ES2296318T3 - Nuevo gen que codifica una desacetilasa de aminoacido con especificidad para la n-acetil-l-fosfinotricina, su aislamiento y su utilizacion. - Google Patents
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Abstract
LA INVENCION TRATA DE MOLECULAS DE DNA QUE CODIFICAN LAS DESACETILASAS O PROTEINAS CON LA ACTIVIDAD BIOLOGICA DE LA DESACETILASA, ASI COMO CELULAS VEGETALES TRANSGENICAS, QUE ESTAN TRANSFORMADAS CON LAS MOLECULAS DE DNA DE LA INVENCION. ESTAS MOLECULAS SE PUEDEN UTILIZAR PARA LA PREPARACION DE PLANTAS CON PARTES QUE SE PUEDEN DESTRUIR DE MANERA DELIBERADA, ES DECIR PLANTAS MASCULINAS O FEMENINAS ESTERILES, MEDIANTE LA EXPRESION ESPECIFICA DE UN GEN DE LA DESACETILASA.
Description
Nuevo gen que codifica una desacetilasa de
aminoácido con especificidad para la
N-acetil-L-fosfinotricina,
su aislamiento y su utilización.
El concepto de una esterilidad masculina
reversible, inducible químicamente, en el caso de plantas, mediante
una expresión, específica para las anteras, de una desacetilasa
específica para la
N-acetil-fosfinotricina
(N-acetil-PPT) se describe en el
documento de solicitud de patente europea EP 531.716. Los genes de
desacetilasas, utilizados en este caso, el procedente de
Streptomyces viridochromogenes [de desacetilasa de
N-acetil-L-fosfinotricil-alanilalanina
(N-acetil-PTT), dea] y
respectivamente el argE procedente de Escherichia coli (de
desacetilasa de
N-acetil-L-ornitina)
codifican proteínas con una especificidad para la
N-acetil-L-PPT. Para
ambos genes, en el caso de una expresión específica para el tapetum
en plantas, se pudo mostrar la aparición de flores estériles
masculinamente después de un tratamiento de capullos individuales
con la
N-acetil-L-PPT. Para
una aplicación con éxito de este sistema, en particular en el caso
del tratamiento de plantas enteras con
N-acetil-PPT en condiciones
relevantes para la práctica, es ventajoso poder emplear
desacetilasas con una alta afinidad para los substratos. Por lo
tanto, se buscaron otras desacetilasas adicionales con una alta
afinidad para la N-acetil-PPT.
La solicitud aquí descrita se basa, por
consiguiente, en la misión de poner a disposición moléculas de ADN,
que codifiquen desacetilasas. Con estas desacetilasas es posible
producir plantas con partes de plantas que se pueden destruir
deliberadamente. Es de interés especial la producción de plantas
estériles masculina o femeninamente. El problema planteado por esta
misión se resuelve mediante la puesta a disposición de las formas
de realización reseñadas en las reivindicaciones de esta
patente.
El invento se refiere a moléculas de ADN, que
codifican desacetilasas o proteínas con la actividad biológica de
una desacetilasa. Las propiedades enzimáticas de estas proteínas se
describen en los Ejemplos.
El invento se refiere además a células de
plantas transgénicas, que habían sido transformadas con las
moléculas de ADN conformes al invento. Las células de plantas
transgénicas se pueden producir de acuerdo con técnicas conocidas y
se pueden regenerar para dar plantas enteras.
El invento se refiere a moléculas de ADN que
codifican una proteína con la actividad biológica de una
desacetilasa de N-acetil-PPT.
El invento se refiere en particular a moléculas
de ADN, que codifican una proteína con la actividad biológica de
una desacetilasa de N-acetil-PPT,
seleccionada entre el conjunto que se compone de
- a)
- moléculas de ADN, que codifican una proteína con la secuencia de aminoácidos, que se indica dentro de la SEQ ID No 2, y fragmentos y/o derivados de ella;
- b)
- moléculas de ADN, que codifican una secuencia de nucleótidos, que se indica dentro de la SEQ ID No 1.
El invento se refiere además al microorganismo
Stenotrophomonas sp. identificado según el procedimiento
descrito en esta solicitud y depositado (como DSM 9734).
Son objeto del invento en particular células de
plantas, o plantas, que contienen las moléculas de ADN conformes al
invento.
Presentan un interés especial unos
procedimientos para la producción de plantas con partes que se
pueden destruir deliberadamente mediante una expresión específica
de un gen de desacetilasa, así como unos procedimientos para la
producción de plantas estériles masculina o femeninamente mediante
una expresión específica de un gen de desacetilasa.
La presente solicitud se refiere además a:
- -
- las moléculas de ADN, que codifican enzimas con una alta actividad de la desacetilasa de N-acetil-PPT,
- -
- las proteínas, que son codificadas por estos genes,
- -
- la expresión de estos genes de desacetilasas en plantas.
A partir de muestras de suelos se pueden
enriquecer, en un medio mineral con quitina como única fuente de C,
unas bacterias que están en situación de disociar a la
N-acetil-PPT con una alta
efectividad. De esta manera se pudieron aislar 2 cepas de bacterias
como cultivos puros: Stenotrophomonas sp. (nº de depósito en
la DSM como DSM 9734) y Comamonas acidovorans (nº de
depósito en la DSM 11070).
El invento se refiere además por consiguiente
a:
\newpage
- 1.
- Una desacetilasa con
- -
- un peso molecular de 20.000 a 100.000 dalton
- -
- un valor óptimo del pH de 6,5 – 10,0
- -
- una especificidad para substratos frente a L-N-acetil-fosfinotricina.
- 2.
- La utilización de la desacetilasa caracterizada dentro de 1. para la producción de plantas estériles masculinamente.
El invento se refiere en particular a una enzima
que tiene un valor óptimo de la temperatura que está situado entre
30ºC y 50ºC.
El gen que codifica la desacetilasa se clonó en
E. coli. En el caso del gen deac 1 procedente de
Stenotrophomonas sp., se escrutó un banco de expresión de
fagémidos de un ADN genómico en E. coli para encontrar la
actividad de una desacetilasa específica para
N-acetil-PPT.
La secuencia de aminoácidos que se deriva de la
secuencia de ADN, posee además una homología con hidrolasas de
hipurato, como son conocidas a partir de bancos de datos de
proteínas.
La alta afinidad de la proteína Deac 1 para el
substrato
N-acetil-L-PPT
(K_{m} = 670 \muM) se hace apreciable en las plantas
transgénicas mediante una alta sensibilidad del tejido frente a esta
sustancia. Así, en el caso de una expresión constitutiva del gen
deac, se pueden obtener unas plantas, cuyas hojas reaccionan de una
manera sensible todavía a unas concentraciones hasta de 0,4 mg/ml de
N-acetil-D,L-PPT (=
0,2 mg/ml del enantiómero L). En el caso de una expresión
específica para el tapetum se consiguió la inducción de flores
estériles masculinamente mediante tratamiento de los capullos con 2
mg/ml de
N-acetil-D,L-PPT (=
1 mg/ml del enantiómero L). Los resultados descritos se refieren a
plantas cultivadas en un invernadero. A causa de las bajas
concentraciones de las sustancias, en caso necesario, en condiciones
al aire libre, es posible sin dificultades una dosificación más
alta en torno a un múltiplo de
5-10 veces.
5-10 veces.
Los Ejemplos siguientes sirven para explicar más
ampliamente el invento. Los datos porcentuales se refieren, cuando
no se indica otra cosa distinta, al peso. Además, el invento se
define en las reivindicaciones de esta pa-
tente.
tente.
Ejemplo
1
Cada vez 1 g de un suelo (légamo arenoso, de la
duna de Schwanheim) se extrajo durante 1 h a la temperatura
ambiente con 10 mM de NaCl y 10 mM de un tampón de fosfato de Na, de
pH = 7,0. Para la selección de diferentes grupos de
microorganismos, los materiales sobrenadantes del suelo se
sobreinocularon en los siguientes medios líquidos:
(1) Medio MS1 (para eubacterias):
- 5 mM de glucosa
- 5 mM de succinato
- 10 mM de glicerol
- 1 g/l NH_{4}Cl
- 50 ml/l de la Solución A
- 25 ml/l de la Solución B
- Solución A:
\hskip0.5cm
50 g/l de K_{2}HPO_{4}
- Solución B:
\hskip0.5cm
2,5 g/l de MgSO_{4}
- 0,5 g/l de NaCl
- 25 ml/l de oligoelementos.
\newpage
(2) Medio de quitina (para actinomicetos y
estreptomicetos así como bacterias quitinovoras):
- 10 g/l de quitina de cangrejo
- 1 g/l de (NH_{4})_{2}SO_{4}
- 0,5 g/l de MgSO_{4}
- 50 ml/l de la Solución A
- 1 ml/l de oligoelementos.
\vskip1.000000\baselineskip
(3) Medio de antibiótico (para hongos
superiores)
- 20 g/l de extracto de malta
- 10 g/l de glucosa
- 2 g/l de un extracto de levadura
- 0,5 g/l de (NH_{4})_{2}SO_{4}
- 50 \mug/ml de tetraciclina.
Todos los medios contenían 5 mM de
N-acetil-PPT y después de la
sobreinoculación se incubaron durante 3-5 días a
28ºC.
Los cultivos de enriquecimiento fueron a
continuación ensayados para determinar la desacetilación de
N-acetil-PPT. Para esto, las
células se separaron por centrifugación a 10.000 rpm y los
materiales sobrenadantes se investigaron en un aparato analizador
de aminoácidos (Biotronic LC 5001) para determinar la formación de
PPT. Solamente los cultivos de quitina y de medio se manifestaron
como positivos para desacetilasas. Después de la extensión en
placas sobre un agar de quitina, de estos cultivos se aislaron en
total 40 colonias individuales, se volvieron a cultivar en un medio
líquido con quitina y se ensayaron de nuevo para determinar la
actividad de desacetilasa. En este caso se encontraron 6 materiales
aislados positivos, a partir de los cuales los cultivos puros
activos se pudieron obtener mediante una renovada extensión sobre
placas de agar y una cultivación adicional de colonias
individuales. La cepa que tenía la más alta actividad de
desacetilasa fue identificada como Stenotrophomonas sp,
(número de depósito en la DSM (Colección Alemana de Microorganismos,
DSM 9734).
Ejemplo
2
Los métodos clásicos de biología molecular,
usados para los trabajos, se describen en la cita de Maniatis y
colaboradores, 1982, Molecular Cloning: a laboratory manual
[Clonación molecular, un manual de laboratorio], Cold Spring Harbor
Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.
Un ADN genómico procedente de
Stenotrophomonas sp. se preparó de acuerdo con el método de
Meade y colaboradores, 1982, J. Bacteriol.
149:114-122. Después una digestión parcial con Sau3A
se aisló la fracción de tamaños de 5-10 kb y se
ligó en el vector de expresión de ZAP - lambda, cortado con BamHI,
de Stratagene (ZAP Express Vector Kit, (estuche de vectores de
expresión ZAP), nº de catálogo 239201, manual de instrucciones). Con
la tanda de ligación envasada se produjo un banco primario de fagos
lambda y a continuación se amplificó. Después de esto, con ayuda
del sistema de fagémidos de pBK-CMV de Stratagene
(nº de catálogo 212209, manual de instrucciones) se estableció un
banco de expresión de fagémidos en Escherichia coli. Este
banco de genes se ensayó mediante un escrutinio de la actividad con
[^{14}C]-N-acetil-L-PPT
como substrato, para determinar la presencia del gen de
desacetilasa. Con esta finalidad, se sobreinocularon en placas de
microtitulación 2.000 clones individuales y se cultivaron durante
una noche en un medio LB a 37ºC con 0,2 mM de
isopropiltiogalactósido (IPTG) como inductor y 50 \mug/l de
kanamicina como marcador de resistencia. Las células se separaron
por centrifugación y se incubaron durante una noche a 28ºC, cada
vez en 10 \mul de
[^{14}C]-N-acetil-L-PPT
1 mM.
A continuación, las tandas se analizaron en
grupos de ocho mediante una cromatografía de capa fina y una
autorradiografía para averiguar la reacción de
N-acetil-PPT en PPT (véase el
documento de patente europea EP 531.716, Ejemplo 8) y en el caso de
un hallazgo positivo, se ensayaron posteriormente los clones
individuales. Con este procedimiento se pudo seleccionar a partir
de 1.920 transformantes un clon positivo con un inserto de 6 kb
(kilobases). Este fragmento de ADN fue caracterizado más
detalladamente mediante un cartografiado por restricción. Por medio
una subclonación de fragmentos de restricción del inserto en
pUC18/19 y por transformación de los plásmidos recombinantes en el
seno de E. coli, se pudo localizar, con ayuda del ensayo de
actividad arriba descrito, el gen estructural deac en un fragmento
para SalI/Smal de 2,5 kb (2.487 pares de bases) (Figura 1). La
actividad era dependiente de la orientación del fragmento en
relación con el promotor lac del vector.
El fragmento de 2,5 kb fue secuenciado en ambas
cadenas con el método de Sanger (Sanger y colaboradores, 1977,
Proc. Natl. Acad. Sci USA 74:5463-5468). Todo el
fragmento tenía una longitud de 2.487 nucleótidos (véase la SEQ ID
NO. 1). El cuadro de lectura abierto, con una longitud de 1.494
nucleótidos, comienza con el nucleótido nº 367 y termina con el nº
1860.
Estudios de expresión con subfragmentos de la
PCR (reacción en cadena de la polimerasa) a partir de esta zona en
E. coli, muestran que la proteína desacetilasa activa es
codificada por una zona que tiene una longitud de 1.365
nucleótidos, comenzando con el codón de iniciación ATG en la
posición 496 y terminando con el codón de detención TGA en la
posición 1.860. La secuencia de aminoácidos, que se deriva de la
secuencia de ADN, representa un polipéptido de 454 aminoácidos (Seq
ID NO 2) con un peso molecular calculado de 48,1 kDa.
Una búsqueda de homologías en los bancos de
datos EMBL, de ADN y de proteínas, dio como resultado similaridades
con la desacetilasa de N-acetil-PPT
procedente de Comamonas acidovorans, descrita por primera vez
en esta solicitud, (37,4% de aminoácidos idénticos), con la
hidrolasa de hipurato procedente de Campylobacter jejuni
(33,9%) y con la
N-acil-L-amidohidrolasa
procedente de Bacillus stearothermophilus (33,7%). En lo
sucesivo, el gen aislado a partir de Stenotrophomonas es designado
como deac1. La proteína correspondiente es designada como Deac 1. A
causa de la homología se puede partir del hecho de que también las
mencionadas hidrolasas de hipurato y amidohidrolasas, en
combinación con promotores específicos para tejidos y con un
subsiguiente tratamiento, se pueden usar ventajosamente para la
producción de plantas con tejidos que se pueden destruir
selectivamente, en particular plantas estériles masculina y/o
femeninamente.
Ejemplo
3
Para la sobreexpresión y la purificación de la
desacetilasa procedente de Stenotrophamonas sp. (deac1) se
utilizó el sistema de vector de fusión del gen con glutatión de
S-transferasa (GST) de Pharmacia (nº de catálogo
27-4581-01, nº de catálogo
27-4570-01). El método se describe
en la cita de Smith y Johnson, 1988, Gene 67:31. La purificación de
la proteína de fusión se efectúa mediante una cromatografía de
afinidad en presencia de
glutatión-Sepharose-4B.
El gen deac funcional fue transclonado como
fragmento de PCR para BamHI/SalI de 1,4 kb (kilobases) en el vector
de fusión con GST pGEX-4T-2 bajo el
control del promotor lac. La expresión de la proteína de fusión
recombinante fue inducida por medio de la adición de 0,1 mM de
IPTG. Por medio de una electroforesis en SDS
(dodecil-sulfato de sodio)/poli(acrilamida)
de extractos brutos de los transformantes de E. coli se pudo
detectar la proteína de fusión como una banda de 74 kDa.
Para la purificación de la proteína, las células
procedentes de un cultivo de 2 l de un transformante en E.
coli inducido, positivo para expresión, se disgregaron con
ultrasonidos, y el extracto, a continuación, fue solubilizado por
adición de 1% de Triton-X-100. El
material sobrenadante fue fijado a
glutatión-Sepharose 4B. Después de haber lavado
múltiples veces con un tampón de PBS [= solución salina tamponada
con fosfato] (140 mM de NaCl, 3 mM de KCl, 10 mM de
Na_{2}HPO_{4}, 2 mM de KH_{2}PO_{4}, pH = 7,3), la proteína
de fusión, fijada a la matriz de Sepharose, fue disociada con
trombina. El material eluído contenía como única banda de proteína
un producto de disociación con un tamaño de 48 kDa (después de una
electroforesis con SDS/poli(acrilamida) desnaturalizadora),
que se había podido identificar en el ensayo con enzimas (véase más
adelante) como desacetilasa de
N-acetil-PPT. Con el método
descrito, a partir de 21 cultivos bacterianos se pudieron purificar
hasta homogeneidad 200 \mug de la proteína de desacetilasa.
La actividad de la proteína de desacetilasa se
midió con los dos siguientes ensayos:
- 1)
- Ensayo radiactivo: Cada vez 2,5 \mug de una enzima purificada se incubaron en tandas de 10 \mul en un tampón de PBS con 0,1 mM de [^{14}C]-N-acetil-L-PPT durante 15 min. a 37ºC. A continuación las muestras se diluyeron a 1:6 en 5 mM de KO_{2}PO_{4}, 10% de metanol, pH = 1,92, y se analizaron en la HPLC (cromatografía en fase líquida de alto rendimiento) con un detector de la radiactividad (columna de separación: Spherisorb SAX, agente eluyente: 5 mM de KH_{2}PO_{4}, 10% de metanol, pH = 1,92, velocidad de flujo: 0,5 ml/min). En estas condiciones, la [^{14}C]-N-acetil-L-PPT se eluye a los 4,5 min y la [^{14}C]-N-acetil-L-PPT se eluye a los 6,5 min. Las actividades de desacetilasas específicas se determinaron en [nmol (nanomoles) de [^{14}C]-N-acetil-L-PPT/min/mg de proteína]. Con el fin de determinar el valor óptimo del pH, las tandas se incubaron en un sistema tamponador en cada caso a base de 40 mM de Bis-Tris, Tris y Caps entre unos pH = de 6 y 9. Para la medición del valor de K_{m} se llevaron a cabo determinaciones en triplicado (en 3 veces) con unas concentraciones de [^{14}C]-N-acetil-L-PPT comprendidas entre 0,1 mM y 1 mM a un pH = 8,0 en presencia de 1 mM de CoCl_{2}.
- 2)
- Ensayo no radiactivo: Con el fin de investigar la especificidad para un substrato, en cada caso 5 \mug de una enzima purificada se incubaron en tandas de 20 \mul en un tampón de PBS, cada vez con 25 mM de un determinado N-acetil- o respectivamente N-acil-aminoácido durante 60 min. a 28ºC. A continuación, las muestras se midieron en cuanto a la formación de los aminoácidos libres en el aparato analizador de aminoácidos (Biotronic LC 5001). Las actividades específicas se determinaron [en nmol de aminoácidos/min/mg de proteína]. Para la desacetilasa de N-acetil-PPT se determinó un valor óptimo del pH de pH = 8 (véase la Tabla 1) y un valor óptimo de la temperatura de 37ºC (véase la Tabla 2). Las mediciones cinéticas dieron un valor de K_{m} de 670 \muM. Por adición de 1 mM de CoCl_{2} se pudo aumentar la actividad enzimática en aproximadamente un 20%.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1,6cm
Los resultados de las mediciones de la
especificidad para substratos se representan en la Tabla 3.
La enzima posee un espectro de substratos
relativamente amplio. Las más altas conversiones se consiguieron
con ácido hipúrico
(N-benzoil-glicina) y con
N-acetil-L-glutamato.
La afinidad para la
N-acetil-L-PPT está
situada aproximadamente un 50% por debajo de la afinidad para los
dos substratos arriba mencionados. La desacetilasa posee una
exclusiva especificidad para
N-acetil-L-aminoácidos.
Con los correspondientes enantiómeros D no se pudieron observar
reacciones de ningún tipo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Ejemplo
4
El gen estructural deac1 se transclonó como
fragmento de PCT para BamHI/SalI de 1,4 kb en el vector binario
pPCV801 (Koncz y Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204;
383-396) bajo el control del promotor de 35S. El
resultante plásmido pPCVKDEAC1 (Figura 2) con el vector de
expresión promotor de 35S - gen estructural deac1 - terminador de
35S, se transformó en el seno de Agrobacterium tumefaciens
(cepa ATHV) mediando utilización de métodos clásicos. Pequeños
trozos de hojas de tabaco (Nicotiana tabacum) se
transformaron con las agrobacterias recombinantes de acuerdo con el
método de Horsch y colaboradores, 1985, Science 227:
1229-1231, y se seleccionaron en un medio de
kanamicina, se regeneraron 18 transformantes de tabaco
independientes y se ensayaron en cuanto a la expresión de la
desacetilasa en las hojas. En el caso de una actividad de la
proteína en las plantas transgénicas había que contar con una
sensibilidad de las hojas frente a la
N-acetil-PPT, puesto que la
sustancia es transformada en la planta, a causa de la actividad
enzimática de la desacetilasa, entonces en la sustancia activa
herbicida fosfinotricina.
En un ensayo de goteo, las hojas de las plantas
transgénicas así como de varias plantas testigos no transgénicas,
se trataron cada vez con 5 \mul de las siguientes concentraciones
de N-acetil-DL-PPT:
4 mg/ml (= 15 mM), 1 mg/ml (= 3,75 mM), 0,4 mg/ml (= 1,5 mM), 0,1
mg/ml (= 4,38 mM). Los sitios de tratamiento fueron investigados
después de 1-2 semanas en cuanto a aclaraciones del
color y respectivamente formación de necrosis. Al mismo tiempo, se
midió la actividad de desacetilasa, específica para la
N-acetil-PPT, de las transformantes,
así como de las plantas testigos en extractos brutos. Para esto,
cada vez 100 mg de un material de hojas se homogeneizaron en 200
\mul de un tampón de PBS, los desechos celulares se separaron por
centrifugación y los materiales sobrenadantes que contenían
proteínas se dializaron durante una noche a 4ºC frente al mismo
tampón. En cada caso 70 \mul de estas muestras se incubaron a
37ºC durante una noche con 0,1 mM de
[^{14}C]-N-acetil-L-PPT.
Las tandas se analizaron a continuación en la HPLC, como arriba se
ha descrito, para determinar la formación de
[^{14}C]-N-acetil-L-PPT.
Los resultados de los ensayos de goteo y de los
ensayos de actividad se representan en la Tabla 4 para plantas
seleccionadas. Se muestra que aproximadamente un 60% de las
transformantes expresan la proteína desacetilasa funcional y se
traducen en el correspondiente fenotipo.
Ejemplo
5
Mediando utilización de métodos clásicos, el
promotor específico para el tapetum del gen tap1 procedente de
hierba becerra (Antirrhinum majus) como un fragmento para
EcoRI/BamHI de 2,2 kb se fusionó con el gen estructural deac1
(fragmento de PCR para BamHI/SalI de 1,4 kb) y con el terminador de
35S, en el vector pUC18. La casete de expresión así resultante,
promotor tap1 - gen estructural deac - terminador de 35S se
introdujo por clonación como fragmento de EcoRI de 3,8 kb en vez de
la región de promotor de 35S/terminador, en el vector binario
pPCV801 (plásmido pPCVTDEAC1, Figura 3). La transformación de tabaco
se llevó a cabo tal como se ha descrito en el Ejemplo 4.
En el caso de una expresión de la desacetilasa,
específica para el tapetum, se deberían poder inducir flores
estériles masculinamente mediante un tratamiento de los capullos de
hojas con N-acetil-PPT. La
transformación del derivado de PPT en la sustancia activa herbicida
fosfinotricina conduce a un daño selectivo para el tejido de
tapetum, con lo cual se impide el desarrollo de polen funcional.
En cada caso, solamente un lado de las
inflorescencias (la zona total de los capullos de flores que se
desarrollan) se trató con
N-acetil-PPT, el otro lado de las
inflorescencias permaneció sin tratar, con el fin de asegurarse de
que los fenómenos que se observan no han de atribuirse a
malformaciones de las respectivas plantas. El tratamiento se llevó
a cabo en un momento, en el que los capullos individuales no eran
mayores que 5 mm (fase activa para el promotor de tapetum). Las
transformantes de tabaco así como varias plantas testigos NT Sam NN
se trataron en el transcurso de una semana 3 veces con 0,2% de
N-acetil- D,L-PPT (= 7,5 mM) y 0,1%
de Genapol (agente humectante). Después del florecimiento de los
capullos (aproximadamente a los 9-11 días después
de la terminación del tratamiento) las plantas fueron investigadas
en cuanto a la aparición de flores estériles masculinamente.
Al mismo tiempo se midió la actividad de
desacetilasa, específica para la
N-acetil-PPT, en anteras no maduras
de las transformantes, así como de las plantas testigos. Para esto,
las anteras no maduras fueron extraídas y preparadas a partir de
capullos de flores con un tamaño de 5 mm, y se incubaron durante una
noche a la temperatura ambiente cada vez en 50 \muM de una
solución de
[^{14}C]-N-acetil-L-PPT.
A continuación, las anteras se lavaron 1 vez en 500 \mul de un
tampón de PBS y luego se homogeneizaron en 50 \mul de un tampón de
PBS. Después de haber separado por centrifugación los desechos
celulares, los materiales sobrenadantes se concentraron por
evaporación en el aparato Speed-Vac y los sedimentos
se recogieron cada vez en 30 \mul de un tampón de HPCl (con 5 mM
de KH_{2}PO_{4}, 10% de metanol, pH = 1,92). Las tandas se
analizaron en la HPLC, como arriba se ha descrito, en cuanto a la
formación de [^{14}C]-L-PPT.
Los resultados del tratamiento de las flores y
de los ensayos de actividad se representan en la Tabla 5 para
plantas seleccionadas. En casi todas las transformantes se pudo
comprobar una actividad de desacetilasa específica para las
anteras. En el caso de 3 transformantes se observó por el lado
tratado con N-acetil-PPT del racimo
de flores estériles masculinamente, es decir no se formó nada de
polen, o respectivamente se observaron flores grandemente reducidas
en cuanto al contenido de polen. El efecto sobre nuevos capullos que
maduraban se detuvo durante un período de tiempo de aproximadamente
3 semanas. Las flores no tratadas de las transformantes, así como
las flores tratadas de las plantas testigos eran fértiles en todos
los casos. En el caso de las flores estériles masculinamente no se
podía comprobar ninguna formación de semillas. Una deliberada
polinización ajena de las hojas estériles masculinamente era sin
embargo posible, con lo cual se demostró que las partes femeninas
de las flores han mantenido su plena capacidad funcional (Nacken y
colaboradores, 1991, Mol. Gen. Genet. 229:
129-136).
Fig. 1 Mapa de restricción del fragmento para
SalI/SamHI de 2,5 kb, que media en la actividad de desacetilasa
específica para la N-acetil-PPT. La
posición y la orientación del gen estructural deac1 están marcadas
por una flecha (bps = pares de bases)
Fig. 2 Mapa del plásmido pPVCKDEAC1 para la
expresión constitutiva del gen deac en plantas
Fig. 3 Mapa del plásmido pPCVTDEAC1 para la
expresión específica para el tapetum del gen deac en plantas
Fig. 4 Mapa del plásmido pGK83
Fig. 5 Mapa del plásmido pMF9.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Hoechst Schering AgrEvo GmbH
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: -
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- LOCALIDAD: Frankfurt
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PAÍS FEDERAL: -
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAIS: Alemania
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- NÚMERO DE CÓDIGO POSTAL: 65926
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 069-305-5596
\vskip0.500000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: (+69) 357175
\vskip0.500000\baselineskip
- (I)
- TELEX: -
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE SOLICITUD: Nuevos genes que codifican desacetilasas de aminoácidos con especificidad para N-acetil-L-fosfinotricina, su aislamiento y su utilización
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE LAS SECUENCIAS: 4
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE EN ORDENADOR
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- SOPORTE DE DATOS: disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- BSISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, version #1.25 (EPA)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN ACERCA DE LA SEQ ID NO: 1
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1.365 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: exón
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- SITUACIÓN: 1...1365
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN ACERCA DE LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD. 454 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE LA MOLÉCULA: Proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICAS;
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Proteína
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- SITUACIÓN: 1....454
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (7)
1. Molécula de ADN que codifica una proteína con
una alta actividad de la desacetilasa de
N-acetil-fosfinotricina, que se
puede aislar a partir de Stenotrophomonas sp. depositada como
DSM 9734.
2. Proteína, que es codificada por una molécula
de ADN de acuerdo con la reivindicación 1.
3. Microorganismo Stenotrophomonas sp.,
depositado como DSM 9734.
4. Célula de planta, que contiene una molécula
de ADN de acuerdo con la reivindicación 1.
5. Planta, que contiene una molécula de ADN de
acuerdo con la reivindicación 1.
6. Procedimiento para la producción de plantas
transgénicas con partes que se pueden destruir deliberadamente, que
comprende:
- a)
- la transformación de una célula de planta con una molécula de ADN de acuerdo con la reivindicación, que se encuentra bajo el control de un promotor específico para un tejido, y
- b)
- la regeneración de plantas a partir de las células de plantas obtenidas de acuerdo con (a), poseyendo las partes de plantas unas partes de plantas que pueden ser destruidas selectivamente.
7. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 6, para la producción de plantas estériles
masculinamente, caracterizado porque
- a)
- el promotor específico para un tejido es un promotor específico para el tapetum; y
- b)
- el tratamiento con N-acetil-fosfinotricina daña al tejido del tapetum.
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DE19933362A1 (de) * | 1999-07-20 | 2001-02-08 | Aventis Cropscience Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren aus ihren racemischen N-Acetyl-D,L-Derivaten durch enzymatische Racemat-Spaltung mittels isolierter, rekombinanter Enzyme |
US6384304B1 (en) * | 1999-10-15 | 2002-05-07 | Plant Genetic Systems N.V. | Conditional sterility in wheat |
EP1370650A2 (en) * | 2001-03-12 | 2003-12-17 | Bayer CropScience N.V. | Novel genes for conditional cell ablation |
EP1258531A1 (en) * | 2001-05-14 | 2002-11-20 | Givaudan SA | Compounds and methods for inhibiting axillary malodour |
WO2003003816A2 (en) | 2001-07-06 | 2003-01-16 | Monsanto Technology Llc | Methods for enhancing segregation of transgenes in plants and compositions thereof |
US7132590B2 (en) * | 2001-12-18 | 2006-11-07 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Methods of making male-sterile plants by underexpressing allene oxide synthase |
BRPI0409816B8 (pt) | 2003-04-29 | 2022-12-06 | Pioneer Hi Bred Int | Genes de glifosato-n-acetiltransferase (gat), construtos os compreendendo, célula bacteriana, polipeptídeo tendo atividade de gat, bem como método para a produção de uma planta transgênica resistente ao glifosato e métodos para controlar ervas daninhas em um campo contendo uma safra |
WO2005001101A1 (en) | 2003-06-03 | 2005-01-06 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Conditional sterility in plants |
US7262293B2 (en) * | 2003-07-02 | 2007-08-28 | Corus Pharma | Aztreonam L-lysine and methods for the preparation thereof |
WO2005070088A2 (en) | 2004-01-15 | 2005-08-04 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Chimeric sequences for tissue-specific gene expression in plants |
NZ571115A (en) | 2006-03-02 | 2011-11-25 | Athenix Corp | Method and compositions for improved enzyme activity in transgenic plant |
US7951995B2 (en) | 2006-06-28 | 2011-05-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof |
US8097712B2 (en) | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
US8697941B2 (en) | 2008-07-23 | 2014-04-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Molecular markers linked to PPO inhibitor tolerance in soybeans |
US8748695B2 (en) * | 2008-07-23 | 2014-06-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Molecular markers linked to PPO inhibitor tolerance in soybeans |
AP2011005671A0 (en) | 2008-09-26 | 2011-04-30 | Basf Agrochemical Products Bv | Herbicide-resistant AHAS-mutants and methods of use. |
MX2011013224A (es) | 2009-06-09 | 2012-06-01 | Pioneer Hi Bred Int | Promotor de endospermo temprano y metodos de uso. |
US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
CN102597244B (zh) | 2009-10-26 | 2014-07-23 | 先锋国际良种公司 | 胚珠体细胞特异性启动子及应用方法 |
US9611485B2 (en) | 2010-01-26 | 2017-04-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Polynucleotide and polypeptide sequences associated with herbicide tolerance |
HUE033056T2 (hu) | 2010-03-08 | 2017-11-28 | Monsanto Technology Llc | Polinukleotid molekulák génszabályozáshoz növényekben |
BR112013003135A2 (pt) | 2010-08-13 | 2017-11-07 | Pioneer Hi Bred Int | polinucletídeo e polipeptídeo isolado ou recombinante, construto de ácido nucleico, célula, planta, explante vegetal, semente transgênica, método para produção de célula vegetal para controle de plantas daninhas e para detecção de um polipeptídeo hppd e um polinucleotídeo. |
CA2810180C (en) | 2010-11-24 | 2015-07-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Brassica gat event dp-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
WO2012071039A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Pioner Hi-Bred International, Inc. | Brassica gat event dp-061061-7 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof |
TWI667347B (zh) | 2010-12-15 | 2019-08-01 | 瑞士商先正達合夥公司 | 大豆品種syht0h2及偵測其之組合物及方法 |
CN103958686A (zh) | 2011-09-13 | 2014-07-30 | 孟山都技术公司 | 用于杂草控制的方法和组合物 |
US10760086B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-09-01 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
ES2645927T3 (es) | 2011-09-13 | 2017-12-11 | Monsanto Technology Llc | Procedimientos y composiciones para el control de malezas |
MX343071B (es) | 2011-09-13 | 2016-10-21 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para el control de malezas. |
CA2848689A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control targeting pds |
EP2756085B1 (en) | 2011-09-13 | 2019-03-20 | Monsanto Technology LLC | Methods and compositions for weed control |
WO2013040033A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
US10829828B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-11-10 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
US9840715B1 (en) | 2011-09-13 | 2017-12-12 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants |
US10806146B2 (en) | 2011-09-13 | 2020-10-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
UA116088C2 (uk) | 2011-09-13 | 2018-02-12 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти) |
CN103958539B (zh) | 2011-09-13 | 2019-12-17 | 孟山都技术公司 | 用于杂草控制的方法和组合物 |
US9920326B1 (en) | 2011-09-14 | 2018-03-20 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for increasing invertase activity in plants |
WO2013096818A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | The Curators Of The University Of Missouri | Soybean variety s05-11268 |
WO2013096810A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | The Curators Of The University Of Missouri | Soybean variety s05-11482 |
US9006515B2 (en) | 2012-01-06 | 2015-04-14 | Pioneer Hi Bred International Inc | Pollen preferred promoters and methods of use |
CA2860783A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ovule specific promoter and methods of use |
AU2013209738A1 (en) | 2012-01-17 | 2014-08-07 | Australian Center For Plant Functional Genomics, Pty, Ltd | Plant transcription factors, promoters and uses thereof |
WO2013138309A1 (en) | 2012-03-13 | 2013-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genetic reduction of male fertility in plants |
CN104703998B (zh) | 2012-03-13 | 2020-08-21 | 先锋国际良种公司 | 植物中雄性育性的遗传减少 |
UY34822A (es) | 2012-05-24 | 2013-12-31 | Seeds Ltd Ab | Composiciones y métodos para silenciar la expresión genética |
WO2013188291A2 (en) | 2012-06-15 | 2013-12-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Methods and compositions involving als variants with native substrate preference |
AU2012208997B1 (en) | 2012-07-30 | 2013-09-19 | Dlf Usa Inc. | An alfalfa variety named magnum salt |
US20150259696A1 (en) | 2012-10-11 | 2015-09-17 | Shane E. Abbitt | Guard cell promoters and uses thereof |
US10077451B2 (en) | 2012-10-18 | 2018-09-18 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for plant pest control |
US20140173781A1 (en) | 2012-12-13 | 2014-06-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for producing and selecting transgenic wheat plants |
AU2013361220A1 (en) | 2012-12-21 | 2015-04-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for auxin-analog conjugation |
US10683505B2 (en) | 2013-01-01 | 2020-06-16 | Monsanto Technology Llc | Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression |
EP2941488B1 (en) | 2013-01-01 | 2023-03-22 | Monsanto Technology LLC | Methods of introducing dsrna to plant seeds for modulating gene expression |
US10000767B2 (en) | 2013-01-28 | 2018-06-19 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for plant pest control |
CN105263329B (zh) | 2013-03-13 | 2020-09-18 | 孟山都技术公司 | 用于杂草控制的方法和组合物 |
US9713332B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-07-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate application for weed control in Brassica |
US10609930B2 (en) | 2013-03-13 | 2020-04-07 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
BR112015023286A2 (pt) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Arzeda Corp | polipeptídeo recombinante com atividade da dicamba descarboxilase, construto de polinucleotídeo, célula, método de produção de uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo heterólogo que codifica um polipeptídeo tendo atividade da dicamba descarboxilase, método para descarboxilar dicamba, um derivado de dicamba ou um metabolito de dicamba, método para a detecção de um polipeptideo e método para a detecção da presença de um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo atividade da dicamba descarboxilase |
US20140283211A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Monsanto Technology Llc | Methods and Compositions for Plant Pest Control |
US20140289906A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions Having Dicamba Decarboxylase Activity and Methods of Use |
BR112015023304A2 (pt) | 2013-03-14 | 2017-07-18 | Pioneer Hi Bred Int | método para melhorar a tolerância ao estresse abiótico de uma planta, planta e semente |
UA121847C2 (uk) | 2013-03-14 | 2020-08-10 | Піонір Хай-Бред Інтернешнл Інк. | Полінуклеотид, що кодує елемент сайленсингу з інсектицидною активністю проти шкідника рослин із ряду coleoptera, та спосіб його застосування |
US10568328B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-25 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for weed control |
BR112015023700A2 (pt) | 2013-03-15 | 2017-07-18 | Pioneer Hi Bred Int | método de aprimoramento da tolerância ao estresse abiótico em uma planta de cultura agrícola , planta de milho transgênica, célula vegetal, semente, método de regulação negativa de um gene de acc oxidase endógeno em uma planta de milho. |
WO2014150914A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Phi-4 polypeptides and methods for their use |
EP2781151A1 (en) | 2013-03-18 | 2014-09-24 | Bayer CropScience AG | Methods of separating hybrid seed from a mixture of seeds |
US9850496B2 (en) | 2013-07-19 | 2017-12-26 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
EP3608412A3 (en) | 2013-07-19 | 2020-04-08 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for controlling leptinotarsa |
CA2918909A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method for producing hybrid brassica seed |
MX359026B (es) | 2013-08-16 | 2018-09-12 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos de uso. |
BR122021005579B1 (pt) | 2013-09-13 | 2022-11-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Construto de dna, método de obtenção de planta transgênica, proteína de fusão, método para controlar uma população de praga de inseto, método para inibir o crescimento ou matar uma praga de inseto |
CA2927180A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate-n-acetyltransferase (glyat) sequences and methods of use |
WO2015061548A1 (en) | 2013-10-25 | 2015-04-30 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Stem canker tolerant soybeans and methods of use |
CA2929533C (en) | 2013-11-04 | 2023-06-06 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations |
UA119253C2 (uk) | 2013-12-10 | 2019-05-27 | Біолоджикс, Інк. | Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл |
CN105979770B (zh) | 2014-01-15 | 2019-07-05 | 孟山都技术公司 | 用于使用epsps多核苷酸的杂草控制的方法和组合物 |
ES2806473T3 (es) | 2014-02-07 | 2021-02-17 | Pioneer Hi Bred Int | Proteínas insecticidas y métodos para su uso |
BR112016018103B1 (pt) | 2014-02-07 | 2024-01-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Polipeptídeo e seu uso, polinucleotídeo, composição, proteína de fusão, método para controlar uma população, método para inibir o crescimento, método para controlar a infestação, método para obtenção de uma planta ou célula vegetal, construto |
US11091770B2 (en) | 2014-04-01 | 2021-08-17 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
WO2015200223A1 (en) | 2014-06-23 | 2015-12-30 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for regulating gene expression via rna interference |
US11807857B2 (en) | 2014-06-25 | 2023-11-07 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression |
US9686931B2 (en) | 2014-07-07 | 2017-06-27 | Alforex Seeds LLC | Hybrid alfalfa variety named HybriForce-3400 |
RU2754955C2 (ru) | 2014-07-29 | 2021-09-08 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Композиции и способы борьбы с насекомыми-вредителями |
WO2016022516A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ubiquitin promoters and introns and methods of use |
WO2016044092A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Pioneer Hi Bred International Inc | Compositions and methods to control insect pests |
US9648826B2 (en) | 2014-09-29 | 2017-05-16 | Alforex Seeds LLC | Low lignin non-transgenic alfalfa varieties and methods for producing the same |
BR112017007932A2 (pt) | 2014-10-16 | 2018-01-23 | Du Pont | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
US20170359965A1 (en) | 2014-12-19 | 2017-12-21 | E I Du Pont De Nemours And Company | Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability |
MX2017009521A (es) | 2015-01-22 | 2018-11-09 | Monsanto Technology Llc | Composiciones y métodos para controlar leptinotarsa. |
RU2017144238A (ru) | 2015-05-19 | 2019-06-19 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Инсектицидные белки и способы их применения |
US10883103B2 (en) | 2015-06-02 | 2021-01-05 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for delivery of a polynucleotide into a plant |
AU2016270913A1 (en) | 2015-06-03 | 2018-01-04 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants |
CA2986265A1 (en) | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
UA124495C2 (uk) | 2015-08-06 | 2021-09-29 | Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк. | Інсектицидний білок рослинного походження та спосіб його застосування |
BR112018012887B1 (pt) | 2015-12-22 | 2024-02-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Cassete de expressão, vetor, métodos de obtenção de célula vegetal e planta transgênica, métodos para expressar um polinucleotídeo |
CA3004914A1 (en) | 2016-02-05 | 2017-08-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genetic loci associated with brown stem rot resistance in soybean and methods of use |
US11008585B2 (en) | 2016-05-04 | 2021-05-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
CN109312359A (zh) | 2016-06-16 | 2019-02-05 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫有害生物的组合物和方法 |
CN109642237B (zh) | 2016-06-24 | 2022-09-30 | 先锋国际良种公司 | 植物调节元件及其使用方法 |
EP3954202A1 (en) | 2016-07-01 | 2022-02-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
WO2018013333A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
EP3535285B1 (en) | 2016-11-01 | 2022-04-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
CA2968905A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-11-30 | Bayer Cropscience Lp | Canola hybrid variety 5cn0125 |
CA2968938A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-11-30 | Bayer Cropscience Lp | Canola hybrid variety 5cn0130 |
CN111373046A (zh) | 2017-09-25 | 2020-07-03 | 先锋国际良种公司 | 组织偏好性启动子和使用方法 |
CN109988806B (zh) * | 2017-12-29 | 2023-02-28 | 弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司 | 一种n-乙酰-草铵膦盐的消旋方法 |
CA3004115A1 (en) | 2018-05-07 | 2019-11-07 | Bayer Cropscience Lp | Canola hybrid variety 6cn0122 |
WO2019226508A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
US20210277409A1 (en) | 2018-06-28 | 2021-09-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for selecting transformed plants |
AU2019369415A1 (en) | 2018-10-31 | 2021-03-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for Ochrobactrum-mediated plant transformation |
CA3040289A1 (en) | 2019-04-12 | 2020-10-12 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7cn0298 |
CA3047768A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-21 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7cn0425 |
US11672218B2 (en) | 2020-04-24 | 2023-06-13 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Canola hybrid variety 7CN0065 |
WO2022015619A2 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
CN112940963B (zh) * | 2021-01-22 | 2022-06-14 | 上海交通大学 | 脱乙酰酶DacApva、编码基因及其在脱乙酰反应中的应用 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE531716C (de) | 1930-06-08 | 1931-08-18 | Mergenthaler Setzmaschfab Gmbh | Einrichtung zum Ausrichten der Giessform gegenueber dem Giessformtraeger von Matrizensetz- und Zeilengiessmaschinen |
DK158316C (da) * | 1974-01-23 | 1990-10-08 | Toyo Jozo Kk | Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substituerede 7-amino-3-cephem-4-carboxylsyrederivater |
DE4126414A1 (de) * | 1991-08-09 | 1993-02-11 | Hoechst Ag | Deacetylasegene zur erzeugung von phosphinothricin oder phosphinothricyl-alanyl-alanin, verfahren zu ihrer isolierung und ihre verwendung |
DE4308061A1 (de) * | 1993-03-13 | 1994-09-15 | Hoechst Ag | Neue Aminosäure-Deacetylase mit Spezifität für L-N-Acetyl-Phosphinothricin, ihre Herstellung und Verwendung |
DE19639463A1 (de) * | 1996-09-26 | 1998-04-02 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Verfahren zur Herstellung weiblich steriler Pflanzen |
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1996
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