FI92498C - Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan - Google Patents

Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan Download PDF

Info

Publication number
FI92498C
FI92498C FI922699A FI922699A FI92498C FI 92498 C FI92498 C FI 92498C FI 922699 A FI922699 A FI 922699A FI 922699 A FI922699 A FI 922699A FI 92498 C FI92498 C FI 92498C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
strain
lactobacillus casei
rhamnosus
yeast
growth
Prior art date
Application number
FI922699A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI922699A0 (fi
FI922699A (fi
FI92498B (fi
Inventor
Annika Maeyrae-Maekinen
Tarja Suomalainen
Original Assignee
Valio Meijerien
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=8535466&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI92498(C) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of FI922699A0 publication Critical patent/FI922699A0/fi
Priority to FI922699A priority Critical patent/FI92498C/fi
Application filed by Valio Meijerien filed Critical Valio Meijerien
Priority to EP93100402A priority patent/EP0576780B1/en
Priority to DK93100402T priority patent/DK0576780T3/da
Priority to DE69322131T priority patent/DE69322131T2/de
Priority to ES93100402T priority patent/ES2125278T3/es
Priority to AT93100402T priority patent/ATE173502T1/de
Priority to US08/129,378 priority patent/US5378458A/en
Publication of FI922699A publication Critical patent/FI922699A/fi
Publication of FI92498B publication Critical patent/FI92498B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI92498C publication Critical patent/FI92498C/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
    • A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
    • A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
    • A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/245—Lactobacillus casei
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/853—Lactobacillus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/853—Lactobacillus
    • Y10S435/856—Lactobacillus casei
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/853—Lactobacillus
    • Y10S435/857—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

92498
Uusi mikro-organismikanta, sita sisåltavat bakteerivalmis-teet ja nåiden kaytto hiivojen ja homeiden torjuntaan
Esilla oleva keksinto koskee uutta mikro-organis-5 mikantaa, jolla on erinomainen hiivoja ja homeita eståva vaikutus, bakteerivalmisteita, jotka sisåltåvåt tåta kan-taa yksin tai yhdessa muiden bakteerien ja/tai apuaineiden kanssa sekå kannan ja bakteerivalmisteiden kayttoå hiivojen ja homeiden torjuntaan.
10 Elintarvikkeiden ja mm. sailorehun sailyvyyttå ja kayttokelpoisuutta heikentaa usein hiivojen ja homeiden aiheuttama pilaantuminen. Hiivat ja homeet saattavat ai-heuttaa ongelmia myos elintarvikkeiden valmistuksessa ja erityisesti panimoteollisuudessa haittavaikutukset ovat 15 suuria.
Hiivojen ja homeiden torjuntaan elintarvikkeissa on yleisimmin kaytetty sorbaattia ja propionaattia erilaisina alkalisuoloina. Tamantyyppisten lisaaineiden kaytosta py-ritåån kuitenkin luopumaan, ja esimerkiksi sorbaatin 20 kaytto on kiellettya joissakin Euroopan maissa. Propionaa-tin huonoja puolia ovat se, ettei sen teho aina ole riit-tava, ja se, etta se antaa makua elintarvikkeisiin. Koska on otettava huomioon kuluttajien yha enenevasså maarin lisaaineiden kayttoa vastustavat asenteet ja eri maiden ' 2 5 erilaiset elintarvikelainsåadannot, teollisuudessa on py- ritty loytamaan luonnollisia biosåilontaaineita korvaamaan tallaisia lisaaineita.
Maitohappobakteerien tiedetåån tuottavan erilaisia antimikrobisia yhdisteita, kuten orgaanisia happoja, vety-30 peroksidia, diasetyylia ja bakteriosiineja, ja nåitå on yritetty kayttåå lisaaineina mm. elintarvikkeiden saily-vyyden parantamiseksi. Kaupallisesti on saatavissa Nisap-lin-valmiste (Aplin & Barrett), joka on Lactococcus lactis -bakteerin tuottamaa puhdistettua nisiinia ja joka tehoaa 35 ainoastaan gram-positiivisiin bakteereihin, eikå silla siis ole homeiden ja hiivojen kasvua estavaa vaikutusta.
--—---- --:--. -nr 92498
Maitohappobakteerien kåyttoå esimerkiksi rehun sai-lomiseen on intensiivisesti pyritty laajentamaan kokeile-malla maitohappobakteerien yhdistelmiå lahinna erilaisten entsyymivalmisteiden kanssa. Tållaisilla yhdistelmillå ei 5 kuitenkaan ole hiivojen ja homeiden kasvua estavaa vaiku-tusta, eivåtkå ne siten ole tuoneet ratkaisua hiivojen ja homeiden aiheuttamiin ongelmiin.
EP-hakemusjulkaisussa 0 302 300 esitetaan menetelma hiivoja ja homeita estavien tuotteiden valmistamiseksi 10 viljelemalla Lactobacillus -lajia ja eristamalla viljely-valiaineeseen erittyneet tuotteet. Naiden tuotteiden mai-nitaan olevan pienimolekyylipainoisten (MP <1 000) yhdis-teiden kompleksinen seos ja ne eristetåån viljelyvåliai-neesta monivaiheisella menetelmållå, joka butanolilla ja 15 etanolilla suoritettavien uuttovaiheiden lisaksi sisåltåå pylvåskromatografia- ja asetonisaostus- tai dialysointi-vaiheet. Tållainen monimutkainen menetelma ei sovellu suu-ren mittakaavan tuotantoon. Hakemuksessa estovaikutuksen osoittamisessa kaytetaan Penicillium oxalicum -itioita.
20 US-patenttijulkaisusta 4 981 705 tunnetaan menetel ma rehun sailomiseksi, jolloin menetelmassa kaytetaan tiettyja propionihappobakteerikantoja, nimittåin Prooioni-bacterium iensenii -kantaa P-9, ATCC 53961, tai Propioni-bacterium iensenii -kantaa P-Fargo, ATCC 53962. Edellå 25 mainittuja propionihappobakteerikantoja voidaan kåyttåå
Lactobacillus -sukuun kuuluvan organismin, edullisesti Lactobacillus plantarum -kannan, ATCC 53187, kanssa. Tåmån US-julkaisun mukainen menetelma perustuu nimenomaan pro-pionihappobakteerien kayttoon: julkaisussa todetaan, etta 30 vain tietyt, edellå nimeltå mainitut propionihappobaktee-rit toimivat tehokkaasti keksinnosså.
US-patenttijulkaisu 4 842 871 kohdistuu menetelmåån maataloustuotteiden sailomiseksi kåsittelemållå tuotetta Lactobacillus plantarum -kannalla, ATCC 53187. Tåsså US-35 julkaisussa todetaan, ettå L. plantarum. ATCC 53187, pys-» · 3 92498 tyy inhiboimaan tavallisia pilaantumista aiheuttavia ho-meita toisin kuin useimmat muut tåmån bakteerilajin jasenet .
Esilla olevan keksinnon tarkoituksena oli loytaa 5 uusia ratkaisuja hiivojen ja homeiden aiheuttamiin ongel-miin. Tutkittaessa erilaisten maitohappo- ja propionibak-teerien antimikrobisten tekijoiden vaikutusta hiivojen ja homeiden kasvuun havaittiin yllåttåen, etta uudella Lactobacillus -sukuun kuuluvalla bakteerikannalla, Lactobacil-10 lus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannalla on erinomaista estovaikutusta homeita, esimerkiksi Penicillium-. Aspergillus- . Cladosporium- ja Fusarium-la~ieihin kuuluvia homeita, ja hiivoja, esimerkiksi Candida-laieia. vastaan, kun sita kaytetåan solususpensiona kasvuliemessåån.
15 Lisåksi todettiin yllattaen, etta Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan tehoa voidaan huomat-tavasti parantaa Propionibacterium-sukuun kuuluvan baktee-rin, erityisesti Propionibacterium shermanii JS -kannan avulla. Tehoa voidaan parantaa myos kayttamalla Lacto-20 bacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa yhdessa toisen Lactobacillus casei -kannan kanssa, erityisesti Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum 1931 -kannan kanssa.
On myos mahdollista parantaa edellå mainitun kannan tai edella mainittujen yhdistelmien tehoa tunnettujen hii-25 vojen ja homeiden torjuntaan kaytettavien aineiden, kuten alkalimetallipropionaatin tai fenyylialaniinin avulla.
Niinpa esilla olevan keksinnon kohteena on uusi Lactobaci1lus-sukuun kuuluva bakteerikanta, Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705, DSM 7061.
30 Esilla olevan keksinnon kohteena on lisåksi baktee- rivalmiste, joka sisåltåå Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, solususpensiona kasvuliemes-så yksin tai yhdessa Propionibacterium-sukuun kuuluvan bakteerin tai Lactobacillus casei -bakteerin toisen kannan 35 kanssa.
4 92498
Esilla olevan keksinnon kohteena on edelleen Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan, DSM 7061, kaytto hiivojen ja homeiden kasvun estamiseksi.
Esilla olevan keksinnon kohteena on edelleen Lacto-5 bacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, sisaltavan bakteerivalmisteen kaytto hiivojen ja homeiden kasvun estamiseksi.
Esilla olevan keksinnon kohteena on vielå menetelmå hiivojen ja homeiden kasvun estamiseksi, jolloin menetel-10 malle on tunnusomaista, ettå kåytetåån solususpensiota, joka sisåltåå Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, yksin tai yhdessa Propionibacterium-su-kuun kuuluvan bakteerin tai Lactobacillus casei -bakteerin toisen kannan kanssa.
15 Keksinto perustuu uuteen Lactobacillus casei ssp.
rhamnosus LC-705 -kantaan, joka on talletettu 13.5.1992 talletuslaitokseen Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM) talletusnumerolla DSM 7061, ja sillå on seuraavat ominaisuudet: 20 - gram-positiivinen lyhyt, ketjuuntuva sauva - homofermentatiivinen - kasvaa hyvin 15 - 45 °C:ssa - kannalla ei ole proteolyyttistå aktiivisuutta - ei muodosta ammoniakkia arginiinista 25 - katalaasi-negatiivinen - MRS-liemesså (LAB M) kasvaessaan kanta tuottaa maito-happoa 1,6 %, joka on optiselta aktiivisuudeltaan L(+)-muoto; kanta hajottaa sitraattia (0,169 %) muodostaen di-asetyylia ja asetoiinia; kanta fermentoi ainakin seuraavia 30 hiilihydraatteja (sokereita, sokerialkoholeja): riboosi, galaktoosi, D-glukoosi, D-fruktoosi, D-mannoosi, L-sorboo-si, ramnoosi, mannitoli, sorbitoli, metyyli-D-glukosidi, N-asetyyliglukosamiini, amygdaliini, arbutiini, eskuliini, salisiini, sellobioosi, maltoosi, laktoosi, sakkaroosi, 35 trehaloosi, melitsitoosi, gentiobioosi, D-turanoosi ja D- tagatoosi 92498 - kestaa hyvin 5 %:n suolapitoisuuksia ja kohtalaisesti 10 %:n suolapitoisuuksia.
Propionibacterium shermanii JS -kanta on talletettu 13.5.1992 talletuslaitokseen Deutsche Sammlung von Mikro-5 organismen und Zellkulturen GmbH talletusnumerolla DSM 7067 ja silla on seuraavat ominaisuudet: - gram-positiivinen, lyhyt sauva - fermentoi glukoosia, fruktoosia, galaktoosia ja laktoo- sia 10 - fermentoi hyvin laktaattia - optimikasvulampotila 32 °C.
Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum 1931 -kanta on saatavissa Valio Meijerien Keskusosuusliikkeen mik-ro-organismikokoelmasta tuotenumerolla 1931 ja silla on 15 seuraavat ominaisuudet: - gram-positiivinen, lyhyt sauva - fakultatiivisesti heterofermentatiivinen - kasvaa hyvin 15 - 45 °C:ssa - ei proteolyyttistå aktiivisuutta 20 - ei muodosta ammoniakkia arginiinisba - tuottaa D(-) ja L(+) maitohappoa.
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa tuotetaan viljelemalla esimerkiksi herapohjaisessa kasvu-alustassa 2-3 vrk lampotilassa 30 - 37 °C pH-saadolla '25 tai ilman. Soluja sisåltava kasvuliemi otetaan talteen ja sita kaytetaan sellaisenaan tai konsentroituna. Konsent-rointi voidaan suorittaa kåyttåen mikrosuodatuslaitteistoa tai muuta vastaavaa tapaa. Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan soluja sisåltava kasvuliemi såilyt-30 tåå hiivoja ja homeita eståvån aktiivisuutensa kylmåsså (jååkaappilåmpotilassa) såilytettynå våhintåån kaksi kuu-kautta ja kylmåkuivattuna vielå kauemmin.
Tåhån soluja sisåltåvåån kasvuliemeen voidaan ha-luttaessa lisåtå muita bakteereja tai hiivojen ja homeiden 35 estoon kåytettyjå lisåaineita. Kun kåytetåån bakteereja, 6 92498 tatå toista bakteerikantaa voidaan viljella joko samanai-kaisesti tai erikseen Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan kanssa. Yksinkertaisuutensa ja helppoutensa vuoksi kantojen samanaikainen viljely on edullista. Kan-5 tojen viljely erikseen puolestaan mahdollistaa haluttaes-sa bakteerivalmisteeseen sisallytettåvien kantojen suhtei-den vaihtelun. On tietysti mahdollista kayttaa molempien bakteerien kylmakuivattuja valxnisteita, jotka rekonsti-tuoidaan yhdessa tai erikseen.
10 Edullisesti Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC- 705 -kantaa sisaltavaån kasvuliemeen lisatåan Propionibac-terium-sukuun kuuluvia bakteereja tai Lactobacillus casei -bakteerin toisen kannan soluja tai kantaa viljellaan Pro-pionibacterium-sukuun kuuluvan bakteerin tai Lactobacillus 15 casei -bakteerin toisen kannan kanssa. Edullisina valmis-teina pidetaån niitå, jotka sisaltavat Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa ja Propionibacterium sher-manii JS -kantaa tai Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa ja Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum 20 1931 -kantaa.
Kaikkein edullisinta on lisatå Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa sisåltavaan kasvuliemeen Propionibacterium shermanii JS -kantaa tai viljella mai-nittuja kantoja yhdessa.
25 Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan solususpensiota yksin tai yhdessa Propionibacterium-sukuun kuuluvan bakteerin, esimerkiksi Propionibacterium shermanii JS -kannan, kanssa tai Lactobacillus casei -bakteerin toisen kannan, esimerkiksi Lactobacillus casei ssp. pseu-30 doplantarum 1931 -kannan, kanssa voidaan kayttaa hiivojen ja homeiden aiheuttamien ongelmien ehkaisemiseksi monilla teollisuuden alueilla, esimerkiksi hiivojen ja homeiden kasvun ehkaisemiseksi valmistusprosessin aikana tai hiivojen ja homeiden aiheuttaman pilaantumisen eståmiseksi mm. 35 elintarviketeollisuuden, panimoteollisuuden ja rehuteol- lisuuden tuotteissa.
7 92498
Esilla olevaa keksintoå kuvataan yksityiskohtaisem-min seuraavien esimerkkien avulla. Nåmå esimerkit annetaan vain keksinnon valaisemiseksi, eika niitå pida katsoa sen suojapiiria mitenkåån rajoittavaksi.
5 Esimerkki 1
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan tuottaminen
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa kasvatettiin herapohjaisella alustalla, joka sisalsi 5 % 10 herapermeaattia (Valio), 2 % kaseiinihydrolysaattia (Va- lio) ja 1 % hiivauutetta (Difco) tislatussa vedessa. Muun-telu ravinnekomponenttien suhteen on mahdollista. Kasva-tuksen aikana alustan pH pidettiin arvossa 4,5 automaat-tisen pH-såådon avulla. Kasvatus tehtiin panoskasvatuksena 15 30 - 37 °C:ssa kahden vuorokauden ajan, minka jalkeen solut otettiin talteen niiden ollessa stationaarisen kas-vun vaiheessa. Bakteeripitoisuus soluja sisaltavassa kas-vuliemessa oli suuruusluokkaa 109 CFU/ml. Soluja sisaltavaa kasvulientå voidaan kayttaa sellaisenaan tai konsentroitu-20 na. Konsentraatin valmistamiseksi soluja sisaltåva kasvu-liemi konsentroidaan esimerkiksi 10 - 15-kertaiseksi. Kon-sentrointi suoritettiin kayttaen mikrosuodatuslaitteistoa. Muuta vastaavaa tapaa voidaan myos kayttaa. Konsentraatin bakteeripitoisuus oli suuruusluokkaa 1010 CFU/ml. Kasvu-".25 liemi såilytettiin sellaisenaan tai konsentraattina noin 4 °C:ssa tai kylmakuivattuna.
Esimerkki 2
Propionibacterium shermanii JS -kannan tuottaminen
Propionibacterium shermanii JS -kantaa kasvatettiin 30 propioniravintoliemessa 3 vrk 30 °C:ssa erlenmeyerpullos-sa. Propioniravintoliemi sisalsi 0,5 % tryptonia (Difco), 1,0 % hiivauutetta (Difco) ja 4,1 % natriumlaktaattia (30-%:inen, Valio) tislatussa vedessa. Muuntelu ravinnekomponenttien suhteen on mahdollista. Kasvatuksen ollessa sta-35 tionaarisessa vaiheessa solut kasvatusliemessMan otettiin • · 8 92498 talteen. Propionibacterium shermanii JS -pitoisuus oli suuruusluokkaa 1010 CFU/ml. Soluja sisaltåvåå kasvulienta voidaan kåyttåå sellaisenaan tai konsentroituna. Konsent-rointi voidaan suorittaa esimerkisså l mainitulla tavalla.
5 Solususpensio (kasvuliemi soluineen) voidaan såilyttåå sellaisenaan tai konsentroituna noin +4 °C:ssa.
Esimerkki 3
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa ja Propionibacterium shermanii JS -kantaa sisåltåvan val-10 misteen muodostaminen
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kanta ja Propionibacterium shermanii JS -kanta siirrostettiin hera-pohjaiseen kasvulieroeen suhteessa 1:2 tai 1:5 riippuen lopputuotteen halutusta propionihappomååråstå. Herapohjai-15 sen alustan koostumus oli 1) 3,5 % herapermeaattia, 1,0 % kaseiinihydrolysaattia, 1,0 % hiivauutetta ja 0,5 % nat-riumsitraattia, 2) 3,5 % herapermeaattia, 1,0 % kaseiinihydrolysaattia, 1,0 % hiivauutetta, 0,5 % natriumsitraat-tia ja 0,5 % natriumkloridia tai 3) 4,0 % herapermeaattia, 20 1,0 % kaseiinihydrolysaattia ja 1,0 % hiivauutetta.
Kantoja kasvatettiin kolme vuorokautta 30 °C:ssa pitåen pH arvossa 4,5 automaattisen pH-såådon avulla. Kas-vatuksen lopussa kasvuliemi soluineen otettiin talteen. Tållainen soluja sisåltåvå kasvuliemi on kåyttokelpoinen • 25 ainakin kaksi kuukautta kylmåsså såilytettynå.
Homeiden ja hiivojen kasvua eståvånå valmisteena kåytettiin soluja sisaltåvåå kasvulientå, jossa kummankin bakteerin pitoisuus oli yli 108 CFU/ml. Valmisteen maito-happopitoisuus oli noin 0,8 - 1,3 %, propionihappopitoi-30 suus riippuen kåytetystå ymppimååråstå (esim. 1 % tai 5 %) noin 200 - 550 mg/100 g ja etikkahappopitoisuus noin 150 -250 mg/100 g.
Valmiste keståå kuumentamista 55 °C:ssa 15 minuutin ajan menettåmåttå aktiivisuuttaan kokonaan, mutta kåsitte-35 ly 70 °C:ssa heikentåå sen hiivoja ja homeita eståvåå vai- 9 92498 kutusta selvåsti. Valmisteen pH voitiin nostaa arvoon 8 sen aktiivisuuden tasta karsimåtta.
Esimerkki 4
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa 5 ja Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum 1931 -kantaa sisaltavån valmisteen muodostaminen
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 - ja Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum 1931 -kantoja kas-vatettiin 2-3 vrk 30 - 37 °C:ssa herapohjaisessa kasvu-10 alustassa, joka sisalsi 5,0 % herapermeaattia, 2,0 % ka-seiinihydrolysaattia ja 1,0 % hiivauutetta. Kasvuliemi so-luineen konsentroitiin mikrosuodatuslaitteistolla. Homei-den ja hiivojen estoon kaytettiin kasvulienta sellaisenaan (bakteeripitoisuus suuruusluokkaa noin 1010 CFU/ml) tai 15 konsentroituna siten, etta bakteeripitoisuudet olivat suuruusluokkaa noin 1010 CFU/ml.
Esimerkki 5
Homeiden ja hiivojen inhibointi Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannalla 20 Estokokeessa kaytettiin elintarvikkeista, kuten leivistå ja juustoista, eristettyja Penicillium-. Aspergillus- ja Cladosporium-sukuihin kuuluvia homeita ja såi-lorehusta eristettya Fusarium sp. -hometta seka leivistå eristettyja Candida-sukuun kuuluvia hiivoja.
* 25 Homeet ja hiivat Fusarium-hometta lukuun ottamatta nuorennettiin kahdesti ennen varsinaista koetta mallasagar (MEA) -vinopinnolla. Viimeinen kasvatus tehtiin 25 °C:ssa 2-3 vrk. Mallasagar sisalsi 2 % mallasuutetta (Difco), 0,1 % peptonia (Difco), 2,0 % glukoosia ja 1,5 % agaria. 30 Fusarium-home nuorennettiin peruna-dekstroosi-agarissa (Potato-Dextrose-agar, PD-agar, LAB M).
Home- tai hiivavinopinnalle pipetoitiin 5 ml ste-riilia, 0,9-%:ista natriumkloridiliuosta, johon vinopinnan kasvusto suspendoitiin varovasti steriilillå silmukalla 35 raaputtamalla. Tåtå suspensiota pipetoitiin 1 ml 100 • • « 10 92498 ml:aan steriilia, 0,9-%:ista natriumkloridiliuosta. Home/-hiivapitoisuus oli talloin 105 - 106 CFU/ml. Tasta perus-suspensiosta levitettiin 0,1 ml kullekin koemaljalle.
1 ml (tai 0,5 ml) esimerkissa 1 kuvattua valmistet-5 ta (bakteeripitoisuus noin 109 CFU/ml) pipetoitiin maljal-le, johon valettiin 10 ml 45-°C:ista PC-agaria (Plate-Count-agar, Difco) ja annettiin jåhmettya. Fusarium-ho-meella kåytettiin PD-agaria (Potato-Dextrose-agar, LAB M) . Jahmettyneen agarin paålle pipetoitiin 0,1 ml edellå ku-10 vattua home- tai hiivasuspensiota ja levitettiin tasaises-ti maljalle. Maljoja kasvatettiin 1 vrk 30 °C:ssa ja sit-ten 2 vrk 25 °C:ssa. Kasvatuksen jalkeen maljoja verrat-tiin kontrollimaljoihin, joihin ei ollut lisatty koeval-mistetta. Maljoilta luettiin home- tai hiivakasvuston voi-15 makkuus kontrollin kasvustoon verrattuna.
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan estovaikutus 10 %:n ja 5 %:n pitoisuutena hiivoja ja ho-meita vastaan on esitetty taulukossa l. Taulukossa esiin-tyvat home- ja hiivalajien lyhenteet tarkoittavat homeita 20 Penicillium sp. 1 (16A), Penicillium sp. 2 (114), Penicil-lium digitatum (L5), Aspergillus niaer (L22), Cladosporium sp. 1 (PI), Penicillium sp. 3 (MZ1) ja Fusarium sp. 1 (FH- 1) seka hiivoja Candida sp. 1 (L9) ja Candida lusitaniae (L18). Taulukossa esitettyjen tulosten tulkinta on seuraa-: 25 va: +++ = erittain voimakas homekasvusto, kuten kontrol-lissa; ++ = hyva homekasvusto; + = heikko homekasvusto; - = ei homekasvustoa. Taulukossa kaytetty lyhenne SS tar-koittaa soluja sisaltavåå kasvulienta.
I! 11 92498
Taulukko 1. LC-705 -valmisteen estovaikutus
Inhibiittori Home/hiiva 114 16A L5 L9 L18 L22 PI MZ1 FH-1 5 _ SS 5 % +++ ++ ++ +++ + +++ +++ ++ SS 10 % +++ - ++ ++ - -
Kontrolli +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 10 _
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kanta esti 10 %:n pitoisuutena Penicillium sp. (16A ja MZ1) , Cladosporium sp. (PI) ja Fusarium (FH-1) -homeita seka 15 Candida-hiivoja. Sen sijaan 5 %:n lisays esti taydellises- ti vain Fusarium-homeen (FH-1) kasvun.
Esimerkki 6
Homeiden ja hiivojen inhibointi Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan ja Propionibacterium sher-20 manii JS -kannan yhdistelmalla (1:2)
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 ja Propionibacterium shermanii JS -valmiste (LC-705 ja JS -val-miste, 1:2) oli valmistettu esimerkissa 3 kuvatulla ta-valla. Valmisteen estovaikutus 10 %:n pitoisuutena seka : 25 solususpensiona etta solususpension konsentraattina hiivo-ja ja homeita vastaan tutkittiin esimerkissa 5 Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannalle kuvatulla taval-la. Tulokset on esitetty taulukossa 2. Taulukossa esiinty-vat home- ja hiivalajien lyhenteet ja esitettyjen tulosten 30 tulkinta ovat kuten edella esimerkissa 5. Taulukossa kåy-tetty lyhenne SS tarkoittaa soluja sisaltavaa kasvulientå, lyhenne Kons tarkoittaa konsentroitua soluja sisaltavaa kasvulientå ja lyhenne SN tarkoittaa soluja sisåltåmåtontå kasvulientå.
• · 12 92498
Taulukko 2. LC-705 ja JS (1:2) -valmisteen esto-vaikutus
Inhibiittori Home/hiiva 5 16A L5 L9 L18 L22 PI MZ1 FH-1 SS 10 % - - --
Kons 10 % +++ + +++ - - - 10 SN 10 % +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
Kontrolli +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
Soluja sisaltavallå kasvuliemellå (SS) Penicillium 15 (16A, L5 ja MZ1), Cladosporium (PI), Aspergillus niaer (L22) ja Fusarium (FH-1) -homeiden kasvu estyi taysin. Myos hiivojen (L9) ja (L18) kasvu estyi taysin. Konsent-roidulla solususpensiolla kasitellyistå maljoista homekas-vua esiintyi kahdella ja hiivakasvua yhdella maljalla.
20 Soluviljelman supernatantti, josta solut oli sentrifugoitu pois, (SN), ei vaikuttanut lainkaan homeiden eika hiivojen kasvua eståvåsti.
Esimerkki 7
Homeiden ja hiivojen inhibointi Lactobacillus casei 25 ssp. rhamnosus LC-705 -kannan ja Propionibacterium Sherman i i JS -kannan yhdistelmalla (1:5)
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 ja Propionibacterium shermanii JS -valmiste (LC-705 ja JS -val-miste, 1:5) oli valmistettu esimerkissa 3 kuvatulla ta-30 valla. Valmisteen estovaikutus 5 %:n pitoisuutena seka solususpensiona etta solususpension konsentraattina hiivo-ja ja homeita vastaan tutkittiin esimerkissa 5 Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannalle kuvatulla taval-la. Tulokset on esitetty taulukossa 3. Taulukossa esiinty-35 vat home- ja hiivalajien lyhenteet, esitettyjen tulosten
II
13 92498 tulkinta ja muut lyhenteet ovat kuten edella esimerkeisså 5 ja 6.
Taulukko 3. LC-705 ja JS (1:5) -valmisteen esto· 5 vaikutus
Inhibiittori hiiva/home 114 L5 L9 L18 L22 PI MZ1 FH-1 10 SS 5% + + — + — — — _ SN 10 % +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++
Kontrol li +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 15 Soluja sisaltåvålla kasvuliemellå (SS) Aspergillus niaer (L22), Penicillium sp. (MZ1), Cladosporium sp. (PI) ja Fusarium sp. (FH-1) -homeiden kasvu estyi taysin. Myos hiivan Candida sp. 1 (L9) kasvu estyi taysin. Penicillium sp. 2 ja Penicillium diaitatum (114 ja L5) -homeiden sekå 20 hiivan Candida lusitaniae (L18) kasvu heikkeni selvasti.
Soluviljelmån supernatantti, josta solut oli sentrifugoitu pois, (SN), ei vaikuttanut lainkaan homeiden eikå hiivojen kasvua estavasti.
Esimerkki 8 : 25 Homeiden ja hiivojen inhibointi Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 - kannan ja Propionih»eterium sher-manii JS -kannan yhdistelmallå (1:1)
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa ja Propionibacterium shermanii JS -kantaa kasvatettiin 30 esimerkissa 1 ja vastaavasti esimerkissa 2 kuvatuilla ta-voilla, minka jalkeen kasvuliemet soluineen yhdistettiin suhteessa 1:1. Yhdisteen estovaikutus homeita ja hiivoja vastaan tutkittiin esimerkissa 5 Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannalle kuvatulla tavalla. Tulokset on 35 esitetty taulukossa 4. Taulukossa esiintyvat home- ja hii- • ♦ • < ----- ---- τ— 92498 14 valajien lyhenteet, esitettyjen tulosten tulkinta ja muut lyhenteet ovat kuten edellå esimerkisså 5.
Taulukko 4. LC-705 ja JS (1:1) -valmisteen esto-5 vaikutus
Inhibiittori Home/hiiva 114 L9 L22 PI MZ1 10 SS 5 % ++ ++ + + + SS 10 % +
Kontrolli +++ +++ +++ +++ +++ 15
Valmiste esti maljakokeissa 10 %:n lisåyksenå hii-van Candida sp. 1 (L9) kasvun sekå homeiden Aspergillus niger (L22), Cladosporium sp.l (PI) ja Penicillium sp. 3 (MZ 1) kasvun kokonaan. 5 %:n pitoisuutena valmiste hidas-20 ti homeiden L22, PI ja MZ kasvua selvåsti.
Esimerkki 9
Homeiden ja hiivojen inhibointi Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan ja Lactobaci1lus casei ssp. pseudoplantårum 1931 -kannan yhdistelmalla ·* 25 Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 ja Lacto bacillus casei ssp. pseudoplantarum 1931 -valmiste (LC-705 ja 1931 -valmiste, 1:1) oli valmistettu esimerkissa 4 kuvatulla tavalla. Valmisteen estovaikutus 10 %:n pitoisuutena sekå solususpensiona ettå solususpension konsent-30 raattina hiivoja ja homeita vastaan tutkittiin esimerkissa 5 Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannalle kuvatulla tavalla. Tulokset on esitetty taulukossa 5. Taulu-kossa esiintyvåt home- ja hiivalajien lyhenteet, esitettyjen tulosten tulkinta ja muut lyhenteet ovat kuten edel-35 lå esimerkeisså 5 ja 6.
• • · 15 92498
Taulukko 5. LC-705 ja 1931 (1:1) -valmisteen esto-vaikutus
Inhibiittori home/hiiva 5 114 16A L5 L9 L18 L22 PI MZ1 SS 10 % ++ + ++ - ++
Kons 10%-- -- 10 SN 10 % +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
Kontrolli +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
Valmisteista tehokkain homeiden ja hiivojen estossa 15 oli konsentroitu soluja sisaltavå kasvuliemi (solukonsent-raatti). Soluja sis&ltava kasvuliemi sellaisenaan oli huo-mattavasti heikompi aktiivisuudeltaan kuin konsentraatti, eika soluviljelman supernatantti, josta solut oli sentri-fugoitu pois, (SN), vaikuttanut lainkaan homeiden eika 20 hiivojen kasvua estMvåsti.
Esimerkki 10
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa sisaltavien valmisteiden kaytto sailorehun valmistuksessa
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa 25 ja Propionibacterium shermanii JS-kantaa kasvatettiin fer- mentorissa 3 vrk 30 °C:ssa pH:ssa 4,5. Kasvatusalustan koostumus oli seuraava: 4 % herapermeaattia, 1 % kaseiini-hydrolysaattia ja 1 % hiivauutetta. Valmisteena kaytettiin solususpensiota (kasvuliemi soluineen), jonka solupitoi-30 suudet olivat LC-705:Ile 1,2 x 109 kpl/ml ja JS:lle 1,1 x 109 kpl/ml.
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus -kantaa LC-705 ja Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum -kantaa 1931 kasvatettiin yhdessa yhteispitoisuuteen noin 2 x 1011 35 CFU/ml fermentorissa 2 vrk 30 °C:ssa pH:ssa 4,5. Kasvatus- 16 92498 alustan koostumus oli seuraava: 4 % herapermeaattia, 1 % kaseiinihydrolysaattia, 1 % hiivauutetta ja 0,1 % Tween 80:ta. Valmisteena kaytettiin solukonsentraattia, jonka solupitoisuus oli 2 x 1011 CFU/ml.
5 Lactobacillus plantarum -kantaa LB 7.5-5 kasvatet- tiin fermentorissa H-alustalla, joka sisalsi 5 % herapermeaattia, 0,5 % kaseiinihydrolysaattia, 0,25 % hiivauutetta, 0,05 g/1 MnS04:a ja 0,1 % Tween 80:tå, 20 tuntia 30 °C:ssa pH:ssa 5,4. Valmisteena kaytettiin solususpen-10 siota, jonka solupitoisuus oli 7 x 1010 CFU/ml.
Fusarium-hometta (F67) kasvatettiin PD-agar-vino-pinnalla 3 vrk 25 °C:ssa, minka jalkeen kasvusto suspen-doitiin steriiliin, 0,9-%:iseen natriumkloridiliuokseen. Homepitoisuus suspensiossa oli noin 106 CFU/ml. Rehussa 15 pitoisuus oli noin 10 - 100 CFU/g.
Valmisteet sekoitettiin esikuivattuun sailorehuun (15 kg) sumuttamalla, minkå jalkeen rehu pakattiin tii-viisti siiloihin. Tulokset on esitetty seuraavissa taulu-koissa 6-8. Siilo 1 on kontrollisiilo ilman valmiste-20 tai homeymppia. Siilo 2 on nayte, joka kasiteltiin valmis-teella LC-705 + JS (2,5 %) + F67. Siilo 3 on nayte, joka kasiteltiin valmisteella LC-705 + 1931 (2,5 %) + F67. Siilo 4 on nayte, joka kasiteltiin valmisteella LB 7,5-5 (2,5 %) + F67. Siilo 5 on nayte, joka kasiteltiin valmisteella , 25 F67 (10 -100 CFU/ml). Siiloista otettiin naytteet heti li- sayksen jalkeen ennen siilojen sulkemista ja kymmenen vii-kon kuluttua lisayksestå.
Koliformiset bakteerit maåritettiin VRB-agarilla (Violet Red Bile -agar, LAB M) , maitohappobakteerit MRS-30 agarilla ja kokonaisbakteerit PC-agarilla.
II
17 92498
Taulukko 6. Såilorehun mikrobien alkupitoisuudet (CPU/g) 5
Siilo Kolit MH-bakt. Kok.bakt. Prop.bakt.
1. 8,4xl07 1,6xl07 2,0x10® * 2. 1,0x10® 3,8xl07 2,2x10® 2,0xl07 10 3. 4,1x10® 2,0x109 2,7xl09 * 4. 1,9x10® 7,1X10® Ι,ΟΧΙΟ9 * 5. 3,4x10® 2,4xl07 4,5x10® * * = ei osoitettavissa 15
Taulukko 7. Såilorehun mikrobien loppupitoisuudet (CPU/g)
Siilo Kolit MH-bakt. Kok.bakt 20 ~ 1. <10 6,1x10' <1000 2. <10 Ι,ΟΧΙΟ9 <1000 3. <10 1,2xl09 <1000 4. <10 1,6X10® <1000 5. <10 9,0xl07 <1000 25 Taulukko 8. Såilorehun hiiva- ja homepitoisuudet (CPU/g)
Siilo Hiivat Homeet 30 Aika 0 vk 10 vk li vk 0 vk 10 vk 11 vk 1. 2,6xl05 2x10* 5x10® 2,8xl05 <1000 <1000 2. 1,9X105 <1000 3X105 1,8X105 <1000 <1000 3. 5,0xl05 <1000 1X107 3,lxl05 <1000 3xl06 4. 6,0X10* 1,9xl05 7X10® l,6xl05 <1000 2x10® 35 5. 2,6xl05 2,6xl06 5x10® 8,2xl05 <1000 2x10* 18 92498
Kymmenen viikon sailytyksen jalkeen avatuissa sii-loissa oli eroja ulkonaossa. Kaikkiin muihin siiloihin paitsi siiloon 2 oli muodostunut silmin havaittavaa val-keaa pintakasvustoa, joka ilmeisesti oli hiivakasvustoa.
5 Eniten hiivakasvustoa oli siiloissa 1 ja 5. Mikrobiologisten maaritysten (maaritysherkkyys <1 000) mukaan siilossa 2 eika myoskaan siilossa 3 ei ollut aerobisia bakteereita eika hiivoja ja homeita. Siiloissa 1, 4 ja 5 oli aerobisia mikrobeja avaushetkella.
10 Siiloista vielå viikkoa myohemmin (11 viikkoa ko- keen alusta) tehtyjen maaritysten mukaan kaikkiin siiloihin kehittyi hiivakasvusto. Hiivapitoisuus oli alhaisin siilossa 2. Homekasvusto kehittyi siiloihin 3, 4 ja 5.
Siiloon 2 lisatty ymppi oli estanyt homeen kasvun.
15 Esimerkki 11
Lactobacillus casei ssp. rhamnoaus LC-705 -kantaa sisaltavan valmisteen kaytto hapanleivan homehtumisen es-toon
Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa 20 ja Prooionibacterium shermanii JS -kantaa siirrostettiin suhteessa 1:5 herapohjaiseen kasvualustaan, joka sisalsi 3,5 % herapermeaattia, 1,0 % kaseiinihydrolysaattia, 1,0 % hiivauutetta ja 0,5 % natriumsitraattia. Kantoja kasvatet-tiin 3 vrk 30 °C:ssa pH:ssa 4,5. Kasvuliemi soluineen , 25 otettiin talteen ja kaytettiin sellaisenaan hapanleipatai-kinalisayksena. Valmisteen bakteeripitoisuudet olivat LC-705: lie 3 x 109 CFU/ml ja JSrlle 4 x 109 CFU/ml.
Valmistetta lisattiin 10 % ja lisays huomioitiin taikinan veden maarassa.
30 Vertailuleipana kaytettiin valmistajan kaupallista hapanleipåå. Leivistå paistettiin vuokaleipia, joista 24 kpl sailytettiin kokonaisina ja 86 kpl viipaloitiin. Lei-pien homehtumista seurattiin silmamaaraisesti 21 vrk.
Tulokset on esitetty taulukossa 9.
II
19 92498
Taulukko 9. Hapanleipien homehtuvuus 5 vrk Vertailuleipå Koeleipå kokonainen viipaloitu kokonainen viipaloitu 5 0/24 0/5 0/24 0/5 6 3/24 0/5 0/24 0/5 7 8/24 2/5 0/24 0/5 10 10 11/24 5/5 1/24 2/5 11 15/24 5/5 2/24 1/5 12 15/24 3/24 2/5 13 15/24 3/24 5/5 14 16/24 5/24 3/5 17 16/24 13/24 5/5 18 16/24 14/24 4/5 15 20 19/24 15/24 4/5 21 19/24 15/24 29/31
Vertailuleivat pilaantuivat nopeammin kuin valmis-teella kåsitellyt leivåt. Ensimmåiset homeet todettiin 20 vertailuleivisså 6 vrk:n jålkeen ja koeleivisså vasta 10 vrk:n jålkeen. Kokonaisista vertailuleivistå oli låhes 50 % pilaantunut 10 vrk:n jålkeen, kun vastaavasti valmis-teella kåsitellyistå leivistå vasta 17 vrk:n jålkeen oli 50 % pilaantunut. Viipaloiduista leivistå vertailuleivåt 25 pilaantuivat huomattavasti nopeammin. Vertailuleivistå påivittåin seuratuista 5 pakkauksesta kaikki 5 olivat pi-laantuneita jo 10 vrk:n ja 11 vrk:n kuluttua, joten seu-ranta vertailuleipien osalta lopetettiin. Leivistå, jois-sa oli valmistelisåys, ensimmåisen kerran kaikki 5 paket-30 tia olivat pilaantuneet 13 vrk:n kuluttua, mutta seuraavan påivån leivistå vain 3 pakettia oli pilaantunut.

Claims (9)

20 92498
1. Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705, DSM 7061.
2. Hiivojen ja hoxneiden torjuntaan kayttokelpoinen bakteerivalmiste, tunnettu siitå, ettå se sisål-tåa Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, solususpensiona kasvuliemessa yksin tai yhdessa Propionibacterium-sukuun kuuluvan bakteerin tai
10 Lactobacillus casei -bakteerin toisen kannan kanssa.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen bakteerivalmiste, tunnettu siita, etta se sisåltåa Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, yhdessa Propionibacterium shermanii JS -kannan, DSM 7067, kanssa.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen bakteerivalmiste, tunnettu siita, etta se sisåltåa Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, yhdesså . Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum 1931 -kannan kanssa.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 2-4 mukainen bak teerivalmiste, tunnettu siitå, ettå solususpensio on konsentroitu.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 2-5 mukainen bakteerivalmiste, tunnettu siitå, ettå se lisåksi 25 sisåltåa tavanomaisia hiivojen ja homeiden torjuntaan kåy- tettåviå aineita, kuten propionaattia tai fenyylialanii-nia.
7. Lactobaci1lus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kannan, DSM 7061, kåytto hiivojen ja homeiden kasvun eståmi- 30 seksi.
8. Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, sisåltåvån bakteerivalmisteen kåytto hiivojen ja homeiden kasvun eståmiseksi. 4 92498
9. Menetelmå hiivojen ja homeiden kasvun estamisek-si, tunnettu siita, etta kaytetaan solususpensio-ta, joka sisaltåa Lactobacillus casei ssp. rhamnosus LC-705 -kantaa, DSM 7061, yksin tai yhdessa Propionibacte-5 rium-sukuun kuuluvan bakteerin tai Lactobacillus casei -bakteerin toisen kannan kanssa. 22 92498
FI922699A 1992-06-10 1992-06-10 Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan FI92498C (fi)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI922699A FI92498C (fi) 1992-06-10 1992-06-10 Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
EP93100402A EP0576780B1 (en) 1992-06-10 1993-01-13 A novel microorganism strain, bacterial preparations comprising said strain, and use of said strain and preparations for the controlling of yeasts and moulds
AT93100402T ATE173502T1 (de) 1992-06-10 1993-01-13 Mikroorganismus-stamm, bakterielles präparat dieses stammes, verwendung dieses stammes und dieses präparates, um hefe und schimmel zu bekämpfen
DK93100402T DK0576780T3 (da) 1992-06-10 1993-01-13 En hidtil ukendt mikroorganismestamme, bakteriepræparater omfattende stammen og anvendelse af stammen og præparaterne til h
DE69322131T DE69322131T2 (de) 1992-06-10 1993-01-13 Mikroorganismus-Stamm, bakterielles Präparat dieses Stammes, Verwendung dieses Stammes und dieses Präparates, um Hefe und Schimmel zu bekämpfen
ES93100402T ES2125278T3 (es) 1992-06-10 1993-01-13 Una cepa de microorganismo, una preparacion bacteriana que comprende esta cepa, utilizacion de esta cepa y de esta preparacion para el control de levaduras y mohos.
US08/129,378 US5378458A (en) 1992-06-10 1993-09-30 Lactobacillus casei ssp. rhamosus, bacterial preparations comprising said strain, and use of said strain and preparations for the controlling of yeast and moulds

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI922699A FI92498C (fi) 1992-06-10 1992-06-10 Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
FI922699 1992-06-10

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI922699A0 FI922699A0 (fi) 1992-06-10
FI922699A FI922699A (fi) 1993-12-11
FI92498B FI92498B (fi) 1994-08-15
FI92498C true FI92498C (fi) 1994-11-25

Family

ID=8535466

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI922699A FI92498C (fi) 1992-06-10 1992-06-10 Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5378458A (fi)
EP (1) EP0576780B1 (fi)
AT (1) ATE173502T1 (fi)
DE (1) DE69322131T2 (fi)
DK (1) DK0576780T3 (fi)
ES (1) ES2125278T3 (fi)
FI (1) FI92498C (fi)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020052869A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Lactobio Aps Method for reducing the transfer of pathogenic microorganisms
WO2020098988A1 (en) 2019-01-04 2020-05-22 Lactobio Aps Strains, composition and method of use
WO2020234382A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Lactobio Aps Composition for treatment, alleviation or prophylaxis of acne
WO2020249734A1 (en) 2019-06-13 2020-12-17 Lactobio Aps A gel composition comprising viable microorganisms
WO2022148699A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Lactobio A/S Strains, compositions and methods of use
WO2022148700A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Lactobio A/S Strains, compositions and methods of use

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9315275D0 (en) * 1993-07-23 1993-09-08 Biotal Ltd Formulation for treating silage
FI102807B (fi) * 1994-08-25 1999-02-26 Valio Oy Lactobacillus rhamnosuksen käyttö elintarviketeollisuudessa klostridie n estoon
GB2310124B (en) * 1996-02-15 1998-01-28 Biotal Ltd Microorganisms and their use in treating animal feed and silage
AUPN907296A0 (en) * 1996-04-02 1996-04-26 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Biocontrol agents for use in treatment of opportunistic infections
US6645506B1 (en) * 1997-04-18 2003-11-11 Ganeden Biotech, Inc. Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
DE69842080D1 (de) * 1997-04-18 2011-02-10 Ganeden Biotech Inc Oberflächige Verwendung von probiotischen Bacillussporen zur Verhinderung oder Bekämpfung von mikrobiellen Infektionen
FI109602B (fi) 2001-01-25 2002-09-13 Valio Oy Probioottiyhdistelmä
EP1308506A1 (en) * 2001-11-06 2003-05-07 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Mixtures of Propionibacterium jensenii and Lactobacillus sp. with antimicrobial activities for use as a natural preservation system
US7300787B2 (en) * 2002-07-05 2007-11-27 Archer-Daniels-Midland Company Lactobacillus strains and use thereof in fermentation for L-lactic acid production
KR100481790B1 (ko) * 2002-07-16 2005-04-11 주식회사한국야쿠르트 락토바실러스 스피시스 에이치와이1213
FI113057B (fi) * 2002-11-04 2004-02-27 Valio Oy Menetelmä hiivojen kasvun estämiseksi
EP1588631A4 (en) * 2003-01-23 2006-05-17 Kyowa Hakko Food Specialties C METHOD FOR IMPROVING THE STORAGE CHARACTERISTICS OF FOOD AND BEVERAGE
WO2004104175A2 (en) * 2003-05-14 2004-12-02 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Probiotic bacteria and methods
US8568710B2 (en) * 2004-07-29 2013-10-29 Meiji Seika Pharma Co., Ltd. Plant disease controlling agent and controlling method
KR101262403B1 (ko) * 2004-12-17 2013-05-08 후지 세이유 가부시키가이샤 빵류 보존성 개량재 및 이것을 사용한 빵류
US20070231311A1 (en) * 2006-04-03 2007-10-04 Kroening Kurt D Method for preserving grain by-products
US20080152758A1 (en) * 2006-12-22 2008-06-26 Zuoxing Zheng Refrigerated Dough with Enhanced Microbiological Safety
FR2924307B1 (fr) * 2007-12-04 2010-08-27 Gervais Danone Sa Utilisation de l. casei ssp. paracasei comme antifongique
JP5270925B2 (ja) 2008-02-07 2013-08-21 雪印メグミルク株式会社 微生物保護剤及び微生物の凍結又は凍結乾燥菌体の製造方法
CN102369274B (zh) * 2009-03-30 2014-08-27 株式会社明治 培养乳酸细菌的方法及生产发酵乳的方法
FI20096058A0 (fi) 2009-10-13 2009-10-13 Valio Oy Koostumuksia ja niihin liittyviä menetelmiä ja käyttöjä
WO2011095372A1 (en) * 2010-02-03 2011-08-11 Unilever Nv A preservative composition
DE102010061431A1 (de) * 2010-12-21 2012-06-21 Ernst Böcker Gmbh & Co. Kg Zwei-Phasen Fermentation
JP6073857B2 (ja) 2011-04-08 2017-02-01 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ 合成抗微生物効果
DK2836588T3 (en) 2012-04-09 2017-05-22 Chr Hansen As Bioprotection using Lactobacillus paracasei strains
HUE034259T2 (en) 2012-04-09 2018-02-28 Chr Hansen As Biological protection using Lactobacillus rhamnosus strains
RU2642306C2 (ru) * 2012-05-21 2018-01-24 ДюПон НЬЮТРИШН БАЙОСАЙЕНСИЗ АпС Штамм lactobacillus, обладающий ингибирующей активностью против дрожжей и плесневых грибов (варианты), и его применение
DK2852290T3 (en) 2012-05-21 2019-01-21 Dupont Nutrition Biosci Aps STREAMS OF PROPIONIBACTERIUM
WO2014209912A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Starbucks Corporation D/B/A Starbucks Coffee Company Biopreservation methods for beverages and other foods
UA127431C2 (uk) 2015-08-31 2023-08-23 Кр. Гансен А/С Бактерія lactobacillus rhamnosus з протигрибковою активнiстю
CN111187729A (zh) * 2019-11-14 2020-05-22 华东师范大学 具有协同抑霉菌活性的丙酸杆菌和乳酸菌组合菌的筛选方法
WO2023152390A1 (en) * 2022-02-14 2023-08-17 Dupont Nutrition Biosciences Aps Protective cultures combination
CN118580985A (zh) * 2023-03-01 2024-09-03 重庆市天友乳业股份有限公司 干酪乳杆菌ty-f14及其应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU751382A1 (ru) * 1979-04-16 1980-07-30 Украинская Ордена Трудового Красного Знамени Сельскохозяйственная Академия Способ борьбы с плесневением кормов
US5096718A (en) * 1982-09-17 1992-03-17 The State Of Oregon Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University Preserving foods using metabolites of propionibacteria other than propionic acid
US4806353A (en) * 1983-09-27 1989-02-21 Thomas Richard D Mold inhibiting product
EP0141642A1 (en) * 1983-11-02 1985-05-15 Stauffer Chemical Company Improved fermentation process
US4794080A (en) * 1984-04-16 1988-12-27 Igene Biotechnology, Inc. Microbial co-culture production of propionic acid
US4842871A (en) * 1985-08-01 1989-06-27 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method and inoculant for preserving agricultural products for animal feed
US4956177A (en) * 1985-11-04 1990-09-11 Microlife Technics, Inc. Method for inhibiting fungi
CA1320165C (en) * 1987-08-06 1993-07-13 Microlife Technics, Inc. Process for producing novel yeast and mold inhibiting products
US4863747A (en) * 1987-10-22 1989-09-05 Pioneer Hi-Bred International Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus Bacillus
IT1227154B (it) * 1988-08-05 1991-03-19 A Tosi Farmaceutici S R L Nova Composizioni farmaceutiche per uso ginecologico a base di lattobacilli
EP0408220B1 (en) * 1989-07-10 1993-09-08 ZENECA Corp. Mould control in forage
US4981705A (en) * 1989-11-06 1991-01-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacterial treatment to preserve silage
US5173319A (en) * 1990-04-24 1992-12-22 Microlife Technics, Inc. Method and composition for extending the shelf life of processed meats

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020052869A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Lactobio Aps Method for reducing the transfer of pathogenic microorganisms
WO2020098988A1 (en) 2019-01-04 2020-05-22 Lactobio Aps Strains, composition and method of use
WO2020234382A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Lactobio Aps Composition for treatment, alleviation or prophylaxis of acne
WO2020249734A1 (en) 2019-06-13 2020-12-17 Lactobio Aps A gel composition comprising viable microorganisms
WO2022148699A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Lactobio A/S Strains, compositions and methods of use
WO2022148700A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Lactobio A/S Strains, compositions and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
EP0576780B1 (en) 1998-11-18
FI922699A0 (fi) 1992-06-10
DE69322131D1 (de) 1998-12-24
ES2125278T3 (es) 1999-03-01
EP0576780A2 (en) 1994-01-05
FI922699A (fi) 1993-12-11
DK0576780T3 (da) 1999-08-02
EP0576780A3 (en) 1995-01-11
ATE173502T1 (de) 1998-12-15
US5378458A (en) 1995-01-03
DE69322131T2 (de) 1999-05-20
FI92498B (fi) 1994-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI92498C (fi) Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
Nout et al. Growth of Bacillus cereus in soyabean tempeh
US4746512A (en) Anticariogenic or antiperiodontitic agent
US8828459B2 (en) Method for reducing the content of pathogenic organisms present in food materials
Todorov et al. Influence of growth medium on bacteriocin production in Lactobacillus plantarum ST31
US20130309754A1 (en) Porphyrin containing lactic acid bacterial cells and use therof
BUCHANAN et al. CHARACTERIZATION OF A LACTIC ACID BACTERIUM, CARNOBACTERIUM PISCICOLA LK5, WITH ACTIVITY AGAINST LISTERIA MONOCYTOGENES AT REFRIGERATION TEMPERATURES 1
EP0281467B1 (en) Method of preparation of bifidobacteria-containing fermented milk
EP0698348B1 (en) Inhibition of clostridia with lactic acid bacteria
Yang et al. Antimicrobial activity of 2-pyrrolidone-5-carboxylic acid produced by lactic acid bacteria
AU648463B2 (en) Yogurt product containing bacteriocin
US9439445B2 (en) Use of L. casei ssp. paracasei as antifungal agent
Kato et al. Complete growth inhibition of Bacillus subtilis by nisin-producing lactococci in fermented soybeans
JP3001338B2 (ja) 新規の微生物株、その菌株を含む細菌製剤、および酵母およびカビの制御のための上記菌株および製剤の使用
KR0123946B1 (ko) 새로운 박테리오신 생산 유산균
US6342366B1 (en) Lactobacilli strains having inhibitory and/or microbicidal activity against pathogenic microorganisms and a method for inducing and keeping said activity in lactobacilli cultures
KR100338393B1 (ko) 젓갈 유래 박테리오신 생산균주 및 이로부터 박테리오신생산방법
Matsushita et al. PQQ, a growth-stimulating substance for microorganisms
Plockova et al. Inhibition of mould growth and spore production by Lactobacillus acidophilus CH5 metabolites
KR960009314B1 (ko) 식품품질개선용 발효산물
Vanos et al. The microbiology of instant coffee
Odame-Darkwah et al. Interactive behavior of Saccharomyces cerevisiae, Bacillus pumilus and Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii
KR910006940B1 (ko) 식품품질개선용 발효산물의 제조방법
JP3241500B2 (ja) 食品保存用抗菌剤
KR20010070689A (ko) 락토바실러스 애시도필러스 30sc 및 그 용도

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
MA Patent expired