PL197747B1 - Kompozycja zawierająca adenowirusa, sposoby zatężania preparatu wirusa oraz sposób oczyszczania preparatu wirusa - Google Patents
Kompozycja zawierająca adenowirusa, sposoby zatężania preparatu wirusa oraz sposób oczyszczania preparatu wirusaInfo
- Publication number
- PL197747B1 PL197747B1 PL342847A PL34284799A PL197747B1 PL 197747 B1 PL197747 B1 PL 197747B1 PL 342847 A PL342847 A PL 342847A PL 34284799 A PL34284799 A PL 34284799A PL 197747 B1 PL197747 B1 PL 197747B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- virus
- concentration
- preparation
- polyhydroxy hydrocarbon
- virus preparation
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 161
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 90
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 74
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 76
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims abstract description 44
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims abstract description 42
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 78
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 31
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 28
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 24
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 20
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 17
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 17
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical group [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 16
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 15
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 15
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 14
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 14
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 13
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 13
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 12
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 11
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 8
- VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M sodium;dihydrogen phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].OP(O)([O-])=O VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 7
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 4
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 claims description 2
- 101100406515 Drosophila melanogaster orb2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100258025 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) shk1 gene Proteins 0.000 claims 1
- HRYZWHHZPQKTII-UHFFFAOYSA-N chloroethane Chemical compound CCCl HRYZWHHZPQKTII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 19
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 14
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 11
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 10
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 description 7
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 5
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 5
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- ZWEVPYNPHSPIFU-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentahydroxy-n-[3-[3-(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoylamino)propyl-[4-(3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl)pentanoyl]amino]propyl]hexanamide Chemical compound OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)N(CCCNC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)CO)CCCNC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)CO)C)C1(C)C(O)C2 ZWEVPYNPHSPIFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701372 Iridovirus Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 150000001923 cyclic compounds Chemical group 0.000 description 2
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 235000013175 Crataegus laevigata Nutrition 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700025701 Retinoblastoma Genes Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 108010079785 calpain inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 159000000006 cesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical group 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000002607 heparin antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000076 hypertonic saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- XONPDZSGENTBNJ-UHFFFAOYSA-N molecular hydrogen;sodium Chemical compound [Na].[H][H] XONPDZSGENTBNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002599 prostaglandin synthase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 1
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K trisodium;phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002100 tumorsuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10351—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Kompozycja zawieraj aca adenowirusa, znamienna tym, ze zawiera adenowirus w prepara- cie zawieraj acym 20 do 200 mg/ml glicerolu, sacharoz e i uk lad buforuj acy utrzymuj acy wartosc pH w zakresie od oko lo 7 do oko lo 8,5 w temperaturze w zakresie od oko lo 2°C do 27°C, przy czym uk lad buforowy zawiera dihydrat diwodorofosfaranu sodu w stezeniu oko lo 0,5 do 10 mg/ml i trometamin e w st ezeniu oko lo 0,5 do 10 mg/ml. 13. Sposób zat ezania preparatu wirusa, znamienny tym, ze obejmuje: (a) dodawanie polihydroksyw eglowodoru do preparatu wirusa do ko ncowego st ezenia polihy- droksyw eglowodoru oko lo 20% lub wi ecej; i (b) poddawanie preparatu wirusa procesowi filtracji, w którym st ezenie wirusa zwi eksza si e przez stosowanie ci snienia na preparat, przy czym rozcie nczalnik usuwa si e z preparatu wirusa przez filtr a wirus pozostaje. 21. Sposób oczyszczania preparatu wirusa, znamienny tym, ze obejmuje : (a) poddawanie preparatu wirusa chromatografii anionowymiennej, w której wirusa eluuje si e ja- ko preparat wirusa ze srodowiska chromatografii anionowymiennej; (b) dodawanie polihydroksyw eglowodoru do preparatu wirusa z etapu (a) do st ezenia polihy- droksyw eglowodoru w preparacie oko lo 25% lub wi ecej; i (c) zwi ekszanie stezenia wirusa w preparacie wirusa z etapu (b) przez stosowanie ci snienia na preparat, przy czym rozcie nczalnik usuwa si e z preparatu wirusa przez filtr a wirus pozostaje; oraz (d) poddawanie zat ezonego preparatu wirusa z etapu (c) jednemu lub kilku dodatkowym eta- pom obróbki. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca adenowirusa o znacząco polepszonej trwałości, oraz nowe sposoby zatężania i oczyszczania preparatu wirusa. Kompozycje według wynalazku są przydatne do utrzymywania trwałości wirusów podczas przechowywania, a zawierające wirusy kompozycje według wynalazku są szczególnie przydatne do zastosowań leczniczych, takich jak terapia genowa.
Stan techniki
Wirusy stają się coraz ważniejsze w zastosowaniach leczniczych, takich jak szczepienia i terapia genowa, i istnieje zapotrzebowanie na opracowanie i wytworzenie zawierających wirusy trwałych kompozycji, które można łatwo przechowywać i transportować, z zachowaniem dostatecznego bezpieczeństwa i skuteczności. W szczególności, ze względu na szerokie zastosowanie wektorów wirusowych w terapii genowej ważne jest opracowanie i wytworzenie preparatów trwale zachowujących żywe rekombinacyjne wirusy niosące lecznicze transgeny.
Ponadto istnieje znaczne zapotrzebowanie na preparaty, które stabilizujące preparaty wirusowe w temperaturach powyżej -80°C przez dłuższy okres. Zawierające wirusy kompozycje wymagają zwykle przechowywania w temperaturze -80°C i nie mogą być przechowywane w standardowych temperaturach lodówek (np. 2°C do 8°C, lub wyższe) przez dłuższy okres. To ograniczenie jest poważną przeszkodą nie tylko dla przechowywania, lecz także dla przetwarzania, dystrybucji i szerokiego stosowania klinicznego.
Istnieje także zapotrzebowanie na opracowanie zawierających wirusy kompozycji zachowujących pH w zakresie około 7 do około 8,5 przez dłuższy czas, mimo wystawienia na temperatury lodówki, i mimo poddawania surowym warunkom, takim jak zamrażanie/odmrażanie, szczególnie dla powolnego zamrażania/odmrażania, co może zachodzić przy produkcji na większą skalę, podczas manipulacji lub dystrybucji. Utrzymanie pH jest ważne dla preparatów wirusowych, ponieważ przy pH poniżej 7,0 i powyżej 8,5 cząstki żywego wirusa są podatne na utratę żywotności wskutek fizycznej i biologicznej nietrwałości.
Dodatkowe problemy odnoszą się do rosnących stężeń wirusa. W szczególności, wysokie stężenie wirusa znacząco przyczynia się do nietrwałości wirusa. Jednak do zastosowań leczniczych konieczne są coraz wyższe stężenia wirusów i wektorów wirusowych. Istnieje ogromne zapotrzebowanie na opracowanie preparatów, które stabilizują względnie wysokie stężenia wirusa, szczególnie w surowych warunkach wspomnianych powyżej. Ponadto istnieje szczególne zapotrzebowanie na opracowanie nowych sposobów zatężania istniejących preparatów wirusów dla uzyskania trwałych preparatów w wyższych stężeniach. Problemy nietrwałości związane z wyższymi stężeniami wirusów znacząco zwiększają się, gdy próbuje się zatężać istniejący preparat wirusa. Po części przyczyną są dodatkowe mechaniczne siły poprzeczne, które pojawiają się podczas prób zwiększania stężenia istniejącego preparatu wirusa. Gdyby znaleziono sposób zatężania preparatu wirusa bez znaczącego pogorszenia trwałości wirusa, to można by łatwo wytwarzać kliniczne dawki o dowolnym żądanym stężeniu (nawet rozpoczynając od substancji o niższym stężeniu) i, co ważne, możliwość zatężania wirusa wyeliminowała by problematyczne wąskie gardła i inne problemy zmiany skali podczas procesu oczyszczania, pozwalając na znacząco wyższą przepustowość podczas różnych etapów przetwarzania, takich jak chromatografia z wykluczaniem rozmiarów.
Opis wynalazku
Wynalazek spełnia wymienione zapotrzebowania.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca adenowirusa, charakteryzująca się tym, że zawiera adenowirus w preparacie zawierającym 20 do 200 mg/ml glicerolu, sacharozę i układ buforujący utrzymujący wartość pH w zakresie od około 7 do około 8,5 w temperaturze w zakresie od około 2°C do 27°C, przy czym układ buforowy zawiera dihydrat diwodorofosfaranu sodu w stężeniu około 0,5 do 10 mg/ml i trometaminę w stężeniu około 0,5 do 10 mg/ml.
Korzystnie sacharoza występuje w stężeniu 5 do 25 mg/ml.
Korzystnie kompozycja według wynalazku ponadto zawiera stabilizator będący dwuwartościową solą metalu, a korzystnie chlorek magnezu, szczególnie korzystnie chlorek magnezu występuje w stężeniu około 0,1 do 1 mg/ml.
Także korzystnie kompozycja według wynalazku ponadto zawiera środek powierzchniowo czynny, korzystnie środkiem powierzchniowo czynnym jest polioksyetylenosorbitan, a w szczególności polisorbat 80, szczególnie korzystnie występujący w stężeniu około 0,03 do 0,3 mg/ml.
PL 197 747 B1
Także korzystnie kompozycja według wynalazku ponadto zawiera rozcieńczalnik zawierający wodę.
Korzystnie w kompozycji adenowirus występuje w stężeniu około 1 x 109 do 1 x 1013 cząstek wirusa na ml.
Korzystnie adenowirus jest rekombinacyjnym adenowirusem.
Kompozycja według wynalazku jest trwała.
Przedmiotem wynalazku także jest sposób zatężania preparatu wirusa obejmujący:
(a) dodawanie polihydroksywęglowodoru do preparatu wirusa do końcowego stężenia polihydroksywęglowodoru około 20% lub więcej; i (b) poddawanie preparatu wirusa procesowi filtracji, w którym stężenie wirusa zwiększa się przez stosowanie ciśnienia na preparat, przy czym rozcieńczalnik usuwa się z preparatu wirusa przez filtr a wirus pozostaje.
Korzystnie w sposobie według wynalazku polihydroksywęglowodorem jest glicerol.
Korzystnie proces filtracji obejmuje ultrafiltrację, także korzystnie proces filtracji obejmuje filtrację z przepływem stycznym.
Korzystnie w sposobie według wynalazku wirusem jest rekombinacyjny wirus, a w szczególności rekombinacyjnym wirusem niosącym terapeutyczny transgen do stosowania w terapii genowej, a zwłaszcza adenowirus.
Dalszym przedmiotem wynalazku jest inny sposób zatężania preparatu wirusa obejmujący:
(a) odwirowywanie kompozycji, która zawiera pierwszą warstwę zawierającą polihydroksywęglowodór w stężeniu 35% do 80% objętościowych, która jest pokryta drugą warstwą zawierającą polihydroksywęglowodór w stężeniu 5% do 30% objętościowych, która jest pokryta trzecią warstwą zawierającą wirusa; i (b) odzyskiwanie wirusa z pierwszej warstwy.
Przedmiotem wynalazku także jest sposób oczyszczania preparatu wirusa obejmujący:
(a) poddawanie preparatu wirusa chromatografii anionowymiennej, w której wirusa eluuje się jako preparat wirusa ze środowiska chromatografii anionowymiennej;
(b) dodawanie polihydroksywęglowodoru do preparatu wirusa z etapu (a) do stężenia polihydroksywęglowodoru w preparacie około 25% lub więcej; i (c) zwiękkzznie stęężnia wirusaw preepraaiewirusa z etaau (b) przze stosowanie ciśśienia na preparat, przy czym rozcieńczalnik usuwa się z preparatu wirusa przez filtr a wirus pozostaje; oraz (d) ppdddwanie zzatężoneo preeprerę wirusa z etęau Ζ() j eennmu I ub kilku etępom obróbki.
W tym sposobie korzystnie polihydroksywęglowodorem jest glicerol.
Sposób oczyszczania według wynalazku korzystnie obejmuje dodatkowy etap obróbki obejmujący chromatografię z wykluczaniem rozmiarów.
W korzystnym wykonaniu sposobu oczyszczania etap (c) obejmuje filtrację z przepływem stycznym, także korzystnie etap (c) prowadzi się stosując aparat zawierający układ filtracyjny Pellicon XL.
W sposobie oczyszczania korzystnie wirus jest rekombinacyjnym wirusem niosącym terapeutyczny transgen do stosowania w terapii genowej, a zwłaszcza wirusem jest adenowirus.
Nowe sposoby zatężania istniejącego preparatu wirusa, pozwalają na łatwe wybranie i wytworzenie klinicznych dawek w szerokim zakresie żądanych stężeń.
Twórcy wynalazku stwierdzili, że nowy sposób zwiększania stężenia wirusa daje dodatkową korzyść w postaci ułatwiania dalszego przetwarzania (np. zmniejszając lub eliminując problematyczne wąskie gardła podczas dalszego oczyszczania, pozwalając na znacząco wyższą przepustowość podczas takich etapów przetwarzania jak chromatografia z wykluczaniem rozmiarów). Zatem w korzystnej odmianie, sposób zatężania preparatów wirusów według wynalazku obejmuje ponadto dalszy etap oczyszczania (np., chromatografię z wykluczaniem rozmiarów). Pod tym względem sposób według wynalazku jest szczególnie przydatny, gdy etap chromatografii z wykluczaniem rozmiarów prowadzi się po chromatografii jonowymiennej, a preparat wirusa zatęża się (zgodnie z wynalazkiem) po chromatografii jonowymiennej, lecz przed chromatografią z wykluczaniem rozmiarów. Frakcje wirusowe otrzymane po chromatografii jonowymiennej, zazwyczaj zawierają duże ilości soli i zapewne inne zanieczyszczenia, które później wpływają na trwałość wirusa podczas procedur zatężania.
Przedmiotem wynalazku są także preparaty wirusów zatężone i/lub oczyszczone powyższymi sposobami.
PL 197 747 B1
Szczegółowy opis wynalazku
Jak stwierdzono powyżej, zgłoszenie ujawnia nowe zawierające wirusy kompozycje, jak też nowe sposoby zatężania i oczyszczania kompozycji zawierających wirusy.
Twórcy wynalazku opracowali nową buforowaną kompozycję, która może zakonserwować preparaty wirusowe z polepszoną trwałością. W szczególności, kompozycja może stabilizować preparaty wirusowe w temperaturach znacznie powyżej -80°C. Co ważniejsze, kompozycje według wynalazku są trwałe przy typowych temperaturach lodówki, np. 2° do 8°C, lub wyższych, przez znacząco długie okresy, korzystnie przez kilka miesięcy lub dłużej. Jest to bardzo ważna korzyść, ponieważ jak wspomniano powyżej, w celu spełnienia potrzeb klinicznych niepraktyczne jest trzymanie preparatów wirusowych zamrożonych w temperaturze -80°C podczas przechowywania i transportu.
Ważną cechą kompozycji według wynalazku jest dodatek polihydroksywęglowodoru. W niniejszym opisie polihydroksywęglowodór oznacza rozgałęziony, liniowy, lub cykliczny związek podstawiony 2 lub więcej (korzystnie 2 do 6, korzystniej 2 do 4) grupami hydroksylowymi. Polihydroksywęglowodory do stosowania w wynalazku korzystnie są polihydroksy-podstawionymi związkami alkilowymi (rozgałęzionymi lub nierozgałęzionymi), korzystnie mającymi 2 do 7 atomów węgla, i mogą obejmować, np., glicerynę, sorbitol i polipropanol. Szczególnie korzystna jest gliceryna. Jak pokazują dane przedstawione poniżej, twórcy wynalazku stwierdzili, że gliceryna pozwala na zachowanie zaskakująco dużej trwałości przez dłuższe okresy nawet w standardowych warunkach lodówki.
Skuteczną ilością polihydroksywęglowodoru dla kompozycji według wynalazku jest ilość dostateczna do stabilizacji wirusa w preparatach według wynalazku bez szkodliwego wpływu na skuteczność wirusa w dalszym stosowaniu, szczególnie w przypadkach, gdy wirus zawiera transgen do stosowania w terapii genowej. Polihydroksywęglowodór korzystnie występuje w końcowym stężeniu około 20 do 200 mg/ml. Węższym zakresem może być 80 do 120 mg/ml. Dla uzyskania żądanej całkowitej ilości polihydroksywęglowodoru w kompozycji według wynalazku można stosować więcej niż jeden polihydroksywęglowodór.
Polihydroksywęglowodór w kompozycjach według wynalazku może ewentualnie zawierać grupę aldehydową. W szczególności, polihydroksywęglowodór może być disacharydem, takim jak sacharoza. Ponadto, nawet jeśli polihydroksywęglowodór wybrany do kompozycji nie zawiera grupy aldehydowej, to kompozycja może dodatkowo obejmować disacharyd, taki jak sacharoza, jako stabilizator i środek ustawiający toniczność. Gdy kompozycja według wynalazku zawiera już odpowiedni polihydroksywęglowodór (taki jak glicerynę) i stosuje się disacharyd w korzystnych odmianach jako dodatkowy stabilizator lub środek ustawiający toniczność, to disacharyd korzystnie występuje w zakresie od 5 do 25 mg/ml, korzystniej 20 mg/ml, a korzystnie disacharydem jest sacharoza.
W korzystnych odmianach kompozycji według wynalazku stosuje się farmaceutycznie dopuszczalne sole dwuwartościowych metali jako stabilizatory, takie jak sole magnezu, sole cynku i sole wapnia. Korzystnie, solą jest chlorek lub sól magnezu, przy czym sól magnezu jest szczególnie korzystna. Korzystnie, sól (np. sól magnezu) jest występuje w ilości od około 0,1 do 1 mg/ml, korzystniej w ilości około 0,4 mg/ml.
W korzystnych odmianach wynalazku można dołączyć jako ewentualne stabilizatory farmaceutycznie dopuszczalne sole jednowartościowych metali, takie jak sole potasu, sodu, litu i cezu. Korzystnie, solą jest chlorek sodu w ilości 0,6 do 10,0 mg/ml, korzystniej w ilości około 5,8 mg/ml.
Poza stabilizowaniem kompozycji chlorek sodu może tłumić szybkość i zakres pojawiania się produktów ubocznych fermentacji, co daje bardziej korzystną farmaceutycznie formulację o zredukowanym immunogennym potencjale, na skutek agregacji białka. Dodanie chlorku sodu nie wpływa na pH preparatu.
Kompozycja według wynalazku może zachowywać pH w zakresie od około 7 do około 8,5 przez dłuższy okres, nawet gdy podda się ją surowym warunkom, takim jak chłodzenie i zamrażanie/odmrażanie. Co więcej, kompozycje mogą zachować trwałość i utrzymać żądany zakres pH nawet przy stosowaniu względnie małej szybkości zamrażania/odmrażania, jaka może występować przy produkcji na większą skalę, dystrybucji lub manipulacjach. Jak zauważono powyżej, zachowanie wartości pH jest ważne dla preparatów wirusowych, ponieważ przy pH poniżej 7,0 i powyżej 8,5 żywe cząstki wirusa mogą stać się nietrwałe i degradować. Konkretna kompozycja wirusów powoduje, że wirusy są trudne w stabilizacji i konserwacji.
Dla uzyskania zachowania pH w surowych warunkach, wynalazek korzystnie obejmuje układ buforowy, który może zachować optymalną wartość pH w zakresie od około 7,0 do około 8,5 pomimo przechowywania pomiędzy -80°C i 27°C i pomimo poddania warunkom zamrażania/odmrażania.
PL 197 747 B1
Ponieważ pH może wahać się w zależności od temperatury, zakresy pH według wynalazku zilustrowano konkretnie poniżej w odniesieniu do konkretnych zakresów temperatur. Na przykład, w temperaturach lodówki (np. około 2°C do 8°C) korzystnym zakresem pH jest około 7,7 do około 8,3, korzystniej około 7,9 do około 8,2. W temperaturze pokojowej (np., około 20°C do 27°C, korzystnie 22°C-25°C), korzystnym zakresem pH jest około 7,3 do około 8,2, korzystniej około 7,4 do około 7,9.
Korzystny układ buforowy według wynalazku obejmuje dihydrat jednozasadowego fosforanu sodu w stężeniu około 0,5 do 10 mg/ml i trometaminę w stężeniu około 0,5 do 10 mg/ml. Trometamina jest także znana jako TRIS lub „Trizma” dostępna z Sigma Chemical Co. Jednak można stosować inne układy buforowe, na przykład można stosować dihydrat jednozasadowego fosforanu sodu, jeśli jest sprzężony z kwasową formą buforu tris. W szczególnie korzystnej odmianie, układ buforowy obejmuje dihydrat jednozasadowego fosforanu sodu w stężeniu około 1,7 mg/ml i trometaminę w stężeniu około 1,7 mg/ml, i ma zdolność utrzymania preparatu w optymalnym zakresie pH około 7,3 do około 7,9 w temperaturze 25°C.
Preparat według wynalazku ma dodatkową zaletę w postaci zdolności do stabilizacji wysokich stężeń wirusa w wyżej wspomnianych surowych warunkach (takich jak temperatury lodówki i zamrażanie/odmrażanie). W szczególności, preparat według wynalazku może zachować trwałość wirusa przy stężeniach do 1 x 1013 cząstek/ml. Korzystny zakres stężeń wirusa do stosowania w wynalazku to ilość od 1 x 109 do 1 x 1013 cząstek/mh korzystnej do 1 x 1012 cząstek/ml, np. 1 x W9 bb 1 x 1010 do 1 x W12.
Stosowane tutaj określenie „rozcieńczalnik” może obejmować rozpuszczalnik (np. wodę, korzystnie sterylną wodę) lub mieszaninę rozpuszczalnika i innych składników, takich jak dodatkowe rozpuszczalniki, dodatkowe stabilizatory, dodatkowe bufory i/lub inne substancje, które nie wpływają szkodliwie na bezpieczeństwo, skuteczność i trwałość preparatu. W stosunku do rozcieńczalników, stabilizatorów, buforów i tym podobnych, można odnieść się do publikacji np. Remington's Pharmaceutical Science, wyd. 15, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.
Surfaktant (środek powierzchniowo czynny), korzystnie niejonowy detergent, taki jak polioksyetylenowany ester kwasu tłuszczowego (np. polioksyetylenosorbitany takie jak Polysorbate 20, Polysorbate 40, Polysorbate 60, lub Polysorbate 80 z firmy ICI Americas, Inc., Wilmington Delaware, lub Tween 20, Tween, 40, Tween 60 i Tween 80 z firmy Sigma, St. Louis, Mo.), można ewentualnie włączać w kompozycje według wynalazku. Korzystnie, niejonowy detergent jest polioksyetylenowanym estrem kwasu tłuszczowego, a polioksyetylenowanym estrem kwasu tłuszczowego jest korzystnie Polysorbate 80, który może działać jako stabilizator w kompozycji. Stężenie niejonowego detergentu znajduje się korzystnie w zakresie od 0,03 do 0,3 mg/ml, korzystniej 0,15 mg/ml.
Kompozycje według wynalazku mogą także zawierać jeden lub więcej „środek polepszający dostarczanie”. Określenie „środek polepszający dostarczanie” odnosi się do dowolnego środka, który polepsza dostarczanie leczniczego genu, takiego jak gen tłumiący nowotwór, do tkanki lub narządu z rakiem. Przykłady takich środków polepszających dostarczanie obejmują między innymi detergenty, alkohole, glikole, surfaktanty, sole żółciowe, antagoniści heparyny, inhibitory cyklooksygenazy, hipertoniczne roztwory soli i octany.
Detergenty, w sensie stosowanym w wynalazku mogą obejmować detergenty anionowe, kationowe, obojnacze i niejonowe. Przykładowe detergenty obejmują między innymi taurocholan, dezoksycholan, taurodezoksycholan, cetylopirydium, chlorek benzalkoniowy, detergent ZWITTERGENT®
3-14, CHAPS (hydrat 3-[3-cholamidopropylo)dimetyloamoniolo]-1-propanosulfonianu, Aldrich), Big CHAP, Dezoksy Big CHAP, detergent TRITON®-X-100, C12E8, oktylo-B-D-glukopiranozyd, detergent PLURONIC® -F68, detergent TWEEN® 20 i detergent TWEEN® 80 (CALBIOCHEM® Biochemicals).
Stosowanie środków polepszających dostarczanie opisano szczegółowo w równoległym zgłoszeniu patentowym US o numerze 08/889335 złożonym 8 czerwca 1997, i publikacji WO 97/25072 z dnia 17 czerwca 1997, oraz w zgłoszeniu patentowym US o numerze 09/112074 złożonym 8 lipca 1998, międzynarodowym zgłoszeniu PCT/US98/14241. Ponadto, stosowanie inhibitorów kalpainy w połączeniu z wektorami wirusowymi dla zwiększenia skuteczności transdukcji opisano w opisach patentowych US o numerach 09/172685 i 60/104321 złożonych 15 października 1998.
W kompozycji według wynalazku można stosować szeroki zakres wirusów, w tym między innymi adenowirusy, wirusy ospy, irydowirusy, wirusy opryszczki, papowawirusy, paramyksowirusy, ortomyksowirusy, retrowirusy, wirusa związanego z adenowirusami, wirusa krowianki, rotawirusy, itp. (patrz, np., Anderson, Science (1992) 256: 808-813); adenowirusy są szczególnie korzystne. Wirusy korzystnie oznaczają wirusy rekombinacyjne, lecz mogą obejmować kliniczne izolaty, osłabione szczepy krowianki, itd. Przykładowym rekombinacyjnym adenowirusem, który można stosować
PL 197 747 B1 w kompozycjach według wynalazku, jest A/C/N/53, który ujawniono w zgłoszeniu patentowym PCT opublikowanym jako WO 95/11984.
Preparat według wynalazku jest szczególnie dobrze przystosowany do stabilizowania rekombinacyjnego wirusa, takiego jak żywy rekombinacyjny adenowirus (lub „wektor wirusowy”), do zastosowań leczniczych w terapii genowej. Na przykład, wirus użyty w wynalazku może obejmować gen tłumiący nowotwór, taki jak dzikiego typu gen p53 lub gen Rb (np., p110RB lub p56RB), i z transgenami, takimi jak dzikiego typu p53 wstawionymi w wektor wirusowy. Kompozycję według wynalazku można stosować jako kompozycję farmaceutyczną do leczenia raka.
Pod tym względem preparaty według wynalazku mają zadziwiającą zdolność do zachowywania żywotności żywego wirusa, w szczególności wektora wirusowego, do którego wstawiono sekwencję nukleotydową kodującą transgen, taki jak p53. Ta cecha pozwala wirusowi zachować zdolność do infekowania docelowych komórek, tak że lecznicze białko zakodowane przez wstawiony transgen jest odpowiednio wytwarzane.
W szczególności dla p53 i jego zastosowań, należy zauważyć, że mutacja genu p53 jest najpospolitszą genetyczną zmianą w rakach ludzkich (Bartek (1991) Oncogene, 6: 1699-1703, Hollstein (1991) Science, 253: 49-53). Wprowadzenie dzikiego typu p53 do korek rakowych ssaka pozbawionych endogennego białka dzikiego typu p53 tłumi nowotworowy fenotyp tych komórek (patrz, np. US-5532220).
W poniższych przykładach, wirus jest żywym rekombinacyjnym adenowirusem zawierającym dzikiego typu gen p53. Konkretny konstrukt wektora wirusowego użyty w tych przykładach określany jest tu jako A/C/N/53. A/C/N/53, także określany jako ACN53, jest szczególnie korzystnym konstruktem wektora wirusowego opisanym w równoległym zgłoszeniu patentowym US o numerze 08/328673 złożonym 25 października 1994, i w WO 95/11984 (4 maja 1995), stanowiących odnośniki literaturowe dla niniejszego zgłoszenia.
Reprezentatywną recepturę dla korzystnych odmian kompozycji według wynalazku zawierających Polysorbate 80 przedstawiono poniżej:
| Reprezentatywny skład kompozycji | ||
| Substancja czynna | A/C/N/53 | 1x10® do 1x1013 cząstek/ird |
| Bufor | Jednozasadowy fosforan sodu | 0,5 do 10 mg/ml |
| Trometamina | 0,5 do 10 mg/ml | |
| Stabilizator/środek tonizujący | Sacharoza | 5 do 25 mg/ml |
| Stabilizatory | Gliceryna | 20 do 200 mg/ml |
| Chlorek magnezu | 0,1 do 1 mg/ml | |
| Polysorbate 80 | 0,03 do 0,3 mg/ml | |
| Rozpuszczalnik | woda do iniekcji q.s. do | 1 ml |
Kompozycję zazwyczaj przechowuje się w dawkach 1,0 ml, „q.s. do” oznacza dodanie dostatecznej ilości rozpuszczalnika do osiągnięcia łącznej objętości 1 ml.
Cztery szczególnie korzystne odmiany kompozycji przedstawiono poniżej. Polysorbate 80 występuje w przykładach 1 i 2, lecz nie w przykładach 3 i 4.
A/C/N/53
Dihydrat jednozasadowego fosforanfu sodu Trometamina
Heksahydrat chlorku magnezu
Sacharoza
Polisorbat 80
Glicerol
Woda do iniekcji q.s. do pH
Przykład 1 7,5xW11 cząstek/ml
1,7 mg/ml
1,7 mg/ml 0,4 mg/ml 20 mg/ml 0,15 mg/ml 100 mg/ml 1 ml
7,4 do 7,8
Przykład 2 7,5x1010 cząstek/ml
1,7 mg/ml
1,7 mg/ml 0,4 mg/ml 20 mg/ml 0,15 mg/ml 100 mg/ml 1 ml
7,3 do 7,8
PL 197 747 B1
A/C/N/53
Dihydrat jednozasadowego fosforanfu sodu Trometamina
Heksahydrat chlorku magnezu
Sacharoza
Glicerol
Woda do iniekcji q.s. do pH
Przykład 3 7,5x1011 cząstek/ml
Przykład 4 7,5x1010 cząstek/ml
1,7 mg/ml
1,7 mg/ml 0,4 mg/ml 20 mg/ml 100 mg/ml 1 ml
1,7 mg/ml
1,7 mg/ml 0,4 mg/ml 20 mg/ml 100 mg/ml 1 ml
7,4 do 7,9
7,3 do 7,8
Następujące składniki: dihydrat jednozasadowego fosforanu sodu, trometaminę, heksahydrat chlorku magnezu, sacharozę, i glicerynę można otrzymać z, np. EM Industries, INC., 7 Skyline Drive, Hawthorne, New York 10532. Polysorbate 80 jest dostępny z, np. ICI Americas, Inc., Wilmington Delaware, 19897.
Kompozycje według wynalazku można wytwarzać podczas oczyszczania wirusa na kolumnie żelowej filtracyjnej chromatografii łącząc składniki (poza Polysorbate-80) w żądanych stężeniach na kolumnie żelowej filtracji. W odniesieniu do sposobów żelowej filtracji, można się odnieść, np. do części V poniżej. Następnie, jeśli pożądane jest rozcieńczenie wirusa, lub dołączenie Polysorbate-80, można wytworzyć rozcieńczalniki standardowymi technikami. Przykład ilustrujący to rozwiązanie przedstawiono poniżej:
Wprowadzić i rozpuścić dihydrat jednozasadowego fosforanu sodu, trometaminę, sacharozę, heksahydrat chlorku magnezu i glicerynę w około 75% objętości porcji wody do iniekcji w temperaturze pokojowej w zbiorniku ze stali nierdzewnej wyposażonym w mieszadło. Doprowadzić porcję powstałego rozcieńczalnika do końcowej objętości wodą do iniekcji. Sprawdzić pH. Obliczyć żądaną objętość leku A/C/N/53 (adenowirus z dzikiego typu p53 jako transgenem) w zawiesinie i żądaną objętość rozcieńczalnika dla wytworzenia zastrzyku A/C/N/53. Jeśli końcowy zastrzyk A/C/N/53 będzie zawierał Polysorbate 80, wytworzyć roztwór zapasowy zawierający 10% nadmiar Polysorbate 80 w rozcieńczalniku. Wprowadzić obliczone ilości leku A/C/N/53 w zawiesinie i rozcieńczalnik do pojemnika ze stali nierdzewnej i mieszać. Wprowadzić roztwór Polysorbate 80, przed dodaniem całości rozcieńczalnika, w oparciu o 10% łącznej objętości porcji zastrzyku A/C/N/53 jeśli to konieczne. Aseptycznie przesączyć zawiesinę przez sterylizowany filtr (0,22 um lub równoważny). Testować całość filtra po filtracji. Zebrać i wprowadzić sterylizowaną zawiesinę do fiolek o odpowiedniej objętości. Zatkać i uszczelnić fiolki.
Dane trwałości dla kompozycji z przykładów 1,2, 3, i 4 podano poniżej, odpowiednio w tabelach 1,2, 3, i 4 poniżej.
W tabelach poniżej próba przeciwrozrostowa jest próbą biologiczną użytą do pomiaru zdolności produktu do supresji komórek rakowych, i ogólnie jest oparta na procedurach użytych przez Willsa, i in. , 1994, Human Gene Therapy, 5:1079-1088. Podane liczby wskazują aktywność, podczas gdy próbka kontrolna nie ma aktywności.
„Próba łysinki” mierzy cząstki wirusa w kulturze licząc liczbę wirusowych łysinek jako funkcję rozcieńczenia, i ogólnie jest oparta na procedurach opisanych u Grahama, F.L., i Preveca, L., Methods in Molecular Biology, tom 7: Gene Transfer and Expression Protocols, red. E.J. Murray, (Humana Press Inc., Clifton NJ) str. 109-128 (1991); patrz także Graham, F.L., Smiley, J., Russel, W.C., i Nairn, R., J. Gen. Virol. tom 36, str. 59-74 (1977).
Próba „FACS” pokazuje zdolność wirusa do infekowania komórek, i takie pomiary ogólnie są oparte na sposobach opisanych w, np. zgłoszeniu patentowym PCT/US97/11865 (WO 98/01582, opublikowane 15 stycznia 1998). W kolejnej kolumnie po prawej, liczby przedstawione pod nagłówkiem „stężenie” oznaczają stężenie wszystkich cząstek wirusa. Liczby pod nagłówkiem „Stosunek cząstka/FACS” oznaczają stosunek łącznej liczby cząstek wirusa w porównaniu z liczbą infekcyjnych cząstek wirusa, wskazując względną moc preparatu wirusa.
Dane pod nagłówkiem „UV” wskazują agregację cząstek wirusa, jak pokazuje stosunek absorbancji UV dla długości fali A320/A260 jako wskaźnik rozproszenia światła. Zasadniczo absorbancja przy długości fali 320 nm mierzy wielkość rozproszenia światła, podczas gdy absorbancja przy długości fali 260 nm koreluje z ilością DNA.
PL 197 747 B1
Temperatury wymienione w drugiej kolumnie tabeli pod „stan oznaczają temperaturę przechowywania. Próby fizjologiczne przeprowadza się w temperaturze 37°C i pH w ostatniej kolumnie mierzy się w temperaturze pokojowej, około 25°C.
T a b e l a 1
Dane trwałości kompozycji z przykładu 1
| Czas trwałości | Stan °C | Próba przeciwrozrostowa x105 SPU/ml | Próba łysinki x108PFU/iril | FAC-Sx1010 U/ml | Stężeme χΊΟ11 cząstka/ml | Stosunek cząstka/FACS | UV A320/A260 | pH |
| pocz. | 3,3 | 5,8 | 3,86 | 7,95 | 21 | 0,23 | 7,53 | |
| 1tyg. | 25 | 4,9 | 10 | 2,27 | 8,06 | 36 | 0,24 | 7,53 |
| 2tyg. | 4 | 3,1 | 6,6 | 3,41 | 7,84 | 23 | 0,23 | 7,49 |
| 4tyg. | 4 | 3,4 | 17 | 3,91 | 7,79 | 20 | 0,23 | 7,63 |
| 8tyg. | 4 | 5,8 | 8,8 | 3,38 | 7,80 | 23 | 0,24 | 7,61 |
| 12tyg. | 4 | 3,9 | 36 | 2,24 | 7,80 | 35 | 0,24 | 7,72 |
| 5 mieś. | 4 | nb | nb | 1,57 | 8,21 | 52 | 0,26 | 7,60 |
| 6 mieś. | 4 | 3,0 | 7,6 | 2,74 | 7,68 | 28 | 0,28 | 7,58 |
| 9 mieś. | 4 | 3,1 | 19 | 3,47 | 7,19* | 21 | 0,28 | 7,58 |
| 11 mieś. | 4 | nb | nb | nb | 6,71 | - | 0,29 | nb |
| 12 mieś. | 4 | 2,6 | 10 | 0,81 | 6,13 | 76 | 0,30 | 7,62 |
nb - nie badane
Ponowny test próbek 9-miesięcznych UV: 6,89xl011 cząstek/ml: A320/A260 = 0,28
T a b e l a 2
Dane trwałości kompozycji z przykładu 2
| Czas trwałości | Stan °C | Próba przeciwrozrostowa χ104 SPU/iril | Próba łysinki χ107 PFU/iril | FAC-Sx109 U/ml | Stężeme χΊΟ10 cząstka/ml | Stosunek cząst- ka/FACS | UV A320/A260 | pH |
| pocz. | 3,3 | 4,8 | 1,99 | 10,0 | 50 | 0,24 | 7,36 | |
| 1tyg. | 25 | 2,4 | 7,1 | 1,64 | no* | — | 0,46 | 7,42 |
| 2tyg. | 4 | 2,4 | 6,9 | 2,13 | 9,79 | 46 | 0,24 | 7,51 |
| 4tyg. | 4 | 3,2 | 8,4 | 2,50 | 9,24 | 37 | 0,22 | 7,55 |
| 8tyg. | 4 | 6,9 | 8,6 | 2,60 | 8,10 | 31 | 0,25 | 7,54 |
| 12tyg. | 4 | 5,5 | 8,3 | 1,09 | 8,60 | 79 | 0,24 | 7,64 |
| 5 mieś. | 4 | nb | nb | 1,74 | 8,03 | 46 | 0,27 | 7,55 |
| 6 mieś. | 4 | 3,3 | 7,3 | 2,10 | 8,25 | 39 | 0,23 | 7,52 |
| 9 mieś. | 4 | 2,3 | 13 | 1,97 | 7,59 | 39 | 0,24 | 7,53 |
| 11 mieś. | 4 | nb | nb | nb | 7,48 | - | 0,23 | nb |
| 12 mieś. | 4 | 1,8 | 9,4 | 0,60 | 4,94 | 82 | 0,26 | 7,59 |
nb - nie badane
Nie określono wskutek interferencji próby
Ponowny test próbek 9-miesięcznych UV: 7,37x10i° cząstek/ml; A320/A260 = 0,24.
PL 197 747 B1
T a b e l a 3
Dane trwałości kompozycji z przykładu 3
| Czas trwałości | Stan °C | Próba przeciwrozrostowa x105SPU/irnl | Próba łysinki x108PFU/iril | FAC-Sx1010 U/ml | Stężeme x1011 cząstka/ml | Stosunek cząstka/FACS | UV A320/A260 | pH |
| pocz. | 3,2 | 6,3 | 2,59 | 7,45 | 29 | 0,24 | 7,67 | |
| 1tyg. | 25 | 4,4 | 4,3 | 1,65 | 7,49 | 45 | 0,24 | 7,68 |
| 2tyg. | 4 | 2,3 | 8,0 | 3,62 | 7,27 | 20 | 0,24 | 7,49 |
| 4tyg. | 4 | 2,7 | 7,6 | 4,08 | 6,97 | 17 | 0,24 | 7,75 |
| 8tyg. | 4 | 5,9 | 8,7 | 2,69 | 7,00 | 26 | 0,25 | 7,82 |
| 12tyg. | 4 | 3,0 | 15 | 0,70 | 7,10 | 101 | 0,25 | 7,80 |
| 6 mieś. | 4 | 2,4 | 6,4 | 2,45 | 7,12 | 29 | 0,25 | 7,76 |
| 9 mieś. | 4 | 2,8 | 9,4 | 2,51 | 7,06 | 28 | 0,26 | 7,81 |
| 11 mieś. | 4 | nb | nb | nb | 6,71 | - | 0,25 | nb |
| 12 mieś. | 4 | 2,2 | 9,8 | 0,74 | 6,75 | 91 | 0,26 | 7,81 |
nb - nie badane
T a b e l a 4
Dane trwałości kompozycji z przykładu 4
| Czas trwałości | Stan °C | Próba przeciwrozrostowa x104 SPU/iril | Próba łysinki x107 PFU/iril | FAC- SX109 U/iril | Stężeme x1010 cząstka/ml | Stosunek cząstka/FACS | UV A320/A260 | pH |
| pocz. | 3,3 | 4,7 | 2,36 | 8,91 | 38 | 0,23 | 7,37 | |
| 1tyg. | 25 | 2,3 | 9,3 | 1,40 | 8,25 | 59 | 0,24 | 7,37 |
| 2tyg. | 4 | 2,8 | 8,0 | 2,16 | 8,80 | 41 | no* | 7,37 |
| 4tyg. | 4 | 2,9 | 6,6 | 2,54 | 9,35 | 37 | 0,20 | 7,63 |
| 8tyg. | 4 | 6,9 | 7,2 | 2,56 | 7,60 | 30 | 0,24 | 7,60 |
| 12tyg. | 4 | 4,4 | 8,6 | 1,45 | 7,20 | 50 | 0,23 | 7,73 |
| 6 mieś. | 4 | 3,6 | 7,1 | 2,85 | 7,92 | 28 | 0,21 | 7,58 |
| 9 mieś. | 4 | 2,9 | 11 | 1,87 | 7,26 | 39 | 0,20 | 7,60 |
| 11 mieś. | 4 | nb | nb | nb | 6,93 | - | 0,22 | nb |
| 12 mieś. | 4 | 2,4 | 22 | 0,70 | 7,15 | 102 | 0,23 | 7,61 |
nb - nie badane *Nie określono wskutek interferencji próby
PRZYKŁAD 5
SMad kompozycji dla przykładu 5: A/C/^53 (7,5x1011 cząste^m^), trometamina (TRIS) (1,7 mg/m) dihydrat jednozasadowego fosforanu sodu (1,7 mg/ml), sacharoza (20 mg/ml), heksahydrat chlorku magnezu (0,4 mg/ml), gliceryna (100 mg/ml), chlorek sodu (5,8 mg/ml), napełniana objętość 10 ml.
PL 197 747 B1
T a b e l a 5
Dane trwałości kompozycji z przykładu 5
| Czas | Stan | Próba przeciwrozrostowa | FAC-Sx1010 | Stężeme x1011 | Stosunek | UV | pH |
| trwałości | °C | x105 SPU/ml | U/ml | cząstka/ml | cząstka/-FACS | A320/A260 | |
| pocz. | 4,5 | 1,87 | 7,81 | 42 | 0,23 | 7,80 | |
| 1 mieś. | 4 | 8,0 | 1,67 | 7,83 | 47 | 0,23 | 7,80 |
| 4 mieś. | 4 | 13,0 | 1,58 | 7,84 | 50 | 0,23 | 7,70 |
W pewnych przypadkach, zaobserwowano tworzenie cząstek stałych w preparacie podczas przechowywania w temperaturze 4°C. Analiza cząstek stałych metodą SDS-PAGE sugeruje, że cząstki stałe są złożone ze śladowych zanieczyszczeń (tj. dodatkowych białek i pewnych niedojrzałych cząstek wirusowych), a więc te cząstki stałe nie wpływają na żywotność preparatu. Tym niemniej, korzystne dla dalszego oczyszczenia preparatu (dla zapobiegnięcia możliwemu tworzeniu cząstek stałych), można wprowadzić ewentualny etap mikrofiltracji dla usunięcia wszelkich potencjalnych cząstek stałych z niewielką utratą cząstek wirusowych. Przy prowadzeniu mikrofiltracji należy zauważyć, że dostateczne pole powierzchni membrany mikrofiltracyjnej na objętość filtrowaną jest bardzo ważne, aby uniknąć strat wirusa przy usuwaniu cząstek stałych.
Ponadto, w korzystnej odmianie, twórcy wynalazku stwierdzili, że wstrząsanie, takie jak mieszanie, może przyspieszać tworzenie cząstek stałych i jest dodatkowym ewentualnym etapem w procesie klarowania. Okazało się, że łagodne mieszanie (np. przez noc, 10°C, mieszadło magnetyczne), a następnie mikrofiltracja usunęły cząstki stałe, tak że nie tworzyło się więcej cząstek stałych przy ponownym mieszaniu.
Okazało się także, że cykle zamrażania/odmrażania mogą sprzyjać tworzeniu cząstek stałych podczas ponownego mieszania. W innej korzystnej procedurze można prowadzić jeden lub więcej cykli zamrażania/odmrażania, następnie mieszanie, i potem mikrofiltrację, dla zapobiegnięcia tworzenia cząstek stałych podczas przechowywania końcowego wirusowego produktu w temperaturach lodówki (np. 4°C).
Sposoby zatężania i oczyszczania kompozycji zawierających wirusa
Przedmiotem wynalazku jest także nowy sposób trwałego zatężania istniejącego preparatu wirusa przez stosowanie filtracji z przepływem stycznym (dalej określanej niekiedy jako „TFF”), co pozwala na łatwe wybranie i wytworzenie klinicznych dawek w szerokim zakresie żądanych stężeń. Nowy sposób zatężania preparatu wirusa obejmuje:
(a) dodanie polihydroksywęglowodoru do preparatu wirusa do końcowego stężenia polihydroksywęglowodoru około 20% lub więcej; i (b) poddanie preparatu wirusa pr^r^r^^^c^\^i w którym stężenie wirusa zwiększasię poddając preparat ciśnieniu takiemu, że rozcieńczalnik jest usuwany z preparatu wirusa przez filtr, podczas gdy wirus pozostaje.
Sposoby według wynalazku są przydatne dla szerokiego zakresu wirusów, w tym między innymi adenowirusów, wirusów ospy, irydowirusów, wirusów opryszczki, papowawirusów, paramyksowirusów, ortomyksowirusów, retrowirusów, wirusa związanego z adenowirusami, wirusa krowianki, rotawirusów, itp.; przy czym adenowirusy są szczególnie korzystne. Wirusy są korzystnie wirusami rekombinacyjnymi, lecz mogą obejmować kliniczne izolaty, osłabione szczepy krowianki, itd. Niniejszy wynalazek jest szczególnie przydatny do zatężania rekombinacyjnych wirusów niosących heterologiczny transgen do stosowania w terapii genowej. Takie wirusy są szczególnie podatne na potencjalnie destabilizujące siły, takie jak dodatkowe mechaniczne siły poprzeczne towarzyszące sposobom zatężania preparatów wirusów. Przykładowym rekombinacyjnym adenowirusem, który można zatężać sposobem według wynalazku, jest A/C/N/53, który ujawniono w zgłoszeniu PCT opublikowanym jako WO 95/11984.
Proces filtracji stosowany do zatężania wirusa zgodnie ze sposobem według wynalazku może obejmować dowolny proces filtracji (np. ultrafiltrację), w którym stężenie wirusa zwiększa się zmuszając rozcieńczalnik do przejścia przez filtr w taki sposób, że rozcieńczalnik jest usuwany z preparatu wirusa, podczas gdy wirus nie może przejść przez filtr a tym samym pozostaje, w stężonej postaci, w preparacie wirusa. Ultrafiltrację opisano szczegółowo w, np. publikacji Microfiltration and Ultrafiltration: Principles and Applications, L. Zeman i A. Zydney (Marcel Dekkar, Inc., New York, NY, 1996). Szczególnie korzystnym procesem filtracji jest filtracja z przepływem stycznym („TFF”), jak opisana w, np.
PL 197 747 B1 katalogu MILLEPORE zatytułowanym „Pharmaceutical Process Filtration Catalogue” str. 177-202 (Bedford, Massachusetts, 1995/96). Korzystny aparat do TFF to układ filtracyjny Pellicon II lub Pellicon XL z Millipore Corporation, 80 Ashby Rd., Bedford, Massachusetts (adres internetowy: www.millipore.com), przy czym system Pellicon XL jest szczególnie korzystny. W korzystnej odmianie sposoby według wynalazku prowadzi się w temperaturach w zakresie od około 2°C to 27°C.
Można stosować inne procesy zatężania dla zatężenia preparatów wirusów według wynalazku. Na przykład, polihydroksywęglowodór można korzystnie stosować do zatężania preparatu wirusa przez odwirowanie. Przedmiotem wynalazku jest także sposób zatężania preparatu wirusa obejmujący:
(a) odwirowanie kompozycjj, która zawiera pierwszą warstwę obejmującą polihydroksywęglowodór w stężeniu 35% do 80% (objętościowo), nakrytą drugą warstwą obejmującą polihydroksywęglowodór w stężeniu 5% do 30% (objętościowo), nakrytą z kolei trzecią warstwą zawierającą wirus; i (b) odzyskanie wirusa z pierwszej warstwy.
Przykładowo, preparat adenowirusa można zatężyć metodą powolnego odwirowania przy 3200 g z użyciem wirników z kołyskowym pojemnikiem wirówki Beckmana. Aby tego dokonać, preparat wirusa można umieścić w wielu probówkach 5 ml, każdej zawierającej 6,25% objętościowych 70% gliceryny w pierwszej warstwie na dnie probówki, nakrytej 2,5% objętościowych 20% gliceryny, z preparatem wirusa położonym; na wierzchu. Preparat odwirowuje się następnie przy 3200 g w temperaturze 4°C przez około 16 godzin dla peletkowania stężonego wirusa do warstw gliceryny i następnie świeżo zatężony preparat wirusa odzyskuje się z pierwszej warstwy. Wirus zatężony w procedurach opisanych powyżej wykazywał dobrą charakterystykę rozproszenia światła i miał odpowiednie właściwości infekcyjności.
Co się tyczy polihydroksywęglowodoru użytego w sposobach według niniejszego wynalazku, „polihydroksywęglowodór” oznacza rozgałęziony, liniowy, lub cykliczny związek podstawiony 2 lub więcej (korzystnie 2 do 6, korzystniej 2 do 4) grupami hydroksylowymi, a skuteczna ilość polihydroksywęglowodoru oznacza ilość dostateczną do stabilizacji; wirusa wobec potencjalnie destabilizujących sił, takich jak mechaniczne siły poprzeczne powstające podczas procesu zatężania. Korzystnie, polihydroksywęglowodór w sposobach zatężania wirusa według niniejszego wynalazku występuje w minimalnym stężeniu 20%, korzystniej 25%. Polihydroksywęglowodory do stosowania w niniejszym wynalazku korzystnie są polihydroksypodstawionymi związkami alkilowymi (rozgałęzionymi lub nierozgałęzionymi), korzystnie mającymi 2 do 7 atomów węgla, i mogą obejmować, np., glicerynę, sorbitol i polipropanol. Gliceryna jest szczególnie korzystna.
Nowy sposób twórców wynalazku na zwiększenie stężenia wirusa ma dodatkową zaletę w postaci ułatwienia przetwarzania, np. eliminując problematyczne wąskie gardła przez dopuszczanie do znacząco wyższej przepustowości podczas różnych etapów przetwarzania, takich jak chromatografia z wykluczaniem rozmiarów. W korzystnej odmianie sposób zatężania preparatów wirusów według wynalazku można zastosować w metodach oczyszczania wirusów, w których etap chromatografii z wykluczaniem rozmiarów (np., filtrację żelową) przeprowadza się po chromatografii anionowymiennej. W tej odmianie występują dodatkowe zagrożenia dla trwałości wirusa wypływające nie tylko z mechanicznych sił poprzecznych potrzebnych do zatężania wirusa przed ograniczającym szybkość procesu etapem chromatografii z wykluczaniem rozmiarów, lecz także wiążące się z faktem, że preparatu wirusa eluowany w etapie chromatografii anionowymiennej typowo zawiera duże ilości soli i innych zanieczyszczeń, które wpływają szkodliwie na trwałość wirusa. W szczególnie korzystnej odmianie, przedmiotem wynalazku jest sposób oczyszczania preparatu wirusa obejmujący:
(a) poddanie preparatu wirusa anionowymiennej chromatografii, w której wirus eluuje się jako preparat wirusa z anionowymiennego środowiska chromatograficznego;
(b) dodanie polihydroksywęglowodoru do preparatu wirusa z etapu (a), aby stężenie polihydroksywęglowodoru w preparacie osiągnęło końcowe stężenie około 25% lub wyższe; i (c) zwiększenie stężenia wirusa w preparacie wirusa z etapu (b) przez przyłożenie ciśnienia do preparatu tak, że rozcieńczalnik jest usuwany z preparatu wirusa przez filtr, podczas gdy wirus pozostaje; i (d) poddanie stężonego preparatu wirusa z etapu (c) jednemu lub kiiku dodatkowym etapom przetwarzania.
W korzystnej odmianie przedstawionej powyżej w związku z chromatografią anionowymienną, minimalny poziom gliceryny wynosi 25% (a nie 20% jak w ogólnych zastosowaniach sposobów zatężania według wynalazku), ponieważ to konkretne zastosowanie musi uwzględniać dodatkowe zagrożenie trwałości powodowane przez wysokie stężenia soli w produkcie eluowanym z kolumny aniono12
PL 197 747 B1 wymiennej. Dodanie 25% gliceryny (korzystnie 30%) powoduje trwałość zawierającej sól puli DEAE przez >10 dni w temperaturze, np. 4°C; zatem następne etapy zatężania wirusa i/lub filtracji żelowej można prowadzić innego dnia z istotną elastycznością w okresie 10 dni. Należy zauważyć, że polihydroksywęglowodór w wyższym stężeniu, 25% lub większym, można także stosować w sposobach według wynalazku, gdy preparat wirusa zawiera dużo soli wskutek innych warunków przetwarzania.
Przykłady sposobów według wynalazku
Poniższe przykłady ilustrują korzystne odmiany wynalazku, i nie stanowią ograniczenia jego zakresu.
Krótki opis - Wsad zatężany ma swój początek w zamrożonych surowych wirusowych substancjach pochodzących z fermentacji. W jednej odmianie, produkt adenowirusowy oczyszcza się najpierw metodą chromatografii anionowymiennej. Następnie, przed podaniem preparatu na kolumnę z wykluczaniem rozmiarów, produkt z wymiany anionowej można zatężać przez filtrację z przepływem stycznym (TFF) w obecności 30% (objętościowo) gliceryny. Alternatywnie, w innej odmianie, etap zatężania TFF można prowadzić w obecności 20% (objętościowo) lub więcej (korzystnie 25%) gliceryny po chromatografii z wykluczaniem rozmiarów.
• Wytwarzanie substratów metodą chromatografii anionowymiennej przed TFF
W korzystnej odmianie, produkt adenowirusowy z wymiany anionowej wytwarza się w celu zatężenia jak następuje. Zamrożony wirusowy materiał z etapów fermentacji i odzyskiwania rozmraża się i przesącza przez membranę hydrofilową 0,45 ąm. Stężenie soli w przesączu ustawia się dodając 4M chlorek sodu. Ten roztwór wsadowy podaje się następnie na kolumnę Fractogel EMD DEAE-650M zrównoważoną wcześniej 50 mM fosforanem sodu, pH 7,5, 260 mM chlorkiem sodu, 2 mM chlorkiem magnezu, 2% (wagowo) sacharozą (bufor A). Adenowirus wiąże się anionowymienną żywicą, podczas gdy większość pożywki i resztki komórek gospodarza przechodzi przez kolumnę kończąc w materiale odpadowym. Kolumnę początkowo przemywa się 4 objętościami bufora A, następnie drugi raz izokratycznie 8 objętościami złoża z 94% bufora A i 6% bufora B (50 mM fosforan sodu pH 7,5, 600 mM chlorek sodu, 2 mM chlorek magnezu, 2% (wagowo) sacharozy) dla usunięcia dodatkowych zanieczyszczeń. Wirusa eluuje się z kolumny 30 objętościami złoża liniowego gradientu od 6% do 100% bufora B. Zbiera się pik adenowirusa z profilu elucji określony przez A280. Następnie dodaje się glicerynę do puli DEAE przy końcowym stężeniu 30% (objętościowo) do dalszego przetwarzania.
• Zatężanie puli DEAE z użyciem filtracji z przepływem stycznym
Pulę DEAE (wytworzoną według powyższego opisu) zatęża się 10- do 20-krotnie stosując jednostkę Millipore TFF (Pellicon XL System) z membranami Biomax odcinającymi masę cząsteczkową 1 milion. Proces prowadzi się w temperaturze 2-10°C lub pokojowej (25°C). Następujące parametry filtracji stosuje się w tej procedurze: przeciętne ciśnienie wlotowe = 14 psi; przeciętne ciśnienie przenikania = o psi; przeciętne natężenie przepływu =13 l/godzinę/m2. Końcowe stężenie adenowirusa osiąga około 1,0-2, 0x1013 cząstek na ml. W oparciu o analizę Resource Q-HPLC i absorbancji UV (A260) wydajność etapu zatężania wynosi >80% bez znaczącej agregacji (próba rozpraszania światła A320/A260).
• Wymiana bufora metodą chromatografii z wykluczaniem rozmiarów (filtracja żelowa)
Zatężony preparat adenowirusa podaje się na kolumnę Su-perdex-200 z wykluczaniem rozmiarów zrównoważoną wcześniej 20 mM fosforanem sodu pH 8,0, 100 mM chlorkiem sodu, 2 mM chlorkiem magnezu, 2% (wagowo) sacharozą, 10% gliceryną (bufor C) lub 11 mM fosforanem sodu, 14 mM Tris, 2 mM chlorkiem magnezu, 2% (wagowo) sacharozy, 10% gliceryną, pH 7,8 (bufor D). Kolumnę eluuje się buforem równoważącym. Zbiera się i łączy pik adenowirusa z profilu elucji określony przez A280. Zatężony preparat adenowirusa przesącza się przez 0,2 ąm hydrofilową membranę Durapore (Stericup, Millipore) w temperaturze 2 do 10°C, i można ją przechowywać w temperaturze -80°C, lub w temperaturach wyższych (takich jak 2 do 10°C).
• Zatężanie puli Superdex-200 z użyciem filtracji z przepływem stycznym
Jak omówiono powyżej, korzystna odmiana wynalazku obejmuje zatężanie wirusa po chromatografii anionowymiennej, lecz przed filtracją żelową. Jednakże w innej odmianie ujawnione sposoby zatężania preparatów wirusów można także stosować po etapie filtracji żelowej (nawet jeśli nie stosowano etapu zatężania wirusa pomiędzy etapem wymiany anionowej i etapem filtracji żelowej). W tym przypadku parametry filtracji są takie same jak parametry zatężania puli DEAE, poza tym, że polihydroksywęglowodór (np. glicerynę) można dodawać do puli Superdex-200 przy końcowym stężeniu tak niskim jak 20% (objętościowo), ponieważ nie jest już konieczna praca z wysokimi stężeniami soli w puli DEAE. Pod tym względem należy zauważyć, że w przypadkach gdy dodawanie polihydroksyPL 197 747 B1 węglowodoru opóźnia się do czasu po filtracji żelowej, pulę DEAE powinno się podawać natychmiast na kolumnę filtracji żelowej (wskutek wrażliwości puli DEAE - z jej wysokim stężeniem soli). Widoczne jest, że dodatkową korzyścią z dodawania polihydroksywęglowodoru do puli DEAE (według wynalazku) jest zwiększona elastyczność w kategoriach okresu i opcji przechowywania w okresie pomiędzy anionowymienną chromatografią i dalszym przetwarzaniem.
Sposoby zatężania preparatów wirusów można stosować w połączeniu z różnymi sposobami oczyszczania. Dodatkowe informacje o sposobach oczyszczania, można znaleźć, np. w publikacji Huyghe i in., Human Gene Therapy. Vol. 6, str. 1403-1416 (1995) i zgłoszeniu US o numerze 08/989227, stanowiących odnośnik literaturowy dla niniejszego zgłoszenia.
Dane trwałości dla sposobów zatężania preparatów wirusa z użyciem filtracji z przepływem stycznym
Jak pokazują poniższe dane doświadczalne, sposoby według wynalazku pozwalają na znaczne polepszenie trwałości wirusa, pomimo mechanicznych sił poprzecznych przy zatężaniu wirusa, i pomimo surowych warunków, takich jak wysokie poziomy soli w puli DEAE. Sposoby według wynalazku pozwalają na, m.in. (1) łatwe wytwarzanie klinicznych dawek w dowolnym żądanym stężeniu (nawet gdy rozpoczyna się od substancji mającej niższe stężenie), (2) polepszenie przetwarzania (np. umożliwiając znacząco wyższą przepustowość podczas chromatografii z wykluczaniem rozmiarów), i (3) trwałość zawierającej sól puli DEAE przez >10 dni w temperaturze 2-10°C (pozwalając na przeprowadzanie kolejnych etapów zatężenia wirusa i/lub filtracji żelowej w innych dniach z istotną elastycznością w okresie 10 dni.
A. Zatężanie wirusa po chromatografii DEAE
W kolejnych trzech przykładach trwałe stężenia adenowirusa wytwarza się przez zatężanie pul DEAE w 30% glicerynie (zgodnie ze sposobami według wynalazku). Preparaty poddano następnie dalszemu oczyszczaniu metodą chromatografii z filtracją żelową Superdex-200 z wytworzeniem końcowego preparatu do testowania.
| P r z y k ł a d D-1 | |
| Końcowy skład: | 20 mM NaPi, 100 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 2% sacharozy, 10% gliceryny, pH 8 przy 2-10°C. |
| Wyniki: | Cząstki/FACS = 24 Rozpraszanie światła (A320/A260) = 0,22 Stężenfe = l.foW13 cząstek/ml |
| P r z y k ł a d D-2 | |
| Końcowy skład: | 14 mM zasady Tris, 11 mM NaPi, 2 mM MgCl2, 2% sacharozy, 10% gliceryny, pH 7,8 w temperaturze 2-10°C. |
| Wyniki: | Cząstki/FACS = 17 Rozpraszanie światła (A320/A260) = 0,25 tężenie = 1,5x1013 cząstek/ml |
| P r z y k ł a d D-3 | |
| Końcowy skład: | 20 mM NaPi, 100 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 2% sacharozy, 10% gliceryny, pH 8 przy 2-10°C. |
| Wyniki: | Cząstki/FACS = 24 Rozpraszanie światła (A320/A260) = 0,25 Stężenie = 1,3x1013 cząstek/ml |
B. Zatężanie wirusa po filtracji żelowej
P r z y k ł a d S-1
W poniższym przykładzie preparat wirusa zatężono w 20% glicerynie przed filtracją żelową. Końcowy skład: 16 mM NaPi , 80 mM NaCI , 1,6 mM MgCI2 , 1,6% sacharoyy,
20% gliceryny, pH 8 w temperaturze 2-10°C.
Wyniki: Cząstki/FACS = Τλ\
Rozpraszanie światła (A320/A260) = 0,26 Stężeme = 1,66x1013 cząstek/ml
Wszystkie publikacje, opisy i zgłoszenia patentowe cytowane w niniejszym zgłoszeniu dołącza się w całości jako odnośniki literaturowe tak, jak gdyby każda pojedyncza publikacja, opis i zgłoszenie patentowe było konkretnie i indywidualnie wskazane jako dołączone jako odnośnik literaturowy.
PL 197 747 B1
Modyfikacje i odmiany wynalazku będą oczywiste dla specjalisty w dziedzinie. Konkretne odmiany opisane w wynalazku podano tylko przykładowo, a wynalazek nie powinien być interpretowany jako tak ograniczony.
Claims (27)
- Zastrzeżenia patentowe1. Komppozcjazzwierająącaadnowiruus,zznmieenntym. że zzwieraaadnowiruuw preepracie zawierającym 20 do 200 mg/ml glicerolu, sacharozę i układ buforujący utrzymujący wartość pH w zakresie od około 7 do około 8,5 w temperaturze w zakresie od około 2°C do 27°C, przy czym układ buforowy zawiera dihydrat diwodorofosfaranu sodu w stężeniu około 0,5 do 10 mg/ml i trometaminę w stężeniu około 0,5 do 10 mg/ml.
- 2. Kornmpozyja weeług zzstrz. 1, zznmieenn tym, że saahhrooz wyyfęęujew stęęemu5 dd 25 mg/ml
- 3. Komppozyjaweeług zza^ 1 albb2, zznmieenntym. że puooSto zzwierastaailizz-or bbdący dwuwartościową solą metalu.
- 4. Kowppozyjaweeługzzstrz.3 , zznmieenntymi. że ntaailiza-orem bbęąccm dweweSośśiowe solą metalu jest chlorek magnezu.
- 5. Komppozyjaweeługzzstrz.4,z znmieenntym. że chloren mpanoeu wectęęujew stęęemu około 0,1 do 1 mg/ml.
- 6. Komppozyją weeług zzstrz. 1 albo 2, znamieena tym, że ρ<^γ^£^-^Ιο zzwiera środde ppwierzchniowo czynny.
- 7. Komppozyjaweeług zzstrz. 6, z znmieenntymi. że śroOdiem ppwierzzhhiowecczcnom j eet polioksyetylenosorbitan.
- 8. Kompozycja według zastrz. 7, znamienna tyi, ee polioksyetylenosorbitanem jest polisorbat 80.
- 9. Kowppozyjaweeługzzsttz.8, z znmieenntym. że pplisarbb-8 8wectęęujew etęęeniuo OoO> 0,03 do 0,3 mg/ml.
- 10. Komppozyjąweeług zastrz. 1 blbb 2, bznmieenntym. be bpooało bzwiera 1ooziencczlnik zawierający wodę.
- 11. Kowppozyjaweeługzzstrz. 1 albb22 z znmieenntym. że aadnowirugwectęęujew stęęenin około 1 x 109 do 1 x 1013 cząstek wirusa na ml.
- 12. Kowppozyjaweeług zzat^ 1 albb 22 zznmieenntym. że nadnowirugjent oenowPinoacjnom adenowirusem.
- 13. Sposób zatęeania preparatu wirusa, znamienny tyi, ee obejmuje:(a) dodawanie polihydroksywęglowodoru do preparatu wirusa do końcowego stęeenia polihydroksywęglowodoru około 20% lub więcej; i (b) poddawanie preparatu wirusa procesowi filtracji, w którym stęeenie wirusa zwiększa się przez stosowanie ciśnienia na preparat, przy czym rozcieńczalnik usuwa się z preparatu wirusa przez filtr a wirus pozostaje.
- 14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tyi, ee polihydrokscwęglowodorem jest glicerol.
- 15. Sposób według zastrz. 13 albo 14, znamienny tyi, ee proces filtracji obejmuje ultrafiltrację.
- 16. Spposó weeług zz-Soo. 13 albb 14, tym, że ρκκ^ 1ιΚ:οο—]ϊ oObjmpją ΑΚοο^ z przepływem stycznym.
- 17. Sposób według zastrz. 13 albo 14, znamienny tyi, ee wirusem jest rekombinacyjny wirus.
- 18. Ss^poSó weeług bast^ H blbb bznmieena tym, be wirou j jet 1onomPinoacjąocj wirosem niosącym terapeutyczny transgen do stosowania w terapii genowej.
- 19. Sposób według zastrz. 13 albo 14, znamienny tyi, ee wirusem jest adenowirus.
- 20. Sposób zatęeania preparatu wirusa, znamienny tyi, ee obejmuje:(a) odwirowywanie kompozycji, która zawiera pierwszą warstwę zawierającą polihydrokscwęglowodór w stęeeniu 35% do 80% objętościowych, która jest pokryta drugą warstwą zawierającą polihydroksywęglowodór w stęeeniu 5% do 30% objętościowych, która jest pokryta trzecią warstwą zawierającą wirusa; i (b) odzyskiwanie wirusa z pierwszej warstwy.
- 21. Sposób oczyszczania preparatu wirusa, znamienny tyi, ee obejmuje :(a) poddawanie preparatu wirusa chromatografii anionowymiennej, w której wirusa eluuje się jako preparat wirusa ze środowiska chromatografii anionowymiennej;PL 197 747 B1 (b) dodawanie polihydroksywęglowodoru do preparatu wirusa z etapu (a) do stężenia polihydroksywęglowodoru w preparacie około 25% lub więcej; i (c) zwięększniestęężnia wiruusw preepraaiewiruusz etaau(b) pprzestosswanieciśnieniann preparat, przy czym rozcieńczalnik usuwa się z preparatu wirusa przez filtr a wirus pozostaje; oraz (d) ppOddwanie zzręężsneg preepraru wirusa z etaau (c) j eenimu I ub kilkk ddOdrkkwam z eta pom obróbki.
- 22. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że polihydroksywęglowodorem jest glicerol.
- 23. Sposób według zastrz. 21 albo 22, znamienny tym, że obejmuje dodatkowy etap obróbki obejmujący chromatografię z wykluczałem rozmiarów.
- 24. Sposób według zastrz. 21 albo 22, znamienny tym, że etap (c) obejmuje filtrację z przepływem stycziym.
- 25. Sppsaówaełubzzntrz.21albb22, z znmieenntym, żż etaa(c) prowaadis ięstosająą aapa rat zawierający układ filtracyjny Pellicoi XL.
- 26. Sppsaówaenιb zzasz. Z1 zlbb Z2, zznmieenytym. żż wiruu j eł (enomUinnacjnnm wirusem łosącym terapeutyczny transgen do stosowała w terapii genowej.
- 27. Sposób według zastrz. 21 albo 22, znamienny tym, że wirusem jest adenowirus.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2446298A | 1998-02-17 | 1998-02-17 | |
| US7964398A | 1998-05-15 | 1998-05-15 | |
| PCT/US1999/001873 WO1999041416A2 (en) | 1998-02-17 | 1999-02-12 | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL342847A1 PL342847A1 (en) | 2001-07-16 |
| PL197747B1 true PL197747B1 (pl) | 2008-04-30 |
Family
ID=26698472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL342847A PL197747B1 (pl) | 1998-02-17 | 1999-02-12 | Kompozycja zawierająca adenowirusa, sposoby zatężania preparatu wirusa oraz sposób oczyszczania preparatu wirusa |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (4) | EP1054955B1 (pl) |
| JP (3) | JP4358434B2 (pl) |
| KR (5) | KR100912362B1 (pl) |
| CN (2) | CN100374551C (pl) |
| AR (3) | AR020054A1 (pl) |
| AT (3) | ATE478945T1 (pl) |
| AU (1) | AU757976B2 (pl) |
| BR (1) | BR9908015A (pl) |
| CA (2) | CA2723040A1 (pl) |
| CO (1) | CO4820440A1 (pl) |
| DE (3) | DE69933433T2 (pl) |
| DK (1) | DK1054955T3 (pl) |
| ES (2) | ES2272053T3 (pl) |
| HK (3) | HK1073481A1 (pl) |
| HU (1) | HU226015B1 (pl) |
| ID (1) | ID28298A (pl) |
| IL (2) | IL137510A0 (pl) |
| MY (1) | MY141641A (pl) |
| NO (1) | NO20004104L (pl) |
| PE (1) | PE20000265A1 (pl) |
| PL (1) | PL197747B1 (pl) |
| PT (1) | PT1054955E (pl) |
| SK (1) | SK11842000A3 (pl) |
| TW (1) | TWI232107B (pl) |
| WO (1) | WO1999041416A2 (pl) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100503701B1 (ko) | 1996-11-20 | 2005-07-26 | 인트로겐 테라페티스, 인코퍼레이티드 | 아데노바이러스 벡터를 생산하고 정제하는 개선된 방법 |
| US7732129B1 (en) | 1998-12-01 | 2010-06-08 | Crucell Holland B.V. | Method for the production and purification of adenoviral vectors |
| EP1133316B1 (en) * | 1998-11-16 | 2009-01-21 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| US6689600B1 (en) | 1998-11-16 | 2004-02-10 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| AU4346101A (en) * | 2000-03-07 | 2001-09-17 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
| US7456009B2 (en) | 2000-03-07 | 2008-11-25 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
| US20020064860A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-05-30 | Schering Corporation | Method for purifying adenoviruses |
| WO2002047726A2 (en) * | 2000-12-12 | 2002-06-20 | Japan Tobacco Inc. | Pharmaceutical composition containing an active with a hemolytic action and a surfactant |
| EP1453536A4 (en) | 2001-12-12 | 2009-08-26 | Mayne Pharma Int Pty Ltd | COMPOSITION FOR PRESERVING VIRUSES |
| US20030153065A1 (en) * | 2002-01-14 | 2003-08-14 | Genvec, Inc. | Composition and method for maintaining non-enveloped viral vectors |
| US20030232018A1 (en) * | 2002-01-18 | 2003-12-18 | Berlex Biosciences | Stabilized formulations of adenovirus |
| AU2005214090B2 (en) | 2004-02-23 | 2008-09-11 | Crucell Holland B.V. | Virus purification methods |
| CA2586107A1 (en) | 2004-11-03 | 2006-05-18 | Introgen Therapeutics Inc. | A novel method for the production and purification of adenoviral vectors |
| JP4621743B2 (ja) | 2004-12-13 | 2011-01-26 | カンジ，インコーポレイテッド | 複製欠損アデノウイルスの産生のための細胞株 |
| CN101155915B (zh) | 2005-04-11 | 2013-12-04 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 利用超滤进行病毒纯化 |
| CN1961961B (zh) * | 2005-11-11 | 2010-05-26 | 深圳市源兴生物医药科技有限公司 | 一种药物制剂及其制备方法 |
| JP5097714B2 (ja) | 2005-12-12 | 2012-12-12 | カンジ，インコーポレイテッド | Ｅ１領域内の発現カセットと不活性化されたｅ２ｂポリメラーゼを有するアデノウイルス発現ベクター |
| AU2007240797B2 (en) * | 2006-04-20 | 2013-05-23 | Wyeth Llc | Purification processes for isolating purified vesicular stomatitis virus from cell culture |
| ES2532015T3 (es) | 2008-11-03 | 2015-03-23 | Crucell Holland B.V. | Método para la producción de vectores adenovíricos |
| JP5879256B2 (ja) | 2009-05-02 | 2016-03-08 | ジェンザイム・コーポレーション | 神経変性障害のための遺伝子治療 |
| WO2011098592A1 (en) | 2010-02-15 | 2011-08-18 | Crucell Holland B.V. | Method for the production of ad26 adenoviral vectors |
| US8771709B2 (en) | 2010-09-20 | 2014-07-08 | Crucell Holland B.V. | Therapeutic vaccination against active Tuberculosis |
| US9168292B2 (en) | 2010-09-27 | 2015-10-27 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime boost vaccination regimen against malaria |
| AU2011336410B2 (en) | 2010-12-02 | 2015-01-22 | Oncolytics Biotech Inc. | Lyophilized viral formulations |
| WO2012075379A2 (en) | 2010-12-02 | 2012-06-07 | Oncolytics Biotech Inc. | Liquid viral formulations |
| EA201391605A1 (ru) * | 2011-04-29 | 2014-02-28 | Онколитикс Байотек Инк. | Способы очистки вирусов с использованием гельпроникающей хроматографии |
| US8932607B2 (en) | 2012-03-12 | 2015-01-13 | Crucell Holland B.V. | Batches of recombinant adenovirus with altered terminal ends |
| CN104379733B (zh) | 2012-03-12 | 2016-01-20 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 具改变末端的重组腺病毒群 |
| US9125870B2 (en) | 2012-03-22 | 2015-09-08 | Crucell Holland B.V. | Vaccine against RSV |
| MY169352A (en) | 2012-03-22 | 2019-03-25 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Vaccine against rsv |
| MX361774B (es) | 2013-04-25 | 2018-12-17 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Polipéptidos f de prefusión del virus sincicial respiratorio (rsv) solubles y estabilizados. |
| PE20160045A1 (es) | 2013-06-17 | 2016-02-18 | Crucell Holland Bv | Polipeptidos f de prefusion del virus sincicial respiratorio (rsv) solubles y estabilizados |
| KR20170004966A (ko) * | 2014-05-28 | 2017-01-11 | 에이전시 포 사이언스, 테크놀로지 앤드 리서치 | 바이러스 감소 방법 |
| US10570417B2 (en) | 2015-04-14 | 2020-02-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Recombinant adenovirus expressing two transgenes with a bidirectional promoter |
| JP6840718B2 (ja) | 2015-07-07 | 2021-03-10 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． | 安定化された可溶性融合前ｒｓｖ ｆポリペプチド |
| WO2017005844A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Vaccine against rsv |
| AU2017248021B2 (en) | 2016-04-05 | 2021-08-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized soluble pre-fusion RSV F proteins |
| BR112018070323A2 (pt) | 2016-04-05 | 2019-01-29 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | vacina contra rsv |
| WO2017207480A1 (en) | 2016-05-30 | 2017-12-07 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized pre-fusion rsv f proteins |
| US11001858B2 (en) | 2016-06-20 | 2021-05-11 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Potent and balanced bidirectional promoter |
| WO2018011196A1 (en) | 2016-07-14 | 2018-01-18 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Hpv vaccines |
| WO2018210871A1 (en) | 2017-05-17 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against rsv infection |
| EP3624844A1 (en) | 2017-05-17 | 2020-03-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against rsv infection |
| WO2019021305A1 (en) * | 2017-07-24 | 2019-01-31 | Ella Foundation | VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE |
| EP3681533A1 (en) | 2017-09-15 | 2020-07-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Method for the safe induction of immunity against rsv |
| CN114173827A (zh) * | 2019-06-28 | 2022-03-11 | 武田药品工业株式会社 | 腺相关病毒纯化方法 |
| JP2023512519A (ja) | 2020-01-31 | 2023-03-27 | ベス イスラエル ディーコネス メディカル センター インコーポレイテッド | コロナウイルス感染症を予防および処置するための組成物および方法－ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２ワクチン |
| WO2022175477A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized pre-fusion rsv fb antigens |
| WO2023020556A1 (zh) * | 2021-08-17 | 2023-02-23 | 上海行深生物科技有限公司 | 病毒制剂、用于配制病毒制剂的溶液及其用途 |
| WO2023020939A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Sars-cov-2 vaccines |
| WO2023111725A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-22 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Sars-cov-2 vaccines |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE299213C (pl) * | ||||
| US4147772A (en) * | 1976-02-03 | 1979-04-03 | Merck & Co., Inc. | Vaccine stabilizer |
| GB1575155A (en) * | 1978-04-11 | 1980-09-17 | Merck & Co Inc | Vaccine stabilizer |
| BE866330A (fr) * | 1978-04-25 | 1978-10-25 | Merck & Co Inc | Procede de fabrication d'un agent de stabilisation de vaccin |
| US5532220A (en) | 1987-08-31 | 1996-07-02 | The Regents Of The University Of California | Genetic mechanisms of tumor suppression |
| DD299213A7 (de) * | 1988-05-04 | 1992-04-09 | Saechsische Landesgewerbefoerderungsgesellschaft M.B.H.,De | Verfahren zur stabilisierung eines lebendvirusimpfstoffes gegen temperatureinwirkung |
| DD295927A5 (de) * | 1988-05-06 | 1991-11-14 | Saechsisches Serumwerk Gmbh Dresden, | Immobilisiertes immunologisch aktives reagens |
| DE69434594T2 (de) | 1993-10-25 | 2006-09-21 | Canji, Inc., San Diego | Rekombinante adenoviren-vektor und verfahren zur verwendung |
| KR100368686B1 (ko) * | 1994-12-29 | 2003-12-01 | 주식회사 엘지생명과학 | 수크로즈를이용한세포와바이러스의분리방법 |
| FR2742756B1 (fr) * | 1995-12-22 | 1998-04-03 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Stabilisants pour vaccins vivants, vaccins les contenant et procedes pour leur preparation |
| US5789244A (en) | 1996-01-08 | 1998-08-04 | Canji, Inc. | Compositions and methods for the treatment of cancer using recombinant viral vector delivery systems |
-
1999
- 1999-02-12 BR BR9908015-0A patent/BR9908015A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-02-12 ES ES99906690T patent/ES2272053T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 JP JP2000531596A patent/JP4358434B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 DE DE69933433T patent/DE69933433T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP99906690A patent/EP1054955B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 ES ES04030395T patent/ES2290613T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 DE DE69942708T patent/DE69942708D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP04030394A patent/EP1526173B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 AT AT06019642T patent/ATE478945T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020087008928A patent/KR100912362B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 DK DK99906690T patent/DK1054955T3/da active
- 1999-02-12 AT AT04030395T patent/ATE371020T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 EP EP04030395A patent/EP1526174B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 ID IDW20001574A patent/ID28298A/id unknown
- 1999-02-12 CA CA2723040A patent/CA2723040A1/en not_active Abandoned
- 1999-02-12 SK SK1184-2000A patent/SK11842000A3/sk unknown
- 1999-02-12 CA CA2320419A patent/CA2320419C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 TW TW088102219A patent/TWI232107B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020097022935A patent/KR101018992B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 AT AT99906690T patent/ATE341614T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 WO PCT/US1999/001873 patent/WO1999041416A2/en active IP Right Grant
- 1999-02-12 CN CNB998050989A patent/CN100374551C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 AU AU26538/99A patent/AU757976B2/en not_active Ceased
- 1999-02-12 PT PT99906690T patent/PT1054955E/pt unknown
- 1999-02-12 CN CN2007101670867A patent/CN101164623B/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 KR KR1020087008929A patent/KR100918187B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020097004676A patent/KR100991683B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020007008878A patent/KR100862169B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 HU HU0100670A patent/HU226015B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 PL PL342847A patent/PL197747B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 IL IL13751099A patent/IL137510A0/xx unknown
- 1999-02-12 DE DE69936948T patent/DE69936948T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP06019642A patent/EP1741777B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-15 MY MYPI99000542A patent/MY141641A/en unknown
- 1999-02-16 CO CO99009282A patent/CO4820440A1/es unknown
- 1999-02-16 PE PE1999000137A patent/PE20000265A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-02-23 AR ARP990100656A patent/AR020054A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-07-25 IL IL137510A patent/IL137510A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-08-16 NO NO20004104A patent/NO20004104L/no not_active Application Discontinuation
- 2000-12-01 HK HK05106734A patent/HK1073481A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-12-01 HK HK00107727A patent/HK1028416A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-02-07 JP JP2006030336A patent/JP2006166925A/ja not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-05-10 HK HK07104995.0A patent/HK1097413A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-10-16 AR ARP070104576A patent/AR063314A2/es unknown
- 2007-10-16 AR ARP070104577A patent/AR063315A2/es unknown
-
2010
- 2010-07-08 JP JP2010156257A patent/JP2010213727A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL197747B1 (pl) | Kompozycja zawierająca adenowirusa, sposoby zatężania preparatu wirusa oraz sposób oczyszczania preparatu wirusa | |
| US20060018930A1 (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| US20080261289A1 (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| EP1371723A1 (en) | Process for preparing an adenovirus-containing preparation | |
| CZ20002864A3 (cs) | Prostředek obsahující virus, způsoby jeho koncentrace a purifikace | |
| MXPA00008008A (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| ES2349106T3 (es) | Composiciones que comprenden virus y procedimientos para concentrar preparaciones virales. | |
| NZ505952A (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20100212 |