FI121912B - Probioottien uusi käyttö - Google Patents

Probioottien uusi käyttö Download PDF

Info

Publication number
FI121912B
FI121912B FI20085102A FI20085102A FI121912B FI 121912 B FI121912 B FI 121912B FI 20085102 A FI20085102 A FI 20085102A FI 20085102 A FI20085102 A FI 20085102A FI 121912 B FI121912 B FI 121912B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
probiotic
lipid
use according
ibs
product
Prior art date
Application number
FI20085102A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI20085102A (fi
FI20085102A0 (fi
Inventor
Riitta Korpela
Kajsa Kajander
Original Assignee
Valio Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Valio Oy filed Critical Valio Oy
Priority to FI20085102A priority Critical patent/FI121912B/fi
Publication of FI20085102A0 publication Critical patent/FI20085102A0/fi
Priority to EP09707320.9A priority patent/EP2252306B1/en
Priority to US12/866,084 priority patent/US8604005B2/en
Priority to PCT/FI2009/050090 priority patent/WO2009098355A1/en
Priority to RU2010136972/15A priority patent/RU2497536C2/ru
Publication of FI20085102A publication Critical patent/FI20085102A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI121912B publication Critical patent/FI121912B/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/20—Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
    • A23L33/21—Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/733—Fructosans, e.g. inulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/175—Rhamnosus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Probioottien uusi käyttö
Keksinnön ala
Esillä oleva keksintö koskee metabolomiikan alaa. Spesifisemmin se koskee epänormaalin metabolomisen profiilin tunnistamista ja probioottien 5 käyttöä epänormaalin profiilin normalisoimiseksi.
Keksinnön tausta
Metabolomiikka on tiede, joka systemaattisesti tutkii ja integroi dynaamista vuorovaikutusta monien pienimolekyylisten biologisten merkkiaineiden välillä, jotka merkkiaineet ovat ainutlaatuisesti tunnusomaisia monimutkai-10 sille biologisille toiminnoille terveydessä ja sairaudessa. Metabolomiikka antaa siten käyttöön mielenkiintoisen alustan tutkia monimutkaisten fysiologisten oireyhtymien patofysiologiaa molekyylitasolla, mikä puolestaan voi johtaa läpimurtoihin aineenvaihduntaan perustuvien häiriöiden ja tautien ymmärtämisessä ja hoidossa.
15 Viime aikoina metabolomiikkaa on käytetty tutkittaessa tulehduksel listen suolistosairauksien (IBD) (Marchesi, J.R., Holmes, E., Khan, F., Koch-har, S., Scanlan, P., Shahahan, F., Wilson, I.D., Wang, Y., Rapid and nonin-vasive metabonomic characterization of inflammatory bowel disease, J Prote-ome Res, 2007, 6: 546-51), liikalihavuuden ja syövän patofysiologiaa. Mar-20 chesi et ai. karakterisoivat Crohnin tautia (CD) ja haavaista paksusuolentuleh-dusta (UC) sairastavien potilaiden ulostenäytteet alentuneilla pitoisuuksilla ly-hytketjuisia rasvahappoja, kuten butyraattia ja asetaattia, metyyliamiinia ja tri-metyyliamiinia, mikä viittaa tulehduksesta johtuviin ilmeisiin muutoksiin suolen mikrobistossa.
25 Metabolomiikkaa, joka rajoittuu lipidien tutkimukseen, kutsutaan li- ^ pidomiikaksi, ja sitä voidaan käyttää lipideihin perustuvien tautien takana olevi- 5 en mekanismien tunnistamiseen ja selvittämiseen. Lipidomiikkaa on käytetty ^ mm. geneettisesti liikalihavien, insuliiniresistenttien hiirten rasvamaksan karak- x terisoinnissa (Yetukuri, L., Katajamaa, M., Medina-Gomez, G., Seppänen-
CC
30 Laakso, T., Vidal-Puig, A., Oresic, M., Bioinformatics strategies for lipidomics o analysis: characterization of obesity related hepatic steatosis, BMC Systems £ Biol., 2007, 1: 12).
o On olemassa yhä enemmän todisteita, jotka osoittavat, että useat lipidit, kuten eikosanoidit, diasyyliglyserolit, lysofosfatidihapot ja sfingolipidit, 35 erityisesti keramidit, kykenevät lisäämään kivun aistimista. Monet näistä lipi- 2 deistä ovat toisiolähettejä signaalireiteissä, jotka liittyvät tuntohermosolujen herkkyyden lisäämiseen, kun taas toiset ovat mahdollisia tulehduksen välittäjiä, jotka aktivoivat joko pintareseptoreja tai ionikanavia näissä hermosoluissa. Nämä ovat mahdollisia kohteita lääkeaineille tulehduksen ja kroonisten kiputi-5 lojen hoitamiseksi [Park, K.A., Vasko, M.R. Lipid mediators of sensitivity in sensory neurons, Trends in Pharmacological Science, 2005, 26(11): 571-577], Malan et ai. ovat esittäneet katsauksen lipidilähettien osuudesta spesifisten fysiologisten toimintojen säätelyssä, vahingollisen aistinvaraisen informaation (kivun) välittämisessä hermojärjestelmässä. He havaitsivat, että li-10 pidimolekyyleillä on tärkeät roolit kipuherkkyyden muuntamisessa. Kuuden lipi-dimolekyylityypin (prostanoidien, fosfatidyyli-inositolibifosfaatin, keramidin, ara-kidonihapon lipoksigenaasimetaboliittien, rasva-asyylidopamiinien ja asyylieta-noliamidien) on osoitettu muuntavan järjestelmiä, jotka ovat tärkeitä kipuvas-teiden säätelyssä. Prostaglandiini on tärkeä prostanoidi kivussa, mitä valaisee 15 se tosiseikka, että ei-steroidiset tulehduskipulääkkeet, jotka estävät prosta-glandiinien muodostumista, ovat laajimmin kivun lievitykseen käytettyjä lääkeaineita. On havaittu, että glutationi, neutraalin sfingomyelinaasin inhibiittori, joka vapauttaa keramidia neutraaleista sfingomyeliineistä, estää keramidin tai C2-keramidin vaikutukset. Keramidin vapautumista välittävää reseptoria vas-20 taan muodostetun estävän vasta-aineen on havaittu estävän hermon kasvutekijän (NGF) vaikutuksia solujen ärtyvyyteen ja delayed-rectifier-kaliumkanaviin (Malan, T.P., Porreca, F. Lipid mediators regulating pain sensitivity, Prostaglandins & other Lipid Mediators, 2005, 77: 123-130).
Siten on yleisesti tunnustettua, että metaboliiteilla, kuten lipidimeta-25 boliiteilla, voi olla vaikutusta lukuisiin tauteihin ja häiriöihin mukaan lukien kivun aistiminen. Kuitenkin tautien, joihin liittyy epänormaali metabolinen profiili, ^ identifiointi ja sellaisen taudin patofysiologian ymmärtäminen on riittämätöntä.
^ Vielä vähemmän tiedetään mahdollisuuksista vaikuttaa epänormaaliin metabo- o liseen profiiliin taudin ennalta ehkäisemiseksi tai hoitamiseksi. Esillä oleva kek- cö 30 sintö auttaa näiden asioiden ratkaisussa.
g Probioottiset mikro-organismit ovat mikro-organismeja, joilla tiede- Q_ tään olevan terveyttä edistävä vaikutus. Monet probiooteista ovat bakteereita, ? erityisesti maitohappobakteereita. Yan et ai. antavat käyttöön molekylaarisen
LO
§ perustan probioottien terapeuttiselle käytölle tulehdusvälitteisissä suolistosai- ° 35 raukeissa. He puhdistivat Lactobacillus rhamnosus GG -kannasta (LGG) kaksi uutta proteiinia, p75 ja p40, joiden osoitettiin edistävän suolen epiteelin ho- 3 meostaasia spesifisten signaalireittien kautta. Nämä havainnot viittaavat siihen, että probiootit voivat olla käyttökelpoisia sytokiinivälitteisissä ruuansulatuskanavan taudeissa, koska ne estivät sytokiinin indusoimaa epiteelisolujen apoptoosia ja vähensivät merkittävästi TNF-indusoitua paksusuolen epiteeli-5 vauriota. [Yan, F., Cao, H., Cover, T.L., Whitehead, R., Washington, M.K., Polk, D.B., Soluble proteins produced by probiotic bacteria regulate intestinal epithelial cell survival and growth. Gastroenterology, 2007, 132(2): 562-75].
Lam et ai. osoittivat, että Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) suojaa limakalvosoluja apoptoosilta vatsassa. He havaitsivat, että esikäsittely LGG:llä 10 lisäsi merkittävästi basaalisen limakalvon prostaglandiini E2 (PGE2) -pitoisuutta, ja ehdottivat LGG:n suojaavaa vaikutusta mahan limakalvovaurioihin PGE2:n lisääntymisestä johtuen, mikä voisi stimuloida liman eritystä ja lisätä transmukosaalista resistenssiä mahan limakalvossa [Lam, E.K., Tai, E.K., Koo, M.W., Wong, H.P., Wu, W.K., Yu, L, So, W.H., Woo, P.C., Cho, C.H., Enhan-15 cement of gastric mucosal integrity by Lactobacillus rhamnosus GG, Life Sci, 2007, 80(23): 2128-36].
Lisäksi Schultz et ai. osoittivat suun kautta annetun L. rhamnosus GG:n vaikutuksen sytokiinien eritysprofiiliin terveillä vapaaehtoisilla. He osoittivat, että suppressiivisten sytokiinien (IL-10, IL-4) kohonnut eritys ja pro-20 inflammatoristen sytokiinien (TNF-α, IL-6, IFN-γ) vähentynyt eritys siirtää syto-kiiniprofiilia kohti lisääntynyttä anti-inflammatorista vastetta (Schultz, M., Linde, H.J., Lehn, N., Zimmermann, K., Grossmann, J., Falk, W., Schölmerich, J., Immunomodulatory consequences of oral administration of Lactobacillus rhamnosus strain GG in healthy volunteers, J Dairy Res, 2003, 70: 165-173).
25 Vielä muiden probioottisten bakteerien, kuten laktobasillien, bifido- bakteerien ja laktokokkien, on ehdotettu lievittävän ärtyvän suolen oireyhty-^ män, IBS, oireita (kokonaisoiresumma, ilmavaivat, turvotus). Camillerin ja
O
^ Gormanin katsausartikkelissa tehdään se johtopäätös, että vaikuttaa esiintyvän o vähintään yksi IBS-alaryhmä, jossa on lisääntynyt suolen permeabiliteetti, ^ 30 vaikka permeabiliteettihäiriöiden roolia IBS:ssä ei ole täysin selvitetty. Suolen g permeabiliteetin muuntajien tutkimukset sisältävät probiootit, proteinaasiakti- voidun reseptorin (PAR), IFN-y:n ja glutamiinin, mutta tuloksia pidetään liian
CM
° alustavina, jotta mitään johtopäätöksiä voitaisiin vetää. Lisäksi tulehdussolujen
LO
g kohonnut lukumäärä limakalvobiopsioissa ja epänormaali interleukiini (IL)- ° 35 10/IL-12-suhde viittaavat lievä/matala-asteisen tulehduksen esiintymiseen joil- 4 lakin IBS-potilailla (Camilleri, M,, Gorman H., Intestinal permeability and irritable bowel syndrome, Neurogastroenterol Motil, 2007, 19: 545-52).
Edelleen on vähän tietoa varsinaisista mekanismeista, jotka säätelevät probioottibakteerien edullisia vaikutuksia koko organismin isäntäsoluta-5 solia. Verdu et ai.’n katsausartikkelissa mainitaan joukko mahdollisia mekanismeja. Probioottien on havaittu vähentävän tulehduksellisen ripulin kestoa lapsilla, muuntavan tulehdusvastetta infektiolle vähentämällä epänormaalia systeemistä interleukiini 10:n suhdetta interleukiini 12:een IBS-potilaissa, stabiloivan suolen estefunktiota lapsilla, joilla on atooppinen dermatiitti, parantavan 10 lihasten toimintaa infektion jälkeisessä IBS:ssä, vähentävän epänormaalia käymistä suolessa ja mahdollisesti vaikuttavan neurotransmissioon ja muuntavan viskeraalista aistimusta IBS:ssä. Ristiriitaisia tuloksia on saatu mitä tulee tiettyjen probioottien kipua vähentävään vaikutukseen. (Verdu, E.F., Collins, S.M., Irritable bowel syndrome and probiotics: from rationale to clinical use, 15 Current Opinion in Gastroenterology, 2005, 21: 697-701).
Kajander et ai. havaitsivat probioottien lieventävän vaikutuksen IBS:n oireisiin ja ehdottavat, että probioottien indusoimat taustalla olevat mekanismit voivat käsittää esimerkiksi anti-inflammatorisia vaikutuksia, mikrobis-ton tasapainottamisen tai motiliteettiin liittyvät vaikutukset [Kajander, K., Ha-20 takka, K., Poussa, T., Fräkkilä, M., Korpela, R., A probiotic mixture alleviates symptoms in irritable bowel syndrome patients: a controlled 6-month intervention, Aliment Pharmacol Ther., 2005, 22: 387-394; Kajander, K., Korpela, R., Clinical studies on alleviating the symptoms of irritable bowel syndrome with a probiotic combination, Asia Pac J Clin Nutr, 2006, 15(4): 576-5809], 25 Julkaisussa WO 2007/36230 kuvataan käyttövalmis tuote, joka si sältää spesifiset määrät fermentoituja viljaperäisiä, ei-patogeenisiä mikro-^7 organismeja, ja mahdollisesti fosfolipidejä, edullisesti fosfatidyylikoliinia, tuleh-
O
^ duksellisten ruuansulatuskanavan tautien, esim. tulehduksellisen suolistosai- o rauden (IBD) ja tulehduksellisen suolistosyndrooman (IBS), hoitamiseksi. Sel- m 30 laisen koostumuksen sanotaan parantavan huomattavasti IBD:n, IBS:n ja mui- g den ruuansulatuskanavan häiriöiden probioottihoitoja.
CL
Esillä oleva keksintö antaa nyt käyttöön uuden indikaation probioo- ° teille.
m 00 o o
(M
5
Keksinnön lyhyt kuvaus
Esillä olevan keksinnön yksi tarkoitus oli tutkia metabolisia profiileja ja niiden yhteyttä häiriöihin ja tauteihin. Toinen keksinnön tarkoitus oli löytää aineita, jotka parantavat metabolista profiilia, erityisesti lipidiprofiilia.
5 Keksinnön tarkoitukset saavutettiin itsenäisissä patenttivaatimuksis sa esitetyillä menetelmällä ja käytöllä. Keksinnön edulliset suoritusmuodot kuvataan epäitsenäisissä patenttivaatimuksissa.
Keksintö perustuu yllättävään havaintoon, että probiootit kykenivät parantamaan metabolista profiilia.
10 Siten keksintö antaa käyttöön probiootin käytön valmistettaessa koostumusta metabolisen profiilin parantamiseksi kohteessa.
Kuvataan myös menetelmä metabolisen profiilin parantamiseksi sitä tarvitsevassa kohteessa, jossa menetelmässä probioottia annetaan mainitulle kohteelle määrä, joka on riittävä aikaansaamaan haluttu vaikutus.
15 Muut esillä olevan keksinnön tarkoitukset, yksityiskohdat ja edut käyvät ilmi seuraavista piirustuksista, yksityiskohtaisesta kuvauksesta ja esimerkistä.
Piirustusten lyhyt kuvaus
Kuviossa 1 esitetään valittujen lipidien pitoisuudet (keskiarvo ± SD) 20 IBS-potilaista (n=15) ja terveistä kontrolleista (n=9) otetuissa limakalvobiopsi-oissa mitattuna UPLC-MS:llä. (A):ssa esitetään lysofosfolipidit; LysoPE = lyso-fosfatidyylietanoliamiini; LysoPC = lysofosfatidyylikoliini; ja (B):ssä esitetään diasyyliglyseroli (DG) ja keramidit (Cer). Potilaat ja kontrollit eroavat merkittävästi toisistaan kaikkien esitettyjen lysofosfolipidien samoin kuin diasyyliglyse-25 rolin ja keramidien suhteen. ** osoittaa arvoa p < 0,01 ja *** arvoa p < 0,001, ^ jolloin P-arvot perustuvat Wilcoxonin testiin (Wilcoxon rank sum test).
^ Kuviossa 2 esitetään Lactobacillus rhamnosus GG:n (LGG) ja Lac- o tobacillus rhamnosus LC705:n (LC705) vaikutus lysofosfatidyylikoIiiniin (Ly- cö soPC) in vitro. Stimulaatio hetkellä 6 h esitetään (A):ssa ja hetkellä 24 h £ 30 (B):ssä. Suhde <1 osoittaa, että bakteerikanta kykenee vähentämään kyseisen
CL
lipidin pitoisuutta.
° Kuviossa 3 esitetään Lactobacillus rhamnosus GG:n (LGG) ja LaC- in § tobacillus rhamnosus LC705:n (LC705) vaikutus keramidiin (Cer) in vitro; sti- ° mulaatio hetkellä 6 h. Suhde <1 osoittaa, että bakteerikanta kykenee vähen- 35 tämään kyseisen lipidin pitoisuutta.
6
Kuviossa 4 esitetään vesiliukoisten metaboliittien profiilien osittainen pienimmän neliösumman erotteluanalyysi (PLS/DA) IBS-potilailla (n=15; □) ja terveillä kontrolleilla (n=9; 0). Käytettiin kahta latenttia muuttujaa (LV:t) (Q2=61 %).
5 Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Analyyttisten laitteiden viimeaikainen teknologinen kehitys yhdistettynä nopeaan edistymiseen bioinformatiikassa on avannut uusia mahdollisuuksia nopeasti ja samanaikaisesti mitata ja mallittaa valtavia lukumääriä moleky-laarisia metaboliitteja biologisista näytteistä. Tätä metabolomista lähestymista-10 pa pidetään tehokkaana välineenä monimutkaisten fenotyyppien karakterisoi-miseksi ja biologisten merkkiaineiden kehittämiseksi spesifisille fysiologisille tiloille. Spesifiselle fysiologiselle tilalle luonteenomaisen metabolomisen profiilin todentaminen myös helpottaa sellaisten aineiden etsimistä, jotka kykenevät muuttamaan profiilia ja siten vaikuttamaan fysiologiseen tilaan.
15 Esillä oleva keksintö antaa käyttöön probiootin käytön metabolisen profiilin, edullisesti lipidiprofiilin, parantamiseksi kohteessa. Kohteen metaboli-nen profiili voidaan määrittää kohteen kehosta otetusta näytteestä. Näyte voi olla biopsianäyte, edullisesti limakalvosta, erityisesti suolesta. Vaihtoehtoisesti näyte otetaan noninvasiivisista kudoksista, kuten verestä tai ulostemateriaalis-20 ta.
Metabolominen profilointi on veteen liukenemattomien metaboliittien (käytännössä lipidien) ja vesiliukoisten metaboliittien suuren mittakaavan tutkimus, joka voidaan saada esimerkiksi tekniikoilla mukaan lukien elektrosuih-kuionisaatio [ESI(+/-)j, massaspektrometria (MS), nestekromatografia kytketty-25 nä massaspektrometriaan (LC/MS) ja kattavalla kaksiulotteisella kaasukroma- tografialla kytkettynä korkean nopeuden time-of-flight-massaspektrometriaan o (GCxGC-TOF). Metaboliittien väliset suhteet voidaan karakterisoida monimuut-o tujamenetelmillä. Tämä mahdollistaa useiden tai jopa valtavan lukumäärän ^ metaboliitteja analyysin samanaikaisesti yhdestä ainoasta näytteestä, jolloin x 30 saadaan “metabolinen profiili”, kuten “lipidiprofiili”, "vesiliukoisten metaboliittien profiili" tai "metabolominen profiili" (ts. lipidien ja vesiliukoisten metaboliittien
(M
o yhdistelmä). Näitä tuloksia voidaan sitten käyttää tietyille fysiologisille tiloille g tyypillisen metabolisen profiilin tunnistamiseksi käyttäen tilastotieteellisiä malli- ° tusmenetelmiä.
35 “Metaboliitti” on aineenvaihdunnan välituote tai tuote ja rajoittuu ta vallisesti pieniin molekyyleihin. Keksinnön yhden suoritusmuodon mukaisesti 7 metaboliitti on “primaarinen metaboliitti”, joka on metaboliitti, joka on suoraan mukana normaalissa kasvussa, kehittymisessä tai lisääntymisessä. Edullisesti primaarinen metaboliitti on metaboliitti, joka on mukana energia-aineen-vaihduntareitissä, kuten sitruunahappo (TCA) -kierrossa, pentoosifosfaattirei-5 tissä tai lipidiaineenvaihdunnassa.
Lipidit analysoidaan kätevästi nestekromatografisesti kytkettynä massaspektrometriaan (LC/MS; LC-MS/MS). Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää kaasukromatografiaa kytkettynä massaspektrometriaan. Edullisesti käytetään käänteisfaasinestekromatografiaa lipidien erottamiseksi, jotka sitten identifioi-10 daan hybridi kvadropoli - time of flight (Q/ToF) -massaspektrometrillä, jossa on tandem-massaspektrometria (MS/MS) -kyky.
Vesiliukoiset metaboliitit analysoidaan kätevästi kaasukromatografialla (GC), erityisesti kattavalla kaksiulotteisella kaasukromatografialla kytkettynä korkean nopeuden time-of-flight-massaspektrometriaan (GCxGC-TOF).
15 Lipidit on väljästi määritelty biologisiksi aineiksi, jotka yleensä ovat luonteeltaan hydrofobisia ja monissa tapauksissa liukoisia orgaanisiin liuottimiin. Lipidit ovat solukalvojen ja mitokondrioiden tärkeitä ainesosia, ja niillä on merkittävä rooli energian kuljetuksessa ja varastoinnissa. Asyyliglyserolit muodostavat suurimman osan kehon lipideistä. Diasyyliglyserolit, fosfatidyylikoliini 20 ja fosfatidyylietanoliamiini ovat tärkeitä aineita, jotka ovat mukana triasyyligly-serolin ja fosfoglyserolin biosynteesin tärkeissä reiteissä ja glyserofosfolipidiai-neenvaihdunnassa. Keramidia syntetisoidaan seriinistä, ja se on monimutkaisen sfingosiini-aminoalkoholin ja rasvahapon yhdistelmä. Kun keramidit reagoivat fosfatidyylikoliinin kanssa, ne muodostavat sfingomyeliiniä sekä diasyy-25 liglyserolia. Keramidit voivat reagoida myös sokereiden kanssa, jolloin muodostuu glykosfingolipidejä.
^ Lysofosfatidyylikoliinien (LysoPC:t) korkean pitoisuuden on ehdotet- ^ tu heikentävän limakalvoestefunktiota ja lisäävän ruuansulatuskanavan per- o meabiliteettia in vivo ja in vitro. Lisäksi LysoPC:t on yhdistetty myös verisuoniin 30 tulehdukseen, endoteelin toimintahäiriöön ja sydämen verisuonten ateroskle- £ roosiin, mikä viittaa siihen, että LysoPC:illä voi olla rooli myös lievämuotoises-
CL
sa limakalvotulehduksessa.
(M
° Kattavan luokittelun tarkoituksiin “lipidit” voidaan määritellä hydro-
LO
§ fobisiksi tai amfipaattisiksi pieniksi molekyyleiksi, jotka voivat olla peräisin ko- ° 35 konaan tai osaksi tioestereiden karbanionipohjaisista kondensaatioista (rasva hapot, polyketidit jne.) ja/tai isopreeniyksiköiden karbokaatiopohjaisista kon- 8 densaatioista (prenolit, sterolit, jne.). Ne voidaan edelleen jakaa seuraaviin kahdeksaan kategoriaan: rasva-asyylit, glyserolipidit, glyserofosfolipidit, sfingo-lipidit, sterolilipidit, prenolilipidit, sakkarolipidit ja polyketidit (Fahy, E., Subra-maniam, S..Brown, H.A., Glass, C.K., Merrill Jr., A.H., Murphy, R.C., Raetz, 5 C.R.H., Russell, D.W., Seyama, Y., Shaw, W., Shimizu, T., Spener, F., van
Meer, G., Van Nieuwenhze, M.S., White, S., Witztum, J.L., Dennis, E.A., A comprehensive classification system for lipids, Journal of Lipid Research, 2005, 46: 839-861).
Edullisesti probiootteja käytetään parantamaan lipidiprofiilia, joka 10 käsittää glyserolipidit, glyserofosfolipidit ja/tai sfingolipidit. Glyserolipidit ovat edullisesti triasyyliglyseroleja (TG) ja diasyyliglyseroleja (DG), ja glyserofosfolipidit ovat edullisesti lysofosfolipideja, kuten lysofosfatidyylikoliini (LysoPC) ja lysofosfatidyylietanoliamiini (LysoPE). Sfingolipidit ovat edullisesti niitä, jotka osallistuvat keramidi/sfingomyeliinireittiin, kuten keramidit (Cer) ja glykosfingo-15 lipidit (GlycoSL). Lipidiprofiili sisältää edullisesti vähintään yhden mainituista lipideistä.
Kun häiriön tai taudin on havaittu liittyvän epänormaaliin metaboli-seen profiiliin, kuten epänormaaliin lipidiprofiiliin, häiriötä tai tautia voidaan hoitaa tai estää antamalla sopivia probiootteja määränä, joka on riittävä norma-20 lisoimaan profiilin. Häiriöt tai taudit valitaan edullisesti ryhmästä, joka koostuu limakalvotulehduksesta, suolen permeabiliteettihäiriöistä, tulehduksellisesta suolistosairaudesta (IBD), ärtyvän suolen oireyhtymästä (IBS), oksidatiivisesta stressistä, mahakivusta ja muista ruuansulatuskanavan häiriöistä.
Esillä olevassa tutkimuksessa lipidipitoisuuksien havaittiin olevan 25 kohonneita IBS-potilailla. Merkittävintä lisääntymistä esiintyi proinflammatori-sissa lysofosfatidyylikoliineissa. Muita lipidiryhmiä, jotka olivat merkittävästi li-^ sääntyneet IBS-potilailla, olivat glykosfingolipidit, di- ja triasyyliglyserolit ja lipo- ^ toksiset keramidit. Siten voidaan tehdä se johtopäätös, että IBS-limakalvolle on 9 luonteenomaista selvä proinflammatorinen ja lipotoksinen metabolinen profiili, cö 30 johon erityisesti kuuluu lisäys useissa lipidilajeissa, kuten lysofosfolipideissä ja £ keramideissa. Probiootit sopivat erityisesti LysoPC:n ja keramidin määrän
CL
alentamiseen.
(M
° Sen lisäksi, että havaittiin eroja lipidipitoisuuksissa IBS-potilaista ja m § kontrolleista otettujen näytteiden välillä, vesiliukoisten metaboliittien kokonais- ° 35 analyysi paljasti muita eroja näiden kahden koeryhmän välillä. Näitä muita ero ja nähtiin perusmetaboliiteissa, kuten 2(3H)-furanoni (joka tunnetaan myös lak- 9 tonina), ribitoli, heptaani, L-mannoosi, kreatiniini, dodekaani, dekaanihappo (joka tunnetaan myös kapriinihappona), dodekaanihappo (joka tunnetaan myös lauriinihappona), n-butyyliamiini, D-riboosi, glukopyranoosi, atselaiini-happo ja adipiinihappo, jotka kaikki osallistuvat tavallisiin biokemiallisiin reittei-5 hin soluissa.
Mikro-organismiin voidaan viitata “probioottina”, jos se oleellisesti vastaa seuraavia vaatimuksia: se pysyy elinkykyisenä ruuansulatuskanavassa vallitsevissa vaativissa olosuhteissa (mahan matala pH, ruuansulatusjärjestelmän hapot jne.); kiinnittyy suolen seinään; metaboloituu suolessa; on teknolo-10 gisesti käyttökelpoinen (kestää prosessointia); sillä esiintyy kliinisesti testattuja ja raportoituja terveysvaikutuksia; ja se on turvallinen nauttia (Lee, Y-K ja Salminen, S., The coming of age of probiotics, Trends Food Sei Technol, 1995, 6: 241-245). Probiootit sisältävät sekä eukaryoottisia että prokaryoottisia organismeja. Parhaiten tunnettuja probiootteja ovat bakteerit, erityisesti maito-15 happobakteerit. Keksinnössä käytettävät probiootit valitaan edullisesti ryhmästä, joka koostuu laktobasilleista, propionibakteereista, bifidobakteereista, lakto-kokeista, enterokokeista, streptokokeista, hiivasta ja mistä tahansa niiden yhdistelmästä. Erityisesti probiootti kuuluu sukuun Lactobacillus, edullisesti lajiin Lactobacillus rhamnosus ja edullisimmin se on L. rhamnosus GG (LGG) 20 (ATCC 53103), joka on kuvattu esim. julkaisussa US 5 032 399, tai L. rhamnosus LC705 (DSM 7061), joka on kuvattu esim. julkaisussa US 5 378 458.
Probiootit annetaan kätevästi suun kautta annettavana koostumuksena, joka sisältää metabolisesti aktiivisia, ts. eläviä ja/tai kylmäkuivattuja, tai ei-eläviä lämmöllä tapettuja, säteilytettyjä tai hajotettuja probioottimikro-orga-25 nismeja.
Tässä kuvattu probioottikoostumus voidaan antaa suun kautta sel-^ laisenaan, ts. tabletin, kapselin tai jauheen muodossa. Lisäksi probioottikoos- ^ tumus voidaan antaa suun kautta ruoka- tai ravitsemuksellisena tuotteena, ku- 9 ten maitona tai herapohjaisena fermentoituna meijerituotteena, tai farmaseuttien 30 sena tuotteena. Keksinnön erään suoritusmuodon mukaan koostumus on syö- £ tävä tuote, kuten meijerituote, juoma, mehu, keitto tai lastenruoka.
CL
Probiootti voidaan mahdollisesti yhdistää vähintään yhden sopivan ° prebioottisen yhdisteen kanssa. “Prebiootti” on tavallisesti ei-sulava hiilihyd- m § raatti, kuten oligo- tai polysakkaridi, tai sokerialkoholi, jota ei hajoteta tai ab- ° 35 sorboida ylemmässä ruuansulatuskanavassa. Tunnettuja kaupallisesti käytet- 10 tyjä prebiootteja ovat esimerkiksi inuliini, frukto-oligosakkaridit, oligofruktoosi tai gaiakto-oligosakkaridit.
Termin “syötävä tuote” tarkoitetaan kattavan kaikki kulutustuotteet, erityisesti ruokatuotteet, ja se voi olla kiinteä, hyytelöity tai neste. Termi kattaa 5 sekä valmistuotteet että tuotteet, jotka tuotetaan käyttäen probioottikoostumus-ta yksinään startterina tai yhdistelmänä tavanomaisten startterien tai muiden probioottien kanssa. Ruokatuotteet voivat olla esimerkiksi meijeriteollisuuden tai juomateollisuuden tuotteita. Vaihtoehtoisesti se voi olla luonnontuote.
Esillä olevassa keksinnössä “meijerituote” tarkoittaa mitä tahansa 10 nestemäistä tai puolikiinteää maito- tai herapohjaista tuotetta, jossa on vaihte-leva rasvasisältö. Meijerituote voi olla esim. lehmän maito, vuohen maito, lampaan maito, rasvaton maito, kokomaito, maitojauheesta ennastettu maito, ja hera ilman mitään prosessointia tai prosessoitu tuote, kuten jogurtti, juoksetet-tu maito, rahka, piimä, hapatettu kokomaito, kirnupiimä, muut hapanmaitotuot-15 teet, kuten viili, välipalapatukoiden täyte jne. Toinen tärkeä ryhmä sisältää mai-tojuomat, kuten herajuomat, fermentoidut maidot, kondensoidut maidot, lasten-tai vauvojen maidot; jäätelön; maitoa sisältävän ruuan, kuten makeiset.
Eräässä keksinnön suoritusmuodossa keksinnön mukainen probi-oottikoostumus on fermentoitu meijerituote tai sitä käytetään fermentoidun mei-20 jerituotteen valmistuksessa. Keksinnön mukaista probioottikoostumusta ja startteria, jos sitä on, käytetään tasapainotetuissa suhteessa toisiinsa nähden halutun vaikutuksen tuottamiseksi kattavaan metaboliseen profiiliin.
Edellä kuvattuja maitopohjaisia tuotteita voidaan käyttää sellaisenaan halutun vaikutuksen aikaansaamiseksi. Mainitut tuotteet voidaan myös 25 konsentroida ja käyttää ainesosina. Lisäksi tuotteet voidaan myös kuivata ja käyttää jauheen tai lyofilisaatin muodossa. Tuotteita voidaan käyttää myös ^ kapseleina, pillereinä tai tabletteina. Tuotteita voidaan käyttää myös funktio- ^ naalisten ruokatuotteiden, terveyttä ja hyvinvointia edistävien syötävien tuottei- 9 den tai muiden vastaavien tuotteiden valmistuksessa. Se voi myös olla eläinten n 30 rehu. Mahdollisia muotoja ovat esimerkiksi kapselit, pillerit tai tabletit, jotka on c valmistettu tavanomaisilla menetelmillä, joita käyttää sellaisen tuotteen valmis-
CL
tuksessa esimerkiksi lääketeollisuudessa. Siten kunkin ruokatuotteen, ruokain aineen ja/tai farmaseuttisten tuotteiden ja eläinten rehun muoto ei ole erityises- § ti rajoitettu, o cv 35 Tässä kuvatut probioottikoostumus ja tuotteet ovat ensisijaisesti so pivia käytettäväksi aikuisille ihmisille ja lapsille. Tuotteiden positiiviset vaiku- 11 tukset ovat hyödyllisiä myös eläimille, erityisesti lemmikkieläimille ja tuotantoeläimille. Näistä esimerkkejä ovat esimerkiksi koirat, kissat, kanit, hevoset, lehmät, siat, vuohet, lampaat ja siipikarja. Tässä käytettynä termi “kohde” sisältää siten sekä ihmiset ja eläimet.
5 Probiootteja annetaan määränä, joka on riittävä parantamaan koh teen metabolista profiilia. Biologisesti tehokkaat määrät probiootteja on kuvattu aikaisemmin. “Epänormaali metabolinen profiili”, kuten “epänormaali lipidiprofii-li” on sellainen, joka eroaa merkittävästi terveiden kontrollien profiilista. Epänormaali metabolinen profiili voi sisältää lisääntyneen tai vähentyneen määrän 10 yhtä tai useampia metaboliitteja, esim. lipidejä, verrattuna kontrolleihin. Tehokas määrä probioottia on määrä, joka normalisoi metabolisen profiilin lisäämällä tai alentamalla epänormaaleja metaboliittipitoisuuksia, esim. lipidipitoisuuk-sia. Probiootit ovat erityisen tehokkaita LysoPC:n ja keramidin alentamisessa, jolloin ne kontrolloivat, lieventävät, normalisoivat, estävät, lievittävät ja/tai hel-15 pottavat oireiden kehittymistä IBS:ssä, johon liittyy epänormaali lipidiprofiili.
Seuraavat esimerkit valaisevat esillä olevaa keksintöä. Esimerkkejä ei tule pitää patenttivaatimuksia rajoittavina millään tavalla.
Esimerkki 1
Limakalvobiopsioiden metabolominen profilointi 20 Kuusitoista aikuista IBS-potilasta (keski-ikä 42 vuotta, SD 15; 6 miespuolista), jotka täyttivät Rooma II -kriteerin (Thompson, W.G., Longstreth, G.F., Drossman, D.A., Heaton, K.W., Irvine, E.J, Miiller-Lissner, S.A., Gut, 1999, 45 Suppl 2: 43-7) ja joilla ei ollut elimellisiä suolistotauteja, rekrytoitiin osallistumaan tutkimukseen. Yhdeksän tervettä henkilöä (keski-ikä 49 vuotta, 25 SD 14; 4 miespuolista), joilla ei ollut elimellisiä suolistotauteja tai IBS:ää vas-^ taavia ruuansulatuskanavan oireita ja joille tehtiin paksusuolentähystys kliini- ™ sistä syistä, rekrytoitiin kontrolleiksi. Mukaanottokriteerit kaikille henkilöille oli- 9 vat: ikä 20-65 vuotta; normaalit verilukemat (erytrosyytit, hemoglobiini, hema- cö tokriitti, MCV, MCH, MCHC, trombosyytit, leukosyytit); viitearvojen sisällä ole- ί 30 vat arvot seerumin kreatiniinille, ALT:lle ja ALP:lle; ja normaali suolen histolo-
CL
gia kokeneen patologin arvioimana. Henkilöt suljettiin pois, jos heillä oli saira-? ushistoria isoista tai monimutkaisista ruuansulatuskanavan leikkauksista, vai-
LO
§ keasta endometrioosista, monimutkaisista vatsaontelon kiinnikkeistä, pahalaa- cvj tuisista kasvaimista, jos he olivat raskaana tai imettivät tai jos he olivat saaneet 35 antimikrobilääkkeitä edellisen kuukauden aikana. Potilaiden, joilla oli laktoosi- 12 intoleranssi, sallittiin osallistua, jos he noudattivat jatkuvaa vähälaktoosista tai laktoositonta ruokavaliota.
Näytteiden keräys ia valmistus. Limakalvobiopsiat (keskimääräinen paino 5,2 mg/näyte; SD 1,5) nousevasta paksusuolesta saatiin kultakin henki-5 löltä paksusuolentähystyksen aikana suolen tyhjennyksen jälkeen. Näytteet jäädytettiin välittömästi ja siirrettiin lämpötilaan -20 °C. Sitten näytteet siirrettiin lämpötilaan -70 °C, kunnes niitä tarvittiin analyysiin. Lipidomiikkaa varten näytteet punnittiin Eppendorf-putkiin, ja 10 pl 0,9-prosenttista natriumkloridia ja 10 μΙ sisäistä standardiseosta (11 lipidiyhdistettä, 0,1 pg kutakin) lisättiin. Näyt-10 teet uutettiin 100 piillä kloroformiimetanoli-seosta (2:1; 2 minuutin sekoitus Vortex-sekoittimella, 2 tunnin uuttoaika) ja sentrifugoitiin (10 000 rpm, 3 min). Alemmasta orgaanisesta faasista otettiin 60 piin määrät pieniin pulloihin, ja 10 pl standardiseosta, joka sisälsi 3 leimattua lipidiyhdistettä, lisättiin. Vesiliukoisia yhdisteitä varten näytteet punnittiin Eppendorf-putkiin, ja 10 pl leimattua palmi-15 tiinihappoa (16:0-16,16,16d3), 1000 ppm (mg/ml), lisättiin sisäiseksi standardiksi. Näytteet uutettiin 500 piillä metanolia (2 minuutin sekoitus Vortex-sekoittimella, 0,5 tunnin uuttoaika) ja sentrifugoitiin (10 000 rpm, 3 min). Erotetut supernatantit haihdutettiin kuivaksi typen alla, ja jäännökset derivatisoitiin 2-prosenttisella metoksiamiini-HCIilla pyridiinissä (MOX; 25 pl, 90 min lämpöti-20 lassa 30 °C) ja N-metyyli-N-trimetyylisilyylitrifluoriasetamidilla (MSTFA; 50 pl, 30 min lämpötilassa 37 °C). Kaikki näytteet ajettiin kaksoismäärityksinä.
Lipidien analyysi UPLC/MS:llä. Lipidien molekyylilajin karakterisointi paksusuolen limakalvolla suoritettiin lipidomiikkastrategialla käyttäen ultrasuori-tuskykyistä nestekromatografiaa kytkettynä massaspektrometriaan (UPLC-25 MS). Pylväs (50 °C) oli Acquity UPLC™ BEH C18 10 χ 50 mm, jossa oli 1,7 pmin hiukkaset. Liuotinsysteemi sisälsi: A. ultrapuhdas vesi (1 % 1 M NH4Ac, ^ 0,1 % HCOOH) ja B. LC/MS-laatuinen asetonitriili/isopropanoli (5:2, 1 % 1 M
^ NH4Ac, 0,1 % HCOOH). Gradients alkoi seoksesta 65% A/35 % B, saavutti 9 100% B kuudessa minuutissa ja pysyi siinä seuraavat seitsemän minuuttia, cö 30 Ennen seuraavaa ajoa oli viiden minuutin uudelleentasapainotusvaihe. Vir- £ tausnopeus oli 0,200 ml/min ja injektoitu määrä 1,0 pl. Lipidien profilointi suori-
CL
tettiin käyttäen ESI+-tapaa, ja tiedot kerättiin massa-alueella m/z 300-2000, ° jolloin pyyhkäisyn kesto oli 0,08 s.
LT) § Lipidit identifioitiin käyttäen sisäisen spektrin kirjastoa tai tandem- ° 35 massaspektrometrialla. Lipidomiikkatietojen normalisointi suoritettiin seuraa vasti: kaikki monoasyylilipidit kolesteroliestereitä lukuun ottamatta, kuten mo- 13 noasyyliglyserolit ja monoasyyli-glyserofosfolipidit, kalibroitiin käyttäen lysofos-fatidyylikoliinia (LysoPC) (17:0/0:0) sisäisenä standardina, kaikki diasyylilipidit etanoliamiinifosfolipidejä lukuun ottamatta normalisoitiin fosfatidyylikoliinilla (LysoPC) (17:0/17:0), diasyylietanoliamiinifosfolipidit kalibroitiin fosfatidyylieta-5 noliamiinilla (LysoPE) (17:0/17:0) ja triasyyliglyserolit ja kolesteroliesterit tri-asyyliglyserolilla TG (17:0/17:0/17:0). Muut molekyylilajit normalisoitiin (Ly-soPC):llä (17:0/0:0) retentioajoille <310 s, (LysoPC):llä (17:0/17:0) retentioajoil-le 310-450 s ja TG:llä (17:0/17:0/17:0) korkeammille retentioajoille. Tiedot prosessoitiin käyttäen MZmine-ohjelmistoversiota 0.60 (Katajamaa, M. ja Oresic, 10 M., 2005, Processing methods for differential analysis of LC/MS profile data, BMC Bioinformatics 2005: 6: 179), ja metaboliitit identifioitiin käyttäen sisäistä spektrikirjastoa tai tandem-massaspektrometrialla.
Vesiliukoisten metaboliittien analyysi GCxGC-TOF:lla Vesiliukoisten metaboliittien laaja seulonta suoritettiin kattavalla 15 kaksiulotteisella kaasukromatografialla kytkettynä korkean nopeuden Time-of-Flight-massaspektrometriaan (GCxGC-TOF). Käytetty laite oli Leco Pegasus 4D GCxGC-TOF, jossa oli Agilent 6890N GC ja CombiPAL -automaattinen näytteenannostelija. GC:tä ajettiin split-tavalla (1:20) käyttäen heliumia kanta-jakaasuna 1,5 ml/min:n vakiovirtaukselia. Ensimmäinen GC-kolonni oli suhteel-20 lisen pooliton RTX-5-kolonni, 10 m x 0,18 mm χ 0,20 pm, ja toinen oli poolinen BPX-50, 1,10 m * 0,10 mm χ 0,10 pm. Lämpötilaohjelma oli seuraava: alku-lämpötila 50 °C, 1 min -» 280 °C, 7 °C/min, 1 min. Sekundaarinen uuni asetettiin +30 °C primaarisen uunin lämpötilan yläpuolelle. Toisen ulottuvuuden ero-tusaika asetettiin 3 sekuntiin. Käytetty massa-alue oli 40-600 amy ja tietojen 25 keräysnopeus oli 100 spektriä/sekunti. Kaupallista massaspektrikirjastoa, Palisade Complete 600K, käytettiin metaboliittien tunnistukseen.
^ Statistiikka o ^ Osittaista pienimmän neliösumman erotteluanalyysiä (PLS/DA) käy- o tettiin valvottuna mallitusmenetelmänä käyttäen SIMPLS-algoritmia mallin las- ^ 30 kemiseksi. Contiguous blocks -ristivalidointimenetelmää ja Q-pistearvoja käy- g tettiin näiden mallien kehittämiseksi. Huippulataukset latenteille muuttujille, jot-
CL
ka liittyivät lääkeainespesifisiin vaikutuksiin, raportoitiin. VIP (variable impor- ° tance in the projection) -arvot laskettiin tärkeimpien molekyylilajien tunnistami- m § seksi tiettyjen ryhmien ryhmittämiseksi. Monimuuttuja-analyysit suoritettiin ° 35 käyttäen Matlab-versiota 7.2 (Mathworks, Inc.) ja PLS Toolbox -versiota 4.0
Matlab package (Eigenvector Research, Inc.). Yksi tilastollisesti ulkopuolinen 14 IBS-potilas jätettiin pois analyyseistä tulosten ensimmäisen laatutarkistuksen jälkeen. Yhden muuttajan vertailu yksittäisille metaboliiteille ryhmien välillä suoritettiin käyttäen Wilcoxonin testiä.
Lipidominen analyysi 5 Käyttäen UPLC-MS:aa havaittiin kaikkiaan 651 lipidipiikkiä, ja 75 niistä identifioitiin käyttäen sisäistä spektrikirjastoa, kuten ovat kuvanneet Ye-tukuri et ai. (Yetukuri, L, Katajamaa, M., Medina-Gomez, G., Seppänen-Laakso, T., Vidal-Puig, A., Oresic, M., Bioinformatics strategies for lipidomics analysis: characterization of obesity related hepatic steatosis, BMC Systems 10 Biol., 2007, 1: 12), tai tandem-massaspektrometrialla käyttäen UPLC/MS/MS:a. Lipidomisten tietojen PLS-DA-analyysi paljasti merkittäviä eroja limakalvojen lipidiprofiileissa IBS-potilaiden ja terveiden kontrollien välillä. Kaiken kaikkiaan lipidilajit olivat lisääntyneet IBS-potilailta otetuissa biopsioissa verrattuna terveiltä henkilöiltä otettuihin biopsioihin. Viisitoista tärkeintä lipidiä, joiden suh-15 teen esiintyi suurimmat ryhmien väliset erot kertaluokkamuutoksina, käyvät ilmi taulukosta 1. Merkittävä lisääntyminen tyypillisten solukalvometaboliittien, lyso-fosfolipidien, pitoisuuksissa IBS-potilaissa oli eräs ilmeisimpiä havaintoja (kuvio 1A). Muita lipidiryhmiä, jotka vaikuttivat merkittävästi erottumiseen IBS-potilaiden ja terveiden kontrollien välillä, olivat keramidit (kuvio 1B), glykosfin-20 golipidit sekä di- ja triasyyliglyserolit, joilla kaikilla esiintyi lisääntymistä IBS-ryhmässä.
δ
CM
O
δ
X
cc
CL
CM
O
δ 00 o o
CM
15
Taulukko 1. 15 tärkeintä lipidiä, joilla esiintyy suurimmat ja merkittävimmät erot IBS-potilaiden ja terveiden kontrollien välillä limakalvopitoisuudessa mitattuna Wilcoxonin testin P-arvolla (IBS-potilaat/terveet kontrollit). LysoPC = lyso-fosfatidyylikoliini; LysoPE = lysofosfatidyylietanoliamiini; TG = triasyyliglyseroli; 5 GlycoSL = glykosfingolipidi; DG = diasyyliglyseroli; Cer = keramidi.
Kertaluku _Lipidin nimi_(IBS/terve kontrolli)_p-arvo*
Cer(d 18:1/24:1) 1,30 0,0013
Cer(d 18:1/24:2) 1,37 0,000038 DG(36:2) 1,93 0,00000097
GlycoSL(m/z=1199.805) 1,88 0,00097
GlycoSL(m/z=1195.851) 1,95 0,00027
LysoPC(16:0) 2,13 0,000058
LysoPC(18:0) 1,87 0,00016
LysoPC(18:1) 2,79 0,000023
LysoPE(18:1e) 2,41 0,000018 TG(46:5) 1,37 0,039 TG(48:5) 1,63 0,028 TG(48:6) 1,67 0,032 TG(49:3) 2,10 0,0089 TG(51:4) 1,55 0,037 TG(51:5)_180_0,016 *Wilcoxonin testi
Metabolomiikka-analvvsi ^ 10 Laaja metaboliittiseulonta GCxGC-TOF:lla johti useisiin satoihin li- ^ makalvometaboliitteihin, joista 107 identifioitiin ja pidettiin mukana analyyseissa sä. PLS/DA-analyysin perusteella havaittiin yllättäen selvä erottuminen IBS- cö tapausten ja kontrollien välillä (kuvio 4). IBS-potilailla havaittiin sekä metaboliit- i tien lisääntymistä että vähenemistä kontrolleihin verrattuna. Tärkeimmiksi arvi-
CL
15 oidut metaboliitit, jotka vaikuttivat erottumiseen ryhmien välillä, käyvät ilmi tau-° lukosta 2.
in oo o o
(M
16
Taulukko 2. Tärkeimmät vesiliukoiset metaboliitit, jotka vaikuttavat erottamiseen IBS-potilaiden (n=15) ja terveiden kontrollien (n=9) välillä. Erottuminen perustuu VIP (variable importance projection) -analyysiin, jossa raja-arvo oli 2.
Kertaluku
Metaboliitti p-arvo * ___ _ „ __ (IBS/terve kontrolli) __ ___ ______ 2(3H)-furanoni 13,73 0,03
Ribitoli 3,63 ns.
Heptaani 2,87 0,02 L-mannoosi 2,75 ns.
Kreatiniini 1,70 0,04
Dodekaani 1,47 ns.
Dekaanihappo 1,26 ns.
Dodekaanihap- -1,46 ns.
po n-butyyliamiini -1,47 0,01 d-riboosi -1,51 ns.
Glukopyranoosi -1,58 ns.
Atselaiinihappo -1,77 0,02
Adipiinihappo ___ -2,69 0,0008 5 *Wilcoxonin testi. ns.= ei merkitsevä.
Metaboliitti, joka vaikutti eniten erottumiseen, oli 2(3H)-furanoni, syklinen esteri, jota yleisesti tuotetaan biokemiallisissa reiteissä ja joka oli lähes 14-kertaisesti lisääntynyt IBS-potilailla verrattuna terveisiin henkilöihin (p<0,05). Kertalukumuutos muilla tärkeiksi arvioiduilla metaboliiteilla oli selvästi r- 10 alhaisempi (3,7 - -2,7-kertainen muutos). Myös muita perusmetaboliitteja, joita ^ usein esiintyy biokemiallisissa reiteissä, kuten sekundaarinen lähetti d-riboosi, ^ oli niiden tärkeiden tekijöiden joukossa, jotka vaikuttivat erotteluun tapausten ja t"·— kontrollien välillä PLS/DA-analyysin perusteella, vaikka tulos Wilcoxonin testis- x sä ei ollut merkittävä. Terveisiin kontrolleihin verrattuna orgaanisten karboksyy- * 15 lihappojen havaittiin olevan sekä lievästi vähentyneitä (dodekaani-, atselaiini- o ja adipiinihappo) samoin kuin lievästi lisääntyneitä (dekaanihappo) IBS- g potilailla.
o o
(M
17
Esimerkki 2 In vitro -stimulaatio
Bakteerikannat
Kantoja Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) (ATCC 53103) ja L.
5 rhamnosus LC705 (DSM 7061) säilytettiin rasvattomassa maidossa lämpötilassa -70 °C ja viljeltiin uudelleen kolme kertaa ennen käyttöä stimulaatioko-keissa. Stimulaatiokokeita varten bakteereja kasvatettiin MRS-alustalla logaritmisen kasvun vaiheeseen, ja bakteerisolujen lukumäärä määritettiin laskemalla Petroff-Hauser-laskentakammiossa.
10 Soluvilielv
Ihmisen makrofageja viljeltiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [Pirhonen, J,, Sareneva, T, Kurimoto, M., Julkunen, I., Matikainen, S. (1999) Virus infection activates IL-1 beta and IL-18 production in human macrophages by a caspase-1 -dependent pathway. J. Immunol. 162, 7322-7329]. Lyhyesti kuvat-15 tuna: juuri kerätyt, runsaasti leukosyyttejä sisältävät buffy coat -valmisteet terveistä verenluovuttajista saatiin Suomen Punaisen Ristin Veripalvelusta (Helsinki). Ihmisen perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) eristettiin ti-heysgradienttisentrifugoinnilla käyttäen Ficoll-Paque-gradienttia (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi). Pesun jälkeen solut suspendoitiin uudelleen RPMI-1640-20 alustaan (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), jota oli täydennetty 0,6 pg/ml:lla penisilliiniä, 60 pg/mUla streptomysiiniä, 2 mM:lla L-glutamiinia ja 20 mM:lla HEPES:iä. Monosyyttien erottelua varten solujen annettiin kiinnittyä muovisiin, kuusikuoppaisiin levyihin (Falcon, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) yhden tunnin ajan lämpötilassa 37 °C RPMkssä (10 x 106 solua/kuoppa). Inku-25 boinnin jälkeen kiinnittymättömät solut poistettiin, ja kuopat pestiin kahdesti fosfaatilla puskuroidulla fysiologisella suolaliuoksella (PBS). Kiinnittyneitä soluja ja kasvatettiin 7 päivää makrofageja/seerumia sisältämättömällä alustalla (Life ™ Technologies, Grand Island, NY), jota oli täydennetty antibiooteilla ja rekom- 9 binantilla ihmisen granulosyytti-makrofagipesäkkeitä stimuloivalla tekijällä (10 30 ng/ml; Leucomax, Schering-Plough, Innishannon, Irlanti). Viljellyillä soluilla oli c tyypillinen makrofagien morfologia, ja ne olivat yli 90-prosenttisesti CD14- ^ positiivisia virtaussytometrilla analysoituna.
° Stimulaatiokokeet LO - o Stimulaatiot suoritettiin soluilla, jotka oli saatu kuudelta verenluovut- o ^ 35 tajalta. Stimulaatiokokeet suoritettiin RPMI-1640-alustalia elävillä bakteereilla makrofagi:isäntäsolusuhteessa 1:1. Soluja stimuloitiin bakteereilla 6 tai 24 tun- 18 tia. Kuuden tai 24 tunnin stimulaation jälkeen solut otettiin talteen lämpötilaltaan -40 °C olevaan metanoliin, kuuden luovuttajan näytteet yhdistettiin ja säilytettiin lämpötilassa -70 °C lisäanalyysiä varten.
Näytteet 5 Käytettiin UPLC/MS-lipidomiikka-alustaa. Näytteitä keitettiin 3 mi nuuttia lämpötilassa +80 °C ja sentrifugoitiin kierrosnopeudella 8000 rpm 5 minuuttia lämpötilassa +4 °C. Supernatantti otettiin talteen, ja neljä millilitraa ult-rapuhdasta vettä lisättiin näytteiden jäädyttämiseksi kylmäkuivausta varten. Kuivat näytteet ennastettiin 50 pl:an ultrapuhdasta vettä ja sentrifugoitiin kier-10 rosnopeudella 10 000 rpm 3 minuuttia.
Näytteen valmistus lipidomiikkaa varten. Solupelletit metanolissa (600 pl) terästettiin 20 pl:lla sisäistä standardia (10 lipidiyhdistettä) ja uutettiin kloroformilla (600 μΙ, jotta saatiin kloroformi:metanoli-suhde 1:1). Natriumklori-diliuosta (0,9 %, 100 μΙ) käytettiin orgaanisen faasin erottamiseen. Erotetut li-15 pidiuutteet (3 min, 10 000 rpm) haihdutettiin kuiviin ja liuotettiin 35 pl:an kloro-formi:metanoli-seosta (2:1), ja 20 μΙ:η määrät toista standardiseosta (3 leimattua lipidiyhdistettä) lisättiin ennen metabolomista profilointia.
Lipidien analyysi UPLC/MS:lla. Bakteerisolupellettiuutteiden lipidien molekyylilajien karakterisointi suoritettiin käyttäen UPLC/MS:a, kuten on kuvat-20 tu esimerkissä 1 sillä poikkeuksella, että tiedot kerättiin massa-alueella m/z 300-1200 ja pyyhkäisyn kestolla 0,2 s, lipidien profiloimiseksi käyttäen ESI+-tapaa.
Lipidominen analyysi
Soveltamalla UPLC-MS:a havaittiin kaikkiaan 516 lipidipiikkiä, ja 25 määrältään suuri muutos havaittiin stimuloiduissa soluissa.
Testattujen bakteerikantojen vaikutus LysoPC:ihin 6 tai 24 tunnin ^ stimulaation jälkeen esitetään kuviossa 2. Voidaan nähdä, että molemmat o ^ kannat kykenivät vähentämään käytettyjen LysoPC:iden määriä ja että vaiku- o tus kasvoi, kun stimulaatioaika kasvoi.
n 30 Samojen bakteerikantojen vaikutus keramideihin esitetään kuviossa g 3. Molemmat kannat vähensivät testattujen keramidien pitoisuuksia.
CL
(M
O
LO
OO
O
O
(M

Claims (12)

1. Maitohappobakteereihin kuuluvan probiootin käyttö valmistettaessa koostumusta lipidiprofiilin parantamiseksi kohteessa, jolloin lipidiprofiili 5 käsittää vähintään lysofosfolipidin tai sfingolipidin, jonka määrä alennetaan.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, jossa lysofosfolipidi on lysofosfatidyylikoliini (Lyso-PC).
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen käyttö, jossa sfingolipidi on keramidi tai glykosfingolipidi.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 3 mukainen käyttö, jossa probioot- ti valitaan ryhmästä, joka koostuu laktobasilleista, laktokokeista, enterokokeista ja streptokokeista ja niiden yhdistelmistä.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen käyttö, jossa probiootti on Lactobacillus rhamnosus LGG (ATCC 53103) tai LC705 (DSM 7061).
6. Patenttivaatimuksen 4 tai 5 mukainen käyttö, jossa probiootti yh distetään prebiootin kanssa.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, jossa probiootti alentaa LysoPC:n ja keramidin määrää.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, jossa probioottia käyte- 20 tään epänormaaliin lipidiprofiiliin liittyvien häiriöiden ja tautien ennaltaehkäisyyn tai hoitoon.
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, jossa lipidiprofiilia parannetaan kohteessa, jolla on häiriö tai tauti, joka valitaan ryhmästä, joka koostuu limakalvon tulehduksesta, suolen permeabiliteettihäiriöstä, tulehdukselli- 25 sesta suolistosairaudesta (IBD), ärtyneen suolen oireyhtymästä (IBS), oksidaa-tiivisesta stressistä, vatsakivusta ja muista ruuansulatuskanavan häiriöistä.
™ 10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, jossa probioottikoostu- o mus on syötävä tuote.
11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, jossa probioottikoostu-x 30 mus on meijeriteollisuuden, juomateollisuuden tai farmaseuttisen teollisuuden tuote, tai se on luonnon tuote.
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen käyttö, jossa probioottikoos- oo tumus on meijerituote, juoma, mehu, keitto tai lastenruoka, o (M
FI20085102A 2008-02-05 2008-02-05 Probioottien uusi käyttö FI121912B (fi)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20085102A FI121912B (fi) 2008-02-05 2008-02-05 Probioottien uusi käyttö
EP09707320.9A EP2252306B1 (en) 2008-02-05 2009-02-04 Use of lactobacillus rhamnosus lc705 for treating inflammatory bowel syndrome
US12/866,084 US8604005B2 (en) 2008-02-05 2009-02-04 Use of probiotics
PCT/FI2009/050090 WO2009098355A1 (en) 2008-02-05 2009-02-04 Novel use of probiotics
RU2010136972/15A RU2497536C2 (ru) 2008-02-05 2009-02-04 Новое применение пробиотиков

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20085102A FI121912B (fi) 2008-02-05 2008-02-05 Probioottien uusi käyttö
FI20085102 2008-02-05

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI20085102A0 FI20085102A0 (fi) 2008-02-05
FI20085102A FI20085102A (fi) 2009-08-06
FI121912B true FI121912B (fi) 2011-06-15

Family

ID=39148972

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI20085102A FI121912B (fi) 2008-02-05 2008-02-05 Probioottien uusi käyttö

Country Status (5)

Country Link
US (1) US8604005B2 (fi)
EP (1) EP2252306B1 (fi)
FI (1) FI121912B (fi)
RU (1) RU2497536C2 (fi)
WO (1) WO2009098355A1 (fi)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2955774A1 (fr) 2010-02-02 2011-08-05 Aragan Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation
US11179427B2 (en) 2013-01-21 2021-11-23 Eth Zurich Baby food composition comprising viable propionic acid-producing bacteria
WO2016172374A1 (en) 2015-04-21 2016-10-27 Donaldson Janet R Utilization of oleaginous microorganisms as an oral supplement for animals
EP3294308A4 (en) 2015-05-14 2019-03-06 University of Puerto Rico PROCESS FOR RECOVERING THE BIOZOOSE OF NEWBORN
US11564667B2 (en) 2015-12-28 2023-01-31 New York University Device and method of restoring microbiota of newborns

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4839281A (en) * 1985-04-17 1989-06-13 New England Medical Center Hospitals, Inc. Lactobacillus strains and methods of selection
FI109602B (fi) * 2001-01-25 2002-09-13 Valio Oy Probioottiyhdistelmä
GB0308104D0 (en) * 2003-04-08 2003-05-14 Novartis Nutrition Ag Organic compounds
DK3067057T3 (da) * 2005-09-28 2023-02-13 Nordic Rebalance As Probiotisk fermenteret cerealiesammensætninger til anvendelse ved behandling af gastrointestinale lidelser forårsaget af pro-inflammatoriske bakterier
CA2689862A1 (en) 2006-06-09 2007-12-13 Nutravital Inc. Probiotic compositions comprising propionibacterium and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP2252306B1 (en) 2014-08-13
EP2252306A1 (en) 2010-11-24
EP2252306A4 (en) 2012-01-11
US20110020303A1 (en) 2011-01-27
FI20085102A (fi) 2009-08-06
WO2009098355A8 (en) 2009-10-08
WO2009098355A1 (en) 2009-08-13
RU2497536C2 (ru) 2013-11-10
US8604005B2 (en) 2013-12-10
RU2010136972A (ru) 2012-03-20
FI20085102A0 (fi) 2008-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Meng et al. Indole-3-lactic acid, a metabolite of tryptophan, secreted by Bifidobacterium longum subspecies infantis is anti-inflammatory in the immature intestine
AU2017101478A4 (en) Probiotic compositions and uses thereof for treatment of obesity-related disorders
Singh et al. Influence of diet on the gut microbiome and implications for human health
Bernini et al. Beneficial effects of Bifidobacterium lactis on lipid profile and cytokines in patients with metabolic syndrome: A randomized trial. Effects of probiotics on metabolic syndrome
Ballan et al. Interactions of probiotics and prebiotics with the gut microbiota
Andersson et al. Probiotics lower plasma glucose in the high-fat fed C57BL/6J mouse
Xiao et al. Effects of milk products fermented by Bifidobacterium longum on blood lipids in rats and healthy adult male volunteers
Xiao et al. Lactic acid bacteria in health and disease
Núñez et al. Evaluation of immune response, microbiota, and blood markers after probiotic bacteria administration in obese mice induced by a high-fat diet
Rezaei et al. The effect of probiotic yogurt on blood glucose and cardiovascular biomarkers in patients with type II diabetes: a randomized controlled trial
US20120134973A1 (en) Novel use of probiotics
CN106103695B (zh) 治疗乳腺炎的唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）
JP2011525483A (ja) プロバイオティクス、分泌型ＩｇＡ及び炎症
FI121912B (fi) Probioottien uusi käyttö
Venkat et al. Milk polar lipids composition and functionality: A systematic review
CN113163836A (zh) 促进宿主防御和刺激、扩增和/或重置t细胞库的组合物和方法
Widodo et al. Antidiabetic effect of milk fermented using intestinal probiotics
Ogrodowczyk et al. The effect of lactic acid fermentation with different bacterial strains on the chemical composition, immunoreactive properties, and sensory quality of sweet buttermilk
Shimoyama et al. Study of the mechanisms of a J apanese traditional fermented medicine in the improvement of constipation
Balcells et al. Effect of yogurt with or without probiotic addition on body composition changes and immune system in an obese model
Kekkonen Immunomodulatory effects of probiotic bacteria in healthy adults
Miao et al. Oral administration of fermented milk supplemented with synbiotics can influence the physiological condition of Wistar rats in a dose-sensitive and sex-specific manner
Komatsuzaki et al. Lactobacillus paracasei NFRI 7415 reduces liver lipid contents in C57BL/6J mice fed a high-fat diet
CN116616348B (zh) 含唾液酸的组合物及其在益生菌增殖和调节免疫中的应用
Shu et al. Effects of inactivated Lactobacillus rhamnosus on growth performance, serum indicators, and colonic microbiota and metabolism of weaned piglets

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 121912

Country of ref document: FI

PC Transfer of assignment of patent

Owner name: CHR. HANSEN A/S

MM Patent lapsed