PL161165B1 - Sposób wytwarzania bialek wirusa AIDS PL - Google Patents
Sposób wytwarzania bialek wirusa AIDS PLInfo
- Publication number
- PL161165B1 PL161165B1 PL1987268266A PL26826687A PL161165B1 PL 161165 B1 PL161165 B1 PL 161165B1 PL 1987268266 A PL1987268266 A PL 1987268266A PL 26826687 A PL26826687 A PL 26826687A PL 161165 B1 PL161165 B1 PL 161165B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- gene
- env
- recombinant
- aids virus
- virus
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 92
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 53
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 45
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims abstract description 38
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims abstract description 29
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 22
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 26
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 23
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 23
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 claims description 16
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 claims description 13
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 claims description 13
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 claims description 3
- 108010034897 lentil lectin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 claims 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 claims 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 claims 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150054672 pil gene Proteins 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 12
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 abstract description 9
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 abstract description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 abstract description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 abstract description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 abstract 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 1
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 45
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 35
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 31
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 17
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 16
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 208000007218 Mungan syndrome Diseases 0.000 description 13
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 10
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 10
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 9
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 7
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ZATRYQNPUHGXCU-DTWKUNHWSA-N Arg-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O ZATRYQNPUHGXCU-DTWKUNHWSA-N 0.000 description 2
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101100173636 Rattus norvegicus Fhl2 gene Proteins 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010091092 arginyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SKHCUBQVZJHOFM-NAKRPEOUSA-N Ala-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SKHCUBQVZJHOFM-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N Ala-Asn-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- ANGAOPNEPIDLPO-XVYDVKMFSA-N Ala-His-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N ANGAOPNEPIDLPO-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- CKLDHDOIYBVUNP-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CKLDHDOIYBVUNP-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N Ala-Leu-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N Ala-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- JAQNUEWEJWBVAY-WBAXXEDZSA-N Ala-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JAQNUEWEJWBVAY-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 1
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FFZJHQODAYHGPO-KZVJFYERSA-N Ala-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N FFZJHQODAYHGPO-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- VBFJESQBIWCWRL-DCAQKATOSA-N Arg-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VBFJESQBIWCWRL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XVLLUZMFSAYKJV-GUBZILKMSA-N Arg-Asp-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O XVLLUZMFSAYKJV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- VRZDJJWOFXMFRO-ZFWWWQNUSA-N Arg-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O VRZDJJWOFXMFRO-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N Arg-His Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HNJNAMGZQZPSRE-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HNJNAMGZQZPSRE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VUGWHBXPMAHEGZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VUGWHBXPMAHEGZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N Arg-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ACRYGQFHAQHDSF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ACRYGQFHAQHDSF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N Asn-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 1
- RRVBEKYEFMCDIF-WHFBIAKZSA-N Asn-Cys-Gly Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)O)N)C(=O)N RRVBEKYEFMCDIF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QRHYAUYXBVVDSB-LKXGYXEUSA-N Asn-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QRHYAUYXBVVDSB-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- AYOAHKWVQLNPDM-HJGDQZAQSA-N Asn-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O AYOAHKWVQLNPDM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- VITDJIPIJZAVGC-VEVYYDQMSA-N Asn-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VITDJIPIJZAVGC-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- LANZYLJEHLBUPR-BPUTZDHNSA-N Asn-Met-Trp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LANZYLJEHLBUPR-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N Asn-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- CPYHLXSGDBDULY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O CPYHLXSGDBDULY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- WSOKZUVWBXVJHX-CIUDSAMLSA-N Asp-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WSOKZUVWBXVJHX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DBWYWXNMZZYIRY-LPEHRKFASA-N Asp-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O DBWYWXNMZZYIRY-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- QRULNKJGYQQZMW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QRULNKJGYQQZMW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ICTXFVKYAGQURS-UBHSHLNASA-N Asp-Asn-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O ICTXFVKYAGQURS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N Asp-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- YTXCCDCOHIYQFC-GUBZILKMSA-N Asp-Met-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O YTXCCDCOHIYQFC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AHWRSSLYSGLBGD-CIUDSAMLSA-N Asp-Pro-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AHWRSSLYSGLBGD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N Asp-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101000583080 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2a Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- CPTUXCUWQIBZIF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CPTUXCUWQIBZIF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- NQSUTVRXXBGVDQ-LKXGYXEUSA-N Cys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NQSUTVRXXBGVDQ-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YNJBLTDKTMKEET-ZLUOBGJFSA-N Cys-Ser-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YNJBLTDKTMKEET-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JIVJQYNNAYFXDG-LKXGYXEUSA-N Cys-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JIVJQYNNAYFXDG-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- UKHNKRGNFKSHCG-CUJWVEQBSA-N Cys-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O UKHNKRGNFKSHCG-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 101150048348 GP41 gene Proteins 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QJCKNLPMTPXXEM-AUTRQRHGSA-N Glu-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O QJCKNLPMTPXXEM-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CUXJIASLBRJOFV-LAEOZQHASA-N Glu-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CUXJIASLBRJOFV-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IVGJYOOGJLFKQE-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N IVGJYOOGJLFKQE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N Glu-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N Gly-Ala-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- GQGAFTPXAPKSCF-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O GQGAFTPXAPKSCF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WKJKBELXHCTHIJ-WPRPVWTQSA-N Gly-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N WKJKBELXHCTHIJ-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- LHRXAHLCRMQBGJ-RYUDHWBXSA-N Gly-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN LHRXAHLCRMQBGJ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- GDOZQTNZPCUARW-YFKPBYRVSA-N Gly-Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GDOZQTNZPCUARW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N Gly-Ile-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N Gly-Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPZSHNZQHQNO-KKUMJFAQSA-N His-Ser-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N IAYPZSHNZQHQNO-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YKUAGFAXQRYUQW-KKUMJFAQSA-N His-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O YKUAGFAXQRYUQW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HDOYNXLPTRQLAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ala-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N HDOYNXLPTRQLAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- QYZYJFXHXYUZMZ-UGYAYLCHSA-N Ile-Asn-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N QYZYJFXHXYUZMZ-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N Ile-Glu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N 0.000 description 1
- SAEWJTCJQVZQNZ-IUKAMOBKSA-N Ile-Thr-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SAEWJTCJQVZQNZ-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- BZUOLKFQVVBTJY-SLBDDTMCSA-N Ile-Trp-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N BZUOLKFQVVBTJY-SLBDDTMCSA-N 0.000 description 1
- WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N Ile-Trp-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 1
- KXUKTDGKLAOCQK-LSJOCFKGSA-N Ile-Val-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O KXUKTDGKLAOCQK-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N Ile-Val-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- REPPKAMYTOJTFC-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O REPPKAMYTOJTFC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UILIPCLTHRPCRB-XUXIUFHCSA-N Leu-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N UILIPCLTHRPCRB-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N Leu-Gly-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- HGFGEMSVBMCFKK-MNXVOIDGSA-N Leu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HGFGEMSVBMCFKK-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- JFSGIJSCJFQGSZ-MXAVVETBSA-N Leu-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N JFSGIJSCJFQGSZ-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- TVEOVCYCYGKVPP-HSCHXYMDSA-N Leu-Ile-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N TVEOVCYCYGKVPP-HSCHXYMDSA-N 0.000 description 1
- DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DCGXHWINSHEPIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N DCGXHWINSHEPIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BIZNDKMFQHDOIE-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIZNDKMFQHDOIE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IWMJFLJQHIDZQW-KKUMJFAQSA-N Leu-Ser-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IWMJFLJQHIDZQW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IDGRADDMTTWOQC-WDSOQIARSA-N Leu-Trp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IDGRADDMTTWOQC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- XZNJZXJZBMBGGS-NHCYSSNCSA-N Leu-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XZNJZXJZBMBGGS-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WQWZXKWOEVSGQM-DCAQKATOSA-N Lys-Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WQWZXKWOEVSGQM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NTSPQIONFJUMJV-AVGNSLFASA-N Lys-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NTSPQIONFJUMJV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- QYOXSYXPHUHOJR-GUBZILKMSA-N Lys-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QYOXSYXPHUHOJR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- OVAOHZIOUBEQCJ-IHRRRGAJSA-N Lys-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O OVAOHZIOUBEQCJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CNXOBMMOYZPPGS-NUTKFTJISA-N Lys-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNXOBMMOYZPPGS-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- USPJSTBDIGJPFK-PMVMPFDFSA-N Lys-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O USPJSTBDIGJPFK-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N Met-Leu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 235000016357 Mirtillo rosso Nutrition 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N N-L-methionyl-L-tyrosine Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- KUGRPPRAQNPSQD-UHFFFAOYSA-N OOOOO Chemical compound OOOOO KUGRPPRAQNPSQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- BRDYYVQTEJVRQT-HRCADAONSA-N Phe-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O BRDYYVQTEJVRQT-HRCADAONSA-N 0.000 description 1
- HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N Phe-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- CSDMCMITJLKBAH-SOUVJXGZSA-N Phe-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O CSDMCMITJLKBAH-SOUVJXGZSA-N 0.000 description 1
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- GHNVJQZQYKNTDX-HJWJTTGWSA-N Phe-Ile-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O GHNVJQZQYKNTDX-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- MWQXFDIQXIXPMS-UNQGMJICSA-N Phe-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O MWQXFDIQXIXPMS-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- OCYROESYHWUPBP-CIUDSAMLSA-N Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 OCYROESYHWUPBP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XYHMFGGWNOFUOU-QXEWZRGKSA-N Pro-Ile-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XYHMFGGWNOFUOU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N Pro-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- GVIGVIOEYBOTCB-XIRDDKMYSA-N Ser-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 GVIGVIOEYBOTCB-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- RXSWQCATLWVDLI-XGEHTFHBSA-N Ser-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RXSWQCATLWVDLI-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- UYLKOSODXYSWMQ-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O UYLKOSODXYSWMQ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- MFEBUIFJVPNZLO-OLHMAJIHSA-N Thr-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MFEBUIFJVPNZLO-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 1
- SHOMROOOQBDGRL-JHEQGTHGSA-N Thr-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O SHOMROOOQBDGRL-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- MSIYNSBKKVMGFO-BHNWBGBOSA-N Thr-Gly-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O MSIYNSBKKVMGFO-BHNWBGBOSA-N 0.000 description 1
- AYCQVUUPIJHJTA-IXOXFDKPSA-N Thr-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AYCQVUUPIJHJTA-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- NCXVJIQMWSGRHY-KXNHARMFSA-N Thr-Leu-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O NCXVJIQMWSGRHY-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N Thr-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- UMFLBPIPAJMNIM-LYARXQMPSA-N Thr-Trp-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=CC=C3)C(=O)O)N)O UMFLBPIPAJMNIM-LYARXQMPSA-N 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- RNFZZCMCRDFNAE-WFBYXXMGSA-N Trp-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RNFZZCMCRDFNAE-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- ADBFWLXCCKIXBQ-XIRDDKMYSA-N Trp-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N ADBFWLXCCKIXBQ-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- DNUJCLUFRGGSDJ-YLVFBTJISA-N Trp-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N DNUJCLUFRGGSDJ-YLVFBTJISA-N 0.000 description 1
- OGXQLUCMJZSJPW-LYSGOOTNSA-N Trp-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N)O OGXQLUCMJZSJPW-LYSGOOTNSA-N 0.000 description 1
- YRXXUYPYPHRJPB-RXVVDRJESA-N Trp-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O)N YRXXUYPYPHRJPB-RXVVDRJESA-N 0.000 description 1
- YTZYHKOSHOXTHA-TUSQITKMSA-N Trp-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YTZYHKOSHOXTHA-TUSQITKMSA-N 0.000 description 1
- TUUXFNQXSFNFLX-XIRDDKMYSA-N Trp-Met-Glu Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N TUUXFNQXSFNFLX-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- GSCPHMSPGQSZJT-JYBASQMISA-N Trp-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N)O GSCPHMSPGQSZJT-JYBASQMISA-N 0.000 description 1
- OOEUVMFKKZYSRX-LEWSCRJBSA-N Tyr-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N OOEUVMFKKZYSRX-LEWSCRJBSA-N 0.000 description 1
- ADECJAKCRKPSOR-ULQDDVLXSA-N Tyr-His-Arg Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O ADECJAKCRKPSOR-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N Tyr-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 244000077923 Vaccinium vitis idaea Species 0.000 description 1
- 235000017606 Vaccinium vitis idaea Nutrition 0.000 description 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UDLYXGYWTVOIKU-QXEWZRGKSA-N Val-Asn-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N UDLYXGYWTVOIKU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- VXDSPJJQUQDCKH-UKJIMTQDSA-N Val-Ile-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VXDSPJJQUQDCKH-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N Val-Leu-Ser Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LJSZPMSUYKKKCP-UBHSHLNASA-N Val-Phe-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 LJSZPMSUYKKKCP-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- NSUUANXHLKKHQB-BZSNNMDCSA-N Val-Pro-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 NSUUANXHLKKHQB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- MNSSBIHFEUUXNW-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N MNSSBIHFEUUXNW-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- AOILQMZPNLUXCM-AVGNSLFASA-N Val-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN AOILQMZPNLUXCM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010008237 glutamyl-valyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010026364 glycyl-glycyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- LBDSXVIYZYSRII-BJUDXGSMSA-N helion Chemical compound [3He+2] LBDSXVIYZYSRII-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010047926 leucyl-lysyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010015796 prolylisoleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 102000004217 thyroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000721 thyroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N valinyl-arginine Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
- C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
- C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
- C12N2810/6045—RNA rev transcr viruses
- C12N2810/6054—Retroviridae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/60—Vector systems having a special element relevant for transcription from viruses
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania bialek wirusa AIDS, z uzyciem rekombinanta bakulowiruso- wego w komórkach owadzich lub owadach, z n a m ie n n y ty m , ze czesc genomu bakulowi- rusa wprowadza sie do nosnika klonujacego, nastepnie do powstalego zmodyfikowanego wektora insercyjnego dokonuje sie insercji genu env, gag lub pol wirusa AIDS lub jego czesci w taki sposób, ze gen env, gag lub pol wirusa AIDS lub jego czesc ulega ekspresji pod kontrola promotora bakulowirusa zawartego w czesci genomu bakulowirusa z wytwo- rzeniem rekombinowanego wektora insercyjnego, tak zmodyfikowany gen env, gag lub pol wirusa AIDS lub jego czesc przenosi sie ze zrekombinowanego wektora insercyjnego do bakulowirusowego wektora ekspresyjnego przez zmieszanie rekombinowanego wektora insercyjnego i bakulowirusowego wektora ekspresyjnego, tak powstalym zmodyfikowa- nym [bakulowirusowym] wektorem ekspresyjnym transfekuje sie odpowiednie komórki owadzie z zainfekowanych komórek owadzich izoluje sie rekombinowane bakulowirusy zawierajace gen env, gag lub pol wirusa AIDS lub jego czesc, tak wytworzonym rekom- binowanym bakulowirusem infekuje sie komórki owadzie lub owady, hoduje sie te zainfe- kowane komórki owadzie lub owady, z wytworzeniem i ekspresja bialka wirusa AIDS i odzyskuje sie bialko wirusa AIDS. PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania białek wirusa AIDS.
Nabyty zespół zaniku odporności /AIDS/ jest epidemiczną chorobą wirusową o wielkim znaczeniu w skali światowej. Powodującym go czynnikiem jest retrowirus zwany ludzkim wirusem zaniku odporności /HIV/, zwany także wirusem uogólnionego powiększenia węzłów chłonnych /LAV/ /Barre-Sinaussi i in., 1983/, ludzkim wiruisem białaczki z komórkami T, typu III /HTLVvlll//popovic i m., 19β4/, albo wirusem związanym z AIDS /ARV//Levy i in., 1984/. Strukturę i zorganizowanie genów kilku wirusw AIDS wyjaśniono na podstawie całkowitej sekwencji nukleotydiw klonów w klonowaniu molekularnym i bezpośredniej analizy sekwencji białek wirusowych.
Białko otoczki jest najbardziej obiecującym kandydatem w rozwoju badań nad szczepionką przeciw AIDS i badań diagnostycznych /Francis i in., 1985/. Przeciwciała przeciw glikoproteinom otoczki są zwykle wykrywane w surowicach pacjentów z AIDS /Robey i in., 1985/. Poza tyra, glikopmteina otoczki przedstawia sobą główny antygen docelowy wirusa AIDS /Barin i in., 1985/.
Wytwarzanie skutecznej szczepionki przeciw AIDS zależy od zdolności wytwarzania dużych ilości bezpiecznego antygenu, który stymuluje odporność ochronną, gdy zostanie wstrzyknięty człowiekowi. Technologia rekombiracji DNA przedstawia najlepszą alternatwę wytwarzania antygenu z powodu jej odczuwalnej zdolności do wtt^arz^na dużych ilości bezpiecznych i ekonomicznych lmmunogeróa. Wybór układu Γekombirartowego do użycia /bakteryjnego, drożdżowego lub stosującego inne komórki eukariotyczne/ będzie związany z wzięciem pod uwagę następujących zagadnień: glikoproteina otoczki LAV jest specyficznie przetwarzana przez glikozylację i rozszczepienie, a więc układ rekombirartcwt powimen być zdolny do przetwarzania produktu genowego w pożądany sposób; komórki bakteryjne i drożdżowe nie glikozylują skuteczne swoich białek ekspresyjnych; podczas gdy komórki ssaków okazują się odpowiednimi wektorami ekspresyjnymi, wykazują one tę niedogodność, że zawierają wiele niepożądanych antygenów immurnreaktywnych i oprócz tego przedstawiają ryzyko w postaci tego, ze mogą być siedliskiem czynników ubocznych.
Powyższe wymgania spełnia bakulowiruow/y układ ekspresyjny, będący korzystnym układem do wytwarzania skutecznego immunogenu otoczki LAV.
Bakulowirusiw można użyć jako wysokoskutecznych eukariotycznych wektorcw klonujących i ekspresyjnych do wytwarzania białek re kombinowanych w komórkach owadzich w hodowli.
Wytwarzanie ludzkiego /3 -interferonu w komortoach owadzich z użyciem bαkulowlruscwegn wektora ekspresyjnego jest znane z artykułu O.E. Smitha i innych, Mooecular and Cellular Biology, tom 3, ran 12, ser. 183-192, grudzień 1983.
Ekspresję (i -galaktozydazy E.coli w komórkach owadzich przy użyciu weKtora bakulowirusowego opisali C.D. Ferrnch i in., Mooecular and Cellular Biologa tom 4, nr 3, str. 399-406, marzec 1984.
Bakulowirusy spełniają więcej nż tylko niezbędne wym garda przy użyciu w postaci eukariotycznych nośników klonujących i wektorów ekspresyjnych. Bakulowirusy są bezpieczne z powodu swojego wąskiego zakresu wy zorzy stywanych gospodarzy, który ograniczony jest do stawonogów. Są one zdolne do przyjęcia bardzo dużych ilości egzogennego DNA. Ich układy w postaci hodowli komórkowych są bezpieczne, nlitαanrnoΓmσwalne i skuteczne. Posiadają one bardzo skuteczny promotor poliedryny, aktywniejszy niż jakikolwiek inny znany promotor w komórkach eukariotycznych zakażonych wirusem.
Układ bekulowirunowy oferuje także duże korzyści przy wytwarzaniu pollϊϋptyd(W do użycia w mtodach diagnostycznych. Nielu ludzi i wiele zwierząt ma na ogół przeciwciała, reagujące z bakteryjnymi, drożdzowymi i heterologicznymi antygenami zgodności tkankowej. Obecność tych przeciwciał osłabia pewmość metod diagnostycznych z powodu fałszywie dodatnich reakcji z zanieczyszczającymi białkami bakteryjrymi, drożdżcwymi i ssaków, znajdowanych w preparatach wytwarzanych w odpowiednich układach ekspresyjnych. Ludzie /i zwierzęu
161 165 ta/ najprawdopodobniej nie byli uprzednio narażeni na ekspozycję immunologiczną na antygeny komórek uolyyi Oub bakiulowirusów. Komórki uoltyi i baknlowirus zastoocwany do wytwarzania białek rekombinowanych w tym układzie nie jest więc prawdopdobnie obciążony problemem zanieczyszczających antygenów rozpoznawanych przez przeciwciała norMl^i-e obecne u ludzi Oub zwierząt. Tak więc zanieczyszczenia pochodzące z komórki mooyla lub bakiuLowirusa nie będą prawdopodobnie prowadzić do fałszywie dodatnich reakcji w miodach diagnostycznych z zastoowaniem antygenów rekomblnowanych tworzonych w tym układzie.
Wytwarzanie białka otoczki jest znane z artykułu zatytuowanego AIDS Virus Env Protem Expressed from a Recombimant Vaccinia Virus“ MF.Kieiy‘'rgn i in., Bio/Technology, tom 4, wrzesień 1986, str. 790-795, który ujawnia, że sekwencję kodującą env, odnoszącą się do białka env LAV, wprowadzono do wektora stanowiącego wirus krowiarki. Powstający żywy wirus rekombincwany WTGeLAV określa następnie wytwarzanie białka env w zakażonych komórkach ssaków. To białko rekombincwaie reaguje z surowicami pacjentów z AIDS i okazuje się, że jest ono glikozyCowaie i przetwarzane w taki sam sposób, jak w przypadku autentycznego env retrowirusa LAV. Inokulacja mszy VVTGeLAV wywołuje powstanie iiO o wysokim mianie, rozpoznających determinanty krowiarki, Oecz przeciwciało rozpoznające białka env LAV ma niskie mano. Kornmrki zakażone rękombintwmym wirusem szybko uwalriLają przetworzoną postać białka env do podłoża hodowi. Tym niemnej, to podejście do zagadnienia wytwarzania i wykorzystywania białka env jako takiego, tak Jak w szczepionce przeznaczonej do wywołania odpowiedzi imInmuilogicznej na wirus LAV czyli HIV, nie Jest całkowicie zadowlające, zwłaszcza z powodu użycia wirusa krowianki jako wektora.
Informacje na temat poruszonych wyżej problemów można znaleźć w następujących publikacjach:
Barin F., McLene M.P., AlOan J.S. i Les T.H., Science 228:1094-1096 /1985/;
Barre-Sinoussi F., Chermann J.C., Rey F., Nuugjybe M.T., S., Gmest J., Dauguet
C., Axler-Blm C., Vezmet-Brun F., ftouzioux C., RozenbaurnW,, Ł Montg^rmer L.,
Science 220:868-870 /1983/;
Chakrabaati S., Robert-Giurof f M, 'łong-Steal F., Galio R.C., Moss B., Naturę 320:535-537 /1986/;
Francis D.P., Petricciani J.C., New Eng. Journal of Md. 1586-1590 /1985/;
Hu Shrn-Lek, Kosowski S.G., Dalrymple J.M, Naturę 320:537-540 /1986/;
Iddekinge 3.J.L·., Hooft van, G.E.Smith, i M.D.Summrs, V.ml^ogy 131:561 /1983/;
Kennedy R.C., Henkel R.D., Pauuotti D., Allan J.S., Lee T.H., Essex M, Dreesman GR., Science 231: 1556-1559 /1986/;
Kieny M.P., Raut mann G., Schmitt D., Dott K., Wlln-Hnbsnn S., Alizon M, Girard M, Chamret S., Laurent A, Monnagnńer L., Lecocą J-P., Research Papsrs 4: 790-795 /1986/; Kozak M, Celi 44:283-292 /1986/; Lasky L.A., Groopmin J.E., Fennie C.W, Benz P.M., CaponD.H., Dwobenko D.J., Nakamira G.R., Renz M.E., Berman 3.W., Science 233:209-212 /1986/;
Levy J.A., Hoffman A.D., Kramer S.M., Shimabururo JM. i Oskim L.S., Science 225:
840-842 /1984/;
McDougal J.S., Kennedy MS., Sligh J.M, Cort S.P., Ma^e A. i J.K.A.,
Science 231: 382-388 /1986/;
Moniagnίer I., Clavel F., Krust B., Virology 144:283-289 /1985/;
Muusing MA., Smth DM., Cabradella C.D. i mm, Mturę 313:450-458 /1985/;
Pennock G.D., OMlwemaker i L.K. Miiler, Mo^CoH. Biol. 4: 399 /1984/;
Popovic M, Saangadhaalgan M.G., Read E., i Galio R.C., Science 224: 497-500 /1984/;
Rainer L., HMaeltine w., Petard R. i inni, Naturę 313:277-284 /1985/;
Robey W.G., Safai B., Oroszlan S. i inni, Science 228:595-595 /1985/;
Smth G.E., M.J. Fraser i MD. Snmlias, J. Virol. 46:584 /l983a/;
161 165
Smith G.E., MD. Summi's i M.J. Fraser, Ml.. Celi. Biol. 3:2156 /l983b/;
Smith G.E., G.Ju, B.L. Ericson, J. Moschera, H.w. Lahm i M.D. Summers, Proc.Natl. Acad.
Science, U.S.A. /1985/ w druku/;
Starich B.R., Hahn B.H., Shaw G.M., McNeely P.D.,, Modriw S., Wolf H., Parka E.S., Farks W.P., Josrphs S.F., Galii R.C., śing-Staal F., Celi.,45:637-648 /1986/;
Summi's i G. Ju, Mol.Cell. Biol. /1985, w druku/;
Tiwbin H., Starbelin T. i Gordon T·, Pric. eatl.Acad.Sci. 76:4350-4353 /1979/ iraz Wain-Hobsin S., Sinigi P., Donos 0., Colr S. i Alizin M. Celi 40:9-17 /1985/.
Nieoczekiwanie ikazałi się, żr niezwykli cenny mteriał dia gni styczny, użyteczny w diagniziwaniu AIDS, można uzyskać wytwarzając białka wirusa AIDS spisobem według wymlazku
Zgodnie zr spisobem według wymlazku białka wirusa AIDS wytwarza się z użyciem rekombinanta baKtuLiwirusowrgi w kimórkach iwadzich lub iwadach, a crchą tęgi spisibu jrst to, zr część grnomu bakuliwirusa wpriwadza się di niśnika klinującrgi, następnir di piw sta te gi zmodyfikowanrgi wektira insrrcyjnegi dikinujr się insercji grnu rnv, gag lub poi wirusa AIDS lub jegi części w taki spisób, żr grn rnv, gag lub poi wirusa AIDS lub jegi część ulr ga rkspresji pid kontrolą promotora bakuliwirusa zawartrgi w części grnomu baku.liwi.rusa z wytworzrniem rekombinowangi wektira insrcyjnrgi, tak zmodyfikowany grn rnv, gag lub poi wirusa AIDS lub jegi część przrnosi się zr zrekombinowanrgi wektira insercyjnegi di bakuli wirusowrgi wektira ^sprosy jnegi przrz zmieszam rekombinσwanegl wektira insrrcyjnego i bakulowirusowrgi wektora rksprrsyjnrgi, tak piwstałym zmodyfikowanym bakulowiruiowym wektorem rkspresyjnym transfekuje się idpowiednir ki morki iwadzie, z zainfekowanych kimórok iwadzich iziluje się rekombinσoaπ bakuliwirusy zawierającr grn rnv, gag lub poi wirusa AIDS lub jegi część, tak wytwirzonym rekombrnowanym bakuliwirusera infekujr się kimórki iwadzir lub iwady, hidujr się te za miękłam kimórki iwadzir lub iwady, z ^^-t^c^irzrni^e^m i rkspresją białka wirusa AIDS i idzyskujr się białko wirusa AIDS.
Gen iticzki LAV /env/ kidujr glikipritnnę i masu cząsteczkowej 160 000, która w niniejszym ipisie zistała nazwana gpl60. W kimórkach zakazinych wirusem LAV prrkursir gpl60 jrst rizszczrpiany przy klnuIroatywnej srkwencji zasadowych aminikwasćw z rtoorzIniem .e-kińciwej glikipriteiny grl20 i mmejszegi G-klńcoorgl białka gp4l. Glikipritriny LAV gpl60, gpl20 i gp+1, zawierają, idpiwiednu 833, 488 i 345 amlnlkoasóo.
Dojrzała gpl20 jrst połączona z iticzką wirusa i jrst uważana za zrwnętrzną, pidczas gd, gF41 ma dwa długu ciągi rrszt hydrofobowych i jedrn lub iba z nich mogą przrnikać w poprzrk itoczkę wirusa. rnkjrsir gplóO, dojrzałą gpl20 i białka gp41 wykrywa się immunisurowicami w większości isobnikćw pi rkspozycji. Wytężani takżr, iz białko gpl20 wiążr się z cząsteczką T4 na powierzchni Kcmmóki idącej limfocytem indnktortjyem/pomlcnlczym T i w ter. spisób białko gpl60 LAV jIut w stanie indukować tworzenir się syncytiurn z udziałem kimórek, któro przrprawadzają rk-sprosję białka receptoiowrgi T4. Wiadomi również, żr 104 aminikwasy kaI'tίoRsyilońcowI gp!60 nir są wymaiganr di fuzji limfocyttw T4+T-.
Glikiprotrina iticzki wirusa AIDS gpl60 LAV piwstajr w rrzultacie rkspresji genu rnv AIDS, który klonowani z zakaźrogi izilatu LAV. Gen rnv LAV użyty di rkspresji kidujr tylko z wykorzystaniem srkwencji znajdowanych w natywnyra genir rnv. LAV. Wirus anv LAV wpriwadzini di rekombinlwanIgl bakuliwirusa tak, zr rksprrsja dawała w rrzultacie dojrzałe białki, które nir zawierało zmenunych iub didatkowych amlnlkoaućw. 2 szrrogu wytworzinych rekombinantiw, jedm zawierał całkowity gen rnv LAV, a innemu brakiwałi ikołi 100 am.nikwasów przy C-kińcu gpl60. Deieij; tę FrzIprowadzlnl w crlu ułatolIria stabilizacji utwirzinrgi w wyniku rkspresji ra^imbmwarogi białka gpl60 z ^^sunięciem dwu hydrofobowych dimen ibrcnych w gp41.
3iałki gpl60 LAV wytworziro spOsobem według wynalazku w układzir Iksprosyrnym kimórrk iwadzich jrst woln id zanirczyszczających białek kimórok ssaków. Ekspresję i iczyszczanir białka gplóO przeprowadzon w war inkach pizwalających na utrzymanir struktury natyw6
161 165 nego białka i jego aktywności biologicznej. Za pomocą immunoprecypitacji, blottingu irntodą Westerna i techniki ELISA wylizano, że utworzone w rezultacie ekspresji bia&to env HIV przejawia w wysokim stopniu reaktywność z surowicami pacjent! z AIDS.
Poniżej om!iono dokładniej realizację sposobu według w/r^ł-azku z powołaniem się na rysunek figur bliżej wyjaśniających zastosowane w tym sposobie środki techniczne.
Figura 1 przedstawia sekwencje nukleotyd! genu otoczki /o pełnej długości/ izolatu LAV-la, czyli genu niosącego informację o budowie białka otoczki wirusa LAV gpl6O, który jest produktem otrzumJW,ciWm sposobem według wyrnlazku. Sekwencja nukleotyd! Jest przedstawiona łącznie z przewidywaną sekwencją aminokwasów. Informacje dotyczące sekwencji otrzymano z Banku Informacji Sekwencji Genetycznych GENBANK1· Departamentu Zdrowia Stan! Zjedn. A ram ryki. Μιιμγθ^ι nukleotyd! postępuje od pierwszego nukleotydu przypuszczalnego kodonu inicjacyńnego ATC. Aminokwasy numeruje się od kodonu inicjacyjnego ATG. Regiony odpowiadające sygncS(Włemn peptydowi zrwnątrzkomórkowej glikoproteiny /gpl20/ i transbłonowej glikoproteiny /gp4l/ są przedstawione razem z proponowanymi peptydcwymi mejscami rozszczepienia i związanymi z asparaginą miejscami glikozylacji. Odnośne miejsca enzym! restrykcyjnych są wyliczone poniżej sekwencji iuklΓStyd!.
Figury 2A i 2B przedstawiają struktury rekombinowanych plazmid! odpowiednio pl6l4 i pl774. Plazmid pl774 jest ^kombinowanym wektorem insercyizym stooowanym w sposobie według wynalazku, a plazmid pl6l4 /otrzymany ze zrekombinowanego plazmidu NA-2, su!ioiegs bliżej w przykładzie/ służy do jego wytwarzania.
Figura 2A przedstawia strukturę zrekombinowanego plazmidu pl614, który powstał przez wprowadzenie fragmentu restyykcyjnego Κρη I 2800 bp /par zasad/ glikoproteiny gpl60 do fragmentu rrstyjkcy jnego Κρη I plazmidu pUC18, będącego dobrze znanym nośnikiem klonującym. Fragment restrykcyjny KpnI 2800 op otrzymany z Na-2 plazmidu /fig. 5/ koduje taki env gen, któremu do pełnej sekwencji brakuje z N* końca fragmentu 121 bp.
Flazmid pl774 zawiera całkowitą sekwencję kodującą genu env LAV, skróconą o kodon startowy ATG. Plazmid pl774 powstał przez wprowadzenie syntetycznego oligomeru o 121 bp do fragmentu restyykcyjnego Smal plazmidu pl6l4 metodą tępych końców. Syntetyczny oligomer o 121 bp uzupełnia miejsce odciętego fragmentu env genu otoczki LAV /fig. 2B/.Plazmid skonstru owano w 2 stadiach:a firament KpnI genu rnv LAV o 2686 parach zasad/bp/ w<s:lIyębnisns z p1614 i •Klonowano do miejsca KpnI pUC18, tak, że miejsce SmI pUC18 było w górę od sekwencji genu env, b/ syntetyczny oligomer o 121 parach zasad włączono do mejsca SmI metodą łączenia tępych końców. Strzałki wskazują polarność sekwencji kodujących. Przedstawiono odpowiednie miejsca endonuklraz restrykcyjnych. Sekwencję nukleotyd! syntetycznych olasomer! otrzymanych dla cel! wy na la z ku skonstrucwano za pomocą Pharmacia Gene Assembler w oparciu o przewidywaną sekwencję aminokwas! regionu LAV z zastos(wranieu korzystnego użycia kodon! genu poliedryny.
Tak więc w etapie b/ przez włączenie syntetycznego oligomeru do plazmidu pl6l4 uzupełnia się sekwencję genu rnv LAV.
Figura 3 obejmująca fig. 3A, fig. 3B i fig. 3C przedstawia strukturę wektor! inercyjnych MGGs3, MGGsJ+2, MGS-4 i MG3-5, pokazanych z odpowiednimi miejscami endonuklraz restrykcyjnych i sekwencją nukleotyd! /polarność sekwencji promotorowych od lewej do prawej/. Przedstawione wektory zawierają część genomu bak^nlswirusa. iMją one włączone co najmniej brakujący kodon starowy ATG dla struktury zawartej w plazmidzie pl774, promotor poliedryny i część genu poliedryny.
Wektor insrrcyjry M(G-1 strunstnsow^ns z fragmentu restrykcyJnego EcoRI-I klonu DNA wyodrębnionego z izolatu AcMNPV oczyszczonego techniką łysinek.
Wektor rnisei^cy^^r^y MGS-1 składa się z następujących części strukturalny ch /patrz fig.3/: sekwencja o 4000 par zasad w górę od kodonu imc jacy Jnego ATG genu poliedryny; polilinker wprowadzony na drodze ukierunkowanej uutaaenezz, który zawiera kodon inicjacyjny ATG i
161 165 miejsca restrykcyjne Srol i KpnI; sekwencja o 1700 parach zasad rozciągająca się od miejsca restrykcyjnego KpnI /wewnętrznego w stosunku do genu poliedryny/ do końcowego mejsca restrykcyjnego EcoRI klonu EcoRI-I.
wektor insercyjny MS-3 jest taki sam jak M(S-1, z>tą różnicą, ze poliUiker składa się z miejsc restrykcyjnych -ma, Kpirt, Bg II i segmentu uniwersalnego kodonu stop.
Wektor insercyjny MGS-2+3 jest taki sam jak MGS-3, z tą różnicą, że zawiera on dwie dodatkowe reszty cytozyny w pozycji +3 MS-3 i ma raniej o jedną resztę guanozyny w pozycji +4 MGS-3. Końcowym wynikiem jest przesunięcie w stosunku do ffiS-3 ramy kodonowej o jeden nukLeotyd.
Wektor insercyjny MGS-4 ma taki sam model strukturalny jak tMS-3, z tą różnicą, że skonsl^ju^twano go z syntetycnnym polilńnkerem, który zawiera sekwencje kodujące pierwszych 10 aminokwasów N-końcowej części genu poliedryny, a następnie miejsca restrykcyjne dla -ml, KpnI, Bglll i segment uniwersalnego kodonu stop. Wektor ten skonstruowano w oparciu o obserwację, że można osiągnąć podwyższony poziom ekspresji, jeśli kodony pierwszych 14 aminokwas^ z N-końca genu poliedryny są sprzężone z N-końcem obcego genu /-mith i in., 19S3/.
Wektor insercyjny MGS-5 ma taki sam model strukturalny, jak MGS-3, z tą różnicą, że skonstruowano go z syntetycnnym polilikkerem, który zawiera sekwencje kodujące odszczepialny peptyd sygnałowy IL-2, a następnie miejsca restrykcyjne dla EcoRI, KpNI, Bglll i segment uniwersalnego kodonu stop. Wektora tego używa się do zapewnienia wewnntrznych sekwencji env LAV z sekwencją peptydu sygnałowego, co do której wykazano, że jest skutecznie rozpoznawana i usuwana w komórkach owadów /-mith i in., 1985/.
Figura 4 przedstawia przewidywaną strukturę drugorzędową i modele hydrrifilowości prekursora gpl60 na podstawie analizy komputerowej z użyciem programu Chowa i Fastmana /Biochemistry, 13, 222 /1974/.
Figura 5 przedstawia strategię klonowania i otrzymywania rekombinowanych wektor<w insercyjnych A, A-1, B-l, C-L będących plazmidami. Te plazmidy stosuje się do wytwarzania zmodyfikowanych bakulowirusowych wektor<w ekspresyjnych poprzez zmieszanie ich z bakiJLowirusówym wektorem ekspresyjnym, poprzez rekombirncję homologiczną.
Klonowanie i ekspresja sekwencji kodującej obce białko w wektorze bakul^c^w^i^uoOT^y^m wymaga, aby sekwencja kodująca była związana z jednej strony z promotorem poliedryny i z sekwencjami położonymi dalej w kierunku w górę, a z drugiej strony ze skróconymi sekwencjami kodującymi poliedrynę, tak, aby w wyniku homoOoglcziej rekombiracji z genomem bakulowiirusa nastąpiło przeniesienie obcej sekwencji kodującej wraz z promotorem poHedryny i z nieaktywnym genem poliedryny. Zgodnie z tym zaprojektcwano różne wektory insercyjne nadające się do zastosowania w konstrukcji genu env LAV. Każdy z opisanych powyżej wektorów insercyjny ch zawierał kodon inicjacji translacjiTTS. Insercji obcych sekwencji do tych wektorw dokonuje się w taki sposób, aby schemat translacji ustalony kod^em inicJacyitym był utrzymany prawidłowo wzdłuż obcych sekwonci..
SekóencJa promotorowa użyta do ekspresji białka env jest sekwencją genu poliedryny /occ/ pochodzącą z bakulowirusa iclMPV, to jest wirusa jądrowej poli-odrozy intlgrapha californica, stosowanego zgodnie z korzystnym wariantem sposobu według wyrnlazku. icMNFV i preparaty wyjściowe ^kombinowanego bakiuLowirusa utrzymuje się w komórkach -podoptera frugiperda /ang. fali ar^^^c^r·!. Rekomlint konstruuje się tak, że gen Pn /poHad^ny/ ulega delecji, co nadaje ^kombinowanemu bakulowirusowi cechę occ”. Pozwala to na łatwą identyfikację rekolbinlóanych bakulowirustw po prostu na podstawie molffOogli łysinek.
Wyizolowany zmcolySkowany bakulowiruscwy wektor ekspresyjny stosuje się do zakażania dowolnej permisyjnej lub półuerlisyjnei popiu.acji komórek utrzymywanej jako linia hodow lana lub jako część całego owada.
Z zakażonych komórek izoluje się rekolilnowany bakulowirus zawierający gen wirusa LAV
161 165 i zakaź się nim komórki owadzie lub owady, które hoduje się w celu ekspresji i produkcji białka wirusa LAV. Powstałe białko ^wyodrębnia się i ewentiuilnie oczyszcza, korzystnie na drodze chromaogrrfii powinowactwa do lektyny z soczewicy, a następnie frakcjonowania otrzymanych glikoprotein pod względem wielkości drogą chromatograf ii sitcwo-molikulirne J.
Białko gpl6O wytworzono sposobem według wynalazku w różnych ilościach, czystości i postaciach, takich jak w jaoowym buforze wodnym w stężeniu około lOOpg białka otoczki na ml przy czystości od 50%, Jak to określono za pomocą analizy EPLC w ΞOO-ppllakΓyllamicdzie. Stwierdzono, że białkto gpl6O LAV jest stabilne w ciągu co najmniej sześciu tygodni w temperaturze 4°C. Zapewniono to btołto w i-losciach lub objętościachl· do pojedynczego użycia i. jest lnl przechowywane z dot>rym skutkiem w tempera turze -7O°C. pożądane Jest, at>y unito ó powtarzania cyitLi zamrażania i rozmrażania. Rozcieńczenia można dokonać z użyciem roz-iwurów zawierających odpowiednie białka lub detergenty, aby zapobiec utracie białka i aktywności biologicznej. Do odpowiednich rozcieńczalnkóó należy 0,1% bydlęca albimina surowicza /BSA/ lub jej ekwiwaaent, 0,1% surowica w wodzie jałowej lub podłożu hodowli i 0,1% siarczan dldecylovo-sodwy lub inny odpowiedni detergent w wodzie lub buforze. Białko wytwarzane sposobem według wynalazku gpl60 LAV konfekcjonuje się w porcjach różniących się wŁ^^Lkością zależnie od potrzeby i przewidywanego zastosowania, jak np. opakowania zawierające 25 yug, 50 /ug lub 100 yig białka. Białko jest użyteczne w badaniach in vitro i innych poszukiwaniach, w zależności od rozrnitych aspektów badań nad AIDS, obejmujących rozwijanie sposobów otrzymywania szczepionki, blotting meeodą '^esterna, techniką ELISA, wiązanie sią z receptorami, imnunoprecypitację, wytwarzanie immunosurowicy, tworzenie syncytiim i inne zastosowania, w tym badania fizyczne oraz jato wzorzec porównawczy.
Blotting metodą westerna stanowi jedną z najbardziej swoistych i czułych metod, dostępnych przy wykrywaniu przeciwciał przeciw LAV i często stosuje się go w rozmitych aspektach badań nad LAV. Jak wspumnano uprzednio, prekursor gplóO, dojrzała gpl20 i białka. gp4l, wykrywane są przez immunosurowice osobników seropozt'tywoych pod względem LAV. Zgodnie z t>m, w jednym z zastosowań wynalazku, białko otoczki wirusa LAV lub env stosuje się na odpowiednim podłożu, takim jak podłoże ceramiczne, szklane, płytki polistyrenowe, dołki lub błony, takie jak paski membrany nitrocelulozowej, w celu wykorzystania w metodach wykrywających przeciwciała przeciw LAV.
W szczególności, zgodnie z tym zastosowaniem wyr^ł.azku, paski TOmbrany nitrocelulozowej impregnuje się elektroforetycznie wydzielonym rekombinowanym białkeern otoczki LAV, gpl60 LA/, do użycia w blottnngu metodą westerna, czyli jako pasków do blottingu. Ponieważ gp env LAV wytwarza się sposobem według wynalazku w układzie ekspresynnym komórek owadzich, jest ona wolna od zanieczyszczeń białkami komórek ssaków. Stwierdzono, ze Maeriał ten zdeponowany na paskach ο^^οβ^Ιο^'^ ch do użycia jako paski do blottingu mtodą Westerna, jest w wysokim stopniu rea^yy^Oy z surowicami pacjentów z LAV. gpl50 LAV zdeponowaną na paskach oιitlocelllzlOTych badano, i to z dobrymi rezultatami, z udziałem ludzkich dodatnich surowic LAV, w rozcieńczeoiach l/OOO do l/OOOOO. Swoiście związane przeciwciało wykryć można albo odczynnikami związanymi z enzymami, takimi jak fosfataza alkaliczna lub pmksydaza, skoojugcwanyml drugimi przeciwciałami, albo swoistymi przeciw-przeciwciałami, lub wreszcie białkeem A znakowanym jodem radioaktywnym. Znane są procesy lmmunologiczor stosowane w blottingu metodą weSterna, w których wykorzystuje się te specjalne zastosowania wynalazku, to jest nośniki białka env LAV jako impregnowane paski do blottingu metodą We Sterna.
Paski gpl60 lub nośniki otrzymuje się w płytkach do jednoraztwego użycia z odpowiednią ilością pasków, np. 8, w ośmiu oddzielnych dołkach. Wszystkie procesy inkubacji można przeprowadzić w płytce, która jest zaopatrzona w pokrywie», tak, że płytki można użyć jako dogod nego pojemnika do przechowywania rozwiniętych naniesień metodą Westerna lub wyników detekcji. Każdy taki pasek Jest impregnowany rekombincwanym białkom gpl60 otoczki LAV, rozdzielonym za pomocą elektroforezy w 10% żelu SDS-pollakryloamdlwvtym, a następnie pΓzeoiesionym
161 165 elektroforet,cznie na nitrocelulozwe membrany, albo paski, albo nośniki. Wytworzone tak produkty są użyteczne przy wykrywaniu m vitro przeciwciał przeciw otoczce LAV do badań na zwierzętach, albo do badań z użyciem hodowli komórkowych lub tkarktowych, w zależności od różnych aspektów poszukiwań wykrycia przeciwciał przeciw LAV, do Kontroli jakości, screeningu banku krwi i rozpoznawania AIDS. Stwierdzono, że mtroceluozzwe nośniki membranowe są stabilne w ciągu co najmniej 6 tygodni w tempreraturze pokojowej i prawidłcwo przechowuje się je, jak w płytkach, w miejscu zimnym i suchym.
Płytki ELISA gpl60 LAV otrzymano jako płytki do jednoraztwego użytku z odpowiednią ilością, taką jak 96, oddzielnych dołków. Wszystkie procesy inkubacji prowadzi się w płytkach. Do każdego dołka dodaje się w odpo-wedniej ilości gpl6O LAV, tak jak np. 100 yiH oczyszczonej gpl60 w stężeniu 1 yug gpl60 LAY na ml.. Dopuszcza się do przylgnięcia białka gpl60 HIV do tworzywa sztucznego w dołkach w ciągu odpowiedniego okresu czasu, tak jak przez noci w temperaturze 4°C. Następnie usuwa się pozostały płyn z tartego dołka w płytkach ELISA i pozwala się na wy schnięcie tych płytek w temperaturze pokojowej. Stwierdzono, że powstałe płytki z gpl60 LAV wprowadzone do dołkców są stabilne w temperaturze pokojowej w ciągu co najmniej 6 tygodni i prawidłowo przechowuje się je, tak jak poprzednio wspomniane płytki, w miejscu zimnym i suchym. wytworzony produkt jest użyteczny przy wykrywaniu przeciwciał przeciw otoczce LAV, lub jako antygen do badań na zwierzętach, albo do badań z zastosowaniem hodowli komórkowych lub tkariowych, w zależności od różnych aspektto poszukiwań związanych z AIDS, w tym do techniki ELISA, do screeningu, do badań diagnostycznych ludzkich surowic pod względem obecności przeciwciała przeciw LAV lub antygenu.
Sposób według wynalazku ilustruje następujący przykład.
Przykład. Konstrukcję rekombinantto bakulowirusa niosących kodujące sekwencje LAV przeprowadzono następująco. Zastosowano rekcmbinowany plazmid oznaczony NA-2, składający się z segmentu o 21,8 kilozasady całkowitego prowirusa LAV wprowadzonego do pUC18.
Klon ten był zakaźny, ponieważ mógł wytworzyć wirusa po transfekcji pewnych komórek ludzkich. Kompletne sekwencje genu otoczki NA-2 otrzymano ze szczepu LAV HIV /Barre-Sinoussi i in., 1985/.
Gen otoczki LAV zawiera otwartą ramę odczytu, która koduje 861 aminokwasów zaczynając kodonem Met As^i-n-Hobson i in., 1983/. Szczep HTLL--II BHIO zawiera 856 kodonów /Stanich i m., 1986/.
Sekwencja peptydu sygnałowego zawiera 30 aminokwasów /2 z nich różnią się od aminokwasów z BHIO/; część pozakomórKo^a składa się z 486 aminokwasów /14 z nich różni się od aminokwasów z BHIO/; a region transbonoowy składa się z 345 aminokwasów /5 z nich różni się od aminokwasów z BHIO/. Fig. 1 przedstawia sekwencję nukleotydów i odpowiadającą jej sekwencję aminokwasów genu env LA- użytego w tych badaniach. Peszty aminokwasowe numeruje się zaczynając od przypuszczalnego sygnału inicjacyjnego Met. Reszty aminokwasowe przytaczane w nitiejzyym opisie odpowiadają numerom pokazanym na fig. 1.
Zdecydowano przeprowadzić ekspresję różnych domen genu env LAV w uzupełnieniu do całkowitego polipeptydu g/3l6O. Oparto tę decyzję na kilKu faktach, w tym na strukturze białka i heterogenności izolaói' retrowirusa AIDS, o Której donoszono /Benn 1 in., 1985, Hahn 1 in., 1985/. Zastosowano program komputerowy, który przewiduje drugorzędową strukturę białek z nałożony mi wartościami hydrofilowości /Chow i Fastman, 1984/. Analiza przedstawiona na fig. 4 ujawniła kilka domen hydrofitowych z obrotami /5 . Wykazano, że te domeny są połączone z anty genowymi epitoparai 1 strukturannym umiejscowieniem Aesthoff i m., 1984+/.
W oparciu o te wr^iki i obecność dogodnych miejsc restrykcyjnych zdecydowano przeprowadzić ekspresję C-końcowych skróconych form otoczki białka pokazanego na fig. 4. Korzyścią wynikającą z t\ch konstrukcji jest otrzymanie progresywnych delecji zaczynających się z C-końcową domeną hydrofobową. Oprócz tego zdecydowano tez przeprowadzić ekspresję regionu objętego przez sekwencje kodujące gp41. Co najmniej dwa /2/ immunodomirentowe epitopy za10
161 165 warte są w regionach rających ulec ekspresji. Dla tych konstrukcji zaprojektcwano wektor zawierające rozszczepialny sygnał dla IL-2. Ostatnio wykazano, że peptyd sygnałowy powodował towarzyszenie ekspresji genu IL-2, z rekombinowanego genomu bakulowirusowego, prawidłowego przetwarzania komórkowego w zakażonych komórkach /Smith i in., 1985/.
Strategię klonowania obmyloną dla ekspresji sekwencji env LAV przedstawiono na fig.5·
Gen otoczki początkowo wy izolowano z NA-2, jako fragment restrykcyjny EcoRl/SacI o 3846 parach zasad i Klonowano do miejsca restrykcyjnego EcoRl/SacI pUC13. Fow stały plazmid oznaczono p708. Gen otoczki następnie izolowano ponownie jako fragment restyykcyjny KpnI o 2800 parach zasad i klonowano do miejsca restykcyjnego KpnI pUC18. Pozostały klon oznaczono pl614 /patrz fig. 2A/. Ten fragment restrykcyjny KpnI zawierał nieco skróconą część genu otoczki, tak, że utracono sekwencję o 121 parach zasad odpowiadającą N-końcowi. Tę utraconą część, która zawierała sekwencję peptydu sygnałowego, zastąpiono w genie przez włączenie dwunicicwego syntetycznego oligomeru, zaprojektowanego na podstawie sekwencji aminokwasów LAV z użyciem korzystnych kodonów genu poliedryny. w celu ułatwienia dalszych mnipulacji nową sekwencję restrykcyjną Sml wprowadzono jednocześnie w miejsce kodonu inicjacyjnego ATG. Kodon inicjacyjny ATG powinien być wprowadzony przez wektor insercyjny. Powstały plazmid oznaczono pl774 i przedstawiono na fig. 2B.
Fragmenty restrykcyjne z pl774 zawierające sekwencje kodonowe różnych domen otoczki LAV klonowano do wektorów MGS tak, ze kodon inicjacyjny ATG wektora insercyjnego był w ramie z kodonami genu otoczki. Przeprowadzono następujące konstrukcje /patrz fig. 5/.
A. gpl60 o pełnej długości klonowana jako fragment z trawienia Srał i częścówego KpnI do MGS-3 w jego miejscu Sml. Klon ten zawierał wszystkie kodujące sekwencje gpl60 z wykorzystaniem jej autentycznego kodonu terminacyjnego translacji.
A1 gpl60 o pełnej długości klonowana jako fragment z trawienia Srał i częścotwego KpnI do MGG-4 w jego miejscu Sml/ Kpinl. Klon ten za^w^ra całość sekwencji kodujących gpl60 z wykorz>staniem jej autentycznego kodonu terminacyJnego translacji.
3. Skrócona gpl60, klonowana jaxo fragment restrykcyJny SmalfeamHI w miejscu restrykcyjnym Sml/Bglll MGG-3. K.on ten zawiera sekwencje kodujące aminokwasy 1-757 gpl60 z wykorzystałem kodonu terminacyJnego zapewnionego przez wektor [MG^.
B!. Skrócona gpl60 Jako fragment restrykcy jry Sml/BarnHI w Mejscu ^st^^ynym Sraa/Bglll MGGs4. Klon ten zawiera sekwencje kodiujące aminokwasy 1-757 gpl60 z wykorzystaniem kodonu terminacy jnego zapewnionego przez wektor iWG^.
C. Skrócona gpl60 klonowana jako fragment Sraa/HiniIII, uzupełniony w Hindlll, w miejscu Smel MGG^. Klon ten zawiera sekwencje kodujące aminokwasy 1-645 gpl60 z wykorzystaniem kodonu terminacy jnego zapewnionego przez wektor MGG^.
D. gpl20 o pełnej długości klonowana jako fragment restykcyjny z trawienia Srał i częściowego Bglll, do której dodano syntetyczny linker DNA do miejsca Bglll w celu uzupełnienia w sekwencjach od miejsca Bglll /przy kolonie aminokwasu 472/ do ostatniego C-końcowego kodom gpl20. Klon ten zawiera sekwencje aminokwasów 1-516 przedstawiając całkowitą sekwencję kodującą gpl20. Kodonem terminacy ny m translacji jest TAA dostarczony przez wektor
MGG-3.
E. Skrócona gFl20, klonowana jako fragment restrykcyjny z trawienia Smal i częściowego Bglll do miejsca restrykcyjnego Sral/ł^glll Ι®^.
F. Skrócona gpl20, klonowana jako fragment restrykcy Jny Sml/Bglll do MGG-3 w jego miejscu Smal/egHI. Klon ten zawiera sekwencje kodujące aminokwasy 1-279 z wykorzystaniem kodonu terminacyjnego dostarczonego przez wektor MC£s3.
G. -króclia gpl20, klonowane jako fragment restrykcyjny Sml/Dral do MGG-3 w jego miejscu Smal. Klon ten zawiera sekwencje kodujące aminokwasy 1-129 z wykorzystaniem kodom terminach jnego dostarczonego przez wektor MGS-3.
H. Powyższa konstrukcja Sml/Dral, do której wprowadzono sekwencje kodujące fflgAg, jako
161 165 fragment BaraHI, do miejsca BgUI umiejscowionego na wektorze w dół. Klon ten zawiera sekwencje kodujące pierwszych 129 N-końcowych aminokwasćw gpl2O, a następnie, w ramie, sekwencje kodujące HBsAg.
I. gp41 klonowana jako fragment restrykcyjry BgUI do MG-3 w jego miejscu BgUI. Klon ten zawiera sekwencje kodujące am.nokHasy od, 472 do C-końca gpl6O.
J. gp41 klonowana jako fragment Sral/KpnI wyodrębniony z P3156 i klonowany do wektora MCS>-5 przy wyciętym miejscu EcoRI i miejscu KpnI. Klon ten zawiera sekwencje kodujące aminokwasy od 473 do C-końca gpl6O.
K. Skrócona gp41, klonowana jako fragment BglllBBamHI do MGS-3 do jego miejsca BgUI. Klon ten zawiera sekwencje kodujące aminokwasy 472-757 gpl6O z wkorzystaniem kodonu terminacyjnego dostarczonego przez wektor MGSs-i.
L. Skrócona gp41, klonowana jako fragment Kpnl/3amHI wyodrębniony z p3l66 i klonowany do pMGS-5 w jego mejscu Kpnl/BarnHI. Klon ten zawiera sekwencje kodujące peptyd sygnacewy kodujący aminokwasy 472-757 gpl6O.
Otrzymywanie i selekcja rekombinowanego bakulowirusa.
Plazmidy rekorabinacy jne genu env LA’/ w'trącono fosforanem wapnia z AcMNPV i dodano do nie zakażonych komorek Spodoptera frugiperda. Następnie chimeryczne geny wprowadzono do genomu AcMNFV na drodze rekombinacji homooogicznej. Rekombinowane bakulowirusy zidentyfikowano na zasadzie morfologu łysinek occ. Łysinki te wylkzują nadający się do identyfikacji efekt cytopatyczny, lecz nie wykazują okluzji jądrowych. Przeprowadzono dwa dodatkowe procesy oczyszczania następujące po sobie techniką łysinek w celu otrzymania rekombinowanego bakulowirusa. Rekombinowany DNA bakulcwirusiwy anal-iowano pod względem specyficzne j co do miejsca insercji sekwencji env LAV przez porównanie jego charaktery styki restrykcyjnej i hybrydyzacyjnej z bakuiowiruoowym DNA typu dzikiego.
Ekspresja env LAV z rekombrnantowych bakulowirusiw w zakażonych komórkach owadzich.
Ekspresja sekwencji env LAV z wirusiw rekombinowanych w komórkach owadzich powinna doprowadzić w wryniku do Syntezy pierwotnego produktu translacji w postaci preprobiałka zawierającego wszystkie aminokwasy kodowane od inic jacy jego kodonu ATS wektora ekspresyjnego w dół od promotora poliedryny. Ten pierwotny produkt powinien składać się z am.nokwasów dobieranych w wyniKu translacji Kodonów dostarczonych przez wektor rekombinowrany.
I tak np., pierwotny produkt translacji Konstrukcji A powinien powstać w rezultacie odczytania na N-końcu: Met-Pro-Sly-Arg-Val. Kodony Met-Fro-Sly zostały zapewnione w rezultacie strategii klonowania.
Dwa potencjalne miejsca przetwarzania dc rozszczepienia prekursorowej glikoproteiny env doprowadziłyby najpieiw do usunięcia 30 reszt amisrkoasπoych peptydu sygnałowego przy N-koncu, a następnie do utworzenia dużego transbonoowego białka zawierająoego 345 aminokwasów i części zewnątΓzkomórkroej z 436 aminokwasów. Na ogół uważa się, ze rozpoznanie i odszczepienie peptydu sygnałowego jest wymagane do skutecznego przetwarzania komórkowego.
celu określenia ekspresji sekwencji genu env LAV z rekombinowanych bakulowirusiw zakażono hodowle komórek owadzich każdym z różnych wirusiw rekombinowanych w obecności 35 35
S-metioniny, S-cystyny lub 3H-rannoiy w późnych okresach zakażenia. Znakowane ekstrakty komórkowe przedstawiono poddając je elektroforezie w żelu SDS-poliakrylolmlroyym /PASĘ/ i autoradiografii.
Użyto trzech typiw surowicy do oceny autentyczności białka rekombinowanego wry-tworzonego w komórkach owadzich zakażonych bakulowirusa mi rekombmovanymi LAV.
1. LAy-do^inie surowice ludzkie dostarczone przez Center for Disease Control /CDC, Atlanta, Georgia/ jako LAV-doratnl wzorzec porównawczy.
2. LA^-ujemne surow/ice ludzkie dostarczone przez CDC jako LAV-ujemny wzorzec ρrr^ι07naoczy
3. Przeciwciało poliklonal.ne, którego powstawanie wywołano u kóz, przeciw oczyszczonemu białku gpl20 otrymmanemu z oczyszczonego, zakaźnego wirusa L^VvII];.
161 165
Wyniki zestawiono w poniższych tablicach 1 i 2.
Tablica 1
Nr izolatu i opis
LAV-ujemna
Surowica___
LAV-dodaania gpl20-Oodatnia
-----------------------------Kontrola nie zakażone komórki Sf zakażone /wt/ komórki 3f
Rekorbirnant
A. 2863 całkowita gp 160 1-861
Al. 3715
3. 3046 skrócona go 160
1-757 *
31. 3540
C. 3774 skrócona gpl60
1-645
D. 4646 gpl20, ld5l6
E. 2040 skrócona gpl20
1-472
F. 2165 skrócona gpł.2O
1-279
G. 2196 skrócona gpl20
1-129
H. 3076 aminokwasy 1-129 sprzężone z HBsAg
I. 3156 gp41, 472-861
J. 4585 sygnał IL-2/rp^41
K. 3166 skrócona gp41
472-757
L. sygnał IL-2/ skrócona gp41
| 2 | __ 1 1 | 3 | 1 1 | 4 |
| — —- I 1 1 1 1 1 | 1 I 1 1 t 1 | |||
| - | 1 1 t 1 | - | ł 1 1 ł | - |
| - | 1 1 1 t 1 1 | ♦· | 1 ł f t 1 I | 4- |
| nd | 1 1 1 1 1 | π0 | 1 1 1 1 1 | nd |
| - | 1 1 1 | + | 1 1 1 | + |
| nd | 1 1 1 | na | 1 1 1 | nd |
| nd | 1 1 1 | nd | 1 1 I | nd |
| nd | 1 1 1 | nd | 1 1 1 1 | nd |
| - | 1 1 1 | + | I 1 ł | + |
| - | 1 1 1 1 | - | 1 1 I I i | ♦/ |
| - | 1 1 I 1 | - | 1 1 1 1 | - |
| nd | I 1 | nd | 1 1 1 1 | nd |
| - | f 1 | + | 1 1 | ♦ |
| nd | nd | ( 1 | nO | |
| - | ł | + | t 1 1 | + |
| - | 1 1 | - | 1 1 1 | - |
powyższej tablicy 1 użyto następującego oznaczenia:
nd = nie oznaczono
Tablica 2
Zestawienie przewidywanych i zaobserwowanych wynik! dotyczących izolat!
| 1 | ’----7---7 — —-- | ------------2------ | l | “7 | ||||
| » Konstrukcja | 1 | Aminokwasy otocz^ ' | ' Wielkość | przewidywana | 1 | wielkość | ||
| 1 i. nr taolatu | 1 1 | j me glikozy | - j ^ikozyto- | 1 ł | zaobserwcwa- | |||
| I | ' lwrana | 1 wana | 1 | na·5 | ||||
| C-___ | 1 | 1 — L. | 2 | _____ΐ.....3..... | i .L | 5 | 1 | |
| ! A. | 2863 | ł ł | całkowita | ' 93,200 | { 160,000 | ’ r 1 | 160,000 | 1 |
| 1 | gpl60 | 1 56,000 | 1 120,000 | 1 | 120,000 | |||
| T ł | 1-861 | ! 37,000 | 1 41,000 | 1 1 | 41,000 | |||
| ; Al. | 3715 | ; 1 | 1 jak w A | [ jak w A | 1 1 1 | jak w A | ||
| i B. | 3046 | 1 1 | skrócona | 1 82,000 | 1 150,000 | t 1 | 150,000 | |
| 1 | gpl60 | ! 56,000 | 1 120,000 | 1 1 | 120,000 | |||
| 1 i | 1-757 | 1 26,000 | ; 30,000 | t 1 | 30,000 | |||
| ; BI. | 3540 | 1 1 1 ł | 1 jak w B 1 | i jak w B i | 1 1 1 1 | jak w B |
161 165 tablica 2 - ciąg dalszy
| 1 | { 2 | t 1 | 3 | 1 --.L- | 4 | 1 __ | 5 j | |
| ----f-----—------------- | 1 | I | ||||||
| c. | 3774 | i skrócona | 1 1 | 69,000 | 1 1 | 130,000 | 1 ł | |
| ! gpl6O | 1 1 | 56,000 | ł 1 | 120,000 | 1 1 | |||
| 1-645 | 1 1 | 14,000 | ł 1 | 18,000 | 1 » | |||
| D. | 4646 | 1 gpl20, 1-516 | 1 1 1 | 56,000 | 1 1 1 | 120,000 | 1 1 1 | N.D. ! |
| E. | 2040 | 1 sKrócona | t 1 | 51,000 | 1 f | 110,000 | 1 1 | 110,000 i |
| 1 gpl20, 1-472 | 1 1 | 1 1 | 1 t | 90,000 j | ||||
| F. | 2165 | 1 skrócona | 1 1 | 30,000 | 1 1 | 60,000 | I 1 | 60,000 ! |
| 1 gpl20, 1-279 | 1 1 | 1 1 | ł | |||||
| G. | 2196 | 1 skrócona | ł 1 | 12,000 | 1 | 15,000 | 1 1 | 15,000 ; |
| 1 gpl20, 1-129 | } 1 | 1 1 | 1 1 | |||||
| H. | 3076 | 1 aminok^ja sy | 1 1 | 35,000 | 1 1 | 40,000 | 1 1 | |
| 1 1-129 | 1 1 | ł | | ł 1 | |||||
| 1 sprzężone z 4EsAg | 1 1 | 1 1 | 1 1 | |||||
| 1 · | 3156 | i gp41, 472-361 | 1 1 | 42,000 | i 1 | 46,000 | 1 1 | |
| J. | 4585 | ! sygnał IL-2/ | 1 1 | 1 I | 46,000 | 1 | | n.d. j | |
| gp 41 | 1 1 | 42,000 | t 1 | 1 1 | ||||
| K. | 3166 | 1 sxrócona | 1 1 | 30,000 | ł 1 | 33,000 | l 1 | n.d. ; |
| 1 gp41, 472-757 | t 1 | 1 1 | 1 1 | |||||
| L. | 1 sygnał IL-2/ | 1 ł | 1 1 | 1 1 | ||||
| 1 skrócona gp41 | 1 1 | 30,000 | 1 | 33,000 | 1 f | N.D. | ||
| ______1__________________— | --J- — | ___L- | — 1- |
n ρο’.’/zszej tablicy 2 użyto następujących oznaczeń:
Reszty aminokwaaćw przewidywanych jako obecne w prepro-produkcie genowym, nie przetworzonym, określone na podstawie sekwencji nukleotydów.
,
Oz.naczone na podstawie reszt aminokwasów w postaciach aktualnych i przewidywanych po przetworzeniu.
Dotyczy głównych immunoreaktywnych polipepyyd;w.
N.D. = nie oznaczono.
Rekombinowanych białek gplóO użyto z dobrym wynikiem w typowycn testach diagnostycznych, takich jak ELI3A i radionmunoprecypitacja w uzupełnieniu do blottingu metodą westerna
Oznaczanie białek otoczki LAV.
Reko.mbmantowe białka otoczki 4IV wytwarza się w komórkach 3, frugiperda w ciągu 4-5 dni po zakażeniu LAV- rękorabmewarym wirusem AcNPV. Większość białek powstających w wyniku ekspresji białek pozostaje v połączeniu z zakażonymi komórkami. Ponieważ wszystkie produktj genu otoczki LAV opisane w niniejszym opisie mją podobne właściwości, to znaczy w pierwszym rzędzie pozostają w połączeniu z komórkami i są glikoproteimmi, można użyć jednej metody oczyszczania dla wszystkich produktów genu otoczki LAV opisanych w nlniessyym zgłoszeniu patenoowym, lub innych podobnych konstrukcji. Następujący tekst jest przykładem sposobu oczyszczania rekombinowanego białka gpl60 tworzonego przy za stosowaniu wektora ekspresyjnego Ac3O46.
Komórki S.frugiperda zakaza się re kombi ncwanym Ac3O46. Po 4-5 dniach od zakażenia zbiera się komórki i przemywa uwalniając od podłoża do hodowli komórek. Najpierw komórki rozdziela się na frakcje błonowe, jądrowe i cytoplazmatyczne zwykłymi metodami. Frakcję glikoproteńoową zawierającą białko gplóO rozpuszcza się i glikoproteiny oczyszcza stosując chromtografię na zasadzie powinowactwa do lektyny z soczewicy i używając zw^^ych metod. Frakcja gliko pro ten owa zawiera białko gpl60 i w tym stadium białko gpl60 soanowi 25-50% całości frakcji glikoprotemowej, jak można sądzić na podstawie analizy w żelu SD33ppoiaMy ooBrnidwym. N celu dalszego oczyszczania gplóO, frakcję glikoprotemwą przeprowadza
161 165 się przez kolumnę do chroimtografi-i cieczowej z sitem molekularnym. Białko gplóO jest eluo wane z kol-wny jako frakcja o wysokiej ms^e cząsteczkowej i białko gplóO stanowi w przybliżeniu 90% białka całkowitego we frakcji o wysokiej msie cząsteczkowej.
161 165
3Z ι&β z*e-sdw
FIG.5
z-τ'
ca
ro ε
lZ>
161 165
ΤΑΑ
161 165
BstEU
CU
CD
I bO rM ? <3 « C (N
E3 w
1/
OO o
t= zj >
o.
tn m
o o -c o* X t-□
Ll
uj u
Ol
ΙΛ => UD
-3 UD CU i
ŁZ ud oj ΪΧ e
UD __
Uj fO $
ł—
ΙΛ m ud
OJ
o. h— CO 4< ro LD o <£
CM
CD
UD
UD ro UD —* L-J ro LD
CU ud t/) *tC
| •«Ł | UD | ||
| LJ LJ | D | UD | |
| r— | OJ | ||
| -< | —· | LJ | |
| γ | ł— | ||
| LJ | |||
| Li | ΓΟ | UD | |
| O | Li | ||
| -P | Ό | D | UD |
| O | Φ | OJ | |
| S | •r* | UJ | |
| O | f—i | L. | L-J |
| Li | O | OJ | UD |
| Ο- | c. | u> | *X |
| ι | D | UD | |
| - | OJ | f— | |
| LO | LJ |
C
O •*4
Cl
O
N
O tQ ω
b9 o
u
Φ o
w is
Φ _J •H nj
S -o X
o.
o
CD o
w •ro
Φ •H
E λ;
CD
Ui
CO
161 165
FIG. 3B
161 165 promotor poliedryny
A,CCTATAAATAATG CCC GGD GGT ACC AGA TCT TAA TTA ATT AAG T f t t I_I
Smal KpnIBglll STOP
TAATG CCC GAT TAT TCA TAC CGT CCC ACC ATC GGG CCC GGG GGT ACC AGA TCT TAA TTA ATT AAG T - 3'
I ♦ ♦ I-1
Smal Kpn! Bglll STOP
FIG. 3A
161 165
CQ
121 bp syntetycznego oligomeru
4.+-4. 4 4
Gly Arg Val Lye Glu Lye Tyr Gin Hie Leu Trp Arg Trp Gly Trp Lye Trp Gly Thr Met Leu Leu CCC GGG CGT GTG AAG GAG AAG TAC CAA CAC CTG TOG CGT TGG GGC TOG AAG TGG GGC ACC ATG CTG CTG
H
> o o> o >-1 «< 9) H > O rH U o 8 h u
3S > o u o > o &8 H A 3 p
SC β o ss
C5 rH «3 σ 3 u u w
C rih ; O ν' e 1 u o β ta m < a HO
Φ U 1-1 H H <
AJ p
3S p
SC
mnl Pvul
-1000) (3840)
161 16S
F8G. 2A
161 165
FIG.1 5/5
730
| Arg Gly | Pro | Asp Arg Pro Glu Gly Ile | Glu Glu Glu Gly Gly Glu | Arg | Asp | Arg | Asp Arg |
| AGG GGA | CCC | GAC AGG CCC GAA GGA ATA | GAA GAA GAA GGT GGA GAG | AGA | GAC | AGA | GAC AGA |
| 750 Ser Ile | Arg | Leu Val Asn Gly Ser Leu | Ala Leu Ile Trp Asp Asp | Leu | Arg | Ser | 8470 Leu Cys |
| TCC ATT | CGA | TTA GTG AAC GGA TCC TTA | GCA CTT ATC TGG GAC GAT | CTG | CGG | AGC | CTG TGC |
| 770 Leu Phe | Ser | BamHI Tyr His Arg Leu Arg Asp | Leu Leu Leu Ile Val Thr | Arg | Ile | Val | 8530 Glu Leu |
| CTC TTC | AGC | TAC CAC CGC TTG AGA GAC | TTA CTC TTG ATT GTA ACG | AGG | ATT | GTG | GAA CTT |
| 790 Leu Gly | Arg | Arg Gly Trp Glu Ala Leu | Lys Tyr Trp Trp Asn Leu | Leu | Gin | Tyr | 8590 Trp Ser |
| CTG GGA | CGC | AGG GGG TGG GAA GCC CTC | AAA TAT TGG TGG AAT CTC | CTA | CAG | TAT | TGG AGT |
| 810 Gin Glu | Leu | Lys Asn Ser Ala Val Ser | Leu Leu Asn Ala Thr Ala | Ile | Ala | Val | 8650 Ala Glu |
| CAG GAA | CTA | AAG AAT AGT GCT GTT AGC | TTG CTC AAT GCC ACA GCC | ATA | GCA | GTA | GCT GAG |
| 830 Gly Thr | Asp | Arg Val Ile Glu Val Val | Gin Gly Ala Cys Arg Ala | ile | Arg | His | 8710 Ile Pro |
| GGG ACA | GAT | AGG GTT ATA GAA GTA GTA | CAA GGA GCT TGT AGA GCT | ATT | CGC | CAC | ATA CCT |
| 851 Arg Arg AGA AGA | Ile ATA | Arg Gin Gly Leu Glu Arg AGA CAG GGC TTG GAA AGG | 861 . 8770 Ile Leu Leu Koniec ATT TTG CTA TAA GAlGGGlGGCAAGlGGTCAAAAAGlAGl |
8837
GTGGTTGGA^TGGCC^l^A^C^l^G^I^AA^G^C^C^f^C^I^A^C^C^CA^C^C^T^CA^C^CA^C^C^A^C^CA^GATGGGGTGGGA^GCAGCA^TCTCGAGACCT
8917
GGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCίATACAGCACGCTACCAATGCl’GClΊGlGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGG
8997
AGGAGGTGGGTTTTCCAGlCACA<CClCAGGTACCTTTJAGACC(AAl’CACllACAAGGCAGCTGlAGATCTTAΓ:CCAClll Kpn Bgl II
9077
TTAAAAGAAAAGGGGGGACTG
9100
161 165
| FIG. 1 | 4/5 | |
| 530 Ala | Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Arg Ser | Met Thr Leu Thr Val Gin Ala Arg Gin Leu |
| GCA | GCA GGA AGC ACT ATG GGC GCA CGG TCA | ATG ACG CTG ACG GTA CAG GCC AGA CAA TTA |
| 550 Leu | Ser Gly Ile Val Gin Gin Gin Asn Asn | 7870 Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gin Gin His |
| TTG | TCT GGT ATA GTG CAG CAG CAG AAC AAT | TTG CTG AGG GCT ATT GAG GCG CAA CAG CAT |
| 570 Leu | Leu Gin Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys | 7930 Gin Leu Gin Ala Arg Ile Leu Ala Val Glu |
| CTG | TTG CAA CTC ACA GTC TGG GGC ATC AAG | CAG CTC CAG GCA AGA ATC CTG GCT GTG GAA |
| 590 Arg | Tyr Leu Lys Asp Gin Gin Leu Leu Gly | 7990 Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile Cys |
| AGA | TAC CTA AAG GAT CAA CAG CTC CTG GGG | ATT TGG GGT TGC TCT GGA AAA CTC ATT TGC |
| 610 Thr | Thr Ala Val Pro Trp Asn Ala Ser Trp | 8050 Ser Asn Lys Ser Leu Glu Gin Ile Trp Asn |
| ACC | ACT GCT GTG CCT TGG AAT GCT AGT TGG | AGT AAT AAA TCT CTG GAA CAG ATT TGG AAT |
| Asn | Met Thr Trp Met Glu Trp Asp Arg Glu | 8110 Ile Asn Asn Tyr Thr Ser Leu Ile His Ser |
| AAC | ATG ACC TGG ATG GAG TGG GAC AGA GAA | ATT AAC AAT TAC ACA AGC TTA ATA CAT TCC |
| 650 Leu | Ile Glu Glu Ser Gin Asn Gin Gin Glu | Hindlll 8170 Lys Asn Glu Gin Glu Leu Leu Glu Leu Asp |
| TTA | ATT GAA GAA TCG CAA AAC CAG CAA GAA | AAG AAT GAA CAA GAA TTA TTG GAA TTA GAT |
| 670 Lys | Trp Ala Ser Leu Trp Asn Trp Phe Asn | 8230 Ile Thr Asn Trp Leu Trp Tyr Ile Lys Ile |
| AAA | TGG GCA AGT TTG TGG AAT TGG TTT AAC | ATA ACA AAT TGG CTG TGG TAT ATA AAA ATA |
| 690 Phe | Ile Met Ile Val Gly Gly Leu Val Gly | 8290 Leu Arg Ile Val Phe Ala Val Leu Ser Ile |
| TTC | ATA ATG ATA GTA GGA GGC TTG GTA GGT | TTA AGA ATA GTT TTT GCT GTA CTT TCT ATA |
| 710 Val | Asn Arg Val Arg Gin Gly Tyr Ser Pro | 8350 Leu Ser Phe Gin Thr His Leu Pro Thr Pro |
| GTG | AAT AGA GTT AGG CAG GGA TAT TCA CCA | TTA TCG TTT CAG ACC CAC CTC CCA ACC CCG |
8410 lól 165
FIG. 1 3/5
350
| Ile Ala Ser | Lys | Leu Arg Glu Gin | Phe | Gly Asn | Asn Lys Thr Ile | Ile Phe | Lys | Gin Ser |
| ATA GCT AGC | AAA | TTA AGA GAA CAA | TTT | GGA AAT | AAT AAA ACA ATA | ATC TTT | AAG | CAA TCC |
| 370 Ser Gly Gly | Asp | Pro Glu Ile Val | Thr | His Ser | Phe Asn Cys Gly | Gly Glu | Phe | 7330 Phe Tyr |
| TCA GGA GGG | GAC | CCA GAA ATT GTA | ACG | CAC AGT | TTT AAT TGT GGA | GGG GAA | TTT | TTC TAC |
| 390 Cys Asn Ser | Thr | Gin Leu Phe Asn | Ser | Thr Trp | Phe Asn Ser Thr | Trp Ser | Thr | 7390 Glu Gly |
| TGT AAT TCA | ACA | CAA CTG TTT AAT | AGT | ACT TGG | TTT AAT AGT ACT | TGG AGT | ACT | GAA GGG |
| 410 Ser Asn Asn | Thr | Glu Gly Ser Asp | Thr | Ile Thr | Leu Pro Cys Arg | Ile Lys | Gin | 7450 Phe Ile |
| TCA AAT AAC | ACT | GAA GGA AGT GAC | ACA | ATC ACA | CTC CCA TGC AGA | ATA AAA | CAA | TTT ATA |
| 430 Asn Met Trp | Gin | Glu Val Gly Lys | Ala | Met Tyr | Ala Pro Pro Ile | Ser Gly | Gin | 7510 Ile Arg |
| AAC ATG TGG | CAG | GAA GTA GGA AAA | GCA | ATG TAT | GCC CCT CCC ATC | AGC GGA | CAA | ATT AGA |
| 450 Cys Ser Ser | Asn | Ile Thr Gly Leu | Leu | Leu Thr | Arq Asp Gly Gly | Asn Asn | Asn | 7570 Asn Gly |
| TGT TCA TCA | AAT | ATT ACA GGG CTG | CTA | TTA ACA | AGA GAT GGT GGT | AAT AAC | AAC | AAT GGG |
| 470 Ser Glu Ile | Phe | Arg Pro Gly Gly | Gly | Asp Met | Arg Asp Asn Trp | Arg Ser | Glu | 7630 Leu Tyr |
| TCC GAG^ATC | TTC | AGA CCT GGA GGA | GGA | GAT ATG | AGG GAC AAT TGG | AGA AGT | GAA | TTA TAT |
| Bglll 490 Lys Tyr Lys Val | Val Lys Ile Glu | Pro | Leu Gly | Val Ala Pro Thr | Lys Ala | Lys | 7690 Arg Arg | |
| AAA TAT AAA | GTA | GTA AAA ATT GAA | CCA | TTA GGA | GTA GCA CCC ACC | AAG GCA | AAG | AGA AGA |
| Helion zewnątrz- 510 komórkowy -------\ Val Val Gin Arg Glu Lys Arg Ala | /---- Val | Region trnnrhłcnowy Gly Ile Gly Ala Leu Phe Leu Gly | Phe | 7750 Leu Gly | ||||
| GTG GTG CAG | AGA | GAA AAA AGA GCA | GTG | GGA ATA | GGA GCT TTG TTC | CTT GGG | TTC | TTG GGA |
7810
161 165
| 170 | FIG. | 1 | 2/5 | |||||||||||||||
| Ile | Arg | Gly | Lys | Val | Gin | Lys | Glu | Tyr | Ala | Phe | Phe | Tyr | Lys | Leu | Asp | Ile | Ile | Pro Ile |
| ΑΤΑ 190 | AGA | GGT | AAG | GTG | CAG | AAA | GAA | TAT | GCA | TTT | TTT | TAT | AAA | CTT | GAT | ATA | ATA | CCA ATA 6790 |
| Asp | Asn | Asp | Thr | Thr | Ser | Tyr | Thr | Leu | Thr | Ser | Cys | Asn | Thr | Ser | Val | Ile | Thr | Gin Jll |
| GAT 210 | AAT | GAT | ACT | ACC | AGC | TAT | ACG | TTG | ACA | AGT | TGT | AAC | ACC | TCA | GTC | ATT | ACA | CAG GCC 6850 |
| Cys | Pro | Lys | Val | Ser | Phe | Glu | Pro | Ile | Pro | Ile | His | Tyr | Cys | Ala | Pro | Ala | Gly | Phe Ala |
| TGT 230 | CCA | AAG | GTA | TCC | TTT | GAG | CCA | ATT | CCC | ATA | CAT | TAT | TGT | GCC | CCG | GCT | GGT | TTT GCG 6910 |
| Ile | Leu | Lys | Cys | Asn | Asn | Lys | Thr | Phe | Asn | Gly | Thr | Gly | Pro | Cys | Thr | Asn | Val | Ser Thr |
| ATT 250 | CTA | AAA | TGT | AAT | AAT | AAG | ACG | TTC | AAT | GGA | ACA | GGA | CCA | TGT | ACA | AAT | GTC | AGC ACA 6970 |
| Val | Gin | Cys | Thr | His | Gly | Ile | Arg | Pro | Val | Val | Ser | Thr | Gin | Leu | Leu | Leu | Asn | Gly Ser |
| GTA 270 | CAA | TGT | ACA | CAT | GGA | ATT | AGG | CCA | GTA | GTA | TCA | ACT | CAA | CTG | CTG | TTG | AAT | GGC AGT 7030 |
| Leu | Ala | Glu | Glu | Glu | Val | Val | Ile | Arg | Ser | Ala | Asn | Phe | Thr | Asp | Asn | Ala | Lys | Thr Ile |
| CTA 290 | GCA | GAA | GAA | GAG | GTA | GTA | ATT | AGA m Bglll | GCC | AAT | TTC | ACA | GAC | AAT | GCT | AAA | ACC ATA 7090 | |
| Ile | Val | Gin | Leu | Asn | Gin | Ser | Val | Glu | Ile | Asn | Cys | Thr | Arg | Pro | Asn | Asn | Asn | Thr Arg |
| ATA 310 | GTA | CAG | CTG | AAC | CAA | TCT | GTA | GAA | ATT | AAT | TGT | ACA | AGA | CCC | AAC | AAC | AAT | ACA AGA 7150 |
| Lys | Ser | Ile | Arg | Ile | Gin | Arg | Gly | Pro | Gly | Arg | Ala | Phe | Val | Thr | Ile | Gly | Lys | Ile Gly |
| AAA 330 | AGT | ATC | CGT | ATC | CAG | AGG | GGA | CCA | GGG | AGA | GCA | TTT | GTT | ACA | ATA | GGA | AAA | ATA GGA 7210 |
| Asn | Met | Arg | Gin | Ala | His | Cys | Asn | Ile | Ser | Arg | Ala | Lys | Trp | Asn | Ala | Thr | Leu | Lys Gin |
| AAT | ATG | AGA | CAA | GCA | CAT | TGT | AAC | ATT | AGT | AGA | GCA | AAA | TGG | AAT | GCC | ACT | TTA | AAA CAG 7270 |
161 165
U!
LL w U
-H <C
X u
| O 1 | 1 u | o | M O O | p. O o | f—ł | O O | Φ | |
| un i | 1 u | o | ^H | χ: U γ- | Co m | fO | H C\ | rH |
| CJ I | 1 co | < | ΡΊ | η < <n | Eh Eh HT | > | O tt | M |
| U> I | 1 | V> | <0 | co |
•Λ-Ι
X r>:
ϋ o
+->
c cO
Γ”
CU tsO
C Eh si w H
-r-ł fś.
X U r-H X If Eh > o
O Φ H »3 H (0 >
O rH < O O o X sz o η x O. Eh
2g (0 >
rH £h m M X 01 co X rH Eh n <
O. Eh 01 X x o 3 O o g
O, Eh 01 X x O •U O Φ Eh 2 X 3 ?! Φ Eh Ul EUl Eh φ o oo x ·— Eh Π3 Eh > O w Eh >o O Eh
O Φ Eh Ul O o X Ul O Cu u
Ul O SZ O Eh X «X Φ Eh U) Eh
UDO Φ O r~ m χ CO co
M H Φ o w X
U H Φ o ω «χ C Eh si £8 H X C Eh
M Eh £ U Eh ft,
M Eh Φ O ω <
| Eh | O X | r“l X | 0) X | C Eh |
| X | u O | (0 Eh | > 2 | W X |
| Eh | u, O | > O | Ul X | x 2 |
| X | C O | 4-> O | r-l X | U O |
| O | W χ | Φ Eh | 01 Eh | sz o |
| O | X X | 2 X | > O | Eh X |
| o u | 0.0 | w Eh | C Eh |
Ul U a. O «Wg
0) >< u!
0.0 S
U O O
Eh Eh ·ή h?
>O Φ rH OK O O
0.0
EE O
Η Eh
Cr>«£
0.0
W o
Eh H
O o Φ H hi _) £h
U, +?*
| rH O | 10 Eh | 0.0 | C | |
| « Eh | rH O | w X | 0) | |
| > O | X O | x o | X | |
| Ul X | 0.H | H X | V) | |
| sz o | w χ | SZ o | >, | |
| Eh X | X O | Eh X | Ul | |
| rd O | u X | O O | p. | |
| 41 Eh | Φ U | M O | tl | |
| > o | W Eh | Cu O | Eh | |
| , Pu0> | (0 X | -Η X | u | |
| * o o | rH O | 10 Eh | Φ | |
| Η Eh | X O | > O | 2 | |
| 3 O | W Eh | 01 Eh | C | |
| Φ Eh | >O | >uO | <n | |
| ι-ł Eh | O Eh | O Eh | X | |
| 0) X | Φ Eh | <0 O | Φ | |
| >2 | sz Eh | rH O | SZ | |
| ►3 2 | Cu Eh | X O | Ou | |
| 3 *5 | 3 X | W Eh | C | |
| r—ł < | Φ Eh | H X | 0) | |
| o OJ | ul O | X O | X | |
| Ol χ | Ul Eh | M X | 3 | |
| x: u | SZ O | •C U | rH | |
| Eh χ | Eh X | H X | o | |
| Ιβ Eh | Ul U | 10 O | Ul | |
| r— O | OSZ O | O —i O | o | xz |
| X O | lS> Eh χ | r- χ O | σι | Eh |
Eh >O O Eh
O < Ul O Cu O 01 O
U?2
Ul Eh Φ O W X iO H rH O X O
| U o Φ O V) 4 | |
| u | X |
| •0 | o |
| Eh | X |
| U | O |
| Φ | O |
| W | X |
| Φ | O |
| i— | Eh |
| H | X |
| C | H |
| w | X |
| X | 2 |
| Φ | o |
| SZ | Eh |
| Oh | Eh |
| Ul | Eh |
| Φ | O |
| W | Eh |
| W | U |
| >O | |
| U | Eh |
| c | O |
| W | |
| < | 2 |
| CO | ff |
| χ | |
| 2 | |
| Φ | X |
| rH | Eh |
| W | < |
| 2 | O |
o rn roo
| O | 3 X | C Eh |
| O | Φ Eh | w χ |
| Eh | ul U | X 2 |
| O | U O | >o |
| Eh | Φ O | r-l O |
| X | w < | O O |
| O | c 2 | 3 O |
| χ | rH 2 | Φ Eh |
| 2 | O o | m Eh |
| Eh | O. Eh | O, Eh |
| Eh | co χ | W X |
| Eh | x OJ | X O |
| eh | 0,0 tu O | O Eh C O |
| 2 | Eh Eh | P < |
| 3 < | W O | |
| 2 | Φ Eh | >uO |
| 3 | ul Eh | O Eh |
U Eh Φ O W X
OWO η >χΐ rl S 3
W X >lX Ul X
O
Eh
X
O
Eh
X
4J O Φ Eh 2 X >o rH O
O o
Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 10 000 zł
Claims (11)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania białek wirusa AIDS, z użyciem rekombinanta bakulowirus owego w komórkach owadzich lub owadach, znamienny tym, że część genomu bakulowirusa wprowadza się do nośnika klonującego, następnie do powstałego zmodyfikowanego wektora insercyjnego dokonuje się insercji genu env, gag lub poi wirusa AIDS lub Jego części w taki sposób, te gen env, gag lub poi wirusa AIDS lub jego część ulega ekspresji pod kontrolą promotora bakulowirusa zawartego w części genomu bakulowirusa z wytworzeniem rekombinowanego wektora insercy jnego, tak zm^t^y fi kowany gen env, gag lub pil wirusa AIDS lub Jego część przenosi się ze zrekombmowanego wektora insercyjnego do bakulowirusowego wektora ekspresyjnego przez zmieszanie rekombinowanego wektora insercyjnego i bakulowirusowego wektora eksprasyjnego, tak powstałym zmody fik<wanym [bakulowtruswrymj wektorem ekspresyjitym -transfekuje się odpowiednie komórki owadzie z zainfekwanych komórek owadzich izoluje 3ię rekombinowane bakulowirusy zawierające gen env, gag lub poi wirusa AIDS lnb jego część, tak wytworzonym rekombinowanym bakulowirusem infekuje się komórki owadzie lub owady, hoduje się te zainfekowane komórki owadzie lub owady, z wytworzeniem i ekspresją białka wirusa AIDS i odzyskuje się białko wirusa AIDS.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny t y m, że jako bakulowirus stosuje się wirus jądrowej poiiedrozy Autographa californica.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny t y m, stosuje się promotor genu poliedryny.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, dzią pochodzącą z należącego do owadów gatunku Spodoptera frugiperda.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się bakiJ.owirusowy wektor ekspresyjny zawierający więcej niż jeden gen białka wirusa AIDS lub jago część.że jako promotor bakuLowirusa że stosuje się komórkę owa
- 6. Sposób według zastrz stosuje się gen env gplóO.
- 7. Sposób według zastrz. 1, stosuje się gen env gpl20.
- 8. Sposób według zastrz. 1, stosuje się gen env gp4l.
- 9. Sposób według zastrz. 1,1, znamienny tym, że jako gen env wirusa AIDS znamienny t y m, że Jako gen env wirusa AIDS znamienn y tym, że jako gen env wirusa AIDS tym, że stosuje się gen env wiruznamienny sa AIDS lub jego część, pochodzący z genu env zawartego w rekombinowanych wektorach insercyjnych A, B, C, D, 5, F, G, Η, I, J, K, L, 4-1 lub B-1 pokazanych na rapie restrykcyjnej na Fig. 5 rysunku.
- 10. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się gen env wirusa AIDS lub jego część, kodujący fragment białka wirusa AIDS zdolny do wywoływania odpowiedzi imnmnologicznej.
- 11. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że podlegające ekspresji białka wirusa AIDS wyodrębnia się i oczyszcza na drodze chrorattgraaii powinowactwa do lektyny z soczewicy, po czym otrzymane glikoproteiny frakcjonuje się pod względem wielkości stosując chrom ttgratię sitowo-molekularną.» 4 »161 165
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US92019786A | 1986-10-16 | 1986-10-16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL268266A1 PL268266A1 (en) | 1988-08-18 |
| PL161165B1 true PL161165B1 (pl) | 1993-05-31 |
Family
ID=25443341
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1987268266A PL161165B1 (pl) | 1986-10-16 | 1987-10-16 | Sposób wytwarzania bialek wirusa AIDS PL |
| PL1987293520A PL161448B1 (pl) | 1986-10-16 | 1987-10-16 | Sposób wykrywania przeciwcial przeciwko wirusowi AIDS6 2 ) Numer zgloszenia,z którego nastapilo wydzielenie:268266 PL |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1987293520A PL161448B1 (pl) | 1986-10-16 | 1987-10-16 | Sposób wykrywania przeciwcial przeciwko wirusowi AIDS6 2 ) Numer zgloszenia,z którego nastapilo wydzielenie:268266 PL |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0265785A3 (pl) |
| JP (1) | JPS63207397A (pl) |
| CN (1) | CN87107837A (pl) |
| AR (1) | AR241940A1 (pl) |
| AU (2) | AU7984287A (pl) |
| BR (1) | BR8705535A (pl) |
| DD (3) | DD269629A5 (pl) |
| DK (1) | DK541987A (pl) |
| FI (1) | FI874564A (pl) |
| HU (1) | HUT45095A (pl) |
| IE (1) | IE872748L (pl) |
| IL (1) | IL84154A0 (pl) |
| LT (3) | LTIP1793A (pl) |
| LV (1) | LV10654B (pl) |
| PL (2) | PL161165B1 (pl) |
| ZA (1) | ZA877752B (pl) |
Families Citing this family (84)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63258575A (ja) * | 1986-12-15 | 1988-10-26 | レプリゲン コーポレーション | 昆虫細胞中でつくられる組換えｈｉｖエンベロープタンパク |
| IL85149A0 (en) * | 1987-01-27 | 1988-06-30 | Microgenesys Inc | Hiv gp160 aids virus envelope protein-containing substrates and methods for detection of aids antibody thereby |
| US5681713A (en) * | 1987-05-08 | 1997-10-28 | Smithkline Beecham Corporation | Expression of heterologous proteins in Drosophila cells |
| IL89118A0 (en) * | 1988-02-03 | 1989-08-15 | Microgenesys Inc | Vaccine containing polypeptides derived from the envelope gene of human immunodeficiency virus type 1 |
| IL90048A0 (en) * | 1988-04-25 | 1989-12-15 | Merck & Co Inc | Recombinant gag precursor of hiv,its preparation and its use as aids vaccine |
| JP2511494B2 (ja) * | 1988-05-12 | 1996-06-26 | 善治 松浦 | 日本脳炎ウイルス表面抗原蛋白質の製造法 |
| CA2003300A1 (en) * | 1988-11-21 | 1990-05-21 | Franklin Volvovitz | Skin test and test kit for aids |
| JP2852431B2 (ja) * | 1988-12-07 | 1999-02-03 | 財団法人阪大微生物病研究会 | レトロウイルスのプロテアーゼ、逆転写酵素及びエンドヌクレアーゼ、並びにこれ等の酵素の製法 |
| AU5187190A (en) * | 1989-02-23 | 1990-09-26 | University Of Ottawa | Improved baculovirus expression system capable of producing foreign gene proteins at high levels |
| US5194376A (en) * | 1989-02-28 | 1993-03-16 | University Of Ottawa | Baculovirus expression system capable of producing foreign gene proteins at high levels |
| AU5184190A (en) * | 1989-02-23 | 1990-09-26 | University Of Ottawa | Polypeptide having immunological activity for use as diagnostic reagent and/or vaccine |
| DK0385909T3 (da) * | 1989-03-03 | 1994-08-15 | Microgenesys Inc | Kit eller middel til forebyggelse eller behandling af HIV-1-infektioner |
| EP0406857B1 (en) * | 1989-07-07 | 1995-05-24 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Proteins and production thereof |
| EP0421626A1 (en) * | 1989-09-19 | 1991-04-10 | Merck & Co. Inc. | Vaccine for aids and hepatitis B |
| US5346989A (en) * | 1990-08-22 | 1994-09-13 | Syntello Vaccine Development Kb | Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1 |
| DE69312485T2 (de) * | 1992-04-24 | 1998-01-15 | Us Health | Nachweis von maservirus-specifischer antikörpern durch gebrauch von rekombinanten maserproteinen |
| DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
| EP0979101B1 (en) | 1996-07-03 | 2010-10-27 | Merial, Inc. | Recombinant canine adenovirus 2 (cav2) containing exogenous dna |
| US6517843B1 (en) | 1999-08-31 | 2003-02-11 | Merial | Reduction of porcine circovirus-2 viral load with inactivated PCV-2 |
| US6224882B1 (en) | 1997-11-07 | 2001-05-01 | Protein Science Corp. | Insect cells or fractions as adjuvant for antigens |
| JP2002030098A (ja) * | 2000-07-17 | 2002-01-29 | Institute Of Immunology Co Ltd | バキュロウィルスの発芽ウイルスからウイルスエンベロープを回収する方法 |
| AU2003275127A1 (en) | 2002-09-19 | 2004-04-08 | Merial Limited | P. ariasi polypeptides, p. perniciosus polypeptides and methods of use |
| EP1572968B1 (en) | 2002-10-29 | 2009-04-22 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Lutzomyia longipalpis polypeptides and methods of use |
| EP2390352A1 (en) | 2003-03-18 | 2011-11-30 | Quantum Genetics Ireland Limited | Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds |
| US7468273B2 (en) | 2003-05-01 | 2008-12-23 | Meial Limited | Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use |
| US7556814B2 (en) * | 2003-10-23 | 2009-07-07 | Karp Nelson M | Immunogenic compositions comprising UV-irradiated, psoralen-inactivated, desialated human immunodeficiency virus (HIV) devoid of CD55 and CD59 in the viral membrane |
| US20050214316A1 (en) | 2003-11-13 | 2005-09-29 | Brown Thomas P | Methods of characterizing infectious bursal disease virus |
| AU2005244673B2 (en) | 2004-02-19 | 2009-12-10 | The Governors Of The University Of Alberta | Leptin promoter polymorphisms and uses thereof |
| ES2343270T3 (es) | 2005-04-25 | 2010-07-27 | Merial Ltd. | Vacunas contra el virus nipah. |
| US20080241184A1 (en) | 2005-08-25 | 2008-10-02 | Jules Maarten Minke | Canine influenza vaccines |
| CA2629522A1 (en) | 2005-11-14 | 2007-05-18 | Merial Limited | Gene therapy for renal failure |
| US7771995B2 (en) | 2005-11-14 | 2010-08-10 | Merial Limited | Plasmid encoding human BMP-7 |
| US7862821B2 (en) | 2006-06-01 | 2011-01-04 | Merial Limited | Recombinant vaccine against bluetongue virus |
| GB2440528A (en) * | 2006-07-27 | 2008-02-06 | Ist Superiore Sanita | Antigen-antibody complexes |
| US8202967B2 (en) | 2006-10-27 | 2012-06-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | H5 proteins, nucleic acid molecules and vectors encoding for those, and their medicinal use |
| JP5867795B2 (ja) * | 2007-02-01 | 2016-02-24 | テーツェーエフ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 調節性ｔ細胞の特異的活性化ならびに喘息、アレルギー疾患、自己免疫疾患、移植片拒絶の治療および免疫寛容の誘導のためのその使用 |
| JP5309159B2 (ja) | 2008-01-09 | 2013-10-09 | コングク ユニバーシティ インダストリアル コーオペレーション コーポレーション | バキュロウイルスを利用したワクチン |
| MX2010012069A (es) | 2008-05-08 | 2010-12-14 | Merial Ltd | Vacuna de la leishmaniasis con el uso del inmunogeno salival de la mosca de la arena. |
| DK2414386T3 (en) | 2009-04-03 | 2016-02-22 | Merial Ltd | Birds of vaccines with newcastle disease virus vectors |
| TWI627281B (zh) | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物 |
| WO2011119920A2 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| PL2611460T3 (pl) | 2010-08-31 | 2017-02-28 | Merial, Inc. | Szczepionki przeciw herpeswirusom przenoszone z pomocą wirusa choroby newcastle |
| AR083533A1 (es) | 2010-10-22 | 2013-03-06 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Proteinas de hemaglutinina 5 (h5) para el tratamiento y prevencion de las infecciones de gripe |
| WO2012090073A2 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | The Netherlands Cancer Institute | Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity |
| EP2694677A2 (en) | 2011-04-04 | 2014-02-12 | Netherland Cancer Institute | Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors |
| WO2012138789A2 (en) | 2011-04-04 | 2012-10-11 | Netherlands Cancer Institute | Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment |
| WO2012145577A1 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Merial Limited | Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile |
| EP2701736A1 (en) | 2011-04-25 | 2014-03-05 | Advanced Bioscience Laboratories, Inc. | Truncated hiv envelope proteins (env), methods and compositions related thereto |
| ES2674439T3 (es) | 2011-06-01 | 2018-06-29 | Merial, Inc. | Administración sin aguja de vacunas contra el VSRRP |
| DK2691530T3 (en) | 2011-06-10 | 2018-05-22 | Univ Oregon Health & Science | CMV GLYCOPROTEIN AND RECOMBINANT VECTORS |
| AU2012284558B2 (en) | 2011-07-20 | 2017-06-29 | Centre National De La Recherche Scientifique | Recombinant feline leukemia virus vaccine containing optimized feline leukemia virus envelope gene |
| LT2741740T (lt) | 2011-08-12 | 2017-08-10 | Merial, Inc. | Biologinių produktų, ypatingai vakcinų, vakuuminis konservavimas |
| AR088028A1 (es) | 2011-08-15 | 2014-05-07 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Proteinas h5, de h5n1 para un uso medicinal |
| WO2013033092A2 (en) | 2011-09-03 | 2013-03-07 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Streptococcus suis pilus antigens |
| WO2013093629A2 (en) | 2011-12-20 | 2013-06-27 | Netherlands Cancer Institute | Modular vaccines, methods and compositions related thereto |
| WO2013138776A1 (en) | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Merial Limited | Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g |
| SG11201405847SA (en) | 2012-03-20 | 2014-10-30 | Merial Inc | Recombinant equine herpesvirus-1 vaccine containing mutated glycoprotein c and uses thereof |
| MX360137B (es) | 2013-02-21 | 2018-10-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Proteínas h5 del virus de la influenza h5n1 para usarse como un medicamento. |
| WO2014164697A1 (en) | 2013-03-12 | 2014-10-09 | Merial Limited | Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof |
| JP6395855B2 (ja) | 2014-04-03 | 2018-09-26 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ インコーポレイテッド | ブタ流行性下痢ウイルスワクチン |
| AU2015343369B2 (en) | 2014-11-03 | 2018-11-22 | Georgia Tech Research Corporation | Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus |
| EA201890110A1 (ru) | 2015-06-23 | 2018-05-31 | Мериал, Инк. | Рекомбинантные вирусные векторы, содержащие минорные белки prrsv, и способы их получения и применения |
| DK3344289T3 (da) | 2015-08-31 | 2020-04-14 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Pestivirusvacciner mod medfødt tremor |
| JP2018526454A (ja) | 2015-09-16 | 2018-09-13 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ インコーポレイテッド | ブタコレラ菌−ネズミチフス菌ワクチン |
| WO2018057441A1 (en) | 2016-09-20 | 2018-03-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Canine adenovirus vectors |
| BR112019005418A2 (pt) | 2016-09-20 | 2019-10-01 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | novos promotores |
| KR102566066B1 (ko) | 2016-09-20 | 2023-08-16 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 신규한 돼지 인플루엔자 백신 |
| KR102618843B1 (ko) | 2016-09-20 | 2024-01-02 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 신규한 ehv 삽입 부위 orf70 |
| CA3042584A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vaccine against porcine parvovirus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of production thereof |
| BR112019009133A2 (pt) | 2016-11-03 | 2019-07-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | vacina contra o parvovírus suíno |
| CN110545841A (zh) | 2017-01-30 | 2019-12-06 | 勃林格殷格翰动物保健美国有限公司 | 猪冠状病毒疫苗 |
| KR20200027479A (ko) | 2017-07-12 | 2020-03-12 | 베링거 인겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인크. | 세네카바이러스 a 면역원성 조성물 및 이의 방법 |
| AR113124A1 (es) | 2017-09-23 | 2020-01-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Sistema de expresión de paramyxoviridae |
| WO2019092027A1 (en) | 2017-11-09 | 2019-05-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Sapelovirus immunogenic compositions and uses thereof |
| WO2019162294A1 (en) | 2018-02-23 | 2019-08-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Recombinant viral vector systems expressing exogenous feline paramyxovirus genes and vaccines made therefrom |
| EP3768307A1 (en) | 2018-03-19 | 2021-01-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | New ehv with inactivated ul18 and/or ul8 |
| AU2019239552A1 (en) | 2018-03-19 | 2020-09-10 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | EHV insertion site UL43 |
| EA202092216A1 (ru) | 2018-03-26 | 2021-06-11 | Бёрингер Ингельхайм Энимал Хелс Ю-Эс-Эй Инк. | Способ получения иммуногенной композиции |
| EP3852800A1 (en) | 2018-09-20 | 2021-07-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Intranasal vector vaccine against porcine epidemic diarrhea |
| CN112867505B (zh) | 2018-09-20 | 2024-10-01 | 勃林格殷格翰动物保健有限公司 | 经修饰的pedv刺突蛋白 |
| WO2021158878A1 (en) | 2020-02-06 | 2021-08-12 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Polypeptides useful for detecting anti-rhabdovirus antibodies |
| CN116438202A (zh) | 2020-10-05 | 2023-07-14 | 勃林格殷格翰动物保健美国有限公司 | 包含圆环病毒科衣壳蛋白的融合蛋白及其构成的嵌合病毒样颗粒 |
| EP4225776A1 (en) | 2020-10-05 | 2023-08-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Fusion protein useful for vaccination against rotavirus |
| AR128992A1 (es) | 2022-04-05 | 2024-07-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Composición inmunógena útil para la vacunación contra el rotavirus |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3485810T2 (de) * | 1983-05-27 | 1992-12-10 | Texas A & M University Syst | Verfahren zur herstellung eines rekombinanten baculovirus-expressionsvektors. |
| ZA867281B (en) * | 1985-09-25 | 1987-05-27 | Oncogen | Vaccines and immunoassays for acquired immune deficiency syndrome |
| GR862412B (en) * | 1985-09-25 | 1987-01-23 | Oncogen | Vaccines and immuinoassays for acquired immune deficiency syndrome |
| KR950001993B1 (ko) * | 1985-12-18 | 1995-03-08 | 마이크로제네시스,인코포레이티드 | B형 간염 표면항원의 제조방법 |
| JPS63258575A (ja) * | 1986-12-15 | 1988-10-26 | レプリゲン コーポレーション | 昆虫細胞中でつくられる組換えｈｉｖエンベロープタンパク |
-
1987
- 1987-10-13 IE IE872748A patent/IE872748L/xx unknown
- 1987-10-13 IL IL84154A patent/IL84154A0/xx unknown
- 1987-10-15 EP EP87115085A patent/EP0265785A3/en not_active Withdrawn
- 1987-10-15 ZA ZA877752A patent/ZA877752B/xx unknown
- 1987-10-16 CN CN198787107837A patent/CN87107837A/zh active Pending
- 1987-10-16 HU HU874666A patent/HUT45095A/hu unknown
- 1987-10-16 DD DD30803987A patent/DD269629A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 PL PL1987268266A patent/PL161165B1/pl unknown
- 1987-10-16 DD DD87329440A patent/DD283935A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 AU AU79842/87A patent/AU7984287A/en not_active Abandoned
- 1987-10-16 DD DD87329441A patent/DD284046A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 JP JP62262572A patent/JPS63207397A/ja active Pending
- 1987-10-16 AR AR87308981A patent/AR241940A1/es active
- 1987-10-16 BR BR8705535A patent/BR8705535A/pt unknown
- 1987-10-16 PL PL1987293520A patent/PL161448B1/pl unknown
- 1987-10-16 FI FI874564A patent/FI874564A/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 DK DK541987A patent/DK541987A/da not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-11-29 AU AU88324/91A patent/AU8832491A/en not_active Abandoned
-
1993
- 1993-05-14 LV LVP-93-344A patent/LV10654B/xx unknown
-
1994
- 1994-01-24 LT LTIP1793A patent/LTIP1793A/xx not_active Application Discontinuation
- 1994-01-24 LT LTIP1792A patent/LTIP1792A/xx unknown
- 1994-01-24 LT LTIP1794A patent/LTIP1794A/xx not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL161448B1 (pl) | 1993-06-30 |
| IE872748L (en) | 1988-04-16 |
| DK541987A (da) | 1988-04-17 |
| FI874564A (fi) | 1988-04-17 |
| LTIP1792A (en) | 1995-08-25 |
| LV10654B (en) | 1995-10-20 |
| JPS63207397A (ja) | 1988-08-26 |
| ZA877752B (en) | 1989-06-28 |
| DD269629A5 (de) | 1989-07-05 |
| FI874564A0 (fi) | 1987-10-16 |
| LV10654A (lv) | 1995-04-20 |
| LTIP1793A (en) | 1995-08-25 |
| AR241940A1 (es) | 1993-01-29 |
| LTIP1794A (en) | 1995-08-25 |
| EP0265785A3 (en) | 1989-11-08 |
| CN87107837A (zh) | 1988-12-21 |
| IL84154A0 (en) | 1988-03-31 |
| DK541987D0 (da) | 1987-10-16 |
| DD283935A5 (de) | 1990-10-31 |
| HUT45095A (en) | 1988-05-30 |
| AU8832491A (en) | 1992-04-30 |
| EP0265785A2 (en) | 1988-05-04 |
| PL268266A1 (en) | 1988-08-18 |
| BR8705535A (pt) | 1988-05-24 |
| AU7984287A (en) | 1988-04-21 |
| DD284046A5 (de) | 1990-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL161165B1 (pl) | Sposób wytwarzania bialek wirusa AIDS PL | |
| AP129A (en) | Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells | |
| Simmonds et al. | Discontinuous sequence change of human immunodeficiency virus (HIV) type 1 env sequences in plasma viral and lymphocyte-associated proviral populations in vivo: implications for models of HIV pathogenesis | |
| US5643756A (en) | Fusion glycoproteins | |
| Delchambre et al. | The GAG precursor of simian immunodeficiency virus assembles into virus‐like particles. | |
| AU700786B2 (en) | Dampening of an immunodominant epitope of an antigen for use in plant, animal and human vaccines and immunotherapies | |
| JP2537570B2 (ja) | エイズ及びその他のレトロウイルス病用ワクチンの遺伝子工学による製造 | |
| Griffiths et al. | Hybrid human immunodeficiency virus Gag particles as an antigen carrier system: induction of cytotoxic T-cell and humoral responses by a Gag: V3 fusion | |
| US5580773A (en) | Chimeric immunogenic gag-V3 virus-like particles of the human immunodeficiency virus (HIV) | |
| Luo et al. | Expression of gag precursor protein and secretion of virus-like gag particles of HIV-2 from recombinant baculovirus-infected insect cells | |
| IL127701A (en) | HIV gp 120 ENVELOPE POLYPEPTIDES, VACCINE AND METHODS FOR THEIR PREPARATION | |
| WO1994028929A1 (en) | Hiv envelope polypeptides | |
| ES2140380T5 (es) | Secuencias de adn que codifican polipeptidos gag retroviricos modificados y vacunas que las contienen o agregados de las mismas. | |
| Luo et al. | Chimeric gag-V3 virus-like particles of human immunodeficiency virus induce virus-neutralizing antibodies. | |
| IL102092A (en) | Use of recombinant VIH protein wrapped in VIH abduction drug and a pharmaceutical preparation containing the accumulated protein | |
| JP2743164B2 (ja) | Ａｉｄｓの原因ウィルスの糖蛋白質をコードするウィルスベクター及び組換えｄｎａ、該ベクターにより感染された細胞培養物、並びに抗体 | |
| KR0172970B1 (ko) | Aids백신에 유용한 키메릭 단백 및 그의 제조방법 | |
| Voss et al. | Definition of human immunodeficiency virus type 1 gp120 and gp41 cytotoxic T-lymphocyte epitopes and their restricting major histocompatibility complex class I alleles in simian-human immunodeficiency virus-infected rhesus monkeys | |
| JPH04500312A (ja) | 自己アセンブルド欠損非自己増殖性ウイルス粒子 | |
| EP0651806B1 (en) | Anti-feline immunodeficiency virus (fiv) vaccines | |
| JPH02448A (ja) | Ｈｉｖ−２ウィルスの蛋白質を発現させるためのベクターおよびその用途 | |
| WO1995032000A1 (en) | Hiv polyprotein immunogens | |
| CA1325610C (en) | Recombinant baculovirus occlusion bodies in vaccines and biological insecticides | |
| JP5555399B2 (ja) | ワクチンとして使用できる免疫性組成物 | |
| Halsey | Construction and characterization of chimaeric human immunodefiency virus type 1 subtype C Gag virus-like particles |