HU226015B1 - Compositions and preparations comprising viruses - Google Patents
Compositions and preparations comprising viruses Download PDFInfo
- Publication number
- HU226015B1 HU226015B1 HU0100670A HUP0100670A HU226015B1 HU 226015 B1 HU226015 B1 HU 226015B1 HU 0100670 A HU0100670 A HU 0100670A HU P0100670 A HUP0100670 A HU P0100670A HU 226015 B1 HU226015 B1 HU 226015B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- virus
- composition according
- concentration
- adenovirus
- preparation
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 130
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 62
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 73
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 102
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 43
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 28
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 21
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 21
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 19
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 18
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 11
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 claims description 11
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M sodium;dihydrogen phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].OP(O)([O-])=O VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 4
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 63
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 abstract description 29
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 abstract description 29
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 abstract description 23
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 description 19
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 19
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 14
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 13
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 12
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 12
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 12
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 12
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- -1 20 to 200 mg / ml Chemical compound 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 7
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 7
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 5
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 241000701372 Iridovirus Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 2
- 150000001923 cyclic compounds Chemical group 0.000 description 2
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-fluorophenyl)methyl]piperazine Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1CN1CCNCC1 OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWEVPYNPHSPIFU-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentahydroxy-n-[3-[3-(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoylamino)propyl-[4-(3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl)pentanoyl]amino]propyl]hexanamide Chemical compound OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)N(CCCNC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)CO)CCCNC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)CO)C)C1(C)C(O)C2 ZWEVPYNPHSPIFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- 235000013175 Crataegus laevigata Nutrition 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700025701 Retinoblastoma Genes Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 108010079785 calpain inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 159000000006 cesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- OJSUWTDDXLCUFR-YVKIRAPASA-N deoxy-bigchap Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@H]([C@@H](CCC(=O)N(CCCNC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO)CCCNC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO)C)[C@@]2(C)[C@H](O)C1 OJSUWTDDXLCUFR-YVKIRAPASA-N 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000002607 heparin antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000076 hypertonic saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-UHFFFAOYSA-N n-octyl beta-D-glucopyranoside Natural products CCCCCCCCOC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HEGSGKPQLMEBJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002599 prostaglandin synthase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940074545 sodium dihydrogen phosphate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 1
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10351—Methods of production or purification of viral material
Description
A találmány tárgyát vírusokat, különösen vírusvektorokat tartalmazó készítmények képezik, amelyek szignifikánsan javított stabilitással rendelkeznek. A találmány szerinti készítmények vírusok tárolás alatti stabilitásának fenntartására alkalmasak, és a találmány szerinti, vírust tartalmazó készítmények különösen hasznosak terápiás alkalmazásokban, például génterápiában. A találmány továbbá víruspreparátumok töményítésére és tisztítására szolgáló új eljárásokat is tárgyal.
A vírusoknak egyre nagyobb jelentősége van terápiás alkalmazásokban, például vakcinációkban és génterápiában, és szükség van olyan stabil, vírustartalmú készítmények kifejlesztésére és előállítására, amelyeket könnyen lehet tárolni és szállítani, miközben még elegendően biztonságosak és hatékonyak maradnak. A vírusvektorok elterjedt génterápiás alkalmazását véve, különösen fontos olyan formák kifejlesztése és előállítása, amelyek stabilan képesek tartósítani élő, rekombináns vírusokat, ha terápiás transzgéneket hordoznak.
Továbbá jelentős igény van olyan formákra, amelyek -80 °C felett képesek víruspreparátumokat stabilizálni, hosszabb időtartamra. Vírustartalmú készítményeket normálisan -80 °C-on kell tárolni, és nem lehet standard hűtési körülmények között (például 2 °C és 8 °C között, vagy magasabb hőmérsékleten) tárolni számottevő ideig. Ez a korlátozás komoly akadályt jelent a feldolgozásban, kiszerelésben és széles körű klinikai alkalmazásban.
Szükség van olyan vírustartalmú készítmények kifejlesztésére is, amelyeket körülbelül 7 és körülbelül 8,5 pH-tartományban lehessen tartani annak ellenére, hogy hűtve vannak, és viszontagságos körülmények között vannak, például fagyasztáson/felolvasztáson, különösen lassú fagyasztáson/felolvasztáson esnek át, amely nagy mennyiségű anyag termelésekor, kezelésekor és kiszerelésekor fordulhat elő. A pH adott értéken tartása fontos víruspreparátumok esetén, mivel 7,0 alatti és 8,5 feletti pH-η az élő vírusrészecskék sérülékennyé válnak életképességük tekintetében fiziológiai és biológiai instabilitás következtében.
További problémákat jelent a víruskoncentrációk növelése. Különösen a magas víruskoncentráció járul hozzá szignifikánsan a vírusinstabilitáshoz. Viszont egyre magasabb koncentrációjú vírusokra és vírusvektorokra van szükség terápiás alkalmazásra. Ennélfogva jelentős igény van olyan formák kifejlesztésére, amelyek vírust viszonylag magas koncentrációkban stabilizálnak, különösen a fentebb említett viszontagságos körülmények között. És továbbá különös igény van meglévő víruspreparátumok koncentrálására szolgáló, új eljárások kidolgozására, magasabb koncentrációjú, stabil preparátumok előállítása céljából. A magasabb víruskoncentrációkkal társult instabilitási problémák szignifikánsan súlyosbodnak, ha meglévő víruspreparátumot próbálunk töményíteni. Ez részben további mechanikai nyíróerőknek tulajdonítható, amelyek meglévő víruspreparátum koncentrációjának növelésekor lépnek fel. Ha találnánk egy módszert víruspreparátum töményítésére a vírus stabilitásának lényegi károsodása nélkül, akkor bármilyen kívánt koncentrációjú klinikai dózist könnyen elő lehetne állítani (még akkor is, ha alacsony koncentrációjú anyagból indulunk ki), és ami jelentős, hogy lehetővé válna olyan vírustöményítés, amelyben elíminálva lenne a problematikus szűk keresztmetszet és más méretnövelési problémák a tisztítási eljárás alatt, szignifikánsan nagyobb hatékonyságot lehetővé téve a különböző feldolgozási lépések alatt, például méretkizárásra alapuló kromatográfiában.
Tehát van igény olyan anyagokra és módszerekre, amelyekkel megoldhatók a fenti célkitűzések.
A találmány készítményt biztosít adenovírusok stabilitásának fenntartására, amely készítményben az adenovírus 20-200 mg/ml glicerint, szacharózt és egy, a pH-t 2 °C-tól 27 °C-ig terjedő hőmérséklet-tartományban 7 és 8,5 között tartó pufferrendszert tartalmazó formulációban van, ahol a pufferrendszer 0,5-10 mg/ml koncentrációban mononátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrátot és 0,5-10 mg/ml koncentrációban trometamint tartalmaz.
A leírásban tárgyalunk továbbá új eljárásokat meglévő víruspreparátumok töményítésére, amelyek lehetővé teszik klinikai dózisok könnyű kiválasztását és előállítását tág, kívánt koncentrációtartományban. Egy víruspreparátum töményítésére szolgáló előnyös eljárás tartalmazza:
(a) egy polihidroxi-szénhidrogénnek egy víruspreparátumhoz körülbelül 20% vagy magasabb polihidroxi-szénhidrogén-végkoncentrációig való hozzáadását; és (b) a víruspreparátum olyan szűrési eljárásnak való alávetését, amelyben a vírus koncentrációját úgy növeljük, hogy nyomást alkalmazunk a preparátumra, így az oldószer eltávozik a víruspreparátumból egy szűrőn keresztül, miközben a vírus visszatartódik.
A leírásban tárgyalunk továbbá egy olyan eljárást is víruspreparátum töményítésére, amelyben:
(a) centrifugálunk egy készítményt, amely egy első réteget tartalmaz, amely polihidroxi-szénhidrogént tartalmaz 35 térf.% és 80 térf.% közötti koncentrációban, az első rétegre rá van rétegezve egy második réteg, amely polihidroxi-szénhidrogént tartalmaz 5 térf.% és 30 térf.% közötti koncentrációban, a második rétegre rá van rétegezve egy harmadik réteg, amely vírust tartalmaz; és (b) kinyerjük a vírust az első rétegből.
Továbbá azt találtuk, hogy a víruskoncentráció növelésére szolgáló új eljárás további előnye, hogy fokozza a további feldolgozás hatékonyságát (például csökkenti vagy eliminálja a problematikus szűk keresztmetszetet az azt követő tisztítás alatt, szignifikánsan nagyobb hatékonyságot lehetővé téve a különböző feldolgozási lépések alatt, például méretkizárásra alapuló kromatográfiában). A víruspreparátumok töményítésére szolgáló eljárásban van ezt követően még egy további tisztítási lépés (például méretkizárásra alapuló kromatográfia). Ebben a vonatkozásban az eljárás különösen hasznos akkor, ha méretkizárásra alapuló kromatográfiát végzünk ioncserélő kromatográfia után, és
HU 226 015 Β1 a víruspreparátumot az ioncserélő kromatográfia után, de a méretkizárásra alapuló kromatográfia előtt töményítjük. Az anioncserélő kromatográfiából származó vírusfrakciók például tipikusan nagy mennyiségű sót és valószínűleg más, olyan szennyeződést tartalmaznak, amelyek tovább veszélyeztetik a vírus stabilitását a töményítési eljárások alatt. A leírásban tárgyalunk továbbá egy olyan eljárást víruspreparátum tisztítására, amelyben:
(a) a víruspreparátumot anioncserélő kromatográfiának vetjük alá, amelyben a vírust víruspreparátumtermékként eluáljuk egy anioncserélő kromatográfiás közegről;
(b) az (a) lépésből származó víruspreparátum-termékhez hozzáadunk polihidroxi-szénhidrogént úgy, hogy a preparátumban lévő polihidroxi-szénhidrogén végkoncentrációja elérjen körülbelül 25%-ot vagy magasabb értéket; és (c) növeljük a (b) lépésből származó víruspreparátum-termékben lévő vírus koncentrációját úgy, hogy nyomást alkalmazunk a preparátumon, így az oldószert eltávolítjuk a víruspreparátumból egy szűrőn keresztül, miközben a vírust visszatartjuk; és (d) a (c) lépésből származó, töményített víruspreparátum-terméket egy vagy több, további feldolgozási lépésnek vetjük alá.
A leírásban tárgyalunk a fenti eljárások alkalmazásával töményített és/vagy tisztított víruspreparátumokat is.
A fentebb leírtak szerint, a találmány tárgyát új, vírustartalmú készítmények képezik, valamint új eljárások vírustartalmú készítmények töményítésére és tisztítására.
A készítmények tekintetében, kifejlesztettünk egy új, pufferolt formát, amely képes víruspreparátumokat fokozott stabilitással tartósítani. A forma különösen jóval -80 °C feletti hőmérsékleteken képes stabilizálni víruspreparátumokat. Még fontosabb, hogy a találmány szerinti készítmények stabilak tipikus hűtési hőmérsékleteken, például 2 °C és 8 °C között, vagy magasabb hőmérsékleten, számottevő ideig, előnyösen néhány hónapig vagy tovább. Ez jelentős előny, mivel a fentebb említettek szerint, klinikai igények kielégítése céljából nem praktikus víruspreparátumokat -80 °C-on fagyasztani tárolás és szállítás alatt.
A találmány szerinti készítmények fontos jellemzője, hogy egy polihidroxi-szénhidrogént, nevezetesen glicerint tartalmaznak. A leírásban „polihidroxi-szénhidrogén” elágazó vagy egyenes láncú, vagy ciklikus vegyületet jelent, melyek 2 vagy több (előnyösen 2 és 6 közötti, előnyösebben 2 és 4 közötti) hidroxicsoporttal vannak szubsztituálva. A polihidroxi-szénhidrogének polihidroxiszubsztituált alkilvegyületek (elágazóak vagy nem elágazóak), előnyösen 2-7 szénatomosak, ilyen például glicerin, szorbit és polipropanol. A lentebb bemutatott adatok alapján azt találtuk, hogy a glicerin meglepően nagymértékű stabilitást lesz lehetővé hosszabb ideig, még standard hűtési körülmények között is.
A találmány szerinti készítményekben alkalmazott glicerin hatásos mennyisége akkora mennyiség, amely elegendő a vírus stabilizálásához a találmány szerinti formában, anélkül hogy károsan befolyásolná a vírus hatékonyságát későbbi alkalmazásban, különösen olyan esetekben, amikor a vírus génterápiában alkalmazott transzgént tartalmaz. A jelen lévő glicerin végkoncentrációja körülbelül 20-200 mg/ml. Szűkebben vett koncentrációtartomány lehet 80-120 mg/ml. Egynél több polihidroxi-szénhidrogént is lehet alkalmazni. A polihidroxi-szénhidrogének adott esetben tartalmazhatnak egy aldehidcsoportot. A polihidroxi-szénhidrogén lehet egy diszacharid, például szacharóz. A glicerin nem tartalmaz aldehidcsoportot, a készítmény azonban még tartalmazhat egy diszacharidot, például szacharózt stabilizátorként és tonicitásbeállító ágensként. A találmány szerinti készítmény tartalmaz glicerint és hozzáadott stabilizátorként és tonicitásbeállító ágensként szacharózt. A szacharóz előnyösen 5-25 mg/ml, előnyösebben 20 mg/ml tartományban van jelen.
A találmány előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti készítményben gyógyászatilag elfogadható, divalens fémsó-stabilizátorokat, például magnéziumsókat, cinksókat és kalciumsókat alkalmazunk. A só előnyösen kloridsó vagy magnéziumsó, a magnéziumsó különösen előnyös. A só (például magnéziumsó) előnyösen körülbelül 0,1 és 1 mg/ml közötti koncentrációban van jelen, előnyösebben körülbelül 0,4 mg/ml koncentrációban van jelen.
A találmány előnyös megvalósítási módja szerint gyógyászatilag elfogadható, monovalens fémsó-stabilizátorokat, például kálium-, nátrium-, lítium- vagy céziumsókat alkalmazhatunk, adott esetben választható stabilizátorként. A só előnyösen körülbelül 0,6 és 10,0 mg/ml közötti koncentrációban jelen lévő nátriumklorid, előnyösebben körülbelül 5,8 mg/ml koncentrációban van jelen.
A készítmény stabilizálásán kívül, a nátrium-klorid szuppresszálhatja fermentációs melléktermékek megjelenésének sebességét és mértékét, gyógyászatilag elegánsabb tálalást eredményezve, amely csökkentheti a fehérjeaggregátumoknak tulajdonítható antigenikus potenciált. Nátrium-klorid hozzáadása nem befolyásolja a forma pH-ját.
A találmány szerinti készítmény képes a pH-t körülbelül 7 és körülbelül 8,5 pH-tartományban tartani hosszabb ideig, még akkor is, ha viszontagságos körülményeknek vetjük alá azokat, például hűtésnek és fagyasztásnak/felolvasztásnak. Továbbá a készítmények stabilak maradhatnak, és megtarthatják a kívánt pH-tartományt még akkor is, ha viszonylag lassú fagyasztásnak/felolvasztásnak vetjük alá azokat, amely nagy mennyiségű anyag termelésével, kiszerelésével és kezelésével kapcsolatban fordulhat elő. A fentebb említettek szerint, a pH adott értéken tartása fontos víruspreparátumok esetén, mivel 7,0 alatti és 8,5 feletti pH-η az élő vírusrészecskék instabilakká válhatnak és bomolhatnak. Az adott víruskészítményekben nehéz a vírusokat stabilizálni és tartósítani.
A pH viszontagságos körülmények közötti fenntartása céljából a találmány szerinti megoldásban olyan
HU 226 015 Β1 pufferrendszert alkalmazunk, amely képes optimális pH-t körülbelül 7,0 és körülbelül 8,5 közötti pH-tartományban fenntartani annak ellenére, hogy hűtve, -80 ’C és 27 ’C között vannak tárolva, és annak ellenére, hogy fagyasztás/felolvasztás hatásának vannak kitéve. Mivel a pH változhat a hőmérséklet függvényében, a találmány szerinti pH-tartományokat lentebb konkrétabban szemléltetjük, konkrét hőmérséklet-tartományokra vonatkoztatva. Például hűtési hőmérsékleteken (például körülbelül 2 °C és 8 °C között) az előnyös pH-tartomány körülbelül 7,7 és körülbelül 8,3 között van, előnyösebben körülbelül 7,9 és körülbelül 8,2 között van. Szobahőmérsékleten (például körülbelül 20 ’C és 27 °C között, előnyösen 22 °C és 25 °C között) az előnyös pH-tartomány körülbelül 7,3 és körülbelül 8,2 között van, előnyösebben körülbelül 7,4 és körülbelül 7,9 között van.
A találmány szerinti készítmény olyan pufferrendszert tartalmaz, amelyben nátrium-dihidrogén-foszfátdihidrát van körülbelül 0,5-10 mg/ml koncentrációban, és trometamint tartalmaz körülbelül 0,5-10 mg/ml koncentrációban. (A trometamin [trisz(hidroxi-metil)-amino-metán] TRIS-ként vagy „Trizma”-ként is ismeretes, beszerezhető a Sigma Chemical Co. cégtől.) Azonban más pufferrendszereket is tárgyalunk. Például dinátrium-hidrogén-foszfát-dihidrátot is lehet alkalmazni, ha a tris-puffer savas formájával kapcsoljuk össze. A találmány különösen előnyös megvalósítási módja szerint, a pufferrendszer mononátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrátot tartalmaz körülbelül 1,7 mg/ml koncentrációban, és trometamint körülbelül 1,7 mg/ml koncentrációban, és képes a forma optimális pH-t körülbelül 7,3 és körülbelül 7,9 közötti pH-tartományban fenntartani 25 ’C-on.
A találmány szerinti forma további előnye, hogy képes nagy koncentrációban lévő vírust stabilizálni a fentebb említett, viszontagságos körülmények között (például hűtési hőmérsékleteken és fagyasztási/felolvasztási folyamat alatt). A találmány szerinti forma különleges előnye, hogy képes vírus stabilitását fenntartani egészen 1*1013 részecske/ml koncentrációig terjedő tartományban. A találmány szerint alkalmazott előnyös víruskoncentrációk 1 * 109 és 1*1013 részecske/ml között vannak, előnyösebben 1*1012 részecske/ml koncentrációig terjedő tartományban vannak, például 1*109 (vagy 1*101θ) és 1 *1012 között vannak.
A leírásban használt „hígítószer” kifejezésen oldószert (például vizet, előnyösen steril vizet) vagy oldószerkeveréket és más adalék anyagokat értünk, például további oldószereket, további stabilizátorokat, további puffereket és/vagy más olyan anyagokat, amelyek nincsenek káros hatással a forma biztonságára, hatékonyságára és stabilitására. Hígítószerek, stabilizátorok, pufferek és hasonlók vonatkozásában lásd például „Remington's s Pharmaceutical Science” című kiadványt, 15. kiadás, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.
A találmány szerinti készítmény adott esetben tartalmazhat felületaktív anyagot, előnyösen nemionos detergenst, például poli(oxi-etilén)-zsírsav-észtert [például poli(oxi-etilén)-szorbitánokat, például Polysorbate 20-at, Polysorbate 40-et, Polysorbate 60-at vagy Polysorbate 80-at, melyeket az ICI Americas, Inc. cégtől szerezhetünk be, Wilmington, Delaware, vagy Tween 20-at, Tween 40-et, Tween 60-at vagy Tween 80-at, melyeket a Sigma cégtől szerezhetünk be, St. Louis, Mo]. A nemionos detergens előnyösen poli(oxi-etilén)zsírsav-észter, és a poli(oxi-etilén)-zsirsav-észter előnyösen Polysorbate 80, amely stabilizátorként hat a találmány szerinti készítményben. A nemionos detergens koncentrációja előnyösen 0,03 és 0,3 mg/ml közötti tartományban van; előnyösebben 0,15 mg/ml.
A találmány szerinti készítmények tartalmazhatnak továbbá egy vagy több „célba juttatást fokozó ágenst”. „Célba juttatást fokozó ágensen” értünk bármilyen olyan ágenst, amely fokozza terápiás gén, például tumorszupresszorgén célba juttatását rákos szövethez vagy szervhez. Ilyen célba juttatást fokozó ágensek lehetnek például detergensek, alkoholok, glikolok, felületaktív anyagok, epesavak sói, heparinantagonisták, ciklooxigenázinhibitorok, hipertóniás sóoldatok és acetátok.
Detergensek (mivel a kifejezést a leírásban alkalmazzuk) lehetnek például anionos, kationos, zwitterionos és nemionos detergensek. Detergens lehet például taurokolát, dezoxikolát, taurodezoxikolát, cetil-piridium, benzalkonium-klorid, ZWITTERGENT® 3-14 detergens, CHAPS [3-(3-kolamido-propil)-dimetil-ammónioj1-propánszulfonát-hidrát, Aldrich), Big CHAP, dezoxiBig CHAP, TRITON®-X-100 detergens, C12E8, oktilβ-D-glükopiranozid, PLURONIC®-F68 detergens, TWEEN®-20 detergens és TWEEN®-80 detergens (CALBIOCHEM® Biochemicals).
Célba juttatást fokozó ágensek alkalmazását részletesen ismertetik az alábbi, párhuzamosan benyújtott szabadalmi iratokban: U.S.S.N. 08/889.335 számú szabadalmi irat (benyújtva 1997. július 8-án), és a WO 97/25072 számú nemzetközi közzétételi irat (1997. július 17.), és az U.S.S.N. 09/112.074 számú szabadalmi irat (benyújtva 1998. július 8.), PCT/US 98/14241 számú szabadalmi irat. Továbbá kalpaininhibitorok alkalmazását vírusvektorokkal, transzdukciós hatékonyság növelésére leírják az U.S.S.N. 09/172.685 és 60/104321 számú (benyújtva 1998. október 15.) szabadalmi iratokban.
Vírusok széles körét tárgyaljuk a leírásban, például adenovírusokat, himlővírusokat iridovírusokat, herpeszvírusokat, papovavírusokat, paramyxovírusokat, ortomyxovírusokat, retrovírusokat, adenoasszociált vírust, tehénhimlővírust, rotavírust stb. [lásd például Anderson, Science 256, 808-813 (1992)]. A találmányban alkalmazott adenovírusok, előnyösen rekombináns vírusok, de lehetnek klinikai izolátumok, gyengített vakcinatörzsek stb. Tehát, a találmány szerinti készítményekben alkalmazható rekombináns adenovírus lehet például A/C/N/53, amelyet a WO 95/11984 számú nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetnek.
A találmány szerinti forma különösen jól megfelel rekombináns vírus, például élő rekombináns adenovírus (vagy „vírusvektor) stabilizálására, génterápiában való terápiás alkalmazásra. A találmány szerint alkal4
HU 226 015 Β1 mázott vírus tartalmazhat például tumorszupresszorgént, például vad típusú p53-gént vagy Rb-gént (például p110RB-t vagy p56RB-t), és transzgéneket, például vad típusú p53-at vírusvektorba inszertálva tartalmazó, találmány szerinti készítményt rák kezelésre szolgáló gyógyászati készítményként lehet alkalmazni.
Ebben a vonatkozásban, a találmány szerinti forma figyelemre méltóan képes élő vírus életképességét fenntartani, különösen olyan vírusvektorét, amelybe transzgén, például p53-at kódoló nukleotidszekvencia van inszertálva. Ez a jelenség lehetővé teszi, hogy a vírus célsejteket fertőzőképessége fennmaradjon, így az inszertált transzgén által kódolt terápiás hatású fehérje kielégítő mértékben termelődjön.
Konkrétan p53 és alkalmazásainak vonatkozásában megjegyezzük, hogy a p53-gén mutációja a legelterjedtebb genetikai változás humán rákos esetekben [Bartek, Oncogene 6, 1699-1703 (1991); Hollstein, Science 253, 49-53 (1991)]. Vad típusú p53 bevitele endogén, vad típusú p53-fehérjét nem tartalmazó emlősráksejtekbe szuppresszálja az ilyen sejtek neopláziás fenotípusát (lásd például az USP 5.532.220 számú szabadalmi iratot).
Az alábbi példákban vírusként vad típusú p53-gént tartalmazó, élő rekombináns adenovírust alkalmazunk. Ezekben a példákban konkrétan alkalmazott vírusvektor-konstrukciót „A/C/N/53”-ként jelöljük. Az A/C/N/53 (,ÁCN53-nak is jelöljük) különösen előnyös vírusvektorkonstrukció, melyet leírnak az USSN 08/328.673 számú, párhuzamosan benyújtott szabadalmi iratban (benyújtva 1994. október 25.) és a WO 95/11984 (1995. május 4.) számú szabadalmi iratban, melyeket a kitanítás részének tekintünk.
A találmány előnyös megvalósítási módja szerinti reprezentatív formát, amely Polysorbate 80-at tartalmaz, az alábbiakban mutatjuk be.
Reprezentatív forma
| Hatóanyag | A/C/N/53 | 1*109 és 1χ1013 részecske/ml között |
| Puffer | mononátrium- dihidrogén- foszfát | 0,5-10 mg/ml |
| trometamin | 0,5-10 mg/ml | |
| Stabilizáló/ tonizáló ágens | szacharóz | 5-25 mg/ml |
| Stabilizátorok | glicerin | 20-200 mg/ml |
| magnézium-klorid | 0,1-1 mg/ml | |
| Polysorbate 80 | 0,03-0,3 mg/ml | |
| Oldószer | víz q.s ad injekcióhoz | 1 ml |
(A készítményeket tipikusan 1 ml-es dózisokban tároljuk. „q.s. ad” jelentése a fenti formában az 1 ml teljes térfogat eléréséhez szükséges mennyiségű oldószer hozzáadását jelenti.)
A találmány négy, különösen előnyös megvalósítási módját ismertetjük az alábbiakban. (Polysorbate 80-at alkalmazunk az 1. és 2. példában, viszont a 3. és
4. példában nem.)
| 1. példa | 2. példa | |
| A/C/N/53 | 7,5x1011 | 7,5χ101θ |
| részecske/ml | részecske/ml | |
| Monobázikus | ||
| nátrium-foszfát- | ||
| dihidrát | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Trometamin | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Magnézium-klorid- | ||
| hexahidrát | 0,4 mg/ml | 0,4 mg/ml |
| Szacharóz | 20 mg/ml | 20 mg/ml |
| Polysorbate 80 | 0,15 mg/ml | 0,15 mg/ml |
| Glicerin | 100 mg/ml | 100 mg/ml |
| Víz q.s. ad injekcióhoz | 1 ml | 1 ml |
| pH | 7,4-7,8 | 7,4-7,8 |
| 3. példa | 4. példa | |
| A/C/N/53 | 7,5x1011 | 7,5x101° |
| részecske/ml | részecske/ml | |
| Monobázikus | ||
| nátrium-foszfát- | ||
| dihidrát | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Trometamin | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Magnézium-klorid- | ||
| hexahidrát | 0,4 mg/ml | 0,4 mg/ml |
| Szacharóz | 20 mg/ml | 20 mg/ml |
| Glicerin | 100 mg/ml | 100 mg/ml |
| Víz q.s. ad injekcióhoz | 1 ml | 1 ml |
| pH | 7,4-7,8 | 7,3-7,8 |
Az alábbi alkotórészeket például az EM Industries, INC. cégtől (7 Skyline Drive, Hawthorne, New York 10532) lehet beszerezni: monobázikus nátrium-foszfátdihidrát, trometamin, magnézium-klorid-hexahidrát, szacharóz és glicerin. Polysorbate 80 beszerezhető például az ICI Americas, Inc. cégtől, Wilmington Delaware, 19897.
A találmány szerinti készítményeket elő lehet állítani a vírus tisztításával gélszűrő kromatográfiás oszlopon úgy, hogy kívánt koncentrációjú adalék anyagokkal (Polysorbate 80-at kivételével) kombináljuk a gélszűrő oszlopban. (A gélszűrés módszerének vonatkozásában, hivatkozásokat lásd például lentebb, az V. részben.) Azután, ha a vírus koncentrációját hígítani kívánjuk, vagy Polysorbate 80-at szeretnénk hozzáadni, a hígítószereket standardtechnikák szerint lehet előállítani. Egy szemléltető példát az alábbiakban bemutatunk.
Bemérünk és feloldunk monobázikus nátrium-foszfát-dihidrátot, trometamint, szacharózt, magnézium-klorid-hexahidrátot és glicerint, egy reakció-térfogat körülbelül 75%-ának megfelelő mennyiségű vízben, szobahőmérsékleten, rozsdamentes acélból készült, keverővei ellátott reakcióedényben. Az eredményül kapott folyadékot feltöltjük injekcióban alkalmazott vízzel végtérfogatra. Ellenőrizzük a pH-t. Kiszámítjuk az A/C/N/53ból („Drug Substance in Suspension) szükséges térfogatot (transzgénként vad típusú p53-at alkalmazunk), és az A/C/N/53-injekció elkészítéséhez szükséges hígítószer térfogatát. Ha a végső A/C/N/53-injekció Polysorbate 80-at tartalmaz, törzsoldatot készítünk, amelyben a Polysorbate 80 10%-os feleslegben van a hígítószerben. Bemérjük a számított mennyiségű A/C/N/53-et
HU 226 015 Β1 („Drug Substance in Suspension”) és hígítószert egy rozsdamentes tartályba és összekeverjük. Ha szükséges, bemérjük a Polysorbate 80 oldatot a teljes A/C/N/53-injekció-sarzs térfogatának 10%-ára alapozva, majd hozzáadjuk az összes hígítószert. Sterilen átszűrjük a szuszpenziót egy sterilizált (0,22 pm vagy ezzel ekvivalens) szűrőn át. Szűrés után teszteljük a szűrő integritását, összegyűjtjük és megfelelő térfogatú edényekbe töltjük a sterilizált szuszpenziót. Ledugózzuk és légmentesen lezárjuk az edényeket.
Az 1., 2., 3. és 4. példákból származó stabilitási adatokat az alábbiakban bemutatjuk a megfelelő 1., 2.,
3. és 4. táblázatban.
Az alábbi táblázatokban feltüntetett, antiproliferatív vizsgálati eljárás olyan biológiai vizsgálati eljárás, amelyben azt mérjük, hogy a termék milyen mértékben képes szuppresszálni ráksejteket, és általában Wills és munkatársai [Humán Gene Therapy 5, 1079-1088 (1994)] által alkalmazott eljárásokra épül. A felsorolt számok az aktivitást jelzik, míg a kontroll nem rendelkezik aktivitással.
A „plakkvizsgálati eljárásban tenyészetben lévő vírusrészecskék számát mérjük, vírusplakkok számának meghatározásával a hígítás függvényében, és általában Graham, F. L. és Prevec, L. által leírt [„Methods in Molecular Biology”, 7. kötet: „Gene Transfer and Expression Protocols”, szerk. E. J. Murray, Humana Press, Inc., Clifton, NJ, 109-128. old. (1991); lásd még Graham, F. L. et al., J. Gén. Virol. 36, 59-74 (1977)] eljárásokra épül.
A „FACS” vizsgálati eljárásban kimutatjuk, hogy a vírus milyen mértékben képes sejteket fertőzni, és általában ezek a mérések például a PCT/US97/11865 (WO 98/01582) számú szabadalmi iratban (közzétéve 1998. január 15.) leírt eljárásra épülnek. Jobbra a következő oszlopban a számok a „Koncentráció” (rövid ít5 ve: C) című oszlopban az összes vírusrészecskére vonatkoztatott koncentrációt jelentik. Végül, a „Részecske/FACS arány” (rövidítve: R) című oszlopban lévő számok jelentése: az összes vírusrészecskeszám viszonyítva a fertőzött vírusrészecskék számához, így jelezve a víruspreparátum relatív potenciálját.
Az „UV című oszlopban lévő adatok a vírusrészecskék aggregációját jelzik, melyet A32o/A2eo hullámhosszakon mért, UV-abszorbancia-aránnyal mutatunk ki, amely fényszórást jelez. A 320 nm hullámhossznál mért abszorbancia a fényszórás mennyiségét méri, míg a 260 nm hullámhossznál mért abszorbancia a DNS mennyiségére utal.
A táblázatok második, „Körülmények című (rövidítve: K) oszlopában felsorolt hőmérsékletek a tárolási hőmérsékletnek felelnek meg. Fiziológiai vizsgálati eljárásokat 37 °C-on végzünk, és az utolsó oszlopban lévő pH-értékeket szobahőmérsékleten, körülbelül 25 °C-on mérjük.
Jelmagyarázat a táblázatokhoz:
K=körülmények,
AVE=antiproliferációs vizsgálati eljárás (SPU/ml), PVE=plakkvizsgálati eljárás (PFU/ml), C=koncentráció (részecske/ml),
R=részecske/FACS arány,
UV=UV A32q/A25o,
NT=nem teszteltük.
1. táblázat
Az 1. példa stabilitási adatai
| Stáb. ideje | K(°C) | AVE*105 | PVE*108 | FACS*1010 U/ml | C*1011 | R | UV | pH |
| Kezdeti | 3,3 | 5,8 | 3,86 | 7,95 | 21 | 0,23 | 7,53 | |
| 1. hét | 25 | 4,9 | 10 | 2,27 | 8,06 | 36 | 0,24 | 7,53 |
| 2. hét | 4 | 3,1 | 6,6 | 3,41 | 7,84 | 23 | 0,23 | 7,49 |
| 4. hét | 4 | 3,4 | 17 | 3,91 | 7,79 | 20 | 0,23 | 7,63 |
| 8. hét | 4 | 5,8 | 8,8 | 3,38 | 7,80 | 23 | 0,24 | 7,61 |
| 12. hét | 4 | 3,9 | 36 | 2,24 | 7,80 | 35 | 0,24 | 7,72 |
| 5. hónap | 4 | NT | NT | 1,57 | 8,21 | 52 | 0,26 | 7,60 |
| 6. hónap | 4 | 3,0 | 7,6 | 2,74 | 7,68 | 28 | 0,28 | 7,58 |
| 9. hónap | 4 | 3,1 | 19 | 3,47 | 7,19* | 21 | 0,28 | 7,58 |
| 11. hónap | 4 | NT | NT | NT | 6,71 | - | 0,29 | NT |
| 12. hónap | 4 | 2,6 | 10 | 0,81 | 6,13 | 76 | 0,30 | 7,62 |
*9 hónapos UV-minták újratesztelése: 6,89* 1011 részecske/ml; ^32(/^260=θ'2θ·
2. táblázat
A 2. példa stabilitási adatai
| Stáb. ideje | K (°C) | AVE*104 | PVE*107 | FACS*109 U/ml | C*1010 | R | UV | pH |
| Kezdeti | 3,3 | 4,8 | 1,99 | 10,0 | 50 | 0,24 | 7,36 | |
| 1. hét | 25 | 2,4 | 7,1 | 1,64 | nd* | - | 0,46 | 7,42 |
HU 226 015 Β1
2. táblázat (folytatás)
| Stáb. ideje | K(’C) | AVExlO4 | PVExlO7 | FACSx109 U/ml | Cx101° | R | UV | pH |
| 2. hét | 4 | 2,4 | 6,9 | 2,13 | 9,79 | 46 | 0,24 | 7,51 |
| 4. hét | 4 | 3,2 | 8,4 | 2,50 | 9,24 | 37 | 0,22 | 7,55 |
| 8. hét | 4 | 6,9 | 8,6 | 2,60 | 8,10 | 31 | 0,25 | 7,54 |
| 12. hét | 4 | 5,5 | 8,3 | 1,09 | 8,60 | 79 | 0,24 | 7,64 |
| 5. hónap | 4 | NT | NT | 1,74 | 8,03 | 46 | 0,27 | 7,55 |
| 6. hónap | 4 | 3,3 | 7,3 | 2,10 | 8,25 | 39 | 0,23 | 7,52 |
| 9. hónap | 4 | 2,3 | 13 | 1,97 | 7,59 | 39 | 0,24** | 7,53 |
| 11. hónap | 4 | NT | NT | NT | 7,48 | - | 0,23 | NT |
| 12. hónap | 4 | 1,8 | 9,4 | 0,60 | 4,94 | 82 | 0,26 | 7,59 |
*nd=nincs meghatározva a vizsgálati eljárás interferenciája miatt **9 hónapos UV-minták újratesztelése: 7,37x101° részecske/ml; ^32(/^260=θ'24·
3. táblázat
A 3. példa stabilitási adatai
| Stáb. ideje | K(*C) | AVExlO5 | PVExlO8 | FACSxlO10 U/ml | Cx1011 | R | UV | pH |
| Kezdeti | 3,2 | 6,3 | 2,59 | 7,45 | 29 | 0,24 | 7,67 | |
| 1. hét | 25 | 4,4 | 4,3 | 1,65 | 7,49 | 45 | 0,24 | 7,68 |
| 2. hét | 4 | 2,3 | 8,0 | 3,62 | 7,27 | 20 | 0,24 | 7,49 |
| 4. hét | 4 | 2,7 | 7,6 | 4,08 | 6,97 | 17 | 0,24 | 7,75 |
| 8. hét | 4 | 5,9 | 8,7 | 2,69 | 7,00 | 26 | 0,25 | 7,82 |
| 12. hét | 4 | 3,0 | 15 | 0,70 | 7,10 | 101 | 0,25 | 7,80 |
| 6. hónap | 4 | 2,4 | 6,4 | 2,45 | 7,12 | 29 | 0,25 | 7,76 |
| 9. hónap | 4 | 2,8 | 9,4 | 2,51 | 7,06 | 28 | 0,26 | 7,81 |
| 11. hónap | 4 | NT | NT | NT | 6,71 | - | 0,25 | NT |
| 12. hónap | 4 | 2,2 | 9,8 | 0,74 | 6,75 | 91 | 0,26 | 7,81 |
4. táblázat
A 4. példa stabilitási adatai
| Stáb. ideje | K(°C) | AVExlO4 | PVExlO7 | FACSxlO9 U/ml | Cx1010 | R | UV | pH |
| Kezdeti | 3,3 | 4,7 | 2,36 | 8,91 | 38 | 0,23 | 7,37 | |
| 1. hét | 25 | 2,3 | 9,3 | 1,40 | 8,25 | 59 | 0,24 | 7,37 |
| 2. hét | 4 | 2,8 | 8,0 | 2,16 | 8,80 | 41 | nd* | 7,37 |
| 4. hét | 4 | 2,9 | 6,6 | 2,54 | 9,35 | 37 | 0,20 | 7,63 |
| 8. hét | 4 | 6,9 | 7,2 | 2,56 | 7,60 | 30 | 0,24 | 7,60 |
| 12. hét | 4 | 4,4 | 8,6 | 1,45 | 7,20 | 50 | 0,23 | 7,73 |
| 6. hónap | 4 | 3,6 | 7,1 | 2,85 | 7,92 | 28 | 0,21 | 7,58 |
| 9. hónap | 4 | 2,9 | 11 | 1,87 | 7,26 | 39 | 0,20 | 7,60 |
| 11.hónap | 4 | NT | NT | NT | 6,93 | - | 0,22 | NT |
| 12. hónap | 4 | 2,4 | 22 | 0,70 | 7,15 | 102 | 0,23 | 7,61 |
*nd=nincs meghatározva a vizsgálati eljárás interferenciája miatt
HU 226 015 Β1
5. példa
Az 5. példában alkalmazott forma: A/C/N/53 (7,5*1011 részecske/ml), trometamin (TRIS) (1,7 mg/ml), mononátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrát (1,7 mg/ml), szacharóz (20 mg/ml), magnézium-klorid-hexahidrát (0,4 mg/ml), glicerin (100 mg/ml), nátrium-klorid (5,8 mg/ml), töltési térfogat=10 ml.
5. táblázat
Az 5. példa stabilitási adatai
| Stáb. ideje | K(°C) | AVE*105 | FACSxlO10 U/ml | Cx1011 | R | UV | pH |
| Kezdeti | 4,5 | 1,87 | 7,81 | 42 | 0,23 | 7,80 | |
| 1. hónap | 4 | NT | 1,67 | 7,83 | 47 | 0,23 | 7,80 |
| 4. hónap | 4 | 3,0 | 1,58 | 7,84 | 50 | 0,23 | 7,70 |
Néhány esetben részecskék képződését figyeltük meg a formában 4 °C-on való tárolás közben. A részecskék SDS-PAGE-val végzett analízise alapján feltételeztük, hogy a részecskéket kisebb arányban jelen lévő szennyeződések (azaz további fehérjék és néhány éretlen vírusrészecske) alkotják, és ennélfogva ezek a részecskék nincsenek hatással a forma életképességére. Mindazonáltal, a találmány előnyös megvalósítási módja szerint a forma további tisztítása céljából (az esetleges részecskeképződés megakadályozása céljából) adott esetben választható, mikroszűrési lépést végezhetünk, bármilyen potenciális részecske eltávolítása céljából, vírusrészecskék kis vesztesége mellett. (Meg kell jegyeznünk, ha mikroszűrést végzünk, a mikroszűréshez alkalmazott, szűrési térfogathoz viszonyított elegendő membránfelület biztosítása döntő fontosságú a vírusveszteség elkerülése céljából, mivel a részecskét eltávolítjuk.)
A találmány előnyös megvalósítási módja szerint továbbá azt találtuk, hogy a kevertetés felgyorsítja a részecskeképződést, és ennélfogva egy további, választható lépésként alkalmazzuk a tisztítási eljárásban. Tehát kimutattuk, hogy enyhe kevertetés (például egy éjszakán át, 10 °C-on, mágneses keverőpálcát alkalmazva), azt követően mikroszűrés alkalmazásával el lehet távolítani a részecskéket úgy, hogy ismételt kevertetés esetén nem képződnek újra részecskék.
Azt is felismertük, hogy fagyasztás/felolvasztás ciklusok elősegíthetik a részecskeképződést ismételt kevertetés esetén. Tehát egy másik előnyös eljárásban, adott esetben, egy vagy több fagyasztás/felolvasztás ciklust végezhetünk, azt követően kevertetünk és azután mikroszűrést végzünk, hogy megelőzzük a részecskeképződést a vírusvégtermék tárolása alatt, hűtési hőmérsékleteken (például 4 °C-on).
Eljárások vírustartalmú készítmények töményítésére és tisztítására A leírás közöl egy új eljárást meglévő víruspreparátum stabil töményítésére tangenciális áramlással való szűrés (amelyet a továbbiakban néha „TFF”-nek jelölünk) alkalmazásával, amely lehetővé teszi klinikai dózisok könnyű kiválasztását és előállítását kívánt, tág koncentrációtartományban. Víruspreparátum töményítésére szolgáló új eljárásban:
(a) hozzáadunk annyi polihidroxi-szénhidrogént egy víruspreparátumhoz, hogy a polihidroxi-szénhidrogén végkoncentrációja körülbelül 20% vagy magasabb ér20 ték legyen; és (b) a viruspreparátumot szűrési eljárásnak vetjük alá, amelyben a vírus koncentrációját úgy növeljük, hogy nyomást alkalmazunk a preparátumon, így az oldószert eltávolítjuk a víruspreparátumból egy szűrőn keresztül, miközben a vírust visszatartjuk.
Az eljárások széles körből származó vírusokra alkalmazhatók, például adenovírusokra, himlővírusokra, iridovírusokra, herpeszvírusokra, papovavírusokra, paramyxovírusokra, ortomyxovírusokra, retrovírusokra, ade30 noasszociált vírusra, tehénhimlővírusra, rotavírusokra stb.; különösen az adenovírusokat részesítjük előnyben. A vírusok előnyösen rekombináns vírusok, de lehetnek klinikai izolátumok, gyengített vakcinatörzsek stb. Az eljárások különösen alkalmasak olyan rekombi35 náns vírusok töményítésére, amelyek heterológ transzgént tartalmaznak génterápiás alkalmazásra. Ilyen vírusok különösen érzékenyek potenciális destabilizáló erőkre, például víruspreparátumok töményítési eljárását kísérő, további mechanikai nyíróerőkkel szemben. Pél40 daként szolgáló rekombináns adenovírus, amelyet a találmány szerinti eljárás alkalmazásával lehet töményíteni, az A/C/N/53, amelyet a WO 95/11984 számú PCT szabadalmi iratban írnak le.
A vírus töményítésére alkalmazott szűrési eljárás45 bán alkalmazhatunk bármilyen szűrési folyamatot (például ultraszűrést), amelyben a vírus koncentrációját úgy növeljük, hogy a hígítószert erővel átnyomjuk egy szűrőn, így a hígítószert eltávolítjuk a víruspreparátumból, míg a vírus nem képes átjutni a szűrőn, és ezáltal töményített formában visszamarad a víruspreparátumban. Az ultraszűrés részletes leírását lásd például L. Zeman és A. Zeman, „Microfiltration and Ultrafiltration: Principles and Applications című könyvben (Marcel Dekkar, Inc., New York, NY, 1996). Különösen előnyös szűrési eljárás a tangenciális áramlással való szűrés („TFF”), melyet leírnak például a MILLIPORE katalógusban, „Pharmaceutical Process Filtration Catalogue” címmel, 177-202. old. (Bedford, Massachusetts, 1995/96). Egy előnyösen alkalmazható TFF-készülék
Pellicon II vagy Pellicon XL szűrőrendszert tartalmaz,
HU 226 015 Β1 melyet a Millipore Corporation cégtől szerezhetünk be, 80 Ashby Rd., Bedford, Massachusetts (interneteim: www.millipore.com), a Pellicon XL rendszert részesítjük különleges előnyben. A találmány szerinti eljárásokat 2 °C és 27 °C közötti hőmérséklet-tartományban végezzük.
Más töményítési eljárásokat is lehet alkalmazni víruspreparátumok töményítésére a találmány szerint. Például polihidroxi-szénhidrogént előnyösen lehet alkalmazni víruspreparátum töményítésére centrifugálással. A leírásban tárgyalunk egy olyan eljárást víruspreparátum töményítésére, amelyben:
(a) centrifugálunk egy készítményt, amely egy első réteget tartalmaz, amely polihidroxi-szénhidrogént tartalmaz 35 térf.% és 80 térf.% közötti koncentrációban, az első rétegre rá van rétegezve egy második réteg, amely polihidroxi-szénhidrogént tartalmaz 5 térf.% és 30 térf.% közötti koncentrációban, a második rétegre rá van rétegezve egy harmadik réteg, amely vírust tartalmaz; és (b) kinyerjük a vírust az első rétegből.
Például adenovíruspreparátumot alacsony sebességű centrifugálással lehet töményíteni 3200 g-n, Beckman-centrifugában, lengőfejes rotor alkalmazásával. Ebből a célból a víruspreparátumot több 5 ml-es csőbe helyezzük, minden egyes cső térfogatának 6,25%-a 70%-os glicerint tartalmaz a cső alján, az első rétegben, erre rárétegzünk a térfogat 2,5%-ának megfelelő 20%-os glicerint, és a tetejére a víruspreparátumot. A preparátumot azután 3200 g-n centrifugáljuk 4 °C-on, körülbelül 16 óra hosszáig, hogy a töményített vírus leülepedjen a glicerines rétegekbe, és azután a frissen töményített víruspreparátumot kinyerjük az első rétegből. A fentebb leírt eljárással töményített vírus jó fényszórás! tulajdonságokkal és megfelelő fertőzési jellemzőkkel rendelkezik.
A leírt eljárásokban alkalmazott polihidroxi-szénhidrogént tekintve, a „polihidroxi-szénhidrogén elágazó vagy egyenes láncú, vagy ciklikus vegyületet jelent, melyek 2 vagy több (előnyösen 2 és 6 közötti, előnyösebben 2 és 4 közötti) hidroxilcsoporttal vannak szubsztituálva, és a polihidroxi-szénhidrogén hatásos mennyisége akkora mennyiség, amely elegendő a vírus stabilizálásához potenciális destabilizáló erőkkel, például a töményítési eljárás alatt fellépő mechanikai nyíróerőkkel szemben. A vírustöményítésre szolgáló eljárásokban jelen lévő polihidroxi-szénhidrogén minimális koncentrációja előnyösen 20%, előnyösebben 25%. Az alkalmazott polihidroxiszénhidrogének előnyösen polihidroxiszubsztituált alkilvegyületek (elágazóak vagy nem elágazóak), előnyösen 2-7 szénatomosak, és lehet glicerin, szorbit és polipropanol. Különösen a glicerint részesítjük előnyben.
A víruskoncentráció növelésére szolgáló új eljárás további előnye, hogy fokozza a további feldolgozás hatékonyságát, például eliminálja a problematikus szűk keresztmetszetet, szignifikánsan nagyobb hatékonyságot lehetővé téve a különböző feldolgozási lépések alatt, például méretkizárásra alapuló kromatográfiában.
A víruspreparátumok töményítésére szolgáló eljárás alkalmazható vírusok tisztítására szolgáló eljárásokban, amelyekben méretkizárásra alapuló kromatográfiát végzünk (például gélszűrést) anioncserélő kromatográfia után. Ebben az eljárásban további káros hatások veszélyeztetik a vírus stabilitását, amelyek nemcsak a sebességmeghatározó, méretkizárásra alapuló kromatográfiás lépés előtt végzett vírustöményítésnél szükségszerűen fellépő mechanikai nyíróerőktől származnak, hanem azon tény következtében, hogy az anioncserélő kromatográfiás lépésben eluált víruspreparátum tipikusan nagy mennyiségű sókat és más olyan szennyeződéseket tartalmaz, amelyek tovább veszélyeztetik a vírus stabilitását. Egy további eljárás egy olyan eljárás víruspreparátum tisztítására, amelyben:
(a) a víruspreparátumot anioncserélő kromatográfiának vetjük alá, amelyben a vírust víruspreparátumtermékként eluáljuk egy anioncserélő kromatográfiás közegről;
(b) az (a) lépésből származó víruspreparátum-termékhez hozzáadunk polihidroxi-szénhidrogént úgy, hogy a preparátumban lévő polihidroxi-szénhidrogén végkoncentrációja elérjen körülbelül 25%-ot vagy magasabb értéket; és (c) növeljük a (b) lépésből származó víruspreparátum-termékben lévő vírus koncentrációját úgy, hogy nyomást alkalmazunk a preparátumon, így az oldószert eltávolítjuk a víruspreparátumból egy szűrőn keresztül, miközben a vírust visszatartjuk; és (d) a (c) lépésből származó, töményített víruspreparátum-terméket egy vagy több, további feldolgozási lépésnek vetjük alá.
A fentebb leírt eljárásban az anioncserélő kromatográfiával összefüggésben megállapítjuk, hogy a glicerin minimális mennyisége 25% (az előbb említett töményítési eljárásban általánosan alkalmazott 20%-os minimális szint helyett), mivel ezen adott alkalmazásban figyelembe kell venni az anioncserélő oszlopról eluált termékben lévő magas sókoncentráció miatt felvetődött, stabilitást veszélyeztető további hatásokat. 25% glicerin (előnyösen 30%) hozzáadása a sótartalmú, egyesített DEAE-eluátum stabilitását eredményezi 10 napnál hosszabb ideig, például 4 °C-on; ennélfogva a vírustöményítés ezt követő lépéseit és/vagy a gélszűrést el lehet végezni más napokon, lényegesen nagyobb rugalmassággal, 10 napos időtartamon belül. Szakember számára nyilvánvaló, hogy polihidroxi-szénhidrogént 25% vagy magasabb koncentrációban is lehet alkalmazni az előbb említett eljárásokban, ha a víruspreparátum sótartalma magasabb, az egyéb feldolgozási körülmények következtében.
V. A találmány szerinti eljárásokat szemléltető példák
Az alábbi példákkal az előbbiekben tárgyalt eljárásokat kívánjuk szemléltetni.
Rövid áttekintés Egy töményített adag előállításához fermentációs eljárásból kinyert, fagyasztott, nyers vírusanyagból indulunk ki. Az egyik eljárásban az adenovírusterméket először anioncserélő kromatográfiával
HU 226 015 Β1 tisztítjuk. Azután, mielőtt a preparátumot méretkizárás alapján elválasztóoszlopra visszük, az anioncserélőről eluált, egyesített anyagot töményíthetjük tangenciális áramlással való szűréssel (TFF), 30 térf.% glicerin jelenlétében. Más módszer szerint, egy másik eljárásban a TFF töményítési lépést 20 térf.% vagy több (előnyösen 25%) glicerin jelenlétében lehet végezni a méretkizárásra alapuló kromatográfia után.
Kiindulási anyagok előállítása anioncserélő kromatográfiával TFF előtt
Az előnyös eljárásban anioncserélő kromatográfiával tisztított adenovíruskészletet koncentráláshoz az alábbiak szerint preparálunk. Fermentációból és feldolgozási lépésekből származó fagyasztott vírusanyagot felolvasztunk, és átszűrünk 0,45 pm-es hidrofil membránon. A szűrlet sókoncentrációját beállítjuk 4 M nátrium-klorid hozzáadásával. Ezt az oldatot felviszzük Fractogel EMD DEAE-650M oszlopra, melyet előzőleg 50 mM nátrium-foszfátot (pH 7,5), 260 mM nátrium-kloridot, 2 mM magnézium-kloridot, 2 vegyes% szacharózt tartalmazó pufferrel (A-puffer) ekvilibráltunk. Az adenovírus kötődik az anioncserélő gyantához, míg a közeg nagyobb része és a gazdaszervezetből származó szennyeződések átfolynak az oszlopon. Az oszlopot először 4 térfogat A-pufferrel mossuk, ezt egy második, 8 térfogat izokratikus mosás követi 94% A-puffert és 6% B-puffert (50 mM nátrium-foszfát, pH 7,5, 600 mM nátrium-klorid, 2 mM magnézium-klorid, 2 vegyes% szacharóz) tartalmazó oldattal, további szennyeződések eltávolítása céljából. A vírust az oszlopról 30 ágytérfogat 6%-100%, lineáris B-puffer-gradienssel mossuk le. Az elúciós profilban az adenovíruscsúcsot A280 alapján határozzuk meg, és ezt gyűjtjük. Glicerint adunk a DEAE-ról eluált anyaghoz, 30 térf.% végkoncentrációban, további feldolgozás céljából.
DEAE-ról eluált anyag töményítése tangenciális áramlással való szűréssel
A DEAE-ról eluált anyagot (a fentebb leírtak szerint preparálva) 10-20-szor töményítjük, Millipore TFF-egységben (Pellicon XL rendszer), amelyben 1 millió molekulatömegnél visszatartó Biomax-membránokat alkalmazunk. Az eljárást 2-10 °C-on vagy szobahőmérsékleten (25 °C) végezzük. Az alábbi szűrési paramétereket alkalmazzuk ebben az eljárásban: átlagos bemenőnyomás=14 psi; átlagos permeátumnyomás=0 psi; átlagos fluxussebesség=13 liter/óra négyzetméterenként. Az adenovírus végkoncentrációja körülbelül 1,0-2,0*1013 részecske/ml-t ér el. Resource-Q-HPLC-vel és UV-abszorbancia (A260) mérésével végzett analízisre alapozva, a töményítés kitermelése >80%, szignifikáns aggregáció nélkül (fényszórást alkalmazó vizsgálati eljárással meghatározva A320/A260).
Puffercsere méretkizárásra alapuló kromatográfiával (gélszűréssel)
A töményített adenovíruspreparátumot felvisszük
Superdex-200, méretkizárást biztosító oszlopra, melyet előzőleg 20 mM nátrium-foszfátot (pH 8,0), 100 mM nátrium-kloridot, 2 mM magnézium-kloridot, 2 vegyes% szacharózt és 10% glicerint tartalmazó pufferrel (C-pufferrel) vagy 11 mM nátrium-foszfátot, 14 mM Trist, 2 mM magnézium-kloridot, 2 vegyes% szacharózt és 10% glicerint tartalmazó pufferrel (pH 7,8, D-puffer) ekvilibráltunk. Az oszlopot az ekvilibrációs pufferrel eluáljuk. Az elúciós profilban az adenovíruscsúcsot A280 alapján határozzuk meg, és ezt gyűjtjük és egyesítjük. A töményített adenovíruspreparátumot 0,2 pm-es hidrofil Durapore membránon (Stericup, Millipore) átszűrjük 2-10 °C-on és -80 °C-on vagy magasabb hőmérsékleteken (például 2-10 °C-on) lehet tárolni.
Superdex-200-ról eluált anyag töményítése tangenciális áramlással való szűréssel
A fentebb leírtak szerint egy előnyös eljárásban a vírust töményítjük anioncserélő kromatográfia után, de gélszűrés előtt. Egy másik eljárásban azonban a víruspreparátumok töményítésre szolgáló eljárásokat a gélszűrési lépés után is lehet alkalmazni (még akkor is, ha nem alkalmazunk vírustöményítést az anioncserélö lépés és a gélszűrési lépés között). Ebben az esetben a szűrés paraméterei ugyanazok, mint amelyeket a DEAE-eluátum töményítésére alkalmaztunk, kivéve azt, hogy a polihidroxi-szénhidrogént (például glicerin) lehet hozzáadni a Superdex-200-eluátumhoz, akár 20 térf.% végkoncentrációban, mivel tovább már nem kell foglalkozni a DEAE-eluátumban lévő magas sókoncentrációkkal. Ebben a vonatkozásban meg kell jegyeznünk, hogy azokban az esetekben, ahol polihidroxi-szénhidrogén hozzáadása el van halasztva a gélszűrés utánra, a DEAE-eluátumot az elúció után azonnal fel kell vinni a gélszűrő oszlopra (a DEAEeluátum érzékenysége miatt, a magas sókoncentráció következtében). Tehát látható, hogy polihidroxi-szénhidrogén hozzáadása a DEAE-eluátumhoz azzal a további előnnyel jár, hogy növeli az időintervallumok és tárolási lehetőségeinek flexibilitását az anioncserélő kromatográfia és azt követő eljárások közötti időtartamban.
Víruspreparátumok töményítésére szolgáló eljárásokat különféle tisztítási módszerekkel összekapcsolva lehet alkalmazni. A tisztítási eljárások tekintetében további információkat lehet találni az alábbi hivatkozásokban: például Huyghe és munkatársai, Humán Gene Therapy 6, 1403-1416 (1995), és USP 08/989.227 számú szabadalmi iratban, melyet kifejezetten a kitanítás részének tekintünk.
VI. Víruspreparátumok töményítésre szolgáló, tangenciális áramlással való szűrést alkalmazó eljárások stabilitási adatai
Az alábbi kísérleti adatok azt mutatják, hogy az előbbiekben tárgyalt eljárások nagymértékben fokozott vírusstabilitást tesznek lehetővé, a vírus töményítésekor fellépő mechanikai nyíróerők és a viszontag10
HU 226 015 Β1 ságos körülmények, például a DEAE-eluátumban lévő magas sókoncentráció ellenére. Tehát az előbbiekben tárgyalt eljárások lehetővé teszik, többek között (1) bármilyen kívánt koncentrációjú klinikai dózist könnyű előállítását (még akkor is, ha alacsony koncentrációjú anyagból indulunk ki), (2) a feldolgozás hatékonyságának fokozását (például szignifikánsan nagyobb hatékonyságot lehetővé téve a méretkizárásra alapuló kromatográfiában), és (3) lehetővé téve a sótartalmú, egyesített DEAE-eluátum stabilitását 10 napnál hosszabb ideig, 2-10 °C-on, ennélfogva a vírustöményítés ezt követő lépéseit és/vagy a gélszűrést el lehet végezni más napokon, lényegesen nagyobb rugalmassággal, 10 napos időtartamon belül.
A. Vírus töményítése DEAE-kromatográfia után
Az alábbi három példában előállítunk stabil, tömény adenovírusoldatot, DEAE-eluátum töményítésével, 30% glicerinben (az előbbiekben tárgyalt eljárásokkal összhangban). A preparátumokat azután Superdex-200 gélszűrő kromatográfiával tisztítjuk, így jutunk a tesztelendő végső formához.
D-1. példa
Végső forma: 20 mM NaPi, 100 mM NaCI, 2 mM MgCI2, 2% szacharóz, 10% glicerin, pH 8, 2-10 °C-on.
Eredmények: részecske/FACS=24, fényszórás (A320/A260)=0,22, konc.=1,6><1013 részecske/ml.
D-2. példa
Végső forma: 14 mM Tris-bázis, 11 mM NaPi, 2 mM MgCI2, 2% szacharóz, 10% glicerin, pH 7,8, 2-10 °C-on.
Eredmények: részecske/FACS=17, fényszórás (A320/A260)=0,25, konc.=1,5x1013 részecske/ml.
D-3. példa
Végső forma: 20 mM NaPi, 100 mM NaCI, 2 mM MgCU, 2% szacharóz, 10% glicerin, pH 8, 2-10 °C-on.
Eredmények: részecske/FACS=24, fényszórás (A320/A260)=0,25, konc.=1,3x1013 részecske/ml.
B. Vírus töményítése gélszűrés után
S-1. példa
Az alábbi példában víruspreparátumot töményítünk
20% glicerinben, gélszűrés után.
Végső forma: 16 mM NaPi, 80 mM NaCI, 1,6 mM MgCI2, 1,6% szacharóz, 20% glicerin, pH 8,0 2-10 °C-on.
Eredmények: részecske/FACS=72, fényszórás (A320/A260)=0,26, konc.=1,66*1013 részecske/ml.
Claims (17)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Készítmény adenovírusok stabilitásának fenntartására, amely egy 20-200 mg/ml glicerint, szacharózt és 2 °C-tól 27 °C-ig terjedő hőmérséklet-tartományban a pH-t 7-8,5 értéken tartó pufferrendszert tartalmazó formulációban tartalmaz adenovírust, ahol a pufferrendszer 0,5-10 mg/ml koncentrációban mononátriumdihidrogén-foszfát-dihidrátot és 0,5-10 mg/ml koncentrációban trometamint tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy 5-25 mg/ml koncentrációban tartalmaz szacharózt.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy stabilizátorként egy két vegyértékű fém sóját is tartalmazza.
- 4. A 3. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy két vegyértékű fémsó-stabilizátorként magnézium-dikloridot tartalmaz.
- 5. A 4. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy 0,1-1 mg/ml koncentrációban tartalmaz magnézium-dikloridot.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy továbbá egy szurfaktánst is tartalmaz.
- 7. A 6. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy szurfaktánsként egy poli(oxi-etilén)-szorbitánt tartalmaz.
- 8. A 7. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy poli(oxi-etilén)-szorbitánként Polysorbat 80-at tartalmaz.
- 9. A 8. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy 0,03-0,3 mg/ml koncentrációban tartalmaz Polysorbat 80-at.
- 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy tartalmaz továbbá egy vizet tartalmazó hígítót.
- 11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy 1*109-1*1013 vírusrészecske/ml koncentrációban tartalmaz adenovírust.
- 12. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy adenovírusként rekombináns adenovírust tartalmaz.
- 13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az adenovírus a készítményben hűtőszekrény-hőmérsékleten legalább két hétig stabil.
- 14. A 13. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az adenovírus 2 °C-tól 8 °C-ig terjedő tartományba eső hűtőszekrény-hőmérsékleten legalább két hétig stabil.
- 15. A 14. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az adenovírus 4 °C hűtőszekrény-hőmérsékleten legalább két hétig stabil.
- 16. A 11. vagy 12. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az adenovírus a készítményben szobahőmérsékleten legalább egy hétig stabil.
- 17. A 16. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az adenovírus a készítményben 25 °C szobahőmérsékleten legalább egy hétig stabil.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2446298A | 1998-02-17 | 1998-02-17 | |
| US7964398A | 1998-05-15 | 1998-05-15 | |
| PCT/US1999/001873 WO1999041416A2 (en) | 1998-02-17 | 1999-02-12 | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0100670A2 HUP0100670A2 (hu) | 2001-06-28 |
| HUP0100670A3 HUP0100670A3 (en) | 2003-10-28 |
| HU226015B1 true HU226015B1 (en) | 2008-02-28 |
Family
ID=26698472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0100670A HU226015B1 (en) | 1998-02-17 | 1999-02-12 | Compositions and preparations comprising viruses |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (4) | EP1526173B1 (hu) |
| JP (3) | JP4358434B2 (hu) |
| KR (5) | KR100918187B1 (hu) |
| CN (2) | CN101164623B (hu) |
| AR (3) | AR020054A1 (hu) |
| AT (3) | ATE341614T1 (hu) |
| AU (1) | AU757976B2 (hu) |
| BR (1) | BR9908015A (hu) |
| CA (2) | CA2320419C (hu) |
| CO (1) | CO4820440A1 (hu) |
| DE (3) | DE69933433T2 (hu) |
| DK (1) | DK1054955T3 (hu) |
| ES (2) | ES2290613T3 (hu) |
| HK (3) | HK1073481A1 (hu) |
| HU (1) | HU226015B1 (hu) |
| ID (1) | ID28298A (hu) |
| IL (2) | IL137510A0 (hu) |
| MY (1) | MY141641A (hu) |
| NO (1) | NO20004104L (hu) |
| PE (1) | PE20000265A1 (hu) |
| PL (1) | PL197747B1 (hu) |
| PT (1) | PT1054955E (hu) |
| SK (1) | SK11842000A3 (hu) |
| TW (1) | TWI232107B (hu) |
| WO (1) | WO1999041416A2 (hu) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7732129B1 (en) | 1998-12-01 | 2010-06-08 | Crucell Holland B.V. | Method for the production and purification of adenoviral vectors |
| JP4492826B2 (ja) | 1996-11-20 | 2010-06-30 | イントロジェン セラピューティクス，インコーポレイテッド | アデノウイルスベクターの産生および精製のための改良された方法 |
| EP1133316B1 (en) * | 1998-11-16 | 2009-01-21 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| US6689600B1 (en) | 1998-11-16 | 2004-02-10 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| EP1263461A4 (en) * | 2000-03-07 | 2009-08-12 | Merck & Co Inc | ADENOVIRUS FORMULATIONS |
| US7456009B2 (en) | 2000-03-07 | 2008-11-25 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
| US20020064860A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-05-30 | Schering Corporation | Method for purifying adenoviruses |
| AU2002218535A1 (en) * | 2000-12-12 | 2002-06-24 | Japan Tobacco Inc. | Pharmaceutical composition containing an active with a hemolytic action and a surfactant |
| CA2469491A1 (en) | 2001-12-12 | 2003-06-19 | Kerrie Setiawan | Composition for viral preservation |
| US20030153065A1 (en) * | 2002-01-14 | 2003-08-14 | Genvec, Inc. | Composition and method for maintaining non-enveloped viral vectors |
| MXPA04006995A (es) * | 2002-01-18 | 2005-07-13 | Schering Ag | Formulaciones estabilizadas de adenovirus. |
| ATE435906T1 (de) | 2004-02-23 | 2009-07-15 | Crucell Holland Bv | Verfahren zur reinigung von viren |
| CA2586107A1 (en) | 2004-11-03 | 2006-05-18 | Introgen Therapeutics Inc. | A novel method for the production and purification of adenoviral vectors |
| EP1831352B1 (en) | 2004-12-13 | 2011-07-13 | CANJI, Inc. | Cell lines for production of replication-defective adenovirus |
| DK1869171T4 (en) | 2005-04-11 | 2016-01-18 | Crucell Holland Bv | Virus cleaning using ultrafiltration |
| CN1961961B (zh) * | 2005-11-11 | 2010-05-26 | 深圳市源兴生物医药科技有限公司 | 一种药物制剂及其制备方法 |
| WO2007070392A2 (en) | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Canji, Inc. | Adenoviral expression vectors having an expression cassette in the e1 region and an inactivated e2b polymerase |
| WO2007123961A2 (en) * | 2006-04-20 | 2007-11-01 | Wyeth | Purification processes for isolating purified vesicular stomatitis virus from cell culture |
| US10041049B2 (en) | 2008-11-03 | 2018-08-07 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Method for the production of adenoviral vectors |
| MX356669B (es) | 2009-05-02 | 2018-06-08 | Genzyme Corp | Terapia genica para trastornos neurodegenerativos. |
| CA2786835C (en) | 2010-02-15 | 2021-08-31 | Crucell Holland B.V. | Method for the production of ad26 adenoviral vectors |
| WO2012038367A1 (en) | 2010-09-20 | 2012-03-29 | Crucell Holland B.V. | Therapeutic vaccination against active tuberculosis |
| WO2012041669A1 (en) | 2010-09-27 | 2012-04-05 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime boost vaccination regimen against malaria |
| US9045728B2 (en) * | 2010-12-02 | 2015-06-02 | Oncolytics Biotech Inc. | Liquid viral formulations |
| TW201233803A (en) | 2010-12-02 | 2012-08-16 | Oncolytics Biotech Inc | Lyophilized viral formulations |
| SG194449A1 (en) * | 2011-04-29 | 2013-12-30 | Oncolytics Biotech Inc | Methods of purifying viruses using gel permeation chromatography |
| US8932607B2 (en) | 2012-03-12 | 2015-01-13 | Crucell Holland B.V. | Batches of recombinant adenovirus with altered terminal ends |
| KR102044051B1 (ko) | 2012-03-12 | 2019-11-12 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 터미널 말단이 변경된 재조합 아데노바이러스의 배치 |
| US9125870B2 (en) | 2012-03-22 | 2015-09-08 | Crucell Holland B.V. | Vaccine against RSV |
| WO2013139916A1 (en) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | Crucell Holland B.V. | Vaccine against rsv |
| DK2988780T3 (en) | 2013-04-25 | 2019-04-08 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | STABILIZED SOLVEN RSV-F PREFUSION POLYPTIDES |
| US10294279B2 (en) | 2013-06-17 | 2019-05-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized soluble pre-fusion RSV F polypeptides |
| KR20170004966A (ko) * | 2014-05-28 | 2017-01-11 | 에이전시 포 사이언스, 테크놀로지 앤드 리서치 | 바이러스 감소 방법 |
| PL3283634T3 (pl) | 2015-04-14 | 2019-10-31 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Rekombinowany adenowirus eksprymujący dwa transgeny z dwukierunkowym promotorem |
| BR112017027448A2 (pt) | 2015-07-07 | 2018-09-04 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | vacina contra rsv |
| BR112017028449A2 (pt) | 2015-07-07 | 2018-09-04 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | polipeptídeos rsv f pré-fusão solúveis estabilizados |
| CA3018139A1 (en) | 2016-04-05 | 2017-10-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Vaccine against rsv |
| SG11201807913XA (en) | 2016-04-05 | 2018-10-30 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Stabilized soluble pre-fusion rsv f proteins |
| SG11201810078PA (en) | 2016-05-30 | 2018-12-28 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Stabilized pre-fusion rsv f proteins |
| EP3472327B1 (en) | 2016-06-20 | 2020-08-19 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Potent and balanced bidirectional promoter |
| US10744196B2 (en) | 2016-07-14 | 2020-08-18 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | HPV vaccines |
| WO2018210871A1 (en) | 2017-05-17 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against rsv infection |
| US11229692B2 (en) | 2017-05-17 | 2022-01-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against RSV infection |
| WO2019021305A1 (en) * | 2017-07-24 | 2019-01-31 | Ella Foundation | VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE |
| EP3681533A1 (en) | 2017-09-15 | 2020-07-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Method for the safe induction of immunity against rsv |
| EP3990031A4 (en) * | 2019-06-28 | 2023-08-09 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | METHODS FOR PURIFYING ADENO-ASSOCIATED VIRUS |
| JP2023512519A (ja) | 2020-01-31 | 2023-03-27 | ベス イスラエル ディーコネス メディカル センター インコーポレイテッド | コロナウイルス感染症を予防および処置するための組成物および方法－ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２ワクチン |
| JP2024509756A (ja) | 2021-02-19 | 2024-03-05 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | 安定化された融合前ｒｓｖ ｆｂ抗原 |
| WO2023020939A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Sars-cov-2 vaccines |
| CN115989321A (zh) * | 2021-08-17 | 2023-04-18 | 上海行深生物科技有限公司 | 病毒制剂、用于配制病毒制剂的溶液及其用途 |
| WO2023111725A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-22 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Sars-cov-2 vaccines |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE299213C (hu) * | ||||
| US4147772A (en) * | 1976-02-03 | 1979-04-03 | Merck & Co., Inc. | Vaccine stabilizer |
| GB1575155A (en) * | 1978-04-11 | 1980-09-17 | Merck & Co Inc | Vaccine stabilizer |
| BE866330A (fr) * | 1978-04-25 | 1978-10-25 | Merck & Co Inc | Procede de fabrication d'un agent de stabilisation de vaccin |
| US5532220A (en) | 1987-08-31 | 1996-07-02 | The Regents Of The University Of California | Genetic mechanisms of tumor suppression |
| DD299213A7 (de) * | 1988-05-04 | 1992-04-09 | Saechsische Landesgewerbefoerderungsgesellschaft M.B.H.,De | Verfahren zur stabilisierung eines lebendvirusimpfstoffes gegen temperatureinwirkung |
| DD295927A5 (de) * | 1988-05-06 | 1991-11-14 | Saechsisches Serumwerk Gmbh Dresden, | Immobilisiertes immunologisch aktives reagens |
| EP2113569A1 (en) | 1993-10-25 | 2009-11-04 | CANJI, Inc. | Recombinant adenoviral vector and methods of use |
| KR100368686B1 (ko) * | 1994-12-29 | 2003-12-01 | 주식회사 엘지생명과학 | 수크로즈를이용한세포와바이러스의분리방법 |
| FR2742756B1 (fr) * | 1995-12-22 | 1998-04-03 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Stabilisants pour vaccins vivants, vaccins les contenant et procedes pour leur preparation |
| US5789244A (en) * | 1996-01-08 | 1998-08-04 | Canji, Inc. | Compositions and methods for the treatment of cancer using recombinant viral vector delivery systems |
-
1999
- 1999-02-12 ES ES04030395T patent/ES2290613T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 DE DE69933433T patent/DE69933433T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 KR KR1020087008929A patent/KR100918187B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 DK DK99906690T patent/DK1054955T3/da active
- 1999-02-12 WO PCT/US1999/001873 patent/WO1999041416A2/en active IP Right Grant
- 1999-02-12 CN CN2007101670867A patent/CN101164623B/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 EP EP04030394A patent/EP1526173B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP04030395A patent/EP1526174B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 KR KR1020007008878A patent/KR100862169B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 DE DE69936948T patent/DE69936948T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 HU HU0100670A patent/HU226015B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020097022935A patent/KR101018992B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 DE DE69942708T patent/DE69942708D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 PL PL342847A patent/PL197747B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 CA CA2320419A patent/CA2320419C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 EP EP99906690A patent/EP1054955B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 BR BR9908015-0A patent/BR9908015A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-02-12 AU AU26538/99A patent/AU757976B2/en not_active Ceased
- 1999-02-12 CN CNB998050989A patent/CN100374551C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 AT AT99906690T patent/ATE341614T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 CA CA2723040A patent/CA2723040A1/en not_active Abandoned
- 1999-02-12 SK SK1184-2000A patent/SK11842000A3/sk unknown
- 1999-02-12 ID IDW20001574A patent/ID28298A/id unknown
- 1999-02-12 PT PT99906690T patent/PT1054955E/pt unknown
- 1999-02-12 AT AT04030395T patent/ATE371020T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 JP JP2000531596A patent/JP4358434B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 IL IL13751099A patent/IL137510A0/xx unknown
- 1999-02-12 AT AT06019642T patent/ATE478945T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 EP EP06019642A patent/EP1741777B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 TW TW088102219A patent/TWI232107B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020097004676A patent/KR100991683B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020087008928A patent/KR100912362B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 ES ES99906690T patent/ES2272053T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-15 MY MYPI99000542A patent/MY141641A/en unknown
- 1999-02-16 PE PE1999000137A patent/PE20000265A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-02-16 CO CO99009282A patent/CO4820440A1/es unknown
- 1999-02-23 AR ARP990100656A patent/AR020054A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-07-25 IL IL137510A patent/IL137510A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-08-16 NO NO20004104A patent/NO20004104L/no not_active Application Discontinuation
- 2000-12-01 HK HK05106734A patent/HK1073481A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-12-01 HK HK00107727A patent/HK1028416A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-02-07 JP JP2006030336A patent/JP2006166925A/ja not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-05-10 HK HK07104995.0A patent/HK1097413A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-10-16 AR ARP070104577A patent/AR063315A2/es unknown
- 2007-10-16 AR ARP070104576A patent/AR063314A2/es unknown
-
2010
- 2010-07-08 JP JP2010156257A patent/JP2010213727A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU226015B1 (en) | Compositions and preparations comprising viruses | |
| US20080293123A1 (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| US20080261289A1 (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| ES2349106T3 (es) | Composiciones que comprenden virus y procedimientos para concentrar preparaciones virales. | |
| NZ505952A (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| MXPA00008008A (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| CZ20002864A3 (cs) | Prostředek obsahující virus, způsoby jeho koncentrace a purifikace |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |