CN102225078A - 抗肥胖剂及抗肥胖食品 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种抗肥胖剂，其以属于罗伊氏乳杆菌的微生物为有效成分，该微生物产生由序列表1、3、5所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。该抗肥胖剂可以在摄取正常饮食的情况下，防止成为肥胖很大原因的脂质被吸收到体内。

Description

抗肥胖剂及抗肥胖食品

本申请是申请号为2006800273816(国际申请号为PCT/JP2006/314640)的原申请的分案申请，该原申请的申请日为2006年7月25日，发明名称为“抗肥胖剂及抗肥胖食品”。

技术领域

本发明涉及抗肥胖剂和抗肥胖食品，更详细地说，本发明涉及可以抑制脂质从消化管的摄入、预防肥胖的抗肥胖剂和抗肥胖食品。

背景技术

肥胖是以体脂肪过剩为特征的体重控制体系疾病。现代社会中，由于运动不足和卡路里过剩的饮食导致中性脂肪在体内蓄积并被判定为肥胖的人不断增加，成为很大的问题。

为了预防肥胖，首要的是进行对消耗所摄取的脂肪来说充分的运动，但实际上进行运动较为困难，需要减少脂肪的摄取。

但是，想通过过度的节食来抑制肥胖时，其它必需营养的摄取量不足或平衡被破坏，结果还会对身体造成不良影响。可以说这与摄取被称为减肥食品的营养少但可以带来饱涨感的食品的情况相同。

发明内容

发明要解决的问题

因此，强烈要求开发摄取正常饮食的同时可防止成为肥胖较大原因的脂质(三酰甘油)被吸收到体内的方法。

用于解决问题的方法

本发明人着眼于脂质被吸收到体内的机理，对于肥胖的抑制方法进行了研究，结果注意到，如果肠内的微生物群落(菌群)将脂质摄取分解，则人摄取的脂质减少，自然可以预防肥胖。于是，对于这样的可摄取分解脂质的微生物进行了深入研究，结果发现属于乳酸菌的微生物中具有这种作用的菌，进而完成了本发明。

即，本发明为抗肥胖剂，其以属于罗伊氏乳杆菌的微生物为有效成分，该微生物产生由以下(1)～(3)的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列、依然保持脂肪酶活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(1)M V K L M T I H E L A N N P T L S G Q V R L I E N I V Y G A

M D G E A L H M S I L A P W T Q R F P K Q Y Q T E P R P L I

V F V Q G S S W R T P K M G E E I P Q L V Q F V R A G Y I V

A T V Q H R S S I D S H P F P A F L Q D V K T A I R F L R A

N A Q K Y A I D P Q Q V A I W G T S S G A N A A M L V G L T

G D D P R Y K V D L Y Q D E S D A V D A V V S C F A P M D V

E K T F E Y D A N V P G N K L L Q Y C L L G P D V S K W P E

I E K Q M S P L Y Q V K D G Q N Y P P F L L F H G D A D K V

V P Y E Q M E K M Y M R L K D N G N S V E A Y R V K G A N H

E R D F W S P T I Y N I V Q K F L G D Q F K

(2)L I Y V L K D L C N T I A E V Y G K S I L K G V F I M K H T

L K V D Q V R D G L W L D S D I T Y T Q V P G W L G N T T R

D L K L S V I R H F Q T N D D T R Y P V I F W F A G G G W M

D T D H N V H L P N L V D F A R H G Y I V V G V E Y R D S N

K V Q F P G Q L E D A K A A I R Y M R A N A K R F Q A D P N

R F I V M G E S A G G H M A S M L G V T N G L N Q F D K G A

N L D Y S S D V Q V A V P F Y G V V D P L T A K T G S A S N

D F D F V Y R N L L G A E P E N A P E L D S A A N P L T Y V

N S N S T P F L I F H G T E D V V V P I K D S E K L Y D A L

V E N N V P A E L Y E I E G A S H M D V K F L Q P Q V F K I

V M D F L D K Y L T R S

(3)M E I K S V N L D Q P Y S S L D I Y H S N T D K A L P G L V

I L P G G S Y N Q I M E R D S E R V A L T F A T H A W Q T F

V V R Y P V V E H K N Y E E A K I A V H Q A F E Y I V N H A

A E L D V D A D R L G I I G F S A G G Q I A A A Y S N E K L

T H A R F A A L G Y P V I Q P L I D E R M G V T T E N V A K

L V N P Q T P P T F M W G S A K D E L T P F V D H L Q V Y A

D A L I K N D I P Y E L H E F G T G G H G I A L A N E Y T G

I V N N D R V D N H M G K W F P L F L E W L T E L N L I

另外，本发明为抗肥胖饮食品，其以属于罗伊氏乳杆菌的微生物为有效成分，该微生物产生由上述(1)～(3)的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。

进而，本发明为由下述(5)～(7)所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的亚基所构成的甘油分解酶。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持甘油分解活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(5)M K R Q K R F E E L E K R P I H Q D T F V K E W P E E G F V

A M M G P N D P K P S V K V E N G K I V E M D G K K L E D F

D L I D L Y I A K Y G I N I D N V E K V M N M D S T K I A R

M L V D P N V S R D E I I E I T S A L T P A K A E E I I S K

L D F G E M I M A V K K M R P R R K P D N Q C H V T N T V D

N P V Q I A A D A A D A A L R G F P E Q E T T T A V A R Y A

P F N A I S I L I G A Q T G R P G V L T Q C S V E E A T E L

Q L G M R G F T A Y A E T I S V Y G T D R V F T D G D D T P

W S K G F L A S C Y A S R G L K M R F T S G A G S E V L M G

Y P E G K S M L Y L E A R C I L L T K A S G V Q G L Q N G A

V S C I E I P G A V P N G I R E V L G E N L L C M M C D I E

C A S G C D Q A Y S H S D M R R T E R F I G Q F I A G T D Y

I N S G Y S S T P N Y D N T F A G S N T D A M D Y D D M Y V

M E R D L G Q Y Y G I H P V K E E T I I K A R N K A A K A L

Q A V F E D L G L P K I T D E E V E A A T Y A N T H D D M P

K R D M V A D M K A A Q D M M D R G I T A I D I I K A L Y N

H G F K D V A E A I L N L Q K Q K V V G D Y L Q T S S I F D

K D W N V T S A V N D G N D Y Q G P G T G Y R L Y E D K E E

W D R I K D L P F A L D P E H L E L

(6)M A D I D E N L L R K I V K E V L S E T N Q I D T K I D F D

K S N D S T A T A T Q E V Q Q P N S K A V P E K K L D W F Q

P V G E A K P G Y S K D E V V I A V G P A F A T V L D K T E

T G I P H K E V L R Q V I A G I E E E G L K A R V V K V Y R

S S D V A F C A V Q G D H L S G S G I A I G I Q S K G T T V

I H Q K D Q D P L G N L E L F P Q A P V L T P E T Y R A I G

K N A A M Y A K G E S P E P V P A K N D Q L A R I H Y Q A I

S A I M H I R E T H Q V V V G K P E E E I K V T F D

(7)M S E V D D L V A K I M A Q M G N S S S A N S S T G T S T A

S T S K E M T A D D Y P L Y Q K H R D L V K T P K G H N L D

D I N L Q K V V N N Q V D P K E L R I T P E A L K L Q G E I

A A N A G R P A I Q K N L Q R A A E L T R V P D E R V L E M

Y D A L R P F R S T K Q E L L N I A K E L R D K Y D A N V C

A A W F E E A A D Y Y E S R K K L K G D N

进而，本发明为由下述(8)所示的氨基酸序列或在该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的肠道黏附性蛋白质。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持使乳酸菌黏附在肠道粘膜细胞附近的活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(8)M F G H D G R I V T K V Y Q W A G T Y Y Y F D P N T Y L R V

D N D Y R Q S Q W G D W Y M F G P D G R I V T G L K E W Y G

S Y Y Y F D P T T Y L K V T N K W I D N K Y F G P A G Q Q A

I S R F E R L D N K Y Y Y F D A N G A V L N I H D Q F K N I

D N H T Y Y F G A D G A C Y T S Q F L N K D G K Q Y Y F D N

D G I M L T D Q E K I I D G K F Y H F N V N G E A I Q V N D

P S E I

发明效果

通过摄取本发明的抗肥胖剂和抗肥胖饮食品，可以进行正常饮食但防止脂质由肠道的吸收。而且，乳酸菌自古就用于酸奶或发酵乳等发酵食品的制造中，安全性极高，因此可以放心地摄取。

附图说明

图1为表示罗伊氏乳杆菌JCM 1112T代谢图谱的图。

图2为表示投与罗伊氏乳杆菌JCM 1112T的大鼠组随时间的体重增加与比较组和对照组相比较的图。

具体实施方式

作为本发明的抗肥胖剂和抗肥胖食品(以下有时称为“抗肥胖剂等”)的有效成分的微生物，属于乳酸菌的罗伊氏乳杆菌(LacTobacillus reuteri)，是可以产生由上述(1)～(3)的氨基酸序列(分别对应于序列表的1、3、5)或在该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶(以下称为“本发明脂肪酶类”)的乳酸菌(以下称为“本发明乳酸菌”)。

该本发明的脂肪酶类将存在于肠道粘膜细胞附近的脂质(三酰甘油)分解为脂肪酸和甘油，摄入到本发明乳酸菌中。而且，如图1所示，所摄入的脂肪酸作为菌体构成要素被利用，甘油经过各种代谢途径成为二氧化碳、丙酮、乙醇、乳酸盐或罗伊氏素(reuterin)。

本发明乳酸菌除了具有产生上述脂肪酶类的能力，即具有编码上述脂肪酶的核苷酸序列(基因)之外，优选具有以下(4)所示的核苷酸序列(对应于序列表的8)作为编码运载蛋白的基因。另外，本发明还包括与下述(4)所示核苷酸序列的同源性为80％以上、且能在严格条件下与编码具有甘油转运活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(4)所示核苷酸序列杂交、且编码具有甘油转运活性的蛋白质的核苷酸序列。

(4)ATGCATGGATTTATTGGCGAATTTTTTGGCACCATGGTTTTAATCCTATTAGGAGCAGGA

TGTTGTGCTGGTAATAGTTTGAATAAAACATATGGGAAACAAAGTGGCTGGTGGTTTATC

TGTATTTCATGGGGCTTAGCAGTTACAATGGGAGTTTATGTTGCAGGATTTCTGGGTTCA

TTAGGGCACTTAAATCCCGCTGTAACAATTCCTTTTGCTATTTTTGGCTTATTCCCATGG

AGTAACGTTATACCTTACTTACTTGGTCAATTTCTTGGTGCGTTTGTTGGTGCAGTATTA

GTAATTATTCAATTCTATCCACAATTTAAAGCAACCCCAAATGAAGAAGAAGGAAATAAT

GTTGGTATTTTTGCTACTCGTCCAGCGATAAATAGTCCAATTTTTAACTTTTTCTCAGAA

GTGATTGCGACCTTTGCATTTATTTTCATCTTATTAAATCTTGGCAACTTTACACAGGGA

TTGAAGCCATTTATCGTAGGAATGGTTATTGCAGTTGTTGGTACATGTCTCGGGACAACT

ACTGGCTTTGCATTAAACCCAGCTCGTGATTGGTCACCACGTTTAGCATATACTATTTTG

CCAATTCCTAATAAGGGTGTTTCAGAATGGTGGTATGCATGGGTTCCAATGTGTGGCCCA

ATTGTTGGGGGCCTTCTTGCTTGTGCTTTACAAACGGCACTAGTTTAG

该基因编码将甘油摄入到本发明乳酸菌的细胞内的运载蛋白，如图1所示，所摄入的甘油通过乳酸菌内的酶代谢。

进而，本发明乳酸菌优选具有由上述式(5)～(7)所示的氨基酸序列(分别对应于序列表的序列号9、11、13)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的亚基所构成的甘油分解酶。该亚基(5)～(7)所构成的甘油分解酶为在pdu(propanediol utilization)操纵子中发挥作用的甘油脱水酶(glycerol dehydratase)，可以高效地代谢通过本发明脂肪酶的作用所产生的甘油。

另外，可通过基因工程学方法将编码该亚基(5)～(7)的核苷酸序列(9)～(11)(分别对应于序列表的序列号10、12、14)整合到其它乳酸菌等中，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。本发明还包括与下述(9)～(11)所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有甘油分解活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(9)～(11)所示的核苷酸序列杂交、且编码具有甘油分解活性的蛋白质的核苷酸序列。

(9)ATGAAACGTCAAAAACGATTTGAAGAACTAGAAAAACGGCCAATTCATCAAGATACATTT

GTTAAAGAATGGCCAGAAGAAGGTTTCGTTGCAATGATGGGGCCTAATGACCCTAAGCCT

AGTGTAAAAGTTGAAAATGGCAAGATCGTAGAGATGGATGGTAAAAAGCTCGAAGATTTT

GATTTGATTGACTTGTACATTGCTAAGTATGGAATCAATATTGACAACGTTGAAAAAGTT

ATGAATATGGATTCTACCAAGATTGCACGGATGCTTGTTGATCCTAATGTTTCTCGTGAT

GAAATTATTGAAATTACATCAGCTTTGACTCCTGCTAAGGCTGAAGAGATCATCAGTAAG

CTTGATTTTGGTGAAATGATTATGGCTGTCAAGAAGATGCGCCCACGTCGTAAGCCTGAC

AACCAGTGTCACGTTACCAATACTGTTGATAACCCAGTTCAAATTGCTGCTGATGCTGCT

GATGCCGCTCTTCGTGGATTTCCAGAACAAGAAACCACGACAGCTGTGGCACGTTATGCA

CCATTCAATGCTATTTCAATTTTAATTGGTGCACAAACAGGTCGCCCTGGTGTATTGACA

CAATGTTCTGTTGAAGAAGCTACTGAATTGCAATTAGGTATGCGTGGTTTTACCGCATAT

GCTGAAACCATTTCAGTTTACGGTACTGATCGTGTATTTACCGATGGTGATGATACTCCA

TGGTCTAAAGGCTTCTTGGCATCTTGTTATGCATCACGTGGTTTGAAGATGCGATTTACT

TCAGGTGCCGGTTCAGAAGTTTTGATGGGTTATCCAGAAGGTAAGTCAATGCTTTACCTT

GAAGCGCGTTGTATTTTACTTACTAAGGCTTCAGGTGTTCAAGGACTTCAAAATGGTGCC

GTAAGTTGTATTGAAATTCCTGGTGCTGTTCCTAATGGTATTCGTGAAGTTCTCGGTGAA

AACTTGTTATGTATGATGTGTGACATCGAATGTGCTTCTGGTTGTGACCAAGCATACTCA

CACTCCGATATGCGGCGGACTGAACGGTTTATTGGTCAATTTATTGCCGGTACTGATTAT

ATTAACTCTGGTTACTCATCAACTCCTAACTACGATAATACCTTCGCTGGTTCAAACACT

GATGCTATGGACTACGATGATATGTATGTTATGGAACGTGACTTGGGTCAATATTATGGT

ATTCACCCTGTTAAGGAAGAAACCATTATTAAGGCACGTAATAAGGCCGCTAAAGCCCTT

CAAGCAGTATTTGAAGATCTTGGATTACCAAAGATTACTGATGAAGAGGTCGAAGCAGCA

ACGTATGCTAACACCCATGATGACATGCCAAAGCGGGATATGGTTGCAGATATGAAGGCT

GCTCAAGATATGATGGATCGTGGAATTACTGCTATTGATATTATCAAGGCATTGTACAAC

CACGGATTTAAAGATGTCGCTGAAGCAATTTTGAACCTTCAAAAACAAAAAGTTGTTGGT

GATTACCTTCAAACATCTTCTATTTTTGATAAAGATTGGAACGTCACTTCTGCTGTTAAC

GACGGAAATGATTATCAAGGACCAGGTACTGGATACCGTCTATATGAAGACAAGGAAGAA

TGGGATCGGATTAAAGACTTACCATTCGCCCTTGATCCAGAACATTTGGAACTGTAG

(10)ATGGCTGATATTGATGAAAACTTATTACGTAAAATCGTTAAAGAAGTTTTAAGCGAAACT

AATCAAATCGATACTAAGATTGACTTTGATAAAAGTAATGATAGTACTGCAACAGCAACT

CAAGAGGTGCAACAACCAAATAGTAAAGCTGTTCCAGAAAAGAAACTTGACTGGTTCCAA

CCAGTTGGAGAAGCAAAACCTGGATATTCTAAGGATGAAGTTGTAATTGCAGTCGGTCCT

GCATTCGCAACTGTTCTTGATAAGACAGAAACTGGTATTCCTCATAAAGAAGTGCTTCGT

CAAGTTATTGCTGGTATTGAAGAAGAAGGGCTTAAGGCGCGGGTAGTTAAAGTTTACCGG

AGTTCAGATGTAGCATTCTGTGCTGTCCAAGGTGATCACCTTTCTGGTTCAGGAATTGCT

ATTGGTATCCAATCAAAAGGGACGACAGTTATTCACCAAAAGGATCAAGACCCTCTTGGT

AACCTTGAGTTATTCCCACAAGCGCCAGTACTTACTCCCGAAACTTATCGTGCAATTGGT

AAGAATGCCGCTATGTATGCTAAGGGTGAATCTCCAGAACCAGTTCCAGCTAAAAACGAT

CAACTTGCTCGTATTCACTATCAAGCTATTTCAGCAATTATGCATATTCGTGAAACTCAC

CAAGTTGTTGTTGGTAAGCCTGAAGAAGAAATTAAGGTTACGTTTGATTAA

(11)ATGAGTGAAGTTGATGATTTAGTAGCAAAGATCATGGCTCAGATGGGAAACAGTTCATCT

GCTAATAGCTCTACAGGTACTTCAACTGCAAGTACTAGTAAGGAAATGACAGCAGATGAT

TACCCACTTTATCAAAAGCACCGTGATTTAGTAAAAACACCAAAAGGACACAATCTTGAT

GACATCAATTTACAAAAAGTAGTAAATAATCAAGTTGATCCTAAGGAATTACGGATTACA

CCAGAAGCATTGAAACTTCAAGGTGAAATTGCAGCTAATGCTGGCCGTCCAGCTATTCAA

AAGAATCTTCAACGAGCTGCAGAATTAACACGAGTACCTGACGAACGGGTTCTTGAAATG

TATGATGCATTGCGTCCTTTCCGTTCAACTAAGCAAGAATTATTGAACATTGCAAAGGAA

TTACGGGACAAGTATGACGCTAATGTTTGCGCAGCATGGTTTGAAGAAGCTGCTGATTAT

TATGAAAGTCGTAAGAAGCTAAAGGGCGATAACTAA

本发明乳酸菌优选进一步还保有下述(8)的氨基酸序列(对应于序列表的序列号15)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的肠道黏附性蛋白质。

(8)M F G H D G R I V T K V Y Q W A G T Y Y Y F D P N T Y L R V

D N D Y R Q S Q W G D W Y M F G P D G R I V T G L K E W Y G

S Y Y Y F D P T T Y L K V T N K W I D N K Y F G P A G Q Q A

I S R F E R L D N K Y Y Y F D A N G A V L N I H D Q F K N I

D N H T Y Y F G A D G A C Y T S Q F L N K D G K Q Y Y F D N

D G I M L T D Q E K I I D G K F Y H F N V N G E A I Q V N D

P S E I

该肠道黏附性蛋白质具有使乳酸菌黏附在肠道粘膜细胞附近的作用，具有该蛋白质的本发明乳酸菌在肠道粘膜附近存在一定期间，可以稳定地摄入脂质。另外，可通过公知的方法将编码该蛋白质的下述(12)所示的基因(对应于序列表的序列号16)整合到其它乳酸菌中，由此获得在肠道内滞留时间长的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(12)所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有使乳酸菌黏附在肠道粘膜细胞附近的活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(12)所示的核苷酸序列杂交、且编码具有使乳酸菌黏附在肠道粘膜细胞附近的活性的蛋白质的核苷酸序列。

(12)ATGTTCGGTCACGATGGCCGCATTGTTACTAAAGTTTACCAATGGGCTGGCACGTATTAC

TACTTTGATCCGAATACTTATTTGCGAGTAGATAATGATTACCGTCAATCTCAGTGGGGC

GATTGGTATATGTTTGGCCCAGATGGTCGTATCGTTACAGGGTTAAAGGAATGGTACGGT

AGTTATTATTACTTTGATCCGACGACTTACTTAAAAGTAACTAATAAGTGGATAGATAAT

AAGTACTTTGGTCCAGCTGGTCAGCAAGCTATTTCACGCTTTGAGAGACTTGATAATAAG

TATTACTATTTCGATGCTAATGGGGCAGTTCTTAATATCCATGATCAATTTAAGAATATT

GATAACCACACTTATTACTTTGGAGCTGATGGTGCTTGTTATACCAGTCAATTCTTAAAT

AAGGATGGTAAACAGTATTATTTCGATAATGATGGAATTATGCTCACTGATCAAGAGAAG

ATCATTGACGGTAAATTCTATCATTTCAATGTTAATGGTGAAGCAATCCAAGTAAATGAT

CCTTCTGAAATTTGA

另外，本发明乳酸菌优选具有由下述式(16)～(20)任一个所示的氨基酸序列(分别对应于序列表的序列号17、19、21、23、25)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的甘油分解酶。该甘油分解酶为醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase，图1中的ADH(8))，可以高效地代谢由本发明脂肪酶的作用所产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持甘油分解活性的序列。作为这种氨基酸序列，可以举出显示80％以上同源性的序列。

(16)M K A A V I N D P V D G F V T V K D V Q L R D L K P G E A L

V D M E Y C G L C H T D L H V A A G D F G K K P G R I I G H

E G V G R V S K V A P G V T S L K V G D R V S I A W F F K G

C G H C E Y C L T G R E T L C R N V L N A G Y T A D G A M A

E Q C I V P A D Y A V K V P E G L D P V E A T S L T C A G V

T M Y K A L K V A D I K P G Q W V S I V G A G G L G N L G I

Q L A H N V F G A H V I A V D G N P D K L E A A K K N G A E

I L I N R H D G D V D K Q I Q E K V G G V H A A V V T A V S

A S A F D Q A V D S L R P D G K L V A V A L P Q G D M K L N

I A K T V L D G I I V A G S L V G T R Q D L A E C F Q F G A

E G K V H P I V K T R K L S E I N D M I Q E L K D N K V V G

R N V V D F V H N D N D

(17)M E K R E N A I P K T M K A W A V T T P G P I D G K E S P I

E F T E K P V P T P K R G E V L V K V I T C G V C H T D L H

V T E G D L P V H H E H V T P G H E I V G K V V G F G P E T

Q R F K F G E R I G I P W F R H A C G V C K F C R S G H E N

L C P H S L Y T G W D H D G G Y A E Y V T V P E G F A Y R L

P E K F D S L E A A P L L C A G I I G Y R A F E R A N V P A

G G R L G L Y G F G G S A H I T A Q I A L A Q G I E V H V F

T R G E D A K K F A L E L G C A S V Q G S Y D P A P V P L D

S S I I F A P V G D M V L P A L A S L V P G G T L A L A G I

H M T D I P T M N Y Q K E I F H E K T L T S V E S N T R R D

G E E F L T L A D R L N I H P E V H E Y P L A K A D E A L R

Y V K H G D I K G A C V L R V S E D

(18)M Q I K A A L A T K P N A D L E I Q T V E L D E P K E N E V

L I K I A S T G F C H T D I V G R S G A T T P L P V V L G H

E G A G V V Q K V G A N V T D V K P G D H V V L S F S Y C G

H C Y N C T H N H Q G L C E N F N Q L N F E G K T Y D G T H

R L H L D D G T P V S V F F G Q S S F A T Y V T A N V H N I

V K V D Q D V D L N L L G P L G C G M Q T G A G T V L N Y I

K P A P E D A I A V F G A G A V G L A A I M A A K I A G V K

H I I A I N R N G N H L D L A K E L G A T E T I N N T A E D

P V K A I K E I V P R G V T Y A I D T T G N T G V I K S A I

D S L A T A G E C V L L G V G G D I T L D L M N D I L S E S

K K I S G V V E G D S N P Q E F I P Q L V K Y Y K Q S K F P

L D K L V K Y Y D F A D I N Q V I A D S T N G K V I K P I I

K I D P E L A K L P L T N D G S N V Q K M V A E A G L A D Q

I T I D S A G T S N I A E G S P A D S R T K A I L D K Y H I

K D D G M I A R Q L Q D R D Y Y D A D Y I I A M D Q M N V R

D A K D M A P A G L E N K V H G I F E A T P G K E N C Y I V

D P W I T H

(19)M K K A I F E K A G Q M K I V D V D R P T I E K P D D V I I

K V V R T C V C G S D L W N F R G I N P V E K D S E N S G H

E A I G I V E E V G E D I T T V K P G D F V I A P F T H G C

G H C A A C R A G F D G S C Q S H N D N F S S G V Q A Q Y V

R F Q H G Q W A L V K V P G K P S D Y S E G M L K S L L T L

A D V M A T G Y H A A R V A N V S D G D T V V V M G D G A V

G L C A I I A A K M R G A K K I I S T S R H A D R Q A L A K

E F G A T D N V A E R S D E A V Q K I M E L T N G A G A D A

V L E C V G T E Q S T D T A M K V G R P G T I V G R V G L P

H T P K M D M T V L F Y N N T I V G G G P A S V T T Y D K D

V L L K A V L D G D I N P G K V F T K S F D L D Q I Q E A Y

E A M D K R E A I K S Y I I M D G F E R D

(20)M G R L D N K V A I I T G G S K G I G A A V A K K F I E E G

A K V V L T A R K M D E G Q K V A D Q L G D N A I F I Q Q D

V A R K G D W D R V I R Q T V Q V F G K L N I V V N N A G I

A E Y A D V E K T D A E I W D K T I A V N L T G T M W G T K

L G I E A M K N N G E K N S I I N M S S I E G L I G D P D L

F A Y N A S K G G V R L L T K S A A L D C A R K G Y D I R V

N T I H P G Y I S T P L V D N L V K D D P K A E G H L E S L

H P L G R L G K P E E I A N L A L Y L A S D E S S F S T G S

E F V A D G G Y T A Q

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该甘油分解酶(16)～(20)的下述核苷酸序列(32)～(36)(分别对应于序列表的序列号18、20、22、24、26)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(32)～(36)任一个所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有甘油分解活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(32)～(36)任一个所示的核苷酸序列杂交、且编码具有甘油分解活性的蛋白质的核苷酸序列。

(32)ATGAAAGCTGCTGTTATTAATGATCCAGTAGACGGTTTTGTTACTGTTAAAGATGTTCAA

CTTCGGGATTTGAAGCCCGGTGAAGCTTTAGTTGACATGGAATATTGTGGTCTTTGTCAC

ACTGATCTACACGTTGCTGCTGGGGACTTTGGTAAGAAGCCCGGTCGTATTATCGGTCAC

GAAGGGGTTGGTCGTGTATCTAAGGTTGCCCCTGGCGTTACTTCCTTGAAAGTTGGCGAC

CGTGTATCAATTGCATGGTTCTTCAAGGGCTGTGGACACTGTGAATATTGTTTAACTGGT

CGTGAAACTCTTTGTCGGAACGTTCTTAATGCGGGTTACACTGCTGACGGTGCAATGGCT

GAACAATGTATCGTACCAGCTGACTACGCTGTTAAGGTTCCAGAAGGTCTTGATCCTGTT

GAAGCTACTTCATTAACTTGTGCTGGTGTTACGATGTACAAGGCATTAAAGGTTGCTGAC

ATCAAGCCAGGTCAATGGGTATCAATCGTTGGTGCTGGTGGTTTAGGTAACTTGGGTATT

CAACTTGCTCACAACGTATTTGGTGCTCATGTTATCGCTGTTGATGGTAATCCTGATAAG

CTTGAAGCCGCTAAGAAGAATGGTGCTGAAATTTTAATTAACCGTCATGACGGTGATGTT

GATAAGCAAATTCAAGAAAAGGTTGGCGGTGTTCACGCTGCTGTAGTAACAGCTGTTTCT

GCCTCTGCATTCGACCAAGCAGTTGATTCACTTCGCCCAGATGGTAAGCTTGTTGCCGTT

GCGCTTCCACAAGGTGACATGAAGCTTAACATTGCTAAGACTGTTCTTGATGGTATCATT

GTTGCTGGTTCATTAGTTGGTACCCGTCAAGACTTAGCTGAATGTTTCCAATTTGGTGCA

GAAGGTAAGGTTCACCCAATTGTTAAGACTCGTAAGTTAAGCGAAATTAATGATATGATC

CAAGAACTTAAGGATAACAAGGTTGTTGGTCGGAATGTTGTTGATTTTGTTCACAACGAT

AACGACTAA

(33)ATGGAAAAACGCGAAAATGCTATTCCGAAAACAATGAAGGCTTGGGCAGTCACAACTCCT

GGGCCGATTGATGGTAAGGAATCACCAATCGAATTTACCGAAAAGCCTGTGCCGACTCCT

AAACGGGGAGAAGTCCTTGTTAAGGTAATAACGTGTGGAGTATGTCATACGGACTTGCAC

GTGACTGAAGGAGACTTGCCGGTTCACCACGAACACGTTACTCCTGGTCATGAAATTGTT

GGTAAAGTTGTCGGCTTTGGACCAGAGACACAACGATTTAAGTTTGGTGAGCGAATTGGG

ATTCCATGGTTTCGGCATGCTTGTGGTGTATGCAAGTTTTGCCGATCAGGTCATGAGAAT

CTCTGTCCTCATTCACTTTATACCGGTTGGGATCATGATGGCGGTTATGCAGAATATGTC

ACAGTTCCAGAAGGATTTGCATATCGGCTTCCAGAAAAGTTTGATTCCCTAGAGGCAGCT

CCGTTATTATGTGCAGGGATTATTGGTTATCGGGCCTTTGAACGTGCCAATGTTCCGGCT

GGCGGTCGCCTAGGATTATATGGCTTCGGTGGTTCAGCTCATATTACAGCTCAAATTGCA

CTTGCTCAGGGAATTGAAGTGCATGTCTTTACGCGTGGTGAGGATGCCAAGAAATTCGCC

CTAGAATTAGGTTGTGCTTCTGTTCAGGGCTCCTATGACCCAGCACCAGTTCCTTTGGAT

TCATCAATCATTTTTGCGCCGGTTGGTGATATGGTCTTGCCGGCTTTAGCTAGTTTAGTT

CCAGGGGGGACATTAGCATTAGCCGGTATTCATATGACTGATATTCCAACAATGAATTAC

CAAAAAGAAATATTCCACGAAAAGACATTAACGAGTGTTGAGAGTAATACTCGTCGTGAT

GGGGAAGAATTCTTAACATTAGCTGATCGTCTTAATATCCATCCTGAAGTCCACGAATAT

CCCCTAGCAAAGGCTGACGAAGCATTACGCTATGTTAAGCACGGTGATATTAAGGGAGCT

TGTGTATTACGTGTTAGTGAGGACTAA

(34)ATGCAAATTAAAGCTGCTCTTGCAACCAAACCTAACGCTGATTTAGAGATTCAAACCGTC

GAATTGGATGAACCAAAAGAAAATGAAGTATTAATAAAAATTGCTTCAACAGGTTTTTGT

CATACAGATATTGTTGGTCGAAGCGGTGCCACTACCCCTCTCCCCGTTGTCCTCGGGCAT

GAAGGTGCGGGCGTCGTCCAAAAAGTAGGAGCTAACGTTACGGACGTTAAACCCGGCGAC

CATGTTGTTCTATCATTTAGCTACTGTGGCCATTGCTATAACTGTACTCATAATCATCAA

GGCTTATGCGAAAACTTCAATCAGCTAAACTTTGAAGGAAAAACCTATGATGGTACTCAC

CGCCTGCACTTAGATGATGGCACGCCAGTCAGTGTCTTTTTTGGTCAGTCTTCCTTTGCG

ACCTATGTAACAGCCAATGTCCATAATATTGTTAAAGTTGATCAAGATGTTGATCTTAAC

TTATTAGGGCCACTCGGTTGTGGAATGCAAACAGGTGCTGGAACCGTTCTAAATTATATT

AAACCTGCTCCTGAAGATGCAATTGCCGTTTTCGGTGCTGGTGCTGTTGGCTTAGCCGCA

ATTATGGCTGCTAAAATTGCTGGAGTTAAACATATTATTGCGATTAATCGTAACGGTAAC

CACCTTGACCTGGCGAAGGAATTGGGCGCTACTGAAACGATTAATAATACGGCTGAAGAT

CCCGTCAAAGCAATTAAAGAAATCGTTCCGCGTGGTGTAACTTATGCAATCGATACTACC

GGAAACACCGGTGTAATTAAATCAGCAATTGATAGTCTTGCCACCGCTGGAGAATGTGTC

CTCTTAGGAGTTGGCGGCGATATTACCTTAGACTTAATGAATGATATCTTATCAGAATCT

AAGAAAATCTCTGGGGTTGTCGAAGGAGATAGCAATCCCCAAGAGTTTATTCCTCAACTA

GTTAAGTACTACAAGCAAAGCAAGTTCCCCCTTGATAAGCTTGTTAAGTACTACGATTTT

GCTGATATTAACCAAGTTATCGCTGACTCAACAAACGGAAAGGTTATTAAGCCAATCATC

AAAATTGATCCTGAATTAGCTAAATAATTGCCGCTCACCAATGACGGAAGCAATGTTCAA

AAAATGGTTGCAGAAGCTGGCCTTGCTGATCAAATTACTATTGATTCAGCCGGAACAAGT

AACATTGCAGAAGGTTCACCTGCTGATAGTCGAACAAAAGCCATTCTCGATAAATATCAC

ATTAAAGACGACGGAATGATTGCCCGTCAATTGCAGGACAGGGATTATTATGATGCCGAT

TATATTATCGCAATGGATCAGATGAATGTCCGGGACGCAAAAGATATGGCACCAGCTGGG

TTAGAAAATAAGGTTCATGGAATCTTTGAAGCTACCCCAGGAAAAGAAAATTGCTATATC

GTTGACCCCTGGATCACTCACTGA

(35)ATGAAAAAAGCTATTTTTGAAAAGGCGGGTCAAATGAAGATTGTTGATGTTGACCGTCCA

ACAATTGAAAAGCCTGATGACGTAATTATTAAGGTAGTGCGGACCTGTGTTTGTGGTTCT

GACCTATGGAACTTCCGAGGAATTAATCCGGTTGAAAAAGATTCTGAAAACTCTGGCCAT

GAAGCAATTGGAATTGTTGAAGAAGTTGGTGAAGATATCACTACTGTCAAACCTGGGGAC

TTTGTGATTGCTCCATTTACTCATGGATGTGGGCACTGTGCTGCTTGTCGCGCGGGCTTC

GATGGTTCTTGCCAAAGTCACAACGATAACTTTAGCTCTGGTGTGCAAGCTCAATACGTT

CGGTTCCAACACGGTCAATGGGCGCTTGTTAAAGTTCCGGGCAAGCCAAGTGACTACAGT

GAAGGAATGCTTAAGTCCCTCTTAACCCTTGCTGATGTTATGGCTACTGGTTACCACGCT

GCACGAGTTGCTAACGTTAGTGATGGTGATACAGTTGTTGTAATGGGTGACGGTGCTGTT

GGCCTTTGTGCGATTATTGCTGCTAAGATGCGGGGCGCTAAGAAGATCATTTCTACTAGT

CGCCATGCTGACCGTCAAGCCCTTGCTAAGGAATTTGGTGCTACTGACAATGTTGCTGAA

CGTAGTGACGAAGCGGTTCAAAAGATCATGGAACTCACTAACGGTGCCGGTGCTGATGCT

GTCCTTGAATGCGTTGGTACTGAACAATCAACTGATACTGCCATGAAAGTTGGCCGTCCA

GGTACCATCGTTGGTCGGGTTGGCTTACCTCATACCCCAAAGATGGACATGACGGTGCTA

TTCTACAACAACACTATTGTCGGCGGTGGTCCAGCATCAGTAACCACTTACGACAAGGAC

GTATTGTTGAAGGCTGTTCTTGATGGTGACATTAACCCTGGTAAGGTCTTTACTAAGAGC

TTCGACCTTGACCAAATTCAAGAAGCTTATGAAGCAATGGATAAGCGTGAAGCAATCAAG

TCTTACATTATTATGGATGGCTTTGAACGCGATTAA

(36)ATGGGTCGTTTAGATAATAAAGTTGCAATTATTACTGGTGGTTCTAAAGGAATTGGAGCT

GCTGTCGCAAAAAAGTTTATCGAAGAAGGCGCAAAGGTTGTTTTAACCGCTCGGAAGATG

GATGAGGGACAAAAAGTCGCTGACCAACTAGGTGACAATGCGATCTTTATCCAACAAGAC

GTTGCTCGGAAAGGAGACTGGGACCGGGTAATCCGCCAAACTGTCCAAGTCTTTGGGAAG

CTCAATATTGTGGTTAACAATGCGGGAATTGCCGAATACGCCGATGTTGAGAAGACGGAC

GCTGAAATTTGGGATAAAACAATTGCCGTTAACCTTACCGGTACGATGTGGGGAACTAAG

CTCGGTATTGAAGCAATGAAGAACAACGGGGAAAAGAATTCAATCATCAATATGTCATCC

ATTGAAGGACTAATTGGTGATCCTGATCTCTTTGCATACAATGCTTCTAAGGGTGGTGTC

CGCCTCTTAACTAAGTCCGCTGCGCTTGATTGTGCCCGGAAAGGCTATGACATCCGTGTA

AATACAATTCATCCTGGTTATATCTCAACTCCACTAGTTGATAATTTGGTCAAGGATGAT

CCAAAAGCAGAAGGACACCTAGAAAGCCTTCATCCCCTTGGCCGTCTTGGAAAGCCAGAA

GAGATTGCTAACCTCGCTTTATACCTTGCTTCAGATGAATCAAGCTTTAGTACTGGTTCG

GAATTTGTCGCTGATGGTGGCTATACGGCTCAATAA

本发明乳酸菌优选具有由下述式(21)或(22)所示的氨基酸序列(分别对应于序列表的序列号27、29)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的甘油分解酶。该甘油分解酶为醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase，图1中的ADH(8))，可以高效地代谢由本发明的脂肪酶作用所产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持甘油分解活性的序列。作为这种氨基酸序列，可以举出显示80％以上同源性的序列。

(21)M T N V P T V K L N N G V E M P T L G F E V F Q V P D L S Q

A E Q A V T D A L E V G Y R L I D T A A A Y Q N E E A V G K

A I K N S S V N R E D V F V T S K L W V S D F N Y K R A K A

G I D A S L Q K L G L D Y M D L Y L L H Q P Y G D T M G A W

R A L Q E A Q K E G K I R A I G V S N F Y A D Q L K D L E L

T M P V K P A V N Q I E V N P W Y Q Q D Q E V K F A Q S E D

I R V E A W A P F A E G K H D I F T N E I I A E I A A K Y G

K S N G Q V I L R W L L Q R G I T V I P K S V H K N R M E E

N I D V F D F E L S N D D M K K I A S L N K K E S Q F F D H

R D P V T I E Q I F G S S L K M V Q D D E K

(22)M I L D E T I T L N S G V K I P K F A L G T W M I D D D Q A

A E A V R N A I K M G Y R H I D T A Q A Y D N E R G V G E G

V R T A G I D R D K I F V T S K I A A E H K D Y D V T K K S

I D E T L E K M G L D Y I D M M L I H S P Q P W K E V N Q S

D N R Y L E G N L A A W R A M E D A V N E G K I R T I G V S

N F K K A D L E N I I K N S D T V P A V D Q V L A H I G H T

P F N L L S F T H E H D I A V E A Y S P V A H G A A L D N P

V I E K M A K K Y N V S V P Q L C I R Y D W Q I G M I V L P

K T T N P E H M K E N T E I D F E I S E A D M D L L R R V K

P L D Y G D F D I Y P V Y G G K M

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该甘油分解酶(21)或(22)的下述核苷酸序列(37)或(38)(分别对应于序列表的序列号28、30)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(37)或(38)所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有甘油分解活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(37)或(38)所示的核苷酸序列杂交、且编码具有甘油分解活性的蛋白质的核苷酸序列。

(37)ATGACAAATGTACCAACAGTAAAATTAAATAACGGAGTAGAAATGCCAACCCTTGGATTT

GAAGTATTCCAAGTTCCAGACTTAAGCCAAGCTGAACAAGCAGTTACCGATGCTCTTGAA

GTCGGCTATCGTTTAATCGATACTGCTGCTGCTTACCAAAATGAAGAAGCAGTTGGAAAG

GCAATTAAGAATAGTAGTGTAAACCGTGAAGATGTCTTTGTAACTTCTAAGTTATGGGTG

TCTGATTTTAACTATAAGCGGGCTAAAGCAGGGATTGACGCTTCACTGCAAAAACTTGGC

CTTGATTACATGGATCTTTACCTTCTCCATCAACCATATGGCGATACAATGGGGGCTTGG

CGAGCATTACAAGAAGCACAGAAAGAAGGTAAGATTCGCGCAATCGGTGTATCGAACTTC

TACGCTGATCAACTAAAGGATCTTGAATTAACAATGCCTGTTAAGCCAGCGGTCAACCAA

ATTGAAGTTAACCCTTGGTACCAGCAAGATCAAGAGGTTAAGTTTGCGCAAAGTGAAGAT

ATTCGTGTTGAAGCATGGGCACCATTTGCGGAAGGTAAGCATGATATTTTTACCAACGAA

ATAATTGCGGAAATTGCTGCCAAGTATGGCAAGAGCAATGGTCAAGTAATTCTTCGCTGG

CTTTTACAACGGGGTATTACTGTCATTCCAAAGTCAGTCCACAAGAACCGGATGGAAGAA

AATATCGATGTCTTTGATTTTGAACTTTCCAATGATGATATGAAAAAGATAGCTAGTCTT

AACAAGAAGGAAAGCCAATTCTTTGACCACCGTGATCCGGTTACGATTGAACAAATCTTT

GGCTCCAGCTTAAAGATGGTTCAAGATGACGAAAAATAA

(38)ATGATTTTAGATGAGACAATTACTCTTAATAGTGGTGTGAAAATTCCAAAGTTTGCATTA

GGAACCTGGATGATTGATGATGACCAAGCAGCCGAAGCAGTTCGGAATGCGATTAAGATG

GGATATCGGCACATCGATACAGCTCAGGCTTATGATAATGAGCGGGGAGTCGGTGAAGGT

GTACGAACAGCCGGTATTGATCGGGATAAAATCTTTGTTACTTCAAAGATCGCTGCTGAA

CACAAAGATTATGATGTAACTAAAAAGTCGATTGACGAGACTCTTGAAAAGATGGGTCTT

GATTATATCGACATGATGCTTATTCATAGTCCTCAACCATGGAAAGAAGTAAATCAATCT

GATAATCGTTACCTTGAAGGAAATCTCGCTGCTTGGCGAGCCATGGAAGATGCCGTTAAC

GAAGGTAAGATTCGAACAATTGGCGTTTCTAATTTCAAAAAAGCCGATCTTGAAAATATT

ATTAAGAATAGCGATACCGTTCCCGCTGTTGATCAAGTTTTAGCTCATATTGGTCATACT

CCATTCAATCTTTTATCATTTACTCATGAACATGACATTGCGGTTGAAGCATATTCACCA

GTTGCTCACGGCGCTGCTTTAGACAACCCCGTAATTGAAAAGATGGCTAAAAAGTACAAC

GTTTCAGTCCCACAATTGTGCATTCGGTATGATTGGCAAATAGGAATGATCGTCTTACCA

AAGACTACTAATCCAGAACACATGAAGGAAAACACTGAAATTGATTTTGAAATTTCTGAA

GCTGATATGGACCTATTGCGGCGAGTAAAGCCATTAGACTATGGCGATTTTGATATCTAC

CCTGTTTACGGTGGAAAAATGTAA

另外，本发明乳酸菌优选具有由下述式(23)～(25)任一个所示的氨基酸序列(分别对应于序列表的序列号31、33、35)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase)。该醛脱氢酶为图1中所示的aldehyde dehydrogenase(9)，可以高效地代谢由本发明脂肪酶的作用而产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持醛脱氢酶活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(23)M P A N N K K Q V E K K E L T A E E K K Q N A Q K L V D D L

M T K S Q A A F E K L R Y Y S Q E Q V D K I C Q A M A L A A

E E H H M D L A V D A A N E T G R G V A E D K A I K N I Y A

S E Y I W N N I R H D K T V G I I E D N D E D Q T I K I A D

P L G V I A G I V P V T N P T S T T I F K S I I S A K T R N

T I I F S F H R Q A M K S S I K T A K I L Q E A A E K A G A

P K N M I Q W L P E S T R E N T T A L L Q H P N T A T I L A

T G G P S L V K A A Y S S G N P A L G V G P G N G P A Y I E

K T A N I E R S V Y D I V L S K T F D N G M I C A T E N S V

V V D E E I Y D K V K E E F Q K W N C Y F L K P N E I D K F

T D G F I D P D R H Q V R G P I A G R S A N A I A D M C G I

K V P D N T K V I I A E Y E G V G D K Y P L S A E K L S P V

L T M Y K A T S H E N A F D I C A Q L L H Y G G E G H T A A

I H T L D D D L A T K Y G L E M R A S R I I V N S P S G I G

G I G N I Y N N M T P S L T L G T G S Y G S N S I S H N V T

D W D L L N I K T I A K R R E N R Q W V K I P P K V Y F Q R

N S L K E L Q D I P N I N R A F I V T G P G M S K R G Y V Q

R V I D Q L R Q R Q N N T A F L V F D D V E E D P S T N T V

E K G V A M M N D F K P D T I I A L G G G S P M D A A K A M

W M F Y E H P E T S W Y G V M Q K Y L D I R K R A Y Q I K K

P T K S Q L I G I P T T S G T G S E V T P F A V I T D S K T

H V K Y P L A D Y A L T P N I A I V D S Q F V E T V P A K T

T A W T G L D V L C H A T E S Y V S V M A T D Y T R G W S L

Q T I K G V M E N L P K S V Q G D K L A R R K M H D F S T M

A G M A F G Q A F L G I N H S L A H K M G G A F G L P H G L

L I A I A M P Q V I R F N A K R P Q K L A L W P H Y E T Y H

A T K D Y A D I A R F I G L K G N T D E E L A E A Y A K K V

I E L A H E C G V K L S L K D N G V T R E E F D K A V D D L

A R L A Y E D Q C T T T N P V E P L V S Q L K E L L E R C Y

D G T G V E E K

(24)M A Y Q S I N P F T N Q V E K T F E N T T D E E L E Q T L T

T A H Q L Y L D W R K Y N D L E E R K R Q I L K L G Q I L R

E R R V E Y A T V M S K E M G K L I S E A E G E V D L C A S

F C D Y Y A A H A D E F L Q P K I I A T T S G R A K V L K Q

S L G I L V A V E P W N F P F Y Q I A R V F I P N F I A G N

P M I L K D A S N C P A S A Q A F N D A V K E A G A P A G S

L T N L F L S Y D Q V N K A I A D K R V A G V C L T G S E R

G G A T V A K E A G A N L K K S T L E L G G N D A F I I L D

D A D W D L V E K V A P A A R L Y N A G Q V C T S S K R F I

V L E K D Y D R F L K M M K D A F S K V K M G D P L D P L T

T L A P L S S K K A K E K L Q Q Q V A T A V E N G A K V Y Y

G N K P V D M E G Q F F M P T I L T D I T P D N P I F D T E

M F G P V A S V Y K V S S E E E A I E L A N N S S Y G L G N

T I F S N D S E H A E R V A A K I E T G M S W I N A G W A S

L P E L P F G G V K N S G Y G R E L S S Y G I D E F T N K H

L I Y E A R Q

(25)M Q I N D I E S A V R K I L A E E L D N A S S S S A N V A A

T T D N G H R G I F T N V N D A I A A A K A A Q E I Y R D K

P I A V R Q Q V I D A I K E G F R P Y I E K M A K D I K E E

T G M G T V E A K I A K L N N A L Y N T P G P E I L E P V V

E N G D G G M V M Y E R L P Y G V I G A V G P S T N P S E T

V I A N A I M M L A G G N T L Y F G A H P G A K N V T R W T

I E K M N D F I A D A T G L H N L V V S I E T P T I E S V Q

Q M M K H P D I A M L A V T G G P A V V H Q A M T S G K K A

V G A G P G N P P A M V D A T A D I D L A A H N I I T S A S

F D N D I L C T A E K E V V A E S S I K D E L I R K M Q D E

G A F V V N R E Q A D K L A D M C I Q E N G A P D R K F V G

K D A T Y I L D Q A N I P Y T G H P V E I I C E L P K E H P

L V M T E M L M P I L P V V S C P T F D D V L K T A V E V E

K G N H H T A T I H S N N L K H I N N A A H R M Q C S I F V

V N G P S Y V G T G V A D N G A H S G A S A L T I A T P T G

E G T C T A R T F T R R V R L N S P Q G F S V R N W Y

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该醛脱氢酶(23)～(25)的下述核苷酸序列(39)～(41)(分别对应于序列表的序列号32、34、36)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(39)～(41)任一个所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有醛脱氢酶活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(39)～(41)任一个所示的核苷酸序列杂交、且编码具有醛脱氢酶活性的蛋白质的核苷酸序列。

(39)ATGCCTGCTAACAACAAGAAACAAGTTGAAAAGAAAGAATTAACTGCTGAAGAAAAAAAG

CAAAACGCCCAAAAGCTAGTTGACGATTTAATGACTAAGAGTCAAGCTGCTTTTGAAAAG

TTACGTTACTATTCACAAGAACAAGTTGACAAGATTTGTCAGGCAATGGCTCTCGCTGCC

GAAGAACACCACATGGACTTAGCTGTTGATGCTGCTAACGAAACTGGTCGTGGGGTTGCT

GAAGATAAGGCTATCAAGAACATCTACGCAAGTGAATACATTTGGAACAACATCCGTCAC

GATAAGACTGTTGGTATTATCGAAGACAATGATGAAGACCAAACTATCAAAATTGCTGAT

CCACTTGGTGTCATTGCCGGAATTGTTCCAGTTACTAACCCTACTTCAACAACGATCTTC

AAATCAATCATTAGTGCTAAGACACGGAATACAATCATCTTTTCTTTCCACCGTCAAGCA

ATGAAGTCATCTATCAAGACTGCAAAGATTCTCCAAGAAGCTGCTGAAAAAGCCGGTGCG

CCAAAGAACATGATTCAATGGCTCCCTGAAAGTACCCGCGAAAACACTACCGCATTACTC

CAACACCCTAATACTGCTACTATTTTAGCAACCGGTGGTCCTTCATTAGTTAAGGCTGCC

TACAGTTCTGGTAACCCTGCTCTTGGTGTTGGTCCTGGTAACGGTCCTGCTTACATCGAA

AAAACTGCCAACATCGAACGTTCTGTTTACGACATCGTTCTTTCTAAGACATTCGATAAC

GGTATGATTTGTGCCACTGAAAACTCAGTTGTTGTTGATGAAGAAATCTACGACAAGGTT

AAAGAAGAATTCCAAAAGTGGAACTGTTACTTCTTGAAGCCAAACGAAATTGATAAATTT

ACTGATGGCTTTATTGACCCAGATCGTCATCAAGTTCGTGGTCCAATCGCTGGTCGTTCA

GCTAATGCTATTGCTGACATGTGTGGTATTAAAGTACCTGACAACACTAAGGTTATCATT

GCTGAATACGAAGGTGTTGGTGACAAGTACCCACTTTCAGCTGAAAAGCTTTCACCAGTA

TTAACAATGTACAAGGCAACCTCTCACGAAAATGCCTTTGATATCTGTGCTCAATTATTA

CACTACGGTGGTGAAGGTCACACTGCTGCTATTCACACCCTTGATGATGATTTAGCTACT

AAGTACGGTCTTGAAATGCGTGCTTCACGGATCATTGTTAACTCCCCATCTGGTATTGGT

GGTATTGGTAACATCTACAACAACATGACTCCATCCCTTACTTTAGGTACTGGTTCATAC

GGTAGTAACTCAATTTCTCACAACGTTACTGATTGGGACCTCTTAAACATCAAAACAATT

GCAAAGCGGCGTGAAAACCGTCAATGGGTTAAGATTCCCCCAAAAGTATACTTTCAACGC

AACTCACTAAAAGAATTGCAAGATATTCCAAACATTAACCGGGCATTCATCGTTACTGGT

CCTGGAATGAGCAAGCGTGGTTACGTTCAACGTGTTATCGATCAATTGCGTCAACGCCAA

AACAACACTGCTTTCTTAGTATTTGATGACGTTGAAGAAGATCCATCAACAAACACTGTT

GAAAAAGGTGTTGCCATGATGAATGACTTCAAACCTGATACAATTATTGCTCTTGGTGGT

GGTTCACCAATGGATGCTGCTAAGGCTATGTGGATGTTCTATGAGCACCCAGAAACTTCA

TGGTATGGGGTTATGCAAAAGTACCTTGATATTCGGAAGCGTGCTTACCAAATCAAGAAG

CCTACTAAGTCTCAACTTATTGGTATCCCTACTACATCAGGTACTGGTTCAGAAGTTACT

CCATTTGCGGTTATTACCGATTCAAAAACTCATGTTAAGTACCCACTTGCTGACTACGCC

TTAACACCAAACATTGCAATCGTTGACTCACAATTCGTTGAAACTGTTCCAGCAAAAACT

ACTGCTTGGACTGGACTAGATGTTTTATGTCACGCTACTGAATCATATGTTTCTGTTATG

GCAACTGACTACACTCGTGGTTGGTCACTACAAACCATCAAGGGTGTTATGGAAAACCTT

CCTAAGTCAGTTCAAGGTGATAAGTTAGCTCGTCGTAAGATGCACGACTTCTCAACAATG

GCCGGGATGGCATTTGGTCAAGCCTTCTTAGGAATTAACCACTCCCTTGCCCACAAGATG

GGTGGAGCATTCGGTCTTCCTCACGGTTTGCTTATCGCTATTGCAATGCCACAAGTAATT

CGCTTTAACGCAAAACGTCCACAAAAGCTTGCTCTCTGGCCTCACTATGAGACTTACCAT

GCAACTAAGGACTACGCTGACATTGCACGGTTCATTGGTTTGAAAGGCAACACTGATGAA

GAATTAGCTGAAGCATATGCTAAGAAAGTTATCGAACTTGCTCACGAATGTGGTGTTAAG

CTTAGTCTTAAGGACAATGGTGTTACACGTGAAGAATTTGATAAGGCGGTTGACGATCTT

GCTCGCTTAGCTTACGAAGATCAATGTACTACTACTAACCCAGTTGAACCACTTGTTAGC

CAACTCAAGGAATTACTTGAACGTTGCTACGATGGTACTGGCGTTGAAGAAAAATAA

(40)ATGGCATATCAAAGTATCAATCCATTTACGAACCAAGTAGAAAAAACGTTTGAAAATACA

ACTGATGAAGAATTAGAACAAACATTAACTACGGCGCATCAATTATATTTAGATTGGCGG

AAGTATAATGACCTTGAAGAACGGAAACGGCAAATTTTAAAGTTAGGTCAAATATTACGT

GAACGGCGTGTTGAATATGCGACAGTTATGAGTAAGGAAATGGGAAAATTAATTAGCGAA

GCAGAAGGCGAGGTTGACCTTTGTGCTTCTTTCTGTGATTATTATGCAGCCCATGCAGAT

GAATTTCTGCAACCAAAAATTATTGCGACAACGAGTGGACGCGCCAAAGTTTTGAAGCAA

TCATTAGGAATTTTAGTTGCAGTTGAACCTTGGAATTTCCCATTCTATCAAATTGCCCGG

GTATTTATTCCCAACTTTATTGCAGGAAACCCCATGATCTTGAAGGATGCGTCGAATTGT

CCAGCATCCGCCCAAGCATTTAACGATGCCGTTAAGGAAGCTGGTGCGCCAGCCGGCAGT

TTAACTAATTTATTCCTTTCATATGACCAAGTAAATAAGGCAATTGCTGATAAGCGGGTA

GCCGGCGTTTGTCTTACTGGTTCTGAACGTGGTGGTGCAACCGTTGCTAAAGAGGCTGGT

GCTAATTTGAAGAAGAGCACTTTGGAACTTGGTGGTAATGATGCCTTTATTATCTTAGAC

GATGCAGATTGGGATCTTGTCGAAAAAGTTGCCCCGGCAGCCCGTCTGTATAATGCTGGA

CAAGTATGTACATCATCAAAACGTTTTATTGTCCTTGAAAAGGATTATGATCGTTTCTTA

AAGATGATGAAAGATGCGTTCTCGAAAGTTAAAATGGGTGATCCCCTTGATCCATTAACA

ACTCTGGCACCATTATCATCTAAGAAAGCAAAAGAAAAGCTCCAACAGCAAGTCGCAACA

GCAGTAGAAAATGGGGCCAAAGTTTACTATGGTAATAAGCCGGTTGACATGGAAGGTCAA

TTCTTTATGCCAACGATCTTAACTGATATCACTCCAGATAACCCAATATTTGATACGGAA

ATGTTTGGGCCAGTGGCTTCGGTTTATAAGGTTAGTTCCGAAGAGGAAGCAATCGAACTG

GCTAATAATTCAAGCTATGGGTTAGGAAACACTATCTTTAGCAATGATTCCGAACATGCG

GAACGAGTAGCAGCGAAGATCGAAACTGGAATGAGTTGGATTAATGCCGGCTGGGCTTCA

TTACCAGAATTACCATTTGGTGGTGTTAAGAATTCAGGTTACGGTCGTGAACTCAGCAGT

TACGGAATTGATGAATTTACTAACAAACATCTAATTTACGAAGCACGACAATAA

(41)ATGCAGATTAATGATATTGAAAGTGCTGTACGCAAAATTCTTGCCGAAGAACTAGATAAT

GCCAGCTCTTCAAGTGCAAACGTTGCAGCTACTACTGATAATGGTCATCGCGGAATTTTC

ACTAATGTCAATGATGCAATTGCTGCTGCAAAAGCTGCTCAAGAAATATATCGGGATAAG

CCAATTGCTGTTCGCCAACAAGTGATTGATGCCATTAAGGAAGGATTCCGCCCATATATT

GAAAAAATGGCTAAAGATATCAAAGAAGAAACAGGAATGGGAACAGTAGAGGCCAAAATT

GCTAAGTTAAACAATGCCTTGTACAACACTCCTGGTCCCGAGATTCTTGAACCAGTTGTA

GAAAACGGTGACGGTGGGATGGTTATGTATGAACGGTTACCATATGGTGTTATTGGTGCG

GTTGGCCCAAGTACAAACCCTTCAGAAACTGTAATTGCTAATGCGATCATGATGCTTGCC

GGTGGTAATACTCTTTACTTTGGTGCTCACCCTGGCGCAAAGAATGTTACTCGCTGGACA

ATTGAAAAGATGAACGATTTTATTGCAGATGCAACAGGCCTTCATAATTTAGTTGTAAGT

ATTGAAACACCAACAATTGAATCAGTTCAACAAATGATGAAGCACCCCGACATTGCAATG

TTAGCAGTAACTGGTGGCCCAGCTGTTGTTCACCAAGCAATGACCAGTGGTAAGAAAGCG

GTTGGTGCTGGTCCTGGTAATCCTCCTGCAATGGTTGATGCTACTGCTGATATTGATTTA

GCTGCTCATAATATCATTACATCTGCTTCATTTGATAATGATATTTTATGTACTGCTGAA

AAGGAAGTAGTTGCAGAAAGTAGCATTAAAGATGAATTAATTCGTAAGATGCAAGATGAA

GGTGCCTTTGTAGTTAACCGTGAACAAGCCGATAAATTAGCTGATATGTGTATCCAAGAA

AATGGTGCTCCTGATCGTAAATTTGTTGGTAAGGATGCAACTTATATCTTAGACCAAGCT

AATATTCCTTACACAGGCCACCCAGTTGAAATTATTTGTGAACTTCCTAAGGAACATCCA

TTAGTAATGACTGAAATGTTAATGCCAATTTTACCAGTTGTTTCTTGTCCAACATTTGAT

GATGTTTTGAAGACTGCTGTTGAAGTTGAAAAAGGTAACCATCACACAGCTACTATTCAT

TCCAATAACCTTAAGCATATTAATAATGCTGCTCACCGGATGCAATGTTCAATCTTTGTT

GTTAATGGCCCATCCTATGTTGGTACAGGTGTTGCAGATAATGGAGCTCACTCAGGTGCT

TCAGCATTAACAATTGCTACGCCAACTGGTGAAGGAACATGTACTGCACGAACATTTACT

CGTCGGGTTCGTTTGAACTCACCACAAGGATTCTCAGTACGTAACTGGTATTAA

本发明乳酸菌优选具有由下述式(26)所示的氨基酸序列(对应于序列表的序列号37)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的甘油酸激酶(glycerate kinase)。该甘油酸激酶为图1中所示的glyceratekinase(10)，可以高效地代谢由本发明脂肪酶的作用而产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持甘油酸激酶活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(26)M K F V I A P D S F K G G L T A K E A A N V M A E G I K R V

F P N A E Y A L V P M A D G G E G T V Q S L V D A T N G Q K

M I A K V H N P L N K L V N A E Y G I L G D G E T A V I E M

A A A S G L Q F V N K E T A N P L I T T T Y G T G E L I K D

A L D H N I K K I I I G I G G S A T V D G G A G M A Q A L G

A R L L D A D N H E I G L G G G E L A S L E Q V D F G G L D

P R L K N V D I Q I A S D V T N P L T G K N G A A P V F G P

Q K G A D E E M V N I L D K N L H H Y A R K I V A A G G P D

V E Q T A G A G A A G G L G A G L I A F T G A T M K R G V E

L V I E A T Q L Q K K A V G A D Y V F T G E G G I D F Q T K

F G K T P Y G V A K A T K E V A P T A P V I V L A G N I G K

G V N D L Y S S T A I D A I F A T P E G A K P L K T A L A D

A P I D I A Q T A E N V A R L I K V S H V S N

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该甘油酸激酶(26)的下述核苷酸序列(42)(对应于序列表的序列号38)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(42)所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有甘油酸激酶活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(42)所示的核苷酸序列杂交、且编码具有甘油酸激酶活性的蛋白质的核苷酸序列。

(42)ATGAAATTTGTAATTGCTCCAGATTCATTTAAAGGCGGATTAACAGCAAAAGAAGCAGCA

AATGTGATGGCAGAAGGAATCAAAAGAGTGTTTCCGAATGCCGAGTATGCTTTAGTTCCA

ATGGCTGATGGAGGAGAGGGGACTGTTCAATCCTTAGTTGATGCGACTAACGGTCAAAAA

ATGATTGCTAAAGTCCACAACCCATTAAATAAATTAGTTAATGCTGAGTACGGAATATTA

GGTGATGGGGAAACGGCAGTGATTGAGATGGCGGCGGCAAGTGGCCTTCAATTTGTTAAT

AAGGAGACTGCGAACCCGCTTATTACAACTACATATGGTACCGGCGAGTTAATTAAGGAT

GCTCTTGACCATAACATTAAAAAAATAATTATTGGAATTGGTGGAAGTGCAACCGTTGAT

GGCGGAGCGGGGATGGCCCAAGCACTTGGAGCACGTTTATTGGATGCTGATAATCATGAA

ATTGGTTTAGGCGGTGGTGAGTTAGCAAGTTTAGAGCAAGTAGATTTTGGAGGATTAGAT

CCTCGCTTAAAAAATGTAGATATTCAGATTGCATCAGACGTAACCAACCCATTAACAGGA

AAAAATGGGGCAGCCCCAGTATTTGGCCCGCAAAAAGGAGCTGATGAAGAAATGGTGAAC

ATCTTGGACAAAAATCTTCATCATTATGCCCGAAAAATAGTTGCAGCTGGTGGGCCAGAC

GTTGAACAAACGGCAGGTGCAGGGGCAGCCGGTGGTTTAGGAGCCGGGTTGATAGCATTT

ACCGGTGCGACAATGAAGCGAGGAGTAGAATTAGTGATTGAAGCAACTCAACTACAAAAA

AAGGCAGTTGGCGCTGATTATGTTTTTACTGGTGAAGGAGGAATTGATTTCCAGACTAAA

TTTGGTAAAACGCCATATGGAGTCGCTAAGGCAACTAAAGAGGTGGCTCCAACTGCTCCG

GTAATTGTGTTGGCTGGAAATATTGGTAAAGGCGTAAATGATCTATATTCATCCACGGCC

ATTGATGCAATTTTTGCAACTCCTGAAGGGGCTAAACCATTAAAAACAGCATTAGCAGAT

GCACCTATTGATATTGCTCAAACAGCGGAAAACGTTGCACGTTTAATTAAAGTGAGTCAT

GTTAGTAATTAA

本发明乳酸菌优选具有由下述式(27)所示的氨基酸序列(对应于序列表的序列号39)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的甘油激酶(glycerolkinase)。该甘油激酶为图1中所示的GK(5)，可以高效地代谢由本发明脂肪酶的作用而产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持甘油激酶活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(27)L S E Q Q Y I M A I D Q G T T S S R A I I F D H D G N K V A

I S Q Q E F P Q Y F P Q P G W V E H D P L E I W D S V Q S V

I S N V M I K S Q I K P Y K I A A I G I T N Q R E T T V I W

D R H T G K P I Y N A I V W Q S K Q T S D I A E Q L I K D G

Y K D M I H Q K T G L V I D S Y F A A T K I K W I L D H V P

G A R E K A A K G D L M F G T I D T W L L W N L S G R R V H

A T D V T N A S R T M L F N I H T L D W D Q D I L D L L D I

P Q S L L P V V K P S S A I Y G Y T G D Y H F Y G V Q I P I

A G I A G D Q Q A A L F G Q A A Y D K G S I K N T Y G T G A

F I V M N T G L K P T L S D N G L L T T I A Y G L D G Q T H

Y A L E G S I F V A G S A V Q W L R D G L K M F D K A S E S

E Q M A V D A K T T G G V Y V V P A F T G L G A P Y W D Q E

V R G A M F G L T R G T E R G H I I R A T L E A I A Y Q T K

D V V D T M V K D T Q L P L T A L T V N G G A S R N N F M M

Q F Q A D I L Q T P I K R A A M E E T T A L G A A F L A G L

A V D F W E D Q D E L R K L S R I G D Q F D P Q M D P Q K A

A D L Y R G W Q R A I A A A Q F Y G K D

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该甘油激酶(27)的下述核苷酸序列(43)(对应于序列表的序列号40)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(43)所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有甘油激酶活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(43)所示的核苷酸序列杂交、且编码具有甘油激酶活性的蛋白质的核苷酸序列。

(43)TTGAGTGAACAACAATATATCATGGCGATTGACCAGGGAACGACGAGCTCACGGGCGATT

ATCTTTGACCATGACGGAAATAAGGTTGCGATCAGTCAGCAGGAATTTCCCCAATACTTC

CCGCAGCCGGGGTGGGTTGAACATGATCCTCTAGAGATTTGGGATAGCGTTCAATCAGTG

ATTTCAAATGTAATGATTAAGTCCCAGATCAAGCCCTATAAGATTGCGGCAATTGGGATT

ACTAACCAACGGGAGACGACGGTTATTTGGGATCGCCATACCGGTAAGCCGATTTATAAC

GCAATTGTCTGGCAATCGAAGCAAACGAGCGACATCGCCGAACAATTGATTAAAGATGGT

TATAAGGATATGATCCACCAGAAGACTGGCTTGGTGATTGATTCGTATTTCGCGGCCACT

AAGATCAAGTGGATCCTTGACCATGTTCCTGGTGCCCGGGAAAAAGCAGCAAAGGGAGAC

TTGATGTTTGGGACTATCGATACTTGGTTACTATGGAATTTATCGGGACGGCGGGTCCAC

GCAACGGATGTGACCAATGCCAGCCGGACGATGCTTTTTAATATCCATACCCTCGACTGG

GATCAAGATATCCTTGACCTGCTTGATATTCCCCAGTCGCTTTTGCCAGTAGTAAAGCCA

AGTTCAGCCATTTACGGTTATACTGGCGACTACCACTTCTATGGGGTGCAGATTCCAATT

GCCGGGATTGCAGGTGACCAACAAGCAGCCCTCTTTGGTCAAGCAGCCTATGATAAAGGT

TCAATCAAGAACACCTATGGGACTGGAGCCTTCATCGTCATGAATACGGGACTAAAACCC

ACGCTTTCGGATAACGGCTTGTTGACGACGATTGCGTATGGCCTGGACGGGCAAACTCAT

TACGCGCTTGAAGGAAGTATCTTTGTGGCCGGTTCTGCCGTTCAATGGTTGCGGGATGGT

CTCAAGATGTTTGATAAGGCAAGCGAGTCCGAACAAATGGCTGTCGATGCCAAGACAACT

GGCGGCGTTTATGTCGTCCCCGCCTTTACAGGATTAGGCGCACCGTACTGGGATCAAGAA

GTGCGGGGCGCAATGTTTGGCCTTACCCGTGGAACTGAACGGGGACATATCATCCGTGCA

ACTTTGGAAGCCATTGCCTACCAGACCAAAGATGTTGTCGATACGATGGTCAAGGACACC

CAATTACCACTAACAGCACTAACGGTTAACGGGGGCGCTTCACGGAACAACTTCATGATG

CAGTTCCAGGCCGATATCTTACAAACGCCAATCAAGCGGGCAGCAATGGAAGAGACAACC

GCGCTGGGAGCAGCCTTTCTCGCTGGATTGGCCGTTGATTTCTGGGAAGACCAGGATGAG

TTACGGAAGCTATCACGGATTGGCGACCAGTTTGATCCACAAATGGATCCGCAAAAGGCA

GCTGACTTGTATCGGGGATGGCAACGGGCCATTGCAGCTGCGCAGTTTTATGGCAAAGAT

TAA

本发明乳酸菌优选具有由下述式(28)所示的氨基酸序列(对应于序列表的序列号41)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的甘油-3-磷酸脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)。该甘油-3-磷酸脱氢酶为图1中所示的GPD(6)，可以高效地代谢由本发明脂肪酶的作用而产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持甘油-3-磷酸脱氢酶活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(28)M A E K I A V L G A G S W G S V L A N M L T E N G H D V T L

W S R N E E Q V K Q L N T E H T N P R Y M K D F V Y S T N L

T A T T D M K K A V K G A S V V L I V I P T K G L R E V A K

Q L N A I L T E L H Q K P L V I H A T K G L E Q N T Y K R P

S E M L S E D I S P E N R Q A I V V L S G P S H A E D V A I

K D M T A V T A A C E D L A S A K K A Q K L F S N S Y F R V

Y T N D D V I G A E F G A A L K N I I A I G A G A I Q G L G

Y H D N A R A A L I T R G L A E I R R L G V A F G A N P M T

F I G L S G V G D L V V T A T S K N S R N W R A G Y Q L G Q

G K K L Q D V I D N M G M V I E G V Y T T K A A Y E L S R K

R Q V Q M P I T E A L Y R V L Y E G E D I K T A I S Q L M D

R D L T S E N E

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该甘油-3-磷酸脱氢酶(28)的下述核苷酸序列(44)(对应于序列表的序列号42)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(44)所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有甘油-3-磷酸脱氢酶活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(44)所示的核苷酸序列杂交、且编码具有甘油-3-磷酸脱氢酶活性的蛋白质的核苷酸序列。

(44)ATGGCAGAAAAAATTGCTGTTTTAGGTGCTGGTTCGTGGGGCAGTGTTTTAGCAAACATG

CTTACAGAAAATGGCCACGATGTAACATTATGGTCTCGTAATGAGGAACAAGTTAAGCAA

TTAAATACTGAACATACAAATCCTCGCTATATGAAAGATTTTGTTTATTCTACTAACTTA

ACAGCAACAACGGACATGAAAAAAGCTGTTAAGGGTGCCAGTGTGGTCCTGATTGTAATT

CCAACAAAGGGTCTTCGTGAAGTTGCTAAGCAATTAAATGCAATTTTGACTGAATTACAT

CAAAAACCGCTAGTTATTCACGCAACGAAAGGCTTAGAACAAAATACTTATAAGCGGCCA

TCGGAAATGCTTAGCGAAGATATTTCTCCTGAAAACCGTCAGGCAATTGTTGTTTTATCA

GGTCCGAGTCATGCTGAAGATGTGGCGATTAAAGATATGACAGCTGTAACCGCAGCTTGT

GAGGACCTGGCCAGTGCTAAAAAGGCGCAGAAGTTATTTAGTAATTCTTATTTCCGTGTG

TACACTAATGACGATGTAATTGGTGCCGAATTTGGCGCAGCCTTAAAGAACATTATTGCA

ATTGGTGCTGGAGCTATTCAGGGACTTGGTTATCATGATAATGCTCGGGCAGCGTTAATT

ACTCGTGGACTTGCAGAAATTCGCCGATTGGGAGTTGCTTTTGGTGCCAACCCGATGACT

TTTATTGGTCTTTCTGGGGTTGGTGACCTTGTTGTTACTGCTACCAGTAAAAATTCTCGA

AATTGGCGTGCTGGCTATCAATTGGGGCAAGGAAAAAAGCTTCAAGATGTAATTGATAAT

ATGGGAATGGTTATCGAAGGTGTCTATACTACCAAAGCCGCTTATGAATTAAGTCGTAAA

CGACAAGTACAGATGCCAATTACCGAAGCTCTTTACCGTGTTTTGTATGAAGGCGAAGAT

ATTAAAACTGCAATTTCTCAATTAATGGACCGAGATCTTACTTCAGAAAACGAATAA

本发明乳酸菌优选具有由下述式(29)～(31)任一个所示的氨基酸序列(对应于序列表的序列号43、45、47)或该氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列所表示的磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase)。该磷酸丙糖异构酶为图1中所示的triosephosphate isomerase(15)，可以高效地代谢由本发明脂肪酶的作用而产生的甘油。这里所说的1个或多个氨基酸缺失、置换或增加的氨基酸序列是指与这些原本的序列等价的序列，依然保持磷酸丙糖异构酶活性的序列。作为这种氨基酸序列可以举出显示80％以上同源性的序列。

(29)M R K P F I A A N W K M H K N V Q E S V E F V D A I K G K L

P D P Q E V E V G I A A Q A F A L P S M V Q A A D D S G L K

I I A Q N A A A E Y S G A F T G E I S L R G L A D A G V S Y

V M L G H I E R R H L F H E D N E L V N R K V L A A L Q M G

V T P I I C T D E T M V Q K E V N G E I H Y V F Q Q L M S V

L R G V S L D Q I K N V V V S Y E P S W A V G Y G Q H A N P

V L A E E G C R Q I R R T I A D N Y T Y E I A D K I R I L Y

G G S V N P D N I G M I M N K P D V D G V L I G R A S L D V

D N F L R M V N Y L K N D Q E K

(30)M R K P F I I A N W K M N K N V H E S V A F V K A I K E K L

P A D K E I G I A A Q A V S L Y N M K K V A S S S N L Q I I

A Q N A S A E L E G P Y T G E I S M R S L A D A G V T Y V M

L G H L E R R R L F N E S N D S I N Q K V L A A L N A G I I

P I I C T D E E M V Q T E V N G Q I H Y V F R Q L K S V L K

G V P A N K L S Q I V I S Y E P S W A V G S T H Q A N P D I

A E E G C Q A I R Q S L V E M Y G N E I G E Q V R I L Y G G

S V N P E N I G Q I M S K P N V D G A L I G R A S L E I E S

F L Q M I N Y I E L A S K Q K L Q V I

(31)M R V P I I A G N W K M H K D V Q E A V S F I E K V K N Q L

P P A D Q L E T A I A A P T L C L V P M V K A A E E S P L K

I M A E N C Y Y K N E G A Y T G E T S P Y A L Y Q A G I H H

V I L G H S E R R T Y F N E T D E L I N K K V K A A L V N G

L C P I V C C D D T M R R R V A G K K V H W V V S R I L A D

L H G L T N D E I C H V T V A Y E P S W A I G T G E S A D P

E Q A A E G C Y L I R Q T I S D M Y G D E V A N N V R I L Y

G G S V T T S N I N A L M A K N D I D G V L V G A A S L N P

E T F L Q L V H H

另外，还可以通过基因工程学的方法将编码该磷酸丙糖异构酶(29)～(31)的下述核苷酸序列(45)～(47)(对应于序列表的序列号44、46、48)整合到其它乳酸菌等，由此获得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本发明还包括与下述(45)～(47)任一个所示的核苷酸序列的同源性为80％以上、且在严格条件下与编码具有磷酸丙糖异构酶活性的蛋白质的核苷酸序列和下述(45)～(47)任一个所示的核苷酸序列杂交、且编码具有磷酸丙糖异构酶活性的蛋白质的核苷酸序列。

(45)ATGCGCAAACCCTTTATTGCTGCTAATTGGAAGATGCATAAGAATGTCCAAGAATCGGTT

GAATTTGTGGATGCAATTAAAGGAAAGCTACCAGATCCGCAAGAAGTTGAAGTCGGAATT

GCAGCCCAAGCTTTTGCATTACCCAGTATGGTTCAAGCCGCTGATGATTCAGGATTAAAG

ATAATCGCGCAAAACGCGGCGGCTGAATATTCGGGAGCTTTCACTGGTGAAATTAGCTTA

CGAGGTTTAGCTGACGCCGGTGTTTCATATGTAATGTTAGGACATATTGAACGGCGCCAT

TTATTCCACGAGGATAATGAGTTGGTTAATCGGAAAGTGTTGGCAGCCCTTCAAATGGGA

GTTACCCCGATAATTTGTACGGATGAAACGATGGTCCAGAAAGAAGTTAATGGTGAAATT

CACTACGTTTTCCAGCAATTGATGAGCGTATTGAGGGGCGTTTCTCTTGATCAAATTAAA

AATGTAGTTGTTTCCTATGAACCAAGTTGGGCAGTTGGATATGGTCAGCATGCTAATCCA

GTTCTTGCTGAAGAAGGATGCCGTCAAATTCGGCGAACGATTGCTGATAACTACACTTAT

GAGATTGCTGATAAGATCAGGATTCTTTATGGGGGCAGTGTCAATCCAGATAATATCGGA

ATGATTATGAACAAGCCAGATGTAGATGGGGTATTAATCGGTCGGGCAAGTTTAGATGTT

GATAATTTTTTGCGAATGGTCAATTATTTAAAAAATGATCAAGAAAAATAA

(46)ATGCGCAAACCGTTTATTATTGCGAACTGGAAAATGAATAAAAACGTTCATGAATCTGTT

GCGTTTGTTAAAGCAATTAAAGAAAAGCTCCCGGCAGATAAAGAAATTGGGATCGCCGCG

CAAGCAGTTTCGCTATATAACATGAAAAAAGTGGCGAGCTCTTCCAACTTACAAATTATT

GCTCAAAATGCATCTGCTGAGTTAGAGGGACCATATACTGGAGAAATTAGCATGCGAAGT

TTAGCAGATGCGGGCGTGACATACGTGATGCTAGGCCATTTAGAGCGCCGACGCCTTTTT

AACGAGAGTAATGATTCAATTAATCAAAAAGTTTTAGCAGCCCTCAATGCTGGTATTATT

CCAATCATTTGTACGGATGAAGAGATGGTCCAAACAGAAGTTAACGGACAAATTCATTAT

GTATTTCGCCAACTAAAAAGCGTCCTTAAAGGGGTACCAGCTAATAAACTATCACAGATT

GTTATTTCGTATGAACCAAGTTGGGCCGTTGGGAGCACGCATCAAGCAAATCCAGACATT

GCGGAAGAGGGATGTCAGGCAATTCGTCAAAGCCTGGTTGAAATGTATGGTAATGAGATT

GGCGAGCAAGTCCGAATACTCTATGGTGGCAGCGTTAATCCCGAGAACATTGGTCAAATT

ATGAGTAAACCAAATGTTGATGGGGCGCTAATCGGTCGCGCAAGTCTCGAGATTGAAAGT

TTCTTACAAATGATTAATTATATCGAATTAGCGAGCAAGCAGAAGTTACAGGTAATTTAG

(47)ATGAGAGTACCGATTATTGCTGGTAATTGGAAAATGCATAAGGATGTACAAGAAGCTGTC

TCTTTTATCGAAAAAGTAAAAAATCAGCTTCCGCCTGCCGACCAACTTGAAACAGCAATT

GCTGCTCCTACTCTTTGTTTAGTACCAATGGTTAAAGCAGCTGAAGAATCCCCGTTAAAA

ATAATGGCAGAAAACTGCTACTATAAGAATGAGGGAGCTTATACTGGTGAAACAAGTCCA

TATGCTTTATACCAAGCAGGAATCCATCATGTGATTTTAGGCCATTCTGAACGCCGAACT

TACTTTAATGAAACTGATGAATTAATTAATAAAAAAGTGAAGGCAGCATTAGTAAATGGG

TTATGTCCGATTGTTTGTTGTGATGATACTATGCGTCGACGAGTTGCTGGAAAGAAAGTT

CATTGGGTGGTGAGCCGAATTCTCGCTGACCTTCATGGATTGACCAATGACGAAATTTGT

CATGTTACGGTTGCTTATGAACCAAGTTGGGCGATTGGAACAGGCGAGAGTGCTGATCCA

GAACAAGCGGCGGAAGGTTGTTACCTTATTCGGCAAACGATTAGTGATATGTATGGCGAT

GAAGTTGCAAATAACGTTCGAATTCTCTATGGCGGAAGTGTGACAACTTCTAATATCAAT

GCACTAATGGCAAAAAATGATATTGATGGTGTTTTAGTCGGAGCGGCGAGCTTAAATCCA

GAAACATTTTTACAATTAGTTCACCATTAG

以上说明的本发明乳酸菌可以根据常规方法对属于罗伊氏乳杆菌的微生物进行基因分析而获得。例如，通过对多个属于罗伊氏乳杆菌的微生物，研究是否存在与编码脂肪酶(1)～(3)的下述基因(13)～(15)(分别对应于序列表的序列号2、4、6)同源性高的核苷酸序列，从而可以获得目标的本发明乳酸菌。

(13)ATGGTGAAATTGATGACAATACACGAATTAGCAAATAACCCAACGTTAAGCGGCCAAGTA

CGCTTGATTGAAAATATTGTTTATGGTGCGATGGATGGTGAGGCATTACATATGTCGATC

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ATGGGAAAGTGGTTCCCGCTATTTCTTGAGTGGTTAACTGAACTGAATTTAATTTAG

本发明中，所谓的“严格条件”可以列举如下条件：例如在含有6×SSC(1×SSC的组成：0.15M NaCl、0.015M的柠檬酸钠、pH7.0)、0.5％SDS、5×Denhardt、100μg/mL的热变性鲑鱼精子DNA的溶液中，与探针一起在50～65℃的温度下保存一晚使其杂交。

进而，具有运载蛋白基因(4)的本发明乳酸菌，具有编码甘油分解酶亚基的基因(9)～(11)、编码甘油分解酶的基因(32)～(38)、编码醛脱氢酶的基因(39)～(41)、编码甘油酸激酶的基因(42)、编码甘油激酶的基因(43)、编码甘油-3-磷酸脱氢酶的基因(44)、编码磷酸丙糖异构酶的基因(45)～(47)或编码肠道黏附性蛋白质的基因(12)的本发明乳酸菌，也可以与上述同样地获得。

作为上述本发明乳酸菌的代表性菌，可以举出罗伊氏乳杆菌JCM1112T，其为理化学研究所的标准株。

本发明的抗肥胖剂可以通过将上述本发明乳酸菌制成可以口服且以活的状态到达肠道的活菌剂而调制。对于其剂型并无特别限定，例如可以为粉末剂、颗粒、片剂、胶囊剂等固体，凝胶、糊剂等半固体状，悬浮液，糖浆等液体状。这些各剂型可以通过制药领域中公知的方法制得。

配合在上述抗肥胖剂中的本发明乳酸菌可以应用公知的乳酸菌培养方法进行培养。作为该培养方法，可以根据常规方法将本发明乳酸菌进行液体培养，直接利用所得的培养物，或者通过离心分离等方法从该培养物中收集菌体后使用，还可以将培养物冷冻干燥制成粉末状后使用。

作为固体状的本发明抗肥胖剂的通常的制造方法，可以举出将本发明乳酸菌与水、淀粉、微晶纤维素、面粉、砂糖等载体一起配合，制成所需形态的方法。上述载体也是公知的，可以根据使用形态进行适当选择后使用。更具体地说，可以将通过常规方法培养获得的本发明乳酸菌的菌体制成冷冻干燥粉末，将其与砂糖混合，从而调制粉末剂。另外，还可以将本发明乳酸菌的菌体与适当的片剂用载体混合，根据常规方法进行压片，获得片剂。而且，还可以将本发明乳酸菌的湿菌体悬浮在糖浆中制成糖浆剂。调制本发明的抗肥胖剂时，还可以根据需要含有其它成分，例如其它微生物或有效成分、或者甜味料、香料、着色剂等。

如此获得的抗肥胖剂的给予量可以考虑对象的身体状况、例如健康状态、体重、年龄、病史、所使用的其它成分等适当地决定，一般来说，作为本发明乳酸菌的菌数，一个成人大致为10⁸～10⁹CFU/天左右。

使用本发明乳酸菌调制抗肥胖饮食品时，可以利用目前公知的乳酸菌的培养方法制成可以口服摄取的发酵食品。具体地说，可以制成酸奶等发酵乳、乳酸菌饮料、发酵香肠等食品，这些食品的制造可以通过使部分或全部所用乳酸菌采用本发明乳酸菌来进行。另外，还可以形成较多地含有本发明乳酸菌的形态，制成健康食品和功能性食品。在调制该抗肥胖食品时，当然并非仅含有本发明乳酸菌，还可以含有其它的乳酸菌，另外，还可以添加食品添加剂或调味品等。

本发明乳酸菌如后述实施例所示，具有显著的体重增加抑制效果(瘦身效果)，认为其理由如下所示。

即，如图1所示，本发明乳酸菌通过3个脂肪酶(脂肪酶(1)～(3))的作用，将消化道内的脂肪成分分解为甘油和脂肪酸。然后，所分解的甘油被本发明乳酸菌所具有的运载蛋白(PduF；(4)的核苷酸编码)摄入到菌体内，进而被菌体内的甘油分解酶基因(PduCDE；由亚基(5)～(7)构成)代谢，产生罗伊氏素或转变为本菌自身的能量源。

另一方面，脂肪酸作为本菌的菌体成分被利用，而不会被吸收入生物体内。而且，(8)的肽具有本发明乳酸菌固定在人或哺乳动物肠道的功能，使本发明乳酸菌可以稳定地在肠道内存在一定期间。

如上所述，本发明乳酸菌由于稳定地存在于肠道内、积极地分解脂肪、且利用或进一步分解其代谢物，因此可以抑制脂质从肠道被吸收入体内、即便摄取通常的饮食也可以预防肥胖、维持及提高瘦身效果。

另外，本发明的一个方式包括本发明乳酸菌用于预防或治疗肥胖症的应用，还包括本发明乳酸菌用于制造抗肥胖剂的应用。

进而，本发明的又一个方式包括以向肥胖症患者给予本发明乳酸菌为特征的肥胖症治疗方法，还包括以给予本发明抗肥胖剂为特征的肥胖症治疗方法。

实施例

以下举出实施例，更加详细地说明本发明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1

罗伊氏乳杆菌JCM1112T的抗肥胖效果试验：

通过下述材料和方法研究罗伊氏乳杆菌JCM1112T的抗肥胖效果。

使用材料和试验方法：

(1)使用的实验动物

使用体重约180～200g的SPF级Wistar系大鼠(8周龄-雄；日本SLC株式会社)，从放入实验室开始设置7天的驯化期，开始实验。饲养环境设定为温度22±1℃、湿度55±5％、照明时间12小时(8点～20点)，大鼠为1只/笼，利用给水瓶使其自由摄取灭菌蒸馏水、使用给饵器使其自由摄取大鼠用放射线灭菌固体样品*(CE-2，CLEA Japan Inc.)。所使用的饲养器具均使用通过高压蒸汽灭菌器灭菌的器具。

^*饲养繁殖用(粗脂肪4.6％)

(2)待测菌液的调制

作为待测菌，使用罗伊氏乳杆菌JCM1112T(理化学研究所的标准菌、从该所购买)和鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)ATCC53103(GG株)。这些待测菌接种于MRS液体培养基(Oxid)，在37℃下培养一晚，制成预培养液。将该预培养液添加到新鲜的MRS液体培养基中达到1％量，在37℃下培养18小时，将其作为待测菌液。

(3)待测菌液的给予

将上述实验动物分为各待测菌给予组和对照组(1组各5只)，对待测菌给予组，将上述待测菌液通过口服给予。待测菌的给予使用探针强制进行。给予菌液在使用时调制，给予菌量为每只大鼠10⁹CFU。另外，对对照组给予相同容量的PBS。

(4)体重测定和一般症状的观察

使用体重计每天测定实验动物的体重。每天均观察一般症状。对每个个体记录症状，用表现个体数来表示观察到显著变化的症状项目。

(5)结果

图2示意出分别给予上述乳杆菌属细菌的大鼠组和未给予的大鼠组的体重随时间增加的状况。由该图可知，与未给予组相比，罗伊氏乳杆菌JCM1112T给予组显著抑制了体重的增加，其程度大于鼠李糖乳杆菌ATCC53103给予组。

另外，实验动物的健康状态良好是由良好的体重增加的进展来显示的同时，由各组大鼠的诊察来确认的。

实施例2

罗伊氏乳杆菌JCM1112T的基因组解析：

使用下述药品，通过以下方法从罗伊氏乳杆菌JCM1112T中获取DNA，进行基因组解析。

DNA获取方法：

(药品)

核裂解液(Wizard基因组DNA纯化试剂盒；Promega公司生产)

生理盐水

50mM EDTA(pH7.0)

50mg/ml溶菌酶溶液(在使用当日，用TE缓冲液、0.25MTris-HCl(pH8.0)或10mM Tris-HCl(pH8.0)/10mMEDTA/0.5％SDS溶解规定量的溶菌酶进行调制)

2mg/ml EDTA

苯酚·氯仿·异戊醇(25∶24∶1)混合液(以下简称为“PCI”)

氯仿·异戊醇(24∶1)混合液(以下简称为“CIA”)

99％乙醇

70％乙醇

TE缓冲液

(方法)

1.在静置条件、37℃下培养罗伊氏乳杆菌JCM1112T 24小时，在3500rpm下离心分离所得培养液(50ml)15分钟后，利用生理盐水悬浮。

2.在3500rpm下离心分离上述1所得的悬浮液15分钟，舍去上清，利用5ml 50mM EDTA悬浮。

3.在上述2所得的悬浮液中加入200μl 50mg/ml溶菌酶溶液，在37℃下培养60分钟。(此时使用空气培养箱时，培养时间为2～3小时)

4.培养后，在3500rpm下离心分离15分钟，舍去上清。

5.在4所得的沉淀物中加入核裂解液5ml，在80℃下培养10分钟。

6.加入1μl 2mg/ml RNase A，在37℃下培养45分钟。

7.加入10ml PCI并混合，在3500rpm下离心分离15分钟。

8.将上清移至新的试管中，再加入10ml PCI并混合。

9.共增加3次同样的操作。(直至变得不能识别蛋白质层)

10.加入10ml CIA，缓缓混合后，在3500rpm下离心分离15分钟。(除去苯酚)

11.将上清移至新的试管中，进行乙醇沉淀。

12.将11所得的沉淀物溶解在1ml TE缓冲液中，获得乳酸菌DNA。

基因组解析方法：

对于如上获得的DNA进行结构基因预测和解析。联合使用GENOMEGAMBLER(Sakiyama，T.，Takami，H.，Ogasawara，N.，Kuhara.S.，Kozuki，T.，Doga，K.，Ohyama，A.，Horikoshi，K.，Anauromated system for genome analysis to support microbial whole-genome shotgun sequencing.，Biosci.Biotechnol.Bichem.，64：670-673.2000.)、GLIMMER 2.0(Salzberg，SL.，Delcher，AL.，Kasif，S.，and White，O.，Microbial gene identification usinginterpolated Markov models.，Nucleic.Acid.Res.，26：544-548.1998.)和BLAST program blastp(Altschul，SF.Gish，W.，Miller，W.，Myers，EW.，and Lipman，DJ.，Basic local alignment searchtool.，J.Mol.Biol.，215：403-410.1990)的结果来进行该结构基因预测等。

另外，域结构的解析使用INTERPRO(Mulder，NJ.，Apweiler，R.，Attwood，TK.，Bairoch，A.，Barrell，D.，Bateman，A.，Binns，D.，Biswas，M.，Bradley，P.，Bork，P.，Bucher，P.，Copley，PR.，Courcelle，E.，Das，U.，Durbin，R.，Falquet，L.，Fleischmann，W.，Griffiths-Johns，S.，Haft，D.，Harte，N.，Hulo，N.，Kahn，D.，Silventoinen，V.，Orchard，SE.，Pagni，M.，Peyruc，D，，Ponting，CP.，Selengut，JD.，Servant，F.，Sigrist，CJ.，Vaughan，R.，andZdobnov，EM.，The  InterPro  Database，2003brings  increasedcoverage and new features.，Nucleic.Acids.Res.，31：315-318.2003，；http://WWW.ebj.ac.uk/interpro)进行；分子系统树的制作中使用了CLUSTALW(Thompson，JD.，Higgins，DG.，and Gibson，TJ.，CLUSTAL W：improving the sensitivity of progressivemultiple sequence alignment through sequence weighting，position-specific gap penalties and weight matrix choice.，Nucleic.Acids.Res.，22：4673-4680.1994.；http://clustalw.Genome.ad.jp/)。

进而，所使用的DNA和氨基酸序列由National Center ofBiological Information(NCBI，http://www.ncibi.nlm.nih.gov)和KEGG database(Ogata，H.，Goto，S.，Sato，K.，Fujibuchi，W.，Bono，H.，and Kanehisa，M.，KEGG：Kyoto Encuclopedia ofGenes and Genomes.，Nucleic，Acids.Res.，27：29-34.，1999.；http://WWW.genome.ad.jp/kegg/kegg2.html)获得，乳杆菌属细菌的序列草图由DOE JOINT GENOME INSTITUTE (JGI；http://WWW.jgi.doe.gov/JGI_microbial/html/index.html)获得。

根据以上信息可知，(13)～(15)所示的基因分别为编码脂肪酶的基因、(4)所示的基因为编码运载蛋白的基因、(9)、(10)和(11)所示的基因为编码甘油分解酶的基因、(12)所示的基因为黏附性基因。另外可知，(32)～(38)所示的基因为编码甘油分解酶的基因、(39)～(41)所示的基因为编码醛脱氢酶的基因、基因(42)所示的基因为编码甘油酸激酶的基因、(43)所示的基因为编码甘油激酶的基因、(44)所示的基因为编码甘油-3-磷酸脱氢酶的基因、(45)～(47)所示基因为编码磷酸丙糖异构酶的基因。

实施例3

甘油分解基因的扩增：

将实施例2中精制的DNA作为模板，将以下核苷酸序列作为引物，使用下述反应液进行PCR。PCR条件也示于下。

(使用的引物)

pduCDE(F)：

CACCATGAAACGTCAAAAACGATTT

pduCDE(R)：

AAAAGCTTAGTTATCGCCCTTTAGC

(PCR反应液)

模板DNA：1μl

KOD-plus：1μl

10×KOD-plus缓冲液：5μl

dNTP(各2mM)：5μl

引物(20mm)：各1μl

MgSO4(25mm)：2μl

去离子水(D.W.)：34μl

(PCR条件)

(1)在94℃下保持3分钟。

(2)在94℃下保持15秒钟。

(3)在56℃(Tm)下保持30秒钟。

(4)在68℃下保持3分30秒钟。

(5)将(2)～(4)进行30个循环。

(6)在4℃下保存

实施例4

罗伊氏乳杆菌来源的脂肪酶基因和黏附性基因的扩增：

除了将引物换成下述引物之外，与实施例3同样地进行PCR，扩增脂肪酶基因和黏附性基因。

(使用的引物)

脂肪酶(1)

5’-ATGGTGAAATTGATGACAAT

5’-TTATTTAAATTGATCGCCAA

脂肪酶(2)

5’-TTGATTTATGTTTTAAAAGA

5’-CTATGACCGAGTTAAATACT

脂肪酶(3)

5’ATGGAAATTAAAAGTGTTAA

5’-CTAAATTAAATTCAGTTCAG

黏附性基因

5’-ATGTTCGGTCACGATGGCCG

5’-TCAAATTTCAGAAGGATCAT

产业实用性

由使用了作为本发明乳酸菌代表的罗伊氏乳杆菌JCM1112T的上述实施例的结果可知，通过该微生物的给予，可以抑制体重的增加，而不损害实验动物的健康、尤其是对营养摄取没有限制。

因此，仅摄取利用了本发明乳酸菌的抗肥胖剂和抗肥胖饮食品，不需要特殊治疗、处置即可预防肥胖、获得瘦身效果。

通过利用公知的方法将编码由本发明乳酸菌发现的甘油分解酶亚基的基因和编码肠道黏附性蛋白质的基因整合在其它乳酸菌中，可以获得甘油分解性高的乳酸菌和在肠道内的停留时间长的乳酸菌，可以有效地用于其它有用的乳酸菌改性中。

Claims (2)

1.属于鼠李糖乳杆菌的微生物用于生产用于预防或治疗肥胖症的抗肥胖剂的用途，其中，所述抗肥胖剂以属于鼠李糖乳杆菌的微生物为有效成分，所述属于鼠李糖乳杆菌的微生物为鼠李糖乳杆菌ATCC53103。

2.属于鼠李糖乳杆菌的微生物用于制备用于预防或治疗肥胖症的抗肥胖饮食品的用途，其中，所述抗肥胖饮食品以属于鼠李糖乳杆菌的微生物为有效成分，所述属于鼠李糖乳杆菌的微生物为鼠李糖乳杆菌ATCC53103。

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