을 행하였다. 또한, PCR 조건도 아래에 나타낸다.
(사용 프라이머)
Figure pat00032
(PCR 반응액)
템플릿 DNA: 1 ㎕
KOD-plus: 1 ㎕
10×KOD-plus 완충액: 5 ㎕
dNTP(각 2 mM): 5 ㎕
프라이머(20 ㎜): 각 1 ㎕
MgSO4(25 ㎜): 2 ㎕
탈 이온수(D.W.): 34 ㎕
(PCR 조건)
(1) 94℃에서 3분간 유지한다.
(2) 94℃에서 15초간 유지한다.
(3) 56℃(Tm)에서 30초간 유지한다.
(4) 68℃에서 3분 30초간 유지한다.
(5) (2) 내지 (4)를 30 사이클 행한다.
(6) 4℃에서 보존한다.
실시예 4
L.루테리 유래 리파아제 유전자 및 접착성 유전자의 증폭:
프라이머를 하기의 것으로 대신하는 것 이외에는 실시예 3과 동일하게 하여 PCR을 행하고, 리파아제 유전자 및 접착성 유전자를 증폭하였다.
(사용 프라이머)
리파아제(1)
Figure pat00033
리파아제(2)
Figure pat00034
리파아제(3)
Figure pat00035
접착성 유전자
Figure pat00036
산업상 이용가능성
본 발명 유산균의 대표인 L.루테리 JCM1112T를 사용한 상기 실시예의 결과로부터 명확한 바와 같이, 이 미생물의 투여에 의해 실험동물의 건강을 손상시키지 않고, 또한 특별히 영양섭취에 제약을 가하지 않고 체중의 증가를 억제할 수 있는 것이었다.
따라서, 본 발명 유산균을 이용하는 항비만제 내지 항비만 음식품은 이것을 섭취하는 것만으로 특별한 치료, 처치를 요하지 않고 비만을 방지하여, 슬리밍효과를 얻을 수 있는 것이다.
또한, 본 발명 유산균으로부터 발견된 글리세롤 분해효소의 서브유닛을 코드하는 유전자 내지는 장관 부착성 프로테인을 코드하는 유전자를 공지의 수법으로 다른 유산균에 삽입함으로써, 글리세롤 분해성이 높은 유산균이나 장관내에서의 체재시간이 긴 유산균을 얻는 것이 가능해져, 다른 유용한 유산균의 개질(改質)에도 유리하게 사용할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> School Corporation, Azabu Veterinary Medicine Educational Institution <120> ANTIOBESITY AGENT AND ANTIOBESITY FOOD <130> PF-060017-WO <150> JP2005-215895 <151> 2005-07-26 <160> 48 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 292 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 1 Met Val Lys Leu Met Thr Ile His Glu Leu Ala Asn Asn Pro Thr Leu 1 5 10 15 Ser Gly Gln Val Arg Leu Ile Glu Asn Ile Val Tyr Gly Ala Met Asp 20 25 30 Gly Glu Ala Leu His Met Ser Ile Leu Ala Pro Trp Thr Gln Arg Phe 35 40 45 Pro Lys Gln Tyr Gln Thr Glu Pro Arg Pro Leu Ile Val Phe Val Gln 50 55 60 Gly Ser Ser Trp Arg Thr Pro Lys Met Gly Glu Glu Ile Pro Gln Leu 65 70 75 80 Val Gln Phe Val Arg Ala Gly Tyr Ile Val Ala Thr Val Gln His Arg 85 90 95 Ser Ser Ile Asp Ser His Pro Phe Pro Ala Phe Leu Gln Asp Val Lys 100 105 110 Thr Ala Ile Arg Phe Leu Arg Ala Asn Ala Gln Lys Tyr Ala Ile Asp 115 120 125 Pro Gln Gln Val Ala Ile Trp Gly Thr Ser Ser Gly Ala Asn Ala Ala 130 135 140 Met Leu Val Gly Leu Thr Gly Asp Asp 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gagaagaaat tccacaactg 240 gttcaatttg ttcgggccgg ttatattgta gcgactgttc aacaccgtag ttcaattgat 300 agccacccat ttcctgcctt tttgcaagat gttaagactg ccattcgttt cttacgggcc 360 aatgcgcaaa aatatgcaat tgatccgcaa caggttgcaa tttgggggac ttcctctgga 420 gccaatgcgg caatgctagt cggcttaacg ggtgatgatc cgcgctataa agttgacctt 480 tatcaagacg aatcggatgc agtagatgct gtggttagtt gttttgcccc aatggacgtg 540 gagaagacgt ttgagtatga tgctaatgtt ccaggaaata agttactgca atattgctta 600 ttagggcctg atgtatcaaa gtggccagaa attgaaaagc aaatgagtcc cttatatcaa 660 gtcaaagatg ggcaaaacta cccaccattc ttattgttcc acggagatgc tgataaagtt 720 gttccatatg aacagatgga aaaaatgtat atgcggttga aggataatgg aaattctgtt 780 gaagcgtacc gggttaaggg tgcgaaccat gaacgagatt tctggagtcc aacaatttat 840 aatattgtgc agaagtttct tggcgatcaa tttaaataa 879 <210> 3 <211> 312 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 3 Leu Ile Tyr Val Leu Lys Asp Leu Cys Asn Thr Ile Ala Glu Val Tyr 1 5 10 15 Gly Lys Ser Ile Leu Lys Gly Val Phe Ile Met Lys His Thr Leu Lys 20 25 30 Val Asp Gln Val 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agcggttcac 240 caagcatttg aatatatcgt caaccatgca gctgaattag atgttgacgc tgatcggttg 300 gggattattg gcttttctgc aggaggccaa attgccgctg catatagtaa tgaaaaacta 360 acacacgcta gattcgccgc attaggatat cctgttattc aacccttgat tgatgaacgt 420 atgggggtta caacagagaa tgtagcgaaa ttagtaaatc cgcaaacacc accaaccttt 480 atgtggggat cggcaaaaga tgaactgact ccctttgttg atcaccttca agtatatgca 540 gatgcgttaa ttaagaatga tattccatat gaattacatg agtttggcac tgggggacat 600 ggaatcgcgt tagctaacga atatactggt attgttaata atgatcgggt agataatcat 660 atgggaaagt ggttcccgct atttcttgag tggttaactg aactgaattt aatttag 717 <210> 7 <211> 235 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 7 Met His Gly Phe Ile Gly Glu Phe Phe Gly Thr Met Val Leu Ile Leu 1 5 10 15 Leu Gly Ala Gly Cys Cys Ala Gly Asn Ser Leu Asn Lys Thr Tyr Gly 20 25 30 Lys Gln Ser Gly Trp Trp Phe Ile Cys Ile Ser Trp Gly Leu Ala Val 35 40 45 Thr Met Gly Val Tyr Val Ala Gly Phe Leu Gly Ser Leu Gly His Leu 50 55 60 Asn Pro Ala Val Thr Ile Pro Phe Ala Ile Phe Gly Leu Phe Pro Trp 65 70 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ttgcaggatt tctgggttca 180 ttagggcact taaatcccgc tgtaacaatt ccttttgcta tttttggctt attcccatgg 240 agtaacgtta taccttactt acttggtcaa tttcttggtg cgtttgttgg tgcagtatta 300 gtaattattc aattctatcc acaatttaaa gcaaccccaa atgaagaaga aggaaataat 360 gttggtattt ttgctactcg tccagcgata aatagtccaa tttttaactt tttctcagaa 420 gtgattgcga cctttgcatt tattttcatc ttattaaatc ttggcaactt tacacaggga 480 ttgaagccat ttatcgtagg aatggttatt gcagttgttg gtacatgtct cgggacaact 540 actggctttg cattaaaccc agctcgtgat tggtcaccac gtttagcata tactattttg 600 ccaattccta ataagggtgt ttcagaatgg tggtatgcat gggttccaat gtgtggccca 660 attgttgggg gccttcttgc ttgtgcttta caaacggcac tagtttag 708 <210> 9 <211> 558 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 9 Met Lys Arg Gln Lys Arg Phe Glu Glu Leu Glu Lys Arg Pro Ile His 1 5 10 15 Gln Asp Thr Phe Val Lys Glu Trp Pro Glu Glu Gly Phe Val Ala Met 20 25 30 Met Gly Pro Asn Asp Pro Lys Pro Ser Val Lys Val Glu Asn Gly Lys 35 40 45 Ile Val Glu Met Asp Gly Lys Lys Leu Glu Asp Phe Asp Leu Ile Asp 50 55 60 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Lys Val Tyr Arg Ser Ser Asp Val Ala Phe Cys Ala 115 120 125 Val Gln Gly Asp His Leu Ser Gly Ser Gly Ile Ala Ile Gly Ile Gln 130 135 140 Ser Lys Gly Thr Thr Val Ile His Gln Lys Asp Gln Asp Pro Leu Gly 145 150 155 160 Asn Leu Glu Leu Phe Pro Gln Ala Pro Val Leu Thr Pro Glu Thr Tyr 165 170 175 Arg Ala Ile Gly Lys Asn Ala Ala Met Tyr Ala Lys Gly Glu Ser Pro 180 185 190 Glu Pro Val Pro Ala Lys Asn Asp Gln Leu Ala Arg Ile His Tyr Gln 195 200 205 Ala Ile Ser Ala Ile Met His Ile Arg Glu Thr His Gln Val Val Val 210 215 220 Gly Lys Pro Glu Glu Glu Ile Lys Val Thr Phe Asp 225 230 235 <210> 12 <211> 711 <212> DNA <213> Lactobacillus reuteri <400> 12 atggctgata ttgatgaaaa cttattacgt aaaatcgtta aagaagtttt aagcgaaact 60 aatcaaatcg atactaagat tgactttgat aaaagtaatg atagtactgc aacagcaact 120 caagaggtgc aacaaccaaa tagtaaagct gttccagaaa agaaacttga ctggttccaa 180 ccagttggag aagcaaaacc tggatattct aaggatgaag ttgtaattgc agtcggtcct 240 gcattcgcaa ctgttcttga taagacagaa actggtattc ctcataaaga agtgcttcgt 300 caagttattg ctggtattga agaagaaggg cttaaggcgc gggtagttaa agtttaccgg 360 agttcagatg tagcattctg tgctgtccaa ggtgatcacc tttctggttc aggaattgct 420 attggtatcc aatcaaaagg gacgacagtt attcaccaaa aggatcaaga ccctcttggt 480 aaccttgagt tattcccaca agcgccagta cttactcccg aaacttatcg tgcaattggt 540 aagaatgccg ctatgtatgc taagggtgaa tctccagaac cagttccagc taaaaacgat 600 caacttgctc gtattcacta tcaagctatt tcagcaatta tgcatattcg tgaaactcac 660 caagttgttg ttggtaagcc tgaagaagaa attaaggtta cgtttgatta a 711 <210> 13 <211> 171 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 13 Met Ser Glu Val Asp Asp Leu Val Ala Lys Ile Met Ala Gln Met Gly 1 5 10 15 Asn Ser Ser Ser Ala Asn Ser Ser Thr Gly Thr Ser Thr Ala Ser Thr 20 25 30 Ser Lys Glu Met Thr Ala Asp Asp Tyr Pro Leu Tyr Gln Lys His Arg 35 40 45 Asp Leu Val Lys Thr Pro Lys Gly His Asn Leu Asp Asp Ile Asn Leu 50 55 60 Gln Lys Val Val Asn Asn Gln Val Asp Pro Lys Glu Leu Arg Ile Thr 65 70 75 80 Pro Glu Ala Leu Lys Leu Gln Gly Glu Ile Ala Ala Asn Ala Gly Arg 85 90 95 Pro Ala Ile 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reuteri <400> 16 atgttcggtc acgatggccg cattgttact aaagtttacc aatgggctgg cacgtattac 60 tactttgatc cgaatactta tttgcgagta gataatgatt accgtcaatc tcagtggggc 120 gattggtata tgtttggccc agatggtcgt atcgttacag ggttaaagga atggtacggt 180 agttattatt actttgatcc gacgacttac ttaaaagtaa ctaataagtg gatagataat 240 aagtactttg gtccagctgg tcagcaagct atttcacgct ttgagagact tgataataag 300 tattactatt tcgatgctaa tggggcagtt cttaatatcc atgatcaatt taagaatatt 360 gataaccaca cttattactt tggagctgat ggtgcttgtt ataccagtca attcttaaat 420 aaggatggta aacagtatta tttcgataat gatggaatta tgctcactga tcaagagaag 480 atcattgacg gtaaattcta tcatttcaat gttaatggtg aagcaatcca agtaaatgat 540 ccttctgaaa tttga 555 <210> 17 <211> 342 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 17 Met Lys Ala Ala Val Ile Asn Asp Pro Val Asp Gly Phe Val Thr Val 1 5 10 15 Lys Asp Val Gln Leu Arg Asp Leu Lys Pro Gly Glu Ala Leu Val Asp 20 25 30 Met Glu Tyr Cys Gly Leu Cys His Thr Asp Leu His Val Ala Ala Gly 35 40 45 Asp Phe Gly Lys Lys Pro Gly Arg Ile Ile Gly His 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tttagctctg gtgtgcaagc tcaatacgtt 360 cggttccaac acggtcaatg ggcgcttgtt aaagttccgg gcaagccaag tgactacagt 420 gaaggaatgc ttaagtccct cttaaccctt gctgatgtta tggctactgg ttaccacgct 480 gcacgagttg ctaacgttag tgatggtgat acagttgttg taatgggtga cggtgctgtt 540 ggcctttgtg cgattattgc tgctaagatg cggggcgcta agaagatcat ttctactagt 600 cgccatgctg accgtcaagc ccttgctaag gaatttggtg ctactgacaa tgttgctgaa 660 cgtagtgacg aagcggttca aaagatcatg gaactcacta acggtgccgg tgctgatgct 720 gtccttgaat gcgttggtac tgaacaatca actgatactg ccatgaaagt tggccgtcca 780 ggtaccatcg ttggtcgggt tggcttacct cataccccaa agatggacat gacggtgcta 840 ttctacaaca acactattgt cggcggtggt ccagcatcag taaccactta cgacaaggac 900 gtattgttga aggctgttct tgatggtgac attaaccctg gtaaggtctt tactaagagc 960 ttcgaccttg accaaattca agaagcttat gaagcaatgg ataagcgtga agcaatcaag 1020 tcttacatta ttatggatgg ctttgaacgc gattaa 1056 <210> 25 <211> 251 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 25 Met Gly Arg Leu Asp Asn Lys Val Ala Ile Ile Thr Gly Gly Ser Lys 1 5 10 15 Gly Ile 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catttggtca agccttctta ggaattaacc actcccttgc ccacaagatg 2220 ggtggagcat tcggtcttcc tcacggtttg cttatcgcta ttgcaatgcc acaagtaatt 2280 cgctttaacg caaaacgtcc acaaaagctt gctctctggc ctcactatga gacttaccat 2340 gcaactaagg actacgctga cattgcacgg ttcattggtt tgaaaggcaa cactgatgaa 2400 gaattagctg aagcatatgc taagaaagtt atcgaacttg ctcacgaatg tggtgttaag 2460 cttagtctta aggacaatgg tgttacacgt gaagaatttg ataaggcggt tgacgatctt 2520 gctcgcttag cttacgaaga tcaatgtact actactaacc cagttgaacc acttgttagc 2580 caactcaagg aattacttga acgttgctac gatggtactg gcgttgaaga aaaataa 2637 <210> 33 <211> 457 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 33 Met Ala Tyr Gln Ser Ile Asn Pro Phe Thr Asn Gln Val Glu Lys Thr 1 5 10 15 Phe Glu Asn Thr Thr Asp Glu Glu Leu Glu Gln Thr Leu Thr Thr Ala 20 25 30 His Gln Leu Tyr Leu Asp Trp Arg Lys Tyr Asn Asp Leu Glu Glu Arg 35 40 45 Lys Arg Gln Ile Leu Lys Leu Gly Gln Ile Leu Arg Glu Arg Arg Val 50 55 60 Glu Tyr Ala Thr Val Met Ser Lys Glu Met Gly Lys Leu Ile Ser Glu 65 70 75 80 Ala Glu Gly 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atggtcatcg cggaattttc 120 actaatgtca atgatgcaat tgctgctgca aaagctgctc aagaaatata tcgggataag 180 ccaattgctg ttcgccaaca agtgattgat gccattaagg aaggattccg cccatatatt 240 gaaaaaatgg ctaaagatat caaagaagaa acaggaatgg gaacagtaga ggccaaaatt 300 gctaagttaa acaatgcctt gtacaacact cctggtcccg agattcttga accagttgta 360 gaaaacggtg acggtgggat ggttatgtat gaacggttac catatggtgt tattggtgcg 420 gttggcccaa gtacaaaccc ttcagaaact gtaattgcta atgcgatcat gatgcttgcc 480 ggtggtaata ctctttactt tggtgctcac cctggcgcaa agaatgttac tcgctggaca 540 attgaaaaga tgaacgattt tattgcagat gcaacaggcc ttcataattt agttgtaagt 600 attgaaacac caacaattga atcagttcaa caaatgatga agcaccccga cattgcaatg 660 ttagcagtaa ctggtggccc agctgttgtt caccaagcaa tgaccagtgg taagaaagcg 720 gttggtgctg gtcctggtaa tcctcctgca atggttgatg ctactgctga tattgattta 780 gctgctcata atatcattac atctgcttca tttgataatg atattttatg tactgctgaa 840 aaggaagtag ttgcagaaag tagcattaaa gatgaattaa ttcgtaagat gcaagatgaa 900 ggtgcctttg tagttaaccg tgaacaagcc gataaattag ctgatatgtg 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tgtaacatta tggtctcgta atgaggaaca agttaagcaa 120 ttaaatactg aacatacaaa tcctcgctat atgaaagatt ttgtttattc tactaactta 180 acagcaacaa cggacatgaa aaaagctgtt aagggtgcca gtgtggtcct gattgtaatt 240 ccaacaaagg gtcttcgtga agttgctaag caattaaatg caattttgac tgaattacat 300 caaaaaccgc tagttattca cgcaacgaaa ggcttagaac aaaatactta taagcggcca 360 tcggaaatgc ttagcgaaga tatttctcct gaaaaccgtc aggcaattgt tgttttatca 420 ggtccgagtc atgctgaaga tgtggcgatt aaagatatga cagctgtaac cgcagcttgt 480 gaggacctgg ccagtgctaa aaaggcgcag aagttattta gtaattctta tttccgtgtg 540 tacactaatg acgatgtaat tggtgccgaa tttggcgcag ccttaaagaa cattattgca 600 attggtgctg gagctattca gggacttggt tatcatgata atgctcgggc agcgttaatt 660 actcgtggac ttgcagaaat tcgccgattg ggagttgctt ttggtgccaa cccgatgact 720 tttattggtc tttctggggt tggtgacctt gttgttactg ctaccagtaa aaattctcga 780 aattggcgtg ctggctatca attggggcaa ggaaaaaagc ttcaagatgt aattgataat 840 atgggaatgg ttatcgaagg tgtctatact accaaagccg cttatgaatt aagtcgtaaa 900 cgacaagtac agatgccaat taccgaagct ctttaccgtg ttttgtatga aggcgaagat 960 attaaaactg caatttctca attaatggac cgagatctta cttcagaaaa cgaataa 1017 <210> 43 <211> 256 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 43 Met Arg Lys Pro Phe Ile Ala Ala Asn Trp Lys Met His Lys Asn Val 1 5 10 15 Gln Glu Ser Val Glu Phe Val Asp Ala Ile Lys Gly Lys Leu Pro Asp 20 25 30 Pro Gln Glu Val Glu Val Gly Ile Ala Ala Gln Ala Phe Ala Leu Pro 35 40 45 Ser Met Val Gln Ala Ala Asp Asp Ser Gly Leu Lys Ile Ile Ala Gln 50 55 60 Asn Ala Ala Ala Glu Tyr Ser Gly Ala Phe Thr Gly Glu Ile Ser Leu 65 70 75 80 Arg Gly Leu Ala Asp Ala Gly Val Ser Tyr Val Met Leu Gly His Ile 85 90 95 Glu Arg Arg His Leu Phe His Glu Asp Asn Glu Leu Val Asn Arg Lys 100 105 110 Val Leu Ala Ala Leu Gln Met Gly Val Thr Pro Ile Ile Cys Thr Asp 115 120 125 Glu Thr Met Val Gln Lys Glu Val Asn Gly Glu Ile His Tyr Val Phe 130 135 140 Gln Gln Leu Met Ser Val Leu Arg Gly Val Ser Leu Asp Gln Ile Lys 145 150 155 160 Asn Val Val Val Ser Tyr Glu Pro Ser Trp Ala Val Gly Tyr Gly Gln 165 170 175 His Ala Asn Pro Val Leu Ala Glu Glu Gly Cys Arg Gln Ile Arg Arg 180 185 190 Thr Ile Ala Asp Asn Tyr Thr Tyr Glu Ile Ala Asp Lys Ile Arg Ile 195 200 205 Leu Tyr Gly Gly Ser Val Asn Pro Asp Asn Ile Gly Met Ile Met Asn 210 215 220 Lys Pro Asp Val Asp Gly Val Leu Ile Gly Arg Ala Ser Leu Asp Val 225 230 235 240 Asp Asn Phe Leu Arg Met Val Asn Tyr Leu Lys Asn Asp Gln Glu Lys 245 250 255 <210> 44 <211> 771 <212> DNA <213> Lactobacillus reuteri <400> 44 atgcgcaaac cctttattgc tgctaattgg aagatgcata agaatgtcca agaatcggtt 60 gaatttgtgg atgcaattaa aggaaagcta ccagatccgc aagaagttga agtcggaatt 120 gcagcccaag cttttgcatt acccagtatg gttcaagccg ctgatgattc aggattaaag 180 ataatcgcgc aaaacgcggc ggctgaatat tcgggagctt tcactggtga aattagctta 240 cgaggtttag ctgacgccgg tgtttcatat gtaatgttag gacatattga acggcgccat 300 ttattccacg aggataatga gttggttaat cggaaagtgt tggcagccct tcaaatggga 360 gttaccccga taatttgtac ggatgaaacg atggtccaga aagaagttaa tggtgaaatt 420 cactacgttt tccagcaatt gatgagcgta ttgaggggcg tttctcttga tcaaattaaa 480 aatgtagttg tttcctatga accaagttgg gcagttggat atggtcagca tgctaatcca 540 gttcttgctg aagaaggatg ccgtcaaatt cggcgaacga ttgctgataa ctacacttat 600 gagattgctg ataagatcag gattctttat gggggcagtg tcaatccaga taatatcgga 660 atgattatga acaagccaga tgtagatggg gtattaatcg gtcgggcaag tttagatgtt 720 gataattttt tgcgaatggt caattattta aaaaatgatc aagaaaaata a 771 <210> 45 <211> 259 <212> PRT <213> Lactobacillus reuteri <400> 45 Met Arg Lys Pro Phe Ile Ile Ala Asn Trp Lys Met Asn Lys Asn Val 1 5 10 15 His Glu Ser Val Ala Phe Val Lys Ala Ile Lys Glu Lys Leu Pro Ala 20 25 30 Asp Lys Glu Ile Gly Ile Ala Ala Gln Ala Val Ser Leu Tyr Asn Met 35 40 45 Lys Lys Val Ala Ser Ser Ser Asn Leu Gln Ile Ile Ala Gln Asn Ala 50 55 60 Ser Ala Glu Leu Glu Gly Pro Tyr Thr Gly Glu Ile Ser Met Arg Ser 65 70 75 80 Leu Ala Asp Ala Gly Val Thr Tyr Val Met Leu Gly His Leu Glu Arg 85 90 95 Arg Arg Leu Phe Asn Glu Ser Asn Asp Ser Ile Asn Gln Lys Val Leu 100 105 110 Ala Ala Leu Asn Ala Gly Ile Ile Pro Ile Ile Cys Thr Asp Glu Glu 115 120 125 Met Val Gln Thr Glu Val Asn Gly Gln Ile His Tyr Val Phe Arg Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Val Leu Lys Gly Val Pro Ala Asn Lys Leu Ser Gln Ile 145 150 155 160 Val Ile Ser Tyr Glu Pro Ser Trp Ala Val Gly Ser Thr His Gln Ala 165 170 175 Asn Pro Asp Ile Ala Glu Glu Gly Cys Gln Ala Ile Arg Gln Ser Leu 180 185 190 Val Glu Met Tyr Gly Asn Glu Ile Gly Glu Gln Val Arg Ile Leu Tyr 195 200 205 Gly Gly Ser Val Asn Pro Glu Asn Ile Gly Gln Ile Met Ser Lys Pro 210 215 220 Asn Val Asp Gly Ala Leu Ile Gly Arg Ala Ser Leu Glu Ile Glu Ser 225 230 235 240 Phe Leu Gln Met Ile Asn Tyr Ile Glu Leu Ala Ser Lys Gln Lys Leu 245 250 255 Gln Val Ile <210> 46 <211> 780 <212> DNA <213> Lactobacillus reuteri <400> 46 atgcgcaaac cgtttattat tgcgaactgg aaaatgaata aaaacgttca tgaatctgtt 60 gcgtttgtta aagcaattaa agaaaagctc ccggcagata aagaaattgg gatcgccgcg 120 caagcagttt cgctatataa catgaaaaaa gtggcgagct cttccaactt acaaattatt 180 gctcaaaatg catctgctga gttagaggga ccatatactg gagaaattag catgcgaagt 240 ttagcagatg cgggcgtgac 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Ala Tyr Thr Gly Glu Thr Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ala Leu Tyr Gln Ala Gly Ile His His Val Ile Leu Gly His Ser 85 90 95 Glu Arg Arg Thr Tyr Phe Asn Glu Thr Asp Glu Leu Ile Asn Lys Lys 100 105 110 Val Lys Ala Ala Leu Val Asn Gly Leu Cys Pro Ile Val Cys Cys Asp 115 120 125 Asp Thr Met Arg Arg Arg Val Ala Gly Lys Lys Val His Trp Val Val 130 135 140 Ser Arg Ile Leu Ala Asp Leu His Gly Leu Thr Asn Asp Glu Ile Cys 145 150 155 160 His Val Thr Val Ala Tyr Glu Pro Ser Trp Ala Ile Gly Thr Gly Glu 165 170 175 Ser Ala Asp Pro Glu Gln Ala Ala Glu Gly Cys Tyr Leu Ile Arg Gln 180 185 190 Thr Ile Ser Asp Met Tyr Gly Asp Glu Val Ala Asn Asn Val Arg Ile 195 200 205 Leu Tyr Gly Gly Ser Val Thr Thr Ser Asn Ile Asn Ala Leu Met Ala 210 215 220 Lys Asn Asp Ile Asp Gly Val Leu Val Gly Ala Ala Ser Leu Asn Pro 225 230 235 240 Glu Thr Phe Leu Gln Leu Val His His 245 <210> 48 <211> 750 <212> DNA <213> Lactobacillus reuteri <400> 48 atgagagtac cgattattgc tggtaattgg aaaatgcata aggatgtaca agaagctgtc 60 tcttttatcg 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Claims (6)

  1. 비만증의 예방 또는 치료에 사용되기 위한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) ATCC53103.
  2. 비만증의 예방 또는 치료에 사용되기 위한 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물을 유효성분으로서 함유하는 항비만제로서, 상기 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물이 락토바실러스 람노서스 ATCC53103 인 항비만제.
  3. 제 2 항에 있어서, 락토바실러스 람노서스 ATCC53103 의 균수로서 어른 1 인당 108 내지 109 CFU/일의 투여량으로 투여되는 항비만제.
  4. 비만증의 예방 또는 치료에 사용되기 위한 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물을 유효성분으로서 함유하는 항비만 음식품으로서, 상기 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물이 락토바실러스 람노서스 ATCC53103 인 항비만 음식품.
  5. 비만증의 예방 또는 치료용 제 2 항 또는 제 3 항에 따른 항비만제의 제조에서 사용하기 위한 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물로서, 상기 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물이 락토바실러스 람노서스 ATCC53103 인 미생물.
  6. 비만증의 예방 또는 치료용 제 4 항에 따른 항비만 음식품의 제조에서 사용하기 위한 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물로서, 상기 락토바실러스 람노서스 종에 속하는 미생물이 락토바실러스 람노서스 ATCC53103 인 미생물.
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