NO331781B1 - Fremgangsmater for fremstilling av heterobifunksjonelle polymere derivater, og for pakobling av disse polymere derivatene pa et legemiddel eller makromolekyl - Google Patents
Fremgangsmater for fremstilling av heterobifunksjonelle polymere derivater, og for pakobling av disse polymere derivatene pa et legemiddel eller makromolekyl Download PDFInfo
- Publication number
- NO331781B1 NO331781B1 NO20021555A NO20021555A NO331781B1 NO 331781 B1 NO331781 B1 NO 331781B1 NO 20021555 A NO20021555 A NO 20021555A NO 20021555 A NO20021555 A NO 20021555A NO 331781 B1 NO331781 B1 NO 331781B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peg
- group
- poly
- functional group
- alkyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 title claims description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 15
- 230000008878 coupling Effects 0.000 title 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 title 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 title 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 119
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 73
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 60
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 26
- -1 poly(acroylmorpholine) Polymers 0.000 claims description 55
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 43
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 32
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 claims description 16
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 claims description 16
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 16
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 claims description 9
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 8
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 7
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims description 6
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 claims description 5
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 229920001584 poly(acrylomorpholines) Polymers 0.000 claims description 3
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 abstract description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 107
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 99
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 47
- 239000000047 product Substances 0.000 description 46
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 40
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 10
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 9
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 8
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 8
- 208000021596 pentasomy X Diseases 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N acryloyl chloride Chemical compound ClC(=O)C=C HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 4
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 3
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBSYMODXUFYOLA-UHFFFAOYSA-N 5-phenylpenta-2,4-dienoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C=CC=CC1=CC=CC=C1 VBSYMODXUFYOLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005002 aryl methyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000005574 benzylation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920000765 poly(2-oxazolines) Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- FEIQOMCWGDNMHM-KBXRYBNXSA-N (2e,4e)-5-phenylpenta-2,4-dienoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C=C\C1=CC=CC=C1 FEIQOMCWGDNMHM-KBXRYBNXSA-N 0.000 description 1
- QWUWMCYKGHVNAV-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydrostilbene Chemical group C=1C=CC=CC=1CCC1=CC=CC=C1 QWUWMCYKGHVNAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASERXEZXVIJBRO-UHFFFAOYSA-N 3,3-diethoxypropan-1-ol Chemical compound CCOC(CCO)OCC ASERXEZXVIJBRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006180 3-methyl benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1[H])C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000006283 4-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1Cl)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000006181 4-methyl benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100231507 Caenorhabditis elegans ceh-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical class OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N Protium Chemical compound [1H] YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N Sorbitol Polymers OCC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000010539 anionic addition polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- FEIQOMCWGDNMHM-UHFFFAOYSA-N cinnamylideneacetic acid Natural products OC(=O)C=CC=CC1=CC=CC=C1 FEIQOMCWGDNMHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 125000005982 diphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Polymers 0.000 description 1
- 150000002304 glucoses Polymers 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Polymers C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Polymers 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003328 mesylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 229920001897 terpolymer Polymers 0.000 description 1
- BNWCETAHAJSBFG-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-bromoacetate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CBr BNWCETAHAJSBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 125000005039 triarylmethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
Abstract
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte til å fremstille, med høy renhet og høyt utbytte, heterobifunksjonelle derivater av poly(etylenglykol) eller beslektede polymerer. Et kromatografisk rensetrinn er ikke nødvendig i metoden. I henhold til fremgangsmåten i oppfinnelsen, blir det tilveiebrakt et mellompolymer som har formelen W-Poly-OH som bærer en fjembar gruppe W i en ende. Mellompolymeren W-Poly-OH blir først forandret ved å modifisere OH-gruppen til en første funksjonell gruppe X, etterfulgt av fjerning av W for å danne en andre hydroksylgruppe. Den siste hydroksylgruppen kan deretter videre bli konvertert til en andre funksjonell gruppe Y, for således å tilveiebringe det ønskede heterobifunksjonelle derivatet.
Description
Fremgangsmåter for fremstilling av heterobifunksjonelle polymere
derivater, og for påkobling av disse polymere derivatene på et legemiddel eller makromolekyl.
Oppfinnelsen angår fremgangsmåter for fremstilling av heterobifunksjonelle polymere derivater og fremgangsmåte for påkobling av disse polymere derivatene på et legemiddel eller makromolekyl.
Kovalent tilfesting av det hydrofile polymere poly(etylenglykol), forkortet (PEG), også kjent som poly(etylenoksid), forkortet (PEO), til molekyler og overflater har viktige anvendelser i bioteknologi og medisin. I sin vanligste form er PEG en lineær polymer som har hydroksylgrupper i hver ende:
Denne formelen kan representeres i korthet som HO-PEG-OH hvor det er forstått at
-PEG- representerer den polymere ryggraden uten de terminale grupper:
PEG er vanligvis brukt som metoksy-PEG-OH, eller mPEG i korthet, i hvilken en ende er den relativt inerte metoksygruppen, mens den andre enden er en hydroksylgruppe som lett er utsatt for kjemisk modifikasjon.
Det er forstått av de med kunnskap på området at betegnelsen poly(etylenglykol) eller PEG representerer eller inkluderer alle de ovennevnte former og enda andre.
Kopolymerene til etylenoksid og propylenoksid er nært beslektet til PEG i sin kjemi og kan substitueres for PEG i mange av dets anvendelser.
PEG er en nyttig polymer som har egenskapen at den er vannoppløselig så vel som oppløselig i mange organiske oppløsningsmidler. PEG er også ikke-toksisk og ikke-immunogent. Når PEG blir kjemisk tilfestet en vannuoppløselig forbindelse, er det resulterende konjugatet generelt vannoppløselig så vel som oppløselig i mange organiske oppløsningsmidler. Når molekylet til hvilket PEG er festet er biologisk aktivt, så som et legemiddel, blir denne aktiviteten vanligvis opprettholdt etter tilfesting av PEG og konjugatet kan vise forandret farmakokinetikk. For eksempel, Bentley et al. i Polymer Preprints, 38(1), 584 (1997) viste at vannuoppløselig antemisinin blir vannoppløselig og utvikler økt antimalariaaktivitet når den kobles til PEG. Davis et al. i U.S. patent nr. 4,179,337 har vist at proteiner koblet til PEG har økt blodsirkuleringslevetid på grunn av redusert utrensing gjennom nyrene og redusert immunogenisitet. Mangelen på toksisitet av PEG og dens hurtige utrensing fra kroppen er fordelaktig for farmasøytiske anvendelser.
Idet anvendelser av PEG-kjemien er blitt mer sofistikert, har det blitt et økt behov for heterobifunksjonelle PEG, det vil si PEG som har ulike terminale grupper: hvor X og Y er forskjellige grupper. PEG som har ryggradestergrupper og terminale grupper X og Y:
kan betraktes å være heterobifunksjonelle selv om X og Y er like, ettersom hver PEG-enhet i ryggraden er substituert usymmetrisk.
Slike heterobifunksjonelle PEG som bærer egnede funksjonelle grupper kan brukes til å koble PEG til overflater eller andre polymerer, så som polysakkarider eller proteiner, med den andre enden festet, for eksempel, til et legemiddel, et liposom, et annet protein eller en biosensor. Hvis en ende er bundet til en polymer og den andre enden er bundet til en egnet funksjonell gruppe, kan tverrbinding for å danne en nyttig hy droge 1 skje.
Ved å utnytte eksisterende fremgangsmåter, er imidlertid heterobifunksjonelle PEG ofte vanskelige eller umulige å fremstille med høy renhet. For eksempel kan man utføre nedenstående reaksjon ved å bruke molare ekvivalenter av hver reagens med det målet å fremstille det heterobifunksjonelle PEG acetalproduktet vist:
I praksis er imidlertid noe av det disubstituerte PEG dietylacetat, (C2H50)2CH20-PEG-OCH2CH(OC2H5)2også uunngåelig dannet og noe ureagert PEG vil også forbli. Langtekkelig kromatografi vil være nødvendig for å atskille denne blandingen.
Den kromatografiske tilnærmingen er blitt brukt av Zalipsky (Bioconjugate Chemistry, 4: 296-299, 1993) for å rense det følgende heterobifunksjonelle PEG-derivatet:
fra en reaksjonsproduktblanding som også inneholder ureagert PEG og det disubstituerte karboksylsyrederivatet.
I visse anvendelser er det essensielt at minimalt HO-PEG-OH er til stede i monoalkyl PEG brukt til å fremstille mono funksjonelle aktiverte PEG, ettersom nærværet av HO-PEG-OH ville føre til dobbelt aktiverte PEG-derivater som ville resultere i tverrbundne produkter eller ha andre uønskede virkninger. Faktisk er HO-PEG-OH en vanlig kontaminant i monoalkyl PEG. Den kromatografiske tilnærmingen er blitt beskrevet i U.S. patent nr. 4,298,410 til å separere CH3O-PEG-OH fra HO-PEG-OH ved å danne trityl (PhaC-derivatene), separere derivatene kromatografisk og fjerne tritylgruppen fra CH3O-PEG-OCPI13. En nylig patentsøknad, Suzawa et al. (W096/35451) beskrev benzyl PEG (C6H5-CH2-OPEG-OH) som et mellomprodukt ved fremstilling av heterobifunksjonelt PEG som bærer en gruppe i den ene enden som har affinitet for en målcelle og som har et toksin i den andre enden. Benzyl PEG ble imidlertid fremstilt ved benzylering av PEG etterfulgt av omstendelig utstrakt gradientkromatografi for å separere benzyl PEG fra dibenzyl PEG og ureagert PEG. Fremgangsmåten ble gjort i liten skala med et utbytte på bare 7,8%. Fremgangsmåten har således liten verdi for nyttig kommersiell produksjon.
En annen strategi, polymeriseringstilnærmingen, for fremstilling av heterobifunksjonell PEG omfatter anionisk polymerisering av etylenoksid på et anion, X, som til slutt blir endegruppen av polymeren:
Denne fremgangsmåten er blitt brukt av Yokoyama et al. (Bioconjugate Chemistry, 3: 275-276, 1992) for å fremstille en PEG med en hydroksylgruppe i den ene enden og en aminogruppe i den andre. Cammas et al. (Bioconjugate Chemistry, 6: 226-230, 1995) har brukt denne metoden til å fremstille PEG med en aminogruppe i en ende og en hydroksyl- eller metoksygruppe i den andre. Den er også blitt brukt av Nagasaki et al. (Biocojugate Chemistry, 6: 231-233, 1995) for å fremstille en PEG som har en formylgruppe i en den ene enden og en hydroksylgruppe i den andre. Disse metodene er generelt nyttige bare hvis X er en egnet og ønsket gruppe som polymerisering kan initieres på; ofte er ikke dette tilfellet. I tillegg krever vellykket anvendelse av denne metoden streng eksklusjon av vann for å forhindre dannelsen av HO-PEG-OH, og dette problemet blir mer alvorlig når molekylvekten øker. Det er også nødvendig å kontrollere nøyaktig graden av polymerisering for å oppnå den ønskede molekylvekten til PEG-derivatet. Denne metoden er begrenset ved degradering av mange typer av legemiddelmolekyler under de harde polymerisasjonsbetingelsene hvis etylenoksid polymerisasjon blir utført direkte på legemiddelmolekylet. Metoden er også begrenset ved mangel på selektivitet hvis mer enn én funksjonell gruppe er til stede på hvilke polymerisasjon kan skje. Kjent teknikk er også beskrevet i WO 99/34833 Al.
Det ville være ønskelig å tilveiebringe ytterligere fremgangsmåter til å fremstille heterobifunksjonelle PEG som hovedsakelig eliminerer minst noen av problemene og ulempene til de tidligere metodene.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte til å fremstille et heterobifunksjonelt polymert derivat, som er kjennetegnet ved at den omfatter: (i) å tilveiebringe en polymer med formel W-O-Poly-OH, hvor W er en gruppe som er fjernbar ved katalytisk hydrogenolyse eller ved syrekatalysert hydrolyse, og Poly representerer en polymerenhet som er valgt fra gruppen som består av poly(alkylenoksider), poly(oksyetylerte polyoler), poly(olefine alkoholer) og poly(akroylmorfolin), (ii) modifisere -OH-resten for å produsere en første funksjonell gruppe, der nevnte første funksjonelle gruppe er valgt fra gruppen som består av:
mesylat, tosylat, tresylat,
-0-(CH2)n-C02R.3hvori n = 1-6 og R3er en alkylgruppe,
-NHR4hvori R4er H, alkyl eller en aminobeskyttende gruppe, -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe,
-0-(CH2)n-CHO der n=l-6, og
(iii) konvertere nevnte W til en andre funksjonell gruppe, der nevnte andre funksjonelle gruppe er forskjellig fra nevnte første funksjonelle gruppe.
Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte til å fremstille et heterobifunksjonelt polymert derivat, som er kjennetegnet ved at det omfatter: (i) å tilveiebringe en polymer med formelen Ar-C(Ri)(R2)0-Poly-OH, hvor Ar er valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler,
hvor R]og R2er H, alkyl eller Ar, hvor Ar er som definert ovenfor, og
hvor Poly er en polymer rest valgt fra gruppen som består av poly(alkylenoksider), poly(oksyetylerte polyoler), poly(olefine alkoholer) og poly(akryloylmorfolin); (ii) kjemisk modifisere -OH-gruppen for å produsere en første funksjonell gruppe -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe, (iii) fjerne Ar-C(R])(R2)0-gruppen for å produsere en ny hydroksylgruppe; (iv) konvertere den nye hydroksylgruppen til en andre funksjonell gruppe, hvor nevnte andre funksjonelle gruppe er forskjellig fra den nevnte første funksjonelle gruppen.
Oppfinnelsen gjelder også en fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen, som er kjennetegnet ved at den er til anvendelse ved inhibering av reaktiviteten til HO-PEG-OH i en blanding der:
Poly er polyetylenglykol (PEG),
Ar-C(Ri)(R2)0- er C5H6-CH2-0-,
trinn (ii) omfatter kjemisk modifisering av -OH-gruppen ved alkylering for å produsere en -OR-gruppe, der R er alkyl, og
trinn (iii) omfatter katalytisk hydrogenering.
I tillegg gjelder oppfinnelsen en fremgangsmåte for påkobling av et polymert derivat på et legemiddel eller makromolekyl, som er kjennetegnet ved at den omfatter fremstillingen av et polymert derivat ved å benytte fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen, og det ytterligere trinnet med å koble på det polymere derivatet på nevnte legemiddel eller makromolekyl.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer i en utførelsesform en fremgangsmåte til å fremstille heterobifunksjonelle polymere derivater via et PEG mellomprodukt som bærer en fjernbar gruppe i en ende. PEG-derivater av klassen W-PEG-OH, hvor W er en gruppe som kan fjernes ved milde kjemiske metoder, blir tilveiebrakt og blir først forandret ved å modifisere OH-gruppen til en ønsket gruppe, X, etterfulgt av fjerning av W for å danne en andre hydroksylgruppe. Den siste hydroksylgruppen kan deretter videre forandres til en andre funksjonell gruppe, Y, og således tilveiebringe den ønskede heterobifunksjonelle PEG:
En foretrukket fjernbar gruppe er benzyloksygruppen (C6H5CH2-O-), skjønt andre arylmetylgrupper inkludert, men ikke begrenset til, 4-metylbenzyl, 3-metylbenzyl, 4-klorbenzyl, 4-metoksybenzyl, difenylmetyl, trifenylmetyl eller 1 -naftylmetyl kan anvendes. Diarylmetyl- og triarylmetylgrupper vil også være tilstrekkelige. Benzyloksy-PEG-OH (BzO-PEG-OH) kan for eksempel fremstilles med høy renhet ved polymerisering av etylenoksid på benzyloksidionet, BzO". Ved å utføre reaksjonen under nøye kontrollerte, vannfrie betingelser, kan det heterobifunksjonelle derivatproduktet fremstilles med en minimal mengde av HO-PEG-OH. En fordel ved benzyl- og andre arylmetylgrupper er at de kan fjernes fra PEG under relativt milde betingelser ved katalytisk hydrogenolyse eller ved syrekatalysert hydrolyse.
I reaksjonene ovenfor, er eat en katalysator, så som palladium eller trekull.
I en utforming av oppfinnelsen blir fremgangsmåten brukt til å konjugere PEG eller beslektede polymerer til makromolekyler så som proteiner, lipider, polysakkarider eller andre polymerer eller overflater. Først blir hydroksylgruppen til mellompolymeren BzO-PEG-OH konvertert til en første reaktiv funksjonell gruppe. Denne reaktive funksjonelle gruppen tillater tilfesting av BzO-PEG- til et makromolekyl. Benzylgruppen blir deretter fjernet ved hydrogenolyse eller hydrolyse, uten kjemisk å påvirke makromolekylet og gjør således tilgjengelig en ny terminal hydroksylgruppe på PEG-derivatet. Denne nye hydroksylgruppen kan brukes direkte til å tilfeste den enden av PEG-derivatet til det samme eller et annet makromolekyl. Alternativt kan hydroksylgruppen ytterligere konverteres til en annen andre relativ funksjonell gruppe, som deretter blir brukt til å koble PEG-derivatet til et makromolekyl. Hvis den andre reaktive funksjonelle gruppen blir koblet til en annet polymer, kan et tverrbundet polymer, nyttig som et hydrogel, dannes. Reaksjonsskjemaet kan illustreres i generelle former som følger:
Hvis ønsket, kan rekkefølgen i reaksjonssekvensen manipuleres for å unngå destruksjon av en kjemisk gruppe sensitiv til hydrogenering eller hydrolyse:
I en annen utforming av oppfinnelsen er det beskrevet en fremgangsmåte til å inhibere reaktiviteten av HO-PEG-OH i en blanding av W-O-PEG-OH og HO-PEG-OH. I denne tilnærmingen produserer alkylering av W-O-PEG-OH som inneholder HO-PEG-OH en blanding av W-O-PEG-OR og RO-PEG-OR, hvor R er en alkylgruppe.
hvor X er en avspaltningsgruppe så som mesylat eller tosylat.
Katalytisk hydrogenering konverterer BxO-PEG-OR til RO-PEG-OH.
Således blir det fremstilt en blanding av RO-PEG-OH og RO-PEG-OR.
Ulik HO-PEG-OH, er RO-PEG-OR inert og ikke-reaktiv. Således blir blandingen en ekvivalent til et rent produkt av RO-PEG-OH i de fleste kjemiske reaksjoner.
Ovennevnte og andre sider, fordeler og trekk ved oppfinnelsen og måten på hvilke de samme blir utført, vil være klarere ved vurdering av den følgende detaljerte beskrivelse av oppfinnelsen.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte til å fremstille, med høy renhet og høyt utbytte, heterobifunksjonelle derivater av poly(etylenglykol) eller beslektede polymerer. Et kromatografisk rensetrinn er ikke nødvendig i fremgangsmåten. I henhold til oppfinnelsens fremgangsmåte, blir det tilveiebrakt en mellomproduktpolymer som har formelen W-Poly-OH som bærer en fjernbar gruppe W i en ende. Mellomproduktpolymeren W-Poly-OH blir først forandret ved å modifisere OH-gruppen til en første funksjonell gruppe X, etterfulgt av fjerning av W for å danne en andre hydroksylgruppe. Den siste hydroksylgruppen kan deretter videre konverteres til en andre funksjonell gruppe Y, og således tilveiebringe det ønskede heterobifunksjonelle derivatet:
I diskusjonen nedenfor vil Poly ofte bli referert til av makelighet som PEG eller som poly(etylenglykol). Det skal imidlertid forstås at andre beslektede polymerer også er egnet for anvendelse i utførelsen av oppfinnelsen og at anvendelse av betegnelsen PEG eller poly(etylenglykol) er ment å være inkluderende og ikke ekskluderende i dette henseende.
Poly(etylenglykol) eller PEG er nyttig i biologiske anvendelser fordi den har egenskaper som er meget ønskelige og er generelt anbefalt for biologiske eller bioteknologiske anvendelser. PEG er typisk klar, fargeløs, uten lukt, oppløselig i vann, varmestabil, inert for mange kjemiske midler, kan hverken hydrolyseres eller brytes ned og er ikke-toksisk. Poly(etylenglykol) er egnet for å være biokompatibel, hvilket betyr at PEG er i stand til sameksistens med levende vev eller organismer uten å forårsake skade. Mer spesifikt er PEG ikke immunogent, hvilket betyr at PEG ikke har en tendens til å produsere en immunrespons i kroppen. Når den er festet til en rest som har en eller annen gunstig funksjon i kroppen, har PEG en tendens til å maskere resten og kan redusere eller eliminere enhver immunrespons slik at organismen kan tolerere nærvær av resten. Følgelig skulle det heterobifunksjonelle derivatet i henhold til oppfinnelsen være hovedsakelig ikke-toksisk og skulle ikke tendere hovedsakelig til å fremstille en immunrespons eller forårsake blodkoagulasjon eller andre uønskede virkninger.
PEG som har formelen -CH2CH20-(CH2CH20)I1-CH2CH2-, hvor n er fra 8 til ca 4000, er et nyttig polymer i utøvelsen av oppfinnelsen. Andre difunksjonelle, vann opp løselige, ikke-peptidpolymerer enn PEG er også egnet i henhold til foreliggende oppfinnelse. Disse andre polymerene inkluderer poly(vinylalkohol)
("PVA"); andre poly(alkylenoksider) så som poly(propylenglykol) ("PPG") og lignende; og poly(oksyetylerte polyoler) så som poly(oksyetylert glyserol), poly(oksyetylert sorbitol) og poly(oksyetylert glukose) og lignende. Polymerene kan være homopolymerer eller tilfeldige eller blokk kopolymerer og terpolymerer basert på monomerene av de ovenstående polymerer, rettkjedet eller forgrenet.
Spesifikke eksempler på egnede ytterligere polymerer inkluderer poly(oksazolin),
difunksjonell poly(akryloylmorfolin) ("PAcM"), og poly(vinylpyrrolidon) ("PVP"). PVP og poly(oksazolin) er velkjente polymerer på området og deres fremstilling er lett tilgjengelig for en person med kunnskap på området. PAcM og dens syntese og anvendelse er beskrevet i U.S. patent nr. 5,629,384 og 5,631,322, hvis innhold er inkorporert heri ved referanse i sin helhet.
Betegnelsene "gruppe", "funksjonell gruppe", "rest", "aktiv rest" og "reaktivt sete", er alle i noen grad synonyme på det kjemiske området og blir brukt på området og heri for å betegne distinkte, definerbare deler eller enheter av et molekyl og til enheter som utfører en funksjon eller aktivitet og er reaktive med andre molekyler eller deler av molekyler.
Betegnelsen "kobling" blir brukt for å betegne grupper som normalt er dannet som et resultat av en kjemisk reaksjon og typisk er kovalente bindinger.
Det skal forstås at med "legemiddel" er det ment ethvert stoff ment for diagnose, terapi, lindring, behandling eller forhindring av sykdom hos mennesker og andre dyr, eller ved annen måte å forhøye fysisk eller mental velvære.
Betegnelsen "makromolekyl" blir brukt for å bety store molekyler inkludert, men ikke begrenset til, lipid, polysakkarid, proteiner, nukleotidsekvenser, legemidler, polymerer, etc. Det er ofte ønskelig å konjugere de ovenfor beskrevne polymerer til slike makromolekyler.
I henhold til oppfinnelsen, kan den fjernbare gruppen W fjernes fra polymeren W-Poly-X ved milde kjemiske reaksjoner. Slike kjemiske reaksjoner kan utføres under betingelser hvor andre rester av polymeren W-Poly-X, spesielt den første funksjonelle gruppen X, ikke er uønsket modifisert. Fortrinnsvis har W en formel som Ar-C(Ri)(R.2)-0- hvor Ar representerer en rest valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler, hvor Ri og R2er H, alkyl eller Ar som er definert ovenfor. Således inkluderer eksemplariske eksempler på den fjernbare gruppen W, men er ikke begrenset til, benzyloksygruppen (C6H5CH2-O-) og andre arylmetyloksygrupper inkludert, men ikke begrenset til, 4-metylbenzyloksy, 3-metylbenzyloksy, 4-klorbenzyloksy, 4-metoksybenzyloksy, difenylmetyloksy, trifenylmetyloksy og 1-naftylmetyloksy. Arylmetyloksygruppene kan fjernes fra polymeren under relativt milde betingelser ved katalytisk hydrogenolyse eller syrekatalysert hydrolyse.
I henhold til oppfinnelsen blir mellompolymeren til W-Poly-OH fortrinnsvis syntetisert, for eksempel ved polymerisering av monomerene til de egnede polymerene på akrylmetyloksidionet. For eksempel kan benzyloksy-PEG-OH (BzO-PEG-OH) fremstilles med høy renhet og høyt utbytte ved polymerisering av etylenoksid på benzyloksidionet BxO-. Fortrinnsvis blir polymerisasjonsreaksjonen utført under vannfrie betingelser. I henhold til denne siden av oppfinnelsen, blir produksjonen av HO-PEG-OH minimalisert. Utstrakt gradientkromatografirensing er ikke nødvendig, og utbyttet av BzO-PEG-OH er høyt. Dette er i kontrast til fremgangsmåten kjent i teknikkens stand med benzylering av PEG etterfulgt av arbeidsom utstrakt gradientkromatografi, som alltid fører til høye omkostninger og lavt utbytte og gjør at fremgangsmåten er av liten verdi for kommersiell produksjon.
I henhold til oppfinnelsen har det avsluttende produktet heterobifunksjonell derivat av poly(etylenglykol) eller beslektede polymerer en formel som Y-Poly-X. Den første funksjonelle gruppen X og den andre funksjonelle gruppen Y er reaktive rester som er i stand til å reagere med andre molekyler til hvilke PEG-derivatene er ønskelig å bli konjugert, for eksempel makromolekyler inkludert, men ikke begrenset, proteiner, lipider, polysakkarider og andre polymerer. Eksempler på den første funksjonelle gruppen X inkluderer, men er ikke begrenset til, mesylat; tosylat; tresylat; -0-(CH2)n-C02H hvor n = 1-6; -0-(CH2)n-C02R3hvor n = 1-6 og R3er en alkylgruppe; -NHR4hvor R4 er H eller alkyl eller en aminobeskyttende gruppe så som t-Boc og Fmoc; -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er fra 1-6, Z er O eller S, R5er H eller en alkylgruppe; Ar-CH=CH-CH=CH-C02- hvor Ar representerer en rest valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler; -0-(CH2)n-CHO; og - 02CCH2CH2C02R6hvor R6er H eller NHS som representerer N-succinimidyl.
Eksempler på den andre funksjonelle gruppen Y inkluderer, men er ikke begrenset til, hydroksylgruppe; mesylat; tosylat; tresylat; -0-(CH2)n-C02H hvor n = 1-6; -O-(CH2)n-C02R3hvor n = 1-6 og R3er en alkylgruppe; -NHR4hvor R4er H eller alkyl eller en aminobeskyttende gruppe så som t-Boc eller Fmoc; -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er et tall fra 1 til 6, Z er O eller S, R5er H eller en alkylgruppe; Ar-CH=CH-CH=CH-C02- hvor Ar representerer en rest valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler; -0-(CH2)n-CHO; -02CCH2CH2C02R6hvor R6er H eller NHS som representerer N-succinimidyl; og CH2=CH-C02-. I et poly(etylenglykol)derivat med formelen Y-Poly-X, er den første funksjonelle gruppen X og den andre funksjonelle gruppen Y fortrinnsvis forskjellige fra hverandre, for således sikre at polymeren er heterobifunksjonell.
Fortrinnsvis når X er Ar-CH=CH-CH=CH-CC«2- hvor Ar er som definert ovenfor, Y er -0-(CH2)n-CHO eller -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er et tall fra 1 til 6, Z er O eller S og R5er H eller en alkylgruppe. Når X -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er et tall fra 1 til 6, er Z O eller S og R5er H eller en alkylgruppe, er Y fortrinnsvis - O2CCH2CH2CO2R6hvor R6er H eller NHS. Når X er -0-CH2-C02CH(CH3)CH2CONHS, er den andre funksjonelle gruppen Y fortrinnsvis CH2=CH-C02-.
Skjønt reaksjonsskjemaet til fremgangsmåten i henhold til foreliggende oppfinnelse er vist ovenfor i likningene:
skal det forstås at det kan være mer enn ett kjemisk reaksjonstrinn mellom ethvert av de to produktene i reaksjonene. For eksempel kan flere sekvensielle reaksjonstrinn finne sted for å konvertere den terminale hydroksylgruppen til W-Poly-OH til den første funksjonelle gruppen X. Likeledes kan flere reaksjonstrinn bli utført for å modifisere den nye hydroksylgruppen HO-Poly-X for å fremstille den andre funksjonelle gruppen Y.
Videre kan i en utforming av oppfinnelsen, før trinnet hvor den fjernbare gruppen W blir fjernet, polymeren W-Poly-X kobles til et makromolekyl eller overflate gjennom en kobling dannet mellom den første reaktive funksjonelle gruppen X og en egnet rest på overflaten av makromolekylet, således konjugere W-Poly-delen av polymeren til makromolekylet: W-Poly-Mi hvor Mi er et makromolekyl så som protein, peptid, lipid, legemiddel, polysakkarid eller andre polymerer, eller overflaten av et stoff, for eksempel mikroorganisme. Den fjernbare gruppen W i konjugatet W-Poly-Mi blir deretter fjernet ved milde kjemiske reaksjoner så som for eksempel katalytisk hydrogenolyse eller ved syrekatalysert hydrolyse. Den resulterende -OH kan omsettes direkte til for eksempel et annet makromolekyl M2så som protein, peptid, lipid, legemiddel, polysakkarid eller andre polymerer, eller overflaten av et stoff, for eksempel mikroorganisme, for å danne M2-Poly-Mi. Hvis konjugering til et annet makromolekyl ikke er ønsket, kan -OH-gruppen eventuelt konverteres til en inert ikke-reaktiv gruppe, for eksempel kapslet ved alkylering. Alternativt kan den resulterende -OH-gruppen konverteres til en reaktiv funksjonell gruppe Y som beskrevet ovenfor: Y-Poly-M]. Den funksjonelle gruppen Y kan deretter omsettes med M2for å danne M2-Poly-Mi.
Hydrogeler kan fremstilles i denne fremgangsmåten gjennom tverrbinding av et flertall forskjellige makromolekyler med det PEG-relaterte polymer Poly. Det skal imidlertid forstås at de to funksjonelle gruppene X og Y også kobles til samme makromolekyl, hvori konjugeringen av PEG-relaterte polymerer på makromolekylet kan danne et polymert skall på makromolekylet.
I en annen utforming av oppfinnelsen kan det heterobifunksjonelle derivatet av PEG eller relatert polymer Y-Poly-X fremstilt som beskrevet ovenfor bli omsatt med makromolekyler eller andre stoffer gjennom de funksjonelle gruppene X og Y og de reaktive restene på makromolekylene eller andre stoffer. For eksempel kan X og Y selekteres slik at to forskjellige typer av makromolekyler eller andre stoffer kan kobles til henholdsvis X og Y. Det er også mulig å selektere X og Y slik at de reagerer med samme typer makromolekyler.
I henhold til en annen side av oppfinnelsen blir heterobifunksjonelle derivater av poly(etylenglykol) eller beslektede polymerer tilveiebrakt. Slike polymerer er
representert av formelen Y-Poly-X, hvor Poly representerer poly(etylenglykol) eller beslektede polymerer som definert ovenfor. X og Y er reaktive funksjonelle grupper valgt fra gruppen som består av mesylat, tosylat, tresylat, -0-(CH2)nC02H hvor n = 1-6,
-0-(CH2)n-C02R3hvor n = 1-6 og R3er en alkylgruppe,
-NHR4hvor R4er H eller alkyl eller en aminobeskyttende gruppe så som t-Boc og Fmoc, -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er tall fra 1 til 6, og Z er O eller S, R5er H eller en alkylgruppe, Ar-CH=CH-CH=CH-CC«2- hvor Ar representerer en rest valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler, -O-
(CH2)n-CHO, og -O2CCH2CH2CO2R.6hvor R6er H eller NHS, n er 1-6. Fortrinnsvis er X forskjellig fra Y.
I noen utforminger, når X er Ar-CH=CH-CH=CH-CC>2- hvor Ar er som definert ovenfor, er Y -0-(CH2)n-CHO eller -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er tall fra 1 til 6, Z er O eller S og R5er H eller en alkylgruppe; når X er -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvor n er et tall fra 1 til 6, Z er O eller S og R5er H eller an alkylgruppe, er Y fortrinnsvis - O2CCH2CH2CO2R6hvor R6er H eller NHS; når X er -O-CH2C02CH(CH3)CH2CONHS, er den andre funksjonelle gruppen Y fortrinnsvis CH2=CH-C02-.
I enda en annen side ved oppfinnelsen er det tilveiebrakt en fremgangsmåte til å fremstille et heterobifunksjonelt derivat av poly(etylenglykol) eller beslektede polymerer som har formelen X-Polya-0-CHR5(CH2)nC02-Polyt,-X, hvor Polya og Polybrepresenterer den samme typen av polymerer representert ved Poly som beskrevet ovenfor, n er 0-6 og R5er H eller alkyl, X er en reaktiv funksjonell gruppe. Hovedsakelig rene former av de heterobifunksjonelle derivatene kan fremstilles med høy renhet og høyt utbytte uten å måtte falle tilbake på et kromatografirensingstrinn.
I fremgangsmåten er det tilveiebrakt et første polymer som har formelen Ar-C(Ri)(R2)0-Polyb-U og en andre polymer med formelen Ar-C(R])(R2)0-Polya-CHR5(CH2)nCO-V hvor R]og R2er H, alkyl eller Ar hvor Ar er som definert ovenfor og er valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler, og hvor U og V er rester valgt slik at den første polymeren kan reagere med den andre polymeren for å danne en polymer med formel Ar-C(Ri)(R2)0-Polya-0-CHR5(CH2)I1C02-Polyb-OC(Ri)(R2)-Ar. Som beskrevet ovenfor, kan den første polymeren og den andre polymeren fremstilles ved å danne separat Polybog Polyadirekte på et arylmetyloksidion Ar-C(Ri)(R2)0" for å fremstille Ar-C(Ri)(R2)0-Polya-OH eller Ar-C(Ri)(R2)0-Polyb-OH, og eventuelt i det påfølgende modifisere den terminale hydroksylgruppen til henholdsvis restene U og V, slik at de to polymerene kan kobles for eksempel i en esterkobling. Den koblede polymeren kan deretter modifiseres ved å fjerne Ar-C(Ri)(R2)0-restene ved katalytisk hydrogenolyse eller ved syrekatalysert hydrolyse. De resulterende -OH-gruppene kan eventuelt konverteres til andre reaktive funksjonelle grupper. Eksempler på den reaktive funksjonelle gruppen X inkluderer, men er ikke begrenset til, -OH; CH2=CR5C02- hvor R5er H eller alkyl; -0-(CH2)n-CH(ZR)2hvor R er H eller alkyl, Z er O eller S og n er 1-6; NHS-02CO- hvor NHS representerer N-succinimidyl. I en foretrukket utforming er U -OH og V er en halogengruppe så som -Cl.
I enda en annen side av oppfinnelsen er det tilveiebrakt en fremgangsmåte til å fremstille et bifunksjonelt derivat av poly(etylenglykol) eller relaterte polymerer som har formelen RgO-Polya-0-CHR5(CH2)nC02-Polyb-Y, hvor Polya, Polyb, n og R5er som definert ovenfor, og Rg er H eller en alkylgruppe. Y er en reaktiv funksjonell gruppe. Fremgangsmåten er fri for ethvert kromatografisk trinn. I fremgangsmåten blir en første polymer Ar-C(Ri)(R2)0-Polyt,-U tilveiebrakt som beskrevet ovenfor. Et andre polymer RgO-Polya-CHR5(CH2)nCO-V blir også tilveiebrakt hvor Rg er H eller alkyl, eller Ar hvor Ar er som definert ovenfor. Restene U og V kan omsettes med hverandre for å danne for eksempel en esterbinding, slik at den første polymeren kan kobles til den andre polymeren for å danne polymeren RgO-Polya-0-CHR5(CH2)nC02-Polyb-OC(Ri)(R2)-Ar. Ar-C(Ri)(R2)0-resten kan deretter konverteres til en ønskelig funksjonell gruppe. Fortrinnsvis er U -OH og V er en halogengruppe så som -Cl. Y kan være en funksjonell gruppe så som -OH; CH2=CRsC02- hvor R5er H eller en alkyl; og -O-(CH2)n-CH(ZR)2hvor R er H eller alkyl, Z er O eller S og n er 1-6; og -0-(CH2)n-C02H hvor n er 1-6.
I henhold til enda en annen side av oppfinnelsen er det tilveiebrakt en fremgangsmåte til å fremstille en polymer R90-Poly-OH uten å kontaminere polymeren med reaktiviteten HO-Poly-OH. Poly er som definert ovenfor og R9er en alkyl- eller arylgruppe. Som beskrevet i kjent teknikk, krever fjerning av HO-Poly-OH så som HO-PEG-OH fra et preparat med PEG-derivater normalt utstrakt og arbeidsomme rensetrinn, for eksempel ved å bruke kromatografi. Fremgangsmåten i henhold til foreliggende oppfinnelse unngår dette kravet. I fremgangsmåten blir Ar-CRiR20-Poly-OH først syntetisert ved å danne polymeren Poly på arylmetoloksidionet Ar-CRiR20\ Ar-CRiR20-Poly-OH blir deretter alkylert for å konvertere polymeren til Ar-CRiR2-0-PEG-OR9. Enhver urenhet med HO-Poly-OH blir konvertert til R9O-PEG-OR9ved alkylering. Neste trinn blir å konvertere Ar-CRiR2-0-resten til -OH ved syrekatalysert hydrolyse eller hydrogenolyse og å danne en ny blanding av R9O-PEG-OH og R9O-PEG-OR9. Ettersom R9O-PEG-OR9er inert i de fleste kjemiske reaksjoner, er blandingen kjemisk ekvivalent til ren R9O-PEG-OH. Eventuelt kan R9O-PEG-OH videre konverteres til R9O-PEG-CHO.
De følgende eksempler er gitt for å illustrere oppfinnelsen, men skal ikke vurderes som en begrensning av oppfinnelsen.
Eksempel 1. Syntese av HO-PEG-NH3<+>Cl"
Eksempel 2. Syntese av HO-PEG-OCH2C02H
Eksempel 3. Syntese av CrH3N<+->PEG-0-CH2C02H
Eksempel 4. Syntese av ClHjN^PEG-O-CHiCHiCOiH
Eksempel 5. Syntese av C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG-OCH2CH(OC2H5)2
Eksempel 6. Syntese av NHS-O2CO-PEG-OCH2CO2-PEG-O-CO2NHS (NHS =
N-succinimidyl)
Eksempel 7. Syntese av CH2=CH-C02-PEG-OCH2C02-PEG-02C-CH=CH2
Eksempel 8. Syntese av CH3O-PEG-O-CH2CH2CO2-PEG-OH
Eksempel 9. Syntese av NHS-02CCH2CH2COO-PEG-OCH2CH2CH(OC2H5)2
Eksempel 10. Syntese av CH2=CHC02-PEG-OCH2C02-PEG-OCH(CH3)CH2C02NHS
Eksempel 11. Anvendelse av alkylering for å fremstille CH3O-PEG-OH som ikke har noe HO-PEG-OH fra en blanding av BzO-PEG-OH og HO-PEG-OH
EKSEMPEL 1
FREMSTILLING AV HO-PEG-NH3<+>CL"
REAKSJONER:
a) Fremstilling av BzO-PEG-OMs:
BsO-PEG-OH (molekylvekt 3400, 34 g, 10 mmol) i 150 ml toluen ble azeotropisk
destillert i 2 timer under nitrogen og oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur. Til oppløsningen ble det tilsatt 40 ml tørr metylenklorid og 2,1 ml tørr trietylamin (15 mmol). Oppløsningen ble avkjølt i et isbad og 1,2 ml tørr mesylklorid (15 mmol) ble tilsatt dråpevis. Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen natten over og reaksjonen ble stoppet ved å tilsette 2 ml absolutt etanol. Blandingen ble inndampet under vakuum for å fjerne oppløsningsmidler, primært de andre enn toluen, filtrert, konsentrert igjen under vakuum og deretter utfelt i 100 ml etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 34 g (100%).<]>H nmr (DMSO-d6): 8 3,5 (br m, PEG), 4,31 (t, OCH2CHj>OMs), \4,49 (s, CeHs-CHj,-OPEG-), 7,33 (s + kompleks mult, C6HrCH2-OPEG-).
b) Fremstilling av BzO-PEG-NH2:
BzO-PEG-OMs (25 g, 7,35 mmol) ble oppløst i 500 ml vandig
ammoniakkoppløsning som inneholdt 5 g ammoniumklorid og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 72 timer. Oppløsningen ble deretter ekstrahert tre ganger med metylenklorid. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, filtrert, kondensert under vakuum og produktet utfelt med 100 ml etyleter. Produktet ble innsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 23 g (92%).<]>H nmr (DMSO-d6): 8 3,5 (br m, PEG), 2,9 (t, -CHjjNHz), 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-), 7,33 (s + kompleks mult., C6Hj-CH2-OPEG-).
c) Fremstilling av HO-PEG-NH3<+>Cl":
En løsning av BzO-PEG-NH2(46 g, 14 mmol) i 200 ml konsentrert HC1 (12 M) ble
omrørt ved romtemperatur i 44 timer. Den ble deretter fortynnet til 1200 ml med vann og NaCl ble tilsatt for å gi en 15% oppløsning. Den vandige oppløsningen ble ekstrahert tre gange med metylenklorid og de kombinerte ekstraktene ble tørket over natriumsulfat. Metylenkloridet ble konsentrert under vakuum og produktet presipitert ved tilsetning av eter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur. Utbytte: 42 g (95%).<]>H nmr (DMSO-d6): 8 2,96 (t, CH2-N), 3,5 (br m, PEG), 4,6 (br, OH), 7,9 (br, NH3<+>).
EKSEMPEL 2
FREMSTILLING AV HO-PEG-OCH2C02H
REAKSJONER:
a) Fremstilling av BzO-PEG-OCH2C02C(CH3)3:
BzO-PEG-OH (molekylvekt 3400, 40 g, 11,7 mmol) ble azeotropisk tørket med 250
ml toluen under N2. Etter 2 timer ble oppløsningen avkjølt til romtemperatur. Kalium tert-butoksid (2,8 g, 23,5 mmol) oppløst i 90 ml tert-butanol og 90 ml toluen ble tilsatt til en ovennevnte PEG-oppløsningen. Blandingen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur. Tert-butyl bromacetat (4 ml, 26,3 mmol) ble tilsatt og oppløsningen ble omrørt under N2ved romtemperatur natten over. Oppløsningen ble filtrert, kondensert under vakuum og utfelt i 300 ml eter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum.<]>H nmr (DMSO-d6): 8 1,5 (s, t-Bu), 3,51 (m, PEG), 3,98 (s, -OCHjjCOr), 4,49 (s, CeHsCHjO-), 7,33 (s + komp. mult., CeHjCHjO-).
b) Fremstilling av HO-PEG-OCH2C02H:
BzO-PEG-OCH2OC2C(CH3)3(10 g) ble oppløst i 100 ml hydrosaltsyre (37%) og
oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Løsningen ble fortynnet med 1 1 destillert vann og pH justert til 2 med 1 N natriumhydroksidoppløsning. Oppløsningen ble deretter ekstrahert tre ganger med metylenklorid. Den organiske fasen ble tørket over vannfritt natriumsulfat, filtrert for å fjerne salt, kondensert under vakuum og utfelt i eter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum. Utbytte 8,5 g (85%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,51 (br m, PEG), 4,01 (s, - PEGOCHjjCOOH).
EKSEMPEL 3
FREMSTILLINGAVCrH3N<+->PEG-0-CH2C02H
REAKSJONER:
a) Fremstilling av HO-PEG340o-OCH2C02CH3:
HO-PEG-OCH2C02H (15 g) fremstilt som i eksempel 2 ble oppløst i 75 ml metanol
og 3 ml konsentrert H2S04ble tilsatt den resulterende oppløsningen. Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 1,5 timer og 180 ml 5% vandig NaHC03ble forsiktig tilsatt. Natriumklorid (25 g) ble deretter tilsatt og pH i den resulterende oppløsningen ble justert til 7,0 med 5% Na2HP04. Oppløsningen ble ekstrahert med metylenklorid og de kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04. Metylenkloridoppløsningen ble deretter inndampet til 20 ml og produktet utfelt med 300 ml kald etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur for å oppnå 13,5 g av et produkt som ble vist å være 100% rent ved GPC.
b) Fremstilling av MsO-PEG-OCH2OC2CH3:
HO-PEG34oo-OCH2C02CH3(13,5 g) ble oppløst i 400 ml CHC13og ca 200 ml
oppløsningsmiddel ble destillert. Restoppløsningen ble avkjølt til romtemperatur og trietylamin (0,72 ml) ble tilsatt, etterfulgt av 0,38 ml MsCl. Reaksjonsblandingen ble omrørt natten over under N2ved romtemperatur, 2 ml etanol ble tilsatt og den resulterende blandingen ble omrørt i 15 minutter. Etter inndamping av oppløsningsmiddelet under vakuum (55°C bad), ble 300 ml kald etyleter tilsatt og det resulterende utfallet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur. Utbyttet var 14 g og<]>H nmr-spektrum anga 100% mesylering.
c) Fremstilling av H2N-PEG-OCH2-C02NH4:
MsO-OCH2C02CH3(13 g) ble oppløst i 70 ml H20 og pH ble justert til 12. Etter
omrøring i 1,5 timer mens pH-verdien ble opprettholdt på 12, ble 250 ml av NH40H-oppløsning som inneholdt 5% NH4CI tilsatt. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt i ca 40 timer, NaCl ble tilsatt for å bringe konsentrasjonen til ca 8%. Den resulterende oppløsningen ble ekstrahert med CH2C12og tørket over Na2SC«4. CH2Cl2-fasen ble inndampet til ca 20 ml og utfelt med ca 300 ml kald etyleter. Det utfelte produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur. Utbyttet var 12,5 g. Renheten var 97% ved<]>H nmr og 95% ved
GPC.
d) Fremstilling av Cl H3N+-PEG34oo-0-CH2C02H:
H2N-PEG-C02NH4<+>(12 g) ble oppløst på H20 (50 ml) som inneholdt 15% NaCl.
pH ble justert til 3,0 med 1 N HC1 og den resulterende oppløsningen ble ekstrahert med CH2C12. CH2Cl2-ekstraktet ble tørket over Na2SC«4, inndampet til ca 20 ml og produktet utfelt med ca 300 ml etyleter og tørket under vakuum ved romtemperatur. Renheten var 95% ved<!>H nmr.
EKSEMPEL 4
FREMSTILLING AV CXHaN^PEG-O-CHjCHjCChH
REAKSJONER:
a) Fremstilling av HO-PEG3400-O-CH2CH2CO2H:
BzO-PEG-OH (100 g) ble oppløst i 100 ml H20, 5 ml 40% vandig KOH ble tilsatt
til den resulterende oppløsningen og blandingen ble omrørt i 1 time. Oppløsningen ble deretter avkjølt til 0°C og 50 ml akrylonitril ble tilsatt under argon. Etter omrøring i 3 timer, ble 1 1 20% NaCl i H20 tilsatt og pH justert til 7,0 med 10% NaH2P04. Oppløsningen ble deretter ekstrahert med CH2CI2og ekstraktet tørket over Na2S04. Etter inndamping av oppløsningsmiddelet under vakuum, ble resten oppløst i 500 konsentrert HC1 og omrørt ved romtemperatur i 60 timer. Oppløsningen ble deretter tilsatt til en oppløsning av 240 g NaOH i 1,2 1H2O, NaCl ble tilsatt for å gi en 8% oppløsning og pH justert til 7,0. Oppløsningen ble ekstrahert med CH2CI2og ekstraktet ble tørket over Na2S04og inndampet til tørrhet under vakuum. Resten ble omrørt i 20 timer i 1,5 1 8% KOH, deretter ble det tilsatt 180 ml konsentrert HCL og NaCl (8%). pH ble justert til 3,0 og produktet ekstrahert med metylenklorid. Ekstraktet ble tørket over Na2S04, inndampet og produktet ble utfelt med etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum for å oppnå 90 g som inneholdt 91% av HO-PEG-0-CH2CH2C02H ved GPC.
b) Fremstilling av Cl"H3N<+->PEG-0-CH2CH2C02H:
HO-PEG-0-CH2CH2C02H ble konvertert til Ci"H3N<+->PEG-0-CH2CH2C02H ved samme fremgangsmåte som den beskrevet for konversjon av HO-PEG-OCH2C02H til Cl"H3N<+->PEG34oo-0-CH2C02H i eksempel 3.
EKSEMPEL 5
FREMSTILLING AV C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG-OCH2CH(OC2H5)2
REAKSJONER:
a) Fremstilling av BzO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2:
I en trehalset, 500 ml rundbunnet flaske ble det plassert 300 ml dioksan og 14 g
BzO-PEG-OH (molekylvekt 3400, 0,0040 mol). Den resulterende oppløsningen ble deretter azeotropisk tørket ved destillasjon under N2av 130 ml oppløsningsmiddel. Etter avkjøling av oppløsningen ble fint pulverisert NaOH (0,8 g, 0,02 mol) og C1CH2CH(0C2H5)2(3 ml, 0,02 mol) tilsatt under N2og den resulterende suspensjonen ble hurtig omrørt under tilbakeløp over en 24 timers periode. 30 ml dioksan ble deretter fjernet ved destillasjon og den hurtig omrørte oppløsningen ble kastet i tilbakeløp under N2i ytterligere 24 timer. Suspensjonen ble deretter avkjølt og filtrert ved tilsetting av Celite<R>. Filtratet ble inndampet under vakuum og 200 ml etyleter ble tilsatt restoljen. Det resulterende presipitatet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur for å oppnå et gyllenbrunt pulver (13,6 g). Pulveret ble oppløst i CH2C12(35 ml) og gjenutfelt ved tilsetning av 500 ml kald etyleter. Bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur for å oppnå 13,0 g BzO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2som et hvitt pulver (renhet 94-98% ved<]>H nmr).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 1,11 (t, OCH2CH3), 3,5 1 (br m, 0-CH2CH2-0), 4,48 (s, CeHs-CHjjO ); 4,55 (t,
-CH(OC2H5)2), 7,32 (s, C6H5-).
b) Fremstilling av HO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2:
BzO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2(13 g) ble oppløst i 150 ml 95% etanol og 6,5 g 10%
Pd på trekull ble tilsatt under N2. Suspensjonen ble ristet i 70 timer under H2(40 psi) og suspensjonen ble filtrert. Restkatalysatoren ble vasket med 2 x 25 ml kokende kloroform og vaskene kombinert med etanolfiltratet og inndampet under vakuum for å oppnå en klar, fargeløs olje. Til oljen ble det tilsatt 400 ml kald etyleter og det resulterende presipitatet ble oppsamlet ved filtrering for å oppnå, etter vakuumtørking ved romtemperatur, 11,3 g HO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2som et hvitt pulver (92% rent ved<]>H nmr).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 1,10 (t, OCH2CH3), 3,51 (br m, O-CH2CH2-O), 4,55 (m, HO + -CH(OC2H3)2).
c) Fremstilling av C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG-OCH2CH(OC2H5)2:
En oppløsning av cinnamylideneddiksyre (1,7 g, 0,01 mol) og tionylklorid (3 ml,
0,04 mol) i 50 ml heksan ble underkastet tilbakeløp under N2i 4 timer, deretter filtrert for å fjerne en liten mengde av mørkt fast stoff og filtratet ble inndampet under vakuum. Resten ble tørket under vakuum natten over ved romtemperatur for å oppnå 1,5 g cinnamylidenacetylklorid som et gult fast stoff, smeltepunkt 51-52°C.
En oppløsning av HO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2(3,4 g, 1,0 mmol) i toluen (50 ml) ble azeotropisk destillert under nitrogen i 2 timer for å fjerne spor av vann, deretter avkjølt til romtemperatur. Trietylamin ble destillert fra KOH under nitrogen og 0,28 ml (2 mmol) av det ferske destillatet ble injisert under nitrogen inni oppløsningen av HO-PEG-0-CH2CH(OC2H5)2i toluen. Til den resulterende oppløsningen ble det tilsatt cinnamylidenacetylklorid (C6H5CH=CH-CH=CHC0C1) dråpevis under nitrogen ved romtemperatur under hurtig omrøring. Omrøringen ble tillatt å fortsette i 3 dager under samme betingelser og det hvite presipitatet ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble inndampet til 20 ml under vakuum og 300 ml kald eter ble tilsatt. Det blekgule presipitatet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum for å oppnå 3,4 g av et blekgult pulver. Pulveret ble oppløst i metylenklorid og ekstrahert en gang med 50 ml vandig mettet natriumklorid og en gang med vann. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, inndampet til 25 ml, og 300 ml kald eter ble tilsatt ved virvling. Det resulterende bunnfallet ble innsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur for å oppnå 3,05 g (86%) av C6H5-CH=CH-CH=CH-C02PEG-OCH2CH(OC2H5)2som et blekgult pulver.<!>H nmr (DMSO-de): 5 1,11 (t, OCH3CH2O-), 3,51 ppm (m, PEG-O-CHjCHjrO + CH3CH2O-); 4,20 ppm (t, -CH202C-), 4,52 ppm (t, -CH(OC2H5)2), 6,11 (d, =CH), 7,57-7,12 (komp. mult., C6Hj>- + =CH). Renhet ved nmr: 89-96%.
EKSEMPEL 6
FREMSTILLING AV NHS-02CO-PEG-OCH2C02-PEG-0-C02NHS (NHS = N-succinimidyl)
REAKSJONER:
a) Fremstilling av BzO-PEG-OCH2C02H:
BzO-PEG-OCH2C02C(CH3)3(20 g) ble oppløst i destillert vann og pH justert til
12,0 med 1 N NaOH-oppløsning. Oppløsningen ble holdt ved pH 12,0 i 2 timer ved kontinuerlig tilsetning av NaOH-oppløsning og oppløsningen ble omrørt natten over. Oppløsningens pH ble justert til 2,5 ved tilsetning av 1 N HCl-oppløsningen og oppløsningen ble ekstrahert tre ganger med metylenklorid. De kombinerte organiske metylenkloridfasene ble tørket over vannfritt natriumsulfat, filtrert og filtratet ble kondensert under vakuum før utfelling av produktet med etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur.
Utbytte 18 g(90%).<!>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 4,01 (s, - PEGOCHjCOOH), 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-), 7,33 (s + com, C6Hj-CH2-OPEG-).
b) Fremstilling av BzO-PEG-OCH2C02-PEG-OBz:
I en 100 ml rundbunnet flaske ble BzO-PEG-OCH2C02H (molekylvekt 3400, 3,4 g,
1 mmol) i toluen tørket ved azeotropisk destillasjon. En oppløsning av tionylklorid (2 M, 4 ml, 8 mmol) i metylenklorid ble injisert og blandingen ble omrørt under N2natten over. Oppløsningsmiddelet ble kondensert ved rotasjonsinndamping og
sirupen ble tørket i vakuum i ca 4 timer over P2Os-pulver. Til resten ble det tilsatt 5 ml vannfritt metylenklorid og azeotropisk tørket BzO-PEG-OH (molekylvekt 3400, 2,55 g, 0,75 mmol) i toluen (20 ml). Etter at BzO-PEG-OCH2COCl ble oppløst, ble ferskt destillert trietylamin (0,6 ml) tilsatt og blandingen ble omrørt natten over. Trietylaminsaltet ble fjernet ved filtrering og produktet oppsamlet ved utfelling med etyleter. Det ble videre renset ved oppløsning i vann og ekstrahert med metylenklorid. Gelgjennomtrengningskromatografi av produktet viste at 100% av BzO-PEG-OH hadde blitt konvertert til esteren. Blandingen ble deretter
kromatografert på en ionebyttekolonne (DEAE sefarose hurtig flow, Pharmacia) for å fjerne BzO-PEG-OCH2C02H og rent BzO-PEG-OCH2C02-PEG-OBz ble oppnådd. Utbytte: 4,1 g (80%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 4,14 (s, -PEGOCH2COOPEG-), 4,18 (t, -PEGO-CH2COOCH2CH2OPEG-), 4,48 (s, Ar-CHjsO), 7,32 (s, C6Hj-).
c) Fremstilling av HO-PEG-OCH2C02-PEG-OH:
En oppløsning av BzO-PEG-OCH2C02-PEG-OBz (molekylvekt 6800, 2 g, 0,59 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml) ble hydrogenolysert med H2(2 atm.) og 1 g Pd/C (10%) natten over. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og produktet utfelt i etyleter etter at mesteparten av oppløsningsmiddelet ble fjernet på en rotasjonsinndamper. Ren HO-PEG-OCH2C02-PEG-OH ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur for å gi: 1,5 g (75%) av HO-PEG-OCH2C02-PEG-OH.<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 4,14 (s, - PEGOCH2COOPEG-), 4,18 (t, -PEGO-CH2COOCH2CH2OPEG-). d) Fremstilling av NHS-02CO-PEG-OCH2C02-PEG-0-C02NHS: HO-PEG-OCH2C02-PEG-OH (2 g, 0,29 mmol) ble azeotropisk destillert med 100 ml acetonitril og deretter langsomt avkjølt til romtemperatur. Til den resulterende oppløsningen ble det tilsatt disuccinimidylkarbonat (621 mg, 1,17 mmol) og pyridin (0,3 ml) og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmiddelet ble deretter fjernet under vakuum og 35 ml tørt metylenklorid ble tilsatt residuet. Det uoppløselige faste stoffet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble vasket med pH 4,5 natriumkloridmettet acetatbuffer. Den organiske fasen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og oppløsningsmiddelet fjernet under vakuum. Etyleter ble tilsatt og bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum. Utbytte: 1,8 g (90%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 4,14 (s, -PEGOCH2COOPEG-), 4,18 (t, -PEGOCH2COOCH2CH2OPEG-), 4,45 (t,
-PEGOCH2CH20CONHS), 2,81 (s, NHS).
EKSEMPEL 7
FREMSTILLING AV CH2=CH-C02-PEG-OCH2C02-PEG-02C-CH=CH2
REAKSJONER:
Fremstilling av CH2=CH-C02-PEG-OCH2C02-PEG-02C-CH=CH2:
REAKSJONER:
HO-PEG-OCH2CO2-PEG-OH (molekylvekt 6800, 1,5 g, 0,44 mmol endegruppe) ble azeotropisk tørket med 100 ml toluen i 2 timer. Oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur under N2og 24 ml metylenklorid og trietylamin (TEA, 0,56 mmol) ble tilsatt. Oppløsningen ble avkjølt i et isbad og akryloylklorid (1,5 mmol) i CH2CI2ble tilsatt dråpevis til oppløsningen. Etter tilsetning av akryloylklorid, ble isbadet fjernet og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. 1 ml etanol ble tilsatt for å oppta overskudd av akryloylklorid og metylenkloridet ble deretter kondensert under vakuum. Saltet ble fjernet ved filtrering og den gjenværende oppløsningen utfelt i 100 ml eter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Produktet ble oppløst i 50 ml kloroform og natriumkarbonat (1,3 g) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt kraftig ved romtemperatur natten over. Saltet ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmiddelet ble fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i 5 ml metylenklorid og oppløsningen satt til 100 ml etyleter. Det resulterende bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering og vasket med 20 ml 2-propanol og deretter med 40 ml eter. Produktet ble til slutt tørket i vakuum. Utbytte: 1,35 g (90%).<!>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 4,14 (t, -PEGOCH2COOPEG-), 4,18 (t, -PEGOCH2COOCH2CH2OPEG-), 4,21 (t, CH2=CH-COO-CH2CH2-0-PEG-, 4H), 5,85-6,45 (m, CH2=CHCOOPEG-).
EKSEMPEL 8
FREMSTILLING AV CH3O-PEG-O-CH2CH2CO2-PEG-OH
REAKSJONER:
a) Fremstilling av CH3O-PEG-OCH2CH2CO2-PEG-OBZ: I en 100 ml rundbunnet flaske ble en oppløsning av CH3O-PEG-OCH2CH2CO2H (molekylvekt 2000, 2 g, 1 mmol) oppløst i toluen og azeotropisk tørket i 2 timer. Etter langsom avkjøling til romtemperatur, ble oppløsningen satt til tionylklorid (3 ml, 6 mmol) i metylenklorid og deretter omrørt under N2natten over. Oppløsningsmiddelet ble deretter fjernet ved rotasjonsinndamping og den resterende sirupen ble tørket i vakuum i ca 4 timer over P20s-pulver. Det faste stoffet ble tilsatt 5 ml vannfritt metylenklorid og en oppløsning (20 ml) av azeotropisk tørket BzO-PEG-OH (molekylvekt 3400, 2,04 g, 0,60 mmol) i toluen. Til den resulterende oppløsningen ble det satt 0,6 ml ferskt destillert trietylamin og oppløsningen ble omrørt natten over. Trietylaminsaltet ble fjernet ved filtrering og råproduktet ble utfelt med etyleter og oppsamlet ved filtrering. Blandingen ble deretter renset ved ionebyttekromatografi (DEAE sefarose hurtigstrømmende kolonne, Pharmacia). Rent CH3O-PEG-OCH2CH2CO2-PEG-OBZble oppnådd. Utbytte: 2,6 g (80%).<]>H nmr (DMSO-d6): 8 3,5 (br mult., PEG), 3,24 (s, CH3OPEG-), 4,48 (s, - PEGOCH2C6H5), 7,33 (s + komp. mult, -PEGOCH2C6H5), 2,55 (t, - OCH2CH2CO2PEG-), 4,13 (t, -PEG-CO2CH2CH2-PEG).
b) Fremstilling av CH3O-PEG-OCH2CH2CO2-PEG-OH:
En oppløsning av 2 g CH3O-PEG-OCH2CH2CO2-PEG-OBZi 1,4-dioksan ble
hydrogenolysert med H2(2 atm) på 1 g Pd/C (10%) natten over. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering, oppløsningsmiddelet ble kondensert under vakuum og oppløsning ble satt til etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum ved romtemperatur for å gi 1,5 g (75%) av CH3O-PEG-OCH2CH2CO2-PEG-OH.<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br. mult., PEG), 3,24 (s, CH3OPEG-), 2,55 (t, -OCH2CH2CO2PEG-), 4,13 (t, -PEG-CO2CH2CH2O-PEG).
EKSEMPEL 9
FREMSTILLING AV NHS-02CCH2CH2COO-PEG-OCH2CH2CH(OC2H5)2
REAKSJONER:
a) Fremstilling av BzO-PEG-OMs:
BzO-PEG-OH (molekylvekt = 3400, 25 g, 7,35 mmol) i 150 ml toluen ble
azeotropisk destillert i 1 time under nitrogen og oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur. Til oppløsningen ble det satt 20 ml tørr metylenklorid, 1,14 ml tørr trietylamin (8,16 mmol) og 0,61 ml tørr mesylklorid (7,86 mmol) dråpevis. Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen natten over og reaksjonen ble stoppet ved å tilsette 5 ml absolutt etanol. Blandingen ble konsentrert under vakuum, filtrert, konsentrert igjen under vakuum og utfelt i etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 23 g (100%).<]>H nmr (DMSO-d6): 8 3,5 (br m, PEG), 4,31 (t, OCHiCgjjOMs), 4,49 (s, C6H5-CH2-0-PEG-), 7,33 (s + komp m., C6H5-CH2-OPEG-).
b) Fremstilling av BzO-PEG-OCH2CH2CH(OC2H5)2:
En løsning av 3,3-dietoksypropanol (9,806 g, 66,2 mmol) ble azeotropisk destillert i 90 ml toluen i 1 time under nitrogen. Etter avkjøling til romtemperatur ble oppløsningen tilsatt en dispersjon av natriumhydrid (60% i mineralolje, 2,75 g, 68,7 mmol) i 50 ml vannfri toluen. Oppløsningen ble blandet i 2 timer under mild oppvarming ved 35°C og deretter filtrert. Filtratet ble tilsatt en azeotropisk destillert oppløsning av BzOPEG-OMs (23 g, 6,76 mmol) i 150 ml toluen. Blandingen ble omrørt i 20 timer ved 125°C under en nitrogenatmosfære. Blandingen ble konsentrert under vakuum og resten ble oppløst i 80 ml metylenklorid. Oppløsningen ble filtrert og produktet ble utfelt med 1 1 kald isopropylalkohol. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Pulveret ble oppløst i 100 ml deionisert vann og ekstrahert tre ganger med 200 ml metylenklorid. Blandingen ble konsentrert under vakuum, filtrert og utfelt i etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 19 g (100%).<!>H nmr (DMSO-d6): 5 1,10 (t, -CH(OCH2CH3)2), 1,73 (q, -OCH2CHj,-CH), 3,5 (br m, PEG), 4,49 (s, C6H5-CH2-0-PEG-), 4,56 (m, -CH(OCH2CH3)2), 7,33 (s + komp m., C^-CF^-O-PEG-). c) Fremstilling av HO-PEG-OCH2CH2CH(OC2H5)2: Bzo-PEG-OCH2CH2CH(OC2H5)2(10 g, 2,94 mmol) ble oppløst i 100 ml 96% etanol
og 5,0 g 10% Pd på trekull ble tilsatt under nitrogen. Suspensjonen ble ristet i 48 timer under H2(40 psi) og suspensjonen ble filtrert. Restkatalysatoren ble vasket med metylenklorid. Produktet i det kombinerte filtratet av metylenklorid og etanol ble konsentrert under vakuum og filtrert. Den viskøse oppløsningen ble utfelt i kald etyleter, og produktet gjenvunnet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 15 g.<]>H nmr (DMSO-d6): 8 1,10 (t, -CH(OCH2CH3)2), 1,72 (q, -OCH2CHj,-CH), 3,5 (brm, PEG), 4,55 (m,
-CH(OCH2CH3)2).
d) Fremstilling av H02CCH2CH2C02-PEG-OCH2CH2CH(OCH2CH3)2: HO-PEG-OCH2CH2CH(OC2H5)2(3 g, 0,88 mmol) og BHT ( 5 mg) ble oppløst i 20
ml vannfri toluen og azeotropisk destillert ved 120°C i 1 time under nitrogen. Etter avkjøling av oppløsningen til 75°C, ble pyridin (0,36 ml) og ravsyreanhydrid (0,353
g) tilsatt og omrørt ved 75°C i 24 timer. Oppløsningen ble konsentrert under vakuum, filtrert og utfelt i kald etyleter. Bunnfallet ble gjenvunnet ved filtrering og
tørket i vakuum. Pulveret ble rekonstituert i 50 ml deionisert vann og 1 M natriumhydroksid ble tilsatt dråpe vis for å opprettholde en konstant pH på 7,2 i 1 time. 1 N HC1 ble hurtig tilsatt dråpevis for å oppnå en pH på 3,0 og øyeblikkelig ekstrahert 3 ganger i 100 ml metylenklorid. Produktet i den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, konsentrert under vakuum, utfelt i kald etyleter, gjenvunnet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 2,0 g (88%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 1,10 (t, -C^OCHzCHj^), 1,72 (q, -OCH2CH2-CH), 3,5 (brm, PEG), 4,12 (t,
-CO2CH2-), 4,55 (t, -CH(OCH2CH3)2).
e) Fremstilling av NHS-02CCH2CH2C02-PEG-OCH2CH2CH(OCH2CH3)2: H02CCH2CH2C02-PEG-OCH2CH2CH(OCH2CH3)2(2,0 g, 0,56 mmol) ble oppløst i 20 ml vannfri metylenklorid under en nitrogenatmosfære. N-hydroksysuccinimid (105 mg, 0,91 mmol) ble først tilsatt oppløsningen og deretter ble disykloheksylkarbodiimid (174 mg, 0,84 mmol) tilsatt. Oppløsningen ble omrørt natten over ved romtemperatur under nitrogenatmosfære. Produktet ble konsentrert under vakuum, filtrert, utfelt i kald etyleter, gjenvunnet ved filtrering og tørket i vakuum. Utbytte 1,5 g (99%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 1,10 (t, -CH(OCH2CH3)2), 1,72 (q, -OCH2CHj,-CH), 2,80 (s, NHS), 3,5 (br m, PEG), 4,12 (t, -C02CHj>-), 4,55 (t,
-CH(OCH2CH3)2).
EKSEMPEL 10
FREMSTILLING AV CH2=CHC02-PEG-OCH2C02-PEG-OCH(CH3)CH2C02NHS
REAKSJONER:
a) Fremstilling av BzO-PEG-OCH2C02-CH(CH3)CH2C02H: BzO-PEG-OCH2C02H (molekylvekt = 3400, 15 g, 4,4 mmol) ble azeotropisk tørket
med 60 ml toluen under N2. Etter 2 timer ble oppløsningen langsomt avkjølt til romtemperatur. Til denne oppløsningen ble det tilsatt tionylklorid (18 ml, 36 mmol). Den resulterende oppløsningen ble omrørt natten over, oppløsningsmiddelet kondensert ved rotasjonsinndamping og sirupen tørket i vakuum i ca 4 timer over P2Os-pulver. 3-hydroksysmørsyre (1,45 g, 13,5 mmol) ble azeotropisk tørket med 70 ml 1,4-dioksan og deretter satt til den tørkede BzO-PEG-OCH2COCl. Etter at PEG acylklorid hadde blitt oppløst, ble 4,5 ml tørr trietylamin injisert inn i systemet og oppløsningen ble omrørt natten over. Saltet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble kondensert på en rotasjonsinndamper ved 55°C og tørket i vakuum. Råproduktet
ble deretter oppløst i 100 ml destillert vann og pH til oppløsningen ble justert til 3,0. Den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med en total på 80 ml metylenklorid. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, filtrert, kondensert på en rotasjonsinndamper og utfelt i 100 ml etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum ved romtemperatur. Utbytte 14 g (93%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 2,58 (d, -PEGCOOCH(CH3)CH2COOH), 5,14 (h, -PEG-COOCH(CH3)CH2COOH), 1,21 (d, -PEGCOOCH(CH3)CH2COOH), 4,055 (s, PEGOCHjjCOO), 4,49 (s, CeHs-CHjj-OPEG-), 7,33 (s + komp. mult, C6H5-CH2-OPEG-).
b) Fremstilling av HO-PEG-OCH2C02-CH(CH3)CH2C02H:
En oppløsning av BzO-PEG-OCH2C02-OCH(CH3)CH2C02H (8 g) i benzen (50 ml) ble hydrogenolysert med H2(2 atm) på 4 g Pd/C (10%) ved romtemperatur i 48 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering, oppløsningsmiddelet ble kondensert, og oppløsningen ble utfelt i etyleter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum ved romtemperatur. Utbytte: 6,6 g (83%).<!>H nmr (DMSO-ds): 5 3,5 (brm, PEG), 2,51 (d, -PEGC02CH(CH3)CH2C02H), 5,16 (h, -PEG-C02CH(CH3)CH2C02H), 1,22 (ds, - PEGC02CH(CH3)CH2C02H), 4,06 (s, PEGOCHC02CH(CH3)-). c) Fremstilling av CH2=CHC02-PEG-OCH2C02-CH(CH3)CH2C02H: HO-PEG-OCH2C02CH(CH3)CH2C02H (3 g, 0,88 mmol) ble azeotropisk destillert med 40 ml toluen under N2inntil ca 15 ml av oppløsningen var igjen. Oppløsningen ble deretter avkjølt i romtemperatur under N2og 25 ml metylenklorid og trietylamin (1,5 mmol) ble tilsatt. Oppløsningen ble avkjølt i et isbad og akryloylklorid (2 mmol) ble tilsatt dråpevis. Etter tilsetting av akryloylklorid, ble isbadet fjernet og oppløsningen omrørt ved romtemperatur natten over. Metylenklorid ble deretter delvis fjernet under vakuum, saltet ble fjernet ved filtrering og filtratet tilsatt 100 ml eter. Det utfelte produktet ble innsamlet ved filtrering og tørket i vakuum. Produktet ble deretter oppløst i natriumacetatbuffer (0,1 M, pH 5,5), omrørt i 30 minutter og ekstrahert tre ganger med metylenklorid. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, filtrert, kondensert og utfelt i 100 ml etyleter. Bunnfallet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum ved romtemperatur. Utbytte 2,4 g (80%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 2,51 (d, CHj>C02H), 5,16 (h, - CH(CH3)), 1,22 (d, -CH(CH3)-), 4,06 (s, -PEGOCH2C02PEG-), 4,21 (t, - C02CH2CH20-), 5,85-6,45 (m, CH^CH-). d) Fremstilling av CH2=CHC02-PEG-OCH2C02-CH(CH3)CH2C02NHS: CH2=CHC02-PEG-OCH2C02-CH(CH3)CH2C02H (1,4 g, ca 0,4 mmol) og N-hydroksysuccinimid (51 mg, 0,43 mmol) ble oppløst i 30 ml tørr metylenklorid. Til denne oppløsningen ble det satt disykloheksylkarbodiimid (95 mg, 0,45 mmol) i 5 ml tørr metylenklorid. Oppløsningen ble omrørt under nitrogen natten over og oppløsningsmiddelet fjernet ved rotasjonsinndamping. Den resulterende sirupen ble oppløst i 10 ml tørr toluen og det uoppløselige faste stoffet ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble tilsatt 100 ml tørr etyleter og bunnfallsproduktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum ved romtemperatur. Utbytte 0,94 g (94%).<!>H nmr (DMSO-de): 5 3,5 (br m, PEG), 3,0-3,2 (m, -PEGCOO-CH(CH3)CH2COONHS), 5,26 (h, PEGCOOCH(CH3)CH2COONHS), 1,3 (d, -PEG-COOCH(CH3)CH2COONHS), 4,10 (s, -PEGOCgjjCOO (CM)), 2,81 (s, NHS), 4,21 (t, CH2=CH-COO-CH2CH2-0-PEG-, 4H), 5,85-6,45 (m, CH2=CHCOOPEG-).
EKSEMPEL 11
FREMGANGSMÅTE TIL Å FREMSTILLE CH3O-PEG-OH SOM IKKE INNEHOLDER NOE HO-PEG-OH FRA EN BLANDING AV BzO-PEG-OH
OG HO-PEG-OH
REAKSJONER:
Alternativ syntese av BzO-PEG-OCH3+ CH30-PEG-OCH3:
Produkt fra hver av rutene er hydrogenolyserte:
a) Fremstilling av BzO-PEG-OMs:
BzO-PEG-OH (molekylvekt = 5000, 50 g, 10 mmol) som inneholder 6 vekt% av
HO-PEG-OH ble oppløst i toluen og oppløsningen ble azeotropisk tørket i 2 timer under nitrogen og avkjølt til romtemperatur. Til denne oppløsningen ble det satt 50 ml vannfritt metylenklorid og 2,1 ml av vannfritt trietylamin (15 mmol). Den resulterende oppløsningen ble avkjølt i et isbad og 1,2 ml mesylklorid (15 mmol) ble tilsatt dråpevis. Oppløsningen ble deretter omrørt ved romtemperatur natten over og reaksjonen ble stoppet ved tilsetting av 2 ml absolutt etanol. Blandingen ble deretter konsentrert under redusert trykk for å fjerne 100 ml oppløsningsmiddel, filtrert og tilsatt 800 ml kald eter. Det utfelte produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Utbytte: 48,3 g (96,6%).<]>H nmr (DMSO-d6): 5 3,5 (br m, PEG), 4,31 (t, OCH2CHj,OMs), 4,49 (s, CeHs-CHjj-OPEG-), 7,33 (s + kompleks mult., C6H5-CH2-OPEG).
b) Fremstilling av BzO-PEG-OCH3:
BzO-PEG-OMs som inneholder 6 vekt% av MsO-PEG-OMs (molekylvekt = 5078, 45 g, 8,86 mmol) i 250 ml toluen ble azeotropisk tørket i 2 timer. Til den resulterende oppløsningen ble det satt en 25 vekt% oppløsning av natriummetoksid (11,5 g, 53,2 mmol, 6 ganger overskudd) i metanol og den resulterende oppløsningen ble oppvarmet til 120-122°C i 20 timer under nitrogen. Den resulterende oppløsningen ble deretter avkjølt til romtemperatur, 2 ml vann ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 15 minutter. Blandingen ble deretter konsentrert under redusert trykk for å fjerne 100 ml oppløsningsmiddel, filtrert og filtratet tilsatt 700 ml kald eter. Det utfelte produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Utbytte: 42,8 g.<]>H nmr (DMSO-d6): 8 3,24 (s, PEG), 3,51 (br. mult., PEG), 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-), 7,33 (s + komp. mult., C6HrCH2-OPEG-).
c) Fremstilling av BzO-PEG-OCH3fra BzO-PEG-OH:
BzO-PEG-OH som inneholder 6 vekt% av HO-PEG-OH (molekylvekt = 10000, 50 g, 5,0 mol) i 250 ml toluen ble azeotropisk destillert i 2 timer under nitrogen og oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur. Kalium tert-butoksid (1,0 M oppløsning i tert-butanol, 25 ml, 25 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 15 minutter. Metyliodid (7,1 g, 50 mmol) ble deretter tilsatt og blandingen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur under nitrogen i mørke. Opp løsningsmidlene ble fjernet under redusert trykk og residuet ble oppløst i 100 ml metylenklorid og tilsatt 800 ml kald eter. Det utfelte produktet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Utbytte: 46,8 g.<!>H nmr (DMSO-d6): 8 3,24 (s, CHjO-PEG), 3,51 (br. mult, PEG), 4,49 (s, C6H5-CH2-OPEG-), 7,33 (s + komp. mult., C6H5-CH2-OPEG-). d) Fremstilling av CH3OPEG-OH som ikke inneholder noe HO-PEG-OH: BzO-PEG-OCH3som inneholder 6 vekt% av CH3O-PEG-OCH3(40 g, molekylvekt = 10000, 12 mmol) ble oppløst i 400 ml etanol og 4 g av Pd på aktivert karbon (10% Pd) ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenert (800 psi) ved romtemperatur. Blandingen ble deretter filtrert og oppløsningsmiddelet fjernet under vakuum. Utbytte: 37,1 g.<]>H nmr (DMSO-d6): 5 (s, CH3O-PEG), 3,51 (br. mult., PEG), 4,58 (t, OH).
Oppfinnelsen er blitt beskrevet i spesielt eksemplifiserte utforminger. Den foregående beskrivelsen er imidlertid ikke ment å begrense oppfinnelsen til de eksemplifiserte utformingene, og en person med kunnskap på området bør vite at variasjoner kan foretas innenfor området og ideen til oppfinnelsen som beskrevet i foregående spesifikasjon. Tvert i mot inkluderer oppfinnelsen alle alternativer, modifikasjoner og ekvivalenter som kan inkluderes innenfor den virkelige ideen og området til oppfinnelsen som definert av de vedlagte krav.
Claims (16)
1. Fremgangsmåte til å fremstille et heterobifunksjonelt polymert derivat,karakterisert vedat den omfatter: (i) å tilveiebringe en polymer med formel W-O-Poly-OH, hvor W er en gruppe som er fjernbar ved katalytisk hydrogenolyse eller ved syrekatalysert hydrolyse, og Poly representerer en polymerrest som er valgt fra gruppen som består av poly(alkylenoksider), poly(oksyetylerte polyoler), poly(olefine alkoholer) og poly(akroylmorfolin), (ii) modifisere -OH-resten for å produsere en første funksjonell gruppe, der nevnte første funksjonelle gruppe er valgt fra gruppen som består av: mesylat, tosylat, tresylat, -0-(CH2)n-C02R.3 hvori n = 1-6 og R3er en alkylgruppe, -NHR4hvori R4er H, alkyl eller en aminobeskyttende gruppe, -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe, -0-(CH2)n-CHO der n=l-6, og (iii) konvertere nevnte W til en andre funksjonell gruppe, der nevnte andre funksjonelle gruppe er forskjellig fra nevnte første funksjonelle gruppe.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1,
karakterisert vedat W har en formel Ar-C(Ri)(R2)-, hvor Ar representerer en rest valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler, hvor R]og R2er H, alkyl, eller Ar, som er definert ovenfor.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1,
karakterisert vedat den andre funksjonelle gruppen er -OH.
4. Fremgangsmåte til å fremstille et heterobifunksjonelt polymert derivat,karakterisert vedat det omfatter: (i) å tilveiebringe en polymer med formelen Ar-C(Ri)(R2)0-Poly-OH, hvor Ar er valgt fra gruppen som består av fenyl, substituert fenyl, bifenyl, substituert bifenyl, polysykliske aryler, substituerte polysykliske aryler og heterosykliske aryler,
hvor Ri og R2er H, alkyl eller Ar, hvor Ar er som definert ovenfor, og hvor Poly er en polymer rest valgt fra gruppen som består av poly(alkylenoksider), poly(oksyetylerte polyoler), poly(olefine alkoholer) og poly(akryloylmorfolin); (ii) kjemisk modifisere -OH-gruppen for å produsere en første funksjonell gruppe -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe, (iii) fjerne Ar-C(R])(R2)0-gruppen for å produsere en ny hydroksylgruppe; (iv) konvertere den nye hydroksylgruppen til en andre funksjonell gruppe, hvor nevnte andre funksjonelle gruppe er forskjellig fra den nevnte første funksjonelle gruppen.
5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 4,
karakterisert vedat Poly er poly(etylenglykol) representert ved - CH2CH20-(CH2CH20)n-CH2CH2-, hvor n' er fra ca. 8 til ca. 4000.
6. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 4,
karakterisert vedat Poly er en kopolymer av etylenoksid og propylenoksid.
7. Fremgangsmåte som angitt i krav 4,
karakterisert vedat nevnte første funksjonelle gruppe er -metoksy.
8. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 4,
karakterisert vedat den andre funksjonelle gruppen er valgt fra gruppen som består av
mesylat, tosylat, tresylat, -0-(CH2)n-C02H hvori n = 1-6, -0-(CH2)n-C02R3 hvori n = 1-6 og R3er en alkylgruppe, -NHR4hvori R4er H, alkyl eller en aminobeskyttende gruppe, -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe, og -0-(CH2)n-CHO der n=l-6.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat nevnte andre funksjonelle gruppe er -0-(CH2)n-
CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat den andre funksjonelle gruppen er -0-(CH2)n-CHO der n=l-6.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert vedat den første funksjonelle gruppen er -0-(CH2)n-CH(ZR5)2hvori n er tall fra 1-6, Z er O eller S, og R5er H eller en alkylgruppe.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 4,
karakterisert vedat polymeren i trinn (i) har formelen CsH6-CH2-0-Poly-OH.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat nevnte fjerningstrinn (iii) omfatter katalytisk hydrogenolyse eller syre katalysert hydrolyse.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat den er til anvendelse ved inhibering av reaktiviteten til HO-PEG-OH i en blanding der: Poly er polyetylenglykol (PEG), Ar-C(Ri)(R2)0- er C5H6-CH2-0-, trinn (ii) omfatter kjemisk modifisering av -OH-gruppen ved alkylering for å produsere en -OR-gruppe, der R er alkyl, og trinn (iii) omfatter katalytisk hydrogenering.
15. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat alkylgruppen er metyl.
16. Fremgangsmåte for påkobling av et polymert derivat på et legemiddel eller makromolekyl,
karakterisert vedat den omfatter fremstillingen av et polymert derivat ved å benytte fremgangsmåtene ifølge krav 1, 4 eller 14, og det ytterligere trinnet med å koble på det polymere derivatet på nevnte legemiddel eller makromolekyl.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/US1999/023536 WO2001026692A1 (en) | 1999-10-08 | 1999-10-08 | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20021555D0 NO20021555D0 (no) | 2002-04-02 |
| NO20021555L NO20021555L (no) | 2002-06-04 |
| NO331781B1 true NO331781B1 (no) | 2012-03-26 |
Family
ID=22273776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20021555A NO331781B1 (no) | 1999-10-08 | 2002-04-02 | Fremgangsmater for fremstilling av heterobifunksjonelle polymere derivater, og for pakobling av disse polymere derivatene pa et legemiddel eller makromolekyl |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1455839B1 (no) |
| JP (1) | JP4344110B2 (no) |
| KR (1) | KR100499655B1 (no) |
| CN (1) | CN1284603C (no) |
| AU (1) | AU781336B2 (no) |
| BR (1) | BR9917517A (no) |
| CA (1) | CA2386762C (no) |
| CY (1) | CY1114128T1 (no) |
| DK (1) | DK1455839T3 (no) |
| ES (1) | ES2404685T3 (no) |
| HU (1) | HU228491B1 (no) |
| IL (2) | IL148890A0 (no) |
| MX (1) | MXPA02003540A (no) |
| NO (1) | NO331781B1 (no) |
| NZ (1) | NZ518143A (no) |
| PT (1) | PT1455839E (no) |
| WO (1) | WO2001026692A1 (no) |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6761824B2 (en) | 2000-08-17 | 2004-07-13 | Reeve Lorraine E | Process for the fractionation of polymers |
| US7829074B2 (en) | 2001-10-18 | 2010-11-09 | Nektar Therapeutics | Hydroxypatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers |
| TW593427B (en) * | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
| US7053150B2 (en) | 2000-12-18 | 2006-05-30 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Segmented polymers and their conjugates |
| US7550512B2 (en) | 2001-11-28 | 2009-06-23 | Keio University | Medical polymers and uses thereof |
| JP3493608B2 (ja) * | 2001-11-28 | 2004-02-03 | 学校法人慶應義塾 | 医用高分子及びその用途 |
| GB0209539D0 (en) * | 2002-04-26 | 2002-06-05 | Avecia Ltd | Monomer Polymer and process |
| CA2492775C (en) | 2002-07-24 | 2011-06-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polyalkylene glycol acid additives |
| US8129330B2 (en) | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| US20040062748A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-04-01 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| WO2004035657A1 (en) * | 2002-10-15 | 2004-04-29 | Baxter International Inc. | Process for the preparation of polyethylene glycol bis amine |
| WO2004061094A1 (en) | 2002-12-30 | 2004-07-22 | Gryphon Therapeutics, Inc. | Water-soluble thioester and selenoester compounds and methods for making and using the same |
| WO2004060967A1 (en) | 2002-12-31 | 2004-07-22 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Methods for the formation of hydrogels using thiosulfonate compositions and uses thereof |
| AU2004229461A1 (en) | 2003-04-11 | 2004-10-28 | Pr Pharmaceuticals Inc. | Method for preparation of site-specific protein conjugates |
| EP1725572B1 (de) | 2003-11-05 | 2017-05-31 | AGCT GmbH | Makromolekulare nukleotidverbindungen und methoden zu deren anwendung |
| US20050214250A1 (en) * | 2003-11-06 | 2005-09-29 | Harris J M | Method of preparing carboxylic acid functionalized polymers |
| JP2008534640A (ja) | 2005-04-05 | 2008-08-28 | イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー | タンパク質の機能部位またはエピトープの遮蔽方法 |
| WO2007022780A1 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-01 | Novo Nordisk A/S | A method of modifying a macromolecular system |
| ES2605022T3 (es) | 2006-07-06 | 2017-03-10 | Daewoong Co., Ltd. | Una formulación líquida estable de la hormona del crecimiento humana |
| US7985783B2 (en) | 2006-09-21 | 2011-07-26 | The Regents Of The University Of California | Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification |
| IN2012DN00407A (no) | 2009-08-05 | 2015-08-21 | Pieris Ag | |
| WO2011050938A1 (de) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | Genovoxx Gmbh | Konjugate von nukleotiden und methoden zu deren anwendung |
| AU2012278944B2 (en) | 2011-07-05 | 2015-09-17 | Bioasis Technologies Inc. | p97-antibody conjugates and methods of use |
| JP6433424B2 (ja) | 2012-07-31 | 2018-12-05 | バイオアシス テクノロジーズ インコーポレイテッド | 脱リン酸化されたリソソーム蓄積症タンパク質およびその使用方法 |
| AU2013341711A1 (en) | 2012-11-12 | 2015-05-21 | Redwood Bioscience, Inc. | Compounds and methods for producing a conjugate |
| JP2016505528A (ja) | 2012-11-16 | 2016-02-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | タンパク質の化学修飾のためのピクテ−スペングラーライゲーション |
| US9310374B2 (en) | 2012-11-16 | 2016-04-12 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate |
| CN103044677A (zh) * | 2012-12-28 | 2013-04-17 | 上海景宇生物科技有限公司 | 一种异端基遥爪聚乙二醇及其制备方法 |
| WO2014160438A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Bioasis Technologies Inc. | Fragments of p97 and uses thereof |
| US20150093399A1 (en) | 2013-08-28 | 2015-04-02 | Bioasis Technologies, Inc. | Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof |
| WO2015081282A1 (en) | 2013-11-27 | 2015-06-04 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate |
| CN104774161B (zh) * | 2014-01-13 | 2017-08-25 | 成都福瑞康生物科技有限公司 | 多肽、蛋白质peg修饰剂合成方法 |
| PL3636691T3 (pl) * | 2015-10-07 | 2021-09-27 | Elementis Specialties, Inc. | Środek zwilżający i przeciwpieniący |
| KR102247701B1 (ko) * | 2016-02-26 | 2021-05-03 | 한미정밀화학주식회사 | 폴리에틸렌글리콜 디알데히드 유도체의 제조방법 |
| CN111094462A (zh) | 2017-12-26 | 2020-05-01 | 贝克顿·迪金森公司 | 深紫外线可激发的水溶剂化聚合物染料 |
| JP2021519841A (ja) | 2018-03-30 | 2021-08-12 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ | ペンダントクロモフォアを有する水溶性ポリマー色素 |
| EP3813867A1 (en) | 2018-07-22 | 2021-05-05 | Bioasis Technologies Inc. | Treatment of lymmphatic metastases |
| KR20210149046A (ko) | 2019-03-29 | 2021-12-08 | 니치유 가부시키가이샤 | 헤테로형 단분산 폴리에틸렌글리콜 유도체의 제조 방법 |
| US20210355468A1 (en) | 2020-05-18 | 2021-11-18 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating lewy body dementia |
| US20210393787A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating frontotemporal dementia |
| CN113583230A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-11-02 | 苏州欣影生物医药技术有限公司 | 一种peg双胺选择性反应制备异双官能团的方法 |
| EP4155349A1 (en) | 2021-09-24 | 2023-03-29 | Becton, Dickinson and Company | Water-soluble yellow green absorbing dyes |
| WO2024007016A2 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Beckman Coulter, Inc. | Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives |
| WO2024044327A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Beckman Coulter, Inc. | Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996035451A1 (fr) * | 1995-05-10 | 1996-11-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Nouveau complexe de toxines |
| US5672662A (en) * | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| US20020064546A1 (en) * | 1996-09-13 | 2002-05-30 | J. Milton Harris | Degradable poly(ethylene glycol) hydrogels with controlled half-life and precursors therefor |
| CA2316834C (en) * | 1998-01-07 | 2006-01-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Degradable heterobifunctional poly(ethylene glycol) acrylates and gels and conjugates derived therefrom |
| ES2307865T3 (es) * | 1998-03-12 | 2008-12-01 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Metodo para preparar conjugados polimericos. |
-
1999
- 1999-10-08 CN CNB998169714A patent/CN1284603C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 MX MXPA02003540A patent/MXPA02003540A/es active IP Right Grant
- 1999-10-08 JP JP2001529753A patent/JP4344110B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 AU AU64230/99A patent/AU781336B2/en not_active Expired
- 1999-10-08 NZ NZ518143A patent/NZ518143A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-08 CA CA002386762A patent/CA2386762C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 PT PT99951885T patent/PT1455839E/pt unknown
- 1999-10-08 WO PCT/US1999/023536 patent/WO2001026692A1/en active IP Right Grant
- 1999-10-08 IL IL14889099A patent/IL148890A0/xx active IP Right Grant
- 1999-10-08 BR BR9917517-7A patent/BR9917517A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-10-08 ES ES99951885T patent/ES2404685T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 EP EP99951885A patent/EP1455839B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 DK DK99951885.5T patent/DK1455839T3/da active
- 1999-10-08 HU HU0203149A patent/HU228491B1/hu unknown
- 1999-10-08 KR KR10-2002-7004507A patent/KR100499655B1/ko active IP Right Grant
-
2002
- 2002-03-26 IL IL148890A patent/IL148890A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-04-02 NO NO20021555A patent/NO331781B1/no not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-04-23 CY CY20131100332T patent/CY1114128T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2386762A1 (en) | 2001-04-19 |
| AU6423099A (en) | 2001-04-23 |
| NO20021555D0 (no) | 2002-04-02 |
| BR9917517A (pt) | 2002-07-30 |
| HUP0203149A2 (en) | 2002-12-28 |
| EP1455839A1 (en) | 2004-09-15 |
| CY1114128T1 (el) | 2016-07-27 |
| IL148890A0 (en) | 2002-09-12 |
| EP1455839B1 (en) | 2013-01-23 |
| CA2386762C (en) | 2009-06-16 |
| IL148890A (en) | 2007-09-20 |
| CN1284603C (zh) | 2006-11-15 |
| CN1374875A (zh) | 2002-10-16 |
| KR20020040841A (ko) | 2002-05-30 |
| JP4344110B2 (ja) | 2009-10-14 |
| WO2001026692A1 (en) | 2001-04-19 |
| MXPA02003540A (es) | 2003-09-12 |
| ES2404685T3 (es) | 2013-05-28 |
| AU781336B2 (en) | 2005-05-19 |
| KR100499655B1 (ko) | 2005-07-07 |
| HU228491B1 (en) | 2013-03-28 |
| DK1455839T3 (da) | 2013-05-06 |
| JP2003511422A (ja) | 2003-03-25 |
| NZ518143A (en) | 2004-04-30 |
| NO20021555L (no) | 2002-06-04 |
| PT1455839E (pt) | 2013-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO331781B1 (no) | Fremgangsmater for fremstilling av heterobifunksjonelle polymere derivater, og for pakobling av disse polymere derivatene pa et legemiddel eller makromolekyl | |
| US6448369B1 (en) | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation | |
| Yang et al. | Penicillin V-conjugated PEG-PAMAM star polymers | |
| US6710125B2 (en) | Method for the preparation of 1-benzotriazolyl carbonate esters of poly(ethylene glycol) | |
| US10035880B2 (en) | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation | |
| JP2003518526A (ja) | ポリ（エチレングリコール）の加水分解的に分解可能なカルバメート誘導体 | |
| JP5150297B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| JP5953459B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| JP6500318B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| JP6361083B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| JP6184462B2 (ja) | ヘテロ二官能性ポリエチレングリコール誘導体およびその調製方法 | |
| Hanay | Polypeptide based hydrogels | |
| ZA200202688B (en) | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation. | |
| KR980009276A (ko) | PVMA-Ara-C 결합체 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |