CN112746062A

CN112746062A - 与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN112746062A
Application number: CN202011618428.4A
Authority: CN
Inventors: 姜涛; 温春秀; 刘灵娣; 温赛群; 田伟; 谢晓亮
Original assignee: INSTITUTE OF CASH CROPS HEBEI ACADEMY OF AGRICULTURE AND FORESTRY SCIENCES
Current assignee: INSTITUTE OF CASH CROPS HEBEI ACADEMY OF AGRICULTURE AND FORESTRY SCIENCES
Priority date: 2020-12-31
Filing date: 2020-12-31
Publication date: 2021-05-04

Abstract

本发明公开了与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白及其编码基因与应用，是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质，编码所述的与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白的基因，所述基因的编码序列为序列表中序列1所示的DNA分子。本发明提供了一种PfGPPS蛋白及其编码基因，将该基因导入烟草中，得到过表达PfGPPS基因的烟草植株，将转基因烟草植株进行盆栽，成熟期收获转基因烟草叶片利用GC‑MS检测萜类物质含量，与野生型烟草相比，其萜类物质含量明显提高。因此，可以看出，PfGPPS基因及其所编码的蛋白在植物萜类物质生物合成过程中起着重要的作用。本发明所提供的PfGPPS蛋白及其编码基因在提高植物萜类物质含量研究中具有重要的应用价值。

Description

与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

紫苏(Perilla frutescens L.)为唇形科一年生草本药用植物，原产亚洲东部，分野生型和栽培型，广泛分布于我国各省区，以及不丹、印度中南半岛、印度尼西亚、爪哇、日本、朝鲜等地。紫苏在我国已有2000多年的栽培历史，北方以供油用为主，兼作药用，有西北、东北2个传统油用产区；南方主要以药用为主，兼作香料和食用。紫苏是2019年国家卫生健康委员会公布的既是药品又是食品的87种作物之一，在医药、食品领域有着重要的开发价值，近年来受到国内外的广泛关注。作为一种多用途的药用植物，紫苏的研究与应用越来越引起人们的关注。目前，国内外相关研究主要集中于紫苏的开发利用、种质资源重要农艺性状、种植栽培技术和含油量分析等方面，而紫苏的离体再生培养、转基因研究、重要物质的生物合成代谢通路及基因功能分析等方面，还很少有人进行研究。

紫苏醛作为一种单萜类化合物，其重要合成途径是MVA和MEP途径，其合成前体是IPP和DMAPP。紫苏醛生物合成代谢通路中，柠檬烯合酶、柠檬烯羟化酶和紫苏醇氧化酶相继都有研究报道，而紫苏香叶基焦磷酸合酶(PfGPPS)至今未见报道，PfGPPS是紫苏醛的生物合成中的一个关键酶，与PfFPPS、PfGGPPS共同竞争同一作用底物——IPP和DMAPP，催化合成不同类型的萜类化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白及其编码基因与应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供的与紫苏萜类物质生物合成相关的蛋白，名称为PfGPPS，来源于紫苏(Perilla frutescens L.)，如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物组织中萜类物质含量有关的由序列2衍生的蛋白质。

所述序列2由366个氨基酸残基组成。

所述编码上述蛋白的DNA分子也属于本发明的保护范围。

所述DNA分子是如下(1)-(3)中任一种的DNA分子：

(1)编码序列为序列表中序列1所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码植物萜类物质含量相关蛋白的DNA分子；

(3)与(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码植物萜类物质含量相关蛋白的DNA分子。

所述序列1由1101个碱基组成，其开放阅读框(ORF)为自5′末端起第1位-第1101位碱基，编码氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白。

上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

含有所述与紫苏萜类物质相关蛋白的编码基因的表达盒、重组表达载体、转基因细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围。

所述重组表达载体是在载体pCambia1300-GFP的多克隆位点间插入所述编码基因得到的重组表达载体；

所述载体pCambia1300-GFP是通过包括如下步骤的方法得到的：

(1)将pCambia1300载体经过Sal I和Pst I双酶切，回收载体大片段；

(2)将GFP序列用PCR的方法扩增出来，上游引物5′端加Sal I酶切位点，下游引物5′端加Pst I酶切位点。构建到测序载体Zero BackgroundpTOPO-Blunt，经过Sal I和Pst I双酶切，回收包含GFP基因的片段；

(3)将步骤(1)中回收的载体大片段与步骤(2)中回收的包含GFP基因的片段连接，得到重组载体pCambia1300-GFP。

所述pCambia1300载体购自CAMBIA公司。

扩增所述与紫苏萜类物质生物合成相关蛋白的编码基因全长或其任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种培育转基因植物的方法。

本发明所提供的培育转基因植物的方法，是将所述与萜类生物合成相关蛋白的编码基因导入目的植物中，得到萜类物质含量提高的转基因植物。

所述与紫苏萜类生物合成相关蛋白的编码基因是通过所述重组表达载体导入目的植物中。

所述目的植物为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物为紫苏(Perillafrutescens L.)。

上述萜类物质含量由GC-MS检测结果来体现。

本发明的实验证明，本发明提供了一种PfGPPS蛋白及其编码基因，将该基因导入烟草中，得到过表达PfGPPS基因的烟草植株，将转基因烟草植株进行盆栽，成熟期收获转基因烟草叶片利用GC-MS检测萜类物质含量，与野生型烟草相比，其萜类物质含量明显提高。因此，可以看出，PfGPPS基因及其所编码的蛋白在植物萜类物质生物合成过程中起着重要的作用。本发明所提供的PfGPPS蛋白及其编码基因在提高植物萜类物质含量研究中具有重要的应用价值。本发明将在农业领域具有广阔的应用空间和市场前景。

附图说明

图1为转基因植株的PCR检测(部分样品)。

图2为野生型烟草W38与转PfGPPS基因株系103、104。

图3为实时荧光定量PCR结果显示。

图4位转基因烟草的萜类物质含量测定结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

下面详细描述本专利的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利，而不能理解为对本专利的限制。

一、与萜类物质生物合成相关的蛋白及其编码基因的获得及功能验证

与萜类物质生物合成相关的蛋白及其编码基因的获得

(一)紫苏(Perilla frutescens L.)PfGPPS蛋白cDNA的克隆

实验材料：以河北省农林科学院经济作物研究所审定的紫苏品种“冀紫2号”为实验材料。

1、紫苏总RNA提取

取0.1g紫苏幼嫩叶片在液氮中研磨成粉状，加入2mL离心管，用TIANGEN的RNApreppure植物总RNA提取试剂盒(目录号：DP432)提取紫苏总RNA，试剂盒中包括：裂解液RL，去蛋白液RW1，漂洗液RW，RNase-Free ddH2O，RNase-Free吸附柱CR3，RNase-Free过滤柱CS，DNase I，缓冲液RDD，RNase-Free离心管，RNase-Free收集管。取1L于1.2％琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，另取2μL稀释至500μL，用紫外分光光度计检测其质量(OD260)和纯度(OD260/OD280)，提取的冀紫2号总RNA，经非变性胶琼脂糖凝胶电泳检测，28S和18S条带清晰，且二者亮度比值为1.5～2︰1，表明总RNA没有降解，所得mRNA符合实验要求，可用于紫苏PfGPPS蛋白cDNA全长的克隆。

2、PfGPPS蛋白cDNA的全长克隆

以本实验室构建的冀紫2号转录组数据为依据，设计PfGPPS基因的引物，进行PfGPPS蛋白cDNA的全长克隆。

(1)PfGPPS蛋白cDNA的全长克隆

根据紫苏转录组数据库获得PfGPPS基因的unigene序列，设计PfGPPS基因的5′-端和3′-端引物进行PCR反应。引物序列如下：

引物1：5’ATGAGTGTCCTTGCTGTTAATCC 3’

引物2：5’TCAATTATCCCTATAAGCAATATAA 3’

PCR得到PfGPPS基因ORF全长，回收后连接pTOPO-Blunt载体进行TA克隆，以M13F/M13R通用引物进行测序。

以上述提取的总RNA经QuantScript RT Kit(TIANGEN，Beijing)反转录为模板，用高保真的FastPfu酶，进行PCR扩增。琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，获得1101bp长度的扩增片段。

经过测序，该PCR产物具有序列表中序列1所示的核苷酸，该序列所示的基因命名为PfGPPS，该基因的编码区为序列表中序列1自5’第1-1101位核苷酸；序列表中序列1由1101个碱基组成；该基因编码的蛋白命名为PfGPPS，该蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2；序列表中序列2由366个氨基酸残基组成。

二、紫苏PfGPPS蛋白在提高植物萜类物质含量中的应用

1、植物表达载体的构建

根据紫苏PfGPPS蛋白cDNA的编码序列，设计扩增出完整编码序列的引物序列，正反向引物分别引入Kpn I和BamH I酶切位点，引物序列如下：

引物3：5’GGGGTACCATGAGTGTCCTTGCTGTTAATCC3’(下划线部分为Kpn I酶切位点)，

引物4：5’CGGGATCCTCAATTATCCCTATAAGCAATATAA3’(下划线部分为BamH I酶切位点)。

以人工合成的序列表中序列2为模板，PCR扩增后，将产物连接到pTOPO-Blunt载体(购自北京艾德莱生物科技有限公司，产品目录号为CV16)上，命名为pTOPO-PfGPPS载体，进行M13F/M13R的测序，保证紫苏PfGPPS蛋白cDNA的阅读框及酶切位点的正确。

用Kpn I和BamH I酶切表达载体pCambia1300-GFP，回收载体大片段，同时，用KpnI和BamH I酶切载体pTOPO-PfGPPS，回收约1.0kb中间片段，将回收的载体大片段与约1.0kb中间片段连接，得到目的质粒。将目的质粒转化大肠杆菌DH5a(购自北京全式金生物技术有限公司，产品目录号为CD201-01)，37℃培养20h，进行重组载体的PCR分析和酶切鉴定，并进行测序验证。测序结果表明，在载体pCambia1300-GFP的Kpn I和BamH I酶切位点间插入了序列表中序列2自5′端第1位-第1101位所示的序列，说明重组载体构建正确，将重组载体命名为pC1300-PfGPPS。

所述pCambia1300-GFP载体是通过包括如下步骤的方法得到的：

(1)将pCambia1300载体(购自CAMBIA公司)经过Sal I和Pst I双酶切，回收载体大片段；

2、植物表达载体转化农杆菌

(1)从-80℃低温冰箱中取出200μL EHA 105感受态细胞(购自北京拜尔迪生物技术有限公司)，置冰上融化，加入1μg上述步骤1得到的植物表达载体pC1300-PfGPPS，混匀。

(2)液氮冷冻1min，37℃温育5min。

(3)加入800μL LB液体培养基，28℃培养2-6h。

(4)取100μL菌液至LB固体培养基上(含100μg/mL利福平(Rif)、50μg/mL卡那霉素(Kan))，涂布均匀，将培养皿封口。倒置培养皿28℃培养2d。

(5)取PCR鉴定呈阳性的单菌落，接种到含有100μg/mL Rif、50μg/mL Kan的LB液体培养基中，28℃培养30h至对数生长期，取适量农杆菌用液体MS培养基稀释50倍备用，即得到导入pC1300-PfGPPS载体的农杆菌菌液。

3、转PfGPPS烟草的遗传转化及再生

用农杆菌介导的方法将PfGPPS的cDNA的编码序列导入到野生烟草cv.Wisconsin38(简称W38)中。具体方法如下：

(1)取经过继代培养4-6周的烟草无菌苗叶片，在超净台中切下5*5的烟草叶盘(去掉主叶脉)，悬浮于上述步骤2制备好的EHA105/pC1300-PfGPPS农杆菌菌液中，10分钟后将侵染后的烟草叶盘接种培养在固体培养基(1.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA的MS)上，28°黑暗共培养3天。

(2)将共培养3天后的烟草叶盘用含有500mg/L Car、1.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA的MS液体培养基洗涤2次后，将烟草叶盘转至含有1.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、10mg/L HPY的固体MS培养基上进行选择培养，培养条件为28℃，每天13小时、3000lx的光照。培养4-6周后将烟草不定芽转移到含有1.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、10mg/L HPY的1/2MS培养基撒花姑娘进行不定根诱导，培养条件为为28℃，每天13小时、3000lx的光照。4-8周后行成完整的再生植株，得到拟转PfGPPS基因的烟草植株。

(3)用CTAB法提取拟转基因植株和野生型烟草植株的基因组DNA。用常规方法进行PCR检测，所使用的PfGPPS基因引物为：引物1：5’ATGAGTGTCCTTGCTGTTAATCC 3’，引物2：5’TCAATTATCCCTATAAGCAATATAA 3’。在0.2ml Eppendorf离心管中加入10×PCR buffer 2μl、4dNTP(10mol/L)1μl、引物(10μmol/l)均为1μl、模板DNA(50ng/ul)2μl、Taq DNA聚合酶1ul，加H2O至总体积20μl。反应程序为94℃变性4min，58℃复性1min，72℃延伸1min30s，共35个循环。电泳检测扩增结果见图1(图1中，泳道M为Maker，泳道P为阳性对照(重组质粒pC1300-PfGPPS)；泳道W为阴性对照水；泳道L1-泳道L7为转化PfGPPS基因的烟草拟转基因植株)，从图中可见，泳道L1、L4-L6和阳性对照扩增出1101bp的目标条带，表明PfGPPS基因已经整合到烟草的基因组中，并证明这些再生植株为转基因植株；对照植株没有扩增出1101bp的目标条带。将经鉴定为转基因的烟草植株扩繁，进行萜类物质指标的测定。

4、转PfGPPS基因对烟草萜类生物合成的影响

将2株过表达PfGPPS基因的转基因株系(株系号为103、104)和野生型烟草(W38)进行扩繁盆栽(图2)，利用TIANGEN的RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒(目录号：DP432)提取烟草总RNA，实时荧光定量PCR验证过表达PfGPPS基因对烟草萜类生物合成相关基因的影响。

(1)荧光定量PCR所采用的设备为ABI PRISM 7500(操作软件为7500和7500 FastReal-Time PCR Systems,v2.0.1,USA)，荧光染料为SYBR Green。利用RealMaster Mix(SYBR Green)，(TIANGEN,北京)试剂盒，操作如下：

(a)20×SYBR solution在室温下平衡并彻底混匀。

(b)将125μL 20×SYBR solution加入至1.0mL 2.5×Real Master Mix中。

(c)反应体系如下：

(d)扩增条件如下：

(2)烟草萜类生物合成相关基因QRT-PCR验证

选取烟草萜类生物合成通路中相关基因1－脱氧木糖－5－磷酸合酶(DXS)，1－脱氧木糖－5－磷酸还原异构酶(DXR)，异戊烯基二磷酸异构酶(IDI)，法尼基二磷酸合(FPPS)，香叶基二磷酸合酶(GPPS)和萜类合成酶(TPS)，以及紫苏PfGPPS基因进行验证，以烟草Action基因为内参，利用Primer Premier 5软件设计以上基因的特异扩增引物(表1)，实时荧光定量PCR结果显示(图3)，转基因株系103和104中PfGPPS基因表达量显著高于对照W38；转基因株系103中DXS，DXR，IDI，FPPS，GPPS，IPS基因表达量与W38差异不大；转基因株系104中DXS，DXR，IDI，FPPS，GPPS，IPS基因表达量显著高于W38，这说明转PfGPPS基因到烟草染色体位置不同，导致PfGPPS基因对烟草植株萜类物质生物合成相关基因影响有差异。

表1 QRT-PCR引物序列

5、转基因烟草的萜类物质含量测定

利用GC-MS对过表达PfGPPS基因的转基因株系和野生型烟草进行萜类含量测定。具体步骤如下：

(1)将干燥的烟草叶样品净选后打粉，过60目筛。称取样品粉末0.10g放入1.5mL离心管中，加入1mL提取溶剂(正己烷)，充分震摇，超声(40KHz)提取15min，13000r·min-1离心10min，取上清液进样分析。

(2)GC-MS条件：气相色谱条件：色谱柱为HP-5石英毛细管柱(0.25μm×0.32mm×30.0m)；分流比2:1；载气为高纯氦气；进样口温度(250℃)；进样量1μL；程序升温：初始温度从45℃开始，以10℃·min-1升温到100℃；再以4℃·min-1升到280℃，保持10min。

(3)质谱条件：采用EI离子源，离子能量为70eV，接口温度为250℃，扫描质量范围：50-500amu，溶剂延迟时间为3min。

经过LC-MS分析数据显示，转基因株系104相对于野生型W38峰值有很大的差异，说明转PfGPPS基因能够提高烟草萜类物质含量。因此，PfGPPS蛋白及其编码基因可以调控植物萜类物质生物合成。

以上的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。

序列表

<110> 河北省农林科学院经济作物研究所

<120> 与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白及其编码基因与应用

<130> HSPI202012229117457

<141> 2020-12-31

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1101

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 1

atgagtgtcc ttgctgttaa tcctatcgca aaatggccgc agacaatcga tattcacggc 60

gcccggagat ccagatccac tctctttctc tcacatccac ccaacatcaa actgcccttc 120

tctctccccc tgaaaaatta ttccgtttca gcgattctga caaaacaaga taaccaaacc 180

gatgataaaa atcggatctt ttcgacttct ccgacgttag atttcaacaa atacatgctc 240

gagaaggcga gttccgtcaa caaagcgttg gaagaagcag tcctgctgca ggaacctttc 300

aagatacacg aatccatgag gtattccctt cttgccggcg gcaagagggt gcgcccgatg 360

ctgtgcatcg ccgcctgcga gctcttcggc ggtgaggaat ccaccgccat gccggcggcc 420

tgtgccgcgg agatgatcca caccatgtcg ctaatgcacg acgacctacc ctgcatggac 480

aacgacgatc tccggcgagg aaagccgacg aaccacaagg tcttcggcga ggacgtggcg 540

gttctggccg gcgacgcgat gctgtcgttc gcattcgagt acgtggccac cgcgacgaag 600

ggcgtgccgg cggcgagaat cgttcgggtg ttgggtgagc tggcgaagtc aatcgggtcg 660

gaagggctgg tggcgggaca ggtggtggat atatgctcgg aagggatggc ggaggtgggg 720

ttggagcatc tggagttcat ccaccaccac aagacggcgg cgctgctgca ggggtcggtg 780

gttatggggg ccattctagg aggcggaaac gaggaggaaa tcgcgaagct gaggaagttc 840

gcgaagtgca tcgggctgct atttcaggtg gtggacgaca ttcttgatgt gacaaaatcg 900

tcgcaggaat tggggaagac ggccggcaag gatttggtcg ccgataaaac gacttatccg 960

aagctcatcg gagttcaaaa atcaagggaa ttcgccgacg atttgaatcg ggaagctcag 1020

gagcagctca ttcactttga tcccaaaagg gctgctcctt tgattgctct cgccaattat 1080

attgcttata gggataattg a 1101

<210> 2

<211> 366

<212> PRT

<213> 蛋白质()

<400> 2

Met Ser Val Leu Ala Val Asn Pro Ile Ala Lys Trp Pro Gln Thr Ile

1 5 10 15

Asp Ile His Gly Ala Arg Arg Ser Arg Ser Thr Leu Phe Leu Ser His

20 25 30

Pro Pro Asn Ile Lys Leu Pro Phe Ser Leu Pro Leu Lys Asn Tyr Ser

35 40 45

Val Ser Ala Ile Leu Thr Lys Gln Asp Asn Gln Thr Asp Asp Lys Asn

50 55 60

Arg Ile Phe Ser Thr Ser Pro Thr Leu Asp Phe Asn Lys Tyr Met Leu

65 70 75 80

Glu Lys Ala Ser Ser Val Asn Lys Ala Leu Glu Glu Ala Val Leu Leu

85 90 95

Gln Glu Pro Phe Lys Ile His Glu Ser Met Arg Tyr Ser Leu Leu Ala

100 105 110

Gly Gly Lys Arg Val Arg Pro Met Leu Cys Ile Ala Ala Cys Glu Leu

115 120 125

Phe Gly Gly Glu Glu Ser Thr Ala Met Pro Ala Ala Cys Ala Ala Glu

130 135 140

Met Ile His Thr Met Ser Leu Met His Asp Asp Leu Pro Cys Met Asp

145 150 155 160

Asn Asp Asp Leu Arg Arg Gly Lys Pro Thr Asn His Lys Val Phe Gly

165 170 175

Glu Asp Val Ala Val Leu Ala Gly Asp Ala Met Leu Ser Phe Ala Phe

180 185 190

Glu Tyr Val Ala Thr Ala Thr Lys Gly Val Pro Ala Ala Arg Ile Val

195 200 205

Arg Val Leu Gly Glu Leu Ala Lys Ser Ile Gly Ser Glu Gly Leu Val

210 215 220

Ala Gly Gln Val Val Asp Ile Cys Ser Glu Gly Met Ala Glu Val Gly

225 230 235 240

Leu Glu His Leu Glu Phe Ile His His His Lys Thr Ala Ala Leu Leu

245 250 255

Gln Gly Ser Val Val Met Gly Ala Ile Leu Gly Gly Gly Asn Glu Glu

260 265 270

Glu Ile Ala Lys Leu Arg Lys Phe Ala Lys Cys Ile Gly Leu Leu Phe

275 280 285

Gln Val Val Asp Asp Ile Leu Asp Val Thr Lys Ser Ser Gln Glu Leu

290 295 300

Gly Lys Thr Ala Gly Lys Asp Leu Val Ala Asp Lys Thr Thr Tyr Pro

305 310 315 320

Lys Leu Ile Gly Val Gln Lys Ser Arg Glu Phe Ala Asp Asp Leu Asn

325 330 335

Arg Glu Ala Gln Glu Gln Leu Ile His Phe Asp Pro Lys Arg Ala Ala

340 345 350

Pro Leu Ile Ala Leu Ala Asn Tyr Ile Ala Tyr Arg Asp Asn

355 360 365

Claims

1.与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白，其特征在于：是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的与紫苏萜类物质生物合成有关的蛋白的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因的编码序列为序列表中序列1所示的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于：载体为将专利要求1所述蛋白的编码基因插入表达载体中，得到表达权利要求1所述蛋白的重组载体。

6.扩增权利要求2或3所述基因全长的引物对。

7.权利要求1所述蛋白、权利要求2或3所述编码基因或权利要求4所述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在调节植物中萜类含量中的应用。

8.培育转基因植物的方法，为将权利要求1所述蛋白的编码基因导入目的植物，获得转基因植物，所述转基因植物组织中萜类物质含量高于所述目的植物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述转基因植物组织为叶片，权利要求1所述蛋白的编码基因通过权利要求4或5所述的重组载体导入目的植物。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述目的植物为药用植物。