PL193489B1 - Cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Comamonas acidovorans, sposób wytwarzania roślin oraz roślinytransformowane genem deacetylazy N-acetylofosfinotricyny - Google Patents
Cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Comamonas acidovorans, sposób wytwarzania roślin oraz roślinytransformowane genem deacetylazy N-acetylofosfinotricynyInfo
- Publication number
- PL193489B1 PL193489B1 PL97377650A PL37765097A PL193489B1 PL 193489 B1 PL193489 B1 PL 193489B1 PL 97377650 A PL97377650 A PL 97377650A PL 37765097 A PL37765097 A PL 37765097A PL 193489 B1 PL193489 B1 PL 193489B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ala
- gly
- deacetylase
- acetyl
- protein
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 77
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 30
- 230000006698 induction Effects 0.000 title 1
- 241001600125 Delftia acidovorans Species 0.000 claims abstract description 20
- 108010040807 N-acetylphosphinothricin deacetylase Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 54
- VZVQOWUYAAWBCP-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-phosphinothricin Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCP(C)(O)=O VZVQOWUYAAWBCP-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 38
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 13
- 101100152304 Caenorhabditis elegans tap-1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 240000001436 Antirrhinum majus Species 0.000 claims description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 2
- 101150080773 tap-1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 6
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241000983364 Stenotrophomonas sp. Species 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 5
- 241000370685 Arge Species 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 4
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 4
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 3
- JRLGPAXAGHMNOL-LURJTMIESA-N N(2)-acetyl-L-ornithine Chemical compound CC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC[NH3+] JRLGPAXAGHMNOL-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RFMMMVDNIPUKGG-YFKPBYRVSA-N N-acetyl-L-glutamic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O RFMMMVDNIPUKGG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- IVWWFWFVSWOTLP-YVZVNANGSA-N (3'as,4r,7'as)-2,2,2',2'-tetramethylspiro[1,3-dioxolane-4,6'-4,7a-dihydro-3ah-[1,3]dioxolo[4,5-c]pyran]-7'-one Chemical compound C([C@@H]1OC(O[C@@H]1C1=O)(C)C)O[C@]21COC(C)(C)O2 IVWWFWFVSWOTLP-YVZVNANGSA-N 0.000 description 2
- WGDNWOMKBUXFHR-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WGDNWOMKBUXFHR-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N Arg-Pro-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- MOGMYRUNTKYZFB-UNQGMJICSA-N Arg-Thr-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MOGMYRUNTKYZFB-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Asp-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N Gly-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)CN CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YXBRCTXAEYSCHS-XVYDVKMFSA-N His-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N YXBRCTXAEYSCHS-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 2
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Phosphinothricin Natural products CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IWNOFCGBMSFTBC-CIUDSAMLSA-N Pro-Ala-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IWNOFCGBMSFTBC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 241000122971 Stenotrophomonas Species 0.000 description 2
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N Thr-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 2
- YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N Val-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- OPGWZDIYEYJVRX-AVGNSLFASA-N Val-His-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N OPGWZDIYEYJVRX-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010059459 arginyl-threonyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- YREOLPGEVLLKMB-UHFFFAOYSA-N 3-methylpyridin-1-ium-2-amine bromide hydrate Chemical compound O.[Br-].Cc1ccc[nH+]c1N YREOLPGEVLLKMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- SBGXWWCLHIOABR-UHFFFAOYSA-N Ala Ala Gly Ala Chemical compound CC(N)C(=O)NC(C)C(=O)NCC(=O)NC(C)C(O)=O SBGXWWCLHIOABR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWINFPQUSSHSFS-UVBJJODRSA-N Ala-Arg-Trp Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C12)C(=O)O DWINFPQUSSHSFS-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CZPAHAKGPDUIPJ-CIUDSAMLSA-N Ala-Gln-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CZPAHAKGPDUIPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ROLXPVQSRCPVGK-XDTLVQLUSA-N Ala-Glu-Tyr Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O ROLXPVQSRCPVGK-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N Ala-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- NJWJSLCQEDMGNC-MBLNEYKQSA-N Ala-His-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](C)N)O NJWJSLCQEDMGNC-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N Ala-Thr-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- IYKVSFNGSWTTNZ-GUBZILKMSA-N Ala-Val-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IYKVSFNGSWTTNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BOKLLPVAQDSLHC-FXQIFTODSA-N Ala-Val-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N BOKLLPVAQDSLHC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CLOMBHBBUKAUBP-LSJOCFKGSA-N Ala-Val-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N CLOMBHBBUKAUBP-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 108090000531 Amidohydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004092 Amidohydrolases Human genes 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000207875 Antirrhinum Species 0.000 description 1
- OOBVTWHLKYJFJH-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OOBVTWHLKYJFJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N Arg-Arg-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IASNWHAGGYTEKX-IUCAKERBSA-N Arg-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(O)=O IASNWHAGGYTEKX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ITVINTQUZMQWJR-QXEWZRGKSA-N Arg-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ITVINTQUZMQWJR-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YSUVMPICYVWRBX-VEVYYDQMSA-N Arg-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YSUVMPICYVWRBX-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- AUFHLLPVPSMEOG-YUMQZZPRSA-N Arg-Gly-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AUFHLLPVPSMEOG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YBIAYFFIVAZXPK-AVGNSLFASA-N Arg-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O YBIAYFFIVAZXPK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- BTJVOUQWFXABOI-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N BTJVOUQWFXABOI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- XSPKAHFVDKRGRL-DCAQKATOSA-N Arg-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XSPKAHFVDKRGRL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ASQKVGRCKOFKIU-KZVJFYERSA-N Arg-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O ASQKVGRCKOFKIU-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N Arg-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- YHZQOSXDTFRZKU-WDSOQIARSA-N Arg-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)=CNC2=C1 YHZQOSXDTFRZKU-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BDMIFVIWCNLDCT-CIUDSAMLSA-N Asn-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BDMIFVIWCNLDCT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- COUZKSSMBFADSB-AVGNSLFASA-N Asn-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N COUZKSSMBFADSB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CBHVAFXKOYAHOY-NHCYSSNCSA-N Asn-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CBHVAFXKOYAHOY-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OERMIMJQPQUIPK-FXQIFTODSA-N Asp-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OERMIMJQPQUIPK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N Asp-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N Asp-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N Asp-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- QNMKWNONJGKJJC-NHCYSSNCSA-N Asp-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QNMKWNONJGKJJC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N Asp-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- NOCCABSVTRONIN-CIUDSAMLSA-N Cys-Ala-Leu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N NOCCABSVTRONIN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N Cys-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MFMDKTLJCUBQIC-MXAVVETBSA-N Cys-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MFMDKTLJCUBQIC-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N Glu-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N Glu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N Glu-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- WOMUDRVDJMHTCV-DCAQKATOSA-N Glu-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WOMUDRVDJMHTCV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N Glu-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N Glu-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- UERORLSAFUHDGU-AVGNSLFASA-N Glu-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UERORLSAFUHDGU-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N Glu-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- BIYNPVYAZOUVFQ-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BIYNPVYAZOUVFQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- RMWAOBGCZZSJHE-UMNHJUIQSA-N Glu-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RMWAOBGCZZSJHE-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- QSDKBRMVXSWAQE-BFHQHQDPSA-N Gly-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN QSDKBRMVXSWAQE-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- QIZJOTQTCAGKPU-KWQFWETISA-N Gly-Ala-Tyr Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QIZJOTQTCAGKPU-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RQZGFWKQLPJOEQ-YUMQZZPRSA-N Gly-Arg-Gln Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN)CN=C(N)N RQZGFWKQLPJOEQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LLXVQPKEQQCISF-YUMQZZPRSA-N Gly-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN LLXVQPKEQQCISF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N Gly-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- DTRUBYPMMVPQPD-YUMQZZPRSA-N Gly-Gln-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O DTRUBYPMMVPQPD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MOJKRXIRAZPZLW-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MOJKRXIRAZPZLW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JSNNHGHYGYMVCK-XVKPBYJWSA-N Gly-Glu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSNNHGHYGYMVCK-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ALOBJFDJTMQQPW-ONGXEEELSA-N Gly-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)CN ALOBJFDJTMQQPW-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N Gly-Leu-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- QSQXZZCGPXQBPP-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O QSQXZZCGPXQBPP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000012630 HPLC buffer Substances 0.000 description 1
- DCRODRAURLJOFY-XPUUQOCRSA-N His-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O DCRODRAURLJOFY-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N His-Ala-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- TVQGUFGDVODUIF-LSJOCFKGSA-N His-Arg-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N TVQGUFGDVODUIF-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- CHZKBLABUKSXDM-XIRDDKMYSA-N His-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N CHZKBLABUKSXDM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- FDQYIRHBVVUTJF-ZETCQYMHSA-N His-Gly-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 FDQYIRHBVVUTJF-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- FYTCLUIYTYFGPT-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FYTCLUIYTYFGPT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N His-His-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CN=CN1 CSTNMMIHMYJGFR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PYNPBMCLAKTHJL-SRVKXCTJSA-N His-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PYNPBMCLAKTHJL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N Leu-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- SGIIOQQGLUUMDQ-IHRRRGAJSA-N Leu-His-Val Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N SGIIOQQGLUUMDQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- OMHLATXVNQSALM-FQUUOJAGSA-N Leu-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N OMHLATXVNQSALM-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 1
- DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CPONGMJGVIAWEH-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Ala Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPONGMJGVIAWEH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N Leu-Thr-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- XFIHDSBIPWEYJJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XFIHDSBIPWEYJJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SLQJJFAVWSZLBL-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN SLQJJFAVWSZLBL-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- MYZMQWHPDAYKIE-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MYZMQWHPDAYKIE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VKCPHIOZDWUFSW-ONGXEEELSA-N Lys-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN VKCPHIOZDWUFSW-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N Met-Gly-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N Met-Leu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UNPGTBHYKJOCCZ-DCAQKATOSA-N Met-Lys-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UNPGTBHYKJOCCZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 101100166793 Mus musculus Cela2a gene Proteins 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- CBQJSKKFNMDLON-JTQLQIEISA-N N-acetyl-L-phenylalanine Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CBQJSKKFNMDLON-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- -1 N-acetylamino acids Chemical class 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010047562 NGR peptide Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- LSXGADJXBDFXQU-DLOVCJGASA-N Phe-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 LSXGADJXBDFXQU-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- LBSARGIQACMGDF-WBAXXEDZSA-N Phe-Ala-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 LBSARGIQACMGDF-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 1
- JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N Phe-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JJHVFCUWLSKADD-ONGXEEELSA-N Phe-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JJHVFCUWLSKADD-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- BNRFQGLWLQESBG-YESZJQIVSA-N Phe-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O BNRFQGLWLQESBG-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- BTAIJUBAGLVFKQ-BVSLBCMMSA-N Phe-Trp-Val Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BTAIJUBAGLVFKQ-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- NXEYSLRNNPWCRN-SRVKXCTJSA-N Pro-Glu-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NXEYSLRNNPWCRN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WSRWHZRUOCACLJ-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-His Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CN=CN1 WSRWHZRUOCACLJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BEPSGCXDIVACBU-IUCAKERBSA-N Pro-His Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CN=CN1 BEPSGCXDIVACBU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NBDHWLZEMKSVHH-UVBJJODRSA-N Pro-Trp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@@H]3CCCN3 NBDHWLZEMKSVHH-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- RSTWKJFWBKFOFC-JYJNAYRXSA-N Pro-Trp-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RSTWKJFWBKFOFC-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- UFKPDBLKLOBMRH-XHNCKOQMSA-N Ser-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O UFKPDBLKLOBMRH-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- JMQUAZXYFAEOIH-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O JMQUAZXYFAEOIH-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N Thr-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N Thr-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- XIULAFZYEKSGAJ-IXOXFDKPSA-N Thr-Leu-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XIULAFZYEKSGAJ-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- NZRUWPIYECBYRK-HTUGSXCWSA-N Thr-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O NZRUWPIYECBYRK-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N Thr-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QNMIVTOQXUSGLN-SZMVWBNQSA-N Trp-Arg-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 QNMIVTOQXUSGLN-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- WPVGRKLNHJJCEN-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WPVGRKLNHJJCEN-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N Tyr-Leu-Ala Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- VXFXIBCCVLJCJT-JYJNAYRXSA-N Tyr-Pro-Pro Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VXFXIBCCVLJCJT-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- FZSPNKUFROZBSG-ZKWXMUAHSA-N Val-Ala-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O FZSPNKUFROZBSG-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- UUYCNAXCCDNULB-QXEWZRGKSA-N Val-Arg-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O UUYCNAXCCDNULB-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Gly Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNOOLPROHJWCSQ-RCWTZXSCSA-N Val-Arg-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DNOOLPROHJWCSQ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N Val-Asn-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- KZKMBGXCNLPYKD-YEPSODPASA-N Val-Gly-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZKMBGXCNLPYKD-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- FEFZWCSXEMVSPO-LSJOCFKGSA-N Val-His-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FEFZWCSXEMVSPO-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- CKTMJBPRVQWPHU-JSGCOSHPSA-N Val-Phe-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)O)N CKTMJBPRVQWPHU-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N Val-Pro-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N Val-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- UVHFONIHVHLDDQ-IFFSRLJSSA-N Val-Thr-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O UVHFONIHVHLDDQ-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- RTJPAGFXOWEBAI-SRVKXCTJSA-N Val-Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RTJPAGFXOWEBAI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N Val-Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N Val-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC([O-])=O AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 108010017893 alanyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010056243 alanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010091092 arginyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 108010009297 diglycyl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010085109 glycyl-histidyl-arginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010033719 glycyl-histidyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010066198 glycyl-leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N methyl acetate Chemical compound COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000007420 radioactive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011536 re-plating Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 208000018655 severe necrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084932 tryptophyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8287—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for fertility modification, e.g. apomixis
- C12N15/8289—Male sterility
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
1. Czasteczka DNA kodujaca bialko o aktywnosci biologicznej deacetylazy N-acetylofosfi- notricyny, która jest wyizolowana z Comamonas acidovorans, zdeponowanego pod numerem DSM 11070. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Comamonas acidovorans, sposób wytwarzania roślin oraz rośliny transformowane genem deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny.
Koncepcja chemicznie indukowalnej, odwracalnej męskiej sterylności u roślin poprzez specyficzną dla pylników ekspresję deacetylazy N-acetylofosfinotricyny (N-acetylo-PTT) jest opisana w Europejskim Zgłoszeniu Patentowym EP 531 716. Stosowany przy tym gen deacetylazy ze Streptomyces viridiochromogenes (deacetylaza N-acetylo-L-fosfinotricylo-alanylo-alaniny (N-acetylo PTT, dea) lub argE z Escherichia coli (deacetylaza N-acetylo-L-ornityny) kodują białka o specyficzności dla N-acetylo-L-PTT. Wykazano, że oba geny przy ekspresji specyficznej dla warstwy wyścielającej (tapetum) u roślin powodują występowanie męskosterylnych kwiatów po działaniu N-acetylo-L-PPT na pojedyncze pąki. Dla skutecznego zastosowania tego systemu szczególnie przy traktowaniu całych roślin N-acetylo-PTT, korzystne jest w warunkach praktycznych użycie deacetylaz o wyższym powinowactwie w stosunku do substratu.
Tak więc poszukiwano innych deacetylaz z wyższymi powinowactwem w stosunku do N-acetylo PPT.
Celem wynalazku jest dostarczenie cząsteczek DNA, które kodują białko o aktywności deacetylazy. Wykorzystując takie cząsteczki DNA kodujące deacetylazy można e wytworzyć rośliny o częściach, które można celowo zniszczyć. Szczególnie interesująca jest produkcja męsko- lub żeńskosterylnych roślin.
Wynalazek dotyczy cząsteczki DNA kodującej białko o aktywności biologicznej deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny, która jest wyizolowana z Comamonas acidovorans, zdeponowanego pod numerem DSM 11070.
Korzystnie cząsteczka DNA według wynalazku koduje białko obejmujące sekwencję aminokwasową o Id. Sekw. Nr 4 lub fragmenty tego białka posiadające aktywność biologiczną deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny. Korzystnie cząsteczka ta obejmuje nukleotyd o Id. Sekw. Nr 3 lub sekwencję, która różni się od tej sekwencji ze względu na degenerację kodu genetycznego.
Wynalazek dotyczy również białka kodowanego przez cząsteczkę DNA według wynalazku.
Właściwości enzymatyczne tych białek opisano w przykładach. W zakres wynalazku wchodzi mikroorganizm Comamonas acidovorans zdeponowany pod numerem DSM 11070.
Zakresem wynalazku objęty jest również sposób wytwarzania roślin mających wybiórczo zniszczalne części, który obejmuje:
a) transformowanie komórek roślinnych genem deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny obejmującym cząsteczkę DNA według wynalazku, pod kontrolą promotora kierującego ekspresją w określonych częściach roślinny, i
b) regenerowanie roślin z komórek roślinnych otrzymanych w etapie (a), przy czym rośliny te mają części, które mogą być wybiórczo zniszczone przez traktowanie N-acetylo-fosfinotricyną (N-acetyl-PPT).
W korzystnym sposobie według wynalazku specyficzna ekspresja genu deacetylazy N-acetylofosfinotricyny jest pod kontrolą promotora specyficznego dla warstwy wyścielającej, korzystniej promotora genu tap1 z Antirrhinum majus.
Wynalazek dotyczy także roślin transformowanych genem deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny obejmującym cząsteczkę DNA według wynalazku, pod kontrolą promotora kierującego ekspresją w określonych częściach rośliny, przy czym te określone części mogą być wybiórczo zniszczone przez traktowanie N-acetylo-fosfinotricyną (N-acetyl-PPT).
Transgeniczne rośliny mogą być uzyskane za pomocą znanych technik z komórek roślinnych, które zostały stransformowane cząsteczkami DNA według wynalazku i regenerowane do całych roślin.
Szczególnie interesujące są sposoby produkcji roślin mających części, które można celowo zniszczyć przez specyficzną ekspresję genu deacetylazy jak i sposoby produkcji roślin męsko- lub żeńskosterylnych, poprzez specyficzną ekspresję genu deacetylazy.
Rozwiązania według wynalazku umożliwiają:
(1) celowe wzbogacanie w mikroorganizmy z wysoką aktywnością deacetylazy N-acetylo-PPT;
(2) izolację odpowiednich genów deacetylazy (3) oczyszczenie i charakterystykę kodowanych przee te geny białek o wysokiej aktywności deacetylazy N-acetylo-PPT (4) ekspresję genu deacetylazy u roślin.
PL 193 489 B1
Stosując pożywkę mineralną z chityną jako jedynym źródłem węgla można było namnożyć bakterie z próbek gleby, które są w stanie rozszczepiać z wysoką skutecznością N-acetylo-PPT. W ten sposób możliwe było wyizolowanie dwóch szczepów bakterii jako czystych kultur: Stenotrophomonas sp. (nr. depozytu DSM 9734) i Comamonas acidovorans (Nr depozytu DSM 11070).
Jednak dla wymaganych w preparatyce przemysłowej warunków jest znacznie bardziej korzystne stosowanie oczyszczonego enzymu.
Poniżej opisano nowe deacetylazy specyficzne w stosunku do L-N-acetylo-PPT, i nowy i skuteczny sposób oczyszczania i charakterystyki tych enzymów ze wzbogaconej kultury tych mikroorganizmów gleby jak i zastosowanie tych deacetylaz. Opisano również:
1. Deacetylazy z
- masą cząsteczkową 20000 do 100000 daltonów
- o optimum pH 6,5-10,0
- specyficzności substratowej w stosunku do L-N-acetylo-fosfinotricyny.
2. Sppsóó przzygtowania ddeactylaaz, który ppleeg na tym,żż hoduje się mikroorggnizm nie twprzący spór w pożywce zawierającej chitynę z kraba, i deacetylazę izoluje się z tego mikroorganizmu.
3. Zastpspwanie deace1:ylazy scharakkeryzowanej w 1. do rpślln nych jak i do stereospecyficznego przygotowania L-fosfinotricyny.
Białko według wynalazku o aktywności enzymatycznej ma optimum temperatury leżące między 30°C i 50°C.
Sposób wytwarzania deacetylaz korzystnie przeprowadza się z mikroorganizmami, wybranymi z grupy, która składa się z organizmów opisanych powyżej.
Chitynę z kraba można otrzymać jak opisali Shimara, Kenzo i Takiguchi, Yasuyuki (Methods in Enzymology, tom 161, str. 417-423, 1988) lub jest do nabycia w firmie Sigma.
W celu oczyszczenia deacetylazy mikroorganizm hoduje się w pożywce odżywczej optymalnej dla jego wzrostu. Hodowanie mikroorganizmu przebiega w warunkach tlenowych, na przykład w hodowli zanurzeniowej przy wytrząsaniu lub mieszaniu w kolbach do wytrząsania lub fermentorach, ewentualnie przy wprowadzaniu powietrza lub tlenu. Fermentacja może zachodzić w temperaturze od około 20 do 40°C, korzystnie około 25 do 37°C, a szczególnie korzystnie przy 30 do 37°C. Hodowlę prowadzi się w zakresie pH między 5 i 8,5, korzystnie między 5,5 i 8.
W tych warunkach hodowli na ogół mikroorganizmy wykazują po 1 do 3 dni godną uwagi akumulację enzymu. Synteza deacetylazy zaczyna się z fazą logarytmiczną. Produkcję enzymu można śledzić za pomocą testu aktywności poprzez analizę HPLC lub fotometrycznie. Stosowana do produkcji pożywka płynna zawiera 0,2 do 5%, korzystnie 0,5 do 2% chityny z kraba i sole nieorganiczne.
Jako sole nieorganiczne pożywka płynna może zawierać na przykład chlorki, węglany, siarczany lub fosforany metali alkalicznych lub metali ziem alkalicznych, żelaza, cynku i manganu, ale także sole amonowe i azotany.
Do deacetylacji mogą być stosowane skuteczne ilości deacetylazy w postaci wolnej lub immobilizowanej, korzystnie wprowadzane do roślin, które wyrażają gen deac.
W celu unieruchomienia stosować można znane sposoby, takie jak opisano w niemieckich opisach wyłożeniowych 32 37 341 i 32 43 591.
Izolację i oczyszczanie enzymu można prowadzić według klasycznych procedur przez rozerwanie za pomocą ultradźwięków i prasy Frencha, strącanie siarczanem amonu, wymianę jonową, chromatografię powinowactwa i sączenie na żelu.
Preparat enzymatyczny można scharakteryzować za pomocą masy cząsteczkowej od 20000 do 100000 daltonów, korzystnie 30000 do 80000, szczególnie korzystnie 40000 do 70000 daltonów. Optimum pH enzymu leży w zakresie pH od 6,0 do 10,0, szczególnie 7,0 do 8,0. Optimum temperatury enzymu leży między 30 i 50°C, szczególnie między 35 i 45°C.
Kodujący deacetylazę gen sklonowano w E. coli. Dla genu deac-1 ze Stenotrophomonas sp. przygotowano fagmidowy bank ekspresyjny z genomowego DNA w E. coli i przeszukiwano pod kątem aktywności deacetylazy specyficznej w stosunku do N-acetylo-PTT. Gen deac2 z Comamonas acidovorans sklonowano poprzez komplementację mutanta E. coli argE za pomocą banku genomowego.
Sekwencje aminokwasów wyprowadzone z sekwencji DNA obu genów są do siebie podobne i posiadają ponadto homologię do hydrolaz hipuranowych, znanych z banków danych białek.
Rośliny transgeniczne mają wysoką wrażliwość tkanki na N-acetylo-PPT, co świadczy o wysokim powinowactwie w stosunku do substratu białka deac1 (Km = 670 μΜ). Tak więc, możliwe jest przy konstytutywnej ekspresji genu deac uzyskanie roślin, których liście są wrażliwe na stężenia do
PL 193 489 B1
0,4 mg/ml N-acetylo-D,L-PPT (= 0,2 mg/ml L-enancjomeru). Przy ekspresji specyficznej w stosunku do tapetum uzyskano sterylność męskich kwiatów przez działanie na pąki 2 mg/ml N-acetylo-D,L-PPT (= 1 mg/ml L-enancjomeru). Opisane wyniki dotyczą roślin szklarniowych. Ze względu na niskie stężenia substratu w razie potrzeby w warunkach otwartej przestrzeni możliwe jest bez problemu stosowanie dawki 5-10 razy wyższej.
Przedstawione przykłady służą do dalszego wyjaśnienia wynalazku. Procenty, o ile nie podano inaczej, są procentami wagowymi. Wynalazek jest dalej definiowany w zastrzeżeniach patentowych.
P r z y k ł ad 1. Izolacja i identyfikacja mikroorganizmów gleby ze specyficzną aktywnością deacetylazy N-acetylo-PPT
Po 1 g gleby (piaszczysta glina, Schwanheimer Duene) mieszano z 10 mM NaCl, 10 mM buforem Na-fosforan, pH = 7,0 i ekstrahowano przez 1 godz. w temperaturze pokojowej. Do selekcji poszczególnych grup mikroorganizmów resztki gleby zaszczepiano do następujących pożywek płynnych.
(1) Pożywka MS-1 (dla eubakterii): 5 mM glukoza mM bursztynian 10 mM gliceryna g/l NH4Cl 50 ml/l roztworu A 50 ml/l roztworu B roztwór A: 50 g/l K2HPO4 roztwór B: 2,5 g/l MgSO4 0,5 g/l NaCl ml/l elementów śladowych (2) pożywka chitynowa dla Actinomycetes i Streptomycetes, jak i bakterii chitynożernych g/l chityny z kraba 1 g/l (NH4)2SO4 0,5 g/l MgSO4 50 ml/l roztworu A ml/l elementów śladowych (3) Pożywka z antybiotykami (dla grzybów wyższych):
g/l ekstraktu słodowego 10 g/l glukozy g/l ekstraktu z drożdży 0,5 g/l (NH4)2SO4 mg/ml tetracykliny
Wszystkie pożywki zawierały 5 mM N-acetylo-PPT i były inkubowane po zaszczepieniu przez 3-5 dni w 28°C.
Wzbogacone kultury następnie testowano pod kątem aktywności deacetylacji N-acetylo-PPT. W tym celu komórki zwirowywano przy 10000 obr/min i w supernatancie badano wiązanie PPT w analizatorze aminokwasów (Biotronic LC 5001). Wyłącznie kultury chitynowe okazały się deacetylazododatnie. Po wysianiu na agar z chityną z tych kultur wyizolowano w sumie 40 kolonii pojedynczych, ponownie hodowano je w chitynowej pożywce płynnej i znowu badano aktywność deacetylazy. Znaleziono 6 dodatnich izolatów, z których przez ponowne wysianie na płytki agarowe i dalszą hodowlę kolonii pojedynczych uzyskano aktywne kultury czyste. Szczep z najwyższą aktywnością deacetylazy został zidentyfikowany jako Stenotrophomonas sp. (numer depozytu DSM 9743).
P r z y k ł a d 2: Klonowanie i sekwencjonowanie genu deacetylazy N-acetylo-PPT ze Stenotrophomonas sp.
Stosowane przy pracy standardowe metody biologii molekularnej opisano w Maniatis i wsp. 1982: Molecular Cloning: a Laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.
Genomowy DNA ze Stenotrophomonas sp. przygotowano według metody Meade i wsp., 1982, J.Bacteriol. 149:114-122. Po częściowym trawieniu Sau3A wyizolowano frakcję o wielkości 5-10 kb i ligowano ją ze strawionym BamHI wektorem lambda-ZAP-Express z firmy Stratagene (ZAP Express vector kit, nr. Katalogu 239201; opis zestawu). Za pomocą pakowanej próbki ligacji uzyskano pierwotny bank fagów lambda, i następnie poddano go amplifikacji. W ten sposób sporządzono za pomocą systemu fagmidowego pBK-CMV firmy Stratagene (nr katalogu 212209, instrukcja stosowania) fagmidowy bank ekspresyjny w Escherichia coli. W tym banku genomowym poszukiwano genu deacetylazy poprzez badanie aktywności z [ C]-N-acetylo-L-PPT jako substratem.
PL 193 489 B1
W tym celu zaszczepiono 2000 pojedynczych klonów w płytkach mikrotitracyjnych i inkubowano przez noc w pożywce LB w 37°C z 0,2 mM izopropylotiogalaktozydem (IPTG) jako induktorem i 50 mg/ml kanamycyny jako markerem oporności. Komórki odwirowano i inkubowano każdą próbkę przez noc w 28°C 10 ml 1 mM [ C]-N-acetylo-L-PPT. Następnie próbki zbierano po osiem i poddawano chromatografii cienkowarstwowej i autoradiografii pod kątem analizy przekształcenia N-acetylo-PPT do PPT (patrz EP 531 716, przykład 8) i przy pozytywnym wyniku badano pojedyncze klony. Za pomocą tej procedury udało się zidentyfikować dodatni klon ze wstawką 6 kb pośród 1920 transformantów. Ten fragment DNA poddano dokładniejszej analizie poprzez mapowanie restrykcyjne. Poprzez subklonowanie fragmentów restrykcyjnych wstawki w pUC18/19 i transformację zrekombinowanych plazmidów do E. coli udało się zlokalizować za pomocą opisanego powyżej testu aktywności gen struktury deac w fragmencie 2,5 kb (2487 par zasad) SalI/Smal (Fig. 1). Aktywność była zależna od orientacji fragmentu w stosunku do promotora lac wektora.
Fragment 2,5 kb poddano sekwencjonowaniu na obu niciach za pomocą metody Sangera (Sanger i wsp., 1977, Proc. Natl. Acad. Sci USA 74:5463-5466). Cały fragment ma łączną długość 2487 nukleotydów (p. SEK NR ID. 1). Otwarta ramka odczytu o długości 1494 nukleotydów rozpoczyna się przy nukleotydzie Nr 367 i kończy się przy Nr. 1860.
Badania ekspresji z użyciem subfragmentów PCR w tym obszarze u E. coli wykazały, że aktywne białko deacetylazy jest kodowane przez obszar o długości 1365 nukleotydów od kodonu start w pozycji 496 do kodonu stop TGA w pozycji 1860. Wywiedziona z sekwencji DNA sekwencja aminokwasów stanowi polipeptyd złożony z 454 aminokwasów (SEQ NR ID 2) z obliczoną masą cząsteczkową 48,1 kDa.
Poszukiwanie homologii w bankach danych EMBL białek i DNA wykazało podobieństwa z opisaną po raz pierwszy w tym zgłoszeniu sekwencją deacetylazy N-acetylo-PPT z Comamonas acidovorans (37,4% identycznych aminokwasów), hydrolazy hipuranowej z Campylobacter jejuni (33,9%) i N-acetylo-L-amidohydrolazy z Bacillus stearothermophilus (33,7%). Dalej gen wyizolowany ze Stenotrophomonas będzie określany jako deac1. Ze względu na homologię można założyć, że także wymienione hydrolazy hipuranowej i amidohydrolazy w połączeniu ze specyficznymi tkankowo promotorami i po dalszej obróbce korzystnie mogą być wykorzystane do przygotowania roślin z tkankami, które można selektywnie niszczyć, szczególnie roślin męsko- i/lub żeńskosterylnych.
P r z y k ł a d 3: Charakterystyka białka Deac1
W celu nadekspresji i oczyszczenia deacetylazy ze Stenotrophommonas sp. (deac1) zastosowano system fuzji genowej z S-transferazą glutationu firmy Pharmacia (Nr Katalogu 27-4581-01, Nr katalogu 27-4570-01). Metoda opisana jest w Smith i Johnson, 1988, Gene 67:31. Oczyszczanie fuzji białkowej przeprowadza się za pomocą chromatografii powinowactwa na glutationylo-Sepharose-4B.
Funkcjonalny gen deac przeklonowano do wektora fuzyjnego GST pGEX-4T-2 pod kontrolą promotora lac. Ekspresję zrekombinowanego białka fuzyjnego indukowano przez dodanie 0,1 mM IPTG. Białko fuzyjne jako prążek o wielkości 74 kDa można było wykazać w surowych ekstraktach transformantów E. coli za pomocą elektroforezy SDS/poliakryloamid.
W celu oczyszczania białek komórki pochodzące z 2 l kultury indukowanej dodatniej pod względem ekspresji transformanta E. coli otwierano za pomocą ultradźwięków i następnie rozpuszczano ekstrakt przez dodanie 1% Tritonu X 100. Supernatant wiązano z glutationylo-4B-Sepharose. Po wielokrotnym płukaniu buforem PBS (140 mM NaCl, 3 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 pH = 7,3) rozszczepiano związane z macierzą Sepharose białko fuzyjne za pomocą trombiny. Eluat zawierał jako jedyny prążek białka produkt rozszczepienia o wielkości 48 kDa (po denaturującej elektroforezie SDS/poliakryloamid), który w oznaczeniu enzymatycznym (patrz poniżej) można było zidentyfikować jako deacetylazę N-acetylo-PPT. Za pomocą opisanej metody udało się oczyścić 200 mg białka deacetylazy do homogenności.
Aktywność białka deacetylazy mierzono za pomocą dwóch następujących oznaczeń:
(1) Test radioaktywny: po 2,5 mg oczyszczonego enzymu inkubowano w porcjach po 10 ml w buforze PBS z 0,1 mM [14C]-N-acetylo-L-PPT przez 15 minut w 37°C. Następnie próbki rozcieńczano 1:6 w 5 mM K2HPO4, 10% metanolu, pH = 1,92 i analizowano w HPLC z detektorem radioaktywności (kolumna do rozdziału: Spherisorb SAX; roztwór do rozwijania 5 mM KH2PO4, 10% metanol, pH 1,92. Tempo przepływu: 0,5 ml/min. W tych warunkach [ C]-L-PPT eluuje się przy 4,5 min i [ C]-N-acetlo-L-PPT przy 6,5 min. Specyficzne aktywności deacetylazy podawano w [ C]-N-acetylo-L-PPT/min/mg białka. W celu ustalenia optimum pH przyrządzono próbki w układzie buforującym z 40 mM Bis-Tris,
PL 193 489 B1
Tris i Caps między pH 6 i 9. Dla oznaczenia wartości Km trzykrotnie prowadzono oznaczenia z [ C]-N-acetylo-L-PPT między 0,01 mM i 1 mM przy pH 8,0 w obecności 1 mM CoCh (2) Test nieradioaktywny: W celu badania specyficzności substratowej po 5 mg oczyszczonego enzymu w próbkach po 20 ml w buforze PBS zawierającym 25 mM określonego N-acetylo lub N-acyloaminokwasu inkubowano przez 60 minut w 28°C. Następnie w próbkach mierzono wytwarzanie wolnych aminokwasów w analizatorze aminokwasów (Biotronic LC 5001). Specyficzne aktywności podano w nmolach aminokwasów/min/mg białka. Dla deacetylazy N-acetylo-PPT ustalono optimum pH = 8 (patrz Tabela 1) i optimum temperatury 37°C (p. Tabela 2). Kinetyczne pomiary dały wartość Km 670 mM. Przez dodatek 1 mM CoCh udało się podwyższyć aktywność enzymatyczną o 20%.
Tabel a 1
Optimum pH deacetylazy N-acetylo-PPT
| Wartość pH | Aktywność specyficzna [mol/min/mg białka] |
| 6 | 2,4 |
| 7 | 7,2 |
| 8 | 12,0 |
| 9 | 8,5 |
T a b ela 2
Optimum temperatury deacetylazy N-acetylo-PPT
| Temperatura [°C] | Aktywność specyficzna [mol/min/mg białka] |
| 28 | 9,6 |
| 37 | 16,8 |
| 50 | 14,9 |
| 60 | 4,3 |
Wyniki pomiarów specyficzności substratowej są podane w tabeli 3.
Enzym posiada stosunkowo szerokie spektrum substratowe. Najwyższe przetwarzanie stwierdzono z kwasem hipurowym (N-benzoilo-glicyna) i N-acetylo-L-glutaminianem. Powinowactwo w stosunku do N-acetylo-L-PPT wynosi około 50% poziomu stwierdzonego dla obu wymienionych substratów. Deacetylaza posiada wyłączną specyficzność dla N-acetylo-L-aminokwasów. Dla odpowiednich D-enancjomerów nie udało się zaobserwować żadnych reakcji.
Tabel a 3
Specyficzność substratowa deacetylazy N-acetylo-PPT
| ^bsfraf | Względna aktywność2 [%] |
| Kwas hipurowy (N-benzoilo-glicyna) | 100 |
| N-Ac-fosfinotricyna | 43 |
| N-Ac-ornityna | 37 |
| N-Ac-metionina | 0 |
| N-Ac-tryptofan | 0,4 |
| N-Ac-fenyloalaniana | 24 |
| N-Ac-tyrozyna | 11 |
| kwas N-Ac-glutaminowy | 100 |
| N-Ac-glutamina | 30 |
| N-Ac-glicyna | 59 |
| N-Ac-histydyna | 43 |
| N-Ac-leucyna | 33 |
| N-Ac-walina | 2 |
| N-ac-seryna | 4 |
| N-ac-prolina | 0 |
1 Przy wszystkich wiązaniach chodzi o L-enancjomery 2Aktywność specyficzna mierzona z kwasem hipurowym została określona jako 100% i inne wartości odnoszono do niej
PL 193 489 B1
P r z y k ł a d 4: Konstytutywna ekspresja genu deacl w tytoniu
Gen struktury deac1 przeklonowano jako fragment 1,4 kb BamHI/Sall-PCT do binarnego wektora pPCV801 (Koncz i Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204: 383-396). Powstały plazmid pPCVK-DEAC (fig. 2) z wektorem ekspresyjnym promotor 35S-gen struktury deac1-terminator 35S wtransformowano za pomocą standardowych metod do Agrobacterium tumefaciens (szczep ATHV). Kawałeczki liści tytoniu (Nicotiana tabacum) transformowano zrekombinowanym Agrobacterium według metody Horsch i wsp., 1985, Science 227:1229-1231 i selekcjonowano na pożywce z kanamycyną, zregenerowano 18 niezależnych transformantów tytoniu i badano w nich ekspresję deacetylazy w liściach. W przypadku aktywności białka w transgenicznych roślinach należało liczyć się z wrażliwością liści na N-acetylo-PPT, jako że związek jest w roślinie przerabiany na działający jako herbicyd związek czynny fosfinotricynę.
W próbie kroplowej liście transgenicznych roślin jak i szeregu nietransgenicznych roślin kontrolnych traktowano po 5 ml następujących stężeń N-acetylo-D,L-PPT: 4 mg/ml (=15 mM), 1 mg/ml (=3,75 mM), 0,4 mg/ml (=1,5 mM), 0,1 mg/ml (=0,38 mM). Miejsca traktowane badano po 1-2 tygodniach sprawdzając rozjaśnienie lub tworzenie nekrozy. Równocześnie mierzono aktywność deacetylazy specyficznej w stosunku do PPT w transformantach jak i roślinach kontrolnych w surowych ekstraktach. W tym celu homogenizowano po 100 mg materiału liści w 200 ml buforu PBS, odwirowano resztki komórek i dializowano zawierające białka supernatanty przez noc w 4°C. Po 10 ml tych próbek inkubowano 37°C przez noc z 0,1 mM [ C]-N-acetylo-L-PPT. Próbki następnie analizowano w HPLC jak opisano powyżej z badaniem wytwarzania [ C]-L-PPT.
Wyniki badań prób kropli i testu aktywności podano dla wybranych roślin w Tabeli 4. Okazało się, że około 60% transformantów wyraża funkcjonalne białko deacetylazy i wykazuje odpowiedni fenotyp.
T a b e l a 4
Wrażliwość roślin pPCYKDEACl na N-acetylo-PPT i aktywność deacetylazy w surowych ekstraktach
| Rośliny | Próba kroplowa z' AktywnośćDEAC w surowym esstrakcie N-Ac-D,L-PPT 4mg/ml 1 mg/m 1 0,4 mg/m 1 0,1 mg/m 1 [%L-PPT]1 | |||||
| Obserwacje (liście) | ||||||
| Kontrola | - | - | - | - | 0 | |
| pPCVK9 | +++ | + | - | - | 14,2 | |
| pPCVK14 | zwiędły | + | + | - | - | 12,1 |
| pPCVK15 | zwiędły | ++ | + | + | - | 36,0 |
| pPCVK16 | zwiędły | + | + | - | - | 4,7 |
| pPCVK16 | zwiędły | + | + | - | - | 4,3 |
1 w stosunku do wprowadzonej radioaktywności [14C]-N-acetylo-L-PPT) + + +: silna nekroza ++ : wyraźne uszkodzenia +: słabe rozjaśnienie -: brak objawów
P r z y k ł a d 5: Specyficzna w stosunku do tapetum ekspresja genu deac1 u tytoniu
Za pomocą standardowych metod połączono specyficzny w stosunku do tapetum promotor genu tap-1 z lwiej paszczy (Antirrhinum majus) jako fragment 2,2 kb EcoRI/BamHI z genem struktury deac1 (fragment PGR 1,4 kb BamHI/SalI) i terminatorem 35S w wektorze pUC18. W ten sposób powstałą kasetę ekspresyjną promotor tap-1-gen struktury deac-terminator 35S wklonowano jako fragment 3,8 kb EcoRI w miejsce regionu promotor 35S/terminator 35S w wektorze binarnym pPCV801 (plazmid pPCVTDEAC1, fig. 3). Transformację tytoniu przeprowadzono jak opisano w Przykładzie 4.
Przy ekspresji deacetylazy specyficznej w stosunku do tapetum powinny po traktowaniu pączków kwiatów N-acetylo-PPT powstawać męskosterylne kwiaty. Przekształcenie pochodnej PPT w czynny związek herbicydu fosfinotricynę prowadzi do selektywnego uszkodzenia tkanki tapetum, przez co zahamowane jest wytwarzanie funkcjonalnego pyłku.
PL 193 489 B1
Tylko jeden bok kwiatostanu (całego obszaru tworzących się pąków kwiatowych) traktowano N-acetylo-PPT, druga połowa kwiatostanów nie była traktowana aby upewnić się, że obserwowane zjawiska nie są wynikiem zniekształceń roślin. Traktowanie przeprowadzano w momencie, w którym pojedyncze pąki nie były większe od 5 mM (faza czynna promotora tapetum). Transformanty tytoniu jak i szereg roślin kontrolnych NT Sam NN w ciągu tygodnia poddawano 3x działaniu 0,2% N-acetylo-D,L-PPT (7,5 mM)/0,1% Genapol (środek sieciujący). Po zakwitnięciu pąków (ok. 9-11 dni po zakończeniu traktowania) badano rośliny pod kątem występowania męskosterylnych kwiatów.
Równocześnie badano specyficzną w stosunku do N-acetylo-PPT aktywność deacetylazy w niedojrzałych pylnikach transformantów jak i w roślinach kontrolnych. W tym celu niedojrzałe pylniki preparowano z pąków kwiatowych o wielkości około 5 mM i inkubowano przez noc każdy w 50 mM roztworze [ C]-N-acetylo-L-PPT. Następnie pylniki płukano w 1 x 500 ml buforu PBS i homogenizowano w 50 ml buforu PBS. Po odwirowaniu resztek komórek supernatanty zatężono w Speed-Vac a osady podnoszono w 30 ml buforu HPLC (5 mM KH2PO4, 10% metanol, pH = 1,92). Próbki analizowano w HPLC jak opisano powyżej pod kątem wytwarzania [ C]-L-PPT.
Wyniki traktowania kwiatów i testu aktywności podano dla wybranych roślin w tabeli 5. U prawie wszystkich transformantów udało się stwierdzić obecność specyficznej w stosunku do pylników aktywności deacetylazy. W 3 transformantach ze strony traktowanej N-acetylo-PPT w gronach kwiatów kwiaty męskie stawały się męskosterylne tzn. nie tworzył się pyłek lub też obserwowano kwiaty, o znacznie zmniejszonej ilości pyłku. Działanie na nowe, dojrzewające pąki pozostawało przez okres około trzech tygodni. Nietraktowane kwiaty transformantów jak i traktowane kwiaty roślin kontrolnych były we wszystkich wypadkach płodne. W męskosterylnych kwiatach nie stwierdzono powstawania plemników. Było jednak możliwe zapłodnienie krzyżowe męskosterylnych kwiatów, przez co wykazano, że żeńskie części kwiatów w pełni zachowały swoją funkcjonalność (Nacken i wsp., 1991, Mol. Gen. Genet. 229:129-136).
Tabel a 5
Indukowana męska sterylność u roślin pPCVTDEAC1 przez traktowanie kwiatów N-acetylo-PPT i aktywność deacetylazy w pylnikach
| Roślina | Liczba kwiatów sterylnych lub o kwiatach Aktywność deacetylazy ze zmniejszoną ilością pyłku w pylnikach [% L-PPT11 | ||
| traktowane | nietraktowane | ||
| Kontrola | 0 | 0 | 0 |
| pPCVT14 | 18 | 0 | 70,0 |
| pPCVT15 | 0 | 0 | 13,8 |
| pPCVT16 | 10 | 0 | 20,4 |
1W stosunku do wprowadzonej aktywności ( [14C]-N-acetylo-L-PPT)
P r z y k ł a d 6: Izolacja i identyfikacja deacetylazy ze specyficznością w stosunku do N-acetylofosfinotricyny z Comamonas acidovorans
Próbkę gleby z Bangkoku rozprowadzono w pożywce z soli mineralnych (0,5 g K2HPO4, 0,2 g MgSO4, 2 g (NH4)2SO4, 0,01 g FeSO4 w 980 ml H2O), która zawierała chitynę (2 g/l) jako jedyne źródło węgla i następnie inkubowano w 30°C przez 48 godzin. Następnie przeprowadzono przeszczepienie do świeżej pożywki z solami mineralnymi i po kolejnych 48 godzinach inkubacji wysiewano szeregi rozcieńczeń na pożywce LB (Miller, Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory Press).
Wśród rosnących kolonii znalazły się też kolonie szczepu bakterii, który się wyróżniał bardzo dobrym wykorzystaniem N-acetylo-glutaminianu jako jedynego źródła węgla (wysianie na pożywkę minimalną z solami mineralnymi z N-acetyloglutaminianem (2 g/l, dodawać jako sterylizowany przez filtrowanie roztwór do autoklawowanej pożywki minimalnej z 14 g/l agaru) prowadzi w czasie inkubacji przez 12 godzin w 30°C do tworzenia wyraźnie widocznych kolonii). Deacetylację N-acetylo-PPT wykazano jak opisano powyżej. Szczep określony w laboratorium jako B6 został zidentyfikowany przez DSM jako Comamonas acidovorans (DSM 11070).
PL 193 489 B1
P r z y k ł a d 7: Klonowanie genu deacetylazy Comamonas acidovorans
Izolowano całkowity DNA z Comamonas acidovorans, strawiono EcoRI i zligowano ze strawionym EcoRI DNA wektora pA-CYC184 (Cang i Cohen, J. Bacteriol. 134, 1141-1156). Mieszaninę ligacyjną wykorzystano do elektroporacji mutanta argE E. coli XSID2 (Mountain i wsp., 1984, Mol. Gen. Genet. 187, 82-89). Poprzez selekcję na komplementację auksotrofa argininowego udało się wyizolować fragment EcoRI o wielkości 8,9 kb z genomu C. acidovorans, który wystarcza do komplementacji. Poprzez subklonowanie możliwe było ograniczenie obszaru komplementującego do wielkości 1,4 kb. Leży on w określonej jako pGK83 pochodnej wektora do sekwencjonowania pSVB30 (Arnold i Puehler, 1989, Gene 70, 172-173).
P r z y k ł a d 8: Sekwencjonowanie genu deacetylazy z Comamonas acidovorans
Komplementujący fragment 1,4 kb (1387 par zasad) zsekwencjonowano całkowicie z obu nici stosując znane metody.
P r z y k ł a d 9. Analiza obszaru kodującego i porównanie homologii sekwencjonowanego obszaru
Analiza obszaru kodującego pokazała otwartą ramkę odczytu od pozycji 1 do 1206 (SEK NR ID 3), która koduje białko o wielkości 402 aminokwasów (SEK NR ID 4).
Porównanie homologii ze znanymi genami z baz danych wykazuje wyraźną homologię do N-acyloamidohydrolazy z Bacillus stearothermophilus (ama, Sakanyan i wsp., 1993, Appl. Environ. Microbiol. 59, 3878-3888) i hydrolazy hipuranowej z Campylobacter jejuni (dotychczas nieopublikowanej). W porównaniu białek hydrolaza hipuranowa wykazuje 43% identycznych aminokwasów (tabela 6). Ponadto gen wykazuje na poziomie DNA i białka bardzo wyraźną homologię do genu deacetylazy wyizolowanego ze Stenotrophomonas sp. W oparciu o określenie genu ze Stenotrophomonas gen wyizolowany z C. acidovorans określono jako deac2.
T ab ela 6
Porównanie homologii ze znanymi sekwencjami
| Gen | Organizm | Funkcja | Identyczne aminokwasy | Konserwatywne aminokwasy |
| n. n. | Campylobacter jejuni | hydrolaza hipuranowa (383 AS) | 43,1% | 60,0% |
| deac2 | Bacillus stearothermophilus | N-acylo-L-amidohydrolaza | 37,0% | 49,5% |
P r z y k ł a d 10. Nadekspresja genu deac2 z Comamonas acidovorans - konstrukty roślinne
W celu analizy specyficzności substratowej produktu genu deac2 z Comamonas acidovorans uzyskano jego nadekspresję. W tym celu wklonowano gen do wektora o wysokiej liczbie kopii pod kontrolą promotora lacz. Jednak ekspresja była ograniczona przez równoczesną, zachodzącą w innej ramce odczytu translację lacz-alfa. Dlatego przerwano ją przez wprowadzenie kodonu stop, aby wektor pGK18 umożliwiał nadekspresję genu deac2, na którą nie miała wpływu ekspresja genu lacz. Można było wykazać także fenotypowo, że ten konstrukt wykazuje wyraźnie silniejszą komplementację mutanta argE E. coli.
W celu transformacji roślin gen struktury deac2 przeklonowano z zastosowaniem wektora binarnego pROKl (Baulcombe i wsp. 1986, Nature, 321:446-449) za konstytutywnym promotorem 35S lub specyficznym w stosunku do tapetum promotorem TA-29. Uzyskany plazmid ekspresyjny pGK83 i pMF9 przedstawiono na Figurach.
P r z y k ł a d 11: Badanie specyficzności substratowej produktu genu deac2 z Comamonas acidovorans
W celu zbadania specyficzności substratowej produktu genu deac2 z Comamonas acidovorans zastosowano komórki szczepu E. coli XL1-Blue permeabilizowane za pomocą toluenu/etanolu z i bez wektora pGK81. Permeabilizowane komórki inkubowano przez 3 godziny w 30°C z różnymi N-acetylowanymi aminokwasami (stężenie końcowe 25 mM) i badano supernatanty za pomocą analizatora aminokwasów. Okazało się, że ponad 20% dostarczonej N-acetyloornityny było przekształcane. Także dla N-acetylofosfinotricyny dała się wykazać wzrastająca deacetylacja do fosfinotricyny zależna od stężenia wprowadzonej N-acetylofosfinotricyny (Tabela 7).
PL 193 489 B1
| N-acetyloornityna (25 mM) | N-acetylofenyloalanina (25 mM) | N-acetylofosfinotricyna | ||
| (12,5 mM) | (25 mM) | (50 mM) | ||
| 5860 nM | <5 nM | 8,0 nM | 20,0 nm | 44,7 nM |
Podano stężenia wprowadzonych N-acetyloaminokwasów i powstałych przez acetylację aminokwasów
Figura 1. Mapa restrykcyjna fragmentu 2,5 kb SalI/BamHI, który jest odpowiedzialny za specyficzną aktywność deacetylazy N-acetylo-PPT. Pozycja i orientacja genu struktury deac1 są zaznaczone za pomocą strzałki (bp - pary zasad)
Figura 2 Mapa plazmidu pPVCKDEAC1 do konstytutywnej ekspresji genu deac u roślin
Figura 3 Mapa plazmidu pPCVTDEAC1 do specyficznej w stosunku do tapeteum ekspresji genu deac u roślin
Figura 4 Mapa plazmidu pGK83
Figura 5 Mapa plazmidu pMF9
Protokół sekwencji (1) Informacja ogólna (i) ZGŁASZAJĄCY (A) NAZWA: Hoechst Schering AgrEvo GmbH (B) ULICA:(C) MIEJSCE: Frankfurt (D) LAND: (E) KRAJ: Niemcy (F) KOD POCZTOWY: 65926 (G) TELEFON: 069-305-5596 (H) TELEFAKS: (+69) 357175 (I) TELEX:(ii) TYTUŁ ZGŁOSZENIA: Nowe geny kodujące deacetylazy aminokwasów ze specyficznością w stosunku do N-acetylo-L-fosfinotricyny, ich izolacja i zastosowanie (iii) LICZBA SEKWENCJI: 4 (iv) FORMA CZYTELNA KOMPUTEROWO (A) NOŚNIK DANYCH: dyskietka (B) KOMPUTER: Kompatybilny z IBM PC (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patentin Release #1.0, wersja #1.25 (EPA) (2) INFORMACJA O SEK NR ID 1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI (A) DŁUGOŚĆ: 1365 par zasad (B) RODZAJ: Kwas nukleinowy (C) NIĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: DNA (genomowy) (ix) CECHY CHARAKTERYSTYCZNE:
(A) NAZWA/KLUCZ: egzon (B) POŁOŻENIE: 1...1365 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEK NR ID 1:
PL 193 489 B1
ATGATCCGCA AGACCGTTCT GTTGACTGCG CTGTCCTGCG CCCTGGCCTC CGCGACAGCC 60
ACCGCCGCCG AAGGCCAGCG GCCCGAGGTG GAGGCCGCCG CCGCGCGCCT GCAGCGGCAG 120
GTGGTGGAGT GGCGCCGCGA TTTCCACCAG CATCCGGAGC TGTCCAACCG CGAGGTGCGC IBO
ACCGCCGCCA AGGTGGCCGA GCGCCTGCGC GCGATGGGCC TGCAACCGCA GACCGGCGTC 240
GCCGTGCACG GCGTGGTGGC GATCATCAAG GGCGCCCTGC CGGGGCCGAA GATCGCCCTG 300
CGCGCGGACA TGGACGCGCT GCCCGGTACC GGALCCGACCC GGCTGCCCGT CGCCTCCACC 360
GCCACGGCCG AGGACCGCCG OGACJ^CCGO GAGGGTACGC CCGGCΊ'GCCG COfcCGACGCC 420
CATACCGCCA CCCTCCTCCG CGT<T3CCGAC GCGCCGGGTA CCACGCGCCA CACGCTGCCC 480
AGCGAAGTAA GCCGCATCTG CCAGCCCC3CC GACCAACGCC GC^G^G^ CCACCACCGC 54 0
CCTCCCCAGC GCATCCTCCA GGAGCGACTG TGGAAGGACA TGACCGCGGA CCGCCAGGGG 600
| CACCGCCACA | GCGTCTCCCC | CCTCCAGACC | CCGCAGATCG | CCGGACCCGG | CGGCCCCCGC | 660 |
| CTCCCCACCT | CCCACCACGG | TOCCA^ACC | CGCACCCGCC | GCCAGACCCA | TCCCGCCGCC | 720 |
| CCCGCCACCC | GCAGCGAGCC | GAT^TCG^ | ^CT^GA^ | GCAGCACCAC | CCCGCACACC | 780 |
| AT^TCM^ | GCCGCCCCCA | CCTCTCCCAG | CAGCCCGCCC | GCCGACCCTT | CGACCCCATC | 840 |
| CACCCCCCCA | GCCCCTCCAA | CATCATCCCC | GACTCCCGGG | CCAGGAGCCG | CAC^TC^O | 900 |
| CCCACAGCCG | CACCCAGAGC | TGCCCCCACT | GCCACCCCCG | CCCCCACCCC | 960 | |
| ACCCCGACCG | CAGCACGCCA | CCGCCACC^C | CGACATCTAC | CACCAACACC | GC^Crc^C | 1020 |
| □AG^TCKAC | GACCCCGCAC | GCCCCCCGCC | CAraeT^^ | CCCCTCCCCG | C^T^T^G | 1080 |
| CCACGCCACC | CGCGACACGC | CATCCCCTCG | ACCCACGGCG | CGCGCGCGCC | 1140 | |
| ^A^A^TG | CCCACCAGAT | GCGGCGTCAG | CGCCGCCACC | CCCCCGGACC | T^ACCC^C | 1200 |
| GA^GC^CC | ^CA^CA^ | CGCCGAACGG | CCGCCTCGAC | CACACCCCCC | GCCACCGCAA | 1260 |
CCT^^G^ CGCCTCCCCG TCGCCCGACA CTATO^OAC GGGACCACGG CGCCGGGACC 1320
CCGCCCAAGC TCG^^^C GAGCCGGACG CAAGACCGCC CATGA
1365
PL 193 489 Β1 (2) INFORMACJA O SEK NR ID 2 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI (A) DŁUGOŚĆ: 454 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwasy (C) NIĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (ix) CECHY CHARAKTERYSTYCZNE:
(A) NAZWA/KLUCZ: białko (B) POŁOŻENIE: 1...454 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEK NR ID 2:
| Met Ile 1 | Arg | Lys Thr Val Leu 5 | Leu Thr Ala Leu Ser 10 | Cys | Ala | Leu 15 | Ala | ||||||||
| Ser | Ala | Thr | Ala | Thr | Ala | Ala | Glu | Gly | Gln | Arg | Pro | Glu | Val | Glu | Ala |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ala | Ala | Ala | Arg | Leu | Gln | Arg | Gln | Val | Val | Glu | Trp | Arg | Arg | Asp | Phe |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| His | Gln | His | Pro | Glu | Leu | Ser | Asn | Arg | Glu | Val | Arg | Thr | Ala | Ala | Lys |
| 50 | 55 | 60 | • | ||||||||||||
| Val | Ala | Glu | Arg | Leu | Arg | Ala | Met | Gly | Leu | Gln | Pro | Gln | Thr | Gly | Val |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ala | Val | His | Gly | Val | Val | Ala | Ile | Ile | Lys | Gly | Ala | Leu | Pro | Gly | Pro |
90 95
Lys Ile Ala Leu Arg Ala Asp Met Asp Ala Leu Pro Val Thr Glu Gln 100 105 110
PL 193 489 B1
| Thr | Gly | Leu Pro | » Phe | Ala | Ser | Thr | Ala | Thr | Ala | Glu | Tyr | Arg | Gly Glu | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||
| Lys | Val | Gly Val | Met | His | Ala | Cys | Gly | His | Asp | Ala | His | Thr | Ala | Thr |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||
| Leu | Leu | Gly Val | Ala | Asp | Ala | Leu | Val | Ala | Met | Arg | Asp | Thr | Leu | Pro |
| 145 | 150 | 155 | · | 160 | ||||||||||
| Gly | Glu | Val Met | Leu | Ile | Phe | Gin | Pro | Ala | Glu | Glu | Gly | Ala | Pro | Pro |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||
| Pro | Glu | Gin Gly | Gly | Ala | Glu | Leu | Met | Leu | Lys | Glu | Gly | Leu | Phe | Lys |
| ISO | 185 | 190 | ||||||||||||
| Olu | Phe | Lys Pro | Glu | Ala | Val | Pha | Gly . | Leu | His | Val | Phe | Ser | Ser | Val |
195 200 205
Gin Ala Gly Gin He Ala Val Arg Gly Gly Pro Leu Met Ala Ala Ser 210 215 220
| Asp Arg Phe 225 | Ala | Ile Thr 230 | Val Asn Gly Arg | Gin Thr 235 | His | Gly Ser Ala 240 | |||||||||
| Pro | Trp | Asn | Gly | Ile | Asp | Pro | Ile | Val | Ala | Ala | Ser | Asp | Leu | Ile | Gly |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Thr | Ala | Gin | Thr | Ile | Val | Ser | Arg | Arg | Ala | Asn | Leu | Ser | Lys | Gin | Pro |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ala | Val | Leu | Thr | phe | Gly | Ala | Ile | Ly3 | Gly | Gly | Ile | Arg | Tyr | Asn | Ile |
| 275 | 280 | 295 | |||||||||||||
| Ile | Pro | Asp | Ser | Val | GlU | Met | Val | Gly | Thr | Ile | Arg | Thr | Phe | Asp | Pro |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Asp | Met | Arg | Lys | Gin | Ile | Phe | Ala | Asp | Leu | Arg | Asn | Val | Ala | Glu | His |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Thr | Ala | Ala | Ala | Trp | Arg | His | Arg | His | His | Arg | His | Leu | Arg | Glu | Gly |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Arg | Gin | Pro | Gly | His | Gly | Gin | Arg | Pro | Gly . | Ala , | Asp | Arg | Ala | His | Ala |
| 340 | 345 | 350 |
PL 193 489 B1
Ala Gln Pro Ala Gly Arg Gly Arg Gln Gly Gln Arg Leu Arg ALa Ala
355 360 365
| Ala | Ala | Asp | Gly | Leu | Gly | Gly | Leu | Leu | Ala | Val | Cys | Ala Ala | Gly | Ala |
| 370 | 375 | 380 | ||||||||||||
| Gly Asp | Val | Leu | Leu | Arg | Arg | Leu | His | Arg | Arg | Gly | His Arg | Pro | Gly | |
| 385 | 390 | 395 | 400 | |||||||||||
| His | Arg | Ala | Gln | Gln | Pro | Leu | ALa | Glu | Val | Pro | Ala | Arg Arg | Glu | Gly |
| 405 | 410 | 415 | ||||||||||||
| Ala | Gly | Arg | Gly | Pro | Ala | Arg | ALa | Ala | Ala | Gly | Val | ALa Gly | Leu | Ser |
| 420 | 425 | 430 | ||||||||||||
| Ala | Arg | Trp | Gln | Gly | Gly | V^i | Thr | Pro | Ala | Ser | Ile | Val Pro | Pro | Ile |
435 440 445
Arg Lys Lys Asp Leu Pro.
450 (2) INFORMACJA O SEK NR ID 3 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI (A) DŁUGOŚĆ: 1273 par zasad (B) RODZAJ: Kwas nukleinowy (C) NIĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: DNA (genomowy) (ix) CECHY CHARAKTERYSTYCZNE:
(A) NAZWA/KLUCZ: egzon (B) POŁOŻENIE: 1...1273 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEK NR ID 3:
atggccttgc tgcaggagct gctggacagc GCACCCGAGA TCACCGCGCT GCGCCGCGAC 60
ATACATGCCC ATCCCGAACT GTGCTTCGAG GAACTGCGCA CCGCCGACCT GGTGGCCCGG 120
CAGCTCGAAG GCTGGGGCAT TGCCGTGCAC CGCGGCCTGG GCCGCACGGG CGTGGTGGGC
180
PL 193 489 Β1
ACCATCCACG GCCGTGACGG CGGCGCCAGC GGCCGGGCCA TCGGGCTGCG CGCCGACATG 240
GACGCCCTGC CCATGCAGGA GTTCAACACC TTCGAGCACG CCAGCCGCCA CGCCGGAAAA 300
ATGCATGCCT GCGGACATGA CGGCCATGTC GCCATGCTGC TGGCCGCCGC GCAGTACCTG 360
GCCGTGCACC GCGACAGCTT CGAGGGCACG GTGCACCTGA TCTTCCAGCC GGCCGAAGAG 420
GGCGGCGGCG GGGCGCGCGA GATGGTCGAG GACGGCCTGT TCACCCAGTT CCCCATGCAG 480
GCCGTGTTCG GCATGCACAA CTGGCCGGGC ATGAAGGCCG GCACCATGCC GTGGGCCCCG 540
GGCCCGGCCA TGGCGTCGAG CAACGAGTTC CGCATCGTCG TGCGCGGCAA GGGCGGCCAC 600
GCGGCCATGC CGCACATGGT GATCGACCCG CTGCCCGTGG CGGCCCAGCT CATCCTGGGC 660
CTGCAGACCA TCGTCAGCCG CAACGTCAAG CCCATCGAGG CGGGCGTGGT CTCGGTCACC 720
ATGGTCCATG CGGGGGAGGC CACGAACGTG GTGCCCGACA GCGTGGAGCT GCAGGGCACG 780
GTGCGCACCT TCACGCTGGA GGTGCTGGAC CTGATCGAGC GGCGCATGAA GGCCCTGGCC 840
GAGAGCATCT GCGCGGCGCA TGACACGCGC TGCGAGTTCG AGTTCGTGCG CAACTACCCG 900
CCCACCATCA ACTCCGCCCC GGAGGCCGAG TTCGCACGCC GCGTCATGGC CGAGGTCGTG 960
GGCGAGGCCA ACGTGCTGCC CCAGGAGCCG TCCATGGGCG CCGAGGACTT CGCCTTCATG 1020
CTGCTGGAAA AGCCCGGCGC CTACTGCTTC ATCGCCAATG GCGACGGCGA CCACCGCGCC 1080
ATCGGCCACG GCGGCGGTCC CTGCACGCTG CACAACCCCA GCTACGACTT CAACGACCAG 1140
CTGATTCCGC AGGGCGCCAC GTTCTGGGTG AAGCTGGCCC AGCGCTGGCT GAGCGAGCCC 1200
ACGCGCTGAG GCCTTGCGGG GTCCGGCCGA CACCGGCATG TCACACACCG CACCTAGCAT 1260
GCGGTCCCTG TGA 1273 (2) INFORMACJA O SEK NR ID 4 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI (A) DŁUGOŚĆ: 402 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwasy (C) NIĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko
PL 193 489 B1 (ix) CECHY CHARAKTERYSTYCZNE:
(A) NAZWA/KLUCZ: białko (B) POŁOŻENIE: 1...402 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEK NR ID 4:
| Met | Ala | Leu | Leu | Gln | Glu | Leu | Leu | Asp | Ser | Ala | Pro | Glu | Ile | Thr | Ala |
| 1 | 5 | 10 | 15' | ||||||||||||
| Leu | Arg | Arg | Asp | . He | His | Ala | His | Pro | Glu | Leu | Cys | Phe | Glu | Glu | Leu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Thr | Ala | Asp | Leu | Val | Ala | Arg | Gln | Leu | Glu | Gly | Trp | Gly | Ile | Ala |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Val | His | Arg | Gly | Leu | Gly | Arg | Thr | Gly | Val | Val | Gly | Thr | Ile | His | Gly |
55 60
| Arg | Asp | Gly | Gly | Ala | Ser | Gly | Arg | Ala | Ile | Gly | Leu | Arg | Ala | Asp | Met |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Asp | Ala | Leu | Pro | Met | Gln | Glu | Phe | Asn | Thr | Phe | Glu | His | Ala | Ser | Arg |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Ala | Gly | Lys | Met | His | Ala | Cys | Gly | His | Asp | Gly | His | Val | Ala | Met |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Leu | Leu | Ala | Ala | Ala | Gln | Tyr | Leu | Ala | Val | His | Arg | Asp | Ser | Phe | Glu |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Gly | Thr | Val | His | Leu | Ile | Phe | Gln | Pro | Ala | Glu | Glu | Gly | Gly | Gly | Gly |
130 135 140
PL 193 489 Β1
| Ala 145 | Arg | 1 Glu Met | : Val | Glu 150 | Asp | Gly Leu | i Phe | Thr 155 | Gin | i Phe | t Pro Met | Gin 160 | |||
| Ala | Val | Phe | Gly | Met 165 | His | Asn | Trp | Pro | Gly 170 | Met | Lys | Ala | Gly Thr 175 | Met | |
| Pro | Trp | Ala | Pro 180 | Gly | Pro | Ala | Met | Ala 185 | Ser | Ser | Asn | Glu | Phe 190 | Arg | Ile |
| Val | val | Arg 195 | Gly | Lys | Gly | Gly | His 200 | Ala | Ala | Met | Pro | His 205 | Met | Val | Ile |
| Asp | Pro 210 | Leu | Pro | Val | Ala | Ala 215 | Gin | Leu | Ile | Leu | Gly 220 | Leu | Gin | Thr | Ile |
| Val 225 | Ser | Arg | Asn | Val | Lys 230 | Pro | Ile | Glu | Ala | Gly 235 | Val | Val | Ser | Val | Thr 240 |
| Mec | Val | His | Ala | Gly 245 | Glu | Ala | Thr | Asn | Val 250 | Val | Pro | ASP | Ser | Val 255 | Glu |
| Leu | Gin | Gly | Thr | Val . | Arg | Thr | Phe | Thr | Leu 1 | Glu | Val | Leu | Asp | Leu | Ile |
260 265 270
Glu Arg Arg Met Lys Ala Leu Ala Glu Ser Ile Cys Ala Ala His Asp 275 260 285
Thr Arg Cys Glu Phe Glu Phe Val Arg Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Asn 290 295 300
Ser Ala Pro Glu Ala Glu Phe Ala Arg Arg Val Met Ala Glu Val Val
30S 310 315 320
Gly Glu Ala Asn Val Leu Pro Gin Glu Pro Ser Met Gly Ala Glu Asp
325 330 335
Phe Ala Phe Met Leu Leu Glu Lys Pro Gly Ala Tyr Cys Phe Ile Ala 340 345 350
Asn Gly Asp Gly Asp His Arg Ala Ile Gly His Gly Gly Gly Pro Cys 355 360 365
Thr Leu His Asn Pro Ser Tyr Asp Phe Asn Asp Gin Leu Ile Pro Gin 370 375 380
Gly Ala Thr Phe Trp Val Lys Leu Ala Gin Arg Trp Leu Ser Glu Pro 305 390 395
Thr Arg
Claims (9)
- Zastrzeżenia patentowe1. Cząsteczka DNA kodująca białko o aktywności biologicznej deacetylazy N-acetylofosfinotricyny, która jest wyizolowana z Comamonas acidovorans, zdeponowanego pod numerem DSM 11070.
- 2. CząsteeczaDDA wedłuu zastrz.1 , z znmieenntym, że koddjebiałkoobbjmująccsekwencję aminokwasową o Id. Sekw. Nr 4 lub fragmenty tego białka posiadające aktywność biologiczną deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny.
- 3. CząsteezaoDDA wedłuugastrz. . a Ibb2 ^znmieenntym, żee dbjmujen nuieetyd o Id. Seek. Nr 3 lub sekwencję, która różni się od tej sekwencji ze względu na degenerację kodu genetycznego.
- 4. Białko kodowane przez cząsteczkę DNA określoną w zastrz. 3.
- 5. Mikroorganizm Comamonas acidovorans zdeponowany pod numerem DSM 11070.
- 6. Seoisb wetwerzasia roślin mająccyh wwbiórczo części, znnmieenn tym, że obejmuje:a) transformowanie komórek roślinnych genem deacetylazy N-acetylo-fosfinotricyny obejmującym cząsteczkę DNA określoną w zaostrz. 3, pod kontrolą promotora kierującego ekspresją w określonych częściach roślinny, ib) regenerowanie roślin z komórek roślinnych otrzymanych w etapie (a), przy czym rośliny te mają części, które mogą być wybiórczo zniszczone przez traktowanie N-acetylo-fosfinotricyną (N-acetyl-PPT).
- 7. Spooób we^dłł^u] 6, znamienny tym, żee speccficznc eks^re^j genu deacejylasaN-acetylo-fosfinotricyny jest pod kontrolą promotora specyficznego dla warstwy wyścielającej.
- 8. Seodebwedług zastrz.7,zznmieenytym, że promutorseoecbczacdlawełstwewebcielałącej jest promotorem genu tap1 z Antirrhinum majus.
- 9. Rodlinctrasnefrmuwescgencm doeacjylasaN-aacjyloOΌdSnctriccbcodejmująccm cząsteezkę DNA określoną w zastrz. 3, pod kontrolą promotora kierującego ekspresją w określonych częściach rośliny, przy czym te określone części mogą być wybiórczo zniszczone przez traktowanie N-acetylofosfinotricync (N-acetyl-PPT).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19652284A DE19652284A1 (de) | 1996-12-16 | 1996-12-16 | Neue Gene codierend für Aminosäure-Deacetylasen mit Spezifität für N-Acetyl-L-Phosphinothricin, ihre Isolierung und Verwendung |
| PCT/EP1997/006755 WO1998027201A2 (de) | 1996-12-16 | 1997-12-03 | Gene codierend für aminosäure-deacetylasen mit spezifität für n-acetyl-l-phosphinothricin, ihre isolierung und verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL193489B1 true PL193489B1 (pl) | 2007-02-28 |
Family
ID=7814866
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97334530A PL193522B1 (pl) | 1996-12-16 | 1997-12-03 | Cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Stenotrophomonas sp., sposób wytwarzania roślin oraz rośliny transformowane genem deacetylazy N-acetylofosfinotricyny |
| PL97377650A PL193489B1 (pl) | 1996-12-16 | 1997-12-03 | Cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Comamonas acidovorans, sposób wytwarzania roślin oraz roślinytransformowane genem deacetylazy N-acetylofosfinotricyny |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97334530A PL193522B1 (pl) | 1996-12-16 | 1997-12-03 | Cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Stenotrophomonas sp., sposób wytwarzania roślin oraz rośliny transformowane genem deacetylazy N-acetylofosfinotricyny |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6177616B1 (pl) |
| EP (1) | EP0942965B1 (pl) |
| JP (1) | JP2001506130A (pl) |
| CN (1) | CN1171993C (pl) |
| AT (1) | ATE377072T1 (pl) |
| AU (1) | AU727831B2 (pl) |
| BR (1) | BR9714513A (pl) |
| CA (1) | CA2275134A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ216699A3 (pl) |
| DE (2) | DE19652284A1 (pl) |
| ES (1) | ES2296318T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0000396A3 (pl) |
| NZ (1) | NZ335852A (pl) |
| PL (2) | PL193522B1 (pl) |
| RU (1) | RU2205219C2 (pl) |
| TR (1) | TR199901332T2 (pl) |
| WO (1) | WO1998027201A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA9711146B (pl) |
Families Citing this family (118)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19933362A1 (de) * | 1999-07-20 | 2001-02-08 | Aventis Cropscience Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren aus ihren racemischen N-Acetyl-D,L-Derivaten durch enzymatische Racemat-Spaltung mittels isolierter, rekombinanter Enzyme |
| US6384304B1 (en) * | 1999-10-15 | 2002-05-07 | Plant Genetic Systems N.V. | Conditional sterility in wheat |
| AU2004260931B9 (en) | 2003-04-29 | 2012-01-19 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Novel glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes |
| WO2002072804A2 (en) * | 2001-03-12 | 2002-09-19 | Bayer Bioscience N.V. | Novel genes for conditional cell ablation |
| EP1258531A1 (en) | 2001-05-14 | 2002-11-20 | Givaudan SA | Compounds and methods for inhibiting axillary malodour |
| AU2002315526A1 (en) | 2001-07-06 | 2003-01-21 | Monsanto Technology Llc | Methods for enhancing segregation of transgenes in plants and compositions thereof |
| US7132590B2 (en) * | 2001-12-18 | 2006-11-07 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Methods of making male-sterile plants by underexpressing allene oxide synthase |
| WO2005001101A1 (en) | 2003-06-03 | 2005-01-06 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Conditional sterility in plants |
| AU2004256124B2 (en) * | 2003-07-02 | 2011-04-28 | Corus Pharma, Inc. | Aztreonam L-lysine and methods for the preparation thereof |
| US7491811B2 (en) | 2004-01-15 | 2009-02-17 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Repressor-mediated tissue-specific gene expression in plants |
| AR059724A1 (es) | 2006-03-02 | 2008-04-23 | Athenix Corp | Metodos y composiciones para mejorar la actividad enzimatica en plantas transgenicas |
| US7951995B2 (en) | 2006-06-28 | 2011-05-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof |
| US8097712B2 (en) | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
| US8697941B2 (en) | 2008-07-23 | 2014-04-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Molecular markers linked to PPO inhibitor tolerance in soybeans |
| US8748695B2 (en) * | 2008-07-23 | 2014-06-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Molecular markers linked to PPO inhibitor tolerance in soybeans |
| MX2011003266A (es) | 2008-09-26 | 2011-07-20 | Basf Agrochemical Products Bv | Mutantes de acetohidroxiacido sintasa resistentes a herbicidas y metodos de uso. |
| WO2010147825A1 (en) | 2009-06-09 | 2010-12-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Early endosperm promoter and methods of use |
| US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
| MX2012004819A (es) | 2009-10-26 | 2012-06-25 | Pioneer Hi Bred Int | Promotor especifico de ovulo somatico y metodos de uso. |
| BR112012018618A2 (pt) * | 2010-01-26 | 2017-01-10 | Pioneer Hi Bred Int | método para seleção de uma planta ou germoplasma apresentando tolerãncia, tolerãncia aumentada, susceptibilidade, ou susceptibilidade aumentada a um ou mais herbicidas, planta, kit para seleção de pelo menos uma planta de soja, método de triagem de uma soja, método para controlar de modo seletivo plantas daninhas, método para triar de modo seletivo plantas de soja para tolerância a um ou mais herbicidas |
| US20130047297A1 (en) | 2010-03-08 | 2013-02-21 | Robert D. Sammons | Polynucleotide molecules for gene regulation in plants |
| US8993837B2 (en) | 2010-08-13 | 2015-03-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Chimeric promoters and methods of use |
| WO2012071040A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Brassica gat event dp-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
| WO2012071039A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Pioner Hi-Bred International, Inc. | Brassica gat event dp-061061-7 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
| TWI667347B (zh) | 2010-12-15 | 2019-08-01 | 瑞士商先正達合夥公司 | 大豆品種ｓｙｈｔ０ｈ２及偵測其之組合物及方法 |
| EP2755466A4 (en) | 2011-09-13 | 2015-04-15 | Monsanto Technology Llc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR CONTROLLING WEEDS |
| UA115535C2 (uk) | 2011-09-13 | 2017-11-27 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
| MX362812B (es) | 2011-09-13 | 2019-02-13 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para el control de malezas. |
| CA2848669A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control targeting epsps |
| WO2013040033A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| US10760086B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-09-01 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| CA2848371A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology, Llc | Method and composition for weed control comprising topical application_of als polynucleotide |
| US10806146B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-10-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| EP2756083B1 (en) | 2011-09-13 | 2020-08-19 | Monsanto Technology LLC | Methods and compositions for weed control |
| US9840715B1 (en) | 2011-09-13 | 2017-12-12 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants |
| US10829828B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-11-10 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| UA116092C2 (uk) | 2011-09-13 | 2018-02-12 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
| US9920326B1 (en) | 2011-09-14 | 2018-03-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for increasing invertase activity in plants |
| US9204603B2 (en) | 2011-12-21 | 2015-12-08 | The Curators Of The University Of Missouri | Soybean variety S05-11482 |
| US20130167262A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | The Curators Of The University Of Missouri | Soybean variety s05-11268 |
| US9006515B2 (en) | 2012-01-06 | 2015-04-14 | Pioneer Hi Bred International Inc | Pollen preferred promoters and methods of use |
| EP2800816A1 (en) | 2012-01-06 | 2014-11-12 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Ovule specific promoter and methods of use |
| AU2013209738A1 (en) | 2012-01-17 | 2014-08-07 | Australian Center For Plant Functional Genomics, Pty, Ltd | Plant transcription factors, promoters and uses thereof |
| WO2013138309A1 (en) | 2012-03-13 | 2013-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genetic reduction of male fertility in plants |
| US9783814B2 (en) | 2012-03-13 | 2017-10-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genetic reduction of male fertility in plants |
| CN104619843B (zh) | 2012-05-24 | 2020-03-06 | A.B.种子有限公司 | 用于使基因表达沉默的组合物和方法 |
| BR112014031260A2 (pt) | 2012-06-15 | 2019-08-20 | Du Pont | métodos e composições que envolvem variantes de als com preferência de substrato nativo |
| AU2012208997B1 (en) | 2012-07-30 | 2013-09-19 | Dlf Usa Inc. | An alfalfa variety named magnum salt |
| CA2887571A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Guard cell promoters and uses thereof |
| EP2908620A4 (en) | 2012-10-18 | 2016-07-27 | Monsanto Technology Llc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR CONTROLLING PHYTOPARASITES |
| US20140173775A1 (en) | 2012-12-13 | 2014-06-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for producing and selecting transgenic plants |
| WO2014100525A2 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for auxin-analog conjugation |
| US10683505B2 (en) | 2013-01-01 | 2020-06-16 | Monsanto Technology Llc | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
| CA2896762A1 (en) | 2013-01-01 | 2014-07-10 | A.B. Seeds Ltd. | Methods of introducing dsrna to plant seeds for modulating gene expression |
| US10000767B2 (en) | 2013-01-28 | 2018-06-19 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for plant pest control |
| MX2015012334A (es) | 2013-03-13 | 2016-02-05 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para el control de malezas. |
| WO2014164761A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-09 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| CA2905743C (en) | 2013-03-13 | 2021-09-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate application for weed control in brassica |
| BR112015023286A2 (pt) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Arzeda Corp | polipeptídeo recombinante com atividade da dicamba descarboxilase, construto de polinucleotídeo, célula, método de produção de uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo heterólogo que codifica um polipeptídeo tendo atividade da dicamba descarboxilase, método para descarboxilar dicamba, um derivado de dicamba ou um metabolito de dicamba, método para a detecção de um polipeptideo e método para a detecção da presença de um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo atividade da dicamba descarboxilase |
| CA2903693A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize stress related transcription factor 18 and uses thereof |
| CA3200166A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| US20140289906A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions Having Dicamba Decarboxylase Activity and Methods of Use |
| US20140283211A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Monsanto Technology Llc | Methods and Compositions for Plant Pest Control |
| CA2901316A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Phi-4 polypeptides and methods for their use |
| US10568328B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-25 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
| CN105143454A (zh) | 2013-03-15 | 2015-12-09 | 先锋国际良种公司 | Acc氧化酶多核苷酸和多肽的组合物和使用方法 |
| EP2781151A1 (en) | 2013-03-18 | 2014-09-24 | Bayer CropScience AG | Methods of separating hybrid seed from a mixture of seeds |
| US9850496B2 (en) | 2013-07-19 | 2017-12-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
| CA2918387C (en) | 2013-07-19 | 2021-11-02 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling leptinotarsa |
| WO2015013509A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method for producing hybrid brassica seed |
| WO2015023846A2 (en) | 2013-08-16 | 2015-02-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| ES2937045T3 (es) | 2013-09-13 | 2023-03-23 | Pioneer Hi Bred Int | Proteínas insecticidas y métodos para su uso |
| CN105874062B (zh) | 2013-10-18 | 2021-07-20 | 先锋国际良种公司 | 草甘膦-n-乙酰转移酶(glyat)序列以及使用方法 |
| WO2015061548A1 (en) | 2013-10-25 | 2015-04-30 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Stem canker tolerant soybeans and methods of use |
| NZ719544A (en) | 2013-11-04 | 2022-09-30 | Beeologics Inc | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations |
| UA119253C2 (uk) | 2013-12-10 | 2019-05-27 | Біолоджикс, Інк. | Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл |
| AR099092A1 (es) | 2014-01-15 | 2016-06-29 | Monsanto Technology Llc | Métodos y composiciones para el control de malezas utilizando polinucleótidos epsps |
| MX2016010187A (es) | 2014-02-07 | 2017-07-11 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| WO2015120270A1 (en) | 2014-02-07 | 2015-08-13 | Pioneer Hi Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| US11091770B2 (en) | 2014-04-01 | 2021-08-17 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
| AU2015280252A1 (en) | 2014-06-23 | 2017-01-12 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for regulating gene expression via RNA interference |
| EP3161138A4 (en) | 2014-06-25 | 2017-12-06 | Monsanto Technology LLC | Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression |
| US9686931B2 (en) | 2014-07-07 | 2017-06-27 | Alforex Seeds LLC | Hybrid alfalfa variety named HybriForce-3400 |
| CA2955842A1 (en) | 2014-07-29 | 2016-02-04 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
| US20170218384A1 (en) | 2014-08-08 | 2017-08-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ubiquitin promoters and introns and methods of use |
| US20170247719A1 (en) | 2014-09-17 | 2017-08-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| AU2015323919B2 (en) | 2014-09-29 | 2019-01-31 | Dlf Usa Inc. | Low lignin non-transgenic alfalfa varieties and methods for producing the same |
| BR112017007932A2 (pt) | 2014-10-16 | 2018-01-23 | Du Pont | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
| US20170359965A1 (en) | 2014-12-19 | 2017-12-21 | E I Du Pont De Nemours And Company | Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability |
| CN108064288B (zh) | 2015-01-22 | 2021-11-26 | 孟山都技术公司 | 用于控制叶甲属的组合物和方法 |
| CN116333064A (zh) | 2015-05-19 | 2023-06-27 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CN107750125A (zh) | 2015-06-02 | 2018-03-02 | 孟山都技术有限公司 | 用于将多核苷酸递送至植物中的组合物和方法 |
| WO2016196782A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants |
| WO2016205445A1 (en) | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| EP3943602A1 (en) | 2015-08-06 | 2022-01-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| US11104911B2 (en) | 2015-12-22 | 2021-08-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Embryo-preferred Zea mays promoters and methods of use |
| US11096344B2 (en) | 2016-02-05 | 2021-08-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genetic loci associated with brown stem rot resistance in soybean and methods of use |
| EP3960863A1 (en) | 2016-05-04 | 2022-03-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CA3022858A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| EP4083215A1 (en) | 2016-06-24 | 2022-11-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| MX2018015906A (es) | 2016-07-01 | 2019-04-04 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas de plantas y metodos para sus usos. |
| US20210292778A1 (en) | 2016-07-12 | 2021-09-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| EP3535285B1 (en) | 2016-11-01 | 2022-04-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CA2968905A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-11-30 | Bayer Cropscience Lp | Canola hybrid variety 5cn0125 |
| CA2968938A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-11-30 | Bayer Cropscience Lp | Canola hybrid variety 5cn0130 |
| CN111373046A (zh) | 2017-09-25 | 2020-07-03 | 先锋国际良种公司 | 组织偏好性启动子和使用方法 |
| CN109988806B (zh) * | 2017-12-29 | 2023-02-28 | 弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司 | 一种n-乙酰-草铵膦盐的消旋方法 |
| CA3004115A1 (en) | 2018-05-07 | 2019-11-07 | Bayer Cropscience Lp | Canola hybrid variety 6cn0122 |
| US11702668B2 (en) | 2018-05-22 | 2023-07-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| US20210277409A1 (en) | 2018-06-28 | 2021-09-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for selecting transformed plants |
| CA3111090A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for ochrobactrum-mediated plant transformation |
| CA3040289A1 (en) | 2019-04-12 | 2020-10-12 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7cn0298 |
| CA3047768A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-21 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7cn0425 |
| US11997965B2 (en) | 2020-04-24 | 2024-06-04 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 8CN0001 |
| US11672218B2 (en) | 2020-04-24 | 2023-06-13 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7CN0065 |
| US11997966B2 (en) | 2020-04-24 | 2024-06-04 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7CN0020 |
| US20230235352A1 (en) | 2020-07-14 | 2023-07-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN112940963B (zh) * | 2021-01-22 | 2022-06-14 | 上海交通大学 | 脱乙酰酶DacApva、编码基因及其在脱乙酰反应中的应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE531716C (de) | 1930-06-08 | 1931-08-18 | Mergenthaler Setzmaschfab Gmbh | Einrichtung zum Ausrichten der Giessform gegenueber dem Giessformtraeger von Matrizensetz- und Zeilengiessmaschinen |
| CA1041447A (en) * | 1974-01-23 | 1978-10-31 | Tadashiro Fujii | Production of 7-amino-cephem compounds by comamonas and pseudomonas |
| DE4126414A1 (de) * | 1991-08-09 | 1993-02-11 | Hoechst Ag | Deacetylasegene zur erzeugung von phosphinothricin oder phosphinothricyl-alanyl-alanin, verfahren zu ihrer isolierung und ihre verwendung |
| DE4308061A1 (de) | 1993-03-13 | 1994-09-15 | Hoechst Ag | Neue Aminosäure-Deacetylase mit Spezifität für L-N-Acetyl-Phosphinothricin, ihre Herstellung und Verwendung |
| DE19639463A1 (de) | 1996-09-26 | 1998-04-02 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Verfahren zur Herstellung weiblich steriler Pflanzen |
-
1996
- 1996-12-16 DE DE19652284A patent/DE19652284A1/de not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-12-03 RU RU99115170/13A patent/RU2205219C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-12-03 TR TR1999/01332T patent/TR199901332T2/xx unknown
- 1997-12-03 PL PL97334530A patent/PL193522B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-12-03 ES ES97953733T patent/ES2296318T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-03 WO PCT/EP1997/006755 patent/WO1998027201A2/de active IP Right Grant
- 1997-12-03 JP JP52724198A patent/JP2001506130A/ja not_active Ceased
- 1997-12-03 CN CNB971806055A patent/CN1171993C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-03 CA CA002275134A patent/CA2275134A1/en not_active Abandoned
- 1997-12-03 BR BR9714513A patent/BR9714513A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-12-03 US US09/319,892 patent/US6177616B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-03 CZ CZ992166A patent/CZ216699A3/cs unknown
- 1997-12-03 AT AT97953733T patent/ATE377072T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-12-03 HU HU0000396A patent/HUP0000396A3/hu unknown
- 1997-12-03 NZ NZ335852A patent/NZ335852A/en unknown
- 1997-12-03 EP EP97953733A patent/EP0942965B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-03 PL PL97377650A patent/PL193489B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-12-03 DE DE59712890T patent/DE59712890D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-03 AU AU57535/98A patent/AU727831B2/en not_active Ceased
- 1997-12-11 ZA ZA9711146A patent/ZA9711146B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2275134A1 (en) | 1998-06-25 |
| EP0942965A2 (de) | 1999-09-22 |
| CZ216699A3 (cs) | 1999-10-13 |
| CN1240476A (zh) | 2000-01-05 |
| US6177616B1 (en) | 2001-01-23 |
| AU727831B2 (en) | 2001-01-04 |
| PL193522B1 (pl) | 2007-02-28 |
| PL334530A1 (en) | 2000-02-28 |
| BR9714513A (pt) | 2000-03-21 |
| CN1171993C (zh) | 2004-10-20 |
| AU5753598A (en) | 1998-07-15 |
| ES2296318T3 (es) | 2008-04-16 |
| EP0942965B1 (de) | 2007-10-31 |
| DE59712890D1 (de) | 2007-12-13 |
| ATE377072T1 (de) | 2007-11-15 |
| HUP0000396A2 (hu) | 2000-06-28 |
| WO1998027201A2 (de) | 1998-06-25 |
| RU2205219C2 (ru) | 2003-05-27 |
| WO1998027201A3 (de) | 1999-03-04 |
| JP2001506130A (ja) | 2001-05-15 |
| TR199901332T2 (xx) | 1999-09-21 |
| NZ335852A (en) | 2001-06-29 |
| ZA9711146B (en) | 1998-06-17 |
| HUP0000396A3 (en) | 2002-02-28 |
| DE19652284A1 (de) | 1998-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL193489B1 (pl) | Cząsteczka DNA, białko, mikroorganizm Comamonas acidovorans, sposób wytwarzania roślin oraz roślinytransformowane genem deacetylazy N-acetylofosfinotricyny | |
| US5426041A (en) | Binary cryptocytotoxic method of hybrid seed production | |
| JPH07504821A (ja) | 植物の種子のリシンおよびスレオニン含有量を増加させるための核酸断片および方法 | |
| US5767371A (en) | Deacetylase genes for the production of phosphinothricin or phosphin-othricyl-alanyl-alanine, process for their isolation, and their use | |
| KR102054567B1 (ko) | 제초제 내성 단백질, 그 코딩 유전자 및 용도 | |
| CN110804090B (zh) | 蛋白质CkWRKY33及其编码基因与应用 | |
| US7525015B2 (en) | Prevention of transgene escape in genetically modified perennials | |
| JPH10508495A (ja) | Ｄｎａ配列およびそれらの使用 | |
| US20020002710A1 (en) | Process for producing plants with female sterility | |
| AU676468B2 (en) | Recombinant gibberellin DNA and uses thereof | |
| HUT62333A (en) | Process ofr producing herbicide-resistant mutants of acetohydroxy acid synthesis enzyme | |
| US6555733B2 (en) | Genes coding for amino acid deacetylases with specificity for N-acetyl-L-phosphinothricin, their isolation and use | |
| CN112980869A (zh) | Pp2cg1基因在调控拟南芥耐低温胁迫中的应用 | |
| WO1999066785A1 (en) | Water stress or salt stress tolerant transgenic cereal plants | |
| US7005561B2 (en) | Arabitol or ribitol as positive selectable markers | |
| AU714454B2 (en) | Recombinant Gibberellin DNA and uses thereof | |
| CN114657204A (zh) | 抑制pad1及其编码基因表达在调控植物耐逆性中的应用 | |
| JPH1118776A (ja) | プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ遺伝子およびその利用 | |
| JP2000500002A (ja) | 新規なｄｎａ配列及び植物における防御誘導因子を同定するためのこれらの使用 | |
| Chou | Purification, characterization, and gene cloning of an inducible indole-3-acetyl-L-aspartic acid hydrolase from Enterobacter agglomerans | |
| JPH09510876A (ja) | 形質転換真核細胞の選択方法及びそれを用いて得られた細胞 | |
| JP2004504843A (ja) | 改変された代謝物含量を有する植物をその援助によって産生させることができる核酸 | |
| MXPA00012786A (en) | Water stress or salt stress tolerant transgenic cereal plants | |
| WO2001066779A2 (en) | Arabitol or ribitol as positive selectable markers | |
| AU2642500A (en) | Recombinant gibberellin DNA uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification | ||
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20081203 |